RU2014125266A

RU2014125266A - Анализ содержания фибриногена

Info

Publication number: RU2014125266A
Application number: RU2014125266/15A
Authority: RU
Inventors: Эшли ДИНГЛИС; Элиф БУРКОГЛУ
Original assignee: Этикон, Инк.
Priority date: 2011-11-21
Filing date: 2012-11-19
Publication date: 2015-12-27
Also published as: AU2012340850A1; RU2619256C2; CN103946391A; BR112014012208A2; CA2855139C; JP2014533835A; WO2013078107A1; AU2012340850B2; US20130130282A1; EP2791351B1; US20150050673A1; EP2791351A4; ES2644283T3; CA2855139A1; US9017955B2; JP6181062B2; US8900822B2; EP2791351A1

Abstract

1. Способ детекции интактного фибриногена, включающий стадии:a) получения образца, содержащего по меньшей мере некоторое количество фибриногена, необязательно превращенного по меньшей мере частично в фибрин, и необязательно содержащего тромбин;b) растворения образца в растворе растворителя, который ингибирует активность тромбина;c) переноса части указанного образца в гель и выполнения электрофореза указанной части;d) переноса фракции указанной части образца из указанного геля на мембрану, связывающую белок, и иммобилизации фибриногена на указанной мембране;e) выполнения по меньшей мере одной стадии блокирования указанной мембраны;f) взаимодействия фибриногена, иммобилизированного на указанной мембране, с первичным моноклональным антителом, способным связываться с фрагментом фибринопептида A, для образования комплекса фибриноген-антитело;g) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки указанной мембраны для удаления любого несвязанного первичного моноклонального антитела;h) взаимодействия указанного моноклонального антитела, образовавшего комплекс фибриноген-антитело, с вторичным антителом, имеющим маркер;i) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки указанной мембраны для удаления любого несвязанного вторичногоантитела, имеющего маркер; иj) детекции количества интактного фибриногена в образце посредством определения количества маркера.2. Способ по п. 1, в котором указанный образец содержит неизвестное количество интактного фибриногена.3. Способ по п. 1, в котором указанный образец является твердым, жидким или полужидким веществом.4. Способ по п. 1, в котором указанный образец содержит лиофи�

Claims

1. Способ детекции интактного фибриногена, включающий стадии:

a) получения образца, содержащего по меньшей мере некоторое количество фибриногена, необязательно превращенного по меньшей мере частично в фибрин, и необязательно содержащего тромбин;

b) растворения образца в растворе растворителя, который ингибирует активность тромбина;

c) переноса части указанного образца в гель и выполнения электрофореза указанной части;

d) переноса фракции указанной части образца из указанного геля на мембрану, связывающую белок, и иммобилизации фибриногена на указанной мембране;

e) выполнения по меньшей мере одной стадии блокирования указанной мембраны;

f) взаимодействия фибриногена, иммобилизированного на указанной мембране, с первичным моноклональным антителом, способным связываться с фрагментом фибринопептида A, для образования комплекса фибриноген-антитело;

g) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки указанной мембраны для удаления любого несвязанного первичного моноклонального антитела;

h) взаимодействия указанного моноклонального антитела, образовавшего комплекс фибриноген-антитело, с вторичным антителом, имеющим маркер;

i) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки указанной мембраны для удаления любого несвязанного вторичного

антитела, имеющего маркер; и

j) детекции количества интактного фибриногена в образце посредством определения количества маркера.

2. Способ по п. 1, в котором указанный образец содержит неизвестное количество интактного фибриногена.

3. Способ по п. 1, в котором указанный образец является твердым, жидким или полужидким веществом.

4. Способ по п. 1, в котором указанный образец содержит лиофилизированные фибриноген и тромбин.

5. Способ по п. 1, в котором указанный способ включает ДСН-ПААГ-электрофорез и вестерн-блоттинг.

6. Способ по п. 1, в котором указанное первичное моноклональное антитело, способное связываться с фрагментом фибринопептида A, является клоном 1F7.

7. Способ по п. 1, в котором указанное первичное моноклональное антитело способно связываться с фрагментом фибринопептида В на фибриногене.

8. Способ по п. 1, в котором указанное вторичное антитело, имеющее маркер, представляет собой козье антитело к IgG мыши, конъюгированное с щелочной фосфатазой.

9. Способ по п. 1, в котором указанную стадию детекции количества интактного фибриногена в образце посредством определения количества маркера выполняют путем инкубации мембраны, связывающей белок, с субстратом для щелочной фосфатазы.

10. Способ по п. 1, в котором указанный маркер представляет собой электрохимически определяемый маркер, колориметрически определяемый маркер, рентгенологически определяемый маркер, маркер, определяемый магнитным способом, или флуоресцентный маркер.

11. Способ оценки эффективности или стабильности гемостатического устройства, содержащего по меньшей мере один биологический компонент, который представляет собой фибриноген; причем способ включает сравнение количества интактного фибриногена в образце, который получен в соответствии со способом по п. 1, и порогового значения интактного фибриногена.

12. Способ детекции интактного фибриногена, включающий стадии:

c) нанесения части указанного образца на мембрану, связывающую белок, и иммобилизации фибриногена на указанной мембране;

d) выполнения по меньшей мере одной стадии блокирования указанной мембраны и удаления фибринопептида A, отщепленного от фибриногена, содержащегося на указанной мембране;

e) взаимодействия фибриногена, иммобилизированного на указанной мембране, с первичным моноклональным антителом, способным связываться с фрагментом фибринопептида A, для образования комплекса фибриноген-антитело;

f) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки указанной мембраны для удаления любого несвязанного первичного моноклонального антитела;

g) взаимодействия указанного моноклонального антитела, образовавшего комплекс фибриноген-антитело, с вторичным антителом, имеющим маркер;

h) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки указанной мембраны для удаления любого несвязанного вторичного антитела, имеющего маркер; и

i) детекции количества интактного фибриногена в образце посредством определения количества маркера.

13. Способ по п. 12, в котором указанный образец содержит неизвестное количество интактного фибриногена.

14. Способ по п. 12, в котором указанный образец является твердым, жидким или полужидким веществом.

15. Способ по п. 12, в котором указанный образец содержит лиофилизированные фибриноген и тромбин.

16. Способ по п. 12, в котором указанное первичное моноклональное антитело, способное связываться с фрагментом фибринопептида A, является клоном 1F7.

17. Способ по п. 12, в котором указанное первичное моноклональное антитело способно связываться с фрагментом фибринопептида В на фибриногене.

18. Способ по п. 12, в котором указанное вторичное антитело, имеющее маркер, представляет собой козье антитело к IgG мыши, конъюгированное с щелочной фосфатазой.

19. Способ по п. 12, в котором указанную стадию детекции количества интактного фибриногена в образце выполняют посредством инкубации мембраны, связывающей белок, с субстратом для щелочной фосфатазы.

20. Способ по п. 12, в котором указанный маркер представляет собой электрохимически определяемый маркер, колориметрически определяемый маркер, рентгенологически определяемый маркер, маркер, определяемый магнитным способом, или флуоресцентный маркер.

21. Способ оценки эффективности или стабильности гемостатического устройства, содержащего по меньшей мере один биологический компонент, который представляет собой фибриноген; причем способ включает сравнение количества интактного фибриногена в образце, который получен в соответствии со способом по п. 12, и порогового значения интактного фибриногена.

22. Способ детекции интактного фибриногена, включающий стадии:

c) переноса части указанного образца на мембрану, связывающую белок, и иммобилизации фибриногена на указанной мембране;

d) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки и одной стадии блокирования указанной мембраны и удаления фибринопептида A, отщепленного от фибриногена, содержащегося на указанной мембране;

e) взаимодействия фибриногена, иммобилизированного на указанной мембране, с первичным моноклональным антителом, способным связываться с фрагментом фибринопептида A, для образования комплекса фибриноген-антитело; и

f) детекции количества интактного фибриногена в образце посредством определения количества первичного моноклонального антитела, образующего связанный комплекс фибриноген-антитело.

23. Способ по п. 22, в котором указанную стадию (f) детекции количества интактного фибриногена в образце выполняют стадиями:

a) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки указанной мембраны для удаления любого несвязанного первичного моноклонального антитела;

b) взаимодействия указанного моноклонального антитела, образовавшего комплекс фибриноген-антитело, с вторичным антителом, имеющим маркер;

c) выполнения по меньшей мере одной стадии промывки указанной мембраны для удаления любого несвязанного вторичного антитела, имеющего маркер; и

d) детекции количества интактного фибриногена в образце посредством определения количества маркера.

24. Способ по п. 22, в котором указанное первичное моноклональное антитело конъюгировано с маркером, причем указанный маркер представляет собой электрохимически определяемый маркер, колориметрически определяемый маркер, рентгенологически определяемый маркер, маркер, определяемый магнитным способом, или флуоресцентный маркер, причем указанную стадию (f) детекции количества интактного фибриногена в образце выполняют посредством определения количества маркера.