RU2010136047A

RU2010136047A - КАТИОННЫЕ siPНК, СИНТЕЗ И ПРИМЕНЕНИЕ В РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ

Info

Publication number: RU2010136047A
Application number: RU2010136047/10A
Authority: RU
Inventors: Жан-Поль БЕР (FR); Жан-Поль БЕР; Мицухару КОТЕРА (FR); Мицухару КОТЕРА; Надеж ПФЭНДЕР (FR); Надеж ПФЭНДЕР; Жан-Серж РЕМИ (FR); Жан-Серж РЕМИ
Original assignee: Сантр Насьональ де ля Решерш Сьянтифик (FR); Сантр Насьональ Де Ля Решерш Сьянтифик
Priority date: 2008-01-30
Filing date: 2009-01-30
Publication date: 2012-03-10
Also published as: NZ587117A; US20110118331A1; US10927371B2; CA2713075A1; WO2009095887A1; AU2009208646A1; JP2011511776A; KR20100120293A; EP2250267A1; FR2926818A1; CN101960009A; IL207290A0; BRPI0907494A2; EP2250267B1; FR2926818B1

Abstract

1. Катионные siPHK, отличающиеся тем, что они представляют собой фрагменты двухцепочечной РНК, на концах которых привиты олигокатионы, причем общее количество привитых катионных зарядов сравнимо или превышает количество анионных зарядов интернуклеозидных фосфатов цепочек РНК. ! 2. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что общая сумма химически привитых катионных зарядов, вычитаемая из общей суммы анионных зарядов интернуклеозидных фосфатных групп, составляет от -30 до +50. ! 3. Катионные siPHK no п.1 или 2, отличающиеся тем, что в двойной спирали комплементарность цепочек является полной или частичной. ! 4. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что каждый олигорибонуклеотид имеет простое расширение цепочки в положении 3' двойной спирали. ! 5. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что олигокатионы привиты в положении 3' и/или 5' смысловой цепочки и/или в положении 3' антисмысловой цепочки. ! 6. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что указанные фрагменты состоят из двухцепочечных РНК длиной от 15 до 30 олигонуклеотидов, в частности от 19 до 30 нуклеотидов, на концах которых привиты путем ковалентной связи 1-3 олигокатиона, общее число катионных зарядов которых сравнимо или превышает число анионных зарядов РНК. ! 7. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна цепочка соответствует формуле (I) ! , ! в которой Ni обозначает i-мерный олигорибонуклеотид, где i=от 15 до 30, в частности, от 19 до 30, а также все химические модификации или замещения, сохраняющие форму А двойной спирали siPHK, ! Aj обозначает j-мерный олигокатион, где j=1-50, A соответствует ! формуле (II) ! , ! где R1, R2 и R3, одинаковые или разные, обозначают низший алкилен, при этом �

Claims

1. Катионные siPHK, отличающиеся тем, что они представляют собой фрагменты двухцепочечной РНК, на концах которых привиты олигокатионы, причем общее количество привитых катионных зарядов сравнимо или превышает количество анионных зарядов интернуклеозидных фосфатов цепочек РНК.

2. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что общая сумма химически привитых катионных зарядов, вычитаемая из общей суммы анионных зарядов интернуклеозидных фосфатных групп, составляет от -30 до +50.

3. Катионные siPHK no п.1 или 2, отличающиеся тем, что в двойной спирали комплементарность цепочек является полной или частичной.

4. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что каждый олигорибонуклеотид имеет простое расширение цепочки в положении 3' двойной спирали.

5. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что олигокатионы привиты в положении 3' и/или 5' смысловой цепочки и/или в положении 3' антисмысловой цепочки.

6. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что указанные фрагменты состоят из двухцепочечных РНК длиной от 15 до 30 олигонуклеотидов, в частности от 19 до 30 нуклеотидов, на концах которых привиты путем ковалентной связи 1-3 олигокатиона, общее число катионных зарядов которых сравнимо или превышает число анионных зарядов РНК.

7. Катионные siPHK по п.1, отличающиеся тем, что по меньшей мере одна цепочка соответствует формуле (I)

,

в которой Ni обозначает i-мерный олигорибонуклеотид, где i=от 15 до 30, в частности, от 19 до 30, а также все химические модификации или замещения, сохраняющие форму А двойной спирали siPHK,

Aj обозначает j-мерный олигокатион, где j=1-50, A соответствует

формуле (II)

,

где R¹, R² и R³, одинаковые или разные, обозначают низший алкилен, при этом Х обозначает NH или NC(NH₂)₂, n1=от 2 до 20, или

формуле (III)

,

где R⁴, R⁵ и R⁶, одинаковые или разные, обозначают низший алкилен, при этом X¹ выбирают из путресцина, спермидина или спермина, или

формуле (IV)

,

где R⁷ и R⁸, одинаковые или разные, обозначают низший алкилен, при этом (aa)_n2 является пептидом, содержащим натуральные аминокислоты с боковыми катионными цепочками, такие как аргинин, лизин, орнитин, гистидин, диаминопропионовая кислота, и n2=от 2 до 20.

8. Катионные siPHK по п.7, отличающиеся тем, что олигокатионы являются олигоаминами.

9. Катионные siPHK по п.8, отличающиеся тем, что олигоамины выбирают из группы, содержащей спермин, спермидин или путресцин.

10. Катионные siPHK по п.9, отличающиеся тем, что олигоамины представляют собой олигонуклеотиды-олигоспермины, имеющие структуру

,

в которой N, i и j такие, как определены в п.7.

11. Катионные siPHK по любому из пп.1-10 для применения в качестве лекарственных средств.

12. Фармацевтические композиции, отличающиеся тем, что они содержат эффективное количество по меньшей мере одной катионной siPHK по любому из пп.1-11 в комбинации с инертным в фармацевтическом отношении носителем, катионным липидом или катионным полимером.

13. Применение катионных siPHK по любому из пп.1-10 в молекулярной биологии и функциональной геномике.

14. Способ автоматизированного синтеза цепочки катионной siPHK по любому из пп.1-10, отличающийся тем, что включает:

последовательное соединение в направлении от 3' к 5' 19-30 рибонуклеотидов на твердом носителе, которому предшествует и/или за которым следует последовательное соединение катионных синтонов, при этом цепочка соответствует формуле (VI)

,

где N, i, А и j такие, как определены в п.7.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что катионные синтоны являются олигоамин-фосфорамидитами и соответствуют

формуле (VII)

,

в которой R¹, R², R³, n1 такие, как определены выше, Х обозначает группу NH или защищенную группу NC(NH₂)₂, R⁹обозначает -CH₂CH₂CN или низший алкилен, R¹⁰ обозначает низший алкилен, или -N(R¹⁰)₂ обозначает пирролидино, пиперидино или морфолино, и Prot обозначает защитную группу, используемую в олигонуклеотидном синтезе, такую как DMT, ММТ; или

формуле (VIII)

,

в которой R⁴, R⁵, R⁶, одинаковые или разные, обозначают низший алкилен, X¹ обозначает путресцин, спермидин или спермин с соответствующими защитными группами, R⁹ и R¹⁰ такие, как определено выше; или

формуле (IX)

,

в которой R⁷, R⁸, R⁹, R¹⁰, n2 и Prot такие, как определены выше, (aa)_n2 обозначает пептид, содержащий натуральные аминокислоты с защищенными боковыми катионными цепочками, такие как аргинин, лизин, орнитин, гистидин, диаминопропионовая кислота, и n2 = от 2 до 20.