RU2005102396A

RU2005102396A - ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЛИПОПОЛИСАХАРИДЫ ИММУНОТИПА L2 И/ИЛИ L3, ПРОИСХОДЯЩИЕ ИЗ ШТАММА NEISSERIA MENINGITIDIS IgtB-

Info

Publication number: RU2005102396A
Application number: RU2005102396/13A
Authority: RU
Inventors: Ральф БИМАН (BE); Ральф БИМАН; Филипп ДЕНОЭЛЬ (BE); Филипп Деноэль; Кристиан ФЕРОН (BE); Кристиан ФЕРОН; Карин ГОРАЖ (BE); Карин ГОРАЖ; Ян ПУЛМАН (BE); Ян Пулман; Винсент ВЕЙНАНТС (BE); Винсент ВЕЙНАНТС
Original assignee: ГлаксоСмитКлайн Байолоджикалз с.а. (BE); ГлаксоСмитКлайн Байолоджикалз с.а.
Priority date: 2002-08-02
Filing date: 2003-07-31
Publication date: 2005-10-27
Also published as: RU2494758C2; RU2317106C2; RU2005101322A; RU2359696C2; RU2005102587A; RU2007127448A; RU2364418C2

Claims

1. Нейссериальный пузырьковый препарат, происходящий из нейссериального штамма с липоолигосахаридом (ЛОС) иммунотипа L2, или нейссериального штамма с ЛОС иммунотипа L3, где этот штамм представляет собой IgtB^-; или нейссериальный пузырьковый препарат, содержащий комбинацию пузырьков, происходящих из нейссериального штамма с ЛОС иммунотипа L2 и нейссериального штамма с ЛОС иммунотипа L3, где каждый штамм, возможно, представляет собой IgtB^-.

2. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1, где нейссериальный штамм(ы) представляет(ют) собой менингококковый штамм(ы), предпочтительно серогруппы В.

3. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1 или 2, где нейссериальный штамм(ы) не может синтезировать капсульный полисахарид.

4. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.3, где нейссериальный штамм(ы) имеет(ют) один из следующих генов капсульного полисахарида, имеющих негативную регуляцию экспрессии и предпочтительно делетированных по сравнению с природным штаммом(штаммами), из которого(ых) они происходят: ctrA, ctrB, ctrC, ctrD, synA, synB, synC или предпочтительно siaD; и где, в том случае, когда присутствуют пузырьки обоих иммунотипов L2 и L3, штаммы, из которых они происходят, предпочтительно имеют один и тот же ген капсульного полисахарида с негативной регуляцией экспрессии в каждом штамме.

5. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1, где нейссериальный штамм(ы) имеет(ют) любой ген или оба гена из следующих генов липида А с негативной регуляцией экспрессии и предпочтительно делегированные по сравнению с природным штаммом(штаммами), из которого(ых) они происходят: msbB или htrB, предпочтительно первый; и где, в том случае, когда присутствуют пузырьки обоих иммунотипов L2 и L3, штаммы, из которых они происходят, предпочтительно имеют один и тот же ген(ы) липида А с негативной регуляцией экспрессии в каждом штамме.

6. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1, где нейссериальный штамм(ы) имеет(ют) 1 или более чем один из следующих генов белков наружной мембраны, имеющих негативную регуляцию экспрессии и предпочтительно делетированных по сравнению с природным штаммом(штаммами), из которого(ых) они происходят: PorA, PorB, ОрА, ОрС, pilC или frpB; и где, в том случае, когда присутствуют пузырьки обоих иммунотипов L2 и L3, штаммы, из которых они происходят, предпочтительно имеют один и тот же ген(ы) белков наружной мембраны с негативной регуляцией экспрессии в каждом штамме.

7. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.6, где нейссериальный штамм(ы) имеет(ют) любую из следующих комбинаций генов белков наружной мембраны, имеющих негативную регуляцию экспрессии и предпочтительно делетированных по сравнению с природным штаммом(штаммами), из которого(ых) они происходят: PorA и ОрА, PorA и ОрС, ОрА и ОрС, PorA и ОрА и ОрС, PorA и FrpB, ОрС и FrpB, ОрА и FrpB, PorA и ОрА и ОрС и FrpB.

8. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1, где нейссериальный штамм(ы) имеет(ют) 1 или более чем один из следующих белковых антигенов наружной мембраны, имеющих позитивную регуляцию экспрессии: NspA, TbpA low, TbpA high, Hsf, Нар, ОМР85, PilQ, NadA, LbpA, MltA; где, в том случае, когда присутствуют пузырьки обоих иммунотипов L2 и L3, штаммы, из которых они происходят, предпочтительно имеют один или более разных белковых антигенов наружной мембраны, имеющих позитивную регуляцию в каждом штамме.

9. Нейссериальный пузырьковый препарат, происходящий из нейссериального штамма, который имеет 2 или более следующих белков наружной мембраны, имеющих негативную регуляцию и предпочтительно делетированных по сравнению с природным штаммом, из которого он происходит: PorA, PorB, ОрА, ОрС, PilC или FrpB.

10. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.9, где нейссериальный штамм имеет любую из следующих комбинаций белков наружной мембраны, имеющих негативную регуляцию экспрессии и предпочтительно делетированных по сравнению с природным штаммом, из которого он происходит: PorA и ОрА, PorA и ОрС, ОрА и ОрС, PorA и ОрА и ОрС, PorA и FrpB, ОрС и FrpB, ОрА и FrpB, PorA и ОрА и ОрС и FrpB.

11. Нейссериальный штамм(ы), из которого(ых) получают нейссериальные пузырьковые препараты по пп.1-10.

12. Препарат ЛОС, выделенный из нейссериального штамма(штаммов) по п.11, включающий ЛОС иммунотипов L2 и/или L3.

13. Препарат ЛОС по п.12 в виде липосомного препарата.

14. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.1 или 9, или препарат ЛОС по п.12 или 13, где содержащийся в нем ЛОС конъюгирован с источником Т-хелперных эпитопов, предпочтительно белком или белком наружной мембраны.

15. Нейссериальный пузырьковый препарат по п.14, который получают способом внутрипузырькового поперечного сшивания.

16. Иммуногенная композиция или вакцина, содержащая нейссериальный пузырьковый препарат или препарат ЛОС по любому из пп.1-10 или 12-15 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

17. Вакцина по п.16, дополнительно содержащая адъювант, предпочтительно гидроксид алюминия, или 3-де-О-ацилированный монофосфориллипид А (3D-MPL) и фосфат алюминия.

18. Вакцина по п.16 или 17, дополнительно содержащая один или более чем один конъюгированный капсульный полисахарид или олигосахарид, происходящий из следующих штаммов: менингококка серогруппы А, менингококка серогруппы С, менингококка серогруппы W-135, менингококка серогруппы Y и Н.influenzae типа b.

19. Способ изготовления вакцины, содержащей нейссериальный пузырьковый препарат, по п.16, включающий стадии культивирования нейссериального штамма(штаммов) по п.11, выделения из них пузырьков, возможного комбинирования пузырьков иммунотипов L2 и L3, и при необходимости, приготовления пузырьков в виде препаратов с фармацевтически приемлемым эксципиентом.

20. Способ по п.19, где стадию выделения осуществляют путем экстракции с использованием 0-0,5, 0,02-0,4, 0,04-0,3, 0,06-0,2 или 0,08-0,15% дезоксихолата, предпочтительно примерно или точно 0,1% дезоксихолата.

21. Пузырьковый препарат из штамма грамотрицательных бактерий, в наружную мембрану которых интегрирован белок наружной мембраны, конъюгированный с ЛОС.

22. Пузырьковый препарат по п.21, где более 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 99% конъюгированного ЛОС имеют липид А-группировку, интегрированную в наружную мембрану пузырька и/или в окружающую среду, посредством чего его токсичность уменьшена или замаскирована для хозяина, которому его вводят.

23. Пузырьковый препарат по п.21 или 22, где токсичность ЛОС в пузырьке уменьшена по сравнению с пузырьками, имеющими такое же количество неконъюгированного ЛОС.

24. Пузырьковый препарат по п.21, где более 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 99% конъюгированного ЛОС находится в природной конформации, подходящей для индуцирования бактерицидного антительного ответа против него при введении в иммунную систему хозяина.

25. Пузырьковый препарат по п.21, где конъюгированный ЛОС имеет конформацию, подходящую для того, чтобы вызвать иммунный ответ у хозяина, реактивного к неконъюгированному ЛОС.

26. Пузырьковый препарат по п.21, где белок наружной мембраны конъюгирован с олигосахаридной или полисахаридной группировкой молекулы ЛОС.

27. Пузырьковый препарат по п.21, где белок наружной мембраны и молекула ЛОС являются природными для штамма грамотрицательных бактерий, из которых происходят эти пузырьки.

28. Пузырьковый препарат по п.21, полученный способом внутрипузырькового поперечного сшивания.

29. Пузырьковый препарат по п.21, где более 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 95% ЛОС, присутствующего в пузырьках, поперечно сшито или конъюгировано с белком наружной мембраны.

30. Пузырьковый препарат по п.21, происходящий из грамотрицательного штамма, который не продуцирует капсульный полисахарид, или из пузырькового препарата, который не содержит капсульный полисахарид.

31. Пузырьковый препарат по п.21, где капсульный полисахарид не конъюгирован с белком наружной мембраны, интегрированным в пузырьковый препарат.

32. Пузырьковый препарат по п.21, происходящий из Moraxella catarrhalis или нетипируемого штамма Haemophilus influenzae.

33. Пузырьковый препарат по п.21, происходящий из нейссериального штамма, предпочтительно из Neisseria meningitis.

34. Пузырьковый препарат по п.33, содержащий конъюгированный ЛОС L2, конъюгированный ЛОС L3, или смесь конъюгированных ЛОС L2 и L3, предпочтительно раздельно конъюгированных с по меньшей мере 2 разными пузырьками.

35. Пузырьковый препарат по п.33 или 34, происходящий из штаммов IgtB^-, или где ЛОС имеет укороченную структуру, которая соответствует структуре, происходящей из штамма, представляющего собой IgtB^-.

36. Пузырьковый препарат по п.32 или 33, происходящий из штаммов htrB^-и/или msbB^-, или где ЛОС-липид А-группировка лишена вторичных ацильных цепей, соответствующих группировке, выделенной из менингококкового штамма htrB^-и/или msbB^-.

37. Иммуногенная композиция или вакцина, содержащая пузырьковый препарат по пп.21-36 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

38. Иммуногенная композиция или вакцина по п.37, дополнительно содержащая адъювант, предпочтительно гидроксид алюминия, или 3D-MPL и фосфат алюминия.

39. Иммуногенная композиция или вакцина по п.37 или 38, дополнительно содержащая один или более чем один конъюгированный капсульный полисахарид или олигосахарид, происходящий из следующих штаммов: менингококка серогруппы А, менингококка серогруппы С, менингококка серогруппы W-135, менингококка серогруппы Y и Н.influenzae типа b.

40. Способ получения пузырькового препарата с внутрипузырьковой конъюгацией из штамма грамотрицательных бактерий, в наружную мембрану которых интегрирован белок наружной мембраны, конъюгированный с ЛОС, включающий стадии:

а) выделения пузырьков из грамотрицательного штамма,

б) осуществления химизма, подходящего для конъюгации олигосахаридной группировки ЛОС, присутствующей в пузырьках, с белком наружной мембраны, присутствующим в том же пузырьке,

в) выделения пузырькового препарата с внутрипузырьковой конъюгацией, и

г) возможно, приготовления пузырькового препарата с внутрипузырьковой конъюгацией с еще одним пузырьковым препаратом с внутрипузырьковой конъюгацией, приготовленным тем же способом, но имеющим ЛОС другого иммунотипа, и/или приготовления пузырькового препарата с фармацевтически приемлемым эксципиентом для изготовления вакцинной композиции.

41. Способ по п.40, где на стадии а) пузырьки экстрагируют с использованием низкой концентрации дезоксихолата, такой как 0-0,3%, предпочтительно примерно или точно 0,1%.

42. Способ по п.40 или 41, где на стадии б) рН поддерживают в интервале от 7 до 9, предпочтительно около рН 7,5.

43. Способ по п.40, где стадию б) проводят в 1-5% сахарозе, предпочтительно примерно 3%.

44. Способ по п.40, где стадию б) осуществляют в условиях с низкой концентрацией NaCl.

45. Способ по п.40, где стадию б) осуществляют в смеси 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDAC) и N-гидросукцинимида (NHS).

46. Способ по п.40, где на стадии а) пузырьки выделяют из нейссериального штамма, предпочтительно менингококкового штамма, наиболее предпочтительно менингококкового штамма В.

47. Способ по п.46, где штамм не может продуцировать капсульный полисахарид и предпочтительно представляет собой мутант siaD^-.

48. Способ по п.46, где штамм представляет собой мутант lgtB^-.

49. Способ по п.46, где штамм представляет собой msbB^- и/или htrB^-.

50. Способ по п.46, где штамм имеет ЛОС иммунотипа L2.

51. Способ по п.46, где штамм имеет ЛОС иммунотипа L3.

52. Способ по п.46, где на стадии г) менингококковый пузырьковый препарат с внутрипузырьковой конъюгацией с иммунотипом L2, приготовленный с использованием способа по п.50, комбинируют с другим менингококковым пузырьковым препаратом с внутрипузырьковой конъюгацией с иммунотипом L3, приготовленным с использованием способа по п.51.