RU2003106551A

RU2003106551A - METHOD FOR PRODUCING L-AMINO ACIDS USING BACTERIA WITH AN OPTIMIZED GENE EXPRESSION LEVEL

Info

Publication number: RU2003106551A
Application number: RU2003106551/15A
Authority: RU
Inventors: Жанна Иосифовна Каташкина; Мария Григорьевна Лунц; Вера Георгиевна Дорошенко; Светлана Александровна Фомина; Александра Юрьевна Скороходова; Лирина Валерьевна Ивановская; Сергей Владимирович Машко
Original assignee: Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика"
Filing date: 2003-03-12
Publication date: 2004-09-27

Claims

1. Способ получения бактерии с оптимизированным уровнем экспрессии гена, кодирующего белок, влияющий на распределение потоков углерода и азота в указанной бактерии, включающий стадии а. введение в хромосому бактерии набора ДНК фрагментов, синтезированных in vitro и содержащих регуляторные элементы генной экспрессии, вместо природного элемента регуляторной области гена с получением популяции бактерий; и b. селекции бактерии с желаемым фенотипом.1. A method of producing a bacterium with an optimized expression level of a gene encoding a protein, which affects the distribution of carbon and nitrogen fluxes in the specified bacterium, comprising stages a. introducing into the bacterial chromosome a set of DNA fragments synthesized in vitro and containing regulatory elements of gene expression, instead of a natural element of the regulatory region of the gene to obtain a bacterial population; and b. breeding bacteria with the desired phenotype.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент L-аминокислоты.2. The method according to claim 1, characterized in that said bacterium is a bacterium producing L-amino acids.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из L-глутаминовой кислоты, L-глутамина, L-пролина, L-аргинина.3. The method according to claim 2, characterized in that the L-amino acid is selected from the group consisting of L-glutamic acid, L-glutamine, L-proline, L-arginine.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент нуклеиновой кислоты.4. The method according to claim 1, characterized in that said bacterium is a bacterium producing a nucleic acid.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота выбрана из группы, состоящей из инозина, гуанозина и аденозина.5. The method according to claim 4, characterized in that the nucleic acid is selected from the group consisting of inosine, guanosine and adenosine.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что фрагмент ДНК содержит один или несколько регуляторных элементов, выбранных из группы, состоящей из промотора, сайта связывания рибосомы (RBS) и оператора.6. The method according to claim 1, characterized in that the DNA fragment contains one or more regulatory elements selected from the group consisting of a promoter, a ribosome binding site (RBS) and an operator.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что набор фрагментов ДНК содержит регуляторные элементы с последовательностью нуклеотидов произвольного состава.7. The method according to claim 6, characterized in that the set of DNA fragments contains regulatory elements with a nucleotide sequence of arbitrary composition.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что набор фрагментов ДНК составлен из регуляторных элементов с известной последовательностью и известной силой.8. The method according to claim 7, characterized in that the set of DNA fragments is composed of regulatory elements with a known sequence and known strength.

9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что указанная бактерия принадлежит к роду Escherichia.9. The method according to any one of claims 1 to 8, characterized in that said bacterium belongs to the genus Escherichia.

10. Бактерия - продуцент L-аминокислоты с оптимизированным уровнем экспрессии гена, кодирующего белок, который влияет на продукцию L-аминокислоты, причем такая бактерия получена способом по любому из пп.1-9.10. A bacterium is a producer of L-amino acids with an optimized expression level of a gene encoding a protein that affects the production of L-amino acids, and such a bacterium is obtained by the method according to any one of claims 1 to 9.

11. Бактерия - продуцент L-аминокислоты по п.10, отличающаяся тем, что последовательность области “-35” промотора гена sucAB содержит последовательность, приведенную в Списке последовательностей под номером 11 или 12.11. The bacterium-producer of the L-amino acid of claim 10, characterized in that the sequence of the “-35” region of the sucAB gene promoter contains the sequence shown in the List of sequences numbered 11 or 12.

12. Способ получения L-аминокислоты, включающий стадии выращивания бактерии по п.10 в питательной среде с целью продукции и накопления L-аминокислоты в питательной среде, и выделения L-аминокислоты из культуральной жидкости.12. A method for producing an L-amino acid, comprising the steps of growing the bacterium of claim 10 in a nutrient medium to produce and accumulate an L-amino acid in a nutrient medium, and isolate the L-amino acid from the culture fluid.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из L-глутаминовой кислоты, L-глутамина, L-пролина, L-аргинина.13. The method according to p. 12, characterized in that the L-amino acid is selected from the group consisting of L-glutamic acid, L-glutamine, L-proline, L-arginine.