RO118426B1 - Derivati de indol utilizati pentru tratarea diabetului zaharat si a obezitatii - Google Patents

Abstract

Prezenta inventie se refera la derivati de indol utilizati pentru tratarea diabetului zaharat si a obezitatii, la procedee de preparare, la o compozitie farmaceutica care ii contine, si la utilizarea acestora in terapie. Derivatii conform inventiei au formula generala I: in care R1 reprezinta o grupare alcoxi inferior, alcoxicarbonil inferior-alcoxi inferior, o grupare carboxi-alcoxi inferior, o grupare alcoxicarbonil inferior, o grupare fenil-alcoxi inferior optional hidroxilata cu alchil inferior, di(alchil inferior)amino-sulfonil etc; R2 reprezinta hidrogen, halogen, alcoxi inferior,alcoxicarbonil inferior-alcoxi inferior, carboxi-alcoxi inferior etc; R3 reprezinta hidrogen sau alchil inferior; R4 reprezinta halogen sau trifluorometil; si R5 reprezinta o grupare alchil inferior. Compusul este un puternic stimulent al receptorului andrenergic, cu selectivitate foarte buna, si este util in prevenirea si tratarea obezitatii.

Description

Prezenta invenție se referă la derivați de îndoi având o puternică activitate de stimulare a receptorului p₃-adrenergic cu o foarte bună selectivitate adrenoreceptoare, fiind utilizați în tratamentul diabetului zaharat și în prevenirea obezității.

Se cunoaște că β-receptorul nervului simpatic are două subtipuri, adică receptorul β,-adrenergic și receptorul β₂^Γβηβφο. în prezent, agenții de stimulare a receptorul β,adrenergic sunt utilizați ca promotori ai funcției cardiace sau ca vasopresori și respectiv, agenții de stimulare a receptorului 6₂-adrenergic, sunt utilizați ca bronhodilatatori.

Recent, s-a găsit și s-a izolat receptorul β₃^Γβηβφο, ca al treilea subtip al receptorului β-adrenergic, care este diferit de cele două subtipuri menționate mai sus [Emorine, L.J. et al., Science, 245,1118-1121 (1989)]. Receptorul β₃^Γβηβ^ϊο există în celulele adipoase maro, și a fost estimat ca având o activitate termoenergetică prin descompunerea lipidelor celulelor adipoase albe, care aderă la țesuturile subcutanate sau la organele interne, și de aceea s-a sugerat că receptorul p₃-adrenergic este legat de apariția obezității. Pe lângă aceasta s-a raportat că, criza de diabet zaharat nedependent de insulină poate, de asemenea, să fie legată de receptorul P₃-adrenergic.

Când un agent de stimulare a receptorului β₃^Γβηβφο acționează asupra receptorului β,-adrenergic precum și asupra receptorului β₂^Γβηβφο, pot apărea efecte secundare, cum ar fi hiperfuncțiunea inimii, tremurul mâinilor și al picioarelor. Astfel, cercetările au avut drept scop să dezvolte un medicament care să aibe o puternică activitate de stimulare a receptorului p₃-adrenergic, dar nu și activități de stimulare a receptorului β,-adrenergic și a receptorului p₂-adrenergic sau care să aibe activitate slabă de stimulare a receptorilor β_Γ și β₂^Γβηθφο. în prezenta descriere și în revendicări, compusul având astfel de proprietăți este denumit ca “un compus având o foarte bună selectivitate adrenoreceptoare”.

Ca agent de stimulare a receptorului p₃-adrenergic, a fost descris compusul BRL35135, bromhidratul esterului metilic al acidului {(R*,R*)-(+)-[4-[2-[2-(3-clorfenil)-2hidroxietilamino]-propil]fenoxi]acetic; J.P.-A2-26744/1988 [Kokuku) și E.P. 23385], compusul SR-58611A, clorhidratul de {(R,S)-N-(7-etoxicarbonilmetoxi-1,2,3,4-tetrahidronaft-2-il)-2-(3clorfenil)-2-hidroxietanamidă; J.P.-A1-66152/1989 (Kokai) și E.P. 255415-A}. Totuși, compușii BRL35135 și SR-58611A sunt complet diferiți de compușii din prezenta invenție, așa cum sunt menționați în continuare, acești compuși nefiind derivați de îndoi.

Tabelul 1 cuprinde alți compuși de îndoi, de asemenea, cunoscuți.

Tabelul 1

Structura chimică	Activitate farmaceutică	Literatură
ÎH HO~^3—CH-CHj-NH-^H-CHj — NHSOjCH, CHj h	activitate de stimulare a receptorului P2-adrenergic	Brevet DE 3407861
HO-Q—țH-CHg-NH-CH-CHj CjO ho' oh ch3	activitate de inhibare a sistemului nervos central	Brevet GB 861428
CHjO-O— CH-CHj-NH-CHz-CHj Br' OH	activitate antibacteriană	J.Org.Chem. 56, 4403-4407 (1991)

RO 118426 Β1

Tabelul 1 (continuare)

Structura chimică	Activitate farmaceutică	Literatură
HO-£3—^H-CHj-NH-CH-CHî CHjOH OH CH, h	activitate de stimulare a receptorului β-adrenergic	JP-A2-2653/1977 (Kokuku)
HO“^— CHjCN OH CH, H	activitate de stimulare a receptorului β-adrenergic	JP-A2139041/1977 (Kokai)
HO-^--țM-CHj-NH-CH-CHî— CONHj OH CH,	activitate de blocare a receptorului β-adrenergic	J.Med.Chem., 25, 670-679 (1982)

Totuși, acești compuși sunt diferiți din punct de vedere a structurii chimice, de compușii chimici conform prezentei invenții, având doi substituenți în nucleul benzenic și neavând nici un substituent în nucleul indolic. Pe lângă aceasta, referințele din literatură nu conțin nici o sugestie că acești compuși ar avea o activitate de stimulare a receptorului β₃adrenergic.

Compușii următori sunt cunoscuți că au o structură chimică mai asemănătoare compușilor, conform prezentei invenții, decât compușii cuprinși în tabelul 1.

De exemplu, J. Pharm. Pharmacol., 17,742-746 (1965) descrie următorul compus A.

CH - CH₂ -NH - CH₂ - CH₂ I

OH

Acta. Polon Pharm., 38,407-410 (1981) (Chem. Abstr., 96,142543k (1982) descrie următorul compus B.

CH- CH₂ -ΝΗ - CH₂- CH₂

OH

Compușii de mai sus, A și B, au structuri chimice deferite de compușii prezentei invenții, deoarece nu au substituent în nucleul benzenic și nici substituent corespunzător substituentului R₆ ai compușilor prezentei invenții, așa cum se menționează mai jos. în plus, referințele de literatură nu cuprind indicații sau vreo sugestie cu privire la activitățile farmacologice ale compușilor A și B.

în plus, Chem. Abstr., 109, 128763η (1988), descrie un derivat de N-indolilalchilamino-1-aril-alcanol substituit, având următoarea formulă VIII:

r-ch-ch₂ —nh-ch-ch₂ l ‘i

OH R¹ [VIII]

RO 118426 Β1 în care: R este o grupare fenil, o grupare m- sau p-nitrofenil, etc, și R¹ este un atom de hidrogen sau o grupare metil.

Compusul menționat mai sus are o structură chimică diferită față de compușii prezentei invenții, deoarece substituentul în nucleul benzenic este o grupare nitro și nucleul indolic nu are substituent. Compusul prezentat cu formula VIII, include, în mod special compusul C.

NO₂

CH- CH₂ —NH - CH₂- CH₂ —π— OH %

H

Compusul, conform prezentei invenții, este cu mult superior ca agent de stimulare a receptorului p₃-adrenergic, față de Compușii A, B sau C, așa cum o arată experimentările farmacologice menționate în continuare.

Astfel, problema pe care o rezolvă invenția este de a pune la punct un nou derivat de indol având o puternică activitate de stimulare a receptorului p₃-adrenergic cu o foarte bună selectivitate adrenoreceptoare, sau o sare a acestuia.

Prezenta invenție se referă la derivați de indol având următoarea formulă structurală generală I:

[I] în care: R, este o grupare alchil inferior, opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare alchil inferior-sulfonilamino, o grupare mono- sau di-alchil inferior-aminosulfonil sau o grupare aleasă dintre următoarele de la (a la d), sau combinat cu R₂ pentru a forma o grupare metilendioxi, numita grupare metilendioxi, fiind opțional substituită cu o grupare carboxil sau cu o grupare alcoxi inferior- carbonil, (a) o grupare având formula -X-Ra, în care X este O, S sau NH, Ra este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior, astfel, încât atunci cînd X este S, Ra să fie o grupare alchil inferior, (b) o grupare având formula:

Rb

I

-{0(CH₂)_m-CH]„-Rbb în care: Rb este un atom de hidrogen, o grupare alchil inferior, o grupare alcoxi inferior carbonil, sau o grupare carboxil, Rbb este o grupare alcoxi inferior-carbonil sau o grupare carboxil, m este un număr întreg de la 0 la 3 și n este 0 la 1;

R0118426 Β1 (c) o grupare de formula: -O(CH₂)_P-R_c, în care R_c este o grupare alcanoil inferior, o grupare hidroxi, o grupare cian, o grupare fenil, o grupare mono- sau di- alchil -inferior- 145 aminocarbonil sau o grupare avînd formula:

150 în care: R_A este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior și p este un număr întreg de la 1 la 4; 155 (d) o grupare având formula: -Y-(CH₂)_qRd, în care Y este NH sau S, Rd este o grupare carboriil sau o grupare alcoxi inferior-carbonil și geste un număr întreg de la 1 la 4;

R_z este un atom de hidrogen, un atom de halogen, sau o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare hidroxi, o grupare alcoxi inferior, sau o grupare din cele menționate anterior la (b sau c) sau combinat cu R, pentru a forma o gru- 160 pare metilendioxi, gruparea metilendioxi menționată fiind opțional substituită cu o grupare carboxil sau cu o grupare alcoxi-inferior-carbonil;

R₃ este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior;

W este o grupare având formula II, care se leagă în pozițiile 2- sau 3- ale nucleului indolic: 165

ch-ch₂

OH —NH-CH-CHj — ^R5 [II]

170 în care: R₄ este un atom de halogen sau o grupare trifluormetil și R₅ este o grupare alchil inferior sau o sare a acestuia.

Derivații de îndoi care fac obiectul prezentei invenții pot fi preparați printr-un procedeu care cuprinde reacția unui compus cu formula generală III: 175 ^R4 ^ςκ-cH, ^tinl

O 180 în care: R₄ are semnificațiile din formula generală structurală I, cu un compus cu formula generală IV:

185

în care: Rj.R^ R₃ și R₅ au aceleași semnificații ca mai sus, sau o sare a acestuia.

190

R0118426 Β1

Derivații de îndoi cu formula generală l-b:

CH- CH₂~NH“ CH- CH

în care: R’ este o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare mono- sau di-alchil inferior-aminosulfonil sau o grupare aleasă din cele cuprinse la (a’, b, c și d’) sau combinat cu R₂, astfel, încât să formeze o grupare metilendioxi, gruparea menționată fiind opțional substituită cu o grupare carboxil sau o grupare alcoxi inferior-carbonil;

(a’) o grupare având formula -X’Ra în care X’ este O sau S, Ra are aceeași semnificație ca mai sus, astfel, încât atunci cînd X’ este S, Ra este o grupare alchil inferior;

(b) o grupare avînd formula:

Rb

I

-{Q(CH_?L -CHL-Rbb în care: Rb, Rbb, m și n au aceleași semnificații ca mai sus;

(c) o grupare având formula -O(CH₂)_p-R_c, în care R_c și p au aceleași semnificații ca în revendicarea 1;

(d’) este o grupare cu formula: -Y’- (CH₂)_q- Rd, în care Y’ este S, Rd și qau aceleași semnificații ca mai sus; și R₂, R₃, R₄și R₅ au aceleași semnificații ca în revendicarea 1,sau sarea acestuia, care cuprinde reacția unui compus cu formula V :

ch₂-nh₂ [V] în care: R₄ este definit ca în revendicarea 1, cu un compus cu formula VI:

în care: R, are aceeași semnificație ca mai sus și Rj, R, și FȚ au aceleași semnificații ca mai sus, în condiții de reducere.

RO 118426 Β1

245

Derivații de indol cu formula generală l-c:

[I-c] în care: R” este o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare 250 fenilsulfonilamino, o grupare mono- sau di-alchil inferior-aminosulfonil sau o grupare selectată din cele prezentate la (a) sau (c^B); sau combinațiile cu R₂' pentru a forma o grupare metilendioxi, (a) o grupare având formula -XRa, în care X și Ra au aceleași semnificații ca mai sus; 255 (c”) o grupare avînd formula -O(CH₂)_p-R”_c, în care R”_c este o grupare hidroxi, o grupare fenil sau o grupare cu formula:

O

I

- P- OR_a

OR_a

260 în care: R_A este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior și p are aceeași semnificație ca mai sus; 265

R₂* este un atom de hidrogen, un atom de halogen, o grupare alchil inferior fiind substituită opțional cu o grupare hidroxi,o grupare hidroxi, o grupare alcoxi inferior, o grupare din cele menționate mai sus la (c”), sau combinațiile cu R/ pentru a forma o grupare metilendioxi și R₃, R₄ și R₅ au aceleași semnificații ca cele prezentate în formula I, sau o sare a acestuia, care constă în reducerea compusului cu formula VII: 270

[VII]

275

280 în care: R/ și R₂' au aceleași semnificații ca mai sus și R₃, R₄ și R, au aceleași semnificații ca mai sus.

Un alt obiect al prezentei invenții îl constituie o compoziție farmaceutică care 285 cuprinde un derivat de indol definit prin formula structurală generală I sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, și un purtător sau un diluant acceptabili farmaceutic.

Un alt obiect al prezentei invenții îl constituie utilizarea derivaților de indol cu formula generală structurală I sau a unei sări acceptabile farmaceutic la fabricarea unui medicament pentru tratamentul diabetului zaharat la mamifere. 290

Un alt obiect al prezentei invenții îl constituie utilizarea derivaților de indol cu formula generală structurală I sau o sare acceptabilă farmaceutic la fabricarea unui medicament pentru tratamentul obezității la mamifere.

RO 118426 Β1

Activitatea de stimulare a receptorului Ș₃-adrenergic și foarte bună selectivitate adrenoreceptoare a compușilor, conform invenției, au la bază particularitățile caracteristice structurale ale compușilor, menționați anterior, sau combinațiile acestora.

în continuare, sunt explicități termenii utilizați în descriere și în revendicări.

Particularitățile caracteristice structurale ale compușilor I, conform invenției, sunt:

(1) au un atom specific sau o grupare specifică în poziția 3- a nucleului benzenic, în substituentul W;

(2) substituentul R₅ este o grupare alchil inferior;

(3) au substituenții R, și R₂ în poziția 4- și 7-a a nucleului indolic;

(4) au substituentul W în poziția 2- și 3-a a nucleului indolic.

O grupare care include termenul “inferior” reprezintă o grupare care are de la 1 până la 4 atomi de carbon. O “grupare alchil inferior” include, de exemplu, metil, etil, propil, izopropil, butii, izobutil, secundar butii, terț- butii, etc, dar, de preferință, metil, etil, propil și izopropil. O “grupare alchil inferior substituită cu o grupare hidroxi include, de exemplu, hidroximetil, 2-hidroxietil, etc. O “grupare alchil inferior-sulfonilamino” include, de exemplu, metilsulfonilamino, etilsulfonilamino, etc. O “grupare mono- sau di-alchil inferior-aminosulfonil” include, de exemplu, monometilaminosulfonil, dimetilaminosulfonil, monoetilaminosulfonil, dietilaminosulfonil, etc. O “grupare alcoxi inferior-carbonil” include, de exemplu, metoxicarbonil, etoxicarbonil, propoxicarbonil, butiloxicarbonil, etc. O “grupare alcanoil inferior include, de exemplu, acetil, propionil, etc. O “grupare mono- sau di-alchil inferior-aminocarbonil” include, de exemplu, metilaminocarbonil, dimetilaminocarbonil, metiletilaminocarbonil, etc. Un “atom de halogen” este fluor, clor, brom, iod, preferabil, fluor, clor și iod, și mai, preferabil, fluor și clor. O “grupare alcoxi inferior include, de exemplu, metoxi, etoxi, propoxi, izopropoxi, butoxi, izobutoxi, secundar butoxi, tert-butoxi, etc. O “grupare alcoxi inferior carbonil-alcoxi inferior (oxalchil inferior)” include, de exemplu, metoxicarbonilmetoxi,

1-metoxicarboniletoxi, 2-metoxicarboniletoxi, 1-metoxicarbonilpropoxi, 3-metoxicarbonilpropoxi, etc. O “grupare carboxi-alcoxi inferior”, include, de exemplu, carboximetoxi, 1carboxietoxi, 2-carboxietoxi, 1-carboxipropoxi, 3-carboxipropoxi, etc. O “grupare fenil-alcoxi inferiori’, include, de exemplu, benziloxi, fenetiloxi, etc.

Sarea compușilor cu formula I este, de exemplu, o sare de adiție de acid a acestora, de preferință, o sare de adiție de acid, acceptabilă farmaceutic. Sarea de adiție de acid include, de exemplu, sărurile cu un acid anorganic, ca de exemplu, acid clorhidric, acid bromhidric, acid iodhidric, acid sulfuric, acid fosforic și sărurile cu un acid anorganic, cum ar fi, acidul oxalic, acidul maleic, acidul fumărie, acidul lactic, acidul malic, acidul citric, acidul tartric, acidul benzoic, acidul metansulfonic, etc. Pe lângă aceștia, compușii din prezenta invenție având o grupare carboxil pentru definirea substituenților R, și R₂ pot exista sub formă de sare a unui metal alcalin sau sub formă de sare cu o bază organică, de exemplu, o sare cu un metal alcalin cum ar fi, sodiu, potasiu, etc, sau o sare cu o bază organică, cum ar fi, trietilamină, tributilamina, diizopropiletilamina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, etc.

Aceste săruri de adiție de acid, sărurile metalelor alcaline sau sărurile cu bazele organice, pot exista sub formă de hidrat sau de solvat a acestora, prezenta invenție incluzând, de asemenea, acești hidrați sau solvați.

Compusul, conform prezentei invenții, având formula structurală generală I, are doi atomi de carbon asimetrici. Astfel, în formula II, atomul de carbon la care se leagă gruparea hidroxi, și, atomul de carbon la care se leagă R₅ sunt atomi de carbon asimetrici. în acest fel, compusul conform prezentei invenții are patru stereoizomeri, prezenta invenție incluzând, de asemenea, acești compuși optic activi, compușii racemici și amestecurile acestora.

R0118426 Β1

Compusul preferat, conform prezentei invenții, este un compus cu formula structurală generală I, în care substituentul W se leagă în poziția 3, a nucleului indolic, cum ar fi compusul cu formula l-a:

345

[I-a]

350 în care: R_1t R₂, R₃, R₄ și R₅ au aceeași semnificație ca mai sus, sau o sare a acestuia.

Printre aceștia, compusul mai preferat al prezentei invenții este compusul cu formula I, în care R, se leagă în poziția 5-, 6- sau 7- ale nucleului indolic și R₂ este un atom de hidrogen sau o sare a acestuia, sau un compus cu formula l-a, în care R₂ este o altă grupare 355 decât atomul de hidrogen și unul dintre radicalii R₁ și R₂ se leagă în poziția 6- a nucleului indolic și celălalt radical se leagă în poziția 7- a acestuia, sau o sare a acestuia.

Alt compus preferat al prezentei invenții este un derivat de îndoi cu formula l-a, în care R₁ este o grupare alchil inferior substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare alchil inferior-sulfonilamino, o grupare dî-alchil inferior- 360 aminosulfonil sau o grupare selectată dintre cele de la (a, b-1, c-1 sau d);

(a) o grupare având formula -XRa, în care X și Ra au semnificațiile de mai sus;

(b-1) o grupare avînd formula:

Rb-1

I

-[OtCHjL -CHL-Rbb

365 în care: Rb-1 este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior, Rbb, m și n au aceleași semnificații ca mai sus; 370 (c-1) o grupare avînd formula -O(CH₂)_P-R_c-1, în care R_c-1 este o grupare alcanoil inferior, o grupare fenil, o grupare mono-alchil-inferior-aminocarbonil și pare aceeași semnificație ca mai sus;

(d) o grupare cu formula: -Y- (CH₂)_q- Rd, în care Y, Rd și q au aceleași semnificații ca mai sus; 375

R₂ este un atom de hidrogen, un atom de halogen, o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare hidroxi, o grupare alcoxi inferior sau o grupare dintre cele definite mai sus la (b-1 sau c-1) sau o sare a acestuia. Printre compușii de mai sus, compusul cel mai preferat este un derivat de îndoi având formula [1-a], în care R, este o grupare alcoxi inferior, o grupare alchil inferior, o grupare alcoxi inferior-carbonil, o grupare 380 alcoxi inferior-carbonil-alcoxi inferior, o grupare carboxi-alcoxi inferior,o grupare fenil alcoxiinferior, sau o grupare di-alchil inferior-aminosulfonil, R₂ este un atom de hidrogen, un atom de halogen, o grupare alcoxi inferior, o grupare alchil inferior, o grupare alcoxi inferiorcarbonil, o grupare alcoxi-inferior-carbonil- alcoxi inferior, o grupare carboxi-alcoxi inferior, sau o grupare fenil-alcoxi inferior, R₃ este un atom de hidrogen, R₄ este un atom de halogen, 385 și R₅este o grupare metil sau o sare a acestuia.

Compusul, preferat în mod special, este un derivat de îndoi având formula [1-a], în care R, este o grupare metoxi, o grupare etoxi, o grupare propoxi, o grupare izopropoxi, o grupare metil, o grupare metoxicarbonil, o grupare metoxicarbonilmetoxi, o grupare

R0118426 Β1 carboximetoxi, o grupare benziloxi sau o grupare dimetilaminosulfonil, R₂ este un atom de hidrogen sau o grupare metoxi, R₃ este un atom de hidrogen, R₄ este un atom de clor și R₅ este o grupare metil, sau o sare a acestuia.

Compusul cel mai preferat al prezentei invenții este un derivat de îndoi, având formula [1-a], în care R! este o grupare metoxi, o grupare etoxi, o grupare metoxicarbonil, o grupare metoxicarbonilmetoxi, sau o grupare carboximetoxi, care se leagă în poziția 6- sau 7- a nucleului indolic, R₂ și R₃ sunt fiecare un atom de hidrogen, R₄ este un atom de clor și R₅ este o grupare metil, sau o sare a acestuia.

Reprezentativi pentru cei mai preferabili compuși sunt:

2-[3-(7-Metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanol

2-[3-(7-Etoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanol

2-[3-(7-Metoxicarbonilmetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanol

2-[3-(7-Carboximetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanol și izomerii optici ai acestora sau sărurile acestora.

Reprezentativi, conform prezentei invenții, sunt compușii cuprinși în tabelele 2,3 și 4 și sărurile acestora.

Tabelul 2

Ri	r4	Ri	R4
6-OH	CI	7-OC2H4COOH	CI
6-COOH	CI	7-OCH(CH3)2	CI
6-OCH2COCH3	CI	7-OC2H4COOCH3	CI
6-OCH2CONHCH3	CI	7-OCH2COCH3	CI
6-SCH2COOH	CI	7-OCH2CONHCH3	CI
6-SCH2COOCH3	CI	7-OCH2CH2OH	CI
6-NHCH2COOH	CI	7-OCH2CN	CI
6-NHCH2COOCH3	CI	7-OCH(COOH)2	CI
6-NHSO2CH3	CI	7-OCH(COOCH3)2	CI
6-NHSO2Ph	CI	7-SCH3	CI
7-OH	CI	7-SCH2COOH	CI
7-SCH2COOCH3	CI	7-CH2OH	CI
7-NHCH2COOCH3	CI	7-COOH	CI
7-NHCH2COOH	CI	7-COOCH3	CI

RO 118426 Β1

Tabelul 2 (continuare)

435

Rt	r4	Ri	r4
7-NHSO2Ph	CI	7-OCH(CH3)COOH	CI
7-NHSO2CH3	CI	7-OCH(CH3)COOCH3	CI
7-NHz	CI	7-SO2N(CH3)2	CI
7-OCH3	cf3	6-COOCH3	cf3
7-OC2Hs	cf3	6-OCH2COOH	cf3
7-COOCH3	cf3	6-OCH2COOCH3	cf3
7-OCH2COOH	cf3	7-OCH2COOCH3	cf3
7-OCH3	CI	7-OC2H5	CI
6-OCH3	CI	7-OCH2Ph	CI
6-CH3	CI	7-CH3	CI
6-OCH2COOCH3	CI	6-COOCH3	CI
4-OCH3	CI	4-CH3	CI
6-SO2N(CH3)2	CI	6-OCH2COOH	CI
7-OCH2COOCH3	CI	7-CH2OH	CI
7-O(CH2)2CH3	CI	7-OCH2COOH	CI

440

445

Tabelul 3

450

455

Ri	r2	Ri	r2
och3	F	OCH3	oc2h4cooch3
och3	och2cooh	oc2h5	F
och3	oc2h5	oc2h5	och3
och3	OH	oc2h5	oc2h4cooh
och3	OCH(CH3)COOH	oc2h5	oc2h5
och3	och2cooch3	oc2h5	och2cooh
och3	OCH(CH3)COOCH3	och2cooh	oc2h5
och2cooh	och2cooh	OH	och3

460

465

RO 118426 Β1

Tabelul 3 (continuare)

Ri	r2	Rt	r2
OCH2COOCH3	OCHg	OH	OCH(CH3)COOH
oc2h4cooh	oc2H5		-o-ch2-o-
och2cooh	OCHg		-O-C(COOH)2-O-
oc2h4cooh	OC2H4COOH		-O-C(COOCH3)2-O-
och3	OCHg

Tabelul 4

Rf	Ri	R:	R,
OCH3	och2cooh	OCH2COOCH3	OC2H4COOH
CHg	COOCHg	oc2h5	O(CH2)2CH3

* substituentul R, se leagă în poziția 6- sau 7- a nucleului indolic

Compusul, conform invenției, poate fi preparat prin următoarele procedee:

Procedeul (a)

Un compus, conform invenției, cu formula I, poate fi preparat prin reacția unui compus cu formula III:

în care: R₄, are aceleași semnificații ca mai sus, cu un compus având formula IV:

în care: R,, R₂, R₃ și R₅ au aceleași semnificații ca mai sus, sau o sare a acestuia.

Reacția poate fi condusă în mediu adecvat de solvent sau în absența solventului.

Solventul poate fi selectat din aceeași clasă a materiilor prime și include, de exemplu, alcooli, (de exemplu, metanol, etanol, izopropanol, etc), cetone (de exemplu, acetonă, metilcetonă, etc), hidrocarburi halogenate (de exemplu, clorură de metilen, cloroform, etc), eteri

RO 118426 Β1 (de exemplu, dietileter, tetrahidrofuran, dioxan, etc), hidrocarburi aromate (de exemplu, benzen, toluen, etc), acetat de etil, Ν,Ν-dimetilformamidă, dimetilsulfoxid și alții, și acești 515 solvenți pot fi utilizați singuri sau în combinații de doi sau mai mulți. în plus, când compusul IV este sub forma de sare de adiție a unui acid, de exemplu, un acid anorganic, cum ar fi, acidul clorhidric, acidul bromhidric, etc, sau o sare cu un acid organic, cum ar fi oxalat, maleat, fumarat, etc, reacția are loc în prezența unei baze. Baza include, de exemplu, carbonat acid al unui metal alcalin, cum ar fi carbonat acid de sodiu, carbonat acid de 520 potasiu, un carbonat al unui metal alcalin, cum ar fi carbonat de sodiu, carbonat de potasiu, etc, sau o o bază organică cum ar fi trietilamină, tributilamină, diizopropiletilamină, N-metilmorfolină, etc. în plus, când în substituenții R, sau R₂ este inclusă o grupare carboxil, reacția este condusă în prezența unei baze așa cum s-a menționat anterior.

Temperatura de reacție variază în funcție de materiile prime ce pot fi utilizate, dar 525 este, de regulă, cuprinsă în domeniul de la temperatura camerei până la temperatura de 150°C, preferabil, în domeniul de la 25°C până la aproximativ 100°C.

în procedeul (a) ambele materii prime, adică compușii III și IV au un atom de carbon asimetric, și reacția de bază are loc cu păstrarea configurației sterice a carbonului asimetric, rezultând compusul dorit I, având aceeași configurație sterică. Astfel, de exemplu, compusul 530 dorit I, având configurația-(R,R) este obținut din compusul inițial III, având configurația-R și compusul inițial IV, având configurația-R.

Compusul optic activ având formula III, poate fi preparat, de exemplu, printr-o metodă similară cu cea descrisă de Bloom, J.D. șl alții, J.Med.Chem., 35,3081-3084 (1992), sau în Eliel, E.L. & Delmonte, D.W., J.Org.Chem., 21,596-597 (1956). Compusul optic activ 535 având formula IV, poate fi preparat, de exemplu, printr-o metodă similară cu cea descrisă de Repke, D.B. & Ferguson, W.J., J.Heterocycl., Chem., 13, 775-778 (1976).

Compusul inițial având formula IV, poate fi preparat, de exemplu, prin metoda descrisă în J.Org.Chem., 21,1548-1558 (1960).

Printre materiile prime având formula IV, compusul cu formula IV, în care jumătatea 540 cu structura:

HoN-CH-CH₂I

545 în care: R₅ are aceeași semnificație ca mai sus și se leagă la poziția 3- a nucleului indolic, poate fi preparat prin metoda descrisă în J.Org.Chem., 51,4294-4295 (1986).

Procedeul (b)

Compusul cu formula I, conform prezentei invenții, în care substituentul R, este o grupare mai limitată R/, adică compusul cu formula l-b:

550

CH- CH,-NH~ CH- CH

555 în care: R, este o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare alchil inferior-sulfonilamino, o grupare mono- sau di-alchilinferior-aminosulfonil sau o grupare aleasă dintre cele cuprinse la (a”, b, și d”), sau corn- 560 binată cu R₂, astfel, încât să formeze o grupare metilendioxi, gruparea metilendioxi menționată fiind opțional substituită cu o grupare carboxil sau o grupare alcoxi inferiorcarbonil,

RO 118426 Β1 (a”) o grupare avînd formula: -X”-Ra (în care X” este O sau S, Ra are aceeași semnificație ca mai sus, astfel încât, când X” este S, Ra este o grupare alchil inferior), (b) o grupare având formula:

Rb

I -{□(CH;,),,, -CH),,-Rbb (în care Rb, Rbb, m și n au aceeași semnificație ca mai sus);

(c) o grupare de formula: -O(CH₂)_P-R_c (în care R_c și p au aceeași semnificație ca mai sus);

(d”) o grupare avînd formula: -Y”-(CH₂)_Q-Rd (în care Y” este S, Rd și q au aceeași semnificație ca mai sus), poate fi preparat prin reacția unui compus cu formula V:

[V] în care: R₄ este definit ca mai sus, cu un compus cu formula VI:

în care: R/, R₂, R₃ și R₅ au aceeași semnificație ca mai sus, în condiții reducătoare.

“Reacția în condiții reducătoare”, înseamnă, în prezentul procedeu, reacția compusului V și a compusului VI, în prezența unui agent de reducere sau a unui catalizator care poate reduce numai jumătatea iminică, formată în timpul reacției, dar care nu afectează în nici un fel gruparea carbonil.

Ca agenți reducători, se folosesc, de exemplu, cianoborohidrură de sodiu, și catalizatorul include, de exemplu, paladiu, oxid de platină, etc.

Reacția este condusă în prezența unui agent reducători sau a unui catalizator, într-un solvent adecvat. Solventul este, de preferință, un alcool, cum ar fi metanolul, etanolul, etc. reacția este, de obicei condusă la o temperatură de la aproximativ 20°C până la aproximativ 80°C, când se utilizează un agent reducător și când se utilizează un catalizator, reacția este condusă la o temperatură de la aproximativ 10°C până la aproximativ 25°C.

Procedeul (c)

Compusul cu formula I, în care în substituentul R₃ sau R₂ nu este inclusă o grupare carbonil sau o grupare ciano, adică compusul cu formula l-c:

[I-c]

RO 118426 Β1 în care: R,” este o grupare o alchil inferior, opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare alchil inferior-sulfonilamino, o grupare mono- sau di-alchil inferior-aminosulfonil, sau o grupare selectată din cele prezentate la (a) sau (c”); sau corn- 615 binațiile cu R₂‘ pentru a forma o grupare metilendioxi, (a) o grupare avînd formula: -XRa (în care X și Ra au aceleași semnificații ca mai sus);

(c”) o grupare avînd formula: -O(CH₂)_P-R_c”, în care R_c“ este o grupare hidroxi, o grupare fenil sau o grupare cu formula: 620

I -p-or

I

0R_a

625 (în care: R_A este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior și p are aceeași semnificație ca mai sus);

R₂ este un atom de hidrogen, un atom de halogen, o grupare alchil inferior fiind 630 substituită opțional cu o grupare hidroxi, o grupare alcoxi inferior, o grupare din cele menționate mai sus la (c”), sau combinațiile cu R,'pentru a forma o grupare metilendioxi și R₃, R₄ și R_s au aceleași semnificații ca mai sus, poate fi preparat prin reducerea compusului cu formula VII:

635

[vn]

640 în care: R/, R₂, R₃, R₄ și R_s au aceleași semnificații ca mai sus.

Reacția este condusă în prezența unui agent reducător într-un solvent adecvat. Ca agenți reducători se pot folosi, de exemplu, diboran, hidrura de litiu și aluminiu, sau un 645 complex-alcoxi al acestuia, o sare a unui metal tranzițional al acestora, o borohidrură de sodiu în amestec cu clorură de aluminiu, trifluorură de bor, oxiclorură de fosfor sau acid carboxilic (de exemplu, acid acetic, acid trifluoracetic, etc). Ca solvenți se pot folosi, de exemplu, eteri, cum ar fi dietileter, terahidrofuran, dimetoxietan, dioxan, diglimă, etc. Temperatura de reacție variază în funcție de tipul de agent reducător ce urmează a fi utilizat, dar 650 este, de regulă, în domeniul de la aproximativ 0°C la aproximativ 160°C.

Configurația sterică a atomului de carbon asimetric a compusului VII considerat ca materie primă se menține în produsul final obținut conform procedeului menționat.

Compusul VII utilizat ca materie primă este un compus nou și este preparat, de exemplu, prin reacția unui compus cu formula IX: 655

CH-COOH i [K]

OH

660

RO 118426 Β1 în care: R₄ are aceleași semnificații ca mai sus, cu un compus cu formula X:

în care: R/, R₂, R₃, și R₅ au aceleași semnificații ca mai sus, sau sărurile acestuia.

Reacția compusului IX și a compusului XX este condusă în prezența unui agent de condensare, cum ar fi, Ν,Ν-diciclohexilcarbodiimidă, 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimidă sub formă de clorhidrat, N,N-carbonildiimidazol, Ν,Ν-carbonilsuccinimidă, 1-etoxicarbonil-2-etoxi-1,2-dihidrochinolină, difenilfosforil azidă, anhidridă propan-fosfonică, etc. Atunci când se utilizează ca agent de condensare Ν,Ν-diciclohexil-carbodiimidă sau 1 -etil-3(3-dimetilaminopropil)carbodiimidă sub formă de clorhidrat, reacția poate fi condusă cu adăugarea la aceasta a N-hidroxisuccinimidei, 1-hidroxibenzotriazolului, etc.

Reacția este condusă de obicei într-un solvent potrivit. Ca solvent se pot utiliza, de exemplu, aceiași solvenți ca cei menționați pentru procedeul (a). Pe lângă aceasta, compusul X, poate fi utilizat sub formă de sare de adiție a unui acid a acestuia, așa cum s-a menționat în procedeul (a), și când se utilizează o sare de adiție a unui acid a compusului X, reacția este condusă în prezența unei baze organice, cum ar fi, trietilamina, tributilamina, diizopropiletilamina, N-metilmorfolina, etc. Reacția este condusă, de regulă, la o temperatură de la aproximativ 20°C până la 50°C.

Configurația sterică a compusului IX și a compusului X, se menține în compusul dorit VII.

Compusul optic activ al compusului IX este preparat, de exemplu, printr-o metodă similară cu cea descrisă de Collet, A. și Jacques, J., Bull. Soc. Chim. France, 3330-3334 (1973).

Compusul optic activ al compusului X este preparat, de exemplu, printr-o metodă similară cu cea descrisă în descrierea JP-A1-22559 (1988) (Kokai).

Produsele obținute prin procesele de mai sus pot fi izolate și purificate printr-o metodă convențională, cum ar fi metoda cromatografică, recristalizarea, reprecipitarea, etc.

Produsele obținute prin procesele de mai sus se pot obține fie sub forma sării de adiție de acid a acestora, fie sub forma unei baze libere, în funcție de condițiile de reacție folosite. Aceste produse pot fi transformate printr-o metodă convențională într-o sare de adiție de acid sau într-o bază liberă.

în fiecare dintre procesele de mai sus, când substituentul R, sau R₂ este o grupare amino sau o grupare (oxialchil)alcoxi-inferior substituită cu o grupare cu formula:

O

I -ΡΌΗ

I

OH sau când substituentul R, sau R₂ conține o grupare carboxil sau o grupare hidroxi, compusul dorit poate fi obținut în mod eficient prin reacția materiilor prime în care substituentul este protejat printr-o grupare protectoare convențională, reacția fiind apoi urmată de înlocuirea grupării protectoare din produse. în cazurile în care compușii conform invenției, obținuți prin procedeele de mai sus, sau când compușii inițiali sunt compuși racemici sau în forma unor amestecuri de diastereomeri, fiecare stereoizomer este separat printr-o metodă convențională, de exemplu, prin metoda descrisă în EPO-455006-A1.

R0118426 Β1

715

Compușii, conform prezentei invenții, sunt agenți de stimulare a receptorului β₃andrenergic cu selectivitate adrenoreceptoare ridicată și se utilizează în profilaxia sau tratamentul obezității și diabetului zaharat la mamifere incluzând și ființele umane. De altfel, compușii conform prezentei invenții, pot fi utilizați, de asemenea, în tratamentul sindromului de intestin iritabil, diareei acute sau cronice, sau în ameliorarea unor simptome cum ar fi, durerile fizice, grețuri, stări de vomă, disconfort abdominal, etc, însoțite de ulcer duodenal (digestiv), gastrite acute sau cronice, dischinezie biliară, colicistite, etc.

Compușii I, conform prezentei invenții sau sărurile acestora, acceptabile farmaceutic, pot fi administrate oral, parenteral sau rectal, de preferință pe cale orală, ca agent de stimulare a receptorului β₃-andrenergic.

Doza compușilor, conform prezentei invenții, variază în funcție de modul de administrare, de bolile tratate, de vârsta pacienților sau tipul de tratare (profilaxie sau tratament), etc, dar este, de obicei, în domeniul cuprins între 0,01 ...20 mg/kg/zi, de preferință, în domeniul cuprins între 0,05...10 mg/kg/zi.

Compușii, conform prezentei invenții se administrează, de regulă sub forma unor preparate farmaceutice care se prepară prin amestecarea acestora cu un purtător sau diluant, acceptabil farmaceutic. Diluantul sau purtătorul acceptabil farmaceutic poate fi unul convențional care se utilizează, de regulă, în domeniul farmaceutic și nu reacționează cu compușii conform prezentei invenții. Ca exemple corespunzătoare de purtător sau diluant, acceptabili farmaceutic sunt următoarele: lactoza, glucoza, manitolul, dextrina, amidonul, zahărul alb, metasilicatul și aluminatul de magneziu, talcul, polimerul de caibovinil, oxidul de titan, esterul unui acid gras al sorbitanului, laurilsulfat de sodiu, glicerină, esterul unui acid gras al glicerinei, lanolină purificată, glicerogelatină, polisorbat, macrogel, ulei vegetal, ceruri, agenți de suprafață neionici, propilenglicol, apă, etc.

Preparatele farmaceutice pot fi, de exemplu, sub formă de tablete, capsule, granule, pudre, siropuri, suspensii, supozitoare, preparate gelifiante, soluții injectabile, etc. Aceste preparate pot fi realizate prin metode convenționale. în preparatele sub formă lichidă, compușii conform prezentei invenții se dizolvă sau se suspendă în apă sau într-un alt solvent adecvat, atunci când se administrează. Tabeletele și granulele pot fi acoperite printr-o metodă convențională. în soluțiile injectabile este preferabil să se dizolve o sare de adiție de acid, acceptabilă farmaceutic, a compusului I, conform prezentei invenții, în apă, dar dacă este necesar, se poate dizolva într-un agent izotonic, și după aceea se poate adăuga în acesta un agent pentru reglarea pH-ului, o soluție tampon sau un conservant.

Preparatele pot conține compusul, conform prezentei invenții, în proporție de cel puțin 0,01%, de preferință, în proporție de 0,05...70%. Aceste preparate pot conține, de asemenea, și alți compuși farmaceutic activi.

Se dau, în continuare, 15 exemple de realizare a invenției.

Identificarea compușilor este făcută prin analiza elementară, spectru de masă, spectru IR, spectru RMN, etc.

în scopul simplificării descrierii, se folosesc în prezenta descriere următoarele abrevieri:

720

725

730

735

740

745

750

Me:	Metil
Et:	Etil
Ph:	Fenil
E:	Etanol
M:	Metanol
H:	n-heptan
DE:	Dietileter
CF:	Cloroform

755

760

R0118426 Β1

EA: Etilacetat

DMF: Dimetilformamidă s: Singlet d: Dublet

765 dt: Dublu triplet dd: Dublu dublet

	t: Triplet
770	m: Multiplei q: qvartet SM: Spectru de masă

Exemplul de referință 1. Prepararea 3-(2-aminopropil)-7-metoxiindolului Compusul menționat se prepară prin următorul procedeu, în conformitate cu metoda prezentată în GB-974893-A.

775 (1) într-o baie de gheață se răcește o cantitate de 16 ml dimetilformamidă (DMF) și se adaugă, sub formă de picături, 5 ml oxiclorură de fosfor, amestecul obținut fiind agitat timp de 10 min. Peste acest amestec se adaugă sub formă de picături 6,5 g de soluție de 7-metoxiindol, care este preparată din 3-metil-2-nitroanisol, urmând metoda descrisă în Heterocycles, 16,1119-1124 (1981), în 16 ml DMF, amestecul obținut fiind agitat la tempe780 ratura camerei timp de 2 h. La acest amestec se adaugă 30 ml soluție apoasă de NaOH 30%, sub răcire cu gheață, iar amestecul obținut este încălzit la temperatura de aproximativ 80°C, timp de 5 min, într-o baie caldă, urmată de menținerea la rece. Precipitatele sunt colectate prin filtrare, spălate cu apă și uscate, și se obțin 4,6 g de 7-metoxiindol-3-aldehidă.

(2) Un amestec format din 3,6 g de acetat de amoniu, 1 ml anhidridă acetică și 3,2 ml

785 acid acetic este încălzit sub agitare, la temperatura de 50°C, timp de 20 min și peste acest amestec se adaugă 4,5 g produs obținut în etapa (1) de mai sus, 19,2 ml acid acetic și 16 ml nitroetan. Amestecul este încălzit la temperatura de 100°C și peste aceasta se adaugă apoi 2,25 g acetat de sodiu. Amestecul este refluxat timp de 2 h, timp în care se adaugă treptat, sub formă de picături 3,2 ml anhidridă acetică. După ce se lasă să se răcească, se adaugă

790 apă peste amestec și precipitatul solid este colectat prin filtrare, spălat cu apă și uscat, obținându-se 3,35 g de 1-(7-metoxiindol-3-il)-2-nitropropenă, brută.

(3) O soluție formată din 3,2 g nitropropenă, obținută în etapa a doua de mai sus, în 60 ml tetrahidrofuran, este adăugată, sub formă de picături, sub răcire cu gheață, peste o suspensie formată din 3,2 g hidrură de litiu și aluminiu în 60 ml dietileter și amestecul este

795 refluxat timp de 5,5 h. La acest amestec se adaugă sub răcire cu gheață, o soluție apoasă saturată de tartrat de sodiu și potasiu și materialele insolubile sunt îndepărtate prin filtrare, iar filtratul este uscat pe sulfat de magneziu anhidru. Amestecul este evaporat pentru îndepărtarea solventului sub presiune redusă și rezultă 3,2 g din produsul dorit, sub formă uleioasă, care este utilizat ca materie primă în exemplul 1.

800 SM (m/z): 205 (MH⁺).

Exemplul de referință 2. Prepararea 3-(2-aminopropil)-6-metoxicarbonilmetoxiindolului (1) Se adaugă peste 100 ml acetonă, 2,9 g de 6-hidroxiindol, 2,7 g cloracetat de metil, 5,5 g carbonat de potasiu, 0,2 g iodură de potasiu și amestecul obținut este refluxat 805 timp de 8 h. Amestecul de reacție este răcit la temperatura camerei și materialele insolubile sunt îndepărtate prin filtrare. Filtratul este evaporat în condiții de presiune redusă. Reziduul este purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel (eluent: cloroform) și rezultă 2,83 g de 6-metoxicarbonilmetoxiindol.

RO 118426 Β1

Spectru Ή-RMN (CDCI₃): 3,78(3H, s, COOCH₃), 4,67(2H, s, OCH₂), 6,49(1 H, m), 6,83(1 H, m), 6,88(1 H, s), 7,11(1H, m), 7,53(1 H, m), 8,2(1 H, s, NH).

(2) La o soluție formată din 2,77 g produs obținut ca mai sus, în 50 ml benzen, se adaugă o soluție formată din 3,56 g 2-nitropropenă în 17,8 ml benzen, și amestecul este refluxat timp de 15 h. Amestecul este evaporat prin eliminarea solventului, la presiune redusă și reziduul este purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel (eluent: cloroform) și rezultând 2,15 g 3-(2-nitropropil)-6-metoxicarbonilmetoxiindol, sub formă de produs uleios.

Spectru Ή-RMN (CDCI₃): 1,56(3H, d, J=7Hz, CHCHg), 3,10-3,48(2H, m, CHgCHNQ,), 3,77(3H, s, COOCH₃), 4,64(2H, s, OCH₂), 4,92(1 H, m, CHNO₂), 6,76-7,05(3H, m), 7,48(1 H, m), 8,08(1 H,s, NH).

(3) O cantitate de 2,1 g din produsul de mai sus, se dizolvă în 50 ml etanol și la această soluție se adaugă catalizator Nichel-Raney și amestecul este supus reducerii la temperatura de 50°C și la presiune atmosferică. După ce se consumă cantitatea teoretică de hidrogen, catalizatorul se separă prin filtrare. Filtratul este evaporat pentru eliminarea solventului, rezultând o cantitate de 1,98 g, 3-(2-aminopropil)-6-metoxicarbonilmetoxiindol, produs brut sub formă uleioasă, care este utilizat ca materie primă în exemplul 7.

SM (m/z): 263 (MH⁺)

Exemplele de referință 3...13 în același mod cu cel descris în exemplele de referință 1 și 2, se obțin următorii compuși, incluși în tabelul 8 și folosiți ca materii prime.

Tabelul 8

810

815

820

825

830

835

Ref.Ex.	Ri	r2	SM (m/z) (MH+)	Procedeul
3	7-OC2H5	H	219	ri
4	6-OCH3	H	205	1
5	7-OCH2Ph	H	281	1
6	6-CH3	H	189	1
7	7-CH3	H	189	1
8	6-COOCH3	H	233	2*2
9	4-OCH3	H	205	1
10	4-CH3	H	189	1
11	6-SO2N(CH3)2	H	281	2
12	6-OCH3	7-OCH3	219	1
13	7-OCH2COOCH3	H	263	2

*¹: Preparat în același mod ca în exemplul de referință 1 *²: Preparat în același mod ca în exemplul de referință 2

840

845

850

RO 118426 Β1

Exemplul 1. Prepararea 2-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-)3-clorfenil) etanolului

Procedeul (a) în 20 ml metanol se adaugă 0,77 g (3-clorfenil)oxiran și 2,16 g 3-(2-aminopropil)-7metoxiindol, amestecul rezultat fiind agitat la temperatura camerei timp de 64 h. Amestecul este evaporat prin eliminarea solventului, la presiune redusă și reziduul este purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel (eluent: cloroform/metanol = 12/1), fracțiunile conținând produsul dorit fiind combinate și concentrate, în condiții de temperatură reduse, rezultând 1,06 g de produs uleios.

Spectru ¹H-RMN (CDCI₃): 1,12(3H, d, J=7Hz, CHCH₃), 2,61 (1H, m), 2,78-2,86(2H, m), 2,88-3,12(2H, m), 3,95(3H, s, OCH₃), 4,56(1 H, m, CHOH), 6,65(1 H, m), 6,93-7,09(2H, m), 7,11-7,29(4H, m), 7,33(1 H, m), 8,25(1 H, s, indol-NH).

O cantitate de 0,3 g produs uleios, obținut ca mai sus este tratată cu acid fumărie, rezultând 0,15 g fumaratul compusului dorit (fumaratul compusului din exemplul 1).

P.t.=143-147°C (recristalizat din etanol/dietileter).

Procedeul (b) într-o cantitate de 10 ml metanol, se adaugă 0,4 g de 7-metoxiindol-3-acetonă, care este preparată prin metoda descrisă în brevetul GB 947893 și, peste acest amestec se adaugă, în condiții de răcire sub gheață, 0,45 g 2-(3-clorfenil)etanolamină sub formă de clorhidrat și 0,2 g de cianoborohidrură. Amestecul este agitat timp de 5 min și apoi, agitat la temperatura camerei timp de 18 h. Amestecul este evaporat prin eliminarea solventului, în condiții de presiune redusă și la reziduul obținut se adaugă o soluție apoasă, saturată de carbonat acid de sodiu. Amestecul este extras cu acetat de etil și extractul este spălat succesiv, cu apă și o soluție apoasă saturată de clorură de sodiu și uscată pe sulfat de magneziu. Rezultantul este evaporat pentru eliminarea solventului, în condiții de presiune redusă, și reziduul rezultat este purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel (eluent: cloroform/metanol = 15/1), rezultând 0,58 g din compusul dorit, sub forma unui produs uleios.

Procedeul (c) (1) într-o cantitate de 80 ml soluție de DMF, conținând 12,24 g de 3-(2-aminopropil)7-metoxiindol și 7,46 g acid 3-clormandelic se adaugă 17,68 g de benzotriazol-N-oxitris (dimetilamino)fosfoniu hexafluorofosfat și apoi, la aceasta, se adaugă, sub formă de picături,

9,8 ml trietilamină. Amestecul este agitat la temperatura camerei timp de 5 h și peste amestecul de reacție se adaugă acetat de etil. Amestecul este spălat, succesiv, cu apă, soluție apoasă 10% de acid citric, apă, o soluție apoasă, saturată de carbonat acid de sodiu, apă și soluție apoasă, saturată de clorură de sodiu și este uscat pe sulfat de magneziu anhidru. Amestecul este evaporat pentru îndepărtarea solventului, în condiții de presiune redusă și reziduul este purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel (eluent: acetat de etil/n-hexan = 1/1 până la 2/1) rezultând 14,02 g de N-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propil]-3clormandelamidă, sub forma unui produs uleios.

Spectru ¹H-RMN (CDCI₃): 1,12, 1,18(3H, d, J=7Hz, CHCHg), 2,82-2,95(2H, m, CHgCH), 3,97(3H, s, OCH₃), 4,33(1 H, m, CHCH₃),4,85(1H, s, CHOH), 6,65(1 H, m), 6,867,37(7H, m), 8,26(1 H, d, J=13Hz, CONH).

(2) O cantitate de soluție conținând 13,4 g compus amidic obținut ca mai sus, în 144 ml tetrahidrofuran, este adăugată, sub formă de picături, la o soluție 1M, complex de boran-tetrahidrofuran, la temperatura de 20°C și amestecul este refluxat timp de 4 h. Peste amestecul de mai sus, se adaugă, în condiții de răcire cu gheață, sub formă de picături, 150 ml metanol. Amestecul este refluxat timp de 1 h pentru a se descompune excesul de

RO 118426 Β1 boran. Amestecul este evaporat pentru îndepărtarea solventului, în condiții de presiune 900 redusă. Peste reziduu se adaugă cloroform și amestecul este spălat, succesiv, cu o soluție apoasă, saturată de carbonat acid de sodiu și o soluție apoasă, saturată de clorură de sodiu și este uscat peste sulfat de magneziu anhidru. Amestecul este evaporat pentru îndepărtartea solventului, în condiții de presiune redusă și reziduul este purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel (eluent: cloroform/metanol = 20/1 până la 10/1), rezultând 7,35 g din 905 compusul dorit, sub forma unui produs uleios.

Exemplul 1 A. Prepararea 2-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-(1R)-1-(3-clorfenil) etanolului

Produsul 2-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-(1 R)-1 -(3-clorfenil)etanol, sub formă uleioasă, se obține în același mod ca cel descris în exemplul 1, Procedeul (a), prin utilizarea 910 compusului (R)-(clorfenil)oxiran (preparat de SEPRACO, Ltd.; puritate optică: 99,2% e.e.) în loc de (3-clorfenil)oxiran.

SM (m/z): 359 (MH⁺)

Exemplele 1A-a și 1A-b. Prepararea2-[(2Rsau2S)-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-(1R)-1-(3-clorfenil)etanolului și 2-[(2S sau 2R)-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propilamino]- 915 (1R)-1 -(3-clorfenil)etanolului

O cantitate de 3,0 g de 2-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-(1R)-1-(3-clorfenil) etanol, obținut în exemplul 1-A, care este un amestec de doi diastereomeri, este separat prin cromatografie pe coloană, rezultând 0,82 g compus 1-A-a, prin eluare cu un solvent cu polaritate scăzută, și 1,12 g de 1-A-b, prin eluare cu un solvent cu polaritate ridicată. 920

Compusul (1-A-a)

Timpul de retenție în cromatografia de lichid de înaltă performanță (HPLC): 20,3 min (puritate optică: >99% d.e.)

Condiții de separare pentru HPLC:

1. Coloană: CHIRALPAK AD (<p=4,6 mm x 250 mm, Daicel Chemical Industries, Ltd.); 925

2. Eluent: n-hexan/etanol/dietilamină = 85/15/0,1;

3. Debit volumetric: 0,4 ml/min;

4. Temperatura: 40°C

5. Lungimea de undă pentru determinare: 254 nm;

Punct de topire: 129-130°C (recristalizat din acetat de etil//>hexan). 930

Spectru ¹H-RMN (CDCI₃): 1,12(3H, t, J=7Hz, CHCHg), 2,57(1H, dd,J=12,7Hz),

2,81 (2H, d, J=7Hz, CKCH), 2,91-3,09(2H, m), 3,95(3H, s, OCH₃), 4,59(1 H, dd, J=8,4Hz, CHOH), 6,64(1 H, d, J=8Hz), 6,95(1 H, d, J=2Hz), 7,03(1 H, t, J=8Hz), 7,10-7,24(4H, m), 7,32(1 H, m), 8,25(1 H, s, indol-NH).

Compusul (1-A-b) 935

Timpul de retenție a HPLC: 24,5 min (puritate optică: >99% d.e.);

Condiții de separare pentru HPLC: aceleași ca cele de la Compusul (1-A-a);

Punct de topire: 86-87°C (recristalizat din acetat de etil/n-hexan).

Spectru ¹H-RMN (CDCI₃): 1,12(3H, d, J=7Hz, CHCHg), 2,62(1H, dd, J=12,9Hz), 2,82(2H, d, J=7Hz, Ch^CH), 2,87(1 H, dd, J=12,4 Hz), 3,05(1 H, m, CHCH₃), 3,96(3H, s, 940 OCH₃), 4,49(1 H, dd, J=9,4Hz, CHOH), 6,65(1 H, d, J=8Hz), 6,99(1 H, d, J=2Hz), 7,04(1 H, t, J=8Hz), 7,12-7,25(4H, m), 7,33(1 H, m), 8,26(1 H, s, indol-NH).

Exemplul 2. Prepararea 2-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil) etanolului

O cantitate de 0,92 g de (3-clorfenil)oxiran și 2,18 g de 3-(2-aminopropil)-7-etoxiindol 945 este tratată în același mod ca cel descris în exemplul 1, procedeul (a) rezultând 1,16 g din compusul dorit sub forma unui produs uleios.

RO 118426 Β1

Spectru ¹H-RMN (CDCI₃): 1,12(3H, d, J=6Hz, CHCHg), 1,48(31-1, t, J=7Hz, CHgCHg),

2,4(2H, br, NH, OH), 2,60(1 H, d, t, J=12,8Hz), 2,77-2,96(3H,m), 3,04(1 H, m), 4,20(2H, q,

J=7Hz, CHgCHa), 4,55(1 H, dd, J=9,4Hz, CHOH), 6,63(1 H, d, J=7Hz), 6,91-7,06(2H, m),

7,10-7,25(4H, m), 7,32(1 H, m), 8,27(1 H, s, indol-NH).

Exemplul 2-A. Prepararea 2-[3-(7-etoxiindol-3-il)-2-propilamino]-(1R)-1-(3-clorfenil) etanolului (R)-(3-clorfenil)oxiran și 3-(2-aminopropil)-7-etoxiindol obținuți în exemplul 3 sunt tratați în același mod ca cel descris în exemplul 1-A, rezultând compusul dorit sub forma unui produs uleios.

SM (m/z): 373 (MH⁺).

Exemplele 3-12. Utilizând compușii derivați de indol, obținuți în exemplele de referință 2 și 4-12 în loc de 3-(2-aminopropil)-7-metoxiindol în exemplul 1, se obțin compușii prezentați în tabelul 9 în același mod ca cel descris în exemplul 1, procedeul (a).

Tabelul 9

Ex.	Ri	r2	Sare de adiție acidă	P.T. (°C)	Solv, de recristalizare	SM(m/z) (MH+)
3	6-OCH3	H		Ulei		359
4	7-OCH2Ph	H		Ulei		435
5	6-CH3	H	-	103-107	CF/M	343
6	7-CH3	H	-	97-104	DE/H	343
T	6-OCH2-COOCH3	H	3/4 HCI· 1/2 H2O	55-65	CF/DE	417
8	6-COOCH3	H	-	118-123	EA/H	387
9	4-OCH3	H		Ulei		359
10	4-CH3	H	-	134-139	DE/H	343
11	6-SO2-N-(CH3)2	H	3/4 HCI· 1/2 H2O	109-114	E/DE	436
12	6-OCH3	7-OCH3	1/2 Fumarat	203-207	E/DE	389

Exemplul 13. Prepararea sării de sodiu a 2-[3-(7-carboximetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-(3-clorfenil)etanolului

O cantitate de 0,42 g de compus obținut ca în exemplul 7 și 0,3 g hidroxid de sodiu, se adaugă într-o soluție apoasă de metanol (metanol/apă = 2:1,9 ml) și amestecul este refluxat timp de 4 h. în continuare, amestecul este lăsat la temperatura de 0°C timp de 4 h și cristalele precipitate sunt colectate prin filtrare, rezultând 0,24 g de compus dorit ca 1/2 hidrat.

Punct de topire: 236-242°C.

R0118426 Β1

Exemplul 14. Prepararea 2-[3-(7-metoxicarbonilmetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-( 1R)1 -(3-clorfenil)etanolului (R)-(3-clorfenil)oxiran și 3-(2-aminopropil)-7-metoxicarbonilmetoxiindol, obținuți ca 995 în exemplul de referință 13, sunt tratați în același mod ca cel descris în exemplul 1-A, rezultând compusul dorit sub forma unui produs uleios.

SM (m/z): 417 (MH⁺).

Spectru Ή-RMN (CDCI₃): 1,13(3H, d, J=6Hz, CHCI^), 2,62(1 H, dt, J=12,8Hz), 2,773,13(4H, m), 3,81 (3H, s, CO₂CH₃), 4,47-4,68(1 H, m, CHOH), 4,75(2H, s, OCH₂), 6,57(1 H, 1000 d, J=8Hz), 6,92-7,06(2H, m), 7,11-7,36(5H, m), 8,77(1 H, s, indol-NH).

Exemplul 15. Prepararea 2-[3-(7-Carboximetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-(1R)-1-(3clorfenil)etanolului într-o soluție apoasă de metanol (metanol/apă = 2:1) se adaugă compusul obținut în exemplul 14 și hidroxid de sodiu și amestecul este tratat în același mod ca în exemplul 13,1005 rezultând compusul dorit.

SM (m/z): 403 (MH⁺).

Exemplul 16. Prepararea tabletelor

Următoarele componente sunt amestecate și omogenizate în mod convențional și amestecul este granulat, iar masa rezultată este apoi comprimată pentru tabletare rezultând1010 tablete (fiecare având 100 g).

Compusul conform exemplului 1 ....................................5g

Amidon de porumb..............................................25g

Lactoză.......................................................54g

Celuloză cristalină ..............................................11 g1015

Hidroxipropilceluloză .............................................3g

Acid silicic anhidru...............................................1g

Stearat de magneziu .............................................1g

Teste farmacologice

Au fost efectuate următoarele experimentări farmacologice în scopul evaluării acti- 1020 vităților compușilor reprezentativi, conform prezentei invenții, cu privire la:

(1) Activitățile de stimulare ale receptorilor β₃- și β₂-andrenergic uman (2) Activitatea de reducere a nivelului glucozei din sânge și (3) Activitatea împotriva obezității.

Mai întâi, este explicată stabilirea liniei celulare de exprimare înaltă a receptorului β₃- 1025 și β₂-andrenergic uman și apoi sunt exemplificate experimentările în care a fost utilizată aceasta. Stabilirea liniei celulare de exprimare înaltă a receptorului β₃-andrenergic.

(1) Construcția vectorului de expresie

Vectorul de expresie pentru celulele animale, pKCRH2 [Mishina și alții, Nature 307:

604-608 (1984] a fost digerat cu o endonuclează de restricție Sal I, și a fost trunchiat cu un 1030 set de trunchiere ADN (DNA Blunting Kit) (Takara Shuzo Co., Ltd.). Separat, un alt vector de expresie pentru celulele animale, pSV2-neo [Southern and Berg, J. Mol. Appl. Genet. 1: 327-341 (1982)] a fost digerat cu o endonuclează de restricție Acc I și Aat II, și trunchiat cu un set de trunchiere ADN. Aceste ADN-uri plasmidice au fost ligate cu un set de ligare ADN (ADN Ligation Kit) (Takara Shuzo CO., Ltd) și au fost introduse în E.coli HB 101, în mod 1035 convențional. ADN-urile plasmidice au fost preparate din transformanți și digerate cu endonuclează Pst I. O clonă care produce fragmente de aproximativ 3,8 kbp, 2,2 kbp, 1,4 kbp și 0,9 kbp, a fost selecționată pentru a rezulta o plasmidă numită pKCNO. Plasmida pKCNO a fost digerată cu o endonuclează de restricție HindiW și ligată cu următorul adaptor sintetic 1 reprezentat prin SEQ ID NO:1 prin setul de ligare ADN. 1040

RO 118426 Β1

S'-AGCTCCTGCAGGCGCGCCGATATCTCGAGCGGCCGCGGTACCA-S¹ 3'-GGACGTCCGCGCGGCTATAGAGCTCGCCGGCGCCATGGTTCGA-5' Amestecul de reacție a fost utilizat pentru transformarea de E.coli HB101 și ADNurile plasmidice au fost preparate de la transformanții selectați. ADN-ul plasmidic a fost digerat cu o endonuclează de restricție Dra\ și H/ndlll, și a fost selecționată o clonă care produce un fragment de aproximativ 430 bp, pentru a rezulta o plasmidă numită pKCN1 pentru expresia vectorului.

(2) Construcția plasmidei de expresie

ARN-ul total a fost extras din linia celulară de neuroblastomă umană SK-N-MC (ATCC HTB 10), și a fost sintetizat ADNc, prin utilizarea Sistemelor Super Script (Life Technologies). ADNc a fost amplificat cu GeneAmp PCR Kit (Perkin-Elmer) prin utilizarea următoarelor oligonucleotide 1 și 2, reprezentate prin SEQ ID NO: 2 și respectiv, NO: 3, pentru primeri. Peste amestecul de reacție s-a adăugat 10% dimetilsulfoxid, la amestecul rezultat din reacția PCR.

I

S'-CCACCTGCAGGTGATTTGGGAGACCCC-S¹ — oligonucleotide 1 5'-TTCTCGAGCCGGGGAATCCCATGGGAC-3' — oligonucleotida 2

După digerarea amestecului de reacție cu endonucleaza de restricție Sse83871 și StiÂ, a fost izolat, prin electroforeză, un fragment de aproximativ 1,3 kbp. Acest fragment a fost ligat cu vectorul de expresie pKCN1, care a fost digerat cu endonucleaza de restricție Sse83871 și EcoRV, și rezultanta a fost introdusă în E.coli HB 101, într-un mod convențional. ADN plasmidic a fost preparat din transformantul selectat și secvența nucleotidei unui fragment de aproximativ 1,3 kbp, obținut prin digestia de ADN plasmidic cu endonucleaza de restricție Sse83871 și a fost determinată Xhd. Secvența a fost identică cu cea a ADNc a receptorului p₃-andrenergic uman, raportată de Lelias și alții, [FEBS Lett. 324: 127-130 (1994)]. Această plasmidă pentru exprimarea receptorului p₃-andrenergic uman a fost denumită pKREXIO.

(3) Stabilirea liniei celulare de exprimare înaltă

O linie celulară de ovar de hamster chinezesc CHO-K1 (ATCC CCL61) a fost transformată cu plasmida pKREXIO exprimând receptorul Ș₃-andrenergic uman prin metoda cu fosfat de calciu și transformanții au fost selectați cu 600 pg/ml de G-418 (Life Technologies) în mediu MEM-Dulbecco (ICN Biomedicale) suplimentat cu 10% serfetal de bovine și 11,5 pg/ml prolină. în culturile clonelor rezistente 69 G-418, aceste celule au fost demembranate prin incubarea cu o soluție salină tamponată cu fosfat care conține 0,5 mM etilendiamino-tetraacetat (EDTA) la 37°C timp de 10 min după ce mediu a fost îndepărtat. Celulele au fost colectate prin centrifugare și suspendate în 10 mM tampon Tris-HCI (pH=7,5), conținând 1 mM EDTA într-o concentrație de 5 x 10⁶ cel/ml. 20 μΙ suspensie și 1,5 nM (-)3-[¹²⁵l]iodocianopindolol (Amersham) au fost amestecați într-un mediu de 200 μΙ RPMI1640 (ICN Biomedicale) conținând 1% albumină din ser de bovine, 0,1% NaN₃ și 20 mM tampon HEPES (pH=7,4) și amestecul a fost incubat la temperatura de 4°C timp de 2 h. Amestecul de reacție a fost filtrat pe filtru de sticlă GFC (Whatman), preumidificat cu 0,3 polietilenimină și spălat prin utilizarea unui aparat BIO-DOT (Bio-rad Laboratories), radioactivitatea filtrului a fost determinată cu un contor de raze gama. Pentru linia celulară de exprimare a receptorului Ș₃-adrenergic uman a fost utilizată o clonă numită CHO/pKREX10-36, care arată cea mai înaltă radioactivitate.

Stabilirea liniei celulare de exprimare înaltă a receptorului p₃-adrenergic uman

A fost sintetizat ADNc cu Poly(A)ARN, derivat din creier uman (Clontech: denumire comercială, CL6516-1) prin utilizarea Sistemelor Super Script (Life Technologies).

R0118426 Β1

Acest ADNc a fost amplificat cu GeneAmp PCR Kit (Perkin-Elmer) prin utilizarea următoarelor oligonucleotide 3 și respectiv 4 reprezentate prin SEQ ID No:4 și respectiv No:5, pentru primeri.

5'-ACACCTGCAGGTGAGGCTTCCAGGCGTCC-3' —oligonucleotida 3

S'-TGTAAGCTTCTGCTTTACAGCAGTGAGTC-S’ —oligonucleotida 4

După ce amestecul de reacție a fost digerat cu endonucleazele de restricție Sse63871 și HinW, a fost izolat prin electroforeză un fragment de aproximativ 1,4 kbp. Acest fragment a fost ligat cu vectorul de expresie pKCN1 digerat cu endonucleazele de restricție Sse83871 și H/nlll, și a fost introdus în E.coli HB 101, într-un mod convențional. ADN plasmidic a fost preparat prin transformantul selectat și secvența nucleotidei unui fragment de aproximativ 1,3 kbp, obținută prin digestia ADN plasmidic cu endonucleaza de restricție Sse63871 și a fost determinată XhdL· Secvența a fost identică cu cea a ADNc a receptorului P₃-adrenergic uman, raportată de Kobilka B.K. șl alții, [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:46-50 (1987)]. Această plasmidă afost numită ca pKREX21 pentru exprimarea înaltă a receptorului p₂-adrenergic uman și a fost introdusă în CHO-K1, în același mod ca în metoda de stabilire a liniei celulare de exprimarea înaltă a receptorului p₃-adrenergic uman. Pentru linia celulară de exprimarea înaltă a receptorului Ș₂-adrenergic uman a fost utilizată o clonă numită CHO/pKREX21-8, care arată cea mai înaltă redioactivitate.

Testul 1. Activitatea de stimulare a receptorului p₃-adrenergic uman

Linia celulară de exprimarea înaltă a receptorului P₃-adrenergic uman, CHO/pKREX 10-36, a fost cultivată 3 zile într-un mediu MEM-Dulbecco, suplimentat cu 10% ser fetal de bovine, 11,5 pg/ml prolină și 200 pg/ml G-418. Celulele au fost demembranate prin incubarea cu o soluție salină tamponată cu fosfat care conține 0,5 mM etilendiamină-tetraacetat (EDTA) la 37°C timp de 10 min după ce mediu a fost îndepărtat. Celulele CHO/pKREX10-36 au fost colectate prin centrifugare și suspendate în săruri Hank echilibrate (ICN Biomedicals) conținând 1 mM acid L-ascorbic și 1 mM 3-izobutil-1-metilxantină la o concentrație de aproximativ 2 x 10⁶ cel/ml. 100 μΙ din această suspensie și compusul de test au fost amestecate în 500 μΙ din aceeași soluție echilibrată și au fost incubate la temperatura de 37°C timp de 30 min, urmate de fierberea timp de 5 min pentru terminarea reacției. După centrifugarea amestecului de reacție, a fost măsurată cantitatea de AMPc în supematant, utilizând AMPc EIA, (Amersham).

în mod similar, a fost măsurată cantitatea de AMPc prin utilizarea receptorului β₂adrenergic uman, de exprimarea înaltă, CHO/pKREX21-8 în locul CHO/pKREX10-36 pentru receptorului p₃-adrenergic uman, de exprimarea înaltă.

Cantitățile de AMPc determinate când se adaugă 10⁵M (-)-izoproterenol în amestecul de reacție și determinate când acesta nu se adaugă la amestecul de reacție, au fost estimate ca 100% și, respectiv 0%, și răspunsul maximal relativ al fiecărui compus conform prezentei invenții a fost exprimat ca activitate intrinsecă % [I.A. (%)].

Valoarea EC^ care este o concentrație a compusului de testat necesară pentru atingerea a 50% din cantitatea de AMPc prin analiza regresiei celor mai mici pătrate a curbei concentrație-răspuns a fiecărui component.

Rezultatele sunt prezentate în tabelul 5. Compușii A, B, și C, menționați mai sus sunt utilizați drept compuși de referință.

1090

1095

1100

1105

1110

1115

1120

1125

1130

RO 118426 Β1

Tabelul 5

Compus de testat	Activitate de stimulare a receptorilor β3 și β2-andrenergic uman
Valoarea lui EC50(nM)	Raportul β2/β3	Valoarea I.A. (%)
Ș3-Receptorul	β,,-Receptorul	83-Receptorul	β2-Receptorul
1*1	1,7	25	14,7	113	33
1-A	0,67	13	19,4	114	36
1-A-b	0,36	3,6	10,0	89	35
2	2,0	55	27,5	117	31
2-A	0,96	15	15,6	96	23
3	22	170	7,7	102	22
4	16	43	2,7	116	36
5	12	33	2,8	95	41
6	35	88	2,5	91	19
7	25	33	1,3	76	15
8	31	_*2	-	92	5
12	4,0	31	7,8	98	13
13	31	_*2	-	101	6
14	0,43	6,0	14,0	95	29
Comp. A	910	410	0,5	92	16
Comp. B	180	_*2	-	100	8
Comp. C	540	_*2	-	105	5
|p*3	5,5	5,6	1,0	100	100

-*¹: Compusul din exemplul 1 (și în continuare același)

-*²: Nedetectat din cauză că activitatea acestor compuși a fost foarte redusă -*³: (-)-lzoproterenol

Un compus care are valoarea EC^ scăzută și valoarea I.A. ridicată este considerat ca având o puternică activitate de stimulare a receptorului β₃ sau p₂-andrenergic uman. Astfel, așa cum se arată în tabelul 5, compușii conform prezentei invenții, în special compușii din exemplele 1,1-A, 1-A-b, 2,2-A și 14 prezintă o puternică activitate de stimulare a receptorului Ș₃-andrenergic uman. De altfel, activitatea de stimulare a receptorului p₃-andrenergic uman a acestor compuși este mai puternică decât activitatea de stimulare a receptorului β₂andrenergic uman. în special, compușii din exemplele 1,1-A, 1-A-b, 2,2-A și 14 au o foarte bună selectivitate adrenoreceptoare pentru receptorul p₂-andrenergic uman. Pe de altă parte, Compușii de referință A, B, și C, menționați anterior, prezintă o activitate de stimulare a receptorului p₃-andrenergic uman destul de slabă, în comparație cu compușii conform prezentei invenții.

De altfel, în ceea ce privește studiile activității crescătoare a vitezei de contracție spontană a atriului drept la cobai, compușii conform prezentei invenții abia prezintă activitate de stimulare a receptorului β,-andrenergic uman.

R0118426 Β1

Așa cum se constată din rezultatele de mai sus, compușii conform prezentei invenții pot fi agenți de stimulare a receptorului Ș₃-andrenergic uman, cu o foarte bună selectivitate adrenoreceptoare.

Testul 2. Activitatea de reducere a glucozei în sânge la șoareci înfometați

Un compus de testat, suspendat în soluție 0,5% de gumă tragant, se administrează oral unui șoarece mascul ddY (greutate: 20...30 g) înfometat și s-a colectat sânge înainte și la 3 h după administrarea acestui compus de testat. Nivelul glucozei în sânge a fost determinat prin metoda Kunst A., și alții, (Hexokinaze/G6PDH method) [Bergmeyer, H.U. (Eds.), Methods in Enzymology, voi. VI, 3rd edition, Verlag Chemie GmbH, WeinheimDeerfield Beach, Florida-Basel, 163-172 (1984)]. Activitatea de reducere a glucozei în sânge este exprimată prin valoarea ED₂₅ care este o concentrație a compusului de testat necesară pentru reducerea cu 25% a nivelului glucozei în sânge înainte de administrarea compusului de testat. Drept compus de referință a fost utilizată gliclazida care este un medicament accesibil comercial pentru tratamentul diabetului zaharat. Rezultatele sunt prezentate în tabelul 6.

1175

1180

1185

Tabelul 6

Compusul de testat	Activitatea de reducere a glucozei din sânge la șoareci (ED5n); mg/kg po)
Γ	0,05
1-A	0,003
2	0,03
3	3,3
5	4,5
6	4,5
7	1,5
8	1,4
10	0,1
Gliclazidă	0,87

* Compusul din exemplul 1 (în cele ce urmează, același)

1190

1195

1200

Testul 3. Activitatea împotriva-obezității la un șoarece diabetic obez

Un compus de testat, suspendat în soluție 0,5% de gumă tragant, se administrează oral unui șoarece diabetic obez (KK-Ay/Ta, Jcl. femelă; 50...60 g, Clea Japan Inc.), într-o doză de 3 mg/kg/zi, timp de 3 săptămâni, și după aceea se ia o probă dintr-un țesut adipos retroperitoneal și dintr-un țesut adipos interscapular și se determină greutatea acestora ca strat adipos alb, respectiv, ca strat adipos maro. Rezultatele sunt prezentate în tabelul 7.

1205

Tabelul 7

Grupa	Greutatea țesutului adipos alb (g)	Greutatea țesutului adipos maro (g)
Control	4,92±0,28	0,460±0,03
Compusul din exemplul 1	2,35±0,12*	0,289+0,04*

* Este în mod semnificativ diferit față de datele de control cu p<0,01.

1210

RO 118426 Β1

Compușii, conform prezentei invenții, au o toxicitate scăzută, ca de exemplu compusul din exemplul 1-A, care nu a avut toxicitate la toate administrările orale în doză de 300 mg/kg (în greutate), în testările de toxicitate acută experimentate pe șoareci. Astfel, când se ia în considerație doza eficientă terapeutic, compușii conform prezentei invenții nu prezintă toxicitate pentru ființe vii.

Așa cum s-a menționat anterior și cum a rezultat și din teste, compușii conform prezentei invenții sunt utilizabili ca medicamente pentru mamifere incluzând ființele umane, în special, ca agent de stimulare a receptorului Ș₃-andrenergic, și pot fi utilizați în tratamentul diabetului zaharat și obezității.

Lista secvențelor

SEQ ID NO: 1:

Lungime: 47 perechi de baze

Tip: acid nucleic

Structură catenară: dublă

Topologie: liniară

Tipul de moleculă: alt acid nucleic, ADN sintetic chimic

Altele: bazele de la 5 la 43 au un lanț complementar, care are același TCGA ca bazele de la 44 la 47

Secvența:

AGCTCCTGCA GGCGCGCCGA TATCTCGAGC GGCCGCGGTA CCA 43

SEQ ID NO: 2:

Lungime: 27 perechi de baze

Tip: acid nucleic

Structură catenară: simplă

Topologie: liniară

Tipul de moleculă: alt acid nucleic, ADN sintetic chimic

Antisens: Nu

Secvența:

CCACCTGCAG GTGATTTGGG AGACCCC 27

SEQ ID NO: 3:

Lungime: 27 perechi de baze

Tip: acid nucleic

Structură catenară: simplă

Topologie: liniară

Tipul de moleculă: alt acid nucleic, ADN sintetic chimic

Antisens: Da

Secvența:

TTCTCGAGCC GGGGAATCCC ATGGGAC 27

SEQ ID NO: 4:

Lungime: 29 perechi de baze

Tip: acid nucleic

Structură catenară: simplă

Topologie: liniară

Tipul de moleculă: alt acid nucleic, ADN sintetic chimic

Antisens: Nu

Secvența:

ACACCTGCAG GTGAGGCTTC CAGGCGTCC 29

SEQ ID NO: 5:

Lungime: 29 perechi de baze

R0118426 Β1

Tip: acid nucleic

Structură catenară: simplă

Topologie: liniară

Tipul de moleculă: alt acid nucleic, ADN sintetic chimic

Antisens: Da

Secvența:

TGTAAGCTTC TGCTTTACAG CAGTGAGTC 29

Claims (25)

1. Derivați de indol, caracterizați prin aceea că au formula structurală generală I:

1265

1270

1275 r₃

1280 în care: R, este o grupare alchil inferior, opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare alchil inferior-sulfonilamino, o grupare mono- sau di-alchil inferior-aminosulfonil sau o grupare aleasă dintre următoarele de la (a) la (d), sau combinat cu R₂ pentru a forma o grupare metilendioxi, numita grupare metilendioxi fiind opțional substituită cu o grupare carboxil sau cu o grupare alcoxi inferior- carbonil, (a) o grupare avînd formula -X-Ra, în care X este O, S sau NH, Ra este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior, astfel încît atunci cînd X este S, Ra să fie o grupare alchil inferior, (b) o grupare avînd formula:

Rb

I -fOlCHgL-CHJn-Rbb în care: Rb este un atom de hidrogen o grupare alchil inferior, o grupare alcoxi inferior carbonil, sau o grupare carboxil, Rbb este o grupare alcoxi inferior-carbonil sau o grupare carboxil, m este un număr întreg de la 0 la 3 și n este 0 la 1;

(c) o grupare de formula: -O(CH₂)_p-R_c, în care R_c este o grupare alcanoil inferior, o grupare hidroxi, o grupare cian, o grupare fenil, o grupare mono- sau di- alchil -inferioraminocarbonil sau o grupare avînd formula:

O

I

- P- or_a

I or_a în care: R_A este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior și p este un număr întreg de la 1 la 4;

(d) o grupare avînd formula: -Y-(CH₂)_QRd, în care Y este NH sau S, Rd este o grupare carbonil sau o grupare alcoxi inferior-carbonil și <7 este un număr întreg de la 1 la 4;

1285

1290

1295

1300

1305

1310

RO 118426 Β1

R₂ este un atom de hidrogen, un atom de halogen, sau o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare hidroxi, o grupare alcoxi inferior, sau o grupare din cele menționate anterior la (b) sau (c) sau combinat cu R, pentru a forma o grupare metilendioxi, gruparea metilendioxi menționată fiind opțional substituită cu o grupare carboxil sau cu o grupare alcoxi-inferior-carbonil;

R₃ este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior;

W este o grupare avînd formula II care se leagă în pozițiile 2- sau 3- ale nucleului indolic:

R4 ch-ch₂-nh-ch-ch₂—[U] lI

OHR în care: R₄ este un atom de halogen sau o grupare trifluormetil și R_s este o grupare alchil inferior sau o sare a acestuia.

2. Derivați de îndoi, conform revendicării 1, caracterizați prin aceea că au formula structurală generală l-a: în care: R,, R₂, R₃, R₄ și R_s au aceeași semnificație ca în revendicarea 1, sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia.

3. Derivați de îndoi, conform revendicării 2, caracterizați prin aceea că, R₁ se leagă în poziția 5-, 6- sau 7- a nucleului indolic și R₂ este un atom de hidrogen sau o sare acceptabilă a acestuia.

4. Derivați de îndoi, conform revendicării 2, caracterizați prin aceea că, R₂ este o altă grupare decât atomul de hidrogen și unul dintre radicalii R, și R₂ se leagă în poziția 6 a nucleului indolic și celălalt radical se leagă în poziția 7 a acestuia, sau o sare a acestuia.

5. Derivați de îndoi, conform revendicării 2, caracterizați prin aceea că, R, este o grupare alchil inferior substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare alchil inferior-sulfonilamino, o grupare di-alchil inferior-aminosulfonil sau o grupare selectată dintre cele de la (a), (b-1), (c-1) sau (d);

(a) o grupare avînd formula -XRa în care X și Ra au semnificațiile din revendicarea 1;

(b-1) o grupare avînd formula:

Rb-1

I

-[0(CH_a)_m -CH]_n-Rbb în care: Rb-1 este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior, Rbb, m și n au aceleași semnificații ca în revendicarea 1;

RO 118426 Β1 (c-1) o grupare avînd formula -O(CH₂)_P-R_c-1, în care R_c -1 este o grupare alcanoil inferior, o grupare fenil, o grupare mono- sau di- alchil -inferior-aminocarbonil și p are aceeași semnificație ca în revendicarea 1;

(d) este o grupare cu formula: -Y- (ΟΗ₂)_Ρ- Rd, în care Y și Rd au aceleași semnificații ca în revendicarea 1;

R₂ este un atom de hidrogen, un atom de halogen, o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare hidroxi, o grupare alcoxi inferior sau o grupare selectată dintre cele menționate anterior la (b-1) sau la (c-1), R₃, R₄ și R_s au aceiași semnificație ca în revendicarea 1, sau o sare a acestuia.

6. Derivați de indol, conform revendicării 2, caracterizați prin aceea că, R, este o grupare alcoxi inferior, o grupare alchil inferior, o grupare alcoxi inferior-carbonil, o grupare alcoxi inferior-carbonil-alcoxi inferior, o grupare carboxi-alcoxi inferior,o grupare fenil alcoxiinferior, sau o grupare di-alchil inferior-aminosulfonil, R₂ este un atom de hidrogen, un atom de halogen, o grupare alcoxi inferior, o grupare alchil inferior, o grupare alcoxi inferiorcarbonil, o grupare alcoxi-inferior-carbonil-alcoxi inferior sau o grupare fenil-alcoxi inferior, R₃ este un atom de hidrogen, R₄ este un atom de halogen, și R₅este o grupare metil sau o sare a acestuia.

7. Derivați de indol, conform revendicării 6, caracterizați prin aceea că, R, este o grupare metoxi, o grupare etoxi, o grupare metil, o grupare metoxicarbonil, o grupare metoxicarbonilmetoxi, o grupare carboximetoxi, o grupare benziloxi sau o grupare dimetilaminosulfonil, R₂ este un atom de hidrogen sau o grupare metoxi, R₃ este un atom de hidrogen, R₄ este un atom de clor și R_s este o grupare metil sau o sare a acestuia.

8. Derivați de indol, conform revendicării 1, caracterizați prin aceea că, R₄ este o grupare metoxi, o grupare etoxi, o grupare metoxicarbonil, o grupare metoxicarbonilmetoxi, o grupare carboximetoxi, care se leagă în poziția 6- sau 7- a nucleului indolic, R₂ și R₃ sunt fiecare un atom de hidrogen, R₄ este un atom de clor și R_s este o grupare metil, sau o sare a acestuia.

9. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este 2-(3-(7metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanol sau sarea acestuia.

10. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este un izomer optic al 2-[3-(7-metoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanolului sau sarea acestuia.

11. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este 2-(3-(7etoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1 -(3-clorfenil)etanol sau sarea acestuia.

12. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este un izomer optic al 2-(3-(7-etoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanolului sau sarea acestuia.

13. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este 2-(3-(7metoxicarbonilmetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanol sau sarea acestuia.

14. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este un izomeroptical2-[3-(7-metoxicarbonilmetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanolului sau sarea acestuia.

15. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este 2-(3-(7carboximetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanol sau sarea acestuia.

16. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este un izomer al 2-[3-(7-carboximetoxiindol-3-il)-2-propilamino]-1-(3-clorfenil)etanolului sau sarea acestuia.

1360

1365

1370

1375

1380

1385

1390

1395

1400

1405

RO 118426 Β1

17. Derivat de îndoi, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că se utilizează ca agent de stimulare a receptorului Ș₃-adrenergic.

18. Derivat de îndoi, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că se utilizează pentru tratamentul diabetului zaharat.

19. Derivat de indol, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că se utilizează pentru tratamentul obezității.

20. Procedeu pentru prepararea derivaților de indol, definiți în revendicarea 1, sau a sărurilor acestora, caracterizat prin aceea că, cuprinde reacția unui compus cu formula generală III:

în care: R₄ are semnificațiile din revendicarea 1, cu un compus cu formula generală IV:

în care: Rp R₂ R_3> și Rg au aceleași semnificații ca în revendicarea 1 sau o sare a acestuia.

21. Procedeu pentru prepararea derivaților de indol cu formula generală l-b:

₂-nh-ch-ch₂ în care: R’ este o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare mono- sau di-alchil inferior-aminosulfonil sau o grupare aleasă din cele cuprinse la (a)’, (b), (c) și (d)’ sau combinat cu R₂, astfel, încât să formeze o grupare metilendioxi, gruparea menționată fiind opțional substituită cu o grupare carboxil sau o grupare alcoxi inferior-carbonil;

(a)’ o grupare avînd formula -X’Ra, în care X’ este O sau S, Ra are aceeași semnificație ca în revendicarea 1, astfel încât atunci cînd X’ este S, Ra este o grupare alchil inferior;

(b) o grupare avînd formula:

Rb

I

4O(CH₂)_m -CHL-Hbb în care Rb, Rbb, m și n au aceleași semnificații ca mai sus;

R0118426 Β1

1455 (c) - o grupare avînd formula -O(CH₂)_P-R_c, în care R_c și p au aceleași semnificații ca în revendicarea 1;

(d) ’ este o grupare cu formula: -Y’- (CH₂)_q- Rd, în care Y’ este S, Rd și q au aceleași semnificații ca în revendicarea 1;

și R₂, R₃, R₄ și R_s au aceleași semnificații ca în revendicarea 1, sau sarea acestuia, care cuprinde reacția unui compus cu formula V:

1460 ch-ch₂~nh₂

I ^z

OH (V)

1465 în care: R₄ este definit ca în revendicarea 1, cu un compus cu formula VI:

[V1]

1470 în care: R, are aceeași semnificație ca mai sus și R₂, R₃ și R_s au aceleași semnificații, ca 1475 în revendicarea 1, în condiții de reducere.

22. Procedeu pentru prepararea derivaților de indol cu formula generală l-c:

[1-c]

1480

1485 în care: R este o grupare alchil inferior opțional substituită cu o grupare hidroxi, o grupare fenilsulfonilamino, o grupare mono- sau di-alchil inferior-aminosulfonil sau o grupare selectată din cele prezentate la (a) sau (c)”; sau combinațiile cu R₂‘ pentru a forma o grupare metilendioxi, 1490 (a) o grupare avînd formula -XRa, în care X și Ra au aceleași semnificații ca în revendicarea 1;

(c)” o grupare avînd formula -O(CH₂)_P-R”_c, în care R”_c este o grupare hidroxi, o grupare fenil sau o grupare cu formula:

1495

I

- P- ORa

I

ORa

1500 în care: R_A este un atom de hidrogen sau o grupare alchil inferior și p are aceeași semnificație ca în revendicarea 1;

RO 118426 Β1

R₂ este un atom de hidrogen, un atom de halogen, o grupare alchil inferior fiind substituită opțional cu o grupare hidroxi,o grupare hidroxi, o grupare alcoxi inferior, o grupare din cele menționate mai sus la (c)”, sau combinațiile cu R/ pentru a forma o grupare metilendioxi și R₃, R₄ și R₅ au aceleași semnificații ca cele prezentate în revendicarea 1, sau o sare a acestuia, caracterizat prin aceea că, constă în reducerea compusului cu formula VII:

în care: R,' și R₂ au aceleași semnificații ca mai sus și R₃, R₄ și 1% au aceleași semnificații ca cele din revendicarea 1.

23. Compoziție farmaceutică, caracterizată prin aceea că, cuprinde un derivat de indol definit prin formula structurală generală I sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, și un purtător sau un diluant acceptabili farmaceutic.

24. Utilizarea derivaților de indol cu formula generală structurală I sau a unei sări acceptabile farmaceutic la fabricarea unui medicament pentru tratarea diabetului zaharat la mamifere.

25. Utilizarea derivaților de indol cu formula generală structurală I sau a unei sări acceptabile farmaceutic la fabricarea unui medicament pentru tratarea obezității la mamifere.