PT93800A

PT93800A - Processo para preparacao de derivados da glucosaminil-epi-podofilotoxina

Info

Publication number: PT93800A
Application number: PT93800A
Authority: PT
Inventors: Cenek Kolar
Original assignee: Behringwerke Ag
Priority date: 1989-04-22
Filing date: 1990-04-19
Publication date: 1990-11-20
Also published as: DE3913327A1; EP0394908A1; KR900016245A; AU5371490A; AU643433B2; JPH02295996A; CA2015072A1

Description

Descrição referente à patente de invenção de BEHRUíGWBRiCE AmMGESEItLSCBAPa?, alemã, industrial e comercial, com sede em B-3550 Marburg, Alemanha Ocidental, (inventorί Br. Ce-nek Kolar, residente na Alemanha Ocidental), para "PROCESSO PARA PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DA GDEGOSMINIL-EPI-PODQEILO-TOXINA”,

DESCRIClQ A presente invenção refere-se a um processo para preparação de derivados da glucosaminil-epi-podofilotoxina, em especial de derivados da 4-0-(4,6-0-alquilideno-beta-D-gluoosa minil)-4,-demetil-4-epi-podofilotoxina, que graças à sua aeti-vidade eitostática são adequados para o tratamento de doenças cancerígenas*

As glicosiL-epipodofilotoxinas encontram-se descri tas na literatura especializada. Dois representantes desta classe de compostos, o etoposido e teniposido, foram introduzi dos como medicamentos para tratamento de doenças cancerígenas. Os derivados do etoposido, que em vez da unidade glucose, apre sentam um componente de hidrato de carbono glucosamina ou Ν,Ν--dimetil-glucosamina, revelam nos ensaios pré-clínicos um espee tro de acção mais alargado do que o do etoposido. Dado que estes compostos são facilmente solúveis em meio aquoso devido à - 1 -

presença do grupo amino, a preparação de formulações galénieas eom esses compostos não e problemática quando comparada com a do etopósido.

Na EP-A-0 141 057 e 0 196 618 são descritos deriva dos do etopósido, que em lugar da glucose apresentam uma compo nente glueosamina ou N,N-dimetil-gluco samina.

Com base na patente acima descrita EP-A-Q 141 057 e também conhecido um processo que permite a preparação dos compostos a que se refere a invenção através de reacção de uma componente beta-glucosamina funcionalizada com 4,-0-epi-podofi lotoxina protegida na função 4*-0, mediante catálise eom Bi^* Este processo I no entanto moroso e associado a grandes percas, pois prepara-se o epi-podofiloioxina-glicósido desejado a partir de uma componente de glicosilação beta-hidróxi, instável devido à mutarotação e dispendiosa de preparar. lambém a subse quente eliminação dos grupos de protecção de acilo, bem como a introdução do grupo 4",6”-alquilideno estão associadas a grandes percas devido ao grande número de compostos secundários ob tidos, e carece, para além disso, de passos suplementares de purificação eromatográfica.

Nas Chemistry letters, 799-802, 1987, é descrito um processo para síntese de be ta-gluco saminil-epi-po do filo toxi nas, no qual é utilizado como componente âe glicosilação um de rivado da 4,6-0-etilideno-glucosamina. A componente glueosamina funcionalizada, que se apresenta na sua forma beta-hidróxi instável, fornece após a glicosilação da aglicona e posterior eliminação dos grupos de protecção, a beta-Glucosaminil-epi-po do filo toxina desejada com um rendimento de 33%*

Surpreendentemente, descobriu-se que quando da gli cosilação de 4f-*0-Z-4-epi-podo filo toxina (2 = benziloxi-carbo-nil) eom uma componente glueosamina funcionalizada, presente 2 -

na sua forma alfa, catalizada com Βϊ^ em acetato de etilo, se forma de preferencia o beta-glieósido* 1 beta-glicõsilação de epi-podo filo toxinas tal como ate agora descrita na bibliografia especializada, decorre através do ião carbónio do átomo 04 da aglieona, sendo necessário o ataque núcleofilo do grupo be-ta-hidroxi da componente glucosamínica. Uma vez que a forma al fa-hidroxi dás unidades de glicosilação são, devido ao efeito anomero, energeticamente mais estáveis do que a forma beta-hi-droxi, sendo mais fácil a preparação sintética dos derivados da alfa-hidroxi-glucosamiba do que a dos compostos análogos be ta-hidroxi, o novo processo a que se refere a presente invenção representa uma nova via vantajosa para a preparação técnica das beta-glucosaminil-epi-podofilo toxinas. Â presente invenção tinha como objectivo desenvol-· ver um novo processo para a preparação de derivados da 4-0-(4, 6-0-alquilideno-beta-D-glueosaminil)-4t-0-àemetil-4-epi-podofi lotoxina com um bom rendimento, que eonstituisse uma simplificação relativamente aos processos já conhecidos· Deveria em es pecial desenvolver-se um novo processo para preparação de uma componente de glicosilação da glueosamina adequada, bem como novos processos de desaellação para a eliminação dos grupos de protecção de aello das glucosaminil-epi-podofilotoxinas*

Tal objectivo foi conseguido pela presente invenção através de um processo para preparação de um derivado da glucosaminil-epi-podofilotoxina da formula geral 1

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na qual ír* representa um átomo de hidrogénio ou o grupo de protecçao acetilo ou mono, di ou trihalogeno-aeetilo com halogénio = * flúor, cloro ou bromo, representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com C1-C4, representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo oom 01--04 ou o grupo de protecçao benziloxi-carbonilo, representa um átomo de hidrogénio, um grupo de protecçao mo no, di ou trihalogeno-aeetilo, um grupo de protecçao benziloxi -carbonilo ou um grupo metilo e A representa um grupo alquilo com 01-04, earaeterizado por se fazer reagir um derivado da glueosamina da fórmula geral II, na forma alfa-hidroxi, 4 -

na qual 13 «· R ' e R representam grupos áe protecçao aeilo conforme defini- dos acima, e R representa um átomo de hidrogénio e , A representa um grupo alquilo com Cl-04,

com um derivado da podo filo toxina da fórmula geral III

OH

III na qual 4- - R representa um grupo metilo ou um grupo de protecçao mono,

I CM di ou trihalogeno-aeetilo ou benziloxi-carbonilo, na presença de um agente promotor tal como x éter ou um trifluormetilo-sulfonato de trialquil-sililo tendo os radicais alquilo 01-04* e de um solvente orgânico anidro, a -50°0 a 10° C, de modo a obter um derivado da 4-0-(beta~glueosaminil)-e -podofilotoxina da formula geral I, na qual os radicais R,

3 4 - R , Rei mantém as definições anteriores, e se eliminar em seguida por via hidrogenolítica o grupo de proteeção benziloxi -carbonilo com um catalizador de paládio, o grupo de proteeção acetilo com dicloreto ou diacetató de zineo, e os grupos de proteeção halogeno-acetilo com uma resina de permuta aniónica básica, num solvente orgânico tal com© metanol, etanol, acetona, acetato de etilo ou eventualmenie suas misturas aquosas, e eventualmente se fazer reagir o grupo amino livre com um aldeído com C1-C4 na presença de um hidreto, de modo a obter um derivado mono ou dialquil-amínieo obtendo assim um derivado 4—0—(beta-glueosaminil)-epi-podofilotoxina da formula geral I, na qual •i R representa um átomo de hidrogénio, R e ά representam átomos de hidrogénio ou grupos alquilo com 01-04, representa um átomo de hidrogénio ou o grupo metilo e A representa um grupo alquilo eom C1-C4.

De preferencia são preparados de acordo com o processo a que se refere a presente invenção compostos da formula geral I, na qual R"*· representa um átomo de hidrogénio ©u os grupos de proteeção acetilo ou eloro-acetilo, R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 01-04, B? representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo com 01--04 ou o grupo de proteeção benziloxi-earbonilo, R^ representa um átomo de hidrogénio, um grupo metilo, ou os grupos de proteeção benziloxi-earbonilo ou eloro-acetilo, e 1 representa o grupo metilo*

Sm pormenor, procede-se da seguinte formas em primeiro lugar, e partindo do composto de partida 1,3-di-Q-acilado da formula geral ΓΥ, 6 -

prépara-se a componente de glicosilaçao glueasamíniea da fórmu la geral Y,

CO-O-GHgPh. 15 m. na qual Rei representa um grupo de protecçao acetilo ou mo no, di ou trihalogeno-aeetilo e 4 representa um grupo alquilo com C1-C4, da seguinte forma: no ©aso de R-' representar um gru po aeetilo, trata-se o composto de partida uma "base orgânica 5 fraea, como piridina ou piperidina, e no caso de R representar um grupo de protecçao halogeno-acetilo, trata-se o composto de partida com silicagel num solvente orgânico polar, tal como metanol ou etanol.

Através da dissolução dos compostos num solvente não polar, tal como clorofórmio, diclorometano, o composto glu cosamínieo é transformado na sua forma alfa, energetieamente mais estável. A glicosilaçao de um derivado da podo filo toxina da 7 - ' * *

formula geral III com uma componente glucosamínica da fórmula geral Vfaz-se de preferencia em acetato de etilo, eventualraen te misturando dieloro-metano, clorofórmio, éter ou acetona, na presença de l a 50 equivalentes, de preferencia 20 a 30 equiva lentes de Biy-eter ou tri-alquilsxlil-trifluormetano-sulfonato tendo os radicais alquilo 1-4 átomos de carbono, a -50°C até 20°0, de preferencia a -30° C ate -15°G. Como agente de captação de ácidos ou agentes secante pode utilizar-se eventualmente um filtro molecular* Á eliminação do grupo de proteeção do derivado da 4-0-gluco saminil-epi-podofilotoxina da.^fórmula geral I faz-se da seguinte formas 0 grupo de proteeção benziloxi-carbonilo é elimina do por via hidrogenolítlea, com o auxílio de paládio/carvão ou paládio/sulfato de bário, em metanol, etanol, acetona ou aeeta to de metilo. 0 grupo de proteeção acetilo é eliminado por meio de diacetato de zinco ou dicloreto de zinco anidros, em metanol ou etanol, à temperatura de refluxo: 0s grupos de proteeção balogeno-acatilo, de preferencia o grupo de proteeção eloro-acetilo, são eliminados por meio de uma resina de permuta iónica básica, tal como Bowex» de preferencia 1x8 num solvente orgânico tal como metanol, eta nol, acetona, acetato de etilo, de preferencia metanol, ou suas misturas. Os compostos da fórmula geral I que apresentam um grupo amino livre no átomo de carbono C-2I!, são transformados em derivados mono-alquilamínicos, de preferencia dialquil-amínicos tendo os radicais alquilo C1-C4» por meio de alquila-ção reductiva com um aldeído com C1-C4 e um hidreto tal como eianoboro-bidreto de sódio*

Os exemplos seguintes destinam-se a ilustrar a pre - 8 * *

sente invenção, sem no entanto a limitarem aos compostos referidos* EXEMPLO 1

Processo para preparação de derivados da 2-ÍT-benziloxicarbonil -1,3-di-Q-aeiI-4, 6-?0-etilideno-aÍ£a ,beta-P-glueosamÍna 2-I-Benziloxicarbonil-4,$-0-etilideno-I3-glueosâmina (composto d · /. . 0 composto em epígrafe e preparado de acordo com o processo de H. Saitó et al., conforme descrito em Chemistry Letters, 799-802 (1987), da seguinte formas partindo de elori-drato de D-glueosamina e cloreto de benziloxicarbonilo, preparasse 2-H-benzil«*oxicarbonil-I)-glucosamina na presença de 2 e-/· quivalentes de SFaOH em água, que em seguida e transformada no composto em epígrafe com.aeetaldeído sob catálise eom H^SO^ * 113-Di-0-acetil-2-I-benziloxicarbonil-4* 6-0-etilideno-alfa,be-ta-D-glueosamina (Composto 2) 0 composto 1 I transformado no composto em epígrafe pelos processos usuais de acilaçao da química dos Mdratos de carbono, com anidrido acético e piridina· 2-Iií-Benziloxicarbonil-l, 3-‘bis-0-eloroacetil-4* β-0-etilideno-al fa, beta-L-glucosamina (composto 3)

Dissolver 33 g (97*2 mmol) do composto 1 em 1000 ml de dieloro-metano e 300 ml de piridina, e adicionar pouco a pouco, a 0°0 e agitando sempre, 2,4 equivalentes de cloreto de cloro-acetilo, dissolvidos em 500 ml de dieloro-metano· lassadas 14 boras lavar a mistura de reacção com tampão de fosfato de sodio, pH 7*5, secar a fase orgânica e evaporar no vácuo* Purificar o resíduo por meio de cromatografia em coluna sobre silicagel (eluentei diclo±o-metano/acetona 10il). - 9 —

Rendimentoϊ 45.4 g (95%) 1H-RMH: (300 MHz, Η,Η-COSY, 0DC13) Delta: 7.4-7.3 (m, 5H, Ph), 6.20 (d, IH, J(l,2) a 3.8 Hz, H-i). 5*28 (dd, IH, J(2,3) a = 10.4 Hz, J(3,4) = 9*6 Hz, H-5). 5.11 (d, IH, Jg * 11.5 Hz, WÚ· 5*03 (d, 1H, Jg, OSPh), 5.02 (d, 1H, J(2,1H) = 9.5 Hz, 4*70 (qf IH, - 5 Ηζ,ΟΕ[«), 4*23 (ddd, IH, J((l,2), J(2,3), J(2,m), H-2). 4.I5 (s, 2H, CIOH^). 4.I3 (dd, IH, Jg = * 10*5 Hz, J(5,6e) « 4.5 Hz, H-6e). 4*02 (d, IH, jg a 15 Hz, C1CH2-A), 3.92 (d, 1H, Jg, C1CH2-B), 3*79 (ddd, 1H, J(5,6a) a = 10 Hz, J(5,6e), J (4*5), W7T3.58 (dd, 1H, J(3,4), J(4,5), Hr4)> 3*52 (dd, IH, Jg, J(5,6a), H-6a)« 1.33 (d, 3H, J(Me,CH), ííeC=) EXEMPLO. 2 ·

Processo para preparação de derivados de 3“0-acil-2-l'í-Penzilo-xiearbonil-4, 6-0-etilideno-alfa-D-glucosamina 3-O-Acetil-2-l!l-benziloxicarbonil-4,6-0-etilidena-alfa-D-gluco-samina (composto 4)

Dissolver 2.11 g (5 mmol) de composto 2 em 40 ml de ΪΗΡ e juntar 0.5 ml de piperidina. Depois de agitar durante 12 horas evaporar a mistura de reacçio no vácuo e destilar depois com tolueno· 0 resíduo dissolvido em clorofórmio é lavada com água com gelo, e secar a fase orgânica sobre sulfato de só dio. Purificar 0 composto por meio de cromatografia em coluna sobre silieagel (eluentes dielorometano/aeetona, 6:1). Rendimento: 1,67 g (88%), xarope. (alfa)í^ = + 29*1° (c * 1 em clorofórmio). 2-iir-Benziloxiearbonil-3-0-cloroacetil-4,6-0-etilideno-alfa-D- -glucosamina (compos£> 5)

Dissolver 37 g (75*2 mmol) de composto 3 em 500 ml de metanol e juntar 74 g de silieagel 60 (40/63 pm). Agitar a suspensão durante 3 h à temperatura ambiente. CCP: dieloro-me-• tano/acetato de etilo, 1:1. Piltrar a mistura de reacçao e la— - 10 -

var a fase solida com metanol. Depois de evaporar a fase orgânica, dissolver o resíduo em dieloro-metano/aeetato de etilo, e filtar através de 50 g de silicagel,· Evaporar a fase orgânica no vácuo e destilar depois com clorofórmio. Rendimento :· 28.31 g (31%) xarope, (alfa= + 32.9° (c=l em acetato de etilo). 1H-MR (300 MHz, H,H-C0ST, CDCI5) Delta: 7.38-7.30 (m, 5H, Bh), 3.32 (dd, 1H,. J(2,3) = 11' Hz, J(3,4) * 10 Hz, H-3), 5.26 (d, 1H, J(2,HH) « 10 Hz, JH), 5.23 (d, 1H,‘ J(l,2) - '3,5 Hz, H-l), 5.11 (d, 1H, Jg = 12 Hz, OHPh), 5.03 (d, 1H, Jg = 12 Hz,’ CHPh). 4.69 (çl, IB, J(Me,CH) = 5 Hz, QH=)„ 4.09 (dd, 1H, J-(5,6e) * 4.7 Hz, Jg « 10 Hz, H-6). 4.04 (d, 1H, 1(1,2), J(2,NH) J(2.3), H-2), 4.02 (d, XH, Jg = I4.6 Hz, 010H), 3.99 (ddd, 1H, J(4,5) * 10 Hz, J (5,6a) = 10 Hz, J(5,6e) =417 Hz, H-5). 3-92 (d, 1H, Jg, 01CH), 3*52 (dd, 1H, J(5,6), Jg, H-6a), 3.48 (dd, 1H, J(3,4), J(4,5), H-4). 1.32 (d, 3H, J(Me,GH), MeO=). mmiPLO 3 G-licosilação de derivados da podo filo toxina 4-0- (3-0-Aeetil-2-lí-benziloxicar'bonil-4, 6-0-etilideno-beta-D--glueosaminil)-4f-íO-benziloxiearbonil-4 ,-0-demetil-4-epi-podo-filotoxina (composto 6) 0

Dissolver 2.8 g (5.2 mraol) de 4•-O-benziloxicarbo-nil-4 ’-0-denietil-4“epi-podo filo toxina e 1*9 g (5.2 mmol) de composto 4 em 300 ml de acetato de etilo. Depois de adicionar 5 g de filtro molecular de 4 t, juntar à mistura de reacção ar refecida a -18°0 39 g de BF^xéter. Agitar a mistura de reacção durante 6 horas a -18°C (CGF: dicloro-metano/acet0na, 10:1).

Sm seguida neutralizar com 40 ml de trietil-amisa e filtrar. E vaporar a fase orgânica no vácuo, e lavar 0 resíduo dissolvido em clorofórmio, com água. Secar a fase orgânica sobre sulfato de sódio e evaporar. Purificar o composto resultante por meio de crornatografia em coluna sobre silicagel (eluente: dicloro--metano/acetona, 10:1). Rendimento: 3*6 g (78%)

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1H-HMR (500 MHz, H,H-C0St, CDCl^ Deitai 7*58-7.19 (i, 10 H, Ph), 6.68 (g, 1H, H-5), 6.44 (s, 1H, H-8), 6.18 (s, 2H, H-2» e 1^1), 5*88 (s, 1H, H-15a), 5*73 (s,IH, H-Í5b), 5*20 (s, 2H, OH2P3a), 5.12 (dd, lH, ,J(2‘ , ,3, f) =10'Hz, H-3* *)» 5.00 (d, IH, Jg * 12.5 Hz, GH2Hi-â), 4.84 (d, 1H, J&, CHgPH-B), 4.82 (d, 1H, J(3,4) = 3 Hz, Ξ-4).' 4*79 (d, 1H, = 10 Hz, NH), 4.69 (d, 1H, J(l**,2**) « 8.5 Hz, H-l”). 4.69 (t, 3Η* J(GH, Me) * 5 Hz, MeOHg). 4.45 (d, 1H, J(l,2) = 5 Hz, H-l), 4.41, (dd, IH, J(3,lla) = 9 Hz, Jg = 9 Hz, H-lla), 4.18 (dd, IH, Jg, j(3,llb) « 7 Hz. H-llb). 4.15 (dd, 1H, Jg = 10 Hz, J(5M,6f,e) “ 4,5 Hz» H-6tfe), 3.60 (s, 3H, MeO), 3*56 {ddd, 1H, J(l,r,-2“), J(2*f,M), J (2 * * «3 * *). H-2«n..5.54 (dd. m, Jg, J(5*% 6*’a) * 10 Hz, E-6»»a), 3.40 (dd, 1H, J^M*’), J(4r,,5T*) -- 9.5 Hz, H-4M). 3.33 (ddd, 1H,·J(4*S5*#)»-J(5t,*6^a)r J-(5H,6,Je), iiiH), 3.19 (dd, IH, J(l,2), J(2,3) = 14 Hz, H-2). 2.77 (m, 1H, J(2,3), J0,4), J(3,lla), J(3,llb), lil)* 1.97 (s, 3H, loetllo). 1,28 (d, 3Η, J(CH,Me) ~ 5 Hz, MeO*=). 4 #~G-Benziloxicarbonil-4“Q- ( 2-H-benziloxicarbonil-3-Q-cloroaee til-4,6-0-etilideno-beta“D-gluGosaminil)-4,-G-demetil-4“epi-po dofilotoxina (composto 7)

Dissolver 13 g (25 mmol) de 4'-Q-benziloxIcarbonil -4*-0-demetil-4-epi-podofilotoxina e 10 g (25 mmol) de composto 5 em 400 ml de dicloro-metano/acetato de etilo 1:1, e adicionar 23 g de filtro molecular 4 1» 1 mistura de reacção .arrefecida a -18°C adicionar pouco a pouco, e agitando sempre, 80 ml de Bl^xéter. Depois de agitar durante 4 Horas a -18°C adicionar 4.0 g de aglieona dissolvidos em 50 ml de acetato de etilo. Passadas 10 Horas, juntar à mistura de reacção 80 ml de trie-til-amina, a uma temperatura de reacção de -18°0. Piltrar a mistura de reacção e evaporar no vácuo. Dissolver o resíduo em clorofórmio e lavar com água com gelo. Secar a fase orgânica sobre sulfato de sódio e evaporar no vácuo. Purificar o corapos to por meio de cromatografia em coluna, sobre silieagel (elu-' ente: dicloro-metano/acetona 15:1), Rendimento: 17 g (74%), 12 - t

2θ (alfa* +. 25° (c= 0.2 em GHCl^). Ponto de fusão: 140-142°C. IMMÍt (300 MHz, H,H-00SX, CDCl^) Delta: 7.50-7*44 (m, 10H, 6*74 (s, 1H, H-5).· 6.50 (s, 1H, H-8), 6.24 (s, 2H, H-2* e lk§D* 5.93 (s, 1H, H-15a). 3.76 (s, 1H. 5-15¾). 3.33 (dd,. 1H, J(2ff,3'·*) « 10 Hz, J(3,lV4ft) .« 10’ Hz. H-3M ). $.26 (s, 2H, 5.05 (d, 1H, Jg‘ * 12.5 Hz, CH-Ph-A).* 4.93 (d, 1H, Jg « «12.5 Hz, QH-Ph-B). 4.89 (d, 1H, J(lf r,2f‘*) « 7.5 Hz, H-l,t). 4.89-(d, Ifí, J(3,4) * 3" .Hz, H-4), 4.89 (d, 1H, J(2*\M) = 9.5 Hz, M), 4.70 (<*, 1H, J(Me,GH) « 5 Hz, Me-GH«), 4*52 (d, 3H, J(l,2) « 5.3 Hz, M), 4-45 (dd, 1H, Jg « 9 Hz, J<3,lla) * = 10 Hz>' H-lla). 4.24 (dd, 1H, Jg, J(3,Í1D) * 7 Hz. H-11D), 4.22 (dd, 1H, Jg = 10.5 Hz, J(5*ff6v,e‘) « 4.5 Hz, Η-β’/β), 4.06 (d, Ui, jg = 15 Hz. OlAo), 3.99' (d, 1H, Jg = 15 Hz, ClAc). 3.66 (s, 3H, MeO), 3.60 (dd, 1H, J(3,,,4,f) = 9 Hz, J(4f,,5,f) « 9 Hz, H~5rt). 3.23 (dd, 1H, J(2,3) * .14 Hz, J(l,2), H-2), 2.83 (m, 1H, J(2,3), J(3,4), J(3,lla), J(3,lld), H-3), 1.34 (s, 3H, J(He,OH) « 5 Hz, MeO«). 4*0- (2-I-Senziloxicar'bonil-3-0“Cloroacetil-4,6-0-etilideno-'be-ta-D,glueosaminil)-4 ,-0-cloroacetil-4 ,“0-demetil-4-epi-podo filo toxina (composto 8)

Partindo de 200 mg (0,42 mmol) de 4,-*0-cloroacetil _4 *-0-demetil-4-epi-podo filo toxina e 175 mg (0.42 mmol) do com posto 5, oPtém-se o composto em epígrafe de acordo com o processo de preparação do composto 7, e earacteriza^se por meio de espectros de 1H-MI e 130-Rffi. Rendimento: 257 mg (70%), 4-0-(2-I-Benziloxicar6onil-3-0-cloroacetil-4* 6-0-etilideno-be-ta-P-glucosaminil)-4-epi“podofilotoxina (composto 9).

Partindo de 150 mg (0,36 mmol) de podo filo toxina e 150 mg (0.36 mmol) de composto 5* obtêm-se o composto em epí grafe de acordo com o processo de preparação do composto 7» e caracteriza-se por meio de espectros de 1H-BMM e 13C-RMH, Ren - 13 -

dimento: 190 mg (65%)* BXMPLQ 4

Besacilação das glucosaminidas 4- 0- (2-l-Benziloxicarbonil- 4 * 6-0- etllideno-be ta-B-gluco saminijl) -4 f-0-bensiloxiearbonil-4 *- 0- demetil-4- epi-po do filo toxina (com posto 10} a) Desacilação do derivado 3n-Q-cloroaeetílico (composto 7)

Dissolver 2.5 g (2.4 mmol) de composto 7 em 500 ml dè metanol e juntar 5 g de resina de permuta iónica Dowex 1x8. Depois de agitar durante 2 boras a temperatura ambiente, filtrar e lavar a resina com metanol. Evaporar a fase orgânica no vácuo e lavar o resíduo dissolvido em clorofórmio. Secar a fase orgânica sobre sulfato de sódio e evaporar no vácuo. Rendi-mento % 1.95 g (98%), (alfa)J = -65.4 (c=l em clorofórmio). 0 composto em epígrafe é caracterizado por meio de espectrosco pia de MI. d) Desacilação do derivado 3I,-0«acetílico (composto 6)

Dissolver 600 mg (0.61 mmol) de composto 6 em 50 ml de metanol anidro, e adicionar 83 mg de dieloreto de zinco. Manter a mistura de reacção durante 3 dias à temperatura de re fluxo, âpós o tratamento usual, purificar o composto por meio de cromatografia em coluna. Rendimento: 377 mg (65%). 4~0-(2-I-Benziloxicarbonil-4»6-0-etilideno-beta-D-glucosamini3) -4-epi-podofilotoxina (composto 11)

Desbloquear 190 mg (0.234 mmol) de composto 9 com Dowex, de acordo com o processo da desacilação do composto 7* de modo a obter o composto em epígrafe. Rendimento: 160 mg (93%). - 14 -

EXEMPLO 5 *

Eliminação Mdrogenolítica do grupo de protecção I- ou Q-benzi loxicarbonilo 4 *_0-Demet:il*”4“epi-4-0- (4 * 6-0-etilideno-beta-D-glucosamini3)-po dofilotoxina (composto 12)

Dissolver 1*5 g (1.88 mmol) de composto 10 em 100 ml.de metanol e juntar 0.45 g de paládio/carvão. Hidrogenar a mistura de reacção durante 1 bora à temperatura ambiente e sob pressão normal. Piltrar a mistura de reacção e evaporar no vácuo. Cristalizar o composto com metano1/acetato de etilo. Rendimento: 0,95 g (90%)» (alfa)jp = -115*4° (c=l em metanol). Ponto de fusãos 202-204°C. 4-Epi-4-0-(4»6-0-etilideno-beta-D-gluco saminil)-po do filotoxina (composto 13)

Partindo de 160 mg (0.217 mmol) de composto 11 hi-drogena-se o composto em epígrafe de acordo com o processo de preparação do composto 12, e trata-se da mesma forma. Rendimen to: 117 mg (90%). EXEMPLO 6

Alquilação reductiva dos derivados 2w-amínicos 4 í-.0-Semetil-4-’0-(2-H,H-dimetil-4* 6-0-etilideno-beta-P-glueosa minil)-4-epi-podofilotoxina (Composto 14)

Dissolver 2,5 g (4.25 mmol) de composto 12 em 200 ml de metanol e junta-se 4 ml de uma solução aquosa de formal-deído a 37% e 1.06 g de elanoborobidreto de sódio. Depois de agitar durante 1b evaporar a mistura de reacção no vácuo e puã rificar o resíduo por meio de cromatografia em coluna sobre si licagel (eluente: dicloro—metano/metanol 10:1). Rendimento: 2 g (76%), (alfa)p° = -113.2° (c=l em clorofórmio). - 15

Claims

4-0- ( 2-!ff ft-Mmetil-4* 6-P-etilideno-‘beta-D-glucosaminil)-4-epI— -podo filo toxina (compostd. 15} Partindo de 110 irig (0*18 mmol) de composto 13 oTd-tem-se o composto em epígrafe de aeordo cõm o processo de preparação do composto 14« Rendimentos 95 mg (75%)« ' . - 1β - Processo para preparação.de um derivado da glucosa minil-epi-podo filo toxí na da formula geral I

0-R4 na qual - 16 -

ΣΤ*" representa um átomo de hidrogénio ou. o grupo de protecção acetilo ou mono, di ou trihalogeno-acetilo com halogenio * flúor, cloro ou bromo, R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 01-04, 3 , - . , . R representa um atomo de hidrogénio, um grupo alquilo com 01- -04 ou o grupo de protecção benziloxi-carbonilo, r4 representa um átomo de hidrogénio, um grupo de protecção mo no, di ou trihalogeno-acetilo, um grupo de protecção benziDo xi-carbonilo ou um grupo metilo e A representa um grupo alquilo com 01-04, caracterizado por ‘ se fazer reagir um derivado da glueosaraina da formula geral II, na forma alfa-hidroxi,

na qual I % Av R e R representam grupos de protecção de acilo conformi defi 1 nídos acima, e O R representa um átomo de hidrogénio e A representa um grupo alquilo com 01-04, com um derivado dã podofilo toxina da formula geral III

na qual A M R representa um grupo metilo ou um grupo de protecção mono, di ou trihalogeno-acetilo ou benziloxi-carbonilo, na presença de um agente promotor, tal como BE^xéter ou um tri-fluormetilo—sulfonato de trialquil-sililo tendo os radicais al quilo C1-C4, e de um solvente orgânico anidro, a -50°C a 10°C, de modo a obter um derivado da 4-0-(beta~glucosamin.il)-epi-po-dofilotoxina da fórmula geral I, na qual os radicais R , R , Íl5, 0 a mantém as definições anteriores, e se eliminar em seguida por via hidrogenolítica o grupo de protecção benziloxi -carbonilo com um catalisador de paládio, o grupo de protecção acetilo com dioloreto ou diacetato de zinco, e os grupos de protecção halog eno-acetilo eom uma resina de permuta anióniea básica, num solvente orgânico tal como metanol, etanol, acetona, acetato de etilo ou eventualmente suas misturas aquosas, e eventualmente se fazer reagir o grupo amino livre eom um aldeído com G1-C4 na presença de um bidreto, de modo a obter um derivado mono ou dialquil-amínieo obtendo assim um derivado 4-0-(beta-glucosaminil)-epi-podofilotoxina da fórmula geral I, na qual R1 representa um átomo de bidroglnio, 2 3 , R e W representam átomos de hidrogénio ou grupos alquilo com - 18 -

C1-G4, B^ representa um átomo áe hidrogénio ou o grupo metilo e 1 representa um grupo alquilo com 01-04* -· 28 * Erocesso de acordo com a reivindicação 1, para pre paração de um composto da formula geral I, na qual li1 representa um átomo de hidrogénio ou os grupos de protecção acetilo ou cloro-acetilo, 2 0 0-ΈΓ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com C1-C4, E representa um atomo de hidrogénio, um grupo alquilo com 01-04 ou o grupo de protecção benziloxi-carbonilo, representa um átomo de hidrogénio, um grupo metilo, ou os grupos de protecção benzilozi-carbonilo ou cloro-acetilo, e I representa o grupo metilo, caracterizado por se fazer reagir um derivado da glueosamina da formula geral II, na sua forma alfa-hidroxi, na qual 1 B. representa um grupo cloro-acetilo, 2 ^ II representa um atomo de hidrogénio, X B representa um grupo benziloxi-carbonilo e Â representa um grupo metilo, com um derivado da podofilotoxina da formula geral III, na qual 11^ representa um grupo metilo, ou um grupo de protecção cloro-acetilo ou benziloxi-carbonilo, na presença de BF^xéter ou trifluormetano-sulfonato de trial-quil-sililo tendo os radicais alquilo G1-C4, num solvente orgá nico, a -30 0 a -10 C, de modo a obter um derivado da 4-0-(be-ta-glucosaminil)-epi-podofilotoxina da fórmula geral I, e se utilizar esse composto para a preparação de outros compostos da fórmula geral I· - 19

3¾ - Processo de abordo com pelo menos uma das reivindi caçoes 1 e 2, para preparação de um composto da fórmula geral I, na qual, I « R representa o grupo de protecçao acetilo, ou um grupo de pr£ teeção .mono, ái ou trihalogeno-acetilo, com iialogeno - flúor, cloro ou bromo, R. representa um atomo de hidrogénio, 3 « R representa o grupo de protecçao benziloxi-carbonilo, R^ representa um grupo de protecçao mono, di ou trihalogeno--acetilo, ou benziloxi-carbonilo, ou o grupo metilo, e A representa um grupo .alquilo com CI-C4, earacterizado por se fazer reagir um derivado dá glueosamina . , “ 1 2 3 da formula geral II, na sua forma alfa, na qual R , R , R e A têm as definições anteriores, com um derivado da podo filo to xi- 0, Λ na da formula geaáL III, na qual R tem as definições anteriores, na presença de um agente promotor tal como BP^xéter ou um trifluormetano-sulfonato de trialquil-sililo tendo os radicais alquilo C1-C4, e de um solvente orgânico anidro, a -50° C atê +20°C, de preferência entre -20° C e -30°C, eventualmente com adição de um agente secante tal como um filtro moleculari - 4â Processo de acordo com a reivindicação 3, caraete-rizado por se utilizar como agente promotor BP^xáter. - 5^ - Processo de acordo com a reivindicação 3» caracte-rizado por se utilizar como solvente orgânico aeetato de etilo ou suas misturas com outros solventes, tais como dicloro-meta-no, acetona ou Iter. - 20 - *·

• - 6ê - Processo para preparação de uni derivado da glucosa mina da formula geral II, na sua forma alfa, na qual R representa um grupo de protecçao acilo, R representa um átomo de hidrogénio f l? representa um grupa de protecçao benziloxi-carbonilo e 1 representa um grupo alquilo com01-04» caracterisado por se tratar um derivado da ls 3-di“0-acil-4,6-0 ~alquilideno-2-n-benzilaxiearbQnil-álfa, beta-B-glueosamina da fórmula geral IV

IV GO-O-CHgPh na qual 15 ' ** R e Pt representam um grupo de protecçao acilo conforme acima 1 definido, Q R representa um átomo de hidrogénio, R representa um grupo de protecçao benziloxi-carbonilo e A representa um grupo alquilo com 01-04» com uma base orgânica, tal como piperidina ou piridina, ou cora silicagel, num solvente polar tal como metanol, obtendo-se assim um composto da formula geral II* A requerente reivindica a prioridade do pedido ale 21 - mao apresentado em 22 de Abril de 1989» sob ο Μ P 39 13 327.3. lisboa, 19 de Abril de 1990 0 ACffiilffll OFICIAL BA ΒΒΟΡΚΙΕΒΑΒΕ ISBUSTMAL

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