PT92573A

PT92573A - Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas contendo derivados de nucleosidos e polissulfato de pentosano

Info

Publication number: PT92573A
Application number: PT92573A
Authority: PT
Inventors: Christoph Meichsner; Irvin Winkler; Manfred Rosner
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1988-12-16
Filing date: 1989-12-14
Publication date: 1990-06-29
Also published as: EP0377846A1; DK638889D0; DK638889A; CA2005717A1; DE3842362A1; JPH02258721A

Description

de invenção de HOECHST AKTIER GESEDLSCHAFT, alemã, industrial e comercial, com sede em B-6230 Prankfurt em Main 80, República Federal Alemã, (inventores: Dr. Manfred Rosner, Dr. Irvin Winkler e Dr. Christoph Meichsner, resi dentes na Alemanha Ocidental) para «'PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS COITEIDO DERIVADOS DE MCIEOSIDOS E PODISSUEFATO DE PEHTOSAEO".

DESCRIÇÃO A presente invenção refere-se a composições farmacêuticas contendo derivados de nucleósidos e po-lissulfato de pentosano, bem como à sua preparação e utilização É conhecido que certos derivados de nucleóxidos, por exemplo a 3*-azido-3»-ãesoxitimidina (A2T) (Yarchoan et al.: The Lancet, 575-580 (1986)), são apropriados para combater infeeções causadas pelo virus da imunodeficiência humana (HIY). Da patente alemã 3601136 sabe-se ainda que certos polímeros orgânicos com grupos aniónicos inorgânicos, em especial polissacáridos sulfatados, são apropriados para combater infeeções causadas por retrovirus. Além disso, já tinha sido . proposto o Gombate a doenças viráis através da administração de 1 um preparado combinado contendo* entre outros, um derivado de 1 -

ί nucleósido e um polissacárido sulfatado (vide EP 0270317).

Descobriu-se então surpreendentemente que um preparado combinado que contenha determinados deriva dos de nucleósido e um polissulfato de pentasano, tem uma extraordinária eficácia contra infeoçães virais, em especial con tra infecções causadas por retrovirus.

0 objectivo da invenção é por isso uma composição farmacêutica constituída por pelo menos um composto do grupo A) - derivados de nueleósidos de fórmulas I a V

nas quais A e B, independentemente um do outro, representam CH ou ΪΓ, R2 é H ou HHZ, R5 é H, m2 ou SH, é Η, I ou d, e

Z é um substituinte de fórmula VI -2- i

(VI) S'

na qual, X significa 0, CH2, ou CR^E^, Y significa NHg, 3?, 01, H ou alcooxilo -C^-C^, significa H ou !,

Rp significa H, 3? ou OH, ou

Y e R^ representam uma ligação dupla quando R^ = H, ou Z é um substituinte de fórmula VII i (VII) (CH2)m

(0)n - (GRR*) - 0H2 - OH na qual R e R*, independentemente um do outro, significam H, OH, CH20H, IH2, R, Cl ou representam uma ligação dupla entre os átomos de carbono vizinhos, e m = 0 ou 1, n = 0 ou 1 e p * 2, 3 ou 4, e pela componente B) constituída por ou contendo pelo menos um polissulfato de pentosano e/ou pelo menos um dos seus sais. Da qui em diante deve entender-se pela designação “polissulfato de pentossano" também os respectivos sais.

Preferem-se as composiçães farmacêuticas que contêm pelo menos um derivado de nucleóxido com as fórmulas I a V acima descritas, nas quais os compostos do grupo A) são um derivado de nucleósido de fórmulas I, II, III, IV ou V, como acima representado, \ nas quais, • A significa H, - 3 -

B significa CH, B.r> significa IH2 ou H para 0 eomposto de fórmula I e significa H para 0 composto de fórmula II, enquanto que R^ significa IH2 e R^ significa H ou Cl, e em que Z é um substituinte de fórmula VI, na qual X significa 0, Y significa 1^, F ou H, R*. significa H, e Rp significa H ou OH.

De entre estes derivados de nucleó-sidos preferem-se 3,-aziâo-3‘-desoxitimidina, 3,-aziâo-2’,3’--didesoxi-uridina, -citidina, -guanosina,-adenosina, -inoeina, -diaminopurina, 3,-fluoro-3'-desoxitimidina, 3,-fluoro-2l,3'- ' -didesoxi-uridina, -citidina,-guanosina, -adenosina, -inosina, -diaminopurina, 3,-fluoro-2'.3'-clidesoxi-5-clorouriãina, 3'--desoxitimidina, 2’,3'-didesoxi-uriãina, -citidina, -guanosina, -adenosina, -inosina, -diaminopurina, e ainda 3*-desoxi--2’,3,-didesidrotimidina, 2',3,-didesoxi-2',3,-didesidro-uridi na, -citidina, -guanosina, -adenosina, -inosina, -diaminopurina, e em especial 3,-azido-3,-desoxitimidina, 3,-azido-2‘,3'--didesoxi-uridina, guanosina, 3'-fluoro-3,-desoxitimidina, 3’--fluoro-2',3'-âidesoxi-uridina, -guanosina, 3,“fluoro-2',3'-άί desoxi-5-clorouridina, 3*-desoxitimidina, 2’,3'-didesoxi-citi-dina, -guanosina, -adenosina, -inosina, -diaminopurina e 3'-de soxi-2',3,-didesidrotimidina e 2,,3,-<3idesoxi-2,,3,-didesidro-uridina.

Preferem-se muito em especial: 3'-azido-3,-desoxitimidina, 3'-fluoro-3'-desoxitimidina, 3'-fluoro-2',31-didesoxi-5-clorouridina, 3'-desoxitimidina, 2',3,-didesoxi-citidina, -adenosina, inosina, e 3,-desoxi-2’, 3’-didesidrotimidina. * 0 polissulfato de pentosano contido • na composição farmacêutica de acordo com a invenção (smoni- - 4 -

moj Hidrogenossulfato de xilano, polissulfato de xilano; vide Index Merck, los ed., Merck & Co. Inc., Rahway 1. J. (1985)» U.S.A.) pode apresentar parâmetros moleculares variados.

Um polissulfato de pentosano preferencial apresenta um peso molecular médio de cerca de 1000 Dalton a cerca de 12000 Dalton, bem como um grau de sulfatação dos grupos OH do polissacárido de cerca de 20$ a cerca de 100$.

Um polissulfato de pentosano particularmente preferido tem um peso molecular médio de 4500 a 7000 Dalton, em especial de cerca de 6000 Dalton e um grau de sulfatação de cerca de 75$ a 95$, em especial de cerca de 90$. Um polissulfato de pentosano extraordinariamente apropriado é o polissulfato de pentosano da firma Bene Chemie GmbH, 8000 Muni que 71, Herteriehstrabe 1. 0 polissacárido sulfatado pode existir na forma de ácido livre, isto é com os grupos funcionais OSO^H, ou na forma de um sal fisiologicamente assimilável. De entre os sais fisiologicamente assimiláveis preferem-se em especial os sais de amónio e os sais de metais alcalinos. Prefere-se muito em especial o sal de sódio. A composição farmacêutica de acordo com a invenção pode conter compostos do grupo A) e polissulfato de pentosano em várias proporções relativas. Prefere-se uma proporção ponderai de derivado(s) de nucleósido em relação ao polissulfato de pentosano de 1:100 a 100:1, muito em especial de 10:1 a 1:10.

As composições farmacêuticas de aeor do com a invenção são eficazes contra um série de virus Humano patogénicos, como por exemplo virus de Herpes, tendo contudo particular importância a sua eficácia contra retrovirus, em es pecial contra o HIY.

Para o tratamento ou profilaxia de doenças causadas por virus - em especial por retrovirus - podem administrar-se as composições farmacêuticas de acordo com a invenção de variados modos. Assim, podem administrar-se por exemplo de modo intravenoso, intramuscular, intraperitoneal, • subcutâneo, como transfusão reotal ou oral. Em estados clíni- • cos agudos é preferível a administração como transfusão. Gomo - 5 -

L medioamentação prolongada indica-se por exemplo a administração dos componentes individuais, .isto é, do ou dos derivados do nuc leósido e do polissulfato de pentosano pode efectuar-se simultâ neamente ou a tempos espaçados, por exemplo com um intervalo de até várias horas; prefere-se contudo a administração simultânea em especial a administração simultânea numa unidade de dosagem. 1 preparação das composições farmacêu ticas de acordo com a invenção efectua-se incorporando pelo menos um derivado de nucleósido e polissulfato de pentosano eventualmente com outros aditivos e/ou veículos, de modo a obter-se uma forma de administração adequada. Os aditivos e veículos são substâncias do grupo dos suportes, conservantes e outros aditivos habituais.

Podem utilizar-se assim, para formas de administração oral, aditivos como amidas, por ememplo amido de batata, milho ou trigo, celulose ou seus derivados, em especial celulose microcristalina, dióxido de silício, vários açuca res como lactose, carbonato de magnésio, e/ou fosfato de cálcio É ainda vantajoso adicionar às formas de administração oral adi tivos que melhorem a assimilibilidade dos medicamentos, como por exemplo lubrificantes e resinas. Para melhorar a assimilibi lidade podem também administrar-se os medicamentos na forma de cápsulas insolúveis no suco gástrico. Pode ainda ser vantajoso adicionar à forma de administração ou a um dos componentes da composição farmacêutica um agente retardante, eventualmente na forma de membranas permeáveis, como por exemplo membranas à base de resinas celulósicas ou de poliestireno, ou permutadores iónicos. 1 dosagem a utilizar das composições farmacêuticas de acordo com a invenção depende de vários factores como a forma de administração do medicamento e o estado clínico, peso e tipo de doença do paciente. Contudo, uma dose diária de cerca de 1500 mg de derivado de nucleósido e cer ca de 5000 mg de um polissulfato de pentosano só deve ser excedida durante um curto espaço de tempo. É preferível uma dose diária de cerca de 10 a 1200 mg de derivado de nucleósido e cer . ca de 10 a 2-50 mg de polissulfato de pentosano para uma pessoa 1 de cerca de 70 kg de peso corporal. Além disso é conveniente, - 6 -

£ para uma determinada combinação de ingredientes activos correc ta, optimizar tanto a composição como a dosagem, por exemplo por determinação da biodisponibilidade em testes preliminares. 1 administração da dose diária da con. posição farmacêutica de acordo com a invenção pode efectuar-se na forma de uma única administração ou em várias doses menores. Prefere-se a administração em 3 a 8 doses por dia. Em muitos ca sos pode ser indicada uma administração contínua da composição farmacêutica, por exemplo na forma de uma transfusão. 1 preparação dos derivados de nucleó-· sido necessários para as composições farmacêuticas de acordo com a invenção, é conhecida da literatura ou pode efectuar-se por analogia com processos conhecidos (vide p. ex. lucleic Acid Ohemistry, Partes I-III, editada por Leroy B. Townsend, R. Stuart Tipson, John Wiley & Sono, (1978) ÍTew York, Chichester, Brisbane, Toronto, Singapore).

Determinados polissulfatos de pento-sano necessários para a composição farmacêutica de acordo com a invenção podem obter-se no mercado. Os polissulfatos de pento-sano com um grau de sulfatação especial podem preparar-se por exemplo por sulfatação de pentosano com ácido sulfúrico ou com um dos seus complexos activados (vide p. ex. patente alemã P 3725554.1, EP 0270317 ou patente suiça 293566). 0 isolamento de pentosanos ou polissulfatos de pentosano com um determinado peso molecular médio pode efectuar-se por meio de processes de preparação conhecidos, em especial processos de separação cromatográficos.

Os exemplos de preparação seguintes destinam-se a ilustrar mais detalhadamente a invenção.

Exemplo 1;

Preparam-se comprimidos, apropriados para administração oral, contendo os componentes seguintes, de acordo com um processo em si conhecido, por granlação dos ingredientes activos e dos aditivos seguindo-se a prensagem até à forma de comprimido. Estes comprimidos destinam-se a um tratamento antiviral com uma dose de comprimidos 3 a 6 vezes por . dia que garanta a dosagem pretendida. - 7 - na«ii^ftg.-«sonrtaiCSgg*»

peso

Componentes (por comprimido) polissulfato de pentosano, sal de sódio (peso mèliEOular médio 6000 Dalton, grau de sulfatação 9o<fo) 3'-azido-3 *-desoxitimidina lactose amido de milho talco dióxido de silício coloidal estearato de magnésio Exemplo 2; 150 mg 100 mg 150 mg 50 mg 6 mg 6 mg 4 mg

Podem preparar-se cápsulas, adequadas para administração oral, contendo os componentes a seguir mencionados, de acordo com um processo em si conhecido, misturando os ingredientes activos e os aditivos e colocando-os em cápsulas de gelatina. Estas cápsulas destinam-se a um tratamento an tiviral com uma dose de uma cápsula 2 a 4 vezes por dia.

Componentes (por cápsula) peso polissulfato de pentosano, sal de sódio 150 mg (peso moleeular médio 6000 Dalton, grau de sulfatação 90$) 3'-azido-3'-desoxitimidina 100 mg lactose 200 mg talco 10 mg dióxido de silício coloidal 10 mg

Exemplo 3i

Podem preparar-se soluções de ingre diente activo, apropriado para injecção, contendo os componan-tes a seguir indicados, de acordo com um processo em si conhecido, misturando os vários ingredientes e enchendo com esta mistura ampolas esterilizadas. Is soluções injectáveis destinam-se a tratamento antiviral com doses de 1 a 2 unidades de injecção por dia (1 unidade de injecção = 1 ampola).

Componentes (por ampola) peso polissulfato de pentosano (sal de sódio) 150 mg (peso molecular médio 6000 Dalton, 8

5 mg 5 g t grau de sulfatação 80$) 3 f-azidO-31-desoxitimidina cloreto de sódio metilparabeno água esterilizada

Testes de eficácia

Teste de preparados contra o HIV em cultura celular Descrição do método

Meio: RMPI pH 6,8 0 meio completo contém ainda 20$ de soro de vitela fetal e 20 IV/ml de interleuqnina 2 recombinante. Células:

Cultivam-se linfócitos, isolados por •p centrifugação de gradiente de Ficoll a partir de sangue fresco, após adição de 2 ug/ml de fitohemaglutinina (Wellcome), em meio completo, durante 36 horas a 37° C sob atmosfera de 5$ de C0P. Gongelam-se as células após adição de 10$ de DMSO até uma densidade celular de 5 x 10°, e armazenam-se em azoto líquido. Descongelam-se as células para o teste, lavam-se em meio RPMI e cultivam-se em meio completo durante 3 a 4 dias.

Ensaio:

Dissolvem-se os preparados a testar em meio completo, normalmente numa concentração de 1,2 mg/ml. Em placas de 24 orifícios coloca-se em cada uma 0,5 ml de meio completo. Após adição de 0,1 ml de preparado dissolvido dilui--se o preparado por transferência de quantidades de 0,1 ml numa série de diluições geométricas de factor 5. A cada mistura 5 , adicionam-se 0,4 ml de uma suspensão com 5 x 10 linfocitos por ml.

Adicionam-se às misturas 0,1 ml de uma camada sobrenadante de linfócitos infectados com HIVl, de modo que na mistura o efeito citopatogénico seja reconhecível após 3 a 4 dias. • A multiplicidade da unidade infeccio . sa é neste caso de 0,01 - 0,02. - 9 -

1 mistura a testar contém assim os seguintes componentes em meio completo: 0,5 ml de preparado 200 ug/ml a 1,6 mg/ml 0,4 ml de células cerca de 1 x 10^/ml 0,1 ml de HXY -j_ . 20 — 1 · 50 1,0 ml

As misturas a testar contêm ainda controle de infecção isentos de preparado ou preparados padrão, por exemplo l,-azido~3,-desoxitimidina 0,2 ug/ml ou polissulfa-to de pentosano 25 ug/ml.

Tratamento dos resultados

Os resultados obtêm-se por observação microscópica das mistura ao 42 dia após infecção.

Gom base na formação de sincitias causada pelos virus determina-se o crescimento dos vírus e a concentração inibitória mínima (MHK). I. Inibição da formação de sincitias induzida por HIY em cultu ras de linfócitos humanos pelo polissulfato de pentosano (sal de sódio, grau de sulfatação cerca de 80-90$, peso molecular médio 6000 Dalton) em combinação com AZT e pelo sul fato de dextrano (sal de sódio, grau de sulfatação cerca de 60-90$, peso molecular médio 8000 Dalton) em combinação com AZT.

Os resultados deste teste apresentam -se na Tabela 1.

Tabela 1 valor MHK ug/ml 3,-azido-3,-desoxitimidina Sulfato de dextrano polissulfato ug/ml de pentosano 0 100 25 0,012 25 12,5 0,025 12,5 1,6 0,05 12,5 1,6 0,1 12,5 1,6 valor MHK: 0,1 ug/ml - 10 -

Os dados apresentados na Tabela 1 com provam a extraordinária eficácia do polissulfato de pentosano em combinação com a AZT. II Inibição da formação de sincitias induzidas pelo HIV em culturas de linfócitos humanos pelo polissulfato de pentosano (sal de sódio, grau de sulfatação 90$, peso molecular médio 6000 Dalton) em combinação com análogos de nuoleósi-dos.

Os resultados deste teste apresentam -se na Tabela 2.

Tabela 2

Valor MHK (ug/ml) do polissulfato de pentosano 5,-azido-3* valor MHK: -desoxitimidina 0,1 ug/ml G 0,012 0,025 0,05 0,1 25 12,5 1,6 1,6 1,6 ^-azido^' ,3'-didesoxiguanosina Valor MHK: 2 ug/ml 0 25 0,25 25 0,5 25 1,0 12,5 2,0 12,5 - 11 -

Claims

pelo menos um oomposto do grupo a) - derivados de nueleósidos de fórmulas I a V

nas quais A e B, independentemente um do outro, representam GH ou 1, R2 é H ou JSHg, é H, IH2 ou SH,‘ R4 é H, ! ou Cl, e Z é um substituinte da fórmula YI S'

(YI)

• na qual ·_ X significa 0, CH2 ou CR^Rp,, - 13

Y significa 35^, » F, 01, H ou alcooxilo-C^-C^, R^· significa H ou I, Rp, significa Η, F ou 0Ξ, Y e R representam uma ligação dupla quando Rjj = H, ou Z é um substituinte de fórmula VII

(VII) (0)n - (CRRf)p - CH2 - OH na qual R e R', independentemente um do outro, significam H, OH, CH20B, N2» HH2, F, 01 ou representam uma ligação dupla entre os átomos de carbono vizinhos, e 1 = 0 ou 1, n s 0 ou 1 e p s 2, 3 ou 4, e uma componente B) constituída por ou contendo pelo menos um polissulfato de pentosano e/ou pelo menos um dos seus sais. Processo de acordo com a reivindicação 1, caraeterizado por 0 composto de grupo A), ser um deriva do de nucleósido de fórmula I, II, III, IV ou V, como definido na reivindicação 1, nas quais A significa H, B significa GH, Rr> significa M2 ou H para o composto de fórmula I e significa H para 0 composto de fórmula II, enquanto que R^ significa HH2 e R^ significa H ou 01, e em que Z é um substituinte de fórmula VI, na qual X significa 0, Y significa H^, F ou H, R^ significa H, e 14 - -----»-«xv.n

Rp significa H ou OH. - 3§ _ Processo de acordo com as reivindica ções 1 ou 2, caracterizado por o composto do grupo A) ser um derivado de nucleósido escolhido de entre os seguintes compostos: 3'-azido-3'-desoxitimidina; 3'^ζίάο-2',3,-ãiâesoxiuriãina ou -guanosina; 31-fluoro-3 *-desoxitimidina; 3,-fluoro-2’,3'-didesoxiuridina ou -guanosina; 3'-fluoro-2’,3,-didesoxi-5-clorouridina; 3’-d e s oxit imid ina; 2’,3'-didesoxicitidina, -guanosina, -adenosina, inosina ou -diaminopurina; 3'-desoxi-2',3-diseshldrotimidina; 2',3,“didesoxi-2r ^'-dideshidrouriâina. - 4i - Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 3, caracterizado por a componente B) ter um peso molecular médio de cerca de 1000 a cerca de 12 000 Dalton e apresentar um grau de sulfatação dos grupos OH polis-sacáridos de cerca de 20 a 100$. — 5§ — Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 4, caracterizado por o polissulfato de pentosano de componente B) ter um peso molecular médio de cerca de 3500 a 6500 Dalton e apresentar um grau de sulfatação de 75 a 95$. - 15 - — 6& — Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 5, caracterizado por a relação em peso entre o composto (ou compostos) do grupo 1) e a componente B) se situar entre 100:1 e 1:100. - 7* - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por se obter uma combinação farmacêutica destinada ao tratamento ou a profilaxia de doneças infecciosas causadas por virus ou por retrovi-rus. A requerente reivindica a priorida de do pedido alemão apresentado em 16 de Dezembro de 1988, sob o Era. p 38 42 262.6. Dezembro de 1989 lisboa, 14 de © Δ«551 ©M5E/X Bi

- 16 -