PT86188B

PT86188B - Processo para a preparacao de analogos de rebecamicina e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT86188B
Application number: PT86188A
Authority: PT
Inventors: Takushi Kaneko; Henry S Wong; Jacob J Utzig
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1986-11-21
Filing date: 1987-11-20
Publication date: 1990-11-07
Also published as: DK612987A; DK165986C; EP0269025A2; KR880006246A; HK49093A; CA1287349C; CN1019806B; CS824987A2; JPS63198695A; DE3783577T2; FI86189C; EP0269025A3; YU46087B; IE60595B1; DK165986B; JPH05400B2; AU614068B2; FI875091A; CY1701A; US4785085A

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE ANÁLOGOS ΌΕ REBECAMICINA E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Campo da Invenção

A presente invenção diz respeito a novos compostos que possuem propriedades anti-neoplãsicas, ã sua preparação, a preparações farmacêuticas que contêm uma quantidade de, pelo menos, um composto, de acordo com a presente invenção, que seja eficaz na inibição do crescimento de tumores em sistemas animais experimentais e a um método de tratamento terapêutico de um animal experimental por meio da administração de uma uma quantidade de, pelo menos, um composto, de acordo com a presente invenção, que seja eficaz na inibição do crescimento tumoral em sistemas animais experimentais .

Antecedentes técnicos

As patentes de invenção norte-americanas n?s 4,487,925 e

4,552,842 referem o agente anti-tumoral designado por rebecamicina e os seus derivados: 5'-N-metilo e 5',2, 3 e 6-tetraacetato, e um processo para a preparação do mesmo agente por meio da cultura de uma estirpe produtora de rebecamicina, de Nocardia aerocolonigenes, de preferência, de Nocardia aerocolonigenes ATCC 39243,

ou de um seu mutante, produtor de rebecamicina, num meio nutriente aquoso contendo fontes assimiláveis de carbono e azoto, submer sas em condições aerõbicas até se preparar uma quantidade substan ciai de rebecamicina.

RESUMO DA INVENÇÃO

A presente invenção compreende analogos do agente anti-tumoral designado por rebecamicina (formula I):

preparados por meio de uma primeira reacção da rebecamicina com uma base forte para se obter um composto intermédio reactivo e depois, por meio da reacção do composto intermédio com um halogeneto de aminoalquilo. Por intermédio da utilização de uma quan tidade de base forte, ligeiramente em excesso, por exemplo cerca de 10% de excesso, da quantidade equivalente molar de rebecamicina, seguida da reacção do composto intermédio resultante com, pelo menos um equivalente molar baseado na rebecamicina de um halogeneto de aminoalquilo, como agente alquilante, obtém-se o correspondente análogo 6-aminoalquilorebecamicina.

Por· meio da utilização de uma quantidade de base forte, ligeiramente em excesso, de duas vezes a quantidade equivalente molar de rebecamicina, por exemplo cerca de 20% de excesso sobre duas vezes a quantidade equivalente molar de rebecamicina, e depois, por meio da reacção do composto intermédio resultante com cerca de um equivalente molar de um halogeneto de aminoalquilo, como agente alquilante, obtem~se o correspondente anãlogo 13-aminoalquilorebecamicina.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Sob um aspecto geral, a presente invenção representa um composto escolhido do grupo que consiste nos compostos que possuem as fórmulas gerais (II) e (III), seguintes:

Formula II nas quais,

os símbolos Αθ e A^ representam, cada um, um ãtomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral: -(CH₉) NR^R^, na qual o símbolo n tem o significado definido antes;

o símbolo n representa um numero inteiro de 1 a 6;

os símbolos e representam, cada um, independente mente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^-Cg eventualmente substituído, aralquilo comportando 1 a 3 átomos de carbono no grupo alquilo e um núcleo fenilo tendo, eventualmente, como substituinte(s) 1 a 3 átomos de halogéneo ou grupos alquilo, alcoxi, hidroxi, carboxilo, alcoxicarbonilo, amino ou mono- e di-alquil (inferior)-amino no radical arilo ou arilo escolhido entre um núcleo fenilo tendo, eventualmente, como substituinte(s) 1 a 3 átomos de halogéneo ou grupos alquilo, alcoxi, hidroxi, amino, mono- e di-alquilamino, nitro, carboxilo, alcoxicarbonilo ou ciano, com a condição de, se um dos símbolos R^ ou R^ representar um grupo arilo, o outro representa um grupo diferente e, se se considerar conjuntamente os mesmos símbolos,eles representam um grupo ou um grupo de formula geral

-Rg — (CH2) 2^na U¹¹³-'- ⁰ símbolo Rg representa um ãtomo de oxigénio ou de enxofre ou um grupo CHg ou NH, formando conjuntamente com o átomo de azoto, um núcleo pentaou hexagonal;

o símbolo X representa um ãtomo de hidrogénio, flúor, cloro ou bromo ou um grupo alquilo C^-Cg, hidroxi, carboxilo, alcoxicarbonilo ou alcoxi em que o radical alquilo representa um grupo alquilo C^-Cg, benziloxi, amino ou mono- e dialquilamino; e o símbolo R^ representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo CHg; e os seus sais de adição com ácidos e bases, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

De acordo com a presente invenção, os compostos preferidos que possuem uma das formulas gerais (II) e (III), são aqueles nos quais o símbolo n representa um numero inteiro de 1 a 6, os símbolos R^ e R₂ representam, cada um, independentemente, um grupo alquilo C^-Cg, eventualmente, substituído e, quan do considerados conjuntamente, representam um grupo -(CE^)ou um grupo de fórmula geral: -(CH₂) ₂~R -(CH₂)₂“s na qual ° símbolo Rg representa um ãtomo de oxigénio ou de enxofre ou um grupo CH₂ ou NH, formando conjuntamente com o ãtomo de azoto, um núcleo penta- ou hexagonal, o símbolo R^ representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo CHg e o símbolo X representa um ãtomo de hidrogénio, cloro ou bromo ou um grupo hidroxi, OCHg ou OCH₂CgHg.

Compostos mais preferidos, de acordo com a presente invenção, que possuem uma das fórmulas gerais (II) e (III), anteriores, são aqueles nos quais, o símbolo n representa um numero inteiro de 1 a 3; os símbolos R^ e R₂ representam cada um, independentemente, um ãtomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^-Cg ou um grupo -(CHg)^-; o símbolo R^ representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo CHg; e o símbolo X representa um ãtomo de hidrogénio, de cloro ou bromo ou um grupo hidroxi, OCHg ou OCH ΟθΗ,..

Os compostos muito mais preferidos, de acordo com a presente invenção, que possuem uma das formulas gerais (II) e (III), anteriores, são aqueles em que o símbolo n representa um numero inteiro 2 ou 3; o símbolo X representa um ãtomo de cloro em cada uma das posições 1 e 11 do núcleo; os símbolos e R₂representam, cada um, um grupo C₂Hg e o símbolo R^ representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo CHg.

Quadro 1 seguinte apresenta combinações representativas de muitos grupos dentro das definições dos símbolos X, n, R^, , e e muitas combinações adicionais de tais grupos serão, facilmente, evidentes para os entendidos na matéria. Compreende-se que o grupo aminoalquilo A, em relação aos grupos n, R^ e .R₂, pode ser substituído em uma ou ambas as posições 6 e 13 (designadas A„ e A_nn) do sistema do núcleo da rebecamicina. Naturalmente,

D 13 quando apenas um dos símbolos Αθ ou A^^ representa um grupo aminoalquilo, o outro representa um átomo de hidrogénio.

Quadro 1 - Grupos substituintes representativos

- (CH_) -NR^R² n

ou H

X	n	*1 h₂

1,11-dicloro	2	etilo etilo	metilo
1,11-dicloro	3	etilo etilo	metilo
3,9-diamino	3	metilo metilo	H
2,10-diamino	4	propilo propilo	H
3,9-dibenziloxi	5	i-propilo H	metilo
4,8-dicloro	6	etilo H	metilo
3,9-dicloro	2	fenetilo H	metilo
4,8-dihidroxi	3	benzilo H	metilo
3,9-dihidroxi	2	-(CH₂)_u-	H
4,8-dimetoxi	3		metilo
3,9-dimetoxi	2		metilo
4,8-dimetilo	3	-<ch₂)₅-	H
3,9-dimetilo	1	-(CH_?)_?-S-(CH_?)_?-	metilo
2,10-dimetilo	2	hexilo H	metilo
3,9-dihidroxicarbonilo	3	etilo etilo	metilo
2,10-dibromo	2		metilo
H	3	etilo etilo	H

- 8 - y

...

Sob outros aspectos, a presente invenção representa uma composição farmacêutica contendo, pelo menos um dos compostos, de acordo com a presente invenção, e um método para tratamento terapêutico de um hospedeiro mamífero, por exemplo, um animal experimental, afectado por um tumor maligno, por meio da administração de, pelo menos, um dos compostos, de acordo com a presente invenção, em uma quantidade inibidora do crescimento tumoral e, normalmente, por meio da administração do composto, sob a forma de composição farmacêutica.

Por intermédio da expressão alquilo C^-Cg, mais particularmente, alquilo C^-Cg não-substituído, referimo-nos a grupos alquilo de cadeia simples ou ramificada ou a grupos alquilo cíclicos que possuem um total de seis (6) ãtomos de carbono. Exem pios de grupos alqíilo de cadeia simples, apropriados, incluem: grupos metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo e hexilo. Exemplos de grupos alquilo de cadeia ramificada, apropriados, incluem: grupos isopropilo, butilo sec., butilo terc., 2-metilbut.ilo, 2-pentilo, 3-pentilo e similares. Exemplos de grupos alquilo cíclicos, apropriados, incluem: grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclohexilo. Os grupos alquilo podem ser substituí dos, geralmente com 1 ou 2 substituintes, que se podem escolher entre os grupos: halo, hidroxi, alcóxi,amino, mono- e dialquilamino, nitro, carboxilo, alcoxicarbonilo e ciano. Por intermédio da expressão aralquilo referimo-nos a grupos benzilo, fenetilo (feniletilo) e fenilpropilo, nos quais o grupo fenilo pode ser substituído. Por intermédio da expressão arilo referimo-nos ao grupo fenilo. 0 grupo arilo ou aralquilo pode conter um núcleo fenilo substituído, em que o substituinte pode ser de 1 a 3 ato i ' mos de halogéneo ou um grupo alquilo, hidroxi, alcoxi, amino, mono- e dialquilamino, nitro, carboxilo, alcoxicarbonilo ou ciano.

Utilizada aqui a expressão halo significa, no sentido convencional, fluor, cloro, bromo e iodo.

Quando se utilizam as expressões: alcoxi, alcox?carbonilo, mono- e dialquilamino, estas expressões significam,normalmente um grupo alquilo possuindo 1 a 3 ãtomos de carbono.

Como se referiu antes, cada um dos símbolos Rg e Rg não representa um grupo arilo. Também os símbolos Rg e Rg, geralmente, nao são escolhidos a partir de grupos mais extensos, sob a forma estéreo, do grupo alquilo Cg-Cg e do grupo aralquilo. De preferên cia, quando cada um dos símbolos Rg e Rg representa um grupo alquilo, esses símbolos são escolhidos a partir de grupos alquilo ^Cl-^C3Como se mencionou antes, a rebecamicina ê um agente anti-tumoral, conhecido, referido nas patentes de invenção norte-americanas n?s 4,487,525 e 4,552,842. A nomenclatura Chemical Abstracts para a rebecamicina é a seguinte: 5H-indoloZ~ 2,3-a _7pirroloZÍ 3,4-cJ7~ carbazol-5,7 (6H) diona, l,ll-dicloro-12,13-di-hidro-12-(4-0-metil-beta-D-glucopiranosil). Porém, utiliza-se o nome rebecamicina, em toda a parte, por simplicidade embora se utilize o sistema de numeração Chemical Abstracts para identificar as varias posições no sistema do núcleo da rebecamicina.

material inicial para os compostos mais preferidos, de

*ϊ acordo com a presente invenção, é a própria rebecamicina. A rebecamicina, de fórmula geral (I), pode preparar-se por meio da cultura de uma estirpe produtora de rebecamicina, de Nocardia aerocolonigenes, de preferência uma estirpe que possua as características da estirpe C38,383~RK2(ATCC 39243) de Nocardia aerocolonigenes ou de um seu mutante, sob condições aerobicas, submerso em um meio nutriente, aquoso, como se descreve nas patentes de invenção norte-americanas n?s 4,487,925 e 4,552,842.

Os compostos derivados da rebecamicina que possuem vários grupos substituídos no sistema do núcleo da rebecamicina, na posi ção dos substituintes 1,11-dicloro, podem utilizar-se como materiais iniciais, em substituição da rebecamicina, para se obterem compostos dentro da vasta definição dos aspectos preferidos e mais preferidos, de acordo com a presente invenção. Por exemplo pode preparar-se a didecloro-rebecamicina por meio da sujeição da rebecamicina a hidrogenólise e sujeição do composto intermédio resultante a alquilação, utilizando-se uma base forte, seguidas da reacção do composto intermédio, tratado com a base forte, com um halogeneto de aminoalquilo apropriado. Podem preparar-se outros cromóforos de rebecamicina, possuindo vários substituintes no sistema do núcleo da rebecamicina, utilizando-se métodos referidos por T. Kaneko et al., Tetrahedron Letters, 26 , 4015 (1985). Por exemplo, por meio da utilização de processos, aqui descritos, prepararam-se compostos que possuem a seguinte fórmula geral (IV):

Formula IV

A seguir, descreve-se mais particularmente, uma síntese típica de análogos ou cromóforos de rebecamicina que possuem vários substituintes no sistema do núcleo, na posição dos grupos Cl. 0 tratamento de um indol substituído com metil magnésio tetra-hidrofurano origina uma solução de indol de grignard (VI). Dois equivalentes desta solução e um equivalente de N-benziloximetil 3,t-dibromo-maleimida originam um aducto de formula geral (VII). Este pode ser, ou ciclizado, fotoquimicamente, por meio da irradiação de 300 mm, uma solução de benzeno contendo uma pequena quantidade de ou ciclizado, termicamente, por meio da temperatura de refluxo de uma solução do aducto em benzeno, na presença de Ag20. 0 composto intermédio, assim preparado (VIII), associa-se depois, com o açúcar 0-acilado 1-halogenado, na presença de Ag£C), para se obter o N-glicosido de fórmula geral (IX). Uma hidrogenação catalítica para eliminar o grupo protector N6 e uma hidrólise básica dos grupos 0-acilados do açúcar originam o compos: to desejado de fórmula geral (X). Estão registados no Quadro 2, exemplos ilustrativos dos indóis substituídos que se podem utilizar em esta preparação.

X e têm os significados definidos antes tipicamente, representa o grupo CH^

Quadro 2 - Indóis iniciais

5- Aminoindol

6- Aminoindo1

5-Benziloxiindol

4- Cloroindol

5- Cloroindol ^-Hidroxiindol

5-Hidroxiindol

Indol

4- Metoxiindol

5- Metoxiindol

4- Metilindol

5- Metilindol

6- Metilindol

Ácido indol-5-carboxílico

A glicosidação de qualquer um dos três cromóforos represen tados por intermédio da formula geral (IV) ou de um cromoforo representado por intermédio da formula geral (X), por meio da reacção com um halogeneto de glicosilo apropriado, conduz ã formação de um derivado da rebecamicina. E a reacção do derivado da rebecamicina, em primeiro lugar, com uma base forte e depois, com um halogeneto de aminoalquilo, origina anãlogos da rebecamicina, de acordo com a presente invenção, que possuem uma das formulas gerais (II) ou (III).

t

Após obter-se rebecamicina ou um derivado ou cromoforo de

- 14 rebecamicina, dissolve-se este material inicial, primeiramente, um dissolvente inerte, apropriado, por exemplo, dimetilformamida (DMF), dimetil-sulfóxido (DMSO), tetra-hidrofurano (THF) ou outro dissolvente aprótico, anidro, e depois faz-se reagir com uma base forte, numa atmosfera inerte, por exemplo, numa atmosfera de argon ou azoto. Ainda que, qualquer base forte que seja compatível com o material inicial e o dissolvente, possa utilizar-se, por exemplo, KNH2 ou KH ou NaNH£ ou NaH ou diisopropilamida de lítio (DAL) ou hexametil disalazida de lítio ou KOtBu ou reagente de Grignard, tal como MeMgBr ou NaN^ ou NaH ou base equivalente, deve utilizar-se NaH com vantagem.

Referiu-se que, utilizando-se uma base forte, por exemplo NaH, numa quantidade ligeiramente em excesso do equivalente molar da quantidade do material inicial por exemplo, na escala de cerca de 5% a cerca de 15% e de preferência, cerca de 10% (9% - 11%) de excesso, e depois, por meio de tratamento com, pelo menos, um equivalente molar baseado no material inicial da rebecamicina de um composto aminoalquilo apropriado, podia obter-se um composto, de acordo com a presente invenção, possuindo um substituinte aminoalquilo no ãtomo de azoto, na posição 6 do sistema do núcleo da rebecamicina .

Alem disso, referiu-se que, utilizando-se uma base forte, por exemplo NaH, uma quantidade de excesso relativamente grande, tal como uma quantidade ligeiramente em excesso de duas vezes o equivalente molar da quantidade de material inicial, por exemplo, na escala de cerca de 15% a cerca de 25% e, de preferência cerca de 20% (18%—22%) de excesso, e depois, por meio de tratamento com um composto aminoalquilo apropriado numa quantidade de cerca do equivalente molar do material inicial, podia obter-se um composto de acordo com a presente invenção, possuindo um substituin te aminoalquilo no ãtomo de azoto,na posição 13 do sistema do núcleo da rebecamicina.

Quando se utilizam mais de dois equivalentes da base, forma-se um dianião em N6 e N13. Desde que o anião N13 seja mais reactivo do que o anião N6, obtém-se um composto derivado aminoalquilado NI3 quando, apenas, se utiliza um equivalente do halogeneto de aminoalquilo. Quando se utilizam dois equivalentes do halogeneto de aminoalquilo, pode obter-se o composto derivado N6, N13-diaminoalquilo.

Prosseguindo a reacção do material inicial com uma base forte, o composto intermédio reactivo, resultante, reage in situ com um composto aminoalquilado reactivo, apropriado, por meio da adição do composto aminoalquilado a uma mistura do material inicial e da base forte e do composto intermédio dessa reacção num dissolvente inerte. Pode utilizar-se qualquer composto aminoalquilado que seja compatível com o material inicial, o composto e o dissolvente, por exemplo, um halogeneto de aminoalquilo ou sulfonato e similares, representados por meio da formula geral: L-( CHg ^-NR-^Rg na qual, os símbolos n, R e R₂ têm os significados definidos antes, e o símbolo L representa um grupo eliminãvel, tal como, halogeneto ou metano-sulfonato ou p-tolueno-sulfonato. Geralmente, pode utilizar-se com vantagem, um halogeneto de aminoalquilo, tal como por exemplo, cloreto de dietilaminoetilo e cloreto de dietilaminopropilo.

- 16 -[ i \__-s

Geralmente, a -reacção da base forte com o material inicial pode efectuar-se, vantajosamente, a cerca da temperatura ambiente, isto ê, entre cerca de 18°C e cerca de 2 2°C. A mistura do material inicial e da base forte, geralmente, pode ser agitada durante um período de alguns minutos a varias horas; porém a reacção completa-se, habitualmente, em cerca de 20 a 30 minutos.

Depois, adiciona-se ã mistura agitada do material inicial e da base forte e do composto intermédio reactivo, resultante dessa reacção, num dissolvente inerte, o composto aminoalquilado apropriado e pode agitar-se a mistura resultante ã temperatura ambiente, durante cerca de 20 a 24 horas ou a cerca de 4°C, durante um menor período de tempo, por exemplo, seis (6) horas até ã reacção do composto intermédio reactivo com o composto aminoalquilado estar completa.

Os .compostos de formula geral (II) e (III), de acordo com a presente invenção, podem preparar-se sob a forma de sais de adição de ãcidos e bases, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, sob a condição de que os seus aniões ou catiões não contribuam, significativamente, para a toxicidade do sal e que os sais sejam compatíveis com os veículos farmacêuticos convencionais e padrão e outros adjuvantes convencionais e excipien tes habitualmente utilizados na preparação das composições farmacêuticas adaptadas para administração oral ou parentérica. Os sais de adição de ãcidos formam-se por meio de técnicas convencionais envolvendo a reacção de compostos de formula geral (II) e (III) com um ãcido mineral ou ãcidos orgânicos, carboxílicos e ãcidos sulfónicos. Exemplos de ãcidos minerais apropriados incluem o ácido clorídrico, o ácido fosfórico e similares. Exemplos de 'á eidos orgânicos apropriados incluem o ácido acético, ácido cítri.

co, ácido maleico, ácido succínico, ácido benzóico, ácido tartãrico, ácido ascórbico, ácido metaD^èulfónico, ácido p-tolueno-sulfánico, e similares.

Os sais básicos formam-se por meio de técnicas convencionais envolvendo a reacção de compostos de fórmula geral (II) e (III) com bases metálicas alcalinas (Ha,K) e alcalino-terrosas (Ca, Zn, Ba, Mg, e Mm), de mais preferência?com bases metálicas alcalinas e por meio da reacção com aminas. Bases apropriadas incluem os sais hidróxido, carbonato e bicarbonato, dos metais mencionados antes, tal como por exemplo, hidróxidos de sódio e <âe potássio, carbonatos de sódio e de potássio e bicarbonatos de sódio e de potássio e os correspondentes sais de cálcio e de zinco. Bases adicionais, apropriadas, incluem os sais de amónio formados por meio da reacção de compostos de fórmula geral (II) e (III) com a trietilamina, dibenzilamina, N,1T'-dlbenziletilenodiamina, procaína e aminas equivalentes.

veículo farmacêutico pode ser sólido ou líquido para preparar as composições sólidas ou líquidas. As composições sóli. das apropriadas para-administração oral incluem pós, comprimidos, cápsulas, pequenas cápsulas, grânulos dispersíveis e hóstias. Veí. culos sólidos apropriados incluem, pelo menos, uma substância veí. culo que pode funcionar apenas, como um veículo ou⁼ter uma função adicional, tal como diluente, agente correctivo do sabor, agente solubilizante, agente lubrificante, agente de suspensão, agente de ligação, agente desintegrante do comprimido, agente encapsulante e similares. Os veículos sólidos inertes incluem, para citar alguns, carbonato e estearato de magnésio, talco, açúcar, lactose, pectina, dextrina, amido, gelatina, materiais celulósicos e similares. Os

-18compostos de acordo com a presente invenção, podem preparar-se sob a forma de compostos ou composições solúveis, esterilizados, incluindo soluções, suspensões e emulsões que se podem dissolver em agua esterilizada ou outro meio líquido para administração oral ou administração parentérica. Exemplos de veículos líquidos apropriados para administração oral incluem a água, álcool, polipropilenoglicol, polietilenoglicol e misturas de dois ou mais destes elementos. Exemplos de veículos líquidos apropriados para ad ministração parentérica incluem água para injecções, soro fisiológico e outros meios esterilizados, apropriados para injecções. Tampões apropriados para utilização com o veículo líquido para se preparar, geralmente, uma solução isotónica tamponada, apropriada, incluem o ortofosfato trisodico, bicarbonato de sõdio, citrato de sõdio, N-metilglucamina, L(+)-lisina e L(+)-arginina, para citar alguns agentes de tamponamento representativos.

A composição farmacêutica deverá conter uma quantidade do componente activo, isto ê, do composto de formula geral (II) ou (III) ou de uma sua mistura, que pode variar ou ajustar-se grandemente, dependendo da aplicação particular da forma, da potência do composto particular utilizado e da concentração desejada do composto na composição. Geralmente, a quantidade do composto acti vo situar-se-á numa escala entre cerca de 0,5% a 90% em peso,, baseado no .peso total da composição.

Na utilização terapêutica para tratamento de hospedeiros mamíferos, por exemplo, um animal experimental, afectado por um tumor maligno, os compostos da presente invenção deverão administrar-se numa quantidade eficaz para inibir o crescimento do tumor, isto ê, uma quantidade de dosagem inibidora do crescimento tumoral.

Geralmente, a quantidade inibidora do crescimento tumoral deverá

-19^ν7< situar-se na escala entre cerca de 0,1 e cerca de 15mg/Kg de peso do corpo do animal/dia. Compreende-se que a dose preferida, actuante, do composto variará grandemente, segundo as necessidades do animal a ser tratado, o tipo do animal hospedeiro, o local e a doença a ser tratada, a composição a utilizar-se e a via de administração. Muitos factores que modificam a acção do agente anti-neoplãsico deverão tomar-se em conta pelos entendidos na matéria a que a presente invenção pertence incluindo por exemplo, a idade, o peso corporal e o sexo do animal hospedeiro; a dieta; o tempo de administração; a velocidade de excreção; o estado do hospedeiro; o grau da doença e similares. A administração pode efectuar-se simultaneamente ou periodicamente, dentro da dose máxima tolerada. Os valores optimos de administração (ou aplicação) para um dado conjunto de condições podem determinar-se, facilmente, pelos entendidos na matéria, utilizando testes convencionais para determinação da dosagem.

Apresentam-se os exemplos seguintes para ilustrar, soínente, alguns aspectos representativos da presente invenção e não são cons truidos como limitação ao seu âmbito. Todas as porções e percentagens são em peso e todas as temperaturas são em graus Celsius, a não ser que se indique outra escala.

Os análogos da rebecamicina, de acordo com a presente invenção, foram testados para a actividade anti-tumoral contra a leu cémia P-388, transplantada para o murganho, de acordo com os processos de Geran et al., referidos em Câncer Chemother. Rpts.,3,1-103 (1972). Observou-se o prolongamento da sobrevivência de murganhos com leucemia, com níveis diferentes de dosagem, situados

-20numa escala de 6mg/Kg de peso corporal/dia até lOOmg/Kg de peso corporal/dia. Os resultados dos testes mostram-se no Qua dro 3 anexo. 0 agente de comparação, tipo padrão, é escolhido entre a olivomicina e a mitomicina C. Estes resultados mostram que os análogos da rebecamicina, de acordo com a presente invenção, possuem actividade anti-neoplãsica eficaz.

Exemplo 1. 6-(2-dietilaminoetil ) rebecamicina.

Adicionaram-se 100 ml de DMF, sob atmosfera de argon, a uma mistura de 990 mg (1,74- mmol) de rebecamicina e 46 mg (1,91 mmol) de NaH.

Apos 20. minutos de agitação ã temperatura ambiente, adi cionaram-se 524 mg (3,86 mmol) de cloreto de 2-dietilaminoetilo. Agitou-se a mistura resultante, durante 24 horas, e depois, arre feceu-se a mistura reaccional por meio da adição de uma solução aquosa de HC1 a 1%. Basificou-se a mistura reaccional por meio da adição de uma solução saturada de NaHCOg e extraíu-se com EtOAc.

Recolheu-se a camada orgânica e lavou-se com uma solução concentrada de cloreto de sodio e secou-se sobre Na^SO^. Submeteu-se a cromatografia sobre gel de sílica, o resíduo obtido por meio da evaporação do dissolvente (eluição com EtOAc), para se obterem 770mg (66%) do composto em título: pf >250°C; RMN (DMSO-dg) 10,68 (s, 1H), 9,26 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 9,08 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,45 (t, 2H, J = 7,8 Hz), 6,94 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,43 (d, 1H, J = 5,6 Hz),

5,31 (bs, 1H), 5,03 (d, 1H, J = 5,7 Hz), 395 (s, 2H), 3,82 (m, 2H),

3,70-3,48 (m, 7Η), 2,72 (m, 2Η), 2,53 (m, 4Η), 0,94 (t, 6Η, J = = 7,0 Hz); IV (KBr) 3343, 1692, 1381, 1070, 760 cm¹; FABMS 669 (M+l), 493, 217 m/e.

Exemplo 2. Cloridrato de 6-(2-dietilaminoetil)rebecamicina

A uma solução de 770 mg (1,15 mmol) de 6-(2-dietilaminoetil)rebecamicina em 30 ml de THF, ã temperatura de 0°C, adicionou-se um (1) equivalente de uma solução etanólica de HC1 5,6M. Apos agitação durante 3 horas, ã temperatura de 0°C, recolheu-se o precipitado resultante por meio de filtração e lavou-se com êter dietílico para se obterem 728 mg (90%) do composto em título: p.f.>250°C; RMN (DMSO-d_g) <í 10,7 (s, 1H), 10,16 (s, 1H),

9,23 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 9,05 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,74 (d, 1H, J = 8,5), 7,72 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 7,46 (t, 2H, J=8,l Hz), 6,94 (d, 1H, H - 9,1 Hz), 5,47 (bs, 1H), 5,36 (bs, 1H), 5,08 (bd, 1H, J = 3,8 Hz), 4,11 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 3,97 (bs, 1H) , 3,85 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 3,66 - 3,57 (m, 7H), 3,49 - 3,20 (m, 7H), 1,26 (t, 6H, J = 7,0 Hz); IV (KBr) 3336, 1699, 1416, 1381, 1084, 760 cm’¹; FABMS 669 (M+l), 635, 493 m/e.

Exemplo 3. 6-(3-dietilaminopropil)rebecamicina

Adicionaram-se 20 ml de DMF, sob atmosfera de argon, a uma mistura de 162 mg (0,28 mmol) de rebecamicina e 7,5 mg (0,31 mmol) de NaH. A esta solução adicionaram-se 110 mg (0,78 mmol) de cloreto de 3-dietilaminopropilo. Agitou-se a solução resultante e aqueceu-se ã temperatura de 40°C, durante 6 horas. Um processo semelhante ao do Exemplo 1 originou 55 mg (28%) do composto em título: RMN (DMS0-d_g)í 9,28 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 9,10 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 7,70 (d, 1H, J = 9,4 Hz),

7,45 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 6,94 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,42 (bd, 1H, J = 5,8 Hz), 5,31 (bs, 1H), 5,03 (bs, 1H), 3,95 (bs, 2H), 3,82 - 3,59 (m, 9H), 2,44 (m, 6H), 1,81 (m, 2H), 0,90 (t, 6H, J = 7,0 Hz); IV (KBr), 3328, 1691, 1376, 1052, 755 cm'¹; MS 682 (M), 653, 403, 393 m/e.

Exemplo 4. cloridrato de 6-(3-dietilaminopropil)rebecamicina tratamento do composto do Exemplo 3 com HC1 etanólico, de um modo semelhante ao do Exemplo 2, originou o composto em título com 89% de rendimento: p.f.> 250°C; RMN (DMS0-d_g)<í 10,70 (s, 1H), 9,81 (bs, 1H), 9,26 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 9,09 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 11,4 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 11,0 Hz), 7,43 (t, 2H, J = 7,9 Hz), 6,94 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 5,46 (bs, 1H), 5,34 (bs, 1H), 5,06 (bs, 1H), 3,95 (bs, 2H), 3,83 (m, 2H), 3,66 - 3,54 (m, 5H), 3,20 (m, 2H), 3,10 (m, 4H), 2,12 (m, 2H), 1,18 (t, 6H, J = 7,2 Hz), IV (KBr) 3343, 1692, 1452, 1070, 760 cm^-1; FABMS 683, (M+l), 507, 406 m/e.

Exemplo 5. 13-(3-dietilaminopropil)rebecamicina

Adicionaram-se 25 ml de DMF, sob atmosfera de árgon, a uma mistura de 188 mg (0,33 mmol) de rebecamicina e 17 mg (0,73 mmol) de NaH. Após alguns minutos de agitação a temperatura ambiente, adicionaram-se 54 mg (0,36 mmol) de cloreto de 3-dietilf aminopropilo e agitou-se a solução resultante a temperatura

3-j

ambiente, durante 22 horas. Arrefeceu-se a mistura reaccional por meio da adição de uma solução de HC1 a 10 % em agua. Adicionou-se uma solução saturada de NaHCOg para basificar a solução e extraíu-se o composto com EtOAc. Recolheu-se a camada orgânica, lavou-se com uma solução concentrada de cloreto de sodio e secou-se sobre MgSO^. 0 resíduo obtido, apos evaporação do dissolvente, foi submetido a cromatografia sobre alumina neutra (10% de MeOH-acetona) para se obterem 76 mg (34%) do composto em título: p.f. 203-204°C; RMN (DMSO-d_g) cT10,67 (s, 1H), 9,28 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 9,10 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 10,9 Hz), 7,71 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 7,45 (t, 2H, J = 8,1

Hz) ,	6,94	(d,	1H, J = 9,0 HZ)	, 5,	43 (d, 1H, J :	= 5,8	Hz) ,	5,32
(t,	1H, J	= 5	,2 Hz), 5,03 (D,	1H,	J = 5,5 Hz),	3,96	(m,	2H),
3,85	-3,79	(m,	3H), 3,91-3,53	(m,	5H), 2,71 (m,	4H) ,	1,95	(m, 2H),
1,13	(m,	6H) ;	IV (KBr) 3343,	1696	, 1388, 1085,	760	-1 cm ;	MS 683

(M+l), 654, 506 m/e.

QUADRO 3 - EFEITO DOS ANÃLOGOS DE REBECAMICINA SOBRE A LEUCEMIA P-388

Composto	Dose, IP mg/kg/inj	Sobrevivência	Media de alteração do peso 49 dia
Media Tempo (MST) Dias	% T/C
Olivomicina	0,8	17,0	162	-2,4
	0,4	13,5	129	-2,6
Ex. 1	100	13,0	124	-2,0
	50	17,5	167	-2,2
	25	14,0	133	-0,5

Mitomicina C	4,8 3,2	19,0 22,0	211 244	-2,0 -1,5
Ex.	2	8,0	12,0	133	-0,4
		6,0	12 ,5	139	-0,0
Ex.	4	8,0	12,5	139	-0,9
		6,0	13,0	144	0,1

REIVINDICAÇÕES

Claims

1.- Processo para a preparação de compostos de formula ge- ral na qual n representa um numero inteiro de 1 a 6;

Ag e A^g representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo de formula geral -(CH₂^NR^Rg na qual n tem o signifi cado definido antes e R^ e R₂ representam, cada um, indepen dentemente, um ãtomo de hidrogénio ou um grupo alquilo eventualmente substituído; aralquilo comportando 1 a 3 átomos de carbono no grupo alquilo e um núcleo fenilo tendo eventualmente como substituinte(s) 1 a 3 átomos de halogêneo ou grupos alquilo, alcoxi, hidroxi, carboxilo, alcoxicarbonilo, amino ou mono- e di-alquil(inferior)-amino no radical arilo; ou arilo escolhido entre um núcleo fenilo tendo eventualmente como substituinteís) 1 a 3 átomos de halogéneo ou grupos alquilo, alcoxi, hidroxi, amino, monoe di-alquilamino, nitro, carboxilo, alcoxicarbonilo ou cia no, com a condição de se um dos símbolos R-^ ou R₂ represen tar um grupo arilo o outro representa um grupo diferente e

-26se se considerar conjuntamente os mesmos símbolos eles representam um grupo ou um grupo de fórmula geral -(CH₂)2^-R3^-(CH₂)2“ na qual Κθ representa um átomo de oxigénio ou de enxofre ou um grupo CH₂ ou NH, formando conjuntamente com o átomo de azoto um núcleo penta- ou hexagonal; com a condição de pelo menos um dos símbolos

A₆ ou A_í3 representar um grupo de fórmula geral “(CH₂)_n-NR^R2 citado antes;

X representa um átomo de hidrogénio, flúor, cloro ou bromo ou um grupo alquilo hidroxi, carboxilo, alcoxicarbo nilo ou alcoxi em que o radical alquilo representa um gru po alquilo C^_g, benziloxi, amino ou mono- e dialquilamino; e

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo CHg;

e dos seus sais de adição com ácidos e bases aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto (a) de se preparar de antemão, como composto inicial, a rebecamicina ou um seu derivado;

(b) de se fazer reagir, em atmosfera inerte, um composto inicial preparado em (a) e dissolvido em um dissolvente inerte apropriado, com uma quantidade eficaz de uma base forte para se obter um compos. to intermédio reaotivo escolhido entre Ci) um anião de rebecamicina comportando a carga eléctrica negativa em posição 6, (ii) um anião de rebecamicina comportando a carga eléctrica negativa em posição 13 ou (iii) um dianião de rebecamicina comportando uma carga eléctrica negativa em posição 6 e a outra em posição 13;

(c) de se fazer reagir um composto intermédio reactivo preparado em (b) com um composto aminoalquílico de'fórmula geral

L-(CH₉) -NR_nR„

2 n 12 na qual

L representa um grupo químico eliminável; e ^R1 ^{e R}2 tem os significados definidos antes;

(d) de se separar da mistura reaccional preparada em (c) o derivado de rebecamicina aminoalquilado resultante.

2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a prepa- ração de compostos de formula geral na qual n, R^, R₂, X e têm os significados definidos antes, e dos seus sais de adiçao com ácidos, e bases aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

3. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de formula geral II na qual X representa um átomo de hidrogénio, cloro ou bromo ou um grupo hidroxi, -OCH^ ou -OCf^CgHg, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

4. - Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de compostos de formula geral II'na qual n representa o numero inteiro 1, 2 ou 3 e R^ e R₂ representam, cada um, independen-28- temente um átomo de hidrogénio caracterizado pelo facto de se ou um grupo alquilo ou utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

5.- Processo de acordo com a reivindicação 4, para a prepara ção de compostos de fórmula geral II na qual X representa um átomo de cloro em cada uma das posições 1 e 11, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

6.- Processo de acordo com a reivindicação 5, para a preparação de compostos de fórmula geral II na qual n representa o numero inteiro 2 ou 3 e e Rg representam, cada um, um grupo CgHg, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondente mente substituídos.

7.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral na qual n, R^, Rg, X e R^ têm os significados definidos antes, e dos seus sais de adição com ácidos e bases aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

-29/

8. - Processo de acordo com a reivindicação 7, para a preparação de compostos de formula geral III na qual R^ representa um grupo CHg e X representa um átomo de cloro ou de bromo ou um grupo hidroxi, -OCHg ou -OCHgCgHg em cada uma das posições 1 e 11 do núcleo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

9. - Processo de acordo com a reivindicação 8, para a preparação de compostos de formula geral III na qual n representa o numero inteiro 1, 2 ou 3 e R^ e Rg representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^_g ou -(CHg caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

10. - Processo de acordo com a reivindicação 9, para a preparação de compostos de formula geral III na qual X representa um ãtomo de cloro em cada uma das posições 1 e 11, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substiutuídos.

11. - Processo de acordo com a reivindicação 10, para a preparação de compostos de formula geral III na qual n representa o número inteiro 2 ou 3 e R^ e Rg representam, cada um, um grupo CgH^, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

12. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas apropriadas para inibir o crescimento de tumores malignos sensíveis ã rebecamicina e a um seu derivado ou análogo, caracterizado pelo facto de se misturar, como ingrediente activo, uma quantidade eficaz de um composto de formula geral preparado pelo processo de acordo com as reivindicações anteriores, com um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.