PT728462E - Composicao e metodo cosmetico para tratamento de perda de cabelo - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "COMPOSIÇÃO E MÉTODO COSMÉTICO PARA TRATAMENTO DE PERDA DE CABELO"

Este invento relaciona-se com um método cosmético para

tratamento de perda de cabelo por aplicação tópica na pele de uma composição contendo minoxidil, em que a composição apresenta penetração e eficácia melhorada do minoxidil aí contido, diminuindo assim a quantidade de minoxidil e o número de aplicações de minoxidil necessárias para obter a regeneração do cabelo. Em particular, o invento relaciona-se com um método de tratamento da perda de cabelo pela aplicação uma vez por dia de uma composição contendo minoxidil e um potenciador da penetração na pele o que aumenta a absorção tópica do minoxidil.

Em anos recentes foram desenvolvidos compostos para o tratamento da perda de cabelo, incluindo minoxidil (Rogaine®). O tratamento da perda de cabelo com tais compostos é geralmente providenciada pela distribuição do ingrediente activo ou ingredientes através da pele, i.e., transdermicamente, em oposição a outros métodos de administração parentérica. A vasta área superficial da pele e as extensas redes linfáticas e circulatórias disponíveis perto da superfície da pele tomam a aplicação tópica de drogas para o tratamento da perda de cabelo extremamente desejável. Além disso, a aplicação tópica de drogas é relativamente não invasiva, conveniente, e comprovadamente segura e providencia um maior controle sobre a distribuição de agentes activos no local alvo desejado.

Contudo, de modo α ser efectivo, um agente activo para o tratamento do cabelo deve passar através da camada externa da pele ou epiderme e na camada de derme antes de ser absorvido na corrente sanguínea. A epiderme compreende duas partes principais, a cómea e o estrato germinativo. A cómea forma a camada mais externa da epiderme e consiste em muitas camadas estratificadas de células compactadas, achatadas e queratinizadas que perderam o seu núcleo. A camada mais externa serve como uma barreira física para os microorganismos e para a maior parte dos agentes químicos. Em particular, comporta-se como uma barreira primária à absorção percutânea de drogas. Por causa do efeito de barreira da pele, só foi até agora possível distribuir drogas que são drogas de "baixa-dosagem", i.e. no intervalo de 15 mg/dia ou menos, ou aquelas de baixa peso molecular. Adicionalmente, drogas para distribuição transdérmico devem ter o balanço lipofílico-hidrofílico próprio para permitir a absorção adequada. Tão cedo como o início deste século que se sabe que as substâncias lipo-solúveis, tais como não electrólitos têm uma permeabilidade na pele comparativamente maior do que as substâncias solúveis na água, tais como electrólitos. A absorção percutânea ou permeação transdérmica é basicamente um conjunto de uma série de passos em sequência. Uma molécula penetrante é primeiro absorvida nas camadas superficiais da cómea, difunde-se através da cómea e pela epiderme viável abaixo, e finalmente difunde-se através da derme papilar e na microcirculação. A resistência da cómea à difusão de agentes aplicados topicamente foi demonstrada com várias drogas. De modo a ultrapassar este efeito de barreira foram desenvolvidos um número de compostos que potenciam a distribuição transdérmica de drogas, tais como dimetilsulfóxido (DMSO), monolaurato de polietilenoglicol, lactamas alquílicas, amidas de cadeia longa, e 1,3- - 3 -

M dioxaciclopcntanos substituídos c 1,3-dioxaciclohexanos substituídos. Por exemplo, a US- A-3 551 554 revela DMSO, a US-A-3 989 816 revela azacicloheptanoptano-2-ona 1-substituída. A US-A-4 132 781 revela uma composição antibiótica tópica contendo 2-pirrolidona ou uma alquil-2-pirrolidina mais baixa, a US-A- 4 017 641 revela composições contendo propilenoglicol e 2-pirrolidona e a US-A- 4 861 764 revela derivados da 1,3-dioxolona e do 1,3-dioxano com os potenciadores de absorção. WO 92/16236 revela métodos e composições para elevar a velocidade de absorção de compostos fisiologicamente activos administrados topicamente. Minoxidil é revelado como um desses compostos. Os potenciadores da penetração são derivados de aminoálcoois que podem formar um anel 1,3-dioxano. O tratamento cosmético da perda de cabelo relacionada com a idade em doentes com alopecia androgénea com soluções tópicas de minoxidil (Rogaine®) sozinho, ou combinado com potenciadores da penetração na pele, tais como DMSO, resultou apenas na regeneração moderada a densa de cabelo em menos de 40% de tais doentes (Katz, Η. I. Clin. Dermatol., 6:195-199, 1988). Além disso, tratamentos com soluções tópicas de minoxidil requerem aplicações múltiplas do ingrediente activo por dia, o que pode ser muito inconveniente ou mesmo dispendioso. Alopecia androgénea ou calvície normal representa 99 por cento de todas as causas de perda de cabelo (Brodland e Muller, Cutis, 47:173-176, 1991) e, portanto, existe uma necessidade de composições e métodos melhorados para tratamento da perda de cabelo em doentes com calvície relacionada com a idade. Em particular, existe uma necessidade de métodos para tratamento de perda de cabelo que requeiram menos aplicações do ingrediente activo, e.g., minoxidil, e que também forneçam uma regeneração de cabelo mais cedo, em maior abundância, e mais espessa, do que é presentemente observado usando minoxidil e potenciadores de penetração conhecidos. "Skin Pharmacology", Vol. 2, No. 1, 1989, resumo, páginas 51, 52, diz respeito a uma avaliação de derivados de dioxolano como potenciadores da absorção percutânea para o minoxidil tópico. O efeito de um derivado de dioxolano (SEPA-I) desenvolvido como uma nova classe de potenciadores de absorção percutânea do minoxidil na difusão in vitro foi investigado. Os dados mostraram que a permeabilidade da pele ao minoxidil foi aumentada pelo SEPA-I (2-n-nonil-l,3-dioxolano) sugerindo que a mesma quantidade de droga pode ser distribuída na pele e absorvida após a aplicação de dosagens mais baixas. O presente invento relaciona-se com um método cosmético para tratar a perda de cabelo resultante de alopecia androgénea ou calvície comum, de acordo com a parte caracterizante da reivindicação 1. O presente invento também se relaciona com o uso de uma composição na manufactura de um gel, creme ou loção para aplicação tópica uma vez por dia no couro cabeludo a fim de promover a regeneração de cabelo. A composição inclui minoxidil e um 1,3-dioxolano de fórmula (I), e veículos cosméticos compreendendo, por exemplo, isopropanol e propilenoglicol. Esta composição contendo 0,5 a 3% por peso de minoxidil e desde 2 a 15% por peso de um composto de fórmula (I), particularmente 2-n-nonil-1,3-dioxolano, é efectiva quando aplicada numa aplicação diária única durante um período de tempo.

De acordo com isto, uma vantagem do método do presente invento é a de fornecer um tratamento para a perda de cabelo que é seguro, simples, fácil de aplicar e barato quando comparado com outros tratamentos para a perda de cabelo.

Uma vantagem particular do presente invento é um tratamento para a pcrda dc cabelo que fornece uma regeneração de cabelo mais rápida e mais abundante do que os tratamentos convencionais, usando menos aplicações de minoxidil e usando a mesma concentração de minoxidil por tratamento como é correntemente usado.

Na descrição que se segue, será feita referência à Figura 1 que é um gráfico de barras mostrando uma mudança cumulativa a partir da linha base do peso do cabelo do couro cabeludo de macacos tratados pelo presente método e macacos de controle.

Num esforço para melhorar a eficácia das composições tópicas de . minoxidil para o tratamento da perda de cabelo, foi desenvolvido um método mais efectivo para aplicar minoxidil e o transportar através da barreira da pele. O presente método requer menos aplicações de minoxidil por dia i.e., tratamento uma vez por dia, e fornece uma regeneração de cabelo mais rápida e mais efectiva do que aplicações duas vezes por dia da mesma quantidade de minoxidil usando potenciadores de penetração típicos incluindo os produtos minoxidil comerciais. Este método envolve a alteração da cómea por aplicação à pele de uma quantidade efectiva de um agente potenciador do aumento da absorção e penetração percutânea para permitir uma distribuição maior de minoxidil através da barreira da pele, reduzindo assim o número de aplicações de minoxidil necessárias à regeneração do cabelo, de aplicações múltiplas a apenas uma aplicação diária. Foi bastante inesperado encontrar um agente potenciador da penetração o qual permitiria o minoxidil ser tão efectivamente aplicado como ou mesmo mais eficazmente aplicado uma vez por dia do que os tratamentos convencionais requerendo aplicações diárias múltiplas. Além disso, foi igualmente inesperado encontrar um agente potenciador da penetração que permitiu ao minoxidil efectivar a regeneração do cabelo após um período mais curto de tratamento do que os tratamentos convencionais. - 6 - - 6 -

C_cU O agente potenciador é um composto 1,3-dioxolano de fómiula (I)

(I) em que R representa um grupo alquilo C7 a Cio, Ro representa hidrogénio e R1} R2, R3 e R4 cada, representam independentemente hidrogénio ou alquilo Ci a C4.

Minoxidil (como descrito nas patentes U.S. 4 139 619 e 4 596 812) é 3-óxido-6-( 1 -piperidinil)-2,4-pirimidinediamina.

Os compostos 1,3-dioxolano usados no presente método para tratamento da perda de cabelo podem ser aplicados simultaneamente com a aplicação do minoxidil, e.g., numa mistura daqueles ou podem ser aplicados antes ou depois do tratamento da pele com minoxidil. No último método, o composto 1,3-dioxolano pode ser aplicado até 4 horas antes ou após o tratamento com minoxidil, mas de preferência por conveniência dentro de 1 hora antes ou após o tratamento com minoxidil, com maior preferência dentro de 15 minutos do tratamento com minoxidil e ainda com maior preferência e conveniência, simultaneamente com aquele, e de preferência, numa mistura daqueles. O composto potenciador 1,3-dioxolano, sozinho ou em combinação com minoxidil e quaisquer aditivos farmaceuticamente aceitáveis pode ser incorporado em qualquer formulação cosmeticamente aceitável. Contudo, a formulação deve ser substancial ao couro cabeludo, i.e., não escorregar do couro cabeludo. Assim, as composições preferidas são na forma de de geis, pomadas ou cremes, em que os ingredientes activos podem permanecer no local de aplicação por um período prolongado de tempo, geralmente, sendo suficiente, desde cerca de 30 minutos até cerca de 6 horas, com maior preferência durante pelo menos 1 hora e até cerca de 4 horas.

Aditivos apropriados que podem ser misturados com o composto potenciador 1,3-dioxolano e/ou minoxidil incluem mas não estão limitados a solventes, tais como água, glicóis, ésteres, álcoois, materiais lipídeos, agentes corantes, fragrâncias, anti-oxidantes, agentes espessantes, estabilizadores de luz ultra-violeta, preservativos e outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis.

Minoxidil e o composto potenciador da absorção são, de preferência, formulados numa composição única para aplicação simultânea na pele. A selecção de aditivos pode ter impacto na eficácia desta composição. Uma composição segura e efectiva particularmente preferida é baseada num veículo cosmético em que o sistema de solvente é uma solução alcoólica aquosa contendo etanol, propanol ou isopropanol, junto com glicol alquilo inferior (C1-C4), tal como etilenoglicol ou propilenoglicol e, usualmente, um agente espessante ou gelatinante. Um outro aditivo frequentemente útil é dimeticone ou outro solvente e veículo de silicone volátil.

Assim, uma composição efectiva particularmente preferida para promover o crescimento do cabelo, mesmo quando aplicada num tratamento uma vez por dia, inclui os ingredientes seguintes nas quantidades seguintes (percentagem de peso) - 8 -

1 ϊ2λ

Largo Intermédio Preferido Minoxidil 0,05-5% 0,5-5 0,5-3 Potenciador de Penetração 0,2-25 0,5-15 2-15 r Agua 0-40 0 ou 5-30 0 ou 5-25 Álcool inferior 0-90 5-60 10-60 Glicol inferior 0-98 5-60 10-60 Agente Espessante 0-5 0-3 0,1-2

Formulações apropriadas para aplicações tópicas na pele são como se segue: Fórmula 1 Propilenoglicol Carbopol 940 (B.F. Goodrich) 97,5% 2,5%

Minoxidil e 2-n-nonil-l,3-dioxolano foram adicionados a propile-noglicol sob agitação. Carbopol 940 foi então adicionado à solução resultante sob condições de agitação vigorosa para fornecer um gel Fórmula 2 Miristato de isopropilo 82% Tween 80 10,0% Aerosil R 972 8,0% Fórmula 3 Propilenoglicol 89,0% Água 10,0% Carbopol 940 0,5% Trietanolamina 0,5% - 9 -

/<L r Fórmula 4 Propilenoglicol Álcool (95%) 50,0% 50,0% Fórmula 5 Propilenoglicol 50,0% Álcool (95%) 30,0% r Agua 20,0%

Cada uma das fórmulas precedentes pode servir como uma base apropriada para ambos os compostos minoxidil e potenciador da absorção usados no presente método.

Geralmente, uma quantidade de cerca de 100 μΐ a 2 ml por 100 centímetros quadrados de pele, e de preferência 500 μΐ a 1 ml por 100 centímetros quadrados é aplicada por aplicação, contudo, a quantidade pode variar dependendo da viscosidade da solução particular de minoxidil e das concentrações de minoxidil e dioxolano. Em geral, é aplicada uma quantidade suficiente para produzir uma camada fina sobre a superfície da pele. O método de tratamento preferido deste invento envolve a aplicação directa à pele de um creme, gel orgânico ou aquoso-orgânico, loção, spray, solução ou aerosol contendo o minoxidil e o composto dioxolano potenciador de absorção nas quantidades descritas acima. Contudo, cada um do minoxidil e do composto dioxolano potenciador da absorção pode ser aplicado separadamente, cada um numa mistura com um veículo farmaceuticamente aceitável tal como água, etanol ou propilenoglicol, por exemplo. A ordem de aplicação pode ter efeito na penetração de minoxidil ou o seu efeito na regeneração do cabelo. Quando aplicado separadamente, é preferível que o dioxolano seja aplicado primeiro e o minoxidil é aplicado pouco tempo depois, - 10-

de preferência dentro de cerca dc duas horas, com maior preferência dentro dc cerca de 60 minutos até 90 minutos, e com maior preferência de uma hora de aplicação do dioxolano. O período de tempo entre a aplicação do dioxolano e minoxidil é primariamente limitado por conveniência do utilizador. Quando o minoxidil e o dioxolano são aplicados separadamente cada um é aplicado nas quantidades discutidas acima.

Formulações típicas de gel que podem ser usadas neste invento incluem as seguintes: Fórmu a Quantidade (g) , · (A) Propilenoglicol 98,0 Carbopol 940 (B.F. Goodrich) 2,6 Minoxidil 2,0 2-n-nonil-l ,3-dioxolano 2,0 ' (B) Miristato de isopropilo 92,0 Tween 80 0,6 Aerosil R972 (sílica) 9,0 Minoxidil 2,0 2-n-nonil-1,3-dioxolano 5,0 (C) Isopropanol 36,0 Propilenoglicol 27,0 Água 27,0 Hidroxipropilcelulose 1,0 Minoxidil 2,0 2-n-nonil-1,3-dioxolano 7,0 (D) Etanol 64,4 Propilenoglicol 18,4 Água 9,2 Hidroxpropilcelulose 2,0 Minoxidil 1,0 2-n-nonil-1,3-dioxolano 5,0 (E) Etanol 57,4 Propilenoglicol 16,4 Água 8,2 Hidroxipropilcelulose 2,0 Minoxidil 1,0 2-n-nonil-1,3-dioxolano 15,0 (F) Fórmula (A) ate (E), mas cm lugar de 2-n-nonil-1,3-dioxolano, é usado o composto 2-n-heptil-l,3-dioxolano

No presente método para tratamento de perda de cabelo, o minoxidil e o composto dioxolano potenciador da absorção são cada um aplicados nas quantidades discutidas acima, na área da pele a necessitar de tratamento, apenas uma vez por dia. Aplicação do presente método mais do que uma vez por dia não foi demonstrado como sendo necessário quer para uma resposta prematura quer para maior de crescimento de cabelo. Foi visto que a aplicação de minoxidil uma vez por dia em combinação com os compostos 1,3-dioxolano reivindicados fornece maior regeneração dè cabelo e regeneração de cabelo mais rápida do que a aplicação uma vez por dia da mesma quantidade de minoxidil no veiculo (Rogaine®TS), outras drogas que abrem os canais de potássio e androgéneos, ou 5% de minoxidil sozinho (maior do que 2x o crescimento do cabelo) e resulta numa regeneração de cabelo significativamente maior e mais rápida do que mesmo duas aplicações diárias de minoxidil e outro veículo. Assim, pelo uso do presente método a quantidade de minoxidil necessária para a regeneração do cabelo pode ser significativamente reduzida e o número de aplicações por dia podem ser reduzidas a apenas uma. Além disso, a regeneração do cabelo, com o presente tratamento, começa antes do que com tratamentos convencionais usando até duas vezes mais de minoxidil por dia.

Como notado acima, o aumento da eficácia do minoxidil (2,5%) no crescimento do cabelo pelo presente método é observado como um aumento na quantidade de cabelo na área tratada e na promoção do crescimento de cabelo mais cedo comparada com tratamento de minoxidil 5% sozinho ou Rogaine®TS. Visto que a(s) célula(s) folicular alvo para o minoxidil como um agente de crescimento de cabelo não é conhecida, não é certo se a melhoria na eficácia de minoxidil quando usado em combinação com o composto dioxolano potenciador da absorção é somente devida ao aumento de penetração do minoxidil. Os compostos potenciadores dioxolano do presente invento são prontamente misciveis com o sebo e assim, é possível que o composto potenciador facilite a abordagem selectiva do minoxidil à glândula sebácea do folículo de cabelo e promova assim uma resposta de crescimento de cabelo mais cedo e maior. O presente método de tratamento de cabelo pode ser continuado até que a quantidade desejada de cabelo tenha crescido na área tatuada. Uma regeneração de cabelo significativa é geralmente evidente tão cedo como apenas quatro semanas após o começo do tratamento numa base de uma vez por dia. Assim, em geral, o protocolo do presente tratamento é continuado durante pelo menos quatro semanas até se conseguir o efeito desejado. Contudo, usualmente, o tratamento é continuado durante até 1 ou 2 anos ou mais para prevenir a perda ou minimizar a perda de cabelo.

Ao avaliar o método do presente invento, a eficácia do minoxidil em combinação com o composto dioxolano foi testado in vivo usando pele de ratinho sem cabelo e um procedimento de célula de difusão que simula de muito perto a situação in vivo na qual a pele calva está exposta às condições ambientais. Foi usada uma célula de difusão de escoamento que asperge o lado dérmico da pele. As amostras líquidas foram obtidas continuamente por recolha automática do líquido de perfusão. A célula de difusão está equipada com uma camisa de água para providenciar o controle de temperatura e equilíbrio da amostra de pele com o líquido dérmico. O método geral usado nos Exemplos 1 a 3 deste invento é o seguinte: uma amostra de pele foi montada na célula de perfusão e deixada a equilibrar durante cinco horas a 32° C ±1°C. A temperatura da camisa de água foi ajustada a 37°C e o líquido no compartimento dérmico foi albumina bovina diluída em água salina (1,5% p/v). Foram adicionados antibióticos à solução do banho para evitar contaminação bacetriológica. 500 mg de cada droga teste em υ A. -13- /<i.v {/} . V>‘

0,1 ml da mistura elanol/água (95/5 p/v) foram aplicadas à superfície da epiderme da amostra de pele. Após a aplicação, o solvente foi deixado a evaporar durante cerca de uma ou duas horas, deixando um depósito sólido de droga na amostra de pele. A droga teste foi marcada com um composto radioactivo de modo a que o fluxo de absorção pudesse ser monitorizado a intervalos de uma hora durante um período de 48 horas. Após 24 horas da aplicação da droga, 0,1 ml de solução do composto potenciador foram aplicados na área tratada.

No teste in vitro usando pele de ratinho sem pêlo e pele humana isolada, os resultados dos quais estão descritos no exemplo abaixo, a percentagem de minoxidil encontrada na epiderme, na derme, e no compartimento dérmico durante um período de 24 horas foi monitorizada. A quantidade encontrada no compartimento dérmico corresponde à quantidade que é totalmente distribuída através da pele e entra no sistema circulatório subdérmico do corpo. A quantidade de minoxidil permanecendo na superfície da pele ou de outro modo vagamente preso na epiderme foi recuperado por lavagem.

Os exemplos seguintes servirão para ilustrar o presente invento sem serem tomados como limitativo daquele.

Nestes exemplos, partes são por peso salvo indicação em contrário. EXEMPLO 1

Foram preparadas três soluções diferentes de minoxidil numa mistura de solventes etanol-propilenoglicol (80:20 numa base de volume). Na solução 1, não foi usado dioxolano; em cada uma das outras duas soluções (2 e 3) foi adicionada 2% (solução 2) e 7% (solução 3) respectivamente, de 2-n-nonil-1,3-dioxolano. -14- C^-___________. (

Solução % de Solvente % de Minoxidil % de Dioxolano 1 98 2 0 2 96 2 2 3 91 2 7

Cada uma destas soluções foi aplicada à pele de ratinho isolada sem cabelo como descrito acima. Após 24 horas as quantidades (percentagem) do minoxidil encontradas nas camadas de pele foram as seguintes:

Tabela I

Solução 1 2 3 Compartimento dérmico 0,46±0,76% 51,43+5,60% 75,90+3,22% Epiderme 4,38±1,86 11,33+4,48 2,29+1,34 Derme 2,78+2,03 5,74+1,11 4,29+1,80 Lavagens 88,30+5,54 29,05+6,96 15,40+1,79

Estes dados demonstram a eficácia marcante do composto dioxolano no aumento da penetração do minoxidil através da pele.

As soluções de minoxidil usadas em todos os exemplos continham uma quantidade de minoxidil marcado com ,4C. Os dados são baseados em contagens radioactivas. EXEMPLO 2 O Exemplo 1 foi repetido usando epiderme humana isolada em vez - 15- vy.Y^ í (la pele de raliulio. Os resultados foram os seguintes (percentagem de minoxidil em cada camada):

Tabela II

Solução 1 2 3 Compartimento dérmico Epiderme Lavagens 0,47±0,76% 11,76±4,95 69,52±23,27 6,43±5,73% 52,29±8,57 36,3516,30 7,3511,82% 49,67110,27 29,1917,21

Estes dados confirmam a eficácia do dioxacicloalcanos como potenciadores da absorção na pele humana bem como na pele de ratinho quando . usada com minoxidil. EXEMPLO 3

Este exemplo compara tratamento da pele de macaco com uma solução de minoxidil e 2-n-nonil-l,3-dioxolano com tratamento usando minoxidil sozinho.

Minoxidil foi sintetizado e purificado na Upjohn Co. 2-n-nonil-l,3-dioxolano (n-DIOX) foi obtido a partir da Macrochem Corp. (Billerica, MA). Rogaine®TS foi preparado na Upjohn Co. e consistiu em 2% de minoxidil (peso/volume) dissolvido num veículo de 20% propilenoglicol, 60% etanol e 20% de água. A formulação minoxidil-(-n-DOX) foi também preparada na Upjohn Co, e continha 2,5% minoxidil (peso/volume) num veículo de 10% (n-DIOX), 25% de propilenoglicol e 65% de álcool isopropílico. Visto que 2,5% de minoxidil tópico em 10% (n-DIOX) foi bem tolerado em voluntários humanos calvos e produziu níveis de droga no estado estacionário no soro comparáveis aos -16-associados com minoxidil 5% tópico em veícuo de propilenoglicol, etanol e água, foi seleccionada a formulação 2,5% minoxidil-(n-DIOX) para usar. Aproximadamente 250pL de veículo sozinho ou droga (preparada no veículo) foram topicamente aplicados via pincel para pintar a uma área tatuada de 6,45 cm2 (1 in2) no centro do couro cabeludo calvo, 5 dias/semana, Segunda-Sexta, durante 16 semanas. A dose tópica foi levada a cabo entre as 6 AM e 7AM. Nos grupos tratados b.i.d. (duas vezes por dia), a segunda dose foi administrada entre 4PM e 5PM. O local doseado foi monitorizado diariamente para procurar evidência de irritação. Alterações físicas ou comportamentais foram também, registadas numa base diária.

Grupos Experimentais: Os macacos foram distribuídos por grupos, de acordo com o peso do cabelo do couro cabeludo antes do tratamento. O. cabelo foi recolhido 4 semanas antes do início da dosagem e pesado. O processo assegurou que a média do peso do cabelo antes do tratamento para cada grupo era semelhante. Os macacos foram colocados num dos 8 grupos seguintes: q.d. (tratamento uma vez por dia) Rogaine® mais veículo (n=5), q.d. Rogaine®TS (n=5), b.i.d. (duas vezes por dia) Rogaine® mais veículo (n=5), b.i.d. Rogaine® TS (n=5), q.d. 10% (n-DIOX) mais veículo (n=5), q.d. 2,5% minoxidil em 10% (n-DIOX) mais veículo (n=5), b.i.d. 10% (n-DIOX) mais veículo (n=5) e b.i.d. 2,5% minoxidil em 10% (n-DIOX) veículo (n=5). Os grupos que recebem veículo sozinho ou n-DIOX mais veículo sem minoxidil serviram como controles negativos. Cada macaco foi tratado com cerca de 250 pL da solução apropriada por 6,45 cm2 (1 in2) de área do couro cabeludo. Método de recolha do cabelo do couro cabeludo - Os efeitos estimulantes do minoxidil no crescimento do cabelo do couro cabeludo em macacos “stumptail” foi avaliado pesando o cabelo da área topicamente doseada 6,45 cm2 (1 in2) no centro do couro cabeludo. Em resumo, as recolhas de cabelo foram levadas a cabo sedando cada macaco c rapando a área tatoada com um "Wahl Clipper (Wahl Clipper Co., Sterling, IL) modelo 8 900 enquanto o cabelo era recolhido através de uma linha de vazio em etanol a 50%. Cada amostra de cabelo foi aspirada para papel de filtro de microfibra de vidro Whatman pré-pesados (Whatman International Ltd, Maidstone, England), secos durante 24 horas num forno a 40°C e pesados numa balança analítica de tara automática Mettler AE 200 (Mettler Instruments Co., Hightstown, NJ). Na linha base (semana 0) e a intervalos de 4 semanas durante o estudo de 16 semanas, os dados do peso do cabelo do couro cabeludo (mg/6,45 cm2 (mh/in2)) foram expressos como a alteração no peso comparado com a linha base. Alterações cumulativas no peso do cabelo (soma das alterações de 4 semanas no peso do cabelo) foram também obtidas para o estudo de 16 semanas. O peso do corpo (kg) de cada macaco foi medido todas as 4 semanas de recolha de cabelo para monitorizar a saúde.

Recolha de Urina - No estado estacionário (após 4 dias consecutivos de dosagem), amostras de 24 h de urina foram recolhidas para todos os macacos tratados q.d. e b.i.d. com minoxidil via gaiola metabólica. Cada macaco foi colocado numa gaiola metabólica imediatamente após a aplicação da primeira dose de droga no 4o dia da semana. A segunda dose foi aplicada no couro cabeludo dos animais tratados b.i.d. na gaiola metabólica como descrito acima. O volume de cada recolha de 24 h de mina foi registado e alíquotas foram congeladas a -78°C. A urina foi analisada por HPLC, descrito abaixo, para avaliar a excreção urinária do minoxidil aplicado topicamente.

Extração e análise por HPLC do minoxidil total urinário (Droga mãe e glucoronidol - A uma amostra de urina de 1,0 ml de cada macaco, foram adicionados 100pL de Glucurase® (Sigma, St Louis, MO) e bem misturados em tubos de ensaio de vidro. Os tubos foram colocados num banho de água com - 18- λΗ lo^rh agitação (37nC) durante 16 horas, removidos e deixados arrefecer à temperatura ambiente. Cada amostra de urina foi aplicada numa coluna ChemElut™ CE1001 de 1 ml (Varian, Harbor City, CA) e deixada absorver durante 3 min. O minoxidil total foi eluído para fora da coluna com três aplicações de 4,0 ml de 1-butanol a 10% em acetato de etilo. Os eluatos foram recolhidos em tubos e o solvente foi removido sob pressão reduzida com um Evaporador Vortex (Buchler Instruments, Fort Lee, NJ). Uma coluna Bond Elut™ de 1,0 ml não encapsulada CN (Varian, Harbor City CA) foi pré-lavada com 1,0 ml de metanol seguido por 1,0 ml de água. O resíduo urinário seco de cada amostra, a partir da coluna ChemElut™ foi re-suspenso em 1,0 ml de ácido acético 0,1% em água e adicionado à coluna CN pré-lavada a 0,5ml/min. O tubo da amostra foi passado com 1,0 ml de ácido acético 0,1% e a lavagem foi adicionada à coluna. A coluna foi lavada consecutivamente com 2,0 ml de água, acetato de etilo, clorofórmio e acetonitrilo seguido por 1,0 ml de água. A coluna foi deixada a secar sob pressão reduzida durante 1 min. O minoxidil total foi eluído da coluna com a fase móvel, descrita abaixo, e recolhido em frascos de injecção para análise por HPLC.

Colunas analíticas acopladas, uma Widebore C8, 4,6x100 mm (5pm) (JT Baker, Phillipsburg, NJ) seguido por duas 3x3 CRI 8 (3pm) (Perkin-Elmer, Norwalk, CT), foram usadas para a detecção do minoxidil total por HPLC em condições isocráticas. Foi usada uma pré-coluna RP-300 C8 (7 pm) (Brownlee Labs, Santa Clara, CA) antes das colunas analíticas. A fase móvel consistiu em 15% de acetonitrilo em água contendo 0,1% de ácido trifluoroacético a uma velocidade de fluxo de 1,0 ml/min. O volume da amostra injectada foi de 100 pL. O efluente da coluna foi monitorizado a 280 nm UV. Os padrões foram preparados contaminando alíquotas de 1,0 ml de urina de macacos tratados com veículo, com minoxidil. As concentrações totais de minoxidil na urina foram determinadas por análise da curva padrão por regressão linear utilizando a área integrada sob a curva para os padrões extraídos e isolados como Μ· - 19- η descrito acima. Os dados urinários foram expressos como o minoxidil total (pg) excretado no período de recolha de 24 horas. Os dados de HPLC foram recolhidos e interpretados com um sistema de software "Spectra-Physics Analytical Spectra-Station™ (Spectra-Physics, In., San Jose, CA).

Estatística - Todos os dados (peso do corpo, peso do cabelo e urina e níveis totais de minoxidil) de cada grupo foram expressos como a média +DMP. Os dados do peso do corpo (linha base comparada com a média das medições das semanas 4 a 16) foram analisados pelo teste das ordens de sinal Wilcoxon não paramétrico para dados emparelhados (bi-caudal). Um ANOVA foi levado a cabo nas ordens de dados de peso de cabelo para mostrar diferenças globais entre grupos. A comparação de grupos aos pares para os dados do peso de cabelo foram feitos pelo teste das ordens da soma Wilcoxon não paramétrico (bicaudal) a cada recolha de cabelo a cada uma das 4 semanas e para o estudo inteiro (alteração cumulativa do peso do cabelo). Os níveis totais de minoxidil na urina foram sujeitos a uma transformação "log" e analisados pelos mesmos métodos usados para os dados do peso de cabelo. As alterações foram consideradas marginalmente significativas a p<0,10 e significativos a p<0,05.

Peso do coroo e Observações Grosseiras - Não houve alterações significativas no peso do corpo (linha base comparada com o tratamento) em quase todos os grupos de macacos tratados q.d. e b.i.d. com minoxidil e veículo. Contudo, um ligeiro, mas estatisticamente significativo, aumento de peso de corpo ocorreu nos grupos q.d. veículo (n-DIOX) (linha base= 7,9±0,6 kg vs. Tratamento=8,4±0,5 kg, p<0,05).

Após aproximadamente 4 semanas de dosagem e através do restante das 16 semanas de estudo, a maior parte dos macacos tratados q.d e b.id. com droga e veículo apresentavam pele seca na região tatuada do couro cabeludo. A secura de pele tendia para ser mais severa nos grupos de tratamento -20-

C~ r«*V» \ b.i.d.. Apesar da secura persistente da pele do couro cabeludo, foi observada uma esfoliação mínima durante as recolhas de cabelo mensais. Esta observação foi confirmada pela ausência de pele morta no papel de microfibra de vidro usado para filtrar o cabelo. Assim, o peso do cabelo do couro cabeludo não foi provavelmente influenciado por pele morta. Eritema, hemorragia ou qualquer outra forma de irritação não foram detectadas na área doseada de qualquer macaco tratado com minoxidil ou veículo. Não foram observadas alterações físicas ou comportamentais em quaisquer macacos.

Peso do cabelo do couro cabeludo - A tabela III apresenta os dados do peso do cabelo do couro cabeludo expressos como a variação a partir da linha ' base a intervalos de 4 semanas para grupos de macacos tratados com veículo e minoxidil.

TabelalII

Alteração a Partir da Linha Base do Peso do Cabelo do Couro Cabeludo (mg/6,45 cm2 (mg/in2)) Associado Com Tratamento Com Veículo e Minoxidil Tempo Q.D. Q.D. B.I.D B.I.D Q.D. Q.D. B.I.D B.I.D. (semanas) Veículo Rogaine® Veículo Rogaine® Veículo Minoxidil Veículo Minoxidil Rogaine® TS Rogaine® TS (n-DIOX) (n-DIOX) (n-DIOX) (n-DIOX) 4 0,2±0,4 0,2±0,1 0,8±0,8 0,0+0,3 0,9+0,3 3,5±0,5 0,3±0,1 3,1±0,6 8 -0,9±0,4 2,2±0,7 0,1 ±0,2 3,9+0,4 0,5+0,5 7.1+1,6 0,5±0,7 9,1±0,2 12 -0,5±0,3 2,3±0,4 0,1±0,2 5,1+1.4 0,3±0,6 5,6±0,9 0,4±0,4 7,8±1,3 16 0,3±0,6 3,5±0,7 1,3±0,4 4,3±1,2 1,3±0,4 7,9±0,8 2,2±0,1 6,4+2,0 Os dados são médias 1DMP

Comparações aos pares relevantes e níveis de significância para os dados da Tabela III são discutidos abaixo. Na semana 4, os tratamentos q.d. e b.i.d. minoxidil-(n-DIOX) mostram uma aumento significativo no peso do cabelo -21 - '---" comparado com os respectivos veículos enquanto nem o tratamento Rogaine®TS q.d. nem o b.i.d. causaram estimulação de crescimento de cabelo. Assim, o presente método resulta numa regeneração de cabelo mais cedo do que o tratamento com duas vezes mais minoxidil mas usando um veículo diferente. Todos os grupos de macacos tratados q.d e b.i.d. com droga apresentaram uma elevação substancial no peso do cabelo, comparado com os seus veículos respectivos, nas semanas 8, 12 e 16. Na semana 8 nos grupos minoxidil-n-(DIO) q.d. e b.i.d. cresceu significativamente mais cabelo do que nos Rogaine®TS q.d. e b.i.d., nas semanas 12 e 16. A aplicação duas vezes por dia de Rogaine®TS não conseguiu produzir um peso significativamente maior de cabelo, comparada com a administração uma vez por dia da mesma formulação em qualquer ponto dè tempo. Da mesma forma, a eficácia do minoxidil-n-(DIOX) q.d. e b.i.d. foi comparável. A Figura 1 ilustra a alteração cumulativa no peso do cabelo dó couro cabeludo durante todo o estudo para grupos de macacos tratados com veículo e droga. Todos os tratamentos q.d. e b.i.d. com droga suscitaram aumento marcado do peso do cabelo relativo aos dos respectivos veículos. A administração uma ou duas vezes por dia de minoxidil-n-(DIOX) gerou um peso de cabelo significativamente maior quando comparado com a aplicação q.d. e b.i.d. de Rogaine®TS, respectivamente. Diferenças estatisticamente significativas em peso de cabelo cumulativo não foram evidentes entre os grupos tratados q.d. e b.i.d. com Rogaine®TS ou entre grupos tratados q.d. e b.i.d. com minoxidil(n-DIOX).

Excrecão Urinária do Minoxidil Total no Estado Estacionário - A Tabela IV mostra os níveis de de minoxidil urinário total. No estado estacionário A administração uma vez por dia de minoxidil-n-DIOX tendeu a produzir um nível urinário de minoxidil total mais elevado comparado com a aplicação q.d. de Rogaine®TS. Contudo, o aumento não foi estatisticamente significativo devido a -22- variabilidadc excessiva no primeiro grupo. Os macacos tratados com minoxidil-n-DIOX b.i.d. apresentaram uma excreção urinária de minoxidil total significativamente maior quando comparada com a aplicação b.i.d. de Rogaine®TS.

Tabela IV

Excreção Urinária de Minoxidil Total no Estado Estacionário Grupo de Tratamento Minoxidil urinário total (pg) Q.D. Rogaine®TS 384±93 Q.D. Minoxidil-(n-DIOX) 459±209 (NS)a B.I.D. Rogaine®TS 314±89 B.I.D. Minoxidil-(n-DIOX) 888±82 (0,01)b

a NS = não significativo vs Rogaine®TS Q:D: b vs. B.I.D. Rogaine®TS Os dados são médias+DMP

A elevação de 2,8 vezes na excreção urinária do minoxidil total mostrada pela aplicação duas vezes por dia em combinação com 10% (n-DIOX) coincidiu com aquela observada como sendo gerada pela administração b.i.d. da mesma formulação nos doentes de alopecia androgénea. Dados adicionais para suportar as propriedades de aumento de penetração do (n-DIOX) com respeito ao minoxidil tópico foram derivados a partir de estudos clínicos nos quais os níveis de minoxidil total no estado estacionário no soro foram elevados 2,5 vezes pelo (n-DOX) 10% comparado com Rogaine®TS em pacientes humanos machos calvos.

Lisboa, 11 de Outubro de 2001 <Λ£ c—Λ ^ j

ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (4)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Um método cosmético para tratamento de perda de cabelo resultante de alopecia androgénea ou calvície comum que compreende a aplicação tópica à pele na área desejada para regeneração de cabelo, caracterizada por não mais do uma aplicação diária na área desejada de uma composição compreendendo uma quantidade efectiva na promoção do crescimento do cabelo, no intervalo de 0,5 a 3% por peso, de minoxidil, e uma quantidade não-tóxica efectiva no aumento da penetração, no intervalo de 2 até 15% por peso, de um composto 1,3-dioxolano de fórmula (I) RK O—c R-C-Ro | x°—A (i) Rj R4 em que R representa um grupo alquilo C7 a Qo, Ro representa hidrogénio e Ri, R2, R3 e R4 cada, independentemente representa hidrogénio ou um alquilo Cj a C4, em que o minoxidil e o 1,3-diioxolano são aplicados num veículo aquoso cosmeticamente aceitável compreendendo alcanol C2-C3 e C1-C4 alquilglicol.
2. 2. Um método cosmético de acordo com a reivindicação 1, no qual o composto de fórmula (I) é 2-n-nonil-l,3-dioxoalno, ou 2-n-heptil-1,3-dioxolano.
3. 3. Uso de uma composição contendo uma quantidade efectiva na promoção do crescimento de cabelo, no intervalo de 0,5 a 3% por peso, de minoxidil e uma quantidade não-tóxica efecliva no aumento da penetração, no intervalo de 2 a 15% por peso, de um composto 1,3-dioxolano de fórmula (I) como definido na reivindicação, num veículo cosmeticamente aceitável compreendendo alcanol C2-C3 e CrC4 alquilglicol, na manufactura de um gel, creme ou loção para aplicação tópica uma vez por dia à pele humana para tratar perda de cabelo resultante de alopecia androgénea.
4. 4. Uso como reivindicado na reivindicação 3, caracterizado no que a composição compreende (a) uma quantidade efectiva na promoção do crescimento de cabelo, no intervalo de 0,5 a 3% por peso, de minoxidil; (b) uma quantidade não tóxica efectiva no aumento da penetração, no intervalo de 2 a 15% por peso de 2-n-nonil-1,3-dioxolano, ou 2-n-heptil-1,3-dioxolano; e (c) um veículo cosmeticamente aceitável compreendendo o seguinte etanol ou isopropanol, propilenoglicol, água e hidroxipropilcelulose numa proporção de peso de 36,0-64,0:16,4-27,0:8,2-27,0:1,0-2,0. Lisboa, 11 de Outubro de 2001

   ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA