PT652000E

PT652000E - Metodos para a inibicao de angiogenese e doencas angiogenicas

Info

Publication number: PT652000E
Application number: PT94307523T
Authority: PT
Inventors: Jai Pal Singh
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1993-10-15
Filing date: 1994-10-13
Publication date: 2002-01-30
Also published as: TW303367B; IL111289A; CZ287535B6; ES2161238T3; DE69428325D1; PH31260A; EP0652000B1; ZA948027B; HU220607B1; AU677701B2; HU9402955D0; DK0652000T3; NO943875D0; CZ253294A3; CN1105361A; DE69428325T2; AU7579194A; UA32427C2; NO313403B1; CA2118097A1

Description

DESCRIÇÃO "MÉTODOS PARA A INIBIÇÃO DE ANGIOGÉNESE E DOENÇAS ANGIOGÉNICAS" A angiogénese (ou neovascularização), desenvolvimento de vasos sanguíneos, desempenha um papel importante no desenvolvimento embriónico, na reacção à inflamação, no desenvolvimento da metástases (angiogénese induzida por tumor ou TIA), na retinopatia diabética, na formação do panus artrítico e na psoríase. Na angiogénese tumoral, por exemplo, são formadas ramificações capilares, sendo a sua formação induzida por um grupo de células tumoriais. Estas ramificações eventualmente podem desenvolver uma malha micro-circulatória no interior da massa do tumor. Existem dois tipos principais de tumores por angiogénese em termos dos acontecimentos que se seguem à implantação da semente da metástase nas superfícies e nos órgãos. 0 primeiro ou angiogénese primária consiste na vascularização inicial da massa das células tumorais em multiplicação e é considerado o pré-requisito para a sobrevivência do crescimento posterior do depósito metastático. O segundo é a angiogénese continuada ou secundária e é o fenómeno que ocorre em ondas na periferia da massa tumoral em crescimento. Esta segunda angiogénese é essencial para a agregação de novos territórios micro-circulatórios ao serviço do tumor em expansão e em infiltração. E evidente que um produto químico que possa inibir a angiogénese, quer por inibição competitiva de um factor de angiogénese quer por qualquer -2- outro mecanismo, terá um efeito adverso no crescimento dos tumores, no desenvolvimento da retinopatia ou artrite reumatóide, ou no desenvolvimento das lesões por psoríase.

Esta invenção providencia a utilização de um composto com a

fórmula I

em que R1 e R3 sejam independentemente hidrogénio, -CH3, C(=0)-(CrC6 alquilo), ou -C(=0)-Ar, em que Ar seja um fenilo opcionalmente substituído; R2 seja seleccionado do grupo consistindo em pirrolidino- e piperidino-; e sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis destes, para a preparação de um medicamento para a inibição da angiogénese e/ou doença angiogénica, com a condição de que esta doença não inclua tumores da mama ou da próstata, ou para a artrite reumatóide. A presente invenção diz respeito à descoberta de que um seleccionado grupo de 2-fenil-3-aroílbenzotiofenos (benzotiofenos), os de fórmula I, são utilizáveis para a inibição da angiogénese e/ou doenças angiogénicas. A utilização providenciada por esta invenção é praticada pela administração ao ser -3-

humano necessitando de uma dose do composto de fórmula I ou de um sal ou de um solvato farmaceuticamente aceitável deste, que seja efectiva para inibir a angiogénese e/ou doenças angiogénicas. O termo inibir é definido por forma incluir o seu significado geralmente aceite que inclui o tratamento profiláctico de seres humanos sujeito à angiogénese e/ou a doenças angiogénicas, e mantendo estática e/ou tratando a angiogénese e/ou doenças angiogénicas existentes. Assim, o método presente inclui ambos os tratamentos terapêutico medicinais e/ou profilácticos apropriados. A US-A-4133814 revela a utilização do 2-fenil-3-aroílbenzotio-fenos para a supressão do crescimento dos tumores da mama. A US-A-4418068 revela a utilização do raloxifeno para o tratamento de tumores da mama e da próstata. A US-A-5075321 revela a utilização dos derivados do 2-fenil-3-aroilbenzotiofenos, e "inter alia" do raloxifeno para o tratamento da artrite reumatoide.

Geralmente, o composto é formulado com excipientes, diluentes ou veículos comuns, e comprimido em comprimidos, ou formulado sob a forma de elixires ou soluções convenientes para a administração oral, ou administrados por via intramuscular ou intravenosa. O composto pode ser administrado transdermi-camente, e pode ser formulado para aplicações em formas de dosagem de libertação sustentada e equivalentes.

Os compostos utilizados na presente invenção podem ser produzidos de acordo com os procedimentos estabelecido, tais como os detalhados nas Patentes U.S. nos. 4.133.814, 4.418.068, e 4.380.635. Geralmente, o processo -4- inicia-se com um benzo[b]tiofeno contendo um grupo 6-hidroxilo e um grupo 2-(4-hidroxifenilo). 0 composto de que se parte é protegido, alquilado, e desprotegido para se formarem os compostos com a fórmula I. Exemplos da preparação destes compostos são fornecidos nas Patentes U.S. acima descritas. Os fenilo substituídos incluem os grupos fenilo substituídos com um ou dois grupos alquilo CrC6, alcoxilo CrC4, hidroxilo, nitro, cloro, fluoro, ou tri(cloro ou fluoro)-metilo.

Os compostos utilizados nos métodos desta invenção formam sais de adição ácida ou básica farmaceuticamente aceitáveis com uma gama alargada e variada de ácidos e bases orgânicos e inorgânicos e incluem sais fisiologi-camente aceitáveis muitas vezes utilizados na química farmacêutica. Estes sais fazem também parte desta invenção. Estão incluídos nos ácidos inorgânicos tipicamente utilizados para a produção destes sais o clorídico, o bromídico, o iodídrico, o nítrico, o sulfurico, o fosfórico, o hipofosfórico e similares. Podem também ser utilizados os sais derivados de ácidos orgânicos, tais como os ácidos mono-alifáticos e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos substituídos com fenilo, ácidos hidroxialcanóicos e hidroxialcanodióicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos ou aromáticos. Assim, estes sais farmaceuticamente aceitáveis incluem o acetato, o fenilacetato, o trifluoracetato, o acrilato, o ascorbato, o benzoato, o clorobenzoato, o dinitrobenzoato, o hidroxibenzoato, o metoxiben-zoato, o metilbenzoato, o o-acetoxibenzoato, o naftaleno-2-benzoato, o brometo, o isobutirato, o fenilbutirato, o β-hidroxibutirato, o butino-l,4-dioato, o hexino-1,4-dioato, o caprato, o caprilato, o cloreto, o cinamato, o citrato, o formato, o fumarato, o glicolato, o heptanoato, o hipurato, o lactato, o malato, o maleato, o hidroximaleato, o malonato, o mandelato, o mesilato, o nicotinato, o isonico-tinato, o nitrato, o oxalato, o ftalato, o tereftalato, o fosfato, o monohidrogeno-fosfato, o dihidrogenofosfato, o metafosfato, o pirofosfato, o propiolato, o propionato, o fenilpropionato, o salicilato, o sebacato, o succinato, o suberato, o -5- sulfato, o bi-sulfato, o piro-sulfato, o sulfonato, o benzeno-sulfonato, o p-bromo-fenilsulfonato, o cloro benzeno-sulfonato, o etano-sulfonato, o 2-hidroxietano-sulfonato, o metano-sulfonato, o naftaleno-1 -sulfonato, o naftaleno-2-sulfonato, o p-tolueno-sulfonato, o xileno-sulfonato, o tartarato, e similares. O sal clorhidrato é o sal de preferência.

Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis são tipicamente produzidos fazendo reagir um composto de fórmula I com uma quantidade equimolar ou com um excesso de ácido. Os reagentes são geralmente combinados num solvente mútuo tal como o éter dietílico ou benzeno. Normalmente o sal é precipitado da solução em cerca de uma hora a 10 dias e pode ser isolado por filtração ou o solvente pode ser removido pelos meios habituais.

Estão incluídas nas bases normalmente utilizadas para a produção destes sais o hidróxido de amónio e os hidróxidos metais alcalinos e alcalino-terrosos, os carbonatos e os bicarbonatos, assim como as aminas alifáticas primárias, secundárias e terciárias, as diaminas alifáticas e os hidróxidos de alquilaminas. Estão incluídas nas bases especialmente úteis na preparação de sais de adição o hidróxido de amónio, o carbonato de potássio, o bicarbonato de sódio, o hidróxido de cálcio, a metilamina, a dietilamina, a etilenodiamina, a ciclohexilamina e a etanolamina.

Em geral, os sais farmaceuticamente aceitáveis possuem solubilidades melhoradas, em comparação com os compostos de que são derivados, e portanto são muitas vezes mais convenientes para formulações em líquidos ou emulsões.

As formulações farmacêuticas podem ser preparadas pelos procedimentos que são do conhecimento dos especialistas. Por exemplo, os compostos podem ser formulados com os excipienles, os diluentes ou os veículos usuais, e formados em comprimidos, cápsulas, suspensões, pós, e similares.

Estão incluídos nos exemplos dos excipientes, diluentes ou portadores aceitáveis para estas formulações os seguintes: cargas de enchimento e cargas de diluição como os amidos, os açúcares, o manitol, e os derivados silícicos; agentes ligantes como a carboximetilcelulose e outros derivados da celulose, os alginatos, a gelatina, e a polivinilpirrolidona; agentes molhantes como o glicerol; agentes de desintegração como o carbonato de cálcio e o bicarbonato de sódio; agentes para a retardamento da dissolução como a parafina; aceleradores de reabsorção como os compostos quaternários de amónio, agentes tensioactivos como o álcool cetílico, ou o monoestearato de glicerol; veículos adsortivos como o caulino e a bentonite; e lubrificantes como o talco, estearato de cálcio e de magnésio, e polietilenoglicóis sólidos.

Os compostos podem também ser formulados como elixires ou soluções para a conveniente administração oral ou como soluções apropriadas para a administração parentérica, por exemplo, por via intramuscular, subcutânea ou intravenosa. Adicionalmente, os compostos são adequados para formulações para aplicações sob formas de dosagem de libertação sustentada e equivalente. As formulações podem ser de tal modo constituídas que libertem o ingrediente activo unicamente ou preferencialmente numa parte especial do trato intestinal, possivelmente durante um certo período do tempo. O revestimento, o invólucro, e as matrizes protectoras podem ser produzidas, por exemplo, a partir de substâncias poliméricas ou de ceras. A dosagem individual do composto de fórmula I necesária para inibir a angiogénese ou doenças angiogénicas, de acordo com esta invenção, vai depender da severidade do estado, da via de administração, e de factores relacionados que serão pomderados pelo médico assistente. Em geral, as dosagens diárias aceitáveis e eficazes estarão no intervalo de cerca de 0,1 a cerca de 1.000 mg/dia, e mais tipicamente de cerca de 50 a cerca de 200 mg/dia. Estas dosagens serão administradas ao sujeito necessitando de tratamento entre uma só vez e cerca de três vezes por dia, ou se necessário, com maior frequência para inibir efectivamente a angiogénese ou doenças angiogénicas.

Usualmente é preferível administrar o composto de fórmula 1 sob a forma de um sal de adição de ácido, caso habitual na administração de fáimacos contendo um grupo básico como o do anel de piperidina. Também é vantajosa a administração deste composto por via oral para um ser humano idoso. Para este efeito, as formas de dosagem oral seguintes estão disponíveis.

Formulações

Nas formulações que se seguem, "Ingrediente activo" significa um composto com a fórmula I.

Formulação 1 : Cápsulas de gelatina

As cápsulas de gelatina rígidas são preparadas usando o seguinte:

Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 0,1 - 1000 Amido, NF 0-650 Amido em pó fluido 0-650 Silicone fluido 350 centistokes 0-15

Os ingredientes são misturados, passados por um peneiro de malha U.S. n°45, e embalados nas cápsulas de gelatina rígidas. -8-

Os exemplos das formulações específicas que foram produzidas para cápsulas dos compostos de fórmula I em que R2 seja piperidino, (raloxifeno), incluem as seguintes:

Formulação 2 : Cápsulas de Raloxifeno

Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Raloxifeno 1 Amido, NF 112 Amido em pó fluido 225,3 Silicone fluido 350 centistokes 1,7 Formulação 3 : Cápsulas de Raloxifeno Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Raloxifeno 5 Amido, NF 108 Amido em pó fluido 225,3 Silicone fluido 350 centistokes 1,7 Formulação 4 : Cápsulas de Raloxifeno Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Raloxifeno 10 Amido, NF 103 Amido em pó fluido 225,3 Silicone fluido 350 centistokes 1,7

Formulação 5 : Cápsulas de Raloxifeno

Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Raloxifeno 50 Amido, NF 150 Amido em pó fluido 397 Silicone fluido 350 centistokes 3,0 As formulações específicas anteriores podem ser alteradas de acordo com as variações razoáveis apresentadas. Uma formulação para comprimidos é preparada utilizando os ingredientes seguintes: Formulação 6 : ComDrimidos Ingrediente Quantidade (mg/comprimido) Ingrediente activo 0,1 - 1000 Celulose, micro-cristalina 0-650 Dióxido de silício, micronizado 0-650 Ácido esteárico 0-15

Os componentes são misturados e comprimidos para se produzirem os comprimidos.

Em alternativa, comprimidos contendo cada um entre 0,1 — 1000 mg do ingrediente activo slo produzidas do seguinte modo;

Formulação 7: Comprimidos

Ingrediente__Quantidade (mg/comprimido)

Ingrediente activo 0,1 -1000 Amido 45 Celulose, micro-cristalina 35 Polivinilpirrolidona 4 (10 % de solução em água) Carboximetilcelulose de sódio 4,5 Estearato de magnésio 0,5 Talco 1

Os ingredientes activos, amido, e celulose são passados por um peneiro de malha U.S. n°45 e completamente misturados. A solução de polivinilpirrolidona é misturada com o pó resultante e passada através de um peneiro de malha U.S. n°14. O granulado assim produzido é seco entre 50o- 60° C e passado por um peneiro de malha U.S. n° 18. O amido carboximetil-sódico, o estearato de magnésio, e o talco, previamente passados por um peneiro U.S. n°60, são adicionados aos grânulos que, após mistura, são comprimidos numa máquina de comprimidos para se produzirem os comprimidos.

As suspensões contendo cada uma entre 0,1 - 1000 mg de medicamento por cada dose de 5 ml são produzidas do seguinte modo: - 11 -

Formulação 8 : Suspensões

Ingrediente

Quantidade (mg/5 ml) 0,1 -1000 mg 50 mg 1,25 mg 0,10 ml q.b. q.b. 5 ml

Ingrediente activo Carboximetilcelulose de sódio Xarope

Solução de ácido benzóico

Saborizante

Corante Água purificada para perfazer O medicamento é passado por um peneiro de malha U.S. n°45 e misturado com o carboximetilcelulose de sódio e xarope para se formar uma pasta macia. A solução de ácido benzóico, saborizante e corante é feita com uma parte de água e adicionada, com agitação. Adiciona-se água para perfazer o volume requerido.

PROCEDIMENTOS DE ENSAIO

As culturas das células primárias capilares retinais endoteliaissão preparadas substancialmente de acordo com os procedimentos descritos em Buzney et al, Retinal Vascular Endothelial Cell and Pericytes: Differential Growth Characteristics in vitro, Invest. Qphthalmo. Visual Sei. 24: 470-483 (1983) e são separadas das células contaminadas tal como descrito em Voyta et al., Identification and Isolation of Endothelial Cells Based on their Increased uptake of Acetylated-low density Lipoprotein, J. Cell Biol.. 99: 2034-2040 (1981).

Em alternativa, células endoteliais do coração de bovinos serão obtidas (American Type Culture Collection; Rockville MD 20852) para a utilização neste ensaio. Iridepeiidentemente da fonte, as células endoteliais são semeadas em placas de cultura em tecido com 24 cavidades, com uma densidade de 10.000 células por cavidade em meio Eagle Dulbecco modificado (GIBCO; Grand Island, N. Y.), suplementado com 10% de soro bovino, 100 U/ml de penicilina, 100 pg/ml de estreptomicina, 2 mM de L-glutamina, e factor crescimento de fibroblastos a 20 ng/ml. Após a incubação durante a noite, diversas quantidades dos compostos da invenção são adicionados às cavidades individuais de crescimento. Para comparação, PF-4 natural, reconhecido como inibidor das células endoteliais e da angiogénese, é testado numa gama de 0,1 a 4 pg/ml, utilizado como controlo positivo. As culturas das células endoteliais são deixadas em crescimento durante quatro dias a 37°C, 5% de CO2 numa incubadora de cultura de tecido humedecido. A cultura é seguidamente colhida individualmente por tripsinização e contada utilizando um Am-Coulter Counter (Coulter Electronics, Inc.; Opa Locka FL 33054).

As actividades nos ensaios acima mencionados indicam que os compostos da invenção possuem potencialidades no tratamento da angiogénese e/ou doenças angiogénicas.

Lisboa, 23 de Outubro de 2001

ALBERTO CANELAS

Agente Oficial da Propriedade industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims

- 1- REIVINDICACÔES 1. A utilização de um composto tendo como fórmula

(I) em que R1 e R1 sejam independentemente hidrogénio, -CH3, -C(=0)-( alquilo Ci-C6), ou -C(=0)-Ar, em que Ar seja fenilo opcionalmente substituído; R2 seja seleccionado do grupo consistindo de pirrolidina e piperidina; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável deste, para a preparação de um medicamento para a inibição da angiogénese e/ou doenças angiogénicas, com a condição de que a doença não inclua tumores da mama ou da próstata, ou artrite reumatóide. 1 seja o sal clorídrato desse composto.
2 A utilização da reivindicação 1, na qual o referido composto -2-
3. A utilização da reivindicação 1, na qual o referido medicamento seja profiláctico.
4. A utilização da reivindicação 1, na qual o referido composto

ou o seu sal cloridrato. Lisboa, 23 de Outubro de 2001 ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade IndwWW RUA VtCTOR COROON, 14 1200 LISBOA I