PT2953938T - Compostos de benzopirano funcionais e sua utilização - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS DE BENZOPIRANO FUNCIONAIS E SUA UTILIZAÇÃO"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção relaciona-se amplamente com agentes antitumorais. Em particular, a presente invenção reivindicada relaciona-se com os compostos de benzopirano seleccionados, e aos referidos compostos para utilização em métodos para o tratamento de cancro e em métodos de tratamento para reduzir a incidência ou o risco de recorrência de cancro e em métodos de tratamento de uma doença num indivíduo causada por células estaminais cancerígenas.

FUNDAMENTO DA INVENÇÃO 0 cancro mata muitos milhares de pessoas anualmente em todo o mundo. Têm sido realizados avanços significativos no tratamento e prevenção de uma grande variedade de cancros. Por exemplo, o cancro da mama tem sido alvo de programas de diagnóstico precoce, bem como uma variedade de técnicas cirúrgicas. No entanto, estes muitas vezes mostram-se física e emocionalmente debilitantes. Além disso, os doentes que foram submetidos a cirurgia e onKc om i οτί Ή o m ii mi rrl-Dran-i a min -h o o T7D -700 onf roram Ho π mo recorrência. Nos últimos anos, as investigações indicaram o potencial oncogénico heterogéneo de células cancerígenas que conduziu à hipótese de células estaminais cancerígenas (CSC). Em resumo, esta hipótese afirma que apenas uma fracção de células dentro de um tumor tem características de células estaminais, incluindo potencial proliferativo ilimitado.

Outras evidências na literatura suportam o conceito de que os tumores são sistemas complexos heterogéneos semelhantes a órgãos com uma organização celular hierárquica, em vez de simples grupos de células tumorais de linhagens homogéneas singulares. A célula tumoral iniciadora mantém a capacidade de gerar descendência diferenciada em vários níveis de diferenciação, a partir de células estaminais pluripotentes não comprometidas, para células progenitoras comprometidas, células descendentes senescentes totalmente diferenciadas. Deste modo, a população de células tumorais é em si própria heterogénea, acrescentando uma arquitetura diversificada proporcionada pelas células imunitárias, estromais e vasculares que também estão presentes em tumores. Algumas das células dentro deste "órgão de cancro" ou tumor têm o potencial para proliferação continuada. A filogenia destas células tumorais indicam, deste modo, a existência de uma população de células que mantém a capacidade de se auto-renovar, enquanto muitas vezes também possui a capacidade de gerar descendência que se diferencia. Consequentemente, a célula estaminal cancerígena é definida como sendo uma célula no interior de um tumor que possui a capacidade de se auto-renovar e originar as linhagens heterogéneas de células cancerígenas que compreendem o tumor. De facto, evidências laboratoriais confirmam que a injecção de células isoladas do tipo estaminal de cancro do ovário, cérebro, cólon, mama, próstata ou pâncreas em ratinhos imunocomprometidos resulta na formação de tumores que são fenotipicamente idênticos ao tumor original e contêm células do tipo estaminal e células do tipo não estaminal.

Consequentemente existem duas populações distintas; um subgrupo relativamente bem diferenciado com capacidade proliferativa limitada que forma a massa do tumor que caracteriza fenotipicamente a doença, e um segundo subgrupo mais pequeno, menos diferenciado que contém CSCs clonogénicas. De forma importante, as CSCs apresentam resistência a múltiplos fármacos, uma propriedade adicional que contribui para a sua longevidade e potencial metastático permitindo-lhes sobreviver a agressões tóxicas, incluindo muitos dos fármacos actualmente utilizados para o tratamento de cancro. Por conseguinte, existe uma necessidade de desenvolver terapêuticas especificamente direccionadas à capacidade de auto-renovação da população de células estaminais, anulando assim a origem da recorrência do tumor como um resultado de resistência a terapêuticas convencionais.

Os marcadores putativos de CSC que foram descritos para outras malignidades, incluindo a leucemia mielóide aguda (CD34-positivo/CD38-negativo) , mama (CD44- positivo/CD24-negativo/-baixo/Lin-negativo), próstata (CD44-positivo /_2_l-alto/CDl33-positivo) e cérebro (CD133-positivo/Nestin-positivo), reflectiram os que foram expressos pelos seus equivalentes do tecido normal no estado original. Evidências recentes confirmam que as células cancerígenas CD44+ do ovário também possuem a capacidade de formar tumores em ratinhos imunocomprometidos. Tal como noutros fenótipos de CSC, as células estaminais cancerígenas do ovário são de crescimento lento, quimio-resistentes e formam tumores em ratinhos imunocomprometidos que são fenotipicamente idênticos ao tumor original em que existem principalmente células CD44-ve que formam a massa do tumor com áreas pequenas de células CD44+ve.

Muitos cancros de fase avançada são recorrentes, apesar da utilização de formas de quimioterapia e radioterapia que inicialmente conduzem a respostas terapêuticas. Por exemplo, a irradiação de glioblastomas pode conduzir a respostas radiográficas significativas, no entanto estes tumores são invariavelmente recorrentes e conduzem à morte do doente. Frequentemente, os glioblastomas são recorrentes num padrão nodular, sugerindo uma origem clonal ou policlonal de células tumorais recorrentes que são capazes de resistir a terapêuticas citotóxicas convencionais, incluindo radioterapia, originando a recorrência da doença. Além disso, os tumores recorrentes também demonstram heterogeneidade dentro da população de células tumorais em relação à presença de CSCs e não-CSCs, bem como em diferenças histológicas e citogenéticas. Isto sugere que as CSCs que ocupavam o tumor original podem ter resistido à intervenção terapêutica para repopularem o tumor recorrente, mesmo após a massa do tumor ter sido removida por ressecção ou quimio-radioterapia, consequentemente o conceito de que as CSCs são a origem de recorrência pós-terapêutica do tumor. Uma mudança na estratégia terapêutica que conduz ao desenvolvimento de agentes únicos direccionados que atacam as CSCs pode melhorar o tratamento de cancro e prolongar a sobrevivência de muitos doentes.

Os presentes inventores verificaram de forma surpreendente que uma selecção de compostos de benzopirano é capaz de exercer efeitos biológicos potentes tanto em não-CSCs, como em CSCs. Esses compostos oferecem estratégias quimioterapêuticas alternativas para o tratamento de cancro e redução da incidência ou risco de recorrência de cancro. 0 W02012/061409 descreve uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um isoflavonóide, e métodos de tratamento de cancro, sensibilizando as células cancerígenas e induzindo a apoptose em células cancerígenas através da administração dessas composições. A US2012/251630 descreve um método de redução das incidências de recorrência de cancro. 0 método envolve a administração de um isoflavonóide a um indivíduo em remissão de cancro. Em casos específicos, o indivíduo tratado está em remissão de cancro epitelial, tal como cancro do ovário ou cancro da mama. 0 W02Ο 05/0490 Ο 8 descreve terapêuticas de associação envolvendo radioterapia e quimioterapia. Proporcionam a utilização de isoflavonas ou seus análogos em associação com radioterapia ou quimioterapia no tratamento do cancro e de patologias e doenças e relacionadas. O WO2006/032086 descreve derivados de cromano e compostos intermédios, composições contendo os mesmos, métodos para a sua preparação e suas utilizações como agentes terapêuticos, particularmente como agentes selectivos antitumorais e quimioterapêuticos.

RESUMO DA INVENÇÃO

Num primeiro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de fórmula geral (I)

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, derivado ou solvato, em que: R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e Ci-Ce alquilo, R2 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH e C1-C6 alcoxi, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, Ci-C6 alquilo e halogéneo, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH, Ci-C6 alcoxi, NH2, NHMe, NHEt, N(Me)2 e N(Et)2, R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, OH, C1-C6 alquilo e halogéneo, ou R13 e um de R14 e R15 em conjunto formam a seguinte estrutura:

R10 é OH, e R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, C1-C4 alquilo e F.

Num segundo aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto em conjunto com um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Num terceiro aspecto, a presente invenção proporciona o composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto para utilização num método para o tratamento de cancro num indivíduo com essa necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto. 0 método pode adicionalmente compreender a administração de outro agente quimioterapêutico. 0 cancro pode ser um cancro recorrente. 0 cancro pode ser resistente a um ou mais agentes quimioterapêuticos. 0 cancro pode ser cancro pancreático, cancro colo-rectal, melanoma, cancro da próstata, cancro do cérebro (incluindo pediátrico e adulto), cancro do ovário, cancro da mama, cancro do pulmão, cancro do fígado, cancro uterino, neuroblastoma, mesotelioma, ascite maligna ou cancro peritoneal.

Num aspecto adicional, a presente invenção proporciona o composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto para utilização num método de tratamento, em que o tratamento é para a redução da incidência, ou o risco, da recorrência de cancro num indivíduo considerado estar em risco de recorrência de cancro, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz do referido composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto. 0 indivíduo pode ser um indivíduo que esteja em remissão do cancro. 0 indivíduo pode estar em remissão do cancro do ovário, cancro do cérebro ou algum outro cancro, tal como um ou mais dos que foram mencionados anteriormente.

Está descrito, mas não reivindicado, um método para indução da apoptose em, ou para inibição da proliferação de, uma célula estaminal cancerígena, compreendendo o método o contacto da célula estaminal cancerígena com uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto. A célula estaminal cancerígena pode ser uma célula estaminal do cancro do ovário ou uma célula estaminal do cancro do cérebro.

Num aspecto adicional, a presente invenção proporciona o composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto para utilização num método para o tratamento de uma doença num indivíduo originada por células estaminais cancerígenas, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto da fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto. A doença pode ser cancro. 0 cancro pode ser um cancro metastático. As células estaminais cancerígenas podem ser células estaminais cancerígenas do ovário ou células estaminais cancerígenas do cérebro.

Está descrito, mas não reivindicado, um método para a preparação de um composto da fórmula (I) compreendendo os passos de: (a) redução de um composto de fórmula (II) para produzir um composto de fórmula (III)

em que no composto de fórmula (II) R1, R3 e R10 a R15 são como definidos no primeiro aspecto e R2 é OAc ou como definido no primeiro aspecto, e no composto de fórmula (III) R1 a R3 e R10 a R15 são como definidos no primeiro aspecto, e (b) hidrogenação de um composto de fórmula (III) para produzir um composto de fórmula (I),

em que R1 a R3 e R10 a R15 são como definidos no primeiro aspecto. 0 passo (a) pode ser realizado através da reacção de um composto de fórmula (II) com um reagente de borano, por exemplo, complexo de borano-dimetilsulfureto, decaborano, 9-BBN ou complexo de borano-tetrahidrofurano. 0 passo (b) pode ser realizado através da reacção de um composto de fórmula (III) com um catalisador metálico heterogéneo com um catalisador metálico heterogéneo sob uma atmosfera de hidrogénio.

Numa forma de realização, o método pode adicionalmente compreender: (c) reacção de um composto de fórmula (IV) com um composto de fórmula (V) para produzir um composto de fórmula (II)

em que no composto de fórmula (II) R1, R3 e R10 a R15 são como definidos no primeiro aspecto e R2 é OAc ou como definido no primeiro aspecto, e no composto de fórmula (IV) R1 a R3 e R13 a R15 são como definidos no primeiro aspecto, e no composto de fórmula (V) R10 a R12 são como definidos no primeiro aspecto. 0 passo (c) pode ser realizado na presença de uma base.

Noutra forma de realização, o método pode adicionalmente compreender: (d) reacção de um composto de fórmula (VI) com um composto de fórmula (VII) para produzir um composto da fórmula (IV)

em que R1 a R3 e R13 a R15 são como definidos no primeiro aspecto. 0 passo (d) pode ser realizado através da associação dos compostos (VI) e (VII) na presença de oxicloreto de fósforo e cloreto de zinco. Numa forma de realização alternativa, o passo (d) pode ser realizado ao reagir o composto (VII) com cloreto de tionilo, seguido por reacção com cloreto de alumínio e o composto (VI).

DEFINIÇÕES

Seguidamente, estão algumas definições que podem ser úteis na compreensão da descrição da presente invenção. Estas apresentam-se como definições gerais e não devem, de modo algum, limitar o âmbito da presente invenção apenas a esses termos, mas são caracterizados para uma melhor compreensão da seguinte descrição.

Ao longo desta especificação, a menos que o contexto exija de outra forma, a palavra "compreender", ou variações tais como "compreende" ou "compreendendo", será entendida como implicando a inclusão de um elemento indicado, número inteiro ou passo, ou grupo de elementos, números inteiros ou passos, mas não a exclusão de qualquer outro elemento, número inteiro ou passo, ou grupo de elementos, números inteiros ou passos.

Os termos "um" e "uma" são aqui utilizados para se referirem a um ou a mais do que um (ou seja, pelo menos um) do objecto gramatical do artigo. A titulo de exemplo, "um elemento" significa um elemento ou mais do que um elemento.

No contexto desta especificação, o termo "alquilo" entende-se como grupos de hidrocarbonetos saturados monovalentes de cadeia linear ou de cadeira ramificada com o número de átomos de carbono indicado. Exemplos de grupos alquilo incluem, mas não estão limitados a, metilo, etilo, 1- propilo, isopropilo, 1-butilo, 2-butilo, isobutilo, terc-butilo, amilo, 1,2-dimetilpropilo, 1,1-dimetilpropilo, pentilo, isopentilo, hexilo, 4-metilpentilo, 1-metilpentilo, 2- metilpentilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, 3,3-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 1,2,2-trimetilpropilo e 1,1,2-trimetilpropilo.

No contexto desta especificação, o termo "alcoxi" entende-se como grupos O-alquilo em que alquilo é como aqui definido. Exemplos de grupos alcoxi incluem, mas não estão limitados a, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, sec-butoxi e terc-butoxi.

No contexto desta especificação, o termo "quantidade eficaz" inclui uma quantidade não tóxica mas uma quantidade suficiente de um composto activo para proporcionar o efeito indicado. Quando utilizado em referência à recorrência de cancro, "quantidade eficaz" significa uma quantidade de um composto de fórmula (I) que é necessária para reduzir a incidência ou risco de um indivíduo sofrer de recorrência de cancro. Os especialistas na matéria irão entender que a quantidade exacta de um composto necessário irá variar com base em vários factores e, deste modo, não é possível especificar uma "quantidade eficaz" exacta. No entanto, para qualquer dado caso, uma "quantidade eficaz" adequada pode ser determinada por um dos vulgares especialistas na matéria.

No contexto desta especificação, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" inclui uma quantidade não tóxica mas suficiente de um composto activo para proporcionar o efeito terapêutico desejado. Os especialistas na matéria irão entender que a quantidade exacta de um composto necessário irá variar com base em vários factores e, deste modo, não é possível especificar uma "quantidade terapeuticamente eficaz" exacta. No entanto, para qualquer caso determinado, uma "quantidade terapeuticamente eficaz" adequada pode ser determinada por um dos vulgares especialistas na matéria.

No contexto desta especificação, os termos "tratar", "tratamento", "prevenir" e "prevenção" referem-se a qualquer e todas as utilizações que melhoram o cancro ou os seus sintomas, previnem o estabelecimento do cancro, ou de outra forma previnem, impedem, retardam ou revertem a progressão do cancro ou outros sintomas indesejados em qualquer forma que seja. Deste modo, os termos "tratar", "tratamento", "prevenir" e "prevenção" e outros semelhantes são para serem considerados no seu contexto mais amplo. Por exemplo, o tratamento não implica necessariamente que um indivíduo é tratado até à recuperação total.

No contexto desta especificação, o termo "indivíduo" inclui seres humanos e também animais que não são seres humanos. Como tal, para além de serem úteis no tratamento de cancro nos seres humanos, os compostos da presente invenção também apresentam utilização no tratamento de cancro em animais que não são seres humanos, por exemplo, mamíferos, tais como animais de estimação e animais de criação. Exemplos não limitativos de animais de estimação e animais de criação incluem cães, gatos, cavalos, vacas, ovelhas e porcos. Preferencialmente, o indivíduo é um ser humano.

No contexto desta especificação, o termo "recorrência" no que se refere ao cancro, entende-se que significa o regresso de células cancerígenas e/ou um tumor cancerígeno após as células cancerígenas e/ou um tumor cancerígeno terem sido previamente tratados com sucesso.

No contexto desta especificação, o termo "administração" e variações desse termo incluindo "administrar" e "administração", inclui o contacto, aplicação, entrega ou o proporcionar de um composto ou composição da invenção a um organismo por quaisquer meios adequados.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Figura 1: Actividade diferencial do composto 2 em função de dois explantes diferentes derivados de GBM de doentes; GBM14-CHA (diamantes) e 0DA14-RAV (quadrados).

Figura 2: Actividade diferencial do composto 2 e dos seus enantiómeros purificados em função do explante GBM14 de GBM derivado de doente.

Figura 3: Análise da eficácia do composto 2 em função de células OCSC-2 utilizando confluência (A, B) , e imagiologia de danos celulares (C, D) . A CI50 foi calculada a partir de gráficos de ASC para a confluência e intensidade de fluorescência em função do tempo. Os cálculos de CI50 foram realizados após 72 horas de cultura.

Figura 4: Análise da eficácia do composto 2 contra células OCSC-2 utilizando confluência. Os cálculos da CI50 foram realizados após 72 horas de cultura. 0 GAD 305 é aqui o composto 9 e o GAD 310 é aqui o composto 13.

Figura 5: Avaliação do racemato do composto 2 (A, C) e seu eutómero (B, D) contra as linhas celulares A172 (Glioma) (A e B) e OVCAR-3 (cancro do ovário) (C e D).

Figura 6: Capacidade do composto 2 em retardar a proliferação de células estaminais cancerígenas do ovário.

Figura 7: Avaliação microscópica de células OCSC2 tratadas com o composto 2 a 1 pg/mL durante 24 (B) e 48 horas (C) em comparação com o controlo, 72 horas (A).

Figura 8: Microscopia de fluorescência de células estaminais OCSC-2 marcadas com GFP e co-culturas OCC2 marcadas com mCherry tratadas com o composto 2 a 1 pg/mL durante 48 horas (B) em comparação com o controlo (A).

Figura 9: O composto 2 destrói células estaminais esferóides de cancro do ovário. Foram caracterizadas OCSC-2 esferóides utilizando metodologia padrão que foram expostas a concentrações crescentes do composto 2 durante 24 horas. A, Controlo; B, 0,1 pg/mL - 24 horas; C, 1 pg/mL - 24 horas, a estrutura esferoidal foi avaliada por microscopia.

Figura 10: Perfil farmacocinético dos compostos 2, 6, 9 e 13 (que é marcado como 31) a 1 mg/kg administrados em formulação Captisol® a 30%.

Figura 11: Eficácia in vivo do eutómero do composto 9 contra um modelo de flanco de GBM (U87MG). Utilizando o modelo de flanco U87 previamente descrito, os ratinhos foram divididos em dois grupos, um grupo de tratamento (eutómero do composto 9) formulado numa base de supositório de manteiga de cacau e administrados com 100 mg/kg uma vez por dia - e um grupo de controlo de supositório (n = 10 para controlo e n = 4 para composto 9 ). Os ratinhos foram observados diariamente, pesados a cada três dias e sacrificados após 12 dias de tratamento. No final do tratamento, os tumores foram excisados e pesados. O composto 9 foi administrado uma vez por dia com 100 mg/kg numa formulação de supositório enquanto que os animais de controlo foram administrados apenas com a formulação de supositório. As curvas de crescimento do tumor (média ± EPM) para a duração do tratamento (12 dias) foram significativamente diferentes (valores P apresentados). O peso do tumor (mediana e quartis) também foi significativamente reduzido (valores P apresentados acima do gráfico).

Figura 12: Eficácia in vivo do eutómero do composto 2 num modelo animal de cancro do ovário. Os animais foram inoculados com células 0CSC1-F2 m-Cherry e depois foram administrados no dia 4 pós-inoculação com eutómero do composto 2 formulado com Captisol® utilizando dois regímen diferentes (100 mg/kg, i.p., uma vez por dia, 50 mg/kg, i.p.) e a eficácia comparada com o controlo. A, intensidade média de fluorescência do tumor (os tumores foram visualizados de a cada três dias utilizando um sistema de imagiologia Vivo FX, ROI) ·, controlo Captisol®; , eutómero do composto 2 (50 mg/kg i.p. uma vez por dia); A, eutómero do composto 2 (100 mg/kg i.p. uma vez por dia); B, O tamanho médio do tumor terminal foi avaliado através da remoção e pesagem de todos os tumores do controlo e dos animais tratados com o eutómero do composto 2 formulado com Captisol®, *, p<0,02; **, p<0,0001; vs respectivos controlos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção relaciona-se com compostos de benzopirano seleccionados da fórmula geral (I) , a preparação desses compostos e sua utilização no tratamento do cancro e redução da incidência da recorrência de cancro. Os compostos aqui descritos representam uma selecção da invenção de no que diz respeito a US2012/0251630 e o W02012/061409.

Num aspecto, a presente invenção proporciona um composto de fórmula geral (I)

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, derivado ou solvato, em que: R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e Ci-Ce alquilo, R2 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH e C1-C6 alcoxi, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, Ci-C6 alquilo e halogéneo, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH, Ci-Ce alcoxi, NH2, NHMe, NHEt, N(Me)2 e N(Et)2, R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, OH, C1-C6 alquilo e halogéneo, ou R13 e um de R14 e R15 em conjunto formam a seguinte estrutura:

R10 é OH, e R11 e R12 são seleccionados independente a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, C1-C4 alquilo e F.

Numa forma de realização, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e C1-C3 alquilo.

Noutra forma de realização, R2 é OH ou OMe. Numa outra forma de realização, R2 é OH.

Noutra forma de realização ainda, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C3 alquilo e halogéneo. Numa forma de realização adicional, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C3 alquilo, F e Cl.

Numa forma de realização, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, metilo, terc-butilo e F. Numa outra forma de realização ainda, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: OMe, metilo, terc-butilo e F. Numa outra forma de realização ainda, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, terc-butilo e F. Noutra forma de realização ainda, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: OMe, terc-butilo e F.

Noutra forma de realização, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, NH2, NHEt e N(Et)2.

Numa forma de realização adicional, R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F, Cl e metilo.

Ainda numa forma de realização adicional, R13 e um de R14 e R15 formam a seguinte estrutura:

Numa forma de realização, os compostos de fórmula (I) têm a seguinte estrutura

em que R1, R3 e R10 a R15 são como definidos anteriorraente.

Numa forma de realização R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e C1-C3 alquilo.

Numa forma de realização adicional, R3 é seleccionado a partir do grupo que consistem em: H, C1-C3 alquilo, F e Cl.

Noutra forma de realização ainda, R11 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, OMe, metilo e F.

Ainda numa forma de realização adicional, R12 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe, metilo, terc-butilo e F.

Noutra forma de realização ainda, R11 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, OMe e F.

Ainda numa forma de realização adicional, R12 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe, terc-butilo e F.

Noutra forma de realização ainda, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, NH2, NHEt e NEt2.

Noutra forma de realização, R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consistem em: H, halogéneo e metilo. Noutra forma de realização, R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F, Cl e metilo

Ainda numa forma de realização adicional, R13 e um de R14 e R15 formam a seguinte estrutura:

Numa forma de realização, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e C1-C3 alquilo, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C3 alquilo, F e Cl, R10 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe, OH e F, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, metilo, OMe e F, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe e OH e R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F, Cl e metilo.

Noutra forma de realização, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e C1-C3 alquilo, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C3 alquilo, F e Cl, R10 é OH, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, metilo, OMe e F, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe e OH e R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F e metilo, ou R13 e um de R14 e R15 formam a seguinte estrutura:

Numa forma de realização, R1 e R3 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, metilo ou etilo, R10 é OH, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, metilo, OMe e F, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe e OH e R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F e metilo. Nesta forma de realização, R15 pode ser orto ou meta em relação a R13.

Noutra forma de realização, R1 e R3 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, metilo ou etilo, R10 é OH, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, metilo, OMe e F, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe e OH e R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F, Cl e metilo, ou R13 e um de R14 e R15 formam a seguinte estrutura:

Numa forma de realização, R1 e R3 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, metilo ou etilo, R10 é OH, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, OMe e F, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe e OH e R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F e metilo. Nesta forma de realização, R15 pode ser orto em relação a R13.

Noutra forma de realização, R1 e R3 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, metilo ou etilo, R10 é OH, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, OMe e F, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe e OH e R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F e metilo, ou R13 e um de R14 e R15 formam a seguinte estrutura:

Numa forma de realização, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e C1-C3 alquilo, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C3 alquilo, F e Cl, R10 é OH, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, metilo, OMe e F, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe, OH, NH2, NHEt e NEt2 e R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F, Cl e metilo.

Noutra forma de realização, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e C1-C3 alquilo, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C3 alquilo, F e Cl, R10 é OH, R11 e R12 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: terc-butilo, metilo, OMe e F, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OMe, OH, NH2, NHEt e NEt2 e R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, F, Cl e metilo, ou R13 e um de R14 e R15 formam a seguinte estrutura:

Exemplos de compostos de acordo com a fórmula (I) incluem os compostos 2, 3, 6, 9, 11, 13 e 15 a 41 (aqui designados por "os compostos numerados de acordo com a invenção"):

Numa forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste em: compostos 2, 6, 9, 13, 16, 18-22, 24 e 32-41. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste em: compostos 2, 6, 9, 13, 16, 18-22, 24 e 32-40. Numa forma de realização adicional, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste nos compostos 2, 6, 9, 13, 16, 18-22, 24 e 32-36. Numa forma de realização adicional, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste nos compostos 2, 6, 9, 13, 16, 18-22, 24 e 32-35. Numa forma de realização adicional, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir dos compostos 33 e 36 a 41. Numa outra forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir dos compostos 33, 36, 37 e 39. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste nos compostos 2, 9 e 36. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste nos compostos 2, 9, 20, 33 e 36. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste nos compostos 2, 9, 33 e 36. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste nos compostos 2, 6, 9, 13 e 36 a 41. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste nos compostos 2, 6, 9, 13 e 36 a 40. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é seleccionado a partir do grupo que consiste nos compostos 2, 6, 9, 13, 36, 37 e 39. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é o composto 2. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é o composto 9. Noutra forma de realização, o composto de fórmula (I) é o composto 36. Em formas de realização alternativas, o composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção.

Os compostos de fórmula (I) incluem pelo menos dois centros quirais. A presente invenção inclui todos os enantiómeros e diastereoisómeros, bem como suas misturas em quaisquer proporções. A invenção também se estende aos enantiómeros isolados ou a pares de enantiómeros. Os métodos de separação de enantiómeros e diastereómeros são bem conhecidos para os especialistas na matéria. Em algumas formas de realização, os compostos da fórmula (I) são misturas racémicas. Noutras formas de realização, os compostos da fórmula (I) estão presentes na forma opticamente pura.

Será também reconhecido pelos especialistas na matéria que nos compostos da fórmula (I), os substituintes fenilo ligados ao anel heterociclico podem ser cis ou trans relativamente um ao outro. Preferencialmente, nos compostos de fórmula (I), estes substituintes serão cis relativamente um ao outro. Em alternativa, nos compostos de fórmula (I), estes substituintes podem ser trans relativamente um ao outro.

Em algumas formas de realização, os compostos da fórmula (I), incluindo os compostos numerados de acordo com a invenção, têm a estrutura seguinte:

Noutras formas de realização, os compostos da fórmula (I), incluindo os compostos numerados de acordo com a invenção, têm a estrutura seguinte:

Também se considera que os compostos da fórmula (I) incluem hidratos e solvatos. Os solvatos são complexos formados por associação de moléculas de um solvente com um composto da fórmula (I) . No caso dos compostos da fórmula (I) que são sólidos, será entendido pelos especialistas na matéria que tais compostos podem existir em diferentes formas cristalinas ou polimórficas, todas as quais destinam-se a estar dentro do âmbito da presente invenção.

Os compostos de fórmula (I) podem estar na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis. Esses sais são bem conhecidos pelos especialistas na matéria. S. M. Berge et al. descrevem detalhadamente sais farmaceuticamente aceitáveis em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66:1-19 . Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação final dos compostos da fórmula (I), ou separadamente através da reacção do composto de base livre com um ácido orgânico adequado. Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis adequados dos compostos da presente invenção podem ser preparados a partir de um ácido inorgânico ou a partir de um ácido orgânico. Exemplos desses ácidos inorgânicos são ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico e fosfórico. Os ácidos orgânicos adequados podem ser seleccionados a partir das classes de alifático, ciclo-alifático, aromático, carboxílico heterocíclico e sulfónico de ácidos orgânicos, exemplos dos quais são ácido fórmico, acético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, glucorónico, fumárico, maleico, pirúvico, alquilsulfónico, arilsulfónico, aspártico, glutâmico, benzóico, antranílico, mesílico, salicílico, p-hidroxibenzóico, fenilacético, mandélico, ambónico, pamóico, pantoténico, sulfanílico, ciclohexilaminossulfónico, esteárico, algénico, β-hidroxibutírico, galactárico e galacturónico. Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis adequados dos compostos da presente invenção incluem sais metálicos preparados a partir de lítio, sódio, potássio, magnésio, cálcio, alumínio e zinco, e sais orgânicos preparados a partir de bases orgânicas tais como colina, dietanolamina, morfolina. Em alternativa, os sais orgânicos preparados a partir de N,N'-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, meglumina (N-metilglucamina), procaína, sais de amónio, sais quaternários tal como sal de tetrametilamónio, sais de adição de aminoácido, tais como sais com glicina e arginina.

Os compostos de fórmula (I) também se estendem para incluir todos os derivados com grupos de saída fisiologicamente cliváveis que podem ser clivados in vivo para proporcionar os compostos da fórmula (I) . Grupos de saída adequados incluem acilo, fosfato, sulfato, sulfonato e preferencialmente são compostos mono-, di- e per-acilo oxi-substituídos, em que um ou mais dos grupos hidroxilo pendentes são protegidos por um grupo acilo, preferencialmente um grupo acetilo. Tipicamente, compostos aciloxi substituídos são prontamente cliváveis para os compostos hidroxi-substituídos correspondentes.

Os compostos representativos da fórmula (I) podem ser sintetizados conforme descrito adiante.

No primeiro passo da síntese, a benzofenona intermediária (IV) é preparada a partir de um fenol funcional adequado (VI) e um ácido benzóico funcional adequado (VII) de acordo com o Esquema 1.

Esquema 1: Preparação de uma benzofenona intermediária A localização relativa dos substituintes R14 e R15 no anel fenilo do composto (VII) pode ser seleccionada com base no padrão de substituição necessário no anel 4-fenilo do composto de fórmula (I) a ser preparado. Sempre que seja adequado ou necessário, podem ser utilizados grupos protectores. Os grupos protectores padrão são conhecidos pelos especialistas na matéria e incluem os descritos, por exemplo, em "Protective Groups in Organic Synthesis" por Theodora Greene e Peter Wuts (Terceira Edição, 1999, John Wiley and Sons) .

Tipicamente, na reacção apresentada no Esquema 1, o composto fenólico (VI) e o composto de ácido benzóico (VII) são feitos reagir sob condições de acilação. Por exemplo, num método descrito no Indian Journal of Chemistry, 1971, 619-62, o composto fenólico (VI) e o composto de ácido benzóico (VII) podem ser associados com oxicloreto de fósforo e cloreto de zinco e a mistura é aquecida durante um período de tempo suficiente para que a reacção decorra substancialmente até à conclusão. 0 período exacto de tempo dependerá da escala da reacção, no entanto os especialistas na matéria serão prontamente capazes de determinar o tempo e as condições de temperatura adequados. Numa reacção típica, os reagentes são aquecidos a uma temperatura de cerca de 70 °C durante cerca de 1 a 3 horas. Quando a reacção é considerada suficientemente completa, a mistura de reacção é arrefecida, por exemplo, vertendo-a sobre gelo, após isto a benzofenona intermediária (IV) pode ser isolada e purificada utilizando técnicas padrão conhecidas pelos especialistas na matéria.

Num método alternativo, o composto de ácido benzóico (VII) pode ser agitado em refluxo com cloreto de tionilo durante cerca de 2 a 6 horas, seguida pela adição de N, N-dimetilformamida catalítica num solvente orgânico adequado (por exemplo, diclorometano), durante cerca de 20 minutos a 1 hora. Após remoção do cloreto de tionilo residual, a mistura é tipicamente arrefecida (por exemplo, num banho de gelo), em seguida, cloreto de alumínio e o composto fenólico (VI) são adicionados e a mistura é agitada durante um período de tempo adequado, tipicamente cerca de 18 a 36 horas, enquanto é lentamente aquecida até à temperatura ambiente, em seguida é aquecida em refluxo durante cerca de 2 a 8 horas. A reacção pode ser conduzida sob uma atmosfera inerte. A benzofenona intermediária (IV) pode ser purificada utilizando técnicas padrão conhecidas pelos especialistas na matéria. Por exemplo, a benzofenona intermediária (IV) pode ser recolhida por filtração, lavada (por exemplo, com água), em seguida recristalizada a partir de um sistema de solventes adequados. Exemplos de solventes de recristalização incluem metanol, etanol, água e suas misturas. De forma alternativa, a benzofenona intermediária (IV) pode ser purificada por cromatografia em coluna. 0 passo seguinte da sintese envolve a reacção da benzofenona intermediária (IV) com um ácido fenilcarboxilico funcional adequado (V) para proporcionar benzopiranona funcional (II) (ver Esquema 2). A localização relativa dos substituintes Rn e R12 no anel fenilo do composto (V) pode ser seleccionada com base no padrão de substituição necessário no anel 3-fenilo do composto de fórmula (I) a ser preparado. Sempre que seja adequado ou necessário, podem ser utilizados grupos protectores.

Esquema 2: Preparação de uma benzopiranona funcionalizada

Tipicamente, na reacção de condensação apresentada no Esquema 2, a benzofenona intermediária (IV) é feita reagir com o ácido fenilacético funcional adequado (V) na presença de uma base e anidrido acético. Tipicamente, a base é uma base não-nucleofilica, tal como N,N-diisopropiletilamina (DIEA), N-metilmorfolina ou trietilamina. Durante esta reacção, quaisquer substituintes hidroxilo presentes nos anéis fenilo podem ser convertidos nos acetatos correspondentes. A reacção é tipicamente realizada com aquecimento a uma temperatura e durante um período de tempo até se considerar que a reacção está substancialmente completa (por exemplo, por análise de TLC ou GC) . Os especialistas na matéria saberão que os períodos de tempo adequados irão depender da escala da reacção e dos reagentes utilizados em particular. Tipicamente, os reagentes podem ser aquecidos a uma temperatura de cerca de 40-60°C (por exemplo, cerca de 50°C) durante cerca de 20 a 30 minutos para assegurar que todos os reagentes estão em solução, em seguida é aquecida a uma temperatura mais elevada, tal como cerca de 130-150°C (por exemplo, cerca de 135°C), durante cerca de 6 a 48 horas (por exemplo, cerca de 18 horas) . A benzopiranona funcionalizada (II) pode ser isolada por meios convencionais, tais como extracção com solvente (por exemplo, utilizando um solvente orgânico tal como acetato de etilo, clorofórmio, ou outros semelhantes), e lavagem com solução aquosa alcalina (por exemplo, carbonato de sódio ou solução de hidrogenocarbonato de sódio), seguida por purificação padrão utilizando técnicas conhecidas pelos especialistas na matéria, tais como cromatografia em coluna, recristalização a partir de um solvente adequado (por exemplo, etanol ou uma mistura etanol/água), ou titulação com um solvente adequado (por exemplo, metanol, etanol ou suas misturas). 0 próximo passo da síntese envolve a redução da lactona da benzopiranona funcionalizada (II) para proporcionar o composto cromeno funcional (III) (ver Esquema 3) .

Esquema 3. Preparação de um cromeno funcional

Tipicamente, a reacção de redução é realizada por tratamento da benzopiranona (II) com um agente redutor adequado capaz de reduzir a unidade de cetona do anel de piranona. Preferencialmente, o reagente redutor reduz selectivamente a unidade de cetona do anel de piranona, mas não reduz a ligação dupla 3,4. A redução também pode desproteger quaisquer grupos hidroxilo acilados presentes nos anéis fenilo. Os agentes redutores adequados serão conhecidos pelos especialistas na matéria e incluem reagentes de borano, tais como, por exemplo, complexo de borano-dimetilsulfureto, decaborano, 9-BBN e complexo de borano-tetrahidrofurano. Em algumas formas de realização, o agente redutor é borano-dimetilsulfureto. A redução pode ser facilitada pela utilização de um auxiliar quiral. Por exemplo, borano-dimetilsulfureto é susceptível de redução de cetona assimétrica utilizando um catalisador de oxazaborolidina quiral (Corey, E.J.; Helal, C. J. Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 1986). A reacção pode ser realizada num solvente orgânico, tal como tetrahidrofurano, tolueno ou clorofórmio. A reacção pode ser realizada sob uma atmosfera inerte a uma temperatura abaixo da temperatura ambiente, tipicamente a uma temperatura desde cerca de -10°C até cerca de 10°C, ou desde cerca de -5°C até cerca de 0°C, ou a cerca de 0°C, durante cerca de 15 minutos a cerca de 4 horas, tipicamente durante cerca de 30 minutos a cerca de 2 horas. Quando a reacção de redução é considerada estar completa (ou substancialmente completa) , o produto pode ser isolado por processo acidico utilizando métodos padrão conhecidos pelo especialista na matéria, em seguida purificado utilizando técnicas convencionais, tais como cromatografia em coluna.

Com o composto de cromeno globalmente desprotegido (III) em curso, o passo final da síntese envolve a redução catalítica cisoide da olefina do composto de cromeno (III) para se obter compostos da fórmula (I) (ver Esquema 4).

Esquema 4. Redução catalítica para proporcionar compostos da fórmula (I) A redução da ligação dupla pode ser realizada por hidrogenação utilizando reagentes e condições que são bem conhecidas pelos especialistas na matéria. Os reagentes adequados incluem catalisadores metálicos heterogéneos, tais como catalisadores de paládio e platina, na presença de uma atmosfera de hidrogénio. Os catalisadores actualmente preferidos incluem, mas não estão limitados a, Pd/C, Pd(OH)2/C, Pt/C, Níquel de Raney, catalisadores de Rh, incluindo os catalisadores de Rh quiral, tal como Rh DIPAMP e catalisadores Wilkinsons. Exemplos de solventes adequados incluem metanol e etanol. A reacção pode ser realizada à temperatura ambiente ou a mistura de reacção pode ser aquecida (por exemplo, até cerca de 50 a 60°C) . De forma alternativa, a reacção de hidrogenação pode ser realizada sob pressão. Os especialistas na matéria serão prontamente capazes de determinar quando a reacção está completa (ou substancialmente completa) utilizando técnicas padrão (por exemplo, TLC, GC-MS). O produto pode ser purificado utilizando técnicas padrão (por exemplo, cromatografia).

Depois da purificação, os compostos de fórmula (I) podem ser substancialmente puros. Por exemplo, os compostos de fórmula (I) podem ser isolados numa forma que é pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99,5% ou 99,9% pura.

Os compostos da fórmula (I) podem ser obtidos como misturas racémicas. Os enantiómeros podem ser isolados utilizando técnicas conhecidas pelos especialistas na matéria, incluindo resolução quiral, cromatografia com fluido supercritico e sínteses enantio-selectivas. Os enantiómeros individuais podem ser isolados numa forma substancialmente pura ou num excesso enantiomérico (ee) . Por exemplo, em formas de realização preferidas, um enantiómero pode ser isolado num excesso enantiomérico de cerca de 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou superior a 99%.

Os presentes inventores verificaram que os compostos da fórmula (I) são capazes de exercer efeitos biológicos surpreendentemente potentes sobre células cancerígenas diferenciadas, bem como em células cancerígenas indiferenciadas, que são variadamente referidas como "células estaminais cancerígenas" ou "células progenitoras cancerígenas". Os efeitos biológicos podem incluir a inibição da proliferação celular, indução da morte celular, indução da diferenciação celular e inversão do comportamento anormal.

Os compostos de fórmula (I), por conseguinte, apresentam utilização no tratamento de cancro. Em particular, os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados no tratamento de cancro em que seja desejável atingir células cancerígenas indiferenciadas e diferenciadas, e em que o efeito em ambos os tipos de células cancerígenas possa ser diferente ou mesmo oposto. Por exemplo, os compostos da fórmula (I) podem induzir a morte celular em células cancerígenas diferenciadas e induzir diferenciação celular em células cancerígenas indiferenciadas. Noutras formas de realização, os compostos da fórmula (I) podem inibir a proliferação de células estaminais cancerígenas e de células estaminais cancerígenas diferenciadas, tais como as células somáticas cancerígenas.

Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados em conjunto com, ou em alternativa na ausência de, outros agentes quimioterapêuticos.

Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados no tratamento de cancro que é resistente a um ou mais agentes quimioterapêuticos.

Em virtude dos seus efeitos biológicos sobre células cancerígenas indiferenciadas, os compostos de fórmula (I) apresentam uma determinada utilização no tratamento de cancro que recidivou num indivíduo e na redução da incidência, ou o risco, da recorrência de cancro num indivíduo considerado estar em risco de recorrência de cancro, por exemplo um indivíduo que está em remissão de cancro. 0 indivíduo pode estar em remissão de um tumor sólido conforme aqui definido. Os compostos de fórmula (I) também podem apresentar utilização na indução da apoptose em, ou inibição da proliferação de, células estaminais cancerígenas. Os compostos de fórmula (I) também podem apresentar utilização no tratamento de doenças causadas por células estaminais cancerígenas, tal como cancro. 0 cancro pode ser um cancro metastático.

Além disso, os compostos da fórmula (I) podem possuir excelentes propriedades farmacêuticas, tais como resistência melhorada à conjugação via glucoronil-transferases e outras transferases de solubilizantes em água, tais como sulfases, que podem estar sobre-expressas em células proliferativas, tais como células cancerígenas. Isto pode conferir de forma vantajosa excelentes propriedades farmacêuticas, tal como um perfil farmacocinético melhorado através da redução da conjugação e eliminação.

Em todos os aspectos da invenção o cancro pode ser um tumor sólido, tal como, por exemplo, cancro da mama, cancro do pulmão (CPNPC e CPPC), cancro da próstata, cancro do ovário, cancro uterino, cancro peritoneal, cancro do cérebro (incluindo, por exemplo, gliomas, tais como glioblastoma, glioma pontino intrínseco difuso (DIPG) e meduloblastoma), cancro da pele, cancro do cólon, cancro da bexiga, cancro colo-rectal, cancro gástrico, cancro do fígado, cancro pancreático, cancro da cabeça e pescoço, melanoma, ascite maligna, mesotelioma ou neuroblastoma. 0 cancro do cérebro pode ser adulto ou pediátrico. 0 glioma pode ser resistente a temozolomida (TMZ) ou susceptível a TMZ .

Em determinadas formas de realização, o cancro é cancro do ovário, neuroblastoma, cancro da próstata ou cancro do cérebro (incluindo, por exemplo, gliomas, tais como glioblastoma, DIPG e meduloblastoma). Noutras formas de realização, o cancro é cancro do ovário, cancro da próstata ou cancro do cérebro (incluindo, por exemplo, gliomas, tais como glioblastoma, DIPG e meduloblastoma). Em formas de realização adicionais, o cancro é cancro do ovário, glioma, cancro colo-rectal, cancro da próstata, cancro da mama, cancro do pulmão, cancro do fígado, melanoma ou ascite maligna. Noutras formas de realização, o cancro pode ser cancro pancreático, cancro colo-rectal, melanoma, cancro da próstata, cancro do cérebro (incluindo pediátrico e adulto), cancro do ovário, cancro da mama, cancro do pulmão, cancro do fígado, cancro uterino, neuroblastoma, mesotelioma, ascite maligna ou cancro peritoneal.

Os compostos de fórmula (I) podem apresentar utilização na indução da apoptose em, ou inibição da proliferação de células estaminais cancerígenas do ovário. Por conseguinte, numa forma de realização, a invenção proporciona um método para indução da apoptose em, ou inibição da proliferação de células estaminais cancerígenas do ovário, compreendendo o método o contacto das células estaminais cancerígenas do ovário com uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) . 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 13 e 36, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 13. 0 composto de fórmula (I) pode ser o composto 2. 0 compostos de fórmula (I) pode ser utilizado na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero ( + ) . As células estaminais cancerígenas do ovário pode ser resistentes à cisplatina e/ou paclitaxel. 0 composto de fórmula (I) pode ser administrado por via intraperitoneal.

Os compostos de fórmula (I) podem apresentar utilização no tratamento do cancro do ovário num indivíduo. Por conseguinte, numa forma de realização, a invenção proporciona um método para o tratamento do cancro do ovário num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) . 0 cancro pode ser um cancro que recidivou. 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 13 e 36, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 13. 0 composto de fórmula (I) pode ser o composto 2. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero ( + ) . 0 cancro do ovário pode ser resistente à cisplatina e/ou paclitaxel. 0 composto de fórmula (I) pode ser administrado por via intraperitoneal.

Os compostos de fórmula (I) podem apresentar utilização na redução da incidência, ou o risco, da recorrência de cancro num indivíduo considerado estar em risco de recorrência de cancro. Por conseguinte, numa forma de realização, a invenção proporciona um método para redução da incidência, ou o risco, da recorrência de cancro num indivíduo considerado estar em risco de recorrência de cancro, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) . 0 indivíduo considerado estar em risco de recorrência de cancro pode ser um indivíduo em remissão do cancro do ovário ou um indivíduo em remissão do cancro do cérebro, tal como glioma. 0 método pode envolver a redução da incidência, ou o risco, da recorrência do cancro do ovário ou recorrência do cancro do cérebro no indivíduo. 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 13. 0 composto de fórmula (I) pode ser o composto 2 ou o composto 9. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Os compostos de fórmula (I) podem apresentar utilização no tratamento de uma doença num indivíduo causada pelas células estaminais cancerígenas do ovário. Por conseguinte, numa forma de realização, a invenção proporciona um método para o tratamento de uma doença num indivíduo causada pelas células estaminais cancerígenas do ovário, compreendendo o método a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula (I) ao indivíduo. A doença pode ser o cancro. 0 cancro pode ser cancro do ovário ou algum outro tipo de cancro, por exemplo um cancro metastático. 0 cancro pode ser resistente à cisplatina e/ou paclitaxel. 0 composto de fórmula (I) pode ser administrado por via intraperitoneal. 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 13. 0 composto de fórmula (I) pode ser o composto 2. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Os compostos de fórmula (I) podem apresentar utilização na indução da apoptose em, ou inibição da proliferação de células estaminais cancerígenas do cérebro, tais como células estaminais de glioma. Por conseguinte, numa forma de realização, a invenção proporciona um método para inibição da proliferação de células estaminais cancerígenas do cérebro, tais como células estaminais de glioma, compreendendo o método o contacto das células estaminais cancerígenas do cérebro com uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) . 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 36, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6 e 9, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 13, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir de compostos 2 e 9. 0 composto de fórmula (I) pode ser composto 9. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Os compostos de fórmula (I) podem apresentar utilização no tratamento de uma doença num indivíduo causada por células estaminais cancerígenas do cérebro, tais como células estaminais de glioma. Por conseguinte, numa forma de realização, a invenção proporciona um método para o tratamento de uma doença num indivíduo causada por células estaminais cancerígenas do cérebro, tais como células estaminais de glioma, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula (I). A doença pode ser cancro. 0 cancro pode ser cancro do cérebro ou algum outro tipo de cancro, por exemplo um cancro metastático. 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 36, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6 e 9, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 13, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2 e 9. 0 composto de fórmula (I) pode ser o composto 9. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Noutra forma de realização, a invenção proporciona um método para o tratamento de cancro num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula (I). 0 cancro pode ser cancro colo-rectal, cancro do cérebro (tal como por exemplo, glioma, DIPG ou meduloblastoma), cancro do ovário, cancro pancreático, cancro da próstata, cancro da mama, cancro do pulmão, cancro do fígado, melanoma, neuroblastoma ou ascite maligna. 0 cancro do cérebro pode ser adulto ou pediátrico. 0 cancro pode ser cancro do ovário, cancro da próstata, cancro do cérebro ou neuroblastoma. 0 cancro pode ser cancro do ovário, cancro da próstata ou cancro do cérebro. 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 13 e 36, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir de compostos 2, 6, 9 e 13. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento do cancro do cérebro num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto da fórmula (I). 0 cancro do cérebro pode ser glioma, por exemplo glioblastoma, DIPG ou meduloblastoma. 0 cancro do cérebro pode ser adulto ou pediátrico. 0 cancro pode ser um cancro que recidivou. 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 36, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 13, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6 e 9, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9 e 13, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir de compostos 2 e 9. 0 composto de fórmula (I) pode ser o composto 9. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. 0 glioma pode ser resistente a TMZ ou susceptível a TMZ. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Ainda numa forma de realização adicional, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento do cancro da próstata num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto da fórmula (I). 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 19-22, 24 e 32 a 41, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 19-22, 24 e 32 a 40. O composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos de 33 a 41 ou a partir dos compostos de 33 a 40. O composto de fórmula (I) pode ser o composto 33 ou 36. O composto de fórmula (I) pode ser o composto 36. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+). O composto de fórmula (I) pode ser administrado por via rectal.

Ainda numa forma de realização adicional, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento do neuroblastoma num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto da fórmula (I). O composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. O composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 19-22, 24 e 32 a 41, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 19-22, 24 e 32 a 40. O composto de fórmula (I) pode ser o composto 9 ou o composto 36. O neuroblastoma pode ser neuroblastoma pediátrico. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Ainda numa forma de realização adicional, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento do melanoma num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto da fórmula (I) . O composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. O composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 19-22, 24 e 32 a 41, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 19-22, 24 e 32 a 40. O composto de fórmula (I) pode ser o composto 9. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Noutra forma de realização ainda, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento da ascite maligna num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto da fórmula (I) . 0 composto de fórmula (I) pode ser qualquer associação de um ou mais dos compostos numerados de acordo com a invenção. 0 composto de fórmula (I) pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 19-22, 24 e 32 a 41, ou, alternativamente, pode ser seleccionado a partir dos compostos 2, 6, 9, 19-22, 24 e 32 a 40. O composto de fórmula (I) pode ser o composto 2 ou o composto 9. O composto de fórmula (I) pode ser o composto 2. Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero (+).

Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento de cancro do ovário, cancro peritoneal, ascite maligna, cancro uterino, cancro pancreático, cancro gástrico, cancro colo-rectal, cancro do fígado, cancro da mama, cancro do pulmão ou cancro da próstata, num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto 2. O composto pode ser utilizado na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. 0 composto pode estar na forma do enantiómero (+).

Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento de cancro do cérebro, neuroblastoma, melanoma, cancro do ovário, cancro pancreático, cancro do pulmão, cancro do fígado, cancro colo-rectal ou cancro da próstata, num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto 9. 0 cancro do cérebro pode ser glioma, por exemplo, DIPG. 0 composto pode ser utilizado na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. 0 composto pode estar na forma do enantiómero (+).

Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento de cancro da próstata, cancro do cérebro, cancro do pulmão, cancro do fígado, cancro da mama, melanoma, cancro pancreático, cancro do ovário ou cancro colo-rectal, num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto 36. 0 cancro do cérebro pode ser glioma, por exemplo, DIPG. 0 composto pode ser utilizado na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. 0 composto pode estar na forma do enantiómero (+).

Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) conforme definido anteriormente para utilização num método para o tratamento do cancro do fígado num indivíduo com sua necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de composto 20 ou composto 33. Os compostos podem ser utilizados na ausência de outros agentes quimioterapêuticos. Os compostos podem estar na forma do enantiómero ( + ).

Os especialistas na matéria irão reconhecer que os compostos e composições farmacêuticos da presente invenção podem ser administrados através de qualquer via de administração que entrega uma quantidade eficaz dos compostos para o tecido ou local a ser tratado. Em geral, os compostos e composições podem ser administrados por via parentérica (por exemplo, intravenosa, intraespinal, subcutânea ou intramuscular), oral ou tópica. A administração pode ser sistémica, regional ou local. Numa forma de realização, a administração pode ser rectal. A via de administração, em particular, a ser utilizada em qualquer circunstância dependerá de vários factores, incluindo a natureza do cancro a ser tratado, a gravidade e extensão do cancro, a dose necessária do determinado composto a ser administrado e os potenciais efeitos secundários do composto.

Em geral, as composições adequadas podem ser preparadas de acordo com os métodos que são conhecidos pelos especialistas na matéria vulgares e podem incluir veículos, diluentes e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Os veículos, diluentes e excipientes devem ser "aceitáveis" em termos de serem compatíveis com os outros constituintes da composição, e não prejudiciais para o seu recipiente.

Exemplos de veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis são água desmineralizada ou destilada; solução de soro fisiológico; óleos vegetais, tais como óleo de amendoim, óleo de cártamo, óleo de azeitona, óleo de semente de algodão, óleo de milho ou óleo de coco; óleos de silicone, incluindo polissiloxanos, tais como metilpolissiloxano, fenilpolissiloxano e metilfenilpolissiloxano; silicones voláteis; óleos minerais, tais como parafina líquida, parafina mole ou esqualano; derivados de celulose, tais como metilcelulose, etilcelulose, carboximetilcelulose, carboximetilcelulose de sódio ou hidroxipropilmetilcelulose; Cremaphor; ciclodextrinas; alcanóis inferiores, por exemplo etanol ou í-propanol; aralcanóis inferiores; polialquilenoglicóis inferiores ou alquilenoglicóis inferiores, por exemplo polietilenoglicol, polipropilenoglicol, etilenoglicol, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol ou glicerina; ésteres de ácidos gordos, tais como palmitato de isopropilo, miristato de isopropilo ou oleato de etilo; polivinilpirridona; ágar-ágar; carragenina; goma adragante ou goma árabica e vaselina. Tipicamente, o veículo ou veículos irão formar desde 10% até 99,9% em peso das composições.

As composições farmacêuticas da invenção podem estar numa forma adequada para administração por preparação injectável, na forma de uma formulação adequada para a administração oral (tais como cápsulas, comprimidos, comprimidos revestidos, elixires, por exemplo), na forma de uma pomada, creme ou loção adequada para administração tópica, numa forma adequada para administração como um colírio, numa forma de aerossol adequada para administração por inalação, tal como por inalação intranasal ou inalação oral, numa forma adequada para administração parentérica, isto é, preparação injectável subcutânea, intramuscular ou intravenosa.

Para administração como uma solução ou suspensão injectável, veículos ou diluentes não tóxicos e parentericamente aceitáveis podem incluir ciclodextrinas (por exemplo, Captisol®) Cremaphor, solução de Ringer, solução de soro fisiológico isotónica, solução de soro fisiológico tamponada com fosfato, etanol e 1,2-propilenoglicol. Para auxiliar a injecção e a distribuição, os compostos também podem ser adicionados a micelas ou lipossomas de PEG e não-PEGilados com identificadores de alvos específicos ligados às unidades de PEG, tal como o péptido RGD ou glutationa, para auxiliar a passagem através da barreira hematoencefálica.

Alguns exemplos de veículos, diluentes, excipientes e adjuvantes adequados para administração oral incluem ciclodextrinas, Cremaphor, óleo de amendoim, parafina líquida, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, alginato de sódio, goma arábica, goma de adragante, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, gelatina e lecitina. Além disso, estas formulações orais podem conter agentes aromatizantes e corantes adequados. Quando utilizado na forma de cápsulas, as cápsulas podem ser revestidas com compostos, tais como monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo que atrasam a desagregação.

Os adjuvantes incluem, tipicamente, emolientes, emulsionantes, agentes espessantes, conservantes, bactericidas e agentes tampão.

As formas sólidas para administração oral podem conter aglutinantes aceitáveis nas aplicações farmacêuticas humanas e veterinárias, edulcorantes, agentes desagregantes, diluentes, aromatizantes, agentes de revestimento, conservantes, lubrificantes e/ou agentes de retardamento. Aglutinantes adequados incluem goma arábica, gelatina, amido de milho, goma adragante, alginato de sódio, carboximetilcelulose ou polietilenoglicol. Edulcorantes adequados incluem sacarose, lactose, glicose, aspartamo ou sacarina. Agentes desagregantes adequados incluem amido de milho, metilcelulose, polivinilpirrolidona, goma de guar, goma xantana, bentonite, ácido alginico ou ágar-ágar. Diluentes adequados incluem lactose, sorbitol, manitol, dextrose, caulino, celulose, carbonato de cálcio, silicato de cálcio ou fosfato dicálcico. Agentes aromatizantes adequados incluem óleo de hortelã-pimenta, óleo de Wintergreen, aroma de cereja, laranja ou framboesa. Agentes de revestimento adequados incluem polímeros ou copolímeros de ácido acrílico e/ou ácido metacrílico e/ou seus ésteres, ceras, álcoois gordos, zeína, goma-laca ou glúten. Conservantes adequados incluem benzoato de sódio, vitamina E, alfa-tocoferol, ácido ascórbico, metilparabeno, propilparabeno ou bissulfito de sódio. Lubrificantes adequados incluem estearato de magnésio, ácido esteárico, oleato de sódio, cloreto de sódio ou talco. Agentes de retardamento adequados incluem monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo.

As formas liquidas para administração oral podem conter, para além dos agentes anteriores, um veiculo liquido. Veículos líquidos adequados incluem água, óleos tais como óleo de azeitona, óleo de amendoim, óleo de sésamo, óleo de girassol, óleo de cártamo, óleo de coco, parafina líquida, etilenoglicol, propilenoglicol, polietilenoglicol, etanol, propanol, isopropanol, glicerol, álcoois gordos, triglicéridos ou suas misturas.

As suspensões para administração oral podem ainda incluir agentes dispersantes e/ou agentes de suspensão. Agentes de suspensão adequados incluem carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, polivinilpirrolidona, alginato de sódio ou álcool acetílico. Agentes dispersantes adequados incluem lecitina, ésteres de polioxietileno de ácidos gordos, tais como ácido esteárico, polioxietileno de sorbitol mono- ou di-oleato, estearato ou -laurato, polioxietileno de sorbitano mono- ou di-oleato, -estearato ou -laurato e outros semelhantes.

As emulsões para administração oral podem ainda conter um ou mais agentes emulsionantes. Os agentes emulsionantes adequados incluem agentes dispersantes conforme exemplificado anteriormente ou gomas naturais, tais como goma de guar, goma arábica ou goma adragante.

Os métodos para a preparação de composições administráveis por via parentérica são evidentes para os especialistas na matéria, e são descritos em maior detalhe, por exemplo, em Remington 's Pharmaceutical Science, 15a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., que são aqui dados como incorporados por citação.

As formulações tópicas podem compreender uma substância activa em conjunto com um ou mais veiculos aceitáveis e, facultativamente, quaisquer outras substâncias terapêuticas. Formulações adequadas para administração tópica incluem preparações liquidas ou semi-líquidas adequadas para penetração através da pele até ao local onde o tratamento é necessário, tais como linimentos, loções, cremes, pomadas ou pastas, e gotas adequadas para administração no olho, ouvido ou nariz.

As gotas de acordo com a presente invenção podem compreender soluções ou suspensões aquosas ou oleosas estéreis. Estas podem ser preparadas por dissolução da substância activa numa solução aquosa de um agente bactericida e/ou fungicida e/ou qualquer outro conservante adequado, e incluindo facultativamente um agente de humedecimento. A solução resultante pode então ser decantada por filtração, transferida para um recipiente adequado e esterilizada. A esterilização pode ser obtida por autoclavagem ou mantendo a 90°C a 100°C durante meia hora, ou filtração, seguida por transferência para um recipiente através de uma técnica asséptica. Exemplos de agentes bactericidas e fungicidas adequados para inclusão nas gotas são nitrato ou acetato de fenilmercúrico (0,002%), cloreto de benzalcónio (0,01%) e acetato de clorexidina (0,01%). Solventes adequados para a preparação de uma solução oleosa incluem glicerol, álcool diluído e propilenoglicol.

As loções de acordo com a presente invenção incluem as adequadas para aplicação na pele ou olho. Uma loção oftálmica pode compreender uma solução aquosa estéril contendo facultativamente um bactericida e pode ser preparada por métodos semelhantes aos descritos anteriormente em relação à preparação de gotas. As loções ou linimentos para aplicação na pele também podem incluir um agente para acelerar a secagem e para arrefecer a pele, tal como um álcool ou acetona, e/ou um hidratante, tal como glicerol, ou óleo tal como óleo de azeitona.

Os cremes, pomadas ou pastas de acordo com a presente invenção são formulações semi-sólidas da substância activa para aplicação externa. Podem ser feitos através da mistura da substância activa finamente dividida ou em forma de pó, isolada ou em solução ou suspensão num líquido aquoso ou não-aquoso, com uma base gordurosa ou não gordurosa. A base pode compreender hidrocarbonetos, tais como parafina dura, mole ou líquida, glicerol, cera de abelha, um sabão metálico; uma mucilagem; um óleo de origem natural, tal como amêndoa, milho, amendoim, rícino ou azeitona; gordura de lã ou seus derivados, ou um ácido gordo, tal como ácido esteárico ou oleico em conjunto com um álcool, tal como propilenoglicol ou macrogóis. A composição pode incorporar qualquer agente tensoactivo adequado, tal como um tensoactivo aniónico, catiónico ou não iónico, tais como ésteres de sorbitano ou seus derivados de polioxietileno. Também podem ser incluídos agentes de suspensão, tais como gomas naturais, derivados de celulose ou materiais inorgânicos, tais como sílicas siliciosas, e outros compostos tal como lanolina.

Em algumas formas de realização, as composições são administradas na forma de supositórios adequados para administração rectal dos compostos da fórmula (I) . Estas composições são preparadas através de mistura do composto de fórmula (I) com um excipiente não irritante adequado que é sólido a temperaturas normais, mas líquido à temperatura rectal e irá, por conseguinte, derreter no recto para libertar o composto de fórmula (I). Esses materiais incluem manteiga de cacau, gelatina glicerinada, óleos vegetais hidrogenados, misturas de polietilenoglicóis de vários pesos moleculares e ésteres de ácidos gordos de polietilenoglicol.

As composições também podem ser administradas ou distribuídas até às células alvo na forma de lipossomas. Os lipossomas são genericamente derivados de fosfolípidos ou outras substâncias lipídicas e são formados por cristais líquidos hidratados mono- ou multi-lamelares que são dispersados num meio aquoso. Exemplos específicos de lipossomas utilizados na administração ou distribuição de uma composição para células alvo são colesterol sintético (Sigma), o fosfolípido 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC); Avanti Polar Lipids), o lípido PEG 3-N-[(-metoxipoli(etilenoglicol)2000)carbamoil]-1,2-dimirestiloxi-propilamina (PEG-cDMA), e o lípido catiónico 1.2- di-o-octadecenil-3-(N,N-dimetil)aminopropano (DODMA) ou 1.2- dilinoleiloxi-3-(N,N-dimetil)aminopropano (DLinDMA) numa proporção molar de 55:20:10:15 ou 48:20:2:30, respectivamente, PEG-cDMA, DODMA e DLinDMA. O lipossoma pode ser construído a partir de 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[metoxi(polietilenoglicol)-2000] (DSPE PEG2000) e fosfatidilicolina derivada de soja e hidrogenada entre 50-100%, por exemplo, Soy PC-75 ou Soy PC-100. PEG's de diferentes PM podem ser utilizados e ligados covalentemente com vários agentes específicos de direccionamento, tais como glutationa, péptidos RGD ou outros agentes de direccionamento de lipossomas reconhecidos. Pode ser utilizado qualquer lípido não tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizável, capaz de formar lipossomas. As composições na forma de lipossomas podem conter agentes de estabilização, conservantes, excipientes e outros semelhantes. Os lípidos preferidos são os fosfolípidos e as fosfatidilcolinas (lecitinas), naturais e sintéticos. Os métodos para formar lipossomas são conhecidos na técnica, e em relação a isso, é citado em específico:

Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, Nova Iorque, NY (1976), p. 33 et seq.

As composições também podem ser administradas na forma de microparticulas ou nanoparticulas. As micropartículas biodegradáveis formadas a partir de polilactida (PLA), polilactida-co-glicolida (PLGA) e epsilon-caprolactona (έ-caprolactona) têm sido amplamente utilizadas como veículos de fármacos para aumentar a semi-vida no plasma e assim prolongar a eficácia (R. Kumar, M., 2000, J. Pharm. Pharmaceut. Sei. 3(2) 234-258). As micropartícuias têm sido formuladas para a administração de uma variedade de candidatos a fármacos, incluindo vacinas, antibióticos e ADN. Além disso, estas formulações têm sido desenvolvidas para várias vias de administração, incluindo injecção subcutânea, injecção parentérica, injecção intravenosa e inalação.

As composições podem incorporar uma matriz de libertação controlada que é composta por isobutirato de acetato de sacarose (SAIB) e um solvente orgânico ou mistura de solventes orgânicos. Podem ser adicionados adjuvantes poliméricos ao veículo como um modificador de libertação para aumentar ainda mais a viscosidade e retardar a taxa de libertação. O SAIB é um aditivo alimentar bem conhecido. É um derivado da sacarose muito hidrofóbico, totalmente esterifiçado, com uma proporção nominal de seis grupos isobutirato para dois grupos acetato. Como um éster misto, o SAIB não cristaliza mas existe como um líquido viscoso transparente. A mistura de SAIB com um solvente orgânico farmaceuticamente aceitável, tal como etanol ou álcool benzilico reduz a viscosidade da mistura suficientemente para proporcionar uma preparação injectável. Uma substância farmacêutica activa pode ser adicionada ao veiculo de administração SAIB para formar formulações de solução ou suspensão de SAIB. Quando a formulação é injectada por via subcutânea, o solvente é diferente da matriz permitindo que as misturas de SAIB-fármaco ou de SAIB-fármaco-polímero se organizem como uma formação de depósito in situ.

Para os objectivos da presente invenção, os compostos e composições podem ser administrados a indivíduos de forma terapêutica ou preventiva. Numa aplicação terapêutica, as composições são administradas a um doente que já sofre de cancro numa quantidade suficiente para curar ou pelo menos parar parcialmente o cancro e suas complicações. A composição deve proporcionar uma quantidade do composto ou agente suficiente para tratar eficazmente o indivíduo. A quantidade terapeuticamente eficaz para qualquer doente em particular dependerá de uma variedade de factores, incluindo: o cancro a ser tratado e a sua gravidade; a actividade do composto administrado; a composição em que o composto está presente; a idade, peso corporal, estado de saúde geral, sexo e dieta do indivíduo; o período de administração; a via de administração; a taxa de fixação do composto; a duração do tratamento; fármacos utilizados em associação ou concomitantes com o composto, em conjunto com outros factores relacionados bem conhecidos em medicina.

Um especialista na matéria seria capaz de, por experimentação de rotina, determinar uma quantidade eficaz, não tóxica de um composto que seria necessária para tratar ou prevenir um determinado cancro.

De um modo geral, está previsto que uma dose eficaz esteja no intervalo de cerca de 0,0001 mg até cerca de 1000 mg por kg de peso corporal em 24 horas; tipicamente, cerca de 0,001 mg até cerca de 750 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 0,01 mg até cerca de 500 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 0,1 mg até cerca de 500 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 0,1 mg até cerca de 250 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 1,0 mg até cerca de 250 mg por kg de peso corporal em 24 horas. Mais tipicamente, está previsto que um intervalo de dose eficaz esteja no intervalo de cerca de 1,0 mg até cerca de 200 mg por kg de peso corporal por 24 horas; cerca de 1,0 mg até cerca de 100 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 1,0 mg até cerca de 50 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 1,0 mg até cerca de 25 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 5,0 mg até cerca de 50 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 5,0 mg até cerca de 20 mg por kg de peso corporal em 24 horas; cerca de 5, 0 mg até cerca de 15 mg por kg de peso corporal em 24 horas.

De forma alternativa, uma dose eficaz pode ser até cerca de 500 mg/m2. Genericamente, está previsto que uma dose eficaz esteja no intervalo de cerca de 25 até cerca de 500 mg/m2, preferencialmente cerca de 25 até cerca de 350 mg/m2, mais preferencialmente cerca de 25 até cerca de 300 mg/m2, ainda mais preferencialmente cerca de 25 até cerca de 250 mg/m2, ainda mais preferencialmente cerca de 50 até cerca de 250 mg/m2, e ainda mesmo mais preferencialmente cerca de 75 até cerca de 150 mg/m2.

Tipicamente, em aplicações terapêuticas, o tratamento seria para a duração do estado de doença.

Adicionalmente, será evidente para um vulgar especialista na matéria que a quantidade óptima e espaçamento das doses individuais serão determinadas pela natureza e extensão do cancro a ser tratado, a forma, via e local de administração, e a natureza do determinado indivíduo a ser tratado. Além disso, essas condições óptimas podem ser determinadas por técnicas convencionais.

Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados isoladamente no tratamento de cancro ou, alternativamente, em associação com radioterapia e/ou cirurgia e/ou outros agentes terapêuticos, por exemplo agentes quimioterapêuticos e agentes imuno-estimulantes, como parte de uma terapêutica de associação. Os compostos de fórmula (I) podem sensibilizar células cancerígenas indiferenciadas para outros agentes quimioterapêuticos e/ou radioterapia.

Os termos "terapêutica de associação" e "complemento da terapêutica" têm como objectivo englobar a administração de múltiplos agentes terapêuticos de uma forma sequencial num regímen que irá proporcionar efeitos benéficos e tem como objectivo englobar a administração destes agentes numa única formulação ou em formulações separadas. A terapêutica de associação pode envolver os agentes activos a serem administrados em conjunto, sequencialmente, ou espaçados, conforme adequado em cada caso. As associações de agentes activos incluindo os compostos da invenção podem ser sinérgicas. 0 co-administração de compostos da fórmula (I) com outro (s) agente(s) terapêutico(s) pode ser efectuada por um composto da fórmula (I) que está na mesma forma farmacêutica unitária como o(s) outro(s) agente(s) terapêutico(s), ou o composto da fórmula (I) e o(s) outro(s) agente(s) terapêutico(s) podem estar presentes em formas farmacêuticas unitárias individuais e discretas que são administradas sequencialmente, ao mesmo tempo, ou a um tempo semelhante. A administração sequencial pode ser em qualquer ordem conforme necessário, e pode necessitar de um efeito fisiológico em curso do primeiro ou agente inicial para estar disponível quando o segundo ou agente posterior for administrado, especialmente quando for desejado um efeito cumulativo ou sinérgico. Quando administrados em separado, pode ser preferível para o composto de fórmula (I) e para o outro agente a ser administrado pela mesma via de administração, embora não seja necessário para que isto seja assim.

De acordo com várias formas de realização da presente invenção, um ou mais compostos de fórmula (I) podem ser incluídos na terapêutica de associação com cirurgia e/ou radioterapia e/ou um ou mais agentes quimioterapêuticos.

Existe uma grande quantidade de agentes quimioterapêuticos que estão actualmente em utilização, em avaliação clínica e em desenvolvimento pré-clínico, que poderiam ser seleccionados para o tratamento de cancros em associação com os compostos da fórmula (I). Esses agentes estão em várias categorias principais, nomeadamente, agentes do tipo antibiótico, agentes alquilantes, agentes antimetabólitos, agentes hormonais, agentes imunológicos, agentes do tipo interferão e uma categoria de agentes variados. De forma alternativa, podem ser utilizados outros agentes quimioterapêuticos, tais como inibidores de metaloproteinases da matriz (MMP). Agentes adequados que podem ser utilizados em terapêuticas de associação incluem aqueles listados, por exemplo, em Merck Index, An Encyclopaedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, 12a Ed., 1996.

Quando utilizados no tratamento de tumores sólidos, os compostos da fórmula (I) podem ser administrados com um ou mais dos seguintes agentes quimioterapêuticos: adriamicina, taxol, docetaxel, fluorouracilo, melfalano, cisplatina, interferão alfa, COMP (ciclofosfamida, vincristina, metotrexato e prednisona), etoposido, mBACOD (metotrexato, bleomicina, doxorubicina, ciclofosfamida, vincristina e dexametasona), PROMACE/MOPP (prednisona, metotrexato (c/ leucovin rescue), doxorrubicina, ciclofosfamida, taxol, etoposido/mecloretamina, vincristina, prednisona e procarbazina), vincristina, vinblastina, angioinibinas, TNP 470, pentosano polissulfato, factor de plaquetas 4, angiostatina, LM 609, SU 101, CM 101, Techgalan, talidomida, SP-PG e outros semelhantes. A presente invenção é adicionalmente descrita adiante através de citação aos exemplos seguintes não limitativos. Nos exemplos, os compostos de acordo com a fórmula (I), que estão dentro do âmbito da reivindicação, são os compostos 2, 3, 6, 9, 11, 13 e 15 a 41.

EXEMPLOS

Exemplo 1 - Sintese de compostos de fórmula (I)

Os compostos representativos da fórmula (I) foram preparados como se segue.

Passo 1. ZnCl2, POCI3, 70°C, 2 h; Passo 2. DiPEA, Ac20, 135°C, 18 h. Passo 3. THF, BH3.Me2S em THF, 35°C, 18 h; Passo 4. H2, Pd/C, EtOH, 3 bar, 40°C, 18 h.

Passo 1. (2,4-Di-hidroxi-3-metilfenil)(4-hidroxifenil)metanona (1-la) 2-Metilresorcinol (50 g, 1 eq.), ácido 4-hidroxibenzóico (55,5 g, 1 eq.), cloreto de zinco (120 g, 2,2 eq) e POCI3 (550 mL) foram adicionados a um balão sob N2 e agitação. A mistura foi aquecida a 70°C durante 2 horas, arrefecida até à temperatura ambiente e vertida em gelo/água (4 L) mantendo a temperatura a <30°C. 0 sólido foi filtrado, lavado com água (3 X 500 mL) . O sólido húmido foi então recristalizado a partir de IMS (250 mL) e seco para se obter o produto na forma de um sólido laranja com 85 g (87%). 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 12,91 (s, 1H) , 10,59 (s, 1H) , 10,30 (s, 1H) , 7,28 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 7,18 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 6,46 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 6,24 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 2, 02 (s, 3H) .

Outros análogos preparados através deste método: (2,4-Dihidroxifenil)(3-fluoro-4-hidroxifenil)metanona(1-lb) (47%). XH RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 11,90 (bs, 1H) , 7,51-7,32 (m, 3H) , 7,09 (t, J= 8,5 Hz, 1H) , 6, 45-6, 33 (m, 2H) . (2,4-Dihidroxi-3-metilfenil)(3-fluoro-4- hidroxifenil)metanona (1-lc) (41%). 1H RMN (400 MHz, DMSO- de) δ 12,72 (s, 1H), 10,76 (s, 1H), 10,65 (s, 1H), 7,43 (dd, J= 1, 96, 11,74 Hz, 1H) , 7,33 (d, J= 9,00 Hz, 2H) , 7,06 (t, J= 8,41 Hz, 1H) , 6,45 (d, J= 9,00 Hz, 1H) , 1,99 (s, 3H) . (2,4-Dihidroxi-3-metilfenil)(4-metoxi-3,5- dimetilfenil)metanona (1-ld) (63%). 1H RMN (300 MHz, DMSO- de) δ 12,89 (s, 1H) , 10,67 (s, 1H) , 10,15 (s, 1H) , 7,38-7,15 (m, 3H) , 6, 52-6, 43 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,28 (s, 6H) . (3, 5-Difluoro-4-hidroxifenil) (2,4-Dihidroxi-3-metilfenil)metanona (1-le) (43%). 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 12,61 (s, 1H) , 10,84 (bs, 1H) , 9,70 (bs, 1H) , 7,23-7,10 (m, 2H), 6, 98-6, 85 (m, 1H) , 2,20 (s, 3H) . (2,4-Dihidroxi-3-i-propil-fenil)(3-fluoro-4-hidroxifenil)metanona (1-lf) (18%). XH RMN (300 MHz, DMSO- de) δ 12,88 (bs, 1H) , 7,62 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,12 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 6,47 (d, J= 8,4 Hz, 1H) , 1,95 (m, 2H) , 1,65 (m, 2H) , 1,2 (t, J= 9,1Hz, 3H) . (2,4-Dihidroxi-5-etilfenil)(3-fluoro-4- hidroxifenil)metanona (1-lg) (77%) ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 7,41 (d, J= 1,2 Hz, 1H) , 7,32 (d, J= 1,4 Hz, 1H) , 7,22 (dd, J= 1,2, 8,2 Hz), 7,08 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 2,51 (q, J = 9,1 Hz, 2H), 1,22 (t, J = 9,2 Hz, 3H). (2,4-Dihidroxi-3-metilfenil) (3 — 4 — metilenodioxifenil)metanona (1-lh) (22%) 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 12,65 (br s, 1 H) , 9,87 (br s, 1 H) , 7,38 (d, J = 8,2 Hz, 1 H) , 7,25 (m, 2H) , 7,05 (d, J= 8,3 Hz, 1H) , 6,43 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 6,06 (s, 2H) , 2,02 (s, 3H) . (2,4-Dihidroxi-3-metilfenil)(4-nitrofenil)metanona (1-li) (38%) XH RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 12,96 (br s, 1H) , 8,33 (d, J= 8,7 Hz, 2H) , 7,97 (d, J= 8,8 Hz, 2H) , 7,09 (d, J= 8,12

Hz, 1H), 6,90 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 2,05 (s, 3H) . (2,4-Dihidroxi-3-metilfenil) (4-acetamidofenil)metanona (1-lj) (38%) χΗ RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 13,21 (br s, 1H), 9,66 (br s, 1H), 7,88 (d, J= 8,1 Hz, 2H), 7,44 (d, J= 8,4 Hz, 1H) , 6,56 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 6,10 (s, 1H) , 2,09 (s, 3H), 2,02 (s, 3H) . (2,4-Dihidroxi-5-etil-3-metilfenil)(4-hidroxifenil)metanona (1-lk) (42%) 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 13,55 (s, 1H) , 11,20 (br, 1H) , 10,90 (br, 1H) , 7,44 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,11 (s, 1H) , 6, 99 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 3,45 (q, J= 7,9 Hz, 2H) , 2,2 (s, 3H), 1,34 (t, J= 8,0 Hz, 3H). (2,4-Dihidroxi-3-etilfenil)(4-hidroxifenil)metanona (1-11) XH RMN (300 ΜΗζ, DMSO-de) δ 12,2 (s, 1Η) , 7,43 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,11 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 8,4 Hz, 2H) , 2,65 (m, 2H) , 1,04 (t, J = 7,8 Hz, 3H) . (2,4-Dihidroxi-5-metilfenil)(4-hidroxifenil)metanona (1-lm) !h RMN (300 ΜΗζ, DMSO-de) δ 11,90 (s, 1H) , 10, 90-95 (br, 2H) , 7,40 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,33 (s, 1H) , 7,11 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 6,33 (s, 1H) , 2,05 (s, 3H) . (2,4-Dihidroxi-5-fluorofenil)(3-fluoro-4- hidroxifenil)metanona (1-ln) 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 7,99 (m, 1H), 7,55-7,35 (m, 3H), 7,05 (m, 1H), 6,55 (s, 1H). (5-Cloro-2,4-dihidroxifenil)(3-fluoro-4- hidroxifenil)metanona (l-lo) XH RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 11,11 (s, 1H), 7,89 (m, 1H), 7,55-45 (m, 2H), 7,11 (s, 1H) , 6,5 (s, 1H) . (2,4-Dihidroxi-3-metilfenil) (3-cloro-4- hidroxifenil)metanona (1-lp) 1H RMN (300 MHz, DMSO-dô) δ 12,91 (s, 1H) , 11,11 (br, 1H) , 10,65 (br, 1H) , 7,90 (s, 1H) , 7.55 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 7,36 (d, J= 8,3 Hz, 1H) , 7,11 (d, J= 8,3 Hz, 1H) , 6,23 (d, J= 8,2 Hz, 1H) 2,05 (s, 3H) . (2,4-Dihidroxi-5-etil-3-metilfenil) (3-fluoro-4-hidroxifenil) metanona (1-lq) (42%) 1H RMN (300 MHz, DMSO- de) δ 13,55 (s, 1H) , 11,20 (br, 1H) , 10,90 (br, 1H) , 7,55- 7,45 (m, 2H) , 7,11 (brs, 1H) , 7,01 (s, 1H) , 3,45 (q, J= 7,9

Hz, 2H), 2,2 (s, 3H), 1,34 (t, J= 8,0 Hz, 3H). (2,4-Dihidroxi-5-etil-3-metilfenil)(3-metil-4-hidroxifenil)metanona (1-lr) (41%) ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 9,55 (s, 1H) , 8,20 (br, 1 Η) , 7,90 (br, 1H) , 6,65 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 6,60 (dd, J= 7,1, 2,1 Hz, 1H) , 6,45 (s, 1H) , 6,35 (d, J= 2,1 Hz, 1H) , 3,15 (q, J = 7,9 Hz, 2H) , 2,2 (s, 3H) , 1,14 (t, J = 8,0 Hz, 3H) . (2,4-Dihidroxi-5-etil-3-metilfenil)(2-metil-4-hidroxifenil)metanona (1-ls) (32%) XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,59 (s, 1H), 8,60 (br, 1H) , 7,95 (br, 1H) , 6,68 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,60 (s, 1H) , 6,56 (d, J = 7.Hz, 1H) , 6,35 (dd, J = 6,9, 2,1 Hz, 1H) , 3,25 (q, J= 7,8 Hz, 2H) , 2,2 (s, 3H) , 1,24 (t, J = 8,0 Hz, 3H). (2,4-Dihidroxi-5-etil-3-metilfenil)(2-fluoro-4-hidroxifenil)metanona (1-lt) (38%) 1H RMN (300 MHz, DMSO-dô) δ 10,9 (s, 1H) , 9,16 (br, 1H) , 7,95 (br, 1H) , 6,78 (dd J = 6,9, 6,2 Hz, 1H) , 6,62 (brd, J = 7,1 Hz, 1 H) , 6,56 (s, 1H) , 6,45 (brd, J = 6,9 Hz, 1H) , 3,28 (q, J = 7,8 Hz, 2H) , 2,2 (s, 3H) , 1,14 (t, J= 8,0 Hz, 3H) .

Passo 2. Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil) -4- (4-acetoxifenil) -8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2a) (2,4-Dihidroxi-3-metilfenil) (4-hidroxifenil)metanona (36,8 g, 1 eq.) e ácido 3,5-dimetoxi-4-hidroxifenilacético (32 g, 1 eq.); foram adicionados a anidrido acético (110 mL) , com agitação, a diisopropiletilamina (64,4 g, 4,5 eq.) foi em seguida adicionada durante 5 minutos. A reacção foi aquecida a 130-140°C durante 18 horas, em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e vertida sobre água (750 mL) . O aquoso foi extraído com DCM (2 x 750 mL), lavado com água (500 mL), solução saturada de cloreto de sódio (300 mL) , secouado sobre

MgSCN, em seguida concentrado para se obter um sólido castanho escuro viscoso. 0 material em bruto foi tratado com EtOAc (200 mL) , agitado, aquecido em refluxo e arrefecido, o sólido removido por filtração, lavado com EtOAc gelado (50 mL) para se obter um sólido amarelo claro (66 g). O sólido foi tratado 2 X EtOAc (100 mL) com agitação à temperatura ambiente durante 30 min, filtrou-se para se obter um sólido branco (62 g, 76%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,18-7,07 (m, 5H) , 6,93 (d, J= 8,3 Hz, 1H) , 6,37 (s, 2H) , 3,62 (s, 6H) , 2,38 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (s, 3H).

Outros análogos preparados através deste método: Acetato de 4-(7-acetoxi-8-metil-2-oxo-3-(3, 4,5-

trimetoxifenil) -2íZ-cromen-4-il) fenilo (l-2b) (61%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,17-7,06 (m, 5H) , 6,91 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 6,34 (s, 2H) , 3,80 (s, 3H) , 3,65 (s, 6H) , 2,38 (s, 3H) , 2, 36 (s, 3H), 2,30 (s, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3, 5-di-terc-butilfenil-4-(4-acetoxifenil)-8-metil-2-oxo-2H-cromen-7-ilo (1-2C) (21 %) . XH RMN (300 MHz, CDCI3 ) δ 7,20-7,00 (m, 7H) , 6, 94-6, 86 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,09 (s, 9H) .

Acetato de 4-(7-acetoxi-8-metil-2-oxo-3-(3,4,5-

trifluorofenil)-2íí-cromen-4-il) fenilo (l-2d) (20%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,18-7,08 (m, 5H) , 7,01 (d, J= 8,8 Hz, 1H) , 6,80-6,71 (m, 2H) , 2,38 (s, 3H) , 2,36 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) .

Acetato de 4-(7-acetoxi-2-oxo-3-(3,4,5-trifluorofenil)-2H-cromen-4-il)-2-fluorofenilo (l-2e) (76%). 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 7,57-7,29 (m, 4H) , 7,21-7,10 (m, 4H) , 2,31 (s, 6H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil-4-(4-acetoxi-3-fluorofenil)-2-oxo-2H-cromen-7-ilo (l-2f) (68%). 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 7,31-7,20 (m, 2H) , 7,17-7,10 (m, 1H) , 7,07- 6,98 (m, 2H) , 6, 94-6, 88 (m, 1H) , 6,38 (s, 2H) , 3,64 (s, 6H) , 2,36 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,29 (s, 3H).

Acetato de 4-(7-acetoxi-2-oxo-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-2H-cromen-4-il)-2-fluorofenilo (l-2g) (50%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,32-7, 22 (m, 2H) , 7,18-7,05 (m, 1H) , 7,08-6, 90 (m, 3H), 6,33 (s, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,69 (s, 6H), 2,38 (s, 6H). Acetato de 4-(4-acetoxi-3-fluorofenil)-8-metil-2-oxo-3-

(3, 4,5-trifluorofenil) -2íZ-cromen-7-ilo (1-2 h) (49%) . 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,37-7, 05 (m, 4H) , 7, 03-6, 88 (m, 2H) , 6,81-6,70 (m, 1H) , 6,38 (s, 1H) , 2,36 (bs, 9H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-acetoxi-3-fluorofenil)-8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2i) (46%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,18-6,87 (m, 5H) , 6,39 (s, 2H) , 3,66 (s, 6H), 2,38 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,33 (s, 3H) , 2,29 (s, 3H) .

Acetato de 4-(4-acetoxi-3-fluorofenil)-8-metil-2-oxo-3-

(3,4,5-trimetoxifenil) -2fí-cromen-7-ilo (1 — 2j) (49%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,16-6,89 (m, 5H) , 6,34 (s, 2H) , 3,82 (s, 3H), 3,68 (s, 6H), 2,38 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,31 (s, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-metoxi-3,5-dimetilfenil)-8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2k) (30%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,20 (d, J= 8,4 Hz, 1H) , 6,92 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,77 (s, 2H) , 6,42 (s, 2H) , 3,72 (s, 3H) , 3,61 (s, 6H) , 2,38 (s, 3H) , 2,36 (s, 3H) , 2,30 (s, 3H) , 2,20 (s, 6H) .

Acetato de 4-(4-metoxi-3,5-dimetilfenil)-8-metil-2-oxo-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-2H-cromen-7-ilo (1-21) (34%). !H RMN (300 MHz, CDC13) δ 7,15 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,90 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,76 (s, 2H) , 6,38 (s, 2H) , 3,80 (s, 3H) , 3,71 (s, 3H), 3,66 (s, 6H) , 2,39 (s, 3H) , 2,37 (s, 3H) , 2,30 (s, 3H), 2,20 (s, 6H).

Acetato de 4-(4-acetoxi-3,5-difluorofenil)-3-(4-acetoxi-3, 5-dimetoxifenil) -8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2m) (30%). XH RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,03-6, 90 (m, 3H) , 6,84-6,76 (m, 1H), 6,47 (s, 2H), 3,73 (s, 6H), 2,39 (s, 3H) , 2,37 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,28 (s, 3H).

Acetato de 4-(4-acetoxi-3,5-difluorofenil)-8-metil)-2-oxo-

3- (3,4,5-trimetoxifenil) -2fí-cromen-7-ilo (l-2n) (22%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,03-6, 77 (m, 4H) , 6,40 (s, 2H) , 3,77 (s, 3H), 3,71 (s, 6H), 2,38 (s, 3H), 2,36 (s, 3H) , 2,34 (s, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(3-fluoro-4-acetoxifenil)-8-propil-2-oxo-2H-cromen-7-ilo (l-2o) (34%). !H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,18 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,15-09 (m, 2H) , 6,87 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 6,82 (d, J= 8,5 Hz, 1H) , 6,36 (s, 2H) , 3,73 (s, 6H) , 2,75 (t, J= 7,6 Hz, 2H) , 2,13 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 2,05 (s, 3H) , 1,65 (m, 1 H) , 1,06 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(3-fluoro-4-acetoxif enil)-6-etil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2p) (34%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,18 (s, 1H) , 7,16 (m, 1H) , 7,08 (s, 1H) , 7,04 (dd, J= 8,2, 1,5 Hz, 1H) , 6,95 (dd, J= 8,3, 2,5 Hz, 1H) , 6,35 (s, 2H) , 3,56 (s, 6H) , 2,56 (q, J = 7,6 Hz, 2Η) , 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H) , 2,09 (s, 3H) , 1,04 (t, J = 7,7 Hz, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(3,4- metilenodioxifenil) -8-metil-2-oxo-2i7-cromen-7-ilo (l-2q) (75%). XH RMN (300 MHz, CDC13) 5 7,20 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6.96 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 6,75 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 6,56 (d, J= 8,3 Hz, 1H) , 6,51 (s, 1H) , 6,34 (s, 2H) , 5,96 (s, 1H) , 5,91 (s, 1H) , 3,58 (s, 6H) , 2,25 (s, 3H) , 2,20 (s, 3H) , 1,65 (s, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-

nitrofenil)-8-metil-2-oxo-2Jí-cromen-7-ilo (l-2r) (25%). 1H

RMN (300 MHz, CDCI3) δ 8,25 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H) , 6,96 (m, 2H) , 6,34 (s, 2H) , 3,67 (s, 6H) , 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,89 (s, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4- etilaminof enil)-8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2s) (45%). XH RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,51 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,17 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 7,09 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 6,87 (d, J= 8,3

Hz, 1H), 6,43 (s, 2H), 3,61 (s, 6H), 2,42 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,96 (s, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4- acetoxifenil)-6-etil-8-metil-2-oxo-2H-cromen-7-ilo (l-2t) (25%). XH RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,18 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 6.96 (s, 1 H) , 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 6,35 (s, 2H) , 3,61 (s, 6H) , 2,32 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,25 (s, 3H) , 2,21 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,05 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-

acetoxifenil)-8-etil-2-oxo-2H-cromen-7-ilo (l-2u) (45%). 1H

RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,21 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,97 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 6,91 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,41 (s, 2H) , 3,61 (s, 6H) , 2,81 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,18 (s, 3H) , 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-

acetoxifenil)-6-metil-2-oxo-2H-cromen-7-ilo (l-2v) (55%). 1H

RMN (300 MHz, CDC13) δ 7,21 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,18 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,07 (m, 1H) , 6,88 (m, 1H) , 6,34 (s, 2H) , 3,61 (s, 6H) , 2,28 (s, 3H) , 2,21 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 1,96 (s, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-acetoxi-3-fluorofenil)-5-fluoro-2-oxo-2íZ-cromen-7-ilo (l-2w) (15%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,07-7,02 (m, 2H) , 6, 96-86 (m, 1H) , 6,58 (s, 1H) , 6,50 (s, 1H) , 6,36 (s, 2H) , 3,61 (s, 6H) , 2,23 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,18 (s, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-

acetoxifenil)-6-cloro-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2x) (45%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,21 (m, 2H) , 7,18 (dd, J= 1,4, 1,2

Hz, 1H), 7,02 (dd, J= 1,2, 8,1 Hz, 1H), 6,96 (dd, J= 1,3, 8,6 Hz, 1H) , 6,41 (s, 2H) , 3,61 (s, 6H) , 2,45 (s, 3H) , 2,35 (s, 3H) , 2,21 (s, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-acetoxi-3-clorofenil)-8-metil-2-oxo-2A-cromen-7-ilo (l-2y) (55%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,31 (s, 1H) , 7,10 (m, 2H) , 7,05-7,01 (m, 2H), 6,45 (s, 2H) , 3,66 (s, 6H) , 2,35 (s, 3H) , 2,21 (s, 3H), 2,18 (s, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-acetoxi-3-fluorofenil) -6-etil-8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2z) (35%). XH RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7, 07-7,02 (m, 2H) , 6,96-88 (m, 1H) , 6,86 (s, 1H) , 6,35 (s, 2H) , 3,61 (s, 6H) , 2,32 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 1,95 (s, 3H) , 1,05 (t, J= 7,2 Hz, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-acetoxi-3-metilfenil) -6-etil-8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2aa) (38%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 6,68 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 6.65 (dd, J = 7,1, 2,1 Hz, 1H) , 6,45 (s, 1H) , 6,35 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 5,98 (s, 2H) , 3,61 (s, 6H) , 2,38 (q, J= 7,2

Hz, 2H) , 2,26 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 1,95 (s, 3H), 1,05 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetilfenil)-4-(4-acetoxi-3-metilfenil) -6-etil-8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-ilo (l-2bb) (38%). XH RMN (300 MHz, CDCI3) δ 6,68 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 6.65 (dd, J = 7,1, 2,1 Hz, 1H) , 6,45 (s, 1H) , 6,35 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 6,23 (s, 2H) , 2,31 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,23 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,14 (s, 3H) , 2,11 (s, 6H) , 1,98 (s, 3H) , 1, 15 (t, J = 7,2 Hz, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-acetoxi-2-metilfenil)-6-etil-8-metil-2-oxo-2H-cromen-7-ilo (l-2cc) (36%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDCI3) δ 6,68 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 6,60 (s, 1H), 6,46 (d, J= 7.Hz, 1H) , 6,30 (dd, J= 6,9, 2,1 Hz, 1H), 5,92 (s, 2H) , 3,65 (s, 6H) , 2,33 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 2,2 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 1,95 (s, 3H) , 1, 15 (t, J = 7,2 Hz, 3H) .

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetilfenil)-4-(4-acetoxi-2-fluorofenil)-6-etil-8-metil-2-oxo-2H-cromen-7-ilo (l-2dd) (38%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDCI3) δ 6,88 (dd J = 6,9, 6,5 Hz,

1H) , 6,66 (brd, J = 7,0 Hz, 1H) , 6,56 (s, 1H) , 6,45 (brd, J = 6,5 Hz, 1H) , 2,31 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 2,29 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,12 (s, 6H) , 1,95 (s, 3H) , 1,17 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Passo 3. 3-(4-Hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4- hidroxifenil)-8-metil-2ff-cromen-7-ol (l-3a)

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-acetoxifenil)-8-metil-2-oxo-2i7-cromen-7-ilo (24 g, 1 eq) , e THF (1500 mL) foram adicionados a um balão sob N2 e arrefecidos a 5°C. Foi adicionado complexo de borano-dimetilsulfureto 2 M em THF (400 mL, 18 eq) durante 10 minutos. A solução foi agitada durante 2 horas a esta temperatura, em seguida aqueceu-se até 40°C o/n. A mistura foi vertida em HCl 2 M (2000 mL) a <15°C, em seguida foi extraída com EtOAc (2 x 1000 mL) . Os orgânicos associados foram lavados com água (2 X 1000 mL) , solução saturada de cloreto de sódio, secados (MgSOO , em seguida evaporados até à secura obtendo-se um sólido amarelo viscoso em bruto <1-3a). O material foi purificado por cromatografia em coluna com eluição com heptano para heptano/EtOAc 3:2. As fracções do produto foram removidas para proporcionar o composto do título (9,5 g, 53%) sob a forma de um sólido laranja. 1H RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 8,39 (bs, 2H) , 7,14 (s, 1H) , 6,98 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 6,82 (d, J = 8, 6 Hz, 2H) , 6,54 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,40 (d, J= 7,9 Hz, 1H) , 6,35 (s, 2H) , 5,07 (s, 2H), 3,61 (s, 6H), 2,12 (s, 3H).

Outros análogos preparados através deste método: 4-(4-Hidroxifenil)-8-metil-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-2H- cromen-7-ol (l-3b) (47%). Ή RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8,38 (bs, 2H) , 6,98 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 6,81 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 6,53 (d, J= 7,9 Hz, 1 H) , 6, 43-6, 35 (m, 3H) , 5,08 (s, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,61 (s, 6H), 2,22 (s, 3H). 3- (3,5-Di-terc-butil-4-hidroxifenil)-4-(4-hidroxifenil)-8- metil-2fí-cromen-7-ol (l-3c) (36%) . 1H RMN (300 MHz, Acetona- de) δ 8,36-8,29 (m, 2H) , 7,50-7,42 (m, 1H) , 6, 94-6, 77 (m, 5H) , 6,52 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,39 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 5,97 (s, 1H) , 5,09 (s, 2H) , 2,13 (s, 3H) , 1,51 (s, 9H) , 1,30 (s, 9H) . 4- (4-Hidroxifenil)-8-metil-3-(3,4,5-trifluorofenil)-2H- cromen-7-ol (l-3d) (41%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8,52 (bs, 1H) , 8,50 (bs, 1H) , 6,98 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 6,90-6,80 (m, 4H) , 6,54 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,47 (d, J = 7, 9 Hz, 1H) , 5, 05 (s, 2H), 2,12 (s, 3H) . 4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-3-(3,4,5-trifluorofenil)-2 H-cromen-7-ol (l-3e) (34%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 8,80 (bs, 1H) , 8,66 (bs, 1H) , 7, 05-6, 77 (m, 5H) , 6, 74-6, 66 (m, 1H) , 6, 45-6, 34 (m, 2H) , 5,03 (s, 2H) . 4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil) -2i7-cromen-7-ol (l-3f) (44%) . 1H RMN (300 MHz,

Acetona-dô) δ 8,72 (bs, 1H) , 8,57 (bs, 1H) , 7,20 (bs, 1H) , 7, 06-6, 96 (m, 1H) , 6.91-6.80 (m, 2H) , 6,81-6,75 (m, 1H) , 6, 45-6, 37 (m, 4H) , 5,08 (s, 2H) , 3,63 (s, 6H) . 4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-2 H-cromen-7-ol (l-3g) (48%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dõ) δ 8,74 (bs, 1H) , 8,59 (bs, 1H) , 7, 04-6, 80 (m, 3H) , 6, 84-6, 82 (m, 1H), 6,48-6, 37 (m, 4H) , 5,08 (s, 2H) , 3,70 (s, 3H) , 3,62 (s, 6H) . 4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-8-metil-3-(3, 4,5-trifluorofenil)-2íZ-cromen-7-ol (l-3h) (48%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dõ) δ 8,80 (bs, 1H) , 8,57 (bs, 1H) , 7,04-6,75 (m, 5H), 6,54 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,43 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 5, 06 (s, 2H), 2,12 (s, 3H) .

4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil) -8-metil-2íZ-cromen-7-ol (l-3i) (53%) . J-H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8,66 (bs, 1H) , 8,37 (bs, 1H) , 7,19 (bs, 1H) , 7, 06-6, 76 (m, 3H) , 6,53 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,45-6,35 (m, 3H), 5,07 (s, 2H) , 3,63 (s, 6H) , 2,17 (s, 3H) . 4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-8-metil-3-(3, 4,5-trimetoxifenil) -27í-cromen-7-ol (l-3j) (49%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8,68 (bs, 1H) , 8,49 (bs, 1H) , 7,04-6,77 (m, 3H) , 6,53 (d, J= 8,5 Hz, 1H) , 6, 48-6, 36 (m, 3H) , 5,07 (s, 2H) , 3,68 (s, 3H) , 3,65 (s, 6H) , 2,13 (s, 3H) . 3- (4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-metoxi-3, 5-

dimetilf enil)-8-metil-2i7-cromen-7-ol (l-3k) (22%). *Η RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 8,37 (bs, 1H) , 7,21 (bs, 1H) , 6,32 (s, 2H), 6, 49-6, 34 (m, 4H) , 5,08 (s, 2H) , 3,71 (s, 3H) , 3,60 (s, 6H), 2,22 (s, 6H), 2,13 (s, 3H). 4- (4-Metoxi-3,5-dimetilfenil)-8-metil-3-(3,4,5- trimetoxifenil)-2H-cromen-7-ol (1-31) (15%). ΧΗ RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 8,41 (bs, 1H) , 6,81 (s, 2H) , 6,49-6,36 (m, 4H) , 5,08 (s, 2H) , 3,73 (s, 3H) , 3,66 (s, 3H) , 3,61 (s, 6H), 2,22 (s, 6H), 2,12 (s, 3H).

4- (3,5-Difluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil)-8-metil-2H-cromen-7-ol (l-3m) (47%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6, 86-6, 74 (m, 2H) , 6, 47-6,36 (m, 4H) , 5,10 (s, 2H) , 3,66 (s, 6H) , 2,13 (s, 3H) . 4-(3,5-Difluoro-4-hidroxifenil)-8-metil-3-(3, 4,5-trimetoxifenil)-2i7-cromen-7-ol (l-3n) (55%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 6, 86-6, 75 (m, 2H) , 6, 49-6, 37 (m, 4H) , 5,12 (s, 2H) , 3,66 (s, 9H), 2,14 (s, 3H) . 4-(3 — fluoro-4-hidroxifenil)-8-propil-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil) -2i7-cromen-7-ol (l-3o) (36%). 1H RMN (300 MHz,

Acetona-dô) δ 8,72 (s, 1H) , 8,12 (s, 1H) , 7,05 (s, 1H) , 7,01 (m, 1H), 6, 95-78 (m, 2H) , 6,48 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 6,45 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 6,41 (s, 2H) , 5,02 (s, 2H) , 3,71 (s, 6H) , 2,65 (m, 1H), 1,65 (m, 1H) , 1,06 (t, J= 7,1 Hz, 3H) . 4-(3 — fluoro-4-hidroxifenil)-6-etil-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil) -2i7-cromen-7-ol (l-3p) (54%) . 1H RMN (300 MHz,

Acetona-dô) δ 8,54 (s, 1H) , 8,05 (s, 1H) , 7,29 (s, 1H) , 7,05 (m, 1H) , 6,78 (m, 1H) , 6,66 (s, 1H) , 6,45 (s, 1H) , 6,34 (s, 2H) , 5,04 (s, 2H) , 3,65 (s, 6H) , 2,45 (m, 2H) , 1,06 (t, J = 7,1 Hz, 3H) . 3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(3,4-metilenodioxifenil)-8-metil-2íí-cromen-7-ol (l-3q) (54%). 1H RMN (300 MHz,

Acetona-dô) δ 8,23 (s, 1H) , 7,31 (s, 1H) , 6,82 (d, J = 8,01

Hz, 1H) , 6,66 (d, J= 8,1 Hz, 1H) , 6,61 (s, 1H) , 6,50 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,42 (s, 2H), 6,40 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,04 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 3,57 (s, 6H), 1,78 (s, 3H). 3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-nitrofenil)-8-metil-2i7-cromen-7-ol (l-3r) (24%) . !H RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 8,23 (s, 1H) , 8,23 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 7,45 (d, J= 8,4 Hz, 2H) , 7,25 (s, 1H) , 6,38 (s, 2H) , 6,32 (s, 2H) , 5,04 (s, 2H) , 3,56 (s, 6H), 2,01 (s, 3H). 3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-etilaminofenil)-8-metil-2i7-cromen-7-ol (l-3s) (21%) . Ή RMN (300 MHz, Acetona- d6) δ 8,23 (s, 1H) , 7,22 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 6,97 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 6,66 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 6,34 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,34 (s, 2H), 5,04 (s, 2H), 3,45 (s, 6H), 3,05 (m, 2H), 1, 06 (t, J = 7,6 Hz, 3H) . 4-(4-hidroxifenil)-6-etil-8-metil-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil) -2fí-cromen-7-ol (l-3t) (31%). 1H RMN (300 MHz,

Acetona-dõ) δ 8,67 (s, 1H) , 7,45 (s, 1H) , 7,05 (d, J = 8,3

Hz, 2H), 6,98 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 6,65 (s, 1H) , 6,45 (s, 2H), 5,08 (s, 2H), 3,56 (s, 6H), 2,55 (m, 2H), 2,05 (s, 3H), 1, 07 (t, J = 7,2 Hz, 3H) . 4-(4-hidroxifenil)-8-etil-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-2H-cromen-7-ol (l-3u) (61%). ^ RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8,34 (s, 1H), 8,11 (s, 1H) , 7,26 (s, 1H) , 7,01 (m, 2H) , 6,76 (m, 2H) , 6,56 (d, J= 8,1 Hz, 1H) , 6,50 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 6,45 (s, 2H) , 5,10 (s, 2H) , 3,47 (s, 6H) , 2,65 (m, 2H) , 1,06 (t, J= 7,5 Hz, 3H). 4-(4-hidroxifenil)-6-metil-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-2fí-cromen-7-ol (l-3v) (68%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8,88 (s, 1H) , 8,23 (s, 1H) , 7,33 (d, J = 3 Hz, 1H) , 7,05 (m, 2H) , 6,78 (m, 2H) , 6,65 (s, 1H) , 6,34 (s, 2H) , 5,11 (s, 2H) , 3,56 (s, 6H), 2,07 (s, 3H). 4-(3 — fluoro-4-hidroxifenil)-5-fluoro-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-2H-cromen-7-ol (l-3w) (21%). 1H RMN (300 MHz,

Acetona-dõ) δ 8,12 (s, 1H) , 7,23 (s, 1H) , 6, 88-76 (m, 3H) , 6,50 (s, 1H) , 6,45 (s, 2H) , 6,05 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 4,89 (s, 2H) , 3,56 (s, 6H) . 6-cloro-4-(3-fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-trimetoxifenil)-2H-cromen-7-ol (l-3x) (21%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dõ) δ 7,32 (m, 1H) , 7,16-09 (m, 2H) , 6,94 (s, 1Η) , 6,59 (s, 1H) , 6,39 (s, 2H) , 5,10 (s, 2H) , 3,65 (s, 6H) . 4-(3-cloro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-8-metil-2H-cromen-7-ol (l-3y) (41%) . 1H RMN (300 MHz,

Acetona-dõ) δ 7,11 (d, J= 1,6 Hz, 1H) , 6,96 (d, J= 8,1 Hz, 1H) , 6,88 (dd, J = 1,2, 8,2 Hz, 1H) , 6,55 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,45 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 6,42 (s, 2H) , 5,11 (s, 2H) , 3,65 (s, 6H), 2,05 (s, 3H). 4-(3-fluoro-4-hidroxifenil)-6-etil-8-metil-3-(4-hidroxi- 3.5- dimetoxifenil) -2fí-cromen-7-ol (l-3z) (41%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8,77 (s, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,15 (m, 2H) , 6,98 (brs, 1H) , 6,65 (s, 1H) , 6,45 (s, 2H) , 5,08 (s, 2H) , 3,56 (s, 6H) , 2,55 (m, 2H) , 2,05 (s, 3H) , 1,07 (t, J = 7,2

Hz, 3H) . 4-(3-metil-4-hidroxifenil)-6-etil-8-metil-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil)-2H-cromen-7-o 1 (l-3aa) (38%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 8,22 (br, 2H) , 7,66 (s, 1H) , 6,62 (d, J= 7,1

Hz, 1H) , 6,55 (dd, J= 7,1, 2,3 Hz, 1H) , 6,41 (s, 1H) , 6,38 (d, J= 2,5 Hz, 1H) , 5,95 (s, 2H) , 3,51 (s, 6H) , 2,32 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,21 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 1,92 (s, 3H) , 1,05 (t, J= 7,2 Hz, 3H) . 4- (3 — fluoro-4-hidroxifenil)-6-etil-8-metil-3-(4-hidroxi- 3.5- dimetoxifenil)-2H-cromen-7-o 1 (l-3bb) (38%) . ΧΗ RMN (300 MHz, CDCI3) δ 6,68 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 6,65 (dd, J = 7,1, 2.1 Hz, 1H) , 6,45 (s, 1H) , 6,35 (d, J= 2,1 Hz, 1H) , 6,23 (s, 2H) , 2,31 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 2,23 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,11 (s, 6H) , 1,98 (s, 3H) , 1,15 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetilfenil)-4-(4-acetoxi-3-metilfenil)-6-etil-8-metil-2-oxo-2H-cromen-7-i lo (l-3cc) (36%). ΧΗ RMN (300 ΜΗζ, CDCls) δ 6,68 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 6,60 (s, 1H) , 6,46 (d, J= 7 Hz, 1H) , 6,30 (dd, J= 6,9, 2,1 Hz, 1H) , 5,92 (s, 2H) , 3,65 (s, 6H) , 2,33 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 2,2 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 1,95 (s, 3H) , 1,15 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Acetato de 3-(4-acetoxi-3,5-dimetilfenil)-4-(4-acetoxi-2-fluorofenil) -6-etil-8-metil-2-oxo-2íí-cromen-7-i lo (l-3dd) (38%). ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 9,08 (br 1H) , 8,65 (s, 1H) , 8,22 (br 1H) , 6,81 (dd J = 6,6, 6,3 Hz, 1H) , 6,62 (brd, J = 7,0 Hz, 1H) , 6,46 (s, 1H) , 6,35 (brd, J = 6,5 Hz, 1H) , 2,31 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 2,29 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H), 2,12 (s, 6H), 1,95 (s, 3H), 1,17 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Passo 4. 3-(4-Hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4- hidroxifenil)-8-metilcroman-7-ol (Composto 2) (l-4a) 3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-4- (4-hidroxifenil)-8-metil-2H-cromen-7-ol (4,8 g, 1 eq) , IMS (500 mL) e Pd/C a 10% tipo pasta 338 (3,0 g) foram adicionados a um hidrogenador e encheu-se com H2 2,5 bar. A reacção foi deixada a 40°C durante a noite e apresentou uma conversão completa. O catalisador foi removido por filtração e os filtrados evaporados até à secura. Foram misturados três lotes iguais e secados para se obter 12,6 g (88%) de Composto 2 sob a forma de um sólido esbranquiçado. ΧΗ RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6,65-6,51 (m, 5H) , 6,40 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 6,04 (s, 2H) , 4,44-4,35 (m, 1H) , 4,25-4,15 (m, 2H) , 3,64 (s, 6H), 3,46-3,37 (m, 1H), 2,15 (s, 3H).

Outros compostos de fórmula (I) preparados através deste método: 4-(4-Hidroxifenil)-8-metil-3-(3,4,5-trimetoxifenil)croman- 7-ol (Composto 1) (l-4b) (99%) . ΧΗ RMN (300 MHz, Acetona-d6) δ 6, 63-6, 49 (m, 5H) , 6,36 (d, J= 7,9 Hz, 1H) , 6,04 (s, 2H) , 4,46-4,36 (m, 1H) , 4,25-4,17 (m, 2H) , 3,68 (s, 3H) , 3,63 (s, 6H), 3,49-3,40 (m, 1H), 2,15 (s, 3H). 3- (3,5-Di-terc-butil-4-hidroxifenil)-4-(4-hidroxifenil)-8- metilcroman-7-ol (Composto 3) (l-4c) (33%). 1H RMN (300 MHz,

Acetona-dô) δ 8,10 (bs 1H) , 8,05 (bs, 1H) 7,28-7,20 (m, 1H) , 6, 63-6, 52 (m, 3H) , 6, 43-6, 36 (m, 2H) , 6,04 (s, 2H) , 4,47- 4,35 (m, 1H) , 4,24-4, 09 (m, 2H) , 3,64 (s, 6H) , 3, 78-3, 66 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,32 (s, 9H). 4- (4-Hidroxifenil)-8-metil-3-(3,4,5-trifluorofenil)croman- 7-ol (Composto 4) (l-4d) (95%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dõ) δ 6, 67-6, 52 (m, 7H) , 6,42 (d, J= 7,8 Hz, 1H) , 4,48-4,40 (m, 1H) , 4,35-4,26 (m, 2H) , 3, 64-3, 55 (m, 1H) , 2,15 (s, 3H) . 4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-3-(3,4,5-trifluorofenil)croman-7-ol (Composto 5) (l-4e) (50%). Ή RMN (300 MHz, Acetona-dõ) δ 6, 84-6, 65 (m, 4H) , 6, 49-6, 30 (m, 4H) , 4,48-4,18 (m, 3H) , 3, 67-3, 56 (m, 1H) .

4- (3-Fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil)croman-7-ol (Composto 6) (l-4f) (39%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dõ) δ 6, 80-6, 74 (m, 2H) , 6, 44-6, 32 (m, 4H) , 6,08 (s, 2H) , 4,41-4,33 (m, 1H) , 4,24-4,12 (m, 2H) , 3,66 (s, 6H), 3,52-3,38 (m, 1H). 4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)croman-7-ol (Composto 7) (l-4g) (22%) . ΧΗ RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 6, 80-6, 72 (m, 2H) , 6, 48-6, 33 (m, 4H) , 6,11 (s, 2H) , 4,44- 4,35 (m, 1H) , 4,25-4,14 (m, 2H) , 3,70 (s, 3H) , 3,64 (s, 6H) , 3,52-3,45 (m, 1H).

4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-8-metil-3-(3, 4,5-trifluorofenil)croman-7-ol (Composto 8) (l-4h) (50%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6,81-6,65 (m, 3H) , 6,60 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 6, 49-6, 40 (m, 2H) , 6, 39-6, 30 (m, 1H) , 4,50-4,42 (m, 1H), 4,38-4,30 (m, 2H) , 3, 66-3,55 (m, 1H), 2,16 (s, 3H) . 4- (3-Fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-8-metilcroman-7-ol (Composto 9) (l-4i) (60%). XH RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6, 78-6, 70 (m, 1H) , 6,60 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6, 46-6, 32 (m, 3H) , 6,07 (s, 2H) , 4,45-4,35 (m, 1H), 4,28-4,17 (m, 2H), 3,65 (s, 6H), 3,49-3,41 (m, 1H), 2,20 (s, 3H). 4-(3-Fluoro-4-hidroxifenil)-8-metil-3- (3,4,5-trimetoxifenil) croman-7-ol (Composto 10) (l-4j) (44%). J-H RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6,80-6,71 (m, 1H) , 6,60 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,46-6, 32 (m, 4H) , 6,10 (s, 2H) , 4,48-4, 38 (m, 1H) , 4,31-4,22 (m, 2H) , 3,69 (s, 3H) , 3,65 (s, 6H) , 3,53-3,41 (m, 1H), 2,17 (s, 3H) . 3- (4-Hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-4-(4-metoxi-3,5- dimetilfenil)-8-metilcroman-7-ol (Composto 11) (l-4k) (83%). JH RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 6,52 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,33 (d, J= 8,5 Hz, 1H) , 6,25 (s, 2H) , 5,91 (s, 2H) , 4,34-4,24 (m, 1H), 4,18-4,05 (m, 2H), 3,57 (s, 3H), 3,50 (s, 6H), 3,48-3,33 (m, 1H), 2,05 (s, 3H), 2,03 (s, 6H). 4- (4-Metoxi-3,5-dimetilfenil)-8-metil-3-(3, 4,5- trimetoxifenil)croman-7-ol (Composto 12) (1-41) (99%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6,58 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 6,42 (d, J= 8,8 Hz, 1H) , 6,33 (s, 2H) , 6,05 (s, 2H) , 4,52-4,37 (m, 1H) , 4,25-4,12 (m, 2H) , 3,68 (s, 3H) , 3,65 (s, 3H) , 3,11 (s, 6H), 3, 50-3, 39 (m, 1H), 2,15 (s, 3H) , 2,07 (s, 6H) . 4-(2,3-Difluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil)-8-metilcroman-7-ol (Composto 13) (l-4m) (60%). XH RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6, 73-6, 68 (m, 1H) , 6, 64-6, 57 (m, 1H) , 6, 55-6,49 (m, 1H) , 6,42 (d, J= 9,6 Hz, 1H) , 6,08 (s, 2H) , 4,59-4, 55 (m, 1H) , 4,46-4,36 (m, 1H) , 4,25-4,21 (m, 1H), 3,63 (s, 6H), 3,53-3,47 (m, 1H), 2,14 (s, 3H) .

4-(2,3-Difluoro-4-hidroxifenil)-8-metil-3-(3,4,5-trimetoxifenil)croman-7-ol (Composto 14) (l-4n) (66%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dõ) δ 6, 74-6, 68 (m, 1H) , 6,60 (d, J = 9,5 Hz, 1H) , 6, 55-6, 47 (m, 1H) , 6,44 (d, J= 9,5 Hz, 1H) , 6,13 (s, 2H) , 4,61-4,57 (m, 1H) , 4,48-4, 36 (m, 1H) , 4,29- 4,22 (m, 1H) , 3,67 (s, 3H) , 3,64 (s, 6H) , 3, 58-3, 48 (m, 1H) , 2, 14 (s, 3H) . 4- (3 — fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-8-propilcroman-7-ol (Composto 16) (l-4o) (80%). ΧΗ RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6,76 (m, 1H) , 6,65 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 6, 45-33 (m, 3H) , 6,05 (s, 2H) , 4,44 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 3,56 (s, 6H), 3,45 (m, 1H), 2,65 (m, 2H), 1,67 (m, 2H) , 1,07 (t, J= 7,1 Hz, 3H) . 4- (3 — fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-6-etilcroman-7-ol (Composto 18) (l-4p) (80%). !H RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 6,76 (m, 1H) , 6,66 (s, 1H) , 6, 56-38 (m, 3H) , 6,05 (s, 2H) , 4,45 (m, 1H) , 4,12 (m, 1H) , 3,55 (s, 6H) , 3,45 (m, 1H) , 2,51 (m, 2H) , 1,05 (t, J = 7,1

Hz, 3H). 4-(3,4-metilenodioxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)- 8-metilcroman-7-ol (Composto 32) (l-4q) (80%). ΧΗ RMN (300 MHz, Acetona-de) δ 8.08 (s, 1H) , 7,01 (s, 1H) , 6,71 (m, 2H), 6,55 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,23 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 6, 0 6 (s, 2H), 4,47 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 3,65 (s, 6H), 3,46 (m, 1H), 2, 05 (s, 3H) . 4-(4-aminofenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-8-metilcroman-7-ol (Composto 21) (l-4r) (70%). ΧΗ RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 6,67 (m, 1H) , 6, 45-33 (m, 5H) , 6,09 (s, 2H) , 4,47 (m, 1H), 4,13 (m, 1H) , 3,64 (s, 6H) , 3,35 (m, 1H) , 2,06 (s, 3H). 4-(4-etilaminofenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-8-metilcroman-7-ol (Composto 22) (l-4s) (78%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 6.65 (m, 1H) , 6,51-39 (m, 5H) , 6,01 (s, 2H) , 4,65 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 3,65 (s, 6H), 3,45 (m, 1H), 3,11 (m, 2H) , 2,06 (s, 3H) , 1,32 (t, J= 7,1 Hz, 3H) . 4-(4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-6-etil-8-metilcroman-7-ol (Composto 33) (l-4t) (80%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 6,75 (m, 1H) , 6,61 (s, 1H) , 6,45 (m, 3H) , 6,01 (s, 2H) , 4,45 (m, 1H) , 4,23 (m, 2H) , 3,65 (s, 6H) , 3,45 (m, 1H), 2,55 (m, 2H) , 2,01 (s, 3H) , 1,07 (t, J= 7,1 Hz, 3H) . 4-(4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-8-etilcroman-7-ol (Composto 34) (l-4u) (86%). ΧΗ RMN (300 MHz,

Acetona-dõ) δ 6.72 (m, 1H) , 6,56 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,50-33 (m, 4H), 6,01 (s, 2H) , 4,51 (m, 1H) , 4,32 (m, 2H) , 3,65 (s, 6H) , 3,45 (m, 1H) , 2,65 (m, 2H) , 1,06 (t, J= 7,1 Hz, 3H) . 4-(4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-6- metilcroman-7-ol (Composto 35) (l-4v) (96%). 1H RMN (300 MHz,

Acetona-cU) δ 6,67 (m, 1H) , 6,56 (s, 1H) , 6, 45-32 (m, 4H) , 6.01 (s, 2H) , 4,45 (m, 1H) , 4,32 (m, 2H) , 3,67 (s, 6H) , 3,45 (m, 1 H), 2,06 (s, 3H). 4- (3-fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil)-5-fluorocroman-7-ol (Composto 19) (l-4w) (66%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 6,67 (m, 1H) , 6,45 (m, 2H) , 6,25 (m, 1H), 6,18 (m, 1 H) , 6,01 (s, 2H) , 4,50 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 3,67 (s, 6H), 3,45 (m, 1H). 4- (3-fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetoxifenil)-6-clorocroman-7-ol (Composto 20) (l-4x) (56%). *H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8,16 (s, 1H) , 7,89 (s, 1H) , 7,21 (s, 1H) , 6,96 (s, 1H) , 6,75 (m, 1H) , 6,60 (s, 1H) , 6,45 (m, 1H) , 6,01 (s, 2H) , 4,45 (m, 1H) , 4,30 (m, 2H) , 3,67 (s, 6H), 3,45 (m, 1H). 4-(3-cloro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-8-metilcroman-7-ol (Composto 24) (l-4y) (66%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dô) δ 8.1 (s, 1H) , 7,6 (s, 1H) , 7,0 (s, 1H) , 6, 65-50 (m, 4H) , 6,42 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 6,01 (s, 2H) , 4,41 (m, 1H) , 4,35 (m, 2H) , 3,64 (s, 6H) , 3,46 (m, 1H) .

4-(3-fluoro-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil) -6-etil-8-metilcroman-7-ol (Composto 36) (l-4z) (80%). 1H RMN (300 MHz, Acetona-dõ) δ 6,75 (m, 1H) , 6,61 (s, 1H) , 6,45 (m, 3H) , 6,01 (s, 2H) , 4,45 (m, 1H) , 4,23 (m, 2H) , 3,65 (s, 6H), 3,45 (m, 1H), 2,55 (m, 2H), 2,01 (s, 3H) , 1,07 (t, J = 7.1 Hz, 3H) . 4-(3-metil-4-hidroxifenil)-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil)-

6-etil-8-metilcroman-7-ol (Composto 37) (l-4aa) (88%). 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 8,22 (br, 2H) , 7,66 (s, 1H) , 6,62 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 6,55 (dd, J = 7,1, 2,3 Hz, 1H) , 6,41 (s, 1H) , 6,38 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,95 (s, 2H), 4,48 (m, 1H), 4.21 (m, 2H) , 3,61 (s, 6H) , 3,45 (m, 1H) , 2,55 (m, 2H) , 2,01 (s, 3H) , 1,07 (t, J= 7,1 Hz, 3H) . 4-(3-metil-4-hidroxifenil)-6-etil-8-metil-3-(4-hidroxi-3, 5-dimetilfenil)-2fí-cromen-7-ol (composto 38) (l-4bb) (80%). Ή RMN (300 MHz, CDC13) δ 6,68 (d, J= 7,5 Hz, 1H) , 6,65 (dd, J = 7,1, 2,1 Hz, 1H), 6,45 (s, lH) , 6,35 (d, J= 2,1 Hz, 1H) , 6,23 (s, 2H), 4,45 (m, 1H) , 4,23 (m, 2H) , 3,45 (m, 1H) , 2,55 (m, 2H), 2,15 (s, 6H) , 2,01 (s, 3H) , 1,02 (t, J= 7,1 Hz, 3H) . 4-(2-metil-4-hidroxifenil)-6-etil-8-metil-3-(4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil) -2íí-cromen-7-ol (composto 39) (l-4cc) (76%) . !H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 6,68 (d, J= 7,1 Hz, 1H) , 6,60 (s, 1H) , 6,46 (d, J= 7 Hz, 1H), 6,30 (dd, J= 6,9, 2,1 Hz, 1H) , 5,92 (s, 2H) , 4,42 (m, 1H) , 4,31 (m, 2H) , 3,65 (s, 6H) , 3,41 (m, 1H), 2,51 (m, 2H) , 2,11 (s, 3H) , 1,01 (t, J= 7,1 Hz, 3H) . 4-(2-fluoro-4-hidroxifenil)-6-etil-8-metil-3-(4-hidroxi- 3,5-dimetilfenil)-2íí-cromen-7-ol (composto 40) (l-4dd) (70%). XH RMN (300 MHz, CDCI3) δ 9,1 (br 1H) , 8,75 (s, 1H) , 7.22 (br 1H) , 6,85 (dd J= 6,6, 6,1 Hz, 1H) , 6,58 (brd, J = 7,3 Hz, 1H) , 6,42 (s, 1H) , 6,25 (brd, J= 6,1 Hz, 1H) , 4,35 (m, 1H) , 4,13 (m, 2H) , 3,35 (m, 1H) , 2,45 (m, 2H) , 2,18 (s, 6H), 2,11 (s, 3H), 1,05 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

Os enantiómeros do composto 2 foram preparados através de resolução quiral numa coluna de fase normal Chiralcel OD-H, 30 x 250 mm, 5 micrómetros. A análise do composto com menor tempo de retenção nesta coluna indicou as seguintes propriedades de Rotação Óptica:

0 enantiómero com o tempo de retenção mais longo nesta coluna apresentou as seguintes propriedades de Rotação Óptica.

Os enantiómeros do composto 6 foram preparados através de resolução quiral numa coluna de fase normal Chiralcel OD-H, 30 X 250 mm, 5 micrómetros. A análise do composto com menor tempo de retenção (enantiómero 1) nesta coluna indicou as seguintes propriedades de Rotação Óptica:

O enantiómero com o tempo de retenção mais longo (enantiómero 2) nesta coluna apresentou as seguintes propriedades de Rotação Óptica:

Os enantiómeros do composto 9 foram preparados através de resolução quiral numa coluna de fase normal Chiralcel OD-H, 30 X 250 mm, 5 micrómetros. A análise do composto com menor tempo de retenção (enantiómero 1) nesta coluna indicou as seguintes propriedades de Rotação Óptica:

0 enantiómero com o tempo de retenção mais longo (enantiómero 2) nesta coluna apresentou as seguintes propriedades de Rotação Óptica:

Exemplo 2 - Ensaios In vitro A actividade antitumoral do composto 2 (a forma racémica e um eutómero e distómero purificados) foi avaliada por XenTech em dois explantes de glioblastoma multiforme derivado de doente caracterizados a partir de biópsias do tumor seguindo a metodologia detalhada. As culturas celulares primárias foram obtidas a partir de 0DA14-RAV explantado e dissociado e xenoenxertos de GBM14-CHA. As células foram descongeladas rapidamente num banho de água a 37°C. Um frasco de células (~10 milhões de células) foi diluído em 10 mL de meio de crescimento completo (F12/DMEM suplementado com soro fetal bovino a 8%, 100 ug/mL de penicilina G sódica, 100 ug/mL de sulfato de estreptomicina). Após centrifugação a 150xg durante 5 minutos, o sedimento celular foi ressuspenso em meio de crescimento completo e colocou-se em placas a uma densidade de pelo menos 140 000 células/cm2 em frascos de cultura celulares com 75 cm2. As células foram mantidas a 37°C numa atmosfera humidificada com 5% de CO2 durante pelo menos uma semana. Em seguida, as células foram recolhidas e inoculadas em placas de 96 poços a uma densidade de 2,5 x 103 células/poço para ensaios de citotoxicidade. As células foram incubadas durante 48 horas a 37°C antes da adição dos compostos de ensaio. Os compostos de ensaio foram adicionados em concentrações finais desejadas e ainda se incubou durante 72 horas. A viabilidade celular foi avaliada antes da adição dos compostos de ensaio (T0) e 72 horas após através da determinação do conteúdo da célula de ATP celular utilizando o Ensaio de Luminescência de Viabilidade Celular CellTiter-Glo® (Promega) de acordo com as instruções do fabricante. ODA14 foi designado como grau III (determinado por histopatologia) susceptível a TMZ quando avaliado em estudos de xenoenxertos, mutante p53, pTEN de tipo selvagem e apresentou expressão amplificada de EGFR. GBM14 foi designado como resistente a TMZ, p53 de tipo selvagem, mutante pTEN, EGFR de tipo selvagem. 0 grau de GBM não foi conhecido. Após 72 horas de exposição ao composto 2, foi observada uma CI50 de 0,14 μΜ contra GBM14 e 48 μΜ contra ODA14. Os resultados estão representados na Figura 1. Após 72 horas de exposição do eutómero de composto 2, foi observada uma CI50 de 0,051 μΜ, enquanto que em oposição, o distómero do composto 2 apresentou ums CI50 de 3,43 μΜ (ver Figura 2) contra linha celular GBM14-CHA. Estes resultados demonstram que o eutómero do composto 2 (o enantiómero +) é umas 2-3 vezes mais activo contra GBM14-CHA em comparação com o racemato do composto 2 e >60 vezes mais activo que o distómero do composto 2 (o enantiómero -).

Os enantiómeros dos compostos 6 e 9 foram também avaliados contra a linha celular de glioblastoma GBM14-CHA utilizando a metodologia descrita anteriormente. Os resultados são apresentados adiante na Tabela 1.

Tabela 1: Resultados de IC 50 para o racemato e formas quirals dos compostos 6 e 9 contra a linha celular de glioblastoma GBM14-CHA

Tal como foi observado para o composto 2, os eutómeros do compostos 6 e 9 foram drasticamente mais activos do que os correspondentes distómeros. A actividade anti-proliferativa do composto 2 foi também avaliada nas linhas celulares correspondentes susceptiveis a TMZ (D54-S e U87-S) ou resistentes a TMZ (D54-R e U87-R) (Universidade de Hong Kong, Dr. Gilberto Leung). Os resultados confirmam que a TMZ apresentou eficácia reduzida contra subclones resistentes a TMZ de U87 e D54 em comparação com os seus respectivos subclones sensíveis a TMZ. Em oposição à TMZ, o composto 2 e o seu eutómero demonstraram actividade anti-proliferativa equipotente contra as linhas celulares D54 e U87 de GBM, independentemente do seu estado de resistência a TMZ. Foram utilizadas duas metodologias (SRB e MTT) para avaliar a viabilidade e ambas demonstraram que o composto 2 foi igualmente eficaz na supressão da viabilidade celular de GBM, independentemente do estado de resistência a TMZ. SRB tendeu a sobrestimar a citotoxicidade em comparação com MTT. No entanto, os valores de Ciso foram inferiores a 0,36 μΜ, independentemente da metodologia, linha celular, e estado de resistência a TMZ, quando tratada com o composto 2. Os valores de CI50 do composto 2, por conseguinte, são acentuadamente mais baixos do que os de TMZ, mesmo contra subclones sensíveis a TMZ. 0 eutómero do composto 2 também foi equipotente contra subclones resistentes e sensíveis a TMZ, mas a eficácia antitumoral foi mais potente para o enantiómero activo do que para o racemato. Os valores de CI50 foram inferiores a 0,065 μΜ, independentemente da linha celular e do estado de resistência a TMZ (ver Tabela 2).

Tabela 2: Viabilidade celular de subclones de U87 e D54 resistentes e sensíveis a TMZ após o tratamento com TMZ, composto 2 ou eutómero do composto 2*

* A viabilidade celular (CI50) 72 horas após o tratamento foi determinada por SRB ou MTT (conforme indicado). CI50 em μΜ. A actividade anti-proliferativa do eutómero do composto 9 (o enantiómero +) também foi avaliada e verificou-se ser equipotente contra subclones de U87 e D54 resistentes e sensíveis a TMZ e semelhante ao eutómero do composto 2, os valores de CI50 foram inferiores a 0,065 μΜ, independentemente da linha celular e do estado de resistência a TMZ. A eficácia dos eutómeros dos compostos 9 e 36 também foi avaliada contra as linhas celulares de neuroblastoma pediátrico. Os valores de CI50 variaram desde 0,020 μΜ até 0,088 μΜ para o eutómero do composto 9 e desde 0,243 μΜ até 0,698 μΜ para o eutómero do composto 36. (ver Tabela 3) . Foram avaliados mais dois cancros neurológicos pediátricos quanto à sensibilidade para o eutómero do composto 9. Os estudos in vitro também demonstraram baixa eficácia micromolar a sub-micromolar contra uma linha celular de DIPG, e eficácia nanomolar contra linhas celulares de meduloblastoma (D283L = 0, 097 μΜ; 547L = 0,063 μΜ; e D425L = 0,101 μΜ) . Em conjunto com os estudos anteriores que utilizam linhas celulares de GMB e culturas de PDX, estes resultados sugerem que o composto 9 tem uma potência considerável contra uma variedade de cancros neurológicos, incluindo os principais cancros infantis.

Tabela 3: Citotoxicidade dos eutómeros do composto 9 e 36 contra neuroblastoma*

*A viabilidade celular foi avaliada após 72 horas A capacidade dos compostos 1 a 14 para inibir a proliferação de células estaminais cancerígenas do ovário foi caracterizada a partir de explantes derivados de doente. 0 laboratório do Dr. Gil Mor (Universidade de Yale) identificou dois tipos de células epiteliais cancerígenas do ovário: as de Tipo I são células epiteliais cancerígenas do ovário (EOC) CD44+ve, quimiorresistentes, e as de Tipo II são células EOC CD44-ve quimiossensíveis. As células estaminais cancerígenas do ovário foram preparadas conforme descrito anteriormente (Alvero et ai., 2009). A proliferação celular foi avaliada utilizando o Sistema de Imagiologia Cinética IncuCyte. O efeito citotóxico dos compostos foi avaliado utilizando simultaneamente do ensaio de citotoxicidade CellPlayer através da utilização de CellTox™ (Promega, Cat#: G8731). As células em monocamada foram tripsinizadas e inoculadas em placas de 96 poços. Após 24 horas, assim que as células estivessem ligadas, o tratamento foi distribuído em RPMI com FBS a 10%. As concentrações de fármaco utilizadas foram: 0,001, 0,01, 0,1, 1 e 10 yg/mL.

Foi adicionada uma diluição adequada de reagente CellTox™ (1:1000) a cada poço após a adição do composto de ensaio. As placas de cultura foram imediatamente colocadas no sistema IncuCyte e fotografadas a cada 2 horas utilizando a opção "Fluorescência e contraste de fase" no equipamento IncuCyte. As curvas de crescimento foram calculadas como uma determinação de confluência das células utilizando um algoritmo integrado de confluência como um substituto para 0 número de células para determinar a taxa de proliferação. A área sob a curva calculada a partir do gráfico de Contagem CsttTox/mm2 ao longo do tempo foi utilizada em seguida para calcular a CI50. Em ensaios duplicados verificou-se que o composto 2 era mais potente a retardar a proliferação de células estaminais cancerígenas do ovário em concentrações entre 0,01-0,1 pg/mL para OCSC-1 e OCSC-2. Os compostos 6, 9 e 13 também foram potentes na inibição da proliferação de células OCSC-2 em concentrações entre 0,1 e 1 pg/mL (Tabela 4) . O composto 2 também obteve um efeito semelhante contra células F2 num registo de concentrações mais elevadas (0,1— 1 pg/mL). Quando avaliados, todos os outros análogos apresentaram actividade anti-proliferativa de 1-10 pg/mL (ver Tabela 4).

Tabela 4: Efeito antitumoral de uma série de compostos contra as células estaminais cancerígenas do ovário

Estudos de confirmação utilizando estudos de confluência IncuCyte que utilizaram um grande número de concentrações, demonstraram que o composto 2 apresentava um valor de CI50 de 0,052 pg/mL contra OCSC2. Esta observação foi ainda confirmada utilizando o verde Cytotox, um reagente corante que tira partido da integridade comprometida da membrana de uma célula morta, com o reagente capaz de atravessar a membrana e ligar-se ao ADN libertando assim um sinal de fluorescência que pode ser quantificado. A CI50 para o composto 2 utilizando o verde CellTox foi de 0,051 pg/mL. Estes resultados demonstram que o composto 2 é um composto antitumoral altamente activo, tal como avaliado por duas metodologias diferentes. Os valores de CI50 de 0,12 g/mL também foram obtidos para os compostos 9 e 13 (ver Figuras 3 e 4) .

Foi estudada a capacidade de compostos seleccionados para a inibição da proliferação de células cancerígenas representativas de melanoma, cancro do pulmão de não pequenas células, cancro colo-rectal, cancro da mama (negativo para o Receptor de Estrogénio (ER-ve, TNBC - ER - ve, negativo para o Receptor de Progesterona e negativo para a amplificação de EGFR), cancro da próstata, cancro do fígado, cancro do ovário, cancro pancreático e cancro do cérebro. Uma quantidade pré-determinada de células, tal como determinado a partir de ensaios de crescimento celular para cada uma das linhas celulares utilizadas, foi inoculada nos seus respectivos meios de cultura (utilizando parâmetros de cultura ATCC - http://www.atcc.org) e cultivadas durante 24 horas a 37°C e CO2 a 5% em placas de cultura de 96 poços. Uma vez ligadas, cada linha celular foi em seguida exposta a várias concentrações de cada análogo respectivo (30, 3, 0,3 e 0,03 μΜ) , cultivadas durante 72 horas adicionais e expostas ao título do reagente de luminescência celular (100 μ/poço) durante mais 30 minutos). A luminescência foi capturada utilizando um leitor multimarcador EnVision e os resultados para cada concentração de análogo foram comparados com o controlo. Os gráficos semi-log de Percentagem do Controlo versus Concentração foram preparados e a CI50 determinada utilizando a análise de regressão linear. Os resultados são apresentados nas Tabelas 5 e 6. Na Tabela 6, os compostos Comp 1, Comp 2 e Comp 3 são compostos comparáveis com as seguintes estruturas:

Tabela 5: Avaliação de uma série de compostos sobre a sua capacidade de retardar a proliferação de uma variedade de células somáticas cancerígenas

Tabela 6: Avaliação de uma série de compostos sobre a sua capacidade de retardar a proliferação de uma variedade de células somáticas cancerígenas

Os resultados demonstram que o composto 2 apresenta uma actividade anti-proliferativa potente (CI50 = <1μΜ) contra linhas celulares representativas de CPNPC (A549), TNBC (MDA-MB-231) e cancro da próstata (DU-145). 0 composto 2 foi moderadamente activo contra células cancerígenas do fígado (HepG2) (CI50 = 1,9 uM) .

Os compostos 6 e 9 também apresentam uma actividade potente (CI50 = <1μΜ) contra CPNPC (A549) e linhas celulares de cancro da próstata (PC3 e DU-145), ao contrário do composto 2 que foi apenas activo contra DU-145. Os compostos 6 e 9 também foram moderadamente activos contra MDA-MB-231 (CI50 <2μΜ) e HepG2 (CI50 <4μΜ) .

Através da utilização do mesmo método, o racemato do composto 2 e seus enantiómeros foram avaliados contra o glioblastoma A172 e linhas celulares OVCAR-3 de cancro do ovário. Conforme observado no estudo anterior do explante de GBM, o eutómero do composto 2 foi pelo menos 2 vezes mais activo contra ambas as linhas celulares em comparação com o racemato (ver Figura 5) . 0 distómero foi >5 vezes menos activo em comparação com o racemato (não apresentado).

Tendo em conta o conceito de que as células progenitoras de cancro residual no interior do tumor pós-tratado são responsáveis pela reincidência do tumor, uma estratégia terapêutica importante para prolongar a sobrevivência é erradicar essas células progenitoras do tumor que conduzem ao seu relapso. Foram realizados estudos in vitro para determinar se o composto 2 foi capaz de inibir a proliferação de OCSC, assim que a pressão do fármaco seja removida. As células OCSC-2 foram tratadas com 0,1, 1 e 10 yg/mL de composto 2 durante 24 h, lavadas com meio de cultura e deixadas a repousar durante 50 horas adicionais sob as condições de incubação padrão. As placas de cultura foram imediatamente colocadas no sistema IncuCyte e fotografadas a cada 2 horas. As curvas de crescimento foram calculadas como uma determinação de confluência das células utilizando um algoritmo integrado de confluência como um substituto para o número de células para determinar a taxa de proliferação.

Em oposição com as células OCSC-2 tratadas com o veiculo, essas células que foram pré-tratadas com o composto 2 durante 24 horas não entraram no crescimento logarítmico após um período adicional de 48 horas de cultura em meio sem fármaco (ver Figura 6) . Morfologicamente, estas células pareciam redondas e tinham corpos apoptóticos, sugerindo que as células já não eram viáveis a partir de 24 horas de exposição (ver Figura 7).

Exemplo 3 - Estudos Celulares

As células 0CSC2 marcadas com GFP e as células 0CC2 marcadas com mCherry foram caracterizadas através da infecção das células com lentivírus que expressa as proteínas fluorescentes (Craveiro et al. 2013). As co-culturas de OCSC2 GFP+ e 0CC2 mCherry+ foram tratadas com 1 yg/mL do composto 2 durante 48 horas e deixadas a repousar durante outras 72 horas. A fluorescência foi determinada por microscopia de fluorescência. 0 Composto 2 reduziu acentuadamente a quantidade de células estaminais OCSC2 marcadas com GFP e fez com que as células OCC2 marcas com mCherry ficassem redondas e levantassem a superfície de cultura (ver Figura 8). Estes resultados indicam que o composto 2 interrompe a proliferação deas células estaminais cancerígenas do ovário e células somáticas cancerígenas do ovário.

As células estaminais esferoidais de cancro do ovário foram obtidas a partir de culturas cultivadas sob condições especiais que seleccionam as células com potencial de autorenovação (Alvero et al., 2009). Resumidamente, as células CD44+ foram incubadas num sistema de suspensão que consiste num tubo de vidro em rotação contínua para evitar aderência Estas células formaram aglomerados em 48 horas e esferóides compactos em 4 dias. Os esferóides foram em seguida expostos a 0,1 e 1 yg/mL do composto 2 e analisados ao microscópio após 24 horas. Após 24 horas de exposição ao composto 2 a 0,1 yg/mL a infraestrutura dos esferóides de cancro do ovário começou a desagregar-se. A 1 yg/mL de composto 2, a estrutura dos esferóides foi quase totalmente destruída. Estes resultados demonstram que o composto 2 é capaz de penetrar o esferóide e destruir a sua infraestrutura (ver Figura 9) e é sugestivo de que o composto deve ser capaz de entrar no microambiente do tumor.

Referências

Craveiro, V., Yang-Hartwich, Y., Holmberg, JC, Sumi, NJ, Pizzonia, J., Grffin, B., Gill., SK, Sliasi, DA., Azodi, M., Rutherford, T.,

Alvero, A, B., Mor, G. (2013). "Modificações fenotípicas nas células-tronco do câncer de ovário após o tratamento com Paclitaxel" Câncer Medicine, 2 (6), 751-762.

Exemplo 4 - Ensaios de farmacocinética

Foi realizado um estudo sobre o comportamento farmacocinético dos compostos 2, 6, 9, 13. Os resultados demonstraram que os compostos podem ser administrados e alcançarem concentrações plasmáticas com a janela farmacêutica proposta de eficácia. O estudo compreendeu a Fase 1, um estudo de pré-formulação que assegurou que todos os compostos eram solúveis em solução Captisol® a 30% e formou uma mistura homogénea adequada para administração por via intravenosa. Foram desenvolvidos vários métodos de LC-MS e parcialmente validados para assegurar que cada analito possa ser quantificado a partir da matriz de plasma e que não houve interferência entre quaisquer dos analitos. A Fase 2 compreendeu o estudo em vida, no qual os ratos Sprague-Dawley foram aclimatizados durante três dias antes de serem injectados na veia da cauda com uma dose de cassete de quatro compostos, cada um com uma concentração final de 1 mg/kg. Foram utilizados um total de três ratos no estudo com recolhas de sangue com tubos anticoagulantes a 5 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h e 8 h. A terceira fase do estudo foi a bioanálise dos analitos. As amostras de sangue foram centrifugadas a 1200 rpm durante 10 minutos a 4°C. Depois dos glóbulos vermelhos e o plasma serem separados, o plasma foi armazenado a -80°C até ser processado e injectados na LC-MS. As amostras dos ratos individuais foram tratadas como as amostras individuais com o perfil de PK obtido a partir da média dos resultados dos três ratos. Os resultados estão representados na Figura 10.

Exemplo 5 - Eficácia in vivo

Através da utilização do modelo de flanco U87 previamente descrito, a administração do supositório do eutómero do composto 9 a 100 mg/kg uma vez por dia deu origem a um efeito antitumoral forte. Os resultados estão representados na Figura 11. ANOVA de duas vias com correcção de Sidak para múltiplas comparações indicou que o tamanho do tumor ficou significativamente menor em apenas 7 dias do inicio do pós-tratamento e isto continuou até ao dia 12 (o ponto de tempo final avaliado) . A taxa de crescimento do tumor também foi significativamente reduzida pelo eutómero do composto 9. 0 peso do tumor no ponto final foi significativamente reduzido pelo eutómero do composto 9 em comparação com o controlo Captisol® (teste t não emparelhado, P = 0,0036). Os pesos finais dos ratinhos nos grupos de tratamento e controlo não eram significativamente diferentes, no entanto 3 ratinhos no grupo de tratamento de um original 7 morreu (todos os animais que morreram estavam dentro do quartil inferior do intervalo de peso do animal). Estes ratinhos também demonstraram uma redução significativa no crescimento do tumor, embora, para consistência, os resultados desses animais foram removidos de todos os resultados apresentados e da análise estatística. Conforme esquema posológico anterior, não se verificaram sinais clínicos evidentes de toxicidade (ou seja, piloerecção, morbilidade, diarreia). A análise histopatológica está em curso para identificar a causa da morte. Os hemogramas estavam normais.

Exemplo 6 - Eficácia in vivo O modelo animal de cancro do ovário utilizado para avaliar a eficácia in vivo do composto 2 consiste numa injecção intraperitoneal de 7 x 106 células estaminais cancerígenas do ovário mCherry-CD44+ em ratinhos atímicos. Neste modelo, a formação do tumor replica a morfologia do cancro do ovário do ser humano, dando origem a tumores disseminados compreendendo CD44+ e CD44-OCC, confirmando que as células estaminais cancerígenas injectadas podem formar tumores heterogéneos. Neste modelo de roedor, a progressão do tumor é caracterizado por carcinomatose disseminada, em que os tumores são encontrados nos ovários, mesentério, peritoneu, diafragma, fígado, pâncreas e baço. 0 modelo também mimetiza o quadro clínico do cancro do ovário e é caracterizado por uma resposta inicial parcial de paclitaxel ou cisplatina, que é então seguida por recorrência e resistência à terapêutica original. A progressão do tumor é monitorizada por imagiologia em vida utilizando um sistema de imagiologia Vivo FX de fluorescência de Bruker/Raio-X (Bruker Corp., Billerica, MA) (Craveiro et al. 2013).

Em comparação com os animais do controlo tratados com Captisol® a 20%, o eutómero do Composto 2 administrado numa posologia de uma vez por dia através de administração intraperitoneal, formulado numa ciclodextrina, originou uma redução significativa, dependente da dose, na taxa de proliferação do tumor (Figura 12A) e do tamanho do tumor terminal (Figura 12B). Foi observada uma resposta dependente da concentração, em que os animais administrados com o composto 2 a 50 mg/kg e 100 mg/kg apresentaram uma redução de 65% e >80% no tamanho do tumor, respectivamente, em comparação com o controlo.

Referência

Craveiro, V., Yang-Hartwich, Y., Holmberg, JC, Sumi, NJ, Pizzonia, J., Grffin, B., Gill., SK, Sliasi, DA., Azodi, M., Rutherford, T.,

Alvero, A, B., Mor, G. (2013). "Modificações fenotipicas nas células-tronco do câncer de ovário após o tratamento com Paclitaxel" Câncer Medicine, 2 (6), 751-762. A citação de qualquer referência aqui não deve ser interpretada como uma admissão de que tal referência está disponível como a técnica anterior para o presente pedido. Além disso, a referência nesta especificação a qualquer publicação prévia (ou informação derivada dela), ou a qualquer assunto que seja conhecido, não é, e não deve ser tomado como reconhecimento ou admissão ou qualquer forma de sugestão de que a publicação anterior (ou informação derivada dele) ou matéria conhecida faz parte do conhecimento geral comum no campo de trabalho a que se refere esta especificação. O âmbito da invenção é definido pelas reivindicações. Os especialistas na técnica entenderão que a invenção aqui descrita é suscetível a variações e modificações diferentes das especificamente descritas. Deve ser entendido que a invenção inclui todas as variações e modificações que se enquadram no âmbito das reivindicações

Lisboa, 02 de outubro de 2017

Claims (14)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composto da fórmula geral (I)

   ou um seu sal, hidrato, derivado ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que: R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e Ci-C6 alquilo, R2 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH e Ci-Cõ alcoxi, R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, Ci-Ce alquilo e halogéneo, R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH, Ci-Ce alcoxi, NH2, NHMe, NHEt, N(Me)2 e N(Et)2, R14 e R15 são seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: H, OH, C1-C6 alquilo e halogéneo, ou R13 e um de R14 e R15 formam a seguinte estrutura:

   R10 é OH, e Ru e Ri2 Sã0 seleccionados de forma independente a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, C1-C4 alquilo e F.
2. 2. Composto da reivindicação 1, em que R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H e C1-C3 alquilo.
3. 3. Composto da reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que R2 é OH.
4. 4. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que R3 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: H, C1-C3 alquilo e halogéneo.
5. 5. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que R11 e R12 são seleccionados independentemente a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, terc-butilo, metilo e F.
6. 6. Composto da reivindicação 5, em que R11 e R12 são seleccionados independentemente a partir do grupo que consiste em: OMe, terc-butilo e F.
7. 7. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que R13 é seleccionado a partir do grupo que consiste em: OH, OMe, NH2, NHEt e N(Et)2.
8. 8. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 7, em que R14 e R15 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em: H, F, Cl e metilo. 9. 0 composto da reivindicação 1, em que o composto é de fórmula (Ia) contendo a seguinte estrutura:

   em que R1, R3 e R10 a R15 são conforme definidos na reivindicação 1.
9. 10. Composto da reivindicação 1, em que o composto é seleccionado a partir do qrupo que consiste em:
10. 11. Composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, em conjunto com um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.
11. 12. Composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, para utilização num método para o tratamento de cancro num indivíduo com essa necessidade, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto de fórmula (I).
12. 13. Composto para utilização num método de tratamento da reivindicação 12, em que o cancro é seleccionado a partir do grupo que consiste em: cancro pancreático, cancro colo-rectal, melanoma, cancro da próstata, cancro do cérebro (incluindo pediátrico e no adulto), cancro do ovário, cancro da mama, cancro do pulmão, cancro do fígado, cancro uterino, neuroblastoma, mesotelioma, ascite maligna ou cancro peritoneal.
13. 14. Composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, para utilização num método de tratamento, em que o tratamento é para redução das incidências, ou do risco, da recorrência de cancro num indivíduo considerado estar em risco de recorrência de cancro, compreendendo o método de administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz do referido composto de fórmula (I) ·
14. 15. Composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, para utilização num método para o tratamento de uma doença num indivíduo causada por células estaminais cancerígenas, compreendendo o método a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto de fórmula (I). Lisboa, 02 de outubro de 2017