PT1989214T

PT1989214T - Processo para preparar um agonista de recetor de adenosina a2a e polimorfos do mesmo

Info

Publication number: PT1989214T
Application number: PT77635456T
Authority: PT
Inventors: Elzein Elfatih; Zablocki Jeff; Seemayer Robert; Lemons Travis
Original assignee: Gilead Sciences Inc
Priority date: 2006-02-03
Filing date: 2007-02-02
Publication date: 2016-09-22
Also published as: ES2593028T3; JP2013014620A; NO20083395L; IL193153A; NO341322B1; PL1989214T3; US20100267953A1; KR20080090491A; US20110257387A1; EP2581381A3; US20120165350A1; HK1127358A1; AU2007212542B2; US9085601B2; EP1989214B8; WO2007092372A1; EP2581381A2; IL193153A0; US8268988B2; EP1989214B1

Description

DESCRIÇÃO

PROCESSO PARA PREPARAR UM AGONISTA DE RECETOR DE ADENOSINA

A2A E POLIMORFOS DO MESMO

Campo da Invenção A presente invenção refere-se a um processo para a preparação a grande escala de um agonista de recetor de adenosina A2A e também se refere a polimorfos desse composto, e a métodos de isolamento de um polimorfo específico.

Antecedentes A adenosina é um nucleõsido de ocorrência natural, que exerce os seus efeitos biológicos através de interação com uma família de recetores de adenosina conhecidos como Αχ, A2A, A2B, e A3, todos os quais modulam importantes processos fisiológicos. Um dos efeitos biológicos da adenosina é atuar como um vasodilatador coronário; sendo este resultado produzido pela interação com o recetor de adenosina A2A.

Este efeito da adenosina foi constatado como sendo útil como uma ajuda para a formação de imagens do coração, em que as artérias coronárias são dilatadas anteriormente à administração de um agente de formação de imagens (por exemplo, tãlio 201), e consequentemente, através da observação das imagens consequentemente produzidas, pode ser determinada a presença ou ausência de doença arterial coronária. A vantagem de uma tal técnica é que evita o método mais tradicional de indução da vasodilatação coronária através de exercício numa esteira, que é claramente indesejável para um paciente que tem uma doença coronária.

Contudo, a administração de adenosina tem várias desvantagens. A adenosina tem uma vida média muito curta em seres humanos (menos de 10 segundos), e também tem todos os efeitos associados com o agonismo dos recetores Ai, A2A, A2Bj e A3. Consequentemente a utilização de urn agonista de recetor de adenosina A2A seletivo proporcionaria um método superior de produção de vasodilatação coronária, particularmente um com uma vida média mais longa e poucos ou nenhuns efeitos secundários.

Uma classe de compostos possuindo estas propriedades desejáveis foi divulgada na Patente U.S. N° 6.403.567. Em particular, um composto divulgado nesta patente, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida, foi mostrado como sendo um agonista de recetor de adenosina A2A altamente seletivo, e está atualmente a ser submetido a ensaios clínicos como um vasodilatador útil em formação de imagens cardíacas.

Dado o interesse aumentado neste em em compostos semelhantes, tounou-se desejável encontrar novos métodos de síntese que proporcionem um método conveniente para fabricar grandes quantidades do material com bom rendimento e pureza elevada. A patente que divulga o composto de interesse (Patente U:S. N° 6.403.567) proporciona vários métodos para preparar o composto. Contudo, embora estes métodos sejam adequados para síntese a pequena escala, todos os métodos sintéticos divulgados na patente utilizam grupos protetores, o que é indesejável para sínteses a grande escala.

Adicionalmente, foi descoberto que o produto desejado (isto é, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6 -aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida) é capaz de existir em pelo menos três formas cristalinas diferentes, a mais estável das quais é um monoidrato. Este polimorfo é estável sob condições de stress por humidade relativa, até ao seu ponto de fusão. Consequentemente, é desejável que o produto final produzido nas novas sínteses seja obtido como o monoidrato estável. 0 documento WO 00/78779 divulga um processo para preparar um agonista de recetor de adenosina.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Consequentemente, é um objeto desta invenção proporcionar sínteses convenientes para a preparação a grande escala de (1-{9-[(4S,2R,3R,SR)-3,4-diidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6 -aminopurin-2 -i1}pi razol-4 -i1)-N-metilca rboxami da, e polimorfos dos mesmos, preferentemente como o seu monoidrato. Consequentemente, num primeiro aspeto, a invenção refere-se a um método para a preparação a grande escala de um composto da Fórmula I:

Fórmula I compreendendo: colocar em contacto um composto da fórmula (4):

(4) com metilamina.

Numa forma de realização a reação é realizada numa solução aquosa de metilamina, inicialmente a uma temperatura de cerca de 0-5 °C, seguido por aquecimento até cerca de 50-70 °C. Alternativamente, a reação é realizada conforme mencionado acima mas num reator de pressão selado. Numa segunda forma de realização, o produto é isolado como o monoidrato puro dissolvendo o produto num solvente, por exemplo sulfóxido de dimetilo, adição de água purificada, filtração da suspensão consequentemente formada, lavagem do conteúdo do filtro com água seguida por etanol, e secagem do sólido restante sob vácuo a uma temperatura que não exceda 40 °C.

Num terceiro aspeto, a invenção refere-se ao método para a preparação do composto de fórmula I compreendendo adicionalmente sintetizar o composto da fórmula (4):

(4) compreendendo colocar em contacto um composto da fórmula (2) :

(2) com um excesso de 2 -formi1-3 -oxopropionato de etilo, preferentemente um excesso de cerca de 2-10 vezes, mais preferentemente um excesso de cerca de 5.-10 vezes.

Numa forma de realização, a reação é realizada em etanol, a uma temperatura de cerca de 80 °C. 0 2-formi1-3-oxopropionato de etilo está presente num excesso de 5-10 vezes.

Num aspeto adicional, a invenção refere-se ao método para a preparação do composto de fórmula I compreendendo adicionalmente a preparação de um composto da fórmula (2):

(2) compreendendo: colocar em contacto um composto da fórmula (1):

(1) com hidrazina.

Definições e Parâmetros Gerais A FIGURA 1 é um espetro de ΧΗ RMN de monoidrato de (l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6 -aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida (Forma A) . A FIGURA 2 mostra a análise térmica do monoidrato de (1-{9~[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida. A FIGURA 3 mostra o padrão de difração de Raios X para monoidrato de (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil) oxolan-2-il]-5-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida. A FIGURA 4 mostra o padrão de difração de Raios X para (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi- 5 -(hidroximetil) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida Forma B. A FIGURA 5 mostra o padrão de difração de Raios X (l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5 -(hidroximetil) oxolan-2- il]- 6-aminopurin-2 -il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida Forma C conforme comparado com a Forma A.

Conforme utilizado na presente memória descritiva, as seguintes palavras e frases destinam-se geralmente a ter os significados conforme estabelecido abaixo, exceto até à extensão do contexto no qual são utilizadas indique de outro modo. ™Opcional™ ou ™opcionalmente™ significa que o evento ou circunstância subsequentemente descrito pode ou não ocorrer, e que a descrição inclui casos onde o dito evento ou circunstância ocorre e casos em que não. 0 termo ™quantidade terapeuticamente eficaz™, refere-se à quantidade de um composto de Fórmula I que é suficiente para efetuar o tratamento, conforme definido abaixo, quando administrado a um mamífero com necessidade de tal tratamento. A quantidade terapeuticamente eficaz variará dependendo do indivíduo e condição de doença a ser tratada, do peso e idade do indivíduo, da gravidade da condição de doença, da forma de administração e semelhantes, que podem ser prontamente determinados por um perito na especialidade. 0 termo ™tratamento™ ou ™tratar™ significa qualquer tratamento de uma doença num mamífero, incluindo: (i) prevenir a doença, isto é, causar que os sintomas clínicos da doença não se desenvolvam; (ii) inibir a doença, isto é, deter o desenvolvimento de sintomas clínicos; e/ou (iii) aliviar a doença, isto é, causar a regressão dos sintomas clínicos.

Conforme utilizado no presente documento, ™portador farmaceuticamente aceitável ™ inclui todos e quaisquer solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antifúngicos e antibacterianos, agentes retardantes de absorção e isotónicos e semelhantes. A utilização de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente activas é bem conhecida na técnica. Excepto na medida em que qualquer meio ou agente convencional seja incompatível com o ingrediente ativo, a sua utilização nas composições terapêuticas ê contemplada. Podem também ser incorporados ingredientes ativos suplementares nas composições. 0 termo ™polimorfo™ pretende incluir amorfos e solvatos de (l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi- 5 - (hidroximetil) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida.

Foi descoberto que este composto é capaz de existir em pelo menos três formas cristalinas diferentes, referidas no presente documento como Forma A, Forma B, Forma C, e um produto amorfo.

Forma A: Este polimorfo pode ser produzido através de cristalização de 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]- 6 -aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida a partir de solventes próticos, por exemplo etanol ou mistura de etanol/água, ou a partir de um solvente polar, por exemplo sulfóxido de dimetilo/água. A Forma A foi mostrada como sendo um monoidrato, e é a mais estável dos vários polimorfos a temperaturas ambientes. É estável sob condições de stress por humidade relativa até ao seu ponto de fusão.

Forma B: Este polimorfo é produzido através de evaporação sob vácuo de uma solução de 1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]- 6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida em trifluoroetanol a temperaturas ambientes. A análise por raios X dos cristais foi distintamente diferente de qualquer outro polimorfo (veja-se a Figura 4), mas foi difícil determinar a sua constituição, já que a análise por raios X deu picos amplos desordenados, e o polimorfo continha quantidades variáveis de água. Foi constatado ser difícil reproduzir fiavelmente a preparação deste polimorfo.

Forma C: Este polimorfo é produzido através de suspensão de l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi- 5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida em acetonitrilo durante um período de tempo longo a 60 0C. A análise por raios X dos cristais foi distintamente diferente de qualquer outro polimorfo (veja-se a Figura 5) . 0 Polimorfo C foi mostrado como sendo um hidrato variável, que, a temperaturas elevadas, é dessolvatado a uma forma instável.

Material Amorfo: Este polimorfo é produzido aquecendo o polimorfo da Forma A a uma temperatura de até 200 °C.

Este polimorfo é instável na presença de humidade atmosférica, formando hidratos variáveis. Técnicas para Análise das Formas A, B, Ce Material Amorfo Difração de Raios-X em Pó

Foram levadas a cabo análises por difração de raios X em pó num difratómetro de raios X em pó Shimadzu XRD-6000 utilizando radiação Cu Ka. 0 instrumento foi equipado com um tubo de raios X de focagem fina, e a voltagem e amperagem do tubo foram ajustadas a 40 kV e 40 mA respetivamente. As ranhuras de divergência e dispersão foram ajustadas a 1 polegada e a ranhura de receção foi ajustada a 0,15 mm. Foi detetada radiação difratada através de um detetor de cintilação de Nal. Foi utilizado um rastreio contínuo teta-dois-teta a 3°/min (0,4 seg/0.02° etapa) a partir de 2,5-40° 2Θ. Foi utilizado um padrão de silicone para verificar o alinhamento do instrumento. Foram recolhidos dados e analisados dados utilizando software XRD-6000 v. 4,1.

Foram também levadas a cabo análises de difração de raios X em pó (XRPD) utilizando difratómetro Inel XRG-3000 equipado com um detetor CPS (Curved Position Sensitive) com um alcance 2Θ de 120 0. A calibragem do instrumento foi realizada utilizando um padrão de referência de silício. A voltagem e amperagem do tubo foram ajustadas a 40 kV e 30 mA, respetivamente. A ranhura do monocromador foi ajustada a 5 mm por 80 mm. Foram colocadas amostras num suporte de amostras de alumínio com um inserto de silício ou em capilares de vidro de qualidade XRPD. Cada capilar foi montado numa cabeça de goniómetro que é motorizada para permitir a rotação do capilar durante a aquisição de dados. Os dados em tempo real foram recolhidos utilizando radiação Cu-Ka a uma resolução de 0,03° 2Θ. Tipicamente, os dados foram recolhidos durante um período de 300 segundos. Somente são exibidos os pontos de dados dentro do intervalo de 2.5-40° 29 nos padrões XPRD representados graficamente. Análises Térmicas

Foram levadas a cabo análises termogravimétricas (TG) num analisador termogravimétrico TA Instruments 2050 ou 2950. Os padrões de calibragem foram níquel e Alumel™. As amostras foram colocadas numa esteira de amostras de alumínio, inseridas no forno de TG, e pesadas com exatidão. As amostras foram aquecidas em azoto a uma taxa de 10 °C/min a até 300 ou 350 °C. A menos que estabelecido de outro modo, as massas das amostras foram equilibradas a 25 °C no forno de TGA anteriormente à análise.

Foram levadas a cabo análises de calorimetria de varrimento diferencial (DSC) num calorímetro de varrimento diferencial TA Instruments 2920. Foram colocadas amostras pesadas com exatidão em bandejas prensadas ou bandejas seladas hermeticamente que continham um orifício para permitir a libertação de pressão. Cada amostra foi aquecida sob azoto a uma taxa de 10 °C/min até 300 ou 350 °C. Foi utilizado metal de índio como o padrão de calibragem. As temperaturas foram relatadas nos máximos de transição. Espectroscopia de Infravermelhos

Foram adquiridos espetros de infravermelhos num espetrofotómetro Magna 860® de espetroscopia de infravermelhos por trasformação de Fourier (FT-IR) (Nicolet Instrument Corp.) equipado com uma fonte de IV médio/longe Ever-Glo, um divisor de fixe de brometo de potássio de alcance estendido, e um detetor de sulfato de triglicerina deuterada (DTGS). A menos que seja indicado de outro modo, foi utilizando um acessório de refletância difusa Spectra-Tech Inc. (the Collector™) para amostragem. Cada espetro representa 256 varrimentos coadicionados a uma resolução espetral de 4 cm'1. A preparação das amostras para o composto consistiu em colocar a amostra num micro- recipiente e livelar o material com uma lâmina de vidro fosco. Foi adquirido um conjunto de dados de fundo com um espalho de alinhamento no lugar. Os espetros representam uma razão dos dados de feixe único da amostra ajustados ao conjunto de dados de feixe único de fundo. Foi realizada calibragem do comprimento de onda do instrumento utilizando poliestireno.

Espetrometria de RMN

Foram adquiridos espetros de Ή RMN de fase de solução das amostras à temperatura ambiente num espetrómetro Bruker de modelo AM-250 operando a 5,87 T (frequência de Larmor: Ή (250 MHz). Foram adquiridos dados de domínio de tempo utilizando uma largura de pulso de 7,5 ps e um tempo de aquisição de 1,6834 segundos sobre uma janela espetral de 5000 Hz. Foram recolhidos um total de 16.384 pontos de dados. Foi empregue um período de desfasamento de relaxamento de 5 segundos entre transitórios. Cada conjunto de dados consistiu tipicamente em 128 transitórios de média conjunta. Os espetros foram processados utilizando software GRAMS 132 AI, versão 6.00. 0 declínio de indução livre foi preenchidos com zeros até quatro vezes o número de pontos de dados e multiplicado exponencialmente com um fator de ampliação de linha de 0,61 Hz anteriormente à transformação de Fourier. Os espetros Ή foram referenciados internamente com tetrametilsilano (0 ppm) que foi adicionado como um padrão interno.

Alternativamente, foi levada a cabo análise RMN conforme descrito no Exemplo 4.

Análises de Sorção/Dessorção de Humidade

Foram recolhidos dados de sorção/dessorção de humidade num VTI SGA-100 Vapor Sorption Analyzer. Foram recolhidos dados de sorção e dessorção sobre um intervalo de humidade relativa (RK) a 5% a 95% a intervalos de HR a 10% sob uma purga de azoto. Foram utilizados cloreto de sódio (NaCl) e polivinilpirrolidona (PVP) como os padrões de calibragem.

Os critérios de equilíbrio utilizados para a análise foram a alteração da massa menor de 0,0100Ã e, 5 minutos, com um tempo de equilíbrio máximo de 180 minutos se o critério de massa não foi cumprido. Os dados representados graficamente não foram corrigidos para o teor de mistura inicial. Nomenclatura A estrutura do composto (l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6 -aminopurin-2 -il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida é conforme segue:

Síntese_de_(1 - { 9 - [ (4S,2R,3R,5R) - 3,4 -diidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida

Um Método de referência para a síntese a grande escala de (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-

(hidroximetil)oxolan-2-il]-6 -aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-meti1carboxamida é mostrado no Esquema de Reação I. ESQUEMA DE REAÇEE1 Ο I

Etapa 1 - Preparação da Fórmula (2) 0 composto de fórmula (2) é preparado a partir do composto de fórmula (1) através de reação com monoidrato de hidrazina na ausência de um solvente. A reação é levada a cabo a uma temperatura de cerca de 40 °C mais/menos 5 °C. Quando a reação está completa, o produto da fórmula (2) é isolado através de agitação com um solvente prótico no qual o composto da fórmula (2) tem solubilidade limitada, por exemplo metanol ou isopropanol. A mistura é agitada durante cerca de 1-5 horas, e posteriormente filtrada. O sólido é purificado através de agitação com água, filtração, e lavagem com água seguida por isopropanol e seco sob vácuo, que é levado até à etapa seguinte sem purificação.

Etapa 2 - Preparação da Fórmula (3) 0 composto da fórmula (2) é então convertido num composto de fórmula (3) através de reação com cerca de 1-1,2 equivalentes molares de 2 -formi1- 3 -oxopropionato de etilo. A reação é levada a cabo num solvente prótico, preferentemente etanol, a cerca da temperatura de refluxo, durante cerca de 2-4 horas. Após arrefecimento, até cerca de 0 °C, o sólido é separado através de filtração, lavado com etanol frio, e seco sob pressão reduzida. 0 produto de fórmula (3) é levado até à etapa seguinte sem purificação. Etapa 3 - Preparação do Produto Final O produto final é preparado a partir do composto de fórmula (3) através de reação com metilamina, preferentemente metilamina aquosa. A reação é levada a cabo a cerca da temperatura ambiente, durante cerca de 4 horas. 0 produto de Fórmula I é isolado através de meios convencionais, por exemplo através de filtração, lavagem do sólido com etanol frio, e secagem sob pressão reduzida. Preparação dos Materiais de Partida É utilizado (4S,2R,3R,5R)-2-(6-amino-2-cloropurin-9-il)-5-(hidroximetil)oxolano-3,4-diol como material de partida na etapa 1. Este composto está comercialmente disponível. É utilizado 2-formil-3-oxopropionato de etilo como material de partida na etapa 2. Está comercialmente disponível, ou pode ser fabricado conforme mostrado no Esquema de Reação II.

ESQUEMA DE REAÇÃO II

onde Et é etilo

3,3-dietoxipropionato de etilo é feito reagir com formato de etilo na presença de uma base forte, preferentemente hidróxido de sódio. A reação é levada a cabo a cerca de 0-5 °C, durante cerca de 24 horas. O produto é isolado através de meios convencionais, por exemplo através da adição de água e extração de impurezas com um solvente convencional, por exemplo éter de t-butilmetilo, acidificação da fase aquosa com, por exemplo, ácido clorídrico, seguido por extração com um solvente tal como diclorometano, e remoção do solvente a partir do extrato seco sob pressão reduzida. 0 método para a síntese a grande escala de ¢1-(9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi- 5 -(hidroximetil)oxolan-2-il]- 6 -aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida da invenção é mostrado no Esquema de Reação I.

ESQUEMA DE REAÇAO III

Etapa 1 - Preparação da Fórmula (2) O composto de fórmula (2) é preparado a partir do composto de fórmula (1) através de reação com monoidrato de hidrazina na ausência de um solvente. A reação é levada a cabo a uma temperatura de cerca de 45-55 °C mais/menos 5 °C. Quando a reação está completa, o produto da fórmula (2) é isolado através de agitação com um solvente prótico no qual o composto da fórmula (2) tem solubilidade limitada, por exemplo metanol ou isopropanol. A mistura é agitada durante cerca de 1-5 horas, e posteriormente filtrada. 0 sólido é purificado através de agitação com água, filtração, e lavagem com água seguida por etanol ou isopropanol e seco sob vácuo, que é levado até à etapa seguinte sem purificação.

Etapa 2 - Preparação da Fórmula (4) 0 composto da fórmula (2) é então convertido num composto de fórmula (4) através de reação com um excesso de 2-formil-3-oxopropionato de etilo, por exemplo um excesso de cerca de 2-10 vezes, preferentemente excesso de cerca de 5-10 vezes. A reação é levada a cabo num solvente prótico, por exemplo etanol, a cerca da temperatura de refluxo, durante cerca de 2-4 horas. Após arrefecimento, até cerca de 0 °C, o sólido é separado através de filtração, lavado com etanol frio, e seco sob pressão reduzida, e o produto de fórmula (4) é levado até à etapa seguinte sem purificação. 0 composto da fórmula (4) é desenhado como um derivado de alqueno (2E), já que este é o isómero principal formado nesta reação. Contudo, deve ser notado que pode também ser formada uma quantidade significativa do derivado de alqueno (2Z) nesta reação; isto é:

denominado como (2Z)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)-oxolan-2-il]-2-[4- (etoxicarbonil)pirazolil]purin-6-il}amino)-2-formilprop-2-enoato de etilo.

Consequentemente, embora o composto da fórmula (4) seja representado como o único derivado de alqueno (2E), o termo ™composto de fórmula (4)™ destina-se a incluir tanto o caso onde é unicamente o isómero (2E) , como o caso onde a maior porção do produto é o isómero (2E) e também está presente uma porção menor do isómero (2Z) . A conversão do composto de fómrula (4) no produto final através de reação com metilamina conforme descrito na Etapa 3 procede da mesma forma quer o composto de fórmula (4) esteja presente como o isómero (2E) quer como uma mistura do isómero (2E) e do isómero (2Z).

Etapa 3 - Preparação do Produto Final 0 produto final é preparado a partir do composto de fórmula (4) através de reação com metilamina, preferentemente metilamina aquosa. A reação é inicialmente levada a cabo a cerca de 0-5 °C durante cerca de 8 horas, preferentemente num reator de pressão, seguido por aumento da temperatura até 50-60 °C durante cerca de 1 hora, e manutenção da temperatura durante 15-30 minutos. 0 produto é isolado através de meios convencionais, por exemplo através de arrefecimento até 0-5 °C e manutenção de um vácuo durante cerca de 1 hora, consequentemente removendo a metilamina. O vácuo é removido, e o conteúdo restante mantido a 0-5 °C durante pelo menos 30 minutos, seguido por filtração. 0 sólido consequentemente obtido é lavado com água seguida por etanol, e seco sob pressão reduzida.

Este processo proporciona (l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi- 5 -(hidroximetil)oxolan-2-il]-6 -aminopurin-2 -il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida como o seu monoidrato. Este polimorfo pode ser adicionalmente purificado através de dissolução em sulfóxido de dimetilo, filtração de quaisquer impurezas sólidas a partir da solução, e precipitação do monoidrato a partir da solução através da adição de água. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1

Preparação de 2-formil-3-oxopropionato de etilo

Um balão de três ou quatro gargalos de fundo redondo equipado com uma barra de agitação magnética, termopar, termómetro digital, entrada e saída de gás e funil de adição foi descarregado com árgon. Foi carregado 3,3-dietoxipropionato de etilo (64,5 g) em tetraidrofurano no funil de adição. Foi carregado hidreto de sódio (21,2 g de uma dispersão a 60Ã) no balão de reação seguido por tetraidrofurano. 0 conteúdo do balão foi arrefecido até 0-5 °C num banho de gelo, e foi adicionado formato de etilo (257 g). A mistura foi adicionada a 0-5 °C e o conteúdo do funil de adição foi adicionado gota a gota, mantendo uma temperatura interna de menos de 5 °C. 0 banho de gelo foi removido e o conteúdo deixado aquecer até à temperatura ambiente. 0 consumo do 3.3-dietoxipropionato de etilo foi monitorizado através de análise TLC. A reação foi extinta através da adição de água gelada (10,6 vol), e extraída três vezes com éter t-butil metílico (5,4 vol cada), e as camadas orgânicas descartadas. A fase aquosa foi acidificada com ácido clorídrico concentrado até um pH de 1 a 1,5. A camada aquosa acidificada foi extraída três vezes com diclorometano e as camadas orgânicas combinadas secas sobre sulfato de sódio. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo destilado sob vácuo, para proporcionar 2 -formi1-3 -oxopropionato de etilo, 27,92 g, rendimento de 70Ã. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 2 A. Preparação de 2-Hidrazinoadenosina (2)

Um balão equipado com um agitador mecânico, entrada de gás, saída de gás e termopar foi descarregado com árgon. Foi adicionado hemiidrato de 2-c1oroadenosina (53,1 g) , seguido por monoidrato de hidrazina (134 g) . A mistura foi agitada durante aquecimento até 40-45 °C durante 2 horas. 0 progresso da reação foi seguido por análise TLC. Quando a reação estava completa, a fonte de calor foi removida e foi adicionado etanol (800 ml). A mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente, posteriormente o precipitado recolhido através de filtração. 0 bolo de filtro foi lavado com etanol e seco sob pressão reduzida durante 30 minutos, Os sólidos foram transferidos a um balão limpo equipado com um agitador mecânico e foi adicionada água (300 ml) . A suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas, e os sólidos isolados através de filtração. 0 bolo de filtro foi lavado com água gelada (300 ml) seguida por uma lavagem com etanol gelado (300 ml). 0 sólido foi lavado sob pressão reduzida para proporcionar 2-hidrazinoadenosina (41,38g, rendimento de 81,4Ã, pureza de 99,3Ã). B. Preparação Alternativa de 2-Hidrazinoadenosina (2)

Um recipiente de reação contendo hidrato de hidrazina (258 g, 250 ml) foi aquecido até 40-50 °C. À mistura quente foi adicionado hemiidrato de 2-cloroadenosina (100 g) em porções, mantendo a temperatura entre 45-55 °C. A temperatura foi mantida a esta temperatura durante duas horas, e posteriormente foi adicionada água desionizada durante um período de 30 minutos, mantendo a temperatura a 45-55 °C. A mistura foi então arrefecida gradualmente até 0-5 °C durante um período de 3 horas, posteriormente agitada a esta temperatura durante 30 minutos adicionais. O sólido foi então filtrado, e lavado com água desionizada (200 ml) fria (2-5 °C) , seguida por etanol (400 ml) . 0 sólido foi seco sob vácuo durante 12 horas, para proporcionar 2-hidrazinoadenosina. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 3

Preparação_de_1- { 9- [ (4S, 2R, 3R, 5R) - 3,4-diidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il-l-6-aminopurin-2-il)pirazol-4-carboxilato de Etilo (3)

Foi colocado 2-formil-3-oxopropionato de etilo (23,93g, 0,17 mol) num balão equipado com agitador mecânico, entrada de gás, saída de gás e condensador de refluxo. Foi adicionado 2-propanol ao balão seguido por 2-hidrazinoadenosina (44,45 g, 0,15 mol). A mistura foi aquecida até ao refluxo sob agitação durante 2-4 horas, seguindo o progresso da reação por análise TLC. Quando a reação foi considerada completa, a fonte de calor foi removida e a mistura arrefecida até à temperatura ambiente. A suspensão foi arrefecida sob agitação num banho de gelo durante 1,5 a 2 horas. Os sólidos foram isolados através de filtração por vácuo, e lavados com 2-propanol gelado. 0 produto, (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5- (hidroximet i1)oxolan-2 -i1]-6 -aminopurin-2-i1}pi razol-4 -carboxilato de etilo, foi seco sob pressão reduzida até uma massa constante. Rendimento 54,29g, pureza (através de HPLC) 96,6Ã. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 4

Preparação_de_(l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5- (hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il)pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida

Uma mistura de l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximet i1)oxolan-2 -i1]-6 -aminopurin-2-il}pirazol-4-carboxilato de etilo (46,4) e metilamina (40Ã em água, 600 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante cerca de 4 horas, seguindo o progresso da reação por análise HPLC. A maioria da metilamina em excesso foi removida sob pressão reduzida, e a restante mistura arrefecida a 0 °C durante 2 horas. 0 material solido foi filtrado, lavado com etanol puro gelado, e seco sob pressão reduzida, para proporcionar (1-{9 -[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi- 5 -(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-iljpirazol-4-il)-N-metilcarboxamida como o seu monoidrato, 36,6 g, pureza 99,6Ã. A estrutura do material foi confirmada através de XH RMN (veja-se a Figura 1 e abaixo). A análise térmica (veja-se a Figura 2) proporcionou resultados consistentes com a presença de uma molécula de água. Foram obtidos padrões de difração de raios X em pó (Figura 3).

Foram obtidos espetros RMN ^ e 13C da seguinte maneira. Duas amostras do material obtido acima foram pesadas e dissolvidas em d6-DMSO - foram utilizados 5,3 mg para os espetros 1H, e foram utilizados 20,8 mg para os espetros 13C. Todos os espetros foram adquiridos à temperatura ambiente num espetrómetro JEOL Eclipse+ 400 operando a 400 MHz para ]'H e 100 MHz para 13C.

Purificação de monoidrato de (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida

Uma solução de monoidrato de (l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida (100 g) em sulfõxido de dimetilo (300 ml) foi filtrada através de um pré-filtro de 0,6 a 0,8 micra e um filtro de 0,2 micra para remover quaisquer impurezas sólidas. 0 filtrado foi então lentamente adicionado durante um período de 1 hora a água desionizada (1 litro) com agitação, e a suspensão consequentemente produzida agitada durante não menos do que 1 hora. 0 sólido foi filtrado, lavado com água desionizada (2x1 litro) , e seco sob vácuo durante não menos do que 1 hora. O produto seco foi então suspenso novamente com água desionizada (1,5 litros) durante não menos do que 2 horas, filtrado, e lavado com água desionizada (1 litro) seguida por etanol absoluto (750 ml). 0 produto purificado foi seco sob vácuo a uma temperatura de não mais do que 40 °C durante não menos do que 12 horas, para proporcionar monoidrrato de (1-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5- (hidroximetil) oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida isento de quaisquer impurezas de 2-hidrazinoadenosina. EXEMPLO 5

Preparação de (2E)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)-oxolan-2-il]-2-[4-(etoxicarbonil)pirazolil-lpurin-6-iljamino)-2-formilprop-2-enoato de Etilo

Uma mistura de 2-hidrazinoadenosina (100 g, 0,34 mol), 2-formi1-3-oxopropionato de etilo (242g, 1,7 mol) e etanol absoluto foi carregada num reator, e a mistura aquecida até ao refluxo durante 2 horas. Quando a reação foi considerada completa, a fonte de calor foi removida e a mistura gradualmente arrefecida até 5-10 °C durante um período de 3 horas. A suspensão foi agitada durante 30 minutos a esta temperatura, e a mistura filtrada. 0 material sólido foi lavado com etanol absoluto frio (5-10 °C) , e posteriormente seco sob vácuo a uma temperatura que não excedeu 40 °C, para proporcionar (2E)3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)-oxolan-2-il]-2 -[4 - (etoxicarbonil)pirazolil]purin-6-il}amino)2-formilprop-2-enoato de etilo.

Uma análise elementar deu os seguintes resultados: C, 4 8,7 5Ã; H, 4,86Ã; N, 18,05Ã; 0, 27,57. Teórico: C, 49,72Ã; H, 4,74Ã; N, 18,45Ã; 0, 27,09. A análise corresponde aos limites de erro experimental para o hemiidrato do produto desejado. (C, 48,89Ã; H, 4,81 Ã; N, 18,1 Ã; 0, 28,12)

Foram obtidos espetros RMN LH e 13 C da seguinte maneira. 20,3 mg do composto de fórmula (4) foram dissolvidos em -0,75 ml de DMS0-d6, e os espetros obtidos à temperatura ambiente num espetrómetro de RMN JEOL ECX-400 operando a 4 00 MHz para ΧΗ e 100 MHz para 13C. Os deslocamentos químicos foram referenciados para o solvente de DMSO, 2,50 ppm para 1H e 3 9,5 ppm para ±JC.

RESULTADOS

Os deslocamentos químicos de 1H e l3C estão listados no Quadro 1. Foram observados dois isómeros numa razão de ~60/30 nos espetros de ΧΗ e de 13C, etiquetados como maior e menor no quadro.

0 composto de fórmula (4) foi confirmado como sendo uma mistura dos seguintes dois

isómeros:

Maior Menor EXEMPLO 6

Preparação_de_(1 - { 9 - [ (4S,2R,3R,5R) - 3,4 -diidroxi - 5 - (hidroximetil)oxolan-2-il]- 6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida a partir do Composto (4)

Foi colocada solução de metilamina a 40Ã aquosa (1300 ml) num reator de pressão, arrefecida até 0-5°C, e o produto do Exemplo 5 ( (2E)-3-({9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4- diidroxi-5-(hidroximetil)-oxolan-2-il]-2-[4-(etoxicarbonil)pirazolil-lpurin-6-il}amino)-2 -formilprop-2 -enoato de Etilo) (lOOg) adicionado. A mistura foi agitada a 0-5°C durante pelo menos 8 horas, monitorizando a reação para a conclusão. Quando completa, a mistura foi aquecida, mantendo a temperatura entre 50 e 60 °C durante 1 hora, e posteriormente arrefecida até menos de 30 °C durante um período de 1 hora. Quando a temperatura esteve por debaixo de 30 °C, a mistura foi desgasif içada utilizando uma pressão de 100-150 mm Hg, permitindo que a temperatura diminuísse até 0-5 °C. A mistura foi agitada a 0-5°C durante pelo menos 1 hora, mantendo a pressão a 100-150 mm Hg. 0 vácuo foi então interrompido e substituído com azoto, mantendo a temperatura a 0-5 °C durante não menos do que 30 minutos. 0 produto sólido foi então filtrado, lavado com água (3 x 500 ml), posteriormente com etanol absoluto (625 ml) . 0 produto foi seco sob vácuo, não permitindo que a temperatura excedesse 40 °C, para proporcionar (1-{9- [(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5 -(hidroximetil)oxolan-2-il]-6-aminopurin-2-ilJpirazol-4-il)-N-metilcarboxamida como o seu monoidrato.

Foram obtidos espetros RMN ΧΗ e 13C da seguinte maneira. Duas amostras do material obtido acima foram pesadas e dissolvidas em ds-DMS0 - foram utilizados 5,3 mg para os espetros 1H, e foram utilizados 20,8 mg para os espetros 13C. Todos os espetros foram adquiridos à temperatura ambiente num espetrómetro JEOL Eclipse+ 400 operando a 400 MHz para 1H e 100 MHz para ±3C.

Uma análise elementar deu os seguintes resultados: C, 43,9 6Ã; H, 4,94Ã; N, 27,94. Teórico: C, 44,12Ã; H, 4,94Ã; N, 27,44Ã; 0, 27,09. A análise corresponde aos limites de erro experimental para o monoidrato.

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, ο IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 6403567 B [0004] [0005] • WO 0078779 A [0007]

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Um método para a preparação a grande escala de (l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi- 5 - (hidroximetil)oxolan-2 -i1]-6-aminopurin-2-il}pirazol-4-il)

-N-metilcarboxamida: Fórmula 1 compreendendo: colocar em contacto um comoosto da fórmula (4):

(4) com metilamina. 2. 0 método de acordo com a reivindicação 1, em que o composto de fórmula (4) é feito reagir com uma solução aquosa de metilamina a uma temperatura inicial de cerca de 0-5 °C seguido por aquecimento até cerca de 50-70 °C. 3. 0 método de acordo com a reivindicação 1, em que a reação é realizada num reator de pressão selado. 4. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o produto final de l-{9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-diidroxi-5-(hidroximetil)oxolan-2-il]-6 -aminopurin-2 -il}pirazol-4-il)-N-metilcarboxamida é isolado como o monoidrato puro através de (a) dissolução do produto num solvente, (b) adição de agua pura, (c) filtração da suspensão consequentemente formada, (d) lavagem do conteúdo do filtro com água seguido por etanol, e (e) secagem do sólido restante sob vácuo a uma temperatura que não exceda 40 °C. 5. 0 método de acordo com a reivindicação 4, em que o solvente utilizado na etapa (a) é sulfóxido de dimetilo. 6. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que o método compreende adicionalmente sintetizar o composto da fórmula (4):

(4) ao colocar em contacto um composto da fórmula (2)

(2) com um excesso de 2-formil-3-oxopropionato de etilo. 7. 0 método de acordo com a reivindicação 6, em que a reação é realizada em etanol. 8. 0 método de acordo com a reivindicação 7, em que a reação tem lugar a uma temperatura de cerca de 80°C. 9. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, em que é utilizado um excesso molar de 2-formil-3-oxopropionato de etilo de 2-10 vezes.

10. O método de acordo com a reivindicação 9, em que é utilizado um excesso molar de 2-formil-3-oxopropionato de etilo de 5-10 vezes. 11. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, compreendendo adicionalmente a etapa (v): preparar o composto da fórmula (2):

(2) compreendendo: fazer reagir um composto da fórmula (1):

O) com hidrazina.