PT1420804E - Métodos e composições para o controlo da coccidiose - Google Patents
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Description
ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
DESCRIÇÃO
"Métodos e composições para o controlo da coccidiose" ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a métodos e composições para o controlo de infecções por coccidios em animais. Em particular, a invenção refere-se à utilização de preparações contendo parede celular de levedura e células de levedura para utilização no controlo de infecções por coccidios em espécies de mamíferos e aves. A coccidiose é uma infecção parasitica por protozoário de mamíferos e aves causada por espécies dos coccidios Eimeria e de que resultam lesões intestinais, diarreia, enterite e morte. As Eimeria spp. (E. tenella, E. maxima e E. acervulina) são três dos mais comuns coccidios que constituem pragas para a indústria das aves de criação. Estas espécies diferem no seu modo de acção. A E. tenella ataca o cego, enquanto a E. maxima e a E. acervulina atacam as regiões média e superior do tracto intestinal, respectivamente. A coccidiose é uma doença economicamente importante na produção de animais domésticos de criação e mesmo nas infecções menos graves, as perdas na eficiência de conversão dos alimentos e os reduzidos ganhos de peso podem representar a diferença entre o lucro e o prejuízo em situações de produção animal intensiva modernas. Sabe-se que as infecções por coccidios constituem um factor de predisposição para outras síndromas, em particular, enterite necrótica (uma infecção bacteriana do forro intestinal de que resulta necrose do forro intestinal em várias regiões do intestino).
Os organismos coccidios sobrevivem no ambiente devido à sua excepcional capacidade reprodutiva e devido à composição das paredes dos seus oocistos, que proporcionam capacidades de sobrevivência extraordinárias durante períodos de tempo significativos. Os oocistos são disseminados por via das fezes e das camas mas podem também ser disseminados através do ar, tal como por movimentos de poeiras, e por organismos vectores tais como minhocas, escaravelhos, moscas e outras pestes. Como 2 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ é prática convencional na indústria das aves de criação, por exemplo, reutilizar as camas, os coccidios nas camas de bandos anteriores infectados servem como reservatório para infecções futuras.
Os desinfectantes convencionais são relativamente ineficazes contra os coccidios. Uma limpeza exaustiva dos alojamentos e medidas estritas de biossegurança são necessárias para manter uma higiene correcta e reduzir o número de oocistos aos quais os animais e aves são expostos. Infelizmente, devido à relativamente rápida rotação de potenciais animais hospedeiros (por exemplo, a rápida substituição de bandos em operações de frangos de carne), é frequentemente mantido um reservatório permanente de oocistos. Mesmo apenas alguns oocistos são capazes de iniciar uma infecção massiva em poucas semanas. Assim, são necessárias medidas de controlo que vão para além da manutenção da higiene correcta.
Os métodos presentemente conhecidos de controlo de coccidios incluem a utilização de medicação anticoccidiana e protocolos de vacinação. Os fármacos anticoccidianos são geralmente eficazes para o seu fim pretendido; vantajosamente, são proporcionados na alimentação ou por via da água de beber aos animais a tratar. Os exemplos de fármacos incluem ionóforos (Monensina, lasalocida) e anticoccidianos químicos. Uma desvantagem significativa dos fármacos correntemente utilizados para o tratamento/controlo de coccidios é que, ao longo do tempo, os organismos tratados podem tornar-se resistentes a fármacos particulares. Assim, têm que ser utilizados diferentes fármacos, frequentemente num esquema de rotação ou sistemático (programas vaivém), para evitar o desenvolvimento de organismos resistentes. Mesmo em casos em que são implementados programas vaivém, é possível que a eficácia contra infecções por coccidios seja comprometida durante o período em que os fármacos anticoccidianos são alterados. Adicionalmente, certos fármacos, embora úteis no controlo da coccidiose, requerem um intervalo de segurança predeterminado antes do abate ou do consumo de produtos animais para abordar as questões de segurança associadas à venda da carne, leite e ovos de animais tratados. 3 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
As vacinas correntemente empregues contra organismos coccidios são geralmente também eficazes para o seu fim pretendido, criando uma imunidade activa contra a infecção em animais tratados. As vacinas são dispendiosas e sofrem da desvantagem de terem que conter os antigénios apropriados para estimular uma resposta imunitária protectora para cada espécie de organismo coccidio envolvida nos processos de doença. Em aves de criação, por exemplo, isto poderia ser qualquer uma ou todas as sete espécies do género Eimeria que infectam as aves domésticas. Adicionalmente, os protocolos de vacinação podem causar infecções subclinicas de várias gravidades, e assim, afectar negativamente o desempenho nos animais vacinados. A nossa publicação em Poultry Science, Janeiro 2002, Suplemento 1, página 134, Resumo S103, ensina o efeito de uma preparação de parede celular de levedura sobre a coccidiose em frangos jovens.
Assim, permanece uma necessidade na especialidade de métodos alternativos para o controlo de infecções por coccidios em animais de criação, com o beneficio de produtividade e rentabilidade melhoradas e onde esses métodos alternativos não conduzam ao desenvolvimento de organismos resistentes e/ou requeiram longos intervalos de segurança antes do abate.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona composições para a prevenção, redução ou melhoria de infecções por coccidios em animais de criação, incluindo suinos e aves de criação. As composições podem ser genericamente descritas como preparações contendo parede celular de levedura ou células de levedura. Numa concretização, as composições da presente invenção compreendem preparações derivadas de parede celular de levedura, onde as preparações compreendem quantidades significativas de manano-oligossacárido(s), por exemplo, manano-oligossacáridos. A presente invenção compreende a alimentação de um animal com uma quantidade de composição contendo parede celular de levedura ou contendo células de levedura, eficaz para prevenir ou reduzir infecções por coccidios, ou para melhorar os efeitos prejudiciais de uma 4 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ infecção por coccídios, uma vez estabelecida, no animal ao qual a composição é alimentada. O manano-oligossacárido e/ou a composição contendo parede celular de levedura ou contendo células de levedura podem ser incorporados nas rações de alimentação do animal ou a composição pode ser proporcionada na forma de um suplemento alimentar ao animal. As composições da presente invenção podem ser preparadas a partir de uma levedura edivel incluindo, mas não se lhes limitando, Saccharomyces cerevisiae (ou outra espécie de Saccharomyces), Candida, Kluyveromyces ou Torulaspora. Como aqui especificamente se exemplifica, a preparação derivada de levedura é preparada a partir de células de Saccharomyces cerevisiae NCYC 1026. Pode-se conseguir uma melhoria adicional na prevenção, redução ou melhoria de infecções por coccidios quando as composições contendo parede celular de levedura ou células de levedura contêm ainda um ionóforo anticoccidiano (e.g., monensina ou lasalocida) e/ou um tensioactivo esteróide (tal como sapogenina).
Ainda outros objectos da presente invenção serão evidentes para os peritos na especialidade a partir da presente descrição onde se mostra e descreve uma concretização preferida da presente invenção, simplesmente com o fim de ilustração de um dos modos mais bem adequados para realização da invenção. Como será evidente, a presente invenção é susceptivel de outras concretizações diferentes e os seus vários detalhes são susceptíveis de modificação em vários aspectos óbvios, todos sem afastamento à invenção. Assim, as presentes descrições serão consideradas de natureza ilustrativa e não restritiva.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção previne, reduz ou melhora infecções por coccidios em animais. Em particular, a invenção proporciona a utilização de uma composição para prevenção ou melhoria de infecções por coccídios em animais compreendendo a alimentação com uma quantidade eficaz de uma preparação derivada de levedura, desejavelmente contendo materiais de parede celular de levedura incluindo manano-oligossacáridos. As preparações derivadas de células de levedura para utilização nas composições e métodos da presente invenção 5 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ podem ser feitas utilizando células de qualquer de várias leveduras ediveis incluindo, mas não se lhes limitando, espécies de Saccharomyces, Candida, Kluyveromyces ou Torulaspora. Numa concretização especificamente exemplificada, a levedura é a Saccharomyces cerevisiae estirpe NCYC 1026. Esta estirpe está depositada na American Type Culture Collection, Manassas, VA (N.° de Acesso 46785) e na Agricultural Research Service, Peoria, IL (N.° de Acesso NRRL Y-11875). Como especificamente exemplificado, a composição derivada de células de levedura está comercialmente disponível em Alltech, Inc., Nicholasville, KY (BIO-MOS®). Esta composição contém material de parede celular de levedura e manano-oligossacárido derivado de levedura.
As composições da presente invenção, como aqui descrito, podem ser dadas como suplementos ou incorporadas em alimentos comercialmente disponíveis. Uma pessoa competente na matéria reconhecerá que as quantidades da composição alimentada variam dependendo da espécie do animal, da idade do animal, do tamanho do animal, e do tipo de alimento ao qual é adicionada a composição ou de acordo com a utilização como suplemento nutricional separado.
As composições a utilizar na presente invenção, são adequadas para prevenção ou melhoria de infecções por coccidios em qualquer animal, incluindo, mas não se lhes limitando, espécies bovina, porcina, aviária, equina, ovina, de leporídeos e caprina. Nem todos os rebanhos ou bandos são infectados com coccidios nem todos são ambientes agrícolas. As aves às quais as composições contendo parede celular de levedura podem ser dadas para prevenir, reduzir ou melhorar infecções por coccidios incluem aves de criação, pombos e aves de companhia (araras, periquitos, catatuas, canários, fringelídeos, papagaio e semelhantes). As aves criadas para a produção de ovos, carne ou desporto incluem, sem limitação, codornízes, tetrazes, faisões, galináceos, gansos, patos, perus, e outros. Os mamíferos podem também beneficiar do suplemento derivado de levedura, especialmente aqueles com importância para a agricultura, tais como suínos, gado vacum, bisontes, cavalos, ovelhas, cabras e outros. 6 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
Estudos clínicos de provocação consistem em infectar aves jovens oralmente com uma dose específica de coccídios, e depois medir o nível de infecção, os danos no tecido intestinal, a mortalidade e os efeitos negativos da infecção sobre o desempenho (ganho de peso e conversão de alimentos). A alimentação das aves com uma composição derivada de células de levedura, especialmente uma composição contendo parede celular de levedura e manano-oligossacáridos preparada como aqui se descreve adiante, reduziu a taxa de lesões, e os efeitos negativos da infecção sobre o ganho de peso e a gravidade das lesões intestinais, como ilustrado nos Exemplos que se seguem. Estes Exemplos não devem ser entendidos como impondo qualquer limitação ao âmbito da presente invenção. Pode-se obter uma melhoria adicional no desempenho em relação a efeitos anticocidianos quando as composições contendo células de levedura ou contendo parede celular de levedura também contêm um ionóforo anticoccidiano tal como monensina ou lasalocida e/ou uma sapogenina esteróide anticoccidiana (veja-se, e.g., ΕΡ 1 082 909).
As abreviaturas e a nomenclatura, quando empregues, consideram-se as Standard no campo e vulgarmente utilizadas em publicações profissionais tais como as aqui citadas.
EXEMPLOS
Exemplo 1.
Realizou-se um ensaio de 28 dias com 360 pintos Cornish Rock machos para investigar os efeitos de duas alimentações medicadas sobre a supressão de efeitos detrimentais de E. tenella (Vejam-se as Tabelas I & II).
Alimentaram-se pintos com um dia de idade com dietas Standard de milho e soja contendo Monensina (60 g/kg) ou uma composição contendo parede celular de levedura/manano- oligossacárido (BIO-MOS®, Alltech, Inc., Nicholasville, KY) (1 kg/tonelada). Os grupos experimentais incluíram: 1) controlo negativo (não medicado, não provocado); 2) controlo positivo (não tratado, provocado); 3) tratado com Monensina, provocado e 4) tratado com BIO-MOS®, provocado. As aves foram 7 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ atribuídas aleatoriamente a três galinheiros replicados em cada grupo de tratamento. Aos 14 dias de idade, os pintos foram infectados oralmente por sonda endogástrica com E. tenella (50 000 oocistos/ave). As variáveis de resposta medidas incluíram o ganho de peso corporal semanal e pontuações de lesão cecal como descrito (Johnson e Reid. 1970 "Anticoccidial Drugs: Lesion Scoring Technique in Battery and Floor Pen Experiments with Chickens." Exp. Parasitol. 28:30-36). Avaliaram-se as diferenças dos tratamentos utilizando o procedimento LSD com o procedimento General Linear Models Procedure (SAS Institute, 1985, Cary, NC) utilizando galinheiros como unidades experimentais. O programa modelo incluiu apenas efeitos do tratamento. Quando se observaram diferenças significativas (P<0,05), aplicou-se o procedimento das diferenças mínimas significativas (LSD - Least Significant Differences) para testar as diferenças entre os tratamentos. A administração tanto de monensina como de BIO-MOS® reduziu significativamente (P<0,05) a gravidade das infecções por E. tenella como medido pelas pontuações de lesão cecal (Tabela I). O estado de saúde melhorado das aves que receberam BIO-MOS® reflectiu-se em melhorias nos ganhos de peso médio relativamente ao controlo provocado com E. tenella (Tabela II) . O ganho de peso médio de aves que receberam BIO-MOS® foi semelhante ao observado no grupo de controlo não provocado (saudável) e 5% maior do que o observado no grupo não tratado e provocado com E. tenella. Não se observaram melhorias semelhantes no ganho de peso em aves que receberam o tratamento Standard com monensina.
Exemplo 2
Realizou-se um ensaio de 28 dias com 360 pintos Cornish Rock machos para investigar os efeitos de duas alimentações medicadas sobre a supressão da infecção por E. maxima. Alojaram-se trinta pintos com um dia de idade por grupo de tratamento em gaiolas em bateria e alimentaram-se com uma dieta Standard de milho e soja contendo monensina (60 g/kg) ou uma composição derivada de células de levedura comercialmente disponível contendo material de parede celular de levedura e manano-oligossacárido (BIO-MOS®) (1 kg/tonelada). Os quatro grupos experimentais incluíram: 1) controlo negativo (não 8 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ medicado, não provocado); 2) controlo positivo (não medicado, provocado); 3) tratado com monensina, provocado, e 4) tratado com BIO-MOS®, provocado. As aves foram atribuídas a galinheiros de tratamento e replicados como descrito no Exemplo 1.
Aos 14 dias de idade, os pintos foram infectados oralmente por sonda endogástrica com E. maxima (50 000 oocistos/ave). As variáveis de resposta medidas incluíram ganho de peso corporal semanal e pontuações de lesão cecal. Estas medições foram submetidas a análise de variância como descrito no Exemplo 1.
Os tratamentos com monensina e BIO-MOS® reduziram, cada um, significativamente, as pontuações de lesão cecal associadas a infecções por E. maxima. A monensina reduziu as pontuações médias de lesão cecal em 21% e o BIO-MOS® reduziu as pontuações médias de lesão cecal em 28% (Tabela III) . Estes resultados confirmam gue o suplemento dietético BIO-MOS® melhora a gravidade de lesões cecais causadas por infecção por E. maxima. O ganho médio de peso corporal de pintos tratados com BIO-MOS® durante as semanas 2-4 foi de 27% relativamente ao ganho médio de peso corporal dos pintos de controlo positivo (não tratados, provocados) (Tabela IV) e foi mais eficaz do gue a monensina a ultrapassar a diminuição do crescimento associada com a provocação com coccídios. Assim, os pintos alimentados com BIO-MOS® foram capazes de manter um ganho de peso corporal como medida do desempenho na presença da provocação com E. maxima.
Exemplo 3
Realizou-se um ensaio de 28 dias com 360 pintos Cornish Rock machos para investigar os efeitos de duas alimentações medicadas sobre a supressão de efeitos detrimentais de E. acervulina.
Alimentaram-se os pintos com um dia de idade com uma dieta Standard de milho e soja contendo salinomicina (6 mg/kg) ou BIO-MOS® (1 kg/tonelada). Os quatro grupos experimentais 9 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
foram: 1) controlo negativo, não medicado, não provocado; 2) tratado com salinomicina, provocado, 3) tratado com BIO-MOS®, provocado e 4)tratado com BIO-MOS®, não provocado. As aves foram atribuídas aleatoriamente a três galinheiros replicados em cada grupo de tratamento. Aos 14 dias de idade, os pintos foram infectados oralmente por sonda endogástrica com E. acervulina (500 000 oocistos/ave). As variáveis de resposta medidas incluíram o ganho de peso corporal semanal e as pontuações de lesão cecal. Os resultados foram submetidos a ANOVA utilizando o procedimento General Linear Model (SAS
Institute, Cary, NC) como descrito no Exemplo 1. O BIO-MOS®, tal como a salinomicina, reduziu significativamente a gravidade de lesões cecais como medido pelas pontuações de lesão cecal. O BIO-MOS® reduziu a gravidade das lesões em 49% e a salinomicina em 57% (Tabela V). Os pintos tratados com BIO-MOS® tinham um ganho médio de peso corporal médio 12% superior ao controlo positivo (Tabela VI). Os resultados confirmam que a adição da preparação de parede celular de levedura pode ser utilizada para manter o desempenho de pintos provocados com E. acervulina.
Exemplo 4
Realizou-se um ensaio em bateria de 20 dias para determinar a actividade anticoccidiana de uma composição de células de levedura em pintos (Cobb) provocados com espécies de Eimeria esporuladas. Alojaram-se cento e sessenta pintos (um dia de idade) em gaiolas em bateria (10 pintos por gaiola, 459 cm2/ave). Houve quatro gaiolas replicadas por tratamento. Proporcionou-se uma dieta Standard de milho e soja com água ad libitum. Os grupos de tratamento foram os seguintes: (1) controlo negativo (não medicado, não provocado); 2) controlo positivo (não medicado, provocado; 3) BIO-MOS®, 1 kg/tonelada (provocado); e 4) salinomicina, 60 g/tonelada (provocado). O inoculo de provocação foi proporcionado aos 14 dias de idade e continha 50 000 oocistos de E. acervulina, 5000 de E. maxima ou 40 000 de E. tenella, respectivamente, administrado por sonda endogástrica oral. Mediaram-se os pesos corporais e o consumo de alimentos aos 9, 14 e 20 dias de 10 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ idade. Seis dias após a infecção sacrificaram-se todas as aves e pontuaram-se as lesões utilizando o método de Johnson e Reid (1970) supra. As pontuações das lesões foram avaliadas nas regiões superior (E. acervulina), média (E. maxima) e cecal (E. tenella) do intestino.
As pontuações das lesões cecais para os pintos tratados com BIO-MOS® e tratados com salinomicina foram todas significativamente reduzidas (P<0,05) em comparação com ambos os grupos de controlo nas regiões superior e média do intestino (Tabela VII). Uma redução da pontuação da lesão cecal para os dois grupos tratados indica que tanto o BIO-MOS® como a salinomicina conferem controlo da provocação com coccidios em comparação com o controlo não tratado, provocado.
Os ganhos de peso após provocação foram significativamente inferiores (P<0,05) no controlo provocado (18,48%) do que no controlo não provocado (Tabela VIII). Observou-se uma redução menos acentuada no peso (11,6%) em pintos que receberam BIO-MOS®. O BIO-MOS® reduziu as pontuações das lesões e melhorou o ganho de peso após provocação aquando da provocação com Eimeria. Estas verificações suportam a conclusão de que o BIO-MOS® reduz a gravidade da infecção e aumenta o desempenho na presença de infecção por coccidios.
Exemplo 5
Realizou-se um ensaio em bateria de 20 dias para determinar a actividade anticoccidiana de um BIO-MOS® em pintos (Cobb) provocados com espécies de Eimeria esporuladas. Alojaram-se cento e sessenta pintos (um dia de idade) em gaiolas em bateria (10 pintos por gaiola, 459 cm2/ave). Haviam 4 gaiolas replicadas por tratamento. Proporcionou-se uma dieta Standard de milho e soja com água ad libitum. Os grupos de tratamento foram os seguintes: 1) Controlo negativo (não medicado, não provocado); 2) Controlo positivo (não medicado e provocado; 3) BIO-MOS®, 1 kg/tonelada (provocado); e 4) Salinomicina, 60 g/tonelada (provocado). 11 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ Ο inoculo de provocação foi proporcionado aos 14 dias de idade e continha respectivamente, 50 000 oocistos de E. acervulina, 5000 de E. maxima ou 40 000 de E. tenella administrado por sonda endogástrica oral. Mediram-se os pesos corporais e o consumo de alimento aos 0, 14 e 20 dias de idade.
Seis dias após a infecção sacrificaram-se todas as aves e pontuou-se as lesões, utilizando o método de Johnson e Reid supra. Avaliaram-se as pontuações das lesões nas regiões superior (E. acervulina), média (E. maxima) e cecal (E. tenella) do intestino.
Os grupos tratados com BIO-MOS® e tratados com salinomicina tinham pontuações de lesões significativamente inferiores às do controlo positivo em todas as regiões do intestino (Tabela IX) . O BIO-MOS® reduziu as pontuações das lesões em 33%. O BIO-MOS® foi também útil para manter o desempenho das aves como reflectido num ganho de peso de 104% após provocação relativamente ao controlo positivo (não tratado, provocado) (Tabela X) . Este aumento de ganho de peso após a provocação reflecte um desempenho melhorado na presença de uma infecção por Eimeria.
Exemplo 6
Realizaram-se três ensaios de 42 dias para avaliar os efeitos de AVATEC (lasalocida, Alpharma, Fort Lee, NJ), um ionóforo anticoccidiano (90,7 g/ton); Bacitracina Zn, (50 g/t) e BIO-MOS® (0,5 kg/tonelada) sobre o crescimento de pintos criados em camas recicladas. Colocaram-se sessenta pintos (um dia de idade) Cornish Rock machos em cada um de quatro grupos de tratamento (replicados três vezes) consistindo no seguinte: 1) Controlo (aves não tratadas); 2) tratados com BIO-MOS®, 3) tratados com AVATEC, e 4) tratados com Bacitracina ZN. Utilizaram-se aparas de pinheiro nas quais frangos infectados com E. tenella, E. maxima e E. acervulina tinham sido criados, como cama reciclada para os ensaios. Atribuiram-se galinheiros contendo esta cama reciclada aos quatro grupos de tratamento antes do inicio do ensaio, e introduziram-se os pintos de um dia de idade em cada um dos três subsequentes ensaios com a mesma cama reciclada. 12 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
As dietas consistiram em principalmente milho e soja suplementados com os necessários vitaminas e minerais para satisfazer os requisitos de 1994 National Research Council. Mediram-se semanalmente os pesos corporais. Os pesos corporais médios dos pintos alimentados com dietas suplementadas com BIO-MOS® foram significativamente superiores aos controlos (P<0,05) e foram comparáveis aos dos pintos alimentados com Bacitracina e AVATEC (lasalocida) em todos os três ensaios (Tabela xi). As médias de peso corporal médio dos pintos em todos os tratamentos diminuíram em cada ciclo de reutilização da cama devido a infecção. Contudo, os pesos corporais médios de pintos que receberam BIO-MOS® para cada um dos três ensaios eram em média 7% superiores à média de pesos corporais do grupo de controlo, demonstrando a capacidade do BIO-MOS® para manter o desempenho na presença de uma provocação com coccidios.
Exemplo 7
Alojaram-se duzentos pintos (um dia de idade) em dez câmaras de isolamento microbiano. Aos 15 dias de idade, 150 foram alojados aleatoriamente, igualmente em 10 câmaras de isolamento microbiano. Os pintos nas cinco câmaras de controlo receberam ração de iniciação para pintos não tratada; os das câmaras de tratamento receberam a mesma ração à qual se adicionaram 0,1% de BIO-MOS®. No dia 22 todos os pintos receberam 2,9 χ 105 oocistos de E. acervulina por sonda endogástrica oral. Recolheram-se fezes sob os fundos de rede de arame levantada diariamente em cada câmara, e contaram-se os oocistos dos dias 21-35. As contagens de oocistos fecais de pintos tratados foram inferiores (P<0,05) nos dias 26, 27 e 29, demonstrando que o BIO-MOS® reduziu significativamente os oocistos no pico da infecção. Isto reflecte a capacidade do BIO-MOS para reduzir a proliferação de E. acervulina num sistema de produção de aves de criação.
Exemplo 8
Nas experiências aqui descritas, prepararam-se composições derivadas de levedura utilizando células de S. cerevisiae, estirpe NCYC 1026 (American Type Culture Collection, Manassas, VA, N.° de Acesso 46885; Agricultural 13 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
Research Service, Peoria, IL, NRRL N.° de Acesso Y-11875). O extracto de parede celular de levedura é obtido por métodos vulgarmente conhecidos na especialidade. (Veja-se, Peppler, H.j. 1979. Production of Yeasts and Yeast Products. Página 157 em: Microbial Technology & Microbial Processes, Vol. 1 (2nd Ed.), Academic Press). Resumidamente, o organismo de levedura é crescido seguindo técnicas comuns utilizadas em fermentações relacionadas com alimentos e na indústria das bebidas. Utilizam-se meios complexos que permitam a proliferação rápida das células de levedura. Pode-se utilizar qualquer um de vários meios contendo açúcar comum, tais como melaços diluídos, para o crescimento das células. Podem ser empregues outros componentes do meio incluindo milho, açúcares de madeira, licor de desperdício de sulfito e soro de leite. As células de levedura são então separadas do meio esgotado por centrifugação, por exemplo, lavadas e novamente recolhidas para originar um "creme de leveduras".
Após a separação, as células no creme de leveduras são lisadas. Pode ser utilizado qualquer um de vários métodos comuns na especialidade para lisar os organismos de levedura, incluindo autólise, hidrólise ou meios mecânicos (congelação-descongelação, extrusão ou ultra-sons). Como especificamente exemplificado, a suspensão de células de levedura é diluída com água até uma concentração de 10-12% de sólidos secos e depois é aquecida até uma temperatura de 140°F. O pH é ajustado para aproximadamente 8,5, por exemplo com hidróxido de sódio. Pode-se adicionar uma protease tal como papaína ou qualquer uma de várias proteases alcalinas ou neutras, durante a fase de lise, para acelerar a solubilização de proteínas de levedura no material das células rompidas. Após uma incubação inicial com uma protease, geralmente cerca de 2 horas, o pH é ajustado para cerca de 8,0 e a temperatura da mistura é lentamente aumentada para aproximadamente 158°F. A mistura é mantida a cerca de 158°F durante cerca de 30 min. O resultante material particulado contendo parede celular de levedura é recolhido por centrifugação para remover componentes intracelulares de baixo peso molecular e concentrar o extracto de parede celular. O concentrado resultante é seco (através de qualquer de vários métodos comuns na especialidade, incluindo secagem por pulverização ou secagem em tambor) para formar um pó higroscópico, solúvel em água. O pó seco pode ser 14 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ adicionado directamente às rações de alimentação animal em taxas de cerca de 0,5 a cerca de 20 kg/tonelada, e todos os valores e gamas entre estes.
Os exemplos anteriores demonstram que os métodos da presente invenção, í.e., que proporcionam uma composição derivada de células de levedura, a animais em risco de contrair infecções por coccidios, são eficazes na redução dos efeitos de doença de infecções por coccidios. A presente invenção foi eficaz na redução de efeitos prejudiciais da infecção por coccidios por organismos coccidios vulgarmente encontrados, e sob condições representativas da produção moderna de animais. Adicionalmente, os métodos e composições da presente invenção foram comparáveis ou superiores a métodos existentes de controlo da infecção por coccidios incluindo tratamentos com monensina e salinomicina. Vantajosamente, os métodos e composições da presente invenção permitem a melhoria de efeitos prejudiciais de infecção por coccidios sem risco de criar organismos coccidios resistentes, e sem requerer um intervalo de segurança prolongado antes do abate, antes da comercialização de ovos, carne ou leite dos animais tratados. A descrição anterior de uma concretização preferida da invenção foi apresentada para fins de ilustração e descrição. Não se pretende ser exaustivo ou limitar a invenção à forma precisa descrita. São possíveis modificações ou variações óbvias à luz dos ensinamentos anteriores. A concretização foi escolhida e descrita para proporcionar a melhor ilustração dos princípios da invenção e sua aplicação prática para desse modo permitir que um perito na especialidade utilize a invenção em várias concretizações e com várias modificações adequadas á utilização particular contemplada. 15 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
Tabela I: Efeitos de Tratamentos com Monensina e BIO-MOS® sobre as Pontuações de Lesão Cecal de Pintos Infectados com E. tenella. Tratamentos Pontuações de Lesão Cecal Controlo negativo 0, 83b Controlo positivo 3,17a Monensina 1,50b BIO-MOS® 1,33b a b- As médias nas colunas com diferentes expoentes são estatisticamente diferentes (P<0,05)
Tabela II: Efeitos de Tratamentos com Monensina e BIO-MOS® sobre o Ganho Médio de Peso em Gramas de Pintos Infectados com E. tenella Durante as Semanas 2-4 Após a Provocação Replicações Tratamentos 3 2 3 Média DP Controlo negativo 730 498 589 606 164,4 Controlo positivo 585 543 606 578 100,5 Monensina 498 611 523 544 312,5 BIO-MOS® 595 655 564 605 85,3
Tabela III: Efeitos de Tratamentos com Monensina e BIO-MOS® sobre as Pontuações de Lesão Cecal de Pintos Provocados com E. maxima Tratamentos Pontuações de Lesão Cecal Controlo 0, 85b Controlo Positivo 2,33a Monensina 0, 93b BIO-MOS® 1, 67b a'b As médias nas colunas com diferentes expoentes são estatisticamente diferentes (p<0,5) 16 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
Tabela IV: Efeitos de Tratamentos com Monensina e sobre o Ganho Médio de Peso de Pintos Infectados com 2-4 Semanas Após a Provocação BIO-MOS® E. maxima Replicações Tratamentos 1 2 3 Média DP Controlo negativo 730 498 589 606 164,7 Controlo positivo 385 443 505 444 112,82 Monensina 598 412 599 536 142,9 BIO-MOS® 613 541 582 565 83,1
Tabela V: Efeitos de Salinomicina e BIO-MOS® sobre as Pontuações de Lesão Cecal de Pintos Provocados com E. acervulina Tratamentos Pontuações de Lesão Cecal Controlo 0,81c Controlo positivo 2,14b BIO-MOS® 1,101a Salinomicina 0, 92bc a b- As médias nas colunas com diferentes expoentes são estatisticamente diferentes (p< 0,05)
Tabela VI: Efeitos de Tratamentos com Salinomicina e BIO-MOS® sobre o Ganho de Peso Corporal de Pintos a 2, 3, 4 Semanas Antes e Após a Provocação com E. acervulina Tratamentos Provocação Peso Corporal Antes da Infecção (gramas) Ganho de Peso Corporal Após a Infecção (gramas) Semana 2 Semana 3 Semana 4 Controlo Não 194b 351ab 580ab Controlo Sim 19 5b 293b 533b Salinomicina Sim 236a 350a 6 0 7ab BIO-MOS® Não 234a 370a 659a BIO-MOS® Sim 232a 332ab 599ab a b- As médias nas colunas com diferentes expoentes são estatisticamente diferentes (p<0,05) 17 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
Tabela VII: Efeitos de Tratamentos com Salinomicina e BIO-MOS® sobre as Pontuações Médias de Lesão Cecal em Pintos Infectados com Eimeria spp. Tratamento Superior Médio Cecal Total Controlo negativo 0,0 0, 0 0, 0 0,0 Controlo positivo 2,3 1,8a 2, 7a 6, 7a BioMos 1 kg/t Λ [-- I—1 1,3b 1,5b 4,5b Salinomicina 60 g/t 1,3° O co o O o 2,7C
Tabela VIII: Efeitos de Tratamentos com Salinomicina e BIO-MOS® sobre a Conversão de Alimentos, Ganho Médio de Peso e % de Redução em Peso de Pintos Infectados com Eimeria spp. Conv. de Alim. Ganho Médio de Peso Vivo (kg) % de Redução de Ganho de Peso Tratamento Dia 0-14 Dia 0-20 Dia 14-20 Controlo negativo 1, 4 3lb 0,640a 0,640a 0,312a 0, 00 Controlo positivo 1,555a 0,592b 0,592b 0,255b 18, 48 BIO-MOS lkg/t 1,538a 0,617ab 0, 617ab 0,276b 11,59 Salinomicina 60g/t 1,511b 0,634a 0,634a 0,314a -0, 41 a b- As médias nas colunas com diferentes estatisticamente diferentes (p<0,05) expoentes são
Tabela IX: Efeitos de Tratamentos com BIO-MOS® e Salinomicina sobre as Pontuações Médias de Lesão Cecal de Pintos infectados com Eimeria spp. nas Regiões Superior, Média e Cecal dos Intestinos Tratamento Superior Médio Cecal Total Controlo negativo o O O o,ob O O α O O α Controlo positivo 1,6a 1,6a 2, 5a 5,8a BioMos lkg/t 0, 9b l,lb 1, 9ab 3, 9ab Salinomicina 60 g/t X3 00 o O > tr 1, 2b 2, 7ab 18 ΕΡ 1 420 804/ΡΤ
Tabela X: Efeitos de Tratamentos com BIO-MOS® e Salinomicina sobre a Conversão de Alimentos, o Ganho Médio de Peso Vivo e a % de Redução de Peso de Pintos Infectados com Eimeria spp. Conv. de Alim. Ganho Médio de Peso Vivo (kg) % de Redução de Ganho de Peso Tratamento Dia 0-14 Dia 0-20 Dia 14-20 Controlo negativo 1,575b 0,257a 0,523a 0,266a 0, 00 Controlo positivo 1,826a 0,248a 0,473b 0,226b 15,24 BIO-MOS lkg/t 1,787a 0,281a 0,516a 0,235ab 11,59 Salinomicina 60g/t 1,675a 0,262a 0,504ab 0,243ab co o a b As médias nas colunas com diferentes expoentes são estatisticamente diferentes (p<0,05)
Tabela XI: Efeitos de Tratamentos com avatec, Bacitracina ZN e BIO-MOS® sobre os Pesos Corporais de Pintos Crescidos em Camas Recicladas Infectadas com Eimeria spp Peso Corporal em Gramas Tratamento Ensaio 1 Ensaio 2 Ensaio 3 Controlo 1993b 1696° 16 9 6 b AVATEC2 2271 a 18 6 3b 1760ab Bacitracina Zn3 2272a 2211a 1819a BIO-MOS® 2186a 18 3 2b 1760ab a b- As médias nas colunas com diferentes expoentes são estatisticamente diferentes (p<0,05)
Lisboa
Claims (14)
- ΕΡ 1 420 804/ΡΤ 1/2 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de parede celular de leveduras para o fabrico de um medicamento para prevenção ou redução de infecção por coccidios.
- 2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a referida composição é misturada com uma ração alimentar antes da alimentação do referido animal.
- 3. Utilização de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a referida composição é formulada para alimentar um animal na forma de um suplemento alimentar.
- 4. Utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que a referida composição compreende pelo menos um manano-oligossacárido derivado de levedura.
- 5. Utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que a referida composição é formulada para alimentação de uma espécie bovina, porcina, avicola, equina, ovina, de leporideos e caprina.
- 6. Utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior em que a referida composição é derivada de uma espécie seleccionada do grupo que consiste em Saccharomyces, Candida, Kluyveromyces e Torulaspora, 1. Utilização de acordo com a reivindicação 6 em que a referida composição é derivada de Saccharomyces cerevisiae.
- 8. Utilização de acordo com a reivindicação 7 em que a composição é derivada de Saccharomyces cerevisiae estirpe NCYC 1026.
- 9. Utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior em que a composição compreende células secas de levedura.
- 10. Utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior em que a composição compreende adicionalmente manano-oligossacárido . ΕΡ 1 420 804/ΡΤ 2/2
- 11. Utilização de acordo com a reivindicação 5 em que o animal é uma espécie porcina ou avícola.
- 12. Utilização de acordo com a reivindicação 11 em que as espécies avícolas são galináceos, perus, patos, gansos, faisões, codornízes ou uma ave de companhia.
- 13. Utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior em que a composição compreende adicionalmente pelo menos um ionóforo anticoccidiano.
- 14. Utilização de acordo com qualquer reivindicação anterior em que a composição compreende adicionalmente pelo menos uma sapogenina esteróide anticoccidiana.
- 15. Utilização de acordo com as reivindicações 5, 11 ou 12, em que o animal é monitorado quanto à presença de infecção por coccídios ou lesões cecais, antes ou após o passo de alimentação com a composição compreendendo parede celular de levedura. Lisboa,
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