PT1254944E

PT1254944E - Composições anidras contendo aminoácidos hidrofóbicos.

Info

Publication number: PT1254944E
Application number: PT00987720T
Authority: PT
Inventors: Chikamasa Yamashita; Masaaki Odomi
Original assignee: Otsuka Pharma Co Ltd
Priority date: 1999-12-24
Filing date: 2000-12-22
Publication date: 2007-06-08
Also published as: AU784885B2; CA2395438C; HK1052946A1; DE60034149D1; EP1254944B1; EP1254944A4; ATE358171T1; DK1254944T3; KR20020070327A; AU2401501A; CA2395438A1; EP1254944A1; DE60034149T2; CN1413241A; KR100709792B1; ES2281370T3; CN1253528C; US20030045481A1; WO2001048117A1

Description

DESCRIÇÃO

COMPOSIÇÕES ANIDRAS CONTENDO AMINOÁCIDOS HIDROFÓBICOS DOMÍNIO técnico A presente invenção tem por objecto um processo para a redução e/ou a prevenção da coloração causada pela utilização combinada de um sacárido e de um aminoácido. Especificamente, a presente invenção tem por objecto um aminoácido utilizável com um sacárido, um aminoácido que tem um efeito anti- coloração quando combinado com um sacárido. A presente invenção também tem por objecto um processo para a prevenção da coloração conseguida pela utilização do aminoácido. A presente invenção ainda tem por objecto um processo para a estabilização de uma composição anidra contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico. Especificamente, a presente invenção tem por objecto uma composição anidra contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, à qual se junta um sacárido e um aminoácido.

TÉCNICA /ANTERIOR

De uma forma generalizada, nas composições farmacêuticas, particularmente, nas composições anidras contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, tem-se utilizado, como ingrediente activo, sacarose, glicose, frutose, maltose e sacáridos semelhantes (publicações de patentes de invenção japonesas não examinadas n0 s. 1983-92619, 1985-48933 e 1990-138222, etc.), glicina, 1 alanina e aminoácidos semelhantes (publicações de patentes de invenção japonesas não examinadas n°s. 1983-146504) como estabilizantes efectivos no ingrediente activo.

Contudo, sabe-se no geral que, quando estes sacáridos, utilizados como estabilizantes para substâncias proteiná-ceas, activas sob o ponto de vista farmacológico, são utilizados com um aminoácido, resulta uma coloração causada pela reacção de Maillard, etc. Por isso, as composições farmacêuticas que contêm um sacárido e um aminoácido têm a desvantagem da coloração com o passar do tempo.

Um dos objectos da presente invenção, é providenciar um aminoácido com um efeito anti-coloração para a redução e/ou a prevenção da coloração causada pela utilização combinada de um sacárido e de um aminoácido. Especificamente, a presente invenção tem por objecto um agente anti-coloração, contendo o aminoácido com um ingrediente essencial apropriado para a prevenção da coloração causada pela alteração, com o passar do tempo, de uma composição anidra contendo um sacárido e um processo para prevenir a coloração quando se utiliza o aminoácido.

Um outro objecto da presente invenção, é um aminoácido que se pode utilizar como um estabilizante para uma composição anidra contendo um sacárido, particularmente, uma composição anidra proteinácea, contendo um sacárido. Maís especi-ficamente, a presente invenção tem por objecto uma composição anidra contendo um sacárido e um aminoácido.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO 0 requerente fez uma investigação extensa para chegar aos objectos anteriores. Consequentemente, o requerente veri- 2 f í cou que, em composições anidras contendo um sacárido, es pecificamente composi ções anidras contendo um sacárido e um a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista f a rmacológico, a utilização de arninoácidos específicos pe rmite uma r edução signi ficativa e/ou a prevenção da co loração que é atribuível ao sacárido. Também verificou que composições anidras contendo um sacárido como estabilizante, mesmo composições anidras contendo uma substância proteiná-cea, activa sob o ponto de vista farmacológico, podem ainda ser melhoradas no que respeita à sua estabilidade, por meio da adição de um aminoácido especifico. A presente invenção foi assim conseguida com base nas verificações anteriores.

Por outras palavras, a presente invenção tem por objecto, em primeiro .lugar, a utilização de um aminoácido hídrofóbico, que previne a coloração causada pela utilização combinada de saeáridos e arninoácidos, especificamente, considerando os enquadramentos que se seguem. 1. Processe para a prevenção da coloração

Item 1. Um processo para a prevenção da coloração de uma composição anidra contendo um sacárido, que compreende a adição de um aminoácido hídrofóbico à composição anidra contendo um sacárido, conforme definido na reivindicação 1.

Item 2. Um processo para a prevenção da coloração, de acordo com o item 1, em que o aminoácido hídrofóbico tem um índice de hidropatia não inferior a 3,8.

Item 3. Um processo para a prevenção da coloração, de acordo com o item 1, em que o aminoácido hídrofóbico tem um índice de hidropatia no intervalo de 3,8 a 4,5. 3

Item 4. Um processo para a prevenção da coloração, de acordo com o item 1, em que o amínoácído hidrofóbico é, peio menos um dos elementos que se selecciona no grupo que consiste em varina, leuciria, isoleucina e fenilalanína,

Item 5. Um processo para a prevenção da coloração, de acordo com o item 1, em que o sacárido é, peio menos um dos elementos seleccionados no grupo que consiste em açúcares de redução, sacarose, tre-halose, manitol e dextrano 40.

Item 6. Um processo para a prevenção da coloração, de acordo com o item 1, em que o amincácido hidrof óbico é utilizado de tal maneira que a sua concentração estará no intervalo de 0,1 % em peso até 70 % em peso, por 100 % em peso do peso total da composição anidra.

Item 7. Um processo para a prevenção da coloração, de acordo com o item 1, em que a composição anidra é uma composição liofilizada, que compreende, como ingrediente actívo, uma substância proteináeea, activa sob o ponto de vista farmacológico.

Item 8. Um processo para a prevenção da coloração, de acordo com o item 20, em que a substância proteináeea, activa seb o ponto de vista farmacológico é, pelo menos, um des elementos seleccionados no grupo que consiste em poiipéptidos antivirais, poiipéptidos imuno-moduladores e poiipéptidos hematínicos.

Item 9. Um processo para a prevenção da coloração, de acordo com o item 1, em que a substância proteináeea, activa sob o ponto de vista farmacológico, é interferão. 4 2. Utilização de aminoácldos hicirofóblcos

Itera 10. Utilização de um aminoácido hidrofóbico para a prevenção da coloração de uma composição anidra contendo um sacárido, conforme definido na reivindicação 19.

Item 11. Utilização de um aminoácido hidrofóbico, de acordo com o itera 10, em que o aminoácido hidrofóbico tem um índice de hidropatía não inferior a 3,8.

Item 12. Utilização de um aminoácido hidrofóbico, de acordo cora o item 10, em que o aminoácido hidrofóbico tem um índice de hidropatía no intervalo de 3,8 a 4,5.

Item 13. Utilização de um aminoácido hidrofóbico, de acordo com o item 10, em que o aminoácido hidrofóbico é, pelo menos, um dos elementos que se selecciona no grupo que consiste em valina, leucina, isoleucina e fenilalanina.

Item 14. Utilização de um aminoácido hidrofóbico, de acordo com o item 10, em que o sacárido é, pelo menos, um dos elementos seleccionados no grupo que consiste em açúcares de redução, sacarose, tre-halose, manitol e dextrano 40.

Item 15. Utíli zação de um aminoácido hídrof óbico, de acordo com o item 10, em q’ ie o aminoácido hidr ofóbice é iiUJ__L£adO de tal maneira que a sua concentração estará no intervalo de 0,1 % em peso até 70 % em peso, por 100 % em peso do peso total da composição anidra.

Item 16. Utilização de um aminoácido hidrofóbico, de acordo com o item 10, em que a composição anidra é uma composição iofilizada, que compreende, como ingrediente 5 activo, uma substância proteinácea, activa sob o ponto ds vista farmacológico.

Item 17. Utilização de um aminoácido hidrofóbico, de acordo com o item 10, em que a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico é, peio menos, um dos elementos seleccionados no grupo que consiste em polipéptidos antivírais, polipéptidos imuno-rcoduladores e polipéptidos hematínicos.

Item 18. Utilização de um aminoácido hidrofóbico, de acordo com o item 10, em que a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, é interferão. A presente invenção pode reduzir com eficácia ou prevenir a coloração causada pela alteração com a passagem do terapo das composições anidras contendo um sacárido, especialmente, as composições que contêm um sacárido e uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico. Po.r isso, pode providenciar composições anidras com uma estabilidade excelente.

Em segundo lugar, a presente invenção tem por objecto composições anidras contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, de uma forma estável, incluindo a prevenção da coloração. h-^-E.9£jlxòes anidras item 13. Uma composição anidra contendo uma substância protemacea, activa sob o ponto de vista farmacológico, em que se D unta, como estabilízante, um sacárido e um aminoácido hidroróbico, conforme definido na reivindicação 10. 6

Item 20. Uma composição anidra contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, de acordo com o item 19, em que o aminoácido hidrofóbíco tem um índice de hidropatía não inferior a 3,8.

Item 21. Uma composição anidra contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, de acordo com o item 19, em que o aminoácido hidrofóbíco tem um índice de hidropatía no intervalo de 3,8 a 4,5.

Item 22. Uma composição anidra contendo uma substância proteinácea, activa sob c ponto de vista farmacológico, de acordo com o item 19, em que o aminoácido hidrofóbíco é, pelo menos, um dos elementos que se selecciona no grupo que consiste em valina, leucína, isoleucina e fenilalanína.

Item 23. Uma composição anidra contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, de acordo com o item 19, em que o sacárido é, peio menos, um dos elementos seleccionados no grupe que consiste em açúcares de redução, sacarose, tre-halose, manítol e dextrano 40.

Item 24 . Uma c omposíção anidra contendo uma substânc -X3 proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, de acordo com í a item 19, em que o aminoácido hidrofóbíco é utilizado de tal maneira que a sua concentr ação estará no intervalo de 0 1 Ου f .... "6 em oeso até 7 0 % em peso , por 100 % em peso do peso total da composição anidra.

Item 25. Uma c proteinácea, activa acordo com o item omposíção anidra contendo uma substância sob o ponto de vista farmacoiógíco, de 19, em que a composição anidra é uma izaoa Q]jp jmpreende, .RQ] PP r g activo, uma substância proteinácea, actíva sob o ponto de vista farmacológico.

Item 26. Uma composição anidra contendo uma substância proteinácea, actíva sob o ponto de vista farmacológico, de acordo com o irem 19, em que a substância proteinácea, actíva sob c ponto de vista farmacológico é, pelo menos, um dos elementos seieccionados no grupo que consiste em polipéptidos antiviraís, polipéptidos ímunc-moduladores e pc.l ipépti dos hematínicos.

Item 27. Uma composição anidra contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, de acordo com o item 19, em que a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, é interferão. A presente invenção tem per objecto, per meio da combinação de um sacárido com um aminoácidc hidrofóbico, composições anidras contendo como ingrediente activo, uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, de uma forma estável, mesmo depois de se completar a secagem (liofilização, etc.) e durante a armazenagem.

MELHOR PRÁTICA PARA A REALIZAÇÃO DA PRESENTE INVENÇÃO 0 processo da presente invenção utiliza um ammoácido hidrofóbico como o ingrediente essencial. 0 processo da presente invenção evita de forma significativa a coloração com a passagem do tempo, nomeadamente, quando utilizado com uma composição anidra contendo um sacárido. 8

Os aminoácídos hidrofóbicos utilizados na presente invenção, são aqueles que têm um índice de hídropatia de cerca de 2 ou maior (Jack Kyte and Russei F. Doolittel, "A Simple Method for Díspjayíng tbe Hydropathic Character of a Protein". J. Mol. Biol. 157 (1982): 105-132). Qualquer amino-ácido com a propriedade anterior pode ser utilizado na presente invenção, quer sejam ou não aminoácídos constituídos por proteínas. Os aminoácídos hidrofóbicos podem ser, preferencialmente, os que têm um índice de hídropatia de cerca de 2,8 ou maior, tal como, valina, leucina, isoleucina e fenilalanina; mais preferencialmente, aqueles que têm um índice de hídropatia de cerca de 3,8 ou maior; e, ainda mais preferencialmente, aqueles que têm um índice de hídropatia no intervalo entre cerca de 3,8 e cerca de 4,5, tal como, valina, leucina e isoleucina.

Os aminoácídos hidrofóbicos podem ser utilizados na presente invenção sob a forma de dipéptidos, tripéptidos, sais ou amidas. Exemplos de dipéptidos de aminoácídos hidrofóbicos são leucíl-valína, isoleucil-valina, isoleucil-leucina, leucil-glicina, etc. Exemplos de tripéptidos de aminoácídos hidrofóbicos são isoleucil-leucil-valina, leucil-glicil-glicina, etc. Os sais de aminoácídos hidrofóbicos incluem os seus sais com sódio, potássio e metais alcalinos ou com cálcio, magnésio e metais alcalino-terrosos; os seus sais de adição com ácido fosfórico, ácido clorídrico, ácido bromídrico e ácidos inorgânicos similares ou com ácidos orgânicos, tais como, ácido sulfónico, etc. Os exemplos mais específicos de sais de amincácidos hidrofóbicos são cloridrato L-leucica de amida, bromidrato de L-isoleucil-β-naftilamida, L-valina-p-naftílamída, etc.

Estes amínoácidos hidrofóbícos (incluindo os que estão sobre a forma de um sal ou de uma amida) , podem ser utilizados indivíduaImente ou numa combinação arbitrária. 0 processo da presente invenção tem por oiujecto sacáridos, que são conhecidos por causarem geralmente coloração com a passagem do tempo, devido à reacçâo de Maíllard e também quando combinados com um aminoácído. Especif i camente, os sacárídos alvo incluem os que se utilizam geralmente como estabilizantes para composições farmacêuticas anidras, partícularmente, composições farmacêuticas contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico. Mais especificamente, incluem glicose, frutose, maltose e açúcares de redução similares; sacarose, tre-halose, manítol, dextrano 40 e similares. Podem adicionar-se este sacárídos a uma composição anidra individualmente ou numa combinação arbitrária. Entre todos, preferem-se a sacarose e a maltose. O teor sacaridico da composição anidra varia consoante o tipo de sacárido contido e não pode ser generalizado. Contudo, no geral, utiliza-se uma quantidade de sacárido de 10 % em peso até 90 % em peso, nalguns casos, de 20 % em peso até 80 % em peso e, noutros casos, de 40 % em peso até 80 % em peso, por 100 % em peso da composição anidra. Aplica-se apropriadamente a proporção anterior quando o sacárido utilizado é a sacarose. O teor de aminoácído hidrofóbico da composição anidra var ia consoante o tipo de sacárido contido na composi ção ani dra e não pod e qpf gener alizado. Contudo, por cada 10 j % em peso da comp os X Çd-t/' anidra, a quantidade de aminoãc ido hia rofób: .co geral mente conti da será de cerca de 0, 1 % em p eso até cerc a de 70 0, em peso, preferencialmente, c e cerca de 10 U , z o % em peso d. t Θ C θ T C â Q 0 60 1 em peso, mais pre fer encíalmente, de cerca de 0,5 1 em peso até cerca de 50 % e m p eso e, ainda mais preferencíalmente, de cerca ae 1 % em pes o a té cerca de 50 % em peso. Â quantidade de amínoácído hidr oíófaíco utilizaoa é de cer ca de 0,1 paroe em peso até cerca de 200 partes em peso, preferencialmente, de cerca de 0,2 partes em peso até cerca de 100 partes em peso e, mais preferencialmente, de cerca de I parte em peso até cerca de 100 partes em peso, por 100 partes em peso do sacárido contido na composição anidra.

As composições anidras para as quais se pode utilizar o processo da presente invenção, incluem composições contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, como o ingrediente activo. Não há nenhum limite das substâncias proteináceas, activas sob o ponto de vista farmacológico, que podem ser utilizadas desde que elas sejam proteínas ou péptidos (incluindo polipéptidos) eficazes sob o ponto de vista farmacológico. Exemplos dessas substâncias são enzimas, hemoglobina, imunoglobulinas, hormonas, factores de coagulação do sangue e proteínas similares, polipéptidos antivirais (por exemplo, irrterf erões-α, -β, -γ, etc.), polipéptidos ímunomoduladores (por exemplo, interleucinas-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, etc.) , polipéptidos hematínícos (por exemplo, eritropoietína, factor de estimulação de colónias de qranulócitos, factor de estimulação de colónias de macrófagos e facror de estimulação de colónias de granulócítos-macrófagos) e polipéptidos similares, etc. As proteínas e os péptidos podem estar contidos na composição anidra ísoladamente ou numa combinação arbitrária. Entre estes preferem-se os ínteríerões.

As proteínas e os péptidos anteriores incluem os existentes na natureza, os produzidos por técnicas de ADN recombinante ou por sínteses anímicas. A quantidade de substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, utilizada, varia consoante o tipo a ser utilizado; contudo, exemplos específicos das suas concentrações são, geralmente, inferiores a 20 % em peso, nalguns casos, 0, 00001 % em peso até 10 I em peso, nalguns casos, 0,0001 % em peso até 10 % em peso, nalguns casos, 0,001 % em peso até 10 % em pese e, nalguns casos, 0,001 % em peso até 5 % em peso, por 100 % em peso da composição anidra.

As composições anidras para as quais se utiliza o processo da presente invenção podem ainda conter albumina de soro humano, um aminoácido polar ou um seu sal (por exemplo, um aminoácido comportando um índice de hidropatia não superior a 0 ou um seu sal), um sal inorgânico, gelatina, um tensioactivo, um tampão, etc. A utilização do processo da presente invenção não está limitada desde que seja utilizado nas composições anidras anteriores. Adiciona-se o aminoácido hidrofóbico a uma solução contendo sacáridos e substâncias proteináceas, activas sob o ponto de vista farmacológico, antes da preparação (isto é, antes da secagem) da composição anidra (produto seco) ou misturados numa solução em conjunto com sacáridos e substâncias proteináceas, activas sob o ponto de vista farmacológico.

Fara hidrofóbi cerca de ρβ50 8 l6 100 I em peso da composição anidra, o aminoácido co está geralmente entre cerca de 0,1 % em peso até 70 % em peso, preferencialmente, cerca de 0,2 cerca de 60 % em peso, mais preferencialmente, em a 12 ainda mais de 0,5 % em peso até cerca de 50 % em peso e, preferencialmente, cerca de 1 % em peso até cerca de 50 % em peso. 0 teor de aminoácido hidrofóbico por 100 partes em peso de sacáridos contidos na composição anidra, é de 0,1 parte em peso até cerca de 200 partes em peso, prefereneiaimente, cerca de 0,2 partes em peso até cerca de 100 partes em peso e, mais preferencialmente, cerca de 1 parte em peso até cerca de 100 partes em peso. A presente invenção tem por objecto um processo para prevenir a coloração de composições anidras contendo um sacárido, que compreende a utilização de um aminoácido hidrofóbico. Exemples específicos de amincácidos hidrofóbi-cos, sacáridos, composições anidras e utilização dos aminoácidos hidrofóbicos, sâc os descritos antes.

Além disso, a presente invenção tem por objecto a utilização de aminoácidos hidrofóbicos como estabi1ízantes. Os aminoácidos hidrofóbicos funcionam, de forma apropriada, como um estabilizante, quando combinado com um sacárido e é particularmente eficaz como estabilizante para composições anidras contendo uma substância proteínácea, actíva sob o ponto de vista farmacológico. A presente invenção também tem por objecto uma composição anidra, contendo uma substância, proteínácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, em que se utiliza um estabilizante composto por um aminoácido hidrofóbico e um sacárido.

Os sacáridos utilizados na presente invenção, não estão limitados mas podem incluir os que são geralmente utilizados 13 ou que funcionam como estabilizantes para composições farmacêuticas anidras, especifícamente, composições farmacêuticas contendo urna substância proteináoea, actíva sob o ponto de vista farmacológico. Exemples específicos são sacarose, maltose, lactose, tre-halose e díssacáridos similares; manitol, xilitol e álcoois de açúcar similares; dextrano 40, dextrano 70; ácido sulfúríco de condroitina e polissacáridos similares. Estes sacárídos podem adicionar-se às composições anidras de forma isolada ou mima combinação arbitrária. Entre todos, prefere-se a sacarose, a maltose, a lactose, a tre-halose e díssacáridos similares e, mais preíerencíalmente, a sacarose. O teor de sacáridos da composição anidra alvo, pode estar geralmente entre cerca de 10 % em peso até cerca de 90 % em peso, nalguns casos, cerca de 20 % em peso até cerca de 80 % em peso e, nalguns outros casos, cerca de 40 % em peso até cerca de 80 % em peso, por 100 % em peso da composição anidra. A proporção anterior é aplicada de forma apropriada quando se utiliza sacarose ou díssacáridos similares. O teor de aminoácidos hidrofóbicos na composição anidra pode ser, por cada 100 % em peso de composição anidra, geralmente, cerca de 0,1 % em peso até cerca de 70 % em peso, preferencialmente, cerca de 0,25 % em peso até cerca de 60 % em peso, mais preferencialmente, cerca de 0,5 % em peso até cerca de 50 % em peso e, ainda mais preferencialmente, cerca de 1 % em peso até cerca de 50 % em peso. A proporção entre aminoácido hidrofóbico e sacári do contido na composição anidra é de por Câdâ 100 partes em peso de sacárido, geralmente , cerca de 0, 1 parte ΘΓΓί peso até cerca de 2 00 partes em peso, pre ferencíalmente, C0 rca de 0,2 parte em peso gsj-p CPTCâ de 100 partes em oeso a ^ f mais preferencralmente, cerca de 1 parte em peso até cerca de 100 partes em peso. 14

Exemplos A presente invenção será descrita a seguir ern ma. detalhe com referência aos exemplos.

Exemplos 1 a 3

Em cada exemplo, preparou-se uma mistura de modc a conter 0,25 mL de uma solução a granel de interferão-α (aqui referida como "solução a granel de IFN-α"; título: 2 x 107 UI/mL) , 1 mg de Tween 80, 5 mg de sacarose e 5 mg de um aminoácido (isoleucina (exemplo 1), valina (exemplo 2) ou leucina (exemplo 3)) por frasco (capacidade de 1 mL). Para os dissolver, adiciona-se uma quantidade apropriada de água destilada para injecção. Liofilízou-se a mistura utilizando um liofilízador do tipo concha (LYOVAC GT-4: LEYBOLD). Deixou-se em repouso, a 70 °C, a composição liofilizada resultante. Observou-se a extensão da coloração e o título da composição liofilizada com o passar do tempo e depois estimou-se a actividade remanescente de IFN-α, por meio da taxa da actividade de IFN-α medida em relação à actividade de IFN-a (100 %) da composição imediatamente após a liofilizaçáo. Para comparação, utilizou-se como um aminoácido, 5 mg de glicina (exemplo comparativo 1) ou cloridrato de argimna (exemplo comparativo 2) para avaliar a coloração. Além disso, para avaliar a estabilidade de IFN-a;, realizou-se um ensaio da mesma maneira que mencionado antes, excepto no facto de se ter utilizado um sistema ao qual não se adicionou aminoácido (exemplo comparativo 3) . Os resultados, incluindo o arau de coloracâo e a estabilidade do IFN-α das composições obtidas nos exemplos e nos exemplos comparativos, estão indicados no quadro 1 e no quadro 2. 15

Quadro 1 índice de HP Preparação e 01 0 Γ 3. Ç ci 0 70 °C; do Aminoácido Sem. 0 Sem. Sem. l.IFN-α + sacarose + isoleucina 4 f o - Exemplos 2.IFN-α + sacarose + valina 4,2 - - - 3.IFN-α + sacarose + leucína 3, 8 - - - l.IFN-α + sacarose - glicina -0,4 - T + + Exemplos 2.IFN-α + sacarose + cloridrato ~4 f 5 _ + ++ Comp. de arginina Avaliação da coloração: - Não se observou nenhuma coloração + Observou-se uma ligeira coloração + Observou-se uma coloração pequena Α+ Observou-se bastante coloração +++ Observou-se uma coloração extrema

Quadro 2

Actividade Preparação Remanescente de IFN-a %) Sem. Sem. Sem. 0 1 2 l.IFN-α + sacarose + isoleucina ICO KD !—! r- 51, 3 Exemplos 2.IFN-α + sacarose + valina 100 59,2 47,1 3.IFN-α + sacarose + ieucina 100 75, 6 72,3 Exemplos Comparativos l.IFN-α v sacarose 100 48, 6 38,7

Como se mostra no quadro 1, a utilização combinada de sacarose e glicina e a utilização combinada de sacarose e cloridrato de arginina, causou uma coloração da composição líoxílízada com o passar do tempo. Utilizando sacarose com aminoácido hidrofóbico, com um índice de hídropatia de 3,8 ou maior, evitou-se a coloração da composição liofílízada. Além disso, como se mostra no quadro 2, a estabilidade de IFN-a 16 melhorou quando se utilizou sacarose com aminoácido hidrofóbico com um índice de hídropatía (Índice de HP) de 3,8 ou maior, comparada com a estabilidade quando se utiliza apenas sacarose.

Exemplos 4 a 6

Em cada exemplo, preparou-se uma mistura de modo a conter 0,25 mL de uma solução a granel de IFN-α (título: 2 x 10' UI/mL) , 1 mg de Tween 80, 5 mg de maltose e 5 mg de um aminoácido (ísoleucina (exemplo 4), valina (exemplo 5) ou leucina (exemplo 6)) por frasco (capacidade de 1 mL). Para os dissolver, adiciona-se uma quantidade apropriada de água destilada para injecção. Liofilizou-se a mistura utilizando um liofilizador do tipo concha (LYOVAC GT-4: LEYBOLD). Deixou-se em repouso, a 70 °C, a composição liofilízada resultante. Observou-se a extensão da coloração da composição liofilízada com o passar do tempo. Para comparação, utilizou-se como um aminoácido, 5 mg de glicina (exemplo comparativo 4) ou cloridrato de arginina (exemplo comparativo 5), para avaliar a coloração e realizou-se o ensaio da mesma maneira que se mencionou antes. Os resultados dos exemplos e dos exemplos comparativos estão indicados no quadro 3. 17

Quadro 3 índice de HP Preparação Coloração O O do Airii noáci do Sem. Sem. Sem. 0 1 2 l.IFN-a + maltose + isoleucína 4, 5 - - - Exemplos S.IFN-σ + maltose + valína d ^ / - - - 6.IFN-CÍ + maltose + leucina 3, 8 - - - 3.IFN-α + maltose + glicina -0,4 - é + +++ Exemplos 4. IFN-α ) maltose f cloridrato -4,5 - + + + + + Comp. de arginina Avaliação da coloração: - Não se observou nenhuma coloração + Observou-se uma ligeira coloração + Observou-se uma coloração pequena ++ Observou-se bastante coloração t+4· Observou-se uma coloração extrema

Como se mostra no quadro 3, a utilização combinada de maltose e glicina e a utilização combinada de maltcse e cloridrato de arginina, causou uma coloração da composição liofilizada com o passar do tempo. Utilizando maltose com aminoácido hidrofóbico com um índice de hídropatia de 3,8 ou maior, evitou-se a coloração da composição liofilizada.

Exemplos 7 a. 9

Sm cada exemplo, preparou-se uma mistura de modo a conter 0,25 mL de uma solução a granel de IFN-α (título: 2 x 107 UI/iuL) , 1 mg de Tween 80, 5 mg de tre-halose e 5 mg de um aminoácido (isoleucína (exemplo 7), valína (exemplo 8) ou leucina (exemplo 9)) por frasco (capacidade de 1 mL). Para cs dissolver, adiciona-se uma quantidade apropriada de água destilada para ínjecção. Líofilízou-se a mistura utilizando um líofílizador do tipo concha (LYOVAC GT-4: LEYBOLD). Deixou-se em repouso, a 70 °C, a composição liofilizada 10 resultante. Observou-se o título da composição liofilizaca com o passar do tempo e depois estimc-u-se a actividade remanescente de TFN-α por mexo da relação entre a actividade de IFN-α medida e a actividade de IFN-a (100 %} da compos i çã.o, imediatamente após a liof ilizaçao. Para comparação, realizou-se o ensaio da mesma maneira que se mencionou antes, excepto no facto de não se adicionar ao sistema nenhum amínoácido (exemplo comparativo 6) para avaliar a estabilidade de IFN-α. Os resultados dos exemplos e dos exemplos comparativos estão indicados no quadro 4.

Quadro 4

Actividade Preparação Remanescer .te de IFN-a %) Sem. Sem. Sem. 0 1 2 7,IFN-a + tre-halose + isoleucxna 100 61,5 58, 9 Exemplos 8.IFN-α + tre-halose + valina 100 61,5 56,9 S,IFN-α + tre-halose + leucina 100 72, 7 63,0 Exemplos 6.IFN-α + tre-halose 100 39,2 28,4 Comparativos

Como se mostra no quadro 4, a estabilidade de IFN-a melhorou quando se utilizou tre-halose com amínoácido hidrofóbíco com um índice de hidropatía (índice de HP) de 3,8 ou maior, comparada com a estabilidade quando se utiliza apenas sacarose.

Exemplos 10 a 12

Em ca dâ exemplo, preparou -se uma mistura de modo a cor.ter 0,25 ml de uma solução a granel de IFN-a título: 2 x 107 UI/mL), 1 mg de Tween 80, 5 mg de maltose e 5 mg de um ami η c> u c i ci o íisoleucina (exemplo 1 0) , valina (exe Típlo 11) ou 19 ieucina (exemplo 12)) por frasco (capacidade de 1 rnL) . Para os dissolver, adíciona-se uma quantidade apropriada de água destilada para injecção. Liofilizou-se a mistura utilizando um líofílizador do tipo concha (LYOVAC GT-4: LEYBOLD). Deixou-se em repouso, a 70 °C, a composição liofilízada resultante. Observou-se a extensão da coloração da composição liofílizada com o passar do tempo. Para comparação, utilizou-se como um aminoácído, 5 mg de glicina (exemplo comparativo 7) ou clorídrato de arginína (exemplo comparativo 8), para avaliar a coloração e realizou-se o ensaio da mesma maneira que se mencionou antes. Os resultados dos exemplos e dos exemplos comparativos, estão indicados no quadro 5.

Quadro 5

Preparação fndíce de HP do Aminoácido Coloração 70 °C) Sem. 0 Sem. 1 Sem. 2 10.IFN-a + sacarose + íscieucína 4,5 - - - Exemp. ll.IFN-a + sacarose + valina 4,2 - - - 12.IFN~a + sacarose + Ieucina 3, 8 - - - Exernp. 7.IFN-a + sacarose + glicina -0,4 - j... ΎΤ- Corr.p. 8.IFN-α + sacarose + clorídrato de arginína -4,5 + +

Avaliação da coloração: - Não se observou nenhuma coloração + Observou-se uma ligeira coloração + Observou-se uma coloração pequena +- Observou-se bastante coloração + 1-+ Observou-se uma coloração extrema

Como s e mostra no q‘ uadro 5, a utilização combinada de ose e glicina e a utilização combinada de maltose e drato de arginína, causou uma COiCrôÇaO da composição iizada com o passar do tempo. Utilizando maltose com 2 0 aminoácido hídrofóbíco com um índice de hidropatía de 3,8 ou maior, evitou-se a coloração da composição liofilizada.

Exemplos 1.3 a 15

Obt eve-se uma composição líofíl í zada da mesma maneira nos exemple jS 1 a 3, excepto no facto de ser utilizado mL de uma solução a granel de IFN-β (título: 2 x 107 UI/mL) , em vez de 0,25 mL de uma solução a granel de IFN-a (título: 2 x 107 UI/mL). Deixou-se a solução liofilizada, resultante, em repouso a 70 °C e depois observou-se a coloração com a passagem do tempo. Os resultados, mostram que, tal como nos exemplos 1 a 3, a coloração da composição liofilizada pode ser evitada, utilizando sacarose com aminoácidos hidrofóbicos com um índice de hidropatía de 3,8 ou maior.

Exemplos 16 a 18

Obteve-se uma composição liofilizada da mesma maneira que nos exemplos 10 a 12, excepto no facto de ser utilizado 0,25 mL de uma solução a granel de IFN-β (título: 2 x 10; UI/mL), em vez de 0,25 mL de uma solução a granel de IFN-a (título: 2 x 107 UI/mL). Deixou-se a solução liofilizada, resultante, em repouso a 70 °C e depois observou-se a coloração com a passagem do tempo. Os resultados, mostram que, tal como nos exemplos 10 a 12, a coloração da composição liofilizada pode ser evitada, utilizando sacarose com aminoácidos hidrofóbicos com um índice de hidropatía de 0,8 ou maior. 21

Exemplos 19 a 21

Obteve -se uma composição líofil í zada da mesim a maneira que nos exemplos 1 a 3, excepto no facto de ser ut iiizaao 0,25 mL de uma soit leão a granel cie IFN-γ (título: : 2 x 107 UI/mL), em vez de 0 ,25 mL de uma solução a granel de IFN-a (título: 2 x 10' UI/ir.L) . Deixou-se a solução iiofilizada, resultante, em repouso a 70 °C e depois observou-se a coloração com a passagem do tempo. Os resultados, mostram que, tal como nos exemplos 1 a 3, a coloração da composição Iiofilizada pode ser evitada, utilizando sacarose com aminoácidos hidrofóbicos com um índice de hidropatia de 3,8 ou maior.

Exemplos 22 a 24

Obteve-se uma composição Iiofilizada da mesma maneira que nos exemplos 10 a 12, excepto no facto de ser utilizado 0,25 mL de uma solução a granel de IFN-β (título: 2 x 107 UI/mL), em vez de 0,2 5 mL de uma solução a granel de iFN-a (título: 2 x 107 UI/mL). Deixou-se a solução Iiofilizada, resultante, em repouso a 70 °C e depois observou-se a coloração com a passagem do tempo. Os resultados, mostram que, tal como nos exemplos 10 a 12, a coloração da composição Iiofilizada pode ser evitada, utilizando sacarose com aminoácidos hidrofóbicos com um índice de hidropatia de 3,8 ou maior.

Exemplos 25 a 27

Obteve-se uma composição Iiofilizada da mesma maneira que nos exemplos 1 a 3, excepto no facto de ser utilizado 0,25 mL de uma sc slução a granel de eritropoietína íiiiuio: 2 x 10 ' UI/mL), em vez de 0,25 mL de i ama solução a granel de o /·>

L· L IFN-α (título: 2 x 107 UI/mL) . Deixou-se a solução liofilízada, resultante, em repouso a 70 °C e depois observou-se a coloração com a passagem do tempo. Os resultados mosuram que, tal como nos exemplos 1 a 3, a coloração da composição liofilízada pode ser evitada, utilizando sacarose com aminoácidos hidrofóbicos com um índice de hidropauia de 3,8 ou maior.

Exemplos 28 a 30

Obteve-se uma composição liofilízada da mesma maneira que nos exemplos 10 a 12, excepto no facto de ser utilizado 0,25 mL de uma solução a granel de eritrcpoietina (título: 2 x 10; UI/mL), em vez de 0,25 raL de uma solução a granel de IFN-oí (título: 2 x 107 UI/mL) . Deixou-se a solução liofilízada, resultante, em repouso a 70 °C e depois observou-se a coloração com a passagem do tempo. Os resultados, mostram que, tal como nos exemplos 10 a 12, a coloração da composição liofilízada pode ser evitada, utilizando sacarose com aminoácidos hidrofóbicos com um índice de hidropatia de 3,8 ou maior.

Exemplos 31 a 33

Preparou-se um franco (capacidade de 1 mL) de solução de mistura de tal maneira que ela compreendesse 0,25 mL de uma solução a granel de IFN-α (título: 2 χ 107 UI/mL), 40 mg de sacarose e 5 mg dos deis tipos de aminoácidos (glicina + ísoleucina (exemplo 31) glícína + vaiina (exemplo 32) ou glicina + leucina (exemplo 33)). Para os dissolver, adiciona-se uma quantidade apropriada de água destilada para injecção. Depois, realizou-se a. l.iofilízação da mesma maneira que nos exemplos 10 a i2, obtendo-se uma composição liofilízada. Deixou-se em repouso, a 70 °C, a composição liofilízada 23 resultante. Observou-se a extensão da coloração da composição liofilízada com o passar do tempo. Para comparação, realizou-se o ensaio da mesma maneira que se mencionou antes, excepto no facto de se ter utilizado apenas 5 mg de giicina (exemplo comparativo 7) como aminoácído. Os resultados dos exemplos e do exemplo comparativo estão indicados no quadro 6.

Quadro 6

Preparação índice de HP do Aminodcido Coloi â çe o O o O Sem. 0 Sem. 1 Sem. 2 31.IFN-α + sacarose + giicina + isoleucina 4,5 Exeinp. 32.IFN-C + sacarose + giicina + valina 4,2 -- 33. IFN-α -{ sacarose l giicina + leucina 3,8 Exemp. Comp. 7. IFN-o: + sacarose + giicina -0,4 + -+

Avaliação da coloração: - Não se observou nenhuma coloração + Observou-se uma ligeira coloração + Observou-se uma coloração pequena ++ Observou-se bastante coloração +++ Observou-se uma coloração extrema

Como se mostra no quadro 6, a composição liofilízada contendo sacarose e giicina causou uma coloração com o passar do tempo. Contudo, a coloração da composição liofilízada pode ser signíficativamente evitada utilizando amínoácídos hídrofóbices com um índice de hidropatía de 3,8 ou maior, para além da sacarose e da giicina 24 APLICABILIDADE INDUSTRIAL 0 agente anti-ccioração da presente invenção pode reduzir significativamente e/ou prevenir a coloração de uma composição liofilizada com a passagem do tempo, causada pela utilização combinada de um sacárido e aminoácido. Esse agente anti-coloração é especificamente útil para prevenir a coloração de uma composição anidra, compreende sacárido e uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico. De outro ponto de vista, o agente anti-coloração é também útil como um estabilizante para uma composição anidra contendo um sacárido e uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico. Por isso, a presente invenção tem por objecto composições anidras contendo uma substância proteinácea, activa scb o ponto de vista farmacológico e um agente anti-coloração ou um estabilizante, isto é, composições anidras contendo uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista fármaco-lógico, à qual se adiciona um sacárido e um aminoácido, composição que exibe uma excelente estabilidade prevenindo assim significativamente a coloração e baixando a actividade observada com o decorrer do tempo.

Lisboa, 29 de Maio de 2007 25

Claims

REINVINDICAÇÕES 1. Processo para a prevenção da coloração de uma composição farmacêutica anidra contendo um sacárido e uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico,, caracterizado peio facto cie compreender a adição de aminoácido hidrofóbico tendo um índice de hidropatia não inferior a 2, a uma solução contendo um sacárido e uma substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, em que o referido aminoácido hidrofóbico se adiciona numa quantidade total de 0,1 parte em peso até 200 partes em peso, por 100 partes em peso do referido sacárido, e a secagem da solução, para se obter a referida composição anidra, prevenindo-se assim a coloração da referida composição anidra.
2. Processo para a prevenção da coloração, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o aminoácido hidrofóbico ter um índice de hidropatia não inferior a 3,8.
3. Processo para a prevenção da coloração, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o aminoácido hidrofóbico ter um índice de hidropatia no intervalo de 3,8 a 4,5.
4. Processo para a prevenção da coloração, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o aminoácí-co hidrofóbico ser pelo menos um dos elementos seleocío-nados no grupo que consiste em valina, leucina, isoleu-cina e fenilalanína. 1 5. Processe para a prevenção da coloração, de acordo com a reivindicação 1, caracterízado pelo facto de o sacárido ser oelo menos um dos elementos seleccionado no grupo que consiste em açúcares de redução, sacarose, tre-halose, manitol e dextrano 40.
6. Processo para a prevenção da coloração, de acordo com a reivindicação 1, caracterízado pelo facto de o aminoáci-do hidrofóbico ser utilizado de tal forma, que a sua concentração se situa no intervalo de 0,1 % em peso até 70 % em peso, por 100 % em peso do peso total da composição anidra.
7. Processo para a prevenção da coloração, de acordo com a reivindicação 1, caracterízado pelo facto de a composição anidra ser uma composição liofilizada.
8. Processo para a prevenção da coloração, de acordo com a reivindicação 1, caracterízado pelo facto de a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, ser pelo menos um elemento seleccionado no grupo que consiste em polipéptídos antívírais, polípéptidos imunomoduladores e polipéptídos hematínicos. S. Processo para a prevenção da coloração, de acordo com a reivindicação 1, caracterízado pelo facto de a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacoló- gieo, ser mterferão. Composição farmacêutica an idra, caracterízada pelo facto de conter uma substância p roteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, um sacárido e um aminoácído hídrofóbic o com um índice de hídropatie não ip.tpf íor a ) pm rto- J Kj í í. ie o referido amínoácido hi drof i óbioo está 2 presente numa quantidade total de 0,1 parte em peso até 200 partes em peso, por 100 partes em peso do referido sacárido,
11. Composição farmacêutica anidra, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo facto de o aminoá-cido hídrofóbico ter um índice de hidropatia não inferior a 3,8.
12. Composição farmacêutica anidra, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo facto de o aminoá-cido hídrofóbico ter um índice de hidropatia no intervalo de 3,8 a 4,5.
13. Composição farmacêutica anidra, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo facto de o aminoá-cido hídrofóbico ser pelo menos um dos elementos seleccionados no grupo que consiste em valina, leucina, isoleucina e fenilalanina.
14. Composição farmacêutica anidra, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo facto de o sacárido ser pelo menos um dos elementos seleccionado no grupo que consiste em açúcares de redução, sacarose, tre-halose, manitol e dextrano 40.
15. Composição farmacêutica anidra, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo facto de a concentração do amínoá-cido hídrofóbico estar no intervalo de 0,1 I em peso até 70 I em peso, por 100 I em peso do peso total da composição anidra.
16. Composição farmacêutica anidra, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo facto de a composição ani.dra ser uma composição liofilizada.
17. Composição farmacêutica anidra, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo facto de a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, ser pelo menos um elemento seleccíonado no grupo que consiste em polipéptídos antivirais, polipéptidos ímuno-moduladores e polipéptidos hematínicos.
18. Composição farmacêutica anidra, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo facto de a substância proteinácea, activa sob c ponto de vista farmacológico, ser interferão.
19. Utilização de um aminoácído hídrofóbíco comportando um índice de hídrcpatia não inferior a 2 para a prevenção da coloração de uma composição farmacêutica anidra, caracterizada pelo facto de conter um sacárído, em que o referido aminoácído hídrofóbíco está presente numa quantidade total de 0,1 parte em peso até 200 partes em peso, por 100 partes em peso do referido sacárído.
20. Utilização, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo facto de o aminoácído hídrofóbíco ter um índice de hidropatia não inferior a 3,8.
21. Utilização, de acordo com a reivindicação 19, caracterí-zada pelo facto de o aminoácído hídrofóbíco ter um índice de hidropatia no intervalo de 3,8 a 4,5. z z . .zacão, de acordo com dvindicação 19, caracteri 5. Cl 3 p 01 G facto de ..noácido hídrofóbíc peio 4 menos um dos elementos seleccionados no grupo que consiste em valina, leucina, isoleucina e fenílalanina.
23. Utilização, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo facto de o sacárido ser pelo menos um dos elementos seleccionado no grupo que consiste em açúcares de redução, sacarose, tre-halose, mamtol e dextrano 40.
24. Utilização, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo facto de o aminoácido hidrofóbico ser utilizado de tal forma, que a sua concentração se situa no intervalo de 0,1 % em peso até 70 % em peso, por 100 % em peso do peso total da composição anidra.
25. Utilização, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo facto de ser uma composição liofilizada.
26. Utilização, de acordo com a reivindicação 19, caracteri zada pelo facto de a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, ser pelo menos um elemento seleccionado no grupo que consiste em polipéptidos antivirais, polipéptidos imunomoduladores e pclipéptidos hematínicos.
27. Utilização, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo facto de a substância proteinácea, activa sob o ponto de vista farmacológico, ser interferão. Lisboa, 29 de Maio de 2007 5