PL243517B1

PL243517B1 - Derivatives of (benzyloxy)benzene for use in immune therapy of tumours

Info

Publication number: PL243517B1
Application number: PL434464A
Authority: PL
Inventors: Magdalena Konieczny; Jacek Plewka; Bogdan Musielak; Łukasz Skalniak; Tadeusz Holak
Original assignee: Univ Jagiellonski
Priority date: 2020-06-25
Filing date: 2020-06-25
Publication date: 2023-09-04
Also published as: PL434464A1

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest związek o wzorze ogólnym (I): gdzie X oznacza -Br lub fenyl, Y oznacza fenyl, 2,3-dihydrobenzo[b][1,4] dioksynę lub naftalen, R1 oznacza –Br, -OMe, -Me, -Cl lub –H, R2 oznacza -OH, -H lub pochodną pikolinonitrylu, a R3 oznacza podstawnik wybrany spośród grup określonych wzorem ogólnym (Ia) lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól. Zgłoszenie obejmuje także kompozycje farmaceutyczną, zawierającą efektywną terapeutycznie dawkę przedmiotowego związku.The subject of the application is a compound of the general formula (I): where X is -Br or phenyl, Y is phenyl, 2,3-dihydrobenzo[b][1,4] dioxin or naphthalene, R1 is -Br, -OMe, -Me , -Cl or -H, R2 is -OH, -H or a picolinonitrile derivative, and R3 is a substituent selected from the groups represented by the general formula (Ia) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The application also includes a pharmaceutical composition containing a therapeutically effective dose of the subject compound.

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne (benzyloksy)benzenu stanowiące małocząsteczkowe inhibitory celujące w punkt kontroli odpowiedzi immunologicznej PD-1/PD-L1 mogące znaleźć zastosowanie w immunoterapii nowotworów oraz zawierająca je kompozycja farmaceutyczna.The subject of the invention are new (benzyloxy)benzene derivatives, which are small-molecule inhibitors targeting the PD-1/PD-L1 immune response control point, which may be used in cancer immunotherapy, and a pharmaceutical composition containing them.

Immunoterapia oparta na inhibitorach punktów kontroli jak np. PD-1, CTLA-4, etc. powoduje trwałe odpowiedzi terapeutyczne i lepsze przeżycie u pacjentów z różnymi rodzajami nowotworów^1-3. Liczne postępy w tej dziedzinie sprawiły, że czasopismo Science ogłosiło immunoterapię „Przełomem Roku” w 2013 roku, natomiast w 2018 James P. Allison z USA i Tasuku Honjo z Japonii otrzymali Nagrodę Nobla z medycyny i fizjologii za opracowanie metod odblokowania działania układu odporności.Immunotherapy based on checkpoint inhibitors such as PD-1, CTLA-4, etc. results in durable therapeutic responses and improved survival in patients with various types of cancer ^{1 - 3} . Numerous advances in this field led the journal Science to declare immunotherapy the "Breakthrough of the Year" in 2013, while in 2018 James P. Allison from the USA and Tasuku Honjo from Japan received the Nobel Prize in Medicine or Physiology for developing methods of unlocking the functioning of the immune system.

Jednym ze sposobów, w jaki komórki nowotworowe unikają nadzoru immunologicznego umożliwiając rozrost guzów, są złożone mechanizmy immunosupresyjne, które zwykle odgrywają rolę w kontrolowaniu normalnych przeciwbakteryjnych i antywirusowych odpowiedzi immunologicznych i zapobiegają nadmiernie nadmiernej odpowiedzi immunologicznej i powiązanym immunopatologiom. Na przykład, silnie lub chronicznie aktywowane komórki T nadregulują ekspresję PD-1 w wyniku czego komórki będą wykazywać ekspresję PD-L1 po ekspozycji na IFNy pochodzący z limfocytów T. Tak więc w procesie znanym jako „adaptacyjna odporność immunologiczna” odpowiedź przeciwnowotworowa limfocytów T spowoduje supresję aktywowanych komórek T CD8 + za pośrednictwem PD-L1/PD-1.One of the ways in which cancer cells evade immune surveillance, allowing tumors to grow, is through complex immunosuppressive mechanisms that typically play a role in controlling normal antibacterial and antiviral immune responses and preventing excessive immune responses and associated immunopathologies. For example, highly or chronically activated T cells will overregulate PD-1 expression, resulting in the cells expressing PD-L1 upon exposure to T cell-derived IFNγ. Thus, in a process known as "adaptive immune immunity," the T cell anti-tumor response will suppress activated CD8 + T cells via PD-L1/PD-1.

PD-1, czyli receptor programowanej śmierci (eng. programmed death receptor 1, CD279), to glikoproteinowe białko o masie ok. 55 kDa składające się z 288 aminokwasów z rodziny białek B7-CD28. Składa się z zewnątrzkomórkowej domeny lgV podobnej, domeny transbłonowej oraz cytoplazmatycznej. PD-1 pełni funkcję negatywnego regulatora odpowiedzi immunologicznej. Jest kodowane przez gen pdcdl zlokalizowany na drugim chromosomie (2q37) i ulega ekspresji na powierzchni aktywowanych limfocytów T i B, odpowiadając za regulację tolerancji immunologicznej.PD-1, i.e. programmed death receptor 1 (CD279), is a glycoprotein protein of approximately 55 kDa consisting of 288 amino acids from the B7-CD28 protein family. It consists of an extracellular LGV-like domain, a transmembrane domain and a cytoplasmic domain. PD-1 functions as a negative regulator of the immune response. It is encoded by the pdcdl gene located on the second chromosome (2q37) and is expressed on the surface of activated T and B lymphocytes, responsible for the regulation of immune tolerance.

Ligand białka PD-1 (PD-L1, CD270 lub B7-H1) to glikoproteinowe białko o masie 33 kDa z genem zlokalizowanym na 9 chromosomie 9p24. To transmembranowe białko typu I składa się z 290 aminokwasów i posiada domeny lgV and IgC w części zewnątrzkomórkowej. Jego nadekspresja została zaobserwowana w wielu komórkach układu odpornościowego takich jak makrofagi, limfocyty B oraz wielu typach komórek niehematopoetycznych⁴. Oddziaływanie pomiędzy PD-1 i jego ligandem PD-L1 skutkuje supresją m.in. proliferacji limfocytów T, wydzielania cytokin oraz funkcji cytotoksycznych limfocytów. Szlak ten jest również często wykorzystywany przez komórki nowotworowe oraz wirusy czy bakterie do osłabienia naturalnej odpowiedzi immunologicznej organizmu i ułatwienia rozprzestrzeniania się w zaatakowanym organizmie⁵. Blokada tego szlaku np. poprzez specyficzne przeciwciała blokujące odziaływanie PD1-/PD-L1 przywraca funkcje cytotoksyczne limfocytom T normalizując odpowiedź immunologiczną organizmu i jest jednym z najważniejszych elementów immunoterapii nowotworowej.PD-1 protein ligand (PD-L1, CD270 or B7-H1) is a 33 kDa glycoprotein protein with a gene located on chromosome 9, 9p24. This type I transmembrane protein consists of 290 amino acids and has IgG and IgC domains in the extracellular part. Its overexpression has been observed in many cells of the immune system such as macrophages, B lymphocytes and many types of non-hematopoietic cells ⁴ . The interaction between PD-1 and its ligand PD-L1 results in the suppression of, among others, T-cell proliferation, cytokine secretion and cytotoxic lymphocyte functions. This pathway is also often used by cancer cells and viruses and bacteria to weaken the body's natural immune response and facilitate their spread in the attacked body ⁵ . Blocking this pathway, e.g. through specific antibodies blocking the interaction of PD1-/PD-L1, restores the cytotoxic functions of T lymphocytes, normalizing the body's immune response, and is one of the most important elements of cancer immunotherapy.

Na chwilę obecną wszystkie zarejestrowane, bądź znajdujące się w fazie badań klinicznych związki bezpośrednio blokujące interakcje białka PD-1 z jego ligandem są oparte na przeciwciałach monoklonalnych, bądź ich kombinacjach między sobą lub z chemioterapią. Jedyny związek małocząsteczkowy znajdujący się aktualnie w I fazie badań klinicznych w Stanach Zjednoczonych, który miał bezpośrednio oddziaływać z białkami PD-1/PD-L1 (CA-170), został ostatnio scharakteryzowany jako oddziałujący na szlak PD-1/PD-L1⁶. Jednakże małocząsteczkowe inhibitory oddziaływania PD-1/PD-L1 są interesującą alternatywną dla terapii opartych na przeciwciałach ze względu na dużo niższe koszty produkcji, możliwość podawania doustnego zamiast dożylnego, lepszej farmakokinetyce i potencjalnie braku niepożądanych działań związanych z odpornością pacjenta tak charakterystycznych dla terapii opartych na przeciwciałach⁷.Currently, all registered or currently in clinical trials compounds that directly block the interactions of the PD-1 protein with its ligand are based on monoclonal antibodies or their combinations with each other or with chemotherapy. The only small molecule compound currently in Phase I clinical trials in the United States that was designed to directly interact with PD-1/PD-L1 proteins (CA-170) was recently characterized as interfering with the PD-1/PD-L1 pathway ⁶ . However, small molecule inhibitors of the PD-1/PD-L1 interaction are an interesting alternative to antibody-based therapies due to much lower production costs, possibility of oral instead of intravenous administration, better pharmacokinetics and potentially lack of adverse effects related to the patient's immunity so characteristic of therapies based on antibodies ⁷ .

Celem wynalazku jest dostarczenie nowych związków, które mogłyby być wykorzystywane jako inhibitor oddziaływania PD-1/PD-L1.The aim of the invention is to provide new compounds that could be used as an inhibitor of the PD-1/PD-L1 interaction.

Przedmiotem wynalazku jest związek o wzorze ogólnym (I):The subject of the invention is a compound of the general formula (I):

O)ABOUT)

PL 243517 Β1 gdzie:PL 243517 Β1 where:

X oznacza -Br lub fenyl,X is -Br or phenyl,

Y oznacza fenyl, 2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksynę lub naftalen,Y is phenyl, 2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin or naphthalene,

Ri oznacza -Br, -OMe, -Me, -Cl lub -H,Ri is -Br, -OMe, -Me, -Cl or -H,

R2 oznacza -OH, -H lub pochodną pikolinonitrylu a R3 oznacza podstawnik wybrany spośród:R2 is -OH, -H or a picolinonitrile derivative and R3 is a substituent selected from:

lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Korzystnie, związek według wynalazku został wybrany z grupy obejmującej: 3-bromo-4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzaldehyd, 4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metoksybenzaldehyd, 4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metylobenzaldehyd, 4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzaldehyd, kwas (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy, kwas (S)-1-(4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metoksybenzylo)piperydyno-2-karboksylowy, kwas (S)-1-(4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metylobenzylo)piperydyno-2-karboksylowy, kwas (S)-1-(4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy, 3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksyn-6-ylo)benzylo)oksy)benzaldehyd, (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksyn-6-ylo)benzylo)oksy)benzylo)piperydyno-2-kwas karboksylowy, 3-bromo-4-((2-bromo-3-(naftalen-2-ylo)benzylo)oksy)benzaldehyd, kwas (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(naftalen-2-ylo)benzylo)oksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy, 3-bromo-4-((2-bromo[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzoesan metylu, chlorowodorek 4-(3-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,1’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzamido)propylo)morfolin-4-ium, 4-([1,T:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-3-bromobenzaldehyd, kwas (2S, 4S)-1-(4-([1,T:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-3-bromobenzylo)-4-hydroksy-pirolidyno-2-karboksylowy, 4-([1,T:2’, 1 ”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-5-chloro-2-hydroksybenzaldehyd oraz 4-((5-([1,T:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-4-chloro-2-formylofenoksy)metylo)pikolinonitryl.Preferably, the compound of the invention is selected from the group consisting of: 3-bromo-4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzaldehyde, 4-((2-bromo-[1, T-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methoxybenzaldehyde, 4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methylbenzaldehyde, 4-((2-bromo -[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzaldehyde, (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy acid )benzyl)piperidine-2-carboxylic acid, (S)-1-(4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methoxybenzyl)piperidine-2-carboxylic acid, (S)-1-(4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methylbenzyl)piperidine-2-carboxylic acid, (S)-1-(4 -((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid, 3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[ b][1,4]dioxin-6-yl)benzyl)oxy)benzaldehyde, (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][) 1,4]dioxin-6-yl)benzyl)oxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid, 3-bromo-4-((2-bromo-3-(naphthalen-2-yl)benzyl)oxy)benzaldehyde, (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(naphthalen-2-yl)benzyl)oxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid, 3-bromo-4-((2 -methyl bromo[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzoate, 4-(3-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl) hydrochloride )methoxy)benzamido)propyl)morpholin-4-ium, 4-([1,T:2',1”-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-3-bromobenzaldehyde, acid (2S, 4S)-1-( 4-([1,T:2',1”-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-3-bromobenzyl)-4-hydroxy-pyrrolidine-2-carboxylic acid, 4-([1,T:2',1 ”-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-5-chloro-2-hydroxybenzaldehyde and 4-((5-([1,T:2',1”-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-4-chloro- 2-formylphenoxy)methyl)picolinonitrile.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest związek określony powyżej do stosowania jako inhibitor szlaku białek PD-1/PD-L1, zwłaszcza w komórkach ssaka, korzystnie komórkach nowotworowych.Another object of the invention is the compound defined above for use as an inhibitor of the PD-1/PD-L1 protein pathway, especially in mammalian cells, preferably cancer cells.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest związek określony powyżej do stosowania w farmacji, zwłaszcza w leczeniu lub profilaktyce chorób nowotworowych.Another subject of the invention is the compound defined above for use in pharmacy, especially in the treatment or prevention of cancer.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca efektywną terapeutycznie dawkę związku określonego powyżej.Another object of the invention is a pharmaceutical composition containing a therapeutically effective dose of a compound as defined above.

W przykładowej realizacji opisano inhibitor oddziaływania PD-1/PD-L1 o wzorze ogólnym (I) (Schemat 1),In an exemplary embodiment, a PD-1/PD-L1 interaction inhibitor of general formula (I) is described (Scheme 1),

Schemat 1. Struktura inhibitorów (I) gdzie X oznacza -Br lub fenyl, Y to fenyl, 2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksyna lub naftalen. Za R1 możemy natomiast przyjąć -Br, -OMe, -Me, -Cl lub -H, R2 to -OH, -H lub pochodna pikolinonitrylu, a R3 stanowią podstawniki, które możemy przedstawić za pomocą zamieszczonych poniżej struktur:Scheme 1. Structure of inhibitors (I) where X is -Br or phenyl, Y is phenyl, 2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin or naphthalene. However, we can assume that R1 is -Br, -OMe, -Me, -Cl or -H, R2 is -OH, -H or a picolinonitrile derivative, and R3 are substituents that we can represent using the structures below:

PL 243517 Β1PL 243517 Β1

COOHCOOH

ΘΘ

lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól mogąca znaleźć zastosowanie jako lek w leczeniu chorób nowotworowych.or a pharmaceutically acceptable salt thereof that may be used as a drug in the treatment of cancer.

Inhibitory te powodują dimeryzację białka PD-L1 uniemożliwiającą jego interakcję z białkiem PD-1, co zostało potwierdzone metodą NMR. Aktywność związków w dysocjacji kompleksu PD-1/PD-L1 została potwierdzona badaniami metodą fluorescencji czasowo-rozdzielczej (eng. Homogenous Time Resolved Fluorescence - HTRF).These inhibitors cause dimerization of the PD-L1 protein, preventing its interaction with the PD-1 protein, which was confirmed by the NMR method. The activity of the compounds in the dissociation of the PD-1/PD-L1 complex was confirmed by time-resolved fluorescence (HTRF) tests.

Dla lepszego zrozumienia istoty wynalazku niniejszy opis został wzbogacony o szczegółowe przykłady jego realizacji, które zostały przedstawione poniżej.For a better understanding of the essence of the invention, this description has been enriched with detailed examples of its implementation, which are presented below.

Widma ¹H i ¹³C NMR zarejestrowano na spektrometrze Bruker Avance 600 MHz z wyrażeniem przesunięć chemicznych (5) w ppm i stałych sprzęgania (J) w Hz. TMS został zastosowano jako wzorzec i wewnętrzny standard. Ponadto analizowano przesunięcia chemiczne w odniesieniu do pików rozpuszczalnika (DMSO-d6, CDCh). Związki oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej z zastosowaniem chromatografu typu flash Grace Reveleris X2. Progres reakcji monitorowano poprzez wizualizacje płytek TLC z żelem krzemionkowym typu TLC Merck 60 254 do 365 nm. ^1H and ^13C NMR spectra were recorded on a Bruker Avance 600 MHz spectrometer expressing chemical shifts (5) in ppm and coupling constants (J) in Hz. TMS was used as a reference and internal standard. Moreover, chemical shifts were analyzed in relation to the solvent peaks (DMSO-d6, CDCh). The compounds were purified by column chromatography using a Grace Reveleris X2 flash chromatograph. The reaction progress was monitored by visualization of TLC plates with TLC Merck 60 silica gel plates 254 to 365 nm.

3-bromo-4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzaldehyd (1)3-bromo-4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzaldehyde (1)

(i)(and)

2-bromo-3-(bromometylo)-1,T-bifenyl (220 mg, 0,68 mmol), 3-bromo-4-hydroksybenzaldehyd (136 mg, 0,68 mmol), węglan potasu (187 mg, 1,36 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (3 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 χ 30 ml). Warstwy organiczne połączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (0-100% AcOEt w heksanie) i otrzymano 1 (119 mg, 39%) w postaci białego osadu. ¹H NMR (600 MHz, CDCh) δ: 9,87 (s, 1H), 8,15 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,83 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,49-7,37 (m, 6H), 7,32 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,36 (s, 2H). ¹³C NMR (151 MHz, CDCh) δ: 189,7, 159,5, 143,6, 141,1, 135,7, 134,8, 131,3, 131,3, 130,9, 129,6, 128,2, 127,9, 127,7, 127,2, 121,9, 113,4, 113,1, 71,1, UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 9,37 min, dla C2oHi₄Br₂02 [M+H]⁺ znaleziono: 447,07 m/z; obliczono: 446,94.2-bromo-3-(bromomethyl)-1,T-biphenyl (220 mg, 0.68 mmol), 3-bromo-4-hydroxybenzaldehyde (136 mg, 0.68 mmol), potassium carbonate (187 mg, 1, 36 mmol) was stirred in anhydrous DMF (3 ml) at room temperature overnight. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 χ 30 ml). The organic layers were combined and concentrated. The product was purified by silica gel column chromatography (0-100% AcOEt in hexane) to afford 1 (119 mg, 39%) as a white solid. ^1H NMR (600 MHz, CDCh) δ: 9.87 (s, 1H), 8.15 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.83 (dd, J = 8.4, 2, 0 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.49-7.37 (m, 6H), 7.32 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.36 (s, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCh) δ: 189.7, 159.5, 143.6, 141.1, 135.7, 134.8, 131.3, 131.3, 130.9, 129.6 , 128.2, 127.9, 127.7, 127.2, 121.9, 113.4, 113.1, 71.1, UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 9.37 min, for C2oHi ₄ Br ₂ 02 [M+H] ⁺ found: 447.07 m/z; calculated: 446.94.

4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metoksybenzaldehyd (2)4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methoxybenzaldehyde (2)

K₂CO₃ _K2CO3 _{_}

DMFDMF

2-bromo-3-(bromometylo)-1,T-bifenyl (300 mg, 0,93 mmol), 4-hydroksy-3-metoksybenzaldehyd (141 mg, 0,93 mmol), węglan potasu (255 mg, 1,85 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (3 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2x30 ml). Warstwy organiczne połączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (0-100% AcOEt w heksanie) i otrzymano 2 (192 mg, 52%) w postaci białego osadu. ¹H NMR (600 MHz, CDCh) δ: 9,87 (s, 1H), 7,53 (ddd, J = 10,8, 5,8, 5,0 Hz, 1H), 7,49-7,35 (m, 8H), 7,29 (dd, J = 7,5, 1,6 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,37 (s, 2H), 4,00 (s, 3H). ¹³C NMR (151 MHz, CDCh) δ: 191,1, 153,4, 150,2, 143,6, 141,3, 136,2, 130,8, 130,7, 129,6, 128,2, 127,8, 127,6, 127,3, 126,8, 122,2, 112,6, 109,6, 71,0, 56,3. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 8,50 min, dla C2iHi7BrO3 [M+H]⁺ znaleziono: 397,22 m/z; obliczono: 397,04.2-bromo-3-(bromomethyl)-1,T-biphenyl (300 mg, 0.93 mmol), 4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde (141 mg, 0.93 mmol), potassium carbonate (255 mg, 1, 85 mmol) was stirred in anhydrous DMF (3 ml) at room temperature overnight. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2x30 ml). The organic layers were combined and concentrated. The product was purified by silica gel column chromatography (0-100% AcOEt in hexane) to afford 2 (192 mg, 52%) as a white solid. ^1H NMR (600 MHz, CDCh) δ: 9.87 (s, 1H), 7.53 (ddd, J = 10.8, 5.8, 5.0 Hz, 1H), 7.49-7, 35 (m, 8H), 7.29 (dd, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H ), 4.00 (s, 3H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCh) δ: 191.1, 153.4, 150.2, 143.6, 141.3, 136.2, 130.8, 130.7, 129.6, 128.2 , 127.8, 127.6, 127.3, 126.8, 122.2, 112.6, 109.6, 71.0, 56.3. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 8.50 min, for C2iHi7BrO3 [M+H] ⁺ found: 397.22 m/z; calculated: 397.04.

PL 243517 Β1PL 243517 Β1

4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metylobenzaldehyd (3)4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methylbenzaldehyde (3)

(3>(3>

2-bromo-3-(bromometylo)-1 ,Τ-bifenyl (200 mg, 0,62 mmol), 4-hydroksy-3-metylobenzaldehyd (84 mg, 0,62 mmol), węglan potasu (170 mg, 1,23 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (3 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2x30 ml). Warstwy organiczne połączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (0-100% AcOEt w heksanie) i krystalizowano z cykloheksanu, otrzymując 3 (90 mg, 38%) w postaci białego osadu. ¹H NMR (600 MHz, CDCI3) δ: 9,88 (s, 1H), 7,76 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,73 (dd, J = 8,3, 2,0 Hz, 1H), 7,57-7,53 (m, 1H), 7,47-7,38 (m, 6H), 7,32 (dd, J = 7,5, 1,7 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,30 (s, 2H), 2,41 (s, 3H). ¹³CNMR(151 MHz, CDCI3)6: 191,3, 161,7, 143,7, 141,3, 136,6, 131,8, 130,8, 130,1, 129,6, 128,2, 128,1, 127,9, 127,5, 127,3, 122,5, 111,2, 70,4, 16,7. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 9,31 min, dla C₂iHi₇BrO₂[M+H]⁺ znaleziono: 381,20 m/z; obliczono: 381,05.2-bromo-3-(bromomethyl)-1,Τ-biphenyl (200 mg, 0.62 mmol), 4-hydroxy-3-methylbenzaldehyde (84 mg, 0.62 mmol), potassium carbonate (170 mg, 1, 23 mmol) was stirred in anhydrous DMF (3 ml) at room temperature overnight. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2x30 ml). The organic layers were combined and concentrated. The product was purified by silica gel column chromatography (0-100% AcOEt in hexane) and crystallized from cyclohexane to give 3 (90 mg, 38%) as a white solid. ^1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 9.88 (s, 1H), 7.76 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 8.3, 2, 0 Hz, 1H), 7.57-7.53 (m, 1H), 7.47-7.38 (m, 6H), 7.32 (dd, J = 7.5, 1.7 Hz, 1H ), 7.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.30 (s, 2H), 2.41 (s, 3H). ¹³ CNMR(151 MHz, CDCI3)6: 191.3, 161.7, 143.7, 141.3, 136.6, 131.8, 130.8, 130.1, 129.6, 128.2, 128.1, 127.9, 127.5, 127.3, 122.5, 111.2, 70.4, 16.7. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 9.31 min, for C ₂ iHi ₇ BrO ₂ [M+H] ⁺ found: 381.20 m/z; calculated: 381.05.

4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzaldehyd (4)4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzaldehyde (4)

2-bromo-3-(bromometylo)-1 ,Τ-bifenyl (200 mg, 0,62 mmol), 4-hydroksybenzaldehyd (75 mg, 0,62 mmol), węglan potasu (170 mg, 1,23 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (3 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 x30 ml). Warstwy organiczne połączono i zatężono. Surowy produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (0-100% AcOEt w heksanie) i krystalizowano z cykloheksanu, otrzymując 4 (97 mg, 43%) w postaci białego osadu. ¹H NMR (600 MHz, CDCI3) δ: 9,91 (s, 1H), 7,90-7,86 (m, 2H), 7,54-7,51 (m, 1H), 7,47-7,37 (m, 6H), 7,31 (dd, J = 7,5, 1,7 Hz, 1H), 7,15-7,12 (m,2H), 5,30 (s, 2H). ¹³CNMR(151 MHz, CDCI₃)6: 190,8, 163,4, 143,7, 141,1, 136,1, 132,1, 130,9, 130,4, 129,4, 128,1, 127,8, 127,5, 127,4, 122,6, 115,2, 70,4. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 8,78 min, dla C₂oHi5Br0₂ [M+H]⁺ znaleziono: 367,18 m/z; obliczono: 367,03.2-bromo-3-(bromomethyl)-1,Τ-biphenyl (200 mg, 0.62 mmol), 4-hydroxybenzaldehyde (75 mg, 0.62 mmol), potassium carbonate (170 mg, 1.23 mmol) mixed in anhydrous DMF (3 mL) at room temperature overnight. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 x 30 ml). The organic layers were combined and concentrated. The crude product was purified by silica gel column chromatography (0-100% AcOEt in hexane) and crystallized from cyclohexane to afford 4 (97 mg, 43%) as a white solid. ^1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 9.91 (s, 1H), 7.90-7.86 (m, 2H), 7.54-7.51 (m, 1H), 7.47- 7.37 (m, 6H), 7.31 (dd, J = 7.5, 1.7 Hz, 1H), 7.15-7.12 (m,2H), 5.30 (s, 2H) . ¹³ CNMR(151 MHz, CDCI ₃ )6: 190.8, 163.4, 143.7, 141.1, 136.1, 132.1, 130.9, 130.4, 129.4, 128.1 , 127.8, 127.5, 127.4, 122.6, 115.2, 70.4. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 8.78 min, for C ₂ oHi5Br0 ₂ [M+H] ⁺ found: 367.18 m/z; calculated: 367.03.

Kwas (S)-1 -(3-bromo-4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy (5)(S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid (5)

COOHCOOH

1. AcOH, DMF1. AcOH, DMF

2. NaBHjCN2. NaBHjCN

(119 mg, 0,27 mmol), kwas L-pipekolinowy (158 mg, 1,22 mmol) i AcOH (3 krople) mieszano w DMF (4 ml) w 25°C przez 2 godziny. Następnie dodano NaBH₃CN (79 mg, 1,33 mmol) i tak powstały roztwór mieszano dodatkowo przez 20 godzin. Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 x30 ml). Warstwy organiczne połączono, wysuszono nad bezwodnym MgSO4, przesączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii typu FLASH (żel krzemionkowy, 0-50% MeOH w CHCI3), w wyniku czego jako produkt 5 otrzymano biały osad (77 mg, wydajność: 51%). Ή NMR (600 MHz, DMSO) δ: 7,67 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,52 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,50-7,35 (m, 6H), 7,32 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,26 (s, 2H), 3,84 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 3,49-3,39 (m, 1H), 3,05 (s, 1H), 2,90-2,83 (m, 1H), 2,24-2,16 (m, 1H), 1,86-1,76 (m, 1H), 1,74-1,62 (m, 1H), 1,58-1,40 (m, 3H), 1,39-1,29 (m, 1H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 153,4, 142,9, 140,7, 136,5, 133,7, 130,9, 129,8, 129,2, 128,3, 128,2, 127,7, 122,4, 113,6, 110,9, 70,6, 64,4, 57,8, 49,2, 28,7, 24,4, 22,0. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 6,51 min, dla C₂₆H₂₅Br₂NO₃[M+H]⁺ znaleziono: 558,20 m/z; obliczono: 558,02.(119 mg, 0.27 mmol), L-pipecolinic acid (158 mg, 1.22 mmol) and AcOH (3 drops) were stirred in DMF (4 mL) at 25°C for 2 hours. NaBH ₃ CN (79 mg, 1.33 mmol) was then added and the resulting solution was stirred for an additional 20 hours. The solution was concentrated under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 x 30 ml). The organic layers were combined, dried over anhydrous MgSO4, filtered and concentrated. The product was purified by FLASH chromatography (silica gel, 0-50% MeOH in CHCl3) to give product 5 as a white solid (77 mg, yield: 51%). Ή NMR (600 MHz, DMSO) δ: 7.67 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.50-7.35 (m, 6H), 7.32 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.26 ( s, 2H), 3.84 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.49-3.39 (m, 1H), 3.05 (s, 1H), 2.90-2.83 (m, 1H), 2.24-2.16 (m, 1H), 1.86-1.76 (m, 1H), 1.74-1.62 (m, 1H), 1.58-1 .40 (m, 3H), 1.39-1.29 (m, 1H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 153.4, 142.9, 140.7, 136.5, 133.7, 130.9, 129.8, 129.2, 128.3, 128.2 , 127.7, 122.4, 113.6, 110.9, 70.6, 64.4, 57.8, 49.2, 28.7, 24.4, 22.0. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 6.51 min, for C ₂₆ H ₂₅ Br ₂ NO ₃ [M+H] ⁺ found: 558.20 m/z; calculated: 558.02.

PL 243517 Β1PL 243517 Β1

Kwas (S)-1 -(4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metoksybenzylo)piperydyno-2-karboksylowy (6)(S)-1-(4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methoxybenzyl)piperidine-2-carboxylic acid (6)

COOHCOOH

(100 mg, 0,25 mmola), kwas L-pipekolinowy (149 mg, 1,15 mmol) i AcOH (3 krople) mieszano w DMF (4 ml) w 25°C przez 2 godziny. Następnie dodano NaBHsCN (74 mg, 1,26 mmol) i otrzymany roztwór mieszano dodatkowo przez 20 godzin. Pozostałość zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 x30 ml). Warstwy organiczne połączono, wysuszono nad bezwodnym MgSO4, przesączono i zatężono. Surowy produkt oczyszczono metodą chromatografii typu FLASH (żel krzemionkowy, 0-50% MeOH w CHCL), w wyniku czego jako produkt 6 otrzymano biały osad (93 mg, wydajność: 72%). ¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ: 7,60 (dd, J = 7,6, 1,5 Hz, 1H), 7,52-7,33 (m, 7H), 7,09 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,08 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,15 (s, 1H), 3,04 (s, 1H), 1,96-1,87 (m, 1H), 1,72 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 1,61-1,53 (m, 3H), 1,41-1,33 (m, 1H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 149,4, 147,9, 143,4, 141,3, 137,4, 131,4, 129,7, 129,3, 128,6, 128,2, 123,3, 123,1, 114,5, 113,7, 79,6, 71,0, 58,5, 56,1,49,7, 28,3, 23,6, 22,1. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 6,10 min, dla C₂7H₂8BrNO4 [M+H]⁺ znaleziono: 510,28 m/z; obliczono: 510,13.(100 mg, 0.25 mmol), L-pipecolinic acid (149 mg, 1.15 mmol) and AcOH (3 drops) were stirred in DMF (4 mL) at 25°C for 2 hours. NaBHsCN (74 mg, 1.26 mmol) was then added and the resulting solution was stirred for an additional 20 hours. The residue was concentrated under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 x 30 ml). The organic layers were combined, dried over anhydrous MgSO4, filtered and concentrated. The crude product was purified by FLASH chromatography (silica gel, 0-50% MeOH in CHCL) to give product 6 as a white solid (93 mg, yield: 72%). ^1H NMR (600 MHz, DMSO) δ: 7.60 (dd, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H), 7.52-7.33 (m, 7H), 7.09 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.08 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.15 (s, 1H), 3.04 (s, 1H), 1.96-1.87 (m, 1H), 1.72 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 1.61-1.53 (m, 3H), 1.41-1.33 (m, 1H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 149.4, 147.9, 143.4, 141.3, 137.4, 131.4, 129.7, 129.3, 128.6, 128.2 , 123.3, 123.1, 114.5, 113.7, 79.6, 71.0, 58.5, 56.1,49.7, 28.3, 23.6, 22.1. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 6.10 min, for C ₂ 7H ₂ 8BrNO4 [M+H] ⁺ found: 510.28 m/z; calculated: 510.13.

Kwas (S)-1 -(4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metylobenzylo)piperydyno-2-karboksylowy (7)(S)-1-(4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methylbenzyl)piperidine-2-carboxylic acid (7)

COOHCOOH

1. AcOH, DMF1. AcOH, DMF

2. NaBHjCN2. NaBHjCN

(90 mg, 0,24 mmola), kwas L-pipekolinowy (140 mg, 1,08 mmola) i AcOH (3 krople) mieszano w DMF (4 ml) w 25°C przez 2 godziny. Następnie dodano NaBHsCN (69 mg, 1,18 mmol) i otrzymany roztwór mieszano dodatkowo przez 20 godzin. Pozostałość zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 x30 ml). Warstwy organiczne połączono, wysuszono nad bezwodnym MgSO4, przesączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii typu FLASH (żel krzemionkowy, 0-50% MeOH w CHCI3), w wyniku czego otrzymano 7 jako żółty osad (65 mg, wydajność: 56%). Ή NMR (600 MHz, CDCI3) δ: 7,50 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,44-7,21 (m, 9H), 6,83 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,06 (s, 2H), 4,39 (d, J = 55,8 Hz, 2H), 3,42 (d, J = 55,1 Hz, 2H), 2,62 (s, 1H), 2,28 (s, 3H), 1,96 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 1,85-1,69 (m, 2H), 1,37-1,20 (m, 2H). ¹³C NMR (151 MHz, CDCI3) δ: 157,8, 143,5, 141,3, 137,0, 134,3, 130,9, 130,6, 129,6, 128,1, 127,9, 127,8, 127,3, 127,2, 122,4, 111,6, 70,1, 58,5, 50,9, 29,8, 28,2, 22,8, 22,1, 16,7. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 6,54 min, dla C₂7H₂sBrNO3 [M+H]⁺ znaleziono: 494,26 m/z; obliczono: 494,13.(90 mg, 0.24 mmol), L-pipecolinic acid (140 mg, 1.08 mmol) and AcOH (3 drops) were stirred in DMF (4 mL) at 25°C for 2 hours. NaBHsCN (69 mg, 1.18 mmol) was then added and the resulting solution was stirred for an additional 20 hours. The residue was concentrated under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 x 30 ml). The organic layers were combined, dried over anhydrous MgSO4, filtered and concentrated. The product was purified by FLASH chromatography (silica gel, 0-50% MeOH in CHCl3) to give 7 as a yellow solid (65 mg, yield: 56%). Ή NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.50 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.44-7.21 (m, 9H), 6.83 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.39 (d, J = 55.8 Hz, 2H), 3.42 (d, J = 55.1 Hz, 2H), 2.62 ( s, 1H), 2.28 (s, 3H), 1.96 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 1.85-1.69 (m, 2H), 1.37-1.20 (m, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl3) δ: 157.8, 143.5, 141.3, 137.0, 134.3, 130.9, 130.6, 129.6, 128.1, 127.9 , 127.8, 127.3, 127.2, 122.4, 111.6, 70.1, 58.5, 50.9, 29.8, 28.2, 22.8, 22.1, 16 ,7. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 6.54 min, for C ₂ 7H ₂ sBrNO3 [M+H] ⁺ found: 494.26 m/z; calculated: 494.13.

Kwas (S)-1 -(4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy (8)(S)-1-(4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid (8)

(90 mg, 0,25 mmol), kwas L-pipekolinowy (145 mg, 1,22 mmol) i AcOH (3 krople) mieszano w DMF (4 ml) w 25°C przez 2 godziny. Następnie dodano NaBHsCN (72 mg, 1,23 mmol) i otrzymany roztwór mieszano dodatkowo przez 20 godzin. Pozostałość zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem.(90 mg, 0.25 mmol), L-pipecolinic acid (145 mg, 1.22 mmol) and AcOH (3 drops) were stirred in DMF (4 mL) at 25°C for 2 hours. NaBHsCN (72 mg, 1.23 mmol) was then added and the resulting solution was stirred for an additional 20 hours. The residue was concentrated under reduced pressure.

PL 243517 Β1PL 243517 Β1

Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 χ 30 ml). Warstwy organiczne połączono, wysuszono nad bezwodnym MgSO4, przesączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii typu FLASH (żel krzemionkowy, 0-50% MeOH w CHCL), w wyniku czego otrzymano 8 jako biały osad (77 mg, wydajność: 65%). ¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ: 7,59 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,54-7,25 (m, 9H), 7,04 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 5,19 (s, 2H), 4,01 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 3,11 (s, 1H), 2,98 (s, 1H), 2,40 (s, 1H), 1,87 (s, 1H), 1,69 (s, 1H), 1,61-1,43 (m, 3H), 1,35 (s, 1H). ¹³C NMR(151 MHz, DMSO) δ: 158,4, 143,5, 141,3, 137,2, 131,8, 131,4, 129,7, 129,5, 128,6, 128,2, 123,4, 115,0, 79,6, 70,3, 58,3, 49,6, 28,5, 23,9, 22,2. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 6,18 min, dla C26H₂6BrNO₃ [M+H]⁺ znaleziono: 480,24 m/z; obliczono: 480,12.Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 χ 30 ml). The organic layers were combined, dried over anhydrous MgSO4, filtered and concentrated. The product was purified by FLASH chromatography (silica gel, 0-50% MeOH in CHCL) to afford 8 as a white solid (77 mg, yield: 65%). ^1H NMR (600 MHz, DMSO) δ: 7.59 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.54-7.25 (m, 9H), 7.04 (d, J = 7, 9 Hz, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.01 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.11 (s, 1H), 2.98 (s, 1H), 2 .40 (s, 1H), 1.87 (s, 1H), 1.69 (s, 1H), 1.61-1.43 (m, 3H), 1.35 (s, 1H). ¹³ C NMR(151 MHz, DMSO) δ: 158.4, 143.5, 141.3, 137.2, 131.8, 131.4, 129.7, 129.5, 128.6, 128.2 , 123.4, 115.0, 79.6, 70.3, 58.3, 49.6, 28.5, 23.9, 22.2. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 6.18 min, for C26H ₂ 6BrNO ₃ [M+H] ⁺ found: 480.24 m/z; calculated: 480.12.

3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksyn-6-ylo)benzylo)oksy)benzaldehyd (9)3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)benzyl)oxy)benzaldehyde (9)

K₂CO₃ _K2CO3 _{_}

DMFDMF

(9)(9)

6-(2-bromo-3-(bromometylo)fenylo)-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksyna (250 mg, 0,65 mmol), 3-bromo-4-hydroksybenzaldehyd (130 mg, 0,65 mmol) i węglanu potasu (180 mg, 1,31 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (4 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 x30 ml). Warstwy organiczne połączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (0-100% AcOEt w heksanie) i otrzymano 9 (291 mg, wydajność: 88%) jako białe ciało stałe. Ή NMR (600 MHz, DMSO) δ: 9,88 (s, 1H), 8,15 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,97 (dd, J = 8,5, 2,0 Hz, 1H), 7,64 (dd, J = 7,6, 1,6 Hz, 1H), 7,52-7,44 (m, 2H), 7,35 (dd, J = 7,6, 1,7 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 1H), 5,40 (s, 2H), 4,29 (s, J = 4,6 Hz, 4H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 190,7, 159,0, 143,2, 142,9, 142,5, 135,8, 134,1, 133,8, 131,3, 131,2, 131,0, 128,5, 127,8, 122,9, 122,3, 118,0, 116,8, 114,1, 111,9,71,2,64,2. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 8,89 min, dla C₂₂Hi6Br₂O4 [M+H]⁺ znaleziono: 503,04 m/z; obliczono: 502,95.6-(2-bromo-3-(bromomethyl)phenyl)-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin (250 mg, 0.65 mmol), 3-bromo-4-hydroxybenzaldehyde (130 mg, 0.65 mmol) and potassium carbonate (180 mg, 1.31 mmol) were stirred in anhydrous DMF (4 mL) at room temperature overnight. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 x 30 ml). The organic layers were combined and concentrated. The product was purified by silica gel column chromatography (0-100% AcOEt in hexane) to afford 9 (291 mg, yield: 88%) as a white solid. Ή NMR (600 MHz, DMSO) δ: 9.88 (s, 1H), 8.15 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.52-7.44 (m, 2H), 7.35 (dd, J = 7.6, 1.7 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.84 (dd, J = 8, 2, 2.1 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.29 (s, J = 4.6 Hz, 4H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 190.7, 159.0, 143.2, 142.9, 142.5, 135.8, 134.1, 133.8, 131.3, 131.2 , 131.0, 128.5, 127.8, 122.9, 122.3, 118.0, 116.8, 114.1, 111.9,71,2,64.2. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 8.89 min, for C ₂₂ Hi6Br ₂ O4 [M+H] ⁺ found: 503.04 m/z; calculated: 502.95.

(S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksyn-6-ylo)benzylo)oksy)benzylo)piperydyno-2-kwas karboksylowy (10)(S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)benzyl)oxy)benzyl)piperidine-2 -carboxylic acid (10)

coohcooh

1. AcOH, DMF1. AcOH, DMF

2. NaBH₃CN2. NaBH _3CN

(310 mg, 0,61 mmol) i kwas L-pipekolinowy (364 mg, 2,82 mmol) mieszano w DMF (4 ml) z dodatkiem katalitycznych ilości AcOH (3 krople) w 25°C przez 2 godziny. Następnie dodano NaBHsCN (181 mg, 3,07 mmol) i otrzymaną zawiesinę mieszano dodatkowo przez 20 godzin. Pozostałość zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2x30 ml). Warstwy organiczne połączono, wysuszono nad bezwodnym MgSO4, przesączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii typu FLASH (żel krzemionkowy, 0-50% MeOH w CHCI3), w wyniku czego wyizolowano 10 jako białe ciało stałe (164 mg, wydajność: 43%). ¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ: 7,66-7,59 (m, 2H), 7,48 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,35-7,29 (m, 2H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 8,3, 2,1 Hz, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,28 (s, 4H), 3,85 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,06 (dd, J = 8,2, 3,8 Hz, 1H), 2,93-2,81 (m, 1H), 2,30-2,17 (m, J = 16,9, 8,1 Hz, 1H), 1,86-1,77 (m, 1H), 1,74-1,61 (m, J = 12,6, 6,6 Hz, 1H), 1,57-1,41 (m, 3H), 1,38-1,28 (m,(310 mg, 0.61 mmol) and L-pipecolinic acid (364 mg, 2.82 mmol) were stirred in DMF (4 mL) with the addition of catalytic amounts of AcOH (3 drops) at 25°C for 2 hours. NaBHsCN (181 mg, 3.07 mmol) was then added and the resulting suspension was stirred for an additional 20 hours. The residue was concentrated under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2x30 ml). The organic layers were combined, dried over anhydrous MgSO4, filtered and concentrated. The product was purified by FLASH chromatography (silica gel, 0-50% MeOH in CHCl3) to isolate 10 as a white solid (164 mg, yield: 43%). ^1H NMR (600 MHz, DMSO) δ: 7.66-7.59 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.35-7.29 (m, 2H), 7.18 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 6.83 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.28 (s, 4H), 3.85 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.06 (dd, J = 8.2, 3.8 Hz, 1H), 2.93-2.81 (m, 1H), 2.30-2.17 (m, J = 16.9, 8.1 Hz, 1H), 1.86-1.77 (m, 1H), 1.74-1.61 (m, J = 12.6, 6.6 Hz, 1H), 1 .57-1.41 (m, 3H), 1.38-1.28 (m,

1H), 1,23 (s, 1H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 153,6, 143,1, 142,8, 142,4, 136,5, 133,8, 133,7,1H), 1.23 (s, 1H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 153.6, 143.1, 142.8, 142.4, 136.5, 133.8, 133.7,

131,0, 129,9, 128,2, 127,7, 122,7, 122,3, 118,0, 116,8, 113,7, 111,0,70,7,64,2,57,9,49,2,28,6,28,5, 24,1, 22,0. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 6,25 min, dla C28H27Br₂NO₅ [M+H]⁺ znaleziono: 616,23 m/z; obliczono: 616,03.131.0, 129.9, 128.2, 127.7, 122.7, 122.3, 118.0, 116.8, 113.7, 111.0.70,7.64,2.57, 9.49,2,28,6,28.5, 24.1, 22.0. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 6.25 min, for C28H27Br ₂ NO ₅ [M+H] ⁺ found: 616.23 m/z; calculated: 616.03.

PL 243517 Β1PL 243517 Β1

3-bromo-4-((2-bromo-3-(naftalen-2-ylo)benzylo)oksy)benzaldehyd (11)3-bromo-4-((2-bromo-3-(naphthalen-2-yl)benzyl)oxy)benzaldehyde (11)

(Π)(Π)

2-(2-bromo-3-(bromometylo)fenylo)naftalen (200 mg, 0,53 mmol), 3-bromo-4-hydroksybenzaldehyd (107 mg, 0,53 mmol), węglan potasu (146 mg, 1,06 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (3 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 χ 30 ml). Warstwy organiczne połączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (0-100% AcOEt w heksanie) otrzymując 11 (107 mg, 41%) w postaci białego osadu. ¹H NMR (600 MHz, CDCL) δ: 9,88 (s, 1H), 8,16 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,93-7,87 (m, 3H), 7,86-7,84 (m, 1H), 7,83 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,73 (dd, J = 7,7, 0,9 Hz, 1H), 7,56-7,52 (m, 3H), 7,48 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,41 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,39 (s, 2H). ¹³C NMR (151 MHz, CDCI3) δ: 189,5, 159,4, 143,5, 138,5, 135,7, 134,7, 133,1, 132,7, 131,2, 131,2, 131,0, 128,3, 128,2, 127,8, 127,6, 127,6, 127,5, 127,2, 126,4, 122,0, 113,3, 113,0, 71,0. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 10,02 min, dla C₂₄Hi₆Br₂O₂ [M+H]⁺ znaleziono: 494,93 m/z; obliczono: 494,95.2-(2-bromo-3-(bromomethyl)phenyl)naphthalene (200 mg, 0.53 mmol), 3-bromo-4-hydroxybenzaldehyde (107 mg, 0.53 mmol), potassium carbonate (146 mg, 1, 06 mmol) was stirred in anhydrous DMF (3 ml) at room temperature overnight. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 χ 30 ml). The organic layers were combined and concentrated. The product was purified by silica gel column chromatography (0-100% AcOEt in hexane) to give 11 (107 mg, 41%) as a white solid. ^1H NMR (600 MHz, CDCL) δ: 9.88 (s, 1H), 8.16 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.93-7.87 (m, 3H), 7 .86-7.84 (m, 1H), 7.83 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 7.7, 0.9 Hz, 1H), 7, 56-7.52 (m, 3H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.39 (s, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl3) δ: 189.5, 159.4, 143.5, 138.5, 135.7, 134.7, 133.1, 132.7, 131.2, 131.2 , 131.0, 128.3, 128.2, 127.8, 127.6, 127.6, 127.5, 127.2, 126.4, 122.0, 113.3, 113.0, 71 ,0. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 10.02 min, for C ₂₄ Hi ₆ Br ₂ O ₂ [M+H] ⁺ found: 494.93 m/z; calculated: 494.95.

Kwas (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(naftalen-2-ylo)benzylo)oksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy (12)(S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(naphthalen-2-yl)benzyl)oxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid (12)

(90 mg, 0,18 mmol) i kwas L-pipekolinowy (107 mg, 0,83 mmol) mieszano w DMF (3 ml) z dodatkiem katalitycznych ilości AcOH (3 krople) w 25 ⁰ C przez 2 godziny. Następnie dodano NaBHsCN (53 mg, 0,89 mmol) i otrzymaną zawiesinę mieszano dodatkowo przez 20 godzin. Pozostałość zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 x30 ml). Warstwy organiczne połączono, wysuszono nad bezwodnym MgSO4, przesączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii typu FLASH (żel krzemionkowy, 0-50% MeOH w CHCE), w wyniku czego wyizolowano 12 jako białe ciało stałe (35 mg, wydajność: 32%). ¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ: 8,02-7,96 (m, 3H), 7,93 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,72 (dd, J = 7,7, 1,6 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,61-7,52 (m, 4H), 7,48 (dd, J = 7,5, 1,7 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 8,4, 1,9 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,30 (s, 2H), 3,85 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,47 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,08 (dd, J = 8,2, 3,9 Hz, 1H), 2,90-2,83 (m, 1H), 2,23 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 1,86-1,78 (m, 1H), 1,73-1,64 (m, 1H), 1,56-1,43 (m, 3H), 1,38-1,31 (m, 1H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 153,9, 143,4, 138,8, 137,0, 134,1, 133,2, 132,7, 131,6, 130,3, 129,0, 128,56, 128,5, 128,3, 128,0, 127,9, 127,9, 126,9, 126,9, 123,1, 114,1, 111,4, 71,0, 64,5, 58,2, 49,6, 29,1,24,7, 22,5. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 7,37 min, dla C3oH27Br₂N03 [M+H]⁺ znaleziono: 608,19 m/z; obliczono: 608,04.(90 mg, 0.18 mmol) and L-pipecolinic acid (107 mg, 0.83 mmol) were stirred in DMF (3 mL) with the addition of catalytic amounts of AcOH (3 drops) at 25 ⁰ C for 2 hours. NaBHsCN (53 mg, 0.89 mmol) was then added and the resulting suspension was stirred for an additional 20 hours. The residue was concentrated under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 x 30 ml). The organic layers were combined, dried over anhydrous MgSO4, filtered and concentrated. The product was purified by FLASH chromatography (silica gel, 0-50% MeOH in CHCE) to isolate 12 as a white solid (35 mg, yield: 32%). ^1H NMR (600 MHz, DMSO) δ: 8.02-7.96 (m, 3H), 7.93 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 7, 7, 1.6 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.61-7.52 (m, 4H), 7.48 (dd, J = 7.5 , 1.7 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.30 (s , 2H), 3.85 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.47 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.08 (dd, J = 8.2, 3, 9 Hz, 1H), 2.90-2.83 (m, 1H), 2.23 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 1.86-1.78 (m, 1H), 1, 73-1.64 (m, 1H), 1.56-1.43 (m, 3H), 1.38-1.31 (m, 1H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ: 153.9, 143.4, 138.8, 137.0, 134.1, 133.2, 132.7, 131.6, 130.3, 129.0 , 128.56, 128.5, 128.3, 128.0, 127.9, 127.9, 126.9, 126.9, 123.1, 114.1, 111.4, 71.0, 64 .5, 58.2, 49.6, 29.1, 24.7, 22.5. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 7.37 min, for C3oH27Br ₂ N03 [M+H] ⁺ found: 608.19 m/z; calculated: 608.04.

3-bromo-4-((2-bromo[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzoesan metylu (13)Methyl 3-bromo-4-((2-bromo[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzoate (13)

(13)(13)

PL 243517 Β1PL 243517 Β1

2-bromo-3-(bromometylo)-1 ,T-bifenyl (200 mg, 0,61 mmol), 3-bromo-4-hydroksybenzoesan metylu (142 mg, 0,61 mmol), węglan potasu (168 mg, 1,22 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (3 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 χ 30 ml). Warstwy organiczne połączono i zatężono. Produkt otrzymano strącając z octanu etylu otrzymując 13 (115 mg, wydajność: 39%) w postaci białego osadu. Ή NMR (600 MHz, CDCb) δ: 8,30 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,99 (dd, J = 8,6, 2,1 Hz, 1H), 7,72-7,67 (m, 1H), 7,48-7,37 (m, 6H), 7,30 (dd, J = 7,5, 1,7 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,32 (s, 2H), 3,90 (s, 3H). ¹³C NMR (151 MHz, CDCb) δ: 165,7, 158,3, 143,4, 141,1, 135,9, 135,0, 130,8, 129,5, 128,0, 127,7, 127,5, 127,1, 124,3, 121,8, 112,5, 112,1, 70,8, 52,2. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 9,99 min, dla C2iHieBr2O3 [M+H]⁺ znaleziono: 475,12 m/z; obliczono: 474,95.2-bromo-3-(bromomethyl)-1,T-biphenyl (200 mg, 0.61 mmol), methyl 3-bromo-4-hydroxybenzoate (142 mg, 0.61 mmol), potassium carbonate (168 mg, 1 .22 mmol) was stirred in anhydrous DMF (3 mL) at room temperature overnight. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 χ 30 ml). The organic layers were combined and concentrated. The product was obtained by precipitation from ethyl acetate to obtain 13 (115 mg, yield: 39%) as a white solid. Ή NMR (600 MHz, CDCb) δ: 8.30 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.99 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 7.72- 7.67 (m, 1H), 7.48-7.37 (m, 6H), 7.30 (dd, J = 7.5, 1.7 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.32 (s, 2H), 3.90 (s, 3H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCb) δ: 165.7, 158.3, 143.4, 141.1, 135.9, 135.0, 130.8, 129.5, 128.0, 127.7 , 127.5, 127.1, 124.3, 121.8, 112.5, 112.1, 70.8, 52.2. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 9.99 min, for C2iHieBr2O3 [M+H] ⁺ found: 475.12 m/z; calculated: 474.95.

Chlorowodorek 4-(3-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzamido)propylo)morfolin-4-ium (14)4-(3-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzamido)propyl)morpholin-4-ium hydrochloride (14)

(100 mg, 0,21 mmol), 3-morfolinopropano-1 -aminę (1,50 ml, 10,26 mmol), oraz DBU (1,0 ml, 6,7 mmol) umieszczono w kolbie i mieszano 2 dni w temperaturze pokojowej. Mieszaninę rozcieńczono wodą, a następnie ekstrahowano octanem etylu (3 χ 20 ml). Warstwy organiczne zebrano razem i osuszono bezwodnym siarczanem(VI) magnezu. Produkt oczyszczono za pomocą chromatografii typu FLASH w układzie chloroform/metanol. Następnie otrzymaną aminę przekształcono w chlorowodorek i rekrystalizowano z octanu etylu otrzymując 14 jako białe ciało stałe (60 mg, wydajność: 48%). ¹H NMR (600 MHz, CDCb) δ: 8,14 (s, 1H), 8,06 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,82 (dd, J = 8,6, 2,2 Hz, 1H), 7,73-7,68 (m, 1H), 7,48-7,37 (m, 6H), 7,30 (dd, J = 7,5, 1,7 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,31 (s, 2H), 3,78 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,57 (dd, J = 10,9, 5,8 Hz, 2H), 2,61-2,55 (m, 2H), 2,53 (s, 4H), 1,83-1,73 (m, 2H), ¹³C NMR (151 MHz, CDCb) δ: 165,6, 157,1, 143,5, 141,2, 136,2, 132,1, 130,7, 129,6, 129,0, 128,2, 128,2, 127,8, 127,6, 127,2, 121,9, 113,0, 112,3, 70,3, 67,1,59,2, 54,1,41,1,23,9. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R= 6,75 min, dla C27H2sBr2N2O3 [M+H]⁺ znaleziono: 587,12 m/z; obliczono: 587,05.(100 mg, 0.21 mmol), 3-morpholinopropane-1-amine (1.50 mL, 10.26 mmol), and DBU (1.0 mL, 6.7 mmol) were placed in a flask and stirred for 2 days at room temperature. The mixture was diluted with water and then extracted with ethyl acetate (3 χ 20 mL). The organic layers were collected together and dried over anhydrous magnesium sulfate. The product was purified by FLASH chromatography in the chloroform/methanol system. The obtained amine was then converted into the hydrochloride salt and recrystallized from ethyl acetate to give 14 as a white solid (60 mg, yield: 48%). ^1H NMR (600 MHz, CDCb) δ: 8.14 (s, 1H), 8.06 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 8.6, 2, 2 Hz, 1H), 7.73-7.68 (m, 1H), 7.48-7.37 (m, 6H), 7.30 (dd, J = 7.5, 1.7 Hz, 1H ), 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.31 (s, 2H), 3.78 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.57 (dd, J = 10.9, 5.8 Hz, 2H), 2.61-2.55 (m, 2H), 2.53 (s, 4H), 1.83-1.73 (m, 2H), ¹³ C NMR (151 MHz, CDCb) δ: 165.6, 157.1, 143.5, 141.2, 136.2, 132.1, 130.7, 129.6, 129.0, 128.2, 128 ,2, 127.8, 127.6, 127.2, 121.9, 113.0, 112.3, 70.3, 67.1,59.2, 54.1,41,1,23.9 . UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 6.75 min, for C27H2sBr2N2O3 [M+H] ⁺ found: 587.12 m/z; calculated: 587.05.

4-([1,1 ”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-3-bromobenzaldehyd (15)4-([1,1”-terphenyl]-3’-ylmethoxy)-3-bromobenzaldehyde (15)

[1,T:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometanol (300 mg, 1,15 mmol) rozpuszczono w bezwodnym DCM (4,5 ml) pod argonem. Ostrożnie dodano SOCI2 (1,4 ml) i otrzymany roztwór mieszano w 45°C. Po 3 godzinach reakcję zatrzymano i roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Utworzony chlorek, 3-bromo-4-hydroksybenzaldehyd (231 mg, 1,15 mmol) i K2CO3 (319 mg, 2,31 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (3,3 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 x30 ml). Warstwy organiczne połączono, osuszono nad bezwodnym siarczanem(VI) magnezu i zatężono. Produkt poddano chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (0-60% AcOEt w heksanie) otrzymując 15 jako białawy osad (308 mg, wydajność: 60%). Ή NMR (600 MHz, CDCb) δ: 9,8 (s, 1H), 8,1 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,7 (dd, J = 8,5, 2,0 Hz, 1H), 7,5 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,4 (dd, J = 7,7, 1,2 Hz, 1H), 7,2-7,0 (m, 10H),6,7(d, J = 8,5Hz, 1H), 5,0 (s, 2H). ¹³C NMR (151 MHz, CDCb) δ: 189,7, 159,8, 142,0, 141,3, 139,8, 138,4, 134,7, 133,9, 131,1, 130,9, 130,4, 130,3, 129,9, 128,1, 128,0, 127,7, 127,3, 127,2, 126,5, 113,2, 112,9, 69,7. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 9,51 min, dla C26Hi₉BrO₂ [M+H]⁺ znaleziono: 445,34 m/z; obliczono: 445,06.[1,T:2',1'-terphenyl]-3'-ylmethanol (300 mg, 1.15 mmol) was dissolved in anhydrous DCM (4.5 mL) under argon. SOCl2 (1.4 ml) was carefully added and the resulting solution was stirred at 45°C. After 3 hours, the reaction was stopped and the solution was concentrated under reduced pressure. The formed chloride, 3-bromo-4-hydroxybenzaldehyde (231 mg, 1.15 mmol) and K2CO3 (319 mg, 2.31 mmol) were stirred in anhydrous DMF (3.3 mL) at room temperature overnight. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 x 30 ml). The organic layers were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated. The product was subjected to silica gel column chromatography (0-60% AcOEt in hexane) to give 15 as an off-white solid (308 mg, yield: 60%). Ή NMR (600 MHz, CDCb) δ: 9.8 (s, 1H), 8.1 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.7 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.5 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.4 (dd, J = 7.7, 1.2 Hz, 1H), 7.2-7.0 (m, 10H),6.7(d, J = 8.5Hz, 1H), 5.0 (s, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCb) δ: 189.7, 159.8, 142.0, 141.3, 139.8, 138.4, 134.7, 133.9, 131.1, 130.9 , 130.4, 130.3, 129.9, 128.1, 128.0, 127.7, 127.3, 127.2, 126.5, 113.2, 112.9, 69.7. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 9.51 min, for C26Hi ₉ BrO ₂ [M+H] ⁺ found: 445.34 m/z; calculated: 445.06.

PL 243517 Β1PL 243517 Β1

Kwas (2S, 4S)-1 -(4-([1, 1 ’: 2’ ,1 ”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-3-bromobenzylo)-4-hydroksy-pirolidyno-2-karboksylowy (16)(2S,4S)-1-(4-([1,1':2',1'-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-3-bromobenzyl)-4-hydroxy-pyrrolidine-2-carboxylic acid (16 )

Roztwór 15 (200 mg, 0,45 mmol), kwasu (2R, 4R)-4-hydroksypirolidyno-2-karboksylowego (272 mg, 2,07 mmol) w DMF (6,0 ml) mieszano z dodatkiem katalitycznych ilości AcOH (3 krople) w temperaturze 25°C przez 2 godziny. Następnie dodano NaBHsCN (142 mg, 2,26 mmol) i mieszano przez noc. Pozostałość zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2 x30 ml). Warstwy organiczne połączono, wysuszono nad bezwodnym MgSO4, przesączono i zatężono. Produkt oczyszczono metodą chromatografii typu FLASH (żel krzemionkowy, 0-50% MeOH w AcOEt), otrzymując 16 jako białe ciało stałe (93 mg, wydajność: 37%). ¹H NMR (600 MHz, CDCI₃) δ: 7,7 (d, J = 7,2 HzJH), 7,6-7,5 (m, 2H), 7,4 (dd, J = 7,7, 1,1 Hz, 1H), 7,2-7,1 (m, 9H), 7,1-7,0 (m, 2H), 6,7 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,8 (s, 2H), 4,1 (s, 1H), 3,9 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,5 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 3,1 (s, J = 19,4 Hz, 1H), 2,8 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 2,4 (s, 1H), 2,2 (s, 1H), 1,7 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 1,2 (s, 1H). ¹³C NMR (151 MHz, CDCI3) δ: 153,4, 141,3, 141,0, 139,8, 138,0, 134,6, 133,6, 130,1, 129,9, 129,7, 129,5, 129,0, 127,8, 127,7, 127,7, 127,7, 126,9, 126,4, 113,2, 110,7, 68,8, 68,6, 65,4, 60,7, 55,8, 48,6. UPLC-MS (DAD/ESI): Ir = 6,55 min, dla C3iH2sBrNO4 [M+H]⁺ znaleziono: 558,27 m/z; obliczono: 558,13.A solution of 15 (200 mg, 0.45 mmol), (2R,4R)-4-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid (272 mg, 2.07 mmol) in DMF (6.0 mL) was stirred with the addition of catalytic amounts of AcOH ( 3 drops) at 25°C for 2 hours. NaBHsCN (142 mg, 2.26 mmol) was then added and stirred overnight. The residue was concentrated under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2 x 30 ml). The organic layers were combined, dried over anhydrous MgSO4, filtered and concentrated. The product was purified by FLASH chromatography (silica gel, 0-50% MeOH in AcOEt) to give 16 as a white solid (93 mg, yield: 37%). ^1H NMR (600 MHz, _CDCl3 ) δ: 7.7 (d, J = 7.2 HzJH), 7.6-7.5 (m, 2H), 7.4 (dd, J = 7.7 , 1.1 Hz, 1H), 7.2-7.1 (m, 9H), 7.1-7.0 (m, 2H), 6.7 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 4.8 (s, 2H), 4.1 (s, 1H), 3.9 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.5 (d, J = 13.0 Hz, 1H) , 3.1 (s, J = 19.4 Hz, 1H), 2.8 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 2.4 (s, 1H), 2.2 (s, 1H) , 1.7 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 1.2 (s, 1H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl3) δ: 153.4, 141.3, 141.0, 139.8, 138.0, 134.6, 133.6, 130.1, 129.9, 129.7 , 129.5, 129.0, 127.8, 127.7, 127.7, 127.7, 126.9, 126.4, 113.2, 110.7, 68.8, 68.6, 65 ,4, 60.7, 55.8, 48.6. UPLC-MS (DAD/ESI): Ir = 6.55 min, for C3iH2sBrNO4 [M+H] ⁺ found: 558.27 m/z; calculated: 558.13.

4-((1,1 ’:2’,1 ”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-5-chloro-2-hydroksybenzaldehyd (17)4-((1,1':2',1'-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-5-chloro-2-hydroxybenzaldehyde (17)

(17)(17)

5-chloro-2,4-dihydroksybenzaldehyd (657 mg, 3,81 mmol), PPh₃ (11,07 g, 42,21 mmol) i [1,T:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometanol (1000 mg, 3,84 mmol) rozpuszczono w bezwodnym THF (30 ml). Roztwór ochłodzono do 0°C i wkroplono Dl AD (0,83 ml, 4,23 mmol) w bezwodnym THF (30 ml). Roztwór pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano przez 20 godzin, a następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (0-60% AcOEt w heksanie) izolując 17 jako biały osad (313 mg, wydajność: 20%). ¹H NMR (600 MHz, CDCI3) δ: 11,36 (s, 1H), 9,66 (s,‘ 1H), 7,67 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,54-7,48 (m, 2H), 7,45 (dd, J = 7,7, 1,2 Hz, 1H), 7,24-7,06 (m, 10H),6,26 (s, 1H), 4,93 (s, 2H). ¹³C NMR (151 MHz, CDCI₃)6: 193,7, 162,8, 160,8, 142,0, 141,1, 139,9, 138,2, 133,9, 133,4, 130,3, 130,2, 129,8, 128,0, 127,9, 127,6, 127,2, 127,1, 126,4, 114,9, 114,7, 101,5, 69,7. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 9,51 min, dla C26H19CIO3 [M+H]⁺znaleziono: 415,30 m/z; obliczono: 415,11.5-chloro-2,4-dihydroxybenzaldehyde (657 mg, 3.81 mmol), PPh ₃ (11.07 g, 42.21 mmol) and [1,T:2',1”-terphenyl]-3'- ylmethanol (1000 mg, 3.84 mmol) was dissolved in anhydrous THF (30 mL). The solution was cooled to 0°C and DI AD (0.83 mL, 4.23 mmol) in anhydrous THF (30 mL) was added dropwise. The solution was allowed to warm to room temperature and stirred for 20 hours and then concentrated under reduced pressure. The product was purified by silica gel column chromatography (0-60% AcOEt in hexane) isolating 17 as a white solid (313 mg, yield: 20%). ^1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 11.36 (s, 1H), 9.66 (s,' 1H), 7.67 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.54- 7.48 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 7.7, 1.2 Hz, 1H), 7.24-7.06 (m, 10H),6.26 (s, 1H) , 4.93 (p, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl ₃ )6: 193.7, 162.8, 160.8, 142.0, 141.1, 139.9, 138.2, 133.9, 133.4, 130, 3, 130.2, 129.8, 128.0, 127.9, 127.6, 127.2, 127.1, 126.4, 114.9, 114.7, 101.5, 69.7. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 9.51 min, for C26H19CIO3 [M+H] ⁺ found: 415.30 m/z; calculated: 415.11.

4-((5-((1,1’:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-4-chloro-2-formylofenoksy)metylo)pikolinonitryl (18)4-((5-((1,1':2',1"-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-4-chloro-2-formylphenoxy)methyl)picolinonitrile (18)

(18)(18)

PL 243517 Β1 (278 mg, 0,67 mmola), 4-(bromometylo)pikolinonitryl (159 mg, 0,81 mmol) i K2CO3 (185 mg, 1,34 mmol) mieszano w bezwodnym DMF (4 ml) w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano wodę (30 ml) i mieszaninę ekstrahowano AcOEt (2x30 ml). Warstwy organiczne połączono i zatężono. Produkt 18 otrzymano przez krystalizację z AcOEt jako białe ciało stałe (175 mg, wydajność: 90%). ¹H NMR (600 MHz, CDCb) δ: 10,27 (s, 1H), 8,73 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,66 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 7,63 (dd, J = 7,5, 1,3 Hz, 1H), 7,52-7,44 (m, 3H), 7,23-7,19 (m, 3H), 7,18-7,12 (m, 3H), 7,10-7,02 (m, 4H), 6,14 (s, 1H), 5,04 (s, 2H), 4,95 (s, 2H). ¹³CNMR(151 MHz, CDCb) δ: 186,3, 159,7, 159,6, 151,5, 146,4, 142,1, 140,9, 139,8, 138,3, 134,5, 133,2, 130,9, 130,6, 130,3, 129,8, 128,1, 128,0, 127,7, 127,4, 127,2, 126,6, 125,8, 124,2, 119,2, 117,3, 116,9, 98,3, 69,8, 68,1. UPLC-MS (DAD/ESI): t_R = 9,32 min, dla C33H23CIN2O3 [M+H]⁺ znaleziono: 531,35 m/z; obliczono: 531,15.PL 243517 Β1 (278 mg, 0.67 mmol), 4-(bromomethyl)picolinonitrile (159 mg, 0.81 mmol) and K2CO3 (185 mg, 1.34 mmol) were stirred in anhydrous DMF (4 ml) at room temperature through the night. The solvent was removed under reduced pressure. Water (30 ml) was added and the mixture was extracted with AcOEt (2x30 ml). The organic layers were combined and concentrated. Product 18 was obtained by crystallization from AcOEt as a white solid (175 mg, yield: 90%). ^1H NMR (600 MHz, CDCb) δ: 10.27 (s, 1H), 8.73 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.66 (d , J = 0.6 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.52-7.44 (m, 3H), 7.23-7, 19 (m, 3H), 7.18-7.12 (m, 3H), 7.10-7.02 (m, 4H), 6.14 (s, 1H), 5.04 (s, 2H) , 4.95 (p, 2H). ¹³ CNMR(151 MHz, CDCb) δ: 186.3, 159.7, 159.6, 151.5, 146.4, 142.1, 140.9, 139.8, 138.3, 134.5, 133.2, 130.9, 130.6, 130.3, 129.8, 128.1, 128.0, 127.7, 127.4, 127.2, 126.6, 125.8, 124, 2, 119.2, 117.3, 116.9, 98.3, 69.8, 68.1. UPLC-MS (DAD/ESI): t _R = 9.32 min, for C33H23CIN2O3 [M+H] ⁺ found: 531.35 m/z; calculated: 531.15.

Aktywność biologicznaBiological activity

Pomiary widm NMRNMR spectra measurements

Widma NMR dla opisanych związków otrzymano na spektrometrze Bruker Avance 600 MHz w temperaturze 300 K. Po dodaniu do białka w końcowym stężeniu 0,2 mM wszystkie przetestowane związki dodane w stężeniu molowym 1:1 dimeryzowały ludzkie PD-L1 powodując zanik pików w alifatycznej części jednowymiarowego spectrum w porównaniu do spectrum samego białka. Przykład spektrów ludzkiego PD-L1 referencyjnego i zdimeryzowanego po dodaniu związków widoczny jest w Fig. 1, na której przedstawiono porównanie 1D spektrów NMR dla referencyjnego ludzkiego białka PD-L1 (niebieski), po dodaniu 1:5 związku: 1 (czerwony), 3 (zielony), 5 (purpurowy), 8 (pomarańczowy).NMR spectra for the described compounds were obtained on a Bruker Avance 600 MHz spectrometer at a temperature of 300 K. When added to the protein at a final concentration of 0.2 mM, all tested compounds added at a molar concentration of 1:1 dimerized human PD-L1 causing the disappearance of peaks in the aliphatic part of the one-dimensional spectrum compared to the spectrum of the protein itself. An example of the spectra of reference and dimerized human PD-L1 after addition of compounds is visible in Fig. 1, which shows a comparison of 1D NMR spectra for the reference human PD-L1 protein (blue), after the addition of 1:5 compound: 1 (red), 3 (green), 5 (purple), 8 (orange).

Wyznaczanie powinowactwa związków metodą HTRFDetermination of the affinity of compounds using the HTRF method

Aktywność biologiczna związków wyrażona w formie IC50 - (połowa maksymalnego stężenia hamującego) została wyznaczona metodą fluorescencji czasowo-rozdzielczej (eng. Homogenous Time Resolved Fluorescence - HTRF). Wyznaczenie zostało przeprowadzone z wykorzystaniem kitu od firmy Cisbio w formacie 20 pL wykorzystując protokół od producenta. Związki w zakresie stężeń pozwalających na wyznaczenie aktywności biologicznej z krzywej przegięcia zostały dodane do kompleksu białek hPD-1 (50 nM) i hPD-L1 (5 nM) wraz z przeciwciałami oraz pozostawione na 2-godzinną inkubację w temperaturze pokojowej przed pomiarem transferu Forster rezonansowej energii (TR-FRET) na aparacie Tecan Spark 20 M. Wyniki zostały znormalizowane na kontrole pozytywną (kompleks bez inhibitora) oraz negatywną (brak hPD-1), uśrednione z trzech niezależnych pomiarów i dopasowane krzywą Hilla. Wyniki przedstawione w Tabeli 1 w przedziałach IC50 > 50 pM (+), między 50 pM a 1 pM (++), pomiędzy 1 pM a 250 nM (+++) oraz poniżej 250 nM (++++).The biological activity of compounds expressed in the form of IC50 - (half the maximum inhibitory concentration) was determined using the time-resolved fluorescence method (Homogenous Time Resolved Fluorescence - HTRF). The determination was carried out using a putty from Cisbio in the 20 pL format using the manufacturer's protocol. Compounds in the concentration range allowing the determination of biological activity from the inflection curve were added to the hPD-1 (50 nM) and hPD-L1 (5 nM) protein complex together with antibodies and left for a 2-hour incubation at room temperature before measuring Forster resonance transfer energy (TR-FRET) on a Tecan Spark 20 M instrument. The results were normalized to positive control (complex without inhibitor) and negative control (no hPD-1), averaged from three independent measurements and fitted with a Hill curve. The results are presented in Table 1 in the ranges IC50 > 50 pM (+), between 50 pM and 1 pM (++), between 1 pM and 250 nM (+++) and below 250 nM (++++).

związek relationship Aktywność biologiczna Biological activity Nazwa Name Aktywność biologiczna Biological activity 1 1 + + 8 8 +++ +++ 2 2 + + 9 9 ++ ++ 3 3 + + 10 10 + + 4 4 + + 13 13 5 5 ++++ ++++ 16 16 + + 6 6 ++++ ++++ 15 15 ++ ++ 7 7 ++++ ++++ 18 18

Wyniki i dyskusjaResults and discussion

Modulacja odpowiedzi immunologicznej poprzez inhibicję receptorów punktów kontrolnych przeciwciałami jest skuteczną metodą walki z nowotworami znaną jako immunoonkologia. Zastosowanie małocząsteczkowych inhibitorów zamiast znanych białkowych stanowi korzystną zmianę w terapiach nowotworowych ze względu na częste i liczne niepożądane działania immunologiczne spowodowane stosowaniem przeciwciał.Modulating the immune response by inhibiting checkpoint receptors with antibodies is an effective method of fighting cancer known as immuno-oncology. The use of small molecule inhibitors instead of known protein inhibitors is a beneficial change in cancer therapies due to the frequent and numerous adverse immunological effects caused by the use of antibodies.

W świetle wyników opisanych powyżej badań związki według wynalazku stanowią nową atrakcyjną grupę aktywnych inhibitorów wiążących się bezpośrednio do PD-L1, co zostało potwierdzone zaprezentowanymi badaniami NMR, w których związek dimeryzuje białko oraz wynikami wykonanych testów HTRF. Zaobserwowana zależność struktury od aktywności pozwala na dodatkową optymalizację wyłonionych struktur.In the light of the results of the studies described above, the compounds according to the invention constitute a new attractive group of active inhibitors that bind directly to PD-L1, which was confirmed by the presented NMR studies in which the compound dimerizes the protein and the results of the HTRF tests performed. The observed dependence of structure on activity allows for additional optimization of the selected structures.

SKRÓTYSHORTCUTS

AcOEt, octan etylu;AcOEt, ethyl acetate;

AcOH, kwas octowy;AcOH, acetic acid;

CHCI3, chloroform;CHCl3, chloroform;

DAD, aparat z matrycą diodową;DAD, diode array camera;

DIAD, azodikarboksylan diizopropylu;DIAD, diisopropyl azodicarboxylate;

DCM, dichlorometan;DCM, dichloromethane;

DMF, dimetyloformamid;DMF, dimethylformamide;

DMSO, dimetylosulfotlenek;DMSO, dimethyl sulfoxide;

ESI, jonizacja typu elektrospray;ESI, electrospray ionization;

HTRF, fluorescencji czasowo-rozdzielczej (ang. Homogenous Time Resolved Fluorescence)HTRF, time-resolved fluorescence (Homogenous Time Resolved Fluorescence)

MeOH, metanol;MeOH, methanol;

MeCN, acetonitryl;MeCN, acetonitrile;

MgSO4, siarczan(VI) magnezu;MgSO4, magnesium sulfate;

NaBH3CN, cyjanoborowodorek sodu;NaBH3CN, sodium cyanoborohydride;

NMR, Spektroskopia Magnetycznego Rezonansu Jądrowego;NMR, Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy;

PD-1, ang. Programmed Death 1;PD-1, Programmed Death 1;

PD-L1, z ang. Programmed Death Ligand;PD-L1, i.e. Programmed Death Ligand;

PPh3, trifenylofosfina;PPh3, triphenylphosphine;

THF, tetrahydrofuran;THF, tetrahydrofuran;

TLC, chromatografia cienkowarstwowa;TLC, thin layer chromatography;

TR-FRET, transfer Forster rezonansowej energiiTR-FRET, Forster resonance energy transfer

TMS, tetrametylosilan;TMS, tetramethylsilane;

UPLC, ang. ultra performance liquid chromatographyUPLC, ultra performance liquid chromatography

LiteraturaLiterature

1. Hellmann, M. D. et al. Nivolumab plus Ipilimumab in Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer. N. Engl. J. Med. 381,2020-2031 (2019).1. Hellmann, M. D. et al. Nivolumab plus Ipilimumab in Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer. N. Engl. J.Med. 381,2020-2031 (2019).

2. Hellmann, M. D. et al. Nivolumab plus Ipilimumab in lung cancer with a high tumor mutational burden. N. Engl. J. Med. (2018) doi:10.1056/NEJMoa1801946.2. Hellmann, M. D. et al. Nivolumab plus Ipilimumab in lung cancer with a high tumor mutational burden. N. Engl. J.Med. (2018) doi:10.1056/NEJMoa1801946.

3. Wolchok, J. D. et al. Nivolumab plus Ipilimumab in advanced melanoma. N. Engl. J. Med. (2013) doi: 10.1056/NEJMoa1302369.3. Wolchok, J.D. et al. Nivolumab plus Ipilimumab in advanced melanoma. N. Engl. J.Med. (2013) doi: 10.1056/NEJMoa1302369.

4. Pardoll, D. M. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nat. Rev. Cancer4. Pardoll, D. M. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nat. Rev. Cancer

12, 252-264 (2012).12, 252-264 (2012).

5. Tumeh, P. C. et al. PD-1 blockade induces responses by inhibiting adaptive immune resistance.5. Tumeh, P. C. et al. PD-1 blockade induces responses by inhibiting adaptive immune resistance.

Nature 515, 568-71 (2014).Nature 515, 568-71 (2014).

6. Musielak, B. et al. CA-170 - A Potent Small-Molecule PD-L1 Inhibitor or Not? Molecules 24, 2804 (2019).6. Musielak, B. et al. CA-170 - A Potent Small-Molecule PD-L1 Inhibitor or Not? Molecules 24, 2804 (2019).

7. Adams, J. L., Smothers, J., Srinivasan, R. & Hoos, A. Big opportunities for small molecules in immuno-oncology. Nat. Rev. Drug Discov. 14, 603-622 (2015).7. Adams, J. L., Smothers, J., Srinivasan, R. & Hoos, A. Big opportunities for small molecules in immuno-oncology. Nat. Rev. DrugDiscov. 14, 603-622 (2015).

8. Guzik, K. et al. Development of the Inhibitors That Target the PD-1/PD-L1 Interaction - A Brief Look at Progress on Small Molecules, Peptides and Macrocycles. Molecules 24, 2071 (2019).8. Guzik, K. et al. Development of the Inhibitors That Target the PD-1/PD-L1 Interaction - A Brief Look at Progress on Small Molecules, Peptides and Macrocycles. Molecules 24, 2071 (2019).

Claims

1. Związek o wzorze ogólnym (I):1. Compound of general formula (I):

U) gdzie:U) where:

X oznacza -Br lub fenyl,X is -Br or phenyl,

Ri oznacza -Br, -OMe, -Me, -Cl lub -H,Ri is -Br, -OMe, -Me, -Cl or -H,

2. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że został wybrany z grupy obejmującej: 3-bromo-4-((2-bromo-[1 ,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzaldehyd, 4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metoksybenzaldehyd, 4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metylobenzaldehyd, 4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzaldehyd, kwas (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy, kwas (S)-1-(4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metoksybenzylo)piperydyno-2-karboksylowy, kwas (S)-1 -(4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)-3-metylobenzylo)piperydyno-2-karboksylowy, kwas (S)-1-(4-((2-bromo-[1,T-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy, 3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksyn-6-ylo)benzylo)oksy)benzaldehyd, (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioksyn-6-ylo)benzylo)oksy)benzylo)piperydyno-2-kwas karboksylowy, 3-bromo-4-((2-bromo-3-(naftalen-2-ylo)benzylo)oksy)benzaldehyd, kwas (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(naftalen-2-ylo)benzylo)oksy)benzylo)piperydyno-2-karboksylowy,2. The compound of claim 1. 1, characterized in that it is selected from the group consisting of: 3-bromo-4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzaldehyde, 4-((2-bromo-[1 ,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methoxybenzaldehyde, 4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methylbenzaldehyde, 4-((2 -bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzaldehyde, (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl) acid )methoxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid, (S)-1-(4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methoxybenzyl)piperidine-2- carboxylic acid, (S)-1-(4-((2-bromo-[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)-3-methylbenzyl)piperidine-2-carboxylic acid, (S)-1 -(4-((2-bromo-[1,T-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid, 3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3 -dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)benzyl)oxy)benzaldehyde, (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(2,3-dihydrobenzo[ b][1,4]dioxin-6-yl)benzyl)oxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid, 3-bromo-4-((2-bromo-3-(naphthalen-2-yl)benzyl)oxy )benzaldehyde, (S)-1-(3-bromo-4-((2-bromo-3-(naphthalen-2-yl)benzyl)oxy)benzyl)piperidine-2-carboxylic acid,

3-bromo-4-((2-bromo[1,1’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzoesan metylu, chlorowodorek 4-(3-(3-bromo-4-((2-bromo-[1,1 ’-bifenylo]-3-ilo)metoksy)benzamido)propylo)morfolin-4-ium,Methyl 3-bromo-4-((2-bromo[1,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzoate hydrochloride 4-(3-(3-bromo-4-((2-bromo-[1) ,1'-biphenyl]-3-yl)methoxy)benzamido)propyl)morpholin-4-ium,

4-([1, Τ :2’, 1”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-3-bromobenzaldehyd, kwas (2S, 4S)-1-(4-([1,1’:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-3-bromobenzylo)-4-hydroksy-pirolidyno-2-karboksylowy, 4-([1,T:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-5-chloro-2-hydroksybenzaldehyd oraz4-([1, Τ :2', 1”-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-3-bromobenzaldehyde, acid (2S, 4S)-1-(4-([1,1':2',1 ”-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-3-bromobenzyl)-4-hydroxy-pyrrolidine-2-carboxylic acid, 4-([1,T:2',1”-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-5 -chloro-2-hydroxybenzaldehyde and

4-((5-([1,T:2’,1”-terfenylo]-3’-ylometoksy)-4-chloro-2-formylofenoksy)metylo)pikolinonitryl.4-((5-([1,T:2',1"-terphenyl]-3'-ylmethoxy)-4-chloro-2-formylphenoxy)methyl)picolinonitrile.

3. Związek określony w zastrz. 1 lub 2 do stosowania jako inhibitor szlaku białek PD-1/PD-L1, zwłaszcza w komórkach ssaka, korzystnie komórkach nowotworowych.3. The compound as defined in claim 1. 1 or 2 for use as an inhibitor of the PD-1/PD-L1 protein pathway, especially in mammalian cells, preferably cancer cells.

4. Związek określony w zastrz. 1 lub 2 do stosowania w farmacji, zwłaszcza w leczeniu lub profilaktyce chorób nowotworowych.4. The compound as defined in claim 1. 1 or 2 for use in pharmacy, especially in the treatment or prevention of cancer.

5. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca efektywną terapeutycznie dawkę związku określonego w zastrz. 1 lub 2.5. A pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective dose of the compound of claim 1. 1 or 2.