PL212258B1 - Nowe szczepy bakteriofagów do leczenia zakazen bakteryjnych, zwlaszcza szczepami bakterii lekoopornych rodzaju Stenotrophomonas - Google Patents

Description

Wynalazek dotyczy nowych szczepów bakteriofagów i ich wykorzystania w leczeniu zakażeń bakteryjnych, zwłaszcza szczepami bakterii lekoopornych rodzaju Stenotrophomonas.

Stan techniki

Bakteriofagi (fagi) stanowią różnorodną grupę wirusów, których cykl życiowy związany jest wyłącznie z komórką bakteryjną. Bakteriofagi charakteryzują się litycznym lub lizogennym cyklem życiowym. Jako czynniki antybakteryjne przydatne są przede wszystkim bakteriofagi lityczne, które po zakażeniu wrażliwych nań komórek bakteryjnych namnażają się w nich, powodując ich całkowite zniszczenie (lizę), a uwalniające się nowe cząsteczki fagowe atakują i niszczą następne komórki bakteryjne. Proces ten może zachodzić zarówno in vitro, jak i in vivo. Jedną z istotnych cech bakteriofagów jest powszechnie znana wysoka swoistość ich litycznego działania. Cecha ta jest wykorzystywana m.in. w typowaniu różnych gatunków bakterii (patrz przykładowo opisy patentowe GB 2285684, US 5824468, SU 543260, oraz międzynarodowe zgłoszenia patentowe WO 0100786, WO 0109370). Inne znane zastosowania bakteriofagów obejmują: wykorzystywanie bakteriofagów jako narzędzi w biologii molekularnej przydatnych przykładowo do ekspresji i selekcji pożądanych białek (np. opis patentowy US 6027930), stosowanie fagów w środkach sterylizacyjnych i czyszczących (np. opis patentowy EP 0414304, EP 0290295, GB 2253859 oraz międzynarodowe zgłoszenia patentowe WO 9808944, WO 9003122). Zmodyfikowane fagi wykorzystano do produkcji szczepionek (np. WO 9505454). Wykorzystuje się także pewne białka pochodzenia bakteriofagowego (np. EP 0510907, US 5470573, WO 9607329). Metody izolacji bakteriofagów i otrzymywania preparatów fagowych są dobrze znane i ciągle udoskonalane (np. GB 829266, CS 192212, RU 2109055).

Na szeroką skalę fagoterapia wykorzystywana jest już od czasu II wojny światowej w Instytucie Mikrobiologii i Wirusologii Tbilisi (Gruzja). Stosowane są tam pule różnych preparatów fagowych w leczeniu zakaże ń bakteryjnych i w profilaktyce. Dostępne dane wskazują na dużą efektywność fagoterapii. Podobne badania prowadzone są od lat w Polsce, w Laboratorium Bakteriofagowym Instytutu Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk we Wrocławiu, gdzie fagoterapię zakażeń wywołanych lekoopornymi formami bakterii i nie poddających się antybiotykoterapii prowadzi się od ponad 25 lat (patrz: Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1981, 31, 293; Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1983, 31, 267; Stefan Slopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1984, 32, 317; Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1985, 33, 219; Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1985, 33, 241; Stefan Ś lopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1987, 35, 569; Beata Weber-Dąbrowska i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 2000, 48, 31-37; Beata Weber-Dąbrowska i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Expenmentalis, 2000, 48, 547-551).

Zgłoszenie patentowe P-370662 dotyczy multiwalentnych szczepów bakteriofagowych, sposobów ich otrzymywania i wykorzystania w leczeniu zakażeń bakteryjnych, zwłaszcza szczepami bakterii lekoopornych rodzajów Psedomonas i Staphylococcus.

Szczególne problemy stwarzają zakażenia krwi, zapalenia płuc oraz infekcje dróg moczowych wywoływane lekoopornymi bakteriami, najczęściej rodzaju Stenotrophomanas. Leczenie dostępnymi antybiotykami takich zakażeń, zwłaszcza w ostatnich latach stwarza poważne problemy terapeutyczne o zasięgu światowym. Prowadzona bowiem antybiotykoterapia tych zakaż eń staje się coraz mniej skuteczna gdyż olbrzymia większość szczepów tych bakterii wykazuje naturalną oporność na wszystkie antybiotyki w tym na antybiotyk ostatniej szansy - wankomycynę. Istnieje zatem pilna potrzeba wprowadzenia do praktyki medycznej alternatywnej metody leczenia uporczywych i bardzo niebezpiecznych zakażeń bakteryjnych.

Cel wynalazku

W ostatnich latach wystę puje masowe szerzenie się szczepów bakteryjnych opornych na wszystkie antybiotyki w tym również na antybiotyk ostatniej szansy wankomycynę. W rezultacie leczenie zakażeń bakteryjnych wywołanych formami lekoopornymi za pomocą antybiotyków jest bezskuteczne. Ten stan stwarza drastyczne problemy terapeutyczne. Istnieje zatem pilna potrzeba wprowadzenia do praktyki medycznej alternatywnej metody leczenia uporczywych zakażeń bakteryjnych.

W zwią zku z powyż szym, celem wynalazku jest uzyskanie wieloważ nych preparatów fagowych, które mogłyby być skutecznie wykorzystane do leczenia zakażeń bakteryjnych wywoływanych przez

PL 212 258 B1 lekooporne szczepy kliniczne bakterii rodzaju Stenotrophomonas, w szczególności należące do gatunku Stenotrophomonas maltophilia. Nieoczekiwanie, określony powyżej cel został osiągnięty w niniejszym wynalazku.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00046

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00046 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenptrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Innym przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00047.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F000/47 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenptrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Innym przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00048.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00048 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Innym przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00049.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00049 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Innym przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00050.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00050 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenptrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00051. Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00051 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00052.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00052 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00053.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00053 do wytwarzania pre4

PL 212 258 B1 paratów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCMF/00054.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00054 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00055.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00055 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00056

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00056 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00057.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00057 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00058.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00058 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00059.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00059 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00060.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00060 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00061.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00061 do wytwarzania prePL 212 258 B1 paratów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

Przedmiotem wynalazku jest szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00062

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie szczepu bakteriofaga zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem depozytowym PCM F/00062 do wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas. Korzystnie, zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.

P r z y k ł a d 1

Fag Stenotrophomonas maltophilia 1 B/145

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków surowych z Portu Rzecznego we Wrocławiu na szczepie S.maltophilia 145.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 145. Następnie pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podłożem agarowym. Płytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odż ywczym zawierają cym 0,05 ml mł odej hodowli szczepu S.maltophilia 145 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00046.

P r z y k ł a d 2

Fag Stenotrophomonas maltophilia 2B/SK1

Bakteriofag wirulentny izolowany z pól irygowanych Wrocławia na szczepie S.maltophilia SKI1.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1. Następnie pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podłoż em agarowym. Płytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1 i inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 2B/SK1 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00047.

P r z y k ł a d 3

Fag Stenotrophomonas maltophilia 3/SK1

Bakteriofag wirulentny izolowany z próbki wody z Morza Czerwonego na szczepie S.maltophilia SK1.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37° C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 3/SK1 został zdeponowany 25 czerwca 2007 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer

PCM F/00048.

PL 212 258 B1

P r z y k ł a d 4

Fag Stenotrophomonas maltophilia 4/SK1

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków surowych oczyszczalni ścieków Strachocin I we Wrocławiu na szczepie S.maltophilia SK1.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00049

P r z y k ł a d 5

Fag Stenotrophomonas maltopholia 5/SK1

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków surowych oczyszczalni Strachocin II we Wrocławiu na szczepie S.maltophilia SK1.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 5/SK1 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00050.

P r z y k ł a d 6

Fag Stenotrophomonas maltophilia 6/SK1

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków z Portu Rzecznego we Wrocławiu na szczepie S.maltophilia SK1.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37° C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia SK1 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 6/SK1 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00051.

P r z y k ł a d 7

Fag Stenotrophomonas maltophilia 7/316

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków surowych z Portu Rzecznego we Wrocławiu na szczepie S.maltophilia 316.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 316. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki

PL 212 258 B1 z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odż ywczym zawierają cym 0,05 ml mł odej hodowli szczepu S.maltophilia 316 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 7/316 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00052.

P r z y k ł a d 8

Fag Stenotrophomonas maltophilia 8/321

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków surowych z Portu Rzecznego we Wrocławiu na szczepie S. maltophilia 321.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 321. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podłożem agarowym. Płytkę inkubowano przez 18 godz. w temp.37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odż ywczym zawierają cym 0,05 ml mł odej hodowli szczepu S.maltophilia 321 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 8/321 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00053.

P r z y k ł a d 9

Fag Stenotrophomonas maltophilia 9/322

Bakteriofag wirulentny izolowany z pól irygowanych Wrocławia na szczepie S.maltophilia 322.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 322. Następnie pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37° C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S maltophilia 322 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga. Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 9/322 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00054.

P r z y k ł a d 10

Fag Stenotrophomonas maltophilia 10/535

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków surowych oczyszczalni w Opolu na szczepie Stenotrophomonas maltophilia 535.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 535. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37° C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odż ywczym zawierają cym 0,05 ml mł odej hodowli szczepu S.maltophilia 535 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 10/535 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer

PCM F/00055.

PL 212 258 B1

P r z y k ł a d 11

Fag Stenotrophomonas maltophilia 11/8c

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków surowych oczyszczalni ścieków we Wrocławiu na szczepie S.maltophilia 8c.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 8c. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37° C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 8c i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 11/8c został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego 30 (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00056.

P r z y k ł a d 12

Fag Stenotrophomonas maltophilia 12 /8c

Bakteriofag wirulentny izolowany z zagęszczonych ścieków surowych z oczyszczalni ścieków w Opolu na szczepie S.maltophilia 8c.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 8c. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37° C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 8c i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 12/8c został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00057.

P r z y k ł a d 13

Fag Stenotrophomonas maltophilia 13/27660

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków surowych z oczyszczalni ścieków w Opolu na szczepie S.maltophilia 27660.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 27660. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podłożem agarowym. Płytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 27660 i inkubowano przez 18 godz. w 37° C.

Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 13/27660 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00058.

P r z y k ł a d 14

Fag Stenotrophomonas maltophilia 14/27660

Bakteriofag wirulentny izolowany z zagęszczonych ścieków surowych z oczyszczalni ścieków w Opolu na szczepie S.maltophilia 27660.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 27660.

Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię

PL 212 258 B1 płytki z selektywnym podłożem agarowym. Płytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 27660 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga stenotrophomonas maltophilia 14/27660 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00059.

P r z y k ł a d 15

Fag Stenotrophomonas maltophilia 15/27660

Bakteriofag wirulentny izolowany z zagęszczonych ścieków z oczyszczalni ścieków w Opolu na szczepie S.maltpphilia 27660.

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 27660. Następnie pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podłożem agarowym. Płytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 27660 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga S. tenotrophomonas maltophilia 15/27660 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00060.

P r z y k ł a d 16

Fag Stenotrophomonas maltophilia 16/27660

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieku oczyszczalni w Opolu na szczepie S.maltophilia 27660

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 27660. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podłożem agarowym. Płytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37°C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 27660 i inkubowano przez 18 godz. w 37°C.

Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 16/27660 został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej Status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer PCM F/00061

P r z y k ł a d 17

Fag Stenotrophomonas maltophilia 17/8c

Bakteriofag wirulentny izolowany ze ścieków oczyszczalni w Opolu na szczepie S.maltophilia 8c

Izolację faga prowadzono po 1 godz. inkubacji w temp. 37°C badanej próbki ścieku w płynnym podłożu odżywczym /w stos.1:1/ z dodatkiem 0,1 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 8c. Następnie, pobierano 0,2 ml badanej mieszaniny i nanoszono z użyciem głaszczki na powierzchnię płytki z selektywnym podł o ż em agarowym. Pł ytkę inkubowano przez 18 godz. w temp. 37° C. Linię fagową wyprowadzono z pojedynczych łysinek z użyciem ezy izolacyjnej. Łysinki przeniesiono do probówek z bulionem odżywczym zawierającym 0,05 ml młodej hodowli szczepu S.maltophilia 8c i inkubowano przez 18 godz. w 37°C. Uzyskany lizat fagowy wirowano przez 30 min. przy 4,5 tyś. obr/min. i sączono przez filtry antybakteryjne oraz kontrolowano na obecność faga.

Szczep faga Stenotrophomonas maltophilia 17/8c został zdeponowany 16 czerwca 2010 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu posiadającej status międzynarodowego ośrodka depozytowego do celów postępowania patentowego (IDA). Depozytowi patentowemu nadano numer

Claims (3)

1. Szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas wybrany ze szczepów zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerami depozytowymi: PCM F/00048; PCM F/00049; PCMF/00050; PCM F/00051; PCM F/00052; PCM F/00053; PCM F/00054; PCM F/00055; PCM F/00056; PCM F/00057; PCM F/00058; PCM F/00059; PCM F/00060; PCMF/00061 lub PCM F/00062.

2. Zastosowanie szczepu bakteriofaga, wybranego ze szczepów zdeponowanych w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerami depozytowymi: PCM F/00048; PCM F/00049; PCM F/00050; PCM F/00051; PCM F/00052; PCM F/00053; PCM F/00054; PCM F/00055; PCM F/00056; PCM F/00057; PCM F/00058; PCM F/00059; PCM F/00060; PCM F/00061 lub PCM F/00062 wytwarzania preparatów przeciwbakteryjnych służących do zwalczania bakterii należących do rodzaju Stenotrophomonas.

3. Zastosowanie według zastrz. 2, znamienne tym, że zwalczane bakterie należą do gatunku Stenotrophomonas maltophilia.