PL206644B1

PL206644B1 - Sposób modyfikacji twardych powłok węglowych

Info

Publication number: PL206644B1
Application number: PL375127A
Authority: PL
Inventors: Mirosława Szczęsna-Antczak; Tadeusz Antczak; Agata Kaczorowska; Stanisław Bielecki; Piotr Niedzielski; Witold Kaczorowski; Stanisław Mitura
Original assignee: Politechnika Lodzka
Priority date: 2005-05-16
Filing date: 2005-05-16
Publication date: 2010-09-30
Also published as: PL375127A1

Description

(22) Data zgłoszenia: 16.05.2005

Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (19) PL (11) 206644 (13) B1 (51) Int.Cl.

C01B 31/04 (2006.01) C01B 31/06 (2006.01) C12R 1/01 (2006.01) C12R 1/645 (2006.01) (54)

Sposób modyfikacji twardych powłok węglowych

	(73) Uprawniony z patentu: POLITECHNIKA ŁÓDZKA, Łódź, PL
(43) Zgłoszenie ogłoszono:	(72) Twórca(y) wynalazku: MIROSŁAWA SZCZĘSNA-ANTCZAK, Łódź, PL
27.11.2006 BUP 24/06	TADEUSZ ANTCZAK, Łódź, PL
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono:	AGATA KACZOROWSKA, Łódź, PL STANISŁAW BIELECKI, Łódź, PL PIOTR NIEDZIELSKI, Dobra Nowiny, PL WITOLD KACZOROWSKI, Łódź, PL
30.09.2010 WUP 09/10	STANISŁAW MITURA, Łódź, PL
	(74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Bałczewski Zbigniew Wojciech Ośrodek Wynalazczości Politechniki Łódzkiej

PL 206 644 B1

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób modyfikacji twardych powłok węglowych, stanowiących mieszaninę grafitu i diamentu.

Dotychczas do modyfikacji twardych powłok węglowych wykorzystuje się gazy i substancje chemiczne, przy czym modyfikację prowadzi się w warunkach podwyższonego ciśnienia i temperatury.

Sposób modyfikacji twardych powłok węglowych według wynalazku polega na tym, że przedmioty pokryte twardą warstwą węglową, uprzednio wysterylizowane i zroszone płynną pożywką o składzie jak podło ż e stał e do inkubacji szczepu pleś ni Mucor circinelloides, Aspergillus niger, Penicillium ochrochloron lub Chaetomium globosum względnie szczepu bakterii Lactobacillus delbrueckii lub Pseudomonas fluorescens, wyizolowanego ze środowiska naturalnego, umieszcza się na wysterylizowanym podłożu hodowlanym tego szczepu, szczepi podłoże zawiesiną wodną zarodników lub komórek tego szczepu i prowadzi hodowlę powierzchniową w czasie 14-40 dni w temperaturze 20 -40°C przy wilgotności 80-100 %. W celu uniknięcia wysuszenia szczepionej kultury, po 10-15 dniach hodowli modyfikowane przedmioty zrasza się dodatkowo pożywką płynną o składzie jak podłoże stałe do inkubacji. Po zakończeniu hodowli modyfikowane przedmioty poddaje się oczyszczeniu z materiału biologicznego. W tym celu zanurza sieje w wodzie destylowanej, poddaje działaniu ultradźwięków w czasie 10-120 minut, przemywa wodą destylowaną, przenosi do naczynia zawierającego 0,1-2% roztwór wodny detergentu i w tym roztworze poddaje mieszaniu na wytrząsarce z szybkością obrotową 50-350 rpm w czasie 10-120 minut. Następnie zmodyfikowane przedmioty przenosi się do 0,5-5% wodnego roztworu detergentu i poddaje działaniu ultradźwięków lub sonifikacji w czasie 10-120 minut, w końcu przemywa wodą destylowaną i suszy w temperaturze pokojowej. Szczep Mucor circinelloides inkubuje się na podłożu stałym zawierającym 0-30 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 7-12°Blg, w temperaturze 20-40°C w czasie 2-7 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g

NaNO₃, 0,5-2 g K₂HPO₄, 0,001-0,1 g Fe₂(SO₄)₃, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy, 10-30 g agaru. Szczep pleśni Aspergillus niger inkubuje się na podłożu stałym zawierającym 10-30 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 7-12°Blg, w temperaturze 20 -40°C w czasie 2-7 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO3, 0,5-2 g K2HPO4, 0,001-0,1 g Fe2(SO4)3, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy, 10-30 g agaru. Szczep pleśni Penicillium ochrochloron inkubuje się na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO3, 0,5-3 g K2HPO4, 0,001-0,1 g Fe₂(SO₄)₃, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy, 10-30 g agaru, w temperaturze 20-40°C w czasie 2-7 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-5 g peptonu, 0,2-2 g ekstraktu drożdżowego, 0,5-2 g K2HPO4, 0,001-1 g MgSO₄-7H₂O, 0,1-2 g glukozy, 10-30 g agaru. Szczep Chaetomium globosum inkubuje się na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO3, 0,5-2 g K2HPO4, 0,001-0,1 g Fe2(SO4)3, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy i 10-30 g agaru, w temperaturze 20-40°C w czasie 2-7 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO₃, 0,5-2 g K₂HPO₄, 0,001-0,1 g Fe₂(SO₄)₃,0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy, 10 -30 g agaru. Szczep Lactobacillus delbrueckii inkubuje się na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 1-10 g ekstraktu drożdżowego, 1-20 g ekstraktu mięsnego, 1-20 g peptonu, 0,5-5 g NaCl, 10-30 g agaru, w temperaturze 20-40°C w czasie 1-2 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-10 g ekstraktu drożdżowego, 1-20 g ekstraktu mięsnego, 1-20 g peptonu, 0,5-5 g NaCl, 10-30 g agaru. Szczep Pseudomonas fluorescens inkubuje się na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 1-10 g ekstraktu wołowego, 1-10 g peptonu, 10-30 g agaru, w temperaturze 20-40°C w czasie 1-2 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-10 g ekstraktu wołowego, 1-10 g peptonu, 10-30 g agaru. Jako detergenty korzystnie stosuje się Triton X-100, Brij 35, gumę arabską, Tween 80, SEKUMATIC®FC lub ich mieszaniny.

Sposobem według wynalazku uzyskuje się na modyfikowanych przedmiotach twarde powłoki węglowe wykazujące pomniejszoną zawartość fazy grafitowej oraz/lub obecność na ich powierzchni połączeń polarnych węgla i tlenu, dzięki czemu poprawione zostają właściwości aplikacyjne powierzchni.

Sposób według wynalazku ilustrują bliżej podane niżej przykłady nie ograniczając jego zakresu.

PL 206 644 B1

P r z y k ł a d I.

Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Mucor circinelloides T45 poddano inkubacji na podłożu stałym zawierającym 20 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 8,5°Blg, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, po czym otrzymane w wyniku inkubacji zarodki pleśni zmywano solą fizjologiczną i przeszczepiono na, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podł o ż e hodowlane o skł adzie: 1 kg wody destylowanej, 2 g

NaNO₃, 1 g K₂HPO₄, 0,01 g Fe₂(SO₄)₃, 0,5 g MgSO₄-7H₂O, 30 g glukozy, 20 g agaru, na powierzchni którego umieszczono, wysterylizowane w czasie 15 minut w temperaturze 121°C, przedmioty pokryte twardą warstwą węglową, zroszone płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe i prowadzono hodowlę w czasie 24 dni w przestrzeni zamkniętej w temperaturze 30°C przy wilgotności 80-100%. Po 10 dniach od rozpoczęcia hodowli, w celu uniknięcia wysuszenia szczepionej kultury, powierzchnię modyfikowanych przedmiotów dodatkowo zroszono płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe. Następnie modyfikowane przedmioty poddano procedurze oczyszczania z materiału biologicznego. W tym celu przedmioty te zanurzono w wodzie destylowanej i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, po czym przemyto wodą i przeniesiono do innego naczynia wypełnionego 0,1% roztworem wodnym Tritonu X-100, w którym mieszano je na wytrząsarce z szybkością obrotową 210 rpm przez 45 minut. Następnie przedmioty pokryte twardą warstwą węglową przenoszono do 1% roztworu wodnego Tritonu X-100 i poddawano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, w końcu zmodyfikowane przedmioty przemyto wodą destylowaną i suszono w temperaturze pokojowej.

W wyniku analizy widm Ramana i FT-IR twardych powłok węglowych zmodyfikowanych przedmiotów stwierdzono, iż po działaniu pleśni Mucor circinelloides T45 powłoki te wykazywały pomniejszoną zawartość fazy grafitowej oraz obecność na powierzchni połączeń polarnych węgla i tlenu.

P r z y k ł a d II.

Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Aspergillus niger poddano inkubacji na podłożu stałym zawierającym 20 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 8,5°Blg, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, po czym otrzymane w wyniku inkubacji zarodki pleśni przeszczepiono na, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie: 1 kg wody destylowanej, 2 g NaNO3, 1 g K2HPO4, 0,01 g Fe₂(SO₄)₃, 0,5 g MgSO₄-7H₂O, 30 g glukozy, 20 g agaru, na którym umieszczono, wysterylizowane w czasie 15 minut w temperaturze 121°C, przedmioty pokryte twardą warstwą węglową, zroszone płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe i prowadzono hodowlę w czasie 14 dni w przestrzeni zamkniętej w temperaturze 30°C przy wilgotności 80-100%. Po 10 dniach od rozpoczęcia hodowli powierzchnię przedmiotów pokrytych twardą warstwą węglową dodatkowo zroszono płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe. Po zakończeniu hodowli modyfikowane przedmioty zanurzono w wodzie destylowanej i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, po czym przemyto je wodą, przeniesiono do innego naczynia wypełnionego 0,1% wodnym roztworem Tritonu X-100 i mieszano na wytrząsarce z szybkością obrotową 210 rpm w czasie 45 minut. Następnie zmodyfikowane przedmioty przeniesiono do 1% roztworu wodnego Tritonu X-100 i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, w końcu przemyto wodą destylowaną i suszono w temperaturze pokojowej.

W wyniku analizy widm Ramana i FT-IR twardych powłok węglowych zmodyfikowanych przedmiotów stwierdzono, iż po działaniu pleśni Aspergillus niger powłoki te wykazywały pomniejszoną zawartość fazy grafitowej oraz obecność na powierzchni połączeń polarnych węgla i tlenu.

P r z y k ł a d III.

Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Penicillium ochrochloron poddano inkubacji na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 2 g NaNO3, 1 g K2HPO4, 0,01 g Fe₂(SO₄)₃, 0,5 g MgSO₄-7H₂O, 30 g glukozy, 20 g agaru, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, po czym otrzymane w wyniku inkubacji zarodki pleśni przeszczepiono na, uprzednio wysterylizowane przez 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie: 1 kg wody destylowanej, 2,5 g peptonu, 0,625 g ekstraktu drożdżowego, 1,25 g Na₂HPO₄, 0,025 g MgSO₄-7H₂O, 0,5 g glukozy, 20 g agaru, na którym umieszczono, wysterylizowane w czasie 15 minut w temperaturze 121°C, przedmioty pokryte twardą warstwą węglową zroszone płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe i prowadzono hodowlę w czasie 14 dni w przestrzeni zamkniętej w temperaturze 30°C przy wilgotności 80 -100%. Po 10 dniach od rozpoczęcia hodowli powierzchnię przedmiotów pokrytych twardą warstwą węglową dodatkowo zroszono płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe. Po zakończeniu hodowli przedmioty zanurzano w wodzie destylowanej i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, po czym przemyto wodą przeniesiono do innego naczynia wypełnionego 0,1% wodnym roztworem

PL 206 644 B1

Tritonu X-100 i mieszano na wytrząsarce z szybkością obrotową 210 rpm w czasie 45 minut. Następnie zmodyfikowane przedmioty przeniesiono dol% roztworu wodnego Tritonu X-100 i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, w końcu przemyto wodą destylowaną i suszono w temperaturze pokojowej.

Analizując widma Ramana i FT-IR twardych powłok węglowych zmodyfikowanych przedmiotów stwierdzono, iż po działaniu pleśni Penicillium ochrochloron powłoki te wykazywały pomniejszoną zawartość fazy grafitowej oraz obecność na powierzchni połączeń polarnych węgla i tlenu.

P r z y k ł a d IV.

Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Chaetomium globosum poddano inkubacji na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 2 g NaNO3, 1 g K2HPO4, 0,01 g

Fe₂(SO₄)₃, 0,5 g MgSO₄-7H₂O, 30 g glukozy, 20 g agaru, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, po czym otrzymane w wyniku inkubacji zarodki pleśni przeszczepiono na, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie: 1 kg wody destylowanej, 2 g NaNO₃, 1 g K₂HPO₄ 0,01 g Fe₂(SO₄)₃, 0,5 g MgSO₄-7H₂O, 30 g glukozy, 20 g agaru, na którym umieszczono, wysterylizowane w czasie 15 minut w temperaturze 121°C, przedmioty pokryte twardą warstwą węglową, zroszone płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe i prowadzono hodowlę w czasie 14 dni w przestrzeni zamkniętej w temperaturze 30°C przy wilgotności 80-100%. Po 10 dniach od rozpoczęcia hodowli powierzchnię modyfikowanych przedmiotów dodatkowo zroszono płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe. Po zakończeniu hodowli modyfikowane przedmioty zanurzono w wodzie destylowanej i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, po czym przemyto wodą, przeniesiono do innego naczynia wypełnionego 0,1% roztworem wodnym Tritonu X-100 i mieszano na wytrząsarce z szybkością obrotową 210 rpm w czasie 45 minut. Następnie zmodyfikowane przedmioty przeniesiono do 1% roztworu wodnego Tritonu X-100 i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, w końcu przemyto wodą destylowaną i suszono w temperaturze pokojowej.

Analizując widma Ramana i FT-IR twardych powłok węglowych zmodyfikowanych przedmiotów stwierdzono, iż po działaniu pleśni Chaetomium globosum powłoki te wykazywały pomniejszoną zawartość fazy grafitowej oraz obecność na powierzchni połączeń polarnych węgla i tlenu.

P r z y k ł a d V.

Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep Lactobacillus delbrueckii poddano inkubacji na podłożu stałym zawierającym 1 kg wody destylowanej, 5 g ekstraktu drożdżowego, 10 g ekstraktu mięsnego, 10 g peptonu, 3 g NaCl, 20 g agaru, w temperaturze 30°C w czasie 1 dnia, po czym otrzymane w wyniku inkubacji komórki przeszczepiono na, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie: 1 kg wody destylowanej, 5 g ekstraktu drożdżowego, 10 g ekstraktu mięsnego, 10 g peptonu, 3 g NaCl, 20 g agaru, na którym umieszczono, wysterylizowane w czasie 15 minut w temperaturze 121°C, przedmioty pokryte twardą warstwą węglową, zroszone płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe i prowadzono hodowlę w czasie 14 dni w przestrzeni zamkniętej w temperaturze 30°C przy wilgotności 80-100%. Po 10 dniach od rozpoczęcia hodowli powierzchnię modyfikowanych przedmiotów dodatkowo zroszono płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe. Po zakończeniu hodowli modyfikowane przedmioty zanurzono w wodzie destylowanej i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, po czym przemyto wodą i przeniesiono do innego naczynia wypełnionego 0,1% wodnym roztworem Tritonu X-100, w którym mieszano je na wytrząsarce z szybkością obrotową 210 rpm w czasie 45 minut. Następnie zmodyfikowane przedmioty przeniesiono do innego naczynia zawierającego 0,1% roztwór wodny detergentu SEKUMATIC®FC i poddano 50 minutowej sonifikacji przy amplitudzie 40 i pulsacji 4, po czym zmodyfikowane przedmioty przemyto wodą destylowaną i suszono w temperaturze pokojowej.

Analizując widma Ramana i FT-IR twardych powłok węglowych zmodyfikowanych przedmiotów stwierdzono, iż po działaniu bakterii Lactobacillus delbrueckii powłoki te wykazywały pomniejszoną zawartość fazy grafitowej oraz obecność na powierzchni połączeń polarnych węgla i tlenu.

P r z y k ł a d VI.

Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep bakterii Pseudomonas fluorescens poddano inkubacji na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 3 g ekstraktu wołowego, 5 g peptonu, 20 g agaru, w temperaturze 30°C w czasie 1 dnia, po czym otrzymane w wyniku inkubacji komórki przeszczepiono na, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie: 1 kg wody destylowanej, 3 g ekstraktu wołowego, 5 g peptonu, 20 g agaru, na którym umieszczono, wysterylizowane w czasie 15 minut w temperaturze 121°C, przedmioty pokryte twardą warstwą węglową, zroszone płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe i prowadzono

PL 206 644 B1 hodowlę w czasie 14 dni w przestrzeni zamkniętej w temperaturze 30°C przy wilgotności 80-100%. Po 10 dniach od rozpoczęcia hodowli powierzchnię modyfikowanych przedmiotów dodatkowo zroszono płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe. Po zakończeniu hodowli modyfikowane przedmioty zanurzono w wodzie destylowanej i poddano działaniu ultradźwięków w czasie 45 minut, po czym przemyto wodą przeniesiono do innego naczynia wypełnionego 0,1% wodnym roztworem Tritonu X-100 i mieszano na wytrząsarce z szybkością obrotową 210 rpm w czasie 45 minut. Następnie zmodyfikowane przedmioty przeniesiono do innego naczynia zawierającego 0,1% roztwór wodny SEKUMATIC®FC i poddano 50 minutowej sonifikacji przy amplitudzie 40 i pulsacji 4, w końcu przemyto wodą destylowaną i suszono w temperaturze pokojowej.

Analizując widma Ramana i FT-IR twardych powłok węglowych zmodyfikowanych przedmiotów stwierdzono, iż po działaniu bakterii Pseudomonas fluorescens powłoki te wykazywały pomniejszoną zawartość fazy grafitowej oraz obecność na powierzchni połączeń polarnych węgla i tlenu.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Sposób modyfikacji twardych powłok węglowych, znamienny tym, że przedmioty pokryte twardą warstwą węglową, uprzednio wysterylizowane i zroszone płynną pożywką o składzie jak podłoże stałe do inkubacji szczepu pleśni Mucor circinelloides, Aspergillus niger, Penicillium ochrochloron lub Chaetomium globosum względnie szczepu bakterii Lactobacillus delbrueckii lub Pseudomonas fluorescens, wyizolowanego ze środowiska naturalnego, umieszcza się na wysterylizowanym podłożu hodowlanym tego szczepu, szczepi podłoże zawiesiną wodną zarodników lub komórek tego szczepu i prowadzi hodowlę powierzchniową w czasie 14-40 dni w temperaturze 20-40°C przy wilgotnoś ci 80 -100 %, przy czym po 10-15 dniach hodowli modyfikowane przedmioty zrasza się dodatkowo pożywką płynną o składzie jak podłoże stałe do inkubacji, zaś po zakończeniu hodowli modyfikowane przedmioty zanurza się w wodzie destylowanej i poddaje działaniu ultradźwięków w czasie 10-120 minut, po czym przemywa wodą destylowaną, przenosi do naczynia zawierającego 0,1-2% roztwór wodny detergentu i w tym roztworze poddaje mieszaniu na wytrząsarce z szybkością obrotową 50-350 rpm w czasie 10-120 minut, nastę pnie zmodyfikowane przedmioty przenosi się do 0,5-5% wodnego roztworu detergentu, poddaje działaniu ultradźwięków lub sonifikacji w czasie 10-120 minut, w końcu przemywa wodą destylowaną i suszy w temperaturze pokojowej.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szczep Mucor circinelloides inkubuje się na podłożu stałym zawierającym 10-30 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 7-12°Blg, w temperaturze 20-40°C w czasie 2-7 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO3, 0,5-2 g

K₂HPO₄, 0,001-0,1 g Fe₂(SO₄)₃, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy, 10-30 g agaru.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szczep pleśni Aspergillus niger inkubuje się na podłożu stałym zawierającym 10-30 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 7-12°Blg, w temperaturze 20-40°C w czasie 2-7 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO3, 0,5-2 g K₂HPO₄,0,001-0,1 g Fe₂(SO₄)₃, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy, 10-30 g agaru.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szczep pleśni Penicillium ochrochloron inkubuje się na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO3, 0,5-3 g K2HPO4, 0,001 -0,1 g Fe₂(SO₄)₃, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy, 10-30 g agaru, temperaturze 20-40°C w czasie 2-7 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-5 g peptonu, 0,2-2 g ekstraktu drożdżowego, 0,5-2 g Na2HPO4, 0,001-1 g MgSO₄-7H₂O, 0,1-2 g glukozy, 10-30 g agaru.
5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szczep Chaetomium globosum inkubuje się na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO3, 0,5-2 g K2HPO4, 0,001-0,1 g Fe₂(SO₄)₃, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy i 10-30 g agaru, w temperaturze 20-40°C w czasie 2-7 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-3 g NaNO₃, 0,5-2 g K₂HPO₄, 0,001-0,1 g Fe₂(SO₄)₃, 0,1-1 g MgSO₄-7H₂O, 10-40 g glukozy, 10-30 g agaru.
6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szczep Lactobacillus delbrueckii inkubuje się na podłożu stałym zawierającym: 1 kg wody destylowanej, 1-10 g ekstraktu drożdżowego, 1-20 g ekstraktu mięsnego, 1-20 g peptonu, 0,5-5 g NaCl, 10-30 g agaru, w temperaturze 20-40°C w czasie 1-2 dni,

PL 206 644 B1 zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-10 g ekstraktu drożdżowego, 1-20 g ekstraktu mięsnego, 1-20 g peptonu, 0,5-5 g NaCl, 10 -30 g agaru.
7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szczep Pseudomonas fluorescens inkubuje się na podłożu stałym zawierającym 1 kg wody destylowanej, 1-10 g ekstraktu wołowego, 1-10 g peptonu, 10-30 g agaru, w temperaturze 20-40°C w czasie 1-2 dni, zaś hodowlę tego szczepu prowadzi się na wysterylizowanym podłożu o składzie: 1 kg wody destylowanej, 1-10 g ekstraktu wołowego, 1-10 g peptonu, 10-30 g agaru.