NO322910B1 - 4-Pyridyl-N-acyl-L-fenylalaniner, anvendelse av disse som medikamenter, farmasoytiske preparater inneholdende slike forbindelser og fremgangsmate for fremstilling av disse. - Google Patents

4-Pyridyl-N-acyl-L-fenylalaniner, anvendelse av disse som medikamenter, farmasoytiske preparater inneholdende slike forbindelser og fremgangsmate for fremstilling av disse. Download PDF

Info

Publication number
NO322910B1
NO322910B1 NO20022650A NO20022650A NO322910B1 NO 322910 B1 NO322910 B1 NO 322910B1 NO 20022650 A NO20022650 A NO 20022650A NO 20022650 A NO20022650 A NO 20022650A NO 322910 B1 NO322910 B1 NO 322910B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
alkyl
hydrogen
oxo
carbonyl
pyridinyl
Prior art date
Application number
NO20022650A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20022650D0 (no
NO20022650L (no
Inventor
Jefferson Wright Tilley
Achyutharao Sidduri
Gerald Lewis Kaplan
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of NO20022650D0 publication Critical patent/NO20022650D0/no
Publication of NO20022650L publication Critical patent/NO20022650L/no
Publication of NO322910B1 publication Critical patent/NO322910B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/61—Halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)

Description

4- pvridinvl- N- acvl- L- fenvlalaniner. anvendelse av disse som medikamenter, farmasø<y>tiske preparater omfattende slike forbindelser og frem<g>an<g>småte for fremstilling av disse
Vaskulært celleadhesjonsmolekyl-1 (VCAM-1), et medlem av immunoglobulin-(Ig)supergenfamilien, blir uttrykt på aktiverte, men ikke hvilende, endotel. Integrinet VLA-4 ((X4P1), som uttrykkes på mange celletyper omfattende sirkulerende lymfocytter, eosinofiler, basofiler og monocytter, men ikke nøytrofiler, er hovedreseptoren for VCAM-1. Antistoffer mot VCAM-1 eller VLA-4 kan blokkere adhesjonen av disse mononukleære leukocytter, så vel som melanomceller, til aktivert endotel in vitro. Antistoffer mot hvert protein er effektive ved hemning av leukocytt-infiltrering og forhindring av vevskade i mange dyremodeller av inflammasjon. Anti-VLA-4 monoklonale antistoffer er vist å blokkere T-celle- emigrasjon i additiv-fremkalt aitritt, forhindre eosinofil akkumulering og bronkokonstriksjon i modeller på astma og redusere paralyse og hemme monocytt- og lymfocytt-infiltrering ved eksperimentell autoimmun encefalitt (EAE). Anti-VCAM-1 -monoklonale antistoffer er vist å forlenge overlevelses-tiden til hjerte-allografter. Nyere undersøkelser har demonstrert at anti-VLA-4 mAbs kan forhindre insulit og diabetes i ikke-overvektige diabetiske mus og betydelig svekke inflammasjon i bomull-topp-tamarinmodell av kolitt. Det har videre blitt vist at VCAM uttrykkes på endotel-celler i betent kolonvev hos en TNB/etanol-rottemodell på inflammatorisk tarmsykdom ( Gastroenterology 1999, 116, 874-883).
Således vil forbindelser som hemmer interaksjonen mellom o^-holdige integriner og VCAM-1 være anvendelige som terapeutiske midler for behandling av kroniske inflammatoriske sykdommer så som revmatoid artritt (RA), multippel sklerose (MS), astma og inflammatorisk tarmsykdom (IBD). Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse har denne effekten.
I beskrivelse og krav har de forskjellige betegnelser de nedenstående betydninger hvis de ikke er spesifikt angitt på annen måte.
Som anvendt i denne beskrivelsen betyr betegnelsen "halogen" hvilket som helst av de fire halogenatomer, brom, klor, fluor og jod Foretrukne halogenatomer er brom, fluor og klor.
Betegnelsen "lavere-alkyl", alene eller i kombinasjon, betyr en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe inneholdende ett opptil et maksimum på seks karbonatomer (Cl-C6), så som metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sek.butyl, isobutyl, tert.butyl, n-pentyl, n-heksyl og lignende.
Betegnelsen en "substituert lavere-alkyl" betyr en lavere-alkylgruppe som definert før som er substituert med én eller flere grupper uavhengig valgt fra cykloalkyl, nitro, aryloksy, aryl, hydroksy, halogen, cyano, lavere-alkoksy, lavere-alkanoyl, lavere-alkyltio, lavere-alkylsulfinyl, lavere-alkylsulfonyl, amino eller mono- eller di-lavere-alkylamino. Eksempler på substituerte lavere-alkylgrupper omfatter 2-hydroksyletyl, 3-oksobutyl, cyanometyl og 2-nitropropyl. Selv om foreliggende oppfinnelse er spesifikt rettet på den substituerte lavere-alkylgruppe trifluormetyl i stillinger R3og R5, er pentafluoretyl også tiltenkt for disse stillinger. Dette gjelder også for R22og R23.
Betegnelsen "cykloalkyl" (eller lavere cykloalkyl) betyr en usubstituert eller substituert 3- til 7-leddet karbocyklisk ring. Substituenter som er anvendelige ifølge foreliggende oppfinnelse er hydroksy, halogen, cyano, lavere-alkoksy, lavere-alkanoyl, lavere-alkyl, aroyl, lavere-alkyltio, lavere-alkylsulfinyl, lavere-alkylsulfonyl, aryl, heteroaryl og mono- eller di-lavere-alkylsubstituert amino.
Betegnelsen "lavere-alkenyl" betyr en alkylengruppe som har fra 2 til 10 karbonatomer med en dobbeltbinding lokalisert mellom hvilke som helst karbonatomer i nabostilling.
Betegnelsen "lavere-alkoksy" betyr en rettkjedet eller forgrenet alkoksygruppe inneholdende maksimum seks karbonatomer, så som metoksy, etoksy, n-propoksy, isopropoksy, n-butoksy, tert-butoksy og lignende.
Betegnelsen "lavere-alkyltio" betyr en lavere-alkylgruppe bundet til resten av molekylet gjennom et divalent svovelatom, for eksempel en metylmerkapto- eller en isopropylmerkaptogruppe. Betegnelsen "lavere-alkylsulfinyl" betyr en lavere-alkylgruppe som definert ovenfor bundet til resten av molekylet gjennom svovelatomet i sulfinylgruppen. Betegnelsen "lavere-alkylsulfonyl" betyr en lavere-alkylgruppe som definert ovenfor bundet til resten av molekylet gjennom svovelatomet i sulfonylgruppen.
Betegnelsen "aryl" betyr en mono- eller bicylisk aromatisk gruppe, så som fenyl eller naftyl, som er usubstituert eller substituert med konvensjonelle substituentgrupper. Foretrukne substituenter er lavere-alkyl, lavere-alkoksy, hydroksy lavere-alkyl, hydroksy, hydroksyalkoksy, halogen, lavere-alkyltio, lavere-alkylsulfinyl, lavere-alkylsulfonyl, cyano, nitro, perfluor-laverc-alkyl, alkanoyl, aroyl, aryl alkynyl, lavere-alkynyl og lavere-alkanoylamino. Eksempler på arylgrupper som kan anvendes ifølge foreliggende oppfinnelse er fenyl, p-tolyl, p-metoksyfeny], p-klorfenyl, m-hydroksy fenyl, m-metyltio-fenyl, 2-metyl-5-nitrofenyl, 2,6-diklorfenyl, 1-naftyl og lignende.
Betegnelsen "arylalkyl" betyr en lavere-alkylgruppe som ovenfor definert hvor ett eller flere hydrogenatomer er erstattet av en aryl- eller heteroarylgruppe som definert her. Hvilken som helst konvensjonell aralkyl kan anvendes ifølge denne oppfinnelse, så som benzyl og lignende.
Betegnelsen "heteroaryl" betyr en usubstituert eller substituert 5- eller 6-leddet monocyklisk hetereoaromatisk ring eller en 9- eller 10-leddet bicyklisk hetereoaromatisk ring inneholdende 1,2,3 eller 4 hetereoatomer som er uavhengig N, S eller O. Eksempler på hetereoarylringer er pyridin, benzimidazol, indol, imidazol, tiofen, isokinolin, kinazolin og lignende. Substituenter som definert ovenfor for "aryl" er omfattet i definisjonen av heteroaryl.
Betegnelsen "lavere-alkoksykarbonyP* betyr en lavere-alkoksygruppe bundet via en karbonylgruppe. Eksempler på alkoksykarbonylgrupper er etoksykarbonyl og lignende.
Betegnelsen "lavere-alkylkarbonyloksy" betyr lavere-alkylkarbonyloksygrupper bundet via et oksygenatom, for eksempel en acetoksygruppe. Dette har samme betydning som betegnelsen "acyloksy".
Betegnelsen "lavere-alkanoyr betyr lavere-alkylgrupper bundet via en karbonylgruppe og omfatter i betydningen av foregående definisjon grupper så som acetyl, propionyl og lignende. Betegnelsen "perfluor-lavere-alkanoyl" betyr en perfluor-lavere- alkylgruppe (en substituert lavere-alkylgruppe hvor alle hydrogenene er substituert med fluor, fortrinnsvis trifluormetyl eller pentafluoretyl) bundet til resten av molekylet via en karbonylgruppe. Betegnelsen perfluor-lavere-alkanoylamino<M>betyr en perfluor-lavere-alkanoylgruppe bundet til resten av molekylet via en aminogruppe.
Betegnelsen "lavere-alkylkarbonylamino" betyr lavere-alkylkarbonylgrupper bundet til resten av molekylet via et nitrogenatom, så som acetylamino. Betegnelsen "lavere-alkylaminokarbonyl" betyr lavere-alkylaminogrupper bundet til resten av molekylet via en karbonylgruppe. Betegnelsen "arylaminokarbonyl" betyr aryl grupper bundet til en aminogruppe videre bundet til resten av molekylet via en karbonylgruppe.
Betegnelsen "aroyl" betyr en mono- eller bicyklisk aryl- eller heteroarylgruppe bundet til resten av molekylet via en karbonylgruppe. Eksempler på aroyl grupper er benzoyl, 3-cyanobenzoyl, 2-naftoyl, nikotinoyl og lignende.
Farmasøytisk akseptable salter er velkjente på området og kan fremstilles ved konvensjonelle metoder som tar hensyn til forbindelsens kjemiske natur. Eksempler på farmasøytisk akseptable salter av sure forbindelser er alkalimetaller eller jordalkali-metaller så som natrium, kalium, kalsium, magnesium, basiske aminer eller basiske aminosyrer, ammonium- eller alkyl-ammoniumsalter. Spesieltønskelige salter av forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er natriumsalter, f.eks. fra den sure forbindelse hvor Re er H. Natriumsaltet av hvilken som helst syre ifølge foreliggende oppfinnelse er lett å oppnå fra syren ved behandling med natriumhydroksyd. For basiske forbindelser er eksempler salter av uorganiske eller organiske syrer så som saltsyre, bromhydrogensyre, svovelsyre, salpetersyre, fosforsyre, sitronsyre, maursyre, fumarsyre, maleinsyre, eddiksyre, ravsyre, vinsyre, metansulfonsyre og p-toluensulfonsyre.
Foreliggende oppfinnelse omfatter en forbindelse med formel I:
og de farmasøytisk akseptable salter derav. Den omfatter også farmasøytiske preparater inneholdende dem, anvendelse av dem som medikamenter ved behandling av visse sykdommer og metoder og mellomprodukter for deres fremstilling.
i
Ifølge oppfinnelsen er Ri en gruppe med formelen
Y-l
hvor R22og R23er uavhengig hydrogen, Q-C6alkyl, C1-C6alkoksy, C3-C7cykloalkyl, fenyl, naftyl, fenyl Cj-Q alkyl, naftyl C1-C6alkyl, nitro, cyano, C]-C6alkyltio, Q-Q alkylsulfinyl, C1-C6alkylsulfonyl, C1-C6alkanoyl, halogen eller perfluor C1-C6alkyl, og minst én av R22og R23er forskjellig fra hydrogen, og R24er hydrogen, C1-C6alkyl, Ci-C6alkoksy, fenyl, naftyl, nitro, cyano, Q-C6 alkylsulfonyl eller halogen; eller
Ri er en gruppe med formelen Y-2, som er en fem- eller seks-leddet heteroaromatisk ring bundet via et karbonatom til amidkarbonylen hvor nevnte ring inneholder ett, to eller tre heteroatomer valgt fra gruppen bestående av N, O og S, og ett eller to atomer i nevnte ring er uavhengig substituert med Q-C6alkyl, C3-C7cykloalkyl, halogen, cyano, perfluorCi-C6alkyl eller fenyl, naftyl, og minst ett av nevnte substituerte atomer sitter i nabostilling til karbonatomet bundet til amidkarbonylen; eller
Ri er en gruppe med formelen Y-3 som er en 3-7-leddet ring med formelen:
hvor R25er C1-C6alkyl, usubstituert eller fluorsubstituert Q-C6alkenyl eller en gruppe med formel R26~~(CH^e- } er fenyl, naftyl, en fem- eller seks-leddet monosyklisk
heteroaromatisk ring eller en ni- eller ti-leddet bisyklisk heteroaromatisk ring hvor nevnte ring inneholder ett, to, tre eller fire heteroatomer valgt fra gruppen bestående av N, O og S, azido, cyano, hydroksy, Ci-Q alkoksy, Ci-Q alkoksykarbonyl, C1-C6alkanoyl, Ci-Ce alkyltio, Ci-Ce alkylsulfonyl, C1-C6alkylsulfinyl, perfluorCi-Q alkanoyl, nitro, eller R2$ er en gruppe med formel -NR28R29. hvor R28 er hydrogen eller C|-C6alkyl, R29 er hydrogen, CrC6alkyl, O-C* alkoksykarbonyl, Cj-Ce alkanoyl, benzoyl, naftoyl, perfluorCi-Ce alkanoylamino, Ci-Ce alkylsulfonyl, Ci-Céalkylaminokarbonyl, fenylaminokarbonyl, naftylaminokarbonyl;
Q er -<CH2)fO-, -(CH2)fS-, -(CH2)fN(R27K -(CH2)f-,
R27er H, C1-C6alkyl, fenyl, naftyl, Ci-Q alkanoyl, benzoyl, naftoyl eller d-Cs alkoksykarbonyl,
e er et helt tall fra 0 til 4 og f er et helt tall fra 0 til 3;
R2er hydrogen, Q-Q alkyl, substituert Ci-Ce alkyl, fenyl, naftyl, fenylCi-C6alkyl eller naftylCi-C6alkyl;
R3er hydrogen, halogen, Ci-Cé alkyl, trifluormetyl, fenyl eller naftyl;
R4er hydrogen, halogen, Ci-Q alkyl, fenyl eller naftyl;
R5er hydrogen, C1-C6alkyl, Ci-C* alkoksy eller trifluormetyl eller OH;
Rs er hydrogen, C1-C6alkyl, Ci-C*alkylkarbonyloksy-Ci-Ce alkyl,
eller Re er en gruppe med formel P-3:
hvor:
R32er hydrogen eller C]-Q alkyl; R33er hydrogen, Ci- Ce alkyl, fenyl, naftyl; R34er hydrogen eller Ci-C6alkyl; h er et helt tall fra 0 til 2; g er et helt tall fra 0 til 2;
summen av h og g er 1 til 3; eller
Réer en gruppe med formel P-4:
hvor: R32, g og h er som tidligere definert; Q' er O, S, -(CH2)j- eller en gruppe med formelen N-R35; hvor R35er hydrogen, C1-C6alkyl, C1-C6alkanoyl, Q-C6alkoksykarbonyl; j er 0,1 eller 2; og
R7er hydrogen, klor, C1-C6alkoksy eller Q-Q alkyl.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan foreligge som stereoisomerer og diastereomere, som alle omfattes av omfanget av foreliggende oppfinnelse.
I en første foretrukket utførelsesform av forbindelsen med formel I, er R3hydrogen, halogen, C|-Ce alkyl, fenyl eller naftyl, fortrinnsvis hydrogen, R*er hydrogen eller halogen, fortrinnsvis halogen, R5er hydrogen, C]-Ce alkyl trifluormetyl eller C1-C6alkoksy, men er fortrinnsvis hydrogen, Re er hydrogen eller Ci-Ce alkyl og R7er hydrogen, klor, Ci-C6alkoksy eller Ci-Ce alkyl.
I hvilken som helst forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse med formel I, kan Ri være en gruppe med formel Y-l eller en gruppe med formel Y-3; R2kan være hydrogen, C1-C6alkyl, fenyl-Ci-Céalkyl eller naftyl-C]-C6alkyl, fortrinnsvis Ci-Ce alkyl, spesielt metyl eller fenylCi-Ce alkyl eller naftylCi-Ce alkyl, særlig benzyl, R3kan være hydrogen, Ci-Ce alky eller trifluormetyl, fortrinnsvis hydrogen eller Ci-Ce alky; R4kan være hydrogen eller halogen; R5kan være hydrogen, C|-Ce alky eller trifluormetyl; Re kan være hydrogen, Ci -Q alky, C1-C6alkylkarbonyloksy-Ci-Ce alkyl eller en gruppe med formel P-3 og kan i tillegg være en gruppe med formel P-4; og R7kan være Ci-Ce alkyl eller hydrogen, fortrinnsvis hydrogen.
I hvilken som helst forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse med formel I, eller de foretrukne forbindelser beskrevet i avsnittet umiddelbart ovenfor, kan gruppene innenfor Y-l og Y-3 være spesifikt valgt som følger: R22 og R23er hydrogen, halogen, Ci-Ce alkyl, R24er hydrogen eller C1-C6alkoksy, R25 er en gruppe med formel R2<g>"~(CH2)cr , hvor R26er Ci-Ce alkoksy, Q er -(CH2)f-,
e er et helt tall fra 0 til 4, og f er et helt tall fra 0 til 3 og/eller hvor R2er CrCe alkyl, R4er hydrogen, og R<3>og R5er C1-C6alkyl eller trifluormetyl, og Re er hydrogen, C1-C6alkyl eller Q-Ce alkylkarbonyloksy-CrCe alkyl eller en gruppe med formel P-3, fortrinnsvis hvor R32er hydrogen; R33og R34er Ci-Ce alkyl;
én av g og h er 1 og den andre er 0.
I slike forbindelser er fortrinnsvis R$og R7hydrogen og/eller R2er Q-Q alkyl; R3er hydrogen; R4er hydrogen eller halogen; og R5er hydrogen eller Ci-Q alkyl, og fortrinnsvis er R22og R23C|-Ce alkyl eller halogen, spesielt halogen, og R24er hydrogen, eller R22og R23er hydrogen eller halogen, og R24er hydrogen eller C1-C6alkoksy, fortrinnsvis hydrogen, eller R| er Y-3. Spesielle forbindelser er
N-[(2,6-diklorfeny])karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trilfuormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin;
N-[(2-etyl-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin;
N-[(2-( 1 -metyletyl)-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[ 1,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin;
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluorrnetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin;
N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-{l,4-dirnetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin; eller
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin.
I andre slike forbindelser er R22og R23fortrinnsvis halogen eller Ci-Ce alkyl, R24er hydrogen eller C1-C6alkoksy, R25er en gruppe med formel R2ff~(CH<2>)ff- j nvor j^<g>er C i-C6 alkoksy, Q er -(CH2)f-, e er et helt tall fra 0 til 4 og f er et helt tall fra 0 til 3, spesielt
N-[[ 1 -(2-metoksyetyl)cyklopently]karbonyl]-4-[ 1,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin og/eller R2er fenylQ-Q alkyl eller naftylCi-C*alkyl; R3er hydrogen, R4er halogen og R5, Re og R7er hydrogen. Det er også foretrukket at Ri er Y-l.
I en spesielt foretrukket forbindelse med formel I er Ri en gruppe med formel Y-l eller en gruppe med formel Y-3; R2er Ci-Céalkyl eller fenylCi-Ce alkyl eller naftylC]-C6alkyl; R3er hydrogen, Ci-Q alkyl eller trifluormetyl; R*er hydrogen eller halogen; R5er hydrogen, CpCealkyl eller trifluormetyl; R$er hydrogen, C1-C6alkyl, Q-Cé alkylkarbonyloksy-Ci-Ce alkyl eller en gruppe med formel P-3; og R7er hydrogen.
I en foretrukket forbindelse med formel I kan gruppen innen Y-l og Y-3 være spesifikt valgt som følger: R22og R23er hydrogen, halogen eller CrCe alkyl, R24er hydrogen eller Q-C6alkoksy, R25 er en gruppe med formel R26~~(CH^er t hvor R26 er Ci-C6alkoksy, Q er -(CH2)f-, e er et helt tall fra 0 til 4 og f er et helt tall fra 0 til 3.
I en foretrukket forbindelse med formel I er R2Ci-Ce alkyl, R4er hydrogen, og R3og R5er C1-C6alkyl eller trifluormetyl.
I én utførelsesform med formel 1 er Re hydrogen. I denne utførelsesform kan Ri være Y-l, spesielt hvor R22og R23er halogen eller Cj-Cé alkyl, eller Ri kan være Y-3. I andre utførelsesformer med formel I er Re C|-Q alkyl, spesielt metyl, eller er Ci-Ce alkylkarbonyloksy-Ci-Céalkyl, spesielt l-{acetoksy)etyl, eller er en gruppe med formel P-3 hvor R32er hydrogen; R33og R34er Ci-Ce alkyl, spesielt metyl eller etyl; én av g og h er 1, og den andre er 0.
Når Re er C|-Ce alkyl, er spesielle forbindelser
N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinylJ-L-fenylalanin-etylester;
N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trilfuormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-etylester;
N-[(2-klor-6-metylfenyl )karbonyl] -4-[ 1,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl] -L-fenylalanin-etylester; eller
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinylJ-L-fenylalanin-etylester.
Når Re er Ci-Ce alkylkarbonyloksy-Cj-Ce alkyl er spesielle forbindelser
N-[(2,6-dikloifenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyI-4-(trilfuonnetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-1 -(acetoksy)etylester;
N-[(2,6-dildorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trilfuormetyl)-2-okso-3-pyri(Unyl]-L-fenylalanin-1 -(acetoksy)etylester;
N-[(2-klor-6-metylfenyI)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-l -(acetoksy)etylester; eller
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[ 1,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-1 -(acetoksy)etylester.
Når R6 er P-3, er spesielle forbindelser
N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[ 1,6-dimetyl-4-(triflu ormetyl)-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester;
N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester;
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-diraetyl-4-(trifluor-metyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester; eller
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[ 1,4-dimetyl-6-(trifluor-metyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester.
I en annen foretrukket forbindelse med formel I er Re hydrogen. Det er foretrukket at R2er Ci-C* alkyl 1; R3er hydrogen; R4er hydrogen eller halogen; og R5er hydrogen eller C1-C6alkyl. I én utførelsesform av formel I er Ri Y-l. Fortrinnsvis er R22og R23 Q-C6alkyl eller halogen, og R24er hydrogen, eller R22og R23er halogen og R24er hydrogen, spesielt
N-[(2-klor-6-metylfeny])karbonyl]-4-(5-kJor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin;
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin;
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin; eller
N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin,
eller R22og R24er hydrogen eller halogen, og R23er Q-Ce alkoksy. Ved en annen utførelsesform med formel I er Ri Y-3, spesielt
4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin.
I en annen foretrukket forbindelse med formel I, hvor R<1>er Y-l hvor R22og R23er halogen eller C1-C6alkyl, er R24hydrogen eller Ci-Q alkoksy, eller hvor R<1>er Y-3 hvor R25er en gruppe med formel<R>2f~(CH2)e-1nvor r26er Ci-Ce alkoksy, er Q -(CH2)f-, e er et helt tall fra 0 til 4 og f er et helt tall fra 0 til 3. Fortrinnsvis er R2fenylCrQ alkyl eller naftylCi-C6alkyl; R3er hydrogen, R4er halogen og R5, R6og R7er hydrogen. Fortrinnsvis er Ri Y-l, spesielt
4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-L-fenylalanin; eller
4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)- N-[[l-(2-metoksyetyl)-cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin.
I et annet aspekt angår foreliggende oppfinnelse forbindelser med formel II
hvor R -R og R er som definert i formel I, og Pi og P2er hver en beskyttelsesgruppe. Mer spesielt er Pjen standard nitrogen-beskyttelsesgruppe så som tert.butyloksykarbonyl (Boe) eller karbobenzyloksygruppen, og P2er en standard karboksybeskyttelsesgruppe så som CpC6alkyl eller substituert C1-C6alkyl. Disse forbindelser er anvendelige mellomprodukter ved fremstilling av forbindelsen med formel I. Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse hemmer bindingen av VCAM-1 og fibronektin til VLA-4 på sirkulerende lymfocytter, eosinofiler, basofiler og monocytter ("VLA-4-uttrykkende celler"). Bindingen av VCAM-1 og fibronektin til VLA-4 på slike celler er kjent å inngå i visse sykdomstilstander, så som revmatoid artritt, multippel sklerose, inflammatorisk tarmsykdom og spesielt i bindingen av eosinofiler til luftveisendotel, som bidrar til årsaken til lunge-inflammasjon som forekommer ved astma. Således er forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse anvendelige for behandling av astma.
På grunn av deres evne til å hemme binding av VCAM-1 og fibronektin til VLA-4 på sirkulerende lymfocytter, eosinofiler, basofiler og monocytter, kan forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse anvendes som medikament eller som farmasøytisk preparat, spesielt for behandling av lidelser som er kjent for å være forbundet med eller mediert av slik binding. Eksempler på slike lidelser er revmatoid artritt, multippel sklerose, astma og inflammatorisk tarmsykdom. Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse blir fortrinnsvis anvendt ved behandling av sykdommer som innbefatter pulmonal inflammasjon, så som astma. Den pulmonale inflammasjon som forekommer ved astma, er beslektet med det aktivering og lunge-infiltrering av eosinofiler, monocytter og lymfocytter som blir aktivert av en astma-utløsende årsak eller substans.
Videre hemmer forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse også bindingen av VCAM-1 og MadCAM til den cellulære reseptor alpha4-beta7 også kjent som LPAM, som blir uttrykt på lymfocytter, eosinophiler og T-celler. Skjønt den nøyaktige rolle av alpha4-beta7-interaksjon med forskjellige ligander ved inflammatoriske tilstander så som astma ikke er fullstendig klarlagt, er forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse som hemmer både alpha4-betal- og alpha4-beta7-reseptorbinding, spesielt effektive i dyremodeller av astma. Videre arbeid med monoklonale antistoffer mot alpha4-beta7 indikerer at forbindelser som hemmer alpha4-beta7-binding til MadCAM eller VCAM er anvendelige for fremstilling av medikamenter for behandling av inflammatorisk tarmsykdom. De ville også være anvendelige for andre sykdommer hvor slik binding er implisert som en årsak til sykdomskade eller -symptomer.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres oralt, rektalt eller parentalt, f.eks. intravenøst, intramuskulært, subkutant, intrathekalt eller transdermalt; eller sublingvalt eller som opthalmalogiske preparater eller som en aerosol i tilfellet pulmonal inflammasjon. Kapsler, tabletter, suspensjoner eller løsninger for oral administrering, suppositorier, injeksjonsløsninger, øyedråper, salver eller sprayløsninger er eksempler på administreringsformer.
Intravenøs, intramuskulær, oral eller inhalering administrering er en foretrukket form for anvendelse. Dosene hvor forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse blir administrert i effektive mengder er avhengig av typen av den spesifikke aktive bestanddel, alderen og kravet til pasienten og administrerings-metoden. Doser kan bestemmes ved hvilke som helst konvensjonelle metoder, f.eks. ved dose-begrensende kliniske forsøk. Således omfatter oppfinnelsen videre forbindelser anvendlige for fremstilling av medikamenter for behandling av en pasient som lider av en sykdom hvor VCAM-1- eller fibronektinbinding til VLA-4-uttrykkende celler er en forårsakende faktor for sykdomssymptomene eller skaden, ved administrering av en mengde av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse som er tilstrekkelig til å hemme VCAM-1- eller fibronektinbinding til VLA-4-uttrykkende celler, slik at nevnte symptomer eller nevnte skade blir redusert. Generelt er doser på ca. 0,1-100 mg/kg kroppsvekt pr. dag foretrukket, idet doser på 1-25 mg/kg pr. dag er spesielt foretrukket, og doser på 1-10 mg/kg kroppsvekt pr. dag er spesielt foretrukket.
I et annet aspekt angår oppfinnelsen videre medikamenter eller farmasøytiske preparater omfattende en farmasøytisk effektiv mengde av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse og en farmasøytisk akseptabel bærer. Den angår også en fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat, hvilken fremgangsmåte omfatter å bringe en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og en kompatibel farmasøytisk bærer i en galenisk administreringsform. Slike preparater kan formuleres ved hvilke som helst konvensjonelle metoder. Tabletter eller granulater kan inneholde en rekke bindemidler, fyllmidler, bærere eller fortynningsmidler. Flytende preparater kan for eksempel foreligge i form av en steril vann-blandbar løsning. Kapsler kan inneholde et fyllmiddel eller fortykningsmiddel i tillegg til den aktive bestanddel. Videre kan smaksforbedrende additiver så vel som substanser vanligvis anvendt som konserverings-, stabiliserende, fuktighetsbevarende og emulgeringsmidler så vel som salter for å variere det osmotiske trykket, buffere og andre additiver også være til stede.
De tidligere nevnte bærermaterialer og fortynningsmidler kan omfatte hvilke som helst konvensjonelle farmasøytisk akseptable organiske eller uorganiske substanser, f.eks. vann, gelatin, laktose, stivelse, magnesiumstearat, talkum, gummi arabicum, polyalkylenglykoler og lignende.
Orale enhetsdoseformer, så som tabletter og kapsler, inneholder fortrinnsvis fra 25 mg til 1000 mg av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse.
Generelt kan forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles fra egnete fenylalaninderivater gjennom en palladiumkatalysert omsetning med et 5-halogen-2,4-dioksopyrimidon.
Som vist i Reaksjonsskjema 1 blir et 4-jod- eller 4-bromfenylalaninderivat så som 1, omdannet til et beskyttet fenylalaninderivat 2 hvor R5' er hydrogen, klor, lavere-alkyl eller lavere-alkoksy, Pi er en standard nitrogen-beskyttelsesgruppe så som en Boe- eller karbobenzyloksygruppe, og P2er lavere-alkyl eller substituert lavere-alkyl hensiktsmessig valgt til å tjene som en beskyttelsesgruppe eller en element for et prodrug. Gruppen P2kan innføres ved konvensjonelle metoder velkjente for fagfolk som arbeider med peptidkjemi. Rekkefølgen av tilsetning av Pi og P2er ikke kritisk og vil avhenge av det spesielle valg av reagenser. En omtale av anvendelse og innføring av beskyttelsesgrupper er gitt i Theodora W. Green og Peter G. M. Wuts., Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley Interscience, New York, 1991. Alternativt kan en forbindelse med formelen 1 omdannes til en forbindelse med formelen 4, hvor Ri' representerer en komponent av en acylgruppe ifølge foreliggende oppfinnelse. En hensiktsmessig metode er å innføre estergruppen P2først, fulgt av en koblingsreaksjon av det frie aminet ved anvendelse av konvensjonelle peptid-koblingsreagenser, for eksempel HBTU i nærvær av en tertiær aminbase så som dietylisopropylamin. Igjen kan det spesielle valg av reagenser diktere endring av sekvensen av innføringen av Ri' og P2. Omdannelse av forbindelser med formel 2 eller 4 til derivater 3 eller 5, hvor M representerer et substituert tinn- eller boratom, kan utføres ved behandling med en egnet forbindelse, for eksempel heksametylditinn, heksabutylditinn eller en tetraalkoksydiboron i nærvær av en kilde til palladium null. Metodikken er beskrevet og referert i F. Diederich og P. J. Stang, ed, Metall Catalysed Cross Coupling Reactions, Wiley-VCH, Weinheim, Tyskland,
1998.
Substituerte pyridoner med formel 6 hvor R3>, R4' og Ry er hydrogen, lavere-alkyl, perfluorlavere-alkyl, halogen, aryl, hydroksy eller lavere-alkoksy er kommersielt tilgjengelig eller fremstilles etter litteraturmetoder (for eksempel finnes omtale av noen av disse kjente metoder i: P. Wirth, et al., Tysk Offen. 28 17 293, Aug. 12,1979, Masaru Hojo, et al. Chem. Lett. 1976,499-502, Robert W. Lang, et al. Helvetica Chimica Acta, 1988, 71, 596-601). Forbindelser med formel 7 hvor R2- er lavere-alkyl eller aryl-lavere-alkyl, blir oppnådd ved alkylering av forbindelser med formel 6 ved behandling med alkyleringsmidler så som jodmetan, benzylbromid i nærvær av en base så som kaliumkarbonat og eventuelt en fase- overføringskatalysator. For mindre reaktive alkyleringsmidler kan det være nødvendig å anvende en sterkere base så som et alkalimetallhydroksyd og å oppvarme reaksjonsblandingen. Forbindelser med formel 7 som definert ovenfor kan halogeneres i 3-stilling ved behandling med konvensjonelle halogeneringsreagenser så som brom, N-jodsuccinimid eller N-bromsuccinimid i et egnet løsningsmiddel så som iseddik eller vandig eddiksyre, hvilket gir halogenpyridoner med formel 8, X = Br eller I, R^ er uavhengig hydrogen, lavere-alkyl, substituert lavere-alkyl eller aryl-lavere-alkyl, Ry og Ry er hydrogen, lavere-alkyl eller perfluorlavere-alkyl. Behandling med overskudd av halogeneringsmiddel fører til forbindelser med struktur 8 hvori R4'= halogen. For forbindelser med formel 8 hvori R2'= aryl er det hensiktsmessig å starte med N-aryl-pyridoner som er kjente forbindelser, eller for å innføre en arylgruppe for eksempel anvendelse av en Ullmann-koblingsreaksjon som beskrevet av Masakatusu, et al., Chem. Pharm. Bull. 1997,45,719.
Som vist i Reaksjonsskjema 3, kan forbindelsen med formel 8 anvendes i en palladiumkatalysert koblingsreaksjon med et fenylalaninderivat med formel 3 eller 5. For eksempel når M er et substituert tinn, gir behandling av en blanding av 8 og fenylalaninet med formel 3 eller 5 med en kilde for palladium null så som tetraakis(trifenylfosfin)-palladium eller bis(trifenylfosfin)palladium-diklorid i nærvær av et inert løsningsmiddel så som DMF ved en temperatur på mellom romtemperatur og 100 °C en forbindelse med formelen 9 eller 10. Forbindelser med struktur 9 kan omdannes til forbindelser med struktur 10 ved fjerning av beskyttelsesgruppen Pi, som kan gjennomføres ved konvensjonelle metoder avhengig av valget av P|. For eksempel hvis Pi er en Boe-gruppe, kan den fjernes ved behandling med en sterk syre, så som trifluoreddiksyre, eventuelt i nærvær av et løsningsmiddel så som metylenklorid og et oppfangingsmiddel. Det resulterende fri amin kan deretter acyleres med en syre med formelen RfCChH ved anvendelse av vanlige peptidkoblingsteknikker. For eksempel ved behandling med HBTU i nærvær av et tertiært amin base så som dietylisopropylamin i nærvær av et aprotisk løsningsmiddel så som DMF, hvilket gir forbindelsen med struktur 10.
Hvis den frie syren 11 er det ønskede sluttprodukt, kan estergruppen P2fjernes ved konvensjonelle metoder. For eksempel i tilfellet at P2er lavere-alkyl, for eksempel metyl, kan den fjernes ved behandling med et alkalimetallhydroksyd, for eksempel litiumhydroksyd, i et egnet løsningsmiddel, for eksempel vandig THF eventuelt inneholdende metanol for å bidra til løseligheten. Hvis P2var benzyl eller en substituert benzylgruppe, kunne den også fjernes ved katalytisk hydrogenering over en edelmetallkatalysator, for eksempel palladium på karbon.
Alternativt kan som vist i Reaksjonsskjema 4 en forbindelse med struktur 8, hvor X er bromid eller jodid, omdannes til en forbindelse med formel 12, hvor M' representerer et substituert tinn-, bor- eller sinkatom. I tilfellet tinn- eller bor- derivater, hvor M' representerer et substituert tinn- eller bor-atom, kan omdannelsen utføres ved behandling med en egnet forbindelse, for eksempel heksametylditin, heksabutylditin eller et tetraalkoksydiboron i nærvær av en kilde for palladium null. For dannelsen av sinkderivatet 12, M<*>= Zn(halogen), kan omdannelse utføres ved behandling av forbindelsen med formel 8, X = I med en kilde for aktivert sinkmetall i et egnet inert løsningsmiddel, for eksempel dimetylacetamid ved en temperatur fra romtemperatur til 100 °C inntil omdannelsen er fullstendig, hvilket gir en forbindelse med formelen 12, M' = Zn(halogen). Disse forbindelser med formel 12 kan omsettes med et 4-substituert fenylalanin-derivat med formel 4<*>hvor X<*>er jod, brom eller trifluormetylsulfonyloksy i nærvær av en kilde for palladium null, hvilket gir en forbindelse med formelen 10'. I tilfellet hvor estergruppen representert ved P2ikke er en del av målforbindelsen, kan den fjernes ved anvendelse av esterhydrolyse- metoder passende til den spesielle P2. For eksempel hvor P2er lavere-alkyl, for eksempel metyl, kan den fjernes med standard basehydrolyse ved anvendelse av et alkalimetallhydroksyd, for eksempel litiumhydroksyd. I en variant av denne metoden kan det være ønskelig å ha en beskyttelsesgruppe gjennom koblingsreaksjonen og skifte den ut på et senere tidspunkt. I dette tilfellet kan en forbindelse med formelen 2' hvor P|' er lavere-alkoksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl og X' er som definert ovenfor, kobles med et pyridon med struktur 12, hvilket gir en forbindelse med struktur 9' som igjen kan omdannes til en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse ved anvendelse av de generelle metoder angitt ovenfor i reaksjonsskjema 3.
En alternativ vei til forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse, som vist i Reaksjonsskjema 5, som er spesielt anvendelig på forbindelser hvor R7' er forskjellig fra hydrogen, er å danne et aldehyd med formel 14. Dette kan utføres ved omsetning av en forbindelse med formelen 12 med en forbindelse med formelen 13, hvor R7' representerer lavere-alkyl eller lavere-alkoksy og X" representerer en jodid-, bromid-, eller trifluormetyl sulfonyloksy gruppe, og Rg representerer en beskyttet alkohol eller et aldehyd. For alkoholer omfatter egnede beskyttelsesgrupper silyletere, benzyletere. Om nødvendig kan aldehyder beskyttes som sine acetalderivater. Forbindelsen med formel 12 kan omdannes til et aldehyd med formel 15 ved vanlige trinn som, når Rg er en alkohol, ville involvere fjerning av beskyttelsesgrupper, om nødvendig fulgt av oksydasjon. Hvilke som helst av de vanlige reagenser for selektiv oksydasjon av primære benzylalkoholer til aldehyder kan anvendes, for eksempel behandling med aktivert mangandioksyd i et inert løsningsmiddel. I tilfellet hvor Rg representerer et beskyttet aldehyd, kan omdannelse til et aldehyd med formel 15 utføres ved fjerning av en egnet beskyttelsesgruppe, for eksempel hydrolyse av et acetal med fortynnet syre. Omsetning av 15, hvilket gir en dehydroaminosyre med formel 16, kan utføres ved behandling med et Wittig-reagens med formel 17 hvor Pj' er lavere-alkoksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl og P2er som definert ovenfor. For eksempel fører behandling av 15 med (±)-N-(benzyloksykarbonyl)-a-fosfonoglycin-trimetylester i nærvær av en egnet base, for eksempel tetrametylguanidin direkte til en dehydroaminosyre med forme! 16, P2- metyl og Pi- = benzyloksykarbonyl. Enantio-selektiv reduksjon av 16 til L-aminosyren 18 kan utføres ved anvendelse av flere reduksjonsmidler egnet for formålet, for eksempel det nylig beskrevete etyl-DuPHOS-rhodiumreagens (Burk, M. J., Feaster, J. E.; Nugent, W. A.; Harlow, R. L. J. Am Chem, Soc. 1993, 115,10125) ved i det vesentlige anvendelse av litteraturmetoder. Videre omdannelse av 18 til forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse kan utføres ved anvendelse av de generelle metoder beskrevet ovenfor. Alternativt kan de generelle metoder beskrevet i reaksjonsskjema 5 anvendes for å fremstille forbindelser med struktur
4 eller 4' hvor Rr er forskjellig fra hydrogen. Disse forbindelser med struktur 4 eller 4' kan deretter anvendes for å fremstille forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse som beskrevet i reaksjonsskjemaene 1 til 4.
I én utførelsesform er N-acylgruppen, Ri' med struktur 11, avledet fra en 2-subsitutert benzosyre. Egnede 2-substituerte benzosyrer er enten kommersielt tilgjengelige eller kan fremstilles ved konvensjonelle metoder. For eksempel kan orto-substituerte aryljodider eller -triflater karbonyleres i nærvær av karbon- monoksyd og en egnet palladium-katalysator. Fremstilling av slike jodid- eller triflat-mellomprodukter er avhengig av det spesielle substitusjonsmønster som er ønsket, og de kan oppnås ved direkte iodering eller diazotering av et anilin fulgt av behandling med en kilde for jodid, for eksempel kaliumjodid. Triflater kan avledes fra de tilsvarende fenoler ved konvensjonelle metoder så som ved behandling med trifluormetansulfonsyreanhydrid i nærvær av en base så som trietylamin eller diisopropyletylamin i et inert løsningsmiddel. Som vist i Reaksjonsskjema 6 innbefatter en annen metode for å oppnå orto-substituerte benzosyrer behandling av et 2-metoksyfenyloksazolin-derivat så som forbindelse 19, Zi og Z2= hydrogen, alkyl, klor, perfluor-lavere-alkyl, lavere-alkoksy, med et alkyl-Grignard-reagens, fulgt av hydrolyse av oksazolinringen ved å følge den generelle metode beskrevet av Meyers, A. I., Gabel, R., Mihelick, E. D, J. Org. Chem. 1978,43, 1372-1379, hvilket gir en syre med formel 20. 2-eller 2,6-disubstituerte benzonitriler tjener også som hensiktsmessige forløpere for de tilsvarende benzosyrer. I tilfellet av meget hindrete nitriler, for eksempel 2-klor-6-metylbenzonitril, er konvensjonell hydrolyse under sure eller basiske betingelser vanskelig, og bedre resultater blir oppnådd ved DIBAL-reduksjon til det tilsvarende benzaldehyd, fulgt av oksydasjon ved anvendelse av et krombasert oksydasjonsreagens. Andre metoder er eksemplifisert i Chen, et al., WO 9910312.
Under henvisning nå til Reaksjonsskjema 7 er cykliske syrer med formel 23 kjente forbindelser eller kan fremstilles ved anvendelse av standardmetoder. For fremstilling av substituerte alkyl- eller cykloalkylkarboksylsyrer kan alkylerings- reaksjoner anvendes ved bruk av et alkalimetalldianion av syren eller monoanion av den tilsvarende ester. For eksempel kan en cykloalkylkarboksylsyreester med formel 21 behandles med en sterk base, for eksempel litiumdiisopropylamid i et inert løsningsmiddel, for eksempel THF fulgt av addisjon av gruppen R4i-Lv hvor R41representerer en ønsket sidekjede, så som substituert benzyl, lavere-alkyl, lavere-alkoksy alkyl, azidolavere-alkyl og lignende, og Lv representerer en utgående gruppe så som et bromid, jodid, mesylat eller lignende gruppe kjent for å delta i ester-enolat-alkyleringsreaksjoner. Produktesteren 22 kan hydrolyseres til syren 23 ved anvendelse av alkalimetallhydroksyd i et egnet løsningsmiddel, for eksempel vandig alkohol. Avhengig av typen av R41og det eventuelle mål kan forbindelsen 23 kobles til et amin, så som forbindelse 1, og omdannes til målet direkte, eller R41kan bli gjenstand for videre manipulering på et egnet punkt i syntesen. For eksempel, hvis R4]er en azido-lavere-alkylgruppe, kan azidet reduseres ved anvendelse av for eksempel et trialkylfosfinreagens fulgt av funksjonalisering av aminproduktet ved alkylering, acylering, sulfonylering og beslektete metoder som er velkjente for fagfolk på området. Hvis R41inneholder en utgående gruppe, for eksempel et terminalt bromatom, kan denne gruppen fortrenges med et passende nukleofil, for eksempel natriummetyl-merkaptid, hvilket i dette tilfellet gir en tioeter, som kan være det ønskede produkt eller selv kan manipuleres videre, for eksempel ved oksydasjon til et sulfoksyd eller sulfon ved anvendelse av standard reaksjonsbetingelser. Andre nukleofiler som kan anvendes for å fremstille mellomprodukter som fører til forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter: natriumcyanid, natriummetoksyd, natriumazid, morfolin og andre. Når R41inneholder en ketalgruppe, kan denne gruppen hydrolyseres på et hensiktsmessig punkt i syntesen for å gi en ketogruppe. Denne gruppen kan igjen manipuleres videre, for eksempel ved reduksjon til en alkohol eller omdannelse til et derivat så som et oksim.
Eksempler på anvendelsen av metoder på syntesen av forbindelser med formel 23 er gitt i Chen, et al. WO 9910313.
Generelt kan orto-substituerte aromatiske syrer som er nødvendige for fremstilling av forbindelser hvor R<1>= Y-l fremstilles som eksemplifisert i Chen, et al., WO9910312.
For syntesen av 2-klor-6-alkylbenzosyrer med formel 28, hvor R43 er lavere-alkyl eller cykloalkyl, er metoden beskrevet i Reaksjonsskjema 8 spesielt egnet. Således blir et kommersielt tilgjengelig aldehyd med formel 24 omdannet til iminet 25 hvor R42 er lavere-alkyl, fortrinnsvis butyl, ved behandling med butylamin i et inert, hydrofobt organisk løsningsmiddel, for eksempel heptan. Den resulterende forbindelsen med formel 25 blir behandlet med et overskudd av et Grignard-derivat 26 i et inert løsningsmiddel, for eksempel THF, fulgt av syrebehandling under opparbeidingen, hvilket gir et aldehyd med formel 27. Oksydasjon av 27 til en syre med formel 28 kan utføres ved konvensjonelle metoder, for eksempel ved behandling av en løsning av 27 i et egnet løsningsmiddel så som vandig acetonitril med natriumkloritt og 30% hydrogenperoksyd ved eller under romtemperatur.
Det kan være ønskelig å fremstille prodrugestere av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, for hvilke det ville være mer hensiktsmessig å innføre estergruppen ved slutten av syntesen. For dette formål kan en rekke vanlige teknikker for dannelse av estere fra karboksylsyrer anvendes. Typiske metoder som kan være anvendelige vil omfatte kobling av en alkohol til karboksylsyren i nærvær av syre, for eksempel saltsyre, en prosedyre vanlig kjent som en Fisher-forestring. Alternativt kan en diimid-mediert kobling mellom karboksylsyren og en alkohol anvendes med eventuell anvendelse av en promoter så som 4,4-dimetylaminopyridin. Et typisk diimid er dicykloheksylkarbodiimid. Et annet alternativ er å behandle karboksylsyren med et reaktivt alkylhalogenid, for eksempel et alkyljodid eller et lavere-alkylkarbonyloksymetylklorid i nærvær av en base, for eksempel natriumbikarbonat og et inert løsningsmiddel, for eksempel DMF. Det spesielle valg av metode vil bestemmes av typen av den spesielle kombinasjon av karboksylsyre og ønsket estergruppe og vil være klart for fagfolk på området. Ester-grupper som kan gi prodrugs, kan innføres på hvilket som helst hensiktsmessig punkt i syntesen. For eksempel kan gruppen P2i formel 1 representere en ønskelig prodrugester og bibeholdes i sluttproduktet.
EKSEMPLER
Eksemplene som følger er for illustrasjonsformå.
Generelle metoder: Smeltepunkter ble tatt på et et Thomas-Hoover-apparat og er ukorrigerte. Optiske dreininger ble bestemt med et Perkin-Elmer modell 241 polarimeter.<J>H-NMR spektra ble registrert med Varian XL-200, Mecury-300 eller Unityplus 400 MHz spektrometere, ved anvendelse av tetrametylsilan (TMS) som intern standard. Elektronimpact (EI, 70 ev) og hurtig atombombardement (FAB) massespektra ble tatt på VG Autospec eller VG 70E-HF massespektrometere. Silikagel anvendt for kolonnekromatografi var Mallinkrodt SiliCar 230-400 mesh silikagel for flashkromatografi; kolonner ble kjørt under et 0-0,34 atm. overtrykk nitrogen for å hjelpe strømningen. Tynnskiktskromatogrammer ble kjørt på glass-tynnskiktsplater belagt med silikagel som leveres av E. Merck (E. Merck # 1,05719) og ble visualisert ved betraktning under 254 nm UV-lys i en betraktningsboks ved å eksponeres for I2damp eller ved sprøyting med enten fosfomolybdensyre (PMA) i vandig etanol eller etter eksponering for CI2med et 4,4'-tetrametyldiaminodifenylmetan-reagens fremstilt i henhold til E. Von Arx, M. Faupel og M Brugger, J. Chromatography, 1976, 120,224-228.
Reversfase-høytrykksvæskekromatografi (RP-HPLC) ble utført ved anvendelse av en Rainin HPLC ved anvendelse av en 41,4 x 300 mm, 8 \ iM, Dynamaks™ C-18 kolonne ved en strøm på 49 ml/min under anvendelse av en gradient av acetonitril: vann (hver inneholdende 0,75% TFA) typisk fra 5 til 95% acetonitril over 35-40 min. HPLC-betingelser er typisk beskrevet i formatet (5-95-35-214); dette angir en lineær gradient på fra 5% til 95% acetonitril i vann over 35 min under overvåkning av effluenten med en UV-detektor ved en bølgelengde på 214 nM.
Metylenklorid (diklormetan), 2-propanol, DMF, THF, toluen, heksan, eter og metanol var Fisher eller Baker reagenskvalitet og ble anvendt uten ytterligere rensning bortsett fra som angitt, acetonitril var Fisher eller Baker HPLC-kvalitet og ble anvendt som de var.
Definisjoner som anvendt her:
THF er tetrahydrofuran,
DMF er N,N-dimetylformamid,
DMA er N,N-dimetylacetamid
HOBT er 1-hydroksybenzotriazol,
BOP er [(benzotriazol-l-yl)oksy]tris-(dimetylamino)fosfoniumheksafluorfosfat, HATU er 0-(7 -azabenzotriazol-1 -yl)-1,1,3,3 -tetrametyluroniumheksafluorfosfat
HBTU er 0-benzotriazol-N,N,N',N',-tetrametyluroniumheksafluorfosfat,
DBPEA er diisopropyletylamin,
DMAP er 4-(N,N-dimetylamino)pyridin
DPPA er difenylfosforylazid
DPPP er l,3-bis(difenylfosfino)propan
DBU er l,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en
NaH er natriumhydrid
saltvann er mettet vandig natriumklorid-løsning
TLC er tynnskiktskromatografi
LDA er litiumdiisopropylamid
BOP-C1 er bis(2-okso-3-oksazolidinyl)fosfinsyreklorid
NMP er N-metylpyrrolidinon
Lawesson's reagens er [2,4-bis(4-metoksyfenyl)-l,3-ditia-2,4-difosfetan-2,4-disulfid] NIS er N-jodravsyreanhydrid.
Silikagelkromatografi på Biotage-kolonner angir anvendelse av et flashkromatografisystem levert av Biotage Division av Dyax Corporation ved anvendelse av forut pakkete 40 g (40s kolonner), 90 g (40m kolonner) eller 800 g (75m kolonner). Eluering blir utført med heksan-etylacetat-blandinger under 0,68-1,02 atm. nitrogentrykk.
Eksempel 1.
N-[(l,l-dimety]etoksy)karbonyl]-4-[(tributyl)stannyl]-L-fenylalanin-metylester.
En løsning av N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-4-jod-L-fenylalanin-metylester (5,3 g, 13 mmol) og heksabutylditin (27,5 ml, 54 mmol) i toluen (50 ml) ble deoksygenert ved skiftevis frysing av blandingen i et flytende-nitrogenbad under vakuum og tining under argon (3 x). Tetrakis(trifenylfosfin)palladium ble tilsatt (280 mg, 0,22 mmol), og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i 45 min da fargen skiftet fra gult til sort. TLC (1:6 etylacetat:heksan) viste tilstedeværelsen av noe utgangsjodid, og en ytterligere porsjon (140 mg, 0,11 mmol) av katalysatoren ble tilsatt. Tilbakeløp fortsatte i 1 time. Blandingen fikk avkjøles og ble inndampet. Residuet ble tatt opp i heksan (200 ml) og trietylamin (30 ml), ble rørt i 30 min og ble filtrert. Filtratet ble inndampet og ble kromatografert over en tørr silikagelkolonne inneholdende 150 g silikagel og under eluering med heksan fulgt av 1:6 etylacetat:heksaner, hvilket ga N-[(l,l-dimetyletoksy)-karbonyl]-4-[(tributyl)stannyl]-L-fenylalanin-metylester (5,7 g, 77%) som en klar olje. LR(+)LSIMS (C27H47N04Sn): m/z 1081 (2M-C4H9) 570 (M+H).
Eksempel 2.
2-Amino-3-brom-5-klorpyridin
En suspensjon av 2-anuno-5-klorpyridin (5,14 g, 40 mmol) og vannfritt natriumacetat (3,29 g, 40 mmol) i eddiksyre (25 ml) ble rørt mekanisk og oppvarmet til en badtemperatur på 45 °C. En løsning av brom (2,1 ml, 40 mmol) i eddiksyre (2 ml) ble tilsatt over 1 time. Den resulterende oransje blanding ble avkjølt til 15<*>C og filtrert. De faste stoffene ble tatt opp i 400 ml vann, suspensjonen gjort basisk ved tilsetning av 1 N NaOH og suspensjonen ekstrahert med etylacetat (5 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med 10 % NaHS03(1 x 100 ml) og ble tørket over MgS04. Inndamping ga 2-amino-3-brom-5-klorpyridin (4 g, 48%), Sm.p. 82-84 °C.
Eksempel 3.
En løsning av 2-amino-3-brom-5-klorpyridin (4,0 g, 19,3 mmol) i vann (30 ml) og kons.
HC1 (5,2 ml) ble avkjølt med et isbad til 0 °C og ble behandlet med en løsning av natrium-nitritt (1,33 g, 19,3 mmol) i vann (12 ml) over 10 min. Blandingen ble rørt i 10 min til og fikk oppvarmes til romtemperatur over 48 timer. Blandingen ble filtrert. De faste stoffene ble vasket med vann, deretter med CCU og ble tørket under vakuum ved 50 °C i 3 timer, hvilket ga 3-brom-5-klor-lH-2-pyridon (2,77 g, 69%), Sm.p. 173,5-175 °C.
Eksempel 4.
En blanding av 3-brom-5-klor-lH-2-pyridon (930 mg, 4,46 mmol), kaliumkarbonat (1,25 g, 9,1 mmol) og jodmetan (2,8 ml, 45 mmol) i 10 ml DME ble oppvarmet til tilbakeløp i 18 timer. Blandingen ble filtrert varm og inndampet. Residuet ble omkrystallisert fra etylacetat, hvilket ga 3-brom-5-klor-l-metyl-2-pyridon (740 mg, 74%), Sm.p. 162-163 "C. HRMS (C6H5BrClNO): Obs. masse 220,9249. Beregnet masse 220,9243 (M+H).
Eksempel 5.
4-(5-Klor-1 -metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N- [(1,1 -dimetyletoksy)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester
En løsning av 3-brom-5-klor-l-metyl-2-pyridon (660 mg, 2,97 mmol) og N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-4-[(tributyl)stannyl]-L-fenylalanin-metylester (1,7 g, 2,99 mmol) i DMF (30 ml) ble deoksygenert ved skiftevis frysing av blandingen i et flytende nitrogenbad under vakuum og tining under argon (3 X). Tetrakis(trifenylfosfin)palladium (140 mg, 0,20 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet til 90°C i 3 timer, hvorved blandingen ble mørk. TLC viste at reaksjonen ikke var fullstendig, og en ytterligere 140 mg porsjon av katalysatoren ble tilsatt og oppvarming fortsatte i 4 timer. Blandingen fikk avkjøles og ble fortynnet med diklormetan og filtrert gjennom et sjikt av Celite. Filtratet ble inndampet til tørrhet, og residuet ble oppløst i 1:1 etenetylacetat (60 ml). Løsningen ble vasket med vann (3x10 ml) og saltvann (1 x 10 ml) og ble tørket (MgSO*). Det oppnådde residuet etter inndamping ble kromatografert over 150 g silikagel under eluering med 7:3 etylacetat:heksan, hvilket ga 4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (670 mg, 54%). LRMS-Elektrospray: m/z 863 (2M+Na), 858 (2M+NH4), 443 (M+Na), 438 (M+NH4), 421 (M+H).
Eksempel 6.
4-(5-Klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorM
En løsning av 4-(5-klor-l-metyl-2-oksb-3-pyridinyl)-N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (210 mg, 0,50 mmol) i 4 N HC1 i dioksan (10 ml) ble røtt i 1 time og ble inndampet, hvilket ga 4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (140 mg) som et hvitt pulver. LR(+)LSIMS : m/z 641 (2M+H), 321 (M+H).
Eksempel 7.
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester
En løsning av 4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid (89,5 mg, 0,25 mmol), 2-klor-6-metylbenzosyre (47 mg, 0,28 mmol), DIEA (175 ul, 1,0 mmol) og HBTU (133 mg, 0,35 mmol) i DMF (3 ml) ble rørt ved romtemperatur i 4 timer. Blandingen ble inndampet, residuet ble oppløst i etylacetat (15 ml), ble vasket med 0,5 N HC1 (1x5 ml), mettet NaHCCh(lx 5 ml), saltvann (1 x 5 ml) og ble tørket (MgS04). Det oppnådde residuet etter inndamping ble kromatografert på 25 g silikagel, under eluering med 3:1 etylacetat:heksan, hvilket gaN-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(5-klor-l- metyl-2-okso-3-pyridiny])-L-fenylalanin-metylester (54 mg). LR(+)LSIMS : m/z 962 (2M+NH4), 945 (2M+H), 490 (M+NH4), 473 (M+H (2 Cl)).
Eksempel 8.
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl] -4-(5-klor-1 -metyl-2-okso-3-pyirdinyl)-L-fenylalanin.
En løsning av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4<5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyirdinyl)-L-fenylalanin-metylester (51 mg, 0,108 mmol) i THF (3 ml) ble behandlet med en løsning av litiumhydroksyd-monohydrat (18 mg, 0,43 mmol) i vann (1,0 ml). Ytterligere THF ble satt for å oppnå en klar løsning, og reaksjonsblandingen ble rørt i 1 time. TLC (etylacetat) viste at utgangsmaterialet var forbrukt. Noen få dråper eddiksyre ble tilsatt, og hele reaksjonsblanding ble satt på en 4 x 30 cm, C-l 8 reversfase HPLC-kolonne og eluert med en lineær gradient av acetonitril i vann på 5 til 95% over 35 min. Den produktholdige fraksjon ble frysetørket, hvilket ga N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyI]-4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin (40 mg, 82%) som et hvitt, fast stoff. LR-Elektrospray: m/z positivt ion, 481(M+Na), 459(M+H (2 Cl)); negativt ion, 457 (M-H (2 Cl)).
Eksempel 9.
4-(5-Klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinylVN-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin-metylester
En løsning av 4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid (47,4 mg, 0,25 mmol), l-(2-metoksyetyl)cyklopentankarboksylsyre (47 mg, 0,28 mmol), DIEA (175 1,0 mmol) og HBTU (133 mg, 0,35 mmol) i DMF (3 ml) ble rørt ved romtemperatur i 4 timer. Blandingen ble inndampet, residuet ble oppløst i etylacetat (15 ml), ble vasket med 0,5 N HC1 (1x5 ml), mettet NaHC03(1x5 ml), saltvann (1 x 5 ml)
og ble tørket (MgS04). Det oppnådde residuet etter inndamping ble kromatografert på 25 g silikagel under eluering med etylacetat, hvilket ga 4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (70,5 mg, 59%). LR-Elektrospray : m/z positivt ion, 943 (2M+Na), 483 (M+Na), 478, (M+NH4), 461 (M+H); negativt ion 919 (2M-H), 521,459 (M-H).
Eksempel 10.
4-(5-Klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin
En løsning av 4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]-karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (69 mg, 0,145 mmol) i THF (3 ml) ble behandlet med en løsning av litiumhydroksyd-monohydrat (24,3 mg, 0,58 mmol) i vann (1,0 ml). Tilstrekkelig THF ble satt til blandingen til å bevirke løsning. Blandingen ble rørt 1 time, og noen få dråper eddiksyre ble tilsatt. Hele reaksjonsblandingen ble satt på en 4 x 30 cm, C-18 reversfase HPLC kolonne og eluert med en lineær gradient av acetonitril i vann på 5 til 95% over 35 min. Den produktholdige fraksjon ble frysetørket, hvilket ga 4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[ 1 -(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin (48 mg, 72%) som et hvitt, fast stoff. LR-Elektrospray : m/z positivt ion 943 (2M+Na), 483 (M+Na), 478,(M+NH4), 461 (M+H); negativt ion 919(2M-H), 521,459 (M-H).
Eksempel 11,
1 -Benzyl-3-brom-5-klor-2-pyridon
En blanding av 3-brom-5-klor-lH-2-pyridon (950 mg, 4,56 mmol), nymalt kaliumkarbonat (1,26 g, 9,1 mmol) og tetrabutylammoniumklorid (100 mg) ble rørt mekanisk uten løsningsmiddel i 30 min, og benzylbromid (0,56 ml, 4,7 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 72 timer. Blandingen ble fortynnet med etylacetat og filtrert ved vasking av de faste stoffen med etylacetat. Filtratet ble inndampet til tørrhet, og residuet ble gnidd ut med mange porsjoner av heksan. Residuet ble kromatografert over 90 g silikagel under eluering med 3:1 heksan:etylacetat fulgt av 100% etylacetat, hvilket ga 1-benzyl-3-brom-5-klor-2-pyridon (423 mg, 31%), Sm.p. 108-110 °C. LR(+)LSIMS: m/z 595 (2M+H, 2 C1.2 Br), 298 (M+H.l Cl, 1 Br).
Eksempel 12.
4-( 1 -Benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[( 1, l-dimetyletoksy)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester
En løsning av l-benzyl-3-brom-5-klor-2-pyridon (296 mg, 0,98 mmol) og N-[(l,l-dimetyletoksy)karbony]]-4-[(tributyl)stannyl]-L-fenylalanin-metylester (560 mg, 0,99 mmol) i DMF (15 ml) ble deoksygenert ved skiftevis frysing av blandingen i et flytende nitrogenbad under vakuum og tining under argon (3 x). Bis(trifenylfosfin)palladium- diklorid (80 mg, 0,11 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet til 90°C i 4 timer, hvorved blandingen ble mørk. Ytterligere 60 mg av katalysatoren ble tilsatt og oppvarmning fortsatte i 2 timer. Blandingen fikk avkjøles, ble fortynnet med diklormetan og ble filtrert gjennom et sjikt av Celite. Filtratet ble inndampet til tørrhet, og residuet ble kromatografert over 150 g silikagel under eluering med 1:2 etylacetat:heksan, hvilket ga 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (255 mg, 52%). LMS-Elektrospray: m/z 1015 (2M+Na) (4 Cl) 519 (M+Na) 514 (M+NH4)497(M+H).
Eksempel 13.
4-(l-Benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid
En løsning av l-benzyl-4-(5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (248 mg, 0,50 mmol) i 4 N HC1 i dioksan (10 ml) ble rørt i 1 time og ble inndampet. Residuet ble gnidd ut med eter (15 ml) og ble filtrert, hvilket ga 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (202 mg, 94%) som et hvitt pulver. LR-Elektrospray: m/z 1015 (2M+Na, 4 CI), 519 (M+Na) 514 (M+NH4), 497 (M+H). HRMS: Obs. masse 496,1774. Beregnet masse 496,1765 (M+H).
Eksempel 14.
4-(l-Benzyl-5-ldor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(2-ldor-6-metylfenyl)karbonyl]-L-fenylalanin metylester
En løsning av 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid (100 mg, 0,23 mmol), 2-klor-6-metylbenzosyre (47 mg, 0,28 mmol), DIEA (200[Al, 1,2 mmol) og HBTU (133 mg, 0,35 mmol) i DMF (2 ml) ble rørt ved romtemperatur i 18 timer. Blandingen ble inndampet, residuet ble oppløst i etylacetat (15 ml), ble vasket med 0,5 N HC1 (1x5 ml), mettet NaHC03(1x5 ml), saltvann (1 x 5 ml) og ble tørket (MgSC»4). Det oppnådde residuet etter inndamping ble kromatografert på 25 g silikagel under eluering med 45:55 etylacetat:heksan, hvilket ga 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (74 mg, 58%). Obs. masse 397,1313. Beregnet masse 397,1320 (M+H)
Eksempel 15.
4-(l-Benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-L-fenylalanin
En løsning av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-pyirdinyl)-L-fenylalanin-metylester (72 mg, 0,13 mmol) i THF (3 ml) ble behandlet med en løsning av litiumhydroksyd-monohydrat (22 mg, 0,52 mmol) i vann (1,0 ml). Ytterligere THF ble tilsatt for å oppnå en klar løsning, og reaksjonsblandingen ble rørt 1,5 timer på hvilken tid TLC (etylacetat) viste at utgangsmaterialet var forbrukt. Noen få dråper eddiksyre ble tilsatt, og hele reaksjonsblandingen ble satt på en 4 x 30 cm, C-18 reverserfase HPLC-kolonne og eluert med en lineær gradient av acetonitril i vann på 5 til 95% over 35 min. Den produktholdige fraksjon ble frysetørket, hvilket ga 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-L-fenylalanin (50 mg, 71%) som et hvitt, fast stoff. LR-Elektrospray : m/z negativt ion 533 (M-H (2 Cl)); positivt ion 557(M+Na), 552 (M+NH4), 535 (M+H (2 Cl)). HRMS: Obs. masse 535,1190. Beregnet masse 535,1191 (M+H).
Eksempel 16.
4-(l-Benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin-metylester.
En løsning av 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid (100 mg, 0,25 mmol), l-(2-metoksyetyl)cyklopentankarboksylsyre (47 mg, 0,28 mmol), DIEA (200 ul, 1,2 mmol) og HBTU (133 mg, 0,35 mmol) i DMF (2 ml) ble rørt ved romtemperatur i 18 timer. Blandingen ble inndampet, residuet ble oppløst i etylacetat (15 ml), ble vasket med 0,5 N HC1 (1x5 ml), mettet NaHC03(lx 5 ml), saltvann (1x5 ml) og ble tørket (MgS04). Det oppnådde residuet etter inndamping ble kromatografert på 25 g silikagel under eluering med 60:40 etylacetat:heksan, hvilket ga 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L- fenylalanin-metylester (80 mg, 63%). LR-Elektrospray: m/z 1123 (2M+Na), 1118 (2M+NH4), 573 (M+Na),
568 (M+NH4), 551 (M+H (1 Cl)). HRMS: Obs. masse 551,2297. Beregnet masse 551,2313 (M+H).
Eksempel 17.
4-(l-Benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin
En løsning av 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]-karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (78 mg, 0,142 mmol) i THF (3 ml) ble behandlet med en løsning av litiumhydroksyd-monohydrat (24 mg, 0,57 mmol) i vann (1,0 ml). Tilstrekkelig THF ble satt til blandingen for å få en løsning. Blandingen ble rørt 1 time, og noen få dråper eddiksyre ble tilsatt. Hele reaksjonsblandingen ble satt på en 4 x 30 cm, C-18 reversfase HPLC-kolonne og eluert med en gradient av acetonitril i vann på 5- til 95% over 35 min. Den produktholdige fraksjon ble frysetørket, hvilket ga 4-(5-klor-l-benzyl-2-okso-3-pyirdinyl)- N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin (45 mg, 60%) som et hvitt, fast stoff. LRMS-Elektrospray: m/z positivt ion 559 (M+Na), 554 (M+NH4), 537 (M+H (1 Cl)); negativt ion 535 (M-H (1 Cl)). HRMS: obs. masse 537,2151. beregnet, masse 537,2156 (M+H).
Eksempel 18.
3-Brom-1 H-2-pyridon.
Til en løsning av lH-2-pyridon {1,9 g, 20 mmol) i IM vandig kaliumbromid (20 ml) sattes en løsning av brom (3,2 g, 20 mmol) i 1 M vandig kaliumbromid (40 ml) over 5 min. Reaksjonen fikk forløpe natten over, og det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet, hvilket ga 1,4 g. Omkrystallisering fra acetonitril ga 0,78 g 3-brom-lH-2-pyridon.
Eksempel 19.
En blanding av 3-brom-lH-2-pyridon (740 mg, 4,25 mmol), kaliumkarbonat (1,18 g, 8,5 mmol) og jodmetan (2,65 ml, 42,5 mmol) i DME (10 ml) ble oppvarmet ved tilbakeløp natten over. Blandingen ble filtrert, vasket med etylacetat, og filtratet ble inndampet til tørrhet. Residuet ble renset ved tørr kolonnekromatografi over 27 g silikagel under eluering med etylacetat, hvilket ga 3-brom-l-metyl-2-pyridon (0,63 g, 79%). LRMS (elektrospray), positivt ion, 188 (M+H).
Eksempel 20.
3-Brom- l-metyl-2-pyridon og 3,5-dibrom-l-metyl-2-pyridon
En løsning av l-metyl-2-pyridon (2,73 g, 25 mmol) og brom (1,4 ml, 27 mmol) i iseddik (150 ml) ble rørt 48 timer ved romtemperatur. Blandingen ble inndampet. Residuet ble tatt opp i vann (100 ml), gjort basisk til litmuspapir med 10 N natriumhydroksyd og ble ekstrahert med diklormetan (3 x 50 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (30 ml) og tørket (MgSCvO. Filtrering og avdamping av løsningsmidlet ga 4,7 g, som ble renset ved tørr kromatografi over 150 g silikagel, under eluering med 1:6 etylacetat:heksan fulgt av 1:1 etylacetat:heksan. Den første forbindelse som ble eluert var 3,5-dibrom-l-metyl-2-pyridon (2,0 g, 30%), LR-Elektrospray: m/z 266 (M+H (2 Br)). NMR(CDC13) 5 3,597 (s, 3H), 7,426 (d, j = 2,7,1H), 7,791 (d, j = 2,7,1H). Den andre forbindelse som ble eluert var 3-brom-l-metyl-2-pyridon (1,39 g, 30%), LR-Elektrospray: m/z positivt ion 251 (M+Na+CH3CN), 188 (M+H).
Eksempel 21.
N-[( 1, l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-( l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester.
En løsning av 3-brom-l-metyl-2-pyridon (94 mg, 0,50 mmol) og N-[(l,l-dimetyletoksy)-karbonyl]-4-[(tributyl)stannyl]-L-fenylalanin-metylester (284 mg, 0,50 mmol) i DMF (3 ml) ble deoksygenert ved skiftevis frysing av blandingen i et flytende nitrogenbad under vakuum og tining under argon (3 X). Bis(trifenylfosfin)palladiumdiklorid (40 mg, 0,057 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet til 90 "C i 3 timer hvorved blandingen ble mørk. TLC viste at reaksjonen ikke var fullstendig, og en ytterligere 20 mg porsjon av katalysatoren ble tilsatt og oppvarming fortsatte i 4 timer. Blandingen fikk avkjøles og ble fortynnet med diklormetan (20 ml) og filtrert gjennom et sjikt av Celite. Filtratet ble inndampet til tørrhet, og residuet ble oppløst i 1:1 etenetylacetat (20 ml). Løsningen ble vasket med vann (1x10 ml), 5% kaliumfluorid (2x5 ml) og vann (1 x 10 ml) og ble tørket (MgSC<4). Det oppnådde residuet etter inndamping ble kromatografert over 25 g silikagel under eluering med 4:6 etylacetat:heksan, hvilket ga N-[(l,l-dimetyletoksyl)-karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (64 mg, 33%). LRMS-Elektrospray: m/z positivt ion, 795 (2M+Na) 409 (M+Na) 387 (M+H). HRMS: Obs. masse 387,1935. Beregnet masse 387,1920 (M+H).
Eksempel 22.
4-(l-Metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid
En løsning av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (60 mg, 0,155 mmol) i 4 N HC1 i dioksan (4 ml) ble rørt i 2 timer og ble inndampet. Residuet ble gnidd ut med mange porsjoner av eter, hvilket ga 4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid (55 mg, quant) som et hvitt pulver. LRMS-Elektrospray : m/z positivt ion 573 (2M+H) 328 (M+H+CH3CN) 319 (M+H+CH30H) 287 (M+H). HRMS: Obs. masse 287,1396. Beregnet masse 287,1396
(M+H)
Eksempel 23.
N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester.
En løsning av 4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid (52 mg, 0,16 mmol), 2-brom-5-metoksybenzosyre (45 mg, 0,19 mmol), DIEA (140 ul, 0,80 mmol) og HBTU (85 mg, 0,22 mmol) i DMF (3 ml) ble rørt ved romtemperatur i 18 timer. Blandingen ble inndampet, residuet ble oppløst i etylacetat (15 ml), ble vasket med 0,5 N HC1 (1x5 ml), mettet NaHC03(lx 5 ml), saltvann (1 x 5 ml) og ble tørket (MgS04). Det oppnådde residuet etter inndamping (85 mg) ble kromatografert på 25 g silikagel under eluering med etylacetat, hvilket ga N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (54 mg, 68%). HRMS: Obs. masse 499,0872.
Beregnet masse 499,0869 (M+H)
Eksempel 24.
N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
En løsning av N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (52 mg, 0,104 mmol) i THF (3 ml) ble behandlet med en løsning av litiumhydroksyd-monohydrat (20 mg, 0,47 mmol) i vann (1,0 ml). Metanol (0,5 ml) ble tilsatt for å oppnå en klar løsning, og reaksjonsblandingen ble rørt 18 timer. Eddiksyre (0,5 ml) ble tilsatt, hele reaksjonsblandingen ble satt på en 4 x 30 cm, C-18 reversfase-HPLC-kolonne og eluert med en gradient av acetonitril i vann på 5 til 95% over 35 min. Den produktholdige fraksjon ble frysetørket, hvilket ga N-f(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin (39 mg, 78%) som et hvitt, fast stoff. HRMS: Obs. masse 485,0703 Beregnet masse 485,0712 (M+H).
Eksempel 25.
4-(5-Brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-t(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester.
løsning av 3,5-dibrom-l-metyl-2-pyridon (267 mg, 1,0 mmol) og N-[(l,l-
dimetyletoksy)karbonyl]-4-[(tributyl)stannyl]-L-fenylalanin-metylester (568 mg, 1,0 mmol) i DMF (7 ml) ble deoksygenert ved skiftevis frysing av blandingen i et flytende nitrogenbad under vakuum og tining under argon (3 X). Bis(trifenylfosfin)palladium-diklorid (80 mg, 0,11 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet til 90 °C i 3 timer, hvorved blandingen ble mørk. TLC viste at reaksjonen ikke var fullstendig, og en ytterligere 40 mg porsjon av katalysatoren ble tilsatt og oppvarming fortsatte i 4 timer. Blandingen fikk avkjøles og ble fortynnet med diklormetan (40 ml) og filtrert gjennom et sjikt av Celite. Filtratet ble inndampet til tørrhet, og residuet ble oppløst i etylacetat (30 ml). Løsningen ble vasket med vann (1 x 10 ml), 5% kaliumfluorid (2 x 10 ml) og saltvann (1x5 ml) og ble tørket (MgSCv). Det oppnådde residuet etter inndamping ble kromatografert over 45 g silikagel under eluering med 3:7 etylacetat:heksan, hvilket ga 4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-L-fenylalanin-metylester (140 mg, 30%). FAB MS: 465 (M+H (1 Br)).
Eksempel 26.
4-(5-Brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid
En løsning av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (135 mg, 0,29 mmol) i 4 N HC1 i dioksan (5 ml) ble rørt i 2 timer og ble inndampet. Residuet ble gnidd ut med mange porsjoner av eter, hvilket ga 4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid (120 mg, kvantitativt) som et hvitt pulver. LRMS-Elektrospray : m/z positivt ion 729,2M+H (2 Br), 406 (M+H+CH3CN), 397 (M+H+CH3CN (1 Br)), 365 (M+H (1 Br)). HRMS: Obs. masse 365,0504. Beregnet masse 365,0501 (M+H).
Eksempel 27.
N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester
En løsning av 4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid (120 mg, 0,30 mmol), 2-brom-5-metoksybenzosyre (82 mg, 0,36 mmol), DIEA (260 ul, 1,5 mmol) og HBTU (157 mg, 0,41 mmol) i DMF (4 ml) ble rørt ved romtemperatur i 18 timer. Blandingen ble inndampet, residuet ble oppløst i etylacetat (15 ml), ble vasket med 0,5 N HC1 (1x5 ml), mettet NaHC03(1x5 ml), saltvann (1 x 5 ml) og ble tørket (MgS04). Det oppnådde residuet etter inndamping (180 mg) ble kromatografert på 25 g silikagel under eluering med 3:1 etylacetat:heksan, hvilket ga N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (130 mg, 76%). HRMS: Obs. masse 576,9959. Beregnet masse 576,9973 (M+H)
Eksempel 28.
N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
En løsning av N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (29 mg, 0,05 mmol) i THF (3 ml) ble behandlet med en løsning av Htiumhydroksyd-monohydrat (20 mg, 0,47 mmol) i vann (1,0 ml). Metanol (0,5 ml) ble tilsatt for å oppnå en klar løsning, og reaksjonsblandingen ble rørt 18 timer. Eddiksyre (0,5 ml) ble tilsatt, hele reaksjonsblandingen ble satt på en 4 x 30 cm, C-18 reversfase HPLC-kolonne og eluert med en gradient av acetonitril i vann på 5 til 95% over 35 min. Den produktholdige fraksjon ble frysetørket, hvilket ga N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(5-brom-1 -metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin (22 mg, 79%) som et hvitt, fast stoff. HRMS: Obs. masse 562,9814. Beregnet masse 562,9817
(M+H).
Eksempel 29.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-( 1 -metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester
Til en suspensjon av 4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hy6!roklorid-salt (101 mg, 0,313 mmol), 2-klor-6-metylbenzosyre (60 mg, 0,35 mmol) og HBTU (133 mg, 0,35 mmol) i DMF (2 ml) sattes DIEA (122 (il, 0,88 mmol) ved romtemperatur. Den resulterende blanding ble rørt i 15 timer. Deretter ble blandingen hellet i vann (25 ml), og den organiske forbindelsen ble ekstrahert med etylacetat (2 x 15 ml). De samlede etylacetat-ekstrakter ble vasket suksessivt med 0,5 N HC1 (25 ml), mettet NaHCXVløsning (25 ml), saltvannsløsning (25 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet som ble renset ved silikagelkromatografi ved anvendelse av en Biotage (40s) kolonne, hvilket ga 122 mg (88% utbytte) av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylestersom et amorft hvitt fast stoff. FAB-HRMS m/e beregnet for C24H23CIN2O4(M+H) 439,1425, funnet 439,1414.
Eksempel 30.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-( 1 -metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
Til en suspensjon av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (118 mg, 0,269 mmol) i etanol (6 ml) sattes IN vandig natrium-hydroksydløsning (4 ml) ved romtemperatur. Den resulterende løsning ble oppvarmet til 50 °C og rørt i 2 timer. Deretter ble etanolen fjernet under vakuum, og residuet ble fortynnet med vann (25 ml). Den vandige løsningen ble vasket med dietyleter (25 ml) for å fjerne alle nøytrale urenheter. Det vandige sjiktet ble surgjort med 1,0 N HC1, og produktet ble ekstrahert med etylacetat (2 x 25 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (50 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga 81 mg (71% utbytte) av N-[(2-klor-6-metylfenyl)-karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin som et hvitt, fast stoff: Sm.p. 204-210 °C. FAB-HRMS m/e beregnet for C23H21CIN2O4(M+H) 425,1268, funnet 425,1267.
Eksempel 31.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l ,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
a) Fremstilling av 1,4-dimetyl-2( 1 H)-pyridon
Til en suspensjon av 4-methyl-2(lH)-pyridon (5 g, 45,82 mmol) og kaliumkarbonat (12,64 g, 91,64 mmol) i DME (100 ml) sattes jodmetan (50,5 g, 366 mmol) ved romtemperatur, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til tilbakeløp natten over. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, hellet i vann (200 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (200 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne, hvilket ga 2,5 g (44% utbytte) av l,4-dimetyl-2(lH)-pyridon som et amorft hvitt fast stoff. FAB-HRMS m/e beregnet for C7H9NO (M+H) 123,0241, funnet 123,0246. b) Fremstilling av l,4-dimetyl-3-jod-2(lH)-pyridon og l,4-dimetyl-5-jod-2(lH)-pyridon
En reaksjonsbl anding inneholdende l,4-dimetyl-2-pyridon (2,46 g, 20 mmol), trifluoreddiksyre (31 ml) og trifluoreddiksyreanhydrid (6,25 ml) ble tilbakeløpskokt i 5 min. Deretter ble NIS (5,62 g, 25 mmol) tilsatt, og blandingen ble rørt i 15 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatu, og løsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Residuet ble fortynnet med etylacetat (100 ml), og det hvite, faste stoffet som ble dannet, ble oppsamlet ved filtrering. Filtratet ble vasket med mettet natriumbikarbonat-løsning (2 x 100 ml), saltvannsløsning (100 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping på løsningsmidlet ga et råprodukt som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne, hvilket ga 0,92 g (5% utbytte) av en -1:1 blanding av l,4-dimetyl-3-jod-2(lH)-pyridon og l,4-dimetyl-5-jod-2(lH)-pyridon som ble anvendt direkte i neste trinn.<*>H NMR (300 MHz, D6-DMSO, ppm) 8,06 (s, 1H), 7,6 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 6,4 (s, 1H), 6,2 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 3,4 (s, 3H), 3,3 (s, 3H), 2,3 (s, 3H), 2,15 (s, 3H). c) Fremstilling av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester og N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-(l ,4-dimetyl-2-okso-5-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester
Til en suspensjon av sinkstøv (0,66 g, 10 mmol) i THF (1,0 ml) sattes 1,2-dibrometan (86 (xl, 1 mmol)) ved romtemperatur. Denne suspensjonen ble oppvarmet til 60-65 °C med en varmepistol inntil utvikling av etylengass opphørte. Deretter ble suspensjonen avkjølt til romtemperatur og trimetylklorsilan (0,126 ml, 1 mmol)) ble tilsatt, og blandingen ble rørt i 15 min. En blanding av l,4-dimetyl-3-jod-2(lH)-pyridon og l,4-dimetyl-5-jod-2(lH)-pyridon (0,92 g, 3,69 mmol) i DMA (3 ml) ble oppvarmet for å bevirke oppløsning og ble satt i én porsjon til reaksjonsblandingen. Etter tilsetning ble blandingen oppvarmet til 70 °C og ble rørt i 15 timer, på hvilket tidspunkt TLC-analyse av en alikvot, som hadde blitt behandlet med mettet ammoniumklorid-løsning, viste fravær av utgangsmateriale. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med THF (4 ml) og ble avkjølt til romtemperatur. Overskudd av sinkstøv fikk sette seg inntil en klar supernatant av væske var dannet (~3 h). Den ovenfor fremstilte løsning inneholdende sinkforbindelsen (3,69 mmol) ble satt til en løsning av Pd(dba)2(54 mg, 0,1 mmol), trifurylfosfin (102 mg, 0,4 mmol) og N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-4-jod-L-fenylalanin-metylester (1,01 g, 2,5 mmol) i THF (4 ml) ved romtemperatur, og den lyse gule blanding ble rørt i 15 timer ved 50 °C. Deretter ble blandingen hellet i en mettet ammoniumklorid-løsning og ble ekstrahert med etylacetat (3 x 50 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (150 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne for å oppnå 0,141 g (14% utbytte) av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C22H28N2O5(M+Na) 423,1890, funnet 423,1894 og 0,350 g (35% utbytte) av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-5-pyirdinyl)-L-fenylalanin-metylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C22H28N2O5(M+Na) 423,1890, funnet 423,1897.
d) Fremstilling av 4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt
Til en løsning av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (132 mg, 0,33 mmol) i dioksan (1 ml) sattes 4 N HC1 løsning i dioksan (1,5 ml) ved romtemperatur. Løsningen ble rørt i 4 timer og inndampet under vakuum. Residuet ble oppløst i metanol (5 ml) og toluen (5 ml) og inndampet under vakuum, hvilket ga 111 mg (99% utbytte) av 4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyirdinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt som et amorft hvitt fast stoff. EI-HRMS m/e beregnet for C7H20N2O3(M<+>) 300,1474, funnet 300,1486.
e) Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester
Til en suspensjon av 4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt (34 mg, 0,1 mmol) og 2,6-diklorbenzoylklorid (25 mg, 0,12 mmol) i diklormetan (2 ml) sattes DIE A (174 ul, 1,0 mmol) ved romtemperatur. Etter 5 min ble en klar løsning oppnådd som ble rørt i 72 timer. Deretter ble blandingen inndampet, residuet ble oppløst i etylacetat (25 ml), ble vasket med 0,5 N HC1 (25 ml), mettet NaHC03løsning (25 ml), saltvannsløsning (15 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga et råprodukt, som ble renset ved silikagelkromatografi ved anvendelse av en Biotage (40s) kolonne, hvilket ga 23 mg (49% utbytte) av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l ,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C24H22CI2N2O4(M+Na) 495,0850, funnet 495,0859. f) Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
Til en suspensjon av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (20 mg, 0,04 mmol) i etanol (1 ml) sattes IN vandig natrium-hydroksydløsning (0,5 ml) ved romtemperatur. Blandingen ble oppvarmet til 40-45 °C og rørt i 3 timer. Deretter ble etanolen fjernet under vakuum, og residuet ble fortynnet med vann (10 ml). Den vandige løsningen ble vasket med dietyleter (25 ml) for å fjerne alle nøytrale urenheter. Det vandige sjiktet ble surgjort med 1,0 N HC1, og produktet ble ekstrahert med etylacetat (2 x 25 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (50 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga 17 mg (89% utbytte) av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C23H20CI2N2O4(M+Na) 481,0691, funnet 481,0699.
Eksempel 32.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
a) Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester
Til en suspensjon av 4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt (68 mg, 0,2 mmol), 2-klor-6-metylbenzosyre (45 mg, 0,25 mmol) og HBTU (95 mg, 0,25 mmol) i DMF (1,5 ml) sattes DIEA (174 ul, 1,0 mmol) ved romtemperatur. Den resulterende løsning ble rørt i 72 timer, blandingen ble hellet i vann (25 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (2x15 ml). De samlede etylacetat-ekstrakter ble vasket suksessivt med 0,5 N HC1 (25 ml), mettet NaHC03løsning (25 ml), saltvanns-løsning (25 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping av løsningsmidlet ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi ved anvendelse av en Biotage (40s) kolonne, hvilket ga 24 mg (27% utbytte av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-( 1,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C25H25CIN2O4(M+Na) 475,1395, funnet 475,1400.
b) Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
Til en suspensjon av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin-metylester (22 mg, 0,048 mmol) i etanol (1 ml) sattes IN vandig natriumhydroksyd-løsning (0,5 ml) ved romtemperatur. Den resulterende løsning ble oppvarmet til 40-45 °C og rørt i 2 timer. Deretter ble etanolen fjernet under vakuum, og residuet ble fortynnet med vann (25 ml). Den vandige løsningen ble vasket med dietyleter (25 ml) for å fjerne alle nøytrale urenheter. Det vandige sjiktet ble surgjort med 1,0 N HC1, og produktet ble ekstrahert med etylacetat (2 x 25 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (50 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga 18 mg (86% utbytte) av N-[(2-klor-6-metylfenyl)-karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C24H23CIN2O4(M+H) 439,1419, funnet 439,1425.
Eksempel 33.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l ,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
a) Fremstilling av l,6-dimetyl-4-(trilfuprmetyl)-2-pyridon
Til en suspensjon av 6-metyl-4-(trifluormetyl)-lH-2-pyridon (2 g, 11,25 mmol) og kaliumkarbonat (4,68 g, 33,9 mmol) i DME (25 ml) sattes jodmetan (9,62 g, 67,8 mmol) ved romtemperatur, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til tilbakeløp natten over. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, hellet i vann (100 ml) og ekstrahert med etylacetat (3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (200 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping av løsningsmidlet ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne for å oppnå 2,1 g (97% utbytte) av l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-pyridon som et hvitt, fast stoff: Sm.p. 80-82°C. EI-HRMS m/e beregnet for C8H8F3NO (M<+>) 191,0558, funnet 191,0559. b) Fremstilling av 1,6-dimetyl-3-jod-4-(trifluormetyl)-2-pyridon
En blanding inneholdende l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-pyridon (2,1 g, 10,98 mmol),
trifluoreddiksyre (18 ml) og trifluoreddiksyreanhydrid (3,5 ml) ble tilbakeløpskokt i 5 min. Deretter tilsattes NIS (3,15 g, 14 mmol), og reaksjonsblandingen ble rørt i 15 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og løsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Residuet ble fortynnet med etylacetat (100 ml), ble vasket med mettet
natriumbikarbonat-løsning (2 x 100 ml) og saltvannsløsning (100 ml), og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga et råprodukt, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne, hvilket ga 2,15 g (62% utbytte) av l,6-dimetyl-3-jod-4-(tirfluormetyl)-2-pyridon som et amorft hvitt fast stoff. EI-HRMS m/e beregnet for C8H7F3INO (M<+>) 316,9524, funnet 316,9527.
c) Fremstilling av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonylJ-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-metylester
Til en suspensjon av sinkstøv (1,96 g, 30 mmol) i THF (2,0 ml) sattes 1,2-dibrometan (172 1*1,2 mmol)) ved romtemperatur. Denne suspensjonen ble oppvarmet til 60-65 °C med en varmepistol inntil utvikling av etylengass opphørte. Deretter ble suspensjonen avkjølt til romtemperatur, og trimetylklorsilan (127 uJ, 1 mmol)) tilsattes, og blandingen ble rørt i 15 min. En suspensjon av l,6-dimetyl-3-jod-4-(tirfluormetyl)-2-pyridon (2,15 g, 6,78 mmol) i DMA (6 ml) ble oppvarmet med en varmepistol for å bevirke oppløsning og sattes i én porsjon til reaksjonsblandingen. Etter tilsetning ble blandingen oppvarmet til 70 °C og ble rørt i 15 timer, på hvilket tidspunkt TLC-analyse av en alikvot, som hadde blitt behandlet med mettet ammoniumklorid-løsning, viste fravær av utgangsmateriaie. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med THF (6 ml), ble avkjølt til romtemperatur, og overskuddet av sinkstøv fikk sette seg.
Den ovenfor fremstilte løsning inneholdende sinkforbindelsen (6,78 mmol) ble satt til en løsning av Pd(dba)2(108 mg, 0,2 mmol), trifurylfosfin (204 mg, 0,8 mmol) og N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-4-jod-L-fenylalanin-metyIester (1,62 g, 4 mmol) i THF (8 ml) ved romtemperatur, og den lyse gule blanding ble rørt i 15 timer ved 50 °C. Reaksjons blandingen ble hellet i en mettet ammoniumklorid-løsning og ble ekstrahert med etylacetat (3 x 70 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (ISO ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne for å oppnå 0,711 g (38% utbytte) av Nr[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C23H27F3N2O5(M+Na) 491,1764, funnet 491,1770.
d) Fremstilling av 4-[l ,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt
Til en løsning av N-[(l ,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-metylester (132 mg, 0,33 mmol) i dioksan (3 ml) sattes 4 N HCl-løsning i dioksan (4,5 ml) ved romtemperatur. Løsningen ble rørt i 4 timer, hvorved et hvitt, fast stoff ble dannet. Blandingen ble fortynnet med dietyleter (50 ml), og det faste stoff ble oppsamlet ved filtrering og vasket med dietyleter. Etter tørking under høyvakuum ble 315 mg (92% utbytte) av4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt oppnådd som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C8H19F3N2O3(M+Na) 391,1241, funnet 391,1241.
e) Fremstilling av N-[(2,6-dikloifenyl)karbonyI]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester
Til en suspensjon av 4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt (150 mg, 0,37 mmol) og 2,6-diklorbenzoylklorid (85 mg, 0,4 mmol) i diklormetan (6 ml) sattes DIEA (257 uJ, 1,48 mmol) ved romtemperatur. Etter 5 min ble en klar løsning oppnådd som ble rørt i 48 timer. Deretter ble blandingen inndampet, og residuet ble oppløst i etylacetat (50 ml). Etylacetatløsningen ble vasket med 0,5 N HC1 (50 ml), mettet NaHC03løsning (50 ml) og saltvannsløsning (50 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga et råprodukt, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne, hvilket ga 190 mg (95% utbytte) av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormety!)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C25H21CI2F3N2O4(M+Na) 563,0724, funnet 563,0726.
f) Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
Til en suspensjon av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-metylester (177 mg, 0,326 mmol) i etanol (6 ml) sattes IN vandig natriumhydroksyd-løsning (4 ml) ved romtemperatur. Blandingen ble rørt i 5 timer. Deretter ble etanolen fjernet under vakuum, og residuet ble fortynnet med vann (20 ml). Den vandige løsningen ble vasket med dietyleter (50 ml) for å fjerne alle nøytrale urenheter. Det vandige sjiktet ble surgjort med 1,0 N HC1, og produktet ble ekstrahert med etylacetat (2 x 50 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (50 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga 159 mg (92% utbytte) av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin som et hvitt, fast stoff: Sm.p. 238-240°C. ES-HRMS m/e beregnet for C24H,9Cl2F3N204(M+Na) 549,0567, funnet 549,0570.
Eksempel 34.
Fremstilling av N-[(2-etyl-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l ,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
a. Fremstilling av 2-etyl-6-metylbenzosyre.
En 250 ml trykk-kolbe ble fylt med 2-etyl-6-metyljodbenzen (30,07 mmol, 7,4 g), Pd(OAc)2(1,43 mmol, 334 mg) og dppp (1,43 mmol, 620 mg). Kolben ble lukket med et septum og evakuert tre ganger med argon. Deretter ble acetonitril (96 ml), trietylamin (189 mmol, 19,0 g, 26,25 ml) og vann (19,1 ml) tilsatt suksessivt ved hjelp av sprøyte, og gummi-septumet ble erstattet med et teflonforet lokk forbundet med en karbonmonoksydkilde. Kolben ble nå trykksatt med karbonmonoksyd (2,72 atm.) og overskudd av trykk ble sluppet ut. Denne prosessen ble gjentatt tre ganger, og til slutt ble blandingen rørt i 5 min under 2,72 atm. karbonmonoksydtrykk. Kolben ble deretter koblet fra karbonmonoksydsylinderen og nedsenket i et forut oppvarmet oljebad (83-85 °C). Reaksjonsblandingen ble sort i løpet av 1 time og ble rørt i 14 timer til ved denne temperatur. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, og trykket ble sluppet ut. Den resulterende blanding ble fortynnet med eter (200 ml) og 1,0N NaOH (20 ml). Den dannete syre ble ekstrahert over i vann (2 x 100 ml). De samlede vannekstrakter ble nøytralisert med 1,0N HC1, og syren ble ekstrahert over i diklormetan (3 x 100 ml). De samlede diklormetan-ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning og tørket over MgS04. Filtrering av tørkemiddelet og fjerning av løsningsmiddel under vakuum ga 3,58 g (72,5%) av en viskøs brun olje som langsomt størknet natten over. TIMER MS: Obs. masse, 164,0833. Beregnet masse, 164,0837 (M+).
b. Fremstilling av 2-etyl-6-metylbenzoylklorid
En løsning av 2-etyl-6-metylbenzosyre (49 mg, 0,30 mmol) i diklormetan (3 ml) inneholdende DMF (1 dråpe) ble behandlet med oksalylklorid (0,14 ml, 1,6 mmol), og blandingen ble rørt i 15 timer. Blandingen ble inndampet, azeotrop-behandlet med toluen for å fjerne spor av oksalylklorid, og residuet ble anvendt direkte i neste trinn.
c. Fremstilling av N-[(2-etyl-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifIuormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-metylester
Molvekt = 514.54
Molekylformel = C28H29F3N204
En blanding av det ovenfor fremstilte syreklorid, 4-(l,3-dimetyl-2,4fdiokso-6-(trifluormetyl)-5-pyrimidinyl)-L-fenylalanin (100 mg, 0,25 mmol) i diklormetan (5 ml) ble behandlet med DIPEA (0,17 ml, 1,0 mmol), og den resulterende lyse brune løsning ble rørt i 3 dager. Blandingen ble inndampet, fortynnet med etylacetat, vasket med 1 N HC1 og saltvannsløsning og ble tørket over magnesiumsulfat. Filtrering og inndamping ga en rest, som ble renset ved silikagelkromatografi ved anvendelse av en Biotage kolonne (40s), hvilket ga N-[(2-etyl-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,3-dimemy-2,4-diokso-6-(rrifluormetyl)-5-pyrimidinyl]-L-fenylalanin-metylester som et hvitt skum (79 mg, 62%). ES-HRMS m/e beregnet for C28H29F3NO4(M+Na) 537,1974, funnet 537,1972.
d. Fremstilling av N-[(2-etyl-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
En løsning av N-[(2-etyl-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,3-dimethy-2,4-diokso-6-(trifluormetyl)-5-pyrimidinyl)-L-fenylalanin-metylester (74 mg, 0,14 mmol) og 1 N natriumhydroksyd (2 ml, 2 mmol) i etanol (3 ml) ble oppvarmet til 40-45 C i 3 timer. Deretter ble etanolen fjernet under vakuum, og residuet ble fortynnet med vann. Den vandige løsningen ble vasket med dietyleter for å fjerne alle nøytrale urenheter. Det vandige sjiktet ble surgjort med 1,0 N HC1, og produktet ble ekstrahert med etylacetat. De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga 68 mg (95% utbytte) av N-[(2-etyl-6-metylfenyl)karbonyI]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifIuormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-I^fenylalanin (Sm.p. 219-221°C). ES-HRMS m/e beregnet for C27H27F3N2O4(M+Na) 523,1815, funnet 523,1816.
Eksempel 35,
Fremstilling av N-[(2-(l-metyletyl)-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyI-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
a). Fremstilling av 2-(l-metyletyl)-6-metyljodbenzen
Molvekt» 260.11
Molekylformel = C10H13l
Til en suspensjon av 2-(l-metyletyl)-6-metylanilin (15,57 mmol, 14,9 g), i kons. HC1 (50 ml) og 30 g is sattes dråpevis en løsning av NaN02(110 mmol, 8 g) i H20 (35 ml) ved -5 °C til 5 °C i 30 min. Etter tilsetningen ble den rødfargete løsning rørt i 30 min til. Deretter tilsattes en løsning av Kl (200 mmol, 33,2 g) i H20 (50 ml) dråpevis over 20 min ved 0-5 °C. Etter tilsetningen fikk blandingen oppvarmes dl romtemperatur hvorunder en eksoterm omsetning med gassutvikling fant sted. Den resulterende rødfargete løsning ble rørt i 18 timer. Deretter ble blandingen ekstrahert med etylacetat (3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med natriumtiosulfat-løsning (200 ml), saltvannsløsning og tørket over MgSC<4. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping av løsningsmidlet under vakuum ga en farget forbindelse som ble renset ved en silikagel-kolonnekromatografi for å oppnå rent 2-(l-metyletyl)-6-metyljodbenzen (17,8 g, 68%) som en gul olje. HR MS: Obs. masse, 260,0063. Beregnet, masse, 260,0062 (M+).
b) Fremstilling av 2-(l-metyletyl)-6-metylbenzosyre.
IJnKfor^11riOH1^ Molvekt = 178.23
Molekylformel = C10H13I Molekylformel = C11H1402
En 250 ml trykk-kolbe ble fylt med 2-(I-metyletyl)-6-metyljodbenzen (25,2 mmol, 6,55 g), Pd(OAc)2(1,2 mmol, 280 mg) og dppp (1,2 mmol, 520 mg). Kolben ble lukket med et septum og evakuert tre ganger med argon. Deretter ble acetonitril (96 ml), trietylamin (188,7 mmol, 19,0 g, 26,25 ml) og vann (19,1 ml) tilsatt suksessivt ved hjelp av sprøyte. Deretter ble gummiseptumet erstattet med et teflonforet lokk forbundet med en karbonmonoksydkilde. Kolben ble nå trykksatt med karbon- monoksyd (2,72 atm.) og overskudd av trykk ble sluppet ut. Denne prosessen ble gjentatt tre ganger, og til slutt ble blandingen rørt i 5 min under 2,72 atm. karbon- monoksydtrykk. Kolben ble deretter koblet fra karbonmonoksydsylinderen og nedsenket i et forvarmet oljebad (83-85 °C). Reaksjonsblandingen ble sort i løpet av 1 time og ble rørt i 4 timer til ved denne temperaturen. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, trykket ble sluppet ut, og blandingen ble fortynnet med eter (200 ml) og 1,0N NaOH (10 ml). Syren ble ekstrahert over i vann (2 x 100 ml). De samlede vandige ekstrakter ble nøytralisert med 1,0N HC1, og syren ble ekstrahert med etylacetat (2 x 100 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning og tørket over MgSC«4. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga 2,8 g (62%) av en viskøs, gul olje. HS MS: Obs. masse, 178,0996. Beregnet, masse, 178,0994 (M+).
c. Fremstilling av 2-(l-metyletyl)-6-metylbenzoylklorid
Molekylvekt = 196.68
Molekylformel = C11H13CIO
En løsning av 2-(l-metyletyl)-6-metylbenzosyre (64 mg, 0,35 mmol) i diklormetan (3 ml) inneholdende DMF (2 dråper) ble behandlet med oksalylklorid (0,16 ml, 1,8 mmol), og blandingen ble rørt i 15 timer. Blandingen ble inndampet, azeotrop-behandlet med toluen for å fjerne spor av oksalylklorid, og residuet ble anvendt direkte i neste trinn.
d. Fremstilling av N-[[2-(l-metyletyl)-6-metylfenyl]karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
Molvekt: 514.54
N-[[2-(l -metyletyl)-6-metylfenyl]karbonyl]-4-[ 1,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyI]-L-fenylalanin ble fremstilt fra 4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester og 2-(l-metyletyl)-6-metylbenzoylklorid ved anvendelse av de generelle metoder beskrevet i eksempel 33. ES-HRMS m/e beregnet for C28H29F3N2O4 (M+Na) 537,1972, funnet 537,1977.
Eksempel 36.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
a) Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester
C26H24CIF3N204 ci8H2oCIF3N2°3 Molvekt: 520.93 Molvekt: 404.81
Til en suspensjon av4-[l,6-dimetyl-4-(trifluoimetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt (100 mg, 0,25 mmol), 2-klor-6-metylbenzosyre (60 mg, 0,35 mmol) og HBTU (132 mg, 0,35 mmol) i DMF (2 ml) sattes DIEA (174 pl, 1,0 mmol) ved romtemperatur. Den resulterende blanding ble rørt i 72 timer. Deretter ble blandingen hellet i vann (25 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (2x15 ml). De samlede etylacetat-ekstrakter ble vasket suksessivt med 0,5 N HC1 (25 ml), mettet NaHC03-løsning (25 ml), saltvannsløsning (25 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet som ble renset ved silikagelkromatografi ved anvendelse av en Biotage (40s) kolonne, hvilket ga 98 mg (75% utbytte) av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyM-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-metylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C26H24CIF3N2O4(M+Na) 543,1268, funnet 543,1275.
b) Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-
<C>26<H>24<C>,<F>3<N>2°4C25<H>22<C>,<F>3<N>2°4
Motvekt: 520.93 Molvekt: 506.90 okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
Til en suspensjon av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-metylester (91 mg, 0,174 mmol) i etanol (5 ml) sattes IN vandig natriumhydroksyd-løsning (4 ml) ved romtemperatur. Den resulterende løsning ble oppvarmet til 40-45<*>C og rørt i 4 timer. Deretter ble etanolen fjernet under vakuum, og residuet ble fortynnet med vann (25 ml). Den vandige løsningen ble vasket med dietyleter (25 ml) for å fjerne alle nøytrale urenheter. Det vandige sjiktet ble surgjort med 1,0 N HC1 og ble ekstrahert med etylacetat (2 x 25 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (50 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping på filtratet ga 71 mg (80% utbytte) av N-[(2-klor-6- metylfenyl)karbonyl]-4-[] ,6-d^ som et hvitt, fast stoff: Sm.p. 220-223°C. ES-HRMS m/e beregnet for C25H22CIF3N2O4(M+Na) 529,1111, funnet 529,1119.
Eksempel 37.
Fremstilling av N-[[ 1 -(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-4-[ 1,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin
^26^31 F3N2O5
Motvekt: 508.53
N-t[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin (Sm.p. 181-183°C) ble fremstilt fra4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester og 1 -(2-metoksyetyl)cyklopentan-karboksylsyre (oppnådd som beskrevet i WO 9910313) ved anvendelse av de generelle metoder beskrevet i eksempel 36. ES-HRMS m/e beregnet for C26H31F3N2O5(M+Na) 531,2077, funnet 531,2084.
Eksempel 38.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[1,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-etylester
<C>24H19CI2F3N204CMH23CI2F3Na04 Motvekt: 527.32 Molvekt: 555.37
Til en suspensjon av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin (145 mg, 0,275 mmol) og natriumbikarbonat (185 mg, 2,2 mmol) i DMF (2 ml) sattes jodetan (343 mg, 2,2 mmol) ved romtemperatur. Blandingen ble rørt i 72 timer ved romtemperatur. Deretter ble reaksjonsblandingen hellet i vann (30 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (3 x 20 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (60 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping av filtratet ga 129 mg (85% utbytte) av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyI-4-(trifIuonnetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-etylester som et krystallinsk hvitt fast stoff: Sm.p. 86-91 "C. ES-HRMS m/e beregnet for C26H23C]2F3N204(M+Na) 577,0876, funnet 577,0887.
Eksempel 39.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l ,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester
C24H1SCI2F3N204CaoH^CyV^
Molvekt: 527.32 Molvekt: 626.49
Til en blanding av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenyIalanin (145 mg, 0,275 mmol), 2-dietylaminoetylklorid hydroklorid (487 mg, 2,75 mmol) og kaliumkarbonat (380 mg, 2,7 mmol) sattes etylacetat (3 ml) og vann (3 ml) ved romtemperatur. Blandingen ble rørt i 72 timer ved romtemperatur. Deretter ble reaksjonsblandingen hellet i en blanding av vann (30 ml) og etylacetat (30 ml). Sjiktene ble separert, og det vandige sjiktet ble ekstrahert med etylacetat (2 x 20 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (60 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi ved anvendelse av en Biotage (40s) kolonne ga 122 mg (71% utbytte) av N-t(2,6-dik]orfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyI-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C3oH32Cl2F3N304(M+H) 626,1796, funnet 626,1802.
Eksempel 40.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfeny])karbonyl]-4-[l ,6-dimetyl-4-(trifluormetyl>2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-l-(acetoksy)etylester
C24H19CI2F3N204<C>a6<H>as<CI>2F3N2Oe
Molvekt: 527.32 Molvekt: 613.41
Til en suspensjon av N-t(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimety]-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin (145 mg, 0,275 mmol) og natriumbikarbonat (185 mg, 2,2 mmol) i DMF (2 ml) sattes 1-kloretylacetat (270 mg, 2,2 mmol) ved romtemperatur. Blandingen ble rørt i 48 timer ved romtemperatur. Deretter ble reaksjonsblandingen hellet i vann (30 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (3 x 20 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (60 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi ved anvendelse av en Biotage (40s) kolonne, hvilket ga 110 mg (65% utbytte) av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l ,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-l-(acetoksy)etylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet forCjsHasCfeFsNjOe(M+Na) 635,0931, funnet 635,0932.
Eksempel 41.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[ 1,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-etylester ..
C27H26C1F3N204
Molvekt: 534.95
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyI-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridiny]]-L-fenylalantn-etylester kan fremstilles fra N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonylJ-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin og jodetan ved anvendelse av den generelle metode beskrevet i eksempel 38.
Eksempel 42.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[ 1,6-dirnetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester
C31<H>35C1<F>3N304
Molvekt: 606.08
N-[(2-klor-6-metyIfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyI)amino]etylester kan fremstilles fra N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trilfuoirnetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylal^ og 2-[(N,N-dietyl)amino]etylklorid-hydroklorid ved anvendelse av den generelle metode beskrevet i eksempel 39.
Eksempel 43.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l ,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylaIanin-1 -(acetoksy)etylester
q9H28<ClF>3<N>206
Molvekt: 592.99
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trilfuometyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-l-(acetoksy)etylester kan fremstilles fra N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyI)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin og 1-kloretylacetat ved anvendelse av den generelle prosedyre beskrevet i eksempel 40.
Eksempel 44.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
a) Fremstilling av 4-metoksy-l,l,l-trifluorpent-3-en-2-on
C4H80 C4F603C6H7F302
Molvekt: 72.11 Molvekt: 210.03 Molvekt: 168.11
Til en løsning av 2-metoksypropen (3,68 g, 51,03 mmol) og pyridin (1,35 g, 16,69 mmol) i diklormetan (15 ml) sattes en løsning av trifluoreddiksyreanhydrid (10 ml, 46,56 mmol) i diklormetan (8 ml) ved 0°C over et tidsrom på 10-12 min. Etter tilsetningen ble løsningen mørk rødbrun, og deretter ble kjølebadet fjernet og røring ble stanset. Blandingen fikk stå i 16 timer og ble fortynnet med kaldt vann (45 ml) og diklormetan (120 ml). De to sjikt ble separert, og det organiske sjiktet ble vasket suksessivt med 2N HC1 (35 ml), mettet natriumkarbonat-løsning (75 ml) og saltvannsløsning (25 ml) og ble tørket over vannfritt natriumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet, som ble renset ved destillering under høyvakuum, hvilket ga 5,546 g (65% utbytte) av 4-metoksy-l,l,l-trifluorpent-3-en-2-on som en lysegul olje.
b) Fremstilling av 4-metyl-2(lH)-okso-6-(trifluormetyl)pyridin-3-karboksylsyre-etylester
Molvekt: 168.11 Molvekt: 131.13 Molvekt: 249.19
Til en suspensjon av 4-metoksy-l,l,l-trifluorpent-3-en-2-on (5,53 g, 32,89 mmol) og etyl malonat monoamid (4,31 g, 32,89 mmol) i etanol (30 ml) sattes natriumetoksyd (11,72 g, 36,18 mmol, 21% ren) ved romtemperatur, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til
-85°C. Etter røring i 18 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og 15% HC1 (10 ml) tilsattes. Deretter ble den fortynnet med vann (10 ml) og ekstrahert med kloroform (2 x 50 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (100 ml) og ble tørket over vannfritt natriumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne, hvilket ga 5,22 g (62% utbytte) av 4-metyl-2(lH)-okso-6-(tirfluormetyl)pyridin-3-karboksylsyre-eiylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-LRMS: m/z 313,4 (M+Na+CH3CN). c. Fremstilling av l,4-dimetyl-2(lH)-okso-6-(trifluormetyl)pyridin-3-karboksylsyre-etylester
<C>10<H>10F3NO3ChHuFjNOj
Molvekt: 249.19 Molvekt: 263.22
Til en suspensjon av 4-metyl-2(lH)-okso-6-(trifluormetyl)pyridin-3-karboksylsyre-etylester (5,2 g, 20,87 mmol) og kaliumkarbonat (8,65 g, 62,59 mmol) i DME (50 ml) sattes jodmetan (12 ml, 192,8 mmol) ved romtemperatur, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, og de uorganiske faste stoffer ble filtrert, og de faste stoffer ble vasket med DME. Løsnings-midlet ble inndampet under vakuum, og residuet ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne, hvilket ga 4,02 g (71% utbytte) av l,4-dimetyl-2(1H)-okso-6-(trifluormetyl)pyridin 3-karboksylsyre-etylester som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C11H12F3NO3(M+Na) 286,0661, funnet 286,0664.
d) Fremstilling av l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-lH-pyridin-2-on
CnH]2F3N03C8H8<F>3NO
Molvekt: 263.22 Molvekt: 191.15
Til en blanding av l,4-dimetyl-2(lH)-okso-6-(trifluormetyl)pyridin-3-karboksylsyre-etylester (2,5 g, 9,5 mmol) og litiumklorid (1,0 g, 23,6 mmol) sattes DMF (15 ml) og vann (0,38 ml) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til en badtemperatur på 160°C og rørt i 19 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og fortynnet med kald etylacetat og dietyleter (75 ml, 1:1). Den resulterende blanding ble vasket med kaldt vann (3 x 20 ml) og saltvannsløsning (20 ml) og ble tørket over vannfritt natriumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping på løsningsmidlet ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40s) kolonne, hvilket ga 1,45 g (80% utbytte) av l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-lH-pyridin-2-on som et lysegult, fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for CgH8F3NO (M+H) 192,0631, funnet 192,0632.
e) Fremstilling av l,4-dimetyl-3-jod-6-(trifluormetyl)-lH-pyridin-2-on
<C>8<HgF>3<NO>C8H7F3INO
Molvekt: 191.15 Molvekt: 317.04
Til en løsning av l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-lH-pyridin-2-on (1,44 g, 7,23 mmol), trifluoreddiksyre (9 ml) og trifluoreddiksyreanhydrid (1,53 ml, 10,85 mmol) sattes NIS (2,569 g, 10,85 mmol) ved romtemperatur. Deretter ble blandingen oppvarmet til 70-85°C og ble rørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, og mettet natriumkarbonat-løsning ble langsomt tilsatt for å nøytralisere løsningen. Deretter ble den vandige blandingen ekstrahert med etylacetat (2 x 50 ml). De samlede ekstrakter ble vasket suksessivt med mettet natriumtiosulfat-løsning (100 ml) og saltvannsløsning (100 ml) og ble tørket over vannfritt natriumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping på løsningsmidlet ga et råprodukt, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne, hvilket ga 1,02 g (45% utbytte) av l,4-dimetyl-3-jod-6-(trifluormetyl)-lH- . pyridin-2-on som et amorft hvitt fast stoff. ES-LRMS: m/z 318,1 (M+H), 381,2 (M+Na+CH3CN).
f) Fremstilling av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester
Til en suspensjon av sinkstøv (1,96 g, 30 mmol) i THF (1,0 ml) sattes 1,2-dibrometan (172 Hl, 2 mmol)) ved romtemperatur. Denne suspensjonen ble oppvarmet til 60-65 °C med en varmepistol inntil utvikling av etylengass opphørte. Deretter ble suspensjonen avkjølt til romtemperatur og trimetylklorsilan (150 ul, 1,2 mmol)) tilsatt, og blandingen ble rørt i 15 min. En suspensjon av l,4-dimetyl-3-jod-6-(tirfluormetyl)-2-pyridon (2,4 g, 7,57 mmol) i DMA (6 ml) ble oppvarmet med en varmepistol for å bevirke oppløsning og sattes i én porsjon til reaksjonsblandingen. Etter tilsetningen ble blandingen oppvarmet til 70-75 °C og ble rørt i 2 timer, på hvilket tidspunk TLC-analyse av en alikvot, som hadde blitt behandlet med mettet ammoniumklorid-løsning, viste fravær av utgangsmateriale. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med THF (5 ml), ble avkjølt til romtemperatur og overskudd av sinkstøv fikk sette seg.
Den ovenfor fremstilte løsning inneholdende sinkforbindelsen (7,57 mmol) ble satt til en løsning av Pd(dba)2(274 mg, 0,478 mmol), trifurylfosfin (391 mg, 1,287 mmol) og N-[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-4-jod-L-fenylalanin-metylester (3 g, 7,411 mmol) i THF (7 ml) ved romtemperatur, og den lyse gule blanding ble rørt i 40 timer ved 50-55 °C. Reaksjonsblandingen ble hellet i en mettet ammoniumklorid-løsning og ble ekstrahert med etylacetat (3 x 70 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (100 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga råproduktet, som ble renset ved silikagelkromatografi på en Biotage (40m) kolonne for å oppnå 1,289 g (36% utbytte) av N-[(l,l-dimetyletoksyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester som et amorft hvitt fast stoff. ÉS-HRMS m/e beregnet for C23H27F3N205(M+Na) 491,1764, funnet 491,1764.
g) Fremstilling av 4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt
N-[(l, 1 -dimetyletoksyl)karbonyl]-4-[ 1,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester (253 mg, 0,54 mmol) ble behandlet med 4 N HCl-løsning i dioksan (4,0 ml) ved romtemperatur. Løsningen ble rørt i 2 timer hvorved et hvitt, fast stoff ble dannet. Blandingen ble inndampet, og residuet ble oppløst i metanol. Etter fjerning av metanol, ble residuet tørket under høyvakuum for å oppnå 221 mg (100% utbytte) av 4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt som et amorft hvitt fast stoff. ES-LRMS m/z 369,3 (M+H), 410,3 (M+CH3CN).
h) Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyI]-4-[l,4-dimetyl-6-(trilfuormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester
Til en suspensjon av 4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester-hydroklorid-salt (216 mg, 0,53 mmol) og 2,6-diklorbenzoylklorid (120 mg, 0,57 mmol) i THF (6 ml) sattes DIEA (210 (il, 1,19 mmol) ved romtemperatur. Etter 5 min ble en klar løsning oppnådd som ble rørt i 18 timer. Deretter ble blandingen fortynnet med etylacetat (50 ml). Etylacetat- løsningen ble vasket suksessivt med 0,5 N HC1 (50 ml), mettet NaHCOj-løsning (50 ml) og saltvannsløsning (50 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga et råprodukt som ble oppløst i etylacetat (~3 ml) og heksaner (-3-4 ml) tilsatt og lagret i kjøleskap. Det faste stoffet ble oppsamlet og vasket med heksaner. Etter tørking under høyvakuum ble 270 mg (93,5% utbytte) av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester oppnådd et hvitt, fast stoff: Sm.p. 170-173 °C. ES-HRMS m/e beregnet for C25H21CI2F3N2O4(M+Na) 563,0724, funnet 563,0730.
i) Fremstilling av N-[(2,6-dMldoifenyl)karbonyl]-4-(l,4-dim^ pyridinyl)-L-fenylalanin
Til en suspensjon av N-[(2,6-dikJorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-metylester (243 mg, 0,45 mmol) i etanol (5 ml) sattes IN vandig natriumhydroksyd-løsning (1,8 ml) ved romtemperatur. Blandingen ble oppvarmet til 45-50 °C og ble rørt i 2 timer. Deretter ble etanolen fjernet under vakuum, og residuet ble fortynnet med vann (20 ml). Den vandige løsningen ble vasket med etylacetat (50 ml) for å fjerne alle nøytrale urenheter. Det vandige sjiktet ble surgjort med 1,0 N HC1, og produktet ble ekstrahert med etylacetat (2 x 50 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket med saltvannsløsning (50 ml) og ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Filtrering av tørkemiddelet og inndamping ga 186 mg (79% utbytte) av N-[(2,6-diklorfenyl)karbbnyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenyla]anin som et amorft hvitt fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C24H19CI2F3N2O4(M+Na) 549,0567, funnet 549,0573.
Eksempel 45.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l ,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin
Molvekt: 506.90
N-[(2-klor-6-metyIfenyI)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-6-(trilfuonnety])-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin ble fremstilt fra4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-metylester og 2-klor-6-metylbenzoylklorid ved anvendelse av de generelle metoder beskrevet i eksempel 44. ES-LRMS m/z 507,1 (M+H), 529,1 (M+Na).
Eksempel 46.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyirdinyl]-L-fenylalanin-etylester
C27H26CIF3N2°4
Molvekt: 534.95
N-[(2-kIor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trilfuonnetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-l^fenylalanin-etylester kan fremstilles fra N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin og jodetan ved anvendelse av den generelle prosedyre beskrevet i eksempel 38.
Eksempel 47.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l ,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-2-[(N,N-dietyl)amino]etylester
C31H35CIF3N3<0>4
Molvekt: 606.08
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester kan fremstilles fra N-[(2-klor-6-metylfenyl> karbonyl]-4-[l ,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin og 2-[(N,N-dietyl)amino]etylklorid-hydroklorid ved anvendelse av den generelle prosedyre beskrevet i eksempel 39.
Eksempel 48.
Fremstilling av N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l ,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-1 -(acetoksy)etylester
CjgHaeCIFaNA
Molvekt: 592.99
N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyI]-L-fenylalanin-l-(acetoksy)etylester kan fremstilles fra N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin og 1-kloretylacetat ved anvendelse av den generelle prosedyre beskrevet i eksempel 40.
Eksempel 49.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l ,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-etylester
C26H23C,2F3N2°4
Molvekt: 555.37
N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-etylester kan fremstilles fra N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin og jodetan ved anvendelse av den generelle prosedyre beskrevet i eksempel 38.
Eksempel 50.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridi nyl] -L-fenylalanin 2- [(N,N-dietyl )amino]ety lester
C3oH32ClaF3N304
Molvekt: 626.49
N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester kan fremstilles fra N-[(2,6-diklorfenyl> karbonyl]-4-[l ^-dimetyl-e-CtrifluormetyO^-okso-S-pyridinyll-L-fenylalanin og 2-[(N,N- diety])amino]etylklorid-hydroklorid ved anvendelse av den generelle prosedyre beskrevet i eksempel 39.
Eksempel 51.
Fremstilling av N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[ 1,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-1 -(acetoksy)etylester
Molvekt: 613.41
N-[(2,6-dikloifenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trilfuormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-l-(acetoksy)etylester kan fremstilles fraN-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin og 1-kloretylacetat ved anvendelse av den generelle prosedyre beskrevet i eksempel 40.
B ioanal vse- eksempler
Eksempel A.
VLA-4 / VCAM-1 Screeningmåling
VLA-4 antagonist-aktivitet, definert som evne til å konkurrere for binding til immobilisert VCAM-1, ble kvantifisert ved anvendelse av en fastfase dobbelt- antistoff ELISA. VLA-4 (04(51 integrin) bundet til VCAM-1 ble detektert med et kompleks av anti-integrin pl-antistoff: HRP-konjugert anti-muse IgG: kromogent substrat (K-Blue). Innledningsvis medførte dette belagte 96-brønners plater (Nunc Maksisorp) med rekombinant humant VCAM-1 (0,4 ug i 100 (il PBS), lukking av hver plate og deretter la platene til stå ved 4°C i -18 timer. De VCAM-belagte plater ble deretter blokkert med 250 |il 1% BSA/0,02% NaN3for å redusere ikke-spesifikk binding. På dagen for måling ble alle plater vasket to ganger med VCAM målingsbuffer (200 (il/brønn av 50 mM Tris-HC1, 100 mM NaCl, 1 mM MnCtø, 0,05% Tween 20; pH 7,4). Testforbindelser ble oppløst i 100% DMSO og deretter fortynnet 1:20 i VCAM målingsbuffer supplert med 1 mg/ml BSA (dvs. endelig DMSO = 5%). En serie av 1:4 fortynninger ble utført for å oppnå et konsentrasjonsområde på 0,005 nM - 1,563[iM for hver testforbindelse. 100 ul pr. brønn av hver fortynning ble satt til de VCAM-belagte plater, fulgt av 10 u.1 Ramos celle-avledet VLA-4. Disse plater ble sekvensielt blandet på en platformryster i 1 min, inkubert i 2 timer ved 37°C og deretter vasket fire ganger med 200 ul/brønn VCAM målingsbuffer. 100[il muse-anti-human-integrin pl antistoff ble satt til hver brønn (0,6 (ig/ml i VCAM målingsbuffer + 1 mg/ml BSA) og fikk inkuberes i 1 time ved 37°C. På slutten av denne inkuberingsperioden ble alle plater vasket fire ganger med VCAM målingsbuffer (200 ul/brønn). Et tilsvarende andre antistoff, HRP-konjugert geite-anti-muse-IgG (100[il pr. brønn @ 1:800 fortynning i VCAM målingsbuffer + 1 mg/ml BSA), ble deretter satt til hver brønn fulgt av en 1 times jnkubering ved romtemperatur og avsluttet med tre vaskinger (200ul/brønn) med VCAM målingsbuffer. Fargeutvikling ble startet ved tilsetning av 100[il K-Blue pr. brønn (15 min inkubering, romtemp.) og avsluttet ved tilsetning av 100[il Red Stop Buffer pr. brønn. Alle plater ble deretter avlest i et UV/Vis spektrofotometer ved 650 nM. Resultater ble beregnet som % hemning av total binding (dvs. VLA-4 + VCAM-1 i fravær av testforbindelse). Resultatene er gitt i den følgende Tabell I (A = IC50< 1 nM, B = IC50<10 nM):
Eksempel B.
Ramos (VLA-4) / VCAM-1 Celle-Basert Screening målingsprotokoll Materialer: Oppløselig rekombinant human VCAM-1 (blanding av 5- og 7-Ig domene) ble renset fra CHO-celle-dyrkningsmedier ved immunoaffinitetskromatografi og holdt i en løsning inneholdende 0,1 M Tris-glycin (pH 7,5), 0,1 M NaCl, 5 mM EDTA, 1 mM PMSF, 0,02% 0,02% NaN3og 10 (xg/ml leupeptin. Calcein-AM ble anskaffet fra Molekular Probes Inc.
Metoder:
VLA-4 (0:401 integrin) antagonistaktivitet, definert som evne til å konkurrere med celle-overflate-VLA-4 forbinding til immobilisert VCAM-1, ble kvantifisert ved anvendelse av en Ramos-VCAM-1 celleadhesjonsmåling. Ramos-celler som bærer celle-overflate-VLA-4, ble merket med et fluorescerende fargestoff (Calcein-AM) og fikk binde VCAM-1 i nærvær eller fravær av testforbindelser. En reduksjon i fluorescensintensitet forbundet med adherente celler (% hemning) viste kompetitiv hemning av VLA-4-mediert celleadhesjon med testforbindelsen.
Først medførte dette belegging av 96-brønners plater (Nunc Maxisorp) med rekombinant human VCAM-1 (100 ng i 100[il PBS), lukking av hver plate og la platene til stå ved 4°C i 18 timer. De VCAM-belagte plater ble deretter vasket to ganger med 0,05% Tween-20 i PBS og deretter blokkert i 1 time (romtemperatur) med 200 |il blokkeringsbuffer (1% BSA/0,02% thimerosal) for å redusere ikke-spesifikk binding. Etter inkuberingen med blokkeringsbuffer ble platene snudd, blotter og den gjenværende buffer avdampet. Hver plate ble deretter vasket med 300 ul PBS, snudd, og den gjenværende PBS avdampet.
Testforbindelser ble oppløst i 100% DMSO og deretter fortynnet 1:25 i VCAM celleadhesjonsmålingsbuffer (4 mM CaCl2,4 mM MgCl2i 50 mM TRIS-HC1, pH 7,5)
(endelig DMSO = 4%). En serie av åtte 1:4 fortynninger ble utført for hver forbindelse (generelt konsentrasjonsområde på 1 nM - 12500 nM). 100[xl/brønn av hver fortynning ble satt til de VCAM-belagte plater, fulgt av 100 ul Ramos-celler (200,000 celler/brønn i 1% BSA/PBS). Plater inneholdende testforbindelser og Ramos-celler fikk inkuberes i 45 min ved romtemperatur, hvoretter 165 ul/brønn PBS ble tilsatt. Platene ble snudd for å fjerne ikke-adherente celler, blottet og 300 (il/brønn PBS tilsatt. Platene ble igjen snudd, blottet, og den gjenværende buffer forsiktig avdampet. 100 ul lysebuffer (0,1% SDS i 50 mM TRIS-HC1, pH 8,5) ble satt til hver brønn og rørt i 2 min på en roterende rysteplatform. Platene ble deretter avlest for fluorescensintensitet på et Cytofluor 2300
(Millipore) fluorecences-målingssystem (eksitasjon = 485 nm, emisjon = 530 nm). Resultatene er vist i den følgende tabell: Resultatene er angitt i den følgende Tabell n, (A * IC50< 100 nM, B = ICso<10000 nM), C = IC5o<5000nM):
Eksempel C
Alpha4-Beta7 målingsprotokoll
To uker til én dag før målingen ble Nunc høy-bindings F96 Maxisorp immuno plater, #442404 eller #439454, belagt med 25ng/brønn (0,25|ig/ml) MadCAM i et volum på lOOfil/brønn. Platene ble dekket med deksel og pakket i saraninnpakning fulgt av inkubering i kjøleskap i minst 24 timer. Beleggbufferen som ble anvendt var: lOmM karbonat/bikarbonat-buffer laget fra: 0,8 g/l natriumkarbonat og 1,55 g/l natriumbikarbonat regulert til pH 9,6 med 1 N HC1.
Mål tngsbuffere besto av det følgende:
Plater ble vasket 2X med vaskebuffer og deretter blokkert ved romtemperatur i minst 1 time med blokkeringsbuffer. Forseglete plater ble noen ganger blokkert natten over i kjøleskap. Platene ble deretter vasket med PBS og håndblottet tørre. Gjenværende væske ble avdampet fra brønnene.
Tilstrekkelige RPMI8866 celler ble tatt ut fra lager for måling (2 X IO<6>celler/ml x 10 ml/plate x antall plater) og plassert i et sentrifugerør. Rørene ble fylt til volum med PBS og ble sentrifugert ved 200 x G i 8 minutter. Bufferen ble hellet av, og cellene ble gjenoppslemmet til 10 X 10<6>/ml i PBS, og en stamløsning av calcein i DMSO (5 mg/ml) ble tilsatt på 5|xl/ml av cellesuspensjon. Suspensjonen ble inkubert i 30 minutter ved 37° C i mørke. Cellene ble deretter vasket med PBS. PBS ble hellet av og cellene gjenoppslemmet i cellebuffer ved en konsentrasjon på 2 x IO<6>celler/ml for plating i målingen.
Stamløsning av testforbindelser på 25 x første fortynning ønsket i 100% DMSO ble fremstilt. Første fortynninger for standarden, så vel som testforbindelser, var 1:25 i ren bindingsbuffer, mens de gjenværende serie-fortynninger var i fortynningsbuffer (Bindingsbuffer/4% DMSO). Stamkonsentrasjoner og fortynninger av forbindelser for screening ble bestemt med forventet aktivitet.
For målingen ble 129jjl1 bindingsbuffer platet i første rekke av brønner og lOO^il fortynningsbuffer ble platet i gjenværende brønner. En 5,4(il alikvot av hver forbindelse ble pipettert i riktige, merkete brønner, in triplo. Forbindelsene ble deretter fortynnet ned platen (34|il + 100|il => 4-gangers fortynning). For kontroller ble 100^1 av fortynningsbuffer + lOOjil cellebuffer platet i de ikke-spesifikke bakgrunnsbrønner (ingen celler, ingen forbindelse), og 100(xl fortynningsbuffer + lOOpi celler ble platet i totalbindingsbrønnene (ingen forbindelse = 100% binding). Merkete celler på 2 X IO6 celler/ml, lOOpJ/brønn (= 2 X 10<5>celler/brønn) ble satt til hver brønn inneholdende forbindelse. Platene ble forseglet og inkubert i mørke i 45 minutter ved romtemperatur. Etter inkubering ble ubundete celler fjernet ved tilsetning av 150(il PBS/brønn. Platene ble snudd, blottet på papirhåndkler og vasket ved forsiktig tilsetning av 200|il PBS til brønner og blotting igjen. Gjenværende buffer ble forsiktig avdampet fra brønnene. En siste 100|il PBS ble satt til hver brønn.
Platene ble deretter avlest for fluorescensintensitet på et Cytofluor 2300 (Millipore) fluorecensmålingsystem (eksitasjon = 485 nm, emisjon = 530 nm). IC^er av hver forbindelse ble bestemt ved lineær regresjonsanalyse. Resultatene er vist i den følgende tabell:
Resultatene er angitt i den følgende Tabell III:

Claims (54)

1. Forbindelse med formelen:
hvor Ri er en gruppe med formelen Y-l
hvor R22og R23er uavhengig hydrogen, C1-C6alkyl, C1-C6alkoksy, C3-C7cykloalkyl, fenyl, naftyl, fenyl Q-C6alkyl, naftyl Q-C6 alkyl, nitro, cyano, C1-C6alkyltio, Q-C6alkylsulfinyl, C1-C6alkylsulfonyl, C1-C6alkanoyl, halogen eller perfluor C1-C6alkyl, og minst én av R22og R23er forskjellig fra hydrogen, og R24er hydrogen, C1-C6alkyl, Ci-C6alkoksy, fenyl, naftyl, nitro, cyano, C1-C6alkylsulfonyl eller halogen; eller Ri er en gruppe med formelen Y-2, som er en fem- eller seks-leddet heteroaromatisk ring bundet via et karbonatom til amidkarbonylen hvor nevnte ring inneholder ett, to eller tre heteroatomer valgt fra gruppen bestående av N, O og S, og ett eller to atomer i nevnte ring er uavhengig substituert med C1-C6alkyl, C3-C7cykloalkyl, halogen, cyano, perfluorCi-C6alkyl eller fenyl, naftyl, og minst ett av nevnte substituerte atomer sitter i nabostilling til karbonatomet bundet til amidkarbonylen; eller Ri er en gruppe med formelen Y-3 som er en 3-7-leddet ring med formelen:
hvor R25er Q-C6 alkyl, usubstituert eller fluorsubstituert C1-C6alkenyl eller en gruppe med formel R26~~(CH^e<r>t R2<g>er fenyl, naftyl, en fem- eller seks-leddet monosyklisk heteroaromatisk ring eller en ni- eller ti-leddet bisyklisk heteroaromatisk ring hvor nevnte ring inneholder ett, to, tre eller fire heteroatomer valgt fra gruppen bestående av N, O og S, azido, cyano, hydroksy, Q-C6alkoksy, C1-C6alkoksykarbonyl, C1-C6alkanoyl, d-Cé alkyltio, C1-C6alkylsulfonyl, C1-C6alkylsulfinyl, perfluorCi-Q alkanoyl, nitro, eller R26er en gruppe med formel -NR28R29»hvor R28 er hydrogen eller C|-C6alkyl, R29 er hydrogen, C1-C6alkyl, C1-C6alkoksykarbonyl, C1-C6alkanoyl, benzoyl, naftoyl, perfluorCi-C6alkanoylamino, C1-C6alkylsulfonyl, Ci-Céalkylaminokarbonyl, fenylaminokarbonyl, naftyl aminokarbonyl; Q er -(CH2)fO-, -(CH2)fS-, -(CH2)fN(R27)-, -(CH2)f-, Rj7er H, C\- C(, alkyl, fenyl, naftyl, Q-C6 alkanoyl, benzoyl, naftoyl eller Q-Q alkoksykarbonyl, e er et helt tall fra 0 til 4 og f er et helt tall fra 0 til 3; R2er hydrogen, Q-C6alkyl, substituert Cj-C6alkyl, fenyl, naftyl, fenylC]-C6alkyl eller naftylCi-Ce alkyl; R3er hydrogen, halogen, Q-Q alkyl, trifluormetyl, fenyl eller naftyl; R4er hydrogen, halogen, Ci-Q alkyl, fenyl eller naftyl; R5er hydrogen, C1-C6alkyl, C1-C6alkoksy eller trifluormetyl eller OH; R6er hydrogen, C1-C6alkyl, C1-C6alkylkarbonyloksy-Ci-Q alkyl, eller R6er en gruppe med formel P-3:
hvor: R32er hydrogen eller Q-C6alkyl; R33er hydrogen, Ci-Q alkyl, fenyl, naftyl; R34er hydrogen eller Ci-C6alkyl; h er et helt tall fra 0 til 2; g er et helt tall fra 0 til 2; summen av h og g er 1 til 3; eller R6er en gruppe med formel P-4:
hvor: R32, g og h er som tidligere definert; Q' er O, S, -(CH2)j- eller en gruppe med formelen N-R35; hvor R35er hydrogen, Q-Q alkyl, Q-Q alkanoyl, C\- C* alkoksykarbonyl; j er 0,1 eller 2; og R7er hydrogen, klor, Q-Ce alkoksy eller Ci-Céalkyl; eller de farmasøytisk akseptable salter derav.
2. Forbindelse ifølge krav 1, hvor R3er hydrogen, halogen, Ci- Ce alkyl, fenyl eller naftyl.
3. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, hvor Rj er Y-3 hvor Q er -(CH2)fO-, -(CH2)fS-eller -(CH2)f-.
4. Forbindelse ifølge krav 3, hvor R5er hydrogen, C1-C6alkyl eller trifluormetyl.
5. Forbindelse ifølge krav 1 eller krav 2, hvor Ri er en gruppe Y-l hvor R22og R23er uavhengig hydrogen, C1-C6alkyl eller halogen og R24er hydrogen, C1-C6alkyl eller Cp C4alkoksy.
6. Forbindelse ifølge krav 5, hvor R22og R23er uavhengig hydrogen, Ci-Cé alkyl eller halogen, R24er hydrogen eller C1-C6alkoksy, og R2er fenyl-Cj-Céalkyl eller naftyl-C1-C6alkyl.
7. Forbindelse ifølge krav 1 eller krav 2, hvor Ri er en gruppe med formelen Y-3 hvor R25 en gruppe med formel<R>2«"~(CH2>e-, hvor R26erCrC6 alkoksy, Q er -(CH2)fS e er et helt tall fra 0 til 4, og f er et helt tall fra 0 til 3.
8. Forbindelse ifølge krav 1 eller krav 2, hvor Ri er en gruppe med formelen Y-3, og R2er hydrogen, C1-C6alkyl, substituert CrC6alkyl, fenyl-Ci-Q alkyl eller naftyl-Ci-Ce alkyl.
9. Forbindelse ifølge krav 8, hvor Rj er en gruppe med formelen Y-3 hvor R25er en gruppe med formel Ftøg-fCH^e- t hvor R26 er Ci-C6alkoksy, Q er -(CH2)f-, e er et helt tall fra 0 til 4, f er et helt tall fra 0 til 3; og R2er fenyl-Ci-C6alkyl eller naftyl-Ci-C6alkyl.
10. Forbindelse ifølge krav 1 eller krav 2, hvor R2er hydrogen, Q-C6 alkyl, fenyl-Ci-C6alkyl eller naftyl-Ci-C6alkyl; R3er hydrogen; R4er hydrogen eller halogen; R5er hydrogen, C1-C6alkyl eller trifluormetyl eller C1-C6alkoksy; Réer hydrogen eller C1-C6alkyl; og R7er hydrogen, klor, C1-C6alkoksy eller C1-C6alkyl.
11. Forbindelse ifølge krav 10, hvor Ri er en gruppe med formelen Y-l.
12. Forbindelse ifølge krav 11, hvor Ri er en gruppe Y-l hvor R22og R23er uavhengig hydrogen, C1-C6alkyl eller halogen, og R24er hydrogen, Ci- Ce alkyl eller Ci-Ce alkoksy.
13. Forbindelse ifølge krav 12, hvor Ri er en gruppe Y-l hvor R24er hydrogen, og R2er fenyl-Ci-C6alkyl eller naftyl-Ci-C6alkyl.
14. Forbindelse ifølge krav 10, hvor Ri er Y-2.
15. Forbindelse ifølge krav 10, hvor Ri er en gruppe med formelen Y-3.
16. Forbindelse ifølge krav 15, hvor Ri er en gruppe med formelen Y-3 hvor R25er en gruppe med formel<R>26~~(Chtøe- t hvor R26er Ci-C6alkoksy, Q er -(CH2)f-, e er et helt tall fra 0 til 4, og f er et helt tall fra 0 til 3.
17. Forbindelse ifølge krav 10, hvor R2er hydrogen, Q-Q alkyl, fenyl-Ci-C6alkyl eller naftyl-Ci-C6alkyl; R3er hydrogen; R4er halogen; Rs er hydrogen; Réer hydrogen eller Ci-Céalkyl; og R7er hydrogen, klor, C1-C6alkoksy eller C1-C6alkyl.
18. Forbindelse ifølge hvilket som helst av krav 1,3 eller 4, hvor R| er en gruppe med formel Y-l eller en gruppe med formel Y-3; R2er hydrogen, C1-C6alkyl, fenyl-Ci-Céalkyl eller naftyl-Ci-Ce alkyl; R3er hydrogen, Ci-Ce alkyl eller trifluormetyl; R4er hydrogen eller halogen; Rs er hydrogen, C1-C6alkyl eller trifluormetyl; Re er hydrogen, Ci- C* alkyl, Ci-C*alkylkarbonyloksy-Ci-Q alkyl, en gruppe med formel P-3 eller en gruppe med formel P-4; og R7er hydrogen eller Q-C6 alkyl.
19. Forbindelse ifølge krav 18, hvor R2er Ci-Q alkyl, fenyl-Ci-Ce alkyl eller naftyl-Ci-Q alkyl; Réer hydrogen, Ci-Ce alkyl, Q-Q alkylkarbonyloksy-Ci-Q alkyl eller en gruppe med formel P-3; og R7er hydrogen.
20. Forbindelse ifølge krav 19, hvor R<1>er Y-l hvor R22og R23er hydrogen, halogen eller Ci-Q alkyl, R24er hydrogen eller Ci-Ce alkoksy, eller R<1>er Y-3 hvor R25er en gruppe med formel R26~~(CH^<ø>->nvor r26 er Ct-C6alkoksy, Q er -(CH2)f-, e er et helt tall fra 0 til 4, og f er et helt tall fra 0 til 3.
21. Forbindelse ifølge krav 20, hvor R2er Ci-C*alkyl, R4er hydrogen og R3og R5er Ci-Ce alkyl eller trifluormetyl.
22. Forbindelse ifølge krav 21, hvor R*er hydrogen.
23. Forbindelse ifølge krav 22, hvor Ri er Y-l.
24. Forbindelse ifølge krav 23, hvor R22og R23er halogen eller Ci-Ce alkyl.
25. Forbindelse ifølge krav 24, som er N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin; N-[(2-etyl-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl] -L-fenylal anin; N-[(2-(l-metyletyl)-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin; N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin; N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin; eller N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin.
26. Forbindelse ifølge krav 22, hvor Ri er Y-3.
27. Forbindelse ifølge krav 26, som er N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin.
28. Forbindelse ifølge krav 21, hvor Re er Ci-C6 alkyl.
29. Forbindelse ifølge krav 28, som er N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-etylester; N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-etylester; N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl] -L-fen yl al anin-ety lester; eller N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-etylester.
30. Forbindelse ifølge krav 21, hvor Re er Q-C6 alkylkarbonyloksy-Ci-C6alkyl.
31. Forbindelse ifølge krav 30, som er N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-1 -(acetoksy)etylester; N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-. L-fenylalanin-1-(acetoksy)etylester; N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-1 -(acetoksy)etylester; eller N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin-1 -(acetoksy)etylester.
32. Forbindelse ifølge krav 21, hvor Re er en gruppe med formel P-3 hvor R32er hydrogen; R33og R34er Cj-Q alkyl; én av g og h er 1, og den andre er 0.
33. Forbindelse ifølge krav 32, som er N- [(2,6-diklorfenyl)karbonyl] -4- [ 1,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3 -pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester; N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester; N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,6-dimetyl-4-(trifluormetyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester; eller N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-[l,4-dimetyl-6-(trifluor-metyl)-2-okso-3-pyridinyl]-L-fenylalanin 2-[(N,N-dietyl)amino]etylester.
34. Forbindelse ifølge krav 20, hvor Re er hydrogen.
35. Forbindelse ifølge krav 34, hvor R2er Ci- Ce alkyl; R3er hydrogen; R4er hydrogen eller halogen; og R5er hydrogen eller C1-C6alkyl.
36. Forbindelse ifølge krav 35, hvor R\er Y-1.
37. Forbindelse ifølge krav 36, hvor R22og R23er Q-C6alkyl eller halogen, og R24er hydrogen.
38. Forbindelse ifølge krav 37, som er N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(5-klor-l-metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin; N-[(2-k]or-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l-metyl-2-okso-3-pyridinyI)-L-fenylalanin; eller N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-4-(l,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin.
39. Forbindelse ifølge krav 36, hvor R22og R23er halogen, og R24er hydrogen.
40. Forbindelse ifølge krav 39, som er N-[(2,6-diklorfenyl)karbonyl]-4-(l ,4-dimetyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin.
41. Forbindelse ifølge krav 36, hvor R22og R» er halogen eller hydrogen, og R24er Ci-Ce alkoksy.
42. Forbindelse ifølge krav 41, som er N-[(2-brom-5 -metoksyfenyl)karbonyl] -4-( 1 -metyl-2-okso-3-pyridinyl)-L-fenylalanin; eller N-[(2-brom-5-metoksyfenyl)karbonyl]-4-(5-brom-l-metyl-2-okso-3-pyirdinyI)-L-fenylalanin.
43. Forbindelse ifølge krav 35, hvor Ri er Y-3,
44. Forbindelse ifølge krav 43, som er 4-(5-klor-1 -metyl-2-okso-3-pyridinyl)-N-[[l-(2-metoksyetyl)cyklopentyl]karbonyl]-L-fenylalanin.
45. Forbindelse ifølge krav 19, hvor R22og R23er halogen eller Ci-Ce alkyl, R24er hydrogen eller Q-Q alkoksy, R25er en gruppe med formel Rzfi^tCH^er>hvor R26 er Ci-Q alkoksy, Q er -(CH2)f-, e er et helt tall fra 0 til 4, og fer et helt tall fra 0 til 3.
46. Forbindelse ifølge krav 45, hvor R2er aryl-Ci-Cg alkyl; Ra er hydrogen, R4er halogen og Rj, Réog R? er hydrogen.
47. Forbindelse ifølge krav 46, hvor Ri er Y-1.
48. Forbindelse ifølge krav 47, som er 4-(l-benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl)-N-[(2-klor-6-metylfenyl)karbonyl]-L-fenylalanin; eller 4-( 1 -benzyl-5-klor-2-okso-3-pyridinyl> N-[[ 1 -(2-metoksyetyl)-cyklopentyl lkarbonyl]-L-fenylalanin.
49. Forbindelse med formel II
hvor R<2->R<5>og R<7>er som definert i krav 1, og Pjer en Boe eller karbobenzyloksygruppe og P2er Ci-Ce alkyl eller substituert Q-Q alkyl.
50. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-48, for anvendelse som et medikament.
51. Farmasøytisk preparat omfattende en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-48 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og en farmasøytisk akseptabel bærer.
52. Forbindelse for anvendelse ved behandling av sykdomstilstander mediert av bindingen av VCAM-1 eller VLA-4 eller VLA-4-som uttrykker celler, spesielt ved behandling av revmatoid artritt, multippel sklerose, inflammatorisk tarmsykdom<p>g astma, hvilken er en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-48.
53. Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat, hvilken fremgangsmåte omfatter å bringe en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-48 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og en kompatibel farmasøytiske bærer i en galenisk administreringsform.
54. Anvendelse av forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-48 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, ved fremstilling av et medikament for behandling av revmatoid artritt, multippel sklerose, inflammatorisk tarmsykdom og astma.
NO20022650A 1999-12-06 2002-06-05 4-Pyridyl-N-acyl-L-fenylalaniner, anvendelse av disse som medikamenter, farmasoytiske preparater inneholdende slike forbindelser og fremgangsmate for fremstilling av disse. NO322910B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16909099P 1999-12-06 1999-12-06
PCT/EP2000/011979 WO2001042215A1 (en) 1999-12-06 2000-11-29 4-pyridinyl-n-acyl-l-phenylalanines

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20022650D0 NO20022650D0 (no) 2002-06-05
NO20022650L NO20022650L (no) 2002-06-05
NO322910B1 true NO322910B1 (no) 2006-12-18

Family

ID=22614226

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20022650A NO322910B1 (no) 1999-12-06 2002-06-05 4-Pyridyl-N-acyl-L-fenylalaniner, anvendelse av disse som medikamenter, farmasoytiske preparater inneholdende slike forbindelser og fremgangsmate for fremstilling av disse.

Country Status (34)

Country Link
EP (1) EP1244625B1 (no)
JP (2) JP2003516392A (no)
KR (1) KR100492111B1 (no)
CN (1) CN1196682C (no)
AR (1) AR031083A1 (no)
AT (1) ATE297895T1 (no)
AU (1) AU779063B2 (no)
BR (1) BR0016172A (no)
CA (1) CA2392566A1 (no)
CO (1) CO5080771A1 (no)
CZ (1) CZ20022352A3 (no)
DE (1) DE60020883T2 (no)
DK (1) DK1244625T3 (no)
ES (1) ES2243335T3 (no)
GC (1) GC0000214A (no)
HK (1) HK1053470A1 (no)
HR (1) HRP20020467A2 (no)
HU (1) HUP0203735A3 (no)
IL (2) IL149622A0 (no)
JO (1) JO2281B1 (no)
MA (1) MA26849A1 (no)
MX (1) MXPA02005240A (no)
MY (1) MY128003A (no)
NO (1) NO322910B1 (no)
NZ (1) NZ518888A (no)
PE (1) PE20010960A1 (no)
PL (1) PL364814A1 (no)
PT (1) PT1244625E (no)
RU (1) RU2270193C2 (no)
TW (1) TWI276629B (no)
UY (1) UY26470A1 (no)
WO (1) WO2001042215A1 (no)
YU (1) YU40502A (no)
ZA (1) ZA200203762B (no)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6960597B2 (en) 2000-06-30 2005-11-01 Orth-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Aza-bridged-bicyclic amino acid derivatives as α4 integrin antagonists
IL154350A0 (en) 2000-08-18 2003-09-17 Ajinomoto Kk New phenylalanine derivatives
DE60124573T2 (de) 2000-09-29 2007-06-21 Ajinomoto Co., Inc. Neue phenylalanin-derivate
WO2003053926A1 (fr) 2001-12-13 2003-07-03 Ajinomoto Co.,Inc. Nouveau derive de phenylalanine
US7482366B2 (en) 2001-12-21 2009-01-27 X-Ceptor Therapeutics, Inc. Modulators of LXR
EP1465869B1 (en) 2001-12-21 2013-05-15 Exelixis Patent Company LLC Modulators of lxr
EP2803667A1 (en) 2003-12-22 2014-11-19 Ajinomoto Co., Inc. Phenylalanine derivatives
US7618981B2 (en) * 2004-05-06 2009-11-17 Cytokinetics, Inc. Imidazopyridinyl-benzamide anti-cancer agents
CN101006097B (zh) * 2004-08-16 2012-07-11 默沙东公司 Vla-4拮抗剂
JP4784224B2 (ja) 2004-09-24 2011-10-05 味の素株式会社 糖鎖転移方法および糖鎖転移酵素
CA2641160A1 (en) * 2006-02-28 2007-09-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating inflammatory and autoimmune diseases with alpha-4 inhibitory compounds
AR060901A1 (es) * 2006-05-12 2008-07-23 Jerini Ag Compuestos heterociclicos para la inhibicion de integrinas y uso de estos
WO2008103378A2 (en) 2007-02-20 2008-08-28 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple sclerosis by administration of alpha-fetoprotein in combination with an integrin antagonist
PL2288715T3 (pl) 2008-04-11 2015-03-31 Merrimack Pharmaceuticals Inc Łączniki będące albuminą surowicy ludzkiej i ich koniugaty
BR112012001558A2 (pt) * 2009-07-23 2016-03-08 Bayer Cropscience Ag alcoxienonas e enaminocetonas e um processo para a sua preparação
US8877815B2 (en) 2010-11-16 2014-11-04 Novartis Ag Substituted carbamoylcycloalkyl acetic acid derivatives as NEP
WO2013110680A1 (en) * 2012-01-27 2013-08-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Integrin antagonist conjugates for targeted delivery to cells expressing vla-4
WO2014201172A1 (en) * 2013-06-11 2014-12-18 Receptos, Inc. Novel glp-1 receptor modulators
MX2018009459A (es) 2016-02-05 2018-09-21 Ea Pharma Co Ltd Derivado de sulfonamida y composicion farmaceutica que contiene el mismo.
CA3115830C (en) 2018-10-30 2023-09-12 Gilead Sciences, Inc. Compounds for inhibition of .alpha.4.beta.7 integrin
AU2019373240B2 (en) 2018-10-30 2023-04-20 Gilead Sciences, Inc. Quinoline derivatives as alpha4beta7 integrin inhibitors
CA3114240C (en) 2018-10-30 2023-09-05 Gilead Sciences, Inc. Imidazopyridine derivatives as alpha4beta7 integrin inhibitors
US11224600B2 (en) 2018-10-30 2022-01-18 Gilead Sciences, Inc. Compounds for inhibition of alpha 4 beta 7 integrin
WO2021030438A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Gilead Sciences, Inc. Compounds for inhibition of alpha 4 beta 7 integrin

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2291778A1 (en) * 1997-05-29 1998-12-03 Merck & Co., Inc. Heterocyclic amide compounds as cell adhesion inhibitors
ATE318841T1 (de) * 1997-05-29 2006-03-15 Merck & Co Inc Biarylalkansäuren in der verwendung als zelladhäsionsinhibitoren
US6197794B1 (en) * 1998-01-08 2001-03-06 Celltech Therapeutics Limited Phenylalanine derivatives
MY153569A (en) * 1998-01-20 2015-02-27 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Inhibitors of ?4 mediated cell adhesion
US6329372B1 (en) * 1998-01-27 2001-12-11 Celltech Therapeutics Limited Phenylalanine derivatives
WO1999043642A1 (en) * 1998-02-26 1999-09-02 Celltech Therapeutics Limited Phenylalanine derivatives as inhibitors of alpha4 integrins
GB9811159D0 (en) * 1998-05-22 1998-07-22 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
ATE261932T1 (de) * 1998-12-22 2004-04-15 Tanabe Seiyaku Co Inhibitoren der alpha-4 beta-1 vermittelten zelladhäsion
CN1231212C (zh) * 1999-01-22 2005-12-14 依兰制药公司 抑制vla－4介导的白细胞粘着的多环化合物

Also Published As

Publication number Publication date
KR20020060256A (ko) 2002-07-16
KR100492111B1 (ko) 2005-06-01
MY128003A (en) 2007-01-31
JP2003516392A (ja) 2003-05-13
AR031083A1 (es) 2003-09-10
IL149622A0 (en) 2002-11-10
MXPA02005240A (es) 2002-11-07
AU779063B2 (en) 2005-01-06
TWI276629B (en) 2007-03-21
JP2008094842A (ja) 2008-04-24
PE20010960A1 (es) 2001-09-22
IL149622A (en) 2006-12-10
WO2001042215A1 (en) 2001-06-14
DK1244625T3 (da) 2005-10-10
NO20022650D0 (no) 2002-06-05
EP1244625A1 (en) 2002-10-02
CN1402709A (zh) 2003-03-12
HUP0203735A3 (en) 2005-03-29
DE60020883D1 (de) 2005-07-21
CZ20022352A3 (cs) 2003-05-14
ZA200203762B (en) 2004-01-28
CO5080771A1 (es) 2001-09-25
RU2270193C2 (ru) 2006-02-20
YU40502A (sh) 2005-03-15
HK1053470A1 (en) 2003-10-24
NZ518888A (en) 2004-02-27
DE60020883T2 (de) 2006-03-23
ES2243335T3 (es) 2005-12-01
PL364814A1 (en) 2004-12-13
GC0000214A (en) 2006-03-29
AU2163901A (en) 2001-06-18
UY26470A1 (es) 2001-05-31
HUP0203735A2 (hu) 2003-03-28
JO2281B1 (en) 2005-09-12
MA26849A1 (fr) 2004-12-20
PT1244625E (pt) 2005-09-30
NO20022650L (no) 2002-06-05
CN1196682C (zh) 2005-04-13
CA2392566A1 (en) 2001-06-14
EP1244625B1 (en) 2005-06-15
HRP20020467A2 (en) 2004-04-30
ATE297895T1 (de) 2005-07-15
BR0016172A (pt) 2002-08-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO322910B1 (no) 4-Pyridyl-N-acyl-L-fenylalaniner, anvendelse av disse som medikamenter, farmasoytiske preparater inneholdende slike forbindelser og fremgangsmate for fremstilling av disse.
US6388084B1 (en) 4-pyridinyl-n-acyl-l-phenylalanines
US6380387B1 (en) 4-Pyrimidinyl-n-acyl-l phenylalanines
JP3824935B2 (ja) ４−ピリミジニル−ｎ−アシル−ｌ−フェニルアラニン
DE69821950T2 (de) N-aroylphenylalaninderivate
US6423728B1 (en) Heterocyclic thioamide derivatives
SK140994A3 (en) Imidazopyridazines, method of their production and pharmaceutical preparation on their base and method of their production
EP0595610A1 (en) Benzo-fused lactams
CZ2000597A3 (cs) N-Aroylfenylalaninové deriváty