NO179615B - Monoklonale antistoffer eller fragmenter derav som reagerer med kakektin, cellelinjer som produserer dem, prövesett som omfatter dem, samt anvendelse derav in vitro - Google Patents
Monoklonale antistoffer eller fragmenter derav som reagerer med kakektin, cellelinjer som produserer dem, prövesett som omfatter dem, samt anvendelse derav in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- NO179615B NO179615B NO901247A NO901247A NO179615B NO 179615 B NO179615 B NO 179615B NO 901247 A NO901247 A NO 901247A NO 901247 A NO901247 A NO 901247A NO 179615 B NO179615 B NO 179615B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cachectin
- monoclonal antibody
- antibodies
- fragment
- monoclonal antibodies
- Prior art date
Links
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 title claims description 45
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims description 26
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 9
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 title claims 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 title description 6
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 4
- 238000011266 cytolytic assay Methods 0.000 claims description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 14
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241001517013 Calidris pugnax Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 2
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100034044 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH1B Human genes 0.000 description 1
- 101710193111 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH4 Proteins 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108010058643 Fungal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 241000941423 Grom virus Species 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 101000761412 Homo sapiens Cactin Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102100022119 Lipoprotein lipase Human genes 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000577979 Peromyscus spicilegus Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 208000026500 emaciation Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007946 glucose deprivation Effects 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009097 homeostatic mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000054065 human cactin Human genes 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000004066 metabolic change Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse vedrører monoklonale antistoffer eller fragmenter derav som reagerer med kakektin, cellelinjer som produserer dem, prøvesett som omfatter dem, samt anvendelse derav in vltro ved påvisning av kakektin.
Oppfinnelsens bakgrunn
Innføringen av angripende stimuli, slik som para-sitt-, bakterie- eller virusinfeksjoner, eller neoplastiske celler, induserer betydelige metabolske endringer hos den mot-takelige vert. Dersom de er alvorlige, kan endringene til sist avbryte normale homøostatiske mekanismer, både lokalt og systemisk, noe som fører til uttømming av vertsenergilagre og føre frem til utmagring (kakeksi), vevsskade, multippel organ-systemsvikt, sjokk og død.
Inntil nylig trodde legene at de systematiske mønstre primært skyldtes virkninger av selve de angripende agenser. Det er imidlertid nå kjent at de angripende stimuli forårsaket at verten genererte forskjellige cytokiner, hvis kombinerte virkninger forårsaker det meste av de uønskede biologiske responser. Disse vertsutvundne betennelsesmediatorer gir nye muligheter for utvikling av behandlingskurer mot en rekke forskjellige inflammatoriske sykdomstilstander.
Et av de sterkeste cytokiner er kakektin som først og fremst frigjøres av makrofager etter passende stimulering. Kakektin, også kjent som tumornekrosefaktor, er et protein med 157 aminosyrer som normalt finnes in vlvo som en dimer eller annen multimer. Den beregnede molekylvekt til human TNF-mono-mer er ca. 17.000 dalton.
Kakektin virker ved å undertrykke biosyntese av flere adipocyttspesifikke proteiner, slik som lipoproteinlipase. Det virker også til å indusere biosyntesen eller frigjørelsen av tallrike andre proteiner, inkludert klasse I hovedhistokompa-tibilitetsantigen, granulocytt-makrofagkolonistimulerende faktor og interleukin 1 (se generelt Beutler og Cerami, New Eng. J. of Med.. 316:379-385 [1987]).
Erkjennelsen av kakektins brede innflytelse på forskjellige sykdomstilstander har ført til forsøk på å kontrollere dets virkning. For eksempel har forsøk vist at antistoffer som reagerer spesifikt med kakektin, kan være tera-peutisk anvendbare til å kontrollere de immunmodulerende responser som nå er kjent for å være forbundet med kakektin (se U.S. patentskrifter nr. 4.603.106 og 4.684.623). Særlig har nøytraliserende antistoffer med evne til å binde forskjellige epitoper på humankakektin med høy affinitet et betydelig potensial for mediering av de toksiske virkninger av for høye kakektinnivåer.
Det foreligger følgelig et behov for forbedrede antistoffer som kan nøytralisere de toksiske virkningene av kakektin in vlvo. Foreliggende oppfinnelse oppfyller disse behov.
Oppsummering av oppfinnelsen
Det er tilveiebrakt nye monoklonale antistoffer eller fragmenter derav for anvendelse in vitro, kjennetegnet ved at a) det monoklonale antistoff eller fragmentet derav binder humankakektin spesifikt, b) mindre enn 400 ng av det monoklonale antistoff vil nøytralisere 20 ng humankakektin i en L929-cellecytolytisk
analyse, og
c) det monoklonale antistoff eller fragmentet derav blokkerer bindingen av monoklonale antistoffer produsert av
ATCC HB9736 eller ATCC HB9737 til kakektin.
Videre er det tilveiebrakt cellelinjer som er kjennetegnet ved at de er i stand til å produsere det monoklonale antistoff eller fragmentet derav ifølge krav 1.
Det er også tilveiebrakt prøvesett for anvendelse ved påvisning av tilstedeværelsen av en infeksjon med endotoksinbærende bakterier i en vert, kjennetegnet ved at det omfatter et monoklonalt antistoff eller fragment derav produsert av ATCC HB9736 eller ATCC HB9737, og markører som gir et påvisbart signal og som er kovalent bundet til antistoffet eller fragmentet derav, eller bundet til andre-antistoffer som reagerer med et av de monoklonale antistoffer eller fragmenter derav.
Endelig er det tilveiebrakt anvendelse in vitro av et monoklonalt antistoff eller fragment derav ifølge krav 1 ved
påvisning av kakektin.
Beskrivelse av de bestemte utførelsesformene
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det tilveiebrakt nye celler med evne til å produsere nøytraliserende monoklonale antistoffer med ønskede affiniteter og preparater som omfatter slike antistoffer, idet disse preparatene er i stand til selektivt å gjenkjenne epitoper som er til stede på humankakektin. De foreliggende celler har identifiserbare kromo-somer hvor bakterielinje-DNA fra dem eller en forløpercelle er blitt omordnet slik at den koder for et antistoff med et bindingssete for en ønsket epitop på humankakektin. Disse monoklonale antistoffene kan anvendes på en lang rekke forskjellige måter, inkludert diagnose.
De således tilveiebrakte monoklonale antistoffer er særlig anvendbare, sammenlignet med tidligere kjente antistoffer, ved diagnostiseringen av alvorlige sykdommer, slik som bakteriemi, sårbetennelse, kakeksi eller andre sykdomstilstander forbundet med forhøyede nivåer av kakektin. Antistoffene vil således vanligvis ha nøytraliserende aktivitet ved mindre enn 400 ng, fortrinnsvis mindre enn ca. 300 ng, helst ca. 50-200 ng, i den L929-cellecytolytiske analyse. Dette høyere aktivitetsnivå muliggjør benyttelse av betydelig lavere doseringsnivåer for diagnostiseringer.
Fremstillingen av monoklonale antistoffer kan utføres ved å udødeliggjøre en cellelinje med evne til å uttrykke nukleinsyresekvenser som koder for antistoffer som er spesifikke for en passende epitop på humankakektin. Den udødelig-gjorte cellelinje kan være en pattedyrcellelinje som er blitt omdannet ved onkogenese, ved transfeksjon, mutasjon e.l. Slike celler omfatter myelomlinjer, lymfomlinjer eller andre cellelinjer som er i stand til å understøtte ekspresjonen og ut-skillelsen av immunglobulinet eller bindende fragment derav in vitro. Immunglobulinet eller fragmentet kan være et naturlig forekommende immunglobulin fra et annet pattedyr enn de fore-trukne muse- eller menneskekilder, fremstilt ved transformasjon av en lymfocytt, særlig en splenocytt, ved hjelp av et virus, eller ved fusjon mellom lymfocytten og en neoplastisk celle, f.eks. et myelom, hvorved det fås en hybridcellelinje. Vanligvis vil splenocytten bli erholdt fra et dyr som er immunisert mot kakektinbeslektede antigener eller fragmenter derav, og som inneholder et epitopsete. Immuniseringsfremgangs-måter er godt kjente og kan variere betydelig, men likevel være effektive (se Goding, Monoclonal Antibodies: Princi<p>les and Practice. 2. utg., Academic Press, N.Y. [1986]).
Hybridcellelinjene kan klones og sorteres ifølge vanlige teknikker, og antistoffer som er i stand til å bindes til de ønskede humane kakektindeterminanter med passende affiniteter kan påvises i cellesupernatantene. De passende hybridcellelinjene kan så dyrkes i storskalakultur eller injiseres i bukhulen til en passende vert for produksjon av antistoffer i
ascitesvæske.
I og med at man har antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse, som er kjent for å være spesifikke for human-kakektinproteinet, kan supernatantene i de etterfølgende for-søk i noen tilfeller undersøkes i en konkurranseanalyse med de foreliggende monoklonale antistoffer som et middel for å iden-tifisere ytterligere eksempler på de ønskede antihumankakektin monoklonale antistoffer (såkalte "blokkerende antistoffer"). Hybridcellelinjer kan således lett produseres fra flere forskjellige kilder basert på tilgjengeligheten av foreliggende antistoffer som er spesifikke for de bestemte kakektindetermi-nantene ved de passende affinitetsnivåer.
Alternativt kan, når det er tilgjengelig hybridcellelinjer som produserer antistoffer som er spesifikke for de foreliggende epitopseter, disse hybridcellelinjene fusjoneres med andre neoplastiske B-celler, hvor slike andre B-celler kan tjene som mottakere for genom-DNA som koder for antistoffene. Disse antistoffene kan være funksjonelle på celleoverflaten og, f.eks., ikke som reseptorer. Selv om neoplastiske B-celler fra gnagere, særlig murine celler, benyttes vanligvis, kan andre pattedyrarter anvendes, slik som hare-, storfe-, saue-, heste- eller grisearter, eller fjærfe e.l.
De monoklonale antistoffene kan være av hvilken som helst av klassene eller underklassene av immunglobuliner, slik som IgM, IgD, IgA eller IgE, eller underklasser av IgG som er kjent for hver dyreart. Generelt kan de monoklonale antistoffene anvendes intakte, eller som bindende fragmenter, slik som Fv, Fab, F(ab')2, men vanligvis intakte.
Cellelinjene ifølge foreliggende oppfinnelse kan finne andre anvendelser for den direkte produksjon av de monoklonale antistoffene. Cellelinjene kan fusjoneres med andre celler (slik som passende legemiddelmerkede humanmyelom-, musemyelom- eller humanlymfoblastoidceller), hvorved det fås hybridomer eller triomer, og således sørge for overføringen av genene som koder for de monoklonale antistoffene. Alternativt kan cellelinjene brukes som en kilde for kromosomene som koder for immunglobulinene, som kan isoleres og overføres til celler ved hjelp av andre teknikker enn fusjon. I tillegg kan genene som koder for de monoklonale antistoffene, isoleres og brukes i henhold til teknikker med rekombinant DNA til fremstillingen av det bestemte immunglobulin i flere forskjellige verter. Særlig kan, ved å fremstille cDNA-biblioteker fra budbringer-RNA, en enkelt cDNA-klon som koder for immunglobulinet og er fri for introner, isoleres og plasseres i egnede prokaryote eller eukaryote ekspresjonsvektorer og deretter transformeres i en vert for endelig masseproduksjon (se generelt U.S. patentskrifter nr. 4.172.124, 4.350.683, 4.363.799, 4.381.292 og 4.423.147. Se også Kennett et al., Monoclonal Antibodies. Plenum, New York [1980] og henvisninger som er gitt der).
Nærmere bestemt kan immunglobulinene eller fragmen-tene ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles i bakterier eller gjær i henhold til hybrid-DNA-teknikk (se Boss et al., Nucl. Acid. Res.. 12:3791 og Wood et al., Nature. 314:446). For eksempel kan budbringer-RNA transkribert fra genene som koder for de lette og tunge kjedene i de monoklonale antistoffene, fremstilt ved hjelp av en cellelinje ifølge foreliggende oppfinnelse, isoleres ved hjelp av differensiell cDNA-hybridi-sering under anvendelse av annen cDNA fra BALB/c-lymfocytter enn den foreliggende klon. mRNA som ikke hybridiserer vil være rik på budskapet som koder for de ønskede immunglobulinkjeder. Om nødvendig kan denne fremgangsmåten gjentas for ytterligere å øke nivåene av den ønskede mRNA. Det fratrukne mRNA-preparat kan så reverstranskriberes, hvorved man får en cDNA-blanding som er anriket på de ønskede sekvenser. RNA kan hydrolyseres ved en passende RNAse, og ssDNA kan gjøres dobbelttrådet med DNA-polymerase I og vilkårlige primere, f.eks. vilkårlig fragmentert kalvethymus-DNA. Den resulterende dsDNA kan så klones ved innføring i en passende vektor, f.eks. virus-vektorer, slik som lambdavektorer eller plasmidvektorer (slik som pBR322, pACYC184 etc). Ved å utvikle prober basert på kjente sekvenser for de konstante områdene i de lette og tunge kjedene, kan de cDNA-klonene som har gener som koder for de ønskede lette og tunge kjedene, identifiseres ved hybridi-sering. Deretter kan genene skjæres ut fra plasmidene, mani-puleres for å fjerne overflødig DNA oppstrøms fra initierings-kodonet eller konstantområde-DNA, og så innføres i en passende vektor for transformasjon av en vert og endelig ekspresjon av genet.
Passende kan pattedyrverter (f.eks. museceller) anvendes til å fremstille kjeden (f.eks. knytte de tunge og lette kjedene sammen), hvorved man får et intakt immunglobulin, og dessuten utskille immunglobulinet fritt for ledersekvensen om ønsket. Alternativt kan man bruke encellede mikroorganismer for å fremstille de to kjedene, hvor ytterligere manipulasjon kan være påkrevet for å fjerne DNA-sekvensene som koder for de sekretoriske leder- og prosesserings-signaler, mens man sørger for et initieringskodon i 5'-enden til sekvensen som koder for den tunge kjeden. På denne måten kan immunglobulinene fremstilles og bearbeides slik at de settes sammen og glykolyseres i andre celler enn pattedyr-celler. Om ønsket kan hver av kjedene avkortes slik at i det minste det variable område beholdes, områder som så kan mani-puleres slik at det sørges for å få andre immunglobuliner, eller fragment som er spesifikt for kakektinepitopene (se f.eks. europeiske patentsøknader med publikasjonsnummer 0239400 og 0125023).
De monoklonale antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse er særlig anvendbare på grunn av sin høye affinitet for epitoper til humankakektin.
Monoklonale antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse kan således finne et stort antall forskjellige anvendelser in vitro. For eksempel kan de monoklonale antistoffene benyttes til å rense naturlig forekommende eller rekombinant humankakektin for selektivt å fjerne humankakektin i en heterogen blanding av proteiner e.l.
For diagnoseformål kan de monoklonale antistoffene enten være merket eller umerket. Vanligvis medfører diagnose-analysene å påvise dannelsen av et kompleks gjennom bindingen av det monoklonale antistoff til proteinet. Når de er umerkede, finner antistoffene anvendelse i agglutineringsanalyser. I tillegg kan umerkede antistoffer anvendes sammen med andre merkede antistoffer (andre-antistoffer) som reagerer med det monoklonale antistoff, slik som antistoffer som er spesifikke for immunglobulin. Alternativt kan de monoklonale antistoffene være direkte merket. Et stort antall forskjellige markører kan anvendes, slik som radionuklider, fluorescerende midler, enzymer, enzymsubstrater, enzymkofaktorer, enzyminhibitorer, ligander (særlig haptener) etc. Et stort antall typer av immunologiske analyser er tilgjengelig, og f.eks. omfatter noen de som er beskrevet i U.S. patentskrifter nr. 3.817.827, 3.850.752, 3.901.654, 3.935.074, 3.984.533, 3.996.345, 4.034.074 og 4.098.876.
Vanligvis benyttes de monoklonale antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse i enzym-immunanalyser, hvor de foreliggende antistoffer, eller andre-antistoffer fra en annen art, er konjugert til et enzym. Når en prøve som inneholder humankakektin, slik som humant blod eller lysat derav, blandes med de foreliggende antistoffer, oppstår binding mellom antistoffene og de molekylene som oppviser den ønskede epitop. Slike komplekser kan så separeres fra de ikke-bundne reagen-ser, og et andre-antistoff (merket med et enzym) tilsettes. Deretter bestemmes tilstedeværelsen av antistoff-enzymkonju-gatet som er spesifikt bundet til cellene. Andre vanlige teknikker som er godt kjent for fagfolk innen teknikken, kan også benyttes.
Prøvesett kan også leveres for bruk sammen med de foreliggende antistoffer til påvisning av humankakektin i opp-løsninger, eller tilstedeværelsen av humankakektinepitoper i rekombinante fraksjoner. Det foreliggende preparat med monoklonalt antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse kan således tilveiebringes, vanligvis i en lyofilisert form, enten alene eller sammen med antistoffer som er spesifikke for endo-toksiner, eksotoksiner eller gramnegative bakterier. Antistoffene som kan være konjugert til en markør eller ikke-konjugert, er inkludert i prøvesettene sammen med buffere, slik som tris, fosfat, karbonat etc, stabiliseringsmidler, biocider, inerte proteiner, f.eks. bovint serumalbumin e.l. Generelt vil disse stoffene være til stede i mindre enn ca. 5 vekt%, basert på mengden av aktivt antistoff, og vanligvis til stede i en samlet mengde på minst ca. 0,001 vekt%, igjen basert på antistoffkonsentrasjonen. Ofte vil det være ønskelig å ta med et inert fyllstoff eller en eksipiens for å fortynne de aktive bestanddelene, idet eksipiensen kan være til stede ved fra ca. 1 til 99 vekt% av den totale blanding. Når et andre-antistoff med evne til å binde til det monoklonale antistoff anvendes, vil dette vanligvis være til stede i en sepa-rat ampulle. Det andre antistoff er vanligvis konjugert til en markør og formulert på en analog måte med antistoffpreparatene beskrevet ovenfor.
De monoklonale antistoffer ifølge oppfinnelsen kan lyofiliseres for lagring og rekondisjoneres i en egnet bærer før bruk. Denne teknikken er blitt påvist å være effektiv med vanlige immunglobuliner, og vanlig kjente lyofiliserings- og rekondisjoneringsteknikker kan anvendes. Det vil forstås av fagfolk innen teknikken at lyofilisering og rekondisjonering kan føre til varierende grader av antistoffaktivitetstap (med f.eks. vanlige immunglobuliner er IgM-antistoffer tilbøyelige til å ha større aktivitetstap enn IgG-antistoffer), og at bruksnivåer vil kunne måtte bli regulert for å kompensere.
FORSØK
Fremstilling og rensing av kakektin
Rekombinant humankakektin (Pennica et al., Nature, 312:724-729 [1984] og Shirai et al., Nature, 313:803-806
[1985] ) ble uttrykt som et intracellulært protein i gjær fra et syntetisk gen som koder for et startmetionin og sekvensen til fullstendig kakektin, idet kodoner ble valgt til å gjen-speile kodonene til høyuttrykte gjærgener i henhold til standardteknikker. De syntetiske sekvensene ble plassert ned-strøms fra en hybrid alkoholdehydrogenase/glyseraldehyd-3-fosfat-dehydrogenase (ADH2/GAPDH) promoter. Kakektinsyntese ble indusert i transformerte kulturer av Saccharomyces cere-visiae ved berøving av glukose. Cirka 5-10 % av samlet gjær-protein var kakektin.
Kakektinet ble renset fra urene gjærekstrakter ved (a) ammoniumsulfatfraksjonering, (b) Q-Sepharose-kolonnekromatografi med hurtig gjennomstrømning, (c) S-Sepharose-kolonnekromatografi med hurtig gjennomstrømning og (d) Sephacryl S-200 (HR) kolonnekromatografi.
Denne fremgangsmåten gav ca. 80 % gjenvinning av kakektinaktivitet analysert med aktinomycin D-behandlede L929-celler (Ruff og Gifford (1981), Tumor Necrosis Factor, Lympho-kines, 2:235-272). Den spesifikke aktivitet til renset kakektin var 2-4 x IO<8> enheter/mg, og renheten var høyere enn 98 % bedømt ved hjelp av SDS-polyakrylamidgelelektroforese.
Fremstilling av monoklonale antistoffer til kakektin
BALB/c-mus ble immunisert intraperitonealt med 5-
25 ug Freunds komplette adjuvans og forsterket to ganger med
den samme dose i Freunds ukomplette adjuvans med tre ukentlige mellomrom. En siste intraperitoneal forsterkning med den samme dose i vandig oppløsning ble gitt og fusjonen utført 3-4 dager senere.
Miltceller (ca. IO<8> celler) fra immuniserte mus ble fusjonert med ca. 2 x IO<7> myelomceller (P3-X63-Ag8.653)
(Kearney et al., J. Immunol. [1979], 123:1548-1550) under anvendelse av polyetylenglykol ifølge Kohler og Milstein ( Nature 256:495 [1979]). Cellene ble platet ut på mikrotiterplater, og hybridene ble valgt ut ved hjelp av hypoksantinaminopterin-thymidinmediet (HAT-mediet).
Fem fusjoner ble utført med miltceller fra fem mus immunisert med kakektin. Ved å bruke fastfase enzymbundet immunsorbentanalyse ble det erholdt 60 positive kloner som produserte monoklonale antistoffer til kakektin.
Hybridene fra positive brønner ble klonet tre ganger med grensefortynninger for å sikre at hver var en virkelig klon. Fjorten hybridomer som var positive for kakektin, ble klonet og karakterisert.
Kakektin/ TNF- bioanalvse: L929- celle- cvtotoksisitet
TNF-aktivitet ble målt under anvendelse av en cyto-lytisk analyse med aktinomycin D-behandlede 929-celler som beskrevet av Ruff og Gifford i Lymphokines. 2:235 (1981).
L929-celler (CCL1, American Type Culture Collection, Rockville, MD) holdes i RPMI 1640 supplert med 10 mM Hepes og 10 % kalvefosterserum (eller DME + 10 % FBS). Sammenflytende kulturer (3-4 x IO<7> celler/75 cm kolbe) frigjøres ved kortvarig trypsinbehandling (skylling med 0,05 % trypsin) i fysiologisk saltoppløsning inneholdende 5 mM EDTA og 10 mM Hepes, pH 7,4, og på nytt oppslemmet i friskt medium inneholdende aktinomycin D (1 pg/ml). Cellene plates så ut i 96-brønners mikrotiter-skåler (5-7 x 10<4> celler/brønn).
Etter 2 timer i kultur tilsettes seriefortynnede prøver til brønnene (mindre enn 10-20 % serum), og platene inkuberes over natten (5 % C02, 37 °C). Prøver analyseres in kvadruplo. Den neste dag dekanteres mediet etter mikroskopisk evaluering, og brønnene fylles med en oppløsning av 0,2 % krystallfiolett, 10 % formalin og 0,01 % fosfat, pH 7-7,5, i 5 minutter, vaskes grundig med vann og tørkes. Graden av lyse kvantifiseres spektrofotometrisk (550-570 nM) på en mikro-titerplateleser. Analyseresultatene uttrykkes som U/ml, idet én enhet (U) defineres som mengden av kakektin som resulterer i lyse av 50 % av cellene.
In vitro nøvtraliserinqsanalvse
Rekombinant humankakektin (20 ng/ml i 0,02 M tris-HC1, pH 8,0, 0,15 M NaCl, 1 mg/ml BSA) blandes med like store volumer fortynnet antistoff og inkuberes ved 37 °C i 60 minutter. Blandingen fortynnes 1:10 med friskt medium inneholdende aktinomycin D (ug/ml), og 0,1 ml seriefortynnet (to ganger) prøver in kvadrupliko tilsettes mikrotiterplatebrønner. Den gjenværende cytolytiske aktivitet bestemmes ved å bruke L929-cellecytotoksisitetsanalysen.
Karakterisering av monoklonale antistoffer
Fjorten hybridomer som er positive for kakektin ble identifisert og subklonet. Antistoffene fremstilt ved hjelp av disse hybridomene ble karakterisert med hensyn på sin evne til å konkurrere med monoklonalt antistoff 18-1-1 (Tracey et al., Nature, 330:662-664 [1987]) for kakektinbinding i en ELISA. Som vist i tabell 1 faller de monoklonale antistoffene innen-for tre klasser; de som ikke konkurrerer med 18-1-1, de som gjør det og de som oppviser intermediær konkurranse. For å bekrefte at de monoklonale antistoffene som ikke konkurrerte med 18-1-1 var spesifikke for kakektin, ble det utført en kakektinoppfangingsanalyse. De monoklonale antistoffene ble bundet på en fast fase for å fange opp kakektin, og monoklonalt antistoff 18-1-1 ble brukt som det merkede antistoff. Alle de monoklonale antistoffene var spesifikke for kakektin ved denne analysen.
Forsøk med kondisjonerte medier fra hybridomceller ble også utført for å bestemme i hvilken utstrekning de monoklonale antistoffene nøytraliserte den celledrepende aktivitet av kakektin. Alle de 14 monoklonale antistoffene ble produsert i museascitesvæske for videre karakterisering. Virkningsfull-heten av de rensede monoklonale antistoffene når det gjelder å beskytte L929-celler mot dreping med kakektin, ble bestemt. Den nøytraliserende aktivitet av MAb 1-2-4B1 var blitt bekref-tet med det rensede materiale. Inkubasjon av MAb 2-2-3E3
(50 ng/ml) med et like stort volum rekombinant kakektin (20 ng/ml) ved 37 °C i 60 minutter viste at 50 % av den cytolytiske aktivitet av kakektin ble nøytralisert, bestemt ved hjelp av L929-celledrepingsanalysen. Som vist i tabell 1 er MAb 2-2-3E3, som gjenkjenner den samme epitop som MAb 18-1-1, påkrevet i 1/8 av mengden av 18-1-1 for cellebeskyttelse. Også vist i tabell 1 er at de fleste av antistoffene med den samme spesifisitet som 18-1-1 nøytraliserte kakektin (ved 100 %) i L929-celledrepingsanalysen. Andre antistoffer, slik som 1-2-4B1, som har andre epitopspesifisiteter enn 18-1-1, hadde også betydelig nøytraliserende aktivitet.
Claims (9)
1. Monoklonalt antistoff eller fragment derav for anvendelse in vitro,
karakterisert ved at a) det monoklonale antistoff eller fragmentet derav binder humankakektin spesifikt, b) mindre enn 400 ng av det monoklonale antistoff vil nøytralisere 20 ng humankakektin i en L929-cellecytolytisk analyse, og c) det monoklonale antistoff eller fragmentet derav blokkerer bindingen av monoklonale antistoffer produsert av ATCC HB9736 eller ATCC HB9737 til kakektin.
2. Monoklonalt antistoff eller fragment derav ifølge krav 1,
karakterisert ved at det monoklonale antistoff eller fragmentet derav blokkerer bindingen av monoklonalt antistoff produsert av ATCC HB9736 til kakektin.
3. Cellelinje,
karakterisert ved at den er i stand til å produsere det monoklonale antistoff eller fragmentet derav ifølge krav 1.
4. Cellelinje ifølge krav 3,
karakterisert ved at den har deponerings-nummer ATCC HB9736 eller ATCC HB9737.
5. Cellelinje ifølge krav 4,
karakterisert ved at den har deponerings-nummer ATCC HB9737.
6. Monoklonalt antistoff ifølge krav 1, karakterisert ved at det er konjugert til en markør som gir et påvisbart signal.
7. Monoklonalt antistoff ifølge krav 6, karakterisert ved at markøren er en fluorescerende forbindelse eller et enzym.
8. Prøvesett for anvendelse ved påvisning av tilstedeværelsen av en infeksjon med endotoksinbærende bakterier i en vert, karakterisert ved at det omfatter et monoklonalt antistoff eller fragment derav produsert av ATCC HB9736 eller ATCC HB9737, og markører som gir et påvisbart signal og som er kovalent bundet til antistoffet eller fragmentet derav, eller bundet til andre-antistoffer som reagerer med et av de monoklonale antistoffer eller fragmenter derav.
9. Anvendelse ln vitro av et monoklonalt antistoff eller fragment derav ifølge krav 1 ved påvisning av kakektin.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO952509A NO180637C (no) | 1988-07-18 | 1995-06-22 | Fremgangsmåte for fremstilling av monoklonale antistoffer eller fragmenter derav |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US22020688A | 1988-07-18 | 1988-07-18 | |
| PCT/US1989/003025 WO1990000902A1 (en) | 1988-07-18 | 1989-07-12 | Monoclonal antibodies reactive with cachectin |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO901247D0 NO901247D0 (no) | 1990-03-16 |
| NO901247L NO901247L (no) | 1990-03-16 |
| NO179615B true NO179615B (no) | 1996-08-05 |
| NO179615C NO179615C (no) | 1996-11-13 |
Family
ID=22822529
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO901247A NO179615C (no) | 1988-07-18 | 1990-03-16 | Monoklonale antistoffer eller fragmenter derav som reagerer med kakektin, cellelinjer som produserer dem, prövesett som omfatter dem, samt anvendelse derav in vitro |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5658803A (no) |
| EP (1) | EP0351789B1 (no) |
| JP (1) | JP2638652B2 (no) |
| AT (1) | ATE173766T1 (no) |
| AU (1) | AU626572B2 (no) |
| CA (1) | CA1340018C (no) |
| DE (1) | DE68928857T2 (no) |
| DK (1) | DK69890A (no) |
| ES (1) | ES2124209T3 (no) |
| FI (1) | FI101937B1 (no) |
| IL (1) | IL90990A (no) |
| NO (1) | NO179615C (no) |
| NZ (1) | NZ229922A (no) |
| PT (1) | PT91201B (no) |
| WO (1) | WO1990000902A1 (no) |
| ZA (1) | ZA895372B (no) |
Families Citing this family (63)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030225254A1 (en) * | 1989-08-07 | 2003-12-04 | Rathjen Deborah Ann | Tumour necrosis factor binding ligands |
| CA2064915C (en) * | 1989-08-07 | 2001-05-29 | Deborah A. Rathjen | Tumour necrosis factor binding ligands |
| US5959087A (en) * | 1989-08-07 | 1999-09-28 | Peptide Technology, Ltd. | Tumour necrosis factor binding ligands |
| US6451983B2 (en) | 1989-08-07 | 2002-09-17 | Peptech Limited | Tumor necrosis factor antibodies |
| GB8918232D0 (en) * | 1989-08-10 | 1989-09-20 | Opal Stephen M | Pharmaceutical product for the treatment of septic shock |
| DE69033457T2 (de) * | 1989-08-16 | 2000-09-14 | Chiron Corp | Prohormonspaltungsplatzblockierungsantikörper |
| DE4037604A1 (de) * | 1990-04-25 | 1991-10-31 | Bayer Ag | Verwendung von anti-tnf-antikoerpern als arzneimittel bei der behandlung von ischaemien und deren folgen |
| AU8337291A (en) * | 1990-08-06 | 1992-03-02 | Cetus Corporation | Methods for the identification of cytokine convertase inhibitors |
| US5958413A (en) * | 1990-11-01 | 1999-09-28 | Celltech Limited | Use of antibodies to TNF or fragments derived thereof and xanthine derivatives for combination therapy and compositions therefor |
| GB9028123D0 (en) * | 1990-12-28 | 1991-02-13 | Erba Carlo Spa | Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha |
| WO1992011870A1 (en) * | 1991-01-11 | 1992-07-23 | Repligen Corporation | Method of preventing inflammatory damage |
| US7192584B2 (en) | 1991-03-18 | 2007-03-20 | Centocor, Inc. | Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies |
| US5919452A (en) * | 1991-03-18 | 1999-07-06 | New York University | Methods of treating TNFα-mediated disease using chimeric anti-TNF antibodies |
| EP0610201B2 (en) * | 1991-03-18 | 2007-09-26 | New York University | Monoclonal and chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor |
| US5698195A (en) * | 1991-03-18 | 1997-12-16 | New York University Medical Center | Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies |
| US5656272A (en) * | 1991-03-18 | 1997-08-12 | New York University Medical Center | Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies |
| US6277969B1 (en) | 1991-03-18 | 2001-08-21 | New York University | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
| US6284471B1 (en) | 1991-03-18 | 2001-09-04 | New York University Medical Center | Anti-TNFa antibodies and assays employing anti-TNFa antibodies |
| EP0525570A3 (en) * | 1991-07-31 | 1993-10-06 | Miles Inc. | Anti-idiotypic antibodies that mimic tnf |
| EP0585705B1 (en) * | 1992-08-28 | 1998-11-04 | Bayer Corporation | Use of monoclonal antibodies to TNF to treat bacterial meningitis |
| RU2139092C1 (ru) * | 1993-06-03 | 1999-10-10 | Терапьютик Антибодиз Инк. | Фрагменты антител в терапии |
| NZ278607A (en) * | 1994-02-07 | 1999-05-28 | Knoll Ag | Use of tnf antagonists for treating disorders involving elevated serum levels of il-6 wherein the serum levels are 500pg/ml or above |
| WO1996008516A1 (en) * | 1994-09-15 | 1996-03-21 | Verigen, Inc. | PORCINE ANTIBODIES TO TNF-α(ALPHA) |
| US6090382A (en) | 1996-02-09 | 2000-07-18 | Basf Aktiengesellschaft | Human antibodies that bind human TNFα |
| DK0929578T3 (da) | 1996-02-09 | 2003-08-25 | Abbott Lab Bermuda Ltd | Humane antistoffer, der binder human TNFalfa |
| DE19746868A1 (de) * | 1997-10-23 | 1999-04-29 | Knoll Ag | Verwendung von TNF-Antagonisten als Arzneimittel zur Behandlung von septischen Erkrankungen |
| UA81743C2 (uk) | 2000-08-07 | 2008-02-11 | Центокор, Инк. | МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ |
| CA2868614A1 (en) | 2001-06-08 | 2002-12-08 | Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. | Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies |
| TWI334439B (en) | 2001-08-01 | 2010-12-11 | Centocor Inc | Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses |
| MY150740A (en) | 2002-10-24 | 2014-02-28 | Abbvie Biotechnology Ltd | Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental |
| ES2347239T3 (es) | 2002-12-02 | 2010-10-27 | Amgen Fremont Inc. | Anticuerpos dirigidos al factor de necrosis tumoral y usos de los mismos. |
| US20050045635A1 (en) * | 2003-09-03 | 2005-03-03 | Jane Dong | Containers for storing articles |
| TW201705980A (zh) | 2004-04-09 | 2017-02-16 | 艾伯維生物技術有限責任公司 | 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法 |
| CA2903138A1 (en) | 2005-05-16 | 2006-11-23 | Abbvie Biotechnology Ltd. | Use of tnfa inhibitor for treatment of erosive polyarthritis |
| CA2632519A1 (en) * | 2005-12-06 | 2007-07-05 | Amgen Inc. | Polishing steps used in multi-step protein purification processes |
| SG170837A1 (en) | 2006-04-05 | 2011-05-30 | Abbott Biotech Ltd | Antibody purification |
| US9399061B2 (en) | 2006-04-10 | 2016-07-26 | Abbvie Biotechnology Ltd | Methods for determining efficacy of TNF-α inhibitors for treatment of rheumatoid arthritis |
| EP2007426A4 (en) | 2006-04-10 | 2010-06-16 | Abbott Biotech Ltd | COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF PSORIASTIC POLYARTHRITIS AND THEIR APPLICATIONS |
| US9605064B2 (en) | 2006-04-10 | 2017-03-28 | Abbvie Biotechnology Ltd | Methods and compositions for treatment of skin disorders |
| WO2008154543A2 (en) | 2007-06-11 | 2008-12-18 | Abbott Biotechnology Ltd. | Methods for treating juvenile idiopathic arthritis |
| NZ586828A (en) | 2008-01-15 | 2012-12-21 | Abbott Gmbh & Co Kg | Powdered antibody compositions and methods of making same |
| US8415291B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-04-09 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses |
| EP2702077A2 (en) | 2011-04-27 | 2014-03-05 | AbbVie Inc. | Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins |
| WO2013158279A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Protein purification methods to reduce acidic species |
| US9181572B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Methods to modulate lysine variant distribution |
| US9067990B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
| WO2013176754A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | Abbvie Inc. | Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography |
| US9512214B2 (en) | 2012-09-02 | 2016-12-06 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
| AU2013309506A1 (en) | 2012-09-02 | 2015-03-12 | Abbvie Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
| CN104955480A (zh) | 2013-01-25 | 2015-09-30 | 西蒙有限公司 | 用于选择性减少循环的生物活性可溶性tnf的组合物以及用于治疗tnf介导的疾病的方法 |
| AU2013381687A1 (en) | 2013-03-12 | 2015-09-24 | Abbvie Inc. | Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same |
| US9017687B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-28 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography |
| US8921526B2 (en) | 2013-03-14 | 2014-12-30 | Abbvie, Inc. | Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use |
| WO2014151878A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides |
| EP3052640A2 (en) | 2013-10-04 | 2016-08-10 | AbbVie Inc. | Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins |
| US9181337B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same |
| US9085618B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-07-21 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
| US8946395B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-02-03 | Abbvie Inc. | Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography |
| WO2015073884A2 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Abbvie, Inc. | Glycoengineered binding protein compositions |
| US10465003B2 (en) | 2016-02-05 | 2019-11-05 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes |
| EP3573658A4 (en) | 2017-01-30 | 2021-07-21 | Janssen Biotech, Inc. | ANTI-TNF ANTIBODIES, COMPOSITIONS, AND METHODS FOR TREATMENT OF ACTIVE PSORIATIC ARTHRITIS |
| JP2020506947A (ja) | 2017-02-07 | 2020-03-05 | ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド | 活動性強直性脊椎炎を治療するための抗ｔｎｆ抗体、組成物、及び方法 |
| CN113874073A (zh) | 2019-05-23 | 2021-12-31 | 詹森生物科技公司 | 用针对IL-23和TNFα的抗体的联合疗法治疗炎性肠病的方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4603106A (en) * | 1982-02-22 | 1986-07-29 | The Rockefeller University | Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay) |
| US4684623A (en) * | 1985-05-02 | 1987-08-04 | The Board Of Trustees Of The Cetus Corporation | Use of tumor necrosis factor as a weight regulator |
| US4870163A (en) * | 1985-08-29 | 1989-09-26 | New York Blood Center, Inc. | Preparation of pure human tumor necrosis factor and hybridomas producing monoclonal antibodies to human tumor necrosis factor |
| WO1987003489A1 (en) * | 1985-12-05 | 1987-06-18 | Biogen N.V. | Combinations of tumor necrosis factors and antibiotics and methods for treating tumors |
| US4834976A (en) * | 1986-07-03 | 1989-05-30 | Genetic Systems Corporation | Monoclonal antibodies to pseudomonas aeruginosa flagella |
| DE3631229A1 (de) * | 1986-09-13 | 1988-03-24 | Basf Ag | Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung |
-
1989
- 1989-07-12 JP JP1508080A patent/JP2638652B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1989-07-12 NZ NZ229922A patent/NZ229922A/en unknown
- 1989-07-12 AU AU39703/89A patent/AU626572B2/en not_active Ceased
- 1989-07-12 WO PCT/US1989/003025 patent/WO1990000902A1/en active IP Right Grant
- 1989-07-14 ZA ZA895372A patent/ZA895372B/xx unknown
- 1989-07-16 IL IL9099089A patent/IL90990A/en not_active IP Right Cessation
- 1989-07-17 CA CA000605914A patent/CA1340018C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-07-18 EP EP89113170A patent/EP0351789B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-07-18 DE DE68928857T patent/DE68928857T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-07-18 ES ES89113170T patent/ES2124209T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-07-18 PT PT91201A patent/PT91201B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-07-18 AT AT89113170T patent/ATE173766T1/de not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-03-16 DK DK069890A patent/DK69890A/da not_active Application Discontinuation
- 1990-03-16 FI FI901344A patent/FI101937B1/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-03-16 NO NO901247A patent/NO179615C/no not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-12-06 US US08/351,553 patent/US5658803A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0351789B1 (en) | 1998-11-25 |
| AU3970389A (en) | 1990-02-19 |
| JPH03501330A (ja) | 1991-03-28 |
| US5658803A (en) | 1997-08-19 |
| ES2124209T3 (es) | 1999-02-01 |
| ATE173766T1 (de) | 1998-12-15 |
| AU626572B2 (en) | 1992-08-06 |
| WO1990000902A1 (en) | 1990-02-08 |
| IL90990A (en) | 1994-10-21 |
| JP2638652B2 (ja) | 1997-08-06 |
| DE68928857D1 (de) | 1999-01-07 |
| FI901344A0 (fi) | 1990-03-16 |
| NO901247D0 (no) | 1990-03-16 |
| ZA895372B (en) | 1990-04-25 |
| PT91201A (pt) | 1990-02-08 |
| NO179615C (no) | 1996-11-13 |
| NO901247L (no) | 1990-03-16 |
| FI101937B (fi) | 1998-09-30 |
| FI101937B1 (fi) | 1998-09-30 |
| DE68928857T2 (de) | 1999-08-05 |
| PT91201B (pt) | 1996-12-31 |
| DK69890A (da) | 1990-05-15 |
| IL90990A0 (en) | 1990-02-09 |
| DK69890D0 (da) | 1990-03-16 |
| EP0351789A3 (en) | 1990-08-01 |
| EP0351789A2 (en) | 1990-01-24 |
| NZ229922A (en) | 1992-04-28 |
| CA1340018C (en) | 1998-09-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO179615B (no) | Monoklonale antistoffer eller fragmenter derav som reagerer med kakektin, cellelinjer som produserer dem, prövesett som omfatter dem, samt anvendelse derav in vitro | |
| US5639455A (en) | Immunosuppressant | |
| JP7262597B2 (ja) | 二重特異性抗体及びその作製方法と使用 | |
| KR900004420B1 (ko) | 인터류킨-1에 대한 항체 | |
| US5700466A (en) | Method of ameliorating or preventing septic shock using a monoclonal antibody specific to cachectin/tumor necrosis factor | |
| JPH06506120A (ja) | ヒト腫瘍壊死因子に特異的なモノクローナルなキメラ抗体 | |
| JPH01501200A (ja) | 抗体 | |
| JPH084496B2 (ja) | トリオーマ細胞およびその製造方法 | |
| EP0364778B1 (en) | Antibody against interleukin-1beta | |
| JPH07505767A (ja) | ヒトインターロイキン−５に対するヒト化モノクローナル抗体の設計，クローン化および発現 | |
| JPH0730116B2 (ja) | ヒトインターロイキン―４の抗体アンタゴニスト | |
| EP0491878B1 (en) | Compositions for the inhibition of protein hormone formation and uses thereof | |
| AU641178B2 (en) | Prohormone cleavage site blocking antibody | |
| EP0511308B1 (en) | Chimeric immunoglobulin for cd4 receptors | |
| US5030564A (en) | Monoclonal antibody specific to the lymphokine LK 2 and its method of production | |
| EP0347728B1 (en) | Monoclonal antibody to human lymphotoxin and use thereof | |
| JPH0213376A (ja) | 緑膿菌に対するモノクローナル抗体、ならびにその調製および使用 | |
| Hausman et al. | Alteration of immunoglobulin phenotype in cell culture-adapted lines of two mouse plasmacytomas. | |
| FI102115B (fi) | Diagnostiikassa käytettävä monoklonaalinen vasta-ainekoostumus ja sitä sisältävä testipakkaus | |
| WO1989009831A1 (en) | Lak cell cytotoxin | |
| NO180637B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av monoklonale antistoffer eller fragmenter derav | |
| JPH06503956A (ja) | 腫瘍細胞に対する標的決定ＩｇＥエフェクター細胞 | |
| US7037496B2 (en) | Chimeric immunoglobulin for CD4 receptors | |
| JPH06125784A (ja) | モノクローナル抗体，ハイブリドーマ，その製造法および用途 | |
| JP2003535021A (ja) | 抗体ワクチン避妊薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN JANUARY 2003 |