NO166486B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid. - Google Patents
Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid. Download PDFInfo
- Publication number
- NO166486B NO166486B NO832148A NO832148A NO166486B NO 166486 B NO166486 B NO 166486B NO 832148 A NO832148 A NO 832148A NO 832148 A NO832148 A NO 832148A NO 166486 B NO166486 B NO 166486B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- arg
- ala
- leu
- peptide
- gln
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 74
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 47
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 34
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 34
- -1 maleinate Chemical compound 0.000 claims description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 27
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 25
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 24
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 13
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 13
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 11
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 6
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 2
- SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 claims 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 claims 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 claims 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 claims 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 claims 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 claims 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 claims 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 claims 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 claims 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 claims 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 claims 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 claims 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 claims 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 claims 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 claims 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 claims 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 claims 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 claims 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 claims 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 claims 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 30
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 30
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 29
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 10
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 9
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 8
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 8
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 7
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 7
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical group C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002303 hypothalamus releasing factor Substances 0.000 description 4
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 3
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 3
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 3
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000038461 Growth Hormone-Releasing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000005726 Pituitary Hormone-Releasing Hormones Human genes 0.000 description 2
- 108010031037 Pituitary Hormone-Releasing Hormones Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 2
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 2
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 150000004658 ketimines Chemical class 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 208000003068 pituitary dwarfism Diseases 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000003578 releasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWOOKDULMBMMPN-UHFFFAOYSA-N 3-(2-ethyl-1,2-oxazol-2-ium-5-yl)benzenesulfonate Chemical compound O1[N+](CC)=CC=C1C1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 MWOOKDULMBMMPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 101710183427 CREB3 regulatory factor Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101000904177 Clupea pallasii Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 101800000736 Growth hormone-releasing factor Proteins 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- 101001075374 Homo sapiens Gamma-glutamyl hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 101000664737 Homo sapiens Somatotropin Proteins 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 208000009164 Islet Cell Adenoma Diseases 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYMWSBVKAPVTPI-UHFFFAOYSA-N N1N=[C-]N=C1 Chemical class N1N=[C-]N=C1 GYMWSBVKAPVTPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000006877 Pituitary Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010047386 Pituitary Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical class C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000006136 alcoholysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 125000002668 chloroacetyl group Chemical group ClCC(=O)* 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 150000001912 cyanamides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- GJAHYSLBRZODMY-UHFFFAOYSA-N dibenzylcyanamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1CN(C#N)CC1=CC=CC=C1 GJAHYSLBRZODMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- WMYNMYVRWWCRPS-UHFFFAOYSA-N ethynoxyethane Chemical group CCOC#C WMYNMYVRWWCRPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-O hydron;1,2-oxazole Chemical class C=1C=[NH+]OC=1 CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007928 imidazolide derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 201000002529 islet cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229940072783 liquimat Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000002182 neurohumoral effect Effects 0.000 description 1
- 210000004522 neurosecretory neuron Anatomy 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000022102 pancreatic neuroendocrine neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002161 passivation Methods 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003170 phenylsulfonyl group Chemical group C1(=CC=CC=C1)S(=O)(=O)* 0.000 description 1
- 125000001557 phthalyl group Chemical group C(=O)(O)C1=C(C(=O)*)C=CC=C1 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000009666 routine test Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilane Chemical group C[SiH](C)C PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N urethane group Chemical group NC(=O)OCC JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid med formel (I)
eller biologisk aktive fragmenter derav, hvor R er OH eller NH2 og R41 er Arg, Arg-Ala, Arg-Ala-Arg, Arg-Ala-Arg-Leu
eller des-R^, og det karakteristiske ved oppfinnelsen er som angitt i patentkravet.
Det ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen fremstill-bare peptid har innvirkning på funksjonen av hypofysen i mennesker og dyr ved at det fremmer frigivelsen av veksthormon fra hypofysen.
Siden tidlig i 50-årene har fysiologer og leger erkjent at hypotalamus i hjernen styrer alle de sekretoriske funksjoner i adenohypofysen. Denne kontroll er nevrohumoral, med spesialiserte nevrosekretoriske nevroner og hypotalamus som fremstiller spesielle polypeptider og virkningen og rollen for hvert av disse er å igangsette akutt og kronisk sekresjon av hvert hypofysehormon. Til nå har en hypotalamisk frigivende faktor vært karakterisert som hypofysehormonene tyrotropin og prolaktin (tripeptidet TRF), for hypofyse-gonadotropiner luteiniserende hormon og follikkelstimulerende hormon (dekapeptidet LRF, LH-RH, GnRH eller Gn-RF) og for hypofysehormonene 3-endorfin og adrenocorticotropin (det 41-aminosyre polypeptid CRF). I tillegg har en inhiberende faktor vært karakterisert: hypotalamisk somatostatin som i hypofysesammenheng inhiberer sekresjonen av veksthormon.
Hver av disse hypotalamiske frigivende faktorer og somatostatin har vært reprodusert ved totalsyntese og mange analoge av de native strukturer er blitt syntetisert, enkelte med langt større aktivitet enn de naturlige forbindelser.
Hittil er ikke en tilsvarende hypotalamisk frigivende faktor for hypofyse-veksthormonet eller somatotropin blitt karakterisert, selv om der har vært utstrakt fysiologisk og klinisk bevis for dets eksistens. Et av de vesentlige problemer ved isolering og karakterisering av den hypotalamiske veksthormon-frigivende faktor (i det følgende GRF) er at det aktive peptid synes å være tilstede i hvert hypotalamisk fragment i infinitesimale mengder som antas å være av størrelsesorden 50-150 femtomol. Dette er langt mindre enn noen gang beregnet for de andre hypotalamiske frigivende faktorer. I samsvar med dette er notatet om at hypotalamisk GRF har ytterst høy potens.
Et annet vesentlig problem ved isolasjonen av hypotalamisk GRF er nærværet i hypotalamiske ekstrakter av meget store mengder somatostatin som selvfølgelig forhindrer eller gir avvikende resultater ved enhver forsøkt bioassay. I løpet av de siste år har flere laboratorier påstått å ha isolert og karakterisert hypotalamisk GRF. Alle disse påstander viste seg siden å være feilaktige Schally A.V.S, et al. J. Biol. Chem. 246, 6647, 1971; Veber D.F. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 45, 235, 1971). Slike uriktige påstander kan delvis forklares ved vanskeligheten med bioassay av frigivning av veksthormon.
Et 44-rest polypeptid er blitt isolert fra human øycelle-tumor, renset, karakterisert, syntetisert og testet og som fremmer frigivelse av veksthormon (GH) av hypofysen. Dette peptid har sekvensen:
Det antas å være og refereres i det følgende til som PGRF
(human pankreatisk GRF) og benevnes også somatokrinin. To andre høyrensede peptider ble også isolert sammen med dette og som fremviser GH-frigivende aktivitet og som er PGRF (1-37) fri syre og PGRF (1-40) fri syre. Disse peptider kan anvendes for å fremme veksten av varmblodige dyr og koldblodige dyr i akvakultur.
Farmasøytiske preparater på basis av disse inkluderer PGRF, en analog eller biologisk aktive fragmenter derav, eller et
ikke-giftig salt av hvilke som helst av de nevnte, dispergert i en farmasøytisk tålbar væskeformet eller fast bærer. Slike farmasøytiske preparater kan anvendes i klinisk medisin, både human- og veterinærmedisin, ved akutt eller kronisk tilførsel for diagnostiske eller terapeutiske formål.
Nomenklaturen anvendt for å definere peptidene er den som spesifiseres av Schroder & Lubke, "The Peptides", Academic Press (1965) hvor i samsvar med vanlig representasjon aminogruppen ved N-enden vises til venstre og karboksylgruppen ved C-enden til høyre. Hvor aminosyreresten har isomer form er det L-formen av aminosyre som er representert med mindre annet uttrykkelig er angitt.
Peptidene syntetiseres ved hjelp av en passende metode, f.eks. ved eksklusiv fastfaseteknikk, ved delvis fastfaseteknikk, ved fragmentkondensering, ved klassiske oppløsnings-koblinger, eller ved anvendelse av nylig utviklet rekombinant DNA-teknikk. F.eks. er teknikken for eksklusiv fastfasesyntese angitt i læreboken "Solid-phase Peptide Synthesis", Stewart & Young, Freeman & Co., San Francisco, 1969 og er eksemplifisert ved læren i US patentskrift nr. 4.105.603 Vale et al. Fragmentkondensering-syntesemetoden er eksemplifisert i US patentskrift nr. 3.972.859. Andre tilgjengelige synteser er eksemplifisert i US patentskrift nr. 3.842.067 og 3.862.925. Fremstilling av de syntetiske peptider under anvendelse av rekombinant DNA-teknikk kan sannsynligvis anvendes for å tilfredsstille krav til produksjon i stor skala.
Felles ved koblingstype-syntesen er beskyttelsen av de labile sidekjedegrupper av de forskjellige aminosyredeler med passende beskyttende gruppe som vil forhindre en kjemisk reaksjon fra å foregå ved dette punkt inntil gruppen endelig fjernes. Vanligvis er dette også felles ved beskyttelsen av en a-aminogruppe på en aminosyre eller et fragment mens enheten reagerer ved karboksylgruppen, etterfulgt av den selektive fjernelse av den a-aminobeskyttende gruppe for å tillate påfølgende reaksjon å foregå på dette sted. Det er følgelig vanlig at man fremstiller en utgangsforbindelse som et trinn i syntesen og denne inkluderer hver av aminosyre-restene lokalisert i den ønskede sekvens i peptidkjeden med sidekjedegruppe knyttet til de tilhørende rester.
Som utgangsforbindelse anvendes et peptidmellomprodukt med formel: X<1->Tyr(X<2>)-Ala-Asp(X<3>)-Ala-Ile-Phe-Thr(X<4>)-Asn-Ser(X<5>)-Tyr(X<2>)-Arg(X<6>)-Lys(X<7>)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(X<5>)-Ala-Arg(X<6>)-Lys(X<7>)-Leu-Leu-Gln-Asp(X<3>)-Ile-Met-Ser(X<5>)-Arg(X6)-Gln-Gln-Gly-Glu(X3)-R34(X5)-Asn-Gln-Glu(X3) -
R38(X5 eller X<6>)-Gly-R40(X<6>)-Arg(X6)-Ala-Arg(X<6>)-Leu-X<8 >hvori X<1> er hydrogen eller en a-aminobeskyttende gruppe. De a-aminobeskyttende grupper som omfattes av X<1> er dem som er kjent å være nyttige innenfor trinnvis syntese av polypeptider. Blant klassene av a-aminobeskyttende grupper som dekkes av X<1> er (1) acyltype-beskyttende grupper som formyl, trifluoracetyl, ftalyl, toluensulfonyl (Tos), benzensulfonyl, nitrofenylsulfenyl, tritylsulfenyl, o-nitrofenoksyacetyl, kloracetyl, acetyl og a-klorbutyryl; (2) aromatiske uretan-typebeskyttende gruppe som benzyloksykarbonyl (Z) og substituert Z, som p-klorbenzyloksykarbonyl, p-nitrobenzyloksykarbonyl, p-brombenzyloksykarbonyl, p-metoksybenzyloksykarbonyl; (3) alifatiske uretanbeskyttende grupper som t-butyloksykarbonyl (BOC), diisopropylmetyloksy-karbonyl, isopropyloksykarbonyl, etoksykarbonyl allyloksy-karbonyl, (4) cykloalkyl-uretan-typebeskyttende grupper som cyklopentyloksykarbonyl, adamantyloksykarbonyl og cyklo-heksyloksykarbonyl; (5) tiouretan-typebeskyttende grupper som fenyltiokarbonyl; (6) alkyl-typebeskyttende grupper som trifenyImetyl (trityl), benzyl; (7) trialkylsilan-grupper som trimetylsilan. Den foretrukne a-aminobeskyttende gruppe er
BOC.
X<2> er en beskyttende gruppe for den fenoliske hydroksylgruppe i Tyr valgt fra gruppen bestående av tetrahydropyranyl, tert-butyl, trityl, Bzl, CBZ, 4Br-CBZ og 2,6-diklorbenzyl. Den foretrukne beskyttende gruppe er 2,6-diklorbenzyl. X<2> kan være hydrogen som betyr at der ikke er noen beskyttende grupper på hydroksyl-gruppen.
X<3> er hydrogen eller esterdannende beskyttende gruppe for karboksyl-gruppen i Asp eller Glu og er valgt fra gruppen bestående av Bzl, 2,6-diklorbenzyl, metyl og etyl.
X<4> og X<5> er beskyttende grupper for hydroksyl-gruppen i Thr og Ser og velges fra gruppen bestående av acetyl, benzoyl, tert-butyl, trityl, tetrahydropyranyl, Bzl, 2,6-diklorbenzyl og CBZ. Den foretrukne beskyttende gruppe er Bzl. X<4 >og/eller X^ kan være hydrogen som betyr at der ikke er noen beskyttende gruppe på hydroksyl-gruppen.
X<6> er en beskyttende gruppe for guanidino-gruppen på Arg valgt fra gruppen bestående av nitro, Tos, CBZ, adamantyloksykarbonyl og BOC, eller er hydrogen;
X<7> er hydrogen eller en beskyttende gruppe for sidekjede-aminosubstituenten i Lys. Illustrerende for egnede sidekjedeaminobeskyttende grupper er 2-klorbenzyloksykarbonyl (2-C1-Z), Tos, CBZ, t-amyloksykarbonyl og BOC.
Seleksjonen av en sidekjede-aminobeskyttende gruppe er ikke kritisk bortsett fra at den må være en som ikke fjernes under avbeskyttelsen av a-aminogruppene under syntesen. Følgelig kan den a-aminobeskyttende gruppe og den sidekjede-beskyttende gruppe ikke være den samme.
X<8> velges fra klassen bestående av en klormetylert harpiks eller en MBHA-harpiks.
Ved formelen for utgangsforbindelsen vil minst en av XI, X<2>, X3, X4, X5, X6, X<7> og X<8> være en beskyttende gruppe.
Ved seleksjon av en spesiell sidekjedegruppe som skal anvendes ved syntese av peptidene følges følgende regler: (a) den beskyttende gruppe bør være stabil overfor reagenset og under reaksjonsbetingelsene valgt for å fjerne den a-aminobeskyttende gruppe ved hvert trinn i syntesen, (b) den beskyttende gruppe bør bibeholde sine beskyttende egenskaper og ikke avspaltes under koblingsbetingelser, og (c) den sidekjede-beskyttende gruppe skal være fjernbar etter fullføring av syntesen inneholdende den ønskede aminosyresekvens under reaksjonsbetingelser som ikke vil endre peptidkjeden.
Peptidene blir foretrukket fremstilt under anvendelse av fastfasesyntese, f.eks. den som er beskrevet av Merrifield J. Am. Chem. Soc, 85, side 2149 (1963), selv om andre ekvivalente kjemiske synteser kjent på området også kan anvendes som tidligere nevnt. Fastfasesyntesen igangsettes fra C-enden av peptidet ved å koble en beskyttet a-aminosyre til en passende harpiks. Et slikt utgangsmaterial kan fremstilles ved å knytte a-aminobeskyttet Leu eller Ala med en esterbinding til en klormetylert harpiks eller en hydroksymetyl-harpiks. Fremstillingen av hydroksymetyl-harpiksen er beskrevet av Bodansky et al., Chem. Ind.
(London) 38, 1597-98 (1966). Klormetylerte harpikser kan fås i handelen fra Bio Rad Laboratories, Richmond, California og fra Lab. Systems, Inc. Fremstillingen av en slik harpiks er beskrevet av Stewart et al., "Solid Phase Peptide Synthesis"
(Freeman & Co., San Francisco 1969) kapitel 1, sidene 1-6. BHA- og MBHA-harpiks-bærere kan fås i handelen og anvendes generelt bare når det ønskede polypeptid som syntetiseres har et a-karboksamid ved C-enden.
Ala beskyttet mot BOC kobles til den klormetylerte harpiks i samsvar med metoden til Monahan og Gilon, Biopolymer 12, sidene 2513-19, 1973 når det f.eks. ønskes å syntetisere 40-aminosyrepeptidet. Etter koblingen av BOC-Ala til harpiksbæreren fjernes den a-aminobeskyttende gruppe, f.eks. ved anvendelse av trifluoreddiksyre (TFA) i metylenklorid, TFA alene eller HC1 i dioksan. Avbeskyttelsen gjennomføres ved en temperatur på mellom 0°C og romtemperatur. Andre standard spaltningsreagenser og betingelser for fjernelsen av spesifikke a-aminobeskyttende grupper kan anvendes som beskrevet i Schroder & Lubke, "The Peptides", 1, sidene 72-75 (Academic Press 1965).
Etter fjernelsen av den a-aminobeskyttende gruppe i Ala blir de resterende a-amino- og sidekjede-beskyttede aminosyrer koblet trinnvis i den ønskede rekkefølge til å oppnå utgangsforbindelsen definert i det foregående, eller som et alternativ til å tilsette hver aminosyre separat i syntesen kan enkelte av dem kobles til hverandre før tilsetningen til fastfasereaktoren. Seleksjonen av et passende koblingsmiddel hører til kjent teknikk for den fagkyndige. Spesielt egnet som koblingsmiddel er N,N'-dicykloheksylkarbodiimid (DCCI).
De aktiverende reagenser som anvendes ved fastfasesyntesen av peptidene er vel kjent innenfor peptidteknikken. Eksempler på passende aktiveringsreagenser er (1) karbodiimider som N,N'-diisopropylkarbodiimid, N-etyl-N'-(3-dimetylaminopro-pyl)karbodiimid, (2) cyanamider som N,N<1->dibenzylcyanamid,
(3) ketiminer, (4) isoksazoliumsalter som N-etyl-5-fenyl-isoksazolium-3'-sulfonat, (5) monocykliske nitrogenholdige heterocykliske amider med aromatisk karakter inneholdende et til fire nitrogener i ringen, som imidazolider, pyrazolider og 1,2,4-triazolider. Spesifikke heterocykliske amider som kan anvendes inkluderer N,N'-karbonyldiimidazol, N,N'-karbonyl-di-1,2,4-triazol, (6) alkoksylert acetylen som etoksyacetylen, (7) reagenser som danner et blandet anhydrid med karboksyldelen i aminosyren, f.eks. etylklorformiat og isobutylklorformiat og (8) reagenser som danner en aktiv ester med karboksyldelen i aminosyren, som nitrogenholdige heterocykliske forbindelser med en hydroksy-gruppe på et ring-nitrogen, f.eks. N-hydroksyftalimid, N-hydroksy-succinimid og 1-hydroksybenzotriazol (HOBT). Andre aktiverende reagenser og deres bruk ved peptidkobling er beskrevet av Schroder & Lubke supra, i kapitel III og av Kapoor, J. Phar. Sei., 59, side 1-27 (1970).
Hver beskyttet aminosyre eller aminosyresekvens innføres i fastfasereaktoren i et overskudd på dobbelt mengde eller mer, og koblingen kan gjennomføres i et medium av dimetylformamid (DMF):CH2C12 (1:1) eller i DMF eller CH2C12 alene. I tilfeller hvor ufullstendig kobling forekom gjentas koblings-prosedyren før fjernelse av den a-aminobeskyttende gruppe før tilkoblingen av den neste aminosyre. Vellykketheten ved koblingsreaksjonen i hvert trinn av syntesen overvåkes ved hjelp av ninhydrin-reaksjonen, som beskrevet av E. Kaiser et al. Anal. Biochem, 34, 595 (1970).
Etterat den ønskede aminosyresekvens er blitt fullført fjernes et utgangspeptid fra harpiksbæreren ved behandling med et reagens, som f.eks. flytende hydrogenfluorid, som ikke bare avspalter peptidet fra harpiksen, men også spalter alle resterende sidekjedebeskyttende grupper X<2>, X<3>, X<4>, X5, X6, X<7> og X<8> og den a-aminobeskyttende gruppe X<*> til å gi peptidet.
Som en alternativ rute kan mellomproduktpeptidet separeres fra harpiksbæreren ved alkoholyse hvoretter den isolerte C-terminale alkylester omdannes til syren ved hydrolyse. Eventuelle sidekjedebeskyttende grupper kan så avspaltes som tidligere beskrevet ved hjelp av andre kjente metoder, som katalytisk reduksjon (f.eks. Pd på BaSO^). Ved anvendelse av hydrogenfluorid for spaltning inkluderes anisol og metyletylsulfid i reaksjonsbeholderen for passivering.
Det følgende eksempel angir den foretrukne metode for syntetisering av PGRF ved hjelp av fastfaseteknikk. Det skjønnes selvfølgelig at syntese av tilsvarende kortere peptidfragment kan gjennomføres på samme måte ved enkelt å fjerne det nødvendige antall av aminosyrer ved den ene eller den annen ende av kjeden. Det antas imidlertid hittil at biologisk aktive fragmenter bør inneholde den indikerte sekvens ved N-enden.
EKSEMPEL I
Syntese av PGRF(1-44) fri syre med formel:
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks, som kan fås fra Lab Systems, Inc. inneholdende 0,9 mekv. Cl/l. Kobling av BOC-Leu til harpiksen gjennomføres ved hjelp av den generelle metode angitt av Monahan et al. i Biopolymers, bind 12 (1973) sidene 2513-2519, og resulterer i substitusjon av omtrent 0,22 mmol Leu pr gram harpiks. Alle løsnings-midler som anvendes blir omhyggelig avgasset ved gjennom-spyling av en inert gass, foretrukket helium, for å sikre fravær av oksygen som uønsket kunne oksydere svovelet i Met-resten.
Etter avbeskyttelse og nøytralisering blir peptidkjeden oppbygget trinnvis på harpiksen. Avbeskyttelse, nøytraliser-ing og addisjon av hver aminosyre gjennomføres i generelt samsvar med metoden angitt detaljert i Guillemin et al. US patentskrift nr. 3.904.594. Koblingene gjennomføres spesifikt som angitt i det følgende skjema.
For koblingsreaksjonen anvendes kort et mmol BOC-beskyttet aminosyre i metylenklorid pr gram harpiks, pluss en ekvivalent 0,5 molar DCCI i metylenklorid eller i 30 % DMF i metylenklorid, i 2 timer. Når Arg kobles anvendes en blanding av 10 % DMF og metylenklorid. Bzl anvendes som hydroksyl-sidekjedebeskyttende gruppe for Ser og Thr. 2-klorbenzyloksykarbonyl (2C1-Z) anvendes som den beskyttende gruppe for Lys-sidekjeden. Tos anvendes for å beskytte guanidinogruppen i Arg og Glu og Asp karboksylgruppe beskyttes som Bzl-ester. Den fenoliske hydroksylgruppe i Tyr beskyttes med 2,6-diklorbenzyl. Ved slutten av syntesen oppnås følgende sammensetning: X<1->Tyr(X<2>)-Ala-Asp(X<3>)-Ala-Ile-Phe-Thr(X<4>)-Asn-Ser(X<5>)-Tyr(X<2>)-Arg(X<6>)-Lys(X<7>)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(X<5>)-Ala-Arg(X6)-Lys(X7)-Leu-Leu-Gln-Asp(X3)-Ile-Met-Ser(X5) - Arg(X6)-Gln-Gln-Gly-Glu(X3)-Ser(X5)-Asn-Gln-Glu(X3) -
Arg(x<6>)-Gly-Ala-Arg(X<6>)-Ala-Arg(X<6>)-Leu-X<8>
hvori x<1> er BOC, X<2> er 2,6-diklorbenzyl, X<3> er benzylester, X<4> er Bzl, X<5> er Bzl, x<6> er Tos, X<7> er 2C1-Z og X<8> er en klormetylert harpiks.
Etterat den endelige Tyr-rest er blitt koblet til harpiksen fjernes BOC-gruppen med 45 % TFA i CH2CI2. For å spalte og avbeskytte den resterende beskyttede peptidharpiks behandles den med 1,5 ml anisol, 0,25 ml metyletylsulfid og 10 ml hydrogenfluorid (HF) pr gram peptidharpiks, ved -20°C, i en halv time og ved 0°C i en halv time. Etter fjernelse av HF under høyt vakuum vaskes harpiks-peptidresten vekselvis med tørr dietyleter og kloroform, og peptidet ekstraheres så med avgasset 2N vandig eddiksyre. Frysetørking av eddiksyre-ekstrakten gir et hvitt voluminøst material.
Det spaltede og avbeskyttede peptid blir så oppløst i 30 % eddiksyre og underkastet Sephadex G-50 fin gelfiltrering.
Peptidet blir så ytterligere renset ved hjelp av CM-32 karboksymetylcellulose (Whatman) kationbytter-kromatografer-ing (1,8 x 18 cm, Vlag = 50 ml) under anvendelse av en konkav gradient utviklet ved å slippe 1 L 0,4 M NH4OAC, pH 6,5 inn i en blandekolbe inneholdende 400 ml 0,01 M NH4OAC, pH 4,5. Endelig rensing gjennomføres ved å anvende fordelings-kromatografering på Sephadex G-50 fin bærer (Pharmacia) med et nBuOH:EtOH:pyridin:0,2 % N HOAc (4:1:1:7) løsningsmiddel-system. Rensingsdetaljer er generelt angitt i Ling et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 95, 945, (1980). De kromato-grafiske fraksjoner overvåkes omhyggelig ved hjelp av TLC og bare de fraksjoner som viser vesentlig renhet oppsamles.
Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse i forseglede rør under anvendelse av metoden som beskrevet i Anal. Biochem., 126, 144-156 (1982) under anvendelse av en Liquimat III aminosyre-analysator for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd, og dette ga følgende resultater: Asx(3,62), Thr(0,75), Ser(3,5), Glx(6,83), Gly(2,87), Ala(5,10), Val(0,9), Met(l,23), Ile(l,84), Leu(5,45), Tyr(2,09), Phe(0,91), Lys(2,31) ogArg(6,61). Analysen bekreftet den riktige sekvens.
EKSEMPEL II
Syntese av PGRF(1-40) med formel:
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks på måten beskrevet i eksempel I. Peptidet forutsettes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd og ga følgende resultater: Asx(389), Thr(0,88), Ser(3,66), Glx(7,04), Gly(3,07), Ala(4,02), Val(0,96), Met(l.Ol), Ile(l,86), Leu(4,28), Tyr(2,0), Phe(0,86), Lys(2,24) og Arg'(4 .15) . Analyse bekreftet den korrekte sekvens.
EKSEMPEL IIA
Syntese av PGRF(1-34) fri syre med formel: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-OH
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks på samme måte som beskrevet i eksempel I. Peptidet forutsettes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd, og dette ga følgende resultater: Asx(2,87), Thr(0,78), Ser(3,78), Glx(5,ll), Gly(l,93), Ala(3,03), Val(0,88), Met(0,96), Ile(l,88), Leu(4,14), Tyr(2,05), Phe(l,07), Lys(2,29) ogArg(3,22). Analyse bekreftet den korrekte sekvens.
EKSEMPEL IIB
Syntese av PGRF(1-31) fri syre med formel:
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptides Synthesizer på en klormetylert harpiks på samme måte som beskrevet i eksempel I. Peptidet forutsettes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd, og dette ga følgende resultater: Asx(2,73), Thr(0,75), Ser(2,77), Glx(3,95), Gly(0,98), Ala(3,06), Val(0,80), Met(0,98), Ile(l,77), Leu(4,28), Tyr(2,23), Phe(l,14), Lys(2,34) ogArg(3,22). Analyse bekreftet den kor-rekte sekvens.
EKSEMPEL IIC
Syntese av PGRF(1-28) fri syre med formel:
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks på samme måte som beskrevet i eksempel I. Peptidet forutsettes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd, og dette ga følgende resultater: Asx(2,66), Thr(0,73), Ser(2,66), Glx(l,98), Gly(0,81), Ala(2,89), Val(0,90), Met(l,15), Ile(l,72), Leu(4,14), Tyr(2,43), Phe(l,58), Lys(2,15) ogArg(2,19). Analyse bekreftet den korrekte sekvens.
EKSEMPEL III
Syntese av PGRF(1-44)-amid med formel:
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks på samme måte som beskrevet i eksempel I. Peptidet antas å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd, og dette ga følgende resultater: Asx(3,75), Thr(0,80), Ser(3,60), Glx(6,98), Gly(3,16), Ala(5,04), Val(0,77), Met(l,02), Ile(l,79), Leu(5,41), Tyr(2,03), Phe(0,84), Lys(2,39) ogArg(6,43). Analyse bekreftet den korrekte sekvens.
EKSEMPEL IV
Syntese av PGRF(1-40)-amid med formel: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-NH2 gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer og en MBHA-harpiks på den måte som er beskrevet i eksempel I. Dette peptid forutsettes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC. Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd, og dette ga følgende resultater: Asx(3,76), Thr(0,88), Ser(3,68), Glx(6,89), Gly(3,12), Ala(4,08), Val(0,88), Met(l,36), Ile(l,76), Leu(4,24), Tyr(2,00), Phe(0,80), Lys(2,32) ogArg(4,16). Analyse bekreftet den korrekte sekvens.
EKSEMPEL V
Syntese av PGRF(1-37) fri syre med formel:
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks .på samme måte som beskrevet i eksempel I. Peptidet antas å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd, og dette ga følgende resultater: Asx(3,92), Thr(0,79), Ser(3,61), Glx(7,05), Gly(l,97), Ala(3,17), Val(l,03), Met(l.O), Ile(l,91), Leu(4,37), Tyr(l,86), Phe(0,76), Lys(2,15) og Arg(3,40). Analyse bekreftet den korrekte sekvens.
EKSEMPEL VA
Syntese av PGRF(1-37)-amid med formel:
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks på samme måte som beskrevet i eksempel I. Peptidet forutsettes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Aminosyreanalyse gjennomføres etter hydrolyse for å kontrollere at den korrekte sekvens ble oppnådd, og dette ga gølgende resultater: Asx(4,02), Thr(0,80), Ser(3,49), Glx(6,90), Gly(l,92), Ala(3,08), Val(l,05), Met(l,01), Ile(l,77), Leu(4,05), Tyr(2,02), Phe(l,14), Lys(2,50) ogArg(3,27). Analyse bekreftet den korrekte sekvens.
EKSEMPEL VI
For å bestemme effektiviteten av peptidene for å fremme frigivelse av veksthormon ble in vitro bedømmelsen foretatt under anvendelse av syntetisk PGRF(1-40) i samsvar med eksempel II i side-ved-side-sammenligning med ekvimolare konsentrasjoner av ekstrahert og renset nativt PGRF(1-4) og en GRF sammenligningsstandard med en kjent effektivitet for å fremme frigivelse av veksthormon fra hypofyseceller. GRF sammenligningsstandard er beskrevet og definert i Brazeau, et al., Endocrinology, bind 110, A538(1982) og er en mengde av et preparat fra rotte-hypofyse som frembringer en halvveis maksimal respons med hensyn til GH-frigivning ved en hypofyse-cellemonolag-bioassay. Det anvendes kulturer som inkluderer celler av rotte-hypofysekjertler fjernet omtrent 4-5 døgn tidligere. Begge kulturer av definert standard medium og kulturer som anses optimale for sekresjon av veksthormon anvendes for den komparative testing, på den generelle måte beskrevet i Brazeau, et al. Regulatory Peptides, 1, 255, 1981. Inkubasjon med substansen som skulle testes gjennomføres 13-4 timer og delprøver av dyrkings-mediet fjernes og behandles for å måle deres innhold av immuno-reaktiv GH(ir GH) ved hjelp av en velkarakterisert radioimmunoassay.
Resultatene av denne sammenlignende testing viser at med ekvimolare forhold har syntetisk PGRF(1-40) full biologisk aktivitet av det native peptid, som vist i tabell I. ED50 av det syntetiske peptid er omtrent 113 picogram, som er langt mer kraftig enn et hvilket som helst annet molekyl som tidligere er påstått å ha en GH-frigivende faktor.
I tillegg til in vitro tester for sekresjon av veksthormon ble det også gjennomført in vivo forsøk ved å injisere det syntetiske peptid i normale hanrotter med kroppsvekt omtrent 200 g, bedøvet med pentobarbital. Resultatene angitt i tabell II viser at det syntetiske PGRF-peptid er en kraftig stimulator for sekresjon av hypofyse-veksthormon.
TABELL II
In vivo virkninger av syntetisk PGRF(1-40) på frigivelsen av hypofyse-veksthormon etter en enkel intravenøs injeksjon i normale rotter (4 dyr pr behandlingsdose).
Ytterligere testing viser at syntetiske fragmenter fra eksempler V og VA også fremviser meget vesentlig biologisk potens. Videre har PRGF(1-40)-peptid med cx-karboksamidet med C-enden fra eksempel IV hovedsakelig den dobbelte biologiske potens som det syntetiske peptid testet i eksempel VI.
EKSEMPEL VII
In vitro-bedømmelsene beskrevet i eksempel VI ble gjentatt under anvendelse av nativt PGRF(1-40) og nativt PGRF(1-44) og resultatene viste at nativt PGRF(1-44) har mer enn omtrent den dobbelte biologiske potens.
Ytterligere testing viser at yntetisk PGRF(1-44) fri syre som syntetisert i eksempel I fremviser noe mindre potens enn nativt PGRF(1-44) og at syntetisk PGRF(1-44)-amid fremviser hovedsakelig den samme potens som nativt PGRF(1-44). Syntetisk PGRF(1-44)-amid, ved injeksjon i laboratoriedyr (rotter) viser den samme type av GH-frigivende aktivitet som fremvises av PGRF(1-40) i tabell II i eksempel VI, men er omtrent 2,5 - 3,0 ganger mer potent på vektbasis enn PGRF(1-40) fri syre.
Omtrent 1 av 7.000 til 15.000 barn født i USA er kjent å være hypofyse-veksthormondefisiente eller "hypofysedverger", det vil si de er dverger på grunn av at de mangler de normale innhold av hypofyse-GH i deres blod. Der er kliniske grunner til å anta at de fleste av disse pasienter har en normal hypofyse-kjertel og at grunnen til deres problem er mangel enten på syntese, eller på sekresjon av hypofyse-frigivende faktor for GH. Syntetisk PGRF forventes å være den ideelle behandling for disse tilfeller som tidligere er blitt behandlet med injeksjoner av human-hypofyse-GH, et ytterst dyrt preparat oppnådd utelukkende fra human-hypofyser ved obduksjoner. Human-GH fremstilt ved DNA-rekombinant metode, selv om dette er opplyst i litteraturen, er ikke for tiden tilgjengelig for rutineformål. Syntetisk PGRF er et mye enklere molekyl og bør ha vesentlige fordeler for bruk over hele verden hvor antallet av slike hypofysedverger antas å være flere hundre tusen.
På grunn av at syntetisk PGRF er det første kjente molekyl som spesifikt fremmer hypofysefunksjonen med hensyn til GH-sekresjon, representerer det således den første rutinetest for GH-sekresjon i alle tilfeller hvor en spesifikk defekt av "hypofysefunksjonen mistenkes av en lege. Syntetisk PGRF bør derfor erstatte de omstendige metoder som i dag anvendes
(arginin-infeksjoner, hypoglycemi, L-DOPA-injeksjoner etc.)
for å bedømme GH-sekresjonsevnen som en diagnosemetode.
Syntetisk PGRF bør være av interesse i alle tilfeller i klinisk medisin hvor en lege ønsker å begunstige, en positiv nitrogenbalanse og anabolisme, som f.eks. ved sårhelbredelse, behandling av store brannskader, post-operative perioder som følger store operasjoner og andre medisinske sitasjoner med debilitering, inklusive mange syndromer for gerontologisk praksis som såvel som pediatrisk praksis for fortidligfødte barn. Stimulering av GH-sekresjon er av interesse i pasienter under og etter kraftig stråleterapi for faste tumorer, også her for å fremme anabolisme og også å trekke fordel av virkningene av GH på stimuleringen av stammecellene i det hematopoetiske system. For tilførsel til mennesker, bør syntetiske PGRF-peptider ha en renhet på minst 93 % og foretrukket minst 98 %. Denne renhet betyr at det ønskede peptid utgjør den angitte vektprosent av alle lignende peptider og peptidfragmenter som er tilstede.
De fleste av de biologisk aktive peptider er funnet å ha andre biologiske aktiviteter enn dem som de opprinnelige ble påtenkt for. På bakgrunn av slike forhold er det sannsynlig at PGRF vil bli funnet å ha ekstra-hypofyseaktiviteter som kan være av praktisk interesse. Selv om PGRF ble ekstrahert og isolert fra en human pankreas-tumor, på basis av samlet erfaring og forsøk, antas det at aminosyresekvensen i PGRF(1-44)-amid er den samme som sekvensen av human hypotalamisk GH-frigivende faktor. Stadig tilførsel av syntetisk PGRF-peptider til dyr i landbruket og andre varmblodige dyr forventes å fremme anabolisme og således øke kroppsvekten med hensyn til muskelmasse. Bruk i akvakultur for oppdrett av fisk og andre koldblodige marine dyr for å fremme veksten er også påtenkt. Tilførsel til dyr med en renhet så lav som omtrent 5 % kan være brukbar.
Syntetisk PGRF eller de ikke-giftige salter derav, kombinert med en farmasøytisk tålbar bærer til å danne et farmasøytisk preparat, kan tilføres pattedyr, inklusive mennesker, enten intravenøst, subkutant, intramuskulært eller oralt. Tilførselen kan anvendes av en lege for å stimulere frigivelsen av veksthormon hvor verten som behandles krever slik terapeutisk behandling. Den nødvendige dose vil variere
Claims (1)
- med den spesielle tilstand som behandles, med alvorligheten av denne og med varigheten av den ønskede behandling. Slike peptider tilføres ofte i form av farmasøytisk tålbare ikke-giftige salter, som syreaddisjonsalter eller metall-komplekser, f.eks. med sink, jern eller lignende (som betraktes som salter i denne forbindelse). Illustrerende for slike syreaddisjonssalter er hydrokloridet, hydrobromidet, sulfatet, fosfatet, maleinatet, acetatet, sitratet, benzoatet, sukksinatet, malatet, askorbatet, tartratet og lignende. Hvis den aktive bestanddel skal tilføres i tablettform kan tabletten inneholde et bindemiddel som tragant, maisstivelse eller gelatin, et desintegrerende middel som alginsyre, og et smøremiddel som f.eks. magnesium-stearat. Hvis tilførsel i væskeform ønskes kan et søtnings-og/eller et aromagivende middel anvendes, og intravenøs tilførsel i isotonisk saltløsning, fosfatbuffer-oppløsninger eller lignende kan gjennomføres. Peptidene bør tilføres under oppsyn av en lege og farmasøytiske preparater vil vanligvis inneholde peptidet i forbindelse med en konvensjonell, farmasøytisk tålbar bærer. Vanligvis er doseringen fra omtrent 20 til omtrent 2.000 nanogram peptid pr kilogram kroppsvekt for verten. PATENTKRAV Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid med formel (I)H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-R4i-R eller biologisk aktive fragmenter derav, hvor R er OH eller NH2 og R41 er Arg, Arg-Ala, Arg-Ala-Arg, Arg-Ala-Arg-Leu eller des-<R>41.karakterisert veddannelse av et peptidmellomprodukt inneholdende minst en beskyttelsesgruppe og med formelen (II): xl_Tyr(X2)-Ala-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Thr(X4)-Asn-Ser(X5) - Tyr(X<2>)-Arg(X<6>)-Lys(X<7>)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(X<5>)-Ala-Arg(X<6>)-Lys(X<7>)-Leu-Leu-Gln-Asp(X<3>)-Ile-Met-Ser(X<5>)-Arg(X6)-Gln-Gln-Gly-Glu(X<3>)-Ser(X<5>)-Asn-Gln-Glu(X<3>)-Arg(X<6>)-Gly-Ala- Arg(X<6>)-Ala-Arg(X<6>)-Leu-(X<8>),hvori X<1> er hydrogen eller en a-aminobeskyttende gruppe,X<2> er hydrogen eller beskyttelsesgruppen for fenolhydroksyl-gruppen i Tyr,X<3> er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for karboksyl-gruppen Asp eller Glu,X<4> er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for alkoholhydrok-sylgruppen i Thr,X<5> er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for alkohol-hydroksylgruppen i Ser, X<*>> er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for guanidogruppen i Arg,X<7> er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for sidekjedeamino-gruppen i Lys, ogX<8> er en klormetylert harpiks eller en MBHA-harpiks,eller en i C-enden hensiktsmessig forkortet versjon derav,ved at de beskyttede aminosyrer i angitt rekkefølge sammen kobles i en mengde omtrent et millimol beskyttet aminosyre pr gram harpiks i et passende løsningsmiddel, foretrukketi metylenklorid eller dimetylformamid eller i en blanding derav, ogavspalting av den eller de beskyttende gruppe(r) fra den nevnte forbindelse med formel (II) for tilveiebringelse av et peptid med formelen (I) eller et C-endeavkortet fragment av et slikt peptid med biologisk aktivitet til å bevirke frigivelse av GH og, om ønsket omdannelse av det oppnådde peptid eller fragmenter derav til et ikke-giftig addisjonssalt.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US8200812 | 1982-06-16 | ||
US06/418,248 US4517181A (en) | 1982-09-15 | 1982-09-15 | Mammalian PGRF |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO832148L NO832148L (no) | 1983-12-19 |
NO166486B true NO166486B (no) | 1991-04-22 |
NO166486C NO166486C (no) | 1991-07-31 |
Family
ID=26766557
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO832148A NO166486C (no) | 1982-06-16 | 1983-06-14 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid. |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0107890B1 (no) |
KR (1) | KR900006711B1 (no) |
AU (1) | AU548590B2 (no) |
CA (1) | CA1247599A (no) |
DD (1) | DD217808A5 (no) |
ES (1) | ES8504673A1 (no) |
FI (1) | FI79716C (no) |
GR (1) | GR78614B (no) |
IL (1) | IL68893A0 (no) |
NO (1) | NO166486C (no) |
NZ (1) | NZ204456A (no) |
PH (1) | PH21001A (no) |
PT (1) | PT76843B (no) |
SU (1) | SU1531857A3 (no) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4518586A (en) * | 1983-01-13 | 1985-05-21 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF Analogs III |
US4581168A (en) * | 1983-02-21 | 1986-04-08 | Sanofi | Synthesis of hpGRF (Somatocrinin) in liquid phase and intermediate peptides |
AU575843B2 (en) * | 1983-08-10 | 1988-08-11 | The Administrators Of The Tulane Eductional Fund | Growth hormone releasing peptides |
PT79094B (en) * | 1983-08-29 | 1986-08-14 | Salk Inst For Biological Studi | Grf analogs |
FR2567524B1 (fr) * | 1984-07-10 | 1987-11-27 | Sanofi Sa | Procede de synthese de la somatocrinine en phase liquide et peptides intermediaires |
CA1271600A (en) * | 1985-01-07 | 1990-07-10 | David Howard Coy | Growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith |
FR2599038B1 (fr) * | 1986-05-26 | 1990-06-29 | Sanofi Sa | Procede de preparation de nonacosapeptides et peptides intermediaires |
-
1983
- 1983-06-02 NZ NZ204456A patent/NZ204456A/en unknown
- 1983-06-06 IL IL68893A patent/IL68893A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-06-09 PT PT76843A patent/PT76843B/pt unknown
- 1983-06-10 GR GR71635A patent/GR78614B/el unknown
- 1983-06-14 PH PH29053A patent/PH21001A/en unknown
- 1983-06-14 NO NO832148A patent/NO166486C/no not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 DD DD83252054A patent/DD217808A5/de not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 ES ES523277A patent/ES8504673A1/es not_active Expired
- 1983-06-15 FI FI832176A patent/FI79716C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 KR KR1019830002655A patent/KR900006711B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 SU SU833611593A patent/SU1531857A3/ru active
- 1983-06-16 EP EP83303490A patent/EP0107890B1/en not_active Expired
- 1983-06-16 CA CA000430533A patent/CA1247599A/en not_active Expired
- 1983-06-16 AU AU15843/83A patent/AU548590B2/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NO166486C (no) | 1991-07-31 |
SU1531857A3 (ru) | 1989-12-23 |
FI79716B (fi) | 1989-10-31 |
FI832176A0 (fi) | 1983-06-15 |
PT76843B (en) | 1986-01-15 |
AU1584383A (en) | 1983-12-22 |
NO832148L (no) | 1983-12-19 |
AU548590B2 (en) | 1985-12-19 |
ES523277A0 (es) | 1985-04-16 |
PH21001A (en) | 1987-06-22 |
KR840006328A (ko) | 1984-11-29 |
ES8504673A1 (es) | 1985-04-16 |
FI79716C (fi) | 1990-02-12 |
IL68893A0 (en) | 1983-10-31 |
EP0107890A1 (en) | 1984-05-09 |
CA1247599A (en) | 1988-12-28 |
KR900006711B1 (ko) | 1990-09-17 |
GR78614B (no) | 1984-09-27 |
PT76843A (en) | 1983-07-01 |
NZ204456A (en) | 1987-05-29 |
EP0107890B1 (en) | 1986-01-29 |
FI832176L (fi) | 1983-12-17 |
DD217808A5 (de) | 1985-01-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI88402C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger | |
US4517181A (en) | Mammalian PGRF | |
FI92210B (fi) | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi | |
US4563352A (en) | Human pancreatic GRF | |
US4529595A (en) | GRF Analogs | |
US4610976A (en) | Porcine GRF | |
US4585756A (en) | Bovine GRF | |
FI87080B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av grf -analoger. | |
US4605643A (en) | Ovine GRF | |
US4533654A (en) | Urotensin peptides | |
US4728726A (en) | GRF analogs IIIb | |
HU199508B (en) | Process for producing grf analogues and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
EP0137689B1 (en) | Grf analogs | |
CA1247600A (en) | Urotensin peptides | |
CA1247599A (en) | Mammalian pgrf | |
US4908352A (en) | Urotensin peptides | |
US4703035A (en) | Human pancreatic GRF amidated fragments | |
NO178031B (no) | Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive syntetiske peptidanaloger | |
CA1340964C (en) | Crf analogs | |
CA1271899A (en) | Grf analogs |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK1K | Patent expired |
Free format text: EXPIRED IN JUNE 2003 |