FI92210B - Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI92210B FI92210B FI851842A FI851842A FI92210B FI 92210 B FI92210 B FI 92210B FI 851842 A FI851842 A FI 851842A FI 851842 A FI851842 A FI 851842A FI 92210 B FI92210 B FI 92210B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- arg
- leu
- ser
- ala
- ile
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 105
- XKCWNEVAXQCMGP-RXMQYKEDSA-N (2R)-2-amino-5-[carbamimidoyl(methyl)amino]pentanoic acid Chemical compound CN(CCC[C@@H](N)C(O)=O)C(N)=N XKCWNEVAXQCMGP-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims abstract description 10
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical group CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims abstract description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 125000003290 L-leucino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims abstract description 4
- 125000003301 D-leucyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC(C)C 0.000 claims abstract description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 54
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 50
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 13
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 34
- -1 Phe Chemical compound 0.000 abstract description 27
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 18
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 abstract description 7
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 abstract description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 abstract description 5
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 5
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Chemical group OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical group OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical group OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 abstract description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N D-histidine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N 0.000 abstract description 2
- FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N D-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N 0.000 abstract description 2
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 abstract description 2
- SGCGMORCWLEJNZ-UWVGGRQHSA-N His-His Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C([O-])=O)C1=CN=CN1 SGCGMORCWLEJNZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 101000825768 Bos taurus Somatoliberin Proteins 0.000 abstract 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N D-Asparagine Chemical group OC(=O)[C@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 1
- 101000825742 Homo sapiens Somatoliberin Proteins 0.000 abstract 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 abstract 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 abstract 1
- 125000000773 L-serino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])*)C([H])([H])O[H] 0.000 abstract 1
- 101000825738 Rattus norvegicus Somatoliberin Proteins 0.000 abstract 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 33
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 29
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 26
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 26
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 26
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 14
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 14
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 10
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 10
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical group C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 5
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100338242 Drosophila virilis His1.1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 108010036509 somatotropin releasing factor 40 Proteins 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000252073 Anguilliformes Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JMEWFDUAFKVAAT-WDSKDSINSA-N Met-Asn Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC(N)=O JMEWFDUAFKVAAT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GELXFVQAWNTGPQ-UHFFFAOYSA-N [N].C1=CNC=N1 Chemical compound [N].C1=CNC=N1 GELXFVQAWNTGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 2
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N di-isopropyl sulphide Natural products CC(C)SC(C)C XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 2
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 125000006847 BOC protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000270617 Cheloniidae Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N dihydrogen phosphate;triethylazanium Chemical compound OP(O)(O)=O.CCN(CC)CC UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002260 hypophysiotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N urethane group Chemical group NC(=O)OCC JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Luminescent Compositions (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Dental Preparations (AREA)
- Superconductors And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Description
92210
Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi
Keksinnön kohteena on menetelmä farmaseuttisesti . 5 käyttökelpoisten kasvuhormonia vapauttavan tekijän synteettisten peptidianalogien valmistamiseksi. Peptidit vaikuttavat ihmisen ja muiden eläinten aivolisäketoimintaan. Erityisesti tämän keksinnön kohteena on menetelmä peptidin valmistamiseksi, joka edistää aivolisäkkeen kasvuhormonin 10 vapauttamista.
Fysiologit ovat pitkään olleet perillä siitä, että alanäkökukkula säätelee aivolisäkkeen etulohkon eritystoimintoja, jolloin alanäkökukkula tuottaa erikoisaineita, jotka kiihottavat tai estävät jokaisen aivolisäkehormonin 15 erittymistä. Hypotalaaminen estotekijä luonnehdittiin 1972 somatostatiinin muodossa, joka estää kasvuhormonin (GH) erittymisen. 1982 eristettiin ihmisen haima(kasvain)vapau-tustekijöitä (hpGRF) ihmisen haimakasvainuutteista, ne puhdistettiin, luonnehdittiin, syntetisoitiin ja testat-20 tiin ja niiden havaittiin edistävän aivolisäkkeen GH:n va pauttamista. Kumpaakin näistä hypofysiotrooppisista tekijöistä on jäljennetty kokonaissynteesillä ja luonnon rakenteiden analogit on syntetisoitu. Uskotaan, että ihmisen . hypotalaamisella GH-vapautustekijällä on täsmälleen sama 25 rakenne; siten tämän jälkeen käytetään käsitettä hGRF.
Vastaava rotan hypotalaaminen GH-vapautustekijä (rGRF), vastaava sian hypotalaaminen GH-vapautustekijä (pGRF) ja vastaava naudan hypotalaaminen GH-vapautustekijä (bGRF) on myös luonnehdittu ja syntetisoitu.
30 Nyt on syntetisoitu ja testattu synteettisiä poly- peptidejä, jotka vapauttavat GH:ia viljellyistä aivolisä-kesoluista ja jotka kestävät ainakin osittain entsymaattista hajottamista kehossa ja joilla on hyvin olennaisesti lisääntynyt teho. Näillä peptideillä on NaCH3-D-Ala(D-NMA) 35 2-asemassa ja/tai D-Leu 14-asemassa ja/tai D-Arg 29-ase- 92210 2 massa sekä edullisesti myös Nle 27-asemassa. D-Leu voi olla läsnä 17- ja/tai 23-asemissa ja joko D-Glu tai D-Asp voi olla läsnä 25-asemassa. Näissä peptideissä voi olla myös joku seuraavista tähteistä 1-asemassa: Tyr, D-Tyr, 5 Met, Phe, D-Phe, pCl-Phe, Leu, His ja D-His, jossa täh-teessä voi valinnaisesti olla metyylisubstituointi joko alfa-hiilellä tai alfa-aminoryhmässä. Niissä voi valinnaisesti olla D-Asp 3-asemassa ja/tai joko D-Arg tai D-Ser 8-asemassa ja/tai D-Tyr 10-asemassa ja/tai D-Ala 15-asemas-10 sa. Niissä voi myös olla D-Met tai Nva joko Nle:n tai Met:n asemasta 27-asemassa.
Tässä esitetyt farmaseuttiset yhdistelmät sisältävät analogeja, jotka ovat pituudeltaan n. 27 - 29 tähdettä tai jonkin näistä ei-myrkyllisen suolan, dispergoituna 15 farmaseuttisesti tai eläinlääketieteellisesti hyväksyttävään nesteeseen tai kiinteään kantimeen. Tällaisia farmaseuttisia yhdistelmiä voidaan käyttää kliinisessä lääketieteessä sekä ihmis- että eläinlääketieteessä, antamista varten hoitotarkoituksissa ja myös diagnostisesti. Lisäksi 20 niitä voidaan käyttää edistämään lämminveristen eläinten, siipikarja mukaan lukien ja vesiviljelyssä kylmäveristen eläinten, esimerkiksi kalojen, ankeriaiden yms., kasvua.
Peptidien määrittelemiseen käytetty nimistö on Schroder'in & Lubke'n "The Peptides", Academic Press 25 (1965), määrittelemä, jossa tavanomaisen esitystavan mu kaisesti aminoryhmä N-päätteellä näkyy vasemmalla ja kar-boksyyliryhmä C-päätteellä oikealla. Luonnon aminohapoilla tarkoitetaan tavallisia, luonnossa esiintyviä aminohappoja, joita esiintyy proteiineissa ja joita ovat Gly, Ala, 30 Vai, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp ja His. Nle:llä tarkoitetaan norleusiinia ja Nva:11a tarkoitetaan norvaliinia. Kun amino-happotähteellä on isomeerisiä muotoja, esitetään aminohapon L-muoto, ellei toisin selvästi ole osoitettu. 35 D-NMA tarkoittaa alaniinin D-isomeeriä, jossa alfa-amino- 3 9221 0 ryhmä on substituoitu metyylillä.
Tämä keksintö kohdistuu menetelmään farmaseuttisesti käyttökelpoisten kasvuhormonia vapauttavan tekijän synteettisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on 5 sekvenssi: R1-R2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Re-Ser-R10-Arg-R12-R13-R14-Gly-Gln-Leu-R18-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-R24-R25-Ile-Nle-R2B-R29 -NHR, jossa Rx on Tyr tai His; Rj on Ala tai D-NMA; R8 on Ser tai Asn; R10 on Tyr tai D-Tyr; R12 on Arg tai Lys; R13 on Ile tai 10 Vai; R14 on Leu tai D-Leu; R18 on Tyr tai Ser; R24 on His tai Gin; R25 on Glu tai Asp; R28 on Asn tai Ser; R29 on Arg tai D-Arg; ja R on H tai CH2CH3; edellyttäen kuitenkin, että R29 tai R28 - R29 voidaan jättää pois, ja edellyttäen myöskin, että R2 on D-NMA ja/tai R14 on D-Leu ja/tai R29 on D-Arg.
15 Peptidit syntetisoidaan jollakin sopivalla menetel mällä, kuten yksinomaisesti kiintofaasimenetelmillä, osittain kiintofaasimenetelmillä, osaskondensaatiolla tai klassisilla liuoskytkemisillä. Viime aikoina kehitettyjä yhdistelmä-DNA-menetelmiä voidaan käyttää osan analogista 20 valmistamiseksi, joka sisältää ainoastaan luonnon aminohappotähteitä, joka osa sitten voitaisiin kytkeä lyhyeen N-päätepeptidiin. Esimerkiksi menetelmiä yksinomaisesti kiintofaasisynteesiä varten on esitetty oppikirjassa "Solid-Phase Peptide Synthesis", Stewart & Yound, Freeman 25 & Co., San Francisco, 1969 ja esimerkkejä niistä on esitetty US-patentissa nro 4 105 603, myönnetty 8.8.1978
Vale et ai:lie. Klassista liuossynteesiä on selostettu yksityiskohtaisesti julkaisussa "Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl): Synthese von Peptiden", E. Wunsch 30 (toimittaja) (1974) Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Länsi-Saksa. Fragmenttikondensaatiosynteesimenetelmästä on esitetty esimerkkejä US-patentissa nro 3 972 859 (3.8.1976). Muista käytettävissä olevista synteeseistä on esitetty esimerkkejä US-patentissa nro 3 842 067 (15.10.1974) ja 35 US-patentissa nro 3 862 925 (28.1.1975).
« 92210 4
Yhteistä tällaisille synteeseille on eri aminohappo-osien epävakaisten sivuketjuryhmien suojaaminen sopivilla suojaryhmillä, jotka estävät kemiallisen reaktion tapahtumisen siinä kohdassa, kunnes ryhmä on lopullisesti 5 poistettu. Yhteistä on tavallisesti myös alfa-aminoryhmän suojaaminen aminohapolla tai osasella, samalla kun tämä kokonaisuus reagoi karboksyyliryhmällä, mitä seuraa alfa-aminosuojaryhmän selektiivinen poistaminen sallimaan myöhemmän reaktion tapahtuminen tässä paikassa. Siten on ta-10 vallista, että yhtenä vaiheena synteesissä valmistetaan välituoteyhdiste, joka sisältää jokaisen aminohappotähteistä sijoitettuna sen haluttuun sekvenssiin peptidiket-jussa sivuketjusuojaryhmät kytkettyinä sopiviin tähteisiin.
15 Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että (a) muodostetaan välituotepeptidi, jossa on ainakin yksi suojaryhmä ja jolla on kaava (II) tai sen tarkoituksenmukaisesti lyhennetty muunnos: X1-^(X tai X2) -R2-Asp( X3) -Ala-Ile-Phe-Thr (X4) -R8( X4 tai X5)-20 Ser(X4)-R10(X2)-Arg(X6)-R12(X6 tai X7 )-R13-R14-Gly-Gln(X5)-Leu- R18(X2 tai X4) -Ala-Arg( X6) -Lys( X7) -Leu-Leu-R24( X tai X5)-R25-(X3)- Ile-Nle-R28( X4 tai X5)-R29(X6)-X9, jossa: X, X1, X2, X3, X4, X5, X6 ja X7 ovat kukin joko vety tai suojaryhmä ja X9 on joko suojaryhmä tai kiinnittävä sidos hartsikantimeen 25 tai on des-X9, jossa tapauksessa C-pääte on NHR, (b) pilkotaan suojaryhmä tai -ryhmät tai kiinnittävä sidos kaavan (II) mukaisesta peptidistä; ja puhdistetaan saatu peptidi.
X1 on joko vety tai α-aminosuojaryhmä, X*:n tarkoittamat α-aminosuojaryhmät ovat niitä, joiden hyvin tiede-30 tään olevan käyttökelpoisia polypeptidien vaiheittaisen synteesin alalla, α-aminosuojaryhmien luokkia, joita voidaan käyttää X3:nä, ovat (1) aromaattiset uretaanityyppiset suojaryhmät, kuten fluorenyylimetyylioksikarbonyyli (FMOC), bentsyylioksikarbonyyli (Z) ja substituoitu Z, ku-35 ten p-klooribentsyylioksikarbonyyli, p-nitrobentsyyli- oksikarbonyyli, p-bromibentsyylioksikarbonyyli ja p-metok- 92210 5 sibentsyylioksikarbonyyli; (2) alifaattiset uretaanisuoja-ryhmät, kuten t-butyylioksikarbonyyli (BOC), di-isopropyy-limetyylioksikarbonyyli, isopropyylioksikarbonyyli, etok-sikarbonyyli, allyylioksikarbonyyli; sekä (3) sykloalkyy-5 li-uretaani-tyyppiset suojaryhmät, kuten syklopentyyliok-sikarbonyyli, adamantyylioksikarbonyyli ja sykloheksyyli-oksikarbonyyli. Edullinen α-aminosuojaryhmä on BOC, silloinkin kun N“Me-substituoitua tähdettä käytetään 1-asemas-sa.
10 X on vety tai suojaryhmä His:n imidatsolitypelle, kuten Tos.
X2 on sopiva suojaryhmä Tyr:n fenoli-hydroksyyliryh-mälle, kuten tetrahydropyranyyli, tert-butyyli, trityyli, Bzl, CBZ, 4Br-CBZ ja 2,6-diklooribentsyyli (DCB). Edulli-15 nen suojaryhmä on 2,6-diklooribentsyyli. X2 voi olla vety, mikä tarkoittaa, että aminohappotähteellä tässä asemassa ei ole sivuketjusuojaryhmää.
X3 on vety tai sopiva esterin muodostava suojaryhmä Asp:n tai Glu:n karboksyyliryhmälle, kuten bentsyyli 20 (OBzl), 2,6-diklooribentsyyli, metyyli ja etyyli.
X4 voi olla sopiva suojaryhmä Thr:n tai Ser:n hyd-roksyyliryhmälle kuten asetyyli, bentsoyyli, tert-butyyli, trityyli, tetrahydropyranyyli, Bzl, 2,6-diklooribentsyyli ja CBZ. Edullinen suojaryhmä on Bzl. X4 voi olla vety, mikä 25 tarkoittaa, että hydroksyyliryhmällä ei ole suojaryhmää.
X5 on vety tai sopiva suojaryhmä Asn:n tai Gin:n sivuket ju-amidoryhmäl le. Se on edullisesti ksantyyli (Xan).
X6 on sopiva suojaryhmä Arg:n guanidiiniryhmälle, kuten nitro, Tos, CBZ, adamantyylioksikarbonyyli ja BOC 30 tai vety.
X7 on vety tai sopiva suojaryhmä Lys:n sivuketju-aminoryhmälle. Kuvaavia sopivia sivuketju-aminosuojaryhmiä ovat 2-klooribentsyylioksikarbonyyli-(2-Cl-Z), Tos, t-amyylioksikarbonyyli ja BOC.
35 X8 on vety tai sopiva sivuketjusuojaryhmä, kuten 6 9221 0 edellä on yleisesti määritelty.
Met voi valinnaisesti olla suojattu hapella, mutta jätetään edullisesti suojaamatta.
Sivuketju-aminosuojaryhmän valinta ei ole ratkaise-5 va, paitsi että yleensä valitaan sellainen, joka ei poistu α-aminoryhmien suojausta purettaessa synteesin aikana. Toisille aminohapoille, esim. His:lle, suojaaminen ei kuitenkaan ole yleensä tarpeen sen jälkeen kun kytkeminen on loppuunsuoritettu ja suojaryhmät voivat olla samoja.
10 X9 on sopiva suojaryhmä C-pääte-karboksyyliryhmälle, kuten esterin muodostava ryhmä X3 tai se on kiinnittävä sidos, jota käytetään kiintofaasisynteesissä kiinnittämistä varten kiinteään hartsikantimeen tai on des-X9, jossa tapauksessa C-pääte on NHR. Kun käytetään kiinteää hartsi-15 kanninta, se voi olla joku tekniikan tasolla tunnetuista kuten kännin, jolla on kaava: -0-CH2-hartsikannin, -NH-bentshydryyliamiini(BHA)hartsikannin tai -NH-parametyyli-bentshydryyliamiini(MBHA)hartsikannin. Kun halutaan subs-tituoimaton amidi, on BHA- tai MBHA-hartsin käyttö edul-20 lista, koska pilkonta antaa suoraan amidin. Tapauksessa, jossa halutaan N-metyyliamidi, se voidaan kehittää N-metyyli-BHA-hartsista. Jos halutaan muita substituoituja amideja tai jos halutaan muita substituoituja amideja tai jos halutaan muita ryhmiä kuin vapaa happo C-päätteelle, 25 saattaa olla edullista syntetisoida peptidi käyttäen klassisia menetelmiä, kuten Houben-Weyl -julkaisussa esitetään.
Välituotteen kaavassa ainakin yksi X-ryhmistä on suojaryhmä tai X9 sisältää hartsikantimen. Siten keksintö 30 koskee menetelmää kiinnostavan peptidin valmistamiseksi (a) muodostelmalla peptidi, jossa on ainakin yksi suojaryhmä ja jolla on kaava (II), jossa: X, X1, X2, X3, X4, Xs, X6, X7 ja X8 ovat jokainen joko vety tai suojaryhmä ja X9 on joko suojaryhmä tai hartsikantimeen kiinnittävä sidos tai 35 des-X9, jossa tapauksessa tähteessä C-pääte on NHR; (b) 92210 7 pilkkomalla suojaryhmä tai -ryhmät tai kiinnittävä sidos pois kaavan (II) peptidistä; ja (c) jos halutaan, muuttamalla saatu sekvenssin (i) peptidi ei-myrkylliseksi suo-lakseen.
5 Valittaessa nimenomaista sivuket jusuojaryhmää, jota käytetään peptidien synteesissä, seurataan seuraavia yleisiä sääntöjä: (a) suojaryhmä säilyttää edullisesti suojaavat ominaisuutensa eikä pilkkoudu pois kytkentäolosuhteis-sa, (b) suojaryhmän tulisi olla kestävä reagenssille ja se 10 on, Xan:ia lukuunottamatta, edullisesti pysyvä reaktio- olosuhteissa, jotka valitaan α-aminosuojaryhmän poistamiseksi synteesin jokaisessa vaiheessa, ja (c) sivuketjusuo-jaryhmän täytyy olla poistettavissa kun synteesi, joka sisältää halutun aminohapposekvenssin, on suoritettu loppuun 15 reaktio-olosuhteissa, jotka eivät muuta peptidiketjua ei-toivotulla tavalla.
Kun peptidejä ei valmisteta yhdistelmä-DNA-teknolo-giaa käyttäen, ne valmistetaan edullisesti käyttäen kiin-tofaasisynteesiä kuten Merrifield'in, J. Am. Chem. Soc. 20 85, s. 2149 (1963) yleisesti selostamaa kiintofaasisyntee- siä, joskin myös muita samanarvoisia kemiallisia alalla tunnettuja synteesejä voidaan käyttää kuten edellä mainittiin. Kiintofaasisynteesi aloitetaan peptidin C-päätteen päästä kytkemällä suojattu α-aminohappo sopivaan hartsiin. 25 Tällainen lähtöaine voidaan valmistaa kiinnittämällä a-aminosuojattu aminohappo esterisidoksella kloorimetyloi-tuun hartsiin tai hydroksimetyylihartsiin tai amidisidok-sella BHA-hartsiin tai MBHA-hartsiin. Hydroksimetyylihart-sin valmistuksen ovat selostaneet Bodansky et ai., Chem. 30 Ind. (Lontoo) 38, 1597-98 (1966). Kloorimetyloituja hartseja on kaupallisesti saatavissa firmasta Bio Rad Laboratories, Richmond, Kalifornia ja firmasta Lab. Systems, Inc. Tällaisen hartsin valmistusta ovat selostaneet Stewart et ai., "Solid Phase Peptide Synthesis" (Freeman & 35 Co., San Francisco (1969), luku 1, sivut 1 - 6). BHA- ja 92210 8 MBHA-hartsikantimia on kaupallisesti saatavissa ja niitä käytetään yleisesti ainoastaan kun halutussa syntetisoitavassa polypeptidissä on substituoimaton amidi C-päätteel-lä.
5 C-pääteaminohappo, esim. Asn, joka on suojattu BOC: llä tai Xanrllä, voidaan ensin kytkeä kloorimetyloituun hartsiin menetelmän mukaisesti, joka on esitetty julkaisussa Chemistry Letters, K. Horiki et ai. 165 - 168 (1978), käyttäen KF DMFissa n. 60°C:ssa 24 tuntia sekoitit) taen, kun on syntetisoitava 43-tähteen peptidi. BOC-suoja-tun aminohapon kytkemisen jälkeen hartsikantimelie a-ami-nosuojaryhmä poistetaan esim. käyttäen trifluorietikkahap-poa (TFA) metyleenikloridissa tai TFA yksinään. Suojauksen purkaminen suoritetaan lämpötilassa 0°C:sta huoneen lämpö-15 tilaan. Muita standardipilkontareagensseja, kuten HC1 dioksaanissa ja olosuhteita spesifisten a-aminosuojaryh-mien poistamiseksi voidaan käyttää, kuten Schroder & Lubke, "The Peptides" 1, sivut 72 - 75 (Academic Press 1965), ovat selostaneet.
20 α-aminosuojaryhmän poistamisen jälkeen jäljelle jäävät α-amino- ja sivuketjusuojatut aminohapot kytketään vaiheittain halutussa järjestyksessä edellä määritellyn välituoteyhdisteen saamiseksi tai vaihtoehtona sille, että jokainen aminohappo yhdistetään erikseen tässä synteesis-25 sä, jotkut niistä voidaan kytkeä toisiinsa ennen lisäämistä kiintofaasireaktoriin. Sopivan kytkentäreagenssin valinta kuuluu alaan perehtyneen tietämykseen. Erityisen sopiva kytkentäreagenssiksi on N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidi (DCCI).
30 Aktivoimisreagenssit, joita käytetään peptidien kiintofaasisynteesissä, ovat hyvin tunnettuja peptidien alalla. Esimerkkejä sopivista aktivoimisreagensseista ovat karbodi-imidit, kuten N,N'-di-isopropyylikarbodi-imidi ja N-etyyli-N' - (3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidi. Muita 35 aktivoimisreagensseja ja niiden käyttöä peptidien kytken- 92210 9 nässä, ovat selostaneet Schroder & Lubke, supra, luvussa III ja Kapoor, J. Phar. Sei., 59, sivut 1-27, (1970).
Jokainen suojattu aminohappo tai aminohapposekvenssi viedään kiintofaasireaktoriin n. 4-kertaisessa tai suu-5 remmassa ylimäärässä ja kytkeminen suoritetaan dimetyyli-formamidi(DMF):CH2C12 (1 s 1)-väliaineessa tai DMFissa tai CH2Cl2:ssa yksinään. Tapauksissa, joissa esiintyy epätäydellistä kytkeytymistä, kytkentäprosessi toistetaan ennen α-aminosuojaryhmän poistamista ennen seuraavan aminohapon 10 kytkemistä. Kytkentäreaktion tulosta synteesin jokaisessa vaiheessa, jos se suoritetaan käsin, tarkkaillaan edullisesti ninhydriinireaktiolla, kuten ovat selostaneet E. Kaiser et ai., Anal. Biochem. 34, 595 (1970). Kytkentä-reaktiot voidaan toteuttaa automaattisesti, esim. Beckman 15 990 automaattisella syntetisoimislaitteella käyttäen oh jelmaa, jollaisen ovat esittäneet Rivier et ai., Biopoly-mers, 1978, 17, sivut 1927 - 1938.
Sen jälkeen kun haluttu aminohapposekvenssi on saatu täydelliseksi, välituotepeptidi voidaan poistaa hartsi-20 kantimesta käsittelemällä reagenssilla, kuten nestemäisellä fluorivedyllä, joka ei ainoastaan lohkaise peptidiä hartsista, vaan pilkkoo myös kaikki jäljellä olevat sivu-ketjusuojaryhmät X, X2, X3, X4, X5, X6, X7 ja X8 ja kiinnittävät sidokset X9 sekä myös α-aminosuo jaryhmän X1, jos sel-25 laista käytetään, peptidin saamiseksi vapaan hapon muodossa. Jos Met on läsnä sekvenssissä, BOC-suojaryhmä poistetaan edullisesti ensin käyttäen trifluorietikkahappo (TFA)/etaaniditiolia ennen peptidin lohkaisua hartsista HF:llä mahdollisen S-alkyloinnin poistamiseksi. Kun pil-30 kontaan käytetään fluorivetyä, sisällytetään reaktioas- tiaan anisolia ja metyylietyylisulfidia happoa poistaviksi aineiksi.
Seuraavassa esimerkissä esitetään edullinen menetelmä peptidien syntetisoimiseksi kiintofaasimenetelmällä. 35 On tietenkin selvää, että vastaavasti lyhyemmän peptidi- 92210 10 osasen synteesi suoritetaan samalla tavalla pelkästään poistamalla tarvittava määrä aminohappoja ketjun jommasta-kummasta päästä; nykyään tuntuu kuitenkin siltä, että biologisesti aktiivisten osasten tulisi sisältää osoitettu 5 sekvenssi N-päätteellä.
Esimerkki I (Vertailuesimerkki)
Peptidin [ N“MeTyr1, D-NMA2, D-Leu23 ] -rGRF (1-43) -OH, jolla on kaava: N MeTyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-10 His-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-
Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 -peptidisyntetisoijaa kloorime-tyloidulla hartsilla, jonka korvausalue on n. 0,1 - 0,5 mmoolia/g hartsia. BOC-Asn(Xan):n kytkeminen hartsiin suo-15 ritetaan yleisellä menetelmällä, joka on esitetty julkai sussa Chemistry Letters, supra, käyttäen KF:ia DMFsssa n. 60°C:ssa 24 tuntia sekoittaen, jonka seurauksena korvautuu n. 0,35 mmoolia Asn grammaa kohti hartsia.
Suojauksen poistamisen ja neutraloinnin jälkeen 20 peptidiketju rakennetaan vaihe vaiheelta hartsille. Jokai sen aminohapon suojauksen poistaminen, neutralointi ja lisääminen suoritetaan yleisesti yhdenmukaisesti menetelmän kanssa, jonka on yksityiskohtaisesti esittänyt Rivier, J., J. Amer. Chem. Soc., 96, 2986 - 2992 (1974). Kaikista 25 liuottimista, joita käytetään, poistetaan kaasut huolelli sesti suihkuttamalla inertillä kaasulla, esim. heliumilla tai typellä hapen, joka saattaisi ei-toivotulla tavalla hapettaa Met-tähteen rikin, poissaolon takaamiseksi.
Suojauksen poistaminen suoritetaan edullisesti seu-30 raavan ohjelman A mukaisesti:
Ohjelma A
Reagenssi Sekoittamisaika (min) 1. 60 % TFA/2 % etaaniditiolia 10 2. 60 % TFA/2 % etaaniditiolia 15 35 3. IPA/1 % etaaniditiolia 0,5
9221 O
11 4. EtjN (10 %) CH2Cl2:ssa 0,5 5. MeOH 0,5 6. Et3N (10 %) CH2Cl2:ssa 0,5 7. MeOH (kahdesti) 0,5 5 8. CH2C12 (kahdesti) 0,5
Kytkemiset suoritetaan edullisesti kuten seuraavas-sa ohjelmassa B esitetään:
Ohjelma B
Reagenssi Sekoittamisaika (min)
10 9. DCCI
10. Boc-aminohappo 50-90 11. MeOH (kahdesti) 0,5 12. CH2C12 (kahdesti) 0,5 13. Ac20 (3M) CH2Cl2:ssa 15,0 15 14. CH2C12 0,5 15. MeOH 0,5 16. CH2C12 (kahdesti) 0,5
Lyhyesti esitettynä käytetään yhdestä kahteen mmoo-lia BOC-suojattua aminohappoa metyleenikloridissa grammaa 20 kohti hartsia, plus yksi ekvivalentti 1,0 moolista DCCI metyleenikloridissa kahden tunnin aikana. Kun BOC-Arg(TOS) kytketään, käytetään seosta, jossa on 50 % DMF ja metylee-nikloridia. Bzl-eetteriä käytetään hydroksyyli-sivuketju-suojaryhmänä Serslle ja Thrslle. Asn:n tai Gln:n amidoryh-25 mä suojataan Xan:lla, kun käytetään DCC-kytkentää, mikä on edullista. P-nitrofenyyliesteriä (ONp) voidaan myös käyttää aktivoimaan Asn:n tai Gin:n karboksyylipää ja esimerkiksi BOC-Asn(ONp) voidaan kytkeä yli yön käyttäen yhtä ekvivalenttia HOBt DMF:n ja metyleenikloridin 50 %:sessa 30 seoksessa, jossa tapauksessa DCC:tä ei lisätä. 2-kloori-bentsyylioksikarbonyyli(2Cl-Z):tä käytetään suojaryhmänä Lys-sivuketjulle. Tos:ia käytetään suojaamaan Arg:n guani-diiniryhmä ja His:n imidatsolityppi ja Glu- tai Asp-sivu-ketju-karboksyyliryhmä suojataan OBzl:lla. Tyr:n fenoli-35 hydroksyyliryhmä suojataan 2,6-diklooribentsyylillä (DCB).
• 92210 12
Synteesin lopussa saadaan seuraava yhdistelmä: BOC-NaMeTyr (X2) -D-NMA-Asp (X3) -Ala-Ile-Phe-Thr (X4) -Ser (X4) -Ser (X4) -Tyr (X2) -Arg (X6) -Arg (X6) -Ile-Leu-Gly-Gln (X5) -Leu-Tyr (X2) -Ai a-Arg (X6) -Lys (X7) -Leu-D-Leu-His (X) -Glu (X3) -Ile-5 Met-Asn (Xs) -Arg (Xs) -Gin (X5) -Gly-Glu (X3) -Arg (X4) -Arg (Xs) -Phe-
Asn(X5)-X9, jossa X2 on DCB, X3 on OBzl, X4 on Bzl, Xs on Xan, X6 on Tos, X7 on 2Cl-z ja X9 on -0-CH2-hartsikannin. Xan on voitu osittain tai kokonaan poistaa TFA-käsittelyl-lä, jota käytettiin α-aminosuojaryhmän poistamiseen.
10 Suojatun peptidihartsin pilkkomiseksi ja suojauksen poistamiseksi sitä käsitellään 1,5 ml:11a anisolia, 0,5 ml:11a metyylietyylisulfidia ja 15 ml:11a fluorivetyä (HF) grammaa kohti peptidihartsia, -20°C:ssa puoli tuntia ja 0°C:ssa puoli tuntia. HF:n poistamisen jälkeen suurtyhjössä 15 hartsipeptidijäännös pestään vuorotellen kuivalla dietyy- lieetterillä ja kloroformilla ja peptidi uutetaan sitten 2N vesipitoisella etikkahapolla, josta kaasut on poistettu ja erotetaan hartsista suodattamalla. Pilkottu peptidi, josta suojaus on poistettu, liuotetaan sitten 0,5 %:seen 20 etikkahappoon ja puhdistetaan, mikä voi tapahtua Sephadex G-50 hienogeelisuodatuksella.
Peptidiä puhdistetaan sitten edelleen valmistavalla tai puolivalmistavalla HPLC:lla, kuten Rivier et ai., Peptides: Structure and Biological Function (1979), sivut 25 125-8 ja Marki et ai., J. Am. Chem. Soc. 103, 3178 (1981) ovat selostaneet. Hylsyjä, jotka sopivat Waters Associates prep LC-500:n, käytetään 15 - 20 u C18 Silicalla Vydacista (300 A). CH3CN:n gradientti TEAP:ssa kehitetään pienpaine Eldex-gradientin tekijällä, kuten on selostanut Rivier J., 30 J. Liq. Cromatography 1, 343 - 367 (1978). Kromatografija-keita tarkkaillaan huolellisesti HPLC:lla ja ainoastaan ne jakeet, jotka ovat olennaisen puhtaita, yhdistetään. Suolan poisto puhdistetuista jakeista, jotka on itsenäisesti tarkistettu puhtauden suhteen, suoritetaan CH3CN:n gradien-35 tiliä 0,1 %:sessa TFA:ssa. Keskijae lyofiloidaan sitten 92210 13 antamaan haluttu peptidi, jonka puhtaus voi olla yli 98 %.
Synteesi toistetaan käyttäen MBHA-hartsia antamaan sama peptidi, jolla on amidoitu C-pääte, käyttäen alkume-netelmää, jonka ovat yleisesti selostaneet Vale et ai. US-5 patentissa nro 4 292 313, Asn:n liittämiseksi MBHA-hart-siin.
Esimerkki II
hGRF-analogiosasen [D-NMA2, Nle27]-hGRF( l-29)-NH2:n, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-10 Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-
Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hart-silla, kuten ovat yleisesti selostaneet Vale et ai. US-patentissa nro 4 292 313. Peptidin arvostellaan olevan 15 pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
Synteesi toistetaan [D-NMA2, Nle27]-hGRF(l-27)-NH2:n valmistamiseksi.
Esimerkki III
[D-NMA2, Nle27]-rGRF(l-29)-NH2:n, jolla on kaava: 20 H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-
Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla kuten esimerkissä II. Peptidin arvostellaan olevan pääasialli-25 sesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
Esimerkki IV
[D-NMA2, Nle27]-pGRF(1-29)-NH2:n, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-30 Ser-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen
Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten ovat yleisesti selostaneet Vale et ai. US-patentissa nro 4 292 313. Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
35 Esimerkki V
14 9221 0 [D-NMA2, Nle27]-bGRF(l-29)-NH2:n, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 5 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten yleisesti ovat selostaneet Vale et ai. US-patentissa 4 292 313. Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
Synteesi toistetaan [D-NMA2, Vai13, Ser18]-rGRF(Ι-ΙΟ 29)-NH2:n valmistamiseksi.
Esimerkki VI
[D-NMA2, Nle27, D-Arg29]-pGRF( 1-29)-NH2:n, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-
Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-15 Ile-Nle-Ser-D-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain
käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten ovat yleisesti selostaneet Vale et ai. US-patentissa 4 292 313. Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa. Asetaattisuola valmis-20 tetaan sitten liuottamalla peptidi veteen ja lisäämällä IN
etikkahappoa. Saatu liuos lyofiloidaan antamaan etikkahap-posuola.
Esimerkki VII
hGRF-analogin [D-NMA2, Nle27, D-Arg29 ]-hGRF( 1-29)-25 NH2:n, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-
Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-D-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten esimerkissä II. Tämän analogin ar-30 vostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
Esimerkki VIII
[D-Leu14, Nle27]-rGRF(l-29)-NH2:n, jolla on kaava: H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-35 Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle- il 92210 15
Asn-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten esimerkissä II. Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLCraa.
5 Synteesi toistetaan [D-NMA2, D-Leu14, Nle27]- rGRF(1-29 )-NH2:n valmistamiseksi.
Esimerkki IX
hGRF-analogin [D-NMA2, Nle27, Asn28] -hGRF( 1-29 )-NH2:n, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-10 Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-
Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten esimerkissä II. Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa. 15 Esimerkki X
[Nle27, D-Arg29] -rGRF( 1-29 )-NH2:n, jolla on kaava: H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-D-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 20 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten esimerkis sä II. Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
Esimerkki XI
hGRF-analogiosasen [D-NMA2, D-Tyr10, Nle27]-hGRF-25 (1-29)-NH2:n, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-
Thr-Asn-Ser-D-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten esimerkissä II. Peptidin arvos-:* 30 teilaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
Esimerkki XII
hGRF-analogiosasen, D-NMA2, Nle27-hGRF( 1-29 )-NHEt:n, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser- 35 Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu- • « « 16 92210
Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NHCH2CH3, synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria kloo-rimetyloidulla hartsilla, kuten esimerkissä I. Peptidi pilkotaan hartsista ammonalyysillä käsittelemällä etyyli-5 amiinilla. Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
Esimerkki XIII
[D-Leu14, Nle27]-rGRF( 1-29 )-NH2:n, jolla on kaava: H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-10 Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-
Asn-Arg-NH2/ synteesi suoritetaan vaiheittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten esimerkissä II.
Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas 15 käyttäen TLC:aa ja HPLCiaa.
Esimerkki XIV
hGRF-analogiosasen [His1, D-NMA2, Nle27]-hGRF( 1-29)-NH2:n, jolla on kaava: H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-20 Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2, synteesi suoritetaan vai heittain käyttäen Beckman 990 Peptide Synthesizeria MBHA-hartsilla, kuten esimerkissä II. Peptidin arvostellaan olevan pääasiallisesti puhdas käyttäen TLC:aa ja HPLC:aa.
·· Synteesi toistetaan kahdesti [His1, Nle27, D-Arg29]- 25 hGRF(1-27)-NH2:n valmistamiseksi.
Esimerkeissä valmistettuja synteettisiä peptidejä verrataan synteettiseen hpGRF(l-40)-0H:hon in vitro-ana-lyyseissä ja niillä havaitaan yleensä olevan suuremmat tehot GH:n eritystä varten ja samanlaiset luontaiset ak- 30 tiivisuudet.
Kaikkien näiden synteettisten peptidien katsotaan olevan biologisesti aktiivisia ja tehokkaasti käyttökelpoisia aivolisäkkeen GH-vapauttamisen stimulointiin.
Tiettyjen edustavien synteettisten peptidien suh-35 teellisen tehokkuuden määrittämiseksi kasvuhormonin va- * 92210 17 pauttamisen edistämiseksi suoritetaan in vitro-määrityksiä käyttäen synteettistä hpGRF(l-40)-OH:ta standardina rinnakkaisessa vertailussa vastaavien analogien, jotka on syntetisoitu, ekvimolaaristen pitoisuuksien kanssa. Käyte-5 tään viljelyjä, jotka sisältävät soluja rotan aivolisäkkeistä, jotka on poistettu n. 3 - 5 päivää aikaisemmin. Tällaisia viljelyjä pidetään optimaalisina kasvuhormonin erittämistä varten ja niitä käytetään vertailevaan testaamiseen yleisellä tavalla, jonka ovat selostaneet Vale et 10 ai., Endocrinology, 91, 562 - 572 (1972) ja yksityiskohtaisemmin selostaneet Vale et ai., Endocrinology, 112, 1553 - 1555 (1983). Inkubointi testattavan aineen kanssa suoritetaan 3-4 tunnissa ja viljelyväliaineen tasaosia poistetaan ja käsitellään niiden immunoreaktiivisen GH:n 15 (irGH) mittaamiseksi hyvin luonnehditulla radioimmunoana-lyysillä.
Tulokset tästä vertailevasta testauksesta ekvimo-laarisille pitoisuuksille on esitetty taulukossa I, jossa myös on esitetty yhdisteiden optinen kierto.
20
Taulukko I
Peptidi In vitro-koe Optinen _ Vertailu-% kierto 25 _ [a]” c=l 1 % etikka-happoa
hGRF(1-40)-OH
30 (standardi tätä koetta varten) 100 % [D-NMA2, Nle27]-hGRF(l-29)-NH2 1330 % - 57,9° [D-NMA2, Nle27] -hGRF(1-27)-NH2 150 % - 56,8° [D-NMA2, N le27 ] -hGRF (1-29) -NHEt 1130 % - 57,0° [D-NMA2, Nle27, Asn2']-hGRF(1-29)-NH2 520 % - 57,6° 35 [D-Leu1*, Nle27]-rGRF(1-29)-NH2 120 % - 52,6° [Nle27, D-Arg2*]-rGRF(1-29)-NH2 386 % - 52,7° [D-NMA2, Nle27]-rGRF(1-29)-NH2 900 % - 51,9° [D-NMA2, D-Tyr10, Nle27]-hGRF-(1-29)-NH2 270% -56,7° [D-NMA2, Nle27, D-Arg”]-hGRF-(1-29)-NH2 580% -57,8° 40 [His1, D-NMA2, Nle27]-hGRF(1-29)-NH2 260 % - 57,3° 92210 18 Näiden synteettisten peptidien in vitro-testaus osoittaa, että niillä on yllättäen suurempi biologinen tehokkuus kuin hpGRF(l-40)-OH:lla, esimerkiksi pienin tehokas pitoisuus [D-NMA2, Nle27]-hGRF( l-29)-NH2: lie on n. 1 pi-5 komoolinen.
In vitro-testien kasvuhormonin erittämisen suhteen lisäksi in vivo-kokeissa ruiskutetaan näitä synteettisiä peptidejä laskimonsisäisesti uretaani-nukutettuihin urospuolisiin rottiin ja määritetään, että ne tukahduttavat 10 spontaanin GH-erityksen poistamatta vastetta oksegeenisel- le GRF:lie. Verinäytteitä otetaan välittömästi ennen ruiskeita ja 10, 30 ja 90 minuuttia ruiskeiden jälkeen. GH-tasot veressä, mitattuina radioimmunoanalyysillä osoittavat, että synteettinen [D-NMA2, Nle27]-hGRF(l-29)-NH2 on 15 noin kuusi kertaa tehokkaampi kuin hGRF(1-40)-OH aivo-lisäke-GH:n verotasojen suhteen mitattuina sekä 10 että 30 minuutin kuluttua IV:n ruiskeesta. Muita tunnettuja GRF in vivo-testejä, joiden tiedetään olevan tehokkaita havaitsemaan GH-eritys, käytetään näiden tulosten vahvistamiseksi. 20 Annoksia väliltä n. 50 nanogrammaa - n. 5 mikrogrammaa näitä peptidejä/kg kehon painoa pidetään tehokkaina aikaansaamaan GH-eritys. Jotkut peptidit, jotka osoittavat in vitro biologista tehoa, joka on yhtä suuri tai jopa pienempi kuin standardilla, osoittavat in vivo tehokkuut-25 ta, joka on paljon suurempi.
Tällaisten synteettisten hGRF-analogien ja mahdollisesti rGRF-, bGRF- ja pGRF-analogien tulisi olla hyödyllisiä ihmiskäyttöön, kun lääkäri haluaa lisätä GH-tuotan-toa. GH-erityksen kiihottaminen tällaisilla analogeilla on 30 kiinnostavaa potilailla, joilla on täydellinen tai suhteellinen GH-puutos, joka aiheutuu endogeenisen GRF:n ali-tuotannosta. Lisäksi on todennäköistä, että lisääntynyt GH-eritys ja siihen liittyvä lisäys kasvussa voitaisiin saavuttaa ihmisillä tai eläimillä, joilla on normaalit GH-35 tasot. Lisäksi antaminen muuttaisi kehon rasvasisältöä ja 92210 19 muuntelisi muita GH:sta riippuvia aineenvaihdunnallisia, immunologisia ja kehityksellisiä prosesseja. Esimerkiksi, nämä analogit voivat olla hyödyllisiä välineenä stimuloida anabolisia prosesseja ihmisissä olosuhteissa, jotka seu-.5 raavat palohaavojen saamista. Toisena esimerkkinä näitä analogeja voidaan antaa lämminverisille kotitalouseläimil-le kuten kananpojille, kalkkunoille, porsaille, vuohille, karjalle ja lampaille ja niitä voidaan käyttää vesivilje-lyksessä kalojen ja muiden kylmäveristen merieläinten, 10 esim. merikilpikonnien ja ankeriaiden sekä sammakkoeläinten kasvattamiseen, kiihdyttämään kasvua ja nostamaan pro-teiini/rasva-suhdetta, mihin päästään syöttämällä tehokkaita määriä peptidejä.
Ihmisille antamista varten näiden synteettisten 15 peptidien puhtauden tulisi olla vähintään n. 93 % ja edullisesti vähintään 98 %. Puhtaus tarkoittaa tämän hakemuksen tarkoituksia varten aiottua peptidiä, joka muodostaa todetun paino-%:n kaikista läsnä olevista peptideistä ja peptidiosasista. Tällaisten synteettisten peptidien anta-20 mistä varten kotitalous- ja muille eläimille niiden kasvun edistämiseksi ja rasvapitoisuuden pienentämiseksi voi niinkin pieni puhtaus kuin n. 5 % tai jopa niinkin pieni kuin 0,01 % olla hyväksyttävä.
Näitä synteettisiä peptidejä tai niiden ei-myrkyl-25 lisiä suoloja, yhdistettyinä farmaseuttisesti tai eläin lääketieteellisestä hyväksyttävän kantimen kanssa farmaseuttisen yhdistelmän muodostamiseksi, voidaan antaa eläimille, ihmiset mukaan lukien, joko laskimonsisäisesti, ihonalaisesti, lihaksensisäisesti, ihon kautta, esimerkik-30 si nenänsisäisesti tai myös suun kautta. Lääkäri voi käyttää tätä antamista kiihdyttämään GH:n vapautumista, kun käsiteltävä isäntä on tällaisen terapeuttisen käsittelyn tarpeessa. Tarvittava annos vaihtelee nimenomaisen käsiteltävän tilan, tilan vakavuuden ja halutun käsittelyn 35 kestoajan mukaan.
20
‘ίιΐ λ O
Tällaisia peptidejä annetaan usein ei-myrkyllisten suolojen kuten happoadditiosuolojen tai metallikompleksien muodossa, esim. sinkin, raudan yms. kanssa (joita pidetään suoloina tämän hakemuksen tarkoituksia varten). Kuvaavia 5 , tällaisia happoadditiosuoloja ovat hydrokloridi, hydrobro- midi, sulfaatti, fosfaatti, maleaatti, asetaatti, sitraat-ti, bentsoaatti, sukkinaatti, malaatti, askorbaatti, tart-raatti jne. Jos vaikuttava aineosa on annettava suun kautta tabletin muodossa, tabletti voi sisältää sideainetta, 10 kuten traganttia, maissitärkkelystä tai gelatiinia; hajo-tusainetta, kuten algiinihappoa; ja liukuainetta, kuten magnesiumstearaattia. Jos halutaan antamista nestemäisessä muodossa, voidaan käyttää makeuttamista ja/tai maustamista ja laskimonsisäinen antaminen tapahtuu isotonisessa suola-15 liuoksessa, fosfaattipuskuriliuoksissa tms.
Näitä peptidejä tulisi antaa ihmisille lääkärin ohjauksen alaisena ja farmaseuttiset yhdistelmät sisältävät tavallisesti peptidiä yhdessä jonkin tavanomaisen, kiinteän tai nestemäisen, farmaseuttisesti hyväksyttävän kan-20 timen kanssa. Tavallinen ruoansulatuskanavan ulkopuolinen annos on n. 0,01:stä n. 1 mikrogrammaan peptidiä/kg isännän kehon painoa.
Vaikka keksintöä on selostettu sen edullisten suoritusmuotojen suhteen, jotka muodostavat keksijöiden tällä 25 hetkellä tunteman parhaan tavan, on selvää, että erilaisia muutoksia ja muunnoksia, jotka olisivat ilmeisiä alaan perehtyneelle, voidaan tehdä poikkeamatta keksinnön piiristä, joka esitetään oheisissa patenttivaatimuksissa. Esimerkiksi muutoksia peptidiketjuun, erityisesti poisjättöjä 30 alkaen peptidin karboksyylipäätteestä ja ulottuen noin asemaan -27, voidaan tehdä nykyisin tunnetun kokeellisen käytännön mukaisesti peptidien tai peptidiosasten muodostamiseksi, jotka säilyttävät kaikki tai hyvin olennaiset osat peptidin biologisesta vaikutuksesta ja tällaisten 35 peptidien katsotaan kuuluvan keksinnön piiriin. Lisäksi
II
21 ^ j 0 jompaankumpaan päätteeseen tai kumpaankin päätteeseen voidaan tehdä lisäyksiä ja/tai yleisesti samanarvoiset tähteet voidaan korvata luonnossa esiintyvillä tähteillä, kuten peptidikemiassa yleisesti on hyvin tunnettua, muiden 5 analogien tuottamiseksi, joilla on ainakin olennainen osa vaaditun polypeptidin tehosta. Lisäksi muunnoksia voidaan tehdä edulliseen -NH2-ryhmään C-päätteellä nykytekniikan tason mukaisesti esimerkiksi aminohappotähteen C-päätteellä karboksyyliosa voi olla radikaali -COOR, -CRO, 10 -CONHNHR, -CON(R) (R') tai -CH2OR, jolloin R ja R' ovat alempi alkyyli, fluori-alempi alkyyli tai vety, sillä tällaisista muunnoksista on tuloksena samanarvoisia synteettisiä peptidejä.
Claims (6)
1. Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten kasvuhormonia vapauttavan tekijän synteettisten peptidianalo- 5 gien valmistamiseksi, joilla on sekvenssi: R1-R2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-R8-Ser-R10-Arg-R12-R13-R14-Gly-Gln-Leu-R18-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-R24-R25-Ile-Nle-R28-R29 -NHR, jossa R3 on Tyr tai His; R2 on Ala tai D-NMA; R8 on Ser tai Asn; R10 on Tyr tai D-Tyr; R12 on Arg tai Lys; R13 on Ile tai 10 Vai; R14 on Leu tai D-Leu; R18 on Tyr tai Ser; R24 on His tai Gin; R25 on Glu tai Asp; R2B on Asn tai Ser; R29 on Arg tai D-Arg; ja R on H tai CH2CH3; edellyttäen kuitenkin, että R29 tai R28 - R29 voidaan jättää pois, ja edellyttäen myöskin, että R2 on D-NMA ja/tai R14 on D-Leu ja/tai R29 on D-Arg, 15 tunnettu siitä, että (a) muodostetaan välituote-peptidi, jossa on ainakin yksi suojaryhmä ja jolla on kaava (II) tai sen tarkoituksenmukaisesti lyhennetty muunnos: X1-R1 (X tai X2 )-R2-Asp( X3 ) -Ala-Ile-Phe-Thr( X4 )-R8( X4 tai X5)-Ser (X4 )-R10( X2 )-Arg( X6) -R12( X6 tai X7 )-R13-R14-Gly-Gln( X5 )-Leu-20 R18(X2 tai X4) -Ala-Arg( X6 )-Lys( X7 )-Leu-Leu-R24( X tai X5)-R25- (X3)-Ile-Nle-R28(X4 tai X5)-R29(X6)-X9 jossa: X, X1, X2, X3, X4, X5, X6 ja X7 ovat kukin joko vety tai suojaryhmä ja X9 on joko suojaryhmä tai kiinnittävä sidos hartsikantimeen tai on des-X9, jossa tapauksessa C-pääte on NHR, (b) pilkotaan 25 suojaryhmä tai -ryhmät tai kiinnittävä sidos kaavan (II) mukaisesta peptidistä; ja puhdistetaan saatu peptidi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R2 on D-NMA.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että R29 on D-Arg.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R14 on D-Leu.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R2 on D-NMA ja R28 on Asn. 92210 23
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan synteettinen peptidi, jolla on kaava: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-
5 Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2. 9 2 ? 1 O 24
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/611,844 US4528190A (en) | 1983-10-25 | 1984-05-18 | GRF Analogs IV |
US61184484 | 1984-05-18 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI851842A0 FI851842A0 (fi) | 1985-05-09 |
FI851842L FI851842L (fi) | 1985-11-19 |
FI92210B true FI92210B (fi) | 1994-06-30 |
FI92210C FI92210C (fi) | 1994-10-10 |
Family
ID=24450622
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI851842A FI92210C (fi) | 1984-05-18 | 1985-05-09 | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4528190A (fi) |
EP (1) | EP0161852B1 (fi) |
JP (1) | JPH0689036B2 (fi) |
KR (1) | KR910000379B1 (fi) |
AT (1) | ATE73823T1 (fi) |
AU (1) | AU578467B2 (fi) |
CA (1) | CA1271299A (fi) |
DD (1) | DD236536A5 (fi) |
DE (1) | DE3585634D1 (fi) |
DK (1) | DK162103C (fi) |
EG (1) | EG17394A (fi) |
ES (1) | ES8606412A1 (fi) |
FI (1) | FI92210C (fi) |
GR (1) | GR851207B (fi) |
HU (1) | HU197759B (fi) |
IE (1) | IE57813B1 (fi) |
IL (1) | IL75088A (fi) |
MX (1) | MX157381A (fi) |
NO (1) | NO168043C (fi) |
NZ (1) | NZ212113A (fi) |
PH (1) | PH20976A (fi) |
PT (1) | PT80450B (fi) |
SU (1) | SU1530097A3 (fi) |
YU (1) | YU46153B (fi) |
ZA (1) | ZA852919B (fi) |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4728726A (en) * | 1982-10-04 | 1988-03-01 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs IIIb |
US4732972A (en) * | 1983-03-07 | 1988-03-22 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polypeptides having growth hormone releasing activity |
US4649131A (en) * | 1984-09-24 | 1987-03-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
CA1271600A (en) * | 1985-01-07 | 1990-07-10 | David Howard Coy | Growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith |
EP0193910A3 (en) * | 1985-03-06 | 1988-11-23 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Synthesis of a derivative of grf and intermediate peptides |
US4734399A (en) * | 1985-08-06 | 1988-03-29 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
US4689318A (en) * | 1985-08-29 | 1987-08-25 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs |
US4880778A (en) * | 1986-05-12 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof |
FR2599038B1 (fr) * | 1986-05-26 | 1990-06-29 | Sanofi Sa | Procede de preparation de nonacosapeptides et peptides intermediaires |
US5565606A (en) * | 1986-10-21 | 1996-10-15 | Hoechst Aktiengesellschaft | Synthesis of peptide aminoalkylamides and peptide hydrazides by the solid-phase method |
DE3742633A1 (de) * | 1987-12-16 | 1989-06-29 | Hoechst Ag | Peptide mit beeinflussender wirkung auf die hypophyse von saeugern |
IL84758A (en) * | 1987-01-13 | 1992-03-29 | Salk Inst For Biological Studi | Peptides stimulating the release of pituitary growth hormone in fish and amphibians,and pharmaceutical compositions containing them |
US4843064A (en) * | 1987-01-13 | 1989-06-27 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs V |
US4914189A (en) * | 1987-02-05 | 1990-04-03 | The Adminstrators Of The Tulane Educational Fund | Synthetic GHRH analogs |
EP0289186A3 (en) * | 1987-04-23 | 1990-04-04 | International Minerals And Chemical Corporation | Process for increasing the growth rate and enhancing the feed efficiency of meat producing livestock |
US5112808A (en) * | 1987-05-11 | 1992-05-12 | American Cyanamid Company | Alkylated hormone-releasing peptides and method of treatig mammals therewith |
IL86102A (en) * | 1987-05-11 | 1994-04-12 | Univ Tulane | Alkylated peptides that release growth hormone and their use |
US5002931A (en) * | 1987-05-22 | 1991-03-26 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs VII |
US4839344A (en) * | 1987-06-12 | 1989-06-13 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
US4801456A (en) * | 1987-07-09 | 1989-01-31 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
USRE33699E (en) * | 1987-07-09 | 1991-09-24 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
US4880777A (en) * | 1987-09-01 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Synthetic peptides having growth hormone releasing activity |
ES2054754T3 (es) * | 1987-09-18 | 1994-08-16 | Hoffmann La Roche | Analogos ciclicos del grf. |
ATE122357T1 (de) * | 1988-01-28 | 1995-05-15 | Polygen Holding Corp | Polypeptide mit hormonwachstumsbefreiender wirkung. |
US5043322A (en) * | 1988-07-22 | 1991-08-27 | The Salk Institute For Biological Studies | Cyclic GRF analogs |
US5023322A (en) * | 1988-08-31 | 1991-06-11 | Mta Kutatas-Es Szervezetelemzo Intezete | Analogs of growth hormone releasing factor (GRF) and a method for the preparation thereof |
US5756458A (en) * | 1989-06-16 | 1998-05-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Stabilized potent GRF analogs |
US5716937A (en) * | 1989-12-13 | 1998-02-10 | The General Hospital Corporation | Method for treating cardiac malfunction |
EP0544706A4 (en) * | 1990-06-29 | 1993-10-13 | Hoffmann-La Roche Inc. | Histidine substituted growth hormone releasing factor analogs |
ATE119916T1 (de) * | 1990-12-10 | 1995-04-15 | Hoffmann La Roche | Verfahren zur enzymatischen herstellung von grf(1-44)nh2. |
CA2084061A1 (en) * | 1991-04-09 | 1992-10-10 | Arthur M. Felix | Growth hormone releasing factor analogs |
ZA922746B (en) * | 1991-04-26 | 1992-12-30 | Lilly Co Eli | Superactive grf analogs |
US5246920A (en) * | 1992-06-15 | 1993-09-21 | University Of South Florida | Treatment of hyperprolactinemia |
US5811074A (en) * | 1992-06-29 | 1998-09-22 | University Of South Florida | Method of diagnosing pituitary dependent growth hormone deficiency |
GB9324691D0 (en) * | 1993-12-01 | 1994-01-19 | Hafslund Nycomed As | Peptide compounds |
US5550212A (en) * | 1993-12-17 | 1996-08-27 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogues of hGH-RH(1-29)NH2 having antagonistic activity |
IT1285405B1 (it) * | 1995-06-06 | 1998-06-03 | Alza Corp | Modificazione di farmaci polipeptidici per accrescere il flusso per elettrotrasporto. |
CN1491233A (zh) * | 2001-02-02 | 2004-04-21 | 康久化学公司 | 长效生长激素释放因子衍生物 |
US20060128615A1 (en) * | 2002-09-18 | 2006-06-15 | Pierrette Gaudreau | Ghrh analogues |
WO2009009727A2 (en) * | 2007-07-12 | 2009-01-15 | Akela Pharma Srl | Ghrh analogs and therapeutic uses thereof |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4563352A (en) * | 1982-10-04 | 1986-01-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Human pancreatic GRF |
IL70530A (en) * | 1983-01-13 | 1986-09-30 | Salk Inst For Biological Studi | Synthetic peptides having growth hormone releasing factor activity and compositions containing them |
US4518586A (en) * | 1983-01-13 | 1985-05-21 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF Analogs III |
AU575843B2 (en) * | 1983-08-10 | 1988-08-11 | The Administrators Of The Tulane Eductional Fund | Growth hormone releasing peptides |
-
1984
- 1984-05-18 US US06/611,844 patent/US4528190A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-04-18 ZA ZA852919A patent/ZA852919B/xx unknown
- 1985-04-26 AT AT85302975T patent/ATE73823T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-04-26 DE DE8585302975T patent/DE3585634D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-04-26 EP EP85302975A patent/EP0161852B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-29 IE IE1087/85A patent/IE57813B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-05-02 CA CA000480584A patent/CA1271299A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-05-03 IL IL75088A patent/IL75088A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-05-08 PH PH32242A patent/PH20976A/en unknown
- 1985-05-09 FI FI851842A patent/FI92210C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-05-10 YU YU77185A patent/YU46153B/sh unknown
- 1985-05-13 PT PT80450A patent/PT80450B/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-05-15 NO NO851947A patent/NO168043C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-05-15 AU AU42488/85A patent/AU578467B2/en not_active Ceased
- 1985-05-16 EG EG306/85A patent/EG17394A/xx active
- 1985-05-17 JP JP60105746A patent/JPH0689036B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1985-05-17 DK DK220685A patent/DK162103C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 DD DD85276457A patent/DD236536A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 KR KR1019850003400A patent/KR910000379B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 MX MX105337A patent/MX157381A/es unknown
- 1985-05-17 NZ NZ212113A patent/NZ212113A/en unknown
- 1985-05-17 GR GR851207A patent/GR851207B/el unknown
- 1985-05-17 SU SU853898058A patent/SU1530097A3/ru active
- 1985-05-17 HU HU851870A patent/HU197759B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 ES ES543235A patent/ES8606412A1/es not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI92210B (fi) | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi | |
FI88402C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger | |
CA1243016A (en) | Human grf peptide analogs | |
US4529595A (en) | GRF Analogs | |
US4626523A (en) | GRF analogs II | |
FI87080B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av grf -analoger. | |
KR0138907B1 (ko) | 합성 펩티드 | |
US4595676A (en) | Rat hypothalamic GRF | |
US5262519A (en) | GRF analogs XI | |
US4628043A (en) | Hypothalamic GRF agonists | |
US4728726A (en) | GRF analogs IIIb | |
FI89499C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbar peptid | |
US5098995A (en) | GRF Analogs VIIA |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
BB | Publication of examined application | ||
MM | Patent lapsed |
Owner name: THE SALK INSTITUTE FOR BIOLOGICAL |