NO161177B

NO161177B - Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk aktive tioetere.

Info

Publication number: NO161177B
Application number: NO852589A
Authority: NO
Inventors: Andreas Von Sprecher; Ivan Ernest; Alan Joseph Main
Original assignee: Ciba Geigy Ag
Priority date: 1984-06-28
Filing date: 1985-06-27
Publication date: 1989-04-03
Also published as: DE3582527D1; CA1276393C; DK291485A; PT80716A; FI852527A0; NO161177C; AU4422985A; IL75620A0; GR851563B; PT80716B; EP0170048A3; DK291485D0; FI852527L; NZ212573A; IL75620A; ES544534A0; NO852589L; EP0170048A2; US4649215A; ES8606260A1

Description

Oppfinnelsen vedrører en analogifremgangsmåte til fremstilling av en terapeutisk aktiv forbindelse med formel

hvori R betyr en C^^-alkyl eller en C^^-hydoksyalkylgrupppe, hvis hydroksylgruppe kan være forestret med en ^2~a-'-'can-syre, R 2 betyr en mettet eller umettet alifatisk rest med 5-15 C-atomer, R3 betyr hydroksy, C^_^-alkoksy, en usubstituert aminogruppe eller en substituert aminogruppe med formel -NH-CH(R<3>)-C(=0)-R3, hvori R<3> betyr hydrogen eller en C. c- a ^ D a x — d alkylgruppe og R^ betyr hydroksy, C^_7~alkoksy, eller en primær aminogruppe, og -X- betyr en enkeltbinding, en metylengruppe eller en evt. med trifluoracetyl substituert aminometylengruppe, idet den frie hydroksylgruppe og S-atomet står i den relative trans-konfigurasjon til hverandre, eller et fysiologisk tålbart salt av en slik forbindelse.

Romfremstillingen av ovennevnte formel I er å forstå

således at symbolene på førsté~linje ligger over de i tredje linje, da under fremstillingsplanet (eller omvendt), hvilket tilsvarer for den viste formel den gjensidige konfigurasjon (RS)-(SR) av begge sentrale karbonatomer i henhold til Kahn-Ingold-Prelog-Konvensj onen.

For noen år siden ble det påvist at isolater fra biologisk material av forskjellig opprinnelse, som var kjent som SRS (slow-reacting substance of anaphylaxis) fra immuno-logiske studier, sammenlign: H.R. Morris et al. Nature 285, 1045-106 (mai 1980) og L. Oerning, S. Hammarstrom og B. Samuelsson: Proe. Nati. Acad. Sei. USA 77 (4), 2014-2017

(1980), som er identisk med de såkalte leukotriener som er kjent fra studiet av arachidonsyre-metabolismen. Således fremgår det klart f.eks. fra de to sistnevnte arbeider at det aktive stoff som er betegnet som SRS-A som med største sannsynlighet er ansvarlig for bronchokdnstriksjonen ved astma som en primær formidler av raskt igangsatte overømfint-lighetsreaksjoner er identisk med det såkalte leukotrien D (sammenlign den etterfølgende formel LTD). Virksom på analog måte er også Leukotrien C, hvis romstruktur for kort tid siden også ble stadfestet ved totalsyntese [E.J. Corey et atl., J.Am. Chem. Soc. 102 (4), 1436-1439 (1980)] .

Det strukturelle grunnskjellettet til leukotrienene dannes allment av en flere ganger umettet, lineær eikosansyre, som har karakteristiske substituenter i 1-, 5- og 6-stilling, slik det avbildes formelmessig for de nevnte viktigste representanter:

LTC-4: R<1> = HOCOCH(NH2)CH2CH2CO-; R<2> = -NHCH2COOH

LTD-4: R<1> = H- ; R<2> = -NHCH2COOH

LTE-4: R<1> = H- ; R<2> = -OH

[Her er romfremstillingen slik å forstå, at hele den olefiniske kjeden ligger i fremstillingsplanet og de valens-streker som er angitt med pil befinner seg over fremstillingsplanet , de punkterte derimot under planet.]

Leukotrienene utmerker seg i sine fysiologiske egenskaper

i almenhet ved, at de forårsaker en markant sammentrekning av glatte muskler av forskjellig slag. Fra et sunnhets-synspunkt er en slik effekt for det meste uønsket, og derfor er forskningen på dette området først og fremst inn-stilt på å finne egnede leukotrien-antagonister.

Overraskende har det nu vist seg, at forbindelsene ifølge oppfinnelsen med formel I, selv om de har flere struktur-kjennetegn felles med kjente leukotriener, utøver en utpreget antagonistisk virkning mot disse. Således virker de i forskjellige testanordninger in vitro tydelig leuko-tr ien-antagoniserende .

Således hemmer de f.eks. i det testede konsentrasjonsområdet på ca. 0,1-25 ^uMol/1 den sammentrekning av en glatt muskel som er indusert av leukotrien-D4 (LTD^ - se ovenfor). Denne såkalte LTD^-antagonisme fastslås eksperimentelt f.eks.

på følgende måte: I segmenter, som ble uttatt fra tarmen fra et 300-400 g tungt marsvin og ble inkubert i et organbad 1 tyrode-løsning ved 38°C og under tilførsel av en blanding av 9 5% oksygen og 5% karbondioksyd ved en belastning på 1 g, utløses sammentrekninger med syntetisk leukotrien D^ (som kaliumsalt) og registreres isotonisk. Målet på hemmingen ved prøvesubstansen bestemmes etter en forinkubasjon på 2 minutter og betegnet som IC5Q, dvs. den konsentrasjon som reduserer testsammentrekningen med 50%. LTD^-antagonis-men kan også påvises in vivo ved bronkosammentreknings-standardtest på marsvin ved aerosol-tilførsel. (beskrivelsen av testmetoden befinner seg i tillegget etter eksemplene).

I en annen testanordning hemmer forbindelser med formel I

i det testede konsentrasjonsområdet på ca. 1-100 ^uMol/1

den aggregasjon av peritoneale leukocytter hos rotter som induseres av leukotrien (LTB^). Ved den eksperimentelle gjennomføringen drepes Wistar-rotter (400-600 g) 24 timer etter i.p. injeksjon av 16 ml 12%-ig natrium kaseinat-løsning, cellene utvaskes fra peritoneum med buffret Eagles minimal essential medium (E-MEM), hver 0,5 ml cellesuspensjon (10 7 celler i 1 ml E-MEM) bringes i kyvetten i et plateaggregometer og oppvarmes til 3 7°C under jevn omrøring (800-900 rpm). Fire minutter etter tilsetningen av prøvesubstansen (2 ^ul) utløses aggreasjonen ved 2^ul LTB^

(1 ng/ml sluttkonsentrasjon) og registreres gjennomgående. Konsentrasjonen av prøvesubstansen, som reduserer kontroll-aggregasjonen (LTB^ alene) med 50%, betegnes som IC^q.

Overraskende utøver forbindelser med formel I også en utpreget hemmevirkning på andre fysiologisk viktige enzym-systemer. Således ble det observert en hemming av fosfolipase A2 fra menneskelige leukocytter i det testede konsentrasjonsområdet på ca. 0,5-50 ^uMol/1. (den eksperimentelle anordningen for denne bestemmelse er nærmere beskrevet i tillegget etter eksemplene). Likeledes ble det observert en hemming av fosfolipase C fra menneskelige trombocyter i det testede konsentrasjonsområdet på ca. 1-lOO^uMol/l (for eksperimentell anordning se tillegget etter eksemplene).

De antiallergiske hhv. antiinflammatoriske egenskapene som ved hjelp av disse metodene er antydet in vitro, bekreftes også i dyreforsøk in vivo. Således kan den lokale anti-inf lammatoriske virkningen eksempelvis påvises ved hjelp av den metode som er utviklet av G. Tonelli og L. Thibault [Endocrinology TT_, 625 (1965) ] ved hemming av det rotteøre-ødem hos normalrotter som er indusert med krotonolje i dose-området fra ca. 1 til ca. 100 mg/ml.

Takket være disse verdifulle,farmakologiske egenskapene kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen med formel I finne terapeutisk anvendelse der, hvor den allaergogene virkningen av leukotriener fører til sykelige tilstander og mildne eller fjerne dem. Som følge av dette kan de eksempelvis anvendes for behandling av allergiske tilstander og sykdommer, som spesielt astma, men også høyfeber såvel som obstruktive lungesykdommer innbefattet cystisk fibrose. Likeledes er de, takket være deres antiinflammatoriske virkning, egnet som betennelseshemmende midler, spesielt som eksterne (lokale) hudflogistatika for behandling av betennelses-dermatoser av en hvilken som helst opprinnelse, som ved lette hudirritasjoner, kontaktdermatitis, eksantemer og forbrenninger, såvel som slimhudflogostatika for behandling av mukosabetennelser, f.eks. i øynene, nesen, leppene,

munnen og genital-, hhv. analregionen. Videre kan de anvendes som solbeskyttelsesmidler. Den høye hemmende virkningen på forskjellige blodfaktorer henviser i tillegg til muligheten av terapeutisk anvendelse av forbindelsene med formel I i indikasjonsområdet trombose og blodkoagulering.

Som allerede nevnt ovenfor kan det i strukturoppbyggingen av forbindelsene med formel I ifølge oppfinnelsen og leukotriener finnes en almen analogi, spesielt i den innledningsvis omtalte obligatoriske trans-konfigurasjonen av det vicinale S- og O-atomet og den totale strukturen til merkaptoalkansyre-resten A (spesielt i dens typiske form av et cystein-peptid). Det skiller seg derimot vesentlig fraleukotriener ved, at det hos dem i den olefiniske resten (B) mangler den karakteristiske terminale karboksylgruppen. Til forskjell fra leukotriener er hos dem også antallet,

karakteren og romanordningen av dobbelt- og tredobbelt-bindingene såvel som totallengden til den olefiniske resten

(B) innenfor vide grenser uvesentlig for virkningen og

den absolutte konfigurasjonen av de to ovenfor diskuterte

asymmetriske C-atomene er til og med ikke-kritisk, for virkningen, slik det eksempelvis kan vises ved det meget virksomme N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eicostrien-6-yl-N-trifluoracetyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt, som i motsetning til naturlige leukotriener har den omvendte, absolutte konfigurasjonen av karbonatomene 5 og 6 i KW-kjeden.

I den ovenfor definerte formel I står symbol R1 fortrinnsvis for metyl, propyl og fremfor alt etyl, eller også w - C1-C5-hydroksyalkyl, som spesielt &-hydroksyetyl, hvorved hydroksylgruppen ikke bare kan foreligge i fri, men også forestret hydroksylgruppe, kan fortrinnsvis foreligge i forestret form med resten av en alifatisk eller aromatisk og spesielt en C^-C^-alkansyre som har høyst 12 C-atomer, fremfor alt eddiksyre.

Den alifatiske resten som er betegnet med symbolet R , er fortrinnsvis en lineær rest, f.eks. en alkylrest, bestående av 5-15, fortrinnsvis 7-12 C-atomer, som spesielt heptyl, nonyl, undecyl og dodecyl, eller en tilsvarende en- eller to ganger umettet rest, som har en, to eller tre flerdobbelte bindinger, som tredobbelte bindinger og fremforalt dobbeltbindinger, vilkårlig i cis- eller trans-konfigurasjon, i vilkårlige kombinasjoner. Disse flerdobbelte bindingene befinner seg fortrinnsvis så nær som mulig svovelatomet, dvs. konjugert med den første dobbeltbindingen, som befinner seg i a,EJ-stilling til det C-atom som bærer svovelatomet. Foretrukne rester R 2av denne type er f.eks. 1-alkenyl-, 1,3-alkadienyl- og 1,3,6-alkatrienyl-rester, som spesielt 1-heptenyl, 1-oktenyl, 1-nonenyl, 1-decenyl, 1-undecenyl og 1-dodecenyl hhv. 1,3-oktadienyl, 1,3-dekadienyl, 1,3-dodecadienyl såvel som 1,3,6-dodekatrienyl, og der dobbelt-bindingene i hver enkelt foreligger i cis- eller trans-konf iguras jon og kan danne vilkårlige kombinasjoner.

Symbolet R 3 som er definert i den innledningsvis angitte formel I danner sammen med nabokarbonylgruppen -CO- en fri eller funksjonelt omdannet karboksylrest. Dersom R<3 >står for hydroksy, danner det karboksylsyreresten av en fri karboksylsyre med karbonylgruppen, dersom det betyr en C1~C7 -alkoksygruppe, fremfor alt metoksy, utfyller det en karboksylsyreester, og dersom det står for en usubstituert aminogruppe, hører det til den amidiske bindingen i et kar-bokamid eller, dersom aminogruppen substituert som angitt et peptid. I det sistnevnte tilfellet er den substituerte aminogruppen grunnelementet av leucin, valin, alanin (spesielt i den "naturlige" L-formen), og fremfor alt glycin. Karboksyl- i disse aminosyrene kan så igjen foreligge som fri karboksyl eller på den ovenfor definerte måten være funksjonelt omdannet som en C-^-C^alkoksykarbonylgruppe, eller karboksamidogruppen -C0NH9. Slike foretrukne betydninger av symbolet R 3 tilsvarer så o partialformelen

hvor Ra 3 er C1_^-alkyl eller fortrinnsvis hydrogen og 3

er hydroksyl, C^_7~alkoksy eller den primære aminogruppe NH2.

Det innledningsvis definerte symbolet -X- kan på den ene siden være en enkelt C-C-binding, og således danne resten av merkaptoeddiksyren -S-CH2-CO-R 3 med nabogruppene. I dette tilfellet er hydroksyl særlig foretrukket av de ovennevnte betydningene av R 3. På den annen side kan -X-

være en aminometylengruppe som eventuelt er acylert ved nitrogenatomet, som dan tilsvarer partialformelen

R 4 betyr hydrogen eller tfifluoracetyl.

Fortrinnsvis danner den ovenfor karakteriserte aminometylen-gruppen sammen med nabosymbolene en eventuelt acylert cystein-rest med partialformelen.

3 4

hvor R og R har de ovenfor nevnte almene og foretrukne betydningene, hvorved L-cysteinyl-resten med den i naturen forekommende konfigurasjonen ved det asymmetriske C-atomet er foretrukket. I dette tilfellet betyr R 3 fortrinnsvis hydroksy, ^-alkoksy eller en glycinrest som er bundet til nitrogenet og eventuelt er forestret med en alkanol, og R^ hydrogen, "eller trifluoracetyl Y-glutamyl (også i saltform).

De fleste forbindelsene med formel I kan også foreligge i form av salter, avhengig av deres enkelte karakter. De av dem som har en tilstrekkelig surhet, som spesielt de med frie karboksylgrupper, kan danne salter med fysiologsk tålbare baser som spesielt uorganiske baser, fortrinnsvis fysiologisk tålbare alkalimetall-salter, fremforalt natrium- og kaliumsalter.

De av forbindelsene med formel I, som er tilstrekkeliq basiske, som f.eks. estere og amider av aminosyre, kan foreligge som syreaddisjonssalter, det vil si som fysiologisk tålbare salter, med vanlige farmasøytisk anvendbare syrer. Av uorganiske syrer kan særlig nevnes halogenhydrogensyrer, som klorhydrogensyre, såvel som svovelsyre og fosfor- hhv. pyrofosforsyre, av de organiske syrene kan i første rekke nevnes sulfonsyrene, f.eks. de aromatiske, som benzen-

eller p-toluen-sulfonsyre, embonsyre og sulfanilsyre, eller laverealkansulfonsyre, som metansulfon-, etansulfon-, hydroksyetansulfon- såvel som etylendisulfonsyre, eller også alifatiske, alicykliske, aromatiske eller heterocykliske karboksylsyrer, som maur-, eddik-, propion-, rav-, glykol-, melke-, eple-, vin-, citron-, fumar-, malein-, hydroksy-malein-, oksal-, pyrodrue-, fenyleddik-, benzo-, p-amino-benzo-, antranil-, p-hydroksybenzo-, salicyl- og p-aminosali-cylsyre, såvel som ascorbinsyre. Forbindelser med formel I, som inneholder såvel basiske som sure, funksjonelle grupper, som frie karboksyl- og amino-grupper, kan også foreligge som indre salter.

Helt spesielt skal fremheves forbindelser med formel I, i hvilke hele resten (A) av den innledningsvis nevnte merkapto-alkankarboksylsyre gjengis ved en av de følgende formlene, hvorved aminosyrerestene av den "naturlige" L-rekken er foretrukket: Medtas skal også tilstedeværende forbindelser, hvor karbok-sylgruppene foreligger i form av et primært amid eller ,en C^_^-alkylester, eller spesielt et salt, fortrinnsvis et alkalimetallsalt.

I første rekke skal de forbindelser med formel I fremheves som er beskrevet i eksemplene.

Analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er karakterisert ved at et trans-epoksyd med formelen

hvor R 1 og R 2 har de ovenfor nevnte betydninger og begge hydrogenatomene på oksyran-ringen er trans-orientert overfor hverandre, og i hvilken en eventuelt tilstedeværende hydroksygruppe kan foreligge i en beskyttet form, omsettes med et merkaptoalkankarboksylsyrederivat med formelen

hvor R 3 og -X- har de ovenfor nevnte betydninger, i hvilken syre en eventuelt tilstedeværende aminogruppe kan foreligge i en beskyttet form, og om nødvendig eller ønsket avspaltes beskyttelsesgruppene til hydroksy- og/eller amino-

gruppen, og/eller en forbindelse som foreligger som ester, hydrolyseres til en fri syre eller til et salt derav, og om ønsket, overføres en oppnådd fri forbindelse

til et salt derav, og/eller en fri forbindelse frigjøres 1 fra en saltform.

Omdannelsen foregår under i og for seg kjente betingelser

ved temperaturer fra ca. -20°C til ca. +50°C, fortrinnsvis ved romtemperatur, og især i et basisk miljø, eksempelvis i nærvær av et amin, spesielt et tertiært alifatisk, aryl-alifatisk eller mettet heterocyklisk amin, som trialkylamin (f.eks. trietylamin, eller etyl-diisopropylamin), dialkyl-benzylamin (f.eks. N,N-dimetylbenzylamin), N,N-dialkyl-anilin (f.eks. N,N-dimetylanilin) f.eks. N-metyl- eller N-etyl-piperidin eller N,N'-dimetylpiperazin. Vanligvis gjennomføres omsetningen i et indifferent organisk oppløs-ningsmiddel, som en laverealkanol, f.eks. metanol eller etanol.

Når det i utgangsstof f et, spesielt i substituenten R"<*>" i formelen II foreligger en fri hydroksygruppe, så kan denne under omsetningen foreligge i en beskyttet, som foretret, form. Foretrukket er lett avspaltbare, spesielt acidolyttisk avspaltbare hydroksyl-beskyttelsesgrupper, slik som de ålment er vel kjent, spesielt fra peptid- og steroid-kjemien. Derved foretrekkes beskyttelsesgrupper av typen tert-butyl- og spesielt tetrahydropyranyl-eter (THP-eter). Disse beskyttelsesgruppene kan fjernes etter frigjøring av hydroksylgruppen etter foretatt hovedreaksjon (dvs. kondensasjon av epoksydet med merkaptokarboksylsyren) på ålment kjent måte, f.eks. ved behandling med en organisk syre, som maur-syre, eddiksyre, oksalsyre eller trifluoreddiksyre, eller en blanding derav, og eventuelt i nærvær av vann og/eller et inert organisk løsningsmiddel, som laverealkanoler (f.eks. metanol eller etanol) og cykliske etere (som tetrahydrofuran eller dioksan).

Når de merkaptokarboksylsyrene som anvendes som utgangsstoff, inneholder en fri aminogruppe, så kan denne under hovedreaksjonen fortrinnsvis foreligge i en beskyttet, som spesielt en acylert, form. Fortrinnsvis anvendes lett, spesielt acidolyttisk, avspaltbare aminobeskyttelsesgrupper, slik de er ålment kjent innbefattet betingelsene for fjerningen av dem, fremfor alt i peptid-kjemien. Blant amino-beskyttelsesgruppene skal imidlertid trifluoracetylgruppen særlig fremheves. Denne kan bli igjen i sluttstoffet ifølge oppfinnelsen etter gjennomført hovedreaksjon eller,

om ønsket, avspaltet etterpå. Avspaltningen av N-trifluoracetylgruppen foregår som kjent fortrinnsvis ved hydrolyse, spesielt under basiske betingelser, som med alkalimetall-karbonater (f.eks. natrium- eller kaliumkarbonat) eller fortynnet alkalilut (f.eks. natrium- eller kalium-hydroksyd) i nærvær av vann i et organisk løsningsmiddel, som er blan-bart med vann, som en laverealkanol (f.eks. metanol eller etanol) eller en cyklisk eter (f.eks. tetrahydrofuran eller dioksan) ved temepraturer fra ca. 0-80°C, fortrinnsvis ved en lett forhøyet temperatur på ca. 50-60°C. Når det foreligger estergrupper i det produktet som skal hydrolyseres, som en acylert hydroksylgruppe i hydroksyalkylresten R eller en forestret karboksylgruppe i merkaptosyre-resten (A), så medforsåpes disse samtidig under disse betingelsene.

I hovedreaksjonen (kondensasjon med epoksyd) anvendes

merkaptokarboksylsyren helst i form av dens ester, fortrinnsvis en C^_^-alkylester (som metyl- eller etyl-ester). Dersom sluttstoffet ifølge oppfinneslen er ønsket som fri syre eller dens salt, så må den oppnådde esteren hydrolyseres. Hydro-lysen gjennomføres under vanlige betingelser, f.eks. slike, som er omtalt foran for den basekatalyserte, hydrolytiske avspaltningen av N-trifluoracetylgruppen. Estergruppen kan imidlertid avspaltes selektivt under bibehold av N-trifluoracetylgruppen under mildere betingelser, som spesielt ved lavere temperatur (fortrinnsvis ved romtemperatur), med en ekvivalent støkiometrisk mengde alkali og med forkortet reaksjonstid, eventuelt under analytisk kontroll, f.eks.

ved tynnskiktskromatografi, for det meste avspaltes derved imidlertid samtidig en acylert hydroksylgruppe.

Utgangsstoffene for kondensasjonsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er enten i og for seg kjente eller kan oppnås ved hjelp av kjente analogifremgangsmåter på i og for seg kjent måte. Således er f.eks. de viktige merkaptokarboksylsyrene med formel III beskrevet (sammenlign f.eks.

E.J. Corey et al.: Tetrahedron Letters 1980, 3143), andre analoge syrer er tilgjengelig på samme måte utgående fra tilsvarende, kjente utgangsstoffer. For fremstilling av cysteinderivater anvendes fordelaktig analoge, kjente cystin-forbindelser og underkastes den vanlige, reduktive spaltningen av den disulfidiske bindingen eller også forarbeides som cystein-derivater med en merkaptogruppe som på egnet måte er beskyttet, f.eks. med trityl eller acetyl-aminometyl.

Det umettede trans-epoksyd som anvendes som utgangsstoff, f.eks. det med den ovenfor definerte formel II, kan især fremstilles ved hjelp av den samme fremgangsmåten, som

anvendes ved syntesen av leukotriener. Ved en typisk vanlig i syntesevei startes det f.eks. fra et mettet alifatisk

aldehyd (alkanal) med formelen

5 hvor R"<*>" har de ovenfor angitte betydningene, hvorved en fri hydroksygruppe som eventuelt forekommer i resten R , foreligger i en som eter beskyttet form, f.eks. i en av de ovenfor omtalte former. Denne forbindelsen kondenseres med formylmetylentrifenylfosforan (eller et ekvivalent reagens), j hvormed det tilsvarende a, (3-umettede aldehydet, 2- trans-alkenal, med formelen

oppstår, hvori R"*" har de ovenfor angitte betydninger og en fri hydroksygruppe som eventuelt foreligger i resten R , er

beskyttet som eter. Denne forbindelsen epoksyderes deretter på i og for seg kjent måte, fortrinnsvis under svakt alkaliske betingelser (f.eks. i nærvær av alkalikarbonater) med vandig hydrogenperoksyd, hvorved det oppnås et trans-epoksyd, 2-(RS),3(SR)-epoksy-alkanal med formelen

hvor R"'" har de ovenfor angitte betydninger og en fri hydroksylgruppe som eventuelt forekommer i resten R , er beskyttet som eter. Dette epoksyaldehydet kan kondenseres til det ønskede umettede epoksydet, f.eks. det med den ovenfor definerte formel II, hvor en fri hydroksylgruppe som eventuelt foreligger i resten r\ foreligger i beskyttet, foretret form, ved kondensasjon med et tilsvarende, kjent alk ylidentrifenylfosforan. For flerdobbelt umettede epoksyder, f.eks. dem med formel II, hvor R 2 oppviser en eller flere dobbeltbindinger, finnes det et indirekte alternativ: i steden for Wittig-reaksjonen med et yliden-fosforan som har umettede kjeder forlenges epoksyaldehydet VI først med formylmetylentrifenylfosforan eller y-trifenylfosforanylidenkrotonaldehyd (4-trifenylfosforanyliden-2-trans-butenal) med 2 hhv. 4 karbonatomer (1 hhv. 2 dobbeltbindinger) , og først det oppnådde 4(RS), 5(RS)-epoksy-2-alkenal hhv. 6(RS), 7(RS)-epoksy-2,4-aldadienal kondenseres med et enkelt, mettet alkylidentrifenylfosforan eller et mindre komplisert alkenylidentrifenylfosforan til det ønskede, flerdobbelt umettede epoksydet (f.eks. et med formel

II) .

Når det ønskes individuelle d iastereomerer, så kan fordelaktig en individuell diastereomer av et utgangsstoff anvendes på

et fritt valgt trinn eller en diastereomer fortrinnsvis dannes fra et racemisk eller optisk inaktivt utgangsjstoff ved stereoselektive reaksjonsbetingelser eller optisk aktive

reagenser, eller racemiske d iastereomerblandinger som oppdeles i optisk individuelle diastereomerer ved fysikalske skillemetoder, eventuelt under anvendelse av optisk aktive hjelpestoffer.

I stereokjemisk hensikt gjennomføres imidlertid såvel kondensasjonen ifølge oppfinnelsen av de dannede bestanddelene II og III, som også tilberedelsen av utgangsstoffene, fortr iinsv is slik at det anvendes stereokjemisk enhetlige utgangsstoffer, reaksjonene gjennomføres om mulig stereo-selektivt, f.eks. ved anvende1 æ av optisk aktive reagenser og/eller hjelpestoffer, og stereokjemisk enhetlige produkter isoleres umiddelbart fra reaksjonsblandingene etter reaksjonen. Således skilles f.eks. ved fremstillingen av de umettede utgangsstoffene eventuelt dannede isomerer med cis- og trans-dobbeltbindinger straks fra hverandre, hvortil de vanlige, fysikalske skillemetodene, som spesielt kromatografi, er egnet. I hovedreaksjonen anvendes helt epoksydet med formel II som en individuell trans- stereoisomer, dog i racemisk form (slik den normalt dannes ved epoksyder ingen av et olefin). Merkaptoalkansyren med formel III, forsåvidt som den er optisk aktiv, anvendes fortrinnsvj s som en individuell, optisk antipode(noe som spesielt er det vanlige til-felle ved cystein og dets derivater). Denne forholdsregel gjør det mulig å skille de to dannede, optisk akt ive diastereomerene fra hverandre på enkel måte ved vanlige fysikalske metoder, som kromatografi. Dersom det anvendes en optisk inaktiv merkaptoalkansyre, er det for å oppnå indi\s duelle, optisk aktive produkter uunngåelig å anvende metodene for spaltning i antipoder ved hjelp av optisk aktive hjelpestoffer, som f.eks. dannelse av salter med optisk aktive baser. Alle egnede skillefremgangsmåter er i og for seg kjente og

kan også gjentas eller kombineres med hverandre på hensikts-mess ig måte.

På grunn av den nære forbindelse mellom de nye forbindelsene

i fri form og i form av deres salter, skal det i det foranstående og det etterfølgende under de frie forbindelsene eller deres salter også forståes de tilsvarende salter, hhv. nye forbindelser.

Oppfinnelsen gjelder også de utførelsesformer av fremgangsmåten, ifølge hvilke det utgås fra en forbindelse som oppnås som mellomprodukt på et hvilket som helst trinn av fremgangsmåten og de manglende trinnene gjennomføres eller det anvendes et utgangsstoff i form av et salt eller dannes under reaksjonsbetingelsene.

De nye utgangsstoffene og mellomproduktene som opptrer ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen og dens innledende trinn, utgjør likeledes en oppfinnelsesgjenstand.

Fortrinnsvis anvendes slike utgangsstoffer, og reaksjonsbetingelsene velges slik, at de forbindelser oppnås som i det foranstående er angitt som spesielt foretrukne.

Ved farmasøytiske preparater og legemidler som inneholder

en av forbindelsene med formel I fremstilt ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk anvendbart salt derav, dreier det seg spesielt om slike, som er bestemt for lokal tilførsel og fremfor alt for inhalasjonstilførsel,

f.eks. i form av en aerosol, et mikropulverisert pulver eller en fininnsprøytet løsning, til pattedyr og som inneholder det aktive stoffet alene eller sammen med et farmasøytisk anvendbart bæremateriale.

Farmasøytiske preparater for lokal anvendelse er f.eks. for behandling av huden, løsninger og kremer, som inneholder en flytende eller halvfast olje-i-vann- eller vann-i-olje-emulsjon, og salver (hvorved slike fortrinnsvis inneholder et konserveringsmiddel). For behandling av øynene er øye-dråper egnet, som inneholder den aktive forbindelsen i vandig eller olje-løsning, og øyesalver, som fortrinnsvis fremstilles i steril form. For behandling av nesen er aerosoler og sprayer (lik de som er beskrevet nedenfor for behandling av luftveiene), grovt pulver, som tilføres gjennom neseborene ved rask inhalering, og fremforalt nesedråper, som inneholder den aktive forbindelsen i vandig eller olje-løsning, egnet. For den lokale behandling av munnhulen egner også suge-karameller seg, som inneholder den aktive forbindelsen i en masse som vanligvis dannes av sukker og gummiarabikum eller fra damp som kan være tilsatt smaksstoffer, såvel som pastiller som inneholder det aktive stoffet i en inert masse, f.eks. av gelatin og glycerol eller sukker og gummiarabikum.

Som farmasøytiske preparater for tilførsel i form av aerosoler eller sprayer er egnet f.eks. løsninger, suspensjoner eller emulsjoner av det aktive stoffet med formel I ifølge oppfinnelsen med et egnet, farmasøytisk godtagbart løsnings-middel, som spesielt etanol og vann, eller en blanding av slike løsningsmidler. De kan etter behov også inneholde andre farmasøytiske hjelpestoffer, som ikke-ioniske eller anioniske, overflateaktive midler, emulgatorer og stabili-satorer, såvel som aktive stoffer av annen type og fremforalt er blanded med en drivgass, som en inert gass under forhøyet trykk eller spesielt med en lett flyktig væske som fortrinnsvis koker under normalt atmosfærisk trykk under den vanlige romtemperaturen (f.eks. mellom ca. -30 og +10°C), som f.eks. et minst delvis fluorert, polyhalogenert laverealkan, eller en blanding av slike væsker. Slike farmasøytiske preparater, som fortrinnsvis anvendes som mellomprodukter eller forråds-blandinger for fremstilling av det tilsvarende legemidlet i ferdig form inneholder vanligv i det aktive stoffet i en konsentrasjon fra ca. 0,1 til ca. 10, spesielt fra ca. 0,3 til ca. 3 vekt-%. For fremstilling av legemidler i ferdig form fylles et slikt farmasøytisk preparat i egnede beholdere, som flasker eller trykkflasker, som er utstyrt med en sprøyte-innretning hhv. en ventil som er egnet for slike formål. Ventilen er fortrinnsvis konstruert som en doseringsventil, som ved påvirkning frigir en forhåndsbestemt mengde av væsken tilsvarende en forhåndsbestemt dose av det aktive stoffet. Ved fremstilling av den ferdige legemiddelformen kan det også gjøres slik, at tilsvarende mengder av det farmasøytiske preparatet som foreligger som forrådsløsning, og drivmidlet separat påfylles på beholderen og først der blandes. Doseringen av det aktive stoffet med formel I

som skal tilføres og hyppigheten av tilførselen avhenger av virkningen hhv. lengden av virkningen for hver enkelt av disse forbindelsene, av styrken av den sykdom som skal behandles hhv. dens symptomer, såvel som av kjønn, alder vekt og individuelt krav av det pattedyr som skal behandles. I gjennomsnitt bør den anbefalte daglige dosen av en forbindelse med formel I ifølge oppfinnelsen, for et pattedyr som veier 75 kg (i første rekke mennesker) ligge i området fra ca. 10 til ca. 500, fortrinnsvis mellom ca. 25 til ca. 250 mg, hvorved tilførselen hensiktsmessig kan foregå i flere doser pr. dag.

De aktive stoffene med formel I fremstilt ifølge oppfinnelsen anvendes for lindring eller fjerning av sykelige tilstander og/eller symptomer fra et pattedyrs kropp, spesielt fra menneskersom kan tilbakeføres til den allergogene innvirkningen av leukotriener og som spesielt forekommer ved astma. Denne anvendelsen hhv. den tilsvarende helbredelsesmetoden, er karakterisert ved behandling av den lidende kroppen hhv. kroppsdelen med en antiallergisk virksom mengde av en forbindelse med formel I alene eller i form av et legemiddel, spesielt i et farma-søytisk preparat som er bestemt for inhalering. Under betegnelsen "en antiallergisk, virksom mengde" skal det forståes en slik mengde av det aktive stoffet, som er tilstrekkelig til en signifikant inhibering av de sammentrekninger som forårsakes av leukotriener.

De følgende eksemplene illustrerer den foreliggende opp-finnelse nærmere, uten å begrense dens omfang'. Alle temperaturer er angitt i celsiusgrader. Aminosyrene som dannelses-bestanddeler for de beskrevne forbindelser er i den "naturlige" L-formen.

Eksempel 1

N-^S-[5(S,R),6(R,S)-5-hydroksy-7-trans,9-trans,11-cis,14-cis-eicosa-tetraen-6-yl] -N-trif luoracetylcysteinyl1; -glycin-metylester og de individuelle 5(S),6(R)- og 5(R),6(S)-dias tereomerene

En løsning av 103 mg (0,36 mmol) 5(S,R),6(S,R)-5,6-epoksy-7-trans, 9-trans,11-cis,14-cis-eicostatraen, 154 mg (0,54 mmol) N-(N<1->trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester og 145 mg (1,44 mmol) trietylamin i 0,5 ml metanol omrøres i en Argon-atmosfære i 4 timer ved romtemperatur og fortynnes med 2 ml metanol. Omvendtfase-kromatografi i systemet acetonitril/vann (2:1) gir 212 mg (100%) av en diastereomerblanding, som ved etterfølgende høytrykks-kromatografi på

en Zorbax ODS RP-søyle med metanol/vann (85:15)oppdeles i omtrent like andeler av begge diastereomerer. 5(S),6(R)-diastereomeren har under disse betingelsene en kortere retensjonstid enn 5(R),6(S)-diastereomeren.

UV (i metanol): 5(S), 6 (R)-isomer: (V =271, 281, 290nm

ms x

(t281= 40600)

5 (R), 6 r)-isomer =271, 280, 290 nm

max

IR (CH2C12) er praktisk talt identisk for begge diastereomerer: 3570 (bred), 3370 (bred), 3000, 2950, 2920, 2850, 1742,1720, 1680, 1518, 1460, 1435, 1380-1350, 1208, 1165, 1000 cm"<1>.

[a]<20>[5(S),6([)-isomer]: +59°-l° (1,4% i CHC13).

Det racemiske 5(S,R),6(S,R)-5,6-epoksy-7-trans,9-trans, 11-cis,14-cis-eicosatetraen som anvendes som utgangsstoff kan fremstilles på følgende måte: En løsning av 51,4 ml pentanal og 147 g trifenylfosforanyl-iden-acetaldehyd i 480 ml klorofom oppvarmes i 5 dager under tilbakeløp, løsningsmidlet avdestilleres under forminsket trykk og den oppnådde rest utrøres med 400 ml av en 3:1-blanding av heksan og eter. Det krystallinsk utfelte trifenylfosfinoksyd avsuges, filtratet inndampes i vakuum og resten destilleres i vakuum. Det oppnås 24,5 g (45,2%) 2-trans-heptenal som farveløs olje, kokepunkt 60-65°C/24 mbar.

Til en løsning av 2,24 g 2-trans-heptenal i 24 ml metylenklorid og 44 ml metanol tilsettes ved 0°C under omrøring 2,04 ml 30%-ig, vandig H202~løsning, fulgt av 100 ml fast kaliumkarbonat. Den således oppnådde reaksjonsblanding videreomrøres i 3 timer ved 0°C. Til slutt tilsettes den 100 ml metylenklorid og vaskes to ganger med hver gang 25 ml fosfatbuffer med pH 8,0. De vandige andelene etterekstraheres med 50 ml metylenklorid. De forenede,

organiske andelene tørkes over magnesiumsulfat og inndampes under forminsket trykk. Kromatografi av det således oppnådde råproduktet på 85 g Merck kiselgel 60 med metylenklorid som elueringsmiddel gir ialt 1,59 g (62%) "(R,S), 3(S,R)-2,3-epoksyheptanal som farveløs olje [R^(silikagel; toluen-etylacetat 4:1):0,59; IR (CH2C12): 2950, 2925, 2850, 2820, 1721, 1463, 1430, 1378, 1210, 850 cm"<1>].

Til en løsning av 640 mg 2(R,S),3(S,R)-2,3-epoksyheptanal i 10 ml metylenklorid tildryppes ved romtemperatur i løpet av 1 time en løsning av 1,65 g y-trifenylfosforanylidenkrotonaldehyd i 15 ml metylenklorid og den resulterende reaksjonsblanding omrøres i ytterligere en time ved romtemperatur.

For opparbeidelse inndampes reaksjonsblandingen under forminsket trykk og resten kromatograferes på en søyle av 40 g silikagel i toluen/etylacetat (19:1). Det oppnås en cis,trans- og trans,trans-isomerblanding, som for isomerisering oppløses i 5 ml metylenklorid med noen få krystaller jod og blandingen får stå ved romtemperatur i 4 timer. Løsningen inndampes så i vakuum og kromatograferes som

nevnt ovenfor. Det oppnås 511 mg (57%) 6(S,R),7(S,R)-6,7-epoksy-2-trans,4-transundecadienal som gulaktig olje.

[UV(etanol):A m_ =276 nm; £ =29900; IR(CH„C10): 2950, 2920,

lu a. X Z A

2850, 2800, 2720, 1678, 1640, 1600, 1460, 1163, 1120, 1007, 985 cm<-1>; Rf [silikagel; toluen-etylacetat (4:1)] =0,56.

En løsning av 3-cis-nonen-l-yl-trifenyl-fosfonium-toluen-sulfonat [I.Ernest, A.J.Main, R.Menassé, Tetrahedron Letters 23, 167 (1982)] (378 mg) i 4,2 ml tetrahydrofuran og 1,26 ml heksametylfosforsyretriamid tilsettes dråpevis ved -78°C under argon 0,31 ml av en 20%-løsning av butyllitium i heksan og den resulterende løsning omrøres videre ved -78°C i 30 minutter. Til den oppnådde løsning av trifenylfosfor-anyliden-3-cis-nonen tildryppes ved -78°C en løsning av 110 mg 6(S,R),7(S,R)-6,7-epoksy-2-trans,4-trans-undecadienal i 1,0 ml tetrahydrofuran og den oppnådde reaksjonsblanding videreomrøres i 30 minutter ved -78°C. For opparbeidelse fordeles reaksjonsblandingen mellom 100 ml eter og 30 ml fosfatbuffer av pH 8,0, og begge faser etterekstraheres med mere eter, hhv. bufferløsning. De forenede eterandelene tørkes over magnesiumsulfat og inndampes i vakuum, hvorved det oppnås 4 21 mg oljeaktig råprodukt. Dette utrøres med 2-3 ml av en heksan-eter-blanding 3:1, det krystallinsk utskilte trifenylfosfinoksydet fraskilles og filtratet inndampes. Den oppnådde rest (195 mg) kromatograferes på en aluminiumoksyd-søyle (10g) som er preparert i heksan med 0,5% trietylamin, med det samme elueringsmiddel. Det oppnås 90,6 mg (57%) 5(S,R),6(S,R)-5,6-epoksy-7-trans,9-trans,11-cis,14-cis-eicosatetraen som tyktflytende, gulaktig olje. [UV (metanol): Kmax = 270, 280, 291 nm; t 2Q0 = 59 600; IR (CH2C12): 3000, 2900, 2850, 1455, 1370, 992, 963 _!

cm

Eksempel IA

N-{_S- [5 (S) , 6 (R) -5-hydroksy-7-trans, 9-trans, 11-cis ,14 ,cis-eicosa-tetraen-6-yl]-N-trif luoracetylcysteinyl} -glycin-metylester [ av optisk individuelt epoksyolefin]

En løsning av 130 mg (0,450 mmol) 5(S) ,6(S),6 (S)-5,6-epoksy-7-trans,9-trans,11-cis,14-cis-eicosatetraen, 260 mg (0,902 mmol) N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester og 250 ml (1,8 mmol) trietylamin i 1,0 ml metanol omrøres under argon ved romtemperatur i 3,5 timer og deretter, etter fortynning med litt metanol, kromatograferes på 12 RP-plater (0pti-UPC12, ANTECH AG, Bennwil, Sveits, 20 x 20 cm) i systemet acetonitril: vann (1:1). Tittelforbindelsen (216 mg) som oppnås på denne måten, rekromatograferes på

en høytrykks-RP-søy1 (Zorbax ODS) i metanol:vann = 87:13. Det oppnås 122 mg ren tittelforbindelse, som i hvert hen-seende er identisk med diastereomeren med den korteste retensjonstiden (se eksempel 1).

Det optisk aktive utgangsstoffet dvs. 5(S),6(S)-5,6-epoksy-7-trans,9-trans,11-cis,14-cis-eicosatetraen, fremstilles på følgende måte: Til en løsning av 10 g litiumaluminiumhydrid i 400 ml eter tildrypes ved 0°C 16,9 g 2-heptinol i 200 ml eter i løpet av 30 minutter under omrøring, og den oppnådde reaksjonsblandingen kokes over natten over tilbakeløp. Overskudd av LiAlH^ ødelegges under avkjøling i et is-vann-bad ved tilsetning av 40 ml etylacetat og den resulterende reaksjonsblandingen fordeles mellom eter og kald IN svovelsyre. Det ansyrede (pH2), vandige skiktet etterekstraheres med mer eter, de forenede organiske ekstraktene tørkes over magnesiumsulfat og inndampes i vakuum. Destillasjon av resten (18 g) under forminsket trykk gir 13,2 g 2-trans-heptenol som farveløs olje, kokepunkt 71,5-72°C/13 mbar.

En løsning av 2,28 g (20 mmol) 2-trans-heptenol i 10 ml metylenklorid tilsettes ved -20°C til en løsning av 5,94 ml tetraisopropylortotitanat og 4,12 g L-(+)-vinsyre-dietyl-ester i 210 ml metylenklorid, fulgt av 9,75 ml av en 4,1 M-løsning av tert.-butylhydroperoksyd i 1,2-dikloretan. Den resulterende reaksjonsblandingen får stå ved -20°C over natten. Etter tilsetning av 8 ml dimetylsulfid omrøres det ved -20til -23°C i 45 minutter, deretter tilsettes 50 ml av en 10%-ig,vandig løsning av L-(+)-vinsyre og det videre-omrøres i 30 minutter ved -20°C og 60 minutter uten avkjøling. Den organiske fasen fraskilles, ettervaskes med 100 ml vann og etter tørking over magnesiumsulfat inndampes den under forminsket trykk. Resten, oppløst i 150 ml eter, omrøres ved 0°C med 60 ml lN-NaOH i 30 minutter, den vandige fasen fraskilles, etterekstraheres med eter, og de forenede organiske ekstraktene utrystes med koksaltløsning. Etter tørking av den organiske andelen over magnesiumsulfat og avdestillering av løsningsmidlet i vakuum oppnås 2,3 g 2 (S),3 (S)-2,3-epoksyheptanol som farveløs, ustabil olje.

Den videreforarbeides straks.

En løsning av 1,2 g 2 (S),3(S)-2,3-epoksyheptanol i 28 ml metylenklorid tilsettes ved romtemperatur til en nyfrem-stilt løsning av 5,5 g kromtrioksyd og 8,76 g pyridin i 70 ml metylenklorid og den oppnådde reaksjonsblandingen videreomrøres i 30 minutter. Den mørkfarvede reaksjonsblandingen avdekanteres fra utskilt materiale, det sistnevnte ettervaskes med 160 ml metylenklorid, og de forenede organiske andelene vaskes med 80 ml fosfatbuffer av pH 8,0. Etter tørking over magnesiumsulfat og inndampning under forminsket trykk kromatograferes det gjenværende råproduktet på 90 g Merck Kieselgel 60 med toluen/etylacetat (4:1).

Det oppnås 464 mg 2(R),3(S)-2,3-epoksyhetanal som farveløs olje. [a]<20> =+101°-l° (1,225% i CHC13); IR(CH2C12): 2950, 2925, 2860, 2815, 2730, 1722, 1462, 1432, 1380, 1360, 1230, 1156, 850 cm"<1>.]

En løsning av 804 mg Y-trifenylfosforanylidencrotonaldehyd

i 10 ml metylenklorid tilsettes i løpet av 1 time dråpevis en løsning av 260 mg 2(R),3(S)-2,3-epoksyheptanal i 10 ml metylenklorid og den resulterende reaksjonsblandingen videreomrøres deretter i 1,5 timer. Løsningen konsen-

treres så under forminsket trykk til ca. 2 ml og kromatograferes umiddelbart på en søyle av 20 g kiselgel 60 med toluen/etylacetat (19:1). Det oppnås 120 mg av en cis, trans- og trans,trans-isomerblanding, som oppløst i 2 ml

metylenklorid med 2 ml jod, får stå ved romtemperatur for isomerisering. Etter 2,5 timer inndampes løsningen i vakuum og kromatograferes igjen, som ovenfor beskrevet, hvorved det oppnås 103 mg ren, optisk aktiv 6(S),7(S)-6,7-epoksy-2-trans,4-trans-undecadienal som gul olje som stivner krystallinsk ved -20°C. [a]2<0> =-28°-l° (0,735% i CHC13).

Kondensasjonen av 90 mg av den sistnevnte forbindelse, oppløst i 2 ml abs. tetrahydrofuran ved -78°C, med en løsning av trifenyl-fosporanyliden-3-cis-nonen, fremstilt fra 338 mg av det tilsvarende fosfoniumtoluensulfonat i tetrahydrofuran/heksametylfosforsyretriamid ved tilsetning av butyllitium i heksan, og opparbeidelse på den måte som er beskrevet for det racemiske produktet (se eksempel 1) oppnås 132 mg (91%) 5(S),6(S)-5,6-epoksy-7-trans,9-trans,11-cis , 14-cis-eicosatetraen som gulaktig olje.

[a]<20> =-23°- 1° (0,81% i CHC13).

Eksempel IB

N-;s-[5(S),6(R)-5-hydroksy-7-trans,9-trans,11-cis,14-cis-eicosa- tetraen- 6- yl]- cysteiny]^- glycin- kaliumsalt En løsning av 84 mg! N-Ls-[5(S),6(R)-5-hydroksy-7-trans,9-trans,11-cis,14-cis-eicosatetraen-6-yl]-N-trifluoracetyl-cysteinyl)' -glycinmetylester i 3,8 ml tetrahydrofuran og 3,8 ml metanol tilsettes en løsning av 276 mg kaliumkarbonat i 11,5 ml vann og den resulterende blandingen omrøres ved romtemperatur under argon i 44 timer. Den inndampes tilslutt under forminsket trykk til ca. 3 ml og påføres på omvendtfase-plater. Kromatografi i systemet acetonitril/ vann (1:1) gir 40 mg av tittelforbindelsen, som oppbevares i 5 ml etanol ved -78°C. UV (Etanol):>- max =271, 280,290 nm;' £ 280 = 4860°-

Eksempel 1C

N-ls-[5(R),6(S)-5-hydroksy-7-trans,9-trans,11-cis,14-cis-eicosa- tetraen- 6- yl]- cysteinylV- glycin- kaliumsalt Analogt med den fremgangsmåte som er beskrevet i det foranstående eksempel IB, oppnås det fra 32 mg N-is-[5(R),6(S)-5-hydroksy-7-trans,9-trans,11-cis,14-cis-eicosatetråen-6-yl]-N-trifluoracetylcysteinyl}-glycin-metylester 8,5 mg av tittelforbindelsen, som oppbevares i et anolisk løsning ved

-78°C. UV (etanol):^ = 270, 280, 290.nm;£_ OQ<=4>9 000. max itjU

Almen fremgangsmåte

Eksempel 2

N-[s-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-heptadecen-6-yl-N-trifluoracétyl- cysteinyl]- glycin- metylester Til en løsning av 480 mg 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-heptadecen (El) og 660 mg N-[N-trifluoracetylcysteinyl]-glycin-metylester [E.J.Corey et al., Tetrahedron Lett. 1980, 3143] i 6 ml metanol tilsettes 0,78 ml trietylamin. Løsningen omrøres i 16 timer ved romtemperatur under argon, løsningsmidlet fordampes i vakuum og resten renses ved kromatografi på silikagel med diklormetan/etylacetat (85:15). Tittelforbindelsen oppnås som farveløs olje.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870, 1755, 1740, 1690, 1530 cm"<1>.

På analog måte oppnås:

Eksempel 3

N- [s-5 (RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-undecen-6-yl-N-trifluor-acetylcysteinyl] -glycin-metylester,

fra 67 mg 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-undecen (E2) og 486 mg N-[N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester. IR (CH2C12): 3400, 2960, 2940, 2880, 1750, 1730, 1640, 1525 cm

Eksempel 4

N-[s-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-tridecen-6-yl-N-trifluor-acetyl-cysteinyl]-glycin-metylester,

fra 0,5 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-tridecen (E3) og 0,8 g N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12):3400, 2980, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700,

1535 cm <1>.

Eksempel 5

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-tridecen-6-yl-cystein-metylester

fra 0,5 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-tridecen (E3) og 0,87 g cystein-metylester-hydroklorid.

IR (CH2C12): 3600, 3400, 2970, 2950, 2880, 1750, 1445 cm<-1>.

Eksempel 6

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-tridecen-6-yl-merkaptoeddiksyre-metylester,

fra 0,72 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-tridecen (E3)- og 0,4 3 g merkaptoeddiksyremetylester.

IR (CH2C12): 3600, 2980, 2940, 2880, 1745, 1475, 1445 cm"<1>.

Eksempel 7

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester,

fra 0,5 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-pentadecen (E4) og 0,71 g N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2970, 2950, 2870, 1760, 1740, 1695, 1530 cm"<1>.

Eksempel 7a

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-entadecen-6-yl-N-trifluor-acetyl-cystein-metylester,

fra 0,5 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-pentadecen (E4) og 0,58 g N-trifluoracetylcystein-metylester.

Eksempel 8

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl-cystein-metylester,

fra 0,5 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-pentadecen(E4) og 0,77 g cystein-metylester-hydroklorid.

IR (CH2C12): 3600, 3400, 2970, 2940, 2870, 1750, 1475, 1445 cm"1.

Eksempel 9

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl-merkaptoeddiksyre-metylester,

fra 0,9 g 5(RS),6(RS)-epoksy-7-cis-pentadecen (E4) og 0,47 g 2-merkaptoeddiksyre-metylester.

IR (CH2C12): 3600, 2970, 2990, 2870, 1750, 1475, 1445 cm"<1>.

Eksempel 10

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-heptadecen-6-yl-cysteinyl-metylester,

fra 1 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-cis-heptadecen (El) og 1,4 g cystein-metylester-hydroklorid.

IR (CH2C12): 3600, 3400, 2940, 2870, 1750, 1475 cm"<1>.

Eksempel 11

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-eicosen-6-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester,

fra 1 g 5(RS),6(RS)-S,6-epoksy-7-cis-eicosen (E5) og 1 g N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2930, 2860, 1750, 1735, 1690, 1530 cm"<1>.

Eksempel 12

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-tricosen-6-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester,

fra 0,6 g 5(RS),6(RS)-5,6-eoksy-7-cis-tricosen (E6) og 0,58 g N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870, 17560, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Eksempel 13

N-^3-[4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-tetradecen-5-yl-tio]-propionyl} -glycin-metylester,

fra 300 mg 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-6-cis-tetradecen (E7) og 2 75 mg N-(3-merkaptopropionyl)-glycin-metylester [S.Okuyama et al. Chem.Pharm.Bull. 30, 2453 (1982)].

IR (CH2C12): 3450, 2970, 2940, 2870, 1760, 1690, 1525 cm"<1>.

Eksempel 14

N- [S-4 (RS),5 (SR) -4-hydroksy-6-cis-tetradecen-5-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester,

fra 0,7 g 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-6-cis-tetradecen (E7) og 1,2 g N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2980, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700,

1530 cm"1.

Eksempel 15

N-\,3- [4 (RS) , 5 (SR) -4-hydroksy-6-cis-nonadecen-5-yl-tio]-propionyl}' -glycin-metylester,

fra 250 mg 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-6-cis-nonadecen (E8) og 175 mg N-(3-merkaptopropionyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3450, 2980, 2940, 2870, 1760, 1690, 1530 cm"<1>.

Eksempel 16

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-nonadecen-5-yl-N-tri-fluoracety1-cysteiny1]-glycin-metylester,

fra 500 mg 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-6-cis-nonadecen (E8) og 620 mg N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2970, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700,

1530 cm"<1>.

Eksempel 17

N- [S-4 (RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-eicosen-5-yl-N-trifluor-acétyl-cysteinyl J -glycin-metylester ,

fra 680 mg 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-6-cis-eicosen (E9) og 830 mg N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Eksempel 17a

N-t3-[4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-eicosen-5-yl-tio]propion-yl)-glycin-metylester,

fra 680 mg 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-6-cis-eicosen (E9) og 720 g N-(3-merkaptopropionyl)-glycin-metylester.

Eksempel 17b

S-[4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-eicosen-5-yl-]-N-trifluoracetyl-cystein-metylester,

fra 680 mg 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-6-cis-eicosen (E9) og 620 mg N-trifluoracetylcystein-metylester.

Eksempel 18

N-[s-6(RS),7(SR)-6-hydroksy-8-cis-eicosen-7-yl-N-trifluor-acetylcysteinyl ] -glycin-me ty lester ,

fra 0,54 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-8-cis-eicosen (E10) og 0,53 g N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Eksempel 18a

N-\,2- [6 (RS) , 7 (SR) -6-hydroksy-8-cis-eicosen-7-yl-tio] -propion-yl) -glycin,

fra 0,54 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-8-cis-eicosen (E10) og 0,4 5 g N-(a-merkaptopropionyl)-glycin.

Eksempel 18b

S-[6(RS),7(SR)-6-hydroksy-8-cis-eicosen-7-yl-]-cystein-metylester,

fra 0,54 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-8-cis-eicosen (E10) og 0,45 g cystein-metylester.

Eksempel 19

N-[s-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-cis-octadecen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester, fra 0,7 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-cis-oktadecen (Ell) og 0,6 g N(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Eksempel 19a

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-cis-oktadecen-6-yl-merkaptoeddiksyre-metylester fra 0,7 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-cis-oktadecen (Ell) og 0,35 g merkaptoeddiksyre-metylester.

Eksempel 20

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-cis-eicosen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester, fra 0,8 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahyropyranyloksy-7-cis-eicosen (E12) og 0,64 g N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2860, 1760, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Eksempel 20a

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-cis-eicosen-6-yl-merkaptoeddiksyre-metylester,

fra 0,8 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-cis-eicosen (E12) og 0,4 g merkaptoeddiksyre-metylester.

Eksempel 21

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-tans-9-cis-nonadecadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester,

fra 0,55 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-trans-9-cis-nonadecadien (E13) og 0,62 g N-(N-trifluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester.

Eksempel 21a

N-i-3-[5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-tans-9-cis-nonadecadien-6-yl-tio]-propionyl]"-glycin-metylester, fra 0,55 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-trans-9-cis-nonadecadien (E13) og 0,53 g N-(3-merkaptopropiony1)-glycin-metylester.

Eksempel 21b

S-[5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-trans-9-cis-nonadecadien-6-yl-]-cystein-metylester, fra 0,55 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-trans-9-cis-nonadecadien (E13) og 0,40 g cystein-metylester.

Eksempel 21c

S-[5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-trans-9-cis-nonadecadien-6-yl-]-merkaptoeddiksyre-metylester, fra 0,55 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-trans-9-cis-nonadecadien (E13) og 0,32 g merkaptoeddiksyre-metylester .

Eksempel 21d

S-[5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-trans-9-cis-nonadecadien-6-yl-]-merkaptoeddiksyre, fra 0,55 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-trans-9-cis-nonadecadien (E13) og 0,30 g merkaptoeddiksyre.

Eksempel 21 e

N-[S-5-hydroksy-7-trans-9-cis-eicosadien-6-yl N-trifluor-acety1-cysteinyl]-glycin-metylester. diastereomere 5(R),6(S)-[A] og 5(S),6(R)- [B] (ved kromatografi): fra 0,6 g racemisk 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7-trans-9-cis-eicosadien (E13a) og 0,52 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester oppnås en blanding av begge diastereomerene i et forhold på ca. 1:1, som oppdeles i individuelle former [A] og [B) av tittelforbindelsen ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat (7:3).

Eksempel 21f

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-trans-8-cis-nonadecadien-5-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester,

fra 0,6 g 4(RS), 5(RS)-epoksy-6-trans-8-cis-nonadecadien (E13b) og 0,52 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester .

Eksempel 2 2

N-[S-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-trans-9-cis-oktadecadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Diastereomerer 5(R),6(S)-[A) og 5(S),6(R)- [B]

(ved kromatografi):

fra 0,6 g racemisk 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-trans-9-cis-oktadecadien (E14) og 0,52 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester oppnås

en blanding av begge diastereomerene i et forhold på ca. 1:1, som skilles i de individuelle fo rmene [A] og [B] av tittelforbindelsen ved kromatografi på silikagel med

heksan-etylacetat (1:1). Begge forbindelser oppviser et praktisk talt identisk spesktum: IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870, 1760, 1740, 1695, 1530 cm"<1>.

Eksempel 22a

S-[5(RS),6(SR ) 5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-trans-9-cis-oktadecadien-6-yl-]merkaptoeddiksyre-metylester: fra 0,9 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-trans-9-cis-oktadecadien (E14) og 0,45 g merkaptoeddiksyre-metylester .

Eksempel 23

N-[S-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-trans-9-cis-eicosadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester: diastereomerer 5(R),6(S)- [A] og 5(S),6(R)- [B]

(ved kromatografi).

Fra 0,5 g racemisk 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-trans-9-cis-eicosadien (E15) og 0,4 g N-(N-tri-fluoracetylcysteinyl)-glycin-metylester oppnås en blanding av begge diastereomerene i et forhold på ca. 1:1, som skilles i de individuelle formene [A] og [B] av tittelforbindelsen ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat (1:1). Begge forbindelser oppviser et praktisk talt identisk spektrum: IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870,

1760, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Eksempel 2 3a

5- [5(RS),6(SR)-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-trans-9-ciseicosadien-6-yl-]merkaptoeddiksyre-metylester: fra 0,91 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7-trans-9-cis-eicosadien (E15) og 0,45 g merkaptoeddiksyre-metylester.

Eksempel 24

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-heksadecatrien-6- yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester, fra 1,1 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7,9-trans-ll-cis-heksadecatrien (E16) og 1,3 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester .

IR (CH2C12): 3400, 2980, 2950, 2880, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Denne diastereomerblanding skyldes de to optisk enhetlige former ved kromatografi på silikagel med heksan- etylacetat (4:1): 5(S),6(R)-diastereomer elueres først, fulgt av 5 (R) ,6 (S)-diastereomeren.

Eksempel 25 N-[s-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,ll-cis-9-trans-heksa-decatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester, fra 0,5 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7,11-cis-9-trans-heksadecatrien (E17) og 0,62 N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester: IR (CH2C12): 3400, 2970, 2950, 2880, 1740, 1700, 1530 cm"<1>. Denne diastereomerblandingen skilles i to optisk enhetlige former ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat 20 (2:1): Først elueres 5(S),6(R)-diastereomeren, [a]D = +102,2 - 4,4°, fulgt av 5(R),6(S)-diastereomeren, [a]<20>= -41,4 2,9°. Begger verdier måles i kloroformløsning av konsentrasjon 0,255% (v/v) hhv. 0,35% (v/v).

Eksempel 25a

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-okta-decatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester, fra

0,5 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7,9-trans-ll-cis-oktadekatrien (E17a) og 0,62 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester .

Eksempel 26

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-11-cis-eicosatrien-<>> 6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester,

fra 0,54 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7,9-trans-ll-cis-eicosatrien (E18) og 0,58 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-

glycin-metylester.

IR (CH2C12): 3400, 2970, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700, 15 30 cm"<1>.

Ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat (3:2) skilles denne diasteromerblandingen i individuelle, optisk enhetlige former. I de første fraksjonene elueres 5(S),6(R)-diastereomeren, fulgt av N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eicosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl] -glycin-metylester, som, såvel som dens diastereomerer, oppviser analoge spektrale egenskaper som diastereomerblandingen.

Begge de nevnte, optisk individuelle forbindelsene kan også oppnås fra tilsvarende, optisk enhetlige 5,6-epoksyder ved kondensasjon med N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester på følgende måte: Eksempel 26A N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eicosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester: En løsning av 2,35 g 5(R),6(R)-5,6-epoksy-7,9-trans-ll-cis-eicosatrien i 28 ml metanol tilsettes under argon 2,48 g trietylamin og 2,53 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester og omrøres i 16 timer ved 20°. Flyktige andeler fjernes i vannstårlevakuum og resten kromatograferes på silikagel. Eluering med heksan-etylacetat (3:2) gir tittelforbindelsen som farveløs olje, som er identisk med det ovenfor karakteriserte produkt.

De optisk aktive epoksyd-bestanddelene kan fremstilles

under anvendelse av fremgangsmåten fra eksempel IA på følgende måte: Under vannfrie betingelser tilsettes en omrørt løsning av 66,3 ml tetraisopropylortotitanat og 38,51 ml D-(-)-vinsyre-dietylester i 1,1 1 metylenklorid ved -23°C 25,7 g 2-trans-

heptenol (se eksempel IA) og 140 ml av en 3,2M-løsning av tert-butylhydroperoksyd i toluen, holdes i 16 timer ved -20°C og behandles dråpevis ved -23°C med 56 ml 10%-ig, vandig L-vinsyre-løsning. Etter ytterligere 30 minutter blir blandingen oppvarmet til +20°C og omrørt så lenge videre, til det organiske skiktet klart lar seg fraskille. Dette omrøres med 1 1 1%-ig,vandig natriumsulfitt-oppløsning i 1 time, fraskilles, vaskes med vann, tørkes over natriumsulfat og inndampes i vannstrålevakuum. Resten oppløses 1 1,6 1 dietyleter, avkjøles til 0°C, tilsettes dråpevis 675 ml N-natronlut og omrøres i 30 minutter ved 0°C.

Den fraskilte organiske fasen vaskes med mettet natriumklo-ridløsning, tørkes og inndampes, hvorved det oppnås 2 (R) ,3(R)-2,3-epoksyheptanol som farveløs ustabil væske,

som straks forarbeides i det neste trinnet.

En løsning av 13,3 g av den sistnevnte forbindelsen i 100 ml metylenklorid tildryppes i løpet av 30 minutter i en omrørt suspensjon av 110,1 g pyridiniumklorkromat og 41,9 g natrium-acetat i 500 ml metylenklorid, hvorved temperaturen holdes på 25°C ved svak avkjøling. Etter 3 timer fortynnes reaksjonsblandingen med 500 ml dietyleter og filtreres gjennom silikagel. Filtratet vaskes med fosfatbuffer av pH 8, tørkes over natriumsulfat og inndampes. Kromatografi av resten på silikagel med en blanding av petroleter (kokepunkt 30-45°) og dietyleter (3:2) gir 2(S) , 3(R)-2,3-epoksyheptanal som farveløs væske. Produktet oppviser analoge spektrale egenskaper som det 2(R),3(S)-antipode

(se eksempel IA).

En løsning av 6,7 g 2(S),3(R)-2,3-epoksyheptanal i 250 ml metylenklorid tilsettes dråpevis ved 20°C i løpet av 1 time en løsning av 20,85 g Y-trifenylfosforanylidenkrotonaldehyd i 200 ml metylenklorid og omrøres i enda en time ved 20°C. Reaksjonsblandingen fortynnes med 240 ml heksan og 120 ml etylacetat,. filtreres gjennom silikagel og inndampes. Resten opptas i like volumdeler heksan og etylacetat, omrøres i 15 minutter, filtreres på nytt gjennom silikagel og inndampes. Den resulterende, oljeaktige blandingen av cis, trans- og trans,trans-isomerer oppløses for isomerisering i 200 ml metanol, tilsettes 220 mg jod og får stå i 3 timer ved 20°C. Etter vasking med en vandig natrium-tiosulfatløsning og vann og tørking over natriumsulfat inndampes løsningen og resten kromatograferes på silikagel. Eluering med heksan-etylacetat (4:1) gir den ønskede 6(R),7(R)-6,7-epoksy-2,4-trans-undekadienal som gulaktig olje, [a]Q = -21,1 -1,3° (0,75 v/v-% i kloroform),hvis spektrale egenksaper ikke skiller seg fra de til 6 (S),7 (S)-antipoder (se eksempel IA).

Til en omrørt løsning av 5,15 g nonyl-trifenylfosfoniumbromid i 50 ml tetrahydrofuran som er avkjølt til -78°C, tilsettes under argon 6,85 ml av en l,6M-løsning av butyllitium i toluen. Etter 30 minutter ved -78°C behandles blandingen i rekkefølge ved dråpevis tilsetning av 15,1 g heksametylfosforsyretriamid og en løsning av 1,52 g (6(R),7(R)-6,7-epoksy-2,4-trans-undekadienal i 10 ml tetrahydrofuran,

holdes i ytterligere 15 minutter ved -78°C og oppvarmes til 0°C. Reaksjonsblandingen tilsettes fosfatbuffer (pH 8) og ekstraheres med eter. De forenede eter-uttrekkene stabiliseres med noen dråper trietylamin, tørkes over natriumsulfat og befries fra lett-flyktige andeler ved 20°C i vakuum. Resten utrøres med små mengder eter og befries ved filtrering for utskilt, fast trifenylfosfinoksyd.

Fra filtratet fjernes de siste andelene trifenylfosfinoksyd ved filtrering gjennom en silikagelsøyle, som er for-preparert ved utvasking med en blanding (4:1) av eter-heksan med en 2%-ig tilblanding av trietylamin. Etter avdestillering av løsningsmidlet fra filtratet oppnås det ønskede 5(R),6(R)-5,6-epoksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien i form av lett gule krystaller, smp. 31-32°C.

Eksempel 26B

N-[S-5(S),6(R)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester oppnås på analog måte som i eksempel 26A, men utgående fra 5(S), 6 (S)-5 , 6-epoksy-7, 9'-trans-II-cis-eikosatrien. Tittelforbindelsen er identisk med det produkt, som kan oppnås ved kromatografi av diastereomerblandingen (se ovenfor).

Det som utgangsstoff nødvendige 5 (S),6 (S)-epoksy-7,9-trans-11-cis-eicosatrien kan oppnås på analog måte som dets 5(R),6(R)-antipode, ved at 6 (S),7 (S)-6,7-epoksy-2,4-trans-undecadienal (se eksempel IA) omsettes med en Wittig-Reagens som er tilberedt in situ fra nonyltrifenylfosfoniumbromid og butylliti.um ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i det siste avsnittet i eksempel 26A.

De spektrale egenskapene til denne forbindelsen til-

svarer egenskapene til 5(R),6(R)-antipoden som er karakterisert i eksempel 26A.

Eksempel 27

N- [S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy—,ll-cis-9-trans-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester fra 0,94 g 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7,ll-cis-9-trans-eikosatrien (E19) og 1,0 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester. IR (CH2C12): 3400, 2970, 2940, 2870, 1740, 1700, 1535 cm"<1>.

Diastereomerblandingen kan skilles i individuelle, optisk enhetlige diastereomerer ved kromatografi analogt med eksempel 25 (elueringsmiddel: heksan-etylacetat 7:3).

Eksempel 28

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7,9-trans-11-cis-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester, individuelle diastereomerer 5(R),6(SJ-IA] og 5(S),6(R)- [B].

Fra 0,78 g racemisk 5 (RS),6(RS)-5.6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien (E20) og 0,63 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester oppnås en blanding av diastereomerer [A] og [B] i et forhold på ca. 1:1, fra hvilken de individuelle formene av tittelforbindelsen kan isoleres ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat (1:1). Begge har analogt spektrum.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870, 1740, 1695, 1530 cm"<1>.

Eksempel 28a

N-[S-5(RS),6(SR)-l-acetoksy-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien- 6-yl-N-trif luoracétyl-cysteinyl] -glycin-metylester, individuelle diastereomerer 5(R),6(S)- [A] og 5(S),6(R)- [B] .

Fra 0,78 g racemisk 5(RS),6(RS)-l-acetoksy-5,6-epoksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien (E20a) og 0,63 g N-(N-tri-fluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester oppnås en blanding av diastereomerer [A] og [B] i et forhold på ca. 1:1, fra hvilken de individuelle formene av tittelforbindelsen isoleres ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat (1:1) .

Eksempel 29

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-11,14-cis-eicosa-tetraen- 6-yl-N-trif luoracétyl-cysteinyl ] -glycin-metylester, individuelle diastereomere 5(R),6(S)- [A] og 5(S),6(R)- [B]. Fra 103 mg racemisk 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7,9-trans-ll,14-cis-eicosatetraen (E21) og 154 mg N-(N-trifluoracetyl-cysteinyl) -glycin-metylester , oppnås en blanding av diastereomerer [A] og [B] i et forhold på ca. 1:1, fra hvilken individuelle former av tittelforbindelsen isoleres ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat.

Begge har analogt spektrum.

IR (CH2C12): 3360, 2920, 2850, 1740, 1720, 1680, 1520 cm"<1>.

Eksempel 29a

5- 5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6- yl-merkaptoeddiksyre-metylester: fra 103 mg 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-7,9-trans-ll,14-cis-

eikosatetraen (E21) og 54 mg merkaptoeddiksyre-metylester.

Eksempel 30

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-l-tetrahydropyranyloksy-7,9-trans-11,14-cis-eikosatetraen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl] -glycin-metylester, individuelle diastereomerer 5(R), 6(S)- [A] og 5(S),6(R)- [B]. Fra 0,5 g racemisk 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydropyranyloksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen (E22) og 0,42 g N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metyleter oppnås en blanding av diastereomerer [A]

og [B] i et forhold på ca. 1:1, fra hvilken individuelle former av tittelforbindelsen isoleres ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat (1:1). Begge viser analogt spektrum.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2880, 1760, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Eksempel 31

N-[S-5(RS),6(SR)-l-acetoksy-5-hydroksy-7,ll,14-cis-9-trans-eikosatetråen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester, individuelle diastereomerer 5(R),6(S)- [A] og 5(S), 6(R)- [B]. Fra 490 mg racemisk 5(RS),6(RS)-l-acetoksy-5,6-epoksy-7,11,14-cis-9-trans-eikosatetraen (E23) og 400 mg N-(N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-metylester, oppnås

en blanding av diastereomerer [A] og [B] i et forhold på

ca. 1:1, fra hvilken individuelle former av tittelforbindelsen isoleres ved kromatografi på silikagel med heksan-etylacetat (1:1). Begge viser analogt spektrum.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 2870, 1740, 1700, 1530 cm"<1>.

Diastereomer [A]: [a]<20>= -36,6- 2° (0,5 v/v-% i kloroform)

20

Diastereomer [B] : [cc]g Q +2 (0,5 v/v-% i kloroform)

Etterfølgende avspaltning av hydroksyl- beskyttelsesgruppen Eksempel 3 2

N-[S-5(RS),6(SR)-l,5-dihydroksy-7-cis-eikosen-6-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester.

Løsningen av 1,2 g 1-tetrahydropyranyleter av tittelforbindelsen (se eksempel 20) i 70 ml av en blanding bestående av 4-volumdeler eddiksyre, 2 volumdeler tetrahydrofuran og 1 volumdel vann, omrøres i 6 timer ved 45°. Løsningsmidlet fordampes i vakuum, resten ekstraheres flere ganger i toluen, og ekstraktene inndampes i vakuum. Etter kromatografi av resten på silikagel med diklormetan/heksan (15:1) oppnås tittelforbindelsen.

IR (CH2C12): 3620, 3400, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700, 1530, 1220, 1180 cm"<1>.

Eksempel 33

N-[S-5(RS),6(SR)-1,5-dihydroksy-7-cis-oktadecen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Ved fremgangsmåten i eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,7 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 19). IR(CH Cl ): 3220, 3400, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700, 1535, 1220, 1180 cm" .

Eksempel 3 3a

S-5(RS),6(SR)-1,5-dihydroksy-7-cis-oktadecen-6-yl-merkaptoeddiksyre-metylester. Ved fremgangsmåten i eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,7 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 19a).

Eksempel 33b

S-5(RS),6(SR)-1,5-dihydroksy-7-cis-eikosen-6-yl-merkaptoeddiksyre-metylester. Ved fremgan<g>småten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,7 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 19b).

Eksempel 34

N- [S-5 (S),6(R)-1,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-oktadekadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Ved fremgangsmåtn fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,39 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 22, diastereomer [B]).

IR (CH2C12): 3620, 3400, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700, 1530, 1220, 1180 cm"<1>.

Eksempel 35

N-[S-5(R),6(S)-l,5-dihydroksy-7~trans-9-cis-oktadekadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,33 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 22, diastereomer [A].

IR(CH2C12): 3620, 3400, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700, 1530, 1220, 1180 cm"<1>.

Eksempel 35a

S-5(RS),6(SR)-l,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-oktadekadien-6-yl-merkaptoeddiksyre-metylester. Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,33 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 22a).

Eksempel 36

N-[S-5(S),6(R)-1,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,25 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 23, Diastereomer [B]).

IR (CH2C12): 3640, 3420, 2940, 2880, 1760, 1740, 1700, 1535, 1220, 1180 cm"<1>.

Eksempel 3 7

N-[S-5(R),6(S)-l,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester.

Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,24 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyl-eter (se eksempel 23, diastereomer [A]).

IR (CH2C12): 3620, 3400, 2940, 2870, 1760, 1740, 1700, 1535, 1220, 1180 cm"<1>.

Eksempel 37a

S-5(RS),6(SR)-l,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6-yl-merkaptoeddiksyre-metylester. Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,25 g av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 23a, diastereomer [B]).

Eksempel 38

N- [S-5 (S),6 (R) -1,5-dihydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 0,56 g av den tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 28, diastereomer [B]).

IR (CH2C12): 3620, 3400, 2940, 2860, 1760, 1740, 1695, 1535, 1220, 1180 cm"<1>.

Eksempel 39

N-[S-5(R),6(S)-1,5-dihydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 4 9 mg av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 28, diastereomer [A]).

IR (CH2C12): 3620, 3400, 2940, 2860, 1760, 1740, 1695, 1535, 1220, 1180 cm"<1>.

Eksempel 40

N-[S-5(S),6(R)-l,5-dihydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 140 mg av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 30, diastereomer [B]). IR (CH2C12): 3610, 3400, 2930, 2880, 1750, 1725, 1685,

1525, 1215, 1170 cm"<1>.

Eksempel 41

N-[S-5(R),6(S)-1,5-dihydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester. Ved fremgangsmåten fra eksempel 32 oppnås tittelforbindelsen fra 140 mg av dens tilsvarende 1-tetrahydropyranyleter (se eksempel 30, diastereomer [A]).

Etterfølgende forsåpning av den endestående estergruppen Eksempel 4 2

N-[S-(5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-heptadecen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin-natriumsalt. Løsningen av 800 mg metylester av tittelforbindelsen (se eksempel 2)

i 70 ml metanol tilsettes 22 ml 0,1-N vandig natronlut og omrøres ved romtemperatur i 16 timer. Metanolen fordampes i vakuum ved 20°C og den vandige resten tilsettes 80 ml acetonitril. Løsningen filtreres gjennom litt silikagel og befries for løsningsmiddel i vakuum ved 20°C. Resten ekstraheres flere ganger med kloroform, og uttrekkene inndampes i vakuum. Etter tørking i høyvakuum lar resten,

som består av tittelforbindelsen, seg pulverisere.

IR (CH2C12):3320, 2980, 2940, 2870, 1730, 1675, 1400 cm"<1>.

Eksempel 43

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-undecen-6-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt. Ifølge den fremgangsmåten som er beskrevet i eksempel 4 2 oppnås tittelforbindelsen fra 1,74 g av den tilsvarende metylester (se eksempel 3).

IR (CH Cl ): 3320, 2980, 2940, 2880, 1730, 1675, 1610, 1400 cm

Eksempel 44

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-tridecen-6-yl-N-trifluor-acétyl-cysteinyl ]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 2 oppnås tittelforbindelsen fra 800 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 4).

IR (CH2C12): 3300, 2980, 2940, 2870, 1730, 1670, 1600,

1400 cm"<1>.

Eksempel 45

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-tridecen-6-yl-cystein-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 300 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 5).

IR (CH2C12): 2970, 2940, 2860, 1740, 1620, 1430 cm"<1>.

Eksempel 4 6

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-tridecen-6-yl-merkaptoeddiksyre-natriumsalt. Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 700 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 6).

IR (CH2C12): 3300, 2960, 2930, 2860, 1600, 1400 cm"<1>.

Eksempel 4 7

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl-N-trifluor-acétyl-cysteinyl] -glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 710 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 7).

IR (CH2C12): 3300, 2970, 2940, 2860, 1730, 1670, 1610,

1400 cm"<1>.

Eksempel 4 7a

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl-N-trifluor-acetyl-cystein-kaliumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbidnelsen fra 710 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 7a).

Eksempel 48

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl-cystein-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 250 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 8).

IR (CH2C12): 2970, 2940, 2870, 1740, 1640, 1590, 1410 cm"<1>.

Eksempel 49

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl-merkaptoeddiksyre-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 950 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 9).

IR (CH2C12): 3300, 2960, 2930, 2860, 1600, 1400 cm"<1>.

Eksempel 50

S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-heptadecen-6-yl-cystein-natriumsalt.

Ifølge den ifølge eksempel 42 beskrevne fremgangsmåte oppnås tittelforbindelsen fra 500 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 10).

IR (CH2C12): 3300, 2940, 2870, 1600, 1410 cm"<1>.

Eksempel 51

N-[S-5(RS),6(SR)—5-hydroksy-7-cis-eikosen-6-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 1,64 g av den tilsvarende metylester (se eksempel 11).

IR (CH2C12): 3300, 2930, 2860, 1730, 1670, 1600, 1400 cm"<1>

Eksempel 52

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-trikosen-6-yl-N-tri-fluoracety1-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 950 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 12).

Eksempel 53

N-V3- [4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-tetradecen-5-yl-tio]-propionyl}-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 2 oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 13).

Eksempel 54

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-tetradecen-5-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 600 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 14).

IR (CH Cl ): 3300, 2980, 2940, 2870, 1720, 1660, 1610, 1560

-1

cm

Eksempel 54 a

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-nonadecen-5-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen, smp. 69-73°C, fra 600 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 16).

Eksempel 55

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-eicosen-5-yl-N-tri-fluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 4 20 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 17).

Eksempel 55a

N- 3-[4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-eicosen-5-yl-tio]-propiony1-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 2, oppnås tittelforbindelsen fra 420 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 17a).

Eksempel 55 b

S-4 (RS),5 (SR) -4-hydroksy-6-cis-eikosen-5-yl-N-trifluoracetyl-cysteln-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42 oppnås tittelforbindelsen fra 420 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 17b).

Eksempel 56

N- [S-6 (RS),7(SR)-6-hydroksy-8-cis-eikosen-7-yl-N-trifluor-acétyl-cysteinyl ]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 2 oppnås tittelforbindelsen fra 570 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 18).

IR(CH2C12): 3300, 2940, 2870, 1730, 1675, 1620, 1400 cm"<1>.

Eksempel 56a

S-5(RS),6(SR)-1,5-dihydroksy-7-cis-oktadecen-6-yl-merkaptoeddiksyre-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 2 oppnås tittelforbindelsen fra 570 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 33a).

Eksempel 5 6b

N-%S-5(RS),6(SR)-1,5-dihydroksy-7-cis-eikosen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 2 oppnås tittelforbindelsen fra 570 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 32).

Eksempel 56c

S-5(RS),6(SR)-1,5-dihydroksy-7-cis-eikosen-6-yl-merkaptoeddiksyre-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 570 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 33b).

Eksempel 5 7

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-trans-9-cis-nonadecadien-6-yl-N~trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 2 oppnås tittelforbindelsen fra 410 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 21).

IR (CH2C12): 3300, 2940, 2860, 1730, 1670, 1610, 1400 cm"<1>.

Eksempel 57a

N-^3-[5(RS) , 6(SR)-5-hydroksy-7-trans-9~cis-nonadecadien-6-yl-tio]-propionylj -glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 2 oppnås tittelforbindelsen fra 410 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 21a).

Eksempel 5 7b

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7- trans-9-cis-eikosadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den fremgansmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 410 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 21e, diastereomer [A]).

Eksempel 5 7c

N-[S-5(S),6(R)-5-hydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 410 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 21e, diastereomer [B].

Eksempel 57d

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-trans-8-cis-nonadekadien-5-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 410 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 21f). Smp. 52-54°C.

Eksempel 57e

5- 5(RS),6(SR)-1,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-oktadekadien-6-yl-merkaptoeddiksyre-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen av 410 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 35a).

Eksempel 57f

N-[S-5(S),6(R)-1,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6- yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen av 410 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 36).

Eksempel 57 g

N-[S-5(R),6(S)-1,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den fremgangsmåten som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 410 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 37).

Eksempel 58

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-heksadekatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt. Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 41 oppnås tittelforbindelsen fra 1,17 g av den tilsvarende metylester (se eksempel 24).

IR (CH2C12): 3300, 2970, 2940, 2880, 1730, 1670, 1620,

1410 cm<-1>.

Eksempel 59

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,ll-cis-9-trans-heksadekatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 730 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 25).

IR(CH2C12): 3300, 2970, 2940, 2880, 1730, 1675, 1625, 1410 cm<->1.

Eksempel 60

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 230 mg av den tilsvarende metylester (eksempel 26) .'

IR (CH2C12): 3350, 2960, 2930, 2860, 1720, 1675, 1540 cm"<1>.

Utgående fra tilsvarende, optisk individuelle diastereomerer (se eksempel 26 A og 26B), kan det på analog måte oppnås optisk individuelle produkter: Eksempel 60A

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-11-cis-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt: En løsning av 3;i g N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien—6-yl-N-trif luoracétyl-cysteinyl ]-glycin-metylester (se eksempel 26A) i 50 ml metanol tilsettes dråpevis under argon ved 0-5°C 26,8 ml 0,2N-natronlut, om-røres i 20 timer ved 20°C og inndampes ved denne temperatur i vakuum. Ved "reversed-phase"-kromatografi på Adsorbent Merck RP8 med metanol-vann (3:1) og avdestillering av løsningsmidlet i vakuum oppnås tittelforbindelsen som hvitt amorft pulver.

Eksempel 60B

N- [S-5 (S),6 (R) -5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Under reaksjonsbetingelsene fra eksempel 60A og med analoge mengder av reaksjonspartnere og hjelpekjemikalier, men utgående fra N-[S-5(S),6(R)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien- 6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester (se eksempel 26B), oppnås tittelforbindelsen i form av et hvitt amorft pulver.

Eksempel 61

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,ll-cis-9-trans-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 370 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 27).

IR (CH Cl ): 3300, 2960, 2430, 2860, 1720, 1660, 1620, 1400

-1 1 2 3300, 2960, 2430, 2860, 1720, 1660, 1620, 1400 cm

På analog måte, utgående fra tilsvarende, optisk individuelle diastereomerer (se den kromatografiske adskillelse i eksempel 27), kan det oppnås optisk individuelle produkter, dvs. 5(S),6(R)-diastereomer [A] og 5(R),6(S)-diastereomer

Eksempel 61a

N-[S-5(S),6(R)-l-acetoksy-5-hydroksy-7,ll-cis-9-trans-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt og N-[S-5(S),6(R)-1,5-dihydroksy-7,ll-cis-9-trans-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kalium-salt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, omsettes det tilsvarende, optisk individuelle metylester-1-acetat (se eksempel 28) og den rå reaksjonsblanding skilles ved Reverse-phasekromatografi (eluering med metanol:vann 3:1). Først elueres diol-forbindelsen, fulgt av en 1-acetatet.

Eksempel 61b

N-[S-5(R) ,6 (S)-l-acetoksy-5-hydroksy-7,ll-cis-9-trans-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt og N-[S-5(R),6(S)-1,5-dihydroksy-7,ll-cis-9-trans-eikosatrien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kalium-salt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, omsettes det tilsvarende, optisk individuelle metylester-1-acetat (se eksempel 28) og den rå reaksjonsblandingen skilles ved Reverse-phase-kromatografi (eluering med metanol: vann 3:1). Først elueres diol-forbindelsen, fulgt av 1-acetatet.

Eksempel 61c

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 370 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 29, diastereomer [A]).

Eksempel 61d

N- [S-5 (S),6(R)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 370 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 29, diastereomer [B].

Eksempel 6le

S-5(RS)6(SR)-5-hydroksy-7,9trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-merkaptoeddiksyre-kaliumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 370 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 29a).

Eksempel 61f

N-[S-5(S),6(R)-1,5-dihydroksy-7,11,14-cis-9-trans-eikosatetraen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kalsiumsalt.

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 370 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 31, diastereomer [B]\.

Eksempel 6lg

N-[S-5(R),6(S)-l,5-dihydroksy-7,ll,14-cis-9-trans-eikosatetråen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt .

Ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 42, oppnås tittelforbindelsen fra 370 mg av den tilsvarende metylester (se eksempel 31, diastereomer [A]).

Etterfølgende avspaltning av N- trifluoracetylgruppen Eksempel 62

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-heptadecen-6-yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Løsningen av 590 mg N cv 2 s-trifluoracetylderivat av tittelforbindelsen (se eksempel 42) i 15 ml metanol tilsettes en løsning av 1,7 g natriumkarbonat i 15 ml vann. Den oppnådde suspensjon omrøres i 20 timer ved 60°C. Reaksjonsblandingen filtreres og filtratet inndampes i vakuum.

Resten oppløses i metanol/diklormetan (1:1) og filtreres

på nytt og filtratet befries for løsningsmiddel i vakuum. Resten gir den ønskede tittelforbindelse ved omvendtfase-kromatografi på silikagel med metanol/vann (3:1).

IR (CH2C12): 3300, 2940, 2870, 1680, 1600, 1400 cm"<1>.

Eksempel 6 3

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-undecen-6-yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 1,74 g av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 42).

IR (CH2C12): 3300, 2980, 2940, 2880, 1730, 1670, 1610,

1400 cm<-1>.

Eksempel 6 4

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-tridecen-6-yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 320 mg av Idet tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 43).

IR (CH2CH2): 3400, 2960, 2930, 2860, 1680, 1600, 1400 cm"<1>.

Eksempel 65

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 400 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 46).

IR (CH2C12): 3380, 2960, 2930, 2860, 1650, 1600, 1400 cm"<1>.

Eksempel 66

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-eikosen-6-yl-cystelnyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 1,64 g av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 50).

IR (CH2C12): 3300,2930, 2860, 1730, 1670, 1600, 1400 cm"<1>.

Eksempel 67

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-trikosen-6-yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 960 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 51).

IR (CH2C12): 3250, 2940, 2870, 1680, 1600, 1400 cm"1.

Eksempel 6 7a

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-nonadecen-5-yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 54a), smp. 182°C.

Eksempel 68

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-eikosen-5-yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåten som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 54). IR (CH2C12): 3420, 2940, 2860, 1720, 1670, 1620, 1400 cm"<1>.

Eksempel 68a

S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-cis-eikosen-5-yl-cystein-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 55a), smp. 153-156°C.

Eksempel 6 8b

N-[S-6(RS),7(SR)-6-hydroksy-8-cis-eikosen-7-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 56).

Eksempel 68c

5- 6(RS),7(SR)-6-hydroksy-8-cis-eikosen-7-yl-cystein-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluor-acetyl-derivatet (se eksempel 18b).

Eksempel 68d

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-trans-9-cis-nonadecadien-6- yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåten som er beskrevet i eksempel 62 oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 57).

Eksempel 68e

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62,oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 57b).

Eksempel 68f

N-[S-5(S),6(R)-5-hydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 57c).

Eksempel 68g

N-[S-4(RS),5(SR)-4-hydroksy-6-trans-8-cis-nonadecadien-5-yl-cysteinyl]-glycin-natriumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåten som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 57d), smp. 98-102°C.

Eksempel 68h

N- [S-5 (S),6 (R)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 60B).

Eksempel 68i

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62 oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluor-acetyl-derivatet (se eksempel 60A).

Eksempel 68j

N-[S-5(S),6(R)-5-hydroksy-7-cis-9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 61).

Eksempel 6 8k

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7-cis-9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremqangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 61).

Eksempel 681

N-[S-5(S),6(R)-1,5-dihydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 61a).

Eksempel 6 8m

N-[S-5(R),6(S)-1,5-dihydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosatrien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 62, oppnås tittelforbindelsen fra 200 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-derivatet (se eksempel 61b).

Etterfølgende, samtidige avspaltning av N- trifluoracetylgruppen og forsåpning av den terminale estergruppen

Eksempel 69

N-[S-5(S),6(R)-l,5-dihydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Til en løsning av 50 mg N CV 2 S-trifluoracetyl-metylester av tittelforbindelsen [se eksempel 39, diastereomer 5(S),6(R)]

i 4 ml metanol tilsettes en løsning av 170 mg kaliumkarbonat i 10 ml vann. Reaksjonsløsningen omrøres under argon i tre dager og inndampes i vakuum ved romtemperatur. Resten opptas gjentatte ganger i kloroform og inndampes i vakuum. Etter omvendtfase-kromatografi på silikagel i systemet metanol-vann (3:1) oppnås tittelforbindelsen.

Eksempel 69a

N-[S-5(RS),6(SR)-l,5-dihydroksy-7-cis-oktadeken-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåten som er beskrevet i eksempel 69, oppnås tittelforbindelsen fra 30 mg av den tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 33).

Eksempel 69b

N-[S-5(RS),6(SR)-1,5-dihydroksy-7-cis-eikosen-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 69, oppnås tittelforbindelsen fra 30 mg av den tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 32).

Eksempel 69c

N-[S-5(S),6(R)-1,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-oktadekadien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 69, oppnås tittelforbindelsen fra 30 mg av den tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 34).

Eksempel 69d

N-[S-5(S),6(R)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-heksadekatrien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 69, oppnås tittelforbindelsen fra 30 mg av den tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 24).

Eksempel 69e

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-heksadekatrien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Eksempel 69f

N-[S-5(S),6(R)-5-hydroksy-7,ll-cis-9-trans-heksadekadien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 69, oppnås tittelforbindelsen fra 30 mg av den tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 25).

Eksempel 69g

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,11-cis-9-trans-heksa-dekadien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 69, oppnås tittelforbindelse fra 30 mg av det tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 25).

Eksempel 70

N-[S-5(R),6(S)-1,5-dihydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetråen-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 69 oppnås tittelforbindelse fra 30 mg av den tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 40, diastereomer [5(R),6(S)].

Eksempel 71

N-[S-5(S),6(R)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 69, oppnås tittelforbindelsen fr 33 mg av den tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 29, diastereomer [B]).

UV{CH-0H):X max= 280 nm (£ = 48600).

3 ' max

Eksempel 72

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-cysteinyl(-glycin-kaliumsalt.

Eksempel 72

N-[S-5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt.

Ifølge den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 69, oppnås tittelforbindelsen fra 8 mg av tilsvarende N-trifluoracetyl-metylester (se eksempel 29, diastereomer [A] ) ,

UV (CH3 ,0H):X max= 280 nm (£= 48600).

Eksempel 7 3

N-[S-5(S),6(R)-1,5-dihydroksy-7,ll,14-cis-9-trans-eikosa-tetråen-6-yl-cysteinyl]-glycin-kalsiumsalt. (Simultan avspaltning av 3 beskyttelsesgrupper).

En løsning av 160 mg N-[S-5(S),6(R)-l-acetoksy-5-hydroksy, 7,11,14-cis-9-trans-eikosatetraen-6-yl-N-trifluoracetyl-cysteinyl] -glycin-metylester tilsettes en løsning av 700 mg kaliumkarbonat i 50 ml vann, den omrøres i 3 dager under argon ved romtemperatur og inndampes i vakuum ved romtemperatur. Resten opptas i flere porsjoner kloroform og ekstraktet inndampes i vakuum. Etter filtrering gjennomføres silikagel i en løsning i diklormetan/metanol (1:3) oppnås den ønskede tittelforbindelse.

IR (CH2C12): 3400, 2940, 1690, 1600, 1440, 1220, 1190 cm"<1>.

Eksempel 74

N-[S-5(R),6(S)-l,5-dihydroksy-7,ll,14-cis-9-trans-eikosatetraen-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt. (Simultan avspaltning av 3 beskyttelsesgrupper)

På analog måte som i det foranstående eksempel hydrolyseres 160 mg N-[S-5(R),6(S)-l-acetoksy-5-hydroksy-7,11,14-cis-9-trans-ikosatetraen-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester til tittelforbindelsen.

IR (CH2C12): 3420, 2940, 1585, 1615, 1420, 1220,1190 cm"<1>.

Eksempel 74a

N-[S-5(R),6(S)-1,5-dihydroksy-7-trans-9-cis-eikosadien-6-yl-cysteinyl]-glycin-kaliumsalt. (Simultan avspaltning av 3 beskyttelsesgrupper).

På analog måte som i eksempel 72 hydrolyseres 160 mg N-[S-5(R),6(S)-l-acetoksy-5-hydroksy-7-trans-9-cis-eikosaien-6-yl-N-trifluoracétyl-cysteinyl]-glycin-metylester fra eksempel 23a til tittelforbindelsen.

Eksempel 75

N-[S-5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-heptadecen-6-yl-cysteinyl]-glycin.

Løsningen av 250 mg natriumsalt av tittelforbindelsen (se eksempel 62) i 15 ml diklormetan rystes kraftig med 15 ml 5-prosentig vandig eddiksyre i 10 minutter ved romtemperatur. Den organiske fasen fraskilles, vaskes med vann, tørkes over natriumsulfat og befries fra løsningsmidlet i vakuum. Det blir tilbake 220 mg av tittelforbindelsen som amorf rest. IR(CH2C12): 3300, 2960, 2870, 1680, 1620, 1410 cm"<1>.

Tillegg

De utgangsstoffer som anvendes i eksemplene 2-74, kan fremstilles på følgende måte:

A. Umettede aldehyder

Al. 2- trans- heptenal

En løsning av 44,8 ml valeraldehyd og 6,3 g formylmetylen-trifenylfosforan (S.Trippett og D.M.Walker, J.Chem. Soc. 1961, 1266) i 400 ml tetrahydrofuran og 150 ml kloroform oppvarmes i 24 timer under argon og med til-bakeløp. Den røde løsningen befries for løsningsmidler i vakuum ved romtemperatur og resten utrøres med eter/heksan (1:1). Den faste andelen avfUtreres og ettervaskes fire ganger med eter/heksan (1:1). Filtratet inndampes i vakuum og resten destilleres i vakuum. Tittelforbindelsen oppnås som farveløs væske (Kp. = 55-57°C/22mbar).

På analog måte oppnås:

A2. 2- trans- heksenal (Kp.=33° C/14 mbar)

fra 30,2 ml butyraldehyd oq 51 g formylmetylentrifenylfosforan.

A3. 2- trans- oktenal (Kp.=66-69°C/16 mbar)

fra 20 g kapronaldehyd og 4 2,6 g formylmetylentrifenylfosforan.

A4. 7- tetrahydropyranyloksy- 2- trans- heptenal (Kp.=106° C/5mbar)

fra 16 g 5-tetrahydropyranyloksypentanal [E.J. Corey et al, J.Am. Chem.Soc. 9^2, 6635 (1970)] og 26,1 g formylmetylen-trifenylfosforan.

A5. 7- acetoksy- 2- trans- heptenal (olje),

fra 3,9 g 5-acetoksypentanal [H.C. Brown et al., Synthesis 1980, 151] og 8,2 g formylmetylentrifenylfosforan, etter kromatografi av råproduktet på silikagel med heksan/etylacetat (3:1).

B. Epoksyaldehyder

Bl. 2( RS), 3( SR)- 2, 3- epoksyheptanal

Løsningen av 9 g 2-trans-heptenal (Al) i 200 ml diklormetan/metanol (1:1) tilsettes 28 ml 30%-ig, vandig hydrogenperoksyd og 800 mg kaliumkarbonat og omrørt i 6 timer ved romtemperatur. Det tilsettes 100 ml fosfatbuffer (pH=8) og den organiske fasen fraskilles. Den vandige fasen ekstraheres ytterligere tre ganger med hver gang 50 ml diklormetan. De forenede organiske fasene vaskes med 20 ml fosfatbuffer og tørkes over magnesiumsulfat. Løsningen filtreres gjennom litt "Florisil" og inndampes i vakuum. Tittelforbindelsen oppnås som farveløs væske.

IR (CH2C12): 2950, 2920, 2850, 1720, 1460, 850 cm"<1>.

På analog måte oppnås:

B2. 2( RS), 3( SR)- 2, 3- epoksyheksanal

fra 16,2 g 2- trans-heksenal (A2) som olje,

IR (CH2C12): 2980, 2950, 2890, 1740, 1475, 860 cm"<1>.

B3. 2( RS), 3( SR)- 2, 3- oktanal

fra 9,0 g 2- trans-oktenal (A3) som olje,

IR (CH2C12): 2970, 2950, 2870, 1740, 1475, 1025 cm"<1>.

B4. 2( RS), 3( SR)- 2, 3- epoksy- 7- tetrahydropyranyloksyheptanal fra 8,1 g 7-tetrahydropyranyloksy-2- trans-heptenal (A4) ved kromatografi av råproduktet på silikagel med heksan/etylacetat (2:1) som olje,

IR(CH2C12): 2950, 2880, 1735, 1140, 1130, 1080, 1040 cm"<1>.

B5. 2( RS), 3( SR)- 7- acetoksy- 2, 3- epoksyheptanal

fra 2,2 g 7-acetoksy-2- trans-heptenal (A5) etter kromatografi av råproduktet på silikagel med diklormetan/ etylacetat (93:7) som olje,

IR (CH2C12): 2960, 1740, 1375, 1240, 1050, 860 cm<-1>.

C. Enkelt umettet epoksyaldehyd

Cl. 4( RS), 5( RS)- 4, 5- epoksy- 2- trans- nonenal

En løsning av 7,4 g 2(RS),3(SR)-epoksyheptanal (Bl) og 17,6 g formylmetylentrifenylfosforan i 250 ml tetrahydrofuran og 100 ml kloroform oppvarmes under argon i 1,5 timer ved tilbakeløp. Den avkjølte løsningen befries for løsningsmidler i vakuum ved romtemperatur og resten utrøres med eter/heksan (4:1). Suspensjonen filtreres gjennom litt silikagel og vaskes med eter/ heksan (4:1). Filtratet inndampes i vakuum og resten kromatograferes på silikagel med heksan/etylacetat (5:1, med 1% trietylamin). Tittelforbindelsen oppnås som farveløs olje,

IR (CH2C12): 2970, 2940, 2870, 1690, 1650, 1115, 990 cm"<1>.

På analog måte oppnås:

Cia. 4-( RS), 5( RS)- 4, 5- epoksy- 2- trans- oktenal

fra 2(RS),3(SR)-2,3-epoksyheksanal (B2) som olje.

C2. 4( RS), 5( RS)- 4, 5- epoksy- 9- tetrahydropyranyloksy- 2- trans-nonenal

fra 2 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-7-tetrahydropyranyloksyheptanal (B4) som olje,

IR (CH2C12): 2950, 2880, 1700, 1125, 1040 cm<-1>.

C2a. 4( RS), 5( RS)- 9- acetoksy- 4, 5- epoksy- 2- trans- nonenal

fra 2(RS),3(SR)-7-acetoksy-2,3-epoksy-heptanal (B5) som olje.

D. Dobbelt umettede epoksyaldehyder

Dl. 6( RS), 7( RS)- 6, 7- epoksy- 2, 4- undekadienal: 2- trans- 4- trans-isomer ( Pla) og 2- trans- 4- cis- isomer ( Dlb).

Til en løsning av 1,75 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksyheptanal (Bl) i 40 ml diklormetan tildryppes under omrøring og under argon en løsning av 4,6 g 4-trifenylfosforanyl-iden-2-trans-butenal [M.J. Berenguer et al., Tetrahedron Lett. 1971, 495] i løpet av 1 time ved romtemperatur.

Det etterrøres i ennu 1 time og løsningsmidlet inndampes

i vakuum ved romtemperatur. Resten utrøres med eter/ heksan (r:l), filtreres gjennom silikagel og ettervaskes med eter/heksan (4:1). Etter fordampning av løsnings-midlet i vakuum kromatograferes resten på silikagel med heksan/etylacetat (4:1, med 1% trietylamin). Som lysegul olje oppnås omtrent like store mengder av 2- trans-4- cis- (Dlb) og 2- trans-4- trans- (Dia)-isomerene av tittelforbindelsen, som begge oppviser samme spektralmaks ima: IR (CH2C12): 2950, 2920, 1680, 1640, 1110, 990 cm"l.

På analog måte oppnås: D2. 6( RS), 7( RS)- 6, 7- epoksy- ll- tetrahydropyranyloksy- 2, 4- trans- undekadienal fra 1,4 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-7-tetrahydropyranyloksyheptanal (B4) oppnås en isomerblanding, som så i diklormetanløsning tilsettes jod til blivende farve og omrøres deretter 5 timer ved romtemperatur. Etter filtrering gjennom silikagel avdestilleres løsnings-midlet og tittelforbindelsen isoleres som olje: IR(CH2C12): 2960, 2880,1690, 1650, 1580, 1120, 1040 cm"<1>.

D3. 6( RS), 7( RS)- ll- acetoksy- 6, 7- epoksy- 2, 4- undekadienal: 2-trans-4-trans-isomer (D3a) og 2-trans-4-cis-isomer (D3b). En blanding av begge isomerer oppnås fra 0,54 g 2(RS),3(SR)-7-acetoksy-2,3-epoksy-heptanal (B5)

i et forhold på ca. 1:2 (D3a: D3b) og adskilles kromato-

grafisk .

E.^ Epoksyolefiner med formel II

El. 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7- cis- heptadecen

Til en løsning av 9,4 g n-decyltrifenyl-fosfoniumbromid (C.T. Eyles og S. Trippett, J.Chem.Soc. (C) 1966, 67) i 50 ml tetrahydrofuran som er avkjølt til -30°C, tildryppes 12,2 ml av en 1,6-mola løsning av n-butyllitium i heksan under omrøring og under argonatmosfære, hvorved temperaturen holdes mellom -25 og -30°C. Den røde løs-ningen får tine opp til romtemperatur og det omrøres i ytterligere 10 minutter ved denne temperatur. Etter avkjøling til -78°C tildryppes en løsning av 2 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-heptanal (Bl) i 10 ml tetrahydrofuran i løpet av 15 minutter. Løsningen får varme seg opp til romtemperatur og omrøres i løpet av 1 time. Løsningsmidlet fordampes i vakuum ved 40°C og resten oppløses i diklormetan. Løsningen tilsettes silikagel (så mye at alt løsningsmiddel oppsuges), oppslemmes så med eter og filtreres. Det vaskes fire ganger med eter/heksan (1:1) og filtratet inndampes i vakuum. Resten renses ved kromatografi på silikagel med heksan/etylacetat (30:1, med 1% trietylamin). Tittelforbindelsen oppnås som farveløs olje.

IR (CH2C12): 2980, 2940, 2870, 1475, 875 cm"<1>.

På analog måte oppnås:

E2. 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7- cis- undecen

fra 1,3 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-heptanal (Bl) og 5,5 g n-butyl-trifenylfosfoniumbromid [R.Mechoulam og F. Sondheimer, J.Am.Chem.Soc. 80, 4386 (1958)]

IR (CH2C12): 2970, 2940, 2880, 1470, 875 cm"<1>.

E3. 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7- cis- tridecen

fra 1,2 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-heptanal (Bl) og 5 g n-heksyl-trifenylfosfoniumbromid [CF. Hauser et al.,

J.Org. Chem. 28, 372 (1963)].

IR (CH2C12): 2970, 2940, 2870, 1475, 875 cm"<1>.

E4 5( RS) 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7- cis- pentadecen

IR (CH2C12): 2970, 2930, 2870, 1475, 875 cm"<1>.

E5 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7- cis- eikosen

fra 2 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-heptanal (Bl) og 12,3 g n-tridecyltrifenylfosfoniumbromid [J.Gigg et al. J. Chem.Soc. 1966, 1872],

IR (CH2C12): 2970, 2940, 2860, 1475, 875 cm"<1>.

E6 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7- cis- trikosen

fra 1 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-heptanal (Bl) og 5,5 g n-heksadecyltrifenylfosfoniumbromid [D. Jerchel og J.Kimmig, Chem. Ber. 83, 277 (1950)].

IR (CH2C12): 2970, 2935, 2870, 1470, 875 cm"<1>.

E7 4( RS), 5( RS)- 4, 5- epoksy- 6- cis- tetradecen

fra 2 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-heksanal (B2) og 10 g n-oktyl-trifenylfosfoniumbromid.

IR (CH2C12): 2990, 2960, 2880, 1480, 910 cm"<1>.

E8 4( RS), 5( RS)- 4, 5- epoksy- 6- cis- nonadecen

fra 1 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-heksanal (B2) og 3,6 g n-tridecy1-trifenylfosfoniumbromid.

IR (CH2C12): 2980, 2940, 2870, 1475, 905 cm"<1>.

E9 4( RS), 5( RS)- 4, 5- epoksy- 6- cis- eikosen

fra 0,58 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-heksanal (B2) og 3,8 g n-tetra-decyltrifenylfosfoniumbromid {E.J.Reist og P.H. Christie, J.Org.Chem. 35, 3521 (1970)]. IR (CH2C12): 2940, 2870, 1470, 905 cm"<1>.

ElO 6( RS), 7( RS)- 6, 7- epoksy- 8- cis- eikosen

fra 1 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-oktanal (B3) og 4,1 g n-dodecyl-trifenylfosfoniumbromid [D.Jerchel og J. Kimmig, Chem. Ber. ;83, 277 (1950)].

IR (CH2C12): 2940, 2870, 1465, 875 cm"<1>.

Ell 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- l- tetrahydropyranyroksy- 7- cis-oktadecen

fra 1 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-7-tetrahydropyranyloksyheptanal (B4) og 6,6 g n-undecyltrifenylfosfoniumbromid (fremstilt analogt n-decyltrifenylfosfoniumbromid). IR (CH2C12): 2930, 2860, 1465, 1040 cm"<1>.

Ella 5( RS), 6( RS)- l- acetoksy- 5, 6- epoksy- 7- cis- oktadecen under samme betingelser som foregående eksempel men fra 2(RS),3(SR)-7-acetoksy-2,3-epoksy-heptanal (B5) istedenfor THP-derivatet B4: olje.

El2 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- l- tetrahydropyranyloksy- 7- cis-eikosen

fra 1 g 2(RS),3(SR)-2,3-epoksy-7-tetrahydropyranyloksyheptanal (B4) og 6,6 g n-tridecyltrifenylfosfoniumbromid.

IR (CH2C12): 2930, 2860, 1465, 1040 cm"<1>.

El2a 5( RS), 6( RS)- l- acetoksy- 5, 6- epoksy- 7- cis- eikosen under de samme betingelser som foregående eksempel,men fra 2(RS),3(SR)-7-acetoksy-2,3-epoksy-heptanal (B5) istedenfor THP-derivatet B4: olje.

E13 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7- trans- 9- cis- nonadekadien fra 1 g 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-2-trans-nonenal (Cl) og 3.8 g n-decyltrifenylfosfoniumbromid.

E13a 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7- trans- 9- cis- eikosadien

fra 1 g 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-7-trans-nonenal (Cl) og 3.9 g n-undecyltrifenylfosfoniumbromid: olje.

E13b 4( RS), 5( RS)- 4, 5- epoksy- 6- trans- 8- cis- nonadekadien

fra 1 g 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-7-trans-oktenal (Cia) og 3,9 g n-undecyltrifenylfosfoniumbromid: olje.

E14 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- l- tetrahydropyranyloksy- 7- trans-9- cis- oktadekadien

fra 0,8 g 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-9-tetrahydropyranyloksy-2- trans-nonenal (C2) og 2,2 g n-nonyltrifenylfosfoniumbromid [G. Ohloff et al. Heiv. Chim. Acta 60, 1161

(1977)1

IR (CH2C12): 2940, 2870, 1585, 1460, 1040 cm"<1>.

E14a 5( RS), 6( RS)- l- acetoksy- 5, 6- epoksy- 7- trans- 9- cis- okta-dekadien

under de samme betingelser som i foregående eksempel, men fra 4(RS),5(RS)-9-acetoksy-4,5-epoksy-2-trans-nonenal (C2a) istedet for THP-derivatet C2: olje.

E15 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- l- tetrahydropyranyloksy- 7- trans-9- cis- eikosadien

fra 0,8 g 4(RS),5(RS)-4,5-epoksy-9-tetrahydropyranyloksy-2- trans-nonenal (C2) og 2,4 g n-undecyltrifenylfosfoniumbromid.

IR (CH2C12): 2940, 2870, 1585, 1450, 1040 cm"<1>.

E15a 5( RS), 6( RS)- l- acetoksy- 5, 6- epoksy- 7- trans- 9- cis-eikosadien

E16 5 ( RS) , 6 ( RS) - 5, 6- epoksy- 7, 9- trans- lT- cis- heksadekatrien fra 0,95 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-2,4-trans-undekadienal (Dia) og 2,8 g n-pentyltrifenylfosfoniumbromid [L.Jaenicke et al., Liebigs Ann. Chem. 1973, 1252].

IR (CH2C12): 2980, 2940, 2880, 1470, 1000, 870 cm"<1>.

E17 5( RS) , 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7, ll- cis- 9- trans- heksadekatrien fra 0,78 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-2-trans-4-cis-undekadienal (Dlb) og 2,3 g n-pentyltrifenylfosfoniumbromid IR (CH2C12): 2975, 2940, 2880, 1470, 1000, 870 cm"<1>.

E17a 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7, 9- trans- ll- cis- oktadekatrien under de samme betingelser som i foranstående eksempel, men fra heptyltrifenylfosfoniumbromid istedet for fra pentylderivat: olje.

E18 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7, 9- trans- ll- cis- eikosatrien fra 0,65 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-2,4-trans-undekadienal (Dia) og 4,65 g n-nonyltrifenylfosfoniumbromid.

E19 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7, ll- cis- 9- trans- eikosatrien fra 0,65 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-2-trans-4-cis-undekadienal (Dlb) og 4,65 g nononyltrifenylfosfoniumbromid. IR (CH2C12): E20 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- l- tetrahydropyranyloksy- 7, 9- trans- Tl- cis- eikosatrien

fra 0,66 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-ll-tetrahydropyranyloksy- 2, 4- trans-undekadienal (D2) og 2,8 g n-nonyltrifenylfosfoniumbromid

E20a 5( RS), 6( RS)- l- acetoksy- 5, 6- epoksy- 7, 9- trans- ll- cis-eikosatrien

under de samme betingelser som i foranstående eksempel, men fra 6(RS),7(RS)-ll-acetoksy-6,7-epoksy-2,4-trans-undekadienal (D3a) i stedet for fra THP-derivat D2 :

olje.

E21 5( RS), 6( RS)- 5, 6- epoksy- 7, 9- trans- ll, 14- cis- eikosatetraen fra 125 mg 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-2,4-trans-undekadienal (Dia) og 435 mg 3-cis-nonenyltrifenylfosfoniumjodid

[E.J.Corey, et al., J.Am. Chem. Soc. 101, 6748 (1979)]

IR (CH2C12): 2910, 2840, 1450, 990 cm"<1>.

E22 5(RS),6(RS)-5,6-epoksy-l-tetrahydroyranyloksy-7,9-trans-11, 14- cis- eikosatetraen

fra 0,5 g 6(RS),7(RS)-6,7-epoksy-ll-tetrahydropyranyloksy-2,4-trans-undekadienal (D2) og 2,1 g 3- cis-nonenyl-trifenyl-fosfoniumjodid.

E2 3 5 ( RS), 6( RS)- l- acetoksy- 5, 6- epoksy- 7, ll, 14- cis- 9- trans-eikosatetraen

fra 0,3 g 6(RS),7(RS)-ll-acetoksy-6,7-epoksy-2-tans-4-cis-undekadienal (D3b) og 0,8 g 3-cis-nonenyl-trifenyl-fosfonium-jodid.

Eksempler på farmasøytiske preparater og tilsvarende ferdige legemiddelformer.

Med uttrykket "Aktivt stoff" skal det i det etterfølgende forståes en forbindelse med formel I ifølge oppfinnelsen, spesielt en slik, som er beskrevet som produkt i eksemplene 1-75, som f.eks. S-[5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-pentadecen-6-yl]-cystein-metylester , N-{ s-[5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7-cis-heptadecen-6-yl]-N-tri-f luor-acetyl-cysteinyij; -glycin-metylester, N-(s- [5 (RS) , 6 (SR) -5-hydroksy-7-trans-9-cis-nonadekadien-6-yl]-N-trifluoracetyl-cysteinyl}-glycin-natriumsalt, N-\S-[5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eikosa-

i

trien-6-yl]-N-trifluoracétyl-cysteinyl^-glycin-metylester, N-ls-[5(RS),6(SR)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl]-cysteinylj;-glycin (også i optisk aktiv form), såvel som

N-[_S- [5 (RS) ,6 (SR)-l,5-dihydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eikosatetraen-6-yl]-cysteinylj-glycin-kaliumsalt (også i optisk aktiv form).

Eksempel A

En drivmiddelholdig, faststoffaerosoldannende inhalasjons-suspensjon som inneholder 0,1 vekt-% aktivt stoff.

Fremstilling

Det aktive stoffet suspenderes under fuktighetsutelukkelse ved hjelp av en vanlig homogenisator under tilsetning av sorbitantrioleatet i triklortrifluoretan, suspensjonen påfylles på en aerosolbeholder som er utstyrt med en doseringsventil. Denne lukkes og påfylles under trykk med drivmidlet B.

Eksempel B

En ca. 2%-ig vandig løsnina av et aktivt stoff i form av dets natrium- eller kalium-salt som er egnet for inhalasjon.

Sammensetning

Fremstilling

Det aktive stoffet oppløses i ca. 60 ml nydestillert vann

og stabilisatoren (etylendiamintetraeddiksyre-dinatriumsaltet) og konserveringsmidlet (benzlkoniumklorid) tilsettes. Etter fullstendig oppløsning av alle bestanddeler oppfylles den oppnådde løsning til 100 ml, fylles på trykkflasker og disse lukkes gasstett. Drivmidlet tilsettes etter behov gassformig under trykk eller i flytende form.

Tillegg - Farmakologiske testmetoder

Marsvin- bronkokonstriksjonstest ( in vivo, aerosol) :

400-700 g tunge hann-marsvin anestetiseres intraperitonealt med 1,4 g/kg uretan og det føres en polyetylenkanyle inn i Vena jugularis. En andre polyetylenkanyle innføres i Trachea. Ved hjelp av en kanyle som er innført i spise-røret, som er forbundet med en Statham-trykk-transduktor, opptegnes trykket i spiserøret. Dyret legges i et lufttett lukkbart plexiglasskammer som er forbundet med et Fleisch-rør nr. 000 og en Validyne-Transducer MP 45-1.

Med denne anordningen måles strømningen.

Etter den kirurgiske prepareringen av forsøksdyrene ventes det en viss tid, foråt lungefunksjonen skal stabilisere seg. Den forbindelse som skal testes tilføres deretter overens-stemmende med den etterfølgende protokoll. Forsøksdyrene utsettes i 1 minutt for en 1-%-ig aerosolløsning av den forbindelse som skal testes (vekt/volum) eller destillert vann (for kontrollformål). For alle testforbindelsene, som skal tilføres gjennom inhalasjon, anvendes et Monaghan-ultralyd-sprøyteapparat (modell 6 70) hvis partikkelstørrelse beveger seg mellom 1 og 8 ^um med en hovedhalvdel på 3^um.

Vandige løsninger nyfremstilles og innføres ved hjelp av

et On-stream drug vial i sprøyteaparatets kammer. Den produserte sprøytetåken tilføres til forsøksdyrene via et glasskammer med 65 ml innhold, som er forbundet med en kanyle med Trachea. Etter forløp av behandlingstiden til-føres LTD^ (0,3/Ug/ml i løpet av 2 minutter med et andre Monaghan-ultralyd-sprøyteapparat (modell 670) og via et lignende glasskammer.

Minskningen i ettergivenhet i det 3. minuttet etter LTD^-applikasjon avleses og middelverdien av tre dyr sammen-lignes med middelverdien av tre kontrolldyr og den prosentuelle hemmingen av ettergivenhet beregnes etter følgende formel:

Dersom forskjellige konsentrasjoner av aktivt stoff undersøkes, opptegnes den prosentuelle hemmingen for hver konsentrasjon, og logaritmen av konsentrasjonen angis på absissen mot den prosentuelle hemmingen på ordinaten. IC5q beregnes da ved lineær regressjonsanalyse.

In vitro- test for bestemmelse av hemming av fosfolipase A^ fra menneskelige leukocytter

Neutrofile menneskelige leukocytter med polymorf kjerne isoleres fra "Buffy coats" ved flertrinns fraksjonert sedimentasjon og dypfryses. Fosfolipase A2 ekstraheres fra cellesuspensjonen ved homogenisering under tilsetning av iskald 0,36 N ^SO^ i 2N NaCl og den overstående væske som oppnås etter sentrifugering ved 10'000 x g mot natrium-acetatbuffer pH 4,5 dialyseres.

For bestemmelse av enzymaktiviteten inkuberes enzym (10-30^ug protein i 0,1 M Tris/HCl-buffer pH 7 under tilsetning av 1 mM CaCl2 og substrat, bestående av fosfolipider (2-uM) av Escherichia coli som er markert radioaktivt med 14 o C-oljesyre, ved 37 i en time. Reaksjonen stanses ved tilsetning av Dole-Reagens (Isopropanol/heptan/lN H SO.

14 2 4 40:10:1, v/v) og den C-oljesyre som frigjøres med fosfolipase A2, ekstraheres. Substrat som også medekstra-heres, fjernes fullstendig ved filtrering av ekstraktene

14

gjennom en søyle av silikagel. Bestemmelsen av C-olje-syren i eluatet foregår ved radiometri.

For bestemmelse av en hemmevirkning av prøvesubstanser på fosfolipase A2 tilsettes disse som løsninger i vann, dimetyl-sulfoksyd (sluttkonsentrasjonen i satsen til 5%, v/v)

eller etanol (sluttkonsentrasjon i satsen til 2,5% v/v) til inkubasjonsomsetningen. Virkningsstyrken til prøvesub-

stansene uttrykkes ved IC50' ^vs• den konsentrasjon, som bevirker en hemming på 50% av kontrollaktiviteten. IC5q beregnes grafisk ved påføring av den prosentuelle hemmingen på ordinaten mot logaritmen av konsentrasjonen(^uM) på abscissen.

Under de beskrevne forsøksbetingelsene hemmer Mepacrin fosfolipase A med en IC^q på 1600 ^uM.

In vitro- test for bestemmelse av hemmingen av fosfolipase C fra menneskelige trombocytter

Menneskelige trombocytter utvinnes fra "Buffy coats" ved fraksjonert sentrifugering og dypfryses deretter. Fosfolipase C frigjøres ved ultralydbehandling av cellesuspensjonen og befinner seg etter ultracentrifugering (150'000 x g i 1 time) i løselig form i den overstående væske.

For bestemmelse av enzymaktiviteten inkuberes enzym (20-100 ^,ug protein i 0,025 M Tris/Meleat-buffer pH 6 under tilsetning av 0,2 mM CaCl_ oa 0,02 mM radioaktivt markert substrat,

14 o

Phosphatidyl-[ C]-inosit, ved 37 i 5 minutter. Reaksjonen stanses ved utrystning med CHCl^/CH^OH 2:1 (v/v). Derved ekstraheres uforbrukt substrat i den organiske fasen, mens reaksjonsproduktet <14>C-inositphophat forblir i den vandige fasen og kan holdes ved radiometri av en aliquot.

For bestemmelse av en hemmevirkning av prøvesubstansene på fosfolipase C tilsettes disse som løsninger i vann, dimetyl-sulfoksyd (sluttkonsentrasjon i satsen til 5%, v/v) eller etanol (sluttkonsentrasjon i satsen til 2,5%, v/v) til inkubasjonssatsen. Virkningsstyrken til prøvesubstansene uttrykkes ved icc;0f dvs. den konsentrasjon, som bevirker en hemming på 50% av kontrollaktiviteten. IC5q beregnes grafisk ved påføring av den protentuelle hemmingen på ordinaten mot logaritmen av konsentrasjonen (^,uM) på abscissen.

Under de beskrevne forsøksbetingelser hemmer Mepacrin fosfolipase C med ett IC50 Pa 20 ^uM.

Claims

1.

Analogifremgangsmåte til fremstilling av en terapeutisk aktiv forbindelse med formel

hvori R<1> betyr en C^_3-alkyl eller en C-^^-hydroksyalkyl-gruppe, hvis hydroksylgruppe kan være forestret med en C-^_^ 2-alkansyre,

R p betyr en mettet eller umettet alifatisk rest med 5-15 C-atomer,

R 3 betyr hydroksy, C^_7~alkoksy eller en usubstituert aminogruppe eller en substituert aminogruppe med formel

hvori R 3 betyr hydrogen eller en C, -alkylgruppe og 3 a r d

Rb betyr hydroksy, C^_7~alkoksy- eller en primær aminogruppe, og -X- betyr en enkeltbinding, en metylengruppe eller en eventuelt med trifluoracetyl substituert primær aminometylengruppe,

idet den frie hydroksylgruppen og S-atomet står i den relative trans-konfigurasjon til hverandre, eller et fysiologisk akseptabelt salt av en slik forbindelse, karakterisert ved at en trans-epoksyd med formel

hvori R 1 og R 2 har ovennevnte betydninger og hvori en eventuelt tilstedeværende hydroksylgruppe kan foreligge i en beskyttet form, omsettes med et merkaptoalkankarboksylsyrederivat med formel

hvori R 3 og -X- har ovennevnte betydning og hvori en eventuelt tilstedeværende aminogruppe kan foreligge i beskyttet form, og hvis nødvendig eller ønskelig, avspaltes beskyttelsesgruppene av hydroksyl- og/eller aminogryppene og/ eller en som ester foreliggende forbindelse, hydrolyseres til fri syre eller et salt og/eller en dannet forbindelse omdannes til et salt og/eller en forbindelse frigjøres fra en tilstedeværende saltform. 2 .

Fremgangsmåte ifølge krav 1 til fremstilling av N-fS-/TRS),6(RS)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eicosatrien-6-yl/-N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin eller dets individuelle 5(S),5(R)-5-diastereomer i form av metylester,

fri syre eller et alkalimetallsalt, karakterisert ved at det anvendes tilsvarende utgangsmaterialer. 3 .

Fremgangsmåte ifølge krav 1 til fremstilling av N-(S-/5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll-cis-eicosatrien-6-yl/-N-trifluoracétyl-cysteinyl)-glycin i form av natrium- eller kaliumsaltet,

karakterisert ved at det anvendes tilsvarende utgangsmaterialer. 4 .

Fremgangsmåte ifølge krav 1 til fremstilling av N- tS-/5(RS),6(RS)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eico-satraen-6-yl/-cysteinyl3-glycin eller dets individuelle 5(S),6(R) i form av metylester, fri syre eller et alkalimetallsalt,

karakterisert ved at det anvendes tilsvarende utgangsmaterialer. 5.

Fremgangsmåte ifølge krav 1 til fremstilling av N-{ S/ 5(R),6(S)-5-hydroksy-7,9-trans-ll,14-cis-eicosatetraen-6-yl/cysteinylJ-glycin i form av metylester, fri syre eller et alkalimetallsalt,

karakterisert ved at det anvendes tilsvarende utgangsmaterialer.