NO133088B - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- NO133088B NO133088B NO4243/71A NO424371A NO133088B NO 133088 B NO133088 B NO 133088B NO 4243/71 A NO4243/71 A NO 4243/71A NO 424371 A NO424371 A NO 424371A NO 133088 B NO133088 B NO 133088B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- spores
- mycelium
- soc
- chem
- steroids
- Prior art date
Links
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 claims description 9
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 claims description 9
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 4
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000036571 hydration Effects 0.000 claims description 4
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 20
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 19
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 15
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 11
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000122824 Aspergillus ochraceus Species 0.000 description 3
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000187389 Streptomyces lavendulae Species 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- WHBHBVVOGNECLV-OBQKJFGGSA-N 11-deoxycortisol Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 WHBHBVVOGNECLV-OBQKJFGGSA-N 0.000 description 2
- BFZHCUBIASXHPK-QJSKAATBSA-N 11alpha-hydroxyprogesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)C[C@H]2O BFZHCUBIASXHPK-QJSKAATBSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 2
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 description 2
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000011491 glass wool Substances 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 11-deoxycorticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 0.000 description 1
- NVUUMOOKVFONOM-GPBSYSOESA-N 19-Norprogesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@@H]2[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 NVUUMOOKVFONOM-GPBSYSOESA-N 0.000 description 1
- -1 A-1 compound Chemical class 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241001558165 Alternaria sp. Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241001312183 Coniothyrium Species 0.000 description 1
- 241000010216 Cunninghamella blakesleeana Species 0.000 description 1
- 241000223211 Curvularia lunata Species 0.000 description 1
- 241000555695 Didymella Species 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000733421 Epipactis Species 0.000 description 1
- 241000186984 Kitasatospora aureofaciens Species 0.000 description 1
- 241000235388 Mucorales Species 0.000 description 1
- 240000000064 Penicillium roqueforti Species 0.000 description 1
- 241000123526 Peziza Species 0.000 description 1
- 241000235400 Phycomyces Species 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 241000235546 Rhizopus stolonifer Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000215410 Trichothecium roseum Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000006757 chemical reactions by type Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N de-oxy corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 229940119740 deoxycorticosterone Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 239000012476 oxidizable substance Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J9/00—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof
- C08J9/04—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof using blowing gases generated by a previously added blowing agent
- C08J9/12—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof using blowing gases generated by a previously added blowing agent by a physical blowing agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A24—TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
- A24D—CIGARS; CIGARETTES; TOBACCO SMOKE FILTERS; MOUTHPIECES FOR CIGARS OR CIGARETTES; MANUFACTURE OF TOBACCO SMOKE FILTERS OR MOUTHPIECES
- A24D3/00—Tobacco smoke filters, e.g. filter-tips, filtering inserts; Filters specially adapted for simulated smoking devices; Mouthpieces for cigars or cigarettes
- A24D3/06—Use of materials for tobacco smoke filters
- A24D3/08—Use of materials for tobacco smoke filters of organic materials as carrier or major constituent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2323/00—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of unsaturated aliphatic hydrocarbons having only one carbon-to-carbon double bond; Derivatives of such polymers
- C08J2323/02—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of unsaturated aliphatic hydrocarbons having only one carbon-to-carbon double bond; Derivatives of such polymers not modified by chemical after treatment
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Extrusion Moulding Of Plastics Or The Like (AREA)
- Filtering Materials (AREA)
- Cigarettes, Filters, And Manufacturing Of Filters (AREA)
- Manufacture Of Porous Articles, And Recovery And Treatment Of Waste Products (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Fremgangsmåte til mikrobiologisk hydrering, dehydrering, hydroksylering og avspaltning av sidekjeder av steroider.
Den foreliggende oppfinnelse angår en
fremgangsmåte til mikrobiologisk hydrering, dehydrering, hydroksylering og side-kjedeavspaltning av steroider ved hjelp av sporer som er oppstått ved fermentering, og mere spesielt en forbedring som består i at forbindelsene fremstilles med sporer i det vesentlige fri for vegetativt vekstmateriale, dvs. mycelin og mesk som er fremkommet under gjæringen, og i det vandig medium som i hovedsaken er fritt for næringsstoffer. Fremgangsmåten kan tillempes til å innføre oksygen i steroider eller i disses intermediære forbindelser og til innføring av dobbeltbindinger i steroider eller deres intermediære.
Oppfinnelsen tilveiebringer en fremgangsmåte til mikrobiologisk fremstilling av steroider ved hjelp av sporer som er frembrakt av vegetativt vekstmateriale under fermentering i et næringssubstrat, be-stående i at sporene skilles fra det vegetative vekstmateriale og næringsstoffer som inneholdes i gjæringssubstratet, hvorpå den mikrobiologiske fremstilling foregår i et i det vesentlige vekstmaterialfritt og næringsfritt vandig medium.
Tidligere har man for det meste utført mikrobiologisk fremstilling av kjemiske
forbindelser av steroidtypen i et gjærings-medium som inneholder slike næringsstoffer som maisvørter, soyamel og lignende, sammen med melasse, sakkarose osv. (for å skaffe assimilerbare kilder for både nitrogen og karbon) og i nærvær av det fremkomne mycelium og den mesk som er opp-
stått under gjæringen. (Se U.S. patent nr.
2 753 290 og U.S. patent nr. 2 793 162). Den
mikrobiologiske fremstilling av forbindelser av steroidtypen er også blitt gjort med både myceliet alene og mesken alene. Man har også foreslått å bruke den væske som samr ler seg oppå opphakket mycelium. (Se U.S. patent nr. 2 602 769, særlig eksempel 18 i spalte 33—34). Som fremhevet i dette eksempel ga den væske som fløt oppå (S 11) adskillig omdannelse, mesken (BF) ga bed-re omdannelse, og myceliumresten ga fullstendig omdannelse.
Utvinning av de omdannete steroider fra et komplekst utgjæret medium bød på åpenbare problemer. Utvinning med godt utbytte enten fra den vegestative vekst som inneholder mycelium, eller fra den utgjæ-rete mesk som inneholder organiske næringsstoffer, som begge er forurenset med biprodukter av gjæringen, byr også på problemer. I betraktning av dette har man innen faget søkt etter fremgangsmåter til forbedret utvinning (f. eks. ekstraksjon) såvel som midler til å utføre omdannelsen med enzymene selv, fri for mycelium <p>g mesk. Hva dette siste angår er det ikke berettet om noen tilfredsstillende enzym-ekstrakt som gir fullstendig omdannelse, og av denne grunn bruker man ved teknisk fremstilling enten hele det fermenterte medium som inneholder både mycelin og mesk, eller myceliet alene, eller mesken alene, fremstilt ved filtrering av den ut-gj ærete mesk.
Under våre undersøkelser over omdannelsen av fett, f. eks. melkefett, til meget aromarike forbindelser med muggsopp av penicilliumtypen, f. eks. P. roqueforti, la vi merke til at den gjæringsperiode hvor det ble brukt vegetativt inoculum (muggceller i mycelform i et næringssubstrat) var relativt kort, f. eks. 2 dager, sammenlignet med gjæringsperioden når det ble brukt mugg-komidier eller konidiesporer, f. eks. 4 dager. Vi la også merke til at gjæringsperioden med f. eks. 7 dager gammelt, sporeholdig vegetativt inoculum eller sporer alene var lenger enn det som trengtes med ungt, f. eks. 2 dager gammelt, idet vesentlige spore-fritt vegetativt inoculum. Dette lot til å stadfeste noe man lenge hadde antatt, nemlig at sporer i seg selv, i sammenlig-ning med de stoffskiftemessig meget aktive sterke, unge mycelieceller var så å si in-aktive, dvs. relativt inerte eller i dvaletil-stand. Ved fortsatte undersøkelser viste denne antagelse seg å være uriktig.
Denne oppdagelse av sporeaktivitet på fettsyreområdet førte videre til den oppdagelse at sporer som var fri for næringssubstrat, omfattende både mycelium og utgjæret mesk, kunne brukes alene til omdannelse av steroider på forskjellige må-ter, som nærmere beskrevet nedenfor.
De sporer som brukes i den foreliggen-i de oppfinnelse kan lett fåes av vegetative celler (mycelium) som har fått vokse i 4 til 6 dager i neddykket kultur med lufttil-gang (f. eks. rysting) i vandig maisvørter-laktose eller et annet næringssubstrat som leverer assimilerbart karbon og nitrogen overensstemmende med kjente fremgangsmåter innen faget. De sporer som produse-res av de gamle vegetative celler høstes ved først å sile gjennom et osteklede for å fjerne det meste av myceliet og derpå filtrere gjennom glassull for å fjerne resten av myceliet. Sporene i filtratet utvinnes ved sentrifugering, og de vaskes så med vann for å fjerne eventuelt gjenværende næringssubstrat. De kan lagres i tørr tilstand eller suspendert i destillert vann og opp-bevart ved 4°C. Man kan standardisere sus-pensjonen så den inneholder f. eks. omkring en milliard sporer pr. ml. Man kan også la sporene vokse på en overflatekultur, f. eks. næringsagar, og etter at sporene er skrapt av og suspendert i vann kan de fåes i meget nær ren form ved filtrering, sentrifugering o. 1. som beskrevet ovenfor. Man bør bruke overflatekulturer der hvor orga-nismen ikke eller bare dårlig danner sporer i neddykket kultur. Fungusarter av klassen Mucorales, f. eks. Rhizopus nigricans, avgir ikke sine sporer i væskekultur, og sporer av denne fungus som skal brukes i henhold til oppfinnelsen bør derfor lages ved overflatekultur som ovenfor nevnt. Hvis man ikke på forhånd vet hvilken fremgangsmåte som er best egnet til høy sporeproduksjon, kan man lett fastslå dette ved en forberedende prøve.
De følgende eksempler tjener til å illustrere oppfinnelsen.
Eksempel 1.
Et glukose-neopepton næringssubstrat (Sabourada medium) som var gjort fast med 2 pst. agar ble først podet med Aspergillus ochraceus etter vanlig fremgangsmåte og dyrket ved ca. 30°C i omtrent 5 dager. De sporer som fremkom i løpet av denne tid ble vasket av overflaten av det oppvokste vegetative mycel med destillert vann. Den vandige suspensjon, som var forurenset med noe mycelium og næringssubstrat ble filtrert gjennom glassull for å fjerne myceliet sammen med eventuelt uoppløst substrat, og sentrifugert for å ut-vinne sporene. De oppløselige bestand-deler av substratet som ble tilbakeholdt av sporene ble så fjernet ved å suspendere dem i destillert vann og sentrifugere for å ut-vinne sporene. Denne vasking (ved at sporene påny suspenderes i destillert vann og sentrifugeres) kan gjentas hvis det er nød-vendig eller ønsket, for å være sikker på at sporene i alt vesentlig er fri for alt for-urensende næringssubstrat og mycelium.
De sporer man fikk på denne måten ble suspendert i destillert vann pufret med ca. 1 pst. fosfatpuffer til pH 6,5—7,0, så det fremkom en suspensjon med ca. 1—10 mil-liarder sporer pr. ml. Til ca. 20 ml av denne suspensjon i en 125 ml erlenmeyerkolbe ble det så satt 1 mg progesteronglykol oppløst i
1 ml propylenglykol. Siden glykolet er
blandbart med vann og progesteronet ikke, faller progesteronet ut av oppløsningen som en fin suspensjon når det settes til den pufrede vandige oppløsning. Den fremkomne spore-progesteronsuspensjon ble så luftet ved rysting i et roterende ryste-apparat med ca. 150 omdreinger pr. minutt med ca. 6,35 mm radius i 12 timer ved omkring 25°C.
Ved slutten av denne tid ble suspen-sjonene med sporer og steroid ekstrahert
med kloroform og ekstrakten sentrifugert for å fjerne uoppløselig stoff og den vandige fase fra kloroformen. Den fremkomne sporefri klare ekstrakt inneholder det ønskede 11-alfa-hydroksyprogesteron og man utvant lett steroidet ved å drive av kloroformen under redusert trykk. Undersøkel-se av produktet sammenlignet med en
kjent, ekte prøve av 11-alfa-hydroksyprogesteron, viste at så å si 100 pst. av progesteronet var blitt omdannet til det ønskede 11-alfa-hydroksyderivat. Dette viser at den 12 timers tid som var brukt til omdannelse, var tilstrekkelig og antyder at ennu kortere tid muligens kan brukes til å fullføre introduksjonen av en hydroksyl-gruppe i progesteron med sporer av A. ochraceus i et medium som i det vesentlige er fritt for mycelium og næringssubstrat. I praksis kan man avpasse forholdet mellom tid og sporekonsentrasjon så den passer til spesielle arbeidsforhold.
Eksempel 2.
Dette eksempel er utført på samme måte som eksempel 1 med sporer stam-mende fra en 10—14 dager gammel kultur av Septomyxa affinis, og Reichsteins forbindelse S i en fosfatpuffer ved pH 7. Etter 24 timer ble den fremkomne A-l-forbindelse (forbindelse S med en 1—2 dobbeltbinding) utvunnet slik som beskrevet i eksempel 1. I dette eksempel undergår steroidmolekylet dehydrogenering, og det innføres en dobbeltbinding i molekylet.
For hurtig omdannelse ved sporenes hjelp bør forbindelsen være til stede med liten partikkelstørrelse. Dette oppnår man lett ved å oppløse steroidet f. eks. i et inert organisk oppløsningsmiddel som er blandbart med vann såsom lavere alkoholer (me-tanol, ethanol etc), vannoppløselige gly-koler, aceton eller lignende, hvorpå denne organiske oppløsning settes til den vandige sporesuspensjon. Når dette gjøres vil som ovenfor nevnt steroidet falle ut av opp-løsningen i den ønskede form som en fin suspensjon. Man får også en lett utvinning av det omdannede steroid med det ønskede høye utbytte ved å bruke organiske opp-løsningsmidler som lett oppløser steroidet, siden det ikke finnes noen vegetativ vekst (mycelium) eller noen mesk med gjenværende næringsstoffer og heller ingen komplekse biprodukter som er dannet under gjæringen. Videre er det av meget stor betydning at sporene etter bruken lett kan gjenvinnes og brukes påny. I dette øyemed bør steroidet i reaksjonsblandingen for-trinnsvis bringes i oppløsning med et opp-løsningsmiddel som er blandbart med vann, såsom propylenglykol, hvorpå blandingen sentrifugeres til gjenvinning av sporene, hvorpå det sporefri medium underkastes ekstraksjon for utvinning av steroidet som ovenfor angitt. De gjenvunne sporer, som helst bør vaskes med vann, kan brukes opp igjen hvis de oppbevares i et medium som mangler ett eller flere av de stoffer som får sporene til å spire. Fremgangsmåten med å bruke bare sporer, og oppdagelsen av at de kan brukes om igjen, representerer klare forbedringer i forhold til de gjær-ingsprosesser som er brukt tidligere.
Fremgangsmåten kan utføres med rent oksygen såvel som med luft under omdannelsen av steroidene. Lufttilførselen kan også skje hvis man ryster med de oksygen-holdige gasser under trykk. En liten mengde KCN (0,65 M) eller CO kan tilsettes sporemediet under omdannelsen, og også en liten mengde (f. eks. 0,5 pst.) glukose. I alminnelighet har man funnet at en liten mengde oksyderbar substant som glukose, eddiksyre, melkesyre og lignende vil øke utbyttet. Disse modifikasjoner kan også hjelpe til en hurtig eller fullstendig omdannelse av steroidene, men hvis man bruker glukose eller lignende er det viktig at mediet holdes fritt for assimilerbart nitrogen for å hindre spiring.
På en måte i likhet med den ovenfor beskrevne kan man få sporer frie for mycelium og næringssubstrat av forskjellige organismer, og disse kan brukes til gjennom-føring av i og for seg kjente hydreringer, dehydreringer, hydroksyleringer og sidekje-deavspaltninger av steroider. I så fall må de i det følgende beskrevne litteratursteder modifiseres overensstemmende med oppfinnelsen. Dette vil si at det vegetativt vok-sende materiale som er nevnt i litteratur - stedene erstattes med sporer av angjelden-de fungi, i det vesentlige fri for mycelium og næringssubstrat, idet dette siste erstattes med ett i hovedsaken næringsfritt medium.
Som eksempel anføres følgende mikrobiologiske modifikasjoner av steroider: 1. Reduksjon av progesteron til A4-preg-
nen-20|3-ol-3-on med Streptomyces lavendulae. Fried. J. et al., J. Am. Chem. Soc, 75: 5764 (1953). 2. Dehyrogenering av sekundære alkoholer.
a. A5-androsten-3|3,17f5-diol til testo-steron med Proactinomyces erythro-polis. Turfitt, G. E., Biochem. J. 0:79
(1946).
b. østradiol til østron med Streptomyces albus. Welsh, M. et al., Compt. rend soc. biol., 142:1QU (1948). 3. Hydroksylering i 1-stilling.
A4-androsten-3,17-dion til A4-andro-sten-la-ol-3,17-dion med Penicillium sp., Dodson, R. M. et al., J. Am. Chem. Soc. 79:3921 (1957). 4. Hydroksylering i 2-stilling.
A4-pregnen-17ci,21-diol-3,20-dion til
A4-pregnen-2|3,17a,21-triol-3,20-dion med Streptomyces sp., Herzog, H. L. et
al., J. Am. Chem. Soc, 79:3922 (1957). 5. Hydroksylering i 6-stilling. Propesteron til A4-pregnen-6|3-ol-3,20-dion med Streptomyces aureofaciens. Fried, J. et al., Recent Progr. Hormone Res. 11:151 (1955). Se også Dulaney, E. L. et al., Mycologia, 47:464 (1955);
Fried, J. et al., J. Am Chem. Soc. 74: 3962 (1952); Meister, P. D. et al., J. Am. Chem. Soc, 75:416 (1953) og Eppstein, S. H. et al., J. Am. Chem. Soc. 75:408
(1953) omfattende mikroorganismene
Aspergillus ochraceus, Aspergillus niger
og Rhizopus arrhizus.
6. Hydroksylering i 7 stilling. Progesteron til A4-pregnen-7a-ol-3,20-dion med Phycomyces blakesleanus. Fried et al., U.S. patent 2 753 290. Se også Meystre, C. et al., Heiv. Chim. Acta. 38:381 (1955) som brukte en art av Peziza til en lignende reaksjons-type på deoksycorticosteron. 7. Hydroksylering i stillingene 10, 11 eller 12. a. 19-nor-progesteron til lOg-hydrok-syl-19-norprogesteron med Rhizopus. nigricans. Pedersons, R. L. et al., J. Am. Chem. Soc, 75:1512 (1956). b. Progesteron til A4-pregnen-lla-ol-3,20-dion med Rhizopus arrhizus. Peterson, D. H. et al., J. Am. Chem., Soc. 74:1871 (1952). Se også Peterson, D. H. et al., J. Am. Chem. Soc 75:412 (1953). c. Reichsteins forbindelse S (A4-preg-nen-17a-21-diol-3,20-dion) til hydrocortison (A4-pregnen-ll|3,17a,21-triol-3,20-dion) med Cunninghamella bla-kesleeana. Hanson, F. R. et al., J. Am. Chem. Soc, 75:5369 (1953). Se også Shull, G. M. et al., J. Am. Chem. Soc. 77:763 (1955) og Thoma et al., U.S. patent 2 793 162 omfattende lignende re-aksjoner med Curvularia lunata, Tri-chothecium roseum og Coniothyrium helleborine. d. Progesteron til A4-pregnen-12|3-ol-3,20-dion og det beslektede 12(3,15|3-diol med Calnectria decora. Schubert, Al et al., Ber. 90:2576 (1957). 8. Hydroksylering i andre stillinger er beskrevet i Meister, P. D. et al., Abstrs., 123rd meeting Am. Chem. Soc. (1953), Fried et al., U.S. patent 2 753 290, Ca-merino, B. et al., Gazz. Chem. ital, 86: 1226 (1956), Meystre, C. et al.. Heiv. Chim. Acta 35:381 (1955), Perlman D. et al., J. Am. Chem. Soc. 74:2126 (1952), Thoma, R. W. et al., J. Am. Chem. Soc. 79:4818 (1957), Dulaney, E. L. et al.,
Appl. Microbiol. 3:372 (1955), Meystre, C. et al., Heiv. Chim. Acta, 37:1548
(1954), Mc Aleer, W. J. et al., Arch. Biochem. Biophys., 62:109 (1956).
9. Dehydrogenering.
Hydrocortison til A'-4-pregnadien-llj3, 17a,21-triol-3,20-dion med Streptomyces lavendulae. Fried et al., U.S. patent 2 793 164. Se også Mobile, A. et al., J. Am. Chem. Soc. 77:4184 (1955), Vischer, E. et al., Heiv. Chim. Acta, 35:835 og 38: 1502 (1955) som brukte henholdsvis Alternaria sp. og Didymella lycoperici. Se også Spero et al., J. A. C. S. 75:6213
(1956) angående bruk av Septomyxa
affinis, som i eksempel 2 ovenfor for å innføre en 1—2 dobbeltbinding.
10. Avbygning av sidekjede.
Progesteron til A'-4-androstadien-3,20-dion med Streptomyces lavendulae. Peterson, G. E. et al., J. Bact. 74:684
(1957) . Se også Vischer, E. et al., beret-ning om Fusarium solani og F. cauca-sicum i Experienta 9:371 (1953) som innfører en 1—2 dobbeltbinding med spaltning av sidekjeden. Se også Turfitt, G. E., Biochem. J. 42:376 (1948). Se også U.S. patentene nr. 2 602 769, 2 649 400, 2 649 401, 2 649 402, 2 695 260, 2 735 800, 2 753 290, 2 762 747, 2 768 928, 2 789 940, 2 802 775, 2 809 919, 2 812 285 og 2 830 937 som innbefatter mikroorganismer som danner sporer som kan brukes i et vegetativt vekst^næringsfritt medium iføl-ge de beskrevne fremgangsmåter. Som ovenfor anført utføres prosessene overensstemmende med de fremgangsmåter som er beskrevet under ovenstående hen-visninger med unntagelse av at (1) det vegetative vekstmateriale som er brukt i den refererte prosess erstattes med sporer av den samme organisme i det vesentlige frie for vegetativt vekststoff, og (2) at det vandige næringssubstrat eller den mesk som brukes i den omtalte prosess erstattes med et vandig medium, som i alt vesentlig er fritt for næringsstoffer. Den tid som kreves til fullstendig omdannelse med sporer (og som man i hvert tilfelle lett kan fastslå ved preliminærforsøk) blir i alminnelighet betydelig forkortet, og utbyttet vesentlig økt i forhold til de tidligere fremgangsmåter. Bortsett fra tidsgevinsten er utvinningen av det modifiserte stoff med godt utbytte (som igjen kan utføres på samme måte som i den refererte prosess) meget lettere fra den relativt rene reak-sjonsblanding ifølge oppfinnelsen enn fra de tidligere fermenteringsblandinger som inneholder vegetativt vekstoff, organiske næringsstoffer, biprodukter av disse osv. Rensning av den modifiserte forbindelse etter isoleringen er også meget lettere ved fremgangsmåten etter oppfinnelsen enn det er mulig fra de sterkt forurensede blan-dinger som ble brukt ved de tidligere fremgangsmåter. Av det ovenstående vil det fremgå at fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse med anvendelse av sporer kan brukes i ethvert tilfelle hvor man tidligere har brukt mycelium og mesk fremkommet ved fermentering av de organsimer som hittil er blitt anvendt. Bruk av et steroid med en 11-methylengruppe og sporer av Aspergillus (se Murray et al., U.S. patent 2 649 402) og Penicillium (se Murray et al., U.S. patent 2 649 400) og slike organismer som Septomyxa affinis som innfører 1—2 dobbeltbindinger, kan nevnes som eksempel og er blandt de foretrukne typer.
Man kan få i stand to omdannelser samtidig ved å bruke sporer av forskjellige
fungi. Forskjellen kan være så liten som bare forskjellige stammer av den samme fungus, eller så stor som en forskjell i klasse. Enn videre kan forskjellen være frembrakt ved mutasjon av en bestemt organisme.
Claims (1)
- Fremgangsmåte til mikrobiologisk hydrering, dehydrering, hydroksylering og avspaltning av sidekjeder av steroider, karakterisert ved at man fremkaller omdannelsen ved sporer som er skilt fra mycel og kulturvæske og derefter vasket, i ett i det vesentlige næringsfritt medium, hvor sporene ikke kan spire.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB5480670 | 1970-11-18 | ||
GB5870070 | 1970-12-10 | ||
GB964671 | 1971-04-16 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO133088B true NO133088B (no) | 1975-12-01 |
NO133088C NO133088C (no) | 1976-03-10 |
Family
ID=27255404
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO4243/71A NO133088C (no) | 1970-11-18 | 1971-11-17 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
JP (2) | JPS577172B1 (no) |
AT (1) | AT315709B (no) |
BE (1) | BE775476A (no) |
CH (1) | CH546543A (no) |
DE (1) | DE2156375C3 (no) |
DK (1) | DK133125C (no) |
FR (1) | FR2114696A5 (no) |
IE (1) | IE36798B1 (no) |
IL (1) | IL38123A (no) |
IT (1) | IT950514B (no) |
NL (1) | NL170916C (no) |
NO (1) | NO133088C (no) |
SE (1) | SE400457B (no) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1482216A (en) * | 1974-04-11 | 1977-08-10 | Monsanto Ltd | Cigarette filters |
US6583193B2 (en) * | 2000-03-17 | 2003-06-24 | Dow Global Technologies Inc. | Polyolefin foam useful for sound and thermal insulation |
JP7187582B2 (ja) * | 2019-01-25 | 2022-12-12 | 日本たばこ産業株式会社 | 喫煙物品用フィルター |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2972554A (en) * | 1955-05-23 | 1961-02-21 | Fiber Bond Corp | Pad and method of making same |
-
1971
- 1971-11-04 AT AT949971A patent/AT315709B/de not_active IP Right Cessation
- 1971-11-09 NL NLAANVRAGE7115391,A patent/NL170916C/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-11-10 SE SE7114391A patent/SE400457B/xx unknown
- 1971-11-11 IL IL38123A patent/IL38123A/en unknown
- 1971-11-12 IE IE1429/71A patent/IE36798B1/xx unknown
- 1971-11-12 DE DE2156375A patent/DE2156375C3/de not_active Expired
- 1971-11-12 CH CH1643371A patent/CH546543A/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-11-15 FR FR7140766A patent/FR2114696A5/fr not_active Expired
- 1971-11-17 DK DK565571A patent/DK133125C/da active
- 1971-11-17 NO NO4243/71A patent/NO133088C/no unknown
- 1971-11-17 BE BE775476A patent/BE775476A/xx unknown
- 1971-11-17 IT IT54140/71A patent/IT950514B/it active
- 1971-11-18 JP JP9270871A patent/JPS577172B1/ja active Pending
-
1977
- 1977-11-09 JP JP13453277A patent/JPS5411299A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK133125C (da) | 1976-08-30 |
DE2156375B2 (de) | 1980-05-29 |
IE36798L (en) | 1972-05-18 |
NL170916B (nl) | 1982-08-16 |
JPS5411299A (en) | 1979-01-27 |
NO133088C (no) | 1976-03-10 |
DE2156375C3 (de) | 1981-02-19 |
SE400457B (sv) | 1978-04-03 |
NL7115391A (no) | 1972-05-23 |
IE36798B1 (en) | 1977-03-02 |
CH546543A (de) | 1974-03-15 |
DK133125B (da) | 1976-03-29 |
IL38123A (en) | 1975-03-13 |
JPS577172B1 (no) | 1982-02-09 |
BE775476A (fr) | 1972-05-17 |
DE2156375A1 (de) | 1972-05-31 |
IT950514B (it) | 1973-06-20 |
IL38123A0 (en) | 1972-01-27 |
NL170916C (nl) | 1983-01-17 |
FR2114696A5 (en) | 1972-06-30 |
AT315709B (de) | 1974-06-10 |
AU3563971A (en) | 1973-05-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US2649402A (en) | Steroids | |
US2649400A (en) | Steroids | |
Vézina et al. | Transformation of Steroids by Spores of Microorganisms: I. Hydroxylation of Progesterone by Conidia of Aspergillus ochraceus | |
US5166055A (en) | Microbiological preparation of 9-alpha-hydroxy-17-keto steroids | |
GB2123833A (en) | Steroid 1,2-dehydrogenation using dried microbial cells | |
EP0127294B1 (en) | Steroid dehydrogenation | |
NO133088B (no) | ||
EP0425001B1 (en) | Natural delta-lactones and process of the production thereof | |
US2802775A (en) | 11 alpha-hydroxylation of steroids by aspergillus ochraceus | |
US4397947A (en) | Microbial process for 9α-hydroxylation of steroids | |
US2831798A (en) | Mgsox | |
US3031379A (en) | Conversion of steroids with mold spores | |
US2721828A (en) | Process for production of 17-ketosteroids | |
US3360439A (en) | Process for preparing 1-dehydro steroids | |
US3031382A (en) | Fermentation process using spore forming fungi | |
US3047470A (en) | Microbiological 11alpha-hydroxylation of 16alpha, 17alpha-epoxy pregnenes | |
US3340278A (en) | 5(10), 7-estradiene-3, 17-dione and the process for the production thereof | |
EP0217840B1 (de) | Verfahren zur herstellung von 1-methyl-1,4-androstadien-3,17-dion | |
US2823171A (en) | Synthesis of steroids of the 1-dehydrotestololactone series | |
US2762747A (en) | Preparation of 17-keto steroid by penicillium | |
US2863806A (en) | 17alpha hydroxylation of steroids by trichoderma viride | |
US3010878A (en) | Process for the production of eburicoic acid | |
US2902411A (en) | Use of second steroid to accelerate 1-dehydrogenation of substrate steroid | |
US3243355A (en) | Method of hydroxylating 19-nor-androstenedione | |
US3037914A (en) | Bacterial production of triamcinolone by bacterial formulations |