NL8105341A - Diagnostische test methode. - Google Patents

Description

i .

OA/A536-113 Hermans Akzo N.V. te Arnhem Diagnostische test methode.

De uitvinding heeft betrekking op een methode om kwalitatief of semi-kwantitatief de aanwezigheid van een antigeen of antilichaam in een testvloeistof vast te stellen en tevens op een testkit, die het 5 uitvoeren van een dergelijke methode mogelijk maakt.

De diagnose van pathologische toestanden bij mensen of dieren wordt veelvuldig gesteld door gebruik te maken van immunochemische reacties.

10 Xn het algemeen wordt de aanwezigheid van een antigeen of antilichaam in een lichaamsvloeistof immunologisch vastgesteld door het in aanraking brengen van het overeenkomstige antilichaam of antigeen met de betreffende te testen lichaams-15 vloeistof, gewoonlijk bloedserum of urine.

De aanwezigheid van het aan te tonen antigeen of antilichaam zou dan kunnen worden opgemerkt, omdat er een slechter oplosbaar antigeen-antilichaam complex ontstaat.

20 Dergelijke complexen ontstaan echter langzaam en eerst bij relatief hoge concentraties aan antigeen en antilichaam. Het is daarom ter verhoging van de gevoeligheid noodzakelijk om gebruik te maken van dragers om het onderkennen van dit soort 25 complexen en daarmee ook van de afzonderlijke anti-genen en antilichamen mogelijk te maken.

Het koppelen van antigenen en antilichamen aan ^ een drager is een bekende techniek, die in alle 1 30 immunologische handboeken beschreven wordt. Veel I toegepaste dragerstoffen zijn o.m.: erythrocyten, I baeteriele cellen, bentoniet, latex deeltjes en 8105341 - 2 - cellulose. In de onderhavige diagnostische test methode wordt gebruik gemaakt van erythrocyten als dragers.

De aanwezigheid van bijvoorbeeld een antigeen 5 in een test-monster of test-vloeistof kan nu aange-toond worden door het test-monster in kontakt te brengem met aan erythrocyten gekoppelde anti-lichamen van dit antigeen. Wanneer het antigeen wel aanwezig is in het test-monster zal een immuno-10 chemische reaktie plaatsvinden tussen het betreffende antigeen en het aan erythrocyten gekoppelde anti— lichaam, resulterende in een aan erythrocyten gekoppeld antigeen-antilichaam complex en een aan elkaar koppelen (agglutineren) van dergelijke erythrocyten deeltjes; 15 bij uitzakken in een buis met ronde bodem geven deze geagglutineerde erythrocyten een effen lichtbruin patroon.

Wanneer het antigeen niet in de test-vloeistof aanwezig is kan er uiteraard geen immunochemische 20 reaktie plaatsvinden en dus ook geen agglutinatie.

Het aan erythrocyten gebonden antilichaam zal na korte tijd uitzakken en in een buis met ronde bodem een karakteristiek ring patroon opleveren.

In deze test opzet betekent het verkrijgen van 25 een karakteristiek ring patroon in het testbuisje derhalve dat het veronderstelde antigeen niet in de test-vloeistof aanwezig is; derhalve dat het test-resultaat dus negatief is.

Men kan ook op een andere wijze het betreffende 30 antigeen aantonen, namelijk door het test-monster in kontakt te brengen met 2 reagentia: (1) het antilichaam tegen het betreffende antigeen en (2) het aan erythrocyten.gekoppelde antigeen zelf.

Indien het betreffende antigeen niet in de test- | 35 vloeistof aanwezig is, zal er een immunologische 1 reaktie plaatsvinden tussen beide toegevoegde 8105341 - 3 - reagentia, resulterende in een agglutinatie van een aan erythrocyten gebonden antigeen-antilichaam complex, dat bij uitzakken geen karakteristiek ring patroon oplevert.

5 Wanneer het betreffende antigeen wel in de test-vloeistof aanwezig is, zal dit antigeen onmiddellijk reageren met het antilichaam, leidende tot een (oplosbaar) antigeen-antilichaam complex, terwijl het niet gebruikte aan erythrocyten gekop-10 pelde antigeen na korte tijd zal uitzakken en in een buis met ronde bodem aanleiding geeft tot het ontstaan van een karakteristiek ring patroon.

In deze test-opzet betekent het verkrijgen van een karakteristiek ring patroon derhalve dat het 15 test-resultaat positief is.

Ofschoon de interpretatie van het test-resultaat derhalve afhankelijk is van de gekozen test-opzet, vormt het karakteristiek ring patroon van het aan erythrocyten gebonden antigeen of anti-20 lichaam telkens de grondslag waarop de test-methodiek gebaseerd is.

Tot dusver werden de hierboven geschetste testen, uitgevoerd in conventionele rondbodem-testbuisjes. In dergelijke testbuisjes manifesteert 25 zich het karakteristiek ring patroon van niet geagglutineerde erythrocyten als een dikke of minder dikke ring.

Verrassenderwijze werd nu gevonden dat het 30 uitvoeren van deze immunochemische reakties in een testbuisje met een bodem in de vorm van een omge-keerd prisma of afgeknot prisma en wel zodanig dat de onderkant van het buisje een streep vormt ^ met een lengte die tenminste gelljk is aan de A 35 kwart afstand tussen twee tegenoverliggende wanden 1 c.q. aan de kwart diameter van het testbuisje, Ϊ 8105341 -¾ - 4 - (a) de afleesbaarheid van het test-resultaat bevordert, zodat er significant minder onjuiste waarnemingen gedaan worden en (b) de gevoeligheid van de test met een factor 5 2 a 3 verhoogt; hetgeen betekent, dat het antigeen of antilichaam nu in lagere concen-traties aangetoond kan worden, dan met een conventioneel rondbodem-buisje mogelijk is.

10 De toepassing van het testbuisje volgens de uitvinding kan bovendien het optische voordeel hebben, dat de immunologische test zodanig is op te zetten, dat een negatief resultaat zich manifesteert als een karakteristiek neerslag in 15 de vorm van een minus-teken*

De testbuisjes die in het kader van de onder-havige uitvinding worden toegepast, zijn van transparant materiaal gemaakt, bijvoorbeeld van 20 glas of een transparante kunststof. De vorm van de testbuisjes, behalve uiteraard de vorm van de bodem, is niet essentieel; de buisjes kunnen derhalve in dwarsdoorsnede vierkant, rechthoekig, cirkelvormig of ovaal zijn.

25 Zoals reeds gesteld de bodem van de testbuisjes moet de vorm hebben van een omgekeerd prisma of afgeknot prisma, waardoor de onderkant van de buis zich als het ware tot een streep vernauwt. De wanden van het prisma mogen voorts een weinig naar buiten 30 gericht gebogen zijn.

Het bij een immunochemische bepaling ontstane karakteristieke neerslag, hetgeen afhankelijk van de gekozen test-opzet hetzij een positief resultaat 35 hetzij een negatief resultaat kan weergeven, vormt zich nu in het streepvormige uiteinde van het test- 8105341 - 5 - buisje. Aangenomen moet worden dat dit neerslag in de vorm van een minus-teken vooral voor leken, die niet al te vaak dergelijke testen uitvoeren, een karakteristieker uitzak patroon oplevert dan 5 in de rondbodem buisjes verkregen wordt, waar-door de betere afleesbaarheid van de test verklaard zou kunnen worden.

10 De testbuisjes volgens de uitvinding die de voorkeur verdienen zijn cylindervormig met een diameter bij voorkeur tussen 0,5 en 1,5 cm, met een bodem in de vorm van een omgekeerd afgeknot prisma, waarbij de onderkant van de bodem een streep vormt 15 met een lengte die tenminste gelijk is aan de kwart diameter van het testbuisje en bij voorkeur een lengte heeft van 50 tot 85% van de diameter van het testbuisje.

De diepte van het omgekeerde prisma (c.q.

20 afgeknot prisma) is niet direct kritisch; de voorkeur wordt echter gegeven aan een "diepte", die ongeveer overeenkomt met 25-75% van de diameter van de testbuis en meer de voorkeur geniet een "diepte" van 40% - 50% van de diameter van het testbuisje.

25 De test-methode volgens de uitvinding kan

voor allerlei diagnostische test-doeleinden gebruikt worden, bijvoorbeeld voor het kwalitatief aantonen van pathologische antilichamen in bloed of urine, maar ook geschikt voor het aantonen van HCG

30 in urine, waardoor de test-methode bij uitstek geschikt is als zwangerschapstest.

8105341

Claims (4)

1. Methode om kwalitatief of semi-kwantitatief de aanwezigheid vast te stellen van een antigeen of antilichaam in een test-vloeistof door deze test-vloeistof in kontakt te brengen, hetzij met de aan een erythrocyten gekoppelde reaktie-partner van het aan te tonen antigeen of antilichaam, hetzij met een mengsel van het aan erythrocyten gekoppeld antigeen of antilichaam zelf en de niet aan een drager gekoppelde reaktie-partner van het aan te tonen antigeen of antilichaam, en vervolgens aan de hand van het in het testbuisje gevormde karakteristieke uitzak patroon van de erythrocyten de al of niet aanwezigheid van het antigeen of antilichaam in de test-vloeistof vast te stellen, met het kenmerk, dat de test wordt uitgevoerd in een testbuisje met een bodem in de vorm van een omgekeerd prisma of afgeknot prisma en wel zodanig dat de onderkant van het testbuisje een streep vormt met een lengte die tenminste gelijk is aan de kwart afstand tussen twee tegen-overliggende wanden c.g. aan de kwart diameter van ---- het testbuisje.

2. Methode volgens conclusie 1 om de aan- of afwezigheid van het eiwit HCG in urine vast te stellen, door een urinemonster in het in conclusie 1 beschreven testbuisje in kontakt te brengen met aan erythrocyten gekoppeld anti-HCG en na verloop van 1 a 2 uur bij afwezigheid van HCG in het urine-monster een karakteristiek uitzak patroon in de vorm van een minus-teken waar te nemen. \ 8105341 . V------- - 7 -

3. Methode volgens conclusie 1 met het kenmerk, dat de bodem van het testbuisje de vorm heeft van een omgekeerd afgeknot prisma met een diepte van 25-75% en bij voorkeur 40-50% van de diameter c.q. de afstand tussen 2 tegenoverliggende wanden van het testbuisje.

4. Testkit geschikt voor het uitvoeren van de werkwijze volgens een der voorgaande conclusies, die tenminste bevat: (a) een testbuisje met een bodem in de vorm van een omgekeerd prisma of afgeknot prisma en wel zodanig dat de onderkant van het testbuisje een streep of lijn vormt met een lengte, die tenminste gelijk is aan de kwart afstand tussen 2 tegenoverliggende wanden c.q. aan de kwart diameter van het testbuisje, en (b) de voor het uitvoeren van de immunologische bepaling noodzakelijke immunologische reagentia. 8105341