NL8102628A - PROCESS FOR PREPARING A POLYSACCHARIDE FROM BACTERIA. - Google Patents
PROCESS FOR PREPARING A POLYSACCHARIDE FROM BACTERIA. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8102628A NL8102628A NL8102628A NL8102628A NL8102628A NL 8102628 A NL8102628 A NL 8102628A NL 8102628 A NL8102628 A NL 8102628A NL 8102628 A NL8102628 A NL 8102628A NL 8102628 A NL8102628 A NL 8102628A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- polysaccharide
- preparation
- cholesterol
- diet
- prep
- Prior art date
Links
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims description 40
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims description 40
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims description 38
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 42
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 36
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 20
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 17
- 241000194105 Paenibacillus polymyxa Species 0.000 claims description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 13
- 230000000923 atherogenic effect Effects 0.000 claims description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- -1 salt polysaccharide Chemical class 0.000 claims description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 2
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims 1
- FCZCIXQGZOUIDN-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-diethoxyphosphinothioyloxyacetate Chemical compound CCOC(=O)COP(=S)(OCC)OCC FCZCIXQGZOUIDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 53
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 30
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 30
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 27
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 17
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 16
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 8
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 3
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 235000021195 test diet Nutrition 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 2
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 238000005115 demineralization Methods 0.000 description 2
- 230000002328 demineralizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 2
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 2
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 206010014476 Elevated cholesterol Diseases 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 235000015241 bacon Nutrition 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 235000020940 control diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
. « £ ; - 1 -. £; - 1 -
Werkwijze voor de bereiding van een polysaccharide uit bacteriën.Process for the preparation of a polysaccharide from bacteria.
Deze uitvinding betreft een werkwijze voor het bereiden van een polysaccharide of een zout daarvan dat de eigenschap heeft verhoogd cholesterol-gehalte van bloedserum of de lever te verlagen en ook de atherogene index te verminderen.This invention relates to a method of preparing a polysaccharide or a salt thereof which has the property of lowering elevated cholesterol levels in blood serum or liver and also reducing the atherogenic index.
5 Het is bekend dat het cholesterol-gehalte in het bloed sterk beïnvloed wordt door aard en hoeveelheid van het voedsel. Cholesteremie wordt geacht een van de gevaarlijkste factoren te zijn die tot arteriosclerose (waaronder hart-infarct) leiden. Polysaccharide, een van de belangrijkste bestanddelen 10 van het voedsel, is door de onderzoekers wat veronachtzaamd, met uitzondering van de verteerbare polysacchariden zoals zetmeel.5 It is known that the cholesterol level in the blood is strongly influenced by the nature and amount of the food. Cholesteremia is believed to be one of the most dangerous factors leading to arteriosclerosis (including heart attack). Polysaccharide, one of the main constituents of the food, has been somewhat neglected by the researchers, with the exception of the digestible polysaccharides such as starch.
Met behulp van rattenproeven is gevonden dat het polysaccharide, afgescheiden door Bacillus polymyxa No. 271 de eigenschap heeft het cholesterol-gehalte van bloedserum en 15 lever te verlagen en ook de atherogene index te verminderen, zodat het nuttig is voor het genezen en voorkomen van arteriosclerose of hypercholesterolemie.Using rat tests, it has been found that the polysaccharide secreted by Bacillus polymyxa No. 271 has the property of lowering blood serum and liver cholesterol levels and also reducing the atherogenic index so that it is useful for curing and preventing arteriosclerosis or hypercholesterolaemia.
Gevonden werd dat het polysaccharide uit Bacillus polymyxa met een gemiddeld molecuulgewicht boven 20 200.000 (hierna afgekort tot "pmps") de verrassende eigenschap heeft verhoogde cholesterol-gehalten van bloedserum en lever te verlagen en ook het gehalte aan cholesterol in lipoproteïne van hoge dichtheid (hierna afgekort tot "HDL") te verhogen, en dat staat bekend als een factor ter voorkoming van arteriosclerose.It was found that the polysaccharide from Bacillus polymyxa with an average molecular weight above 20,000,000 (hereinafter abbreviated to "pmps") has the surprising property of lowering elevated blood serum and liver cholesterol levels and also the cholesterol content in high density lipoprotein (hereinafter referred to as abbreviated to "HDL"), which is known as a factor in preventing arteriosclerosis.
25 Verhoging van het gehalte aan HDL-choleste- rol betekent een verlaging van de atherogene index die gedefinieerd wordt als: serum-cholesterol - HDL-cholesterol HDL-cholesterol 3025 Increasing the level of HDL cholesterol means a decrease in the atherogenic index which is defined as: serum cholesterol - HDL cholesterol HDL cholesterol 30
Dit was een niet te voorzien effect van pmps.This was an unforeseeable effect of pmps.
Het gemiddelde molecuulgewicht werd bij het onderzoek dat tot deze uitvinding leidde bepaald volgens de me- «102 6 2 8 __ t 1 - 2 - *» » thode van Ninomiya et al beschreven in het Journal of Agricultural Chemical Society of Japan _42, no. 7 (1968) 431-434.The average molecular weight in the study which led to this invention was determined by the method of Ninomiya et al., Described in the Journal of Agricultural Chemical Society of Japan, 42, no. 7 (1968) 431-434.
Het polysaccharide volgens de uitvinding kan verkregen worden door Bacillus polymyxa No. 271 (FERM-P No.The polysaccharide of the invention can be obtained by Bacillus polymyxa No. 271 (FERM-P No.
5 1824) aëroob te kweken in een waterig medium dat 3-5 % van een ge schikte koolstofbron (zoals glucose, saccharose, lactose, melasse of andere suikers) en een stikstof-bron zoals pepton, maisweek-water, gistextract of ureum) en zouten zoals magnesiumsulfaat bevat. Het opgehoopte polysaccharide (dat de oplossing viskeus 10 maakt) wordt afgescheiden en gezuiverd door neerslaan met alko-hol en ultrafiltratie. Daarbij moet men gewoonlijk langer dan 20 uur incuberen om een polysaccharide met een voldoend hoog gemiddeld molecuulgewicht te krijgen, Incubeert men slechts 16 uur dan krijgt men een polysaccharide met een molecuulgewicht van 15 190.000 of lager. Geschikte omstandigheden bij dit kweken zijn in de hierna komende voorbeelden nader aangegeven, De gebruikte bacteriestam, Bacillus polymyxa No. 271, werd gedeponeerd bij het Fermentatie Research Instituut, Afdeling voor Industriële Wetenschap en Technologie van het Ministerie voor Internationale 20 Handel en Industrie, en kreeg daar het nummer FEEM-P No. 1824; deze stam is voor het publiek beschikbaar.5 1824) to be grown aerobically in an aqueous medium containing 3-5% of a suitable carbon source (such as glucose, sucrose, lactose, molasses or other sugars) and a nitrogen source such as peptone, corn soak water, yeast extract or urea) and salts such as magnesium sulfate. The accumulated polysaccharide (which makes the solution viscous 10) is separated and purified by alcohol precipitation and ultrafiltration. In addition, one usually has to incubate longer than 20 hours in order to obtain a polysaccharide with a sufficiently high average molecular weight. If one incubates for only 16 hours, one obtains a polysaccharide with a molecular weight of 190,000 or less. Suitable conditions in this culture are further specified in the examples below. The bacterial strain used, Bacillus polymyxa No. 271, was deposited with the Fermentation Research Institute, Department of Industrial Science and Technology of the Ministry of International Trade and Industry, and was given the number FEEM-P No. 1824; this strain is available to the public.
Voor het effect van het verlagen van het cholesterol-gehalte van bloedserum en de levert is het van wezenlijk belang dat het gemiddelde molecuulgewicht boven 200.000 25 ligt. Uit een preparaat met een gemiddeld molecuulgewicht beneden 200.000 kan men de gewenste hoger moleculaire fractie afschéiden door aan een waterige oplossing alkohol toe te voegen tot een lage alkohol-concentratie. De aanwezigheid van zouten zoals NaCl en KC1 kunnen dit neerslaan ondersteunen. Polysacchariden met te 30 hoog gemiddeld molecuulgewicht kunnen met zuur gehydrolyseerd worden tot polysacchariden met een lager en wat handzamer molecuulgewicht. Als men hydrolyseert is het gewenst dat te doen voordat men de bacteriecellen uit de kweekvloeistof verwijdert, daar het filtreren dan gemakkelijker gaat.For the effect of lowering blood serum cholesterol and liver levels, it is essential that the average molecular weight be above 200,000. The desired higher molecular fraction can be separated from a preparation with an average molecular weight below 200,000 by adding alcohol to an aqueous solution to a low alcohol concentration. The presence of salts such as NaCl and KCl can support this precipitation. Polysaccharides with too high an average molecular weight can be hydrolyzed with acid to polysaccharides with a lower and somewhat more convenient molecular weight. When hydrolysing, it is desirable to do this before removing the bacterial cells from the broth, since filtration is easier.
35 Het polysaccharide dat zich in de kweekvloei stof ophoopt en dit hoog viskeus maakt, blijkt opgebouwd te zijn ................——- Ö1 0 2 6 2 8 ........... * 4 - 3 - uit D-glucose, D-mannose, D-galactose en D-glucuronzuur in een molverhouding van 3:3:1:2. Het is dus een polymeer zuur en wordt veelal in de vorm van een of ander zout verkregen. Uit deze samenstelling kan men afleiden dat er op een gewicht van 1500 eenheden 5 twee kationen gebonden kunnen worden, zodat de mate van zoutvorming = Σ ( waarin Mi het gehalte aan kation in g/kg en Ni het equivalentgewicht van het kation is.35 The polysaccharide that accumulates in the culture liquid and makes it highly viscous, appears to have been built up ................———1 0 2 6 2 8 ..... ...... * 4 - 3 - from D-glucose, D-mannose, D-galactose and D-glucuronic acid in a molar ratio of 3: 3: 1: 2. It is thus a polymeric acid and is usually obtained in the form of some salt. It can be deduced from this composition that two cations can be bound at a weight of 1500 units, so that the degree of salt formation = Σ (where Mi is the content of cation in g / kg and Ni is the equivalent weight of the cation.
In de meeste preparaten ligt de mate van zoutvorming boven 0,2.In most preparations, the degree of salt formation is above 0.2.
10 Deze zouten van het pmps zijn even goed werkzaam als het polysaccharide als zodanig. Ze ontstaan door Bacillus polymyxa No. 271 te kweken in een medium dat naast voldoende koolstof-bron en stikstof-bron ook zouten bevat. De hoeveelheid kation in het kweekmedium bedraagt bij voorkeur tenminste 15 0,005 M, en de kationen zijn bij voorkeur die der alkali- en aardalkali-metalen. De pH moet dan boven 4,5 liggen, bij voorkeur tussen 6 en 7.These salts of the pmps are as effective as the polysaccharide as such. They originate from Bacillus polymyxa No. 271 in a medium that contains salts in addition to sufficient carbon source and nitrogen source. The amount of cation in the culture medium is preferably at least 0.005 M, and the cations are preferably those of the alkali and alkaline earth metals. The pH should then be above 4.5, preferably between 6 and 7.
Indien het verkregen preparaat niet de gewenste kationen bevat kan men dit op geëigende wijze, bijvoorbeeld 20 rost behulp van een ionenwisselaar of door elektrolyse, van die kationai bevrijden en er dan door toevoegen van geschikte zouten de gewenste kationen in invoeren. Dit gebeurt bij voorkeur voordat men het polysaccharide door neerslaan met alkohol en/of ultrafiltratie gaat afscheiden en zuiveren.If the obtained preparation does not contain the desired cations, it can be freed from that cation in an appropriate manner, for example by means of an ion exchanger or by electrolysis, and then the desired cations are introduced into it by adding suitable salts. This preferably takes place before the polysaccharide is separated and purified by alcohol precipitation and / or ultrafiltration.
25 Het volgens de uitvinding verkregen poly saccharide en de zouten daarvan hebben de opmerkelijke eigenschap het cholesterol-gehalte van bloedserum en de lever te verlagen; dit bleek bij proeven met ratten die gevoerd werden met een dieet dat 5 % pmps bevatte.The poly saccharide and the salts thereof obtained according to the invention have the remarkable property of lowering the cholesterol content of blood serum and liver; this was found in experiments on rats fed a diet containing 5% pmps.
30 Het pmps volgens de uitvinding of enig zout daarvan kan als poeder of als waterige oplossing of suspensie ingenomen worden. Men kan het als zodanig innemen, maar ook na opname of verwerken in een of ander voedsel (bijvoorbeeld in een dieet). Indien het in de vorm van een zout gaat zijn de kationen daarin 35 die der alkalimetalen, aardalkalimetalen, overgangsmetalen, mangaan, aluminium, zink, koper en/of ammonium, en in het algemeen 8102628 '=·· - 4 - ψ *· met een mate van zoutvorming boven 0,2.The pmps according to the invention or any salt thereof can be taken as a powder or as an aqueous solution or suspension. It can be taken as such, but also after ingestion or processed in some food (for example in a diet). If it is in the form of a salt, the cations therein are those of the alkali metals, alkaline earth metals, transition metals, manganese, aluminum, zinc, copper and / or ammonium, and generally 8102628 '= ·· - 4 - ψ * · with a degree of salt formation above 0.2.
De uitvinding wordt nu nader toegelicht door de volgende, niet beperkende voorbeelden.The invention is now further illustrated by the following non-limiting examples.
Voorbeeld IExample I
5 Van een vloeistof die met Bacillus polymyxa5 From a liquid containing Bacillus polymyxa
No. 271 (FERM-P No. 1824) beent en 24 uur gexncubeerd was werd 600 ml toegevoegd aan 12 liter kweekvloeistof die 4 % glucose,No. 271 (FERM-P No. 1824) was bone and incubated for 24 hours, 600 ml was added to 12 liters of culture broth containing 4% glucose,
0,1 % pepton, 2 % maisweekwater, 0,2 % magnesiumsulfaat en 6 dpm mangaansulfaat bevatte en een pH van 7,0 had. Het incube-10 ren gebeurde bij 28°C onder beluchting met 0,8 liter lucht per liter vloeistof per minuut. Na 72 uur was de viscositeit van de vloeistof 9500 cP. Het geheel werd met 5 vol.dln heet water verdund en tot 70-80°C opgewarmd. De bacteriecellen werden verwijderd door de verdunde vloeistof te leiden door filtreerpapier 15 waarop eerst een laag diatomeeënaarde afgezet was. Van het fil-traat werd 40 liter door een ultrafilter getrokken (UF-SWM-85V-1, membraan-moduul Abcor SWM-85M van de firma Bioengineering Co. Ltd.) onder voortdurend aanvullen van de vloeistof tot constant volume en een filtraat van 200 liter. Dit filtraat werd geconcentreerd 20 en gevriesdroogd, wat 50 g poedervormig polysaccharide gaf. Voorbeeld II0.1% peptone, 2% corn soak water, 0.2% magnesium sulfate and 6 ppm manganese sulfate and had a pH of 7.0. Incubation was done at 28 ° C under aeration with 0.8 liters of air per liter of liquid per minute. After 72 hours, the viscosity of the liquid was 9500 cP. The whole was diluted with 5 parts by volume of hot water and heated to 70-80 ° C. The bacterial cells were removed by passing the diluted liquid through filter paper 15 on which a layer of diatomaceous earth was first deposited. 40 liters of the filtrate were drawn through an ultra-filter (UF-SWM-85V-1, membrane module Abcor SWM-85M from Bioengineering Co. Ltd.) with continuous replenishment of the liquid to constant volume and a filtrate of 200 liters. This filtrate was concentrated and lyophilized to give 50 g of powdered polysaccharide. Example II
Van hetin voorbeeld I verkregen filtraat werden vier monsters van 40 liter met zoutzuur aangezuurd tot pH = 1,5, waarna ze verschillende tijden op 80°C gehouden werden, 25 namelijk preparaat no. 2 5 minuten, preparaat no. 3 15 minuten, preparaat no. 4, 45 minuten en preparaat no. 5 2 uren. Daarna werden de vloeistoffen met NaOH geneutraliseerd, en daarna onderging ieder monster een ultrafiltratie net als in voorbeeld I.From the filtrate obtained in Example I, four 40 liter samples were acidified with hydrochloric acid to pH = 1.5, after which they were kept at 80 ° C for several times, namely preparation no. 2 5 minutes, preparation no. 3 15 minutes, preparation no. 4, 45 minutes and preparation no. 5 for 2 hours. The liquids were then neutralized with NaOH, and then each sample was ultrafiltrated as in Example I.
Dit gaf 48 g preparaat no. 2, 46 g preparaat no. 3, 45 g prepa-30 raat no. 4 en 40 g preparaat no. 5.This gave 48 g of preparation no. 2, 46 g of preparation no. 3, 45 g of preparation no. 4 and 40 g preparation no. 5.
De molecuulgewichten en eiwit- en asgehalten van de verkregen preparaten staan in tabel A.The molecular weights, protein and ash contents of the obtained preparations are shown in Table A.
35 8102628 - 5 "35 8102628 - 5 "
F FF F
Tabel ATable A
Preparaat Gemidd. mole- Eiwitgehalte Asgehalte no. cuulgewicht (%) (%) 1 93 x 104 1,16 7,6 5 2 54 x 104 1,02 7,5 3 36 x 104 0,87 7,2 4 25 x 104 0,89 8,1 5 16 x 104 0,78 8,2Preparation Average. mole Protein content Ash content no. molecular weight (%) (%) 1 93 x 104 1.16 7.6 5 2 54 x 104 1.02 7.5 3 36 x 104 0.87 7.2 4 25 x 104 0, 89 8.1 5 16 x 104 0.78 8.2
Voorbeeld IIIExample III
10 Overeenkomstig voorbeeld I werd Bacillus polymyxa gekweekt op een medium dat 4 % "rest" (verkregen als bijprodukt van de bereiding van kristallijn glucose), 0,1 % pepton, 2 % maisweekwater, 0,2 % magnesiumsulfaat en 6 dpm man-gaansulfaat bevatte. Van de gefiltreerde vloeistof werd 40 liter 15 verdund met 2 vol.dln ethanol. Het aldus ontstane vezelige neerslag werd door centrifugeren verzameld, ontwaterd en gedroogd, en daarna weer in 15 liter water opgenomen. Nadat deze oplossing tot 70-80°C opgewarmd en gefiltreerd was werd 25 liter ethanol toegevoegd. Het aldus verkregen neerslag werd weer verzameld, 20 onder vacuum bij 50°C gedroogd en tot poeder vermalen; opbrengst 50 g (preparaat no. 6).In accordance with Example I, Bacillus polymyxa was grown on a medium containing 4% "residue" (obtained as a by-product of the preparation of crystalline glucose), 0.1% peptone, 2% corn soak water, 0.2% magnesium sulfate and 6 ppm man-sulfate contained. 40 liters of the filtered liquid were diluted with 2 parts by volume of ethanol. The fibrous precipitate thus formed was collected by centrifugation, dehydrated and dried, and then taken up again in 15 liters of water. After this solution had warmed to 70-80 ° C and filtered, 25 liters of ethanol was added. The precipitate thus obtained was collected again, dried under vacuum at 50 ° C and ground to powder; yield 50 g (preparation no. 6).
Voorbeeld IVExample IV
Van de gefiltreerde vloeistof van voorbeeld niwerd 40 liter ultragefiltreerd (UF-SWM-85V-1, membraan-moduul 25 Abcor SWM-85V van de firma Bioengineering Go., Ltd.) en vervolgens gezuiverd door filtreren met constant'volume tot een filtreer-verhouding van 5:1. Het filtraat werd geconcentreerd en gevriesdroogd dat 50 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 7). Voorbeeld V40 liters of the filtered liquid of example was ultra-filtered (UF-SWM-85V-1, membrane module 25 Abcor SWM-85V from Bioengineering Go., Ltd.) and then purified by constant volume filtration to a filtering state. ratio of 5: 1. The filtrate was concentrated and lyophilized to give 50 g of powdered polysaccharide (formulation No. 7). Example V
30 Van het met Bacillus polymyxa beënte en 24 uur voorgekweekte medium werd 600 ml toegevoegd aan 12 liter vloeistof die 5 % glucose, 0,3 % gistextract, 0,05 % ureum, 0,2 % magnesiumsulfaat en 6 dpm mangaansulfaat bevatte en een pH van 7,0 had. Het kweken gebeurde bij 28°C onder beluchting met 0,8 liter per liter 35 vloeistof per minuut. Na 120 uur werd overeenkomstig voorbeeld I 40 liter filtraat verkregen en deze werd ook overeenkomstig voor- 8102628 * w - 6 - beeld I opgewërkt, behalve dat nu voor het neerslaan methanol gebruikt werd. Dit gaf 40 g poedervormig polysaccharide (preparaat no. 8).600 ml of the medium pre-cultured with Bacillus polymyxa and pre-cultured for 24 hours was added to 12 liters of liquid containing 5% glucose, 0.3% yeast extract, 0.05% urea, 0.2% magnesium sulfate and 6 ppm manganese sulfate and a pH of 7.0. Cultivation was done at 28 ° C under aeration at 0.8 liters per liter of liquid per minute. After 120 hours, 40 liters of filtrate were obtained according to Example I and this was also generated according to Example 8102628 * w - 6, except that now methanol was used for the precipitation. This gave 40 g of powdered polysaccharide (formulation no. 8).
De analytische gegevens van de laatste drie 5 preparaten staan in tabel B.The analytical data of the last three preparations are shown in Table B.
Tabel BTable B
Preparaat Gemidd.mole- Eiwitgehalte Asgehalte no. cuulgewicht (%) (%) 6 104 x 104 2,0 8,1 10 7 100 x 104 1,4 6,2 8 136 x 104 1,9 7,5Preparation Average mole Protein content Ash content no. Molecular weight (%) (%) 6 104 x 104 2.0 8.1 10 7 100 x 104 1.4 6.2 8 136 x 104 1.9 7.5
Voorbeeld VIExample VI
Van het met Bacillus polymyxa beënte en 24 uur voorgekweekte medium werd 600 ml toegevoegd aan 12 liter 15 vloeistof die 4 % glucose, 0,5 % pepton, 0,5 % IG^PO^, 0,1 %600 ml of the medium inoculated with Bacillus polymyxa and pre-cultured for 24 hours was added to 12 liters of liquid containing 4% glucose, 0.5% peptone, 0.5% IG ^ PO ^, 0.1%
MgSO^^^O, 6 dpm MnSO^.S^O en 0,1 % silicon tegen het schuim bevatte, en waarvan de pH 7,0 was. Het kweken gebeurde bij 28°C onder beluchting met 0,8 liter per liter vloeistof per minuut.MgSO 2 3 0 6 ppm MnSO 2 SO 2 and 0.1% silicone against the foam, the pH of which was 7.0. Cultivation was done at 28 ° C under aeration at 0.8 liters per liter of liquid per minute.
Na 96 uur was de viscositeit van de vloeistof 14.000 cP. Deze 20 werd met 5 dln heet water verdund en overeenkomstig voorbeeld III opgewerkt, wat 53 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 9).After 96 hours, the viscosity of the liquid was 14,000 cP. This was diluted with 5 parts of hot water and worked up according to example III to give 53 g of powdered polysaccharide (preparation no. 9).
Voorbeeld VIIExample VII
Aan 40 liter filtraat van voorbeeld V werd 25 40 ml verzadigde NaCl-oplossing toegevoegd, en vervolgens 80 liter ethanol. Daarna werd overeenkomstig voorbeeld III opgewerkt wat 55 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 10). Voorbeeld VIII .40 ml of saturated NaCl solution was added to 40 liters of the filtrate of Example V, then 80 liters of ethanol. Thereafter, according to example III, it was worked up to give 55 g of powdered polysaccharide (preparation no. 10). Example VIII.
Van het eerste m voorbeeld VI verkregen filtraat werd 40 liter 30 onder verdunning met niet meer dan eenzelfde volume water gefiltreerd, en hieraan werden 300 ml kationenwisselaar Amberlite 200 (H-vorm) en 600 ml anionenwisselaar Amberlite IRA-411 (OH-vorm) toegevoegd. Na 3 uur roeren op 40°C werd de aldus behandelde vloeistof verder gezuiverd door ultrafiltratie (UF-SDIM-85V-1, mem-35 braan-moduul Abcor SWM-85V) tot een verdunningsverhouding van 5:1. Dit filtraat werd geconcentreerd en gevriesdroogd, wat 50 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 11).40 liters of filtrate obtained from the first m Example VI were filtered with dilution with no more than the same volume of water, to which was added 300 ml cation exchanger Amberlite 200 (H-form) and 600 ml anion exchanger Amberlite IRA-411 (OH-form) . After stirring at 40 ° C for 3 hours, the thus-treated liquid was further purified by ultrafiltration (UF-SDIM-85V-1, membrane-module Abcor SWM-85V) to a dilution ratio of 5: 1. This filtrate was concentrated and lyophilized to give 50 g of powdered polysaccharide (formulation No. 11).
81 0 2 6 2 8 0 \ - 7 -81 0 2 6 2 8 0 \ - 7 -
Voorbeeld IXExample IX
Overeenkomstig voorbeeld VIII werd een deel van het filtraat van voorbeeld VI met ionenwisselaar behandeld, en hieraan was 50 ml 5 % KCl-oplossing toegevoegd. Na 5 een nacht staan werd verder overeenkomstig voorbeeld VIII opgewerkt, wat 51 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 12). Voorbeeld XIn accordance with Example VIII, part of the filtrate from Example VI was treated with an ion exchanger, to which was added 50 ml of 5% KCl solution. After standing overnight, work-up was continued according to Example VIII to give 51 g of powdered polysaccharide (formulation no. 12). Example X.
Voorbeeld IX werd herhaald, behalve dat nu 20 ml 5 % NaCl-oplossing toegevoegd werd. Na opwerken had men 10 51 g poedervormig polysaccharide (preparaat no. 13).Example IX was repeated except that now 20 ml of 5% NaCl solution was added. After work-up, 51 g of powdered polysaccharide was obtained (formulation no. 13).
De analytische gegevens van de laatste vijf preparaten staan in tabel C.The analytical data of the last five preparations are shown in Table C.
Tabel CTable C
15 Prep. Gem. eiwit as Kation-gehalte (dpm Totaal Mate no. mol. en mg/g)_ van gew. % % Na K Mg Ca zout- vor- __________ming 20 9 114xl04 1,46 7,4 5.400 18.000 3.400 <50 0,23 0,46 0,28 0,002 0,97 0,73 10 98 1,23 7,2 15.000 9.700 2.700 <50 0,65 0,25 0,22 0,002 1,12 0,84 11 118 0,74 3,0 590 120 270 <50 25 0,025 0,003 0,022 0,002 0,052 0,039 12 118 0,73 4,5 550 22.300 260 <50 0,024 0,57 0,021 0,002 0,62 0,47 13 116 0,73 4,9 6.900 130 270 <50 0,30 0,003 0,022 0,002 0,33 0,25 30 ___15 Prep. Avg. protein as Cation content (ppm Total Mate no. mol and mg / g) - wt. %% Na K Mg Ca salt formation 20 9 114x104 1.46 7.4 5.400 18.000 3.400 <50 0.23 0.46 0.28 0.002 0.97 0.73 10 98 1.23 7.2 15,000 9,700 2,700 <50 0.65 0.25 0.22 0.002 1.12 0.84 11 118 0.74 3.0 590 120 270 <50 25 0.025 0.003 0.022 0.002 0.052 0.039 12 118 0.73 4.5 550 22,300 260 <50 0.024 0.57 0.021 0.002 0.62 0.47 13 116 0.73 4.9 6,900 130 270 <50 0.30 0.003 0.022 0.002 0.33 0.25 30 ___
Voorbeeld XIExample XI
Van het met Bacillus polymyxa beënte en 24 uur voorgekweekte medium werd 600 ml toegevoegd aan 12 liter medium dat 5 % glucose, 0,625 % pepton, 0,5 % Kl^PO^, 0j2 % 35 MgS04.7H20, 0,5 Z CaC03, 6 dpm MnS04-5H20 en 0,1 % soja-olie bevatte, waarvan de pH 7,0 was. Het kweken gebeurde bij 28°C onder beluchting met 0,8 liter per liter per minuut. Na 96 uur 8102628600 ml of the medium pre-cultured with Bacillus polymyxa and pre-cultured for 24 hours was added to 12 liters of medium containing 5% glucose, 0.625% peptone, 0.5% Kl 2 PO 4, 0.02% 35 MgSO 4 .7H 2 O, 0.5 Z CaCO 3, 6 ppm MnSO 4-5H 2 O and 0.1% soybean oil, the pH of which was 7.0. Cultivation was done at 28 ° C under aeration at 0.8 liters per liter per minute. After 96 hours 8102628
* V* V
- δ - was de viscositeit van de vloeistof 16.000 cP. Van de gefiltreerde kweekvloeistof werd 40 liter .overeenkomstig voorbeeld III opgewerkt, wat 58 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 14).- δ - the viscosity of the liquid was 16,000 cP. 40 liters of the filtered culture liquid was worked up according to example III to give 58 g of powdered polysaccharide (preparation no. 14).
5 Voorbeeld XIIExample XII
Van het in voorbeeld XI verkregen filtraat werd 40 liter overeenkomstig voorbeeld VIII opgewerkt, wat 62 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 15).40 liters of the filtrate obtained in Example XI were worked up according to Example VIII to give 62 g of a powdered polysaccharide (formulation No. 15).
Voorbeeld XIIIExample XIII
10 Van het in voorbeeld XI verkregen filtraat werd 40 liter met eenzelfde volume water verdund en gedeminera-liseerd door het te leiden door een kolom met 300 ml Amberlite 200 (H-vorm ) en 600 ml Amberlite IRA-411 (OH-vorm). Een mengsel van 35 g K^PO^ en 15 g MgSO^^E^O (hoeveelheid berekend uit de 15 oorspronkelijk aanwezige hoeveelheid zouten) in een klein beetje water werd toegevoegd, en daarna werd het mengsel met NaOH geneutraliseerd, en na een nacht staan onderging dit overeenkomstig voorbeeld VIII ultrafiltratie en opwerken, wat 60 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 16).40 liters of the filtrate obtained in Example XI were diluted with an equal volume of water and demineralized by passing through a column with 300 ml Amberlite 200 (H-form) and 600 ml Amberlite IRA-411 (OH-form). A mixture of 35 g K ^ PO ^ and 15 g MgSO ^ ^ E ^ O (amount calculated from the 15 originally present amount of salts) in a little water was added, then the mixture was neutralized with NaOH, and overnight standing, according to Example VIII, underwent ultrafiltration and work-up to give 60 g of powdered polysaccharide (formulation no. 16).
20 Voorbeeld XIVExample XIV
Een gedeelte van het filtraat van voorbeeld XIII dat ionenwisseling ondergaan had werd ultragefiltreerd zonder dat er zouten aan toegevoegd waren. Dit leidde tot 56 g poedervormig polysaccharide (preparaat no. 17).An ion-exchanged portion of the filtrate of Example XIII was ultrafiltered with no salts added. This resulted in 56 g of powdered polysaccharide (formulation no. 17).
25 Analytische gegevens van de laatste vier preparaten staan in tabel D.Analytical data of the last four preparations are shown in Table D.
30 81 02 62 8 β30 81 02 62 8 β
- 9 -Tabel D- 9 -Table D
Prep. Mol. eiwit as Kation-gehalte (dpm en Totaal Mate no. r* gew. mg/g) __r— Van zout- 5___% % Ha K Mg Ca vor- [ ming 14 104x10^ 2,0 8,1 5.470 18.800 7.850 4.250 - 0,24 0,48 0,65 0,21 1,58 1,18 15 100 1,4 8,9 6.670 15.600 4.420 4.120 - 10 0,29 0,40 0,36 0,21 1,26 0,95 16 89 0,9 6,1 5.610 16.350 6.700 920 - 0,24 0,42 0,55 0,0½ 1,26 0,95 17 91 0,9 1,2 670 70 310 3.19( - 0,029 0,002 0,025 0,16 0,216 0,16 15 _____Prep. Mol. protein as Cation content (ppm and Total Mate no. r * wt. mg / g) __r— Of salt 5 ___%% Ha K Mg Ca Form [14 104x10 ^ 2.0 8.1 5,470 18,800 7,850 4,250 - 0.24 0.48 0.65 0.21 1.58 1.18 15 100 1.4 8.9 6,670 15,600 4,420 4,120 - 10 0.29 0.40 0.36 0.21 1.26 0.95 16 89 0.9 6.1 5.610 16.350 6.700 920 - 0.24 0.42 0.55 0.0½ 1.26 0.95 17 91 0.9 1.2 670 70 310 3.19 (- 0.029 0.002 0.025 0, 16 0.216 0.16 15 _____
Voorbeeld XVExample XV
Van de met Bacillus polymyxa beënte en 24 uur geïncubeerde vloeistof werd 600 ml toegevoegd aan 12 liter medium dat 4 % glucose, 0,5 % pepton, 0,5 % K^PO^, 0,5 % CaCO^, 20 0,1 % MgSO^.71^0, 6 dpm MnSO^.5^0 en 0,1 % silicon tegen het schuim bevatte, en waarvan de pH 7,0 was. Het incuberen gebeurde bij 28°G onder beluchting met 0,8 liter per liter per minuut.600 ml of the liquid incubated with Bacillus polymyxa and incubated for 24 hours was added to 12 liters of medium containing 4% glucose, 0.5% peptone, 0.5% K ^ PO ^, 0.5% CaCO ^, 20 0.1 % MgSO ^ .71 ^ 0.6, MnSO ^ .5 ^ 0 and 0.1% silicone against the foam, the pH of which was 7.0. Incubation was done at 28 ° G under aeration at 0.8 liters per liter per minute.
Na 72 uur was de viscositeit van de vloeistof 10.000 cP. Nu werd met 5 vol.dln heet water verdund en het geheel tot 70-80°C 25 opgewarmd. De bacteriecellen werden afgefiltreerd over een filtreer- papier waarop eerst een laagje diatomeeënaarde aangebracht was.After 72 hours, the viscosity of the liquid was 10,000 cP. Now it was diluted with 5 parts by volume of hot water and the whole was heated to 70-80 ° C. The bacteria cells were filtered through a filter paper on which a layer of diatomaceous earth was first applied.
Van het filtraat werd 40 liter ultragefiltreerd (UF-SWM-85V-1, membraan-moduul Abcor SWM-85V) onder constant houden van het volume boven het filter totdat 200 liter filtraat verkregen was.40 liters of the filtrate were ultra-filtered (UF-SWM-85V-1, membrane module Abcor SWM-85V) keeping the volume above the filter constant until 200 liters of filtrate were obtained.
30 Dit werd geconcentreerd en gevriesdroogd, wat 50 g poedervormig polysaccharide gaf (preparaat no. 18).This was concentrated and lyophilized to give 50 g of powdered polysaccharide (formulation no. 18).
Voorbeeld XVIExample XVI
Van het in voorbeeld XV verkregen eerste filtraat werden 6 monsters met een gelijke hoeveelheid water ver-35 dund en dan gedemineraliseerd door elk daarvan te leiden door een kolom van 5 cm doorsnede gevuld met 300 ml Amberlite 200 81 0 2 628 « w - 10 - (H-vorm) en 600 ml Amberlite IRA-411 (OH-vorm). Aan ëén partij werd niets toegevoegd (no, 19) en aan de andere vijf 1 liter porties 10 % oplossingen van respectievelijk NaCl, KC1, MgC^» CaCl^ en NH^Cl. Elk mengsel liet men een nacht staan en werd 5 daarna overeenkomstig voorbeeld I ultragefiltreerd. Dit gaf 40-45 g polysaceharide-zouten (preparaten no. 20 t/m 24).From the first filtrate obtained in Example XV, 6 samples were diluted with an equal amount of water and then demineralized by passing each through a 5 cm diameter column filled with 300 ml Amberlite 200 81 0 2 628 w - 10 - (H form) and 600 ml Amberlite IRA-411 (OH form). Nothing was added to one batch (no. 19) and to the other five 1 liter portions 10% solutions of NaCl, KCl, MgC 2 CaCl 2 and NH 2 Cl, respectively. Each mixture was left overnight and then ultrafiltered in accordance with Example I. This gave 40-45 g of polysaceharide salts (formulations No. 20 to 24).
Voorbeeld XVIIExample XVII
Aan een overeenkomstig voorbeeld XVI met ionenwisselaar behandelde portie werd 1 liter 10 % FeCl^-oplos-10 sing toegevoegd. Na een nacht staan met zo nu en dan omroeren werd het ontstane neerslag afgecentrifugeerd, tweemaal met ge-demineraliseerd water uitgewassen en onder vacuum gedroogd. Dit gaf het ferri-zout van het pmps (preparaat no. 25).1 liter of 10% FeCl 2 solution was added to a portion treated with an ion exchanger according to Example XVI. After standing overnight with occasional stirring, the resulting precipitate was centrifuged off, washed twice with demineralized water and dried under vacuum. This gave the pmps ferric salt (formulation no. 25).
Voorbeeld XVIIIExample XVIII
15 Aan een overeenkomstig voorbeeld XVI met ionenwisselaar behandeld preparaat werd 1 liter 10 % AlCl^-oplossing toegevoegd. Na een. nacht staan met zo nu en dan omroeren werd het neerslag overeenkomstig voorbeeld XVII afgecentrifugeerd, uitgewassen en gedroogd. Dit gaf het aluminium-zout van het 20 pmps.1 liter of 10% AlCl 2 solution was added to a preparation according to example XVI treated with ion exchanger. After a. overnight with occasional stirring, the precipitate was centrifuged according to example XVII, washed and dried. This gave the aluminum salt at 20 pmps.
De analytische gegevens van de laatste negen preparaten staan in tabel E.The analytical data of the last nine preparations are shown in Table E.
8102628 ' 9 - 11 - 60 0 ΠΐδθΟΟΜ)ΟΜ5ΐΛ£ΜσΓ^· ►> q p·1. »—« vO LO oo r-vco c1 r S A Λ Λ Λ Λ Λ Λ Λ Λ8102628 '9 - 11 - 60 0 ΠΐδθΟΟΜ) ΟΜ5ΐΛ £ ΜσΓ ^ · ►> q p · 1. »-« vO LO oo r-vco c1 r S A Λ Λ Λ Λ Λ Λ Λ Λ
(U4JOOOOOOOOO(U4JOOOOOOOOO
y 2 ιβ Ο 5 Ν 'caocn-orcor^mooeMC^ ta-HO-COVO-OOCOCM > ' ΐ η r1 Λ η Λ Λ Λ Λ Λy 2 ιβ Ο 5 Ν 'caocn-orcor ^ mooeMC ^ ta-HO-COVO-OOCOCM>' ΐ η r1 Λ η Λ Λ Λ Λ Λ
Ortr-OOO’-’’—— Η ^5 ο ο ο ο on ο ο ο σι νο ο m co vo cm « «k · Λ t Λ γ. co ~ <r <- 1-> ι-1 5 «Μ •ϋ 0 " 10 « β «-1 ί§ ft) <! οσ ο cm ο— ο— ο 00 ο>— m <- ^ ιη~ ιο ο οο ο οο ο οο οσ coo t"· ο cm ο öocaco«r'«'cn1'CM“CM»>in1>cM'‘ ο ο ο ο · ο ο ο ο·ο ο ·1 1 cc cm —· σ ο ο 6 -pj S ο ·—· ο cm om om oen o — cmcm o Mf co üo cm co m o f~- o r- o o — en o en o mo lOrtr-OOO ’-’—— Η ^ 5 ο ο ο ο ο on ο ο ο σι νο ο m co vo cm« «k · Λ t Λ γ. co ~ <r <- 1-> ι-1 5 «Μ • ϋ 0" 10 «β« -1 ί§ ft) <! οσ ο cm ο— ο— ο 00 ο> - m <- ^ ιη ~ ιο ο οο ο οο ο οο οσ coo t "· ο cm ο öocaco« r "« 'cn1'CM "CM»> in1> cM' 'ο ο ο ο · ο ο ο ο ο ο · 1 1 cc cm - · Σ ο ο 6 -pj S ο · - · ο cm om oen o - cmcm o Mf co üo cm co mof ~ - o r- oo - and o and o mo l
ry g 2 « CM »> O o 1 »-" « O Ory g 2 «CM»> O o 1 »-" «O O
(5, .o O « O " 1 r_ip.cn o o en oo OJ ^ 1“ ^3(5, .o O «O" 1 r_ip.cn o o and oo OJ ^ 1 "^ 3
i2 S ocnmcMomooocnocnmcMOcnocMi2 S ocnmcMomooocnocnmcMOcnocM
i-h ocncoo—oovoenO'-or'OCMOi^oi-h ocncoo — oovoenO'-or'OCMOi ^ o
Ö tij o » o NO Μ· « nO Γ.Ο O — O OÖ tij o »o NO Μ ·« nO Γ.Ο O - O O
rf «O Λ λ · O Λ Λ Λ Λ Λ <u co ο ο en ο ο ο ο ο öo — cm k Ο •η ca om oen om om co ° t: Λ Λ jj jz vo cm coo m co mo en mo om en si- m ·— oj oo rv \p _ · λ i—1 λ o cm λ σ o σ o cm o vj · o o σ o · o o o © ·> o o ^ - o -· ° o1 o 60 • Mf .-1 o 2 σ en <1· co o σ» m vo m vo i γ1. i i co 60 , •5 I I 10 « d S «ü i) , J» & 2 a J>rf «O Λ λ · O Λ Λ Λ Λ Λ <u co ο ο and ο ο ο ο ο öo - cm k Ο • η ca om o o om om co ° t: Λ Λ yy jz vo cm coo m co mo en mo om en sim · - oj oo rv \ p _ · λ i — 1 λ o cm λ σ o σ o cm o vj · oo σ o · ooo © ·> oo ^ - o - · ° o1 o 60 • Mf.-1 o 2 σ and <1 · co o σ »m vo m vo i γ1. i i co 60, • 5 I I 10 «d S« ü i), J »& 2 a J>
*rt iW<U(U-r4 60 0) 60 60 M* rt iW <U (U-r4 60 0) 60 60 M
Ö (β·Η 0-P 0T3 60 Ό 01¾ f! OJ ·Η H dl 0Ό3 ca μ y .η td τΐ n es Μ ·ι-ι Μ M ^ H P‘H^Ö (β · Η 0-P 0T3 60 Ό 01¾ f! OJ · Η H dl 0Ό3 ca μ y .η td τΐ n es Μ · ι-ι Μ M ^ H P "H ^
j3 4JflJScn <U11-1QJ <D <U <f<0 > CUj3 4JflJScn <U11-1QJ <D <U <f <0> CU
«ο η μ oj1h cao o öoo ca o a o ^ H o pq 34Jar-ia>!^!>S>U>g>Fy60<Ji> 8102628 2«Ο η μ oj1h cao o öoo ca o a o ^ H o pq 34Jar-ia>! ^!> S> U> g> Fy60 <Ji> 8102628 2
PUPU
(U · μ o oo σ o >— cm en -er m '•o(U · μ o oo σ o> - cm and -er m '• o
p;p„ „ CM CM CM CM CM CM CMp; p "" CM CM CM CM CM CM CM
- 12 -- 12 -
Dierproef 1Animal testing 1
Zeven groepen van 5 ratten, alle van 4 weken oud, werden 4 dagen gevoerd met een dieet van hierna op te geven samenstelling. Een groep kreeg alleen het standaard-5 dieet, een tweede groep kreeg bovendien cholesterol, en de andere vijf groepen kregen elk 5 % van de preparaten 1 t/m 5.Seven groups of 5 rats, all 4 weeks old, were fed 4 days with a diet of the composition specified below. One group received only the standard-5 diet, a second group additionally received cholesterol, and the other five groups each received 5% of the preparations 1 to 5.
De samenstellingen van de diëten staan in tabel F. Water en voer waren ad libitum beschikbaar.The diet compositions are shown in Table F. Water and food were available ad libitum.
Tabel FTable F
10 Samenstelling van het standaard-dieet (in gew.%)10 Composition of the standard diet (in% by weight)
Standaard Blanco Proef- _dieet _dieet_dieet_Standard Blank Trial _ Diet _ Diet_ Diet_
Caseïne 22 22 22 .....Casein 22 22 22 .....
Zoutmengsel^ 4 4 4 (2) 15 Vitaminenmengselv ' 0,85 0,85 0,85 (water oplosbaar) soja-olie^ 1 1 1 (met daarin lipofiele vitaminen) 20 choline 0,15 0,15 0,15 spek 10 10 10 cholesterol 0 0,5 0,5 natriumcholaat 0 0,25 0,25 pmps 0 0 5 (3) 25 saccharose 62 61,25 56,25 _(58,25)Salt mixture ^ 4 4 4 (2) 15 Vitamin mixture 0.85 0.85 0.85 (water soluble) soybean oil ^ 1 1 1 (containing lipophilic vitamins) 20 choline 0.15 0.15 0.15 bacon 10 10 10 cholesterol 0 0.5 0.5 sodium cholate 0 0.25 0.25 pmps 0 0 5 (3) 25 sucrose 62 61.25 56.25 _ (58.25)
Totaal_100_100_100_ (1) Zoutmengsel volgens Harper, Dit bevat CaCO^ 29,29;Total_100_100_100_ (1) Harper salt mixture, This contains CaCO2 29.29;
CaHP04.2H20 0,43; KH2P04 34,31; NaCl 25,06; 30 MgS04.7H20 9,98 en andere.CaHPO4.2H20 0.43; KH2PO4 34.31; NaCl 25.06; 30 MgSO4.7H20 9.98 and others.
(2) Vitaminenmeng-sel volgens Harper.(2) Vitamin mix according to Harper.
(3) Met daarin per kg 3000IE vitamine A, 300IE vitamine D en 100 mg vitamine E.(3) Containing 3000 IU of vitamin A, 300 IU of vitamin D and 100 mg of vitamin E per kg.
(4) Tussen haakjes de hoeveelheid indien er 3 % pmps toegevoegd 35 werd.(4) The amount in brackets if 3% pmps was added.
8102628 - 13 -8102628 - 13 -
Na de proef werden de ratten met ether verdoofd, werden hun huiken opengesneden en werd uit de buikader bloedafgetapt. De levers werden eruit gesneden en afgewogen.After the experiment, the rats were anesthetized with ether, their hoods were cut open and blood was drained from the abdominal vein. The livers were cut out and weighed.
De bloedmonsters werden gecentrifugeerd en het serum afgezonderd.The blood samples were centrifuged and the serum separated.
5 Levers en serum-monsters werden onder diepvries bewaard. Het cholesterol-gehalte van het serum werd direct gemeten met behulp van de Determiner TC van de firma Kyowa Hakko Co., Ltd. De levers werden verzeept en in de onverzeepbare resten werd met dezelfde Determiner TC het cholesterol-gehalte bepaald. De be-10 paling van het HDL-cholesterol gebeurde met behulp van HDL- sterozyme van de firme Fuji Zoki Seiyaku Co., Ltd. De resultaten hiervan staan in tabel G.Livers and serum samples were stored under freezer. The serum cholesterol level was measured directly using the Determiner TC from Kyowa Hakko Co., Ltd. The livers were saponified and the cholesterol content was determined in the unsaponifiable residues with the same Determiner TC. HDL cholesterol was determined using HDL sterozyme from Fuji Zoki Seiyaku Co., Ltd. The results are shown in Table G.
Tabel GTable G
Proef- Cholesterol-gehalte (mg/dl) Atherogene Totaal aan ^ groeP_serum HDL_lever(mg/g) *-n(*ex_,in°deSlever standaard 91+16 59,6+16,0 3,7j+l,2 0,6+O,4 - dieet blanco- 291+53 31,6+7,0 22,2+0,6 8,2+2,0 50,4+4,7 dieet 20 proef- dieet met 5% van prep. 1 116+16 39,5+4,8 7,6+1,1 1,9+0,3 14,2+1,7 prep. 2 129+40 38,9+8,4 10,2+1,9 2,4+1,0 16,6+6,4 25 prep. 3 165+41 34,5+4,7 9,6+2,5 2,8+1,2 15,9+4,7 prep. 4 190+37 40,1+9,7 12,9+0,9 4,2+2,6 20,6+6,0 prep. 5 243+35 30,5+4,8 20,6+1,7 7,0+2,0 35,4+5,3Test Cholesterol level (mg / dl) Atherogenic Total growth serum HDL liver (mg / g) * -n (* ex_, in ° deSlever standard 91 + 16 59.6 + 16.0 3.7 y + 1.2 0 .6 + O.4 - diet blank- 291 + 53 31.6 + 7.0 22.2 + 0.6 8.2 + 2.0 50.4 + 4.7 diet 20 pilot diet with 5% of prep. 1 116 + 16 39.5 + 4.8 7.6 + 1.1 1.9 + 0.3 14.2 + 1.7 prep. 2 129 + 40 38.9 + 8.4 10.2 +1.9 2.4 + 1.0 16.6 + 6.4 25 prep. 3 165 + 41 34.5 + 4.7 9.6 + 2.5 2.8 + 1.2 15.9+ 4.7 prep. 4 190 + 37 40.1 + 9.7 12.9 + 0.9 4.2 + 2.6 20.6 + 6.0 prep. 5 243 + 35 30.5 + 4.8 20.6 + 1.7 7.0 + 2.0 35.4 + 5.3
Zoals men in tabel G ziet verlagen de 30 pmps met molecuulgewichten boven 200.000 (preparaten 1 t/m 4) het cholesterol-gehalte van serum en lever aanzienlijk.As seen in Table G, the 30 pmps with molecular weights above 200,000 (formulations 1 through 4) significantly reduce the cholesterol content of serum and liver.
De lever van de ratten op het standaard- dieet zag er roodbruin uit, en die van de ratten op het blanco dieet geligbruin, kennelijk de kleur van vervette lever. Maar 35 de levers van ratten op diëten met 5 % pmps 1 t/m 4 hadden de • clfi gezonde roodbruine kleur. De levers van ratten uit de 7 groep (preparaat no. 5) zagen er geligbruin uit, net als die op het blanco dieet; ook zij hadden vervette levers.The liver of the rats on the standard diet looked reddish brown, and that of the rats on the blank diet yellowish brown, apparently the color of fatty liver. Only 35 rat livers on diets at 5% pmps 1 to 4 had the • clfi healthy reddish brown color. The livers of rats from the 7 group (preparation no. 5) looked yellowish brown, just like those on the blank diet; they also had fatty livers.
8102628 ’ - 14 -8102628 "- 14 -
Dierproef 2Animal testing 2
De proefopzet was dezelfde als die bij de eerste rattenproef, alleen werden nu preparaten 6, 7 en 8 gebruikt en in twee verschillende doseringen. De uitkomsten hier-5 van staan in tabel H.The experimental design was the same as in the first rat experiment, except now preparations 6, 7 and 8 were used and in two different dosages. The results-5 of this are shown in table H.
Tabel HTable H
Proef- Cholesterol-gehalte (mg/dl) atherogene Totaal aan groep index cholesterol serum_HDL lever(mg/g)_in de lever 10 standaard 96+13 61,8j+4,5 2,9+0,2 0,6+0,2 dieet blanco- 323+19 36,3+1,2 22,4+1,0 8,3+0,4 52,4+3,8 dieet proef-dieet 15 met 3 % prep. 6 213+11 32,1+1,5 11,9+0,6 5,7+0,5 19,8+2,5 5 % prep. 6 150+11 39,7+2,1 9,5+0,5 2,9+0,5 14,6+1,4 3 % 20 prep. 7 138+11 34,9+1,2 7,9+0,5 3,0+0,3 9,9+1,1 5 % prep.7 90^3 45,0^+2,4 5,4+0,6 1,0+0,1 3,8j+l,3 3 % prep.8 201+8 35,8+2,2 11,3+0,8 4,5+0,3 18,8+2,0 25 5 % prep.8 155+14 37,1+1,9 9,6+0,3 3,0+0,5 14,7+1,5Test Cholesterol level (mg / dl) atherogenic Total group index cholesterol serum_HDL liver (mg / g) _ in the liver 10 standard 96 + 13 61.8j + 4.5 2.9 + 0.2 0.6 + 0 , 2 diet blank- 323 + 19 36.3 + 1.2 22.4 + 1.0 8.3 + 0.4 52.4 + 3.8 diet pilot diet 15 with 3% prep. 6 213 + 11 32.1 + 1.5 11.9 + 0.6 5.7 + 0.5 19.8 + 2.5 5% prep. 6 150 + 11 39.7 + 2.1 9.5 + 0.5 2.9 + 0.5 14.6 + 1.4 3% 20 prep. 7 138 + 11 34.9 + 1.2 7.9 + 0.5 3.0 + 0.3 9.9 + 1.1 5% prep. 7 90 ^ 3 45.0 ^ + 2.4 5, 4 + 0.6 1.0 + 0.1 3.8 y + 1.3 3% prep. 8 201 + 8 35.8 + 2.2 11.3 + 0.8 4.5 + 0.3 18. 8 + 2.0 25 5% prep. 8 155 + 14 37.1 + 1.9 9.6 + 0.3 3.0 + 0.5 14.7 + 1.5
Zoals duidelijk uit tabel H blijkt verlagen de pmps volgens de uitvinding de verhoogde cholesterol-30 gehalten van serum en levers en de atherogene indices aanzienlijk, zowel op 3 % als op 5 % preparaat in het voer. Dit ziet men vooral duidelijk met preparaat no. 7, dat ultrafiltratie ondergaan had. Preparaat no. 8 met het hoogste molecuulgewicht van 1.360.000 was iets minder goed, maar kwam toch niet veel achter 35 bij preparaat no. 6 met een molecuulgewicht van 1.040.000. De werkzaamheid van deze preparaten schijnt niet verder omhoog te gaan als het molecuulgewicht boven 1.000.000.As can be clearly seen from Table H, the pmps of the invention significantly reduce the elevated serum and liver cholesterol levels and atherogenic indices, both on 3% and 5% formulation in the feed. This is especially evident with formulation No. 7 which had undergone ultrafiltration. Preparation no. 8 with the highest molecular weight of 1,360,000 was slightly less good, but still did not lag much behind preparation no. 6 with a molecular weight of 1,040,000. The efficacy of these preparations does not seem to increase further if the molecular weight is above 1,000,000.
De levers van de ratten in de proefgroepen met de preparaten volgens de uitvinding hadden de roodbruine kleur, 40 net als die die op het stnadaard-dieet stonden.The livers of the rats in the test groups with the compositions of the invention had the reddish brown color, just like those on the standard diet.
8102628 - 15 -8102628 - 15 -
Dierproef 3Animal testing 3
Overeenkomstig proeven 1 en 2 werden preparaten 9 t/m 13 ook onderzocht, alleen in de dosering van 5 %. De uitkomsten staan in tabel I.In accordance with Runs 1 and 2, Formulations 9-13 were also tested, only at the 5% dose. The results are shown in Table I.
5 Tabel ITable I
Proef- Cholesterol-gehalte (mg/dl) atherogene Totaal aan groep index cholesterol ____serum_HDL_lever (mg/g) _in de lever standaard- 88+5 50,9+4,2 3,2+0,3 0,7+0,1 - 10 dieet blanco- 251+26 28,9+2,7 20,6+0,5 8,2+1,8 49,8+2,2 dieet proef-dieet met 5 % 15 prep. 9 106+6 49,9+6,0 7,7+1,1 I>3+0,3 8,6+2,9 5 % prep. 10 116+16 41,0+6,1 7,4+1,4 2,2+0,7 7,8+4,2 5 % 'prep.11 191+47 31,5+3,2 23,4+0,5 8,4+1,3 51,4+1,8 20 5 % prep. 12 105+11 32,0+4,2 8,3+1,6 2,3+0,7 7,5+3,1 5 % prep. 13 154+21 28,1+2,7 9,8+1,6 4,8+1,1 12,9+4,0 25 Zoals men duidelijk uit tabel I ziet ver lagen preparaten no. 9, 10, 12 en 13, waarin het zuur voor meer dan 0,2 zout is (resp. 0,73, 0,84, 0,47 en 0,25) de cholesterolgehalten van bloedserum en levert aanzienlijk. Dieet met 5 % preparaat no. 11, waarvan de mate van zoutvorming slechts 0,039 30 bedroeg, gedroeg zich ongeveer als het blanco dieet.Test Cholesterol content (mg / dl) atherogenic Total group index cholesterol ____serum_HDL_ liver (mg / g) _ liver standard- 88 + 5 50.9 + 4.2 3.2 + 0.3 0.7 + 0, 1 - 10 diet blank- 251 + 26 28.9 + 2.7 20.6 + 0.5 8.2 + 1.8 49.8 + 2.2 diet pilot diet with 5% 15 prep. 9 106 + 6 49.9 + 6.0 7.7 + 1.1 I> 3 + 0.3 8.6 + 2.9 5% prep. 10 116 + 16 41.0 + 6.1 7.4 + 1.4 2.2 + 0.7 7.8 + 4.2 5% prep. 11 191 + 47 31.5 + 3.2 23, 4 + 0.5 8.4 + 1.3 51.4 + 1.8 20 5% prep. 12 105 + 11 32.0 + 4.2 8.3 + 1.6 2.3 + 0.7 7.5 + 3.1 5% prep. 13 154 + 21 28.1 + 2.7 9.8 + 1.6 4.8 + 1.1 12.9 + 4.0 25 As can be clearly seen from Table I, lowered preparations No. 9, 10, 12 and 13, wherein the acid is more than 0.2 salt (0.73, 0.84, 0.47, and 0.25, respectively) the cholesterol levels of blood serum and provides substantial. Diet with 5% formulation No. 11, of which the salt formation amounted to only 0.039, behaved much like the blank diet.
Preparaten 12 en 13, waaraan na deminerali-sering metalen toegevoegd waren hadden een nogal goede werking, net als preparaten 9 enlO. De aanwezigheid van kationen in deze pmps schijnt van wezenlijk belang te zijn voor de cholesterol-35 verlagende werking. De pure aanwezitheid van enig kation schijnt daarvoor niet voldoende te zijn, zoals uit tabel F blijkt, waarbij 4 % zoutmengsel het controle-dieet niet omhoog trok.Compositions 12 and 13, to which metals had been added after demineralization, had quite a good effect, as did preparations 9 and 10. The presence of cations in these pmps appears to be essential for the cholesterol-lowering activity. The sheer presence of any cation does not appear to be sufficient for this, as shown in Table F, where 4% salt mixture did not elevate the control diet.
Bij het bekijken van de levers van de proefdieren waren de dieren gevoerd met proefdiëten met pmps volgens 8102628 :/ V t t ! -16- de uitvinding weer roodachtig bruin, en die van de blanco groep geligbruin. De levers van de ratten gevoerd met pmps bevattende preparaten zagen er veel beter uit dan die van de blanco groep, net als bij dierproeven 1 en 2.When examining the livers of the test animals, the animals were fed test diets with pmps according to 8102628: / V t t! The invention again reddish brown, and that of the blank group yellowish brown. The livers of the rats fed preparations containing pmps looked much better than those of the blank group, as in animal experiments 1 and 2.
5 Dierproef 45 Animal testing 4
Overeenkomstig de voorafgaande proeven werden nu preparaten 14 t/m 17 in twee verschillende doseringen beproefd. De uitkomsten hiervan staan in tabel J.In accordance with the previous tests, preparations 14 to 17 were now tested in two different dosages. The results of this are shown in table J.
Tabel JTable J
10 Proef- Cholesterol-gehalte in (mg/dl) atherogene Totaal aan groep index cholesterol _serum HDL_Lever (mg /g)_in de lever standaard- 96+j3 61,8^4,5 2,9+0,2 0,6+0,2 dieet 15 blanco- 323+19 36,3+1,2 22,4+1,0 8,3+0,4 52,4+3,8 dieet proef-dieet met 3 % prep. 14 213+11 32,1+1,5 11,9+0,6 5,7+0,5 19,8+2,5 20 5 % prep. 14 150+11 39,7+2,1 9,5+0,5 2,9+0,5 14,6+1,4 3 % prep. 15 138+11 34,9+1,2 7,9+0,5 3,0+0,3 9,9+1,1 5 % 25 prep. 15 90+3 45,0+2,4 5,4+0,6 1,0+0,1 3,8+1,3 3 % prep. 16 127+16 42,2+1,0 6,6+0,4 2,0+0,4 6,5+1,1 5 % prep. 16 91+8 45,1+4,3 5,3+0,4 1,1+0,3 2,5+1,2 30 3 % prep. 17 251+17 33,9+1,2 15,6+1,5 6,4+’,4 31,3+3,4 5 % prep. 17 227+12 32,4+1,6 15,5+1,3 6,1+0,4 29,1+3,2 35 Zoals men duidelijk uit tabel J ziet gaat het met diëten waarin preparaten 14, 15 en 16 veel beter dan met de blanco groep. Preparaat no. 17, met een zoutvorming van slechts 0,16, had een wat zwakkere werking. Preparaat no. 16, met een zoutvorming van 0,95, bereid door toevoegen van zouten aan gede-40 mineraliseerd polysaccharide en ultrafiltreren, had bijna even- 8102628 - 17 - veel effect als preparaat no. 15, ook met een zoutvorming van 0,95, bereid door ultrafilteren zonder demineraliseren. De cho-lesterol-verlagende werking wordt door toevoegen van zouten blijkbaar volledig hersteld.10 Test Cholesterol content in (mg / dl) atherogenic Total group index cholesterol _serum HDL_Lever (mg / g) _ in the liver standard- 96 + j3 61.8 ^ 4.5 2.9 + 0.2 0.6 +0.2 diet 15 blank- 323 + 19 36.3 + 1.2 22.4 + 1.0 8.3 + 0.4 52.4 + 3.8 diet pilot diet with 3% prep. 14 213 + 11 32.1 + 1.5 11.9 + 0.6 5.7 + 0.5 19.8 + 2.5 20 5% prep. 14 150 + 11 39.7 + 2.1 9.5 + 0.5 2.9 + 0.5 14.6 + 1.4 3% prep. 15 138 + 11 34.9 + 1.2 7.9 + 0.5 3.0 + 0.3 9.9 + 1.1 5% 25 prep. 15 90 + 3 45.0 + 2.4 5.4 + 0.6 1.0 + 0.1 3.8 + 1.3 3% prep. 16 127 + 16 42.2 + 1.0 6.6 + 0.4 2.0 + 0.4 6.5 + 1.1 5% prep. 16 91 + 8 45.1 + 4.3 5.3 + 0.4 1.1 + 0.3 2.5 + 1.2 30 3% prep. 17 251 + 17 33.9 + 1.2 15.6 + 1.5 6.4 + ', 4 31.3 + 3.4 5% prep. 17 227 + 12 32.4 + 1.6 15.5 + 1.3 6.1 + 0.4 29.1 + 3.2 35 As can be clearly seen from Table J, diets in which preparations 14, 15 and 16 much better than with the blank group. Preparation No. 17, with a salt formation of only 0.16, had a somewhat weaker effect. Preparation no. 16, with a salt formation of 0.95, prepared by adding salts to de-40 mineralized polysaccharide and ultrafiltration, had almost as much effect as preparation no. 15, also with a salt formation of 0, 95, prepared by ultrafiltration without demineralization. The cholesterol-lowering effect is apparently completely restored by adding salts.
5 Opnieuw zagen de levers van ratten, gevoerd op diëten met pmps volgens de uitvinding er veel beter uit dan die van de blanco-groepen, net als bij de voorafgaande dierproeven.Again, the livers of rats fed on pmps diets of the invention looked much better than those of the blank groups, as in the previous animal experiments.
Dierproef 5 10 Deze gebeurden weer geheel overeenkomstig de voorafgaande proeven, nu met preparaten no. 18 t/m 25, waarvan steeds 4 % aan het proefdieet toegevoegd werd. De uitkomsten hiervan staan in tabel K.Animal Test 5 These again were entirely in accordance with the previous tests, now with preparations no. 18 to 25 inclusive, of which 4% were always added to the test diet. The results of this are shown in table K.
Tabel KTable K.
15 Proef- Cholesterol-gehalte (mg/dl) atherogene Totaal aan groep index cholesterol _serum_HDL lever (mg/g)_in de lever standaard- 92j+I4 43,3^7,3 2,5jf0,3 1,2jK),5 - dieet 20 blanco- 248+31 31,8+5,4 17,7+0,6 8,1+1,8 44,1+3,1 dieet proef-dieet met 4 % prep. 18 114+16 39,1+13,9 7,3+1,1 1,9+0,3 12,2+2,4 25 prep. 19 (Na-zout) 106+13 34,6+6,5 7,8+1,0 1,8+0,6 12,8+3,7 prep. 20 (K-zout) 92+25 40,7+12,7 6,5+2,2 1,6+1,4 8,5+5,3 prep. 21 30 (Mg-zout) 88+35 50,3+13,2 6,2+1,8 1,1+1,7 7,7+5,0 prep. 22 (Ca-zout) 85+24 47,8+11,7 5,8+1,6 0,9+0,9 6,1+3,9 prep. 23 (NH^-zout) 72+17 46,9+4,9 4,6+1,8 0,5+0,2 3,9+5,0 35 prep. 24 (Fe-zout) 102+17 37,0+6,1 7,7+1,3 1,8+0,7 12,1+3,3 prep. 25 (Al-zout) 110+17 42,5+17,0 6,5+1,9 1,9+1,1 8,6+5,6 81 0 2 6 2 8 *.i v - 18 -15 Test Cholesterol content (mg / dl) atherogenic Total group index cholesterol _serum_HDL liver (mg / g) _ in the liver standard- 92j + I4 43.3 ^ 7.3 2.5jf0.3 1.2jK), 5 - diet 20 blank- 248 + 31 31.8 + 5.4 17.7 + 0.6 8.1 + 1.8 44.1 + 3.1 diet pilot diet with 4% prep. 18 114 + 16 39.1 + 13.9 7.3 + 1.1 1.9 + 0.3 12.2 + 2.4 25 prep. 19 (Na salt) 106 + 13 34.6 + 6.5 7.8 + 1.0 1.8 + 0.6 12.8 + 3.7 prep. 20 (K salt) 92 + 25 40.7 + 12.7 6.5 + 2.2 1.6 + 1.4 8.5 + 5.3 prep. 21 30 (Mg salt) 88 + 35 50.3 + 13.2 6.2 + 1.8 1.1 + 1.7 7.7 + 5.0 prep. 22 (Ca salt) 85 + 24 47.8 + 11.7 5.8 + 1.6 0.9 + 0.9 6.1 + 3.9 prep. 23 (NH4 salt) 72 + 17 46.9 + 4.9 4.6 + 1.8 0.5 + 0.2 3.9 + 5.0 35 prep. 24 (Fe salt) 102 + 17 37.0 + 6.1 7.7 + 1.3 1.8 + 0.7 12.1 + 3.3 prep. 25 (Al salt) 110 + 17 42.5 + 17.0 6.5 + 1.9 1.9 + 1.1 8.6 + 5.6 81 0 2 6 2 8 *. I v - 18 -
Zoals men in tabel K ziet verlagen de zouten de pmps met combinaties van kationen het cholesterol-gehalte in serum en lever en ook de atherogene index aanzienlijk, bij vergelijking met het proefdieet. Misschien geeft het combineren van 5 kationen nog e.en extra effect. Vooral de ammonium-, calcium- en magnesium-zouten van de pmps hadden opvallend hoge werkzaamheden, wat men vooral aan de atherogene indices kan zien.As can be seen in Table K, the salts of the pmps with combinations of cations significantly reduce the cholesterol content in serum and liver and also the atherogenic index when compared to the test diet. Perhaps combining 5 cations gives an extra effect. The ammonium, calcium and magnesium salts of the pmps in particular had remarkably high activities, which can be seen mainly from the atherogenic indices.
Ook bij deze proevenserie zagen de levers van ratten gevoerd met dieet met zouten van pmps volgens de uit-10 vinding er veel beter uit dan die op het blanco dieet.Also in this test series, the livers of rats fed the pmps salt diet according to the invention looked much better than those on the blank diet.
81026288102628
Claims (9)
Applications Claiming Priority (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP10240280 | 1980-07-28 | ||
JP10240280A JPS5729292A (en) | 1980-07-28 | 1980-07-28 | Preparation of polysaccharide having cholesterol reducing action |
JP10674380A JPS5733600A (en) | 1980-08-05 | 1980-08-05 | Production of polysaccharide having cholesterol- depressant activity |
JP10674380 | 1980-08-05 | ||
JP7862081 | 1981-05-26 | ||
JP56078620A JPS57194798A (en) | 1981-05-26 | 1981-05-26 | Production of polysaccharide |
JP56078621A JPS57194799A (en) | 1981-05-26 | 1981-05-26 | Production of polysaccharide |
JP7862181 | 1981-05-26 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NL8102628A true NL8102628A (en) | 1982-02-16 |
Family
ID=27466190
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NL8102628A NL8102628A (en) | 1980-07-28 | 1981-05-29 | PROCESS FOR PREPARING A POLYSACCHARIDE FROM BACTERIA. |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
CH (1) | CH659085A5 (en) |
DE (1) | DE3121548A1 (en) |
FR (1) | FR2487376B1 (en) |
GB (1) | GB2080818B (en) |
IT (1) | IT1195275B (en) |
NL (1) | NL8102628A (en) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT1267498B1 (en) * | 1994-11-10 | 1997-02-05 | P & G Spa | CATIONIC CELLULOSE DERIVATIVE, ITS USE FOR THE REDUCTION OF CHOLESTEROL LEVELS AND ITS PHARMACEUTICAL COMPOSITION. |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS50101400A (en) * | 1974-01-18 | 1975-08-11 | ||
CA1167403A (en) * | 1979-07-10 | 1984-05-15 | Unilever Limited | Microbial heteropolysaccharide |
-
1981
- 1981-05-27 FR FR8110636A patent/FR2487376B1/en not_active Expired
- 1981-05-29 IT IT22039/81A patent/IT1195275B/en active
- 1981-05-29 GB GB8116459A patent/GB2080818B/en not_active Expired
- 1981-05-29 DE DE19813121548 patent/DE3121548A1/en not_active Withdrawn
- 1981-05-29 NL NL8102628A patent/NL8102628A/en not_active Application Discontinuation
- 1981-06-25 CH CH3523/81A patent/CH659085A5/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3121548A1 (en) | 1982-06-03 |
IT1195275B (en) | 1988-10-12 |
GB2080818A (en) | 1982-02-10 |
FR2487376B1 (en) | 1985-10-25 |
CH659085A5 (en) | 1986-12-31 |
FR2487376A1 (en) | 1982-01-29 |
GB2080818B (en) | 1984-07-11 |
IT8122039A0 (en) | 1981-05-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Harrison et al. | Phytic acid and the rickets-producing action of cereals | |
KR900007498B1 (en) | Polysaccharides and antiviral drug containing chesame as active ingredient | |
FI100089B (en) | Linen product, its use and manufacture | |
US3914450A (en) | Concentrated extract of yeast and processes of making same | |
McFarlane et al. | The fat-soluble vitamin requirements of the chick: The vitamin A and vitamin D content of fish meal and meat meal | |
US3887431A (en) | Yeast protein isolate with reduced nucleic acid content and process of making same | |
CH660026A5 (en) | POLYSACCHARIDES WITH ANTI-CARCINOGENIC EFFECT AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. | |
US4421746A (en) | Process for producing interferon inducers | |
WO1988007822A1 (en) | Product for proteolysis of all proteins | |
US4237232A (en) | Method of purifying distillers solubles and use of the purified matter | |
NL8102628A (en) | PROCESS FOR PREPARING A POLYSACCHARIDE FROM BACTERIA. | |
EP0586933B1 (en) | Agents for suppression or lowering of blood lipids | |
JPH06256402A (en) | Production of water-soluble polysaccharide | |
US6884456B2 (en) | High-mineral oyster extract and a process for manufacturing the same | |
US3840515A (en) | Method of treating gluten | |
US4804536A (en) | Dietary fibres of seaweed having ion-exchange ability | |
CA2044802A1 (en) | Anti-herpes agents and veterinary anti-herpes agents | |
CA2286637C (en) | Method for potentiating and stimulating plant natural defence system | |
CA1107210A (en) | Process for the preparation of fermentation media suitable for culturing yeast for animal consumption and microspores and /or for the production of protein from vegetable waste matter | |
CN115595351A (en) | Goose liver protein peptide and preparation method and application thereof | |
RU2337571C2 (en) | Method of complex processing sea ware (versions) | |
US20230101104A1 (en) | Use Of Ionic Polymers In Biomass Processing For Preparation Of Animal Feed Additive | |
CN1324979C (en) | Low phosphorus animal feed and method for making same | |
DE2328628A1 (en) | Recovery of microbial protein - with nucleic acid content | |
Lynn et al. | Nucleic acid content of pleuropneumonialike organisms from human sources |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
BV | The patent application has lapsed |