NL8002981A

NL8002981A - Alkyl-ketohexopyranosidederivaten.

Info

Publication number: NL8002981A
Application number: NL8002981A
Authority: NL
Original assignee: Hisamitsu Pharmaceutical Co
Priority date: 1979-05-23
Filing date: 1980-05-22
Publication date: 1980-11-25
Also published as: AT368755B; AU5861580A; AR225310A1; SE8003815L; CH647531A5; DE3019221A1; ES8104321A1; AU529742B2; GB2052485A; FR2457300A1; CA1141761A; ES492194A0; IT1140976B; ZA803076B; GB2052485B; IT8022265A0; JPS55154991A; US4395405A; SU978732A3; ATA278880A

Description

1 VO 537 . . ** ^ < % j

Titel: Alkyl-ketohexopyranosidederivaten.

De uitvinding "betreft alkyl-ketohexopyranosidederivaten met de formule 1 van het formuleblad, waarin R een alkylgroep met tenminste 3 koolstof at omen is, met uitzondering van het D-fructosederivaat, waarin R een n-propylgroep is. De onderhavige alkyl-ketohexopyranosi de-5 derivaten zijn nieuwe verbindingen en bezitten farmacologische activiteiten, zoals een sterke anti-allergische en een anti-kankeractiviteit, waardoor ze als therapeutica kunnen worden gebruikt.

Het symbool R in de formule 1 kan n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, n-pentyl, isopentyl, n-hexyl of isohexyl voorstellen.

10 Bij de geneeskunde van allergische ziekten, is tot dusver slechts een symptomatische behandeling toegepast, waarbij de ontleding van weefselcellen door allergische reacties wordt geremd en de vrij-gifte van chemische stoffen wordt tegengegaan, of de fysiologische of symptomatische verschijnselen'veroorzaakt door deze stoffen}worden ver-15 licht. De gewoonlijk toegepaste anti-allergiea zijn meestal symptoom-bestrijdend, hoewel ook wel is gezocht naar geneesmiddelen, die het allergische reactiemechanisme kunnen remmen.

Bij een poging duidelijk effectieve anti-allergische middelen te vinden zijn de eigenschappen van de onderhavige alkyl-ketohexo-20 pyranosidederivaten onderzocht. Er werd daarbij gevonden, dat deze derivaten de produktie van antilichaam-immunoglobulinen (igE) die verantwoordelijk zijn voor diverse allergische ziekten kunnen remmen, zonder dat de produktie van immunoglobulinen (IgG, IgM)dié immuniteits-reacties regelen, eveneens wordt geremd.

25 Voorts bleek een aantal van de onderhavige verbindingen de produktie van immunoglobulinen (IgG en IgM) duidelijk te versnellen, waardoor ze ook als antikankermiddelen in aanmerking komen, omdat genoemde globulinen een duidelijk immuniserende functie hebben.

Meer in het bijzonder werd gevonden, dat de onderhavige ver-30 bindingen een opmerkelijke immuniteitsregelende activiteit bezitten zonder neveneffecten, zodat ze vooral als anti-allergica geschikt zijn. Voorts werd gevonden, dat diverse onderhavige verbindingen goede antikankermiddelen vormen, vanwege hun vermogen de produktie van diverse immunoglobulinen (IgG en IgM) te bevorderen.

35 Vergeleken met bekende maar chemisch verwante verbindingen «nn 9 q ai -2- kan het volgende worden gezegd:

De Journal of Food Science, 38, 665 (1973) vermeldt o.m. sorbose-derivaten, waarin R methyl of ethyl is, en D-fructosederivaten, waarin R propyl is.

5 Deze verbindingen hebben echter andere substituenten dan de onder havige en verschillen daarvan dus qua chemische structuur. Bovendien zijn de genoemde bekende verbindingen slechts vermeld als zoetmakende middelen en is nergens weergegeven, dat ze als geneesmiddelen zouden kunnen worden gebruikt; nog veel minder is obit sprake geweest van anti-allergische 10 of anti-kankereigens chappen.

De onderhavige verbindingen kunnen b.v. worden bereid volgens schema A van het formuleblad, waarin R de bovenweergegeven betekenis bezit.

Er wordt op gewezen, dat de formule 1 de volgende twee typen 15 van verbindingen cmvat, t.w. die met de formule la en die met de formule lb.

De verbindingen met de formule 1 kunnen dus worden verkregen door eenketohexose met de formule 2 cm te zetten met een alcohol met de formule 3, waarin R de boven weergegeven betekenis bezit, en wel bij 20 aanwezigheid van een anorganisch of organisch zuur en bij kamertemperatuur of hoger (liefst 20-80°C) welke reactie tenminste een half uur, liefst 0,5 tot 2b uur moet duren.

Meer in het bijzonder omvatten de verbindingen met de formule 2 fructose en sorbose; die met de formule 3 cmvatten alcoholen, als 25 n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, sec.butanol, n-pentanol, isopentanol, n-hexanol en isohexanol; terwijl de zuren zoutzuur, zwavelzuur en fosforzuur, alsmede mierezuur, azijnzuur, oxaalzuur, citroenzuur, wijnsteenzuur, appelzuur enz. cmvatten. De reactie kan bij kamertemperatuur of zacht verhitten wordeuuitgevoerd en liefst 0,5 tot 2b 30 uur duren. Ha afloop van de reactie wordt het verkregen reactiemengsel langzaam en onder roeren met ammonia geneutraliseerd, waarna het verkregen neerslag wordt afgefiltreerd. Het gevormde filtraat wordt onderverminderde druk geconcentreerd en de achterblijvende viskeuze massa van onzuiverheden bevrijd. De verwijdering van deze onzuiverheden wordt 35 b.v. bereikt door de viskeuze materialen te behandelen met met water 800 2 9 81 i -3- verzadigd ethylacetaat onder toepassing van een silicagelkolan. of door ze te "behandelen met actieve kool of een water/alcoholmengsel. De gezuiverde massa -wordt daarna geconcentreerd en onder verminderde druk gedroogd tot een ruw kristallijn alkylketohexopyranosidederivaat. Dit on-5 zuivere kristallijne materiaal kan uit ethanol of ethanol/ether worden herkristalliseerd tot de eindverbinding met de formule 1, een stabiel kristallijn maar bitter smakend materiaal.

De onderhavige verbindingen kunnen ook worden bereid volgens schema B van het formuleblad, waarbij R de boven weergegeven betekenis 10 bezit en R' een alkyl- of arylgroep is.

Meer in het bijzonder kunnen de verbindingen met de formule 1 worden verkregen docr synthese van een verbinding met de formule U uit een ketohexose met de formule 2, en omzetting van de aldus verkregen verbinding k met een alkylhalogenide, waardoor een verbinding met de formule 15 5 ontstaat, welke met ammoniak in de verbinding met de formule 1 kan worden omgezet. Ook kunnen de verbindingen met de formule 1 worden verkregen door fructose of sorbose met de formule 2 cm te zetten met zinkchlo-ride bij aanwezigheid van een zuur-anhydride, waarDij een verbinding met de formule li· ontstaat, omzetting van deze verbinding h met een alkylhalo-20 genide bij aanwezigheid van zilveroxide, waardoor een verbinding met de formule 5 ontstaat, en omzetting van deze verbinding met de formule 5 in methanol onder toevoer van ammoniakgas en roeren, welke laatste reactie bij kamertemperatuur 3-^ uren duurt.

Voorts kunnen de onderhavige verbindingen met de formule k worden 25 verkregen volgens J.A.C.S. 37, 2736 (1915), J.A.C.S. 5£, 3018 (1933) en J.A.C.S. JO, k052 (19½). De eindprodukten volgens de uitvinding zijn weergegeven in tabel A.

30 35 800 2 9 81 -U-

Tabel A

Eindprodukten met de formules la en lb

Verb, formule R Smeltpunt Specifieke rotatie 1 (1-a) 112-113 CH\^ ch3 2 (1-a) CH2(CH2)2CH3 1^7-1^9 -138.1° £H, 3 (l-a) CH2C^ ° 157-158 -130.0 CH3 k (1-a) CHgiCH^CI^ 130-131 -123.2° βΕ 5 (1-a) CHpCHpCH 2 120-122 -131,0° \:h3 6 (1-a) σΗ2(0Η2)^0Η3 130-132 -120,0° 7 (1-¾) CHpCHpCH, 9^-95 - 77,3° JOH j 8 (l-b) CH^ j 98-99 N>CH3 j 9 (1-¾) CHgiCHgJgC^ j I4.6 - UT - 73,2° βΰΞ~ ΐ 0 10 (1-¾) CHpCHv J 79 - 80 - 60,2

CÏÏ, I

3 j 11 (1-¾) CH2(CH2)3CH3 S 92 - 93 -70,1°

β H

12 (l-b) CHpCHpCH^ s 72-73 -65,6° nch3 13- (l-b) CH^CH^C^ 77 - 78 -77,5° _I_^_ I_ 800 2 9 81 £ ί -5-

De volgende voorbeelden lichten de uitvinding nader toe.

Voorbeeld I:

UlO g n-butanol met daarin waterstofchloride in een hoeveelheid van 0,2$ van de alcohol werd toegevoegd aan 10,0 g D-fructose en het 5 resulterende mengsel onder roeren bij kamertemperatuur gedurende 2h uur omgezet, waarna het reactiemengsel langzaam met 25$'s ammonia onder roeren werd geneutraliseerd. Het gevormde neerslag werd afgefiltreerd en het filtraat onder verminderde druk geconcentreerd tot een viskeuze geel gekleurde stof, die in met water verzadigde ethylacetaat onder 10 verwarmen werd opgelost, en daarna van onoplosbaar materiaal door filtreren bevrijd. Het verkregen filtraat werd geconcentreerd en onder verminderde druk gedroogd, waarna het verkregen droge materiaal uit ethylacetaat werd herkristalliseerd tot 5,3 g onzuiver kristallijn materiaal. Dit kristallijne materiaal werd uit ethanol herkristalliseerd 15 tot 3,7 g n-butyl-^-D-fructopyranosiee in de vorm van kleurloze naalden met een smeltpunt van 1^7-1^9°C en de volgende analyse: specifieke rotatie -138,1° elementairanalyse molecuulformule: C10H20°6 ber.: C 50,83; H 8,53 20 gev.: C'50,79; H 8,5^.

Voorbeeld II: 1*10 g isobutylalcohol met 0,2$ waterstof chloride werd begiftigd met 10,0 g D-fructose en dit geheel door goed roeren bij kamertemperatuur gedurende 2k uur omgezet, waarna het reactiemengsel langzaam met 25 25$’s ammonia werd geneutraliseerd. Het gevormde neerslag werd afge filtreerd en het filtraat geconcentreerd onder verminderde druk, waarbij een viskeus geel gekleurd materiaal achterbleef. Dit materiaal werd in met water verzadigd ethylacetaat onder verwarmen opgelost en gefiltreerd, cm het onoplosbare materiaal af te filtreren. Het verkregen 30 filtraat werd geconcentreerd en onder verminderde druk gedroogd waarna dit droge materiaal uit ethylacetaat werd herkristalliseerd tot 5»0 g onzuiver kristallijn materiaal. Dit onzuivere kristallijne materiaal werd uit ethanol herkristalliseerd tot 3,5 g isobutyl-ft-D-fructopgra-noside in de vorm van witte naalden met een smeltpunt van 157-158 C.

35 Specifieke rotatie (·=*)ρ : -130,0°

Elementairanalyse: Molecuulf ormule <-'iq^20°6

Ber.: C 50,83; H 8,53 gev.: C 50,81; H 8,52.

800 2 9 81 -β-

Voorbeeld III: i+85 g n-pentylalcohol met 0,1% waterst of chloride werd begiftigd met 10,0 g D-fruetose en onder goed roeren 2k uur bij Jcamertempetatuur omgezet. Vervolgens werd langzaam met 25%'s ammonia geneutraliseerd 5 en het gevormde neerslag afgefiltreerd, waarna het filtraat onder verminderde druk werd geconcentreerd tot een viskeus geelachtig materiaal, dat werd opgelost in met water verzadigde ethylacetaat, onder licht verhitten. Vervolgens werd bevrijd van onoplosbaar materiaal door te filtreren en het filtraat tot droog geconcentreerd en herkristalliseerd 10 uit ethylacetaat tot 5,2 g onzuiver kristallijn materiaal. Dit laatste werd uit ethanol herkristalliseerd tot 3,5 g n-pentyl-p-D-fructopyra-noside in de vorm van kleurloze naalden met een smeltpunt van 130-131°C. Specifieke rotatie («*0^ elementairanalyse molecuulformule: 0g 15 ber.: C 52,78; H 8,86 gev.: C 52,80; H 8,8U.

Voorbeeld IV: 1 g D-fructopyranose $-l,3',k,5-tetracetaat werd opgelost in 30 cm benzeen en begiftigd met 2,2 g zilveroxide en 1,3 g n-pentyljodide. 20 Dit mengsel werd 8 uren gekookt. Het verkregen reactiemengsel werd gefiltreerd ter verwijdering van de zilververbinding en onder verminderde druk het oplosmiddel af gedestilleerd. Toegevoegd werd hO cm methanol, waarna ammoniakgas werd toegevoerd. Ha afloop van deze reactie werd het geheel onder verminderde druk verhit ter verwijdering van de methanol, 25 ijswater toegevoegd, met chloroform geëxtraheerd, met water gewassen, met natriumsulfaat gedroogd, geleid over een silicagelkolcm, de laatste ontwikkeld met waterhoudend ethylacetaat en de afloop van oplosmiddel bevrijd, waarna het gevormde residu uit ethanol werd herkristalliseerd tot 162 mg n-pentyl-β-D-fructopyranoside in de vorm vaawitte naalden 30 met een smeltpunt van 130-131°C.

Specifieke rotatie element air analys e mole cuulf ozmule: C11H22°6 ber.: C 52,78; H 8,86 gev.: C 52,62; H 8,89.

35 Voorbeeld V: 800 2 9 81 * si -7- ^85 g isoptnetylalcohol met 0,1$ waterstofchloride werd "begiftigd •met 10,0 g D-fructose en onder roeren bij kamertemperatuur gedurende 2h uur omgezet. Hierna werd het reactiemengsel langzaam met 25$'s ammonia onder roeren geneutraliseerd en gefiltreerd ter verwijdering van onge-5 wenst neerslag. Het verkregen filtraat werd onder verminderde druk geconcentreerd tot een viskeuze geel gekleurde stof, die in met water verzadigd ethylacetaat onder verwarmen werd opgelost. De verkregen oplossing werd gefiltreerd ter verwijdering van onoplosbaar materiaal en het verkregen filtraat geconcentreerd en onder verminderde druk gedroogd, ver-10 volgens gekristalliseerd uit ethylacetaat tot k,2 g ruw kristallijn materiaal en dit kristallijne materiaal uit ethanol herkristalliseerd tot 2,7 g zuiver isopentyl-P-D-fructopyranosicfein de vorm van witte naalden met een smeltpunt van 120-122°C-Specifieke rotatie -131,0°.

15 Elementairanalyse molecuulformule: ber.: C 52,78; H 8,86 gev.: C 52,77; H 8,87.

Voorbeeld Υί: 570 g n-hexanol met 0,05 % waterstof chloride werd begiftigd met 20 10,0 g D-fructose en het verkregen mengsel 2^ uur bij kamertemperatuur geroerd. Ha afloop wend langzaam met 25$ ’ s ammonia geneutraliseerd.

Het verkregen materiaal, werd gefiltreerd cm ongewenst neerslag te verwijderen en het filtraat geconcentreerd onder verminderde druk tot een viskeus geel gekleurd materiaal, dat onder verwarmen werd opgelost in 25 met water verzadigd ethylacetaat. Onoplosbaar materiaal werd af gefiltreerd en het filtraat geconcentreerd en gedroogd onder verminderde druk. Dit droge materiaal werd vervolgens uit ethylacetaat gekristalliseerd tot U,6 g onzuiver kristallijn materiaal en dit laatste dit ethanol herkris-taliseerd tot 3,0 g n-hexyl-£-D-fructopyranoside in de vorm van een 30 wit poeder met een smeltpunt van 131-132°C.

Specifieke roateie : -120,0°

Elementairanalyse molecuulformule: C^Hg^Og ber.: C 5^,53; H 9,15 gev.: C 5^,50; H 9,16 35 Voorbeeld VII: 800 2 9 81 -8- 335 g n-propylalcohol met daarin 0,05$ zwavelzuur werd "begiftigd met 10,1 L-sorbose waarna 15 uur bij 70°C werd geroerd. Na afkoelen werd geneutraliseerd met 25$'s ammonia en de verkregen massa gefiltreerd ter verwijdering van het ongewenste precipitaat. Het verkregen filtraat werd 5 onder verminderde druk geconcentreerd tot een viskeuze geelbruine stroop. Dit residu werd in water opgelost, dat actieve kool bevatte en 20-30 min geroerd. Na filtreren werd de actieve kool nogmaals met water gewassen, gedurende 20-30 min bij 50°C met 20$'s ethanol geroerd, waardoor het geadsorbeerde materiaal werd werd gedesorbeerd en tenslotte gefiltreerd.

10 Het verkregen filtraat werd tot droog geconcentreerd en wel onder verminderde druk tot een lichtgeel vast materiaal, dat uit ethanol/ethyl-ether werd herkristalliseerd tot 8,5 g n-propy1-^-L-sorbopyranoside in de vorm van een wit kristallijn poeder met een smeltpunt van 9^-95°C. Specifieke rotatatie: («0^: -77 »3° 15 Elementairanlyse molecuulformule: C^H^gOg ber.: C 1*8,61*; H 8,l6 gev.: C 1*8,62; H 8,17.

Voorbeeld VIII: 1*10 g n-butylalcohol met daarin 0,05$ zwavelzuur werd begiftigd 20 met 10,0 g L-sorbose en dit mengsel 15 uren bij 70°C geroerd. Na afkoelen werd het reactiemengsel begiftigd met 25$ ammonia en het geheel gefiltreerd om ongewenst neerslag te verwijderen. Het filtraat werd onder verminderde druk geconcentreerd tot een viskeuze geelbruine stroop.

Deze stroop werd in water met daarin actieve kool opgelost, 20-30 min 25 geroerd en gefiltreerd, waarna de actieve kool werd gewonnen, met water gewassen en in 30$rs ethanol werd geroerd en wel 20-30 min bij 50°C, waarbij het geadsorbeerde materiaal weer werd gedesorbeerd. Na filtreren werd het filtraat onder verminderde druk geconcentreerd en gedroogd tot een lichtgeel vast materiaal, dat werd gekristalliseerd uit een mengsel 30 van·ethanol en ether, waarbij 9)3 g n-butyl-ά-L-sorbcpyranoside in de vorm van een wit poedervormig kristal met een smeltpunt van 1*6-1*7°C werd verkregen.

Specifieke rotatie (fJ^: -73,2°

Elementairanlyse molecuulformule: ^^0^20®6 35 ber.: C 50,83; H 8,53 gev.: C 50,85; H 8,5¾.

800 2 9 81 I f -9-

Voorbeeld IX:

UlO g isobutylalcohol met daarin 0,05% zwavelzuur werd "begiftigd met 10,0 g L-sofbose, waarna 15 uur "bij 70°C werd geroerd. Ha afkoelen werd het reactiemengsel met 25#'s ammonia geneutraliseerd. Het verkregen 5 materiaal werd gefiltreerd cm het ongewenste neerslag te verwijderen en het filtraat onder verminderde druk geconcentreerd tot een viskeuze geelbruine stroop. Deze werd in water met actieve kool opgelost, 20-30 min geroerd en'de actieve kool afgefiltreerd. Deze actieve kool werd met water gewassen, in 30%'s ethanol gedispergeerd en daarin 20-30 10 min hij 50°C geroerd. Ha filtreren werd het filtraat geconcentreerd en gedroogd onder verminderde druk en wel tot een lichtgeel vast materiaal dat uit ethanol/ether werd gekristalliseerd tot 9,1 g is obuty l-u(-L-s orbo-pyranoside in de vorm van witte poedervormige kristallen met een smeltpunt van T9-80°C.

15 Specifieke rotatie (©0^: -60,2°.

Elementairanalyse molecuulfonmile : her.: C 50,83; H 8,53 gev.: C 50,86; Ξ 8,5¾.

Yoorheeld X: 20 k85 g n-pentylalcohol met daarin 0,05% zwavelzuur werd begiftigd met 10,0 g L-sorbose en het verkregen mengsel 15 uren bij 70°C geroerd.

Ha afkoelen werd 25% 's ammonia toegevoegd ter neutralisatie. Het geheel werd gefiltreerd cm het ongewenste neerslag af te filtreren en het filtraat geconcentreerd onder verminderde druk tot een viskeus geelbruin 25 stroopachtig residu, dat werd opgelost in water met daarin actieve kool. Dit laatste geheel werd 20-30 min geroerd en gefiltreerd, waarna de actieve kool met water werd gewassen en gedispergeerd in 30%'s ethanol, waarna dit laatste geheel 20-30 min bij 50°C werd geroerd.

Ha filtreren werd het filtraat onder verminderde druk geconcentreerd 30 en gedroogd en een lichtgeel vast materiaal verkregen, dat na her-kristalliseren uit ethanol/ether 9,2 g n-pentyl-g^-L-sorbopyranoside ' opleverde in de vorm van een wit poedervormig kristallijn materiaal met een smeltpunt van 92-93°C.

Specifieke rotatie -70,1° 35 Elementairanalyse molecuulformule: G^H22 800 2 9 81 -10- ber.: C 52,78; H 8,86 gev.: C 52,81; H 8*85.

Voorbeeld XI: 1:85 g isopentylalcohol met daarin 0-05# zwavelzuur werd begiftigd 5 met 10,0 g L-sorbose, waarna het geheel 15 uren bij 70°C werd geroerd.

Na afkoelen werd met 25#’s ammonia geneutraliseerd. Het geheel werd gefiltreerd en het filtraat onder verminderde druk geconcentreerd tot een viskeus geelbruinachtig residu. Dit werd opgelost in water, voorzien van actieve kool, 20-30 min geroerd en gefiltreerd, waarna de actieve kool 10 werd gewonnen. Deze actieve kool werd met water gewassen, gedispergeerd in 30#’s ethanol, bij 50°C 20-30 min geroerd, en na filtreren het filtraat geconcentreerd en gedroogd onder verminderde druk. Verkregen werd een lichtgeel vast materiaal, dat werd herkridalliseerd uit ethanol/ether tot 8,9 g is opentyl-2-L-sorbopyranoside in de vorm van een wit poedervormige 15 kristallijn materiaal met een smeltpunt van 72-73°C.

Specifieke rotatie (cO^: -65,6°

Elementairanalyse molecuulfonmile: C^HggOg ber.: C 52,78; H 8,86 gev.: C 52,62; H 8,89-20 Voorbeeld XII: 570 g n-hexylalcohol met daarin 0,05# zwavelzuur werd begiftigd met 10,0 g L-sorbose en dit geheel 15 uren bij 70°C geroerd. Na afkoelen werd onder roeren geneutraliseerd met 25#'s ammonia. Vervolgens werd gefiltreerd en het filtraat onder verminderde druk geconcentreerd tot 25 een viskeus geelbruin stroopachtig residu. Dit werd in water met actieve kool opgelost, 20-30 min geroerd en gefiltreerd, waarbij de actieve kool werd gewonnen. Deze kool werd met water gewassen, gedispergeerd in 30#'s ethanol, daarin 20-30 min bij 50°C geroerd, gefiltreerd en het verkregen .filtraat onder verminderde druk geconcentreerd en ge-30 droogd. Aldus werd een lichtgeel vast materiaal verkregen, dat na kristalliseren uit ethanol/ether 8,0 g n-hexyl-^L-sorbopyranoside opleverde in de vorm van witte poedervormige kristallen met een smeltpunt van 77-78°C.

Specifieke rotatie : -77,5° 35 Elementairanalyse molecuulfornrule: c-|2H2l+°6 800 2 9 81 t Γ· -11-

Ber.: C 5^,53} H 9,15 Gev.: C 5^,55; H 9,IT·

In elk van de voorbeelden werd het concentreren bij verminderde druk uitgevoerd bij 20-30 mm Hg en 60-70°C.

5 De farmacologische activiteit van de onderhavige verbindingen wordt aan de hand van de volgende experimenten nader toegeÜcht.

Experiment 1: Effect op de vorming van homocytotrope antilichamen bij _ratten._

Dit experiment werd uitgevoerd overeenkomstig de methode van 10 Tada en Okumura (J. Immunol., 106, 1002, (1971)).

Groepen van 8-9 wistarratten werden bij dit experiment gebruikt.

Zoals blijkt uit de tabellen B-E werden de vier poten van de ratten geïnjecteerd met 1 mg dinitrofenyl-extract van ascaris suum (DHP-As) als eiwit en 10 cellen van Vaccinum pertussis (B- pertussis) ter sensi-15 tivering, waarna de onderhavige verbindingen gedurende 5 dagen aan de geïnjecteerde ratten werden toegediend. 8-9 dagen na het sensitiveren werd bloed af genomen en daarin de hoeveelheid gevormde antilichamen bepaald onder toepassing van een passieve cutane anafylaxie (?0A)reactie en een fytohexaglutinine (PHA)reactie 20 (l) Bepaling van de hoeveelheid antilichaam via de PCA-reactie:

Het opgevangen serum werd tot diverse concentraties verdund en intradermaal geïnjecteerd bij andere ratten. ^8 uur na deze injectie

O

werd 2 mg DHP-As als proteïne en4 0,5 err van een 1%'s Evans .Blauw intraveneus in deze ratten geïnjecteerd ter bepaling van de verdunning 25 van. het serum, dat nog een minimaal extravasale kleur vertoonde.

De resultaten zijn weergegeven in de tabellen B en C. Er wordt op gewezen, dat de symbolen x en xx significante verschillen aangeven met een waarschijnlijkheid van resp. 95 en 99$.

80 0 2 9 81 -12- ö I i . ’.p bO αΡ ^ ' ϋΛ ' 00 -ρ ·η s *ö oo t- ' 00 « cd cn.H t\i m on w o\ t- ?h a a u ooHHt-Hmcy a> o o> cm i i i i cm i <D ra ·η ft w o\ vo t- O i On rjJ i^j | * « * « lf\ rl cd 0) bO cKhoovoj· ** *

•1-9 C O ^ H LA VO 00 VO O ON

• p +3 -v_ H w w w w Q\ w (3<uiq -a· o σ\ la o bO Η ON Λ Λ Λ Λ Λ Ο ai (ίο \ο 4· t- Η Ο Λ· Μ) Οι ΌίπΟ Η Ο 0\ ΙΑ ΟΝ Η Η 0 Η

cd Ον '— I

•Η ----—1 >

bD

C

•Η ———ι — ......... 1 1 § ’•3 <ΰ ο c ,-.

43 <U ’ bO '

u G

. (U <D *H X

ffll ·—I r* G Μ rS

cd ·η a) ^ r-i M -P ·Η ^ / ' <UO «Η >0 ^ -=f *> t—

49 tn <u bQ v .—. O OO JT

cd G COcö 0- 00 H t- T1

Eh 0) (1) 43 Ό 00 0 1 I I

a on cm o t- o <D <U bD I I " ·* *

H ed H >4 on J" CM vo I J" I

cd C cd vo 0 la 00 vo Ö CbD Η H ·—< N—· '— •h G *H S '— '— _

SOS LA Ο O

O bOOO t— t— * * * •0 tdOo m j- on CM t-

O >ÖOH CM H t— LA ON

Id %'—, § eWi !> 43 0 .................

<D

ft

ft C

w 3> / i i / ►> Ό / <D /

bO ƒ <U

ft / *0 Ο < ·Η

CM 00 J- LA VO S

jl ,α .....Vi

Sh OOOOOOtn ο ill H S K S S S 0 CQ “ !> 0 ft

J £_| # * · · # O

t φ 430rOPrO^=H

/O CCCC?hCO

U Ο 0 4) Φ 0 <D >9

,;ft Ο £ > > > O

i / . I

u I_J

800 2 9 81 -13-

1-1 I

« * * *

/*% '*· /-N

I H J- CO OJ

. Λ Λ Λ Λ CQ rH -Of t— 0\ a co co t— vo

φ CO OJ H CM

μ m I I I I

aj oo On On OJ

h as * " " " rj 00 <u H CO CO o

Id O Ö OJ Η H OJ

φ φ w w w w !h ö φ oj oo on -a· ^ .η o\ t-

<* CO -P VO t·— LfN CO

O OJ Η H OJ

ft__ cd ' H ö

>· O

ÖQ

00 g / d cö öo / S φ id / Φ bO / •H ft / id o / <d _ / ο a /

45 £,/ o H OJ

Φ I φ/ Η Η H

§7 ...

0 .h / h s a S

P /1 p _j C / · ^1··· φφ /mfl Έ i? £

<Q rrt / O Jh Ö Μ Êh P

1 O / Μ Ο Ο α> O

ti ft / ft !> of>!>i> s---- § s

> .A ® K

_p m fc— * *—».

a c t- ^ in OJ

Φ φ H -or *> " ft ra 1 Γ1 £ £?

Li LTN I ON CO

(vj d " -a· l I

C t— ·* On OO

H OJ *> " a a h t- t- vo

φ φ W -0Γ CO

ho ft _ w w CÖ φ LTN -=t"

ld fc» Λ " VO ON

>rt -=f OJ " " 00 -P ~=f O t— t— __Η H VO -=f a a) to / 9 /

}> g) / J· t— ON

S / ooo σ / s s £3 /· o g yft · Ü · · · 3 /ΦΡ Si?·?·?

fn/Ofti aSftifttfH

φ/ ftt a) Η φ <u ai ra ft i> >o >· !> £* / _ ! 800 2 9 81 -lU— (2) Bepaling van de hoeveelheid anti lichamen via de PHA-reactie:

Het opgevangen serum werd tot diverse verdunningen verdund en geincubeerd met s chapeneiythrocyten, gekoppeld met DHP-As onder toepassing van his-gediazoteerd "benzidine ter "bepaling van de verdunning van het serum dat nog een minimale hemaglutinatie opleverde. De resultaten zijn weergegeven in de tabellen D en E.

Tabel D

Effect van orale toediening via PHA bij de rat

Proeï*^ Serum 8 dagen na het sensitiveren N verb. x-opge vangen _J£ag_____

Controle 320 (270-370)

Verbinding Ho. 2 600 (i|.80-720)X

verbinding Ho. 3 630 (1*10-81*0 )X

verbinding Ho. k 3250 (900-5600)231 verbinding Ho. 6 810 (630-990)32 800 2 9 81 s- -« -15- i u 0 § ^ ^ 'd co η H on 0 ··'—···

o ΙΑ OO CO OO CO

Η, ·Η VO Η · Η H

P +3 OJ -=1· o -it ov •H J h h h Ό

3! Μ LA

« a I I j- I I

pH 0) I

m t- j· n oo m d · · · · · •rf tö -=t tA O ¢- o > d ιλ H ffl o\ tn

t- MP 00 VO

bO ö OJ co 0J CM

•η1 μ __ d cö On H J VO ffl <U >d .....

•Η in 00 l> 1Λ 1Λ

<0 00 n ^ NO W NO

<d cm OJ -=r o cm o on in on \o =f •P ^ -- OJ —- " tn d

Tj CD

•H bQ

M 9 tf , % > -d / H m <n ƒ

*8 Ë 8) / OHCUCO

H d p ft / HHHH

Ο Ο δ O / Λ (D / · · · ·

® ö CQ / 0) Ο Ο Ο O

Eh cö / rHlSÖSS

> /1 o ^ / G-1 · · * · · += / φ p Έ £ £ £ ·? CJ/OJh d Pi Pi Pi Pi 0 / & 0 O 0 <U 0 0) H-i / Ph t> «Η*-- (3__ d 8 k ο -—- -—- fn « -=r la oo 0 H · » · b · VO 00) •H OJ VO IA -=f

+3 NO =t =1 ON

•H CO 00 VO ία! Η I I I

ö | cO CO -3- 0 on · · · ra · t— la c— on on vo so ce on t— oj -=t d On H -t on d

0 on t— Η H

hO * · · ·

ccf oO -t 00 CO

id rl in J J

on -3- oj cm

CD H OJ LA IA

d 0 bD / a a*/ go) / 3 bO / S Pi / it t- On 0 O / CQ / ...

j 0 O O O

/ H S S S

/ · Pi · · ·

/ 0 P 4= P P P

/ Ο P d Pi Pi Pi / Pi 0 O 0 <D 0 / Ph t> O > f> f> 800 2 9 81 -16-

Experiment 2 . Effecten op de vorming van hcmocytotrope antilichamen __Bij muizen_

Groepen van elk 5 vrouwelijke muizen (BALB/c-stam) werden bij dit experiment gebruikt. De muizen werden gesensitiveerd met lO^ug DNP-As als proteïne en 3 mg Al(OH)g 9 waarna de proefverbinding werd toegediend aan de gevoelig gemaakte muizen en wel gedurende 5 dagen in een dosis van 100 mg/kg/dag. Na het sensitiveren werd een monster serum van de muizen opgevangen en gelijkelijk behandeld als bij experiment 1 ter bepaling van de hoeveelheid gevormde antilichamen.

De resultaten zijn weergegeven in de tabellen F-K.

Tabel F

Effect van orale toediening via PCA bij de muis ^ j [ S,

Serum 10 dagen na 21 dagen na 30 dagen na verbINN\°Pgevanseri sensitiveren sensitiveren sensitiveren N^dag

Controle 256 ί 128 102k ί 0 299 * k3 verb. No. 3 118 - 37 563 - 125s 256 - 129 verb. No. k 88 - 2 k 328 | 108^ 272 - 80 verb. No. 5 3l6 - 86 k80 - 1^23°: kk8 - 6k verb. No. 6 320 288 2k0

Cyclofosfamide 2lk - 103 516 - 71^ 368 ί lk6

Tabel G

_Effect van orale toediening via ECA bi.j de muis \

Proef-i. 10 dagen na sensitiveren vert '-opgevangen X flag__ controle 537.0 (k36.5 - 660.7) verb. No. 7 218.8 (109-7 - ^36.5) verb. No. 9 . 380.2 (20k.2 - 708.0) verb. No. 10 501.2 (251.2 - 1000.0) verb. No. 11 501.2 (135k.8 - 708.0) verb. No. 12 269.2 (166.Ο - k36.5) 800 2 9 81 -17- 00 Μ ^ ΙΑ Ο Ο 00 Η VO · · * * CM CO οο t- rl J· (η m cn Ο to '-ι '-ι

•η ft 1 cy ^ ^ °P

3 O I I I I

S .p H H 1A 00 CO

M CÖ · · · · ·

Ο) H w w Γ1 ‘-ζ S

rrj VO NO t— H CO

ö CO 00 O CO VO

•rj (1) H H H H CM

,Ο cd rö j- co no no σ\ <c .....

O t— 00 IA CO 00 LA

(ft CO H ON Η H CO

00 ON LA LA CM

cd OJ Η Η H CO

•H

i>__ bo Ö ^ ^ 'pj VO -4- LA 00 O · · r'·'· · ·

•Η Ο IA 4 rl CM

rpj IA t- · t— H

Μ Λ) b— CA 00 Ο 0θ Ο 00 Η

Η +5 ft I I CM I I

Ο Ο I

Ώ(ϋ -p CM -4" O CM NO

Cd XJ Cd .....

EHCJ Η O 00 VO H VO

CQ CO 00 NO Ο H

•H Ö CO CM H LA NO

Ë bO

d) as o -a- co ο o trj trt .....

O t- t- 00 00 00

Q, O CO O H O O

K H la -sr cm t- t— X!---^ ^.....—-

g O oo CM X

> H CM CO CO l·- t— r“l -4" · ·

Jj 00 co H CO ίο H CO NO

<D I I I On -a-

Lh ft II

(ft d> -4 O LA LA LA

ώ +3 .....

Cd LA t- NO LA LA

H t- CO CO -4 -4·

LA LA -4· CM CM

Ö w W W

d)

hb O t- ο O CM

cd .....

rtf 00 O 00 t— o σ\ NO o CO 00 ON t- NO t— LA 00

C

D

60 α m cö cd S > >0 .

3 o /

ft bD / O CO

¢) ft/ t— ON Η H

CQ O/ / . . · · / dl ο Ο 0 0 /1 H 1¾ S S S3

/«ft O

/ <0 · ft · * · · /οχι χιχιρχιρ / ft ft ö ft ft ft ft ' ft φ 00)00)0 !> a i> i> !> l> 800 2 9 81 -18-

Tabel J

Effect ran hypodermisehe toediening via PCA bij de muis \ serum 37 dagen later proef^Kopgevangen verb. dag

Controle 3167.37 (2013-72 - 3767-0*0 verb. No. 1 177-83 (119.62 - 211-35) “ verb. No. 9 251-19 (191-51 - 321-31)^

verb. No. 11 177-83 (ll0.60 - 22l-9l)XX

Tabel K

Effect van orale toediening Yia PHA. bij de muis serum proef Ok opgeTangen 10 dagen later

Yerb. d3g

Controle 125-9 (95-5 - 166.0)

Yerb. No. 9 177-8 (109-7 - 288.1)

Yerb. No. 10 109-7 (89-1 - 131-9)

Yerb. No. 11 177-8 (ill.5 - 218.8) verb. No. 12 109-7 (77-6 - 151-9) verb. No. 13 109-7 (89-1 - 131-9) -w 800 2 9 81 -19- ΟΓ) .—. ^ CO (Ο • cn οι ιλ σι · · οο · · · · t— t·— H ao co cm la co co CO H 4 rl 0\

H co H -4 σ\ Η H

jj Η Η Η H

<D I I I I

-p I I I I CO

(ö O CO · o vo

H · VO t— 'CO

m ^ H · . CO Η H CO

.Ij rj n_ CO O CO CO 6— LA

H flj CO LA VO OS H CO t— g 60 t— VO '—' '

(V <ö LA *— "o OJ CO CO CM

rrt · . · · · ·

t- H oHOOHOCO

•r^ PO t— O t~“ CM CO -4; a P-)--—- " CÖ 'rj ^ p-' ‘ ^ ^ '

OS CM LA OS LA O LA

60 · ......

d LA 4 [- IA 4 \£) t“ •S h 3 8 3 3 3 3 3 •2 | . ......

'm H LA OS rl CM CM OS H

O · ......

4J Ö LA 4 ft PO O IA Λ O OS CO CO CO CO CM 00 J O 9 w 1 «d- w —p w w

om 10 t~- O CO CO t— LA CO

o.H O · ......

rog H Os VO W W J 4 w

c^C O vo O O O -4 O

(U H r-fHHHHH

Ό 0

1 OCMCMCOSOHLASO

r ·······»

+3 f-OOJ-Ot-VOO

u COCOCOLAOSLAOOOS

φ LACOCOCOH-4.4H

& Φ I I I I I I I I

Μ -P

CÖ C\lC\JWLAO\-it-C\J

·······*

Os Η H LA LA CO OS 00 rj SOLALAJ’CMOOOCO

O CMCMCMCMHCMH

hD — ^ —' CÖ Ό CMOOJ-OsCOCOOs ········

os oososco.a--=roOLA

COOOOOLALAHCM COCOCOCMiHCOCMH

a a> 60 Ö bO CÖ CÖ [> Ό

IS/ O H CM CO

^ ft/ -4 t— Ox Η Η Η H

φ oy oóoóóóoo / . o * * ίπ ······*

0P

OU

£j<U O<U<D<D0<DDO

& |> 800 2 9 81 -20- , Deze resultaten tonen aan, dat IgE-antilichamen werden aan getoond via PCA-reacties en dat IgG en IgM werden aangetoond via PHA-reacties. Hieruit volgt, dat de onderhavige verbindingen de vorming van IgE selectief remmen, maar de vorming van IgG en IgM niet remmen. Tevens volgt hieruit, dat bepaalde verbindingen volgens de uitvinding de vorming van IgG en IgM zelfs bevorderen.

Experiment 3. Acute giftigheidsproeven

Elk van de proefverbindingen werd gesuspendeerd in een fysiologische zoutoplossing met daarin 0,5% tragacantgom, waardoor een proefsuspensie werd verkregen. Deze proefsuspensies werden toege-diend aan ratten en muizen langs verschillende wegen. De LD^-waarden werden bij deze proeven 3 weken na hun begin berekend. De resultaten zijn weergegeven in de tabellen M en ïï.

Tabel M

Acute giftigheid bij de rat

Proef- Wijze van geslacht LD,-0 waarde (mg/kg) verb. toedienen oraal man ^ ^000 oraal vr. U000 hypodermisch man 1500 (130^ - 1725) verb hypodermisch vr. 1300 (1135 - 1^89)

Ho. 1+ abdominaal man > 2778 abdominaal vr. > 2778 intraveneus man 670 (632 - 710) intraveneus vr. 660 ( 617 - 706) oraal man ^ 5000 verb. v.

jj0 j hypodermisch man / 5000 abdominaal man } 5000 intraveneus man } 2000 oraal man 5000 verb. oraal > 5000

Ho. 10 hypodermisch man ^5000 hypodermisch vr. ^ 5000 abdominaal man '= 2000 abdominaal vr. r= 2000 800 2 9 81 -21- vervolg tabel Μ verb. Ιο. 10 intraveneus man 2000s? ^1000 intraveneus vr. 2000> ^1000

Tabel I

Acute giftigheid bij muizen

Proef. Wijze van geslacht LD,-- vaare (mg/kg) verb. toedienen ? oraal man 3800 (3333 - 1)-332) oraal vr. 3790 (335¼ - ^283) hypodermiscy man 1020 ( 959 - 1085) hypodermisch vr. 1080 (1009 - 1156) lo^i abdominaal man 2590 (2U20 - 2771) abdominaal vr. 2360 (2169 - 2568) intraveneus man 760 ( 70¼ - 821) intraveneus vr. 930 ( 857 - 1009) oraal man. ^ 5000 hypodermiscy man ) 5000 verb. abdominaal man ^ 1000

lo. 7 · . V

intraveneus man } 2000 oraal man 5000^ ^2000 oraal vr. 5000) ^2000 * hypodermisch man =, 2000 verb. . > Ιο 10 hypodermisch vr. =,2000 abdominaal man -10007 >500 abdominaal vr, 10007 7500 intraveneus man 20007 ?1000 intraveneus vr. 20007 71000

Uit de bovenweergegeven resultaten volgt, dat de onderhavige verbindingen hoge LD^-waarden bezitten en dus weinig giftig zijn.

800 2 9 81

Claims

1. Alkyl-ketohexopyranosi dederivaten met de formule 1 van het formuleblad, waarin R een alkylgroep met tenminste 3 koolstof-atcmen is, met uitzondering van het D-fructosederivaat met R is n-propyl. 2. Alkyl-ketohexopyranosidederivaten volgens conclusie 1, waarin R: n-propyl, isopropyl, n-hutyl, isobutyl, n-pentyl, isopentyl, n-hexyl of isohexyl voorstelt. 3· Geneesmiddel met daarin een in conclusie 1 weergegeven verbinding. 800 2 9 81 1α L Η

1 HO X-ο O-R lb Η / H \[ A \ \H ho/ η J-0 O-R H0,H( ) H I I CH OH l/H \ \H Ηθ/l OH H

2 C / 1-1 CH„OH ττη N HK OH H 2 H0 1-Γ CH_0H OH H * B. Η H λ-0 OH J-0 OH A \ 2 A \ H°,H< ) (rxco) 0 R'C00,h( ) \H HO/ C0'2° \h R*COo/ -( CH OH 1-—f OOCR* OH H OOCR* H * i A H f I-0 . OH k-0 O-R A \ / \ \h ho/ \h ho/ Έ-Ύ ch2oh -f ch-oh OH Η

3 OH H 2 1 H J-0 O-R RX TJtpnn -a / \ NH3 Ag 0 \H R’COO/ in CH OH 2 )-r ch2oocr* J OOCR» H 2 5 H ,\- 0 O-R /H N ho,h ( ; \h ho/ Xj-\ CH OH OH Η Λ 80 0 2 9 81 Hisamitsu Pharmaceutical Co., Ltd.