NL7905141A - Bepaling van triglyceriden alsmede enzymreagentia. - Google Patents
Bepaling van triglyceriden alsmede enzymreagentia. Download PDFInfo
- Publication number
- NL7905141A NL7905141A NL7905141A NL7905141A NL7905141A NL 7905141 A NL7905141 A NL 7905141A NL 7905141 A NL7905141 A NL 7905141A NL 7905141 A NL7905141 A NL 7905141A NL 7905141 A NL7905141 A NL 7905141A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- enzyme reagent
- diaphorase
- glycerol dehydrogenase
- lipase
- present
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/61—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving triglycerides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/90—Developer
- C12Q2326/92—Nitro blue tetrazolium chloride, i.e. NBT
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
- G01N2333/904—Oxidoreductases (1.) acting on CHOH groups as donors, e.g. glucose oxidase, lactate dehydrogenase (1.1)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
*
•v I
X.' < _ VO 7858 ______
American Hospital Supply Corporation Evanston, Illinois Verenigde Staten van Amerika
Bepaling van triglyceriden alsmede enzymreagentia.
De uitvinding betreft een werkwijze voer het bepalen van tri-. ; glyceriden in biologische vloeistoffen volgens een enzymatische reactie^en een reagens voor deze werkwijze.
Ir bestaat behoefte aan een bepaling van serum-triglyeeriden 5 sinds een verband is aangetoond tussen het vetmetabolisme en aandoeningen als atherosclerose, diabetes, hypertensie en een. verhoogd risico voor myocard-infarcten.
De eerste directe methode voer het bepalen van triglyceriden is gepubliceerd in 1957 door Van Handel en Zilversmit(J. Lab. and 10 Clin. MedU 50, Ho. 1, blz. 152). Deze werkwijze gebruikt organische oplosmiddelen voor het extraheren van triglyceriden uit serum en een vaste faseadsorptie ter verwijdering van storerde:'fosfólipiden. Geëxtraheerde triglyceriden worden vervolgens verzeept met KOH waardoor glycerol vrijkant. Dit glycerol wordt geoxideerd met perjodaat 15 tot formaldehyde. Dit laatste wordt gecondenseerd met chrcmotroopzuur waardoor een gekleurd complex ontstaat. Déze basismethode is gemodificeerd, maar bij al deze modificaties is de chemie en de methode in hoofdzaak onveranderd gebleven.
In i960 introduceerde Eggstein (Slin. Wochenschr. hh, blz.
20 262-266) 'eer. gedeeltelijk enzymatische methode voor het bepalen van serum-triglyeeriden. Volgens deze methode wordt het glycerol vrijgesteld door verzepen van triglyceriden gefosforyleerd door adenosine-trifosfaat (ATP) bij aanwezigheid van een ATP-regenererend systeem ondersteund door een fosfoënol-pyruvaatafbraak tot pyrodruivenzuur.
25 Een daaropvolgende reductie van pyrodruivenzuur tot melkzuur door gereduceerd nicotihamideadeninedinucleotide (HADH) wordt spectro-metrisch gevolgd en direct gerelateerd aan de glycerolconcentratie.
In 1973 voerden Bucolo en David (Clin. Chem. 19, blz. hj6-28,2) een totale enzymatische procedure in voor het bepalen van serum- 790 5 1 41 ; ^ . . a- Λ triglyceriden. Bij hem.· methode wordt de alkalische verzeping vervangen door een enzymatische hydrolyse: triglyceriden —>glycerol + vetzuren (FFA)
Het door de enzymatische hydrolyse vrijgestelde glycerol reageert 5 vervolgens volgens de methode van Eggstein. Deze methode vormde een duidelijke verbetering bovenlde zuiver chemische en gedeeltelijk enzymatische methode, maar om de volgende redenen bleef nog veel te wensen over: (a) de aanwezigheid van inwendige blancowaarden; 10 (b) de instabiliteit van gereconstitueerde reagentia; en (c) de noodzaak het tijdsverloop nauwkeurig aan te houden.
Er zijn diverse pogingen gedaan deze nadelen van de methode van Bucolo en David te ecarteren. Deze omvatten b.v. een enzymatische • reactie als beschreven in Frans octrooischrift 2.31*+. *+97· Ih dit 15 Franse octrooischrift worden enzymatische methoden beschreven voor het bepalen van glycerol dat uit triglyceriden is vrijgesteld door een reactie van een oplossing van Rhizcrpus Delemar-lipase enöC-chrymo-trypsine. Het glycerol reduceert daarbij HAD,, terwijl een enkel enzym, glycerol-dehydrogenase (GDH) wordt gebruikt , danwel twee enzymen, 20 ’ glycerolkinase (GK) en glycerol-3-fosfaatdehydrogenase (GFDH). In beide gevallen levert de reactie gereduceerd nicotinamideadenine-dinucleotide (MDH) op, en wel in een hoeveelheid die evenredig is met die van glycerol.
Het hoofddoel van het Franse octrooischrift is een werkwijze 25 voer het bepalen van glycerol die kwantitatief is bij zichtbaar licht.
Er bestaat dus nog steeds behoefte aan een betrouwbare specifieke enzymatische reactie voor het bepalen van triglyceriden in biologische vloeistoffen. Aan deze behoefte kamt de uitvinding tegemoet .
30 De onderhavige werkwijze voor het bepalen van triglyceriden in biologische vloeistoffen wordt uitgevoerd met een enzymatische reactie. Bij deze reactie wordt een biologische vloeistof toegevoegd-aan------ een enzymreagens omvattende een lipase, glyceroldehydrogenase (GDH), pyridinenucleotide (PH), een buffer, een tetrazoliumverbinding en 35 diaforase, waarbij de triglyceriden enzymatisch worden gehydrolyseerd 790 5 1 41 -- 3- en Het resulterende glycerol geoxideerd waarbij een gereduceerd pyridinenucleotide (PU) wordt gevormd, dat op zijn beurt reageert met de tetrazoliumverbinding bij aanwezigheid van de diaforase waardoor een gekleurd formazan ontstaat, waarvan de kleur wordt gemeten bij 5 een golflengte tussen h-75 en 525 nm.
De lipase is een enzym verkregen, uit Chranobacterium viscosum.
In het enzymreagens is ca. 5,0 tot 15,0 I.E./cm g ly eeroldehydrc-genase aanwezig.
De uitvinding gebruikt dus een reagens met enzymen, een tetra-10 zoliumverbinding en pyridinenucleotide voor het bepalen van tri-glyceriden in biologische vloeistoffen.
Volgens een voorkeursuitvoeringsvorm wordt de bepaling uitge-vèerd volgens een enzymatische reactie, waarbij een biologische vloeistof wordt toegevoegd en omgezet met het enzymatische reagens.
15 De biologische-vloeistof kan iedere vloeistof zijn die tri- glyeeriden bevat, zoals serum.
Het enzymatische reagens bevat een lipase, glyceroldehydrogenase, pyridinenucleotide, een buffer, een tetrazoliumverbinding en diaforase.
Bij de reactie van de biologische vloeistof en het enzymatisch 20 reagens worden de triglyceriden enzymatisch gehydrolyseerd en het resulterende glycerol geoxideerd, waarbij een gereduceerd pyridine- nucleotide ontstaat dat met de tetrazoliumverbinding bij aanwezigheid van diaforase een gekleurd formazan doet ontstaan. De kleur wordt als gezegd gemeten bij U75-525 nm, liefst bij ca. 505 nm.
25 . .De totale enzymatische reactievolgorde luidt als volgt: triglyceriden-iJ-=Pa.se7 glycerol + vetzuren (FFA)
GDH
glycerol + PU--—7 dihydroxaceton + EU (gereduceerd) cL"^ OÏ*StS6 PU (gereduceerd) + tetrazoliumverb. —=-^ PU + formazan (kleur)
De lipase heeft tot taak de triglyceriden tot vetzuren en 30 glycerol te hydrolyseren. De triglyceriden volgens de uitvinding moeten daarbij volledig worden gehydrolyseerd. De lipase kan worden gekozen uit de volgende: lipoproteïnelipase (LPL) varkenspancreaslipase, 35 Hhizonus arrhizus-linase 790 5 1 41 & __u » '
Candida cylindracea lipase Pseudcmanas lipase.
De voorkeurslipase is evenwel lipoproteïne-lipase , een enzym verkregen uit. Chrcmobacterium viscosum.
5 De hoeveelheid lipaserii het enzymreagens bedraagt ca. 100 tot
O O
ca. 300 I..E./cm en de voorkeurshoeveelheid 200 I.E./cm .
De glyceroldehydrogenase is de meest critische. component van het enzymatische reagens. Bij de reactie verwijdert glycerol-dehydrogenase een waterstof van glycerol en brengt gelijktijdig het pyri-10 dinenucleotide (PH) in zijn gereduceerde vorm.
Glyceroldehydrogenase is een enzym verkregen uit Enterobacter aerogenes. De hoeveelheid glyceroldehydrogenase in het enzymreagens 3 kan variëren van. 5,0-tot 15,0 I.E./cm met een voorkeurshoeveelheid
O
van 10.0 I.E./cm .
15 Het pyridinenucleotide dats de beste resultaten bij de enzyma tische reactie oplevert is micotinamideadeninedinucleotide (HAD).
Dit nucleotide, oxideert het glycerol verkregen door de hydrolyse van de triglyceriden. Dit glycerol wordt geoxideerd door nicotinamideadeninedinucleotide bij aanwezigheid van glyceroldi-20 hydrogenase waarbij de gereduceerde vorm van ni cotinami de adenine- dinucleotide en dihydroxyaceton ontstaan.
Dit gereduceerde HAD reageert met de tetrazoliumverbinding bij aanwezigheid van diaforase waardoor een gekleurde verbinding wordt gevormd. Bij de enzymatische reactie is dus het nucleotide een nood?: 25 zakelijke waterstofoverdrager tussen glycerol en de tetrazolium verbinding.
De concentratie van het nicotinamideadeninedinucleotide in
O
het enzymreagens kan variëren van ca. 2,5 tot 5,5 mg/cm . De voor- 3 keursconcentratie bedraagt 2,5 mg/cm .
30 De tetrazoliumverbinding in het enzymreagens kan ofwel jood- fenylnitrofenyltetrazoliumchloride (IHT) of nitroblauw-tetrazolium-chloride (EBT) wezen. Deze tetrazoliumverbindingen kernen overeen met de structuurformules 1 en 2 van het formuleblad·.
De tetrazoliumverbinding wordt gereduceerd tot een rood 35 formazan bij een reactie met gereduceerd HAD. Dit rode formazan 790 5 1 41 -.5- - — - ‘ -—- ' · ' i " - - ----— * absorbeert licht bij een golflengte ran ca. 505 am.
De voorkeur stetrazoHumverbinding is j oodfenylnitrofenyltetra-zoliumchloride met formule 1 omdat het een hogere negatieve reduc-tiepotentiaal bezit. De concentratie van de tetrazoliumverbinding
O
5 varieert van. 0,1*5 tot 1,35 mg/cm met een voorkeursconcentratie van
O
ca. 0,90 mg/cm .
Het enzyme diaforase katalyseert de oxidatie van het gereduceerde nicotinamideadeninedinucleotide tot HAD en reduceert gelijkertijd de tetrazoliumverbinding tot een gekleurd formazan.
10 Bethoeveelheid diaforase in het enzymreagens kan variëren van 15 tot 1*5 I.E./cm^ met een. voorkeurshoeveelheid, van ca. 28,5 3 1.3./cm' .
Diaforase is een enzym verkregen uit Clostridium kluyveri.
De enzymen (lipase, GDH en diaforase) van het reagens hebben 15 elk een afzonderlijk. pH-optimum. De pH van. het enzymsysteem moet dus zodanig zijn, dat alle enzymen goed functioneren en het reagens een goede gevoeligheid bezit. Daartoe moet de pH van het reagens zijn gelegen tussen 6,k en 8,0 met een voorkeurswaarde bij ca.
7.6.
20 Ih het enzymreagens kan elke passende bufferuworden ge bruikt, die effectief is voor dit pH-traject van 6,1*· tot 8,0. Sen effectieve buffer is kaliumfosfaat. Andere buffers kunnen eveneens worden gebruikt, met name een triëthanolaminebuffer, een tris-buffer, een imidazooibuffer en. een bicinebuffer.
25 Volgens de uitvinding kan tevens mangaan worden toegeveegd aan de glyceroldehydrogenase cm de reactiespecificiteit te verhogen.
Eet mangaan dat aan de glyceroldehydrogenase wordt teegeveegd kan een concentratie bezitten van 0,05 tot ca. 0,15 mM in het vloeistof substraat. De vcorkeursconcentratie aan mangaan met de glycerol-30 dehydrogenase bedraagt ca. 0,10 mM.
3ij de hydrolyse van de triglyceriden kan een veröumings-middel worden gebruikt, zoals oplossingen van Triton X-100, een oppervlakteactief m-fddeT bereikt door Rohm en Haas, Dit Triton jC-100 is een alkylarylpolyetheralcohol, die wordt gebruikt om de treebsling 35 van de reactie te verminderen. Dit Triton X-100 vermindert de 790 5 1 41
J
6..
o ~ ....... i ' 1 troebeling door het solubiliseren van de tijdens de lipasehydrolyse y van de triglyceriden vrijgestelde vetzuren.
De toevoeging van ca. 0,5 % Triton X—100 aan water vermindert de blanco1 s door troebeling met zeker 1800$. De maximale hoeveelheid 5 aan Triton X-100 bedraagt echter ca. 2,0$, omdat het troebelings-niveau gemeten, bij 660 nm nul is bij. aanwezigheid, van 2$ Triton X-100..
Ook een zuur, zoals zoutzuur-, kan. in het verdunningsmiddel met Triton X-100 worden vervat, om de reactie door denatureren van de 10 enzymen te beëindigen.. Dit zuur solübiliseert tevens formazan.
Gevonden is,, dat alle zuurconcentraties de reactie doen afbreken en een stabiele eindkleur opleveren. De concentratie aan zoutzuur kan zijn gelegen tussen 0,01. en 0,20 mM.. De voorkeurs concentratie bedraagt-0,1. mM.
15 Het volgende, voorbeeld licht de. uitvinding nader toe.
Voorbeeld
Enzymatische procedurea voor een triglyceridebena-ling
Om de effectiviteit van het onderhavige enzymatische procédé te be-oordelendzijn dè ‘karakteristieken, en de trappen van de onderhavige 20 werkwijze vergeleken met die van andere enzymatische procedures.
De onderhavige methode is vergeleken met de methoden volgens: (A) Calbiochem. Amerikaans octrooischrift 3.703.591; (B) Bohringer Mannheim , Amerikaans octrooischrift 3.862.009 en (C) Dow Chemical, Amerikaans octrooischrift k.001.089· 25 De karakteristieken en trappen van de enzymatische procedures zijn opgevoerd in de volgende tabel:
Tabel
Enzymatische procedures bi,i triglyceridebepalingen Karakt eri sti eken ui tv. Calbiochem (A) 30 produkt Tri-ES triglyceriden-glycerolreagens gemeten wordt endogene glycerol endogene-«.glycerol aantal proeven 95 50
principe van de Tri aS-e^ Gly+FFA Tri Gly + FFA
reactie Gly + BAD-? Gly + ATP^ GP + ADP
35 dihydroxyaceton+BADH ADP + PEP^^ATP + Py 790 5 1 41
V
- τ · Λ monstergrootte 20 ^ 50 jal.
reagensbereiding Ij reconstitutessubstraat 3^r ee ons ti tut Ë-jLpasea toevoegen aan gere-constituteerd substraat houder, reconstitutie glycerol-kinase gereconstituteerde substraat J2 u bij 1+°C Alle reagentia
stabiliteit 2h uren bij 2-8°C
aantal reagentia 2 + standaard 3 ^ pipetteren 3 x 3 ς extractie geen. . geen incubatietijd/temp. 1 x 20 min bij 3T°C 3 x, in totaal 33 min.
bij 30°G
tij dsduurbepaling 25 min 38 min 15 golflengte 505 nm 3^0 nm lineariteit T00 mg/dl ^00 mg/dl normaaltraject 50-16T mg/dl mannen bj 168 mg/dl;
vrouwen h-9 ITO
standaard nodig ja nee 2Q opslag ijskast (2-8°C) ijskast (2-8°C) karakteristieken 3oehringer Dow Chemical (C)
Mannheim (B) produkt triglyceriden enzymatisch trigly ceride gemeten wordt endogene glycerol endogene glycerol 25 aantal proeven 2b 100
principe van de reactie Tri Mr.Pase..) Giy+FFA Tri ~1^aSe.-'jly+FFA
Gly + ATP ^TGly-3-fos+ Gly + ATE^ffi5"-·? ADP Xxnase /
gly 1 fos + ADP
ΤΛΤ
ADP + PSP ££MaTP + Py Gly 1 fos + EAD
30 iy + 2IADH ^^>Lac + MD gly 1 fos ^
dehydrogenase dihydroxy-aceton fos + EADH
KADE + IET dl —0I:"5^ formazan + EAD
monstergrcotte 50 y.1 20 ul reagensbereiding Reconstitutie EADH- reconstitutie sub straat 790 5 1 41 _ 8 _ 4 “ " ” " » -TT-· °pi., combineren opl.1,2 en 3 voor test-straat aantal reagentia 3 + standaard
greconstituteerde substraat 8 u bij substraat 2k u bij 1°C
stabiliteit K.T. of 30 u bij ^°C
UADH stabiel 2 weken bij k°C
' pipetteren. U x 3 x extracties 2 x geen ~ incubatietijd/ geen 2 x, in totaal
temperatuur g voor een totaal van 20 min. bij 37°C
; tijd/bepaling 25 min bij Κ.ΠΤ. of 15 min. bij 37°C 25 min eindkleur-stabiliteit 25 min 10 min ' golflengte 3^0 of 566 nm 500 nm lineariteit 580 mg/dl 700 mg/dl normaal traject 72-172 mg/dl 19-167 mg/dl standaard nodig neen ja opslag· ijskast (2-8°C) ijskast. (2-8°C)
Uit deze tabel kan gemakkelijk worden afgeleids dat de uitvinding zeer effectief is en voordelen heeft boven de bekende enzymatische reacties op triglyceriden.
7905141
Claims (30)
1. Werkwijze voor het "bepalen van triglyceriden in biologische vloeistoffen volgens een enzymatische reactie, waarbij een biologische vloeistof wordt toegevoegd aan een enzymreagens omvattende een lipase, glyceroldehydrogenase. (GDH), pyridinenucleotide (EN), een buffer, 5 een tetrazoldunrverbinding en diaforase, waarbij de triglyceriden en zymatisch worden gehydcolyseerd en het vrijgekomen glycerol wordt geoxideerd, waarbij een gereduceerd pyridinenucleotide ontstaat dat met- de tetrazoliumverbinding bij aanwezigheid van de diaforase reageert tot een gekleurd formazan, dat bij een golflengte tussen kJ5 en 10 525 nm. kan warden gemeten.
2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat. de lipase wordt verkregen uit. Chrcmobacterium viscosum.
3. Werkwijze vólgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de glyceroldehydrogenase wordt verkregen uit Eaterobacter aerogenes. 15 li. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de diaforase was verkregen uit Clostridium kluyveri.
5. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de pH van het enzymreagens 6,^-8,0 bedraagt.
6. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk,dat de bio-20 logische vloeistof een serum is.
7· Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat ca. 100-300 O I.E./cm lipase in het enzymreagens aanwezig is.
8. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat ca.5,0-15,0 '3 I.E./cm glyceroldehydrogenase in het enzymreagens aanwezig is. 25 9· Werkwijze volgens conclusie 5, met het kenmerk, &t ca. 0,05-0,15 mM mangaan bij de glyceroldehydrogenase in het enzymreagens aanwezig is.
10. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat ca. 3 2,5-7,5 mg/cm pyridinenucleotide in het enzymreagens aanwezig is.
11. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat O 15,0-115,0 I.E./cm diaforase in het enzymreagens aanwezig is.
12. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat 0,075- 2,0 g/1 tetrazoliumverbinding in het enzymreagens aanwezig is. 790 5 1 41 * - if) - » '
13. Enzymreagens voor het "bepalen, van triglyceriden in "biologische vloeistoffen met daarin een lipase, glyceroldehydrogenase, pyridine-nucleotide, een buffer, een tetrazoliumverbinding en diaforase. ll+- Enzymreagens volgens conclusie 13, met het kenmerk, dat daarin O * 5 100-300 I.E./cm lipase aanwezig is.
15· Enzymreagens volgens conclusie 13, met- het kenmerk, dat daarin 5.0- lJ,0 I.E. glyceroldehydrogenase aanwezig is.
16. Enzymreagens volgens conclusie 13, met het kenmerk,, dat daarin 0,05-0,15 mM mangaan met de glyceroldehydrogenase aanwezig is. 10- 17- Enzymreagens volgens conclusie. 13, met het kenmerk, dat ca. 2.5- 7,5 mg/cm pyridinenuclêotide daarin aanwezig is. 18„ Enzymreagens. volgens conclusie 13, met het kenmerk, dat daarin 15-,0-1+5-,0 I.E'./cm"5 diaforase. aanwezig is.
19- Enzymreagens volgens conclusie 13, met het kenmerk, dat. daarin. 15 0,1+5-1,35 mg/cmJ tetrazoliumverbinding aanwezig is.
20. Enzymreagens voor het bepalen van triglyceriden. in biologische vloeistoffen met daarin een lipase, glyceroldehydrogenase, nicotinamideadeninedinucleotide (HAD), een buffer,, een tetrazolium-verbinding en diaforase.
21. Enzymreagens volgens conclusie 20, met. het kenmerk, dat daarin 100-300 I.E./cm lipase aanwezig, is.
22. Enzymreagens volgens conclusie 20, met het kenmerk, dat daarin 3 5.0- 15,0 I.E./cm glyceroldehydrogenase aanwezig is.
23. Enzymreagens volgens conclusie 20, met het kenmerk, dat daarin 25 0,05-0,15 mM mangaan aanwezig is met de glyceroldehydrogenase. 2l+. Enzymreagens volgens conclusie 20, met het kenmerk,dat daarin 3 2.5- 7,5 mg/cm nicotinamideadeninedinucleotide aanwezig is.
25· Enzymreagens volgens conclusie 20, met het kenmerk, dat daarin 15.0- 1+5,0 I.E./cm diaforase aanwezig is.
26. Enzymreagens volgens conclusie 20, met het kenmerk, dat daarin O 0,1+5-1,35 mg/cnr tetrazoliumverbinding aanwezig is.
27· Enzymreagens voor het bepalen en aantonen van triglyceriden in biologische vloeistoffen met daarin een lipase, glyceroldehydrogenase, nicotinamideadeninedinucleotide, een buffer, joodfenylnitro-35 fenyltetrazoliumchloride (IHT) en diaforase. 790 5 1 41 X. _ 11..
28. Enzymreagens volgens conclusie 27, met het. kenmerk, dat de pH van het reagens ligt tussen 6,U en 8,0.
29- Enzymreagens volgens conclusie 2T, met het kenmerk, dat daarin 3 ca. 100-300 I.E./cm lipase aanwezig is.
30. Enzymreagens volgens conclusie 27, met het kenmerk, dat daarin 3 5,0-15,0 I.E./cm glyceroldehydrogenase aanwezig is.
31. Enzymreagens volgens conclusie 27, met hèt kenmerk, dat daarin 0,05-0,15 mM mangaan aanwezig is met de glyceroldehydrogenase.
32. Enzymreagens volgens conclusie 27, met het kenmerk, dat daarin 3 10 15,0-^5,0 I.E./cm diaforase aanwezig is.
33· Enzymreagens volgens conclusie 27, met het kenmerk, dat daarin *3 · Q,k5—1,35 mg/cn joodf enylnitr of enyltetrazoliumchloride aanwezig is. • 3k. ¥erkwijzer"voor het "bepalen van triglyceriden in biologische vloeistoffen met een enzymatische reactie, waarbij een biologische 15 vloeistof wordt, toegevoegd aan een enzymreagens met daarin, een lipo-proteïnelipase (LPL), glyceroldehydrogenase (GDH) met mangaan, jood-fenylnitr ofenyltetrazoliumchlori de (INT), een buffer, nicotinamide-adeninedinucleotide (NAD) en diaforase, waarbij de triglyceriden enzymatisch worden gebydrolyseerd en. het vrijgekomen glycerol wordt 20 geoxideerd waarbij een gereduceerd nicotinamideadeninedinucletotide wordt gevormd dat met de j oodf enylnitr of enyltetrazoliumchloride reageert bij aanwezigheid van de diaforase waardoor een gekleurd formazan ontstaat, dat wordt gemeten bij een golflengte tussen ^75 en 525 nm. 25 35· werkwijze volgens conclusie 3^, met het kenmerk, dat het iipo- protexnelipase wordt verkregen uit Chrcmobacterium viscosum.
36. Werkwijze volgens conclusie 3^·, met het kenmerk, dat de glyceroldehydrogenase wordt verkregen uit Enterobacter aerogenes.
37· Werkwijze volgens conclusie 3k, met het kenmerk, dat de 30 diaforase wordt verkregen uit Clostridium kluyveri.
38. Werkwijze volgens conclusie 3^, met het kenmerk, dat 5,0-15,0 3 I.E./cm glyceroldehydrogenase in het reagens aanwezig is. 39* Werkwijze volgens conclusie 38, met het kenmerk, dat 0,05-0,15 mM mangaan met de glyceroldehydrogenase in dit enzymreagens aanwezig 35 is. 7905141 _ 12_ * ' < 1+0. Werkwijze, volgens conclusie 3I+, met het kenmerk, dat de pH Tan het enzymreagens. is gelegen tussen 6,1+ en 8,0. 1+1- Werkwijze Tolgens conclusie 3l+, met het kenmerk, dat ca. 3 100-300 I.E./cm lipoproteïnelipase in het enzymreagens aanwezig is. 5 1)-2. Werkwijze volgens conclusie 31)·, met het kenmerk, ddt 2,5-7,5 O mg/cm. nicotinamideadeninedinucleotide in het enzymreagens aanwezig, is. 1+3. Werkwijze volgens conclusie 3^, met het kenmerk, dat 15,0-1+5,0 I.E./cm diaforase in het. enzymreagens aanwezig is. 10 1+1+. Werkwijze volgens conclusie 3l+, met het kenmerk, dat 0,1+5-1,35 •3 mg/cm. joodfenylnitrofenyltetrazoliumchloride. in. het enzymreagens aanwezig' is. 1+5. Werkwijze volgens conclusie 31)·, met. het kenmerk, dat een oplossing van Triton. X-100 wordt toegevoegd om het reactiemengsel 15 te verdunnen en dè troebeling. te verminderen. 1+6.. Werkwijze volgens conclusie 1+5, met het kenmerk, dat 0,5-3,0 vol./? Triton X-100 wordt toegepast. 1+7. Werkwijze volgens conclusie 1+5, met het kenmerk, dat tezamen met het*Triton X-100 een zuur wordt toegevoegd.om de reactie 20 af te breken. 1+8. Werkwijze volgens conclusie 1+7, met het kenmerk,, dat het zuur zoutzuur is. 1+9. Werkwijze volgens conclusie 1+8, met het kenmerk, dat 0,01-0,2 mM HC1 wordt gebruikt. 790 5 1 41 4 » CM O Z Ó'° ~ +z=:z § I o° S\V y n . u> Φ T _ + -z I \ -^= 1 ^°· ~ O'- Y u OJ o z American Hospital Supply Corporation 790 5 1 41
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US92452878 | 1978-07-13 | ||
| US05/924,528 US4223090A (en) | 1978-07-13 | 1978-07-13 | Reagents for the enzymatic determination of triglycerides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL7905141A true NL7905141A (nl) | 1980-01-15 |
Family
ID=25450330
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL7905141A NL7905141A (nl) | 1978-07-13 | 1979-07-02 | Bepaling van triglyceriden alsmede enzymreagentia. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4223090A (nl) |
| EP (1) | EP0016799A1 (nl) |
| BE (1) | BE877709A (nl) |
| CA (1) | CA1136973A (nl) |
| ES (1) | ES482455A1 (nl) |
| NL (1) | NL7905141A (nl) |
| WO (1) | WO1980000260A1 (nl) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1190223A (en) * | 1977-11-01 | 1985-07-09 | Anthony C. Richardson | Substrates for enzymes |
| FR2449726A1 (fr) * | 1979-02-22 | 1980-09-19 | Millipore Corp | Composition a base de lipases bacteriennes et son application a l'hydrolyse et au dosage d'un ester de glycerol |
| US4399218A (en) * | 1980-02-05 | 1983-08-16 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method and reagent for the determination of glycerin |
| DE3162798D1 (en) * | 1980-07-22 | 1984-04-26 | Baker Instr Corp | A triglyceride analysis composition and a method for triglyceride determination |
| IT1157281B (it) * | 1981-06-25 | 1987-02-11 | Toyo Jozo Kk | Metodo di saggio per un componente relativo ai lipidi, composizione per il saggio e procedimento per la produzione dell'enzima utilizzato allo scopo |
| JPS58129994A (ja) * | 1982-01-27 | 1983-08-03 | Toyo Jozo Co Ltd | 高感度測定法 |
| JPS59140900A (ja) * | 1983-01-28 | 1984-08-13 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規な酵素的高感度測定法 |
| DE3311027A1 (de) * | 1983-03-25 | 1984-09-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Nad(p)-unabhaengige glycerindehydrogenase, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung zur bestimmung von glycerin und triglyceriden |
| JP2533236B2 (ja) * | 1990-11-20 | 1996-09-11 | ユニチカ株式会社 | カルシウムイオン測定用試薬 |
| GB2261729A (en) * | 1991-10-11 | 1993-05-26 | Ashutosh Sharma | Method and optical probe for the determination of reduced nicotinamide adenine dinucleotide in a sample |
| AU666821B2 (en) * | 1993-08-05 | 1996-02-22 | Bayer Corporation | Analyte detection device and process |
| ATE389052T1 (de) * | 2001-04-20 | 2008-03-15 | Enzymatic Deinking Technologie | Triglycerid-schnellbestimmungsverfahren zur anwendung bei der verhinderung von pechausscheidungen aus pulpen |
| GB0803850D0 (en) * | 2008-02-29 | 2008-04-09 | London School Hygiene & Tropical Medicine | Assay |
| CN103602718A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-02-26 | 天津市宝坻区人民医院 | 血清中甘油三酯的甘油脱氢酶测定方法 |
| MX2018012485A (es) | 2016-04-13 | 2019-08-14 | Polymer Technology Systems Inc | Sistemas y metodos para ensayos para trigliceridos electroquimicos. |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2101796A1 (de) * | 1970-01-21 | 1971-08-05 | Baxter Laboratories Inc | Verfahren zur Bestimmung von Tnglycenden im Blutserum |
| US3703591A (en) * | 1970-12-16 | 1972-11-21 | Calbiochem | Triglyceride hydrolysis and assay |
| CA1030436A (en) * | 1974-03-20 | 1978-05-02 | William S. Stavropoulos | Method for determination of triglycerides and glycerol |
| JPS5169691A (en) * | 1974-06-07 | 1976-06-16 | Iatron Lab | Ketsuseichuno chuseishibosokuteiyoshaku |
| US4056422A (en) * | 1975-06-06 | 1977-11-01 | General Binding Corporation | Two stage oven laminator method |
| AT354406B (de) * | 1975-08-12 | 1979-01-10 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung von triglyceriden |
| DE2831580C2 (de) * | 1978-07-18 | 1980-09-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Glycerin |
| US4242446A (en) * | 1978-07-26 | 1980-12-30 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a substance in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
-
1978
- 1978-07-13 US US05/924,528 patent/US4223090A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-05-18 WO PCT/US1979/000341 patent/WO1980000260A1/en unknown
- 1979-06-27 CA CA000330676A patent/CA1136973A/en not_active Expired
- 1979-07-02 NL NL7905141A patent/NL7905141A/nl not_active Application Discontinuation
- 1979-07-12 ES ES482455A patent/ES482455A1/es not_active Expired
- 1979-07-13 BE BE0/196309A patent/BE877709A/xx not_active IP Right Cessation
-
1980
- 1980-02-25 EP EP79900838A patent/EP0016799A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4223090A (en) | 1980-09-16 |
| ES482455A1 (es) | 1980-09-01 |
| EP0016799A4 (en) | 1980-10-09 |
| EP0016799A1 (en) | 1980-10-15 |
| CA1136973A (en) | 1982-12-07 |
| BE877709A (fr) | 1979-11-05 |
| WO1980000260A1 (en) | 1980-02-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Klotzsch et al. | Triglyceride measurements: a review of methods and interferences | |
| US7883862B2 (en) | Diglyceride solutions for lipase activity determination | |
| EP0080304B1 (en) | Stabilization of oxidase | |
| NL7905141A (nl) | Bepaling van triglyceriden alsmede enzymreagentia. | |
| JP5129572B2 (ja) | 生体試料中の２項目の測定対象物の同時分別定量方法 | |
| CS228127B2 (en) | Reagencni cinidlo | |
| Noma et al. | Polarographic method for rapid microdetermination of cholesterol with cholesterol esterase and cholesterol oxidase. | |
| US6986998B2 (en) | Method of analyzing components in biological samples | |
| JP4861005B2 (ja) | リパーゼ活性測定用組成物および活性測定法 | |
| US4565780A (en) | Method for determination of cholinesterase activity | |
| US5559003A (en) | Assay method for biological components | |
| FR2540137A1 (fr) | Procede tres sensible d'analyse quantitative enzymatique | |
| JP2000287700A (ja) | 試料中のリパーゼ活性値、コレステロール濃度、中性脂肪濃度の測定方法。 | |
| JP2007306821A (ja) | リパーゼ活性測定用組成物および活性測定法 | |
| JPH0452119B2 (nl) | ||
| JPH07303497A (ja) | 生体成分の測定方法および測定用試薬組成物 | |
| JPS6123998B2 (nl) | ||
| RU1788466C (ru) | Способ определени холестерина | |
| JP2562882B2 (ja) | 生体成分測定用試薬の安定化法 | |
| JP3357667B2 (ja) | 物質の測定法 | |
| JP2643205B2 (ja) | 高感度比色定量法 | |
| Peinado et al. | Enzymatic determination of cholesterol, L-amino acids and linoleic acid with a novel redox indicator system | |
| JPH1146795A (ja) | 酸化酵素含有分析用試薬 | |
| JP2663257B2 (ja) | 生体成分測定用試薬の安定化方法 | |
| JPH08293A (ja) | カルシウムイオン測定方法および組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| CNR | Transfer of rights (patent application after its laying open for public inspection) |
Free format text: MERCK PATENT GESELLSCHAFT MIT BESCHRAENKTER HAFTUNG |
|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BV | The patent application has lapsed |