MXPA98007442A - Profarmacos de paclitaxel solubles en agua - Google Patents

Abstract

Se describen composiciones solubles en agua de paclitaxel, y docetaxel formados conjugando el paclitaxel o docetaxel a un quelante soluble en agua, glicol de polietileno o polímero tal comoácido poli-1-glutámico oácido poli-1-aspártico. También se describen métodos para utilizar las composiciones para el tratamiento de tumores, trastornos autoinmunes tales como artritis reumatoide y para la predicción de la absorción de paclitaxel por tumores y formación de imágenes de tumores de DTPA-paclitaxel radiomarcados. Otras modalidades incluyen el revestimiento de masas de Stent implantables para la prevención de restenosis.

Description

PROFÁRMACOS DE PACLITAXEL SOLUBLES EN AGUA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere generalmente a los campos de composiciones farmacéuticas que serán utilizadas en el tratamiento de cáncer, enfermedades autoinmunes y restenosis. La presente invención también se refiere ai campo de preparaciones farmacéuticas de agentes anticancerígenos tales como paclitaxel (Taxol) y docetaxel (Taxotere), en particular formando paclitaxel soluble en agua conjugando el fármaco con porciones solubles en agua. ANTECEDENTE DE LA INVENCIÓN El paclitaxel , un agente anti-microtubular extraído de agujas y corteza de árbol de tejo del Pacífico, Taxus brevifolia, ha mostrado un efecto notorio anti-neoplástico en cáncer humano en estudios en Fase I y ensayos tempranos en Fase II y I I I (Horwitz y otros, 1993) .

Ha reportado principalmente cáncer de ovario y mama avanzados. Se ha documentado la actividad significativa en cáncer de pulmón de células pequeñas y células no pequeñas , cánceres de cabeza y cuello y en melanoma metastático . Sin embargo, una dificultad principal en el desarrollo de paclitaxel para su uso en ensayos clínicos ha sido su insolubilidad en agua. El docetaxel se produjo semisintéticamente de 10-desacetil bacatina II I , un precursor no citotóxico extraído de las agujas de Taxus baccata y esterificado con una cadena lateral sintetizada químicamente (Cortes and Pazdur, 1995) . Se ha mostrado que varias líneas celulares de cáncer, incluyendo cánceres de mama, pulmón y colorectal y melanomas, responden a docetaxel. En ensayos clínicos en docetaxel se ha utilizado para lograr respuestas completas o parciales en cánceres de mama, ovarios, cabeza y cuello, y 5 melanoma maligno. Paclitaxel normalmente se formula como una solución concentrada que contiene 6 mg de paclitaxel por mililitro de Cremophor EL (aceite de ricino polioxietilado) y alcohol deshidratado ? (50% v/v) y además se debe diluir antes de la administración (Goldspiel, 1994). La cantidad de Cremophor EL necesaria para suministrar las dosis requeridas de paclitaxel es significativamente superior que la administrada con otro fármaco que se fórmula en Cremophor. Varios efectos tóxicos severos se han atribuido a Cremophor, incluyendo vasodilatación , disnea e hipotensión . Este vehículo también ha mostrado que ocasiona seria hipersensibilidad en animales de laboratorio y seres humanos (Weiss y otros, 1990) . fr De hecho, la dosis máxima de paclitaxel que se puede administrar en ratones por inyección i.v. al bolo se dicta por la toxicidad letal aguda del vehículo de Cremophor (Eiseman y otros, 1994). Además, se sabe que el Cremophor EL, un agente tensoactivo. lixivia plastificantes de ftalato tales como ftalato de di(2-etilhexilo) (DEH P por sus siglas en inglés) de las bolsas de cloruro de polivinilo y tubos de administración intravenosa . Se sabe que DEHP ocasiona hepatotoxicidad en animales y es carcinogénico en roedores . Esta preparación de paclitaxel también ha mostrado formar materia en partículas con el tiempo y por lo tanto la filtración es necesaria durante la administración (Goldspiel, 1994) . Por lo tanto, son necesarias las provisiones especiales para la preparación y administración de soluciones de paclitaxel para asegurar el suministro seguro del fármaco a pacientes y estas provisiones inevitablemente conducen a costos superiores. Los intentos previos para obtener paclitaxel soluble en agua han incluido la preparación de profármacos de paclitaxel colocando porciones solubilizantes tales como succinato y aminoácidos en el grupo 2'-hidroxilo o en la posición 7-hidroxilo (Deutsch y otros (1989; Mathew y otros, 1992). Sin embargo , no se ha probado que estos profármacos sean químicamente estable lo suficiente para su desarrollo. Por ejemplo, Deutsch y otros, (1989) reportan un derivado de 2'-succinato de paclitaxel , pero la solubilidad del agua de la sal de sodio únicamente es de aproximadamente 0.1 % y las sales de trietanolamina y N-metilglucamina fueron solubles solamente al 1 % . Además, los esteres de aminoácidos se reportan como inestables. Se reportaron resultados simi lares por Mathew y otros (1992) . Greenwaid y otros, reportaron la síntesis de esteres de glicol de 2' y 7'-polietileno de taxol altamente solubles en agua (Greenwaid y otros, 1994), sin embargo, no se reportaron datos en referencia a ia actividad antitumoral in vivo de estos compuestos (Greenwaid y otros, 1995). Otros intentos para resolver estos problemas, han implicado la microencapsulación de paclitaxel tanto en liposomas como nanoesferas (Bartoni and Boitard, 1990). La formulación de liposomas se reportó por ser efectiva como paclitaxel libre , sin embargo, solamente las formulaciones y liposomas que contienen menos del 2% de paclitaxel fueron físicamente estables (Sharma and Straubinger, 1994). Desafortunadamente, la formulación de nanoesferas probó que es tóxico. Por lo tanto, aún existe la necesidad de una formulación de paclitaxel soluble en agua que pueda suministrar cantidades efectivas de paclitaxel y docetaxel sin las desventajas ocasionadas por la insolubilidad del fármaco. Otro obstáculo del uso de difundido de paclitaxel son los recursos limitados a partir de los cuales se produce paclitaxel , ocasionando que la terapia con paclitaxel sea costosa. Por ejemplo , un curso de tratamiento puede costar varios miles de dólares. También existe la desventaja adicional de que no todos los tumores responden a la terapia con paclitaxel , y esto puede ser debido a que el paclitaxel no se introduce al tumor. Por lo tanto , existe una necesidad inmediata de formulaciones efectivas de paclitaxel y fármacos relacionados que sean solubles en agua con vidas de almacenamiento en suero largas para tratamiento de tumores , enfermedades autoinmunes tales como artritis reumatoide, así como para la prevención de restenosis de vasos sujetos a traumas , tales como angioplasía e implantes de masas de Stent. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención busca superar estos y otros inconvenientes inherentes en la técnica anterior proveyendo composiciones que comprenden un fármaco quimioterapéutico y antiangiogénico, tal como paclitaxel o docetaxel conjugado con un polímero soluble en agua tal como, por ejemplo, un ácido poliglutámico o un ácido poliaspártico, o a un quelante metálico soluble en agua. En la presente se muestra que estas composiciones son sorprendentemente efectivas como agentes anti-tumorales contra modelos tumorales ilustrativos y se espera que por lo menos sean tan efectivas como paclitaxel o docetaxel contra cualquiera de las enfermedades o condiciones para los cuales se conocen efectivos los taxano o taxoides. Las composiciones de la invención proveen taxoides solubles en agua para superar los inconvenientes asociados con la insolubilidad de los propios fármacos, y también proveen las ventajas de liberación controlada de manera que los tumores mostrados en la presente se erradiquen en modelos animales después de una sola administración intravenosa. Los métodos descritos en la presente también se pueden utilizar para formar conjugados de polímeros solubles en agua de otros agentes terapéuticos, agentes de contraste y fármacos, incluyendo etopsidos, teniposidos, fludarabina, doxorubicina, daunomicina, emodina, 5-fluorouracilo, FUDR, estradíol, camptotecina, ácidos retinoicos, verapamil, epotilones y ciclosporina. En particular, aquellos agentes con un grupo hidroxilo libre podrían conjugarse con los polímeros mediante reacciones químicas similares como se describe en la presente para paclitaxel. Dicha conjugación podría estar dentro de la experiencia de un practicante de rutina de la técnica química, así como podría caer dentro del alcance de la invención reclamada. Aquellos agentes podrían incluir, pero no estar limitados a, etopsido, teniposido, camptotecina y los epotilones.

Como se usa en la presente, conjugado a un polímero soluble en agua significa la unión covalente del fármaco al polímero o quelante. También se entiende que los conjugados solubles en agua de la presente invención se pueden administrar junto con otros fármacos, incluyendo otros fármacos anti-tumorales o anti-cancerígenos. Dichas combinaciones se conocen en la técnica. El paclitaxel o docetaxel soluble en agua de la presente invención, en ciertos tipos de tratamiento, se puede combinar con un fármaco de platino, un antibiótico tal como doxorubicina o daunorubicina, por ejemplo, u otros fármacos que se utilizan en combinación con Taxol. La conjugación de fármacos quimioterapéuticos a polímeros es un enfoque atractivo para reducir toxicidad sistémica y mejorar el índice terapéutico. Los polímeros con masa molecular más grande a 30 kDa no se difunden fácilmente a través de capilares normales y endotelio glomerular, privando así al tejido normal de toxicidad mediada por fármaco ¡rrelevante (Maeda and Matsumura, 1989; Reynolds, 1995). Por otro lado, se establece bien que los tumores malignos con frecuencia tienen endotelio capilar desordenado y mayor permeabilidad que la vasculatura de tejido normal (Maeda and Matsumura, 1989; Fidler y otros, 1987). Por lo tanto, un conjugado de fármaco de polímero que podría permanecer normalmente en la vasculatura puede derramarse selectivamente de los vasos sanguíneos en tumores, dando como resultado la acumulación tumorai del fármaco terapéutico activo. Adicionalmente, los conjugados de polímero-fármaco pueden actuar como depósitos del fármaco para liberación sostenida, produciendo exposición de fármaco prolongada a células tumorales. Finalmente, los polímeros solubles en agua se pueden utilizar para estabilizar fármacos, así como para solubilizar otros compuestos insolubles. En la actualidad, una variedad de polímeros sintéticos y naturales se han examinado para su capacidad de aumentar el suministro de fármaco específico para el tumor (Kopecek, 1990, Maeda and Matsumura, 1989). Sin embargo, solamente unos cuantos actualmente se someten a evaluación clínica, incluyendo SMANCS en Japón y HPMA-Dox en el Reino Unido (Maeda, 1991; Kopeckova, 1993). En la presente descripción, se entiende que un taxoide significa aquellos compuestos que incluyen paclitaxel y docetaxel y otros químicos que tienen el esqueleto de taxano (Cortes and Pazdur, 1995), y se pueden aislar de fuentes naturales tales como el árbol de tejo, o de cultivo celular, o moléculas químicamente sintetizadas, y se prefiere un químico de la fórmula química general, C 7H51 NO14, incluyendo, éster 6, 12b,bis(acetiloxi-12-(benzoiloxi)-2a, 3, 4, 4a, 5, 6, 9,10,11 , 12, 12a, 12b-dodecahidro-4, 11-dihidroxi-4a- 8,13,13-tetrametil-5-oxo-7,11 -metano- 1 H-ciclodeca[3,4]benz-[1,2-b)oxet-9-ilo del ácido [2aR-[2aa- 4ß,4aß,9a(aR*,ßS*),11a,12a,12aa,12ba,]]-ß-(Benzoilamino)-a-hidroxibencenpropánoico. Se entiende que paclitaxel y docetaxel son cada uno más efectivos que el otro contra ciertos tipos de tumores y que en la práctica de la presente invención, aquellos tumores que son más susceptibles a un toxoide particular, podrían tratarse con el conjugado de taxoide soluble en agua. 5 En las modalidades en las cuales se conjuga el paclitaxel a un quelante metálico soluble en agua, la composición además puede comprender un ion metálico quelatado. El ion metálico quelatado de la presente invención puede tener cualquier forma iónica de uno de aluminio, boro, calcio, cromo, cobalto, cobre, disprosio, erbio, europio, gadolinio, galio, germanio, holmio, indio, iridio, fierro, magnesio, manganeso, níquel, platino, renio, rubidio, rutenio, samario, sodio, tecnecio, talio, estaño, itrio o zinc. En ciertas modalidades preferidas, el ion metálico quelatado será un radionúclido, es decir, un isótopo radioactivo de uno de los metales listados. Los radionúclidos preferidos incluyen, pero no están limitados a, 67Ga, 68Ga, 111ln, 99mTc, 90Y, 114mln y 193mPt. Los quelantes solubles en agua preferidos que serán utilizados en la práctica de la presente invención incluyen, pero no están limitados a, ácido dietilentriaminapentaacético (DTPA), ácido etilendiaminatetraacético (EDTA), 1 ,4,7, 10-tetraazaciclododecano- N,N\N",N"'-tetracetato (DOTA), ácido tetraazaciclotetradecano- N,N\N",N"'-tetracético (TETA), difosfato de hidroxietilideno (HEDP), ácido dimercaptosuccinico (DMSA), ácido dietilentriaminatetrametilenfosfónico (DTTP) y ácido 1-(p- 25 aminobencil)-DTPA, ácido 1,6-diamino hexan- N,N,N',N'-teraacético 9f DPDP y ácido etilenbis(oxietilenonitrilo)-tetraacético, el DTPA siendo el más preferido. Una modalidad preferida de la presente invención también puede ser una composición que comprende '"in-DTPA- paclitaxel. 5 En ciertas modalidades de la presente invención, el paclitaxel o docetaxel se pueden conjugar con un polímero soluble en agua y preferiblemente el polímero se conjuga con 2' o 7-hidroxiio o ambos del paclitaxel o docetaxel. Por lo tanto, cuando los grupos I? funcionales se utilizan para la conjugación de fármacos, como antes con el C2'-hidroxilo de paclitaxel, se utiliza una ligadura degradable, en este caso, un éster, para asegurar que el fármaco activo se libere de vehículo polimérico. Los polímeros preferidos incluyen, pero no están limitados a, glicol de polietileno, ácido poli-1-glutámico, ácido poli-d-glutámico, ácido poli-d1-glutámico, ácido poli-1-aspártico. ácido poli-d-aspártico, ácido poli-d1-aspártico, glicol de polietileno. copolímeros de los poliaminoácidos listados antes con glicol de - polietileno, policaprolactona, ácido poliglicólico y ácido poiiláctico. así como ácido poliacríiico, poli-2-hidroxietil 1-glutamina. carboximetil dextrano, ácido hialurónico, albúmina de suero humana y ácido algínico con glicol de polietileno, los ácidos poliaspárticos y ácidos poliglutámicos siendo los más particularmente preferidos Los ácidos poliglutámicos o ácidos poliaspárticos de la presente invención preferiblemente tienen un peso molecular de aproximadamente 5,000 a alrededor de 100,000 con aproximadamente 20,000 a alrededor de 80.000, o aún aproximadamente 30, 000 a alrededor de 60,000 siendo más preferidos. Se entiende que las composiciones de la presente invención pueden estar dispersas en un vehículo farmacéuticamente aceptable 5 como se describe más adelante. Dicha solución podría ser estéril o aséptica y puede incluir agua, soluciones reguladoras de pH , agentes isotónicos u otros ingredientes conocidos por aquellos con experiencia ordinaria en la materia, que podrían ocasionar una reacción no alérgica o dañina cuando se administran a un sujeto animal o humano. Por lo tanto, la presente invención también se puede describir como una composición farmacéutica que comprende un fármaco quimioterapéutico o anti-cancerígena tal como paclitaxel o docetaxel conjugado a un polímero soluble en agua de peso molecular alto o a un quelante. La composición farmacéutica puede incluir glicol de polietileno, ácidos poliglutámicos, ácidos poliaspárticos o un quelante, preferiblemente DTPA. También se entiende que se puede utilizar un radionúclido como un agente anti- tumoral o fármaco, y que la presente com posición farmacéutica pueda incluir una cantidad terapéutica de un isótopo radioactivo quelado. En ciertas modalidades, la presente invención se puede describir como un método para determinar la absorción de un fármaco quimioterapéutico tal como paclitaxel o docetaxel por el tejido tumoral. Este método puede comprender la obtención de un conjugado del fármaco y un quelante metál ico con un ion metálico quelado, poniendo en contacto el tejido tumoral con la composición y detectando la presencia del ion metálico quelado en el tejido tumoral indica la absorción por el tejido tumoral . El ion metálico quelado puede ser un radionúclido y la detección puede ser mediante el registro gráfico de centelleo. El tejido tumoral también puede contenerse en un animal o un sujeto humano y la composición podría entonces administrarse al sujeto. La presente invención también se puede describir en ciertas modalidades como un método para tratar cáncer en un sujeto. Este método incluye obtener una composición que comprende un fármaco quimioterapéutico tal como paclitaxel o docetaxel conjugado a un polímero soluble en agua o quelante y dispersarse en una solución farmacéuticamente aceptable y administrar la solución al sujeto en una cantidad efectiva para tratar el tumor. Las composiciones preferidas comprenden paclitaxel o docetaxel conjugado a ácidos poliglutámicos o ácidos poliaspárticos y más preferiblemente a ácido poli-1 -glutámico o ácido poli-1 -aspártico. Se entiende que las composiciones de la invención son efectivas contra cualquier tipo de cáncer para el cual se muestra que el taxoide no conjugado es efectivo y podría inclui r, pero no está limitado a , cáncer de mama, cáncer de ovario, melanoma maligno, cáncer de pulmón , cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de cabeza y cuello o leucemia. El método para tratar un tumor puede inclui r alguna predicción de la absorción de paclitaxel o docetaxel en el tumor antes de adm inistrar una cantidad terapéutica dei fármaco o profármaco. Este método puede incluir cualquiera de las técnicas de formación de * imágenes tratada antes en la cual se administra a un sujeto un paclitaxel, quelante, metal quelado y se detecta en un tumor. Este paso provee una forma de costo efectivo para determinar que no se 5 podría esperar que un tumor particular responda a terapia de DTPA- paclitaxel en aquellos casos en donde el fármaco no entra al tumor. Se contempla que si una técnica de formación de imágenes se puede utilizar para predecir la respuesta de paclitaxel y para identificar pacientes que probablemente no responden, se puede ahorrar mayor 10 gasto y tiempo crucial para el paciente. La suposición es que si no hay una cantidad razonable de agente quimioterapéutico depositada en el tumor, la probabilidad de respuesta del tumor a ese agente es relativamente pequeña. En ciertas modalidades, la presente invención puede describirse como un método para obtener una imagen del cuerpo de un sujeto. La imagen del cuerpo se obtiene administrando una cantidad efectiva de un ion metálico radioactivo quelado a un conjugado de paclitaxel-quelante conjugado a un sujeto y midiendo las señales del registro gráfico de centelleo del metal radioactivo para obtener una imagen. La presente invención también se puede describir en ciertos aspectos amplios como un método para disminuir por lo menos un síntoma de una enfermedad autoinmune sistémica que comprende administrar a un sujeto que tiene una enfermedad autoinmune sistémica, una cantidad efectiva de una composición que comprende paclitaxel o docetaxel conjugado con ácido poli-1-glutámico o ácido * poli-1-aspártico. De interés particular en el contexto de la presente descripción es el tratamiento de artritis reumatoide, que se sabe que responde en algunos casos a taxol cuando se administra en la 5 formulación normal de Cremophor (Patente de E.U.A. número 5,583,153). Como en el tratamiento de tumores, se contempla que la efectividad de los taxoides solubles en agua de la presente invención no se disminuirá por la conjugación de una porción soluble en agua, y que el profármaco soluble en agua puede actuar como una 10 formulación de liberación controlada que libera el fármaco activo durante un tiempo. Por lo tanto, se espera que las composiciones de la presente invención sean tan efectivas como Taxol contra artritis reumatoide, por ejemplo, pero ofrecerán la ventaja de una liberación controlada. También se entiende que las composiciones de taxoide de la presente invención se pueden utilizar en combinación con otros fármacos, tales como un inhibidor de angiogénesis (AGM-1470 (Oliver y otros, 1994) o metotrexato. El hallazgo de que el paclitaxel también inhibe restenosis bajo angioplastía de globo indica que los placitaxeles y docetaxeles solubles en agua de la presente invención encontrarán una variedad de aplicaciones más allá de la administración parenteral directa (WO 9625176). Por ejemplo, se contempla que el paclitaxel soluble en agua será útil como un revestimiento para dispositivos médicos implantados, tales como tubos, derivadores, catéteres, implantes artificiales, pasadores, implantes eléctricos tales como marcapasos y especialmente para masa de Stent arterial o venoso, incluyendo * masa de Stent explandible por globo. En estas modalidades, se contempla que el paclitaxel soluble en agua puede unirse a un dispositivo médico implantable, o alternativamente el paclitaxel 5 soluble en agua pueda absorberse pasivamente a la superficie del dispositivo ¡mplantable. Por ejemplo, las masas de Stent pueden estar revestidas con conjugados de polímero-fármaco sumergiendo las masas de Stent en solución de polímero-fármaco o rociando las masas de Stent con dicha solución. Los materiales adecuados para el dispositivo ¡mplantable deberían ser biocompatibles y no tóxicos y pueden ser elegidos de los metales tales como aleaciones de níquel- titanio, acero o polímeros biocompatibles, hidrogeles, poliuretanos, polietilenos, copolímeros de acetato de etilenvinilo, etc. En una modalidad preferida el paclitaxel soluble en agua, especialmente un conjugado de PG-paclitaxel, se reviste en una masa de Stent para su inserción en una arteria o vena siguiendo la angioplastía de globo. La invención, por lo tanto, puede ser descrita en ciertos aspectos amplios como un método para inhibir restenosis arterial u oclusión arterial siguiendo trauma vascular comprendiendo la administración a un sujeto que necesita del mismo, una composición que comprende paclitaxel o docetaxel conjugado a ácido poli-1-glutámico o ácido poli-1-aspártico. En la práctica del método, el sujeto puede ser un paciente por ejemplo, de conducto de coronaria, cirugía vascular, transplante de órgano o angioplastía coronaria o arterial, y la composición puede administrarse directamente, intravenosamente, o aún revestirse sobre una masa de Stent y la masa de Stent se * implanta si hay signos de trauma vascular. En una modalidad de la invención, por lo tanto, es un dispositivo médico ímplantable, en donde el dispositivo se reviste 5 con una composición que comprende paclitaxel o docetaxel conjugado a ácidos poliglutámicos o ácidos poliaspárticos en una cantidad efectiva para inhibir proliferación de células de músculo liso. Un dispositivo preferido es una masa de Stent revestida con las composiciones de la invención como se describe en la presente, y en ciertas modalidades preferidas, la masa de Stent se adapta para ser utilizada después de la angioplastía de globo y el revestimiento es efectivo para inhibir restenosis. En ciertas modalidades preferidas, la invención se puede describir como una composición que comprende ácidos poliglutámicos conjugados al 2' o 7-hidroxilo o ambos de paclitaxel, o aún una composición que comprende ácido poliaspártico conjugado £?* al 2' o 7-hidroxilo o ambos de paclitaxel. Como se utiliza en ia presente, los términos "ácido poliglutámico" o "ácidos poliglutámicos" incluyen ácido poli-1-glutámico, ácido poli-d-glutámico y ácido pol i- 20 d1-glutámico y los términos "ácido poliaspártico" o "ácidos poliaspárticos" incluyen ácido poli-1-aspártico, ácido poli-d-aspártico y ácido-d1-aspártico. A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado como se entendió comúnmente por alguien con experiencia en la materia a la cual pertenece esta invención. Aunque cualesquiera métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos descritos en la presente se pueden utilizar en ia práctica o prueba de la presente invención, ahora se describen los métodos y 5 materiales preferidos. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS FIGURA 1A. Estructura química de paclitaxel, PEG-paclitaxel y DTPA-paclitaxel. FIGURA 1B. Estructura química y esquema de reacción para la 10 producción de PG-paclitaxel. FIGURA 2. Efecto de paclitaxel, PEG-paclitaxel y DTPA- paclitaxel sobre la proliferación de células de melanoma B16. FIGURA 3. Efecto antitumoral de DTPA-paclitaxel sobre tumores mamarios de MCa-4. 15 FIGURA 4. Tiempo medio (días) para alcanzar el diámetro del tumor de 12 mm después del tratamiento con paclitaxel, DTPA- paclitaxel y PEG-paclitaxel. FIGURA 5. Registros gráficos de centelleo gama de ratones que tienen tumores de MCa-4 después de inyección intravenosa de plln-20 DTPA-paclitaxel y '"in-DTPA. La flecha indica el tumor. FIGURA 6. Degradación hidrol ítica de PG-paclitaxel según se determinó en PBS a pH 7.4 a 37°C. --D-- representa porcentaje de paclitaxel que permanece unido a PG soluble, --?-- representa porcentaje de paclitaxel liberado, --O-- representa el porcentaje de matabolito-1 producido.

™ FIG U RA 7A. El efecto antitumoral de PG-paclitaxel sobre ratas que tiene tumor de mama de murino (13762F). --D-- representa la respuesta de una sola dosis de i.v. de PG (0.3 g/kg); -?- representa la respuesta al paclitaxel (40 mg/kg) , -O- representa la respuesta a PG-paclítaxel (60 mg equiv. Paclitaxel/kg) . FIG U RA 7B. El efecto antitumoral de PG-paclitaxel y pacl itaxel sobre ratones que tienen tumores OCa- 1 . -D- representa la respuesta a una sola dosis de i.v. de PG (0.8 g/kg); --?-- representa la respuesta a paclitaxel (80 mg/kg), -•- representa la respuesta a 10 PG-paclitaxel (80 mg equiv. Paclitaxel/kg) , -O- representa respuesta a PG-paclitaxel (160 mg equiv. Paclitaxel/kg) . FIG U RA 7C. El efecto antitumoral de PG-paclitaxel sobre ratones que tienen tumores de carcinoma mamario MCa-4. -D- representa la respuesta a una solados de i . v. de solución salina, -?- 15 representa la respuesta a una sola dosis de i . v. de PG (0.6 g/kg) ; - + - representa la respuesta a PG-paclitaxel (40 mg/kg) , -0- representa la respuesta a PG-paclitaxel (60 mg equiv. Paclitaxel/kg), -O- representa la respuesta a PG-paclitaxel (120 mg/kg). FIGU RA 7D. El efecto antitumoral de PG-paclitaxel contra 20 tumor de sarcoma de tejido blando (FSa-l l) en ratones . -D- representa la respuesta a una sola dosis de i . v. de solución salina, - 0- representa la respuesta a una sola dosis de i. v. de PG (0.8 g/kg) ; -O- representa la respuesta a paclitaxel (80 mg/kg) , -?- representa repuesta PG-paclítaxel (160 mg equiv. Paclitaxel/kg) .

FIGURA 7E. El efecto antitumoral de PG-paclitaxel contra tumor de hepatocarcinoma singénico (HCa-l) en ratones. -D- representa la respuesta a una sola dosis de i.v. de solución salina, -?- representa la repuesta a una sola dosis de i.v. de PG (0.8 g/kg); -O- representa 5 repuesta a PG-paclitaxel (80 mg/kg), -?- representa repuesta PG- paclitaxel (160 mg equiv. Paclitaxel/kg). FIGURA 8. Perfil de liberación de paclitaxei de PEG-paclitaxel en solución reguladora de pH de fosfato (pH 7.4). Paclitaxel, -X-: PEG-paclitaxel, -O- 10 FIGURA 9. El efecto antitumoral de PEG-paclitaxel sobre tumores mamarios MCa-4. -D- representa la repuesta a una sola inyección i.v. con solución salida de PEG (60 mg/ml), -»- representa la respuesta al vehículo de Cremophor/alcohol, -O-representa una sola dosis de 40 mg/kg de peso corporal de paclitaxel, -•- 15 representa PEG-paclitaxel a 40 mg equiv. Paclitaxel/kg de peso corporal. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención surge del descubrimiento de formulaciones novedosas solubles en agua de paclítaxel y docetaxel y a la eficacia sorprendente de estas formulaciones contra las células tumorales in vivo. El ácido poli-1-glutámico conjugado con paclitaxel (PG-paclitaxel) administrado a ratones que tienen carcinoma de ovario (OCa-l) ocasionó un retardo de crecimiento tumoral significativo comparado con la misma dosis de paclitaxel sin PG. Los ratones tratados con paclitaxel solo o con una combinación de paclitaxel libre y PG mostraron inicialmente crecimiento tumorai retardado, pero los tumores volvieron a crecer a niveles comparables con un grupo control no tratado después de diez días. Además, a la dosis máxima tolerada (DMT) del conjugado de PG-paclitaxel. (160 5 mg equiv. Paclitaxel/kg), el crecimiento de los tumores se suprimió completamente, los tumores se encogieron y los ratones se observaron durante dos meses después del tratamiento permanecieron libres de tumor (DMT: definida como la dosis máxima que produjo 15% o menos perdida de peso corporal dentro de dos semanas después de una sola inyección i.v.). En un estudio paralelo, la actividad antitumoral de PG-paclítaxel en ratas con adenocarcinoma mamario en ratas (13762F) fue examinado. De nuevo, se observó la erradicación completa del tumor a 40-60 mg equiv. Paclitaxel/g de PG-paclitaxel. Estos resultados sorprendentes demuestran que el conjugado de polímero-fármaco, PG-paclitaxel. erradica exitosamente los tumores sólidos bien establecidos tanto en ratones como en ratas después de una sola inyección intravenosa. Además, con una vida media de 40 días a pH 7.4, el PG-paclitaxel es uno de los derivados de paclitaxel solubles en agua más estables conocidos (Deutsch, y otros, 1989; Mathew y otros, 1992; Zhao and Kingston, 1991). El DTPA-paclitaxel también se muestra en la presente como tan efectivo como el paclitaxel en un análisis de potencia antitumoral in vitro utilizando una línea celular de melanoma B16. El DTPA- 25 paclitaxel no mostró ninguna diferencia significativa en el efecto antitumoral comparado con paclitaxel contra un tumor mamario de MCa-4 a una dosis de 40 mg/kg de peso corporal en una sola inyección . Además, se mostró que el DTPA-paclitaxel marcado con 1 1 1 lndio se acumula en el tumor de MCa-4 como se demuestra por escintigrafía de gama, demostrando que los fármacos antí-tumorales conjugados con quelante de la presente invención son útiles y efectivos para la formación de imágenes. Los compuestos novedosos y métodos de la presente invención proveen avances significativos sobre los métodos y composiciones previos, dado que los paclitaxeles solubles en agua se proyectan para mejorar la eficacia de terapia anti-cáncer basada en paclitaxel , proveyendo composiciones derivadas de paclitaxel solubles en agua y de l iberación controlada. Dichas composiciones eli minan la necesidad de que los solventes estén asociados con los efectos laterales vistos con las composiciones de paclitaxel previas . Además , el paclitaxel radiomarcado, el cual se muestra q ue retiene la actividad anti-tumoral , también será úti l en la formación de imágenes de tumores. Además, la presente invención permite que uno determine si será absorbido un paclitaxel por un tumor particular por registro gráfico de centelleo, tomografía de computadora de emisión de fotones sencilla (TCEFS) o tomografía de emisión de positrones (TEP). Entonces esta determinación se puede utilizar para decidir la eficacia del tratamiento anti-cáncer. Esta información puede ser útil para guiar al practicante en la selección de pacientes que se someterán a terapia con paclitaxel .

El paclitaxel se puede volver soluble en agua de dos maneras: conjugando paclitaxel a polímeros solubles en agua que sirven como vehículos de fármaco y derivatizando el fármaco antitumoral con agentes quelantes solubles en agua. El último enfoque también provee una oportunidad para marcar con radionúclidos (v.gr., 11 ln, 9o? i66H?j 68Qa 99mTc) para formación de imágenes nucleares y/o para estudios de radioterapia. Las estructuras de paclitaxel, glicol de polietileno-paclitaxel (PEG-paclitaxel), conjugado de ácido glutámico-paclitaxel (PG-paclitaxel) y ácido dietilenetriaminpentaacético-paclitaxel (DTPA-paclitaxel) se muestran en la FIGURA 1. En ciertas modalidades de la presente invención, DTPA-paclitaxel u otros conjugados de paclitaxel-agente quelante, tales como EDTA-paclitaxel, DTTP-paclitaxel o DOTA-paclitaxel, por ejemplo, se pueden preparar en la forma de sales solubles en agua (sal de sodio, sal de potasio, sal de tretrabutillamonio, sal de calcio, sal férrica, etc.). Estas sales serán útiles como agentes terapéuticos para el tratamiento tumoral. En segundo, lugar DTPA-paclitaxel u otros paclitaxel-agentes quelantes serán útiles como agentes de diagnóstico, los cuales cuando se marcan con radionúclidos tales como 111ln o 99mTc, se pueden utilizar como radiorastreadores para detectar ciertos tumores en combinación con técnicas de formación de imágenes nucleares. Se entiende que además del paclitaxel (taxol) y docetaxel (taxotere), se pueden adaptar otros derivados de taxano para usarse en las composiciones y métodos de la presente invención y que todas las composiciones y métodos podrían abarcarse mediante las reivindicaciones anexas. Los estudios de toxicidad, farmacocinética y distribución de tejido de DTPA-paclitaxel han mostrado que en ratones la DL50 (dosis letal al 50%) de DPTA-paclitaxel observada con una sola inyección intravenosa (iv) es de aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal. La comparación directa con paclitaxel es difícil de realizar debido a las restricciones de dosis-volumen impuestas por la solubilidad limitada de paclitaxel y toxicidad del vehículo asociada con administración iv. Sin embargo, en vista de la presente descripción, alguien experto en la materia de quimioterapia podría determinar las dosis toleradas efectivas y máximas en un estudio clínico para usarse en sujetos humanos. En ciertas modalidades de la invención, una masa de Stent revestida con conjugados de polímero-paclitaxel se puede utilizar para evitar la restenosis, el cierre de arterias después de angioplastía de globo. Los resultados recientes en ensayos clínicos utilizando masas de Stent expandibles con globo en angioplastía coronaria, han mostrado un beneficio significante en aberturas y la reducción de restenosis comparado con angioplastía de globo (Serruys y otros, 1994). De acuerdo con la hipótesis de respuesta al daño, la formación neoíntima se asocia con la proliferación de células incrementada. Actualmente, la opinión popular sostiene que el proceso crítico que conduce a las lesiones vasculares tanto en arteriosclerosis espontánea y acelerada es la proliferación de células de músculo liso (CML) (Phillips-Hughes y Kandarpa, 1996). Dado que la proliferación fenotípica de CML después del daño arterial imita la de las células neoplásticas, es posible que los fármacos anti-cáncer puedan ser útiles para evitar la acumulación de CML neoíntima. Las 5 masas de Stent revestids con agentes anti-proliferativos ligados a polímeros que son capaces de liberar estos agentes durante un tiempo prolongado con suficiente concentración evitará por lo tanto el crecimiento de la íntima y media hiperplástica en el lumen reduciendo así la restenosis. 10 Debido a que se ha mostrado que el paclitaxel suprime la artritis inducida por colágeno en un modelo de ratón (Oliver y otros, 1994), las formulaciones de la presente invención también se contemplan como útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunes y/o inflamatorias tales como artritis reumatoide. La unión de paclitaxel a tubulina cambia el equilibrio a polímeros de mícrotubuios estables y hace a este fármaco un inhibidor fuerte de replicación celular eucariótica bloqueando células en la última etapa mitótica de G2. Varios mecanismos pueden estar implicados en la supresión de artritis por paclitaxel. Por ejemplo, los efectos cítotóxicos específicos de fase del paclitaxel pueden afectar rápidamente la proliferación de células inflamatorias y además el paclitaxel inhibe la mitosis celular, migración, quimiotaxis, transporte intracelular y producción de H2O2 de neutrófilos. Además, el paclitaxel puede tener actividad antiangiogénica bloqueando la migración de células endoteliales coordinada (Oliver y otros, 1994).

Por lo tanto, los profármacos conjugados con polímeros de la * presente invención se contemplan por ser útiles como paclitaxel libre en el tratamiento de artritis reumatoide. La formulación conjugada de polímeros descrita en la presente también ofrece las ventajas de 5 liberación retardada o sostenida del fármaco y solubilidad mayor. También es un aspecto del tratamiento de artritis que las formulaciones pueden inyectarse o implantarse directamente en las áreas de articulaciones afectadas. Las preparaciones farmacéuticas de paclitaxel o docetaxel adecuadas para el uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser fluido para inyección. Debe ser estable bajo las condiciones de manufactura y almacenamiento y se deben conservar contra la acción contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos. El vehículo puede ser un solvente o medio de dispersión, que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, glicol de propileno, y un glicol de polietileno líquido y similares), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales. La prevención de la acción de microorganismos se puede llevar a cabo por varios agentes antibacterianos y agentes antifúngícos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal y similares. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o cloruro de sodio.

* Las soluciones inyectables estériles se preparan incorporando los compuestos activos en la cantidad requerida en el solvente apropiado con varios de los otros ingredientes enumerados antes, según se requiera, seguido por la esterilización filtrada. 5 Generalmente, se preparan las dispersiones incorporando los varios ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril el cual contiene el medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de aquellos enumerados antes. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son técnicas de secado por vacío y secado por congelación que dan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional a partir de una solución previamente filtrada estéril del mismo. Como se usa en la presente, "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos y agentes isotónicos y similares. El uso de dicho medios y agentes de substancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la materia. Excepto en cuanto a que cualquier medio convencional o agente es incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en la composiciones terapéuticas. Los ingredientes activos suplementariamente también se pueden incorporar en las composiciones. La frase "farmacéuticamente aceptable" también se refiere a entidades y composiciones moleculares que no producen una reacción de avance alérgica o similar cuando se administra a un animal o a un ser humano. Para la administración parenteral en una solución acuosa, por ejemplo, la solución debe ser regulada adecuadamente, si es 5 necesario, y el diluyente líquido volverse primero isotínico con suficiente solución salina o glucosa. Estas soluciones acuosas particulares son especialmente adecuadas para la administración intravenosa e intraperitoneal. En relación con esto , el medio acuoso estéril que puede emplearse será conocido por los de experiencia 10 ordinaria en la materia en vista de la presente descripción . Se incluyen los siguientes ejemplos para demostrar modalidades preferidas de la invención. Será apreciado por los expertos en la materia que las técnicas d escritas en los ejem plos que siguen representan técnicas descubiertas por el inventor para 15 funcionar bien en la práctica de la invención y por lo tanto se pueden considerar que constituyen modos preferidos para su práctica. Sin embargo, los de experiencia en la materia , en vista de la presente descripción deberían apreciar que se pueden hacer muchos cambios en las modalidades específicas que se describen y aún obtener un 20 resultado similar sin alejarse del espíritu y alcance de la invención Eje plo 1 DTPA-Paclitaxel Síntesis de DTPA-paclitaxel: A una solución de paclitaxel (100 mg , 0.1 17 mmol) en DM F 25 seco (2.2 mi) se le agregó anh ídrido de ácido dietilentrieminapentaacético (DTPA A) (210 mg, 0.585 mmol) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 4°C durante la noche. La suspensión se filtró (filtro Millipore de 0.2 µm) para remover el anhídrido de DTPA sin reaccionar. El filtrado se vertió en agua destilada, se agitó a 4°C durante 20 min, y se recuperó el precipitado. El producto crudo se purificó mediante CLF preparativo sobre placas de gel de sílice de C?8 y se desarrolló en acetonitrilo/agua (1:1). El paclitaxel tuvo un valor de Rf de 0.34. La banda por arriba del paclitaxel con un valor de Rf de 0.65 a 0.75 se 10 removió raspando y se eluyó con una mezcla de acetonitrilo/agua (1:1) y ei solvente se removió para dar 15 mg de DTPA-paclitaxel como producto (rendimiento 10.4%): pf:>226°C desc. El espectro de UV (sal de sodio en agua) mostró absorción máxima a 228 nm lo que también es característico para paclitaxel. Espectro de masa: (FAB) m/e 1229 (M + H) + , 1251 (M + Na), 1267 (M + K). En el espectro de 1H RMN (DMSO-de) la resonancia de NCH2CH2N y CH2COOH de DTPA apareció como una serie compleja de señales a d 2.71 - 2.96 ppm, y es un multiplete a d 3.42 ppm, respectivamente. La resonancia de C7-H a 4.10 ppm en paclitaxel cambió a 5.51 ppm, sugiriendo esterificación en la posición 7. El resto del espectro fue consistente con la estructura de paclitaxel. La sal de sodio de DTPA-paclitaxel también se obtuvo agregando una solución de DTPA-paclitaxel en etanol en una cantidad equivalente de 0.05 M NaHCO3, seguido por liofilización para dar un polvo sólido soluble en agua (solubilidad>20 mg equivalente paclitaxel/ml). Estabilidad hidrolítica de DTPA-paclitaxel: La estabilidad hidrolítica de paclitaxel de DTPA-paclitaxel se 5 estudió bajo condiciones aceleradas. En resumen, 1 mg de DTPA- paclitaxel se disolvió en 1 mi de solución acuosa de NaHCO3 de 0.5 M (pH 9.3) y se analizó por CLAR. El sistema de CLAR consistió de una columna Nova-Pak de 150 x 3.9 (i.d.) mm de Waters llenada con 4µm de gel de sílice de C18, una bomba de CL ¡socrática Perkin- 10 Elmer, una interface serie 900 de PE Nelson, un detector de UV/Vis de Spectra-Physics y una estación de datos. El eluyente (acetonitrilo/metanol/acetato de amonio 0.02M =4:1:5) se corrió a 1.0 ml/min con detección de UV a 228 nm. Los tiempos de retención de DTPA-paclitaxel y paclitaxel fueron de 1.38 y 8.83 min, respectivamente. Las áreas pico se cuantificaron y se compararon con curvas normales para determinar las concentraciones de DTPA- paclictaxel y paclitaxel. La vida medía calculada de DPTA-paclitaxel en solución de NaHCO3 0.5 M es de aproximadamente 16 días a temperatura ambiente. 20 Efectos de DTPA-paclitaxel sobre el crecimiento de células de melanoma de ratones B16 in vitro: Las células se sembraron en placas de 24 pozos a una concentración de 2.5 x 104 células/ml y crecieron en medio esencial mínimo modificado de Dulbecco de 50:50 (DEM) y medio F12 conteniendo 10% de suero de becerro de bovino a 37°C durante 24 horas en una atmósfera humidificada de 97% de 5.5% de CO2. El medio se reemplazó con medio fresco conteniendo paclitaxel o DTPA-paclitaxel en concentración que varía de 5 x 10"9 M a 75 x 10 -9 M. Después de 40 horas, las células se liberaron por tripsinización y 5 se contaron en un contador Coulter. Las concentraciones finales de DMSO (utilizadas para disolver paclitaxel) y solución de bicarbonato de sodio 0.05 M (utilizada para disolver DTPA-paclitaxel) en el medio de células fue menor a 0.01%. Esta cantidad de solvente no tiene ningún efecto sobre el crecimiento de las células como se determinó 10 por los estudios de control. Los efectos de DTPA-paclitaxel sobre el crecimiento de células de melanoma de B16 se presentan en la FIGURA 2. Después de una incubación de 40 horas con varias concentraciones, se compararon DTPA-paclitaxel y paclitaxel en cuanto a citotoxicidad. La IC5o para paclitaxel y DTPA-paclítaxel son de 15nM y 7.5 nM, respectivamente. Efecto antitumoral sobre modelo de tumor de carcinoma mamario (MCa-4): Los ratones hembra C3Hf/Kam se inocularon con carcinoma mamario (MCa-4) en los músculos de la extremidad derecha (5 x 105 células/ratón). Cuando los tumores se desarrollaron a 8 mm (aproximadamente 2 semanas) una sola dosis de paclitaxel o DTPA- paclitaxel se les dio a 10, 20 y 40 mg equivalente paclitaxel/kg en peso corporal. En estudios de control, se utilizaron solución salina y alcohol absoluto/Cremophor 50/50 diluido con solución salina (1:4).

El crecimiento del tumor se determinó diariamente midiend, tres diámetros ortogonales del tumor. Cuando el tamaño del tumor alcanzó 12 mm de diámetro, se calculó el retardo del crecimiento. Los ratones se sacrificaron cuando los tumores llegaron a aproximadamente 15 mm. La curva del crecimiento del tumor se muestra en la FIGURA 3. Comparado con los controles, tanto el paclitaxel como el DTPA- paclitaxel mostraron efecto antitumoral a una dosis de 40 mg/kg. Los datos también se analizaron para determinar el número promedio de días para que el tumor alcance 12 mm de diámetro. El análisis estadístico mostró que DTPA-paclitaxel retardó el crecimiento del tumor significativamente comparado con el control tratado con solución salina a una dosis de 40 mg/kg (p<0.01). El tiempo medio para que el tumor alcance 12 mm de diámetro fue de 12.1 días para DTPA-paclítaxel comparado con 9.4 días para paclitaxel (FIGURA 4).

Radiomarcado de DTPA-paclitaxel con 111ln En una ampolleta de 12 mi se agregaron sucesivamente 40 µl de solución reguladora de pH de acetato de sodio 0.6 M (pH 5.3); 40 µl de solución reguladora de pH de citrato de sodio 0.06 M (pH 5.5). 20 µl solución de DTPA-paclitaxel en etanol (2% p/v) y 20 µl de solución de 111lnCI3 (1.0 mCi) en solución reguladora de pH de acetato de sodio (pH 5.5). Después de un período de incubación de 30 minutos a temperatura ambiente, el 111ln-DTPA-paclitaxel marcado se purificó pasando la mezcla a través de un cartucho de Sep-Pac C18 utilizando solución salina subsecuentemente como la fase móvil Se removió el 111ln-DTPA libre (<3%) por la solución salina, mientras que se recuperó 111ln-DTPA-paclitaxel en el lavado de etanol. El etanol se evaporó bajo gas nitrógeno y el producto marcado se reconstituyó en solución salina. Rendimiento radioquímico: 84%. Análisis de 111ln-DTPA-paclitaxel: 5 Se utilizó CLAR para analizar la mezcla de reacción y pureza de 111ln-DTPA-paclitaxel. El sistema consistió de una bomba binaria de LDC, una columna de Waters 100 x 8.0 mm (i.d.) rellenada con 5 µm de gel de sílice de ODS. La columna se eluyó a un régimen de flujo de 1 ml/min con una mezcla de gradiente de agua y metanol (gradiente de 0% a 85% de metanol durante 15 minutos). El sistema de gradiente se monitoreó con un detector cristalino de Nal y un detector de UV/Vid Spectra-Physics. Como se evidenció por el análisis de CLAR, la purificación por el cartucho de Sep-Pak removió la mayoría del 111ln-DTPA, que tuvo un tiempo de detección de 2.7 min. El 111ln-DTPA probablemente se derivó de trazas de contaminante de DTPA en el DTPA-paclitaxel. Un radio- » cromatograma de 111ln-DTPA-paclitaxel se correlacionó con su cromatrograma de UV, indicando que el pico en 12.3 min además fue el compuesto blanco. Bajo las mismas condiciones cromatográficas. el paclitaxel tuvo un tiempo de retención de 17.1 min. La pureza radioquímica de la preparación final fue del 90% como se determinó por análisis de CLAR. Representación gráfica de centelleo de cuerpo entero Se inocularon ratones hembras C3Hf/Kam con carcinoma mamario (MCa-4) en los músculos de la extremidad derecha (5 x 10 = células). Cuando los tumores habían crecido a 12 mm de diámetro, los ratones se dividieron en dos grupos. En el grupo I, los ratones se anestesiaron por inyección íntraperitoneal de pentobarbital de sodio, seguido por 111ln-DTPA-pacIitaxel (100-200 mCi) vía la vena de la cola. Una cámara ? equipada con un colimador de energía del medio se colocó sobre los ratones (3 por grupo). Se recuperaron una serie de adquisiciones de 5 minutos a 5, 30, 60, 120, 240 min y 24 horas después de la inyección. En el grupo II, se siguieron los mismos procedimientos excepto que los ratones se inyectaron con 111ln-DTPA como un control. La FIGURA 5 muestra fegistros gráficos de centelleo gama de animales inyectados con 111ln-DTPA y 111ln-DTPA-paclitaxel. 111ln-DTPA se caracteriza por eliminación rápida de plasma, la rápida y alta excreción en la orina con retención mínima en el riñon y la retención insignificante en el tumor, el hígado, el intestino y otros órganos o partes del cuerpo. En contraste, 11ln-DTPA-paclitaxel exhibió un perfil farmacológico que se asemeja al del paclitaxel (Eiseman y otros, 1994). La radioactividad en el cerebro fue insignificante. El hígado y el riñon tuvieron las mayores proporciones de tejido:plasma. La excreción hepatobiliar de DTPA-paclitaxel rediomarcado o sus metabolismos fue una de las rutas principales para la eliminación del fármaco de la sangre. A diferencia de paclitaxel, una cantidad significativa de 11ln-DTPA-paclitaxel también se excretó a través del riñon, el cual únicamente jugó un papel menor en la eliminación de paclitaxel. El tumor tuvo absorción significativa de 111 In-DTPA-paclitaxel. Estos resultados demuestran que 111 ! In-DTPA-paclitaxel es capaz de detectar ciertos tumores y de cuantificar la absorción de 111ln-DTPA-paclítaxel en los tumores, el cual a su vez puede ayudar a la selección de pacientes para el tratamiento con paclitaxel. 5 Ejemplo 2 Ácido Pol?glutámico-Paclitaxel El presente ejemplo demuestra la conjugación de paclitaxel a un polímero soluble en agua, ácido poli-1-glutámico (PG). El potencial de polímeros solubles en agua utilizados como vehículos 10 de fármacos está bien establecido (Kopecek, 1990; Maeda y Matsumura, 1989). Además de su capacidad de solubilizar otros fármacos ¡nsolubles, el conjugado de fármaco-polímero también actúa como un depósito de liberación lenta para la liberación del fármaco controlada. 15 Síntesis de PG-Paclitaxel Se seleccionó PG como un vehículo para paclítaxel dado que se puede degradar fácilmente por las enzimas liposomales, es estable en plasma y contiene suficientes grupos funcionales para la unión de fármacos. Varios fármacos antitumorales, incluyendo Adriamicina 20 (Van Heeswijk y otros, 1985; Hoes y otros 1985), ciclofosfamida (Hirano y otros, 1979) y Ara-C (Kato y otros, 1984) han sido conjugados a PG. La sal de sodio de PG (MW 34 K, Sigma, 0.35 g) se disolvió en agua. El pH de la solución acuosa se ajustó a 2 utilizando HCl 0.2 M. lizó contra agua destilada y se liofilizó para dar 0.29 g de PG. A una solución de PG (75 mg, unidad de repetición de FW 170, 0.44 mmol) en DMF seco (1 .5 mL) se le agregaron 20 mg de 5 paclitaxel (0.023 mmol, relación molar de PG/paclitaxel =19), 15 mg de diciclohexilcarbodiimida (DCC) (0.073 mmoles) y una cantidad traza de dimetilaminopiridina (DMAP). La reacción se dejó proceder a temperatura ambiente durante 4 horas. La cromatografía de capa fina (CLF, síl ice) mostró la conversión completa de paclitaxel (Rf=0.55) a un conjugado de polímero (Rf=0, fase móvil , CHCI3/MeOH = 10: 1 ) . La mezcla de reacción se vertió en cloroformo. El precipitado resultante se recuperó y se secó en un vacío para dar 65 mg del conjugado de polímero-fármaco. Cambiando la relación en peso de paclitaxel a PG en los materiales de partida, los conjugados poliméricos de varias concentraciones de paclitaxel pueden sintetizarse . La sal de sodio del conjugado de PG-paclitaxel se obtuvo disolviendo el producto de NaHCO3 0.5 M. La solución acuosa de PG- paclitaxel se dializó contra agua destilada (MWCO 1 , 000) para remover contaminantes de peso molecular bajo y exceso de sal de NaHCO3. La liofilización del dialisato dio 88.6 mg de polvo blanco. El contenido de paclitaxel en este conjugado polimérico se determinó por UV (descrito más adelante) como 21 % (p/p). Rendimiento (conversión a polímero unido a paclitaxel, UV) : 93% . El PG-paclitaxel con contenido de paclitaxel superior (hasta 35%) se puede sintetizar mediante este método simplemente incrementado la relación de paclitaxel a PG utilizado. 1H-RMN (espectrómetro GN 500 modelo GE, 500 MHz, en D2O): d = 7.75 a 7.36 ppm (componentes aromáticos de paclitaxel); d = 5 6.38 ppm (C10-H), 5.97 ppm (C13-H), 5.63 y 4.78 ppm (C2'-H), 5.55- 5.36 ppm (C3'-H y C2-H, m), 5.10 ppm (C3-H), 4.39 ppm (C7-H), 4.10 (C10-H), 1.97 ppm (OCOCH3), y 1.18-1.20 ppm (C-CH3) se asignan a los componentes alifáticos de paclitaxel. Otras resonancias de paclitaxel se obscurecieron por las resonancias de PG. Las resonancias de PG a 4.27 ppm (H-a), 2.21 ppm (H-?), y 2.04 ppm (H- ß) concuerdan con el espectro de PG. Los acoplamientos de paclitaxel conjugados de polímero son resueltos muy pobremente para ser medidos con suficiente precisión. La solubilidad en agua fue >20 mg de paclitaxel/ml. 15 Caracterización de PG-paclitaxel ^ Se obtuvieron espectros ultravioleta (UV) en un espectrofotometro Beckman DU-640 (Fullerton, CA). El contenido de paclitaxel conjugado a PG se estimó por UV basado en una curva normal generada con concentraciones conocidas de paclitaxel en metal (? = 228 nm), suponiendo que el conjugado polimérico en agua y fármaco libre en metanol tuvieron los mismos coeficientes de extinción molares y que ambos siguieron la ley de Lambert Beer Como se muestra por su espectro de UV, el PG-paclitaxel tuvo absorción de paclitaxel característica con dos cambios de ? de 228 a 230 nm. La concentración de paclitaxel en PG-paclitaxel se calculó basado en la curva normal generada con concentraciones conocidas de paclitaxel en metanol a una absorción de 228 nm, suponiendo que el conjugado de polímero en agua a 230 nm y el fármaco libre en 5 metanol a 228 nm tienen la misma extinción molar y ambos siguen la ley de Lambert Beer. Estudios de Cromatrografía de Permeación de Gel de PG-Paclitaxel. El peso molecular relativo de PG-paclitaxel se caracterizó por ?^' cromatografía de permeación de gel (CPG). El sistema de CPG consistió de dos bombas del modelo III de LDC acopladas con el el gradiente principal de LDC, una columna de CPG de PL y un detector de disposición de fotodiodo Waters 990. El eluyente (DMF) se corrió a 1.0 ml/min con detección de UV fijada a 270 nm. La conjugación de paclitaxel a PG dio como resultado un incremento en el peso molecular de PG-paclitaxel, como se indica por el cambio de tiempo L de retención de 6.4 min de PG a 5.0 min del conjugado PG-paclitaxel como se analizó por CPG. El peso molecular calculado de PG- paclitaxel conteniendo 15-25% de paclitaxel (p/p) está en la escala de 45-55 kDa. El producto crudo contuvo un contaminante de peso molecular pequeño (tiempo de retención 8.0 a 10.0 min y 11.3 min), que se puede remover efectivamente convirtiendo al PG-paclitaxel a su sal de sodio, seguido por diálisis. Degradación hidrolítica del conjugado de PG-paclitaxel. El PG-paclitaxel se disolvió en soluciones reguladoras de pH de fosfato (PBS, 0.01 M) a pH 6.0, pH 7.4 y pH 9.6 a una concentración equivalente de paclitaxel de 0.4 mM. Las soluciones se incubaron a 37°C con agitación moderada. A intervalos de tiempo seleccionados, se removieron alícuotas (100 µl), se mezclaron con un volumen igual de metanol y se analizaron por cromatografía de líquidos de alto 5 rendimiento (CLAR). El sistema de CLAR consistió de una columna de sílice de fase inversa (Nova-Pac, Waters, CA), una fase móvil de metanol-agua (2:1, v/v) suministrada a un régimen de flujo de 1.0 ml/min, y un detector de fotodiodo. La concentración de paclitaxel unido a PG, paclitaxel libre y otros productos de degradación en cada muestra, se calculó comprando las áreas pico con una curva normal obtenida por separado preparada de paclitaxel, suponiendo que el coeficiente de extinción molar de cada pico a 228 nm es el mismo que el de paclitaxel. La vida media del conjugado, calculada por ser de 132, 40 y 4 días a pH 6.0, 7.4 y 9.6 respectivamente, se determinó por una análisis de regresión de mínimos cuadrados lineal. El análisis de CLAR reveló la incubación de PG-paclitaxel en soluciones de PBS que produjeron paclitaxel y otras diferentes especies incluyendo una que es más hidrofóbica que paclitaxel (metalíto-1). De hecho, la cantidad de metabolito-1 , que más probablemente fue 7-epipaclitaxel, recuperado en PBS a pH 7.4 sobrepaso el del paclitaxel después de 100 horas de incubación (FIGURA. 6). Estudios in vitro Las alícuotas obtenidas de solución de PBS a pH 7.4 se sometieron a análisis por un análisis de polimerización de tubulina.

La reacción de ensamble de tubulina se realizó a 32°C en solución reguiadora de pH PEM (pH 6.9) a una concentración de tubulina (cerebro de bovino, Cytoskeleton Inc., Boulder, CO) de 1 mg/ml (10 µM) en presencia de las muestras de prueba (1.0 µM equiv. Paclitaxel ) y GTP al 1.0 mM. La polimerización de tubulina se siguió midiendo la absorbancia de la solución a 340 nm con el tiempo. Después de 15 min, se agrego cloruro de calcio (125 mM) para medir la despolimerización inducida por CaCI2 de los microtubulos. Mientras PG-paclitaxel dísuelto recientemente en PBS fue inactivo en la producción de microtubulos, las alícuotas de PG-paclitaxel se incubaron durante tres días dieron como resultado la polimerización de tubulina. Los mícrotubulos formados fueron estables contra la despolimerízacíón inducida por CaCI2. El efecto de PG-paclitaxel sobre el crecimiento celular también se examinó por análisis de sal de tetrazolio (MTT) (Mosmann, 1983). Las células de MCF-7 o células o 13762F se sembraron a 2 x 104 células/ml en una placa de microtitulación de 96 pozos tratada 24 horas después con varias concentraciones de PG-paclitaxel, paclitaxel o PG, y se incubó durante 72 horas adicionales. La solución de MTT (20 µl, 5 mg/ml) se agregó después a cada pozo y se incubó durante 4 horas. El sobrenadante se aspiró y el formazan de MTT formado por células metabólicamente viables se midió por un lector fluorescencia de microplaca a una longitud de onda de 590 nm. Durante el período de tres días, PG-paclitaxel inhibió proliferación de células tumorales a un grado similar a la del paclitaxel. Para la línea de células tumorales de mama MCF-7, los valores de IC50 resultantes fueron de 0.59 µM para paclitaxel y 0.82 µM para PG-paclitaxel (medido en unidades equivalentes de paclitaxel). Contra la línea de células 13762F, la sensibilidad para PG-paclitaxel (IC50 = 1.86 µM) fue comprable a la del paclitaxel (ICso = 6.79 µM). Para ambas líneas celulares, la IC50 de PG solo fue mayor a 100 µM. Actividad antitumoral in vivo Todo el trabajo en animales se llevó a cabo en la instalación de animales en M.D. Anderson Cáncer Center de acuerdo con los lineamientos institucionales. Los ratones C3H/Kam se criaron y mantuvieron en una instalación libre de patógenos en ei Departamento de Oncología de Radiación Experimental. Los tumores solitarios se produjeron en el músculo de la extremidad derecha de los ratones C3H/Kam (25-30g) inyectando 5 x 10s células de carcinoma de ovario de murinos (OCa-l), carcinoma mamario (Mca-4). hepatocarcinoma (HCa-l) o sarcoma fibroso (FSa-ll). En un estudio paralelo, 344 ratas Fischer hembras (125-150 g) se inyectaron con 1.0 x 105 células tumorales 13762F viables en 0.1 mi de PBS. Los tratamientos se iniciaron cuando los tumores en los ratones crecieron a 500 mm3 (10 mm en diámetro) o cuando los tumores en ratas se desarrollaron a 2400 mm3 (diámetro medio 17 mm). Una sola dosis de PG-paclitaxel en solución salina o paclitaxel en vehículo Cremophor EL se dio en dosis que varían de 40 a 160 mg equiv Paclitaxel/kg de peso corporal. En experimentos de control, se utilizaron solución salina, vehículo Cremophor [50/53 Cremophor/etanol diluido con solución salina (1:4)], solución de PG (PM 38K) solución salina y una mezcla de paclitaxel/PG. Ei crecimiento del tumor se determinó diariamente (FIGURA 7A, 7B, 7C, 7D y 7E) midiendo tres diámetros tumorales ortogonales. El volumen del tumor se calculó de acuerdo con la fórmula (A x B x C)/2. El retardo del crecimiento absoluto (RCA) en ratones se definió como el tiempo en días para tumores tratados con varios fármacos para desarrollarse de 500 a 2,000 mm3 en ratones menos el tiempo en días para tumores tratados con control de solución salina para crecer de 500 a 2,000 mm3. La Tabla 1 resume la toxicidad de PG paclitaxel en ratas en comparación con paclitaxel/Cremophor. La Tabla 2 resume los datos que se refieren al efecto de PG-paclitaxel, contra tumores de MCa-4, FSa-ll y HCa-l en ratones. Los datos también se resumen la FIGURA 7A-FIGURA 7E.

-Paclitaxel en Ratas Fischer* P *Los fármacos se administraron intravenosamente en ratas Fischer que tienen tumor 13762F (hembra, 130 g) en una sola inyección. *J^F a La solución de PG-paclitaxel se preparó disolviendo el conjugado en solución salina (8 mg equiv. Paclitaxel/ml). El volumen inyectado a 60 mg/kg fue de 0.975 mi por rata. b La solución de Paclitaxel Cremophor se preparó disolviendo paclitaxel en una mezcla 1:1 de alcohol etílico y Cremophor (30 mg/ml). Esta solución madre se diluyó además con solución salina (1:4) antes de la inyección. La concentración final de paclitaxel en la solución fue de 6 mg/ml). El volumen inyectado a 60 mg/kg fue de 1.3 mi por rata. olviendo el polímero en solución salina (22 mg/ml). La dosis inyectada fue de 0.3 g/kg (1.8 mi por rata) que fue equivalente a la dosis de paclitaxel de 60 mg/kg. d El vehículo Cremophor se preparó diluyendo una mezcla de alcohol dietílico y Cremophor (1:1) con solución salina (1:4). Tabla 2: El Efecto Antitumoral de PG-Paclitaxel Contra Diferentes Tipos de Tumores de Murino in vivo * se trataron con varias dosis de PG-paclitaxei (40-120 mg equiv Paclitaxel/kg) en solución salina o paclitaxel en vehículo de Cremophor en una sola inyección i.v.. Los animales de control se trataron con solución salina (0.6 mi), vehículo Cremophor (0.5 mi) solución de PG en solución salina, o PG g/kg) más paclitaxel (80 mg/kg). b El crecimiento del tumor se determinó por la medición diaria de tres diámetros ortogonales con calibradores y el volumen se calculó como (a x b x c)/2. Entre corchetes de muestra el número de ratones utilizados en cada grupo. El tiempo en días para crecer de 500 mm° a 2000 mm3 se presenta como desviación media + normal, c Retardo de crecimiento absoluto (RCA) definido como el tiempo en días para tumores con varios fármacos para crecer de 500 a 2000 tumores tratados con control de solución salina para crecer de 500 a 2000 mm3. d El tiempo en días para crecer de 500 a 2000 mm3 se comparó para el tratamiento de grupos y el grupo de solución salina utilizando 5 prueba t de Estudiante. Los valores P tienen dos lados y se tomaron como significativos cuando fueron menores o iguales a 0.05. Ejemplo 3 Glicol de polietileno-Paclitaxel Síntesis de glicol de polietileno-paclitaxel (PEG-paclitaxel) 10 La síntesis se logró en dos pasos. Primero se preparó 2'- succinilo-paclitaxel de acuerdo con un procedimiento reportado (Deutsch y otros, 1989). Ei paclitaxel (200 mg, 0.23 mmoles) y anhídrido succínico (228 mg, 2.22 mmoles) se dejaron reaccionar en piridina anhídrida (6 mi) a temperatura ambiente durante 3 horas. La piridina después se evaporó y el residuo se trató con agua, se agitó durante 20 minutos y se filtró. El precipitado se disolvió en acetona, se agregó lentamente agua y los cristales finos se recuperaron para dar 180 mg de 2'-succinil-paclitaxel. El PEG-paclitaxel se sintetizó por una reacción de acoplamiento mediada por N-etoxicarbonil-2- 20 etoxi-1 ,2-dihidroquinolina (EEDQ). A una solución de 2'-succinil- paclitaxel (150 mg, 0.18 mmoles) y metoxipolioxietilen amina (PEG- NH2, PM 5000, 900 MG, 0.18 mmoles) en cloruro de metileno se le agregó EEDQ (180 mg, 0.72 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. El producto crudo se cromatografió sobre gel de sílice con acetato de etilo seguido por cloroformo-metanol (10:1). Esto dio 350 mg de producto. 1H RMN (CDCI3) d 2.76 (m, ácido succínico, COCH2CH2CO2), d 3.63 (PEG, OCH2CH2O), d 4.42 (C7-H) y d 5.51 (C2'-H). La absorción máxima de UV fue de 288 nm que también fue característico para paclitaxel. La unión a PEG mejoró la solubilidad acuosa de paclitaxel (>20 mg equivalente paclitaxel/ml de agua). Estabilidad hidrolítica de PEG-Paclitaxel Se disolvió PEG-paclitaxel en solución reguladora de pH de fosfato (0.01 M) a varios pH a una concentración de 0.4 mM y las soluciones se dejaron incubar a 37°C con agitación moderada. A intervalos de tiempo seleccionados, se removieron alícuotas (200 µl) y se líofilizaron. Los polvos secos resultantes se redisolvieron en cloruro de metileno para la cromatografía de permeación de gel (análisis de CPG). El sistema de CPG consistió de una columna del hecho mezclada de gel de PL Perkin-Elmer, una bomba de CL ¡socrática Perkin-Elmer, una interface de serie 900 PE Nelson, un detector de UV/Vis Spectra-Physics y una estación de datos. El eluyente (cloruro de metileno) se corrió a 1.0 ml/min con un detector de UV fijado a 228 nm. Los tiempos de retención de PEG-paclitaxel y paclitaxel fueron 6.1 y 8.2 min, respectivamente. Las áreas pico se cuantificaron y se calcularon el porcentaje de PEG-paclitaxel que permanece y el porcentaje de paciitaxel relacionado. La vida de media de PEG-paclitaxel determinada por mínimos cuadrados lineales a pH 7.4 fue de 54 minutos. La vida media a pH 9.0 fue de eración de paciitaxel de PEG- paclitaxel a pH 7.4 se muestra en la FIGURA 8. Estudios de Citotoxicidad de PEG-paclitaxel utilizando células de melanoma de ratones B16 in vitro. Siguiendo el procedimiento descrito en los estudios de citotoxicidad con DTPA-paclitaxel, se sembraron células de melanoma en placas de 24 pozos a una concentración de 2.5 x 104 células/ml y se desarrollaron un medio esencial mínimo de Dublecco 50:50 (DME) y medio F12 conteniendo 10% suero de becerro de bovino a 37°C durante 24 horas a 97% de atmósfera humidificada de 5.5% de CO2. El medio se reemplazó entonces con medio fresco conteniendo paclitaxel y sus derivados en concentraciones que varían de 5 x 10"9 M a 75 x 10"9. Después de 40 horas, las células se liberaron por tripsinación y se contaron en un contador Coulter. Las concentraciones finales de DMSO (utilizadas para disolver paclitaxel) y solución de bicarbonato de sodio 0.05 M (utilizada para disolver PEG-paclitaxel) en el medio de células fue menor a 0.01%. Esta cantidad de solvente no tiene ningún efecto sobre el crecimiento de las células determinado por los estudios control. Además, el PEG en la escala de concentración utilizado para generar una concentración de 5 x 10"9 M a 75 x 10"9 M tampoco tuvo defectos sobre la proliferación. Efecto antitumoral de PEG-paclitaxel contra tumor MCa-4 en ratones Para evaluar la eficacia antitumoral de PEG-paclitaxel contra tumores de mama sólidos, se inyectaron células de MCa-4 (5 x 105 idad derecha de ratones hembra C3Hf/Kam. Como se describió en el Ejemplo 1 con el DTPA- paclitaxel, cuando los tumores crecieron a 8 mm (aproximadamente 2 semanas), se dio una sola dosis de paclitaxel o PEG-paclitaxel a 10, 5 20 y 40 mg equivalente paclitaxel/kg de peso corporal. El paclitaxel se disolvió inicialmente en etanol absoluto con un volumen igual al Cremophor. Esta solución madre además se diluyó (1:4 por volumen) y? con una solución fisiológica estéril dentro de 15 minutos de ^ inyección. Se disolvió PEG-paclitaxel en solución salina (6 mg equiv.

Paclitaxel/ml) y se filtró a través de un filtro estéril (Millipore, 4.5 µm). Se utilizaron solución salina, vehículo de paclitaxel, alcohol absoluto:Cremophor (1:1) diluido con solución salina (1:4) y solución de PEG en solución salina (600 mg/kg de peso corporal) en experimentos de control. El crecimiento del tumor se determinó 15 diariamente, midiendo tres diámetros ortogonales del tumor. Cuando el tamaño del tumor alcanzó 12 mm de diámetro, se calculó el retardo del crecimiento de tumor. La curva de crecimiento del tumor se muestra en la FIGURA 9. A una dosis de 40 mg/kg, tanto PEG-paclitaxel o paclitaxel 20 retardaron efectivamente el crecimiento de tumor. El paclitaxel fue más efectivo que PEG-paclitaxel, aunque la diferencia no es estadísticamente significante. Los tumores tratados con paclitaxel requirieron 9.4 días para alcanzar 12 mm de diámetro mientras que los tumores tratados con PEG-paclitaxel requirieron 8.5 días 25 Estadísticamente, estos valores fueron significativos (p > 0.05) comparado con sus controles correspondientes, que fueron de 6,7 días para el vehículo de paclitaxel y 6.5 días para la solución salina de PEG (FIGURA 4). Mientras que las composiciones y métodos de esta invención se han descrito en términos de modalidades preferidas, será evidente para los expertos en la materia que se pueden aplicar variaciones a las composiciones, métodos y en los pasos o en la secuencia de pasos de los métodos descritos en la presente sin alejarse del concepto, espíritu y alcance de la invención. Más específicamente, será evidente que ciertos agentes que están tanto física como fisiológicamente relacionados, se pueden substituir por agentes descritos en la presente, mientras que se podrían lograr los mismos resultados o similares. Todos los substitutos similares y modificaciones aparentes para los expertos en la materia se consideran dentro del espíritu, alcance y concepto de la invención definido por las reivindicaciones anexas.

Referencias Las siguiente referencias, al grado que proveen detalles de procedimientos ilustrativos u otros detalles suplementarios para los exhibidos en la presente, se incorporan específicamente aquí por referencia. Bartoni and Boitard, Yin vitro and in vivo antitumoral activity of free, and encapsulated taxol," J. Microencapsulation, 7:191-197, 1990. Cortes, J.E. and Pazdur, R., "Docetaxel", Journal of Clinical Oncology, 13:2643-2655, 1995. Deutsch y otros, "Synthesis of congeners and prodrugs. 3. Water-soluble produgs of taxol with potent antitumor activity," J. Med. Chem., 32:788-792, 1989. Eiseman y otros, "Plasma pharmacokinetics and tissue distribution of paclitaxel in CD2F1 mice," Cáncer Chemother. Pharmacol., 34:465-471, 1994. Fidler, y otros, "The biology of cáncer invasión and metástasis," Adv. Cáncer Res., 28:149-250, 1987. Goldspiel, "Taxol pharmaceutical issues: preparation, administration, stability, and compatibility with other medications," Ann. Pharmacotherapy, 28:S23-26, 1994. Greenwaid y otros, "Highly water soluble Taxol derivatives, 7-polyethylene glycol esters as potential products," J. Org. Chem., 60:331-336, 1995.

Greenwaid y otros, "H ighly water soluble taxol derivative: 2'-poiyethylene glycol esters as potential products," Biorganic & Medicinal Chemistry Letters, 4:2465-2470, 1994. Hirano y otros, "Polymeric derivatives of activated cyclophosphamide as drug delivery systems in antitumor therapy," Makromol. Chem., 180: 1 125-1 130 , 1979. Hoes y otros, "Optimization of macromolecular produgs of the antitumor antibiotic andriamycin," J. Controlled Reléase, 2:205-213, 1985. Hofle y otros, DE38942. Horwitz y otros, "Taxol, mechanisms of action and resistance , " J.

Nati. Cáncer Inst. Monographs No. 15, pp. 55-61 , 1993. Kato y otros, "Antitumor actívity of 1 -b-arabinofuranosylcytosine conjugated with polyglutamic acid and its derívative", Cáncer Res.. 44:25, 1984. Kopecek, "The potential of water-soluble polymeric carries ín targeted and site-specific drug del ivery", J. Controlled Reléase. 1 1 :279-290, 1990. Kopecek and Kopeckova, "Targetable water-soluble polymeríc antícancer drugs: achievements and unsolved problems , " Proceed .

Intern Symp. Control. Reí . Bioact. Mater. , 20: 190-191 , 1993. Maeda and Matsumura, "Tumoritropic and lymphotropic principies of macromelecular d rugs", Critical Review in Therapeutic Drug Carrier Systems, 6: 193-210, 1989.

Magri and Kingston, "Modified taxols. 2. Oxidation products of taxol," J. Org. Chem., 51:793-802, 1986. Mathew y otros, "Synthesis and evaluation of some water-soluble produgs and derivatives of taxol with antitumor activíty," J. Med. 5 Chem., 35:145-151, 1992. Mosmann, T., "Rapid colormetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxic assay," J. Immunol. Methods, 65:55-63, 1983. Oliver, S.J. y otros., Suppression of collagen-induced arthritis using 10 an angiogenesis inhibitor, AGM-1470, and a microtubule stabilizer. Taxol," Cellular Immunology, 157:291-299, 1994. Phillips-Hughes and Kandarpa, "Restenosís: pathophysiology and preventive strategies", JVIR, 7:321-333, 1996. Reynolds, T., "Polymers help guide cáncer drugs to tumor targets- 15 and keep them there," J. Nati. Cáncer Institute, 87:1582-1584, 1995. § Scudiero y otros, "Evaluation of a Soluble Tetrazolium/Formazan Assay for Cell Growth and Drug Sensitivity in Culture Using Human and Other Tumor Cell Lines," Cáncer Research, 48:4827-4833, 1988. Serruys y otros., "A comparison of balloon-expandable-stent 20 implantation with balloon angioplasty ¡n patients with coronary artery disease," N. Engl. J. Med. 331:489-495. Sharma and Straubinger, "Novel taxol formulations: Preparation and Characterization of taxol-containing liposomes," Pharm. Res.. 11:889-896, 1994. 25 Patente de EUA 5,583,153 thesis and characterization of polypeptide-adriamycin conjúgate and its complexes with adriamycin. Part 1", J. Controlled Reléase, 1:301-315, 1985. Weiss y otros., "Hypersensitivity reactions from Taxol," J. Clin. Oncol., 8:1263-1268, 1990. WO 96/25176 Zhao, Z. And Kingston, D.G.I., "Modified taxols. 6. Preparation of water-soluble taxol phosphates," J. Nat. Prod., 54:1607-1611, 1991.

Claims (4)

1. # REIVINDICACIONES 1. Una composición que comprende un fármaco antí-tumoral conjugado con un polímero soluble en agua o quelante metálico y en donde el fármaco anti-tumoral es paclitaxel, docetaxel, etopsído, teniposido, camptotecina o epotilona.
2. 2. La composición de la reivindicación 1, en donde el fármaco anti-tumoral es paclitaxel.
3. 3. La composición de la reivindicación 1, en donde el fármaco anti-tumoral es docetaxel. 10 4. La composición de la reivindicación 1, en donde el fármaco anti-tumoral se conjuga a un quelante metálico soluble en agua. 5. La composición de la reivindicación 4, en donde además comprende un ion metálico quelado. 6. La composición de la reivindicación 5, en donde el ion 15 metálico quelado se selecciona del grupo que consiste de aluminio, boro, calcio, cromo, cobalto, cobre, disprosío, erbio, europio, gadolinio, galio, germanio, holmio, indio, iridio, hierro, magnesio, manganeso, níquel, platino, renio, rubidio, rutenio, samario, sodio, tecnecio, talio, estaño, itrio y zinc. 20 7. La composición de la reivindicación 5, en donde el ion metálico quelado es un radionúclido. 8. La composición de la reivindicación 7, en donde el radionúclido se selecciona del grupo que consiste de 67Ga, 68Ga. 111ln, 99mTc, 90Y, 114mln y 193mPt. 25 9. Una composición que comprende 111ln-DTPA-paclitaxel dicación 4, en donde el quelante soluble en agua se selecciona del grupo que consiste de (DTPA), ácido etilendíaminatetraacético (EDTA), 1,4,7,10- tetraazaciclododecano-N,N',N",N'"-tetracetato (DOTA), ácido 5 tetraazaciclotetradecano-N,N',N",N'"-tetracético (TETA), difosfato de hidroxietilideno (HEDP), ácido dimercaptosuccinico (DMSA), ácido dietilentriaminatetrametilenfosfónico (DTTP), DPDP y 1-(p- aminobencil)-DTPA. 11. La composición de la reivindicación 4, en donde el quelante 10 es ácido dietilentriaminapentaacético (DTPA). 12. La composición de la reivindicación 1, en donde el polímero soluble en agua se selecciona de grupo que consiste de ácido poli-d- glutámico, ácido poli-1-glutámico, ácido poli-d1-glutámico, ácido poli-d-aspártico, ácido poli-1-aspártico, ácido poli-d1-aspártico, 15 glicol de polietileno, ácido poliacrílico, poli(2-hidroxietil 1-£i glutamina), carboximetilo dextrano, ácido hialurónico, albúmina de suero humano, ácido algíníco y una combinación de los mimos. 13. La composición de la reivindicación 12, en donde el polímero además se define como un copolímero con policaprolactona, 20 ácido poliglicólico, ácido poliláctíco, ácido poliacrílico poli-2- hidroxietil 1-glutamina), carboximetil dextrano, ácido hialuróníco, albúmina de suero humano, ácido polialgínico o combinación de los mismos. reivindicación 12, en donde el polímero tiene un peso molecular de aproximadamente de 5,000 a alrededor de 100,000. 15. La composición de la reivindicación 12, en donde el 5 polímero tiene un peso molecular de aproximadamente de 20,000 a alrededor de 80,000. 16. La composición de la reivindicación 12, en donde el polímero tiene un peso molecular de aproximadamente de 30,000 a alrededor de 60,000. 10 17. La composición de la reivindicación 12, en donde el polímero soluble en agua se conjuga al 2'-y/o el 7-hidroxilo de paclitaxel o docetaxel. 18. La composición de la reivindicación 12, en donde el polímero soluble en agua es glicol de polietileno. 15 19. La composición de la reivindicación 12, en donde el polímero soluble en agua es ácido poli-1-glutámico. 20. La composición de la reivindicación 12, en donde el polímero soluble en agua es ácido poli-1-aspártico. 21. La composición de la reivindicación 1, dispersa en una 20 solución de vehículo farmacéuticamente aceptable. 22. Un método para determinar una absorción de fármaco antitumoral por tejido del tumor comprendiendo los pasos de: a) obtener una composición que comprende un conjugado de paclitaxel o docetaxel y un quelante metálico y un ion metálico 25 quelado; b) poner en contacto el tejido tumoral con la composición; y c) detectar la presencia del ¡on metálico quelado en dicho tejido tumoral; en donde la presencia del ion metálico quelado en dicho tejido 5 tumoral indica el paclitaxel por el tejido del tumor. 23. Un método de la reivindicación 22, en donde el fármaco anti-tumoral es paclitaxel. 24. Un método de la reivindicación 22, en donde el ion metálico # quelado es un radionúclido y dicha detección es la representaci'n 10 gráfica de centelleo. 25. El método de la reivindicación 22, en donde el tejido tumoral es un sujeto y dicha composición se administra a dicho sujeto. 26. Un método para tratar cáncer en sujeto que comprende los 15 pasos de: a) obtener una composición que comprende paclitaxel o docetaxel conjugado con un polímero soluble en agua o quelante y dispersado en una solución farmacéuticamente aceptable; y b) administrar dicha solución a dicho sujeto en una cantidad 20 efectiva para tratar el cáncer. 27. El método de la reivindicación 26, en donde la composición comprende paclitaxel. 28. El método de la reivindicación 26, comprendiendo además determinar la absorción de paclitaxel o docetaxel en dicho tumor 25 antes de la administración, en donde la determinación es administrada con un conjugado de quelante-ión metálico-paclitaxel o docetaxel a dicho sujeto y detectado la presencia del ion metálico en dicho tumor. 29. El método de la reivindicación 26, en donde el cáncer es cáncer mamario, cáncer de ovario, melanoma maligno, cáncer de pulmón, cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de cabeza y cuello o leucemia. 30. El método de la reivindicación 26, en donde el cáncer es cáncer de mama. 31. El método de la reivindicación 26, en donde el cáncer es cáncer de ovario. 32. Un método para disminuir por lo menos un síntoma de una enfermedad autoínmune comprendiendo administrar a un sujeto que tiene una enfermedad autoinmune sistémica una cantidad efectiva de una composición que comprende paclitaxel o docetaxel conjugado con ácido poli-1-glutámico o ácido poli-1-aspártico. 33. El método de la reivindicación 32, en donde la composición comprende paclitaxel. 34. El método de la reivindicación 32, en donde la composición comprende ácido pol¡-1 -glutámico. 35. El método de la reivindicación 32, en donde la enfermedad del sistema autoinmune es artritis reumatoide. 36. Un método para inhibir restenosis arterial u oclusión arterial después de trauma vascular comprendiendo administrar a un sujeto que la necesita, como una composición que comprende n ácido polí-1-glutámico o ácido poli-1-aspártico. 37. El método de la reivindicación 36, en donde la composición comprende paclitaxel. 5 38. El método de la reivindicación 36, en donde la composición comprende ácido poli-1-glutámico. 39. El método de la reivindicación 36, en donde el sujeto es un paciente con derivación coronaria, cirugía vascular, transplante de órganos o angioplastía coronaria o arterial. 10 40. El método de la reivindicación 36, en donde la composición se reviste sobre una masa de Stent y dicha masa de Stent se implanta en el sitio del trauma vascular. 41. Una composición farmacéutica que comprende paclitaxel o docetaxel conjugado con un polímero soluble en agua o quelante. 15 42. La composición de la reivindicación 41, en donde el polímero soluble en agua es ácido poli-1-aspártico o ácido pol¡-1- glutámico. 43. La composición de la reivindicación 41, en donde el quelante es DTPA. 20 44. La composición de la reivindicación 43, que además comprende una cantidad terapéutica de un radionúclido quelado. 45. Un método para obtener una imagen de un sujeto que comprende: a) administrar a dicho sujeto una cantidad efectiva del agente 25 de la reivindicación 6; y b) medir las señales de la representación gráfica de centelleo para obtener una imagen. 46. Un dispositivo medio implantable, en donde el dispositivo se reviste con una composición que comprende paclitaxel o docetaxel conjugado con un ácido poliglutámico o ácido poliaspártico en una cantidad efectiva para inhibir la proliferación de células de músculo. 47. El dispositivo medico implantable de la reivindicación 46, definido además como una masa de Stent revestida con dicha composición. 48. El dispositivo médico implantable de la reivindicación 47, en donde dicha masa de Stent se adapta para ser utilizada después de la angioplastía de globo y la composición es efectiva para inhibir restenosis. 49. Una composición que comprende ácido poliglutámico conjugado con el 2' o 7-hidroxilo de paclitaxel. 50. Una composición que comprende ácido poliaspártico conjugado con el 2' o 7-hidroxilo de paclitaxel. 51. La composición de la reivindicación 49, en donde el ácido políglutámico se conjuga con el 2' y el 7-hidroxilo de paclitaxel. 52. La composición de la reivindicación 40, en donde el ácido poliaspártico se conjuga con el 2' y el 7-hidroxilo de paclitaxel. 53. Una composición que comprende un fármaco anti-tumoral conjugado con ácido-d-glutámico, ácido poli-1-glutámico, ácido poli-d1-glutámico, ácido poli-d-aspártico, ácido poli- 1 -aspártico, ácido poli-d1-aspártico, ácido poliacrílico, poli-2-hidroxietil 1-glutamina. carboximetil dextrano, ácido hialurónico, albúmina de suero humano, ácido algínico o combinación de los mismos, y en donde dicho fármaco anti-tumoral es paclitaxel, docetaxel, etopsido, teniposido, camptotecina o epotilona. 54. La composición de la reivindicación 53, en donde la composición es una composición farmacéutica que comprende paclitaxel o docetaxel conjugado a un polímero soluble en agua, en donde dicho polímero soluble en agua se selecciona del grupo que consiste de ácido-d-glutámico, ácido poli-1-glutámico, ácido poli-d 1 -glutámico, ácido poli-d-aspártico, ácido poli-1-aspártico, ácido polí-d1-aspártico, ácido poliacrílico, poli-2-h idroxietil 1-glutamina, carboximetil dextrano, ácido hialurónico, albúmina de suero humano, ácido algínico o combinación de los mismos. 55. La composición de la reivindicación 54, en donde el polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 5,000 a alrededor de 100,000. 56. La composición de la reivindicación 55, en donde el polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 20,000 a alrededor de 80,000. 57. La composición de la reivindicación 56, en donde el polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 30,000 a alrededor de 60,000. 58. La composición de la reivindicación 54, en donde la composición comprende paclitaxel o docetaxel conjugado con un polímero soluble en agua, en donde el polímero soluble en agua se selecciona del grupo que consiste de ácido poli-d-glutámico, ácido poli-1-glutámico, o ácido poli-d1-glutámíco o una combinación de los mismos.