MXPA97002809A - Formulaciones orales de ciclosporina - Google Patents

Abstract

Se dan a conocer formulaciones orales mejoradas de la ciclosporina, las cuales tienen alta biodisponibilidad y son capaces de su administración en cápsulas duras o en nanopartículas. En las presente formulaciones, la ciclosporina se entrega en un vehículo aceptable oralmente, que comprende al menos un solvente de alcanol, con 2ó3átomos de carbono, en combinación con al menos un agente tensoactivo no iónico. Las presente formulaciones además pueden comprender cuando menos un cosolvente, donde cosolventes de interés incluyen losácidos grasos y los dioles. Las presentes formulaciones encuentran uso en la terapia inmuno-supresora.

Description

' ) FORMULACIONES ORALES DE CICLOSPORINA Campo de la Invencién Esta invención se refiere a formulaciones orales de 5 la ciclosporina Antecedentes A pesar de los esfuerzos para evitar los rechazos de injertos a través de la correspondencia del tipo de tejido de un donador huésped, en la mayoría de los procedimientos de transplante, donde un órgano donador es introducido en un huésped, la terapia inmunos presora es crítica a la viabilidad mantenida del órgano del donador en el huésped. Se han empleado una variedad de agentes inmunosupresores en procedimientos de transplante, que incluyen la azatioprina, metotrexato, ciclofosfamida, FK-506, rapamicina y corticoesteroides. Los agentes que encuentran uso creciente en la terapia inmunosupresora, debido a su efecto potencial en las reacciones mediadas de células T, son las ciclosporinas. 20 Las ciclosporinas son una clase de polipéptidos cíclicos que consisten de once aminoácidos, que se producen como un metabolito por las especies de hongos, Tolypocladium inflatum Gams . Las ciclosporinas se ha observado inhiben reversiblemente los linfocitos inmunocompetentes, particularmente los linfocitos T en la fase G0 o G^ del ciclo celular. Las ciclosporinas se ha observado inhiben reversiblemente la producción y liberación de la linfocina. Aunque un número de ciclosporinas es conocido, la Ciclosporina A es la usada más ampliamente. El uso de la Ciclosporina A se ha informado prolonga la sobrevivencia de transplantes alogénicos que implican la piel, corazón, riñon, páncreas, médula del hueso, intestino delgado y pulmón. En trasplantes alogénicos, la Ciclosporina A se ha mostrado suprime la inmunidad humoral y, en mayor extensión, las reacciones inmunológicas mediadas de células, que incluyen el rechazo de aloinjertos, hipersensibilidad retardada, encefalomielitis alérgica experimental, artritis adyuvante de Freund y enfermedad de injertos vs. huésped. Aunque se ha tenido éxito con la Ciclosporina A, en seguida del transplante, la administración del agente debe ser continuada, puesto que los beneficios de la terapia de la ciclosporina son reversibles y ocurre el rechazo de injerto una vez que es discontinuada la administración de la Ciclosporina A. Aunque las formulaciones de ciclosporina para la administración tanto oral como intravenosa se han desarrollado, la administración oral de la ciclosporina se prefiere debido a la facilidad de administración y mayor aceptación por el paciente. Asimismo, la administración intravenosa de la ciclosporina puede resultar en reacciones anafilácticas, un efecto secundario no observado con las formulaciones orales. Las formulaciones orales de la ciclosporina que se han desarrollado y están actualmente en el mercado, incluyen formulaciones de cápsulas de gelatina suave y en solución, ambas de las cuales se venden con las marcas comerciales de SANDIMMUNE® y NEORAL™. En el uso de formulaciones orales de la ciclosporina en la terapia inmunosupresora, tanto el surtidor como el fabricante deben tener cuidado y estar conscientes de los muchos problemas inherentes. Con las formulaciones de la ciclosporina oral, la biodisponibilidad de la ciclosporina se puede limitar debido a la inmiscibilidad de la ciclosporina en agua y la tendencia de la ciclosporina a precipitar en ambientes acuosos. Además, la concentración de la ciclosporina presente en las formulaciones orales se puede limitar debido a la naturaleza hidrofóbica de la ciclosporina. Asimismo, la absorción de la ciclosporina por el tracto gastrointestinal puede ser errática de un lote de la formulación al siguiente, lo cual requiere la vigilancia constante de los niveles de la ciclosporina en la sangre durante el tratamiento. Finalmente, la estabilidad en el paquete y el almacenamiento son un problema con las formulaciones orales. Por ejemplo, con formulaciones de cápsulas suaves de gelatina de la ciclosporina, se debe emplear un paquete hermético al aire, lo cual es inconveniente debido a la volu inosidad y alto costo. Asimismo, las formulaciones de la ciclosporina pueden ser inestables a temperaturas bajas, ya que puede ocurrir la cristalización de la ciclosporina. Así, formulaciones orales convenientes de la ciclosporina serán formulaciones que resuelvan al menos algunos de los problemas anteriores. Idealmente, las formulaciones orales promoverán la alta biodisponibildiad, comprenderán altas concentraciones de la ciclosporina y serán reformables para la preparación en forma de cápsulas duras. Literatura Pertinente Physician ' s Desk Reference (1994) páginas 2071-2074 describe formulaciones orales de la ciclosporina, vendidas actualmente bajo la marca comercial de SANDIMMUNE®. También se describen formulaciones orales de la ciclosporina en el inserto del paquete de NEORAL™, (1995) (Sandoz Pharmaceuticals Corporation, East Hanover, New Jersey, 07936) . Patentes de E. U. A., de interés que describen ciclosporinas y sus derivados incluyen las Nos. 4,220,641, 4,639,434, 4,289,851 y 4,384,996. La patente de E. U. A., No. 5,047,396 describe una preparación intravenosa para la administración de la c?closporina. Las patentes de E. U. A., Nos. 4,388,307, 4,970,076 y 4,990,337, describen la preparación de formulaciones orales de la ciclosporina.

La preparación de cápsulas duras para la entrega oral de formulaciones farmacéuticas se describe en las patentes de E. U. A., Nos. 4,822,618, 4,576,284, 5,120,710 y 4,894,235. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Se dan a conocer formulaciones orales de ciclosporina y métodos para su empleo en la terapia inmunosupresora. En las presentes formulaciones, la ciclosporina se presenta en un vehículo aceptable oralmente, que comprende al menos un solvente de alcanol con 2 a 3 átomos de carbono, en combinación con al menos un agente tensoactivo no iónico. Las presentes formulaciones pueden además comprender uno o más cosolventes, donde estos cosolventes de interés son los esteres de ácidos grasos y dioles. Las formulaciones de la ciclosporina se pueden empacar como cápsulas duras. Por la inclusión de un agente tensoactivo de polioxialquileno, al diluir la dispersión estable en un medio acuoso, se suministran nanopartículas de ciclosporina, biodisponibles, amorfas, en un medio acuoso. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA8 FIGURAS La figura 1 suministra la concentración cresta de la ciclosporina (Cmá?) lograda en ratas para varias formulaciones orales de acuerdo con la presente invención, donde la Cm£? se muestra como un valor relativo comparado con la Cmá? lograda con la formulación SANDIMMUNE® ORAL (SO) .

La Figura 2 suministra el tiempo (Tmax) en e^ cual ocurrió la Cmáx para cada una de las formulaciones mostradas en la Figura 1, donde se proporciona el Tmáx como un valor relativo comparado con el Tmá? de la formulación SANDIMMUNE® ORAL (SO) . La Figura 3 suministra el área relativa bajo la curva de concentración en sangre-tiempo (AUC) de las formulaciones mostradas en la Figura 1, donde la AUC es provista como un valor relativo, comparado con el valor de la AUC para la formulación SANDIMMUNE® ORAL (SO) . La Figura 4 suministra la concentración cresta de la ciclosporina (Cmá?) lograda en seres humanos en varias formulaciones orales, de acuerdo con la presente invención, al igual que la solución SANDIMMUNE® ORAL ("Sand en la figura) . La Figura 5 suministra el tiempo (Tmá ) en el cual ocurre la Cmáx para cada formulación mostrada en la Figura 4. La Figura 6 suministra el área bajo la curva de concentración en sangre - tiempo (AUC) para cada una de las formulaciones mostradas en la Figura 4. DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES ESPECÍFICAS Se suministran formulaciones orales de la ciclosporina, las cuales promueven la biodisponibilidad y se pueden formular como cápsulas, particularmente cápsulas duras. En las presentes formulaciones, la ciclosporina está presente en un vehículo aceptable oralmente, que comprende al menos un solvente de alcanol de 2 03 átomos de carbono, en combinación con al menos un agente tensoactivo no iónico. Las presentes formulaciones pueden además comprender al menos un cosolvente, donde estos cosolventes de interés incluyen los esteres de ácidos grasos y los dioles. Cada uno de los componentes de las presentes formulaciones son aceptables farmacéuticamente. Además de suministrar una alta biodisponibilidad, las presentes formulaciones suministran una absorción reproducible de la ciclosporina, de un lote de una formulación particular, al siguiente. Estas formulaciones encuentran uso en la terapia inmunosupresora. Se conocen en el arte un número de ciclosporina que exhiben una actividad inmunosupresora y se pueden entregar en las formulaciones orales presentes. Las ciclosporinas que se pueden administrar en las presentes formulaciones incluyen la Ciclosporina A, Ciclosporina B, Ciclosporina C, Ciclosporina D y Ciclosporina G, al igual que sus análogos sintéticos. Véase el índice de Merck (1989) 2759. Las presentes formulaciones orales son particularmente adecuadas para la entrega de la Ciclosporina A. Cuando se entrega en las presentes formulaciones, la Ciclosporina A estará presente en concentraciones que varían de 50 a 150 mg/ml, usualmente de 100 a 150 mg/ml, con base en el volumen del componente vehículo de la formulación.

El componente vehículo de las presentes formulaciones incluirán un solvente de alcanol, donde este componente de solvente de alcanol comprenderá al menos un alcanol y usualmente no más de tres diferentes alcanoles, más usualmente no más de dos diferentes alcanoles, donde los alcanoles usualmente tendrán 2 ó 3 átomos de carbono, y 1 ó 2 grupos hidroxi, de modo que no exista más de 1 grupo hidroxi por 1.5 átomos de carbono. Alcanoles adecuados incluyen el etanol y el propilen-glicol- La cantidad total del solvente de alcanol en la formulación será al menos de aproximadamente el Q% (v/v) , usualmente al menos un 3% (v/v) , y puede ser tan alto como del 95% (v/v) , pero generalmente variará de alrededor del 5 al 75% (v/v) , usualmente de alrededor del 5 al 60% (v/v) y más usualmente de alrededor del 10 al 60% de la formulación. Cuando el etanol está presente en la formulación como un solvente de alcanol, la cantidad de este etanol podrá variar del 5 al 20% (v/v) , usualmente de alrededor del 5 al 15% (v/v) de la formulación, mientras, cuando está presente el propilen-glicol como un solvente de alcanol, la cantidad de este propilen-glicol en la formulación presente puede variar de alrededor del 5 al 90% (v/v) , usualmente de alrededor del 5 al 85% (v/v) , más usualmente de alrededor del 10 al 50% (v/v) de la formulación.

También presente en el vehículo aceptable oralmente estará al menos un agente tensoactivo de polioxialquileno no iónico, usualmente no más de dos agentes tensoactivos no iónicos de polioxialquileno. Estos agentes tensoactivos de polioxialquileno tendrán un equilibrio hidrofílico-lipofílico ("HLB") de aproximadamente 5 a 20, usualmente de alrededor de 8 a 16. Preferiblemente, los agentes tensoactivos no iónicos de polioxialquileno empleados en las presentes formulaciones serán los compuestos de polioxietileno. Estos compuestos de polioxietileno de interés incluyen: los alcoholes etoxilados, es decir los alcoholes de polioxietileno o alcoholes grasos etoxilados, donde las partes de alcohol tienen generalmente de 10 a 18, usualmente de 10 a 14 átomos de carbono, al igual que sus substituyentes de éter y de éster; y derivados de polioxietileno de esteres parciales de ácidos grasos, usualmente los monoésteres, de polioles con 4 a 6 átomos de carbono, usualmente de 6 átomos de carbono, donde estos polioles pueden ser anhídridos de poliol, por ejemplo el sorbitán. Las partes de ácidos grasos del presenta gente tensoactivo variarán típicamente de 10 a 18 átomos de carbono, el número de grupos de óxido de etiieno generalmente estará en el intervalo de 2 a 30, usualmente en el intervalo aproximado de 2 a 25. Agentes tensoactivos preferidos son el polioxietileno (4) -lauril-éter (BRIJ 30® y el polioxietileno (20) mono-sorbitán-monmo-oleato (TWEEN 80®) . La cantidad total de los agentes tensoactivos no iónicos presentes en las presentes formulaciones variará del 5 al 65%, usualmente de alrededor del 5 al 60% (v/v) de la formulación. Cuando el TWEEN 80® está presente en la formulación, usualmente estará presente en cantidades que varían del 5 al 60%, más usualmente de alrededor del 10 al 50% (v/v) de la formulación. Cuando está presente el BRIJ 30® en la presente formulación, usualmente estará presente en cantidades que varían del 10 al 45%, más usualmente de alrededor del 15 al 40% (v/v) de la formulación. Las presentes formulaciones pueden además comprender uno o más cosolventes, usualmente no más de tres diferentes cosolventes, más usualmente no más de dos diferentes cosolventes, donde cosolventes adecuados incluyen los esteres de ácidos grasos y los dioles, donde el cosolvente puede ser el 100% del éster de ácido graso, 100% del diol, o sus combinaciones. La cantidad total del cosolvente presente en la formulación puede variar de aproximadamente el 20 al 80% (v/v) y usualmente variará de alrededor del 25 al 75% (v/v) . Cuando está presente en la formulación, la relación del cosolvente al solvente en la presente formulación podrá variar de aproximadamente 1:1 hasta 15:1, pero usualmente variará de alrededor de 1:1 hasta 13:1.

Los esteres de ácidos grasos que pueden servir como cosolventes en las presentes formulaciones son aquellos esteres de ácidos grasos donde la cadena de hidrocarburo del ácido graso tiene de 12 a 18, usualmente de 14 a 18 átomos de carbono de longitud, donde el éster del ácido graso será un monoéster de un alcanol inferior. Esteres de ácidos grasos adecuados comprenderán generalmente una cadena de ácidos grasos de número par donde la cadena de hidrocarburo puede ser saturada o insaturada, usualmente con no más de dos sitios de insaturación. Ácidos grasos de interés generalmente serán de origen de plantas o de mamíferos, e incluyen el palmitato, estearato, palmitoleato, linoleato, linolenato y similares, particularmente el miristato y oleato. El alcohol del monóester del ácido graso será un alcanol inferior de 2 a 4 átomos de carbono en longitud, usualmente de 2 ó 3 átomos de carbono en longitud, con o sin ramificaciones. Los esteres de ácido grasos de interés particular son el miristato de isopropilo y el oleato de etilo. El miristato de isopropilo, cuando está presente variará de alrededor del 55 al 75% (v(v) y el oleato de etilo, cuando está presente, variará de alrededor del 35 al 75% (v/v) de la formulación total. Usualmente, el éster de ácido graso estará presente en una cantidad de al menos igual (v/v) y hasta de 8 veces la cantidad del agente tensoactivo en la formulación, usualmente no más de 5 veces la cantidad del agente tensoactivo en la formulación (v/v) . Los dioles pueden también estar presentes en las presentes formulaciones, en que estos dioles pueden estar presentes además de, o en lugar de, el cosolvente de éster de ácido graso. Los dioles de interés como cosolventes son generalmente líquidos a las temperaturas fisiológicas e incluyen dioles de 8 a 28 átomos de carbono, usualmente de 16 a 20 átomos de carbono, donde este diol puede ser un diol de polioxialquileno, en que el alquileno tiene 2 ó 3 átomos de carbono. Dioles adecuados para su uso como solventes pueden variar de 200 a 800 Daltons, usualmente de unos 200 a 650 Daltons. Dioles de interés particular incluyen los polietilen-glicoles, particularmente el polietilen-glicol 200 (PEG 200) , polietilen-glicol 400 (PEG 400) , polietilen-glicol 600 (PEG 600, y similares, con el PEG 400 siendo el preferido. Cuando están presentes como cosolventes en las presentes formulaciones, los dioles variarán de un 5 a un 60% (v/v) , usualmente alrededor del 5 al 55% (v/v) de la formulación. Para la formación de nanopartículas amorfas, convenientemente en la formulación, la cantidad total del alcanol inferior generalmente estará en el intervalo aproximado del 25 al 60 por ciento en peso, más usualmente en el intervalo aproximado del 30 al 50 por ciento en peso. La cantidad total del uno o más compuestos de alquilenoxi generalmente estará en el intervalo aproximado del 20 al 50 por ciento en peso, más usualmente en el intervalo aproximado de un 25 a un 40 por ciento en peso. Cuando se emplean combinaciones de los compuestos de polioxialquileno, la cantidad del éster de ácido grado variará generalmente de alrededor del 25 al 100% de los compuestos de polioxialquileno. En las presentes formulaciones, los propios cosolventes pueden impartir las propiedades físicas convenientes a la formulación, tal como la viscosidad, estabilidad y similares. Cuando sea deseado, la formulación puede además comprender agentes adicionales que impartan las propiedades físicas deseadas a la formulación, tal como agentes de espesamiento, agentes de suspensión, agentes de solidificación, y similares, donde estos agentes incluyen la acacia, carboximetil-celulosa, hidroxipropilcelulosa, lecitina, metil-celulosa, polietilen-glicoles de alto peso molecular, por ejemplo aquellos polietilen-glicoles con pesos moleculares que varían aproximadamente de 1000 a 6000, usualmente de 1000 a 5000 Daltons, povidona, alginato de sodio, goma de tragacanto, y similares. También pueden estar presentes en las formulaciones presentes un número de componentes menores los cuales suministren varias funciones, tal como inhibidores de enzima, preservativos, antioxidantes, agentes antimicrobianos, estabilizadores y similares. La cantidad total de estos agentes de espesamiento y otros aditivos, si están presentes en la formulación, normalmente no será mayor del 5% en peso, . usualmente del 2% en peso, más usualmente del 1% en peso de la formulación. Un número de excipientes pueden también estar presentes en las presentes formulaciones, como es conocido en el arte. Las presentes formulaciones son estables en un amplio intervalo de temperaturas, donde por estables se entiende que la integridad física de la formulación no está comprendida, por ejemplo, la cristalización del agente activo de ciclosporina no ocurrirá. Incluidas dentro del intervalo de temperatura en el cual las formulaciones presentes son estables son las temperaturas inferiores, tal como las empleadas en el almacenamiento refrigerado, donde estas temperaturas inferiores varían típicamente de 0 a 15ac, más típicamente de 2 a 8SC, aproximadamente. Las presentes formulaciones son adecuadas para la administración en forma de cápsulas, por ejemplo, cápsulas duras y suaves. Métodos para producir cápsulas duras que comprenden las formulaciones líquidas son conocidos en el arte y se describen en las patentes de E. U. A., Nos. 4,822,618 y 4,576,284, cuyas descripciones se incorporan aquí como referencia. En general, las cápsulas duras que encuentran uso con las presentes formulaciones comprenderán dos partes: un componente de cubierta y un componente de tapa. Los componentes de cubierta y de tapa se adaptan juntos para producir una cavidad encerrada de volumen definido, sellado en una cubierta de cápsula dura. Los componentes de cubierta y de tapa se pueden fabricar de un polímero hidrofílico, tal como el almidón o la gelatina. En la preparación de las cápsulas duras, la formulación líquida será vaciada dentro del componente de cubierta y luego la cápsula será sellada ajustando el componente de tapa sobre el componente de cubierta. El sello entre los dos componentes puede ser asegurado, impidiendo así la fuga de la formulación encerrada desde la cápsula, usando un sellador, como se describe en la patente EP 116744, cuya descripción se incorpora aquí como referencia. Para evitar la degradación en el estómago, las cápsulas que comprenden las presentes formulaciones pueden ser recubiertas con un recubrimiento entérico, el cual inhibe la degradación de la cápsula en el medio ácido del estómago. Una variedad de recubrimientos entéricos son conocidos en el arte. Véase, por ejemplo, la patente de E. U. A., No. 5,206,219, cuya descripción de incorpora aquí como referencia. Las composiciones, particularmente las nanopartículas que producen la formulación, pueden ser preparadas disolviendo la ciclosporina en el alcanol inferior, donde una pequeña proporción del compuesto de polioxialquileno puede también ser incluida, en general menos de un 50 por ciento en peso de la composición usada para disolver la ciclosporina. Una temperatura elevada se puede emplear, usualmente en el intervalo aproximado de 60 a 902C Después de disolver la ciclosporina, la proporción principal del compuesto de polialquilenoxi se puede agregar y la formulación total se lleva a las relaciones deseadas por la adición de los componentes apropiados. En general, la ciclosporina se puede disolver en el alcanol inferior (opcionalmente incluye una porción del compuesto de polialquilenoxi) en una relación en peso de aproximadamente 1:1.5 - 5, más usualmente de 1:2 - 4. Las presentes formulaciones encuentran uso en la terapia inmunosupresora. Esta terapia inmunosupresora se indica en una amplia variedad de enfermedades, que incluyen el síndrome nefrótico idiopático, la diabetes dependiente de insulina de tipo I, el síndrome de Behcet, la enfermedad de Crohn activa, la anemia aplástica, asma severa dependiente de corticoesteroides, psoriasis, artritis reumatoide y otras enfermedades, donde el sistema inmunológico puede jugar un papel patogénico. De interés particular es el uso de las presentes formulaciones en situaciones de transplantes, que incluyen los transplantes de órganos, tejidos o células alogénicas y xenogénicas, donde es conveniente la inmunosupresión para asegurar la viabilidad mantenida del órgano, tejido o célula transplantados, en seguida del transplante, es decir, impedir el rechazo del injerto o impedir la enfermedad del injerto vs huésped, por ejemplo, en seguida del transplante de la médula del hueso. Al usar las presentes formulaciones para suministrar la terapia inmunosupresora a un huésped, una cantidad efectiva de la ciclosporina será administrada oralmente para lograr el nivel deseado de la inmunosupresión en el huésped, dependiendo de la condición particular que se va a tratar. Con transplantes, usualmente una dosis inicial de la ciclosporina será administrada antes de la operación. En seguida del transplante del órgano del donador al huésped, la ciclosporina será administrada repetidamente, es decir crónicamente, al huésped para mantener la inmunosupresión. La dosis inicial será administrada 4 a 12 horas antes del transplante y puede variar de 10 a 18 mg/kg del huésped, usualmente de 10 a 15 mg/kg del huésped. En seguida de la operación, la dosis inicial continuará generalmente en una base diaria, por un período de 1 a 3 semanas, usualmente 1 a 2 semanas. La dosis puede luego ser disminuida a una dosis de mantenimiento de 3 a 10 mg/kg por día, usualmente de 3 a 6 mg/kg por día. El régimen al cual la dosis se reduce al nivel de mantenimiento puede variar del 3 al 8% por semana y usualmente será de un 5% por semana. La dosis se ajustará típicamente con base en los niveles sanguíneos para mantener una concentración de 150 a 250 mg/ml, según se mide por los ensayos de HPLC, RÍA, ELISA o TDx. Las presentes formulaciones pueden ser administradas en conjunto con agentes adicionales, cuando la terapia auxiliar se recomienda y es conocida en el arte. Por ejemplo, las formulaciones presentes pueden ser administradas en conjunto con corticosteroides adrenales, azatioprina y similares. La administración de las presentes formulaciones en conjunto con el transplante de un órgano de donador a un huésped, resultará en una prolongación de la viabilidad del órgano donador en el huésped como resultado de la supresión de la respuesta inmunológica del huésped a la presencia del órgano donador. Por "prolongación de la viabilidad" se entiende que el órgano donador permanece viable en el huésped por un período de tiempo más largo de aquél si no se hubiera empleado la terapia inmunosupresora en conjunto con el transplante. Así, una prolongación de la viabilidad incluye el mantenimiento de esta viabilidad por un período de tiempo indefinido. Un órgano donador se considera viable en tanto mantenga la funcionalidad en el medio del huésped. Para conveniencia del usuario, se suministran equipos que tienen la cantidad apropiada de la ciclosporina, uno o más niveles de dosis y los cosolventes, es decir los alcanoles inferiores y los compuestos de polialquilenoxi, por ejemplo al menos uno del etanol y el propilen-glicol, y cuando menos uno del polisorbato 80 y el PEG 400. Se ofrecen los siguientes ejemplos en forma de ilustración y de ninguna manera de limitación. EJEMPLO EXPERIMENTAL Varias formulaciones orales de la ciclosporina, de acuerdo con la presente invención, se prepararon. La biodisponibilidad de la ciclosporina en las formulaciones preparadas luego se observaron en ratas y en humanos. I Formulaciones Orales de la Ciclosporina Se prepararon las siguientes formulaciones orales de la Ciclosporina A. En cada caso, 100 mg de CsA, la cantidad indicada del agente tensoactivo, y la cantidad indicada del etanol o el propilen-glicol, se agregaron a un matraz volumétrico de 1.0 mi, y se logró el volumen final de 1.0 mi por la adición de un volumen adecuado de éster de ácido graso y/o el diol.

PG = propilen-glicol; EtOH = etanol Brij 30 = polioxietilen (4) - lauril - éter Tween 80 = polioxietilen (29)-monosorbitan-mono-oleato IO = isopropil-miristato EO = etil-oleato.

II. Estudios de la Biodisponibilidad in vivo para las Formulaciones 19-24 y 33-42. La biodisponibilidad de la ciclosporina en las formulaciones 19-24 y 33-42 se estudió como sigue. Como una medida de la biodisponibilidad, se determinaron los siguientes parámetros far acocinéticos: (a) la concentración cresta en la sangre de la ciclosporina (Cmax) ; (b) el tiempo (tmá?) para obtener la Cmax; y el área bajo la curva de concentración en la sangre - tiempo (AUC) . Además de las formulaciones 19-24 y 33-42, la biodisponibilidad de la ciclosporina en una solución oral (SO) de SANDIMMUNE®, bajo condiciones análogas, se observó para fines de comparación. Para cada una de las formulaciones anteriores, ratas Sprague-Dawley, de CsA natural, con peso de 250-350 g, se alimentaron con alimento estándar en pellas (Agway® 3000, Granville Mili, Greensboro, NC) y agua ad libitum . Un día antes del experimento, se insertó una cánula de hule de silicona en la s venas yugular derecha y femoral derecha, bajo leve anestesia de éter. Después de ayunar durante la noche, la CsA se administró por cebadora. En seguida de la administración, se recogieron muestras de sangre de 200 µl de la vena yugular en tubos de microcentrífuga de polipropileno de 0.5 mi, que contienen 0.3 mg de EDTA de Na liofilizado y se sometieron a agitación inmediatamente durante 10 segundos. Los tiempos del muestreo para los animales sometidos a las formulaciones orales fueron de 0, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36, 48 y 72 horas, después de la administración. La CsA, que incluye algunos de sus metabolitos, se determinó en la sangre total por el inmunoensayo de polarización fluorescente (FPI) (TDx, Abbott Lab.). En breve, 150 µl de la muestra de sangre total se transfirieron cuantitativamente a un tubo de microcentrífuga de 1.5 mi. Las células se sometieron a lisis y se disolvieron con 50 µl de un reactivo solubilizador que contiene un agente tensoactivo. Las proteínas luego se precipitaron y separaron con 300 µl de acetonitrilo. Después de centrifugar, el sobrenadante se sometió al ensayo FPI en un autoanalizador TDx, seguido por el procedimiento recomendado por Abbott Diagnostics. Puesto que el ensayo TDx se desarrolló originalmente para la sangre humana, algunos de los procedimientos recomendados se modificaron como sigue. Una serie de soluciones estándar de concentración de CsA conocida, se prepararon agregando una cantidad conocida de CsA a la sangre de la rata tratada con EDTA. Cuando la concentración de CsA en una muestra se espera sea mayor de 1.0 µg/ml, la muestra de sangre se diluyó 10 veces en un regulador de fosfato 0.1M, pH de 7.0. Para muestras diluidas, se obtuvo otro curva de calibración usando una serie de soluciones estándar que contienen cantidades conocidas de CsA, que en la sangre de las ratas es del 10% en volumen y el 90% del regulador de fosfato. Los parámetros far acocinéticos descriptivos se obtuvieron para el análisis no compartmental. La concentración cresta (Cmax) y el tiempo (Tmax) en el cual ocurrió esta concentración cresta, se estimaron por la inspección del perfil de concentración-tiempo, sin tratar. El área bajo la curva de concentración en sangre - tiempo (AUC) , desde el tiempo 0 hasta el último punto de datos (AUCg-t) se calculó de acuerdo con el procedimiento trapezoidal lineal. El área residual bajo el extremo de la curva de concentración en sangre - tiempo (AUC^-oo) se estimó como la relación de la concentración final observada (C*) a un régimen de primer orden constante, asociado con la fase de eliminación terminal del perfil de concentración-tiempo (?z) . El régimen de contacto ?z se determinó por la regresión log-lineal de los datos de concentración-tiempo en la fase log-lineal terminal aparente del perfil de concentración-tiempo (es decir los puntos 3 a 5 finales, dependiendo del perfil bajo análisis) . La AUC total (AUC-t-8) se tomó como la suma de AUC0_t Y AUC-t-8 Los resultados para cada formulación se compararon con los resultados obtenidos para el SO2 y se suministran en las Figuras 1-3. Estos resultados demuestran que, para la mayoría de las formulaciones, la mayor biodisponibilidad de la ciclosporina se logra con las presentes formulaciones en comparación con la solución oral (SO) SANDIMMUNE®, como se indica por los valores de AUC mayores de las presentes formulaciones. III. Biodisponibilidad humana in vivo de las Formulaciones 35, 43-46 y 48-52 . 48 personas saludables macho, con edad entre 19 y 55 años y no más de una desviación del 20% del peso ideal, se usaron como los sujetos de prueba. Se realizó una estudio cruzado de tres rutas, doble ciego, aleatorio, en ayunas, con una dosis sencilla. Los 48 sujetos formaron 6 grupos de 8 sujetos al azar. Cada grupo recibió una sola dosis de 300 mg de la ciclosporina de las formulaciones anteriores, o la solución oral (SO) de SANDIMMUNE®, en tres diferentes ocasiones, donde cada ocasión se separó por un período de recuperación de 7 días. Se requirió que los sujetos ayunaran 10 horas antes, y 4 horas después, de la dosificación. Se permitió agua ad libitum durante el estudio, excepto por un período de 1 hora antes y 2 horas después de la dosificación. Antes de la dosificación, se sacó una muestra de 15 mi de sangre. Para las administraciones, partes alícuotas de 3 mi de la formulación (300 mg) se combinaron con 200 mi de leche con chocolate y se ingirieron oralmente. Se sacaron 10 mi de muestras de sangre a t = 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 y 24 horas. También se sacó una muestra de sangre de 15 mi en un estudio posterior. Las concentraciones de la ciclosporina A en las muestras de sangre totales se ensayaron usando el TDx (Abbott Diagnostics, N. Chicago, IL) , de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se derivaron farmacocinéticas no compartmentales usando métodos estándar. La concentración máxima de sangre total (Cmá?) y el tiempo (Tmax) de su ocurrencia se compilaron de los datos de concentración-tiempo. El área bajo la curva de concentración de sangre-tiempo (AUC) se calculó por la regla trapezoidal lineal a la concentración de sangre última arriba del límite de la sensibilidad (25 mg/ml) y se extrapoló al infinito. Los valores observados de Cmax, Tmax y AUC para cada formulación se promediaron. Se suministraron los valores promedio de cada formulación en las Figuras 4 a 6. Los resultados demuestran que para cada formulación probada, la cmáx ocurrió al menos dos veces tan rápido como con la solución oral (SO) SANDIMMUNE® bajo las mismas condiciones. Asimismo, la AUC observada para las formulaciones de prueba fue al menos de 2000 ng-hora/ml mayor que la observada para la solución oral (SO) SANDIMMUNE® bajo las mismas condiciones. Con base en estos resultados, las formulaciones 35, 43-46 y 48-52 suministraron mayor biodisponibilidad en comparación con la solución oral (SO) SANDIMMUNE®. Se prepararon formulaciones para la formación de nanopartículas amorfas en la dilución en un medio acuoso. IV Formulaciones de Nanopartículas A. 5 g de ciclosporina A se agregaron a 5 mi de etanol. La mezcla se agitó para completar la disolución de la ciclosporina A. A la solución resultante se agregaron 25 g de polisorbato 80 y el volumen se completó a 50 mi por el 1,2-propilen-glicol. La mezcla se agitó suficientemente a la temperatura ambiente hasta que se formó una solución homogénea.

B. 5 g de ciclosporina A se agregaron a 5 mi de etanol. La mezcla se agitó hasta la disolución completa de la ciclosporina A. A la solución resultante se agregaron 15 g de polisorbato 80 y el volumen se completó a 50 mi por una mezcla del 1,2-propilen-glicol y el polietilen-glicol 400. La mezcla se agitó suficientemente a la temperatura ambiente hasta formar una solución homogénea. C. 1 mi de la solución obtenida en el Ejemplo 1 se agregó a 50 mi de agua con una jeringa de vidrio, como se recomendó para la administración oral de las emulsiones o microemulsiones concentradas en seres humanos. La adición de la solución fue seguido por una disolución rápida y se obtuvo una suspensión blanca de partículas finas, que tiene un reflejo azul, como suspensiones coloidales (efecto Tyndall) . Después de la centrifugación a 26,000 G durante 5 horas, el sedimento se lavó con agua y luego se centrifugó a 26,000 G durante 24 horas. Los procesos de lavado y centrifugación se repitieron dos veces bajo las mismas condiciones. Después de secar, se realizó un diagrama de rayos X del polvo. El sólido fue exclusivamente en forma amorfa. El sedimento se examinó por el microscopio electrónico de barrido. El sedimento estaba constituido por nanopartículas esféricas amorfas con un diámetro entre 200 y 400 nm, con la presencia de algunos agregados.

D. 2 mi de la solución obtenida en el Ejemplo 1, se agregaron a 100 mi de agua y la suspensión coloidal se examinó 10 minutos y 1 hora después de la dilución por el granulómetro láser de difracción/difusión (Malvern SB.OD) Después de 1 hora, se observaron dos grupos de partículas: uno representando el 70% del peso de la ciclosporina A, con un diámetro promedio de 300 nm, y el segundo representando el 30% del peso de la ciclosporina A, con un diámetro promedio de 20 µm, probablemente constituyendo agregados de nanopartículas. E. l mi de la solución obtenida en el Ejemplo l, se agregó a 50 mi de agua y la suspensión coloidal se agitó durante 10 minutos., La suspensión luego se agregó a 200 mi de jugo gástrico ácido artificial y se calentó a 372C. La suspensión coloidal homogénea se examinó por la granulometría láser de difracción/difusión (Malvern SB.OD) . La suspensión estaba constituida exclusivamente de nanopartículas con un diámetro promedio de 600 nm. F. 1 mi de la solución obtenida en el Ejemplo 1, se agregó directamente a 200 mi de jugo gástrico ácido artificial. La suspensión homogénea se calentó a 37fiC y se examinó rápidamente por la granulometría láser de difracción/difusión (Malvern SB.OD) . La suspensión estaba constituida exclusivamente de nanopartículas con un diámetro promedio de 350 nm. De los resultados y discusión anteriores, es evidente que se suministran novedosas formulaciones de ciclosporina tienen una alta biodisponibilidad, Las presentes formulaciones son capaces de comprender altas concentraciones de ciclosporinas y son estables durante el almacenamiento en un amplio intervalo de temperaturas, que incluyen las temperaturas bajas comúnmente usadas en la refrigeración. Las presentes formulaciones son capaces de entregarse en forma de cápsulas, que incluyen la forma de cápsulas duras, suministrando el fácil almacenamiento y manejo. Las formulaciones también proporcionan nanopartículas, las cuales resultan en una biodisponibilidad aumentada de la ciclosporina. Todas las publicaciones y solicitudes de patente citadas en la especificación, se incorporan aquí como referencia como si cada publicación o solicitud de patente individual se indicara específica e individualmente para ser incorporada como referencia. Aunque la invención anterior se ha descrito en algún detalle en forma de ilustración y ejemplo , para fines de claridad de entendimiento, será evidente fácilmente a los expertos ordinarios en la materia, a la luz de las enseñanzas de esta invención, que se pueden hacer ciertos cambios y modificaciones en ella sin apartarse del espíritu o ámbito de las reivindicaciones anexas.

Claims (14)

1. REIVINDICACIONES 1. Una formulación de ciclosporina, la cual consta de: una ciclosporina, al menos un solvente de alcanol, que tiene 2 ó 3 átomos de carbono, y al menos un agente tensoactivo no iónico de polioxialquileno, en que este agente tensoactivo se selecciona del grupo que consta de alcoholes de polioxietileno y monoésteres de ácidos grasos de polioles etoxilados, con 4 a 6 átomos de carbono.
2. 2. La formulación, de acuerdo con la reivindicación 1, en que esta formulación además consiste de cuando menos un cosolvente, seleccionado del grupo que consta de monoésteres de un alcanol inferior y un ácido graso, con 14 a 18 átomos de carbono, y dioles con 8 a 28 átomos de carbono.
3. 3. La formulación, de acuerdo con la reivindicación 1, en que el solvente de alcanol se encuentra en aproximadamente el 5 al 75% (volumen/volumen) de la formulación, y el cuando menos un agente tensoactivo no iónico de polioxialquileno está en aproximadamente el 5 al 65% (volumen/volumen) de la formulación, y el al menos un cosolvente se encuentra aproximadamente en el 20 al 80% (volumen/volumen) de la formulación.
4. 4. Una formulación de ciclosporina, la cual consta de: la Ciclosporina A; al menos un solvente de alcanol, seleccionado del grupo que consta del etanol y el propilen-gliol, en que este solvente de alcanol está en aproximadamente el 5 al 75% (volumen/volumen) de la formulación; al menos un agente tensoactivo no iónico de polioxietileno, en que este agente tensoactivo no iónico de polioxietileno se selecciona del grupo que consta de alcoholes de polioxietileno y monoésteres de sorbitanes etoxilados, y se encuentra aproximadamente en el 5 al 65% (volumen/volumen) de la formulación; y al menos un cosolvente, en que cuando menos uno de los cosolventes es n éster de un alcanol inferior con 2 a 4 átomos de carbono y un ácido graso con 14 a 18 átomos de carbono, en que este cosolvente está aproximadamente en un 20 a 80% (volumen/volumen) de la formulación.
5. 5. La formulación, de acuerdo con la reivindicación 4, en que el agente tensoactivo no iónico se selecciona del grupo que consta del polioxietileno (4)- lauril-éter y el polioxietileno (20) - mono-sorbitán-mono-oleato, este éster de ácido graso se selecciona del grupo que consta del miristato de isopropilo y el oleato de etilo, y la formulación comprende dos cosolventes, en que uno de los cosolventes es un diol con 8 a 28 átomos de carbono.
6. 6. Una formulación oral de ciclosporina, que consta de: la Ciclosporina A, en una concentración que varía aproximadamente de 50 a 150 mg/ml; un componente de solvente de alcanol, que consiste del etanol y el propilen-glicol, en que este componente de solvente de alcanol se encuentra aproximadamente en el 5 al 75% (volumen/volumen) de la formulación; y un monoéster de un sorbitan etoxilado, en aproximadamente el 10 al 50% (volumen/volumen) de la formulación.
7. 7. Una formulación, de acuerdo con la reivindicación 6, en que el etanol está aproximadamente entre el 5 y el 20% (volume /volumen) de la formulación.
8. 8. La formulación, de acuerdo con la reivindicación 6, en que el propilen-glicol está aproximadamente entre el 10 y el 50% (volumen/volumen) de la formulación.
9. 9. Una formulación de ciclosporina en cápsula dura, la cual consiste de: una cápsula dura que contiene la formulación oral de acuerdo con la reivindicación 1.
10. 10. Una dispersión acuosa de nanopartículas de ciclosporina, en que al menos el 50 por ciento en peso de la ciclosporina presente en la dispersión es de partículas menores de aproximadamente 1 µm, y la ciclosporina es amorfa.
11. 11. Una dispersión, de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende, en cantidades menores, un alcanol inferior, y al menos un agente tensoactivo de polioxietileno.
12. 12. Una dispersión, de acuerdo con la reivindicación 11, en que el alcanol inferior es al menos uno del etanol y el propilen-glicol, y el compuesto de polioxietileno es el polisorbato 80.
13. 13. Un conjunto que comprende la ciclosporina, al menos uno del etanol y el propilen-glicol y al menos uno del polisorbato 80 y el PEG 400.
14. 14. Un método para preparar una dispersión acuosa de partículas de ciclosporina, de acuerdo con la reivindicación 10, este método comprende: combinar al menos uno del etanol y el propilenglicol con la ciclosporina, para formar una solución y combinar la solución con un agente tensoactivo de polietilenoxi, para formar una segunda solución, la cual, al diluir con agua, forma nanopartículas amorfas de la ciclosporina.