MXPA06014002A - Tratamiento con cisplatina y un inhibidor de cinasa del receptor del factor de crecimiento epidermico (egfr). - Google Patents

Abstract

La presente invencion provee un metodo para la fabricacion de un medicamento para tratar tumores o metastasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una cantidad terapeuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina, con o sin agentes o tratamientos adicionales, tales como otros farmacos anti-cancer, o terapia por radiacion. La invencion tambien abarca una composicion farmaceutica que esta comprendida de una combinacion del inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina en combinacion con un portador farmaceuticamente aceptable. Un ejemplo preferido del inhibidor de cinasa EGFR que se puede utilizar en la practica de esta invencion es el compuesto HCL del erlotinib (tambien conocido como TarcevaTM).

Description

TRATAMIENTO CON CISPLATINA Y UN INHIBIDOR DE CINASA DEL RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDÉRMICO (EGFR) CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención está dirigida a composiciones y métodos para fabricar medicamentos previstos para tratar cáncer. En particular, la presente invención está dirigida a métodos para fabricar medicamentos que comprenden cisplatina y un inhibidor de cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR, por sus siglas en inglés). ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Cáncer es un nombre genérico para una amplia escala de malignidades celulares caracterizadas por un crecimiento no regulado, falta de diferenciación, y la habilidad de invadir tejidos locales y convertirse en metástasis. Estas malignidades neoplásticas afectan, con varios grados de prevalencia, cada tejido y órgano en el cuerpo. Se han desarrollado una multitud de agentes terapéuticos sobre las décadas pasadas para el tratamiento de varios tipos de cáncer. Los tipos más comúnmente utilizados de agentes anticáncer incluyen: agentes de alquilación de ADN (por ejemplo, ciclofosfamida, ifosfamida) , antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato, un antagonista de folato, y 5-fluoroacilo, un antagonista de pirimidina) , disruptores de microtúbulo (por ejemplo, vincristina, vinblastina, paclitaxel) , intercaladortes de ADN (por ejemplo, REF:177830 doxorubicina, daunomicina, cisplatina) , y terapia de hormona (por ejemplo, tamoxifen, flutamida) . De acuerdo con el Instituto de Cáncer Nacional, el cáncer de pulmón es la causa más grande individual de muertes por cáncer en los Estados Unidos y el responsable de casi el 30% de las muertes por cáncer en el país. De acuerdo con la organización de la salud mundial, existen más de 1.2 millones de casos alrededor del mundo de cáncer de pulmón y bronquios cada año, originando aproximadamente 1.1 millones de muerte anualmente . NSCLC es la forma más común de cáncer de pulmón y representa casi el 80% de todos los casos. Las opciones de tratamiento para cáncer de pulmón son cirugía, terapia por radiación y quimioterapia, ya sea solas o en combinación dependiendo de la forma y etapa del cáncer. Para el NSCLC avanzado, los agentes que han demostrado que son activos incluyen cisplatina (CisP; por ejemplo, platinol®) , carboplatina, paclitaxel, docetaxel, topotecan, irinotecán, vinorelbina, gemcitabina, e inhibidores de cinasa EGFR gefitinib y erlotinib. Los regímenes de quimioterapia de combinación que contienen cisplatina y contienen carboplatina han demostrado que producen grados de respuestas objetivos que son más altos que aquellos logrados con una quimioterapia de un solo agente ( eick, J. K. , y otros. (1991) J. Clin. Oncol . 9 (7) : 1157-1162) . Se ha reportado que paclitaxel tiene actividad con un solo agente en pacientes en la etapa IV, con grados de respuesta en la escala de 21% a 24% (Murphy W. K. , y otros (1993) J. Nati. Cáncer Inst. 85 (5) : 384-388) . Las combinaciones de paclitaxel han demostrado grados de respuesta relativamente altos, 1 año de supervivencia significativo y la mitigación de los síntomas del cáncer de pulmón (Johnson D.H. , y otros (1996) J. Clin. Oncol . 14 (7) : 2054-2060) . Con un régimen de paclitaxel más carboplatina, los grados de respuesta han estado en la escala de 27% a 51% con tasas de supervivencia de 1 año de 32% a 54%. Sin embargo, la eficacia de dichos tratamientos es tal que no se puede relacionar ningún régimen específico como terapia estándar por el momento . La sobre-expresión de la cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) , o su ligando TGF-alfa, frecuentemente están asociados con muchos cánceres, incluyendo cáncer de pecho, de pulmón, colorectal, y de cabeza y cuello (Salomón D. S., y otros (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 19:183-232; Wells, A. (2000) Signal, 1:4-11), y se cree que contribuyen al crecimiento de la malignidad de estos tumores. También se ha encontrado una eliminación-mutación específica en el gen EGFR que incrementa la tumorigenicidad celular (Halatsch, M-E. y otros (2000) J. Neurosurg. 92:297-305; Archer, G. E. y otros (1999) Clin. Cáncer Res. 5:2646-2652). La activación de las trayectorias de señalización estimuladas por EGFR promueven múltiples procedimientos que son promotores del cáncer potencialmente, por ejemplo, proliferación, angiogénesis, motilidad de célula e invasión, apoptosis disminuida e inducción de resistencia a fármaco. El desarrollo para el uso como agentes anti-tu or de compuestos que directamente inhiben la actividad de cinasa de EGFR, así como anticuerpos que reducen la actividad de cinasa EGFR, a través del bloqueo de la activación EGFR, son áreas de intensos esfuerzos de investigación (de Bono J. S. y Rowinsky, E. K. (2002) Trends in Mol. Medicine 8:S19-S26; Dancey, J. y Sausville, E. A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313). Varios estudios han demostrado o descrito que algunos inhibidores de cinasa EGFR pueden mejorar la aniquilación de la célula de tumor o neoplasia cuando se utilizan en combinación con ciertos otros agentes anti-cáncer o quimioterapéuticos o tratamientos (por ejemplo, Raben, D. y otros (2002) Semin. Oncol. 29:37-46; Herbst, R. S. y otros (2001) Expert Opin. Biol. Ther. 1:719-732; Magne, N y otros (2003) Clin. Can. Res. 9:4735-4732; Magne, N. y otros (2002) British Journal of Cáncer 86:819-827; Torrance, C. J. y otros (2000) Nature Med. 6:1024-1028; Gupta, R.A. y DuBois, R. N. (2000) Nature Med. 6:974-975; Tortora, y otros (2003) Clin. Cáncer Res. 9:1566-1572; Solomon, B. y otros (2003) Int. J. Radiat . Oncol. Biol. Phys. 55:713-723; Krishnan, S. y otros (2003) Frontiers in Bioscience 8, el-13; Huang, S y otros (1999) Cáncer Res. 59:1935-1940; Contessa, J. N. y otros (1999) Clin. Cáncer Res. 5:405-411; Li, M. y otros Clin. (2002) Cáncer Res. 8: 3570-3578; Ciardiello, F. y otros (2003) Clin. Cáncer Res. 9:1546-1556; Ciardiello, F. y otros (2000) Clin. Cáncer Res .6 : 3739-3747 ; Grunwald, V. and Hidalgo, M. (2003) J. Nat. Cáncer Inst. 95:851-867; Seymour L. (2003) Current Opin. Investig. Drugs 4 (6) : 658-666; M. Y. y otros (2003) Expert Rev. Anticancer Ther. 3:367-380; Bulgaru, A.M. y otros (2003) Expert Rev. Anticancer Ther. 3:269-279; Dancey, J. y Sausville, E. A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2: 92-313; Kim, E. S. y otros (2001) Current Opinión Oncol. 13:506-513; Arteaga, C. L. y Johnson, D. H. (2001) Current Opinión Oncol. 13: 491-498; Ciardiello, F. y otros (2000) Clin. Cáncer Res. 6: 2053-2063; publicaciones de patente de E.U.A. Nos. 2003/0108545; US 2002/0076408; y patente de E.U.A. No. 2003/0157104; y publicación de patente internacional No. WO 99/60023; WO 01/12227; WO 02/055106; WO 03/088971; WO 01/34574; WO 01/76586; WO 02/05791; y WO 02/089842). Un fármaco anti-neoplástico podría idealmente aniquilar células de cáncer selectivamente, con un amplio índice terapéutico relacionado con su toxicidad hacia células no malignas. Esto también podría retener su eficacia contra células malignas, aún después de una exposición prolongada al fármaco. Desafortunadamente, ninguna de las quimioterapias actuales posee dicho perfil ideal. Más bien, la mayor parte poseen índices terapéuticos muy estrechos. Además, las células cancerosas expuestas a concentraciones ligeramente sub-letales de un agente quimioterapéutico a menudo desarrollarán resistencia a dicho agente, y por lo general bastante resistencia cruzada a varios otros agentes antineoplásticos también. De esta forma, existe una necesidad de un tratamiento más eficaz para la neoplasia y otros trastornos proliferativos . Las estrategias para mejorar la eficacia terapéutica de los fármacos existentes ha involucrado cambios en la programación de su administración, y también su uso en combinación con otros agentes de modulación anticáncer o bioquímicos . La terapia de combinación es bien conocida como un método que puede dar como resultado una eficiencia mayor y efectos secundarios disminuidos con relación al uso de una dosis terapéuticamente relevante de cada agente solo. En algunos casos, la eficiencia de la combinación de fármaco es aditiva (la eficiencia de la combinación es aproximadamente igual a la suma de los efectos de cada fármaco solo) , pero en otros casos el efecto es sinergístico (la eficiencia de la combinación es mayor que la suma de los efectos de cada fármaco dado solo) . Sin embargo, aún permanece una necesidad crítica de tratamientos mejorados para cánceres de pulmón y otros cánceres. Esta invención provee terapias de combinación anti-cáncer que reducen las dosificaciones para componentes individuales requeridos para la eficiencia, por lo tanto disminuyendo los efectos secundarios asociados con cada agente, mientras se mantiene o se incrementa el valor terapéutico. La invención descrita aquí provee nuevas combinaciones de fármaco, y métodos para utilizar combinaciones de fármaco en el tratamiento de cáncer de pulmón y otros cánceres . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee un método para fabricar un medicamento previsto para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina. Preferiblemente, la combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina es prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, con o sin agentes o tratamientos adicionales, tales como otros fármacos anticáncer o terapia de radiación. La invención también abarca una composición farmacéutica que está comprendida de una combinación del inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Un ejemplo preferido de un inhibidor de cinasa EGFR que se puede utilizar en la práctica de esta invención es el compuesto HCl erlotinib (también conocido como Tarceva™) .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figuras 1A-1B: Concentraciones en el plasma de Erlotinib con el paso del tiempo (figura lA) Concentraciones en el plasma dependientes de dosis (figura IB) Correlación entre las concentraciones del fármaco de tumor y concentraciones del fármaco en el plasma. Se les dio a ratones llevando tumor dosis orales diarias de erlotinib a 0, 6.3, 12.5, 25.0, 100.0 o 150.0 mg/kg durante 21 días. En el día 28 después del implante de tumor, se recolectaron muestras de sangre (del seno retro-orbital) y de tumor en las horas 1 y 6 después de la dosificación. Las concentraciones de erlotinib se determinaron utilizando LC-MS/MS. Los valores son medias ± SD, n=3. Figura 2 : Efecto de erlotinib sobre la media del volumen de tumor en un modelo de xenoinjerto H460a NSCLC. Se implantó a los ratones células H460a NSCLC. Cuando se establecieron los tumores palpables, los animales se aleatorizaron de tal forma que cada grupo tubo una media de volumen de tumor de inicio de 100-150 mm3. Se les dio a los ratones dosis orales diarias de erlotinib a 0, 6.3, 12.5, 25 o 100 mg/kg durante 21 días. El tamaño del tumor se midió 3 veces por semana. Los valores son medias, n=10. Figura 3 : Farmacocinéticos de dosis individual de erlotinib 20 y 100 mg/kg en ratones atímicos nu/un hembra no llevando tumor.

Figura 4: Efecto de erlotinib y cisplatina solo y en combinación en un volumen de tumor medio en el modelo de xenoinjerto H460a NSCLC. Se implantó a los ratones células H460a NSCLC. Cuando se establecieron los tumores palpables, los animales se aleatorizaron de tal forma que cada grupo tuvo una media de volumen de tumor de inicio de 100-150 mm3. Los ratones se trataron con vehículo, erlotinib oral solo a 25 o 100 mg/kg/día durante 3 semanas, cisplatina i.p. solo a 1.5 o 6 mg/kg cada 6 días durante 3 semanas, o erlotinib a 25 mg/kg/día con cisplatina a 1.5 mg/kg cada 6 días . El tamaño del tumor se midió 3 veces por semana. Los valores son medias, n=10. Figura 5: Lesiones de la piel en ratones administrados con erlotinib. Se fijaron muestras de piel, con necropsia en 10% de formalina regulada en su pH, embebida en parafina, seccionada a 5 µ y teñida con ematoxilina y eosina. En ratones que se les dio erlotinib a 100 mg/kg/día durante 21 días, las lesiones de la piel fueron burdamente caracterizadas como enrojecidas y escamosas. Histológicamente las lesiones consistieron de acantosis epidérmica de media a moderada, difusa, hiperqueratosis epidérmica, escarosis focal e infiltración de células inflamatorias agudas principalmente en la dermis. Las lesiones fueron temporales y se disiparon con tratamiento continuo. Figuras 6A-6B: Fotomicrográficas de tinción inmunohistoquímica de NSCLC en modelos de xenoinjerto. Se tiñeron las secciones de tumor de los ratones desnudos con el antígeno KÍ67 para detectar la proliferación de las células en los ratones de control (Figura 6A) y los ratones tratados con erlotinib a 100 mg/kg/día durante 21 días (Figura 6B) . Las áreas oscuras que representan la tinción Ki67 que fueron indicativas de la actividad proliferativa. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El término "cáncer" en un animal se refiere a la presencia de células que poseen características típicas de células que causan el cáncer, tales como proliferación no controlada, inmortalidad, potencial metastático, grado de crecimiento y proliferación rápida, y ciertos aspectos morfológicos característicos. Por lo general, las células de cáncer estarán en la forma de un tumor, pero ciertas células pueden existir solas dentro de un animal, o pueden circular en la corriente sanguíneas como células independientes, tales como células leucémicas . "Crecimiento de célula anormal", como se utiliza aquí, a menos que se indique otra cosa, se refiere al crecimiento de la célula que es independiente de los mecanismos reguladores normales (por ejemplo, pérdida de la inhibición del contacto). Esto incluye el crecimiento anormal: (1) células de tumor (tumores) que proliferan a través de la expresión de una cinasa de tirosina mutada o la sobre-expresión de una cinasa de tirosina del receptor; (2) células benignas y malignas de otras enfermedades proliferativas en donde ocurre la activación de cinasa de tirosina aberrante; (4) cualesquiera tumores que proliferan medias de cinasas de tirosina del receptor; (5) cualesquiera tumores que proliferan a través de la activación de cinasa de serina/treonina aberrante; y (6) células benignas y malignas de otras enfermedades proliferativas en donde ocurre la activación de cinasa de serina/treonina aberrante. El término "tratar" como se utiliza aquí, a menos que se indique otra cosa, significa invertir, aliviar, inhibir el avance de, o prevenir, ya sea parcial o completamente, el crecimiento de tumores, metástasis de tumor, u otras células que causan cáncer o neoplásticas en un paciente. El término "tratamiento" como se utiliza aquí, a menos que se indique otra cosa, se refiere al acto de tratar. La frase "un método de tratamiento" o su equivalente, cuando se aplica, por ejemplo, al cáncer se refiere a un procedimiento o curso de acción que está designado para reducir o eliminar el número de células cancerosas en un animal, o aliviar los síntomas de un cáncer. "Un método de tratamiento" de cáncer u otro trastorno proliferativo no necesariamente significa que las células de cáncer u otro trastorno será, de hecho eliminado, que el número de células o trastorno será, de hecho, reducido, o que los síntomas de un cáncer u otro trastorno serán, de hecho aliviados. Por lo general, un método de tratamiento de cáncer se llevará a cabo aún con muy poca probabilidad de éxito, pero el cual, dado el historial médico, y la esperanza de supervivencia estimada de un animal, es sin embargo considerado como un curso de acción benéfico global. El término "agente terapéuticamente efectivo" significa una composición que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que está siendo investigado por el investigador, veterinario, doctor médico u otro médico. El término "método para la fabricación de un medicamento" se refiere a la fabricación de un medicamento para uso en la indicación como se especifica aquí y en particular para uso en tumores, metástasis de tumor, o cáncer en general . El término se refiere al formato de la reivindicación así llamada "tipo Suizo" en la indicación especificada. El término "cantidad terapéuticamente efectiva" o "cantidad efectiva" significa la cantidad del compuesto o combinación en cuestión que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que está siendo investigado por el investigador, veterinario, doctor médico u otro médico. Los datos presentados en los Ejemplos aquí a continuación demuestran que la co-administración de cisplatina con un inhibidor de cinasa EGFR es efectiva para el tratamiento de cánceres avanzados, tales como cáncer colorectal. Por consiguiente, la presente invención provee un método para la fabricación de un medicamento previsto para tratar tumores o metástasis de tumor en un paciente, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina. Preferiblemente, dicha combinación está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente. En una modalidad los tumores o metástasis de tumor se tratarán como tumores colorectales o metástasis de tumor. Preferiblemente, dichas sustancias están previstas para la administración al paciente simultánea o secuencialmente. Por consiguiente, la presente invención además provee un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizada en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente. Preferiblemente, adicionalmente, se utilizan uno o más agentes citotóxicos diferentes, quimioterapéuticos o anti-cáncer, o compuestos que mejoran los efectos de dichos agentes .

En el contexto de esta invención, otros agentes citotóxicos, quimioterapéuticos, o anti-cáncer adicionales, o compuestos que mejoran los efectos de dichos agentes, incluyen, por ejemplo: agentes de alquilación o agentes con un acción de alquilación, tales como ciclofosfamida (CTX; por ejemplo, cytoxan®) , clorambucil (CHL; por ejemplo, leukeran®) , busulfan (por ejemplo, myleran®) , melf lan, carmustina (BCNU) , estreptozotocina, trietilenmelamina (TEM) , mitomicina C, y similares; antimetabolitos, tales como metrotrexato (MTX) , etoposida (VP16; por ejemplo, vepesid®) , 6-merca topurina (6MP) , 6-tiocguanina (6TG) , citarabina (Ara-C) , 5-fluorouracil (5-FU) , capecitabina (por ejemplo, Xeloda®) , dacarbazina (DTIC) , y similares; antiobióticos , tales como actiomicina D, toxorubicina (DXR; por ejemplo, adriamycin®) , daunorubicina (daunomicina), bleomicina, mitramicina y similares; alcaloides, tales como alcaloides vinca tales como vincristina (VCR) , vinblastina, y similares; y otros agentes antitumor, tales como paclitaxel (por ejemplo, taxol®) , y derivados de paclitaxel, los agentes citoestáticos, glucocorticoides tales como dexametasona (DEX; por ejemplo, decadron®) y coticoesteroides tales como prednisona, inhibidores de la enzima de nucleósido tales como hidroxiurea, enzimas de depleción de aminoácido tales como asparaginasa, leucovorin, ácido folínico y otros derivados de ácido fólico, y similares, diversos agentes anti-tumor. Los siguientes agentes también se pueden utilizar como agentes adicionales: arnifostina (por ejemplo, ethyol®) , dactinomicina, mecloretamina (mostaza de nitrógeno) , estreptozocina, ciclofosfamida, lornustina (CCNU) , doxorubicina lipo (por ejemplo, doxil®) , gemcitabina (por ejemplo, gemzar®) , daunorubicina lipo (por ejemplo, daunoxome®) , procarabicina, mitomicina, docetaxel (por ejemplo, taxotere®) , aldesleucina, carboplatina, cladribina, camptotecina, CPT 11 (irinotecan) , 10-hidroxi 7-etil-camptotecina, (SN38) , floxuridina, fludarabina, ifosfamida, idarubicina, mesna, interferón alfa, interferón beta, mitoxantrona, topotecan, leuprolida, magestrol, melfalan, mercaptopurina, plicamicina, mitotano, pegaspargasa, pentostatina, pipobroman, plicamicina, tamoxifen, teniposida, testolactona, tioguanina, tiotepa, mostaza de uracilo, vinorelbina, clorambucil. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está previsto para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, en donde además, se utilizan uno o más agentes anti-hormonales . Como se utiliza aquí, el término "agente anti-hormonal" incluye compuestos orgánicos o peptídicos naturales o sintéticos que actúan para regular o inhibir la acción de la hormona sobre los tumores . Los agentes antiohormonales incluyen, por ejemplo: antagonistas del receptor esteroide, anti-estrógenos tales como tamoxifen, raloxifen, aromatasa que inhibe 4(5)-imidazoles, otros inhibidores de aromatasa, 42-hidroxitamoxifen, trioxifen, ceoxifen, LY 117018, onapristona, y toremifen (por ejemplo, Fareston®) ; anti-andrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida, y goserelina; y sales farmacéuticamente aceptables, ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores; agonistas y/o antagonistas de hormonas de glicoproteína tales como la hormona estimuladora de folículo (FSH) , hormona estimuladora de tiroides (TSH) , y la hormona lutinizante (LH) y LHRH (hormona de liberación de la hormona leutinizante) ; acetato de goserelina del agonista LHRH, comercialmente disponible como Zoladex®, (AstraZeneca) ; el antagonista de LHRH D-alaninamida N-acetil-3- (2-naftalenil) -D-alanil-4-cloro-D-fenilalanil-3- (3-piridinil) -D-alanil-L-seril-N6- (3-piridinilcarbonil) -L-lisil-N6- (3-piridinilcarbonil) -D-lisil-L-leucil-N6- (1-metiletil) -L-lisil-L-prolina (por ejemplo, Antide®, Ares-Serono) ; acetato de ganirelix del antagonista de LHRH; el anti-andrógeno esteroidal de acetato de ciproterona (CPA) y acetato de megestrol, comercialmente disponible, Megace® (Bristol-Myers Oncology) ; el anti-andrógeno no esteroidal flutamida (2-metil-N- [4, 20-nitro-3- (trifluorometil) fenilpropanamida) , comercialmente disponible, Eulexin® (Schering Corp.); el anti-andrógeno no esteroidal de nilutamida, (5, 5-dimetil-3- [4-nitro-3- ( trifluorometil-4 ' -nitrofenil) -4, 4-dimeti1-imidazolidin-diona) ; y antagonistas para otros receptores no permisibles, tales como antagonistas para RAR, RXR, TR, VDR, y similares . El uso de agentes citotóxicos y otros agentes anticáncer descritos anteriormente en regímenes quimioterapéuticos están generalmente bien caracterizados en las técnicas de terapia de cáncer, y su uso cae bajo las mismas consideraciones para el monitoreo de la tolerancia y efectividad y para controlar las rutas de administración y dosificaciones, con algunos ajustes. Por ejemplo, las dosificaciones actuales de los agentes citotóxicos puede variar dependiendo de la respuesta de célula cultivada del paciente determinada a través del uso de métodos de histocultura. Generalmente, la dosificación se reducirá comparada con la cantidad utilizada en ausencia de otros agentes adicionales. Las dosificaciones típicas de un agente citotóxico efectivas puede estar en la escala recomendada por el fabricante, y en donde se indica a través de las respuestas in Vitro o respuestas en modelos de animales, se puede reducir por hasta aproximadamente un orden de magnitud en cuanto a concentración o cantidad. De esta forma, la dosificación actual dependerá del juicio del médico, la condición del paciente, y la efectividad del método terapéutico con base en la respuesta in Vitro de las células malignas cultivadas principales o muestras de tejido histocultivadas, o las respuestas observadas en los modelos de animales apropiados. En el contexto de esta invención, de los otros agentes citotóxicos adicionales anteriores quimioterapéuticos o anticáncer los compuestos gemcitabina, taxotere, y vinorelbina son preferidos . También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, cuando además se utiliza uno o más inhibidores anti-angiogénesis . Los agentes anti-angiogénicos incluyen, por ejemplo, inhibidores VEGFR, tales como SU-5416 y SU-6668 (Sugen Inc. del Sur de San Francisco, Calif., Estados Unidos), o como se describen en, por ejemplo la Solicitud Internacional No. WO 99/24440, WO 99/62890, WO 95/21613, WO 99/61422, WO 98/50356, WO 99/10349, WO 97/32856, WO 97/22596, WO 98/54093, WO 98/02438, WO 99/16755, y WO 98/02437, y las patentes de E. U. A. Nos. 5,883,113, 5,886,020, 5,792,783, 5,834,504 y 6,235,764; inhibidores VEGF tales como IM862 (Cytran Inc. de Kirkland, Wash., Estados Unidos); angiozima, una ribosina sintética de Ribozima (Boulder, Coló.); y anticuerpos para VEGF, tales como bevacizumab (por ejemplo, Avastin™, Genentech, Sur de San Francisco, CA) , un anticuerpo humanizado recombinante para VEGF; antagonistas del receptor de integrina y antagonistas de integrina tales como las integrinas ?vß3, 00^5 y oCvíSd, y subtipos de las mismas, por ejemplo cilengitidas (EMD 121974) , o los anticuerpos anti-integrina, tales como por ejemplo los anticuerpos humanizados específicos 0(vß3 (por ejemplo, Vitaxin®) ; factores tales como IFN-alfa (patentes de E. U. A. Nos. 41530,901, 4,503,035, y 5,231,176); fragmentos de angioestatina y plasminógeno (por ejemplo, kringle 1-4, kringle 5, kringle 1-3 (O'Reilly, M. S. y otros (1994) Cell 79:315-328; Cao y otros (1996) J. Biol. Chem. 271:29461-29467; Cao y otros (1997) J. Biol. Chem. 272:22924-22928); endostatina (O'Reilly, M. S. y otros (1997) Cell 88:277; y la Publicación de Patente Internacional No. WO 97/15666); trombospondina (TSP-1; Frazier, (1991) Curr. Opin. Cell Biol. 3:792); factor 4 de plaqueta (PF4); activador de plasminógeno/inhibidores de urocinasa; antagonistas del receptor de urocinasa; heparinasas; análogos de fumagilina tales como TNP-4701; suramin y análogos de suramin; esteroides angioestáticos; antagonistas bFGF; antagonistas flk-1 y flt-1; agentes anti-angiogénesis tales como inhibidores MMP-2 (matriz-metaloproteinasa 2) e inhibidores MMP-9 (matiz-metaloproteinasa 9. Ejemplos de inhibidores de metaloproteinasa de matriz útiles se describen en las Publicaciones de Patente Internacionales Nos. WO 96/33172, WO 96/27583, WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/34918, WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667, and WO 99/07675, Publicaciones de Patente Europea Nos. 818,442, 780,386, 1,004,578, 606,046, y 931,788; Publicación de Patente de Gran Bretaña No. 9912961, y Patentes de E. U. A. Nos. 5,863,949 y 5,861,510. Los inhibidores MMP-2 y MMP-9 preferidos son aquellos que tienen poca o nada de actividad que inhibe MMP-1. Más preferidas son aquellas que selectivamente inhiben MMP-2 y/o MMP-9 con relación a otras metaloproteinasas de matriz (es decir, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7 , MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12, y MMP- 13) . También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, en donde además, se utilizan uno o más agentes pro-apoptóticos o estimuladores de apoptosis de la célula de tumor. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, en donde además, se utilizan uno o más inhibidores de transducción de señal. Los inhibidores de transducción de señal incluyen, por ejemplo, inhibidores del receptor erbB2 , tales como moléculas orgánicas, o anticuerpos que se enlazan al receptor erbB2 , por ejemplo, trastuzumab (por e emplo, Herceptin®) ; inhibidores de otras cinasas de tirosina de proteína, por ejemplo imitinib (por ejemplo, Gleevec®); inhibidores ras, inhibidores MEK; inhibidores mTOR; inhibidores PDK-1; inhibidores de cinasa dependiente de ciclina; inhibidores de cinasa C de proteína; e inhibidores PDK-1 (ver, Dancey, J. y Sausville, E. A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313, para una descripción de varios ejemplos de dichos inhibidores, y su uso en el ensayos clínicos para el tratamiento de cáncer) . Los inhibidores del receptor ErbB2 incluyen, por ejemplo: inhibidores del receptor ErbB2 , tales como GW-282974 (Glaxo Wellcome pie) , anticuerpos monoclonales tales como AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc. of The Woodlands, Tex. , Estados Unidos) , e inhibidores erbB2 tales como aquellos descritos en las Publicaciones Internacionales Nos. WO 98/02434, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 98/02437, WO 97/13760, y WO 95/19970, y Patentes de E. U. A. Nos. 5,587,458, 5,877,305, 6,465,449 y 6,541,481. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, en donde además, se utiliza un anticuerpo anti-HER2 o un fragmento in unoterapéuticamente activo del mismo. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, en donde además, se utilizan uno o más agentes anti-proliferativos adicionales. Los agentes antiproliferativos adicionales incluyen, por ejemplo: inhibidores de transferasa de proteína de farnesilo de enzima e inhibidores de cinasa de tirosina del receptor PDGFR, incluyendo los compuestos descritos y reclamados en las Patentes de E. U. A. Nos. 6,080,769, 6,194,438, 6,258,824, 6,586,447, 6,071,935, 6,495,564, 6,150,377, 6,596,735 y 6,479,513, y la Patente de Publicación Internacional WO 01/40217. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, en donde adicionalmente se utiliza un inhibidor COX II (ciclooxigenasa II) . Ejemplos de inhibidores COX-II útiles incluyen alecoxib (por ejemplo, Celebrex™) , valdecoxib, y rofecoxib. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, en donde además se utiliza un radiofarmacéutico. En lugar de agregar un radiofarmacéutico o adicionalmente, el tratamiento se puede llevar a cabo con radiación. La fuente de radiación puede ser ya sea externa o interna al paciente que se está tratando. Cuando la fuente es externa al paciente, la terapia es conocida como una terapia de radiación de rayo externo (EBRT, por sus siglas en inglés) . Cuando la fuerte de radiación es interna al paciente, el tratamiento es denominado branquiterapia (BT, por sus siglas en inglés) . Los átomos radioactivos para uso en el contexto de esta invención se pueden seleccionar del grupo que incluye, pero no se limita a, radio, cesio-37, iridio-192, americio-241, oro-198, cobalto-57, cobre-67, tecmetio-99, yodo-123, yodo-131, e indio-111. Cuando el inhibidor de cinasa EGFR para esta invención es un anticuerpo, también es posible marcar el anticuerpo con dichos isótopos radioactivos . La terapia de radiación es un tratamiento estándar para controlar tumores no removibles o inoperables y/o metástasis de tumor. Se han visto resultados mejorados cuando la terapia por radiación se ha combinado con quimioterapia. La terapia por radiación se basa en el principio de que la radiación de alta dosis distribuida a un área objetivo dará como resultado la muerte de las células reproductoras tanto en el tumor como en los tejidos normales. El régimen de dosificación de radiación generalmente se define en términos de dosis absorbida de radiación (Gy) , tiempo y fraccionamiento, y más cuidadosamente definida por el oncologista. La cantidad de radiación que recibe un paciente dependerá de varias consideraciones, pero las dos más importantes son la ubicación del tumor con relación a otras estructuras u órganos críticos del cuerpo, y la extensión a la cual el tumor se ha esparcido. Un curso de tratamiento típico para un paciente que experimenta terapia por radiación será una programación del tratamiento durante un periodo de 1 a 6 semanas, con una dosis total de entre 10 y 80 Gy administrada al paciente en una sola fracción diaria de aproximadamente 1.8 a 2.0 Gy, 5 días a la semana. En una modalidad preferida de esta invención existe una sinergia cuando los tumores en pacientes seres humanos se tratan con un tratamiento de combinación de la invención y radiación. En otras palabras, la inhibición del crecimiento del tumor por medio de agentes comprende la combinación de la invención mejorada cuando se combina con radiación, opcionalmente con agentes quimioterapéuticos o anticáncer adicionales. Los parámetros de las terapias por radiación adyuvantes están, por ejemplo, contenidos en la publicación de Patente Internacional WO 99/60023. También es más preferido un método para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está prevista para la administración al paciente simultánea o secuencialmente, en donde además, se utilizan uno o más agentes capaces de mejorar las respuestas inmunes antitumor. Los agentes capaces de mejorar las respuestas antitumor incluyen, por ejemplo anticuerpos CTLA4 (antígeno de linfocito citotóxico 4) (por ejemplo MDX-CTLA4) , y otros agentes capaces de bloquear CTLA4. Los anticuerpos CTLA4 específicos que se pueden utilizar en la presente invención incluyen aquellos descritos en la patente de E.U.A. No. 6,682,736. También es más preferido un método para la fabricación de medicamento para reducir los efectos secundarios causados por el tratamiento de tumores o metástasis de tumor, caracterizados en que se utiliza una combinación de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina y está previsto para la administración al paciente simultanea o secuencialmente en cantidades que son efectivas para producir un efecto aditivo, o súper aditivo, o antitumor sinergístico y que es efectivo para inhibir el crecimiento del tumor. La presente invención además provee un método para el tratamiento de cáncer, que comprende la administración a un sujeto en la necesidad de dicho tratamiento (i) una primera cantidad efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad efectiva de cisplatina. La presente invención también provee un método para el tratamiento de cáncer que comprende la administración a un sujeto en la necesidad de dicho tratamiento (i) de una primera cantidad sub-terapéutica del inhibidor de cinasa EGFR erlotinib, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad sub-terapéutica de cisplatina. Adicionalmente, la presente invención provee una composición farmacéutica que comprende un inhibidor EGFR y cisplatina en un portador farmacéuticamente aceptable. La presente invención además provee una composición farmacéutica, en particular para uso en cáncer, que comprende (i) una primera cantidad efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (ii) una segunda cantidad efectiva de cisplatina. Dicha composición opcionalmente comprende portadores y/o excipientes farmacéuticamente aceptables . La presente invención además provee una composición farmacéutica, en particular para uso en cáncer que comprende (i) una primera cantidad sub-terapéutica del inhibidor de cinasa EGFR erlotinib, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad sub-terapéutica de cisplatina. Dicha composición opcionalmente comprende portadores y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. Preferiblemente, el inhibidor de cinasa EGFR elotinib. Como se utiliza aquí, el término "paciente" preferiblemente se refiere a un ser humano en la necesidad de tratamiento con un inhibidor de cinasa EGFR para cualquier propósito, y más preferiblemente un ser humano en la necesidad de dicho tratamiento para tratar cáncer, o una condición o lesión precancerosa. Sin embargo, el término "paciente" también se puede referir a animales no seres humanos, preferiblemente mamíferos tales como perros, gatos, caballos, vacas, puercos, ovejas, y primates no humanos, entre otros, que están en la necesidad de tratamiento con un inhibidor de cinasa EGFR. En una modalidad preferida, el paciente es un ser humano en la necesidad de tratamiento para cáncer de, o una condición o lesión precancerosa. El cáncer es preferiblemente cualquier cáncer tratable, ya sea parcial o completamente, a través de la administración de un inhibidor de cinasa EGFR. El cáncer puede ser, por ejemplo, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón de célula no pequeña (NSCL) , cáncer de pulmón de célula broncoalveolar, cáncer de hueso, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer del estomago, cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de pecho, cáncer uterino, carcinoma de los conductos de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cerviz, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de las glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma de tejido suave, cáncer de uretra, cáncer del pene, cáncer de próstata, cáncer de la vejiga, cáncer de riñon o del uretra, carcinoma de célula renal, carcinoma de pelvis renal, mesiotelona, cáncer hepatocelular, cáncer biliar, leucemia crónica o aguda, linfomas linfosíticos, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) tumores del eje espinal, glioma del tallo cerebral, glioblastoma multiforme, astrotitomas , schwanomas, ependimonas, méduloblastomas, meningiomas, carcinomas de célula escamosa, adenoma de pituitaria, incluyendo versiones refractarias de cualquiera de los cánceres anteriores, o una combinación de uno ó más de los cánceres anteriores . La condición o lesión precancerosa incluye, por ejemplo, el grupo que consiste de leucoplaquia oral, queratosis actínica (queratosis solar), pólipos precancerosos del colon o recto, displasía epitelial gástrica, displasía adenomatosa, síndrome de cáncer de colon no de pólipo hereditaria (HNPCC) , esófago de Barret, displasía de vejiga, y condiciones cérvicas precancerosas . Preferiblemente, el cáncer es cáncer de colon y más preferiblemente cáncer colorectal. También preferiblemente, el cáncer es cáncer de pulmón y más preferiblemente cáncer de pulmón de célula no pequeña (NSCL) . Para propósitos de la presente invención, "co-administración de" y "co-administración" de cisplatina con un inhibidor de cinasa EGFR (ambos componentes referidos de aquí en adelante como los "dos agentes activos") se refieren a cualquier administración de dos agentes activos, ya sea separadamente o juntos, en donde los dos agentes activos se administran como parte de un régimen de dosis apropiado designado para tener el beneficio de la terapia de combinación. De esta forma, los dos agentes activos se pueden administrar ya sea como parte de la misma composición farmacéutica o en composiciones farmacéuticas separadas. La cisplatina se puede administrar antes de, al mismo tiempo de, o subsiguiente la administración del inhibidor de cinasa EGFR o en combinación del mismo. Cuando se administra el inhibidor de cinasa EGFR al paciente a intervalos repetidos, por ejemplo, durante un curso estándar de tratamiento, la cisplatina se puede administrar antes de, al mismo tiempo que, o subsiguiente a, cada administración del inhibidor de cinasa EGFR, o alguna combinación del mismo, o a intervalos diferentes con relación al tratamiento del inhibidor de cinasa EGFR o en una sola dosis antes de, en cualquier momento durante, o subsecuente al curso de tratamiento con inhibidor de cinasa EGFR. El inhibidor de cinasa EGFR típicamente se administrara al paciente en un régimen de dosis que provee el tratamiento más efectivo de cáncer (tanto para la perspectiva de eficacia como de seguridad) para el cual el paciente está siendo tratado como se conoce en la técnica, y se describe, por ejemplo en la publicación de patente internacional No. WO 01/34574. Al conducir un método de tratamiento de la presente invención, el inhibidor de cinasa EGFR puede administrarse en cualquier ruta efectiva conocida en la técnica tal como a través de la ruta oral, tópica, intravenosa, intra-peritional, intramuscular, intra-articular, subcutánea, intranasal, intraocular, vaginal, rectal, o intradérmica, dependiendo del tipo de cáncer que se está tratando, el tipo de inhibidor de cinasa EGFR que se está utilizando (por ejemplo molécula pequeña, anticuerpo, construcción de ARNi o antisentido) y el juicio médico del médico que prescribe según se basa, por ejemplo, en los resultados de los estudios clínicos publicados. La cantidad del inhibidor de cinasa EGFR administrado y el tiempo de la administración del inhibidor de cinasa EGFR dependerá del tipo (especie, genero, edad, peso, etc.) y la condición del paciente que se está tratando, la severidad de la enfermedad o condición que se está tratando, y la ruta de administración. Por ejemplo, los inhibidores de cinasa EGFR de molécula pequeña se pueden administrar en un paciente en dosis en escala de 0.001 a 100 mg/kg del peso corporal por día o por semana en dosis individuales o divididas, o a través de infusión continua (ver por ejemplo la publicación de patente internacional No. WO 01/34574) . En particular, HCL de erlotinib se puede administrar en paciente en dosis sin escala de 5-200 mg por día, o 100-1600 mg por día, en dosis individuales o divididas, o a través de infusión continua. Una dosis preferida es de 150 mg/día. Los inhibidores de cinasa EGFR basados en anticuerpo, o instrucciones de ARNi, antisentido o ribozima, se pueden administrar al paciente en dosis en escala de 0.1 a 100 mg/kg del peso corporal por día o por semana en dosis individuales o divididas, o a través de infusión continúa. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior de la escala anteriormente mencionada pueden ser más que adecuadas, mientras que en otros casos pueden utilizarse dosis más grandes sin causar ningún efecto secundario dañino, siempre que dichas dosis más grandes primero se dividan en varias pequeñas dosis para la administración a lo largo del día. Los inhibidores de cinasa EGFR y cisplatina se pueden administrar ya sean separadamente o juntos a través de las mismas o diferentes rutas, y en un amplia variedad de diferentes formas de dosificación. Por ejemplo, el inhibidor de cinasa EGFR preferiblemente se administra oral o parenteralmente, mientras la cisplatina preferiblemente se administra parenteralmente. Cuando el inhibidor de cinasa erlotinib HCl (Tarceva™) , es preferible la administración oral . El inhibidor de cinasa EGFR se puede administrar con varios portadores inertes farmacéuticamente aceptables en la forma de tabletas, cápsulas, trociscos, comprimidos, dulces duros, polvos, rocíos, cremas, bálsamos, supositorios, jaleas, geles, pastas, lociones, ungüentos, elixires, jarabes, y similares. La administración de dichas formas de dosificación puede llevarse a cabo en dosis individuales o múltiples. Los portadores incluyen diluyentes o llenadores sólidos, medios acuosos estériles y varios solventes orgánicos no tóxicos, etc. Las composiciones farmacéuticas orales pueden endulzarse adecuadamente y/o saborízarse. El inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina se pueden combinar juntos con varios portadores inertes farmacéuticamente aceptables en las formas de aspersiones, cremas, bálsamos, supositorios, jaleas, geles, pastas, lociones, ungüentos, y similares. La administración de dichas formas de dosificación se puede llevar a cabo en dosis individuales o múltiples. Los portadores incluyen diluyentes o llenadores sólidos, medios acuosos estériles, y varios solventes orgánicos no tóxicos etc. Todas las formulaciones que comprenden los inhibidores de cinasa EGFR proteínicos deberán seleccionarse para de esta forma evitar la desnaturalización y/o degradación sin la perdida de la actividad biológica del inhibidor. Los métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor de cinasa EGFR son conocidos en la técnica, y se describen, por ejemplo en la publicación de patente internacional No. WO 01/34574. Los métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden cisplatina también son bien conocidos en la técnica. En vista de las enseñanzas de la presente invención, los métodos para preparar composiciones farmacéuticas comprenden tanto un inhibidor de cinasa EGFR como cisplatina que serán evidentes a partir de las publicaciones anteriormente citadas y de las otras referencia conocidas tales como Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, pág. , dieciochoava edición (1990) . Para la administración oral de los inhibidores de cinasa EGFR, se combinan las tabletas que contienen uno o ambos de los agentes activos con cualquiera de varios excipientes tales como por ejemplo, celulosa microcristalina, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato dicálcico y glicina, junto con varios disgregantes tales como almidón (y preferiblemente almidón de maíz, de papa o tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos de complejo, junto con aglutinantes de granulación de tipo polivinil pirrolidona, sacarosa, gelatina y acacia. Adicionalmente, los agentes de lubricación tales como estearato de magnesio, lauril sulfato de sodio y talco por lo general son muy útiles para los propósitos de la formación de tabletas. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden utilizar como llenadores en cápsulas de gelatina; y en materiales preferidos en esta conexión también incluyen lactosa o azúcar de leche así como polietilen glicoles de peso molecular muy alto. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para la administración oral el inhibidor de cinasa EGFR se puede combinar con varios agentes saborizantes o edulcorantes, materia colorante, o tintes, y, si así se desea, agentes emulsificadores y/o de suspensión también, junto con tales diluyentes como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y varias combinaciones similares de los mismos. Para la administración parenteral de cualquiera o ambos de los agentes activos, se pueden utilizar soluciones en aceite de ajonjolí o de cacahuate o en propilenglicol acuoso, así como soluciones acuosas estériles que comprenden el agente activo o una sal soluble al agua correspondiente del mismo. Dichas soluciones acuosas estériles preferiblemente se regulan en su pH, y también son preferiblemente convertidas en isotónicas, por ejemplo, con suficiente salina o glucosa. Estas soluciones acuosas son especialmente adecuadas para propósitos de inyección intravenosa, intramuscular, subcutánea, e intraperitoneal. Las soluciones oleosas son adecuadas para propósitos de inyección intra-articular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas soluciones bajo condiciones estériles fácilmente se logra a través de técnicas farmacéuticas estándares bien conocidos de los expertos de la técnica. Cualquier formulación parenteral seleccionada para la administración de inhibidores de cinasa EGFR proteínicos deberá seleccionarse para evitar la desnaturalización y pérdida de la actividad biológica del inhibidor . Adicionalmente, es posible administrar tópicamente cualquiera o ambos de los agentes activos, por medio, por ejemplo, de cremas, lociones, jaleas, geles, pastas, ungüentos, bálsamos y similares de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar. Por ejemplo, se puede preparar una formulación tópica que comprende ya sea un inhibidor de cinasa EGFR o cisplatina en una concentración de aproximadamente 0.1% (v/v) a aproximadamente 5% (v/v) . Para propósitos veterinarios, dos agentes activos se pueden administrar de manera separada o junta a los animales utilizando cualquiera de las formas y a través de cualquiera de las rutas descritas anteriormente. En una modalidad preferida, el inhibidor de cinasa EGFR se administra en la forma de una cápsula, bolo, tableta, empapado líquido, a través de inyección o como un implante. Como una alternativa, el inhibidor de cinasa EGFR se puede administrar con el alimento del animal, y para este propósito se puede preparar un aditivo de alimento concentrado o premezcla para un alimento de animal normal . La cisplatina preferiblemente se administra en la forma de un empapado líquido, a través de inyección o como un implante. Dichas formulaciones se preparan en una forma convencional de acuerdo con la práctica veterinaria estándar. La presente invención además provee un kit que comprende un solo contenedor que comprende tanto el inhibidor de cinasa EGFR como la cisplatina. La presente invención además provee un kit que comprende un primer contenedor que comprende un inhibidor de cinasa EGFR y el segundo contenedor que comprende cisplatina. En una modalidad preferida, los contenedores del kit pueden además incluir un portador farmacéuticamente aceptable. El kit además puede incluir adicionalmente un diluyente estéril, el cual preferiblemente se almacena en un contenedor adicional separado. El kit puede además incluir un inserto de paquete que comprende las instrucciones impresas dirigidas al uso de tratamiento combinado como un método para tratar el cáncer . Como se utiliza aquí, el término "inhibidor de cinasa EGFR" , se refiere a cualquier inhibidor de cinasa EGFR que es actualmente conocido en la técnica, o que se identificará en el futuro, e incluye cualquier entidad química que, después de la administración a un paciente, da como resultado la inhibición de la actividad biológica asociada con la activación del receptor EGF del paciente, incluyendo cualquiera de los efectos biológicos en corriente 3 ' que por el contrario den como resultado el enlace a EGFR de su ligando natural . Dichos inhibidores de cinasa EGFR incluyen cualquier agente que pueda bloquear la activación de EGFR o cualquiera de los efectos biológicos en corriente 3 ' de la activación EGFR que es relevante para tratar cáncer en un paciente. Dicho inhibidor puede actuar a través de enlace directo a un dominio intracelular del receptor e inhibir su actividad de cinasa. Alternativamente, dicho inhibidor puede actuar ocupando el sitio de enlace de ligando o una porción del mismo del receptor EGFR, por lo tanto convirtiendo al receptor en inaccesible a su ligando natural por lo que su actividad biológica normal es evitada o reducida. Alternativamente, dicho inhibidor puede actuar a través de la modulación de la dimerización de polipéptidos EGFR, o a la interacción del polipéptido de EGFR con otras proteínas, o mejorar la ubiquitinación y la degradación endocitótica de EGFR. Los inhibidores de cinasa EGFR incluyen pero no se limitan a inhibidores de bajo peso molecular, anticuerpos o fragmentos de anticuerpo, construcciones antisentido, ARNs inhibidor pequeño (es decir, interferencia de ARN a través de ARNsd; iARN), y ribozimas. En una modalidad preferida, el inhibidor de cinasa EGFR es una molécula orgánica pequeña o un anticuerpo que se enlaza específicamente al EGFR humano. Los inhibidores de cinasa EGFR que incluyen, por ejemplo, inhibidores de cinasa EGFR de quinazolina, inhibidores de cinasa EGFR de pirido-pirimidina, inhibidores de cinasa EGFR de pirimido-pirimidina, inhibidores de cinasa EGFR de pirriolo de pirimidina, inhibidores de cinasa EGFR de pirazolo-pirimidina, inhibidores de cinasa EGFR de felinanino-pirimidina, inhibidores de cinasa EGFR de oxindol, inhibidores de cinasa EGFR de indolo carbazol, inhibidores de cinasa EGFR de ftalacina, inhibidores de cinasa EGFR de isoflavona, inhibidores de cinasa, EGFR quinalona, e inhibidores de cinasa EGFR de tifostina, tales como aquellos descritos en las siguientes publicaciones de patente, y todas las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de dichos inhibidores de cinasa EGFR: publicaciones de patente internacionales Nos. WO 96/33980, WO 96/30347, WO 97/30034, WO 97/30044, WO 97/38994, WO 97/49688, WO 98/02434, WO 97/38983, WO 95/19774, WO 95/19970, WO 97/13771, WO 98/02437, WO 98/02438, WO 97/32881, WO 98/33798, WO 97/32880, WO 97/3288, WO, 97/02266, WO 97/27199, WO 98/07726, WO 97/34895, WO 96/31510 WO 98/14449, WO 98/14450, WO 98/14451, WO 95/09847, WO 97/19065, WO 98/17662, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 99/07701, y WO 92/20642; solicitud de patente europea No. EP 520722, EP566226, EP 787772, EP 837063, y EP 682027; patentes de E.U.A. Nos. 5,747,498, 5,789,427, 5,650,415, y 5,656,643; y Solicitud de patente alemana No. DE 19629652. Los ejemplos no limitantes adicionales de inhibidores de cinasa EGFR de bajo peso molecular incluyen cualquiera de los inhibidores de cinasa EGFR descritos en Traxler, p., 1998, Exp. Opin. Ther.

Patents 8 (12 ): 1599-1625. Los ejemplos preferidos específicos de inhibidores de cinasa EGFR de bajo peso molecular que se pueden utilizar de acuerdo con la presente invención [6 , 7-bis (2-metoxietoxi) -4-quinazolin-4-il] - (3-etinilfenil) amina (también conocido como OSI-774, erlotinib, o Tarceva™ (erlotinib HCl); OSI Phannaceuticals/Genentech/Roche) (Patente de E.U.A. No. ,747,498; Publicación de Patente Internacional No. WO 01/34574, y Moyer, J.D. y otros (1997) Cáncer Res. 57: 4838-4848); CI-1033 (anteriormente conocida como PD183805; Pfizer) (Sherwood y otros, 1999, Proc.

Am. Assoc. Cáncer Res. 40: 723); PD-158780 (Pfizer); AG- 1478 (University of California); CGP-59326 (Novartis) ; PKI-166 (Novartis) ; EKB-569 (Wyeth) ; GW-2016 (también conocida como GW-572016 o ditosilato de lapatinib; GSK) ; y gefitinib (también conocido como ZD1839 o Iressa™; Astrazeneca) (Woodburn y otros, 1997, Proc.

Am. Assoc. Cáncer Res. 38: 633). Un inhibidor de cinasa EGFR de bajo peso molecular particularmente preferido que se puede utilizar de acuerdo con la presente invención es [6,7-bis(2-metoxietoxi) -4-quinazolin-4-il] - (3-etinilfenil) amina (es decir, erlotinib) , su sal de clorhidrato ( es decir, erlotinib HCl, Tarceva™), u otras formas de sal (por ejemplo, mesilato de erlotinib) . Los inhibidores de cinasa EGFR basados en anticuerpo incluyen cualquier anticuerpo anti-EGFR o fragmento de anticuerpo que pueda parcial o completamente bloquear la activación de EGFR a través de su ligando natural. Ejemplos no limitantes de inhibidores de cinasa EGFR basados en anticuerpo incluyen aquellos descritos en Modjtahedi, H., y otros, 1993, Br. J. Cáncer 67: 247-253; Teramoto, T., y otros, 1996, Cáncer 77:639-645; Goldstein y otros, 1995, Clin. Cáncer Res. 1:1311-1318; Huang, S. M. , y otros, 1999, Cáncer Res. 15:59 (8):1935-40; Yang, X., y otros, 1999, Cáncer Res. 59: 1236-1243. De esta forma el inhibidor de cinasa EGFR puede ser Mab del anticuerpo monoclonal E7.6.3 (Yang, X.D. y otros (1999) Cáncer Res.59:1236-43) , o Mab C225 (ATCC No.de registro HB-8508), o un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene la especificidad de enlace del mismo. Los inhibidores de cinasa EGFR del anticuerpo monoclonal adecuados incluyen, pero no se limitan a, IMC-C225 (también conocido como cetuximab o Erbitux™; Imclone Systems), ABX- EGF (Abgenix) , EMD 72000 (Merck KgaA, Darmstadt) , RH3 (York Medical Bioscience Inc. ), y MDX-447 (Medarex/ Merck KgaA) . Los inhibidores de cinasa EGFR basados en anticuerpos adicionales pueden surgir de acuerdo con métodos conocidos a través de la administración del antígeno o epítopo apropiado al animal huésped seleccionado, por ejemplo, puercos, vacas, caballos, conejos, cabras, ovejas y ratones entre otros. Se pueden utilizar varios adyuvantes conocidos en la técnica para mejorar la producción del anticuerpo. Aunque los anticuerpos útiles en la práctica de la invención pueden ser anticuerpos policlonales, los monoclonales son preferidos . Los anticuerpos monoclonales contra EGFR pueden prepararse y aislarse utilizando cualquier técnica que provee la producción de las moléculas de anticuerpo a través de líneas de células continuas en el cultivo. Las técnicas para la producción y aislamiento incluyen pero no se limitan a la técnica de hibridoma originalmente descrita por Kohier y Milstein (Nature, 1975, 256: 495-497); la técnica de hibridoma de célula B humana Kosbor y otros, 1983, Immunology Today 4: 72; Cote y otros, 1983, Proc. Nati. Acad. Sci.

USA 80: 2026-2030); y la técnica de hibridoma EBV Colé y otros, 1985, Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy, Alan R. Liss, Inc., págs. 77-96). Alternativamente, las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena individual (ver, por ejemplo Patente de E.U.A. No. 4,946,778) se puede adaptar para producir anticuerpo de cadena individual anti-EGFR. Los inhibidores de cinasa EGFR basados en anticuerpo útiles en la práctica de la presente invención también incluyen fragmentos de anticuerpo anti-AGFR que incluyen pero no se limitan a los fragmentos F (ab' ) . sub.2 , que se pueden generar a través de la digestión de pepsina de una molécula de anticuerpo intacta y fragmentos Fab, que se pueden generar a través de la reducción de puentes de disulfuro en los fragmentos F (ab' ) . sub.2. Alternativamente, se pueden construir colecciones de expresión Fab y/o scFv (por ejemplo, ver Huse y otros, 1989, Science 246: 1275-1281) para permitir la rápida identificación de los fragmentos que tienen la especificidad deseada EGFR. Las técnicas para la producción y aislamiento de anticuerpos monoclonales y fragmentos de anticuerpos son bien conocidas en la técnica, y se describen en Harlow and Lañe, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, y en J.W. Goding, 1986, Monoclonal Antibodies: Principies and Practice, Academic Press, Londres. Los anticuerpos anti-EGFR humanizados y fragmentos de anticuerpos también se pueden preparar de acuerdo con las técnicas conocidas tales como aquellas descritas en Vaughn, T.j. y otros, 1998, Nature Biotech. 16: 535-539 y referencias citadas aquí, y dichos anticuerpos o fragmentos de los mismos también pueden ser útiles en la práctica de la presente invención. Los inhibidores de cinasa EGFR para uso en la presente invención pueden basarse alternativamente en construcciones de oligonucleótido antisentido. Los oligonucléotidos anti-sentido, incluyen moléculas de ARN antisentido y moléculas de ADN anti-sentido, que podrían actuar directamente para bloquear la traducción de ARNm de EGFR a través del enlace a la misma y de esta manera evitando la producción de la proteína o el incremento de la degradación de ARNm, de esta forma disminuyendo el nivel de la proteína de cinasa EGFR, y de esta forma, su actividad en una célula. Por ejemplo, los oligonucléotidos antisentido de por lo menos aproximadamente 15 bases y complementaria a las regiones únicas de la secuencia de trascripción de ARNm que codifican EGFR se pueden sintetizar, por ejemplo, a través de técnicas de fosfodiéster convencionales y administrarse a través de, por ejemplo, inyección intravenosa o infusión. Los métodos para utilizar técnicas anti-sentido para específicamente inhibir la expresión del gen de genes cuya secuencia es conocida y bien conocida en la técnica (por ejemplo, Patentes de E.U.A. Nos. 6,566,135; 6,566,131; 6,365,354; 6,410,323; 6,107,091; 6,046,321; y 5,981,732). Los ARNs inhibidores pequeños (ARNsi) también pueden funcionar como inhibidores de cinasa EGFR para uso en la presente invención. La expresión del gen EGFR se puede reducir a través del contacto con el tumor, sujeto o célula con un ARN destructora de cadena doble (ARNds) o un vector o construcción que causa la producción dé un ARN de estructura de cadena doble pequeño, de tal forma que la expresión de EGFR se inhibe específicamente (es decir, interferencia de ARN o iARN) . Los métodos para seleccionar un ARNds o vector que codifica ARNds son bien conocidos en la técnica para genes cuya secuencia es conocida (por ejemplo, ver Tuschi, T. , y otros (1999) Genes Dev. 13 (24) :3191-3197; Elbashir, S. M. y otros (2001) Nature 411: 494-498; Hannon, G. J. (2002) Nature 418:244-251; McManus, M. T. y Sharp, P. A. (2002) Nature Reviews Genetics 3: 737-747; Bremmelkamp, T. R. y otros (2002) Science 296: 550-553; Patentes de E.U.A. Nos. 6,573,099 y 6,506,559; y la Publicación de Patente Internacional Nos. WO01/36646, WO 99/32619, y WO01/68836) . Las ribozimas también pueden funcionar como inhibidores de cinasa EGFR para uso en la presente invención. Las ribozimas o moléculas de ARN enzimáticas capaces de catalizar la división específica de ARN. El mecanismo de la acción de ribozima involucra la hibridación específica de la secuencia de la molécula de ribozima al ARN objetivo complementario seguido por la división endonucleolítica . Las moléculas de ribozima de motivo de cabeza de martillo fabricadas por ingeniería que específica y eficientemente catalizan la división endonucleolítica de las secuencias de ARNm de EGFR por lo tanto son útiles dentro del alcance de la presente invención. Los ciclos de división de ribozima específicos dentro de cualquier ARN potencial objetivo inicialmente se identifican a través de la exploración de la molécula objetivo para los sitios de división de ribozima, que típicamente incluyen las siguientes secuencias GUA, GUU, y GUC. Una vez que se identifican, las secuencias de ARN cortas de entre aproximadamente 15 y 20 ribonucléotidos, corresponden a la región del gen objetivo que contiene el sitio de división que se puede evaluar para aspectos estructurales pronosticados, tales como una estructura secundaria, que puede convertir la secuencia de oligonucléotido en no adecuada. La adecuabilidad de los objetivos candidatos también se puede evaluar a través de la prueba de su accesibilidad para la hibridación con oligonucleótidos complementarios, utilizando, por ejemplo, ensayos de protección de ribonucleasa. Tanto los oligonucléotidos antisentidos como las ribozimas útiles como inhibidores de cinasa EGFR se pueden preparar a través de métodos conocidos. Estos incluyen técnicas para síntesis química tales como, por ejemplo, síntesis química de fosforamidita de fase sólida. Alternativamente, las moléculas de ARN anti-sentido se pueden generar a través de transcripción in Vitro o in vivo de las secuencias de ADN que codifican la molécula de ARN. Dichas secuencias de ADN se pueden incorporar en una amplia variedad de vectores que incorporan promotores de polimerasa de ARN adecuada tales como los promotores de polimerasa T7 o SP6. Se pueden introducir varias modificaciones a los oligonucléotidos de la invención como medios para incrementar la estabilidad intracelular y la vida media. Las modificaciones posibles incluyen pero no se limitan a la adición de secuencias de flanqueo de ribonucleótidos o desoxiribonucléotidos en los extremos 5' y/o 3' de la molécula, o el uso de fosforotioato o 2 '-O-metilo en lugar de enlaces de fosfodiesterasa dentro de la estructura troncal del oligonucléotido. La invención también abarca una composición farmacéutica que está comprendida de una combinación del inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Preferiblemente la composición está comprendida de un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica de una combinación del compuesto del inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada componente del mismo) . Además, dentro de esta modalidad preferida, la invención abarca una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedad, el uso del cual da como resultado la inhibición del crecimiento de las células neoplásticas, tumores benignos o malignos, o metástasis que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica de una combinación del compuesto inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada componente de la misma) . El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales preparadas de bases o ácidos farmacéuticamente aceptables no tóxicos . Cuando un compuesto de la presente invención es ácido, su sal correspondiente puede convenientemente prepararse a partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables, incluyendo bases inorgánicas y bases orgánicas . Las sales derivadas de dichas bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre (cúprico y cuproso) , férricas, ferrosas, de litio, magnesio, manganeso (mangánicas y manganesas) , potasio, sodio, zinc y similares. Particularmente preferidas son las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. Las sales derivadas de bases no tóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, así como aminas cíclicas y aminas substituidas tales como las de existencia natural y aminas substituidas sintetizadas. Otras bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables a partir de las cuales se pueden formar sales incluyen resinas de intercambio de ion tales como, por ejemplo, arginina, betaina, cafeína, colina, N' ,N' -dibenciletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol , 2-dimetilaminoetanol , etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaina, purinas, teobromina, trietilameina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Cuando un compuesto de la presente invención es básico, su sal correspondiente puede prepararse convenientemente a partir de ácidos no tóxicos aceptables, incluyendo ácidos inorgánicos y orgánicos . Dichos ácidos incluyen por ejemplo, ácido acético, bencensulfónico, benzoico, alcanforsulfónico, cítrico, etansulfónico, fumárico, glucónico, glutámico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metansulfónico, múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluensulfónico y similares. Particularmente preferidos son los ácidos cítrico, bromhídrico, clorhídrico, maleico, fosfórico, sulfúrico y tartárico . Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden una combinación de un compuesto inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada componente de la misma) como ingrediente activo, un portador farmacéuticamente aceptable y opcionalmente otros ingredientes o adyuvantes terapéuticos. Otros agentes terapéuticos pueden incluir agentes citotóxicos, quimioterapéuticos o anti-cáncer o agentes que mejoran los efectos de dichos agentes, como se enumero anteriormente. Las composiciones incluyen composiciones adecuadas para administración oral, rectal, tópica y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular e intravenosa) , aunque la ruta más adecuada en cualquier caso dado que dependerá del huésped particular, y la naturaleza y severidad de las condiciones para la cual el ingrediente activo se está administrando. Las composiciones farmacéuticas pueden presentarse convenientemente en formas de dosificación unitaria y prepararse a través de cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia. En la práctica, los compuestos representados por una composición del compuesto inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada componente de la misma) de esta invención se pueden combinar según el ingrediente activo en la mezcla íntima con un portador farmacéutico de acuerdo con técnicas formadoras de compuesto farmacéuticamente convencionales. El portador puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para administración, por ejemplo, oral o parenteral (incluyendo intravenosa) . De esta forma, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden presentar como unidades discretas adecuadas para administración oral tales como cápsulas, comprimidos o tabletas cada una conteniendo una cantidad predeterminada del ingrediente activo. Además, las composiciones se pueden presentar como un polvo, como granulos, como una solución, como una suspensión en un líquido acuoso, como un líquido no acuoso, como una emulsión de aceite en agua, o como una emulsión líquida de agua en aceite. Además de las formas de dosificación comunes establecidas anteriormente, la combinación del compuesto del inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada componente de la misma) también se pueden administrar a través de medios de liberación controlada y/o dispositivos de distribución. Las composiciones de combinación se pueden preparar a través de cualquiera de los métodos de farmacia. En general, dichos métodos incluyen un paso de poner en asociación los ingredientes activos con el portador que constituye uno o más ingredientes necesarios. En general, las composiciones se preparan a través de la mezcla uniforme e íntima del ingrediente activo con portadores líquidos o portadores sólidos finamente divididos o ambos. El producto después se puede convenientemente dar la forma en la presentación deseada. De esta forma, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden incluir un portador farmacéuticamente aceptable y una combinación del compuesto inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada componente de la misma) . Una combinación del compuesto inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada componente de la misma) también se pueden incluir en composiciones farmacéuticas en combinación con uno o más compuestos terapéuticamente activos. Otros compuestos terapéuticamente activos pueden incluir aquellos agentes citotóxicos, quimioterapéuticos o anti-cáncer, o agentes que mejoran los efectos de dichos agentes, como se enumeró anteriormente . De esta forma en una modalidad de esta invención, una composición farmacéutica puede comprender una combinación de un compuesto del inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina en combinación con un agente anti-cáncer, en donde dicho agente anti-cáncer es un miembro seleccionado del grupo que consiste de fármacos de alquilación, antimetabolitos, inhibidores de microtúbulo, podofilotoxinas, antibióticos, nitrosoureas, terapias de hormona, inhibidores de cinasa, activadores de la apoptosis de célula de tumor, y agentes antiangiogénicos . El portador farmacéutico utilizado puede ser, por ejemplo, un sólido, líquido o gas. Ejemplos de portadores sólidos incluyen lactosa, tierra alba, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio, y ácido estérico. Ejemplos de portadores líquidos son jarabe de azúcar, aceite de cacahuate, aceite de olivo, y agua. Ejemplos de portadores gaseosos incluyen dióxido de carbono y nitrógeno . En la preparación de las composiciones para la forma de dosificación oral, se puede utilizar cualquier medio farmacéutico conveniente. Por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes, conservadores, agentes de coloración y similares se pueden utilizar para formar preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, elíxires y soluciones; ya que los portadores tales como almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes, y similares se pueden utilizar para formar preparaciones sólidas orales tales como polvos, cápsulas y tabletas. Debido a su fácil administración, las tabletas y cápsulas son las unidades de dosificación orales preferidas mientras los portadores farmacéuticos sólidos se utilizan. Opcionalmente, las tabletas pueden estar cubiertas por técnicas acuosas o no acuosas estándares. Una tableta que contiene la composición de esta invención se puede preparar a través de compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios o adyuvantes . Las tabletas comprimidas se pueden preparar a través de compresión, en una máquina adecuada, el ingrediente activo en una forma de flujo libre tal como polvo o granulos, opcionalmente mezclado con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, agente activo o de dispersión de superficie. Las tabletas moldeadas se pueden hacer a través de moldeo en una máquina adecuada, una mezcla del compuesto en polvo humectado con un diluyente líquido inerte. Cada tableta preferiblemente contiene de aproximadamente 0.05 mg a aproximadamente 5 g del ingrediente activo y cada comprimido o cápsula preferiblemente contiene de aproximadamente 0.05 mg a aproximadamente 5 g del ingrediente activo. Por ejemplo, una formulación prevista para administración oral a seres humanos puede contener de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 5 g de agente activo, formado en un compuesto con una cantidad apropiada y conveniente de material portador que puede variar de aproximadamente 5 a aproximadamente 95% de la composición total. Las formas de dosificación unitaria generalmente contendrán entre aproximadamente 1 mg a aproximadamente 2 g del ingrediente activo, típicamente 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg, o 1000 mg. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención adecuadas para administración parenteral se pueden preparar como soluciones o suspensiones de los compuestos activos en agua. Se puede incluir un agente tensioactivo adecuado tal como por ejemplo hidroxipropil celulosa. Las dispersiones también se pueden prepara en glicerol, polietilenglicoles líquidos, y mezclas de los mismos en aceites. Además, se puede incluir un conservador para evitar el crecimiento perjudicial de los microorganismos. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles. Además, las composiciones pueden estar en la forma de polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma inyectable final debe ser estéril y debe estar efectivamente fluida para una fácil calidad de inyección. Las composiciones farmacéuticas pueden ser estables bajo condiciones de fabricación y almacenamiento; de esta forma, preferiblemente deberán conservarse contra la acción contaminante de los microorganismos tales como bacterias y hongos. El portador puede ser un solvente o medio de dispersión que contiene por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polientilenglicol líquido), aceites vegetales, y mezclas adecuadas de los mismos. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden estar en una forma adecuada para aplicación tópica tal como por ejemplo, un aerosol, crema, ungüento, loción, polvo espolvoreado o similar. Además, las composiciones pueden estar en una forma adecuada para uso en dispositivos transdérmicos. Estas formulaciones se pueden preparar, utilizando una combinación del compuesto inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de cada componente de la misma) de esta invención, a través de métodos de procesamiento convencionales. Como un ejemplo; se puede preparar una crema o ungüento a través del mezclado del material hidrofílico y agua, junto con aproximadamente 5% en peso a aproximadamente 10% en peso del compuesto, para producir una crema o ungüento que tiene una consistencia deseada. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden estar la forma adecuada para administración rectal cuando el portador en un sólido. Se prefiere que la mezcla forme supositorios de dosis unitarias. Los portadores adecuados incluyen mantequilla de cacao y otros materiales comúnmente utilizados en la técnica. Los supositorios pueden formarse convenientemente primero a través de la mezcla de la composición con un portador (es) suavizado o fundido seguido por enfriamiento y formación en moldes. Además de los ingredientes de portador anteriormente mencionados, las formulaciones farmacéuticas descritas anteriormente pueden incluir, según sea apropiado, uno o más ingredientes portadores adicionales tales como diluyentes, reguladores de pH, agentes saborizantes, aglutinantes, agentes activos de superficie, engrosadores , lubricantes, conservadores (incluyendo antioxidantes) y similares. Además, se pueden incluir otros adyuvantes para convertir la formulación en isotónica con la sangre del receptor previsto. Las composiciones que contiene una combinación del compuesto inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina (incluyendo sales farmacéuticamente aceptable de cada componente de la misma) también se pueden preparar en una forma de polvo o concentrado líquido.

Los niveles de dosificación para los compuestos de la combinación de esta invención serán aproximadamente como se describe aquí, o como se describe en la técnica de estos compuestos. Se entiende, sin embargo, que el nivel de dosis específica para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores que incluyen edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, ruta de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos y la severidad de la enfermedad particular que experimenta la terapia. Esta invención se entenderá mejor a partir de los detalles experimentales siguientes. Sin embargo, un experto en la técnica fácilmente apreciará que los métodos específicos y resultados explicados son meramente ilustrativos de la invención como se describe más completamente en las reivindicaciones que siguen más adelante, y que no se deberá considerar en ninguna forma limitada por los mismos. DETALLES EXPERIMENTALES INTRODUCCIÓN El receptor del factor de crecimiento epidérmico específico de célula cancerosa (HERl/EGFR) es un objetivo molecular valioso en terapia de cáncer (Ciardiello, F y Tortora G, (2000) Expert Opin. Investig. Drugs 11:755-768). Muchos cánceres sobreexpresan HERl/EGFR: carcinoma de célula escamosa de cabeza y cuello (70-100%) , cáncer de pulmón de célula no pequeña (NSCLC) (50- 90%) , cáncer de próstata (40-70%) , glioma (10-50%) , cáncer gástrico (30-60%) , cáncer de pecho (35-70%) , cáncer colorectal (45-80%) , cáncer pancreático (30-50%) y cáncer ovárico (35-60%) (Ciardiello, F and Tortora G. (2002) Expert Opin. Investig. Drugs 11:755-768); Salomón D. S., y otros (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol . 19:183-232). Salomón y otros también resaltaron el enlace entre HERl/EGFR sobreexpresado y los pacientes con una enfermedad, avanzada, metástasis y pobre prognosis. NSCLC es el cáncer de pulmón más común. Por consiguiente según la extensión de la enfermedad, el método de tratamiento diferirá. Para la etapa temprana de la enfermedad, la cirugía no es la única cura, y se puede asociar un método multimodal con quimio/radioterapia con un resultado mejorado. En la enfermedad avanzada, la quimioterapia es la opción principal, la cual ofrece pequeñas mejoras en la supervivencia global. De esta forma, la necesidad médica permanece alta en NSCLC con la búsqueda de regímenes más efectivos y mejor tolerados. Se han utilizado muchos citotóxicos tradicionales como monoterapia en NSCLC, incluyendo vindesina, carboplatina, etoposida, ifosfamida, ciclofosfamida, vincristina, y mitomicina y cisplatina (Rajkumar S.V., y Adjei AA. (1998) Cáncer Treat Rev. 24:35-53). La monoterapia con estos fármacos produce solamente una pequeña mejora, pero la terapia de combinación con cisplatina ha disminuido la enfermedad en los pacientes y mejorador su calidad de vida en ensayos aleatorios (Bunn P. A. Jr, and Kelly K. (1998) Clin Cáncer Res. 4(5) :1087-1100) . La gemcitabina se desarrolló en los 90s, e inhibe la reductasa de ribonucleasa. La monoterapia de gemcitabina tiene una alta probabilidad de respuesta de tumor y una calidad de vida en el paciente mejorada (en términos de pérdida de cabello, nausea y vómitos reducidos, y pérdida de apetito) que la quimioterapia con cisplatina/etoposida estándar (ten Bokkel W. W. , y otros (1999) Lung Cáncer 26 (2 ) : 85-94) . Los ensayos de combinación a través de la Organización Europea de Investigación y Tratamiento de Cáncer (EORTC, por sus siglas en inglés) comparado con cisplatina y teniposida para cisplatina y paclitaxel (Giaccone G, y otros (1998) J Clin. Oncol. 16:2133-2141). Ya que la combinación anterior dio una mejor paliación para NSCLC avanzado (aún cuando no se ha logrado un beneficio de supervivencia claro) , ha sido recomendado como uno de los estándares de cuidado para pacientes con NSCLC avanzado. Además, una combinación de gemcitabina y cisplatina han demostrado que actúa sinegísticamente in Vitro y por lo menos aditivamente in vivo (Peters G. J. y otros (1995) Semin. Oncol. 22(4 Suppl. 11):72- 79). En los ensayos de la fase II, la tasa de respuesta para gemcitabina y cisplatina fue de 47% y la supervivencia media de 57 semanas, con una tasa de supervivencia de 1 año de 48% (Bunn P. A. Jr, and Kelly K. (1998) Clin Cáncer Res. 4(5) :1087-1100) . Los nuevos tratamientos para el cáncer toman un método específico de célula cancerosa, y prometen menos toxicidad que los fármacos citotóxicos más antiguos. Según los objetivos específicos de célula cancerosa son solamente parte de la etiología de la enfermedad, los tratamientos que combinan fármacos objetivo y convencionales pueden tener un efecto sinergístico. El tratamiento de NSCLC óptimo probablemente consiste de inhibidores EGFR en combinación con quimioterapia tradicional . Erlotinib (Tarceva™, OSI-774) es un inhibidor de molécula pequeña oralmente disponible, selectivo del dominio de tirosina-cinasa HERl/EGFR. Tiene una actividad antitumor potente en modelos de animales preclínicos de carcinoma de cabeza y cuello vulvar (Pollack V.A., y otros (1999) J. Pharmacol. Exp. Ther. 291:739-48). Erlotinib induce una apotosis in vitro y está activo contra varios xenoinjertos de tumor humanos que expresan EGFR in vivo (Moyer J.D. y otros (1997) Cáncer Res. 57:4838-4848). En un estudio de la fase II de etiqueta abierta con pacientes de NSCLC que ha fallado en la quimioterapia basada en platino (Pérez-Soler R. y otros (2001) Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20:310a (Abstract 1235)), erlotinib ha estimulado la actividad anticáncer. En este estudio se investigó si la combinación de erlotinib con cisplatina o gemcitabina en modelos de xenoinjerto llevando NSCLC en ratones desnudos atípicos actúa sinergística o antagonista en la inhibición del crecimiento de tumor. Los modelos de tumor H460a y A549 NSCLC se seleccionaron debido a que claramente expresan EGFE, con alrededor 70,000-80,000 sitios de enlace por célula (Bianco, C. y otros (2002) Clin. Cáncer Res. 8 (10) : 3250-3258; Lee, M. y otros (1992) J Nati. Cáncer Inst. Monogr. (13) : 117-123 ) . A549 crece lentamente y H460a es más agresivo y crece más rápido. MATERIALES Y MÉTODOS ANIMALES Se utilizaron ratones desnudos nu/nu-nuBR, atímicos, hembra (Charles River Labs, Wilmington, Estados Unidos) de aproximadamente 10-12 semanas de edad y pesando entre 23 y 25 g. La salud de los ratones se evaluó diariamente a través de la observación y análisis de las muestras sanguíneas tomadas de los animales centinela en los anaqueles compartidos. Todos los animales se dejaron aclimatar y recuperar de la tensión relacionada con el embarque durante 1 semana . El agua esterilizada en autoclave y los alimentos irradiados (5058-ms Pico Lab [ratón] de la raza chow, Purina Mills, Richmond, IN) fueron provistos ad libi tum, y los animales se mantuvieron en un ciclo de 12 horas de luz y oscuridad. Las jaulas, los lechos y las botellas de agua se esterilizaron en una autoclave antes de utilizarse y se cambiaron semanalmente. Todos los experimentos con animales fueron de acuerdo con los protocolos aprobados por el comité de cuidado y uso de animales Roche. CULTIVO DE CÉLULAS Y ESTUDIOS DE ANIMALES Se hicieron crecer células H460a (provistas por Dr Jack Roth, MD, Anderson) en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado con suero de bovino fetal al 10% (FBS) . Se hicieron crecer células A549 (Colección del Cultivo de Tipo Americano [Manassas, VA] en medio del instituto del parque memorial Roswell (RPMI) 1640 + FBS al 10%. Las concentraciones de célula para implante fueron de lxlO7 células /O.2 ml para H460a y 7.5xl06 células/0.2 ml para A549. Las células se suspendieron en salina regulada en su pH con fosfato, y se implantaron subcutáneamente en el flanco derecho de cada ratón. Una vez que se establecieron los tumores palpables, los animales se aleatorizaron de tal forma que todos los grupos tuvieron volúmenes de tumor medios de inicio similares de 100-150 mm3. Las mediciones de tumor y los pesos de los ratones se tomaron 3 veces por semana. Los animales fueron monitoreados individualmente a lo largo del experimento . AGENTES DE PRUEBA Y TRATAMIENTO DE PRUEBA Se formuló Erlotinib (OSI Pharmaceuticals, Uniondale, NY) como una suspensión fina con carboximetilcelulosa de sodio y Tween 80 en agua para inyección. Se dio oralmente Erlotinib (0.2mL/animal) utilizando una jeringa de 1 ml y aguja de sonda gástrica de calibre 18. Todos los grupos se trataron diariamente durante 3 semanas. Se proveyó cisplatina (Platinol-AQTM, Bristol-Myers Squibb) en una solución de salina estéril concentrada de 1 mg/ml. Se tomó una alícuota de las soluciones del recipiente de abastecimiento para cada grupo de dosis, consistiendo del fármaco necesario para el estudio completo, y se diluyó adicionalmente con salina estéril, para dar una solución de 0.5 ml de volumen de dosificación para cada animal. La cisplatina se administró intraperitonealmente utilizando una jeringa de 3 ml, y una guja de calibre 26. Todos los grupos se trataron cada 6 días durante 3 semanas (un total de 3 inyecciones) . CÁLCULOS Y ANALIS ESTADÍSTICO La pérdida de peso de calculó como cambio de porcentaje en el peso corporal del grupo promedio, utilizando la fórmula : ( (Wo-Wo) /W0)xl00 en donde W representa el peso corporal medio del grupo tratado en día particular, y 'Wo' representa el peso corporal medio del mismo grupo al inicio del tratamiento. La pérdida máxima de peso también se calculó utilizando la fórmula anterior, dando el porcentaje máximo del peso del cuerpo perdido en cualquier momento en el experimento completo para un grupo particular. La eficiencia del tratamiento se evaluó a través de la inhibición del crecimiento de tumor. Los volúmenes del tumor de los grupos tratados se dieron como porcentajes de volúmenes de tumos de los grupos de control (%T/C) , utilizando la fórmula: 100x( (T-To) /(C-Co) ) en donde ' ' representa el volumen de tumor medio del grupo tratado en un día específico durante el experimento, ' T0 ' representa el volumen de tumor medio del mismo grupo en el primer día del tratamiento, C representa el volumen del tumor medio del grupo de control en un día particular del experimento, y C0 representa el volumen de tumor medio del mismo grupo en el primer día del tratamiento. La inhibición del crecimiento de tumor se calculó utilizando la fórmula: 100-%T/C El volumen del tumor (mm3) se calculó utilizando la fórmula elipsoide: (Dx(d) )/2 en donde 'D' representa el diámetro largo del tumor, y 'd' representa el diámetro pequeño. En algunos casos, la regresión del tumor y/o cambio de porcentaje en el volumen de tumor se calculó utilizando la fórmula: ( (T-T0)/T0)xlOO en donde 'T' representa el volumen de tumor medio del grupo tratado en un día particular, y 'T0' representa el volumen del tumor medio del mismo grupo tratado al inicio del tratamiento. El análisis estadístico se hizo a través de la prueba de suma de categoría y un análisis de una vía de variación (ANOVA) y una prueba t de Bonferroni post-hoc (SigmaStat, versión 2.03, Jandel Scientific, San Francisco, CA) . El nivel de importancia se estableció a p<0.05. ANÁLISIS FARMACOCINETICO Para farmacocinéticos de dosis individual (PK) , se recolectaron muestras sanguíneas de 3 ratones por punto en el tiempo a través de una punción cardiaca 5, 15, 30, 60 minutos y 2, 4, 8, 16, 24 horas después de la dosis. Para los animales crónicamente tratados, las muestras sanguíneas de 2 o 3 ratones por punto en el tiempo se recolectaron a través del seno retro-orbital en la hora 1 y 6. Los tubos de colección contuvieron ácido etilenodiamina tetra-acético (EDTA) como anticoagulante. Las muestras se almacenaron a -70 aC. Las concentraciones en el plasma de erlotinib se determinaron utilizando el método de cromatografía líquida y espectrometría de masa tándem (LC-MS/MS) con límites de cuantificación de 1 ng/ml. Los parámetros PK se estimaron a través del análisis no por compartimientos de los datos compuestos, utilizando el programa de evaluación PK WinNonlinPRO® versión 3.1 (Pharsight Inc) . En un estudio, las concentraciones del tumor de erlotinib (H460a) se determinaron utilizando un método LC-MS/MS selectivo con un límite de cuantificación de 1 ng/g de tejido. PATOLOGÍA/NECROPSIA Se les dio a 5 ratones por tratamiento de todos los grupos restantes una necropsia completa al final del estudio. También se recolectó la sangre completa de estos ratones para hematología y química clínica. Las muestras de tumor se fijaron a través inmersión en formalina de zinc al 10% después se procesaron en un Tissue-Tek® VIP (Sakura) y se embebieron en parafina. Se cortaron las secciones para inmunohistoquímica a 5 µ. Se utilizó suero de conejo o cabra pre-inmune (Dako Ltd) como el control negativo. Las secciones se sumergieron en solución de recuperación objetivo (Dako Ltd) y se calentaron a 942C en un vaporizador (Black & Decker) durante 20 minutos. La actividad de peroxidasa endógena se extinguió con H202 al 6% en metanol durante 15 minutos. Para bloquear los sitios de unión de tejido no específicos, las secciones se bloquearon por medio de suero normal al 10% de especies en donde se originó el anticuerpo secundario. Las secciones se incubaron durante 20 minutos a temperatura ambiente en suero preparado en Ultra-V (Lab Vision) .

Para el antígeno de la molécula de adhesión de célula endotelial de plaqueta (PECAM-1, CD31) y el antígeno EGFR, las secciones se incubaron durante la noche a temperatura ambiente con un igG anti-PECAM-1 de cabra policlonal (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) diluido a 1:800 en diluyente de anticuerpo (Dako Ltd) o con IgG anti-EGFR de conejo policlonal (BioGenex, San Ramón, CA) diluido a 1:50 en diluyente de anticuerpo (Dako Ltd). Las secciones se incubaron con peroxidasa ABC Vectastain Élite (Vector Laboratories) durante 45 minutos a temperatura ambiente. Para el antígeno Ki-67, las secciones se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente con un IgG anti Ki-67 policlonal (NeoMarkers, Fremont, CA) diluido a 1:2,000 en diluyente de anticuerpo (Dako Ltd) , seguido por la adición de el complejo de peroxidasa de rábano picante-estrepavidina marcada durante 30 minutos. Para detectar la apoptosis, se utilizó el kit de detección de fragmentación de ADN TÚNEL TdT-FragEL™ (Oncogene Research Products, San Diego, CA) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Para los 4 antígenos, el vector Nova Red (Vector Laboratories) fue el cromógeno final y la hemotoxilina la contraestatina nuclear. RESULTADOS Y EXPLICACIÓN RESULTADOS Tinción inmunohistoquímica EGFR en xenoinjertos NSCLC . El patrón de expresión EGFR en los tumores H460a y A549 se examinó a través de inmunohistoquímica. Ambas líneas de célula tuvieron un patrón de membrana similar de tinción para EGFR (datos no mostrados) esto confirma los resultados anteriores que mostraron una expresión equivalente de EGFR en estas dos líneas de tumor (Bianco, C. y otros (2002) Clin. Cáncer Res. 8(10):3250- 3258; Lee, M. y otros (1992) J Nati. Cáncer Inst. Monogr . (13 ): 117-123 ) . Evaluación PK de dosis individual y crónica de erlotinib en ratones desnudos atípicos . En ratones no llevando tumor. Se dio Erlotinib 20 y 100 mg/kg a través de sonda gástrica a ratones atímicos nu/nu hembra. Las dosis se refieren a la sal de clorhidrato con un contenido de fármaco activo (base libre de 91.5%. Las formulaciones fueron suspensiones de carboximetilcelulosa de sodio conteniendo 2.5 mg/ml y 12.5 mg/ml de erlonitib, respectivamente. Se evaluaron los tres animales por punto en el tiempo para datos PK (Figura 3). A los ratones que se les dio 100 mg/kg, tuvieron exposiciones sistémicas altas a erlotinib, con un valor AUC?ast de aproximadamente 196,000 h*ng/mL. El AUC?ast después 20 mg/kg fue de 33,500 h*ng/ml . La exposición (AUC) fue proporcional a la dosis. Las concentraciones en el plasma máximas medias fueron de aproximadamente 24,000 ng/ml después de 100 mg/kg y de 9,100 ng/ml después de 20 mg/kg. La concentración en el plasma máxima fue de 0.5-1.0 horas después de la dosis. La vida media terminal aparente media fue de aproximadamente 4 horas, y el tiempo de residencia medio promedio de aproximadamente 7 horas . RATONES LLEVANDO TUMOR Después de darles erlotinib 6.3, 12.5, 25.0, 100.0, y 150.0 mg/kg oralmente a ratones actínicos nu/un, la concentración en el plasma fue de hasta 16,700 ng/ml y 8,870 ng/ml, 1 hora y 6 horas después de la dosis, respectivamente (Figura ÍA) . Las concentraciones de tumor medio respectivas después de las dosis orales de 150 mg/kg, se muestrearon en los mismos puntos en el tiempo que las muestras de plasma, fueron de 4,800 y 3,090 ng/g de tejido. La variabilidad inter-individual de las concentraciones de plasma fue moderada, con una desviación estándar relativa (RSD) de aproximadamente 35-40% (intervalo: 5.2-120%) . La exposición fue dependiente de la dosis y más de proporcional a la dosis con dosis ascendentes. Las concentraciones de tumor también se correlacionaron bien con la concentración del plasma en este estudio (Figura IB) . Determinación de las dosis máximas toleradas (MTD)en ratones desnudos atímicos . MTD DE ERLOTINIB El MTD para erlotinob fue de 100 mg/kg (Figura 5) .

Los ratones que mostraron signos de toxicidad todos tuvieron lesiones similares. La toxicidad bruta se encontró en la piel y en el tracto gastrointestinal. Un ratón en el grupo de 400 mg/kg murió. El resto de los animales en este grupo se sacrificaron debido a la morbidez. A los ratones que se les dieron 200 mg/kg tuvieron una pérdida de peso marcada y todos fueron sacrificados. Nuestros estudios de eficacia previos han demostrado, sin embargo, que erlotinib 150 mg/kg en esta formulación también es bien tolerado durante 3 semanas (autores, observación no publicada. MTD DE CISPLATINA El MTD en este estudio fue de 6 mg/kg cada 6 días x 3 i.p. (Tabla 2). Existen reporte de varios MTD en ratones para cisplatina, utilizando ya sea ruta i.p. o intravenosa (i.v.), incluyendo 4 mg/kg cada 6 días x 2 i.v. en ratones desnudos (Perez-Soler R. y otros (2001) Proc. Am. Soc. Clin. Oncol .20 :310a (Abstract 1235)), 6 mg/kg cada 6 días x 3 i.p. en ratones C57/B16 (van Moorsel C. J. , y otros (1999) Eur. J. C ncer 35(5):808-814) y 4 mg/kg cada 4 días por 3 i.v. en ratones desnudos (Riccardi, A. , (2001) Cáncer Chemother. Pharmacol. 47 (6 ): 498-504) . Se les dio a los ratones cisplatina i.p. en dosis en incremento de 3 mg/kg a 12 mg/kg. Los efectos secundarios tóxicos clásicos de la terapia de cisplatina son renal, gastrointestinal, y neurológico (Perez-Soler R. y otros (2001) Proc. Am. Soc. Clin. Oncol .20 : 310a (Abstract 1235). Los ratones en ambos grupos (a una extensión menor en el grupo de 9 mg/kg) tuvieron signos claros de toxicidad gastrointestinal. No hizo una necropsia completa, por lo tanto no se sabe si hubo lesiones histológicas en los riñones, en el sistema nervioso central o en el tracto gastrointestinal en estos ratones, o en aquellos en el grupo de la dosis más baja. Pero no hubo signos brutos de nefrotoxicidad, o comportamiento o signos de postura de neurotoxicidad en ninguno de los grupos de dosis . Efectos de erlotinib en xenoinjertos NSCLC establecidos . ESTUDIO DE RESPUESTA A LA DOSIS EN H460a. Al final del estudio en xenoinjertos NSCLC H460a (en el día 28 después de la implantación del tumor) el erlotinib, como una monoterapia, tuvo una eficacia dependiente de dosis significativa. En el grupo de 100 mg/kg, hubo inhibición del crecimiento de 61% (p=O.OOl, contra el control de vehículo. Los otros grupos tuvieron la siguiente inhibición del crecimiento: 25 mg/kg: 46% (p=O.OOl contra control de vehículo); 12.5 mg/kg: 36% (p=0.003 contra control de vehículo); 6.25 mg/kg: 28% (p=0.014 contra control de vehículo) (Figura 2). No hubo regresión parcial o completa. Actividad de la combinación de erlotinib y cisplatina en H460a La cisplatina 6 mg/kg significativamente inhibió el crecimiento del tumor en 81% (p=O.OOl) (Figura 4). La cisplatina 1.5 mg/kg inhibió el crecimiento del tumor en 42% (p=0.014). La cisplatina combinada de 6 mg/kg y erlotinib de 100 mg/kg fue letal con signos de toxicidad en el día 5 después de la implantación del tumor . Todos los ratones murieron en el día 23 después de la implantación del tumor (día de tratamiento 13). La cisplatina combinada de 1.5 mg/kg, y erlotinib de 25 mg/kg fueron bien toleradas e inhibieron el crecimiento del tumor en 53% (p=0.003 contra vehículo). No hubo regresión parcial o completa. Esta inhibición del crecimiento del tumor no fue aditiva y no fue significativa mejor que cualquiera de cisplatina o erlotinib administrada al 25% del MTD. Esta combinación tampoco fue significativamente mejor que erlotinib de 100 mg/kg o cisplatina de 120 mg/kg. Actividad de combinación de erlotinib y cisplatina en A549. Al final de este estudio (día 47 después de la implantación del tumor, día de tratamiento 19, el erlotinib de 100 mg/kg significativamente inhibió el crecimiento del tumor en 93% (p=O.OOl) (Figura 6). No hubo regresión parcial (2%). El erlotinib de 25 mg/kg inhibió el crecimiento del tumor en 25%. Cisplatina de 6 mg/kg significativamente inhibió el crecimiento de tumor en 88% (p=O.OOl) con una regresión parcial (2%). Cisplatina de 1.5 mg/kg inhibió el crecimiento de tumor en 30%, aunque esto no fue significativo. Debido a las toxicidades en los estudios previos, la cisplatina y erltinib no se combinaron a altas dosis. La cisplatina combinada de 1.5 mg/kg y erlotinib de 25 mg/kg fueron bien tolerados por todos los ratones sin una pérdida de peso significativa o signos globales de toxicidad. Esta combinación significativamente inhibió el crecimiento de tumor en un 98% (p=O.OOl contra control de vehículo), con 5 regresiones parciales (intervalo: 2%-28%) . Esta inhibición del crecimiento del tumor fue sinergística, por lo que fue significativamente mejor que cualquiera de cisplatina (p=0.05) o erlotinib (p=0.05) dado a 25% del MTD. Esta combinación no fue significativamente mejor que erlotinib de 100 mg/kg y cisplatina de 6 mg/kg. Efectos relacionados con el tratamiento en tejido normal y de tumor . Necropsia en animales que se les dio monoterapia. En animales que se les dio monoterapia de erlotinib, no hubo cambios en los parámetros de hematología o parámetros de química clínica (datos no mostrados) . Hubo cambios macroscópicos relacionados con el tratamiento en la piel . Los ratones tuvieron un enrojecimiento sustancial y endurecimiento de la piel en el hocico (Figura 7), que pudo haber sido debido al alto nivel de la expresión de EGFR en la piel. Estas lesiones fueron temporales y se disiparon con un tratamiento continuo. Los efectos anti-tumor relacionados con el tratamiento consistieron de una disminución media en el índice proliferativo Ki-67 en el erlotinib de 100 mg/kg en ambos modelos de tumor de xenoinjerto NSCLC (Figura 8) . No hubo diferencia significativa en la frecuencia de apoptosis en células de tumor en xenoinjertos tratados, y no hubo un claro efecto en angiogénesis según medida por densidad microvascular (MVD) a través de tinción inmunohistoquímica para el marcados de la célula endotelial CD31. Necropsia en animales que se les dio combinación de erlotinib/cisplatina . La severidad de las lesiones microscópicas fue dependiente de la dosis en riñones de grupos que se les dio cisplatina sola y en combinación. Las lesiones principales fueron necrosis tubular y basofilia tubular (datos no mostrados) . Los efectos relacionados con el tratamiento en la hematología y los parámetros de la química de suero fueron mínimos. La cisplatina es una nefrotoxina, que produce daño celular tubular próximo y distal (Klaassen, and Curtís, D. , (Editor). Casarett and Doull's Toxicology: The Basic Science of Poisons. 6a. Ed. McGraw-Hill, New York (2001), págs. 399-401, 496, 497, 500, 503, 506, 511, 695, 852 y 853). Con base en los datos patológicos, las combinaciones de erlotinib de 25 mg/kg y cisplatina de 1.5 mg/kg también tuvieron efectos antineoplásticos claros, y otra vez, no apareció toxicidad incrementada. Los efectos sobre la proliferación de célula de tumor en el grupo de combinación fueron similares a aquellos de la monoterapia de erlotinib de alta dosis. DISCUSIÓN Los resultados muestran que erlotinib, un inhibidor de molécula pequeña selectivo y oralmente disponible, potente de HERl/EGFR, tiene una actividad antitumor fuere en modelos de xenoinjerto NSCLC humanos que expresan número similares de HERl/EGFR, como monoterapia y en combinación como quimioterapéuticos convencionales . En el modelo de xenoinjerto 460a, tuvo una excelente relación de dosis-respuesta, y la concentración de tumor se correlaciona bien con la concentración del plasma. Las dos líneas de célula NSCLC humanas, cuando crecieron como tumores subcutáneos en ratones atímicos, tuvieron cinéticos de crecimiento de tumor diferentes, con un tiempo doble de 5 días para H460a y 10 días para A549. La monoterapia con erlotinib a 100 mg/kg significativamente inhibió el crecimiento de tumor en el modelo de xenoinjerto H460a. Hubo una inhibición de crecimiento de tumor significativa y una remisión parcial con la combinación cisplatina/erlotinib, administrada a 25% del MTD, en un tumor A549 de lento crecimiento (90%) . La inhibición del crecimiento de tumor con erlotinib en combinación con cisplatina significativamente se disminuyó comparada con la monoterapia de erlotinib (p=0.05). En el tumor H460a de crecimiento más rápido, hubo inhibición del crecimiento de tumor sustancial con la combinación cisplatina/erlotinib (53%) utilizando un cuarto del MTD de cualquiera de los compuestos. Sin embargo, la inhibición del crecimiento de tumor con esta combinación no fue significativamente diferente de aquella con la monoterapia. A549 crece lentamente, y por consiguiente se asume que es más dependiente de la angiogénesis. Erlotinib se cree que es un agente anti-angiogénico indirecto (Kerbel, R, y Folkman, J. (2002) Nat. Rev. Cáncer 2 (10) : 727-39 ) , por lo que no es sorprendente que tenga una eficiencia mayor contra A549. Elotinib inhibe el enlace de trifosfato de adenosina (ATP) con el dominio de cinasa de tirosina intracelular de HERl/EGFR, bloquea la fosforilación del receptor y la señalización en corriente 3' asociada (Moyer J. D. y otros (1997) C ncer Res. 57:4838-4848). El resultado es la inhibición de los procesos celulares asociados con el crecimiento y avance del tumor, tales como proliferación, angiogénesis, metástasis y protección de apoptosis (Moyer J. D. y otros (1997) Res. 57:4838-4848). Desafortunadamente, los efectos anti-angiogénicos no fueron detectados por MVD en tumores tratados con erlotinib, posiblemente debido a que el ensayo no fue lo suficientemente sensible. En ambos modelos NSCLC, la cisplatina (1.5 mg/kg) con erlotinib (25 mg/kg) , administrado a un cuarto de MTD, fue bien tolerado, con o sin una pérdida de peso insignificante, sugiriendo una calidad significante potencial de vida benéfica para los pacientes, a través del mantenimiento de la eficacia con un riesgo menor de efectos secundarios. En contraste, la combinación de alta dosis de erlotinib y agentes convencionales a sus dosis máximas toleradas individuales no fueron toleradas. Esto puede estar relacionado con el hecho de que no se puede utilizar el cuidado de soporte preclínicamente . Los ensayos de la fase III de erlotinib en combinación con gemcitabina y cisplatina, o carboplatina y paclitaxel en seres humanos con NSCLC, han sido desepcionantes ya que no demostró ningún beneficio de supervivencia conclusivo. Sin embargo, los estudios preclínicos reportaron que claramente han demostrado que erlotinib en combinación con cisplatina tiene un efecto aditivo en la inhibición del crecimiento de tumor. Estos hallazgos soportan la necesidad de un examen adicional de los efectos de erlotinib en varias configuraciones clínicas tales como su uso secuencial con otros agentes quimioterapéuticos, y en poblaciones de pacientes seleccionados. Además, HERl/EGFR se sobreexpresa en numerosos cánceres, incluyendo cáncer de cabeza y cuello, próstata, glioma, gástrico, de pecho, cervical, pancreático y ovárico (Ciardiello, F and Tortora G. (2002) Expert Opin.

Investig. Drugs 11:755-768); Salomón DS, y otros (1995) Crit. Rev. Oncol. Hematol . 19:183-232). POr consiguiente, erlotinib en combinación con cisplatina pueden tener efectos de eficacia en otros cánceres con tumores de célula sólidos que expresan HERl/EGFR. En conclusión, en NSCLC, la actividad antitumor de erlotinib en tumores de xenoinjerto con niveles similares de la expresión de EGFR es sólida tanto en monoterapia como en combinación con cisplatina. Se necesita una investigación adicional para completamente evaluar esta nueva avenida prometedora en el tratamiento del cáncer. INCORPORACIÓN POR REFERENCIA Todas las patentes, solicitudes de patente publicadas y otras referencias descritas aquí se incorporan expresamente por referencia. EQUIVALENTES Aquellos con experiencia en la técnica reconocerán, o serán capaces de evaluar utilizar no más de la experimentación de rutina, muchos eguivalentes a modalidades específicas de la invención descritas específicamente aquí. Dichos equivalentes pretenden abarcarse en el alcance de las siguientes reivindicaciones .

TABLA 1 Farmacocinéticos de dosis individual de erlotinib 20 y 100 mg/kg en ratones atímicos un/un hembra que llevan tumor.

Cmx = concentración de plasma pico; Tmax = tiempo para la concentración de plasma pico; Túltima = tiempo de la última concentración medible; AUC última = área por debajo de la curva de tiempo de concentración en el plasma desde el tiempo cero al tiempo de la última concentración medible; CL/F = huelgo aparente; ?z = constante de grado de eliminación; ?2 = vida media terminal del plasma; MRT = tiempo de residencia medio; Vz/F = volumen aparente de distribución.

TABLA 2 Evaluación de la dosis máxima tolerada en ratones desnudos atímicos no llevando tumor tratados durante 14 días (n=5) Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (35)

1. REIVINDICACIONES
2. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad de lo contenido en las siguientes reivindicaciones. 1.- Una composición farmacéutica, en particular para uso en cáncer, caracterizada porque comprende un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina, en un portador farmacéuticamente aceptable. 2. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el inhibidor de cinasa EGFR es erlotinib
3. 3.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el erlotinib en la composición está presente como una sal de clorhidrato.
4. 4. - La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porgue adicionalmente comprende uno o más de otros agentes anticáncer .
5. 5. - Un método para la fabricación de un medicamento previsto para tratar tumores o metástasis de tumor, caracterizado porque se utilizan el inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina .
6. 6. - El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el medicamento es previsto para el cáncer .
7. 7. - El método de conformidad con la reivindicación 5 o reivindicación 6, caracterizado por el inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina está contenido en la misma formulación.
8. 8. - El método de conformidad con la reivindicación 5 o reivindicación 6, caracterizado porque el inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina está contenido en diferentes formulaciones .
9. 9. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, caracterizado porque el inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina está previsto para la administración al paciente a través de la misma ruta.
10. 10.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, caracterizado porque el inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina está previsto para la administración al paciente a través de rutas diferentes.
11. 11.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10, caracterizado porque se utiliza el inhibidor de cinasa EGFR erlotinib.
12. 12. - El método de conformidad con cualguiera de las reivindicaciones 5 a 11, caracterizado porgue erlotinib está previsto para la administración al paciente a través de administración parenteral u oral .
13. 13. - El método de conformidad con cualguiera de las reivindicaciones 5 a 12, caracterizado porgue la cisplatina está prevista para la administración al paciente a través de administración parenteral.
14. 14.- El método de conformidad con cualguiera de las reivindicaciones 5 a 13, caracterizado porgue adicionalmente comprende uno o más de otros agentes anti-cáncer.
15. 15.- El método de conformidad con cualguiera de las reivindicaciones 5 a 14, caracterizado porque los otros agentes anti-cáncer se seleccionan de un agente de alquilación, ciclofosfamida, clorambucil, cisplatina, busulfan, melfalan, carmustina, estreptozotocina, trietilenmelamina, mitomicina C, un antimetabolito, metotrexato, etoposida, 6-mercaptopurina, 6-tiocguanina, citarabina, 5-fluorouracilo, capecitabina, dacarbazina, un antibiótico, actinomicina D, doxorubicina, daunorubicina, bleomicina, mitramicina, un alcaloide, vinblastina, paclitaxel, un glucocorticoide, dexametasona, un corticoesteroide, prednisona, inhibidores de la enzima de nucleosido, hidroxiurea, un enzima de depleción de aminoácido, asparaginasa, leucovorina, y un derivado de ácido fólico.
16. 16.- Un método para preparar una composición farmacéutica útil para el tratamiento de tumores o metástasis de tumor en un paciente, caracterizado porque comprende combinar cisplatina con un inhibidor de cinasa EFGR.
17. 17. - El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porgue el inhibidor de cinasa EGFR es erlotinib.
18. 18.- El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque además comprende combinar un portador farmacéuticamente aceptable con la cisplatina y erlotinib.
19. 19.- Un kit caracterizado porque comprende un contenedor que comprende cisplatina y un inhibidor de cinasa EGFR.
20. 20.- El kit de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque además comprende un diluyente estéril.
21. 21.- El kit de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el inhibidor de cinasa EGFR es erlotinib.
22. 22.- El kit de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque además comprende un inserto de paquete que comprende las instrucciones impresas dirigidas al uso de un tratamiento combinado de cisplatina y erlotimib para un paciente como un método para tratar tumores, metástasis de tumor u otros cánceres en un paciente.
23. 23.- La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende adicionalmente uno o más de otros agentes anti-cáncer.
24. 24.- La composición de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porgue dicho otro agente anti-cáncer es un miembro seleccionado del grupo que consiste de fármacos de alquilación, antimetabolitos, inhibidores de microtúbulo, podofilotoxinas, antibióticos, nitrosoureas, terapias de hormona, inhibidores de cinasa, activadores de apoptosis de célula de tumor, y agentes antiangiogénicos .
25. 25.- El uso de una primera cantidad efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y una segunda cantidad efectiva de cisplatina para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
26. 26.- El uso de una primera cantidad sub-terapéutica de un inhibidor de cinasa EGFR, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y una segunda cantidad sub-terapéutica de cisplatina para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
27. 27.- El uso para el tratamiento de cáncer de conformidad con la reivindicación 25 o reivindicación 26, en donde el inhibidor de cinasa EGFR es erlotinib.
28. 28.- El uso de conformidad con la reivindicación 5, en donde los tumores o metástasis de tumor que se va a tratar son tumores colorectales o metástasis de tumor.
29. 29.- Una composición farmacéutica, en particular para el uso en cáncer, caracterizada porque comprende (i) una primera cantidad efectiva de un inhibidor de cinasa EGFR, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad efectiva de cisplatina.
30. 30.- Una composición farmacéutica, en particular para uso en cáncer, caracterizada porque comprende (i) una primera cantidad sub-terapéutica de un inhibidor de cinasa EGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) una segunda cantidad sub-terapéutica de cisplatina.
31. 31.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 29 o reivindicación 30, caracterizada porque el inhibidor de cinasa EGFR es erlotinib.
32. 32.- Un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina caracterizado porque es para uso como medicamento, en particular para uso en cáncer.
33. 33.- Erlotinib y cisplatina caracterizadas porque son para uso como medicamento, en particular para uso en cáncer .
34. 34.- El uso de un inhibidor de cinasa EGFR y cisplatina para la fabricación de un medicamento para tratar tumores o metástasis de tumor.
35. 35.- El uso de conformidad con la reivindicación 34, en donde el inhibidor de cinasa EGFR es erlotinib.