MXPA06002846A - Quinolinas sustituidas como inhibidores de la enzima de la proteina tirosina cinasa. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona compuestos de la formula (I), que tienen la estructura, en donde R1, R2, R3 se describen dentro de la especificacion. Los compuestos actuan como agentes anti-cancer mediante la inhibicion de HER-2 y EGFR.

Description

QUINOLINAS SUSTITUIDAS COMO INHIBIDORES DE LA ENZIMA DE LA PROTEINA TIROSINA CINASA CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con algunos compuestos de quinolina 3-ciano sustituidos así como con las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los compuestos de la presente invención inhiben la HER2 y la enzima del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR, por sus siglas en inglés) por lo que inhiben el crecimiento anormal de algunos tipos de células . Los compuestos de esta invención son agentes anti-cáncer y son útiles para el tratamiento de cáncer en mamíferos. Esta invención también se relaciona con el uso de 3-ciano quinolinas en el tratamiento de cáncer y las preparaciones farmacéuticas que las contienen. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las proteínas tirosina cinasas son una clase de enzimas que catalizan la transferencia de un grupo fosfato del ATP a un residuo de tirosina localizado en un sustrato de proteína. Las proteínas tirosina cinasas juegan claramente un papel en crecimiento celular normal . Muchas proteínas del receptor del factor de crecimiento funcionan como tirosina cinasas y es mediante este proceso que efectúan la señalización. La interacción de los factores de crecimiento con estos receptores es un evento necesario en la regulación normal del REF.: 171041 crecimiento celular. Sin embargo, bajo ciertas condiciones, como resultado de la mutación o sobre-expresión, estos receptores pueden llegar a desregularse, el resultado de lo cual es la proliferación celular descontrolada que puede conducir al crecimiento tumoral y, finalmente, a la enfermedad conocida como cáncer [Walks, A.F., Adv. Cáncer Res., 60, 43 (1993) y Parsons, J.T.; Parsons, S.J., Important Advances in Oncology, DeVita, V.T. Ed. , J.B. Lippincott Co., Phila. , 3 (1993)]. Entre las cinasas del receptor del factor de crecimiento y sus proto-oncogenes que se han identificado y que son blancos de los compuestos de esta invención son la cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (cinasa EGF-R, el producto de la protelna del oncogén erbB) y el producto producido por el oncogén erbB-2 (también referido como el neu o HER-2) . Dado que el evento de fosforilación es una señal necesaria para que se presente la división celular y dado que las cinasas sobre-expresadas o mutadas se han asociado con el cáncer, un inhibidor de este evento, un inhibidor de la tirosina cinasa de proteína, tendrá valor terapéutico para el tratamiento de cáncer y otras enfermedades caracterizadas por el crecimiento celular descontrolado o anormal. Por ejemplo, la sobre-expresión del producto de la cinasa del receptor del oncogén erbB-2 se ha asociado con los cánceres de mama y ovario en humanos [Slamon, D.J., et al., Science, 2é4, 707 (1989) y Science, 235, 1146 (1987)]. La desregulación de la cinasa EGF-R se ha asociado con tumores epidermoides [Reiss; M. , et al., Cáncer Res., 51, 6254 (1991)], tumores de mama [Macias, ?. , et al., Anticáncer Res. , 7, 459 (1987)] y tumores que involucran otros órganos principales [Gullick, W. J. , Brit. Med. Bull. , 47, 87 (1991)]. Debido a la importancia del papel jugado por las cinasas del receptor desreguladas en la patogénesis del cáncer, muchos estudios recientes han tratado con el mejoramiento de los inhibidores de PTK específicos como agentes terapéuticos an i-cáncer potenciales [algunas revisiones recientes: Burke, T.R., Drugs Future, 17, 119 (1992) y Chang, C.J.; Geahlen, R.L. J". Nat. Prod. , 55, 1529 (1992)] . Los compuestos de esta invención inhiben la actividad de cinasa de EGF-R y por lo tanto, son útiles para el tratamiento de algunos estados de enfermedades, tales como cáncer, que resultan, por lo menos en parte, de la desregulación de este receptor. El gen HER-2 (c-erbB-2, neu) codifica un receptor de tirosina cinasa de transmembrana de 185 kDa que tiene homología parcial con otros miembros de la familia del receptor del factor de crecimiento epidérmico [Shih, C, Padhy, L.C., Murray, M. , et al., Transforming genes of carcinomas and neuroblastomas introduced into mouse fibroblasts, Nat re, 290, 261-264 (1981)]. Se conoce ahora que las células de humano normales expresan una pequeña cantidad constitutiva de la proteína HER-2 sobre la membrana de plasma.

La activación del oncogén HER-2 se cree que sigue la unión de un ligando del factor de crecimiento aún no identificado para el complejo del receptor HER-2, lo que conduce a la heterodimerización, activación de una cascada de señales de crecimiento que culmina en la activación del gen. Más específicamente, la familia del factor de crecimiento epidérmico puede subdividirse en cuatro grupos basados en sus especificidades de unión del receptor (HER-1, HER-2, HER-3 y HER-4) . HER-2 es la pareja de heterodimerización preferida de todos los otros receptores de HER. La sobre-expresión de HER-2 se ha demostrado que conduce a un aumento en la tumorigenicidad, la invasión de tumores, aumento en el potencial metastático y la sensibilidad alterada a agentes hormonales y quimioterapéuticos en los estudios de transfección en modelos celulares y animales [Pegram, M. D., Finn, R.S., Arzoo, K. , et al., The effect of HER-2/neu over expression on chemotherapeutic drug sensivity in human breast and ovarían cells Oncogene, 15, 537-547 (1997)]. La sobre-expresión de la proteína HER-2 se ha reportado que se presenta en aproximadamente 30% de los cánceres de mama invasores, con la amplificación del gen HER-2 detectada en 95% o más de los especímenes que se encuentra que sobre-expresan la proteína HER-2, [Gebhardt, F. , Zánker, K. , Brandt, B. Differential expression of alternatively spliced c-erbB-2 mRNA in primary tumors, lymph node metastases, and bone marrow micro metastases from breast cáncer patients Biochem. Biophys. Res. Commun., 247, 319-323 (1998)]. La patente U.S. 6,288,082 publicada el 11 de septiembre de 2001 (la patente 082) describe compuestos de 3-ciano quinolina sustituidos que inhiben el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) . Los compuestos de esta solicitud se distinguen de los de la patente ?082 en su capacidad para actuar como inhibidores de HER-2 potentes. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona un compuesto de la fórmula 1: en donde : Ri es halógeno; R2 es un anillo de piridinilo, pirimidina opcionalmente sustituida, tiazol o fenilo opcionalmente sustituido, en donde el anillo de fenilo o pirimidina pueden ser insustituidos , mono-sustituidos o di-sustituidos ; y R3 es -O- o -S-. En una modalidad los compuestos de esta invención incluyen : (E) -N-{ 4- [4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil}-4- (dimetilamino) -2-butenamida; (E) -N-{ 4- [3-cloro-4- (2-piridinilmetoxi) anilino] -3-ciano-7~ etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida; (E) -N- (4-{3-cloro-4- [ (3-fluorobencil) oxi] anilino}-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida; (2E) -N- ( 4- { [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfanil) fenil] amino}-3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida; (E) -N- (4-{3-cloro-4- [ (4, 6-di-metil-2-pirimidinil) sulfanil] anilino}-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida; (E) -N-{ 4- [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfanil) anilino] -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil}-4- [ (2-metoxietil) (metil) amino] -2-butenamida; o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los siguientes detalles experimentales se establecen para ayudar a entender la invención, y no se pretende y no deberían construirse para limitar de ninguna manera la invención establecida en las reivindicaciones que a continuación siguen. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los compuestos de esta invención son algunas quinolinas 3-ciano sustituidas. A través de toda esta solicitud de patente, el sistema de anillo de quinolina será numerado como se indica en la siguiente fórmula; también se muestra la numeración para el sistema de anillo de quinazolina: Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención son los derivados de los ácidos orgánicos e inorgánicos como: acético, láctico, cítrico, tartárico, succínico, maleico, malónico, glucónico, clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, metansulfónico y los ácidos aceptables similarmente conocidos. Para los propósitos de esta invención "halógeno" es F, Cl, Br o I. Como se usa en la presente, el término "sustituido" incluye unir un grupo metilo a un carbono del anillo. Los compuestos de esta invención pueden contener uno o más átomos de carbono asimétricos; en estos casos, los compuestos de esta invención incluyen los diastereómeros individuales, los racematos y los enantiómeros R y S individuales de los mismos . Algunos de los compuestos de esta invención pueden contener uno o más enlaces dobles; en tales casos, los compuestos de esta invención incluyen cada uno de los isómeros configuraciones posibles así como las mezclas de estos isómeros . Para los propósitos de esta invención, un "neoplasma" se define como las células seleccionadas de mama, riñon, vejiga, boca, laringe, esófago, estómago, colon, ovario, páncreas, cerebro, próstata y pulmón que tiene una morfología no encontrada en la mayoría de las células de un mamífero. En una modalidad, la presente invención proporciona un método que inhibe el neoplasma. El método comprende poner en contacto una célula con una cantidad de un compuesto efectiva para disminuir o prevenir la función de HER-2. La célula puede ser una célula de mamífero y más específicamente una célula de humano. La célula también puede ser una célula bacteriana tal como, por ejemplo, E. coli. La célula puede incluir, pero no se limita a, una célula neuronal, una célula endotelial, una célula glial, una célula microglial, una célula de músculo liso, una célula somática, una célula de la médula ósea, una célula del hígado, una célula intestinal, un gameto, un miocito, un fagocito mononuclear, una célula endotelial, una célula tumoral, una célula de linfocito, una célula mesangial, una célula epitelial retinal, una célula vascular retinal, una célula de ganglio o una célula de tallo. La célula puede ser una célula normal, una célula activada, una célula neoplásica, una célula enferma o una célula infectada. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para el tratamiento o prevención de un neoplasma en un mamífero. Por lo tanto, la presente invención proporciona a un mamífero, una composición farmacéutica que comprende un compuesto de esta invención en combinación o asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable. El compuesto de esta invención puede administrarse solo o en combinación con otros compuestos terapéuticamente efectivos o terapias para el tratamiento o prevención del neoplasma. Los compuestos pueden proporcionarse oralmente, por inyección intralesional , intraperitoneal , intramuscular o intravenosa; infusión; liberación mediada por liposomas; liberación tópica, nasal, anal, vaginal, sublingual, uretral, transdérmica, intratecal, ocular u ótica. Para obtener consistencia para proporcionar el compuesto de esta invención se prefiere que un compuesto de la invención esté en la forma de una dosis unitaria. Las formas de dosis unitaria apropiadas incluyen tabletas, cápsulas y polvos en saquitos o ampolletas. Estas formas de dosificación unitaria pueden contener de 0.1 a 300 mg de un compuesto de la invención y de preferencia de 2 a 100 mg. Las formas de dosificación unitaria aún preferidas contienen 5 a 50 mg de un compuesto de la presente invención.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse oralmente a un intervalo de dosificación de aproximadamente 0.01 a 100 mg/kg o de preferencia a un intervalo de dosificación de 0.1 a 10 mg/kg. Estos compuestos pueden administrarse de 1 a 6 veces por día, más usualmente de 1 a 4 veces por día. La cantidad efectiva será conocida por un experimentado en la técnica; también será dependiente de la forma del compuesto. Un experimentado en la técnica puede realizar de manera rutinaria pruebas de actividad empírica para determinar la bioactividad del compuesto en las biopruebas y, de esta manera, determinar qué dosificación administrar. Los compuestos de la invención pueden formularse con los excipientes convencionales, tales como un rellenador, un agente de desintegración, un aglomerante, un lubricante, un agente saborizante, un aditivo de color o un vehículo. El vehículo puede ser, por ejemplo, un diluyente, un aerosol, un vehículo tópico, una solución acuosa, una solución no acuosa o un vehículo sólido. El vehículo puede ser un polímero o una pasta dental. Un vehículo en esta invención abarca cualquiera de los vehículos farmacéuticamente aceptados estándares, tales como solución salina amortiguada con fosfato, solución salina amortiguada con acetato, agua, emulsiones, tales como una emulsión de aceite/agua o una emulsión de triglicéridos, varios tipos de agentes humectantes, tabletas, tabletas y cápsulas recubiertas . Cuando se proporcionan oral o tópicamente, estos compuestos serían proporcionados a un paciente por liberación en diferentes vehículos. Por lo regular, estos vehículos contienen excipientes tales como almidón, leche, azúcar, algunos tipos de arcilla, gelatina, ácido esteárico, talco, grasas o aceites vegetales, gomas o glicoles. El vehículo específico que necesitaría seleccionarse con base en el método de liberación deseado, por ejemplo, solución salina amortiguada con fosfato (PBS) puede usarse para la liberación intravenosa o sistémica y pueden usarse grasas vegetales, cremas, salvias, ungüentos o geles para la liberación tópica.

Los compuestos de la presente invención pueden liberarse junto con los diluyentes, conservadores, solubilizantes, emulsificantes, adyuvantes y/o vehículos apropiados en el tratamiento o prevención de neoplasma. Estas composiciones son líquidas o liofilizadas o de otra forma formulaciones secas e incluyen diluyentes de diferente contenido amortiguador (por ejemplo, Tris-HCl, acetato, fosfato) , pH y concentración iónica, aditivos tales como albúminas o gelatina para prevenir la absorción a superficies, detergentes (por ejemplo, TWEEN 20, TWEEN 80, PLURONIC F68, sales de ácido biliar), agentes solubilizantes (por ejemplo, glicerol, polietilenglicerol) , antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico, metabisulfato de sodio), conservadores (por ejemplo, timerosal, alcohol bencílico, parabenos) , sustancias de volumen o modificadores de tonicidad (por ejemplo, lactosa, manitol) , unión covalente de polímeros, tales como polietilenglicol , acomplej amiento con iones metálicos o la incorporación del compuesto en o sobre preparaciones de particulados de hidrogeles o liposomas, micro-emulsiones, micelas, vesículas unilamelares o multilamelares , espectros de eritrocitos o esferoblastos . Tales composiciones incluirán el estado físico, la solubilidad, la estabilidad, la velocidad de liberación in vivo y la velocidad de clarificación in vivo del compuesto o la composición. La elección de las composiciones dependerá de las propiedades físicas y químicas del compuesto capaz de tratar o prevenir un neoplasma. El compuesto de la presente invención puede liberarse localmente por medio de una cápsula que permite una liberación prolongada del compuesto durante un periodo de tiempo. Las composiciones de liberación controlada o prolongada incluyen formulación en depósitos lipofílicos (por ejemplo, ácidos grasos, ceras, aceites) . La presente invención proporciona además un compuesto de la invención para el uso como una sustancia terapéutica activa para prevenir un neoplasma . La presente invención proporciona un método para el tratamiento de neoplasma en humanos, que comprende administrar al paciente infectado una cantidad efectiva de un compuesto o una composición farmacéutica de la invención. Los compuestos de esta invención pueden prepararse como se representa en el diagrama de flujo 1, en donde Ri7 R2 y R3 son como se definen anteriormente. El grupo amino del compuesto 1 puede protegerse como un grupo amida por acetilación usando anhídrido acético en un solvente, tal como ácido acético. El grupo hidroxilo de 2 puede alquilarse con bromuro, yoduro, tosilato o mesilato de alquilo usando carbonato de potasio en un solvente de reflujo tal como acetona. El grupo nitro de 3 puede reducirse usando hidrogenación catalítica para dar la anilina sustituida 4. El calentamiento de 4 con el reactivo 5 con o sin un solvente proporciona el intermediario 6. El reflujo de 6 en un solvente de alto punto de ebullición tal como Dowtherm resulta en la ciclización a la hidroxi quinolina 7. Esta puede clorarse calentando en oxicloruro de fósforo para dar el derivado de cloro 8. La condensación de 8 con una anilina de la fórmula 9 en un solvente de reflujo tal como etanol en presencia de una cantidad catalítica de ácido produce el intermediario 10. El grupo acetato de 10 puede removerse por hidrólisis usando condiciones ácidas o básicas seguido de neutralización para dar 11. El intermediario 11 puede acilarse con un cloruro de aminoácido 12 (como la sal de clorhidrato) para dar los compuestos de esta invención de la fórmula 13. Los métodos usados para preparar los compuestos en la patente U.S. 6,288,082, WO-9633978 y WO-9633980 también pueden usarse para preparar los compuestos de esta invención y se incorporan en la presente por referencia.

Esquema de reacción 1 Además del método descrito en la presente anteriormente, hay un número de solicitudes de patente que describen métodos que son útiles para la preparación de los compuestos de esta invención. Aunque estos métodos describen la preparación de algunas quinazolinas, también son aplicables para la preparación de las 3-cianoquinolinas sustituidas correspondientemente usadas en esta invención, en donde la sustitución en la posición 6 es un grupo aminoalquilalcoxi . Los procedimientos químicos descritos en la solicitud WO-9633978 pueden usarse para preparar los intermediarios de 3-cianoquinolina usados en esta invención, en donde la sustitución en la posición 6 es un grupo aminoalquilamino . Ej emplo 1 (E) -N-{4- [4- (benciloxi) -3 -cloroanilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida Una porción de 1.74 mi (2.54 g, 0.02 moles) de cloruro de oxalilo se adicionó a 3.31 gramos (0.02 moles) de clorhidrato del ácido (E) -4- (dimetilamino) -2-butenoico en 75 mi de acetonitrilo . A éste se adicionó una pequeña gota de dimetilformamida . La reacción se calentó y se agitó en un baño de aceite a 63° durante 20 minutos, para dar una solución anaranjada. Esta solución se concentró in vacuo sin la aplicación de calor a aproximadamente la mitad de su volumen original . Esta solución se enfrió en un baño de aceite y una solución de 4.45 g (0.01 moles) de 6-amino-4- [4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -7-etoxi-3-quinolincarbonitrilo en 50 mi de N-metil pirrolidona se adicionó en una corriente. La reacción se enfrió y se agitó durante 2 horas. La reacción se vertió en 100 mi de bicarbonato de sodio acuoso saturado en hielo. En reposo, la goma resultante se solidificó y se filtró el sólido. Este sólido se sometió a cromatografía en gel de sílice. La columna se lavó con 3 litros de metanol : acetato de etilo 1:19, después el producto se eluyó con 3 litros de trietilamina-metanol-acetato de etilo 1:5:94.

La concentración del eluato dio un sólido, que se filtró para dar 2.96 gramos del compuesto del título. Del filtrado se obtuvo 1.0 gramos adicionales de producto. Total: 3.96 g. Ej emplo 2 (E) -N-{4- [3-cloro-4- (2-piridinilmetoxi) anilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida Una solución de clorhidrato del ácido (E) -4- (dimetilamino) -2-butenoico en 1.2 L de tetrahidrofurano (THF) y una cantidad catalítica de dimetilformamida (DMF) (1.2 mL) se enfrió a 0-5°C. Se adicionó gota a gota cloruro de oxalilo (0.95 eq) y la mezcla se calentó a 25-30°C y se agitó durante 2 horas. La suspensión anaranjada se verificó para el consumo completo del cloruro de oxalilo por HPLC después se enfrió a 0-5°C. Una solución de 111 g de 4- [4- (2-piridilmetoxi) -3-cloro] amino-6-amino-3 -ciano-7-etoxiquinolina en 1.47 L de 1-metil-2 -pirrolidinona se adicionó gota a gota y la mezcla se agitó hasta que permaneció =1.0% de la anilina iniciadora (3-16 horas) . La reacción se apagó con agua y la mezcla se calentó a 40 °C. Se adicionó hidróxido de sodio acuoso para llevar el pH a 10-11. Los precipitados resultantes se filtraron en caliente y se lavaron con agua. Los sólidos húmedos se calentaron a reflujo (70-75°C) en acetonitrilo :THF (1.5:1) y la solución se enfrió durante 3 horas a temperatura ambiente. El producto se filtró y se lavó con acetonitrilo : THF. El producto se secó (50°C, 10 mmHg, 24 horas) para dar un rendimiento de 80-85%. Punto de fusión de la sal de maleato 178-183°C. Ejemplo 3 (E) -N- (4- {3-cloro-4- [ (3-fluorobencil) oxi] anilino}-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida Una solución de 108 g de clorhidrato del ácido (E) -4- (dimetilamino) -2-butenoico en 1.1 L de tetrahidrofurano (THF) y una cantidad catalítica de dimetilformamida (DMF) (1.2 mL) se enfrió a 0-5°C. Se adicionó gota a gota cloruro de oxalilo (0.95 eq) y la mezcla se calentó a 25-30°C y se agitó durante 2 horas. La suspensión anaranjada se verificó para el consumo completo del cloruro de oxalilo por HPLC después se enfrió a 0-5°C. Una solución de 150 g de 6-amino-4- [3-cloro-4- (3-fluorobenciloxi) ] anilino-3-ciano-7-etoxi quinolina en 1.5 L de l-metil-2-pirrolidinona se adicionó gota a gota y la mezcla se agitó hasta que permaneció =1.0% de la anilina iniciadora (3-16 horas) . La reacción se apagó con agua y la mezcla se calentó a 40°C. Se adicionó hidróxido de sodio acuoso (101 g en 750 mL) para llevar el pH a 10-11. Los precipitados resultantes se filtraron en caliente y se lavaron con agua. Los sólidos húmedos se calentaron a reflujo (70-75°C) en acetonitrilo :THF (1.5:1) y la solución se enfrió durante 3 horas a temperatura ambiente . El producto se filtró y se lavó con acetonitrilo : HF . El producto se secó (50 °C, 10 mmHg, 24 h) y se obtuvo en un rendimiento de 80-85%. Punto de fusión 165-167°C. Ejemplo 4 4-Benciloxi-3-cloro-nitrobenceno Una porción de 15.43 g (0.275 moles) de hidróxido de sodio sólido (pelotillas) se adicionó a una solución de 43.89 g (0.25 moles) de 3~cloro-4-fluoro nitrobenceno y 32.34 mi (33.79 gramos, 0.373 moles) de alcohol bencílico en 220 mi de acetonitrilo . La reacción se agitó vigorosamente con un agitador mecánico durante la noche. El sólido resultante se filtró. La concentración del filtrado dio un segundo cultivo, que también se filtró. En reposo, más sólido salió de este filtrado. Esta mezcla se trató con éter, y el sólido se filtró. Todos los sólidos se lavaron completamente con agua y se combinaron para dar 49.71 g del compuesto del título. Ejemplo 5 4~Benciloxi-3-cloro-fenilamina Una mezcla de 6.59 g (0.025 moles) de 4-benciloxi-3-cloro nitrobenceno (ejemplo 4), 4.19 g (0.075 moles) de polvo de hierro y 12.04 g (0.225 moles) de cloruro de amonio en 100 mi de etanol y 25 mi de agua se filtró mecánicamente y se sometió a reflujo durante media hora. La reacción se dejó enfriar y agitar durante 1 hora. La mezcla se filtró y los sólidos se lavaron con etanol . Los filtrados combinados se tomaron a sequedad in vacuo. Este sólido se disolvió en cloruro de metileno y se pasó a través de Magnesol . La remoción del solvente del filtrado in vacuo dio 5.60 g del compuesto del título. Ejemplo 6 N-{4- [4- (Benciloxi) -3 -cloroanilino] -3-ciano-7-etoxi-6-guiñolinil }acetamida Una mezcla de 4.17 g (0.0149 moles) de la N- (4-cloro-3 -ciano-7-etoxi-6-quinolinil) acetamida, 4.04 g (0.0173 moles) de 4-benciloxi-3-cloro-fenilamina (ejemplo 5) y 2.0 g (0.017 moles) de clorhidrato de piridina en 85 mi de isopropanol se agitó y se sometió a reflujo en un baño de aceite durante 30 minutos . La reacción se enfrió en un baño de aceite y el sólido se colectó por filtración y se lavó con isopropanol y después con éter, para producir 7.26 g de producto crudo como la sal de clorhidrato. Este material se purificó por cromatografía de la base libre en gel de sílice mediante elución con metanol : cloruro de metileno 1:39. Ejemplo 7 6-Amino-4- [4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -7-etoxi-3-quinolincarbonitri1o Una solución de 298 mg (0.612 moles) de N-{4-[4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -3-ciano-7-etoxi-6-guinolinil}acetamida purificada (ejemplo 6) y 97 mg (1.73 mmoles) de hidróxido de potasio en 10 mi de metanol se agitó y se sometió a reflujo durante 60 horas. En enfriamiento, se formó un sólido. Esta mezcla se vertió en hielo, y el sólido resultante se filtró y se lavó con agua. Una vez seco, se formaron 242 mg del compuesto del título. Ejemplo 8 2 -Acetamido-5-nitrofenol A 400 g de 2-amino-5-nitrofenol en un matraz multi-cuello de 5 L equipado con un agitador mecánico, condensador de reflujo, entrada de nitrógeno, embudo de adición de 500 mL, manta de calentamiento y un termopar unido a un controlador de temperatura se adicionó 1.6 L de ácido acético. La mezcla se agitó a 60°C conforme 398 g de anhídrido acético se adicionaron durante 1.5 horas. Después de 1 hora, se adicionaron otros 37 g de anhídrido acético. Después de 1 hora, la mezcla se enfrió y se diluyó con 2 L de agua. El sólido se colectó por filtración y se lavó con agua y heptano. El sólido se secó en un horno al vacío para dar 509 g del compuesto del título. Ej emplo 9 4 -Acetamido-3 -etoxinitrobenceno A 400 g de 2 -acetamido-5-nitrofenol en un matraz de 4 cuellos de 12 L equipado con un condensador de reflujo, entrada de nitrógeno, termopar, embudo de adición y agitador mecánico se adicionó 790 g de carbonato de potasio y 2.0 L de dimetilformamida. La mezcla se agitó a 60 °C conforme se adicionaron 294 g de bromuro de etilo durante 30 minutos. Después de 1 hora, se agregaron 27 g de bromuro de etilo adicionales y la mezcla se agitó a 60 °C durante otra hora. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en 4 L de agua. Después de 30 minutos, el producto se colectó por filtración y se lavó con agua y heptano. El producto se secó en un horno al vacío a 60 °C para dar 457 g del compuesto del titulo . Ejemplo 10 Etil éster del ácido 3 - (4-acetamido-3 -etoxianilina) -2-cianopropenoico Una suspensión del compuesto 4-acetamido-3-etoxinitrobenceno en tetrahidrofurano (10 partes) se redujo al derivado de anilina usando 10% de Pd/G húmedo a 3.44 bar (50 psi) de hidrógeno y 30°C durante 2 horas. La solución resultante se filtró y se concentró a 2 partes de tetrahidrofurano . El concentrado se diluyó con tolueno y se dejó reaccionar con (etoximetilen) cianoacetato de etilo comercialmente disponible a reflujo durante 16 horas. Después de que se completó la reacción, la mezcla se enfrió. El producto precipitado se colectó por filtración, se lavó y se secó. El producto se obtuvo en un rendimiento de 90%. Ejemplo 11 3 -Ciano-7-etoxi-4-hidroxi-6-W-acetilquinolina Una solución de 210 g de etil éster del ácido 3- (4-acetamido-3 -etoxianilina) -2 -cianopropenoico en 12 L de Dowtherm se agitó bajo nitrógeno a 250 °C durante 15 a 20 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y el sólido se colectó por filtración. El sólido se lavó con tolueno y se mezcló con 1.2 L de tetrahidrofurano . La mezcla se sometió a reflujo durante 30 minutos y después se enfrió a temperatura ambiente. El sólido se colectó y se lavó con te rahidrofurano. Después del secado, se obtuvieron 179.4 g del compuesto del título. Ejemplo 12 4 -Cloro-3 -ciano-7-etoxi-6-nitro quinolina Una mezcla agitada de 300 g de 3~ciano-7-etoxi-4-hidroxi- 6-N-acetilquinolina en 2.53 L de 1, 2-dietoxietano se calentó a 80-85°C. A esta se adicionó 224 mi de oxicloruro de fósforo durante 30-40 minutos. La mezcla se agitó a 80-85°C durante 2-4 horas. La mezcla se enfrió, se filtró sobre una almohadilla de celita y se lavó con 1 , 2-dietoxietano . Los filtrados se adicionaron durante 1.5 horas a una solución de carbonato de potasio enfriada (0-10°C) (537 g en 1.5 L de agua). La mezcla amarilla resultante se agitó durante un mínimo de 12 horas . La mezcla se filtró y se lavó con agua caliente. Los sólidos se secaron (50 °C, 10 mmHg, 24 h) , para dar el compuesto del título en un rendimiento de 30-50%. El material se usó directamente en la siguiente etapa. Ejemplo 13 3 -Cloro-4- (2-piridilmetoxi) nitrobenceno Una mezcla de 160 g de hidróxido de potasio y 2-píridilcarbinol en 8 L de acetonitrilo se agitó durante 20-30 minutos. A esta se adicionaron 400 g de 3-cloro-4-fluoronitrobenceno y la mezcla se agitó a 40°C durante un mínimo de 18 horas hasta que la reacción se completó. Se adicionó agua y los sólidos amarillos precipitados se filtraron y se lavaron con agua. El producto se secó (40-50°C, 10 mmHg, 24 h) para dar el producto en 85-95% de rendimiento. Ejemplo 14 3 -Cloro-4- (3 -fluorobenciloxi ) nxtrobenceno Este compuesto se preparó a partir de 3-cloro-4-fluoronitrobenceno y alcohol 3-fluorobencilico usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 13. Ej emplo 15 6-Amino-4~ (3-cloro-4- (3-fluorobenciloxi) anilino-3-ciano-7-etoxi guiñolina A una mezcla de 400 g de 3-cloro-4- (3-fluorobenciloxi) nitrobenceno (ejemplo 14) y 464 g de polvo de zinc en 4 L de etanol a 40-50°C se adicionó cloruro de amonio acuoso (152 g en 800 mi de agua) . Después de agitar un mínimo de 2 horas, la mezcla de reacción se filtró en caliente a través de una almohadilla de celita y se lavó con etanol caliente. El filtrado se evaporó y se adicionaron 1.72 L de 2-metil THF, agua y salmuera. La capa orgánica se separó y se lavó con agua. La capa orgánica se evaporó y se reemplazó con 3.8 L de etanol. Se adicionó 4-cloro-3-ciano-7-etoxi-6-N-acetilamino-quinolina con una cantidad catalítica de ácido metansulfónico y la mezcla se calentó a 70-75°C durante un mínimo de 2 horas hasta que la reacción se completó. Se adicionó 1.69 L de HC1 concentrado a 70-75°C y se mantuvo durante un mínimo de 2 horas hasta que se completó la hidrólisis. Se adicionó agua y la mezcla se enfrió a 40°C, se colectó el sólido y se lavó con agua. La torta húmeda se suspendió en 5.4 L de metanol, se adicionó carbonato de potasio acuoso al 10% (315 g en 2.8 L de agua) y la mezcla se agitó durante 2.5 horas. La mezcla se filtró y se lavó con metanol: agua 1:1. El producto se secó (50 °C, 10 mmHg, 24 horas) para dar el compuesto del título en un rendimiento de 80-90%. Ejemplo 16 6-Amino-4- (4- (2-piridilmetoxi) -3-cloro) anilino-3-ciano-7-etoxigui olina El compuesto identificado anteriormente se preparó a partir de 3-cloro-4- (2-piridilmetoxi) itrobenceno y 4-cloro-3-ciano-7-etoxi-6-N-acetilamino-quinolina usando el método descrito anteriormente en el Ejemplo 15. Ejemplo 20 [4- (3-Cloro-4-fluoro-fenilamino) -3-ciano-7-etoxi-quinolin-6-il] -amida del ácido 4-dimetil-but-2-enoico Ejemplo 21 N- { 4- [3-Cloro-4- ( l-metil-lH-imidazol-2-ilsulfanil) -fenilamino] -3-ciano-quinolin-6-il} -acrilamida Ejemplo 22 6, 7-Dimetoxi-4- (lH-indol-6-ilamino) -quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 23 4- (2, 3-Dihidro-benzo [1,4] dioxin-6-ilamino) -6, 7-dietoxi quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 24 4- (lH-Indazol-6-ilamino) -6, 7-bis (2-metoxi-etoxi) -quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 25 4- (1, 4-Dioxo-l, , 3, 4-tetrahidro-ftalazin-6-ilamino) -6, 7-dietoxi-quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 26 6, 7-Dietoxi-4- (indan-5-ilamino) -quinolin-3-carboniti Ejemplo 27 4- (2, 4-Dioxo-l, 4-dihidro-2H-benzo [d] [1, 3] oxazin-6-ilamino) 6, 7-dietoxi-quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 28 6, 7-Dietoxi-4- (l-oxo-indan-5-ilamino) -quinolin-3-carbo'nitrilo Ejemplo 29 6, 7-D±etoxi-4- (3-oxo-l, 3-dihidro-isobenzofuran-5-ilamino) quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 30 4- (1, 1-Dioxo-lH-l-benzo [b] tiofen-6-ilamino) -6, 7-dietoxi-quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 31 7-Etoxi-4- ( lH-indazol-6-ilamino) -6-metoxi-quinol±n-3-carbonitrilo Ejemplo 32 6-Etoxi-4- (lH-indazol-6-ilamino) -7-metoxi-quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 33 6, 7-Dietoxi-4- (l-metil-2, 5-dioxo-2, 3,4, 5-tetrahidro-lH benzo [e] [1, 4] diazepin-7-ilamino) -quinolin-3-carbonitri Ejemplo 34 4- (lH-indazol-6-ilamino) -6-metoxi-7- (3-morfolin-4-il-propoxi) quinolin-3-carboni"trilo Ejemplo 35 4- ({3-cloro-4-[ (l-raetil-lH-imidazol-2-il) sulfanil] fenil } amino) -7-metoxi-6-nitro-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 36 6-Amino-4- ( { 3-cloro-4- [ (l-metil-lH-imidazol-2-il) sulfanil] fenil } amino) -7-metoxi-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 37 (2E) -N- [4- ( {3-cloro-4- [ (l-metil-lH-imidazol-2-il) sulfanil] fenil lamino) -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil] -4-(dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 38 4-{ [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfañil) fenil] amino} -7-metoxi-6-nitro-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 39 6-Amino-4-{ [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfanil) fenil] amino}-7-metoxi-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 40 (2E) -N- ( - { [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfanil) fenil] amino} ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 41 4- [3-cloro-4- (IH-imidazol-l-il) anilino] -7-metoxi-6-nitro~3-idazol-l-il) anilino] -7-metoxi-6-nitro-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 42 6-i¾mino-4- [3-cloro-4- (IH-imidazol-l-il) anilino] -7-metoxi-3- (lH-imidazol-l-il) anilino] -7-metoxi-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 43 (E) -N-{ - [3-cloro-4- (IH-imidazol-l-il) anilino] -3-ciano-7 metoxi-6-quinolinil }-azol-l-il) anilino] -4- (dimetilamino) ) anilino-2-butenamida Ejemplo 44 4-{3-cloro-4- [ (4-oxo-3, 4-dihidro~2-quinazolinil) sulfanil] anilino}-7-metoxi-6-hidro-2-quinazolinil) sulfanil] anilino} -7-metoxi-6-nitro-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 45 6-amino-4-{3~cloro-4- [ (4-oxo-3, 4-dihidro-2-quinazolinil) sulfanil] anilino}-7~3, 4-dihidro-2-quinazolinil) sulfanil] anilino}-7-metoxi-3-quinolincarbonitril Ejemplo 46 (E) -N- ( 4- { 3-cloro-4- [ (4-oxo-3, 4-dihidro-2-quinazolinil) sulfanil] anilino}-3-fanil] anilino} -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenam da Ejemplo 47 (E) -N- (4-{ 4- [acetil (3-piridinilmetil) amino] -3-cloroanilino} ciano-7-metoxi-] -3-cloroanilino }-3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-oanilino } -3-ciano-7-metoxi-6 quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 48 N-{2-cloro-4- [ (3-ciano-7-metoxi-6-nitro-4-quinolinil) amino] fenil}-N- (3-7-metoxi-6-nitro-4-quinolinil) amino] fenil}-N- (3-piridinilmetil) acetamida Ejemplo 49 N- { 4- [ ( 6-amino-3-ciano-7-metoxi-4-quinolinil) amino] -2-clorofenil } -N- (3-metoxi-4-quinolinil) amino] -2-clorofenil }-N- (3-piridinilmetil) acetamida Ejemplo 50 N- (4-{ [6- (acetilamino) -3-ciano-7-metoxi-4-quinolinil] amino}-2 clorofenil) -N-ano-7-metoxi-4-quinolinil] amino} -2-clorofenil) -N- (3-piridinilmetil) acetamida Ejemplo 51 4- { 3-cloro-4- [ (l-metil-lH-imidazol-2-il) sulfanil] anilino}-6-metoxi-7- [3- (4-morfolinil) propoxi] -3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 52 4- (3-cloro-4-{ [5- (trifluorometil) -1, 3, -tiadiazol-2-il] amino} anilino) -7-etoxi-6-nitro-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 53 (E)-N-[4- (3-cloro-4-{ [5- (trifluorometil) -1, 3, 4-tiadiazol-2-il] amino } anilino) -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil] -4- (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 54 4- [3-cloro-4- (4-piridiniloxi) anilino] -7-etoxi-6-nitro-3-quinolincarbonit ilo Ejemplo 55 6-amino-4- [3-cloro-4- (4-piridiniloxi) anilino] -7~etoxi-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 56 (E) -N~{ 4- [3-cloro-4- (4-piridiniloxi) anilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 57 4- { 3-cloro-4- [ (3-piridinilmetil) amino] anilino}-7-metoxi-6-nitro-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 58 (E) -N- ( 4- { 3-cloro-4- [ ( 4-fenil-1, 3-tiazol-2~ il) sulfañil] anilino } -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 59 6-amino-4- (3-cloro-4-{ [5- (trifluorometil) -1, 3, 4-tiadiazol-2-il] amino } anilino) -7-etoxi-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 60 4- [3-cloro-4- (lH-imidazol-l-ilmetil) anilino] -7-etoxi-6-nitro- Ejemplo 61 6-amino-4~ [3-cloro-4- (IH-imidazol-l-ilmetil) anilino] -7-etoxi-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 62 (E) -N-{4- [3-cloro-4- (IH-imidazol-l-ilmetil) anilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetalamino) -2-butenamida Ejemplo 63 4-{ 3-cloro- - [ ( 4-metil-2-pirimidinil) sulfañil] anilino} -7-etoxi-6-nitro-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 64 6-amino-4-{3-cloro- - [ (4-metil-2-pirimidinil) sulfanil] anilino }-7-etoxi-3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 65 (E) -N- (4-{3-cloro-4- [ (4-metil-2-pirimidinil) sulfanil] anilino} 3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 66 (E) -N- (4-{3-cloro-4- [ (4, 6-dimetil-2-pirimidinil) sulfanil] anilino }-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 67 7-etoxi-6-nitro-4- [4- f (4-fenil-l, 3-tiazol-2-il) sulfanil] -3-(trifluorometil) anilino] -3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 68 6-Amino-7-etoxi-4- [4- (4-fenil-tiazol-2-ilsulfañil) -3-trifluorometil-fenilamino] -quinolin-3-carbonitrilo Ejemplo 69 (E) -N-{ 3-ciano-7-etoxi-4- [4- [ (4-fenil-1, 3-tiazol-2-il) sulfanil] -3- (trifluorometil) anilino] -6-quinolinil } (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 70 (E) -N- (4-{3-cloro-4- [ (5-fenil-l, 3-tiazol-2-il) sulfanil) anilino) -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) (dimetilamino) -2-butenamida Ejemplo 71 (E) -N-{ 4- [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfañil) anilino] -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil } -4- [ (2-metoxietil) (metil) amino] -2-butenamida (E) -N-{ 4- [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfañil) anilinoj -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil}-4- [ (2-metoxietil) (metil) amino] -2-butenamida se preparó adicionando gota a gota, 3.43 g (18.71 mmol, 1.95 mL) de cloruro de 4-bromocrotonilo en 12 mL de THF durante 45 minutos a una solución agitada de 4.7 g (1069 mmol) de 6-amino-4- [3~cloro-4~ (tiazol-2-ilsulfañil) -fenilamino] -7-metoxi-quinolin-3-carbonitrilo en 588 mL de THF que contiene 3.73 mL (21.36 mmol) de diisopropiletilamina, a 0°C bajo nitrógeno. La reacción produjo una mezcla de { 4- [3-cloro-4- (tiazol-2-ilsulfanil) -fenilamino] -3-ciano-7-metoxi-quinolin-6-il}-amida del ácido 4-bromo- (y cloro) -but-2-enoico . Una porción de 300 mL de la solución se enfrió a 0°C y se adicionó gota a gota 2.38 g (26.7 itimol) de (2-metoxietil) -metilamina en 11 mL de THF. Después de que la reacción se habia calentado a temperatura ambiente, se adicionaron 401 mg (0.5 eq) de yoduro de sodio y la solución se agitó durante la noche. Los solventes se evaporaron para dejar una goma roja, que se dividió entre EtOAc y NaHC03 saturado. Después de reposo durante la noche, las capas se separaron y la capa orgánica se secó y se evaporó. La cromatografía del residuo en una columna corta de Kieselgel 60, eluyendo con EtOAc, después EtOAc/MeOH al 15% y finalmente EtOAc/MeOH al 15%/Et3N al 1% produjo 1.3 g (41%) del producto como un cristal amarillo; HRMS (ESI) m/z 595.13338 (M)+1, ? = -2.28 mu. Ejemplo 72 (E) -N- ( 4- { 3-cloro-4- [ (4-fenil-1, 3-tiazol-2-il) sulfanil] anilino }-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4-(dime ilamino) -2-butenamida Ejemplo 73 4-{3-cloro~4- [ (l-metil-lH-imidazol-2-il) sulfanil] anilino}-6-metoxi-7- [3- (1H-1, 2 , 3-triazol-l-il) ropoxi] -3-quinolincarbonitrilo Ejemplo 74 4- { 3-cloro-4- [ (4, 6-dimetil-2-pirimidlnil) sulfanil] anilino}-7-etoxi-6-nitro-3-quinolincaxbonitrilo Ejemplo 75 6-amino-4-{3-cloro-4- [ (4, 6-dimetil-2-pirimidinil) sulfanil] anilino } -7-etoxi-3-quinolincarbonit Ejemplo 76 (2E) -N-{ - [3-clorc—4- (2-tienilmetoxi ) anilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil}-4- (dimetilamino) -2-butenamida Los compuestos representativos de esta invención se evaluaron en varios procedimientos de prueba farmacológicos estándares que mostraron que los compuestos de esta invención poseen actividad significativa como inhibidores de HER-2 y son agentes antiproliferativos . Basado en la actividad mostrada en los procedimientos de prueba farmacológicos estándares, por lo tanto, los compuestos de esta invención son agentes antineoplásicos . Los procedimientos de prueba usados y los resultados obtenidos se muestran a continuación. Pruebas de cinasa: el ejemplo 1, ejemplo 2 y ejemplo 3 son inhibidores potentes de la enzima HER-2, el ejemplo 20 no. El fragmento C terminal recombinante purificado de cada enzima se incuba con ATP en ausencia o presencia de una gama de concentraciones de compuesto. La autofosforilación de los receptores se evaluó con los anticuerpos de fosfotirosina en un formato ELISA. En una prueba de autofosforilación libre de células usando el dominio citoplásmico recombinante de HER-2, todos los tres inhibidores redujeron la actividad enzimática por 50% (ICS0) a concentraciones entre 33-65 nM (Tabla 1) . Tabla 1 También exhibieron EGFR bajo condiciones de prueba similares a 33-92 nM. Pruebas de proliferación celular: el ejemplo 1, ejemplo 2 y ejemplo 3 reprimieron la proliferación de una linea celular de fibroblasto de ratón transfectada con el oncogén HER-2 (3T3/rteu) por 50% (IC50) a 3-5 nM (Tabla 2) . Este valor fue sustancialmente menor que el obtenido con las células no transfectadas isogénicas (3T3 IC50 683-906 nM) , lo que indica un alto grado de selectividad para esta ruta oncogénica. Las células se incubaron con diferentes concentraciones del compuesto durante 2 días (6 días para las células BT474) . La supervivencia celular se determinó usando una prueba de colorante de unión de proteína (SRB) , (Rubinstein LV, Shoemaker RH, Pauli D, Simón RM, Tosini S, Skehan P, Scudiero DA, Monks A, Boyd MR. Comparison of in vitro anticancer-drug-screening data generated with a tetrazolium assay versus a protein assay against a diverse panel of human tumor cell lines. J. Nati. Cáncer Inst. 82(13): 1113-8, Skehan P, Storeng R, Scudiero D, Monks A, McMahon J, Vistica D, Warren JT, Bokesch H, Kenney S, Boyd MR. New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening. J. Nati. Cáncer Inst. 82 (13) : 1107-12, 1990) . Se muestra la concentración del fármaco (nM) que inhibe la actividad enzimática o la proliferación celular por 50%. Los tres inhibidores también inhibieron dos otras lineas celulares de cáncer de mama que sobre-expresan HER-2, SK-Br-3 y BT474 (IC50 2-4 nM) , pero fueron mucho menos activas en células MDA-MB-435 y SW620 (una linea celular de cáncer de mama y de cáncer de colon, respectivamente) , que son EGFR y HER-2 negativas . Los compuestos reprimieron la linea celular de carcinoma epidérmico, A431, que sobre-expresa EGFR (IC50 81-120 nM) (Tabla 2) . Tabla 2 IC50 CELULAR (pg/mL) EGFR - - +++ - + - - Her-2 - +++ + +++ +++ - - COMPUESTO 3T3 3T3/NEU A431 SKBr3 BT474 MDA- SW620 MB-435 Ejemplo 1 0.38 0.0029 0.062 0.0015 0.0014 0.47 0.24 Ejemplo 2 0.39 0.0018 0.045 0.001 0.0013 0.44 0.44 Ejemplo 3 0.52 0.0023 0.069 0.0015 0.0024 0.51 0.29 Ejemplo 20 0.26 0.0230 0.030 0.0071 0.020 0.34 0.32 Ejemplo 21 0.463 0.62 0.01 4.57 1.84 Ejemplo 22 0.933 0.123 0.0374 0.365 0.286 Ejemplo 23 0.375 0.27 0.281 0.235 0.41 Ejemplo 24 >5 1.961 >5 2.045 >5 Ejemplo 25 >5 >5 >5 >5 >5 ICso CELULAR (Mg/mL) EGFR - - +++ - + - - Her-2 - +++ + +++ +++ - - COMPUESTO 3T3 3T3/NEU A431 SKBr3 BT474 MDA- SW620 MB-435 Ejemplo 26 0.0198 0.342 0.294 0.352 0.294 Ejemplo 27 4.616 >5 >5 >5 2.922 Ejemplo 28 0.031 0.0181 0.0281 0.028 0.0244 Ejemplo 29 3.301 >5 >5 3.404 1.565 Ejemplo 30 0.251 0.257 0.336 0.00328 0.146 Ejemplo 31 0.0267 0.0368 0.022 0.0359 0.0212 Ejemplo 32 4.801 0.786 2.094 2.626 4.313 Ejemplo 33 >5 >5 >5 >5 >5 Ejemplo 34 >5 >5 >5 >5 >5 Ejemplo 35 4.09 2.88 0.669 1 1.55 Ejemplo 36 1.06 3.04 0.011 0.39 3.16 Ejemplo 37 0.02 0.02 0.0004 0.43 0.43 Ejemplo 38 0.262 0.148 0.124 0.35 0.15 Ejemplo 39 0.333 0.663 0.236 0.65 0.55 Ejemplo 40 0.002 0.017 0.0007 0.33 1.13 Ejemplo 41 1.09 1.79 1.48 0.95 1.66 Ejemplo 42 0.53 1.63 1.73 1.27 5.99 Ejemplo 43 1.46 0.51 0.32 0.57 1.45 Ejemplo 44 4.54 2.28 4.54 >5 1.96 Ejemplo 45 1.88 1.22 2.15 4.58 4.66 Ejemplo 46 0.15 0.34 0.06 >5 >5 Ejemplo 47 >5 0.646 >5 1.16 1.64 Ejemplo 48 1.79 1.6 0.68 2.61 2.57 Ejemplo 49 2.4 >5 3.41 3.76 >5 Ejemplo 50 >5 3.68 3.94 >5 >5 Ejemplo 51 0.196 0.775 0.32 2.18 ' Ejemplo 52 1.89 1.79 1.22 1.84 2.54 Ejemplo 53 0.89 0.728 0.179 0.95 1.05 Ejemplo 54 >5 >5 >5 2.54 >5 Ejemplo 55 >5 >5 >5 1.61 >5 Ejemplo 56 >5 3.27 1.51 2.06 >5 Tabla 2 IC50 CELULAR ^g/mL) EGFR - - +++ - + - - Her-2 - +++ + +++ +++ - - COMPUESTO 3T3 3T3/NEU A431 SKBr3 BT474 DA- SW620 MB-435 Ejemplo 57 4.03 1.6 0.726 1.87 3.21 Ejemplo 58 0.028 0.162 0.005 0.23 0.57 Ejemplo 59 >5 >5 0.551 0.91 1.38 Ejemplo 60 >5 >5 2.44 >5 >5 Ejemplo 61 >5 >5 0.75 >5 >5 Ejemplo 62 0.99 0.95 0.045 2.1 3.8 Ejemplo 63 1.49 1.2 0.45 1.3 0.9 Ejemplo 64 3.03 1.53 >5 1.8 2 Ejemplo 65 0.003 0.12 0.001 0.3 0.2 Ejemplo 66 0.01 0.24 0.006 0.2 0.32 Ejemplo 67 0.68 0.76 0.268 0.4 0.4 Ejemplo 68 2.52 >5 0.943 2.5 3.1 Ejemplo 69 0.42 0.3 >5 0.3 0.6 Ejemplo 70 0.12 0.22 0.01 0.08 0.5 Ejemplo 71 0.002 0.03 0.002 0.09 0.4 Ejemplo 72 0.02 0.24 0.006 0.18 0.54 Ejemplo 73 0.973 1.83 0.104 3.69 Ejemplo 74 >5 >5 >5 4.1 >5 Ejemplo 75 2.12 0.76 0.98 1.3 1.36 Ejemplo 76 0.41 0.0039 0.066 0.004 0.003 0.77 0.25 Fosforilación del receptor: Los compuestos que reprimieron la proliferación de una linea celular de fibroblasto de ratón con el oncogén HER-2 (3T3/üeu) por 50% (IC50) < 0.05 µg/ml en la Tabla 2 anterior se probaron para la fosforilación In vitro. Para las pruebas de fosforilación Her-2 y EGFR, las células (BT474 y A431, respectivamente) se incubaron con diferentes concentraciones del compuesto durante 3 horas a 37 °C. Los extractos de proteína se analizaron por ínmunomanchado usando anticuerpos de fosfotirosina . Las manchas se cuantificaron por exploración densitométrica. Se determinó la concentración del compuesto (nM) que inhibe la fosforilación por 50%. El ejemplo 1, ejemplo 3 y H I-272 disminuyeron la fosforilación del receptor independiente del ligando por 50% (IC50) a 5-23 nM en células BT474 (Tabla 3) . También reprimieron la fosforilación dependiente de EGF de EGFR en células ?431 a una dosis comparable (IC50 3-7 nM) . Tabla 3 IN VIVO: La actividad antitumoral in vivo del ejemplo 3 se evaluó en modelos de xenoinjerto de tumor. Las células de tumor (crecidas en cultivo de tejido) o fragmentos de tumor se implantaron subcutáneamente en ratones desnudos hembra. El tratamiento se inició después de que los tumores habían alcanzado un tamaño de 90-200 mg, siguiendo una asignación aleatoria de los animales a diferentes grupos de tratamiento (por etapas). De manera alternativa (3T3/neu) , el tratamiento se inició el día después de la implantación del tumor, debido a la excrescencia rápida de estos tumores . Los compuestos se formularon en Methocel al 0.5%-polisorbato 80 al 0.4% (Tween 80) y se administraron por día, PO, por gavage . La masa del tumor [ (L X W2) /2] se determinó cada 7 días. La significación estadística de los efectos del compuesto se evaluó usando la prueba t de Student . La actividad del ejemplo 3 se evaluó primero en xenoinjertos de células 3T3/neu del ejemplo 3 que inhibieron el crecimiento tumoral cuando se administraron a animales a 20 mg/kg/día (65% de inhibición, día 21) , 40 mg/kg/día (97% de inhibición) y 80 mg/kg/día (99% de inhibición) . Estos resultados fueron casi idénticos a los obtenidos con el tratamiento del ejemplo 2 (53%, 95% y 98% de inhibición, respectivamente a 20, 40 y 80 mg/kg/día). En otras dos pruebas independientes, el tratamiento del EJEMPLO 3 produjo una inhibición estadísticamente significativa del crecimiento del tumor (21-33%) a una dosis de 10 mg/kg/día. Con base en estos estudios, se estimó que la dosis eficaz mínima (MED, por sus siglas en inglés) era de 10 mg/kg/día. Esta es la dosis más pequeña que produce una reducción prolongada, estadísticamente significativa (p<0.05) del crecimiento del tumor.

El efecto del ejemplo 3 se estudió luego en xenoinjertos de líneas celulares de tumor de humano dependientes de HER-2. En animales que portan xenoinjertos BT474, el tratamiento del ejemplo 3 redujo el crecimiento tumoral cuando se dosificó entre 10 mg/kg/día y 40 mg/kg/día. La inhibición máxima se observó en el día 21 y osciló de 59% (10 mg/kg/día) a 96% (40 mg/kg/día) . Para el ejemplo 2, la inhibición osciló de 76% (10 mg/kg/día) a 95% (40 mg/kg/día) . Se obtuvieron resultados similares en los otros dos experimentos independientes. En animales que portan los xenoinjertos de SUM-190 (una segunda línea celular de cáncer de mama dependiente de HER-2) , el tratamiento del ejemplo 3 resultó en una represión sustancial del crecimiento del tumor cuando se dosificó a 40 mg/kg/día (94% de inhibición, día 28) . El ejemplo 3 también fue efectivo contra los xenoinjertos de SK-OV-3 (una línea celular de carcinoma de ovario de humano dependiente de HER-2) . Aquí, el ejemplo 3 fue activo entre 20 mg/kg/día (86% de inhibición, día 35) y 60 mg/kg/día (91% de inhibición) . La MED en los modelos de xenoinjerto de humano que sobre-expresan HER-2 se estimó a 10 mg/kg/día, similar al ejemplo 2. En estos estudios, no hubo disminución en el tamaño del tumor debajo del tamaño inicial al inicio de la dosificación. Además, los tumores mostraron una evidencia de re-crecimiento cuando se completó el tratamiento, lo cual es consistente con un modo de acción no citotóxico para el ejemplo 3.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (33)

1. REIVINDICACIONES
2. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un compuesto de la fórmula 1 que tiene la estructura: caracterizado porque: Ri es halógeno; R2 es un anillo de piridinilo, tiofeno, pirimidina opcionalmente sustituida, o fenilo opcionalmente sustituido, en donde el anillo de fenilo o pirimidina pueden ser insustituidos , mono-sustituidos o di-sustituidos ; y R3 es -O- o -S-. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es: (E) -N-{4- [4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil }-4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es: (E) -N- {4- [3-cloro-4- (2-piridinilmetoxi) anilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil} -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es: (E) -N- (4- {3-cloro-4- [ (3-fluorobencil) oxi] anilino} -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
5. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es: (2E) -N- (4- { [3~cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfañil) fenil] amino} -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. 6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es: (E)-N- (4-{3-cloro-4- [ (4, 6-di-metil-2-pirimidinil) sulfañil] anilino} -3-ciano-7-etoxi-6~quinolinil) -4-(dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. 7. Un compuesto, caracterizado porque comprende (E)-N-{4- [3-cloro-4- (1 , 3-tiazol-2-ilsulfañil) nilino] -3~ciano-7-metoxi-6-quinolinil} -4- [ (2-metoxietil) (metil) amino] -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. 8. Un método de tratamiento, inhibición del crecimiento de, o erradicación de neoplasmas, en un mamífero en necesidad del mismo, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula 1 que tiene la estructura: en donde: Ri es halógeno; ' R2 es un anillo de piridinilo, tiofeno, pirimidina opcionalmente sustituida, o fenilo opcionalmente sustituido, en donde el anillo de fenilo o pirimidina pueden ser insustituidos , mono-sustituidos o di-sustituidos; y R3 es -O- o -S-.
9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N-{ 4- [4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -3-ciano-7-etoxí-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N-{ 4- [3-cloro-4~ (2-piridinilmetoxi) anilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N- (4- {3-cloro-4~ t (3-fluorobencil) oxi] anilino} -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2 -butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto es : (2E) -N- (4- { [3-cloro-4- (1, 3-tiazol~2-ilsulfanil) fenil] amino}-3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N- (4-{3-cloro-4- [ (4 , 6-metil-2~ pirimidinil) sulfanil] anilino} -3 -ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4-(dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
14. 14. Un método de tratamiento, inhibición del crecimiento de, o erradicación de neoplasmas, en un mamífero en necesidad del mismo, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de (E) -N- {4- [3 -cloro-4- (1 , 3-tiazol-2-ilsulfañil) anilino] -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil}-4-[ (2-metoxietil) (metil) amino] -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el neoplasma se selecciona del grupo que consiste de mama, riñon, vejiga, boca, laringe, esófago, estómago, colon, ovario, pancreático, cerebro, próstata y pulmón .
16. 16. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de la fórmula 1 que tiene la estructura: en donde: Ri es halógeno; R2 es un anillo de piridinilo, tiofeno, pirimidina opcionalmente sustituida, o fenilo opcionalmente sustituido, en donde el anillo de fenilo o pirimidina pueden ser insustituidos, mono-sustituidos o di-sustituidos ; y R3 es -O- o -S-.
17. 17. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque es: (E) -N-{ 4- [4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
18. 18. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque es: (E) -N-{ 4- [3-cloro-4- (2-piridinilmetoxi) anilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
19. 19. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque es: (E) -N- (4-{ 3-cloro-4- [ (3-fluorobencil) oxi] anilino}-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
20. 20. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque es: (E) -N- (4-{3-cloro-4~ [ (4-metil-2-pirimidinil) sulfanil] anilino}-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
21. 21. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (E) -N-{ - [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfanil) anilino] -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil}-4- [ (2-metoxietil) (metil) amino] -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
22. 22. Un método para inhibir EGFR en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula 1 que tiene la estructura: en donde: Ri es halógeno; R2 es un anillo de piridinilo, tiofeno, pirimidina opcionalmente sustituida, o fenilo opcionalraente sustituido, en donde el anillo de fenilo o pirimidina pueden ser insustituidos , mono-sustituidos o di-sustituidos ; y R3 es -O- o -S-.
23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N-{4- [4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil} -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
24. 24. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N-{4- [3~cloro-4- (2-piridinilmetoxi) anilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil } -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
25. 25. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N- (4- {3-cloro-4- [ (3-fluorobencil) oxi] anilino} -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
26. 26. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el compuesto es: (2E) -N- (4- { [3-cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfanil) fenil] amino}-3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
27. 27. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N- (4-{3-cloro-4- [ (4-metil-2-pirimidir.il) sulfanil] anilino}-3-ciano-7-etoxi~6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
28. 28. Un método para inhibir Her-2 en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula 1 que tiene la estructura: en donde : Ri es halógeno; R2 es un anillo de piridínilo, tiofeno, pirimidina opcionalmente sustituida, o fenilo opcionalmente sustituido, en donde el anillo de fenilo o pirimidina pueden ser insustituidos , mono-sustituidos o di-sustituidos ; y R3 es -O- o -S-.
29. 29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N-{4- [4- (benciloxi) -3-cloroanilino] -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil} -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
30. 30. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porgue el compuesto es: (E) -N- {4- [3 -cloro-4- (2-piridinilmetoxi) anilino] -3~ciano-7-etoxi-6-guinolinil} -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
31. 31. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el compuesto es: (E) -N- (4- {3 -cloro-4- [ (3-fluorobencil) oxi] anilino} -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
32. 32. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el compuesto es: (2E) -N- (4-{ [3 -cloro-4- (1, 3-tiazol-2-ilsulfa il) fenil] amino} -3-ciano-7-metoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
33. 33. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el compuesto es : (E) -N- (4- {3-cloro-4- [ (4-metil-2-pirimidinil) sulfañil] anilino) -3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil) -4- (dimetilamino) -2-butenamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.