MXPA04012598A

MXPA04012598A - Composicion de oligomero de proantocianidina que contiene azufre y metodo de produccion de la misma.

Info

Publication number: MXPA04012598A
Application number: MXPA04012598A
Authority: MX
Inventors: Fujii Hajime
Original assignee: Usaien Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2003-05-26
Filing date: 2004-05-25
Publication date: 2005-07-01
Also published as: US7833553B2; ATE440829T1; EP1524270A1; CA2488394A1; JPWO2004103988A1; US20110021792A1; AU2004240219B8; US8088419B2; US20050261198A1; DE602004022758D1; NZ567835A; US20110028742A1; NZ536591A; JP5004265B2; AU2004240219B2; KR101241534B1; WO2004103988A1; CA2488394C; CN102178673B; US7939116B2

Abstract

Se proporciona: un metodo para producir un oligomero de proantocianidina que contiene azufre al reducir el peso molecular de la proantocianidina en plantas de manera que puedan absorberse facilmente a traves del intestino de un organismo; y una composicion alimenticia saludable y una composicion farmaceutica que contienen el oligomero de proantocianidina que contiene azufre resultante como el ingrediente activo y que son utiles para tratar y prevenir varias enfermedades relacionadas con el estilo de vida y enfermedades cerebrales ocasionadas por la generacion de especies de oxigeno activo asi como para prevenir el envejecimiento.

Description

COMPOSICIÓN DE OLIGOMERO DE PROANTOCIANIDINA QUE CONTIENE AZUFRE Y MÉTODO DE PRODUCCIÓN DE LA MISMA Campo Técnico La presente invención se refiere a un oligómero de proantocianidina que contiene azufre, a una composición del mismo, a su método de producción y al uso del mismo. Más específicamente, la presente invención proporciona un método para producir un oligómero de proantocianidina que contiene azufre al reducir los pesos moleculares de las proantocianidinas en plantas a un nivel tal que se facilita la absorción a través del intestino de un organismo, una composición alimenticia saludable y una composición de droga que contiene el oligómero de proantocianidina que contiene azufre obtenido por el método como un ingrediente activo y que son útiles para el tratamiento y la prevención de varias enfermedades relacionadas con el estilo de vida y enfermedades cerebrales ocasionadas por la generación de especies de oxígeno activo o lo similar. Técnica Anterior Como resultado de una ingesta excesiva de grasas debida a cambios en la dieta, cambios ambientales, incremento en la exposición a los rayos ultravioleta debido a la destrucción de la capa de ozono, incrementos en los contaminantes ambientales y lo similar, se encuentra en aumento el número de pacientes con las así llamadas enfermedades relacionadas con el estilo de vida tales como hiperlipemia, hipercolesterolemia, hipertensión, diabetes y cánceres y también se encuentra en aumento el número de pacientes con enfermedades alérgicas o cerebrales, tales como demencia.. Con el progreso en el envejecimiento de la sociedad, se teme un incremento en el futuro en el número de pacientes con demencia, síndrome de Alzheimer, y lo similar; se ha señalado que las especies de oxígeno activo generadas en el organismo se encuentran involucradas en estas enfermedades (Bioorganic & Medicinal Chemistry, 10 (2002) , 2497-2509) . Sin embargo, debido a que aún no se ha desarrollado ninguna tecnología que suprima o controle completamente la generación de las especies de oxígeno activo, en el presente no existen tecnologías establecidas que sean suficientemente efectivas y confiables para prevenir o tratar las enfermedades relacionadas con el estilo de vida, enfermedades cerebrales, y lo similar. En años recientes, se ha enfocado la atención en sustancias naturales que se encuentran en plantas y que exhiben actividades fisiológicas, particularmente compuestos de polifenol. Los polifenoles se encuentran generalmente contenidos en el té, vegetales, frutas, hierbas y lo similar y se espera que sean útiles como agentes de tratamiento o preventivos que no tengan efectos secundarios, lo cual se ha confirmado a partir de una ingesta a largo plazo como un alimento o alimento favorito. Los compuestos de polifenol son metabolitos secundarios de plantas y se sabe que se presentan universal y abundantemente en el mundo vegetal y exhiben varias actividades fisiológicas. Los compuestos de polifenol han recibido atención en el campo de la farmacología, la química vegetal y lo similar desde hace tiempo, y recientemente atraen la atención desde el campo de la alimentación sana. Por ejemplo, se sabe que los polifenoles en el té, particularmente catequinas, exhiben una amplia variedad de actividades fisiológicas tales como el efecto anti-microbiano, el efecto antiviral, el efecto anti-mutacional , el efecto anti -oxidante, el efecto para evitar el incremento en la presión, el efecto para reducir el colesterol en sangre, el efecto anticaries, el efecto anti-alérgico, el efecto para mejorar la flora intestinal y el efecto desodorante . Entre los polifenoles, las proantocianidinas son fenoles contenidos en una amplia variedad de plantas. A fin de que las proantocianidinas exhiban varias actividades fisiológicas como se mencionó anteriormente, los compuestos de proantocianidina tienen que absorberse en un organismo a través del intestino. Sin embargo, se dice que las proantocianidinas tienen pesos moleculares generalmente en el orden de varios miles a varios diez miles. Una sustancia que tiene tal peso molecular es difícil de absorber a través del intestino. Incluso cuando las proantocianidinas se ingieren, en la mayoría de los casos, no se absorben en el cuerpo viviente, de manera que no se utilizan por el organismo viviente. Los inventores de la presente invención han encontrado que un polifenol extraído del trigo negro tiene actividades de mejoramiento del metabolismo de los lípidos, la función cerebral, etcétera y presentaron una solicitud de patente (JP 10-218786 A) en base a los descubrimientos. El ingrediente activo del polifenol . es un polímero de proantocianidina, y su capacidad para bio-absorberse se ha considerado menos de lo suficiente. SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un medicamento, un alimento saludable y lo similar, útiles para el tratamiento o la prevención de enfermedades relacionadas con el estilo de vida y enfermedades cerebrales presumiblemente ocasionadas por especies de oxígeno activo, al convertir un compuesto de proantocianidina que tiene una deficiente capacidad para bio-absorberse a través del intestino, en una forma de compuesto que se absorbe fácilmente en el cuerpo viviente y que permite que se exhiban totalmente los diversos efectos fisiológicos del compuesto de proantocianidina de manera que pueda incrementarse la actividad de anti-oxidación del organismo viviente. Los inventores de la presente invención han encontrado que un oligómero de proantocianidina que contiene azufre que tiene un bajo peso molecular, que se obtiene por medio de una reacción entre una planta que contiene proantocianidinas o un extracto de la misma y un compuesto que contiene el grupo SH, puede absorberse fácilmente en un cuerpo viviente a través del intestino y exhibe varias actividades fisiológicas mediante la ingestión oral, y en base a este descubrimiento, completaron la presente invención . Es decir, la presente invención se refiere a los siguientes oligómeros de proantocianidina que contienen azufre y sus composiciones útiles como composiciones farmacéuticas y a composiciones de alimentos saludables así como a los métodos de producción para éstas. 1. Una composición que comprende un oligómero de proantocianidina que contiene azufre como componente principal, en donde el oligómero se obtiene al concentrar y secar una solución de reacción preparada al hacer reaccionar una planta que contiene proantocianidinas o extractos de las mismas con un compuesto que contiene el grupo SH. 2. La composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con el 1, en donde el oligómero es uno seleccionado desde un dímero a pentámero de la proantocianidina. 3. La composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con el 1, en donde la planta que contiene proantocianidinas es una o más seleccionadas de un grupo que consiste de vegetales, frutas, tés, hierbas, especias, maderas y cortezas. 4. La composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con el 1, en donde el compuesto que contiene el grupo SH es al menos uno seleccionado de un grupo que consiste de cisteína, cistina, glutatión, péptidos que contienen el grupo SH, y sus sales. 5. La composición de acuerdo con cualquiera de 1 a 4, que es una composición farmacéutica para tratar y/o prevenir las enfermedades relacionadas con el estilo de vida. 6. La composición de acuerdo con cualquiera de 1 a 4, que es una composición farmacéutica para prevenir el envej ecimiento . 7. La composición de acuerdo con cualquiera de 1 a 4, que es una composición alimenticia saludable para aliviar y/o prevenir las enfermedades relacionadas con el estilo de vida. 8. La composición de acuerdo con cualquiera de 1 a 4, que es una composición alimenticia saludable para prevenir el envejecimiento. 9. Un oligómero de proantocianidina que contiene azufre, que se obtiene al fraccionar componentes que contienen un oligómero de proantocianidina que contiene azufre preparado al hacer reaccionar una planta que contiene proantocianidinas o un extracto de la misma con un compuesto que contiene el grupo SH. 10. El oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con el 9, en donde el oligómero es uno seleccionado desde un dímero a pentámero de proantocianidina. 11. Un método para producir una composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre, en donde una planta que contiene proantocianidinas o un extracto de la misma, se hace reaccionar con un compuesto que contiene el grupo SH bajo una condición acídica y la solución de reacción se concentra y se seca. 12. Un método para producir una composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre, en donde una planta que contiene proantocianidinas o un extracto de la misma se hace reaccionar con un compuesto que contiene el grupo SH bajo una condición acídica y la solución de reacción se concentra y se fracciona. 13. El método de producción de acuerdo con 11 o 12, en donde la planta que contiene proantocianidinas es una o más seleccionada de el grupo que consiste de vegetales, frutas, tés, hierbas, especias, maderas y cortezas. 14. El método de producción de acuerdo con 11 o 12, en donde el compuesto que contiene el grupo SH es al menos uno seleccionado de un grupo que consiste de cisteina, cistina, glutatión, péptidos que contienen el grupo SH, y sus sales. 15. El método de producción de acuerdo con 11 o 12, en donde la condición acidica se obtiene al utilizar uno o ambos de un ácido inorgánico y un ácido orgánico. 16. El método de producción de acuerdo con 15, en donde se utiliza al menos uno seleccionado del grupo que consiste de ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido acético, ácido cítrico, ácido ascórbíco, y ácido málíco. 17. Un compuesto de proantocianidina representado por la Fórmula (4). 18. Un compuesto de proantocianidina representado or la Fórmula (5) . 19. Un compuesto de proantocianidina representado mula (6) .

. Un compuesto de proantocianidina representado mula (7) . 21. Un compuesto de proantocianidina representado por la Fórmula (8) .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las Figuras 1A y IB son gráficas que ilustran los niveles de LPO en suero en ratones administrados con una composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con el Ejemplo 1 de la presente invención (polvo antes del fraccionamiento; Sustancia 1) y su material natural (extracto de polifenol de semilla de uva; Sustancia Comparativa 1) . La Figura 1A indica los resultados en grupos, administrados con dosis baja y la Figura IB indica los resultados en grupos administrados con dosis alta. Las Figuras 2A, 2B y 2C son gráficas que ilustran los niveles de LPO en hígados (Figura 2A) , riñones (Figura 2B) , y cerebros (Figura 2C) de ratones administrados con la composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con el Ejemplo 1 de la presente invención (Sustancia 1) y su material natural (Sustancia Comparativa 1), respectivamente. La Figura 3A se refiere a personas cuyos valores iniciales en los niveles de LPO fueron normales, y la Figura 3B se refiere a personas cuyos valores iniciales en los niveles de LPO fueron anormales, que ilustran ambos los niveles de LPO en suero en humanos administrados con la composición de la invención de acuerdo con el Ejemplo 1 (Sustancia 1) y el material natural de acuerdo con el Ejemplo 1 (Sustancia Comparativa 1) . La Figura 4A se refiere a personas cuyos valores iniciales en los niveles de SOD fueron normales, y la Figura 4B se refiere a personas cuyos valores iniciales en los niveles de SOD fueron anormales, que ilustran ambos los niveles de SOD en suero en humanos administrados con la composición de la invención de acuerdo con el Ejemplo 1 (Sustancia 1) y el material natural de acuerdo con el Ejemplo 1 (Sustancia Comparativa 1) . La Figura 5 es una gráfica que ilustra los efectos de la inhibición de la inactivación celular PC-12 con respecto a los ß-amiloides en la Sustancia 1 de la invención y en la Sustancia Comparativa 1 de acuerdo con el Ejemplo 1. Las Figuras 6A y 6B son una fotografía y una gráfica, respectivamente, que muestran los efectos de la disminución de la inhibición en el potencial de la membrana mitocondrial, con respecto a los ß-amiloides en la Sustancia 1 y en la Sustancia Comparativa 1 de acuerdo con el Ejemplo 1. Las Figuras 7A y 7B son una fotografía y una gráfica, respectivamente, que muestran los efectos de la reducción en la acumulación de las especies de oxígeno activo en células PC-12, con respecto a los ß-amiloides en la Sustancia 1 de la invención y en la Sustancia Comparativa 1. La Figura 8 es una gráfica que ilustra los efectos antioxidantes intracelulares de los ß-amiloides en la Sustancia 1 de la invención y en la Sustancia Comparativa 1. La Figura 9 es una gráfica que ilustra los efectos inhibidores de la oxidación de transmembrana de inhibición con respecto a los ß-amiloides en la Sustancia 1 de la invención y en la Sustancia Comparativa 1. La Figura 10 es una gráfica que ilustra los efectos de la disminución del nivel de glucosa en sangre en ayuno en ratones diabéticos inducidos por STZ, con respecto a la Sustancia 1 de la invención y a la Sustancia Comparativa 1. La Figura 11 es una gráfica que ilustra los efectos de la disminución del nivel de glucosa en orina en ratones diabéticos inducidos por STZ, con respecto a la Sustancia 1 de la invención y a la Sustancia Comparativa 1. La Figura 12 es una gráfica que ilustra los efectos de la disminución del nivel de proteína en orina en ratones diabéticos inducidos por STZ, con respecto a la Sustancia 1 de la invención y a la Sustancia Comparativa 1. La Figura 13 es una gráfica que ilustra los efectos de la disminución del nivel de PLO en sangre en ratones diabéticos inducidos por STZ, con respecto a la Sustancia 1 de la invención y a la Sustancia Comparativa 1. La Figura 14 es una gráfica que ilustra los efectos de la elevación del nivel de TEAC en sangre (capacidad antioxidante) en ratones diabéticos inducidos por STZ, con respecto a la Sustancia 1 de la invención y a la Sustancia Comparativa 1. La Figura 15 es una gráfica que ilustra los efectos de la elevación del nivel de polifenol en sangre en modelos de rata con disfunción renal aguda en rata inducida por bromato de potasio con respecto a la Sustancia 1 de la invención . La Figura 16 es una gráfica que ilustra los efectos de la elevación de la actividad de la antioxidación en sangre (TEAC) en modelos de rata con disfunción renal aguda inducida por bromato de potasio con respecto a la Sustancia 1 de la invención . La Figura 17 es una gráfica que ilustra los efectos de la inhibición de la elevación en el nivel de peróxido de lípido en sangre en modelos de rata con disfunción renal aguda inducida por bromato de potasio con respecto a la Sustancia 1 de la invención. La Figura 18 es una gráfica que ilustra los efectos de la inhibición de la elevación en los niveles de nitrógeno de urea en sangre en modelos de rata con disfunción renal aguda inducida por bromato de potasio con respecto a la Sustancia 1 de la invención. La Figura 19 es una gráfica que ilustra los efectos de la inhibición de la elevación de los niveles de creatinina en sangre en modelos de rata con disfunción renal aguda inducida por bromato de potasio con respecto a la Sustancia 1 de la invención. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El oligómero que contiene azufre de la presente invención comprende comúnmente de dímero a pentámero de proantocianidina y comúnmente tiene un peso molecular de 1,500 o menos. Se prefiere que la reacción entre la planta que contiene proantocianidinas o su extracto con el compuesto que contiene el grupo SH se lleve a cabo bajo una condición acídica. Los ácidos adecuados seleccionados de ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y ácido nítrico, y ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido cítrico, ácido ascórbico y ácido málico se utilizan en concentraciones de aproximadamente 0.1 N a 1.0 N, preferentemente de 0.5 N.

El término "proantocianidina" como se utiliza en la presente se refiere a polímeros de catequina, cuyos ejemplos específicos incluyen catequina, epicatequina, epigalocatequina, galato de epigalocatequina, galocatequina y galato de galocatequina así como los que incluyen éstos como unidades constituyentes. Las plantas que contienen proantocianidinas incluyen una amplia variedad de plantas que incluyen: vegetales y frutas tales como pérsimo Japonés, pera, uva, fresa, plátano, aguacate, arándano de montaña, raíz de loto, y trigo negro; tés en general, tales como el te verde, te negro, y te parcialmente fermentado; hierbas y especias; y maderas y cortezas de pino. Se utilizan preferentemente las plantas y extractos que contienen proantocianidina (inclusive de jugos prensados, jugos de fruta, y jugos de vegetales) . Ejemplos del compuesto que contiene el grupo SH utilizado en la presente invención incluyen cisteína, cistina, glutatión, péptidos que contienen SH, y sus sales así como sustancias naturales que contienen azufre tales como cebolla y ajo. También son útiles los mercaptanos . Sin embargo, en consideración a que el oligómero de proantocianidina que contiene azufre de la presente invención se utiliza en composiciones alimenticias y farmacéuticas, los compuestos que contienen el grupo SH utilizados en la presente son preferentemente los que se utilizan aceptablemente en alimentos y farmacéuticos. La reacción entre las plantas que contienen proantocianidinas o sus extractos con el compuesto que contiene el grupo SH se lleva a cabo desde temperatura ambiente hasta 80°C, preferentemente de 40 a 60°C durante algunas pocas horas hasta 1 semana, preferentemente de 24 a 48 horas. Ejemplos del solvente utilizado en la reacción incluyen agua, metanol, etanol y una mezcla de dos o más de ellos. Sin embargo, en consideración, se prefiere agua y etanol para la aplicación a alimentos y farmacéuticos. Después de la reacción, el residuo se filtra y el filtrado se concentra. Después de eso, el concentrado se purifica de una manera convencional. Es decir, la purificación del concentrado puede llevarse a cabo sometiendo el extracto obtenido a tratamiento de membrana (ultrafiltración, osmosis inversa, etc.) o tratando el concentrado con un adsorbente . Los adsorbentes que pueden utilizarse incluyen adsorbentes de estireno-divinilbenceno, adsorbentes de ácido metacrílico, polímeros de vinilo hidrofílico, gel de dextrano modificado, gel de poliacrilamida, gel de sílice de fase inversa, y resina de intercambio iónico. Cuando se utiliza un adsorbente como esos, la fracción adsorbida en el adsorbente (referida en adelante como "fracciones adsorbidas") contiene un compuesto de polifenol (oligómero de proantocianidina que contiene azufre) que tiene un peso molecular que se ha reducido por medio de la reacción con el compuesto que contiene el grupo SH. Al eluir la fracción adsorbida con hidroalcohol , alcohol, acetona o lo similar, pueden obtenerse componentes que tienen varios pesos moleculares. Los valores medidos por HPLC de fase normal y NMR confirman que los oligómeros de proantocianidina que contienen azufre así obtenidos son de dímeros a pentámeros de proantocianidina representados por la siguiente Fórmula general (9) . en donde n es 0 o un entero de 1 a 3 , R1 representa un átomo de hidrógeno o un grupo galoilo representado por la siguiente Fórmula, 2 y R3 representan independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo hidroxilo, y R4 representa cisteína, cistina, glutatión o un residuo de péptido que contiene el grupo SH. El oligómero de proantocianidina que contiene azufre se absorbe fácilmente en el cuerpo viviente a través del intestino debido al peso molecular tan bajo como 1,500 o menos y exhibe un potente efecto antioxidante del radical DPPH, un efecto incrementado de la actividad similar a SOD, un efecto preventivo de la peroxidación del lípido P450, un efecto protector contra la agresión oxidativa de FNT, un efecto protector de las células nerviosas contra la destrucción celular oxidativa inducida por ß-amiloide, un efecto preventivo contra la diabetes inducida por Streptozotocina (STZ) y así sucesivamente. El oligómero tiene una capacidad antioxidante relativamente alta en comparación con otros materiales de polifenol. Los datos que se juzga que están basados en los efectos antioxidantes también se obtienen en pruebas de monitoreo del índice de an ioxidación en seres humanos. En consecuencia, la composición que contiene el oligómero de proantocianidina que contiene azufre de la presente invención como ingrediente activo no solo tiene un efecto preventivo contra la producción de peróxido de lípido en un organismo, sino también es efectiva para enfermedades ocasionadas por el daño de oxidación debido a la generación de oxígeno activo. De acuerdo con esto, la composición tiene efectos preventivos contra disfunciones de varios órganos y el envejecimiento ocasionados por los peróxidos de lxpidos o la producción de oxígeno activo, y varias enfermedades ocasionadas por los peróxidos de lípidos o la producción de oxígeno activo se tratan y/o se previenen efectivamente utilizando la composición. Además, la composición se considera efectiva para la supresión, prevención o tratamiento de disfunciones cerebrales, tales como demencia, ocasionadas presumiblemente por el envejecimiento del cerebro. Al mismo tiempo, a través del mejoramiento en la función cerebral, se esperan también los efectos de mejoramiento de la función de aprendizaje, alivio de la distracción, alivio del insomnio, recuperación de la serenidad, y así sucesivamente. En consecuencia, la composición que contiene el oligómero de proantocianidina que contiene azufre de la presente invención como ingrediente activo puede utilizarse como una composición farmacéutica y una composición alimenticia saludable. La composición que contiene el oligómero de proantocianidina que contiene azufre de la presente invención como ingredientes activos no muestran ninguna toxicidad y pueden utilizarse de manera bastante segura. La composición se utiliza oral o parenteralmente . Cuando la composición se utiliza oralmente, la dosis de la composición, que puede variar dependiendo de la edad, peso corporal, síntomas, efecto terapéutico objetivo, método de administración y así sucesivamente., se encuentra comúnmente en el rango de 100 a 2, 000 mg a la vez para un adulto. Cuando la composición de la presente invención se administra oralmente, generalmente se utiliza la composición en forma de tabletas, pildoras, cápsulas, polvos, gránulos, jarabes, etc. Cuando la composición de la presente invención se administra parenteralmente, la composición se utiliza en forma de inyecciones, linimentos etc. Cuando se formula la composición de la presente invención en gránulos, tabletas o jarabes, pueden utilizarse materiales auxiliares apropiados (almidones, dextrina, edulcorantes, pigmentos, fragancias, etc.) según sea necesario. MEJOR MODO PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN De aquí en adelante, la presente invención se describirá en más detalle a manera de ejemplos y ejemplos de prueba de la composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de la presente invención. Sin embargo, la presente invención no se limita a los siguientes ejemplos. Ejemplo 1: Producción del oligómero de proantocianidina que contiene azufre derivado de semilla de uva. (1) Extracción de polifenol de semilla de uva Se extrajeron 8 kg de uva seca con 30 1 de metanol al 80% a temperatura ambiente durante 3 días y el residuo se filtró. Después de eso, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener una solución concentrada, que se purificó bajo las siguientes condiciones. [Condiciones de Purificación] La cantidad total de la solución concentrada se cargó en DIAION HP-20 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation) 200 p?p?f x 30 cm (aproximadamente 25 1) y se lavó con 100 1 de agua. Después de eso, se recuperó el eluido obtenido utilizando 50 1 de metanol, se concentró bajo presión reducida, y se secó por congelación para obtener 456 g de composición en polvo. (2) Reacción de reducción del peso molecular con cisteína Se mezclaron 400 g del polifenol de semilla de uva obtenido en el método (1) antes descrito, 400 g de L-cisteína (fabricada por ako Puré Chemical Industries, Ltd.), 4 g de ácido ascórbico (fabricado por Junsei Chemical Co.,Ltd.), 0.8 kg de ácido cítrico (fabricado por Wako Puré Chemical Industries, Ltd.), y 4 1 de agua y se hicieron reaccionar a 40 °C durante 48 horas. La mezcla de reacción se cargó en una columna (volumen aproximado 25 1) de 200 mm de diámetro y 80 mm de altura, se empacó con DIAION HP-20 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation) como un vehículo y la fracción no absorbida se lavó con 100 1 de agua. Después de eso, las fracciones eluidas con 50 1 de etanol al 40% se recuperaron, se concentraron bajo presión reducida, y se secaron por congelación para obtener un polvo café rojizo (rendimiento: 408 g) que es fácilmente soluble en agua, metanol, y etanol. El polvo se fraccionó con una solución mezclada de etanol -agua en una columna (diámetro: 50 mm, altura: 500 mm, volumen: aproximadamente 1 1) se empacó con Sephadex LH-20 (fabricado por Pharmacia Co., Ltd.) y la composición de oligómero de las fracciones se analizó mediante el método de Nonaka et al. (Chem. Pharm. Bull., 34(2), 633-642 (1986)). Como resultado, se obtuvieron las siguientes composiciones. Fracción de monómero de epicatequina enlazado a cisteína 19% Fracción de dímero de epicatequina enlazado a cisteína 21% Fracción de trímero de epicatequina enlazado a cisteína 11% Fracción de tetrámero a hexámero de epicatequina enlazado a cisteína 16% (3) Monómero de epicatequina enlazado a cisteína La fracción de monómero de epicatequina enlazado a cisteína así obtenida se purificó mediante cromatografía en columna utilizando gel Sephadex LH-20 (agua-metanol-acetona) para separar manchas que dieron café rosado al rociarse con un reactivo de ninhidrina-ácido acético y se calentó, y en consecuencia se aislaron los compuestos representados por las siguientes fórmulas (1) a (3) (de aquí en adelante, abreviados algunas veces como "Compuestos 1 a 3") · El compuesto de la Fórmula (1) (Compuesto 1) mostró un pico iónico molecular [M+HJ + (m/z) de 410.0925 al medir mediante HR-FAB-MS (Espectroscopia de Masa con Bombardeo Atómico Rápido de Alta Resolución) , que estuvo de acuerdo con un valor calculado de 410.0910 correspondiente a la fórmula molecular Ci8H2oOaNS con un error de 3 . 6 ppm (dentro de 10 ppm) . En consecuencia, se presumió que el Compuesto 1 tenía la fórmula molecular Ci8Hi908NS y se supuso que su estructura química es tal que el átomo de azufre de L-cisteína se enlaza a catequina o epicatequina . Adicionalmente , en la medición de 1H-NMR (espectro de resonancia magnética nuclear de hidrógeno, ver Tabla 1) del Compuesto 1, además de las cinco señales de protones en un anillo aromático que son comunes a la catequina y epicatequina, las señales de estructuras que tienen un átomo de oxígeno o un átomo de azufre en la base, se observaron a d5.09 (br.s), 54.07 (m) , y 53 . 86 (d, J=2Hz) , ascendiendo cada una a un protón. Lo anterior sugiere que el Compuesto 1 tiene una configuración de epicatequina. La señal de protón en 53 . 86 (d, J=2Hz) se asigna a una disposición de 4OÍ correspondiente a la señal de un producto de tiolisis en el cual el átomo de azufre se encuentra dispuesto a 4ß. En adición, se observaron señales tipo ABX en 54.13 (1H, dd, J=9, 4Hz) , 52.95 (1H, dd, J=15, 9Hz) , y 53.43 (1H, dd, J=15, 4Hz) , sugiriendo una estructura parcial en la cual un grupo metileno se encuentra adyacente al grupo metileno en cisteína. En base a la información antes mencionada, se presumió que la estructura química del Compuesto 1 fue 4ß- (S-L-cisteinil) - (-) -epicatequina representada por la Fórmula (1) . Las 18 señales totales de carbono incluyendo cada orden de carbono observado en 13C-NMR (espectro de resonancia magnética nuclear del carbono-13, ver Tabla 2) (método DEPT) del Compuesto 1 soportaron esta estructura . En 1H-NMR (ver Tabla 1) del compuesto de la Fórmula (2) (Compuesto 2) , las señales de estructuras que tienen un átomo de oxígeno o un átomo de azufre en la base, se observaron a d4.86 (1H, d, J=9, 6Hz) , d4.22 (1H, dd, J=9.6, 4.3Hz), y d4.23 (1H, d, J=4, 3Hz) , cada uno ascendiendo a un protón. Los últimos dos se asignaron a ordenamientos 2ß y 3ß y d4.23 (1H, d, J=4 , 3Hz) se asignó a un ordenamiento 4a. Las señales corresponden a señales de un producto de tiolisis en el cual el átomo de azufre se encuentra ordenado a 4ß. En consecuencia, se considera que el Compuesto 1 y el Compuesto 2 difieren entre sí solo en la configuración en la posición 3, de manera que se presumió que la estructura química del Compuesto 2 es 4ß- (S-L-cisteinil) - (+) -catequina representada por la Fórmula (2) . El compuesto de la Fórmula (3) (Compuesto 3) mostró un pico iónico molecular [M+H]+(m/z) de 426.0844 al medir mediante HR-FAB-MS, que estuvo de acuerdo con un valor calculado de 426.0859 correspondiente a la fórmula molecular Ci8H2o09 S que tiene un átomo más de oxígeno en comparación con el Compuesto 1 con un error de 3.5 ppm. Además, el Compuesto 3 correspondió y fue similar al Compuesto 1 excepto que en 1H-NMR (ver Tabla 1) la medición del Compuesto 3, se observaron hidrógenos en las posiciones 2'- y 6'- como señales equivalentes en d6.57 (2H, s) en una región del anillo aromático. En consideración a la asignación de las señales de 13C-NMR mostradas en la Tabla 2, se presumió que la estructura del Compuesto 3 es 4 ß- (S-L-cisteinil) - ( - ) -epigalocatequina representada por la Fórmula (3) .

Tabla 1: Asignación de señales 1H- ]yiR (d en ppm) de los Compuestos 1, 2 y 3. H No. Compuesto 1 Compuesto 2 Compuesto 3 2-H 5.09 (br, s) 4.86 (d, 2Hz) 5.13 (s) 3-H 4.07 («) 4.22 (dd, 8.3, 2Hz) 4.07 (s) 4-H 3.86 (d, 2Hz) 4.27 (d, 2Hz) 3.92 (s) 6-H 5.99 (d, 2Hz) 6.04 (d, 2Hz) 6.03 (br. s) 8-H 5.87 (d, 2Hz) 5.81 (d, 2Hz) 5.96 (br. s) 2 ' -H 6.99 (d, 2Hz) 6.94 (br, s) 6.57 (s) 5' -H 6.76 (d, 8.3Hz) 6.86 (br, s) 6'-H 6.81 (dd, 8.3, 2Hz) 6.86 (br, s) 6.57 (s) cys 2-H 4.13 (dd, 9, 4Hz) 4.07 (dd, 9, 4Hz) 4.10 (m) cys 3-H2 2.95 (dd, 15, 9Hz) 3.02 (dd, 15, 9Hz) 3.00 (dd. 15, 9Hz) 3.43 (dd, 15, 4Hz) 3.55 (dd, 15, 4Hz) 3.45 (dd. 15, 4Hz) Nota: El Compuesto 1 se midió en acetona-d6-D20, y los Compuestos 2 y 3 se midieron en CD3OD, respectivamente.

Tabla 2 : Asignación de señales 13C-NMR (d en ppm) de los Compuestos 1 y 3.

Nota: El Compuesto 1 se midió en acetona-ds-D20, y el Compuesto 3 se midió en CD3OD, respectivamente. Nota: Los valores con a) y b) a la derecha de la columna son intercambiables . (4) Dimero de epicatequina enlazado a cisteína El polvo de la fracción del dimero de epicatequina enlazado a cisteína se purificó de la misma manera que en lo anterior para aislar un compuesto representado por la Fórmula (4) (en adelante, abreviado algunas veces como "Compuesto 4") .

El Compuesto 4 mostró un pico iónico molecular [M+H] + (m/z) de 698 al medir mediante FAB-MS, sugiriendo una estructura que contiene una o más unidades de catequina que el Compuesto 1. En vista del comportamiento único mostrado en TLC y HPLC, el 1H- MR del Compuesto 4 mostró un espectro en el cual las señales agudas coexistieron en las señales amplias. Esta característica en la distribución de señal de ¦"¦H-NMR sugirió que de 4?6 y de 4?8, la posición de enlace de condensación sería la siguiente, lo cual genera una fuerte obstáculo de rotación. Se observó que las señales derivadas de los benzopiranos respectivos directamente enlazados a los enlaces 4?8 se encontraban deformadas en amplias. Es decir, d4.22, d4.54 u d4.96 (cada 1H, br.m, c-3, -4 y -2, respectivamente) se asignaron a una unidad de extremo superior y más agudo 53.83, y 53.90 (cada 1H, s, c-4', y -3 ' , respectivamente), 5,20 (1H, br.m, C-2') se asignaron a una unidad (extremo inferior) enlazado al átomo de azufre. La consideración al utilizar un modelo molecular sugirió que la unidad de extremo inferior fue más libre de obstáculo de rotación que la unidad de extremo superior. En la región aromática en d5.92, las señales correspondientes a tres protones que se asignaron a c-6, -8 y -6' se observaron como una envoltura. Los protones en los anillos B de ambas unidades se observaron de 66.60 a 67.09 y una señal aguda doble que tiene una constante de acoplamiento de 8.3 Hz entre ellas se considera asignada a la posición 5 en la unidad de extremo inferior, que estuvo libre de obstáculo de rotación. Se presumió que las señales restantes 62.95 y 63.44 (cada 1H, br. tn , cys-C-3), y 64.14 (1H, dd, J=9, 4Hz, cys-C-2) se derivaron de residuos de cisteína. La 13C-NMR del Compuesto 4 (ver Tabla 3) , el cual contiene las señales correspondientes al Compuesto 1, soportó la estructura del Compuesto 4 representado por la Fórmula (4) . En consecuencia, se presumió que la estructura del Compuesto 4 es 4 (S-L-cisteinil) - ( - ) -epicatequin ( 4ß?8 ) - ( - ) -epicatequina .

Tabla 3: Asignación de las señales de C-NMR (d en ppm) del Compuesto 4 Nota 1) Cada muestra se midió en acetona -d6-D20. Nota 2) Los valores químicos de variación con a) , b) y e) a la derecha son intercambiables. (5) Trímero de epicatequina enlazado a cisteína El polvo de la fracción de monómero de epicatequina enlazado a cisteína se purificó de la misma manera que en lo anterior para aislar un compuesto representado por la Fórmula (5) (en adelante, abreviado algunas veces como "Compuesto 5") .

El Compuesto 5 mostró un pico iónico molecular [M+H]+(m/z) de 984.1956 al medir mediante HR-ESI-MS, que estuvo de acuerdo con un valor calculado de 984.2011 correspondiente a la fórmula molecular C48H42O20NS con un error de 5.5 ppm. En consecuencia, se presumió que el Compuesto 5 tiene una fórmula molecular C48H4202oNS ? se supuso que su estructura química es tal que la L-cisteína se encuentra enlazada a un condensado de tres moléculas de catequina o epicatequina . Además, las señales 1H-NMR del Compuesto 5 fueron generalmente amplias y se sugirió que las tres unidades están condensadas linealmente al enlace 4?8, con L-cisteína enlazada a la unidad de extremo inferior. De las únicas observadas en 55.98 como señales en los anillos aromáticos, la asignación se efectuó como sigue: 6-H y 8-H en el anillo A, 6-H en el anillo A' , y 6-H en el anillo A' ' . Las señales observadas en los campos magnéticos inferiores (56.04, s; 56.91, 7.01, s; 57.11, s) tuvieron una proporción de pico de aproximadamente 3:2:1:3 y se asignaron a las señales derivadas de 2-H en los anillos B, B' y B' ' . Se consideró que las señales en 56.91 y 57.01 (2:1) que aparecieron como resultado de la señal derivada de 2-H en el anillo B colocado a la mitad de la estructura variaron debido al obstáculo de rotación. En base a la información, se presumió que la estructura de plano del Compuesto 5 es tentativamente de la Fórmula (5) . Ejemplo 2: Producción del oligómero de proantocianidina que contiene azufre derivado de semilla de uva. Utilizando el mismo material natural y las condiciones del Ejemplo 1, se extrajo el polifenol de semilla de uva y se purificó bajo las mismas condiciones del Ejemplo 1. El producto purificado se reactivó con glutatión bajo las siguientes condiciones para reducir el peso molecular. decir, se mezclaron 1.0 g del polifenol semilla de uva obtenido, 3.0 g de glutatión (fabricada por Wako Puré Chemical Industries, Ltd.), 0.5 g de ácido ascórbico (fabricado por Junsei Chemical Co.,Ltd.), y 50-0 mi de 1 N de ácido clorhídrico y se hicieron reaccionar a 40 °C durante 48 horas. La mezcla de reacción purificó utilizando DIAION HP-20 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation) MCIgel CHP-20 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation), Sephadex LH-20 (fabricado por Pharmacia Co . , Ltd.), etc., se concentró bajo presión reducida, y se secó por congelación para obtener un polvo café rojizo (rendimiento: 120 mg) . 1) Monómero enlazado a glutatión El polvo café rojizo obtenido se purificó repitiendo la cromatografía en columna utilizando gel de poliestireno, gel Sephadex LH-20, y gel de sílice ODS como vehículos, y una mezcla de agua y metanol como fase móvil para obtener un compuesto representado por la Fórmula (6) (Compuesto 6) .

Al medir mediante HR-ESI-MS (Espectroscopia de Masa de Ionización con Electro-Aspersión de Alta Resolución) , el Compuesto 6 mostró un pico iónico molecular [M+H] + (m/z) de 596.1550, que estuvo de acuerdo con un valor calculado de 596.1551 correspondiente a la fórmula molecular C25H30O12 3S con un error de 0.17 ppm. En consecuencia, se presumió que el Compuesto 6 tiene una estructura química tal que el átomo de azufre derivado de L-ciste£na de glutatión se enlazó a catequina o epicatequina . En la 1H-NMR del Compuesto 6, además de las 5 señales (55.84, 5.96, 6.91) (cada 1H, 8-m 6-m 2'-H, respectivamente); dß.73-6.78 (2H, m, 5'-, 6'-H) de los protones en un anillo aromático, que son comunes a catequina y epicatequina , las señales de las estructuras que tienen un átomo de oxígeno o un átomo de azufre en la base se observaron a 53.90, 3.91, 5.15 (cada 1H, 3-, 4-, 5-H, respectivamente) . Esto sugiere que la estructura fue tal que el átomo de azufre se encuentra colocado a 4ß en la posición 4 de epicatequina de la misma manera que en el Compuesto 1. En adición, se observaron las señales que corresponden a la porción de cisteína (53.63 (1H, br.t, J=9, 4Hz, cys-2-?) , 3.72, 3.80 (cada 1H, d, J=17.6 Hz, cys-3-H2) ) , la porción de ácido glutámico (51.72 (2H, m, glu-4-H2) , 1.78 (2H, m, glu-3-¾) ) , 3-05 (1H, br.d, J=5.4Hz, glu-2-?)), y la porción de glicina (53.20 (2H, s, gly-2-??). Esta estructura se soportó mediante la observación de 25 señales de carbono en la medición de 13C-NMR (ver Tabla 4) del Compuesto 6. En consecuencia, se presumió que la estructura del Compuesto 6 que es 4ß- (glutationil) - (-) -epicatequina representada por la Fórmula (6) , en la molécula de glutatión se enlazó a 4 ß de epicatequina.

Tabla 4: Asignación de las señales C-NMR (d en ppm) del Compuesto 6 Nota 1) La muestra se midió después de disolverse en CD30D.

Nota 2) Los valores químicos de variación con * a la derecha son intercambiables. Ejemplo 3: Producción de proantocinanidina que contiene azufre derivada de corteza de pino (1) Extracción del polifenol de corteza de pino 400 g de corteza de Abies sachalinensis (Todo Fir) se extrajeron con 1.5 1 de metanol al 80% a temperatura ambiente durante 3 días y el residuo se filtró. Después de eso, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener una solución concentrada que se purificó bajo las siguientes condiciones. [Condiciones de purificación] La cantidad total de la solución concentrada se cargó en DIAION HP-20 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation) 50 mm<j> x 30 cm (aproximadamente 600 mL) y se lavó con 2,500 mL de agua. Después de eso, se recuperó un eluido obtenido utilizando 1,200 mL de metanol, se concentró bajo presión reducida y se secó por congelación para obtener 18.4 g de una composición en polvo. (2) Reacción de reducción del peso molecular con cisteína 1.0 g del polifenol de corteza de pino obtenido mediante el método (1) antes descrito, 1.7 g de L-cisteína (fabricada por Wako Puré Chemical Industries, Ltd.), 0.25 g de ácido ascórbico (fabricado por Junsei Chemical Co., Ltd.), y 20.0 mL de 1N de ácido clorhídrico se mezclaron y se hicieron reaccionar a 40 °C durante 48 horas. La mezcla de reacción se cargó en una columna (volumen aproximado 100 mi) de 25 mm de diámetro y 150 mm de altura, se empacó con DIAION HP-20 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation) como un vehículo y una fracción no absorbida se lavó con 400 mL de agua. Después de eso, las fracciones eluidas con 400 mL de metanol se recuperaron, se concentraron bajo presión reducida, y se secaron por congelación para obtener un polvo café rojizo (rendimiento: 0.95 g) . La proantocianidina exhibe una fuerte actividad antioxidante in vi tro aunque la proantocianidina no siempre exhibe un efecto suficiente in vivo mediante la ingesta oral. Presumiblemente, la razó es que el alto peso molecular de la proantocianidina no puede absorberse fácilmente del intestino. En contraste, el oligómero de proantocianidina que contiene azufre que tiene un peso molecular reducido utilizando la sustancia que contiene el grupo SH de acuerdo con la presente invención, exhibe una actividad de antioxidación equivalente a la de la proantocianidina de alto peso molecular in vi tro y también exhibe una actividad de antioxidación superior a la de la proantocianidina de alto peso molecular in vivo. Ejemplo 4: Producción de proantocianidina que contiene azufre derivada de Myrica rubra (1) Extracción del polifenol de Myrica rubra 400 g de corteza de Myrica rubra (baya de laurel) se extrajeron con 1.5 1 de metanol al 80% a temperatura ambiente durante 3 días y el residuo se filtró. Después de eso, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener una solución concentrada, que se purificó bajo las siguientes condiciones. [Condiciones de purificación] La cantidad total de la solución concentrada se cargó en DIAION HP-20 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation) 50 mm<j) x 30 cm (aproximadamente 600 mL) y se lavaron las fracciones no absorbidas con 2,500 mL de agua. Después de eso, se recuperó un eluido obtenido utilizando 1,200 mL de metanol, se concentró bajo presión reducida y se secó por congelación para obtener 38.0 g de una composición en polvo. (2) Reacción de reducción del peso molecular con cisteína 1.0 g del polifenol de Myrica rubra obtenido mediante el método (1) antes descrito, 1.7 g de L-cisteína (fabricada por ako Puré Chemical Industries, Ltd.), 0.25 g de ácido ascórbico (fabricado por Junsei Chemical Co. , Ltd.), y 20.0 mL de 1N de ácido clorhídrico se mezclaron y se hicieron reaccionar a 40 °C durante 48 horas. La mezcla de reacción se cargó en DIAION HP-20 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation) de 25 mm<|> de diámetro y 150 mm de altura (volumen aproximado 100 mi) , y una fracción no absorbida se lavó con 400 mL de agua. Después de eso, se recuperó un eluido obtenido utilizando 400 mL de metanol, se concentró bajo presión reducida, y se secó por congelación para obtener 0.95 g de un polvo café rojizo. (3) Con respecto a la combinación de polifenol de corteza de baya de laurel y L-cisteína 1) Monómero de galato de epigalocatequina enlazada a L-cisteína El polvo café rojizo obtenido en (2) antes descrito se purificó repitiendo la cromatografía de columna utilizando gel de poliestireno, gel Sephadex LH-20, y gel de sílice ODS como vehículos, y una mezcla de agua, metanol y acetona en proporciones opcionales como fase móvil para aislar el galato de epicatequina, el galato de epigalocatequina, galato de (4ß?8) epigalocatequina, y el Compuesto 3 antes mencionado así como los siguientes compuestos representados por las Fórmulas (7) y (8) (Compuesto 7 y Compuesto 8) .

El compuesto 7 mostró un pico iónico molecular [M+H] + (m/z) de 575 al medir mediante ESI- S. Además, los resultados de medición por """H- R (ver Tabla 5) indicaron que el Compuesto 7 fue similar al Compuesto 1 y el Compuesto 3. Sin embargo, se observaron 3-ß? (1H, 5.29, s) que variaron hacia campos magnéticos inferiores por aproximadamente 1.33 ppm, así como a las posiciones 6- y 8- en el anillo A en una región de anillo aromático, y dos grupos de señales únicas agudas equivalentes (derivadas de los hidrógenos en las posiciones 2- y 6- en benceno 1, 3, 4, 5-sustituido) ascendiendo cada uno a dos protones . Las señales sugirieron que el Compuesto 7 es un galato de epigalocatequina . Tomando en consideración la información y asignación de las señales de 13C-NMR juntas, se presume que la estructura del Compuesto 7 es galato de 4ß- (S-L-cisteinil) - (-) -epicatequina representado por la Fórmula (7) . (2) Dimero de galato de epicatequina enlazado a L-cisteína Al medir por HR-ESI- S, el Compuesto 8 mostró un pico iónico molecular [M+H] + (m/z) de 1032.1517, que estuvo de acuerdo con un valor calculado de 1032.1503 correspondiente a la fórmula molecular C25H30O12N3S con un error de 1.4 ppm. En consecuencia, se presumió que el Compuesto 8 tiene una estructura que tiene una o más unidades de galato de epicatequina que el Compuesto 7. La 1H-NMR del Compuesto 8 mostró un espectro en el cual una señal aguda coexistió en señales amplias de manera similar al Compuesto 4, y se consideró que es del tipo de condensación de 4?8. Las señales de ""?- y 13C-NMR se asignaron similarmente al Compuesto 4 (Tablas 5 y 6, respectivamente) y se presumió que la estructura del Compuesto 8 es galato de 4ß- (S-L-cisteinil) - (-) - galato de epicatequina- (4ß?8) -(-) -epicatequina representado por la Fórmula (8) .

Tabla 5 Asignación de las señales de 1H-NMR (d en ppm) de los Compuestos 7 y 8 Notas: El Compuesto 7 se midió a 25°C, El Compuesto 8 se midió a 40°C en acetona-de-D20.

Tabla 6 Asignación de las señales de 13C-NMR (d en ppm) de los Compuestos 7 y 8 C No. Compuesto Compuesto 8 7 C-2 74.0 C-C-2 75.0 C -C-2 73.5 -3 74.0 -3 75.0 -3 73.5 -4 39.3 -4 32.4 -4 38.9 -5 156.2 A-C-5 154.8 A' -C-5 154.8 -6 95.4 -6 94.7 -6 94.7 -7 157.3 -7 156. la) -7 155.9a) -8 97.0 -8 95.3 -8 95.3 -9 158.9 -9 156.5 -9 156.5 -10 97.9 -10 96.6 -10 96.9 -1' 129.3 B-C-l 131.9 B' -C-1 131.9 -2' 106.4 -2 106.0 -2 106.0 -3' 145.6 -3 131.9 -3 131.9 -4' 132.9 -4 119.6 -4 119.6 -5' 145.6 -5 144.8 -5 144.8 -6' 106.4 -6 106.0 -6 106.0 gal-C-1 120.2 gal-C-1 119.6 gal-C-1 119.6 -2 109.8 -2 109.4b) -2 109.4 -3 146.0 -3 145.0 -3 145.3 -4 139.2 -4 138.8 -4 138.8 -5 146.0 -5 145.0 -5 145.3 -6 109.8 -6 109.5b) -6 109.4 -C(=0) 0- 167.0 -C(=0) 0- 166.7 -C(=0)0- 166.7 Cys-1 171.8 Cys-1 171.0 -2 53.9 -2 53.3 -3 33.3 -3 32.6 Nota 1) El Compuesto 1 se midió en acetona-ds-D20, El Compuesto 3 se midió en CD3OD. Nota 2) Valores químicos de variación con a) y b) a la derecha son intercambiables. Ejemplo de Prueba 1: Efecto antioxidante del radical DPPH El polvo antes del fraccionamiento del Ejemplo 1 (Sustancia 1) , la fracción de monómero (Sustancia 2) obtenida fraccionando la Sustancia 1, las fracciones de dímero y trímero (Sustancia 3) obtenidas fraccionando la Sustancia 1, las fracciones de tetrámero o hexámero (Sustancia 4) obtenidas fraccionando la Sustancia 1, el material natural en el Ejemplo 1 (extracto de polifenol de semilla de uva) (Sustancia Comparativa 1) , y la catequina comercialmente disponible (fabricada por ako Puré Chemical Industries, Ltd.) (Sustancia Comparativa 2) se midieron para el efecto antioxidante de radical de 1 , 1-difenil-2-picrilhidrazil (DPPH) mediante el siguiente método. 100 µ? de una solución de DPPH (60 µ? de solución de etanol) se cargaron en una micro-placa de 96 pozos y 100 µ? de una solución de etanol como una muestra de prueba o se agregaron 100 µ? de etanol como control, y el total se mezcló suavemente y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después se midió la absorbencia a 520 nm y se calculó la capacidad de expulsión del radical DPPH de acuerdo con la siguiente fórmula. Se calculó una concentración efectiva de 50% (EC50) a partir de la capacidad de expulsión del radical DPPH y las concentraciones de muestras de prueba se diluyeron gradualmente. Capacidad de expulsión del radical DPPH (%) = [(1-absorbencia de la muestra de prueba) ) / (absorbencia del control) ] x 100 La concentración efectiva al 50% (EC50) se calculó a partir de las capacidades de expulsión del radical DPPH en las concentraciones graduales de cada muestra. La Tabla 7 muestra los resultados. A bajas concentraciones, la Sustancia 4 tuvo una capacidad relativamente alta de expulsión del radical DPPH. Otras muestras mostraron actividades similares. A altas concentraciones, cada muestra mostró una alta actividad. Tabla 7 EC50 en la EC50 de expulsión del radical DPPH Sustancia 1 1.62 Sustancia 2 2.78 Sustancia 3 1.45 Sustancia 4 0.77 Sustancia Comparativa 1 1, 55 Sustancia Comparativa 2 1.71 Ejemplo de Prueba 2: Actividad similar a (SOD) de dismutasa superóxido Con respecto a las Sustancias 1 a 4 y a las Sustancias Comparativas 1 y 2 que fueron las mismas utilizadas en el Ejemplo de Prueba 1, se midió la actividad similar a SOD utilizando un equipo de medición de la actividad SOD en sangre (SOD Test Wako : fabricado por Wako Puré Chemical Industries, Ltd.). La actividad similar a SOD se calculó de acuerdo con la siguiente fórmula y la concentración efectiva al 50% (ECSo) se calculó en base a la relación con la concentración de la muestra de prueba. La EC50 se calculó a partir de las actividades similares a SOD en concentraciones graduales de cada muestra. La Tabla 8 muestra los resultados. Cada fracción de las Sustancias 2 a 4 mostró una alta actividad similar a SOD en comparación con las Sustancias Comparativas 1 y 2. Tabla 8 EC50 en la actividad similar a SOD (µg/mL) Sustancia 1 69.7 Sustancia 2 84.8 Sustancia 3 74.6 Sustancia 4 75.5 Sustancia Comparativa 1 70.9 Sustancia Comparativa 2 62.0 Ejemplo de Prueba 3: Efecto en el modelo sub-agudo falla múltiple de órganos inducido por FeNTA Las pruebas se llevaron a cabo utilizando FeNTA (una mezcla de nitrato de hierro (Fe(N03)3) y nitrilotriacetato de sodio (NTA3Na) ) conocido como un modelo de oxidación in vivo que genera una gran cantidad de oxígeno activo al administrarse en un organismo para inducir una falla múltiple de órganos. Es decir, se mezcló una solución de 240 mg de nonahidrato de nitrato de hierro (fabricado por Kanto Kagaku) en 40 mi de agua fría y una solución de 390 mg de monohidrato de nitrilotriacetato de sodio en 40 mi de agua fría bajo enfriamiento en hielo y la mezcla se ajustó a un pH 7.5 con 1N de ácido clorhídrico y se ajustó también a un volumen fijo de 100 mL para preparar una solución FenTA. Dentro de los 10 minutos después de la preparación, se administraron 22.5 mg/kg de peso corporal como Fe de la solución FeNTA a ratones macho ddY de 7 semanas de edad (peso corporal promedio de 30 g) cada tercer día. La Sustancia 1 y la Sustancia Comparativa 1 se administraron cada una oralmente cada día en una dosis de 25 mg/kg de peso corporal (grupo administrado con baja dosis) o 50 mg/kg de peso corporal (grupo administrado con alta dosis) . Al grupo de control se le dio agua municipal. Se prepararon el grupo negativo de control al cual no se administró FeNTA y el grupo positivo de control al cual se administró FeNTA. Se permitió que los animales bebieran agua y tomaran alimento libremente. Se colectó sangre en el día 7, 14, 21 y 28 desde el inicio de la administración. Se midió el nivel de peróxido de lípido (LPO) en suero. En el día 28 a partir del inicio de la administración, se disectaron los animales para retirar el hígado, riñon y cerebro, y se midió el nivel de LPO del homogenado de cada órgano . [Resultados de la Prueba] (1) Las Figuras 1(A) y 1(B) muestran niveles de LPO en suero. En el grupo administrado con baja dosis, el nivel de LPO en suero del grupo de la Sustancia 1 se redujo significativamente en comparación con el grupo de la Sustancia Comparativa 1 y el grupo positivo de control en el Día 21 (Figura 1(A)) . También el grupo administrado con alta dosis, el nivel de LPO en suero del grupo de la Sustancia 1 se redujo significativamente en el día 21 a partir del inicio de la administración y subsecuentemente (Figura 1 (B) ) . El grupo de la Sustancia Comparativa 1 también mostró un bajo nivel en el día 21 pero la sustancia de la presente invención mostró efectos más altos. (2) Nivel de LPO en cada órgano Las Figuras 2A a 2C muestran los niveles de LPO en hígado, riñón, y cerebro. En el hígado, no se observó un incremento significativo en el nivel de LPO por la administración de FeNTA o no se observó ningún cambio en cada grupo administrado. En ríñones y cerebro, la administración de FeNTA incrementó el nivel de LPO en el homogenado. La administración de la Sustancia 1 y la Sustancia Comparativa 1, disminuyó el nivel de LPO. Tanto el riñon como el cerebro mostraron el nivel más bajo en el grupo administrado con alta dosis de la Sustancia 1. En particular, en el cerebro, la administración de la Sustancia Comparativa 1 mostró también bajos niveles. Sin embargo, el grupo administrado con alta dosis de la Sustancia 1 mostró niveles significativamente bajos en comparación con los otros grupos. [Sumario de los resultados] La administración de FeNTA incrementó el nivel de LPO en suero. La Sustancia 1 exhibió el efecto en dosis bajas y en periodos cortos en comparación con la Sustancia Comparativa 1. Esto muestra que debido a la reducción en el peso molecular, la Sustancia 1 se absorbe más fácilmente por el intestino al tomarse oralmente, de manera que la Sustancia 1 exhibe el efecto en bajas dosis y en períodos cortos. En particular, se ha aclarado que la Sustancia 1 exhibe una potente actividad de antioxidación en riñon y cerebro. Ejemplo de Prueba 4: Prueba de monitoreo en seres humanos [Método de Prueba] Treinta y cuatro (34) personas sanas (edad promedio: 41.2 años, 21 machos y 13 hembras) se dividieron en dos grupos como se muestra en la Tabla 9, y se administraron 500 mg/día de cada una de las Sustancia 1 y Sustancia Comparativa 1 durante 28 días. Se colectó sangre antes de iniciar la administración y después de 28 días a partir de la administración, y se midió el nivel de LPO en suero y la actividad similar a SOD. Tabla 9 [Resultados] Las Figuras 3A, 3B, 4A y 4B muestran el nivel de LPO y la actividad similar a SOD antes y después de la administración. La Figura 3A muestra los niveles de LPO para personas con niveles iniciales normales y la Figura 3B muestra los niveles LPO para personas con niveles iniciales anormales. La Figura 4A muestra la actividad similar a SOD para personas con valores iniciales normales y la Figura 4B muestra la actividad similar a SOD para personas con valores iniciales anormales. Mediante la administración de la Sustancia Comparativa 1 y la Sustancia 1 durante 28 días, los niveles de LPO mostraron una disminución y la actividad similar a SOD mostró una tendencia a incrementarse. Entre los sujetos con niveles iniciales anormales, aquellos con un nivel de LPO inicial alto (nivel LPO de 8.0 o más) y aquellos con una actividad similar a SOD relativamente baja (actividad similar a SOD de 12.0 o menos), se observó una disminución estadísticamente significativa en el nivel LPO en un grupo administrado con la Sustancia 1 (Figura 3 (B) ) . De manera similar, se observó un incremento estadísticamente significativo en la actividad similar a SOD en un grupo administrado con la Sustancia 1 (Figura 4 (B) ) . Esto confirmó que la Sustancia 1 es más efectiva para mejorar el estado de oxidación de un organismo que la misma cantidad de la Sustancia Comparativa 1. Ejemplo de prueba 5: Efecto de protección de la célula nerviosa de la muerte celular oxidativa inducida por ß-amiloide La enfermedad de Alzheimer, ocasionada por la regeneración anormal del nervio, se caracteriza en que la enfermedad forma la placa senil mediante la acumulación de b-amiloide. B-amiloide es una sustancia que genera especies de oxígeno activo y que juega un papel clave en el inicio y progreso de la enfermedad de Alzheimer debido a la citotoxicidad a las células nerviosas. Se examinó polifenol de peso molecular reducido (en adelante, algunas veces abreviado como "GSM") para el efecto protección de células nerviosas contra la actividad de daño celular mediante la inducción a la apoptosis en células PC-12 ampliamente utilizadas en experimentos de citotoxicidad nerviosa. [Método de Prueba] Se cultivaron células PC-12 en medio DMEM conteniendo suero equino al 10% inactivado con calor y suero fetal bovino al 5% en una atmósfera al 10$ de dióxido de carbono. Después del pre-cultivo durante 24 horas ajusfando la densidad de la célula a 4 x 104 células/300 µ??, GSM o polifenol de semilla de uva (en adelante, algunas veces abreviado como "GSP") se agregó a un medio N-2 que no contiene suero en una concentración de 1, 1.5, 5, 0 10 g/mL y se llevó a cabo el cultivo en una placa de 48 pozos. (1) Prueba de supervivencia de las células: Después del tratamiento, las células se trataron con una solución de MTT de 1 mg/mL y se disolvió un producto de formazan azul oscuro en un amortiguador y se midió la absorbencia a 540 a 595 nm. Los resultados se muestran en una proporción (%) para la absorbencia de células de control no tratadas. [Resultados] La prueba MTT probó que la concentración de GSM suprimió dependíentemente la inactivación celular PC-12 debido al ß-amiloide. Su efecto fue más alto que el GSP en una región de baja concentración de particularmente 1 y 1.5 µ?/p? (Figura 5) . (2) Prueba de medición del potencial de la membrana mitocondrial La TMRE, una sonda de catión soluble en grasa, se utilizó para medir el potencial de la membrana mitocondrial . Se trataron células PC-12 (1 x 104 células/mL) con 25 µ? de ß-amiloide en presencia/ausencia de GSM o GSP y después se lavaron con salina de amortiguador de fosfato, seguido por un tratamiento con TMRE (150 nM) a 37 °C durante 30 minutos. La TMRE que se acumuló dependiendo del potencial de la membrana del mitocondrio se detectó utilizando fluorescencia a una longitud de onda de excitación de 488 nm y una longitud de onda de emisión de 590 nm. [Resultados] El mitocondrio experimenta alteración en la integridad de la membrana previo al síntoma de muerte celular. Este cambio se presenta en las membranas tanto interna como externa del mitocondrio, conduciendo finalmente a la descarga del potencial de transmembrana para liberar una proteína soluble intermembranosa tal como citocromo C y un cambio en la permeabilidad de la membrana. Al exponerse al ß-amiloide, las células PC-12 experimentan una rápida disminución en el potencial de transmembrana del mitocondrio, que se expresa por fluorescencia roja utilizando la TMRE, que es un tinte dependiente del potencial (Figura 6 (A) ) . La disminución en el potencial transmembrana por el ß-amiloide se suprime significativamente mediante pre-tratamiento con GSM y el efecto fue más alto que el del GSP (Figuras 6 (A) y 6(B) . (3) Medición de la acumulación de las especies de oxígeno activo en la célula: Para observar la cantidad acumulada de especies de oxígeno activo en las células, se utilizó una sonda fluorescente DCF-DA (2', 7 ' -diclorodihidrofluorescein-diacetato. Después de tratar las células PC-12 (1 x 106 célula/ 3 mL) con 25 mM de b-amiloide en presencia/ausencia de GSM o GSP, las células se lavaron con solución Krebs-Ringer y se agregaron 10 mM de DCF-DA a la misma. Después de cultivar a 37 °C durante 15 minutos, las células se observaron utilizando un microscopio confocal láser equipado con láser de argón a una longitud de onda de excitación de 488 nm y una longitud de onda de emisión de 530 nm. [Resultados] Para elucidar la agresión oxidativa en la muerte celular de la célula PC-12 debido a b-amiloide, la acumulación intracelular de especies de oxígeno activo se midió utilizando DCF-DA que pueda permear a través de la membrana celular. En una célula, DCF-DA se hidroliza a DCF debido a la actividad esterasa de la célula y reacciona con un peróxido para producir una sustancia fluorescente. Las células PC-12 tratadas con b-amiloide se tiñen con un tinte DCF y se visualizan (Figura 7(A)). La acumulación de las especies de oxígeno activo en las células debido a b-amiloide disminuyó por medio de GSM y el efecto de reducción fue más alto que el GSP (Figuras 7(A) y 7(B)). (4) Nivel de glutation intracelular El nivel de glutation se midió utilizando un equipo comercialmente disponible (BIOXYTECH GSH-400, fabricado por OXIS Research Corporation, E.U.A.). Las células PC-12 tratadas con b-amiloide cultivadas en presencia/ausencia de GSM o GSP se recuperaron y se homogenizaron en una solución de ácido metafosfórico, y se centrifugaron para obtener un sobrenadante, al cual se agregó una solución cromógena de ácido clorhídrico. Después de agitar, se agregó una solución de hidróxido de sodio al 30% y las células se cultivaron a 25°C durante 10 minutos y después se centrifugaron para obtener un sobrenadante transparente, que se midió para absorbencia a 400 nm. El contenido de proteína se midió utilizando un equipo de medición de proteína BCA y la concentración de glutation de la proteína por peso de unidad de la proteína se comparó con la del control no tratado. [Resultados] El daño por oxidación se encuentra implicado en la inactivación celular debido al ß-amiloide. En células tratadas con ß-amiloide, disminuyó el nivel intracelular de glutatión. En células tratadas con GSP, el nivel intracelular de glutatión se recuperó a un nivel normal mientras que en el caso de GSM, se mostró un nivel de glutatión intracelular por encima del nivel normal., de manera que el GSM exhibió una alta actividad de oxidación en la célula (Figura 8) . (5) Nivel de peróxido lípido : El nivel de peróxido de lípido se midió utilizando un equipo comercialmente disponible (BIOXYTECH LPO-586) : fabricado por OXIS Research Corporation, E.U.A.). Las células PC- 12 tratadas con b-amiloide se cultivo en presencia/ausencia de GSM o GSP se recuperaron y se homogenizaron en un amortiguador Tris-hidrocloruro 20 mM conteniendo 0.5 mM de hidroxitolueno, y se centrifugaron para obtener un sobrenadante que se diluyó y se mezcló con una solución de acetonitrilo de 10.3 mM N-metil-2-fenilindolo. Después de agregar 37% de ácido clorhídrico, la mezcla cultivó a 45° durante 60 minutos. Después del enfriamiento, se llevó a cabo la centrifugación para obtener un sobrenadante transparente, que se midió para absorbencia a 590 nm. El contenido de proteína se midió utilizando un equipo de medición de la proteína de BCR. y una concentración de peróxido de lípido de la proteína por peso de unidad de la proteína se comparó con el del control no tratado.

[Resultados] La peroxidación de una membrana celular ocasionada por el tratamiento con ß-amiloide se indica por el malonedialdehído (MDA) producido de un peróxido lípido. El pretratamiento con GSM o GSP suprimió la peroxidación del lípido por ß-amiloide y el efecto del GSM fue el mayor, suprimiendo el peróxido de lípido al nivel de control no tratado o menos. (Figura 9) . [Sumario de Resultados] GSM suprimió la muerte celular de las células nerviosas debido a la toxicidad de ß-amiloide disminuyendo la acumulación de las especies de oxígeno activo en las células nerviosas en células PC-12, que son la línea celular modelo de la célula nerviosa. La supresión de la muerte celular de las células nerviosas debido al ß-amiloide que se encuentra profundamente implicado en el inicio y progreso de Alzheimer por medio de GSM en virtud del efecto de antioxidación, indica que el inicio y progreso de la enfermedad de Alzheimer puede suprimirse con GSM. Ejemplo de Prueba 6: Efecto preventivo contra la diabetes inducida por estreptozotocina (STZ) A fin de examinar el efecto preventivo de la Sustancia 1 contra ratones con diabetes inducida por STZ, se utilizó un modelo de la condición clínica correspondiente a una etapa inicial de la diabetes inducida administrando STZ en una baja dosis múltiple (MLD) . [Método] Se midieron ratones Jla:ddy (machos, 7 semanas de edad) por su peso corporal, nivel de glucosa en sangre, y nivel de LPO en sangre y se agruparon como sigue de manera que cada grupo se ecualizó. (1) Grupo de control negativo: STZ(-) (n=5, 1 jaula) (2) Grupo positivo de control: STZ(+) (n=15, 3 jaulas), (3) Grupo de Sustancia 1: STZ (+) + Sustancia 1 (n=10, 2 jaulas) , y (4) Grupo de la Sustancia Comparativa 1: STZ(+) + Sustancia Comparativa 1 (n=10, 2 jaulas) . Después de administrar intraperitonealmente la STZ en una dosis de 20 mg/kg durante 4 días consecutivos (esta administración de 4 días se efectuó en dos rondas) , se administró STZ en una dosis de 40 mg/kg intraperitonealmente durante 4 días consecutivos. La Sustancia 1 o la Sustancia Comparativa 1 se mezcló en alimento en polvo en 0.05& y se dejó a lo animales tomar el alimento libremente (desde la cantidad de alimento tomado al día, la cantidad de la Sustancia 1 o la Sustancia Comparativa 1 tomada por día fue de aproximadamente 100 mg/kg) . El período de administración se estableció 5 días antes de iniciar la administración de STZ y hasta 65 días desde el inicio de la administración de STZ. Durante el período de administración, se recolectó sangre y orina y se midió la glucosa en sangre, la glucosa en orina, la proteína en orina, el nitrógeno urea en sangre (BU ) , y LPO/TEAC en sangre (capacidad antioxidante equivalente Trolox) . Las Figuras 10 a 14 muestran los resultados de la medición. [Sumario de Resultados] (1) Niveles de glucosa en plasma en ayuno En la diabetes, el nivel de glucosa en sangre es alto al ayunar como se muestra en la Figura 10. En el día 35, 49, y 66 después de la administración de STZ, el grupo de control positivo mostró niveles de glucosa en sangre significativamente más altos que los del grupo de control negativo y se confirmó que el modelo de diabetes benigna se preparó administrando STZ en bajas dosis múltiples. El grupo de la Sustancia 1 y el grupo de la Sustancia Comparativa 1 mostraron niveles de glucosa en sangre significativamente menores que los del grupo de control positivo y el grupo de la Sustancia 1 tendió a mostrar un efecto más alto de disminución del nivel de glucosa en sangre que el grupo de la Sustancia Comparativa 1. (2) Nivel de glucosa en orina En la diabetes, la cantidad de glucosa excretada en la orina aumenta. La cantidad de glucosa excretada en orina se incrementa grandemente tratando con STZ, lo cual afirma que la diabetes se induce en los ratones. Como se muestra en la Figura 11, el efecto de mejoramiento del nivel de glucosa en orina que se incrementa debido a la STZ se observó en el grupo de la Sustancia 1 y en el grupo de la Sustancia Comparativa 1, y se observó una diferencia significativa entre el grupo de la Sustancia 1 y el grupo de control positivo y también entre el grupo de la Sustancia Comparativa 1 y el grupo de control positivo en el día 49, respectivamente. Además, el grupo de la Sustancia 1 mostró valores relativamente bajos en comparación con los de la Sustancia Comparativa 1. (3) Nivel de proteína en orina En la diabetes, la cantidad de proteína excretada en la orina aumenta. Como se muestra en la Figura 12, La Sustancia 1 y la Sustancia Comparativa 1 fueron capaces de suprimir la fuga de proteína dentro de la orina debido a la STZ y ambas sustancias redujeron significativamente la cantidad de proteína en el día 49 a partir de la administración de STZ en comparación con el grupo de control positivo. Además, se anticipa que la Sustancia 1 exhibe el efecto en etapas más tempranas de su modelo clínico que la Sustancia Comparativa 1. (4) Indicador de la capacidad antioxidante (4-1) Nivel de LPO en sangre Como se muestra en la Figura 13, se observó una tendencia de que el grupo de la Sustancia 1 mostró valores menores que los del grupo de control positivo y el grupo de la Sustancia Comparativa 1. (4-2) Valor de TEAC en sangre El método TEAC (capacidad antioxidante equivalente Trolox hace una evaluación relativa de la intensidad de antioxidación convirtiendo la actividad de antioxidación de un compuesto en la capacidad antioxidante de Trolox, que es un derivado de -Tocoferol. Los valores obtenidos por el método TEAC se utilizan ampliamente como indicadores de la actividad de antioxidación. Como se muestra en la Figura 14, los valores de la actividad de antioxidación del grupo de la Sustancia Comparativa 1 y del grupo de control positivo se encontraron sustancialmente en el mismo nivel el día 49 y en el día 66, mientras que los valores del grupo de la Sustancia 1 fueron altos demostrando que el grupo tuvo la más alta actividad de antioxidación. [Sumario] En modelos de baja dosis múltiple de STZ, la diabetes benigna puede inducirse en ratones y los modelos no muestran mucha diferencia entre los modelos individuales en el nivel de glucosa en sangre en comparación con una caso en que se utilizan modelos con una alta dosis única. En consecuencia, el modelo de baja dosis múltiple de STZ puede considerarse como altamente conveniente para efectos de estudio de la prevención de la diabetes. Se probó que la Sustancia 1 suprime el incremento en el nivel de glucosa en sangre y en el nivel de glucosa en orina implicados en el progreso de la condición clínica en el modelo de diabetes y de este modo tiene efectos preventivos contra la diabetes. En la diabetes inducida por STZ, las células ß dañadas de muerte por los radicales generados específicamente en la célula ß pancreática inducen la diabetes . Presumiblemente, proporcionando la Sustancia 1 y la Sustancia Comparativa 1 de 1 a 5 días antes de la administración de STZ, la actividad de antioxidación en el cuerpo puede incrementarse previamente, de manera que puede aliviarse el daño a las células ß ocasionado por STZ. Los resultados de las pruebas LPO y TEAC probaron que la Sustancia 1 aumenta significativamente la capacidad antioxidante en sangre. Es un hecho bien conocido en la técnica que los radicales tales como el monóxido de nitrógeno y el oxígeno activo se encuentran implicados en la destrucción de las isletas pancreáticas Langerhans en la diabetes dependiente de insulina, y se está probando mediante pruebas en el cuerpo humano que la supresión del daño celular ocasionado por los radicales libres puede aliviar la diabetes. En consecuencia, los resultados mostraron que la Sustancia 1 tiene un efecto preventivo en personas sanas que son candidatos potenciales para la diabetes y efectos adicionales de supresión del progreso de las condiciones clínicas en etapas tempranas de la diabetes. A fin de dilucidar qué tan alta es la capacidad antioxidante de la Sustancia 1 comparada con otros materiales de polifenol antioxidantes, las pruebas comparativas se llevaron a cabo en modelos de rata de falla renal aguda inducida por bromato de potasio. [Método] Se dividieron las ratas Wistar (macho, 12 semanas de edad) como sigue. Grupo de control negativo: bromato de potasio (-) (n=5) , Grupo de control positivo: bromato de potasio (+) (n=5) , Grupo de Sustancia 1 (derivada de semillas de uva) : bromato de potasio (+) + Sustancia 1 (n=5) , Grupo de Sustancia 5 (derivada de corteza de pino) : bromato de potasio (+) + Sustancia 5 (n=5) , Grupo de Sustancia Comparativa 2 (Catequina) : bromato de potasio (+) + Sustancia Comparativa 2 (n=5) , Grupo de Sustancia Comparativa 3 (extracto de hoja Ginkgo) : bromato de potasio (+) + Sustancia Comparativa 3 (n=5) , Grupo de Sustancia Comparativa 4 (derivada de corteza de pino) : bromato de potasio (+) + Sustancia Comparativa 4 (n=5) , Grupo de Sustancia Comparativa 5 (extracto de cocoa) : bromato de potasio (+) + Sustancia Comparativa 5 (n=5) . Se administró bromato de potasio intraperitonealmente en una dosis única de 65 mg/kg de peso corporal. La Sustancia 1, Sustancia 5 y cada una de las sustancias comparativas se administraron oralmente cada día una vez al día en una dosis de 10 mg/kg de peso corporal antes de 1 semana (Día 7) del inicio (Día 0) de la administración de bromato de potasio hasta el día después del Día 0. En el día de administración del bromato de potasio, las sustancias se administraron 30 minutos antes o después de la administración del bromato e potasio. En el Día -7, 0 y 2, se colectó sangre de la vena cervical y se midió el nivel de polifenol, el nivel de peróxido lípido, TEA, el nivel de nitrógeno urea, y el nivel de creatinina en sangre. [Resultados] Debido a que los efectos de la Sustancia 1 y de cada una de las sustancias comparativas en la falla renal aguda inducida por bromato de potasio se atribuyen a una acción antioxidante, se examinó el nivel de polifenol en sangre, la capacidad antioxidante en sangre (TEAC) , y el nivel de peróxido de lípido en sangre como indicador de antioxidación, y el nivel de nitrógeno urea en sangre y el nivel de creatinina en sangre como indicadores del efecto clínico en la falla renal. las Figuras 15 a 19 muestran las mediciones de éstos. (1) índice de antioxidación (1-1) Nivel de polifenol en sangre Como se muestra en la Figura 15, el valor inicial del nivel de polifenol en sangre antes de la administración de bromato de potasio fue constante para cada grupo mientras que después de la administración de la Sustancia 1 y de cada una de las sustancias comparativas durante 7 días, el grupo de la Sustancia 1 mostró el valor más alto, seguido por el grupo de la Sustancia Comparativa 2, en el Día 0 a partir de la administración del bromato de potasio. Se confirmó que la administración de la Sustancia 1 incrementó el nivel de polifenol en sangre y su proporción incrementada fue significativamente más alta que la de cada una de las sustancias comparativas. (1-2) Capacidad antioxidante de (TEAC) en sangre Como se muestra en la Figura 16, la pre-administración de la Sustancia 1 y de cada una de las sustancias comparativas durante 1 semana ocasionó que la capacidad antioxidante en la sangre mostrara una tendencia de incremento y el incremento en la capacidad antioxidante mediante la administración de la Sustancia 1 fue significativa en comparación con los grupos administrados cada uno con una sustancia comparativa. (1-3) Nivel de peróxido de lípido en sangre La pre-administración de la Sustancia 1 y de cada sustancia comparativa durante 1 semana suprimió el incremento en el nivel de peróxido de lípido en sangre mediante la administración de bromato de potasio. Como se muestra en la Figura 17, su efecto fue el más alto en el grupo de la Sustancia 1, y el grupo de la Sustancia 1 mostró un valor significativamente más bajo que el de cada una de las sustancias comparativas . (2) índices de condición clínica (2-1) Nivel de nitrógeno urea en sangre Como se muestra en la Figura 18, la administración de bromato de potasio incrementó significativamente el nivel de nitrógeno urea en sangre en comparación con los casos en donde no se dio ningún tratamiento. La administración de la Sustancia 1 y de cada una de las sustancias comparativas suprimió el incremento en el nivel de nitrógeno urea en sangre ocasionado por la administración de bromato de potasio, y la supresión del incremento en el nivel de nitrógeno urea en sangre mediante la administración de la Sustancia 1 fue significativa en comparación con cada grupo administrado con sustancias comparativas. (2-2) Nivel de creatinina en sangre Como se mostró en la Figura 19, la administración de bromato de potasio incrementó significativamente el nivel de creatinina en sangre en comparación con los casos en los que no se dio ningún tratamiento. La administración de la Sustancia 1 y de cada una de las sustancias comparativas suprimió el incremento en el nivel de creatinina en sangre ocasionado por la administración de bromato de potasio, y la supresión del incremento en el nivel de creatinina en sangre mediante la administración de la Sustancia 1 fue significativa en comparación con cada grupo administrado con sustancias comparativas . [Sumario] Las Sustancias Comparativas 3, 4 y 5 son materiales ricos en polímero de proantocianidina (alto peso molecular) y muestran alta actividad de antioxidación in vi tro. Sin embargo, la Sustancia 1 con un reducido peso molecular fue más alta que cada una de las sustancias comparativas en la actividad de antioxidación al introducirse en un organismo. En comparación con la Sustancia Comparativa 2 que es un monómero (catequina) , la Sustancia 1 mostró una actividad aún más alta. Partiendo de la cantidad de polifenol en sangre, se probó que la Sustancia con un reducido peso molecular tiene excelente capacidad de absorción en un cuerpo vivo y exhibe una actividad de antioxidación en el organismo.

La pre-administración de la Sustancia 1 incrementó la capacidad antioxidante en sangre y exhibió una actividad de antioxidación. Como resultado, esto suprimió el incremento en el nivel de peróxido de lípido en sangre ocasionado por la administración de bromato de potasio, suprimió la falla renal, y en consecuencia suprimió la fuga de nitrógeno urea y creatinina dentro de la sangre. Su efecto fue significativamente más alto que el de cada una de las sustancias comparativas, y excelente en las propiedades de antioxidación al introducirse en un organismo en comparación con un material de polifenol en base al polifenol y monomero de alto peso molecular (catequina) ya conocido. [Seguridad de la sustancia de la invención] Se evaluó la seguridad mediante pruebas de toxicidad con administración de dosis única. Es decir, la Sustancia 1 se administró oralmente en dosis de 2.5, 5.0, 7.5 y 10.0 g por kg de peso corporal a 8, 7, 3, y 18 ratones ddY (9 semanas de edad, macho), respectivamente. Se observaron los cambios en comportamiento y muerte después de la administración y se calculó la LC50. Como resultado, 50% de concentración letal (LC50) de la Sustancia 1 fue de 5.0 g/kg de peso corporal (95% de límite de conflabilidad : 3.5 a 6.4 g/kg de peso corporal) . Además, no se observó ninguna anormalidad en el comportamiento después de la administración ni ninguna anormalidad en la observación de la disección al completar las pruebas. Los resultados anteriores confirmaron que la sustancia 1 es extremadamente segura como alimento. En el Ejemplo de Prueba 4 antes mencionado (prueba de monitoreo en humanos) , los comentarios de los sujetos de prueba se colectaron mediante cuestionarios. De éstos, la Tabla 10 muestra resultados relacionado al sueño, y la Tabla 11 muestra los resultados de fatiga, claridad de pensamiento y función estomacal mediante una evaluación de 5 fases. Tabla 10 Grupo Edad Sexo Comentarios posteriores al uso Sustancia 1 49 macho Se volvió fácil de despertar Sustancia 1 43 macho Mejoró su calidad de sueño Sustancia 1 57 macho Despertó placentero por las mañanas Sustancia Comparativa 1 27 hembra Sensación de fatiga al levantarse Sustancia Comparativa 1 34 macho Soranoliento y con dificultad para Sustancia levantarse Comparativa 1 43 macho Se volvió difícil de despertar Tabla 11 Puntuación promedio del cuestionario mediante la evaluación de fase 5 (Los números mayores indican mejores condiciones; s números en paréntesis son antes de la administración) .

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una composición que comprende un oligómero de proantocianidina que contiene azufre como un componente principal, en donde el oligómero se obtiene al concentrar y secar una solución de reacción preparada al hacer reaccionar una planta que contiene proantocianidinas o extractos de las mismas con un compuesto que contiene el grupo SH.
2. La composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el oligómero es uno seleccionado desde un dímero a pentámero de la proantocianidina.
3. La composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la planta que contiene proantocianidinas es una o más seleccionadas de un grupo que consiste de vegetales, frutas, tés, hierbas, especias, maderas y cortezas.
4. La composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto que contiene el grupo SH es al menos uno seleccionado de un grupo que consiste de cisteína, cistina, glutatión, péptidos que contienen el grupo SH, y sus sales.
5. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, la cual es una composición farmacéutica para tratar y/o prevenir las enfermedades relacionadas con el estilo de vida.
6. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que es una composición farmacéutica para prevenir el envejecimiento.
7. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que es una composición alimenticia saludable para aliviar y/o prevenir las enfermedades relacionadas con el estilo de vida.
8. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que es una composición alimenticia saludable para prevenir el envejecimiento.
9. Un oligómero de proantocianidina que contiene azufre, que se obtiene al fraccionar componentes que contienen un oligómero de proantocianidina que contiene azufre preparado al hacer reaccionar una planta que contiene proantocianidinas o un extracto de la misma con un compuesto que contiene el grupo SH como se describió en la reivindicación 1.
10. El oligómero de proantocianidina que contiene azufre de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el oligómero es uno seleccionado desde un dímero a pentámero de proantocianidina .
11. Un método para producir una composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre, en donde una planta que contiene proantocianidina o un extracto de la misma, se hace reaccionar con un compuesto que contiene el grupo SH bajo una condición acídica y la solución de reacción se concentra y se seca.
12. Un método para producir una composición de oligómero de proantocianidina que contiene azufre, en donde una planta que contiene proantocianidina o un extracto de la misma se hace reaccionar con un compuesto que contiene el grupo SH bajo una condición acídica y la solución de reacción se concentra y se fracciona.
13. El método de producción de acuerdo con las reivindicaciones 11 o 12, en donde la planta que contiene proantocianidina es una o más seleccionadas de un grupo que consiste de vegetales, frutas, tés, hierbas, especias, maderas y cortezas.
14. El método de producción de acuerdo con las reivindicaciones 11 o 12, en donde el compuesto que contiene el grupo SH es al menos uno seleccionado de un grupo que consiste de cisteína, cistina, glutatión, péptidos que contienen el grupo SH, y sus sales.
15. El método de producción de acuerdo con las reivindicaciones 11 o 12, en donde la condición acídica se obtiene utilizando uno o ambos de un ácido inorgánico y un ácido orgánico.
16. El método de producción de acuerdo con la reivindicación 15, en donde se utiliza al menos uno seleccionado del grupo que consiste de ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido acético, ácido cítrico, ácido ascórbico, y ácido málico.
17. Un compuesto de proantocianidina representado por la Fórmula (4) .
18. Un compuesto de proantocianidina representado por la Fórmula (5) .
19. Un compuesto de proantocianidina representado órmula (6) .
20. Un compuesto de proantocianidina representado órmula (7) .
21. Un compuesto de proantocianidina representado órmula (8) . OH