MXPA04011039A

MXPA04011039A - Secuencias de polinucleotidos semejantes a clavata 3 de maiz y metodos de uso.

Info

Publication number: MXPA04011039A
Application number: MXPA04011039A
Authority: MX
Inventors: Newman Lisa
Original assignee: Pionner Hi Bred International
Priority date: 2002-05-06
Filing date: 2003-05-06
Publication date: 2005-02-14
Also published as: WO2003093450A3; US20030226178A1; US7179963B2; EP1523491A4; AU2003228935A1; CA2484525A1; EP1523491A2; CA2484525C; WO2003093450A2; NZ536311A

Abstract

Se proporcionan metodos y composiciones para modular el desarrollo y/o las rutas de desarrollo. Las composiciones de la presente invencion comprenden secuencias de acidos nucleicos y aminoacidos. Particularmente, se proporcionan las secuencias de nucleotidos (SEQ ID NO: 1 3 o 4) y secuencias de aminoacidos (SEQ ID NO:2) para un polipeptido de maiz semejante a CLAVATA3 (semejante a CLV3). Se proporcionan metodos para la expresion de las secuencias semejantes a CLV3 en una planta hospedera o celulas de planta para modular el desarrollo de la planta y/o las rutas de desarrollo. Los metodos de la invencion encuentran uso en controlar o modular la division, diferenciacion y desarrollo celular. En particular, las secuencias de la presente invencion encuentran uso en modular el desarrollo del meristemo. Tambien se proporcionan plantas transformadas, celulas, tejidos y semillas de planta.

Description

SECUENCIAS DE POLINUCLEOTIDOS SEMEJANTES A CLAVATA 3 DE MAIZ Y METODOS DE USO CAMPO DE LA INVENCION La invención se relaciona al campo de la manipulación genética de plantas, particularmente la modulación de la actividad génica y el desarrollo en plantas. ANTECEDENTES DE LA INVENCION Las hojas y los meristemos axilares que generan ramas y flores son iniciados en patrones regulares a partir del meristemo apical de retoño. Las células del ápice del meristemo apical de retoño sirven como células madre que se dividen para continuamente desplazar a las células hijas a las regiones circundantes, donde son incorporadas en primordios diferenciados de hojas o flores. Los meristemos de esta manera son capaces de regular su tamaño durante el desarrollo al equilibrar la proliferación celular con la incorporación de células en nuevos primordios . Varias mutaciones se han identificado en Árabidopsls que ocasionan agrandamien-to en el meristemo incluyendo, por ejemplo, las mutaciones clava ta (clv) , mgounl y mgoun2, fasciatal y fasciata2 y la mutación completamente fasciada. CLAVATAl (CLV1) es un miembro de una familia específica de planta de quinasas de proteína de receptor que se extiende en la membrana y permite a las células reconocer y responder a su medio ambiente extracelular . CLV2 es una proteina de repetición rica en leucina (LRR) enlazada a la membrana que se enlaza con CLV1. CLV3 se presenta que es un ligando, o una molécula implicada en la síntesis o enlace de ligando que se produce en la región de meristemo apical de retoño. La pérdida de la actividad de CLV1, CLV2 o CLV3 en Arabidopsis ocasiona acumulación de células no diferenciadas en el ápice del retoño, indicando que los genes CLV conjuntamente promueven la transición oportuna de las células madre en rutas de diferenciación o reprimen la división de las células madre, o ambas. La pérdida de actividad de CLV1 o CLV3 en Arabidopsis se presenta como un agrandamiento del meristemo apical de retoño y la generación de órganos extraflorales (Fletcher y colaboradores (1999) Science 283:1911-1914; Taguchi-Shiobare y colaboradores (2001) Genes and Development 15:2755-5766; y, Trotochaud y colaboradores (1999) The Plant Cell 11:393-405). Los meristemos apicales de retoño de p-lantas mutantes clv se agrandan progresivamente a través del desarrollo, tal que en el momento en que la planta hace la transición a la floración, el meristemo frecuentemente ha experimentado fasciación y se agrupa como un montículo en lugar de un punto. La producción de tales meristemos apicales de retoño fasciados mediante una planta mutante clv indica que la función de tipo silvestre de C V1, CLV2 y CLV3 es para restringir la actividad del meristemo apical de retoño. Los mutantes con meristemos apicales de retoño fasciados que se asemejan a aquellos de los mutantes clv también se ha reportado en tomate (Merton y colaboradores (1954) Am. J. Bot. 41:726-32 y Szymkowiak y colaboradores (1992) Plant Cell 4 :1089-100), soya (Yamamoto y colaboradores (2000,) Biochim. Biophys. Acta. 1491:333-40) y maíz (Taguchi-Shiubara y colaboradores (2001) Genes Dev. 15:2755-66). En el maíz, se ha identificado un mutante ear2 fasciado {fea2) (Taguchi-Shiubara y colaboradores (2001) Genes Dev. 15:2755-66) . fea2 codifica una proteína de LRR que es dirigida a la membrana del plasma, sugiriendo que actúa como un receptor y está estrechamente más relacionada con el gen CLV2 de Arabidopsis. Las plantas fea2 desarrollan meristemos más grandes durante la inflorescencia y el desarrollo de retoño floral. Además, los meristemos de inflorescencia de la mazorca muestran severa fasciación, sugiriendo que fea2 normalmente actúa, para limitar el crecimiento de estos meristemos. Además, las plantas fea2 tienen un incremento en el número de órganos florales. Las flores masculinas tienen un incremento en el número de estambres y las flores femeninas tienen un incremento en el número de carpelos. Las plantas fea2 también tienen pedicelos más largos en las espiguitas de la espiguilla, un fenotipo que es similar del fenotipo de pedicelo de flor más largo de los mutantes clv2. Estos resultados sugieren que la ruta CLAVATA está funcionalmente conservada en las especies monocotiledóneas . Es deseable poder controlar el tamaño y la aparición de retoños y meristemos florales, para dar rendimientos incrementados de hojas, flores y frutos. Por consiguiente, un objeto de la invención es proporcionar métodos y composiciones novedosas para la modulación del desarrollo del meristemo. BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención proporciona secuencias de nucleótidos y aminoácidos semejantes a CLAVATA3, (semejante a CLV3) de maíz. Las secuencias de la invención encuentran uso en modular el desarrollo y las rutas de desarrollo, particularmente, modular el desarrollo del meristemo. La presente invención proporciona un polipéptido aislado seleccionado del grupo que consiste de (a) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 2 u 8; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de nucleótidos que comprende la secuencia expuesta en la SEQ ID N0:1, 3, 4 o 7; (c) un polipéptido codi'ficado por una secuencia de nucleótidos que híbrida bajo condiciones severas al complemento de . una secuencia de nucleótidos que comprende las secuencias expuestas en la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7, en donde las condiciones severas comprenden la hibridación en formamida al 50%, NaCl 1M, SDS al 1% a 37°C y un lavado en 0.1 X SSC en 60°C a 65°C (d) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia a la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 2 u 8, en donde la secuencia modula el desarrollo del meristemo y (e) un polipéptido que comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de la SEQ ID NO: 2 u 8. La presente invención además proporciona una molécula de ácido nucleico aislada seleccionada del grupo que consiste de (a) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleotidos expuesta en la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7; (b) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 2 u 8; (c) una molécula de ácido nucleico que comprende por lo menos 15 nucleotidos consecutivos del complemento de la SEQ ID NO:l, 3, 4 o- 7; (d) una molécula de ácido nucleico que comprende · por lo menos 15 nucleotidos consecutivos de la SEQ ID N0:1, 3, 4- o 7; (e) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleotidos que híbrida bajo condiciones severas al complemento .de la secuencia de nucleotidos expuesta en la SEQ ID NO:l, 3 , 4 o 7, en donde las condiciones severas comprenden la hibridación en formamida al 50%, NaCl 1 M, SDS al 1% a 37°C- y un lavado de 0.1 X SSC en 60°C a 65°C; y (f) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia a la secuencia expuesta en la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7, en donde la secuencia codifica un polipéptido que modula el desarrollo del meristemo. Las composiciones de la invención además incluyen células hospederas, plantas, células de plantas y semillas que tienen establemente incorporado en su genoma por lo menos una construcción de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de la invención. Además se proporcionan métodos para hacer tales células, plantas y semillas. Se reconoce que una variedad de promotores serán útiles en la invención, la elección de los cuales dependerá en parte sobre el nivel deseado de expresión de la secuencias de nucleótidos descritas. Se reconoce que los niveles de expresión pueden ser controlados para modular los niveles de expresión en la célula de planta. En particular, los métodos y composiciones . se pueden usar para modular el desarrollo de la planta. Más específicamente, los métodos y composiciones ¦ de la ' invención se pueden usar para modular el desarrollo del meristemo. El método implica transformar establemente una planta con una secuencia de nucleótidos semejante a CLV3 y expresar la secuencia en una planta o célula de planta. También se proporcionan métodos para modular el nivel de un polipéptido en una planta o célula de planta que comprende introducir en la planta o célula de planta una molécula de ácido nucleico de la invención que codifica el polipéptido y expresar la molécula de ácido nucleico durante un tiempo suficiente para modular el nivel del polipéptido. En una modalidad, la secuencia de nucleótidos de la invención está operablemente enlazada a un promotor inducible por sequía. En otros métodos de la invención, el nivel de un polipéptido en una planta o célula de planta se modula al proporcionar una planta que comprende una mRNA que tiene la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 1, 3 o 4 e introducir en la planta o célula de planta una secuencia de nucleótidos que comprende por lo menos 15 nucleótidos consecutivos del complemento en la SEQ ID N0:1, 3 o 4, en donde la secuencia de nucleótidos inhibe la expresión del mRNA en la planta o célula de planta. BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La Figura 1 proporciona una alineación .de secuencia dé aminoácidos de la secuencia semejante a CLAVATA3 del maíz con la secuencia de aminoácidos de CLAVATA3 de Arabidopsls. La secuencia superior en la alineación corresponde a los aminoácidos 57 a 91 de la SEQ ID NO: 2, mientras que la secuencia de fondo corresponde a los aminoácidos 53 a 88 del Acceso de GenBank No. Q98ZF04 (SEQ ID N0:5). La Figura 2 proporciona niveles de expresión de ortólogos de maíz de CLV3 y CLV2 en mazorcas inmaduras g completas de líneas endogámicas de mazorca larga (LE) y mazorca corta (SE) en dos etapas vegetativas, Vil y V12. La Figura 3A proporciona la secuencia de ácido nucleico de la secuencia semejante a CLAVATA3 de cDNA de la invención (SEQ ID N0:1) y la Figura 3B proporciona la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 2). La región de 14 aminoácidos conservada comúnmente encontrada en los homólogos de CLAVATA3 (Cock y colaboradores (2001) Plant Physiology 126:939-942) corresponde a los aminoácidos 73 a 87 de la SEQ ID NO: 2 y está subrayada en la Figura 3B. La Figura 4A proporciona la ' secuencia de ácido nucleico de un fragmento genómico que contiene el gen CLAVATA3. El fragmento genómico contiene dos intrones ( similarmente colocados al gen CLV3 de Arabidopsis) que son · indicados por letras minúsculas cursivas y subrayadas. La secuencia de codificación del fragmento genómico con los intrones removidos se proporciona en- la Figura ' 4B y corresponde a la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 3. La Figura 5 (a, b, c y d) ilustra la expresión constitutiva de zmCLV3 en plantitas jóvenes de Arabidopsis sp. Esto ocasiona una detención del desarrollo de SAM en el tipo silvestre y en los residuos antecedentes mutantes de clv3 limitando el número de hojas en crecimiento a unas cuantas. La Figura 5a muestra 35S::zmCLV3 en clv3-l, 5b muestra otra línea transgénica de 35S::zmCLV3 en clv3-l, 5c muestra 35S : : zmCLV3 en el tejido de tipo silvestre y 5d muestra 35S::Esrl en clv3-l donde varias hojas en crecimiento jóvenes se pueden observar similar al tipo silvestre solo. La Figura 6 (a, b y e) muestra plantas de Arabidopsis con expresión constitutiva de zmCLV3 que tienen un fenotipo similar a wuschel que es esencialmente un fenotipo equivalente de la expresión constitutiva del atCLV3 (Brand y colaboradores (2000) Science 289:617-619). La Figura 6a es una fotografía del tipo silvestre (dos charolas a la izquierda) y clv3-l (dos charolas a la derecha) de plantas que crecen con (dos charolas al frente) y sin (dos charolas atrás) transformación con zmCLV3. La Figura 6b es una vista cercana de 35S::zmCLV3 en el tejido de tipo silvestre y la Figura 6C es una vista cercana de 35S : : zmCLV3 en el tejido clv3-l. La Figura 7 es una representación fotográfica del requerimiento de actividad de ¦ CLVl para la expresión · del fenotipo wuschel' (causado por la expresión constitutiva zmCLV3) . La caja de plantas a la izquierda es 35S : : zmCLV3 en el tejido de tipo silvestre, la caja de plantas central es 35S : : zmCLV3 en el tejido de planta clv3-l, y la caja de plantas a la derecha es 35S::zmCLV en clvl-4. La Figura 8 es la alineación de secuencia de proteína derivada de CLUSTALW del arroz (SEQ ID NO: 8) y del maíz (SEQ ID NO: 2) semejante a CLV3 con la secuencia de proteína CLV3 de Arabidopsis (Acceso de GenBank No. Q98ZF04) usando ajustes de error. ? cuadro de rojo muestra aminoácidos idénticos, azul muestra aquellos aa idénticos entre dos de las tres secuencias, los cuadros verde y gris muestran igualaciones de aminoácidos sustituidos conservativos . DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Revisión Las composiciones de la presente invención comprenden secuencias de ácidos nucleicos y aminoácidos.. Particularmente, se proporcionan las secuencias de nucleótidos (SEQ ID NO:l, 3 o 4) y la secuencia de aminoácidos (SEQ - ID NO: 2) para un polipéptido semejante a CLAVATA3 (semejante a CLV3) de maíz. El polipéptido semejante a CLV3 de la presente invención es aproximadamente de la ~ misma longitud como CLAVATA3 de Arabidopsis (Fletcher y colaboradores (1999) Science 283:1911-1914), y, como se muestra en la Figura 1, las secuencias de la presente invención comparten homología con la secuencia de aminoácidos CLAVAIA3 de Arabidopsis. La secuencia superior^ en la alineación de la Figura 1 corresponde a los aminoácidos 57 a 91 del polipéptido semejante a CLV3 se maíz (SEQ ID N0:2), mientras que la secuencia de fondo corresponde a los aminoácidos 53 a 88 del Acceso de BenBank No. Q98ZF04 (SEQ ID NO:5). El polipéptido semejante a CLV3 de la presente invención además contiene una región conservada de 14 aminoácidos que está presente en CLV3 de Arabidopsis. Esta región conservada corresponde a los aminoácidos 72 a 85 de la SEQ ID N0:2. La presente invención es solamente el otro ortólogo funcional de CLV3 de Arabidopsis conocido hasta la fecha. Un programa de predicción de secuencia de señal, SignalP v 1.1 predice la presencia y ubicación de los sitios de segmentación del péptido de señal en las secuencias de aminoácidos de diferentes organismos: procariotas Gram positivas, procariotas Gram negativas y eucariotas . El método incorpora una predicción de los sitios de segmentación y una predicción del péptido de señal/péptido no de señal basado en una combinación de varias redes neurales artificiales (Nielsen y colaboradores (1997) Int. J. Neural Sys 8:581-599). Usando SignalP v 1.1 para las secuencias de proteina semejante a CLV3 de maiz y CLV3 de Arabidopsis, se mostró .que ambas tienen una secuencia de señal altamente predictiva en aproximadamente los primeros 20 aminoácidos. La secuencia de señal es importante en dirigir el polipéptxdo a la superficie celular después de su segmentación. Se conoce que el CLV3 de Arabidopsis es transportado al espacio extracelular (Rojo y colaboradores (2002) Plant Cell, 14:989-77). Cuando se compara con la secuencia de cDNA semejante a CLV3 (SEQ ID NO:l), la secuencia genómica (SEQ ID NO: 4) de la región transcrita semejante a CLV3 muestra la presencia de dos Intrones (SEQ ID NO: 4 en 238-335, y 415-525) lo mismo que aquel del gen CLV3 de Arabidopsis . Las secuencias genómicas de cuatro lineas endogámicas de maíz muestran que las secuencias de codificación semejantes a CLV3 son idénticas pero algunos polimorfismos de secuencia existen en los intrones, 5' ÜTR y 3' UTR-. Para dos lineas endogámicas de maíz A y B, las mazorcas tienen un número bajo de flósculos por hilera de granos mientras que las dos lineas restantes, C y D, tienen un número significativamente más alto de flósculos por hilera de granos. La comparación de las secuencias genómicas de A y B muestran que ellas son 99.8% homologas (2 de cada 826 diferencias de nucleótidos) mientras que las secuencias genómicas semejantes a CLV3 de ya sea A o B comparadas con C y D muestran 97.3 y 96.8% de homología (22/826 y 27/826 diferencias de nucleótidos) , respectivamente. Esto sugiere que las dos líneas endogámicas con números menores de flósculos por hilera y mazorcas cortas tienen un alelo muy similar del gen semejante a CLV3. Los alelos de mazorca corta son significativamente diferentes de los alelos semejantes a CLV3 de las líneas endogámicas C y D, ambos que tienen número más alto de flósculos por hilera y una tendencia hacia mazorcas más largas. La secuencia semejante a CLV3 de la presente invención se aisló de una biblioteca de maíz (5 días después de la maduración de los óvulos) que incluyó tejidos meristemáticos . Como es discutido en detalle adicional enseguida, la expresión de la secuencia semejante a CLV3 de la presente invención se presentó que es más activa en la linea de maíz de élite de mazorca corta que en una linea de mazorca larga. Un homólogo de CLV3 seria previsto que es más aotivo en el tejido de mazorca inmaduro de una linea de mazorca corta que en una linea de mazorca larga, puesto que esa secuencia regularía negativamente los genes de mantenimiento del meristemo, tales como, por ejemplo, un homólogo de maíz USCHEL o P0LTERGEI3T . Para una revisión ver, por ejemplo, Fletcher y colaboradores (2002) Annu. Rev. Plant Biol. 53:45-66. Adicionalmente, la hibridación de RNA in situ (Jackson y colaboradores (1991) En: Molecular Plant Pathology: A Practical Guide (DJ Bowles, SJ Gurr> & McPhereson, eds) . Oxford üniversity Press) del. gen semejante a CLV3 en mazorcas en' desarrollo de maíz claramente reveló la evidencia del mRNA semejante a CLV3 en los meristemos de los flósculos de la mazorca excipiente como es previsto por la similitud en la función al CLV3 de Arabidopsis. Dos líneas de maíz 'mutantes insercionales mediante el elemento transposable Mutator se identificaron en el gen semejante a CLV3 mediante el método esencialmente como es' descrito (Bensen y colaboradores (1995) Plant Cell 7:75-84) que produce mazorcas levemente fasciadas similares a lo que se observó por las lineas mutantes £ea2 (Taguchi-Shiubara y colaboradores (2001) Genes Dev. 15:2755-66). Consecuentemente, estos datos sustentan que el semejante al CLV3 de maíz de la presente invención es un homólogo funcional de CLV3. Por lo tanto, se proporcionan métodos para la expresión de las secuencias semejantes a CLV3 en células hospederas, plantas hospederas o células de plantas para modular el desarrollo de la planta y/o rutas de desarrollo. Así la invención encuentra uso en controlar o modular la división, diferenciación y desarrollo celular. En particular, las secuencias de la presente invención encuentran uso en modular el desarrollo del meristemo. Como es discutido en detalle adicional después, por "modular el desarrollo del meristemo" se propone cualquier alteración en el fenotipo del meristemo incluyendo, por ejemplo, una alteración en la formación y el mantenimiento del meristemo y/o una alteración del tamaño y la aparición de los meristemos de retoño y florales. Tales modulaciones en el desarrollo del meristemo pueden ¦ dar por resultado un incremento o una disminución en el tamaño del meristemo y/o un incremento o disminución en el rendimiento de hojas, flores y/o frutos. Composiciones Las composiciones de la invención incluyen secuencias de ácidos nucleicos y de aminoácidos que están implicadas en modular el desarrollo de la planta y las rutas de desarrollo. En particular, la presente invención proporciona moléculas de ácido nucleico aisladas que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican las secuencias de aminoácidos mostradas en la SEQ ID NO: 2. Además se proporcionan polipéptidos que tienen una secuencia de aminoácidos codificada por una molécula de ácido nucleido descrito en la presente, por ejemplo aquellos expuestos en las SEQ ID NOS:l, 3 o 4 y fragmentos y variantes de los mismos . La invención comprende composiciones de ácido nucleico o de proteina aislada o sustancialmente purificada. Una molécula de ácido nucleico o proteina "aislada" o "purificada", o porción biológicamente activa de la misma, está sustancial o esencialmente libre de componentes que normalmente acompañan o interactúan con la molécula- de .ácido nucleico o proteina como se encuentra en su ambiente en que se presenta naturalmente. Así, una molécula de ácido nucleico o proteina aislada o purificada está sustancialmente libre de otro material celular, o medio de cultivo cuando se produce mediante técnicas recombinantes, o sustancialmente libre de precursores químicos u otras sustancias químicas cuando se sintetiza químicamente. De preferencia, un ácido nucleico "aislado" está libre de secuencias (de preferencia secuencias de codificación de proteina) que naturalmente flanquean el ácido nucleico (es decir, secuencias localizadas en los extremos 5' y 3' del ácido nucleico) en el DNA genómico del organismo del cual se deriva el ácido nucleico. Por ejemplo, en varias modalidades, la molécula de ácido nucleico aislada puede contener menos de aproximadamente 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0.5 kb o 0.1 kb de secuencias de nucleótidos que naturalmente flanquean la molécula de ácido -nucleico en el DNA genómico de la célula de la cual se deriva el ácido nucleico. Una proteina que está sustancialmente libre de material celular incluye preparaciones de proteina que tienen menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5% o 1% (en peso seco) de proteina contaminante. Cuando la proteina de la invención o porción biológicamente activa de la misma es producida recombinantemente, de preferencia el medio de cultivo representa menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5% o 1% (en peso seco) de precursores químicos o sustancias químicas no de interés de la proteína. Los fragmentos y variantes de las secuencias de nucleótidos y proteínas descritas, codificadas de esta manera, también están comprendidas por la presente invención. Por "fragmento" se propone una porción de la secuencia de nucleótidos o una porción de la secuencia de aminoácidos y por consiguiente, la proteína codificada de esta manera. Los fragmentos de una secuencia de nucleótidos pueden codificar fragmentos de proteína que retienen la actividad biológica de la proteína nativa y por consiguiente enlazar receptores, influenciar en la transducción de. la señal y/o retener la habilidad para modular el desarrollo del meristemo (es decir, impiden el agrandamiento del meristemo) . Alternativamente, los fragmentos de una secuencia de nucleótidos que son útiles como sondas de hibridación generalmente no codifican proteínas de fragmento reteniendo la actividad biológica. Así, los fragmentos de una secuencia de nucleótidos pueden variar de por ,1o menos aproximadamente 20 nucleótidos, aproximadamente 50 nucleótidos, aproximadamente 100 nucleótidos, aproximadamente 150, aproximadamente 200, aproximadamente 250, aproximadamente 300, aproximadamente 350, aproximadamente 400, aproximadamente 450, aproximadamente 500 y hasta la secuencia de nucleótidos de longitud completa que codifica las proteínas de la invención. Alternativamente, el fragmento puede comprender · los nucleótidos 1-50,' 50-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-350, 350-400, 400-450 y 450-500. Otros fragmentos del polipéptido de la SEQ ID NO: 2 incluyen los aminoácidos 1-20, aminoácidos 21-40, aminoácidos 41-60, aminoácidos 61-80 y aminoácidos 81-94. Un fragmento de una secuencia de nucleótidos semejante a CLV3 que codifica una porción biológicamente activa de una proteína semejante a CLV3 de la invención codificará por lo menos 15, 25, 30, 50, 60, 70, 80, 90 o 96 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos presentes en una proteina semejante a CLV3 de longitud completa de la invención (por ejemplo, 96 aminoácidos para la SEQ ID NO:2). Los fragmentos de una secuencia de nucleótidos semejante a CLV3 que son útiles como sondas de hibridación o IQS cebadores de PCR generalmente no necesitan codificar una porción biológicamente activa de una proteina semejante a CLV3. Asi, un fragmento de una secuencia de nucleótidos semejante a CLV3 puede codificar una porción biológicamente activa de una proteina semejante a CLV3, o puede ser un fragmento que puede ser usado como una sonda de hibridación o cebador de PCR usando los métodos descritos después. Una porción biológicamente activa de una proteina semejante a CLV3. se puede preparar al aislar una porción de una -de las secuencias de nucleótidos semejantes a CLV3 de. la invención, al- expresar la porción codificada dé la proteina semejante a CLV3, (por ejemplo mediante expresión recombinante in vitro) y al estimar la actividad de la porción codificada de la proteina semejante a CLV3. Las moléculas de ácido nucleico que son fragmentos de una secuencia de nucleótidos semejante a CLV3 comprenden por lo menos 16, 20, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 nucleótidos, o hasta el número de nucleótidos presentes en una secuencia de nucleótidos semejante a CLV3 de longitud completa descrita en la presente (por ejemplo, 740 nucleótidos, 282 nucleótidos u 826 nucleótidos para las SEQ ID NOS:l, 3 o 4, respectivamente). Por "variantes" se proponen sustancialmente secuencias similares. Para secuencias de nucleótidos, las variantes conservativas incluyen aquellas secuencias que, debido a la degeneración del código genético, codifican la secuencia de aminoácidos de uno de los polipéptidos semejantes a CLV3 de la invención. Las variantes alélicas que se presentan naturalmente, tales como éstas, se pueden identificar con el uso de técnicas de biología molecular bien conocidas, como por ejemplo, con técnicas de reacción de cadena de polimerasa (PCR) e hibridación, como se resumen después en la presente. Las secuencias de nucleótidos variantes también incluyen secuencias de nucleótidos sintéticamente derivadas, tales como aquellas generadas, por ejemplo, al utilizar mutagénesis dirigida al sitio, pero que. todavía codifican una proteína semejante a CLV3 de la invención. Generalmente, las variantes de una- secuencia de nucleótidos particular de la invención tendrá por lo menos. 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, generalmente por lo menos 75%, 80%, 85%, de preferencia por lo menos aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% y más de preferencia por lo menos aproximadamente 98%, 99% o más identidad de secuencia a aquella secuencia de nucleótidos particular, como es determinado mediante programas de alineación de secuencia descritos en otra parte en la presente, utilizando parámetros de error. Por proteina "variante" se propone una proteina derivada de la proteina natural mediante supresión (llamado truncamiento) o adición de uno q más aminoácidos al extremo N-terminal y/o C-terminal de la proteina natural; supresión o adición de uno o más aminoácidos en uno o más sitios en la proteina natural; o sustitución de uno o más aminoácidos en uno o más sitios en la proteina natural. Las proteínas variantes comprendidas por la presente invención son biológicamente activas, es decir, continúan teniendo la actividad biológica deseada de la proteína natural, esto es, enlazan receptores, influyen en la transducción de la señal y/o retienen la habilidad para modular el desarrollo del meristemo (es decir, previenen el agrandamiento del meristemo) como es descrito en la presente. Tales variantes pueden resultar, por ejemplo, del polimorfismo genético- o de la manipulación humana. Las variantes biológicamente activas de una proteína semejante a CLV3 nativa de la invención tendrán por lo menos 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, generalmente por lo menos aproximadamente 75%, 80%, 85%, de preferencia por lo menos aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% y más dé preferencia por lo menos aproximadamente 98%, 99% o más identidad de secuencia a la secuencia de aminoácidos para la proteina natural, como es determinado mediante los programas de alineación de secuencia descritos en otra parte en la presente, utilizando parámetros de error. Una variante biológicamente activa de una proteina de la invención puede diferir de aquella proteina por tan pocos "como 1-15 residuos de aminoácido, tan pocos como 1-10, tal como 6-10, tan pocos como 5, tan pocos como 4, 3, 2 o aun 1 residuo de aminoácido. Las proteínas de la invención se pueden alterar de varias maneras incluyendo sustituciones, supresiones, truncamientos e inserciones de aminoácidos.' Métodos para tales manipulaciones son generalmente conocidos en la técnica. Por ejemplo, las variantes de secuencias de aminoácidos de las proteínas semejantes a CLV3 se pueden preparar mediante mutaciones en el DNA. Métodos para mutagénesis y alteraciones de secuencias de nucleótidos son bien conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Kunkel (1985) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 52:488-492; Kunkel y colaboradores (1987) Methods in Enzymol. 154:367-382; la · patente norteamericana No . 4 , 873 , 192 ; Walker y Gaastra, eds . (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York) y las referencias citadas en las mismas. Guía para sustituciones apropiadas de aminoácidos que no afectan la actividad biológica de la proteína de interés, se puede encontrar en el modelo de Dayhoff y colaboradores (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Nati. Biomed. Res. Found. , Washington, D.C.), incorporada en la presente por referencia. Se pueden preferir sustituciones conservativas, tal como el intercambio de un aminoácido con otro que tiene propiedades similares. Asi, los genes y las secuencias de nucleótidos de la invención incluyen tanto las secuencias que se presentan naturalmente asi como las formas imitantes. Del mismo modo, las proteínas de la invención comprenden tanto las proteínas que se presentan naturalmente como las variaciones y formas modificadas de las mismas. Tales variantes continuarán teniendo la actividad deseada (es decir, enlazar receptors, influir en la transducción de la señal y/o retener la habilidad para modular el desarrollo del meristemo (es. decir, prevenir el agrandamiento del meristemo) ) . Obviamente, las mutaciones que serán hechas en el DNA que codifica la variante, no deben colocar la secuencia fuera del . cuadro de lectura y de preferencia no crearán regiones complementarias que podrían producir una estructura de mRNA secundaria. Ver, la Publicación de. Solicitud de Patente EP No. 75, 444.- Las supresiones, inserciones y sustituciones' de Tas secuencias de proteína comprendidas en la presente, no se esperan que produzcan cambios radicales en las características de la proteína. Sin embargo, cuando es difícil predecir el efecto exacto de la sustitución, supresión o inserción por adelantado, un experto en la técnica apreciará que el efecto será evaluado mediante análisis de selección rutinarios. Las plantas que exhiben desarrollo del meristemo modulado se pueden seleccionar usando la observación visual. Ver, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 5,637,785; 6,002,069; 5,859,338; 6,025,483 y Fletcher y colaboradores (1999) Science 283:1911-1914, todas las cuales son incorporadas en la presente por referencia. Las secuencias de nucleótidos y proteínas variantes también comprenden secuencias y proteínas derivadas de un procedimiento mutagénico y recombinogénico tal como el entremezclamiento de DNA. Con tal procedimiento, una o más secuencias de codificación semejantes a CLV3 diferentes se pueden manipular para crear una nueva secuencia semejante a CLV3 que posee las propiedades deseadas. De esta manera, bibliotecas de polinucleótídos recombinantes son generadas a partir de una población de polinucleótídos de secuencia relacionada que comprenden regiones de secuencia que tienen identidad de secuencia sustancial y pueden ser recombinadas homólogamente in vitro o in vivo. Por ejemplo, utilizando este procedimiento, las porciones de secuencia que codifican un dominio de interés pueden ser entremezcladas entre el gen semejante a CLV3 de la invención y otras secuencias conocidas implicadas en el mantenimiento o desarrollo del meristemo (tal como otros homólogos de CLV3) para obtener una nueva codificación de gen para una proteina con una propiedad mejorada de interés, tal como una Km incrementada en el caso de una enzima. Las estrategias para tal entremezclamiento de DNA son conocidas en la técnica. Ver, por ejemplo, Stemmer (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 51:10747-10751; Stemmer (1994) Nature 370:389-391; Crameri y colaboradores (1997) Nature Biotech. 15:436-438; Moore y colaboradores (1997) J. Mol. Biol. 272:336-347 ; Zhang y colaboradores (1997) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 54:4504-4509; Crameri y colaboradores (1998) Nature 351:288-291; y las patentes norteamericanas Nos. 5,605,793 y 5,837,458. Los siguientes términos son utilizados para describir las relaciones de secuencia entre dos o más ácidos nucleicos o polinucleótidos : (a) "secuencia de referencia", (b) "ventana de comparación", (c) "identidad de secuencia", (d) "porcentaje de identidad de secuencia" y (e) "identidad sustancial". (a) Como se utiliza en la presente, "secuencia de referencia" es una secuencia definida utilizada como una base para la comparación de secuencia. Una secuencia de referencia puede ser un subconjunto o la totalidad de una secuencia especificada; por ejemplo, como un segmento de una secuencia de cDNA o de gen de longitud completa, o la secuencia de cDNA o de gen completa. (b) Como se utiliza en la presente, "ventana de comparación" hace referencia a un segmento contiguo y especificado de una secuencia de polinucleótidos, en donde la secuencia de polinucleótidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o supresiones (es decir, espacios) comparada con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o supresiones) para la alineación óptima de las dos secuencias. Generalmente, la ventana de comparación es de por lo menos 20 nucleótidos contiguos en longitud y opcionalmente puede ser de 30, 40, 50, 100 o más larga. Aquellos expertos en la técnica entienden que para evitar una alta similitud a una secuencia de referencia debido a la inclusión de espacios en la secuencia de polinucleótidos, una sanción de espacio es típicamente introducida y es sustraída del número de igualaciones. Métodos de alineación de secuencias ' para comparación son bien conocidos en la técnica- Así, la determinación del por ciento de identidad de secuencia entre cualquiera de dos secuencias se puede realizar utilizando un algoritmo matemático. Ejemplos no limitativos de tales algoritmos matemáticos son el algoritmo de Myers y Miller (1988) CABIOS 4:11-17; el algoritmo de homología local de Smith y colaboradores (1981) Adv. Appl. Math. 2:482; el algoritmo de alineación de homología de Needleman y Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443-453; el método de búsqueda-para-similitud de Pearson y Lipman (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. 85:2444-2448; el algoritmo de arlin y Altschul (1990) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 872264, modificado como en Karlin y Altschul (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:5873-5877. Las implementaciones o ejecuciones en computadora de estos algoritmos matemáticos se pueden utilizar para comparación de secuencias, para determinar la identidad de secuencia. Tales implementaciones incluyen, pero no están limitadas a: CLUSTAL en el programa ?C/Gene (disponible de Intelligenetics, Mountain Vie , California) ; el programa ALIGN (Versión 2.0) y GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA Y TFAS A en el Wisconsin Genetics Software Package, Versión 8 (disponible de Genetics Computer Group (programas GCG® (Accelrys, Inc., San Diego, CA) ) Las alineaciones utilizando estos programas se pueden realizar utilizando los parámetros de error. El programa CLUSTAL es bien descrito por Higgins y colaboradores (1988) Gene 73:237-244 (1988); Higgins y colaboradores (1989) CABIOS 5:151-153; Corpet y colaboradores (19&8) Nucleic Acids Res. 15:10881-90; Huang y colaboradores- (1992) CABIOS 8:155-65 y Pearson y colaboradores (1994) Meth. Mol. Biol. 24:307-331. El programa ALIGN está basado en el algoritmo de Myers y Miller (1988) supra. Una tabla de residuo de peso PAM20, una sanción de longitud de espacio de 12 y una sanción de espacio de 4 se pueden utilizar con el programa ALIGN cuando se comparan secuencias de aminoácidos. Los programas BLAST de Altschul y colaboradores (1990) J. Mol. Biol. 215:403 están basados en el algoritmo de Karlin y Altschul (1990) supra. Las búsquedas de nucleótidos BLAST se pueden realizar con el programa BLASTN, registro = 100, longitud de palabra = 12, para obtener secuencias de nucleótidos homologas a una secuencia de nucleótidos que codifica una proteina de la invención. Las búsquedas de proteina BLAST se pueden realizar con el programa BLASTX, registro = 50, longitud de palabra = 3, para obtener secuencias de aminoácidos homologas a una proteina o polipéptido de la invención. Para obtener alineaciones espaciadas para propósitos de comparación, se puede utilizar Gapped BLAST (en BLAST 2.0) como es descrito en Altschul y colaboradores (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389. Alternativamente, se puede utilizar PSI-BLAST (en BLAST 2.0) para realizar una búsqueda iterativa que detecta relaciones distantes entre las moléculas. Ver- Altschul y colaboradores (1997) supra. Cuando se utilizan BLAST, Gapped BLAST, PSI-BLAST,. se pueden utilizar los parámetros de error de ' los programas respectivos (por ejemplo, . BLASTN para secuencias de nucleótidos, BLASTX para proteínas) . La alineación también se puede realizar manualmente mediante inspección . A menos que se mencione de otra manera, los valores de identidad/similitud de secuencia proporcionados en la presente, se refieren al valor obtenido utilizando GAP Versión 10 que utiliza los siguientes parámetros: % de identidad utilizando GAP Peso de 12 y Peso de Longitud de 3; % de similitud utilizando Gap Peso de 12 y Peso de Longitud de 4, o cualquier programa equivalente. Por "programa equivalente" se propone cualquier programa de comparación de secuencia que, para cualquiera de dos secuencias en cuestión, genera · una alineación que tiene igualaciones idénticas de residuo de nucleótido o aminoácido y un por ciento idéntico de identidad de secuencia, cuando se compara a la alineación correspondiente generada por GAP Versión 10. GAP utiliza el algoritmo de Needleman y unsch (1970) J. Mol. Biol. 48: 443-453, para encontrar la alineación de dos secuencias completas que maximiza el número de igualaciones y minimiza el número de espacios. GAP considera todas las alineaciones posibles y las posiciones de espacio y crea la alineación con el número más grande de bases igualadas y los pocos espacios. Esto permite la provisión de una sanción de creación de espacio y una sanción de extensión de espacio en unidades de bases igualadas. GAP debe sacar provecho del número de igualaciones de la sanción de creación de espacio para cada espacio que éste inserta. Si se selecciona una sanción de extensión de espacio mayor que cero, GAP además, debe sacar provecho por cada espacio insertado de la longitud de los intervalos de espacio de la sanción de extensión de espacio. Los valores de sanción de creación de espacio de error y los valores de sanción de extensión de espacio en la Versión 10 del Wisconsin Genetics Software Package para secuencias de proteina son 8 y 2, respectivamente. Para secuencias de nucleótidos, la sanción de creación de espacio de error es 50, mientras que la sanción de extensión de espacio de error es 3. Las sanciones de creación de espacio y de extensión de espacio se pueden expresar como un número entero seleccionado del grupo de números enteros que consiste de 0 a 200. Asi, por ejemplo, las sanciones de creación de espacio y de extensión de espacio pueden ser 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 o más grande. GAP presenta un elemento de la familia de mejores alineaciones. Pueden existir muchos elementos de esta familia, pero ningún otro elemento tiene una mejor calidad. GAP exhibe cuatro perfiles de mérito para las alineaciones: Calidad, Relación, Identidad y Similitud. La Calidad es la métrica maximizada con. el fin de alinéar las secuencias. La Relación, es la calidad dividida entre el número de bases en el segmento más corto. Por ciento de Identidad es el por ciento de los símbolos que realmente se igualan.. Por ciento de Similitud es el por ciento de los símbolos que son similares. Los símbolos que están a través de los espacios son ignorados. Una similitud es registrada cuando el valor de la matriz de registro para un par de símbolos es mayor o igual a 0.50, el umbral de similitud. La matriz de registro utilizada en la Versión 10 del isconsin Genetics Software Package es BLOSU 62 (ver Henikoff y Henikoff (1989) Prop. Nati. Acad. Sci. USA 59:10915) . (c) Como se utiliza en la presente, · "identidad de secuencia" o "identidad" en el contexto de dos secuencias de ácido nucleico o de polipéptido, hace referencia a los residuos en las dos secuencias que son los mismos cuando se alinean para correspondencia máxima sobre una ventana de comparación especificada. Cuando el porcentaje de identidad de secuencia se utiliza con referencia a proteínas, se reconoce que las posiciones del residuo que no son idénticas frecuentemente difieren por sustituciones de aminoácido conservativas, donde los residuos de aminoácido son sustituidos por otros residuos de aminoácido con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad) y por lo tanto no cambian las propiedades funcionales de la molécula. Cuando las secuencias difieren en sustituciones conservativas, el por ciento de identidad de secuencia se puede ajusfar hacia arriba para corregir la naturaleza conservativa de la sustitución. Las secuencias que difieren por tales sustituciones conservativas se dicen que tienen "similitud de secuencia" o "similitud". Los medios para hacer este ajuste son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica. Típicamente, esto implica registrar una sustitución conservativa como una desigualación parcial antes que completa, para incrementar de esta manera el porcentaje de identidad de secuencia. Asi, por ejemplo, donde a un aminoácido idéntico se le da un registro de 1 y a una sustitución no conservativa se le da un registro de cero, a una sustitución conservativa se le da un registro entre cero y 1. El registro de sustituciones conservativas se calcula, por ejemplo, como se implementa en el programa PC/GENE (Intelligenetics, Mountain View, California) . (d) Como se utiliza en la presente, "porcentaje de identidad de secuencia" significa el valor determinado al comparar dos secuencias óptimamente alineadas sobre una ventana de comparación, en donde la porción de la secuencia de polinucleótidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o supresiones (es decir, espacios) comparada con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o supresiones) para la alineación óptima de las dos secuencias. El porcentaje es calculado al' determinar el número de posiciones en las cuales la base de ácido nucleico idéntica o el residuo de aminoácido se presenta en ambas secuencias para producir el número de posiciones igualadas, al dividir el número de posiciones igualadas entre el número total de posiciones en la ventana de comparación y al multiplicar el resultado por 100 para producir el porcentaje de identidad de secuencia. (e) (i) El término "identidad sustancial" de secuencias de polinucleótidos significa que un polinucleótido comprende una secuencia que tiene por- lo menos 70% de identidad de secuencia, de preferencia por lo menos 80%, más de preferencia por lo menos 90% y mucho más de preferencia por lo menos 95%, comparada con una secuencia de referencia utilizando uno de los programas de alineación descritos, utilizando parámetros estándares. Un experto en la técnica reconocerá que estos valores pueden ser apropiadamente ajustados para determinar la identidad correspondiente de proteínas codificadas por dos secuencias de nucleótidos al tomar en cuenta la degeneración del codón, similitud del aminoácido, posicionamiento del cuadro de lectura y similares. La identidad sustancial de las secuencias de aminoácidos para estos propósitos, normalmente significa identidad de secuencia de por lo menos 60%, más de preferencia por lo menos 70%, 80%, 90% y mucho más de preferencia por lo menos 95%. Otra indicación de que las secuencias de nucleótidos son sustancialmente idénticas es si dos moléculas se hibridan entre sí bajo condiciones severas o rigurosas. Generalmente, las condiciones severas son seleccionadas para ser aproximadamente 5°C menor que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia específica a una intensidad iónica y pH definidos. Sin embargo, las condiciones severas comprenden temperaturas en la gama de aproximadamente 1°C a aproximadamente 20 °C menor que la Tm, dependiendo del grado deseado de severidad, como se aprueba de otra manera en la presente. Los ácidos nucleicos que no se hibridan entre si bajo condiciones severas todavía son sustancialmente idénticos si los polipéptidos que ellos codifican son siistancialmente idénticos. Esto puede ocurrir, por ejemplo, cuando una copia de ácido nucleico es creada utilizando la degeneración de codón máxima permitida por el código genético. Una indicación de que dos secuencias de ácidos nucleicos son sustancialmente idénticas, es " cuando el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico es reactivo inmunológicamente transversal con el polipéptido codificado por el segundo ácido nucleico. (e) (ii) El término "identidad sustancial" en el contexto de un péptido, indica que un. péptido comprende una secuencia con por lo menos 65% o 70% de identidad de secuencia a una secuencia de · referencia, de preferencia 80%, más de preferencia 85%, mucho más de preferencia por lo menos 90% o 95% identidad de secuencia a la secuencia de referencia sobre una ventana de comparación especificada. De preferencia, la alineación óptima es conducida utilizando el algoritmo de alineación de homología de Needleman y Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 45:443-453. Una indicación de que dos secuencias de péptidos son sustancialmente idénticas es que un péptido es inmunológicamente reactivo con los anticuerpos resaltados contra el segundo péptido. Asi, un péptido es sustancialmente idéntico a un segundo péptido, por ejemplo, donde los dos péptidos difieren solamente por una sustitución conservativa. Los péptidos que son "sustancialmente similares" comparten secuencias como se mencionó anteriormente, excepto que las posiciones de residuos que no son idénticas pueden diferir por cambios de aminoácidos conservativos . Las secuencias de nucleótidos de la invención se pueden usar para aislar secuencias correspondientes de otros organismos, particularmente otras plantas, más particularmente otras monocotiledóneas . De esta manera, los métodos tales como PCR, hibridación, y los semejantes se pueden usar para identificar tales secuencias basadas en su homología de secuencia a las secuencias expuestas en la presente. Las secuencias aisladas basadas en su identidad de s.ecuencia a las secuencias semejantes a CLV3 completas expuestas en la presente o a fragmentos de las mismas están comprendidas por la presente invención. Tales secuencias incluyen secuencias que son ortólogas de las secuencias descritas. Por "ortólogos" se proponen genes derivados de un gen ancestral común y que se encuentran en diferentes especies como un resultado de la evolución de las especies. Los genes encontrados en diferentes especies se consideran ortólogos cuando sus secuencias de nucleótidos y/o sus secuencias de proteina codificadas comparten identidad sustancial como es definido en otra parte en la presente. Las funciones de los . ortólogos son frecuentemente altamente conservadas entre las especies. Asi, las secuencias aisladas que codifican para una proteina semejante a CLV3 y que hibridan bajo condiciones severas a las secuencias semejantes a CLV3 descritas en la presente, o fragmentos de las mismas, están comprendidas por la presente invención. En un procedimiento de PCR, cebadores de oligonucleótidos pueden ser diseñados para uso en las reacciones de PCR para amplificar las secuencias de DNA correspondientes a partir del cDNA o el DNA genómico extraído de cualquier planta de interés. Métodos para diseñar cebadores de PCR y la clonación de PCR son generalmente conocidos, en la técnica y son descritos en Sambrook y colaboradores (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed. Cold Spririg Harbor Laboratory Press, Plainview, New York) . Ver también Innis y colaboradores, eds . (1990) PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Academic Press, New York); Innis y Gelfand, eds. (1995) PCR Strategies (Academic Press, New York); e Innis y Gelfand, eds. (1999) PCR Methods Manual (Academic Press, New York) . Métodos conocidos de PCR incluyen, pero no están limitados a, métodos que utilizan cebadores, en pares, cebadores alojados, cebadores específicos individuales, cebadores degenerados, cebadores específicos de gen, cebadores específicos de vector, cebadores parcialmente desigualados y similares. En las técnicas de hibridación, toda o parte de una secuencia de nucleótidos conocida es utilizada como una sonda que hibridiza selectivamente a otras secuencias ¦ de nucleótidos correspondientes presentes en una población de fragmentos de DNA genómico clonado o fragmentos de cDNA (es decir, bibliotecas genómicas o de cDNA) de un organismo seleccionado. Las sondas de hibridación pueden ser fragmentos de DNA genómico, fragmentos de cDNA, fragmentos "de RNA, u otros oligonucleótidos, y pueden ser marcados con un grupo detectable tal como 32P, o cualquier otro marcador detectable. Así, por ejemplo, las sondas para hibridación se pueden hacer al marcar oligonucleótidos sintéticos basado en las secuencias semejantes a CLV3 de la invención. Métodos para preparación de sondas para hibridación y para construcción de bibliotecas de cDNA y genómicas ' son generalmente conocidos en la técnica y son descritos en Sambrook y colaboradores (198&) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York) . Por ejemplo, la secuencia semejante a CLV3 completa descrita en la presente, o una o más porciones de la misma, se puede utilizar como una sonda capaz de hibridar específicamente a las secuencias de CLV3 correspondientes y RNAs mensajeros. Para lograr la hibridación especifica bajo una variedad de condiciones, las sondas incluyen secuencias que son únicas entre las secuencias semejantes a CLV3 y son de preferencia de por lo menos aproximadamente 10 nucleotidos en longitud, y más de preferencia de por lo menos aproximadamente 15, aproximadamente 20 o aproximadamente 50 nucleotidos en longitud. Tales sondas se pueden utilizar para amplificar las secuencias semejantes a CLV3 correspondientes de una planta seleccionada mediante PCR. Esta técnica se puede utilizar para aislar secuencias de codificación adicionales a partir de una planta deseada o como un análisis de diagnóstico para determinar la presencia de secuencias de codificación en una planta. Las técnicas de hibridación incluyen la selección por hibridación de bibliotecas de DNA en placas (ya sea placas o colonias; ver, por ejemplo, Sambrook y colaboradores (1989) Molecular ¦ Cloning: A Laboratory Manual (2d ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview,. New York) . La · hibridación de tales secuencias se- uede llevar a cabo bajo condiciones severas o rigurosas. Por "condiciones severas" o "condiciones de hibridación severas" se proponen condiciones bajo las cuales una sonda hibridará a su secuencia objetivo a un grado detectablemente más grande que a otras secuencias (por ejemplo, por lo menos 2 veces arriba de la antecedente) . Las condiciones severas son dependientes de la secuencia y serán diferentes en circunstancias diferentes. Al controlar la severidad de la hibridación y/o las condiciones de lavado, las secuencias objetivo que son 100% complementarias a la sonda pueden ser identificadas (sondeo homólogo) . Alternativamente, las condiciones de severidad se pueden ajustar para permitir algo de desigualación en las secuencias, de modo que menores grados de similaridad son detectados (sondeo heterólogo) . Generalmente, una sonda es de menos de aproximadamente 1000 nucleótidos en longitud, de preferencia de menos de 500 nucleótidos en longitud. Típicamente, las condiciones severas serán aquellas en las cuales la concentración de sal es de menos de aproximadamente 1.5 M de ion Na, de manera típica de aproximadamente 0.01 a 1.0 M de concentración de ion de Na (u otras sales) a un pH de 7.0 a 8.3 y la temperatura es de por lo menos aproximadamente 30 °C para sondas cortas (por ejemplo, 10 a 50 nucleótidos) y por- lo menos aproximadamente 50°C para sondas largas (por ejemplo,, más grandes que "50 nucleótidos) . Las condiciones severas o rigurosas también se pueden alcanzar con la adición de agentes desestabilizantes tal como formamida. Condiciones de baja severidad ejemplares incluyen la hibridación con una solución reguladora de - formamida al 30 al 35%, NaCl 1 M, SDS (dodecil sulfato de sodio) al 1% a 37 °C y un lavado en SSC al IX al 2X (SSC al 20X = NaCl 3.0 M/citrato de trisodio 0.3 M) en 50 a 55 °C. Condiciones de moderada severidad ejemplares incluyen la hibridación en formamida al 40 al 45%, N'aCl 1.0 M, SDS al 1% a 37°C y un lavado en SSC al 0.5X al IX en 55 a 60°C. Condiciones de alta severidad ejemplares incluyen la hibridación en formamida al 50%, NaCl' 1 M, SDS al 1% a 37 °C y un lavado en SSC al 0. IX en 60 a 65 °C. .La duración de la hibridación es generalmente de menos de aproximadamente 24 horas, de manera usual aproximadamente 4 a aproximadamente 12 horas. La especificidad es típicamente la función de los lavados de posthibridación, los factores críticos que son la intensidad iónica y la temperatura de la solución de lavado final. Para híbridos de DNA-DNA, la Tm puede ser aproximada de la ecuación de Meinkoth y Wahl (1984) Anal. Biochem 138:261-284: Tm = 81.5°C + 16.6(log M) + 0.41(%GC) - 0.61( form) - 500/L; donde M es la molaridad de cationes monovalentes, ' %GC es el porcentaje de nucleotidos guanosxna y c'itosina en el D A, % .form es el porcentaje de formamida en la solución de hibridación y L es la longitud del híbrido' en pares base. La Tm es la temperatura (bajo la intensidad iónica y el pH definidos) en la cual 50% de una secuencia objetivo complementaria hibridiza a una sonda perfectamente igualada o acoplada. La Tm es reducida por aproximadamente 1°C para cada 1% de desigualación; así, la Tm, la hibridación y/o las condiciones de lavado se pueden ajustar para hibridizar a secuencias de la identidad deseada. Por ejemplo, si se buscan secuencias con =90% de identidad, la Tm- puede ser disminuida 10°C. Generalmente, las condiciones severas son seleccionadas para estar aproximadamente 5°C menor que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia especifica y su complemento a una intensidad iónica y pH definidos. Sin embargo, las condiciones rigurosamente severas pueden utilizar una hibridación y/o lavado a l, 2, 3 o 4°C menor que el punto de fusión térmico (Tm) ; las condiciones moderadamente severas pueden utilizar una hibridación y/o lavado a 6, 7, 8, 9 o 10 °C menor que el punto de fusión térmico (Tm) ; las condiciones de baja severidad pueden utilizar una hibridación y/o lavado a 11, 12, 13, 14, 15 o 20 °C menor que el punto de fusión térmico (Tm) . Utilizando la ecuación,- la hibridación y las composiciones de lavado, y la Tm deseada, aquellos expertos ordinarios en la técnica entenderán que las variaciones en la severidad de hibridación y/o las soluciones de lavado son inherentemente descritas. Si el grado deseado de desigualación da por resultado una Tm de menos de 45°C (solución acuosa) o 32°C (solución de formamida) , se prefiere incrementar la concentración de SSC, de modo que se pueda utilizar una temperatura más alta. Una guia extensiva para la hibridación de ácidos nucleicos se encuentra en Tijssen (1993) Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes, Parte I, Capítulo 2 (Elsevier, New York); y Ausubel y colaboradores, eds . (1995) Current Protocole in Molecular Biology, Capítulo 2 (Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York) . Ver Sambrook y colaboradores (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainviéw, New York) . Como es discutido en lo anterior, las secuencias semejantes a CLV3 de la presente invención se predicen que limitan el crecimiento de las estructuras de meristemo al regular la división celular en el meristemo. Sin embargo, los fragmentos y variantes de las secuencias semejantes a CLV3 que codifican polipéptidos semejantes a CLV3 de la invención no están limitados para retener la actividad biológica nativa de la proteína. Se reconoce que las secuencias de la invención que codifican los polipéptidos semejantes a CLV3 pueden ser modificadas de tal manera que la expresión del polipéptido da por resultado el agrandamiento del meristemo. Consecuentemente, las secuencias que codifican el polipéptido semejante a CLV3 dominante-negativo están comprendidas por la presente invención. En esta modalidad, las variantes y fragmentos del polipéptido semejantes a CLV3 interfieren con la función de la proteína semejante a CLV3 endógena, normal. Así, la acción del polipéptido semejante a CLV3 endógeno puede ser bloqueada sin inactivar la secuencia del gen semejante a CLV3 estructural o su RNA. Un fragmento de una secuencia de nucleótidos semejante a CLV3 que codifica una proteina semejante a CLV3 que tiene sctividad negativa dominante codificará por lo menos 15, 25, 30, 50, 60, 70, 80, 90 o 94 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos presentes en una proteina semejante a CLV3 de longitud completa de la invención (por ejemplo, 94 aminoácidos para la SEQ ID NO:2). Alternativamente, una variante de una proteina semejante a CLV3 de la invención que tiene actividad negativa dominante tendrá por lo menos aproximadamente 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, generalmente por lo menos aproximadamente 75%, 80%, 85%, de preferencia por lo menos aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% y más de preferencia por lo menos aproximadamente 98%, 99% o más identidad de secuencia a la secuencia de aminoácidos para la proteina nativa como es determinada por los programas, de alineación de secuencia descritos en otra parte en la presente usando parámetros de "error. Además, una variante de un polipéptido semejante a CLV3 que tiene actividad negativa dominante puede -diferir aquella proteína por tan pocos como 1-15 residuos de aminoácidos, tan pocos como 1-10, tal como 6-10, tan pocos como 5, tal pocos como 4-, 3, 2 o aun 1 residuo de aminoácido. Los métodos para obtener mutaciones negativas dominantes son conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Attardi y colaboradores (1993) Proc. Nati. Acad. Sci 90:10563, Lloyd y colaboradores (1991) Nature 352:635; Logeat y colaboradores (1991) EMBO 10:1827; Mantovani y colaboradores (1995) J. Biol. Chem 269:20340, todas las cuales son incorporadas en la presente por referencia. Una secuencia semejante a CLV3 que tiene actividad negativa dominante disminuirá la actividad del polipéptido semejante a CLV3 endógeno. Los análisis funcionales para identificar secuencias semejantes a CLV3 que tienen actividad negativa dominante incluyen, la expresión del fragmento o variantes semejantes a CLV3 en una planta o célula de planta y visualmente analizar para una modulación en el desarrollo del meristemo, particularmente un agrandamiento del meristemo. En los meristemos apicales de retoño este agrandamiento puede conducir a la fasciación, donde el meristemo crece grande, ocasionando que el tallo llegue a ser semejante a una -banda, y las hojas y las flores sean producidas en · gran profusión. En- las flores, el agradamiento conduce a un incremento del número de órganos florales, incluyendo un incremento en el número de carpelos, que incrementa el tamaño del fruto y los números de .semillas. Una descripción más completa de los fenotipos comprendidos por el término agrandamiento de meristemo se encuentra enseguida Expresiones de las secuencias Las secuencias de ácido nucleico de la presente invención se pueden expresar de una célula hospedera tales como células de bacterias, levadura, insectos, mamiferas o de preferencia células de plantas. Se espera que aquellos expertos en la técnica estén bien informados de los numerosos sistemas de expresión disponibles para la expresión de un ácido nucleico que codifica una proteina de la presente invención. Ningún intento se hará para describir en detalle los diversos métodos conocidos en la expresión de proteínas en procariotas o eucariotas. Como se utiliza en la presente, las células hospederas pueden ser células procariotas tales como E. coli, o células eucarióticas tales como células de levadura, de insecto', de anfibio, o mamiferas. De preferencia, las células hospederas son células de planta monocotiledóneas o dicotiledóneas. Una célula hospedera monocotiledónea particularmente preferida es una célula hospedera de maíz. Las secuencias semejantes a CLV3 de la invención se proporcionan en casetes o construcciones' de nucleótidos .para la expresión en la planta de interés'. El cásete incluirá secuencias reguladoras 5' y 3' operablemente enlazadas a una secuencia semejante a CLV3 de la invención. Por "operablemente enlazado" se propone un enlace funcional entre un promotor y una segunda secuencia, en donde la secuencia de promotor inicia y media la transcripción de la secuencia de DNA correspondiente a la segunda secuencia. Generalmente, operablemente enlazado significa que las secuencias de ácidos nucleicos que son enlazadas están contiguas y donde es necesario unen dos regiones de codificación de proteina, contiguas y en el mismo cuadro de lectura. El cásete adicionalmente puede contener por lo menos un gen adicional que es cotransformado en el organismo. Alternativamente, el (los) gen (es) adicional (es) se puede proporcionar sobre casetes de expresión múltiple. Tal cásete de expresión se proporciona con una pluralidad de sitios de restricción para inserción de la secuencia semejante a CLV3 que está bajo la regulación transcripcional de las regiones reguladoras. El cásete de expresión . adicionalmente puede contener genes marcadores seleccionables . El cásete de expresión incluirá en la dirección 5'- 3' de transcripción, una región de iniciación transcripcional y traduccional, una secuencia semejante a CLV3 de la invención y una -región de terminación transcripcional y traduccional funcional en las plantas. La región de iniciación transcripcional, el promotor, puede ser nativa -(o análoga) o extraña (o heteróloga) al huésped de planta. Adicionalmente, el promotor puede ser la secuencia natural o alternativamente una secuencia sintética. Por "extraño" o "heterólogo" se propone que la región de iniciación transcripcional no es encontrada en la planta natural, en la cual es introducida la región de iniciación transcripcional . Como se utiliza en la presente, un gen quimérico comprende una secuencia de codificación operablemente enlazada a una región de iniciación de transcripción que es heteróloga a la secuencia de codificación. Mientras que puede ser preferible expresar las secuencias utilizando promotores heterólogos, se pueden utilizar las secuencias de promotor nativas. Tales construcciones cambiarían los niveles de expresión del RNA/proteína semejante a CLV3 en la planta o célula de planta. Asi, el fenotipo de la planta o célula de planta es alterado . La región de terminación puede ser nativa con la región de iniciación transcripcional, puede ser nativa con la secuencia de DNA operablemente enlazada de interés, o puede ser derivada de otra fuente. Las regiones de terminación convenientes son disponibles del Ti-plásmido de A. turnefaciens, tal como las regiones de terminación de octopiná sintasa y nopalina sintasa. Vér también Guerineau y colaboradores (1991) Mol, Gen. Genet. 252:141-144; Proudfoot (1991) Cell 64:671-674; Sanfacon y colaboradores (1991) Genes Dev. 5:141-149; Mogen y colaboradores (1990) Plant Cell 2:1261-1272; unroe y colaboradores (1990) Gene 91:151-158; Bailas y colaboradores (1989) Nucleic Aclds Res. 17:7891-7903 y Joshi y colaboradores (1987) Nucleic Acid Res. 25:9627-9639. Donde es apropiado, el (los) gen (es) puede ser optimizado para expresión incrementada en la planta transformada. Esi:o es, los genes pueden ser sintetizados utilizando codones preferidos de la planta para expresión mejorada. Métodos están disponibles en la técnica para sintetizar genes preferidos de plantas. Ver, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 5,380,831 y 5,436,391, y Murray y colaboradores (1989) Nucleic Acíds Res. 17:477-498, incorporadas en la presente por referencia . Las modificaciones de secuencia adicionales son conocidas para aumentar la expresión de gen en un huésped celular. Estas incluyen la eliminación de secuencias que codifican señales de poliadenilación espurias, - señales del sitio de empalme exón-intrón, repeticiones similares a transposón y otras secuencias tales bien caracterizadas que pueden ser perjudiciales a la expresión de gen.. El contenido de G-C de la secuencia puede ser ajustado a niveles promedio para un huésped celular dado, como es calculado con referencia a los genes conocidos expresados en la célula hospedera. Cuando es posible, la secuencia es modificada para evitar las estructuras de mRNA secundarias de horquilla previstas .

Los casetes de expresión adícionalmente pueden contener secuencias guia 5' en la construcción de cásete de expresión. Tales secuencias guia pueden actuar para aumentar la traducción. Las guias de traducción son conocidas en la técnica e incluyen: guias picornavirus, por ejemplo, guia EMCV (región de no codificación 5' de Encefalomiocarditis) (Elroy-Stein y colaboradores (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA Sí: 6126-6130) ; guias potivirus, por ejemplo, guia TEV (Virus de Grabado de Tabaco) (Gallie y colaboradores (1995) Gene 165 (2) : 233-238) , guia MDMV (Virus de Mosaico Diminuto de Maíz) (Virology 154:9-20) y proteina de enlace de cadena pesada de inmunoglobulina humana (BiP) (Macejak y colaboradores (1991) Nature 353:90-94) ; guia no traducida del mRNA de proteina de cubierta del virus de mosaico de alfalfa (AMV RNA 4) (Jobling y colaboradores (1987) Nature 325:622-625) ; guia de virus de mosaico de tabaco (TMV) (Gallie y colaboradores (1989) en Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, New York), pp. 237-256); y guia de virus moteado clorótico de maiz (MCMV) (Lommel y .colaboradores (1991) Virology S2:382-385). Ver también, Della-Cioppa y colaboradores (1987) Plant Physiol. 84: 965-968. Otros métodos conocidos para aumentar la traducción también pueden ser utilizados, por ejemplo, intrones y similares. En la preparación del cásete de expresión, los diversos fragmentos de DNA pueden ser manipulados, para proporcionar las secuencias de DNA en la orientación apropiada y, como sea apropiado, en el cuadro de lectura apropiado. Para este fin, adaptadores' o enlazadores pueden ser empleados para unir los fragmentos de DNA u otras manipulaciones pueden ser involucradas para proporcionar sitios de restricción convenientes, remoción de DNA superfluo, remoción de sitios de restricción o similares. Para este propósito, se puede involucrar la mutagénesis in vitro, reparación de cebador, restricción, templado, resustituciones, por ejemplo, transiciones y transversiones. Generalmente, el cásete de expresión comprenderá un gen marcador seleccionable para la selección de células transformadas. Los genes marcadores seleccionables se utilizan para la selección de células o tejidos transformables. Los genes marcadores incluyen genes que codifican resistencia al antibiótico, tales como aquellos que codifican neotuicina fosfotransferasa II (NEO) e igromicina fosfotransferasa (HPT) , asi como genes que confieren resistencia a compuestos herbicidas, tales como glufosinato amonio, bromoxinilo, imidazolinonas y 2, 4-diclorofenoxi-acetatos (2,4-D). Ver generalmente, Yarranton (1992) Curr. Opin. Biotech. 3:506-511; Crhistopherson y colaboradores (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:6314-6318; Yao y colaboradores (1992) Cell 71:63-72; Reznikodd (1992) Mol. Microbiol. 6:2419-2422; Barkley y colaboradores (1980) The Operon, p. 177-220; Hu y colaboradores (1987) Cell 48:555-566; Brown y colaboradores (1987) Cell 49:503-612; Figge y colaboradores (1988) Cell 52:713-722; Deuschle . y colaboradores (1989) Proc. Nati. Acad. Aci. USA 86:5400-5404; Fuerst y colaboradores (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86:2549-2553; Deuschle y colaboradores (1990) Science 248:480-483; Gossen (1993) Ph. D. Thesis, üniversity of Heidelberg; Reines y colaboradores (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:1917-1921; Labo y colaboradores (1990) Mol. Cell. Biol. 10:3343-3356; Zambretti y colaboradores (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:3952-3956; Baim y colaboradores (1991) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:5072-5076; Wyborski.y colaboradores (1991) Nucleic Acids Res. 19:4647-4653; Hillenand-Wissman (1989) Topics Mol. Struc. Biol. 10:143-162; Gegenkolb y colaboradores (1991) Antimicrojb. Agrents Chemother. 35:1591-1595; Kleinschnidt y colaboradores (1988) Biochemistry 27:1094-1104; Bonin (1993) pH. D." Thesis, üniversity of Heidelberg; Gossen y colaboradores (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:5547-5551; Oliva y colaboradores (1992) Antimicrob. Agents Chemother; 36:913-919; Hlavka y colaboradores (1985) Handbook of Experimental Pharmacology, Vol . 78 (Springer-Verlag, Berlín); Gilí y colaboradores (1988) Nature 334:721-724. Tales descripciones se incorporaren la presente por referencia. La lista anterior de genes marcadores seleccionables no se propone para ser limitada. Cualquier gen marcador seleccionadle puede ser usado en la presente invención . Un número de promotores pueden ser utilizados en la práctica de la invención. Los promotores pueden ser seleccionados en base al efecto deseado. Esto es, los ácidos nucleicos pueden ser combinados con promotores preferidos del tejido constitutivos u otros promotores para expresión en plantas. Tales promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, el promotor de núcleo del Rsyn7 (Solicitud de PCT No. de Serie US99/03863) ; promotor Scpl (patente norteamericana No. 6,072,050); actina de arroz (McElroy y colaboradores (1990) Plant Cell 2:163-171); ubiquitin (Christensen y colaboradores (1989) Plant Mol. Biol. 22:619-.632 y Christensen y colaboradores (1992) Plant Mol.- Biol. 18:675-689); pEMU (Last y colaboradores (1991) Theor. Appl . Genet. 82:581-588); MAS (Velten y colaboradores (1984) EMBO J. 3:2723-2730); promotor ALS (solicitud norteamericana No. de serie 08/409,297) y similares. Otros promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 5,608,149; 5,608,144; 5,604,121; 5,569,597; 5,466,785; 5,399,680; 5,268,463 y 5,608,142. En las modalidades .especificas será beneficioso expresar el gen a partir de un promotor inducible. Por ejemplo, los promotores regulados por químicos se pueden usar para modular la expresión de un gen en una planta a través de la aplicación de un regulador químico exógeno . Dependiendo del objetivo, el "promotor puede ser un promotor inducible por químicos, donde la aplicación del químico induce la expresión del gen o un promotor reprimible por químicos, donde la aplicación del químico reprime la expresión del gen. Los promotores inducibles por químicos son conocidos en la técnica e incluyen, pero no están limitados a, el promotor In2-2 de maíz, que es activado por los protectores de herbicidas bencensulfonamida, el promotor GST de maíz, que es activado por compuestos electrofílicos hidrofóbicos que se usan como herbicidas pre-emergentes, y el promotor PR-la de tabaco, que es activado por ácido salicílico. Otros promotores regulados por químicos de interés incluyen los promotores responsivos a esteroides (ver, por ejemplo, el promotor inducible por glucocorticoide en Schena y colaboradores (1991) Proc. Nati. Acad. - Sci. USA 88:10.421-10425 y McNellis' y colaboradores (1998) Plant J. 14(2) :247-257) y los promotores inducibles por tetraciclina y reprimíbles por tetraciclina (ver por ejemplo, Gatz . y colaboradores (1991) Mol. Gen. Genet. 227:229-237, y las patentes norteamericanas Nos. 5,814,618 y 5,789,156), incorporadas en la presente por referencia. . En otra modalidad, el promotor es un promotor inducible por sequía. Por promotor inducible . por seguía se propone un promotor que es inducible bajo condiciones de estrés osmótico. Por ejemplo, el promotor RAB-17 es inducido por sequía asi como por otros estreses, presumiblemente como un resultado de su regulación por la hormona de planta ABA. Ver, por ejemplo, Vilardell y colaboradores (1990) Plant Mol. Biol. 14:423-432. Alternativamente, el promotor del gen Atmyb2 de Arabidopsis se puede usar como un promotor general responsivo a ABA, inducido por sequía y por estrés (Urao y colaboradores (1993) Plant Cell 5:1529-1539). Otros promotores inducibles por sequía incluyen 26-g de Pisum sativum (Guerrero y colaboradores (1988) Plant Physiol 88:401-408; Guerrero y colaboradores (1990) Plant Mol Biol 15:11-26), trg-31 de tabaco (Guerrero y colaboradores (1993) Plant Mol Biol 21:929-935) btg-26 de Brassica napus (patente norteamericana No. 6,084,153); o los promotores del gen rd29B y, los genes AREB1, 2 y 3 (Uno y colaboradores · (2000) Proceedings of the National Academy of Sciences 97:11632-11-637; Yamaguchi-Shinozaki y colaboradores (199.3) Mol. Gen. Genet. 236:331-40; y, Yamaguchi-Shinozaki y colaboradores (1994) Plant Cell 6:251-64, todas las cuales son incorporadas en la presente por' referencia) . Alternativamente, los promotores preferidos de tejido se puede utilizar para dirigir la expresión de secuencia semejante a CLV3 mejorada dentro de un tejido de planta particular. Los promotores preferidos de tejido incluyen, por ejemplo, promotores preferidos del meristemo de retoño como es descrito en Atanassova y colaboradores (1992) Plant J. 2:291, patente norteamericana No. 6,239,329; que es incorporada en la presente por referencia. Además, el promotor del gen KN0TTED1 se puede usar para dirigir la expresión preferida del meristemo de retoño (Dorien y colaboradores (2002) Plant Molecule Biology 48:423-441 y Tomoaki y colaboradores (2001) Genes and Development 15:581-590, ambas de l s cuales son incorporadas en la presente por referencia) . Alternativamente, el promotor del gen REVOLUTA podría ser usado para la expresión preferida del meristemo. Ver, por ejemplo, el Acceso de GenBank No. AC024594 (Arroz) y AB005246 (Arabidopsis) , ambos de los cuales son incorporados en la presente por referencia. Un experto en la técnica reconocerá que el promotor puede comprender hasta .5Kb, 1Kb, 2Kb, o más de las secuencias que flanquean la región de codificación de estos genes. Tales promotores pueden .ser modificados, si es necesario, para la expresión débil. Los métodos" de la invención involucran la introducción de una construcción de nucleótidos a una planta. Por "introducción" se propone presentar a l planta la construcción de nucleótidos de una manera tal que la construcción gana acceso al interior de una célula de la planta. Los métodos de la invención no dependen de un método particular para introducir una construcción de nucleótidos a una planta, solamente que la construcción de nucleotidos gane acceso al interior de por lo menos una célula de la planta. Los métodos para introducir construcciones de nucleotidos en plantas son conocidos en la técnica incluyendo, pero no limitados a, métodos de transformación estable, métodos de trasformación transiente y métodos mediados por virus. Por "transformación estable" se propone que la construcción de nucleotidos introducida en una planta se integra en el genoma de la planta y es capaz de ser heredada por la progenie de la misma. Por "transformación transiente" se propone que una construcción de nucleotidos introducida en una planta no se integra en el genoma de la planta. Las construcciones de nucleotidos de la invención se pueden introducir en plantas al poner en contacto las plantas con un virus o ácidos nucleicos virales. Generalmente, tales métodos involucran incorporar una construcción de nucleotidos de la invención dentro dé una molécula de DNA o · RNA viral. Se reconoce que la secuencia semejante a CLV3 de la invención puede ser inicialmente sintetizada como parte de una poliproteina viral, ,qüe posteriormente puede ser procesada mediante proteólisis in vivo o in vitro para producir la proteina recombinante deseada. Además, · se reconoce que los promotores de la invención también comprenden promotores utilizados para transcripción mediante polimerasas de RNA virales. Los métodos para introducir construcciones de nucleótidos en plantas y expresar una proteina codificada en la mismas, que involucran moléculas de DNA o RNA virales, son conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 5,889,191, 5,889,190, 5,866,785, 5,589,367 y 5,316,931; incorporadas en la presente por referencia. El método de transformación/transfección no es critico para la presente invención; varios métodos de transformación o transfección están actualmente disponibles. · Asi, se puede emplear cualquier método, que proporciona la transformación/transfección efectiva. Los protocolos de transformación asi como los protocolos para introducir secuencias de nucleótidos en plantas pueden variar dependiendo del tipo de planta o de célula vegetal, es decir, · monocotiledónea o dicotiledónea, dirigida para la transformación. Los métodos adecuados para introducir secuencias de nucleótidos en las células vegetales- y la inserción subsecuente en el genoma de la planta incluyen la microinyección (Crossway y colaboradores (1986) Biotechniques 4:320-334), electroporación (Riggs y colaboradores (1986) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 83: 5602-5606, transformación mediada por Agrobacterium (Townsend y colaboradores, patente norteamericana No. 5,563,055; Zhao y colaboradores, patente norteamericana No. 5,981,840), transferencia de gen directa (Paszkowski y colaboradores (1984) EMBO J. 3:2717-2722) y aceleración balística de partículas (ver, por ejemplo, Sandford y colaboradores, patente norteamericana No. 4,945,050; .Tomes y colaboradores, (1995) "Direct DNA Transfer into Intac Plant Cells via Microproj ectile Bombardment", en Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg y Philips ( Springer-Verlag, Berlín) ; y McCabe y colaboradores (1988) Biotechnology 6:923-926). También ver Weissinger y colaboradores (1988) Ann. Rev. Genet . 22:421-477; Sanford y colaboradores (1987) Particulate Science and Technology 5:27-37 (cebolla); Christou y colaboradores (1988) Plant Physiol. 87:671-674 (soya); McCabe y colaboradores (1988) Bio/Technology 6:923-926 (soya); Finer y McMullen (1991) In Vitro Cell Dev. Biol. 27P:175-182 (soya); Singh y colaboradores (1998) Theor. Appl . Genet. 95:319-324 (soya); Datta y colaboradores (1990) . Biotechnology 8:736-740 (arroz); Klein y colaboradores (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:4305-4309 (maíz); Klein y colaboradores (1988) Biotechnology 6:559-563 (maíz); Tomes, patente norteamericana No. 5,240,855; Buising y colaboradores .patentes norteamericanas Nos. 5,322,783 y 5,324,646; Tomes y colaboradores (1995) "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment", en Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg (Springer-Verlag, Berlín) (maíz) ; Klein y colaboradores (1988) Plant Physiol 91:440-444 (maíz); Fromm y colaboradores (1990) Biotechnology 5:833-839 (maíz); Hooykaas-Van Slogteren y colaboradores (1984) Nature (Londres) 311:163-164; Bytebier y colaboradores (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 54:5345-5349 (Liliaceae) ; De Wet y colaboradores (1985) en The Experimental Manípulation of Ovule Tissues, ed. Chapman y colaboradores (Longman, New York) , pp. 197-209 (polen) ; Kaeppler y colaboradores (1990) Plant Cell Reports 9: 415-418 y Kaeppler y colaboradores (1992) Theor. Appl . Genet. 84:560-566 (transformación mediada por whisker) ; D'Halluin y colaboradores (1992) Plant Cell 4:1495-1505 (electroporación) ; Li y colaboradores (1993) Plant Cell Reports 12:250-255 y Christou y Ford (1995) Annals of Botany 75:407-413 (arroz); Osjoda y colaboradores (1996) Nature Biotechnology 14:745-750 (maíz vía Agrobacterium tumefaciens) ; todas las cuales son incorporadas en la presente por referencia. Las células que se han transformado pueden ser cultivadas en plantas' de acuerdo con maneras convencionales. Ver, por ejemplo, McCormick y colaboradores (1986) Plant Cell Reports 5:81-84. Estas plantas luego pueden ser cultivadas y ya sea polinizadas con la misma especie transformada o diferentes especies, y el híbrido resultante que tiene expresión constitutiva de " la característica fenotípica deseada, identificada. Dos o más generaciones pueden ser cultivadas para asegurarse de que la expresión de la-característica fenotípica deseada sea establemente mantenida y heredada, y luego las semillas cosechadas para asegurarse de que se ha obtenido la expresión de la característica fenotípica deseada. La presente invención se puede utilizar para la transformación de cualquier especie de planta, incluyendo, pejro no limitada a, monocotiledóneas y dicotiledóneas. Ejemplos de plantas de interés incluyen, pero no limitadas a, maíz (Zea mays) , Brassica sp. (por ejemplo, B. napus, B'. rapa, B. júncea), particularmente aquellas especies Brassica útiles como fuentes de aceite de semilla, alfalfa (Medicago sativa), arroz (Oryza sativa), centeno {Sécale cereale) , sorgo (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare) , mijo (por ejemplo, mijo perlado (Pennisetum glaucum) , mijo proso {Panicu milíaceum) , mijo de cola de zorra (Setaria itálica), mijo de dedos (Eleusine coracana) ) , girasol (Helianthus annuus) , cártamo (Carthamus tinctorius) , trigo (Triticum aestivum) , soya (Glycine max) , tabaco (Nicotiana tabacum) , papa (Solanu tuberosum) , cacahuates (Arachis hypogaea-) , algodón (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum) , camote (Ipomoea batatus) , mandioca (Manihot esculenta), café (Coffea spp. ) , coco (Cocos nucífera), piña (Ananas comosus) , árboles cítricos (Citrus spp.), cacao (Theobro a cacao), té (Camellia sinensis) , plátano (Musa spp.), aguacate (Persea americana), higo (Ficus casica) , guayaba (Psidium guajava) , mango (Mangifera indica), olivo (Olea europaea) , papaya (Carica papaya), anacardo (Anacardium occidentale) , macadamia (Macadamia integrifolia) , almendra (Prunus amygdalus) , betabeles (Beta vulga is) , caña de azúcar (Saccharum spp.), avenas, cebada, vegetales, plantas ornamentales y coniferas. Los vegetales incluyen tomates (Lycopersicon esculentum) , lechuga (por ejemplo, Lactuca sativa), habichuelas verdes (Phaseolus vulgaris) , habas (Phaseolus limensis) , guisantes (Lathyrus spp.) y elementos del género Cucu is tales como pepino - (C. sativus) , cantalupo (C. cantalupensis) y melón amarillo (C. meló) . Las plantas ornamentales incluyen azalea (Rhododendron spp.), hortensia (Macrophylla hydrangea) , hibisco (Hibiscus rosasanensis) , rosas (Rosa spp.), tulipanes (Tulipa spp.), narcisos trompones (Narcissus spp.), petunias (Petunia . hybrida) , clavel (Dianthus caryophyllus) , pastora roja (Euphorbia pulcherrima) y crisantemo. Las coniferas que se pueden emplear en la práctica de la presente invención incluyen, por ejemplo, pinos tales como pino espeso (Pinus taeda) , pino del incienso (Pinus elliotii) , pino ponderoso (Pinus ponderosa), pino de construcción (Pinus contorta) y pino Monterrey (Pinus radiata) ; pino Oregón (Pseudotsuga menziesii) ; pinabete del Oeste (Tsuga canadensis) ; abeto Sitka (Picea glauca); secoya (Seguoia sempervirens) ; abetos tales como abeto blanco (Abies amabilis) y abeto balsámico (Abies balsamea) ; y cedros tales como cedro rojo del Oeste (Thuja plicata) y cedro amarillo de Alaska ( Chamaecyparis nootkatensis) . De preferencia, las plantas de la presente invención son plantas de cultivo (por ejemplo, maíz, alfalfa, girasol, Brassica , soya, algodón, cártamo, cacahuate, sorgo, trigo, mijo, tabaco, etc.), más de preferencia plantas de maíz y soya, todavía más de preferencia plantas de maíz. Las coniferas que se pueden emplear en la práctica de la presente invención incluyen, por ejemplo, pinos tales como pino espeso (Pinus ' taeda) , pino del incienso (Pinus elliotii) , pino ponderoso {Pinus ponderosa) , pino de construcción (Pinus contorta) y pino Monterrey (Pinus radiata) ; pino Oregón (Pseudotsuga menziesii) ; pinabete del Oeste {Tsuga canadensis) ; abeto Sitka (Picea glauca); secoya (Sequoia sempervirens) ; abetos tales como abeto blanco (Abies amabilis) ¦ y abeto balsámico (Abies balsamea) ; y cedros tales como cedro rojo del Oeste (Thuja plicata) y cedro amarillo de Alaska (Chamaecyparis nootkatensis) . De preferencia, las plantas de la presente invención son plantas de cultivo (por ejemplo, maíz, alfalfa, girasol, Brassica, soya, algodón, cártamo, cacahuate, sorgo, trigo, mijo, tabaco, etc.), más de preferencia plantas de maíz y soya, todavía más de preferencia plantas de maíz. Las células procarióticas se pueden usar como huéspedes para expresión. Las procariotas más frecuentemente son representadas por varias cepas de E. coli; sin embargo, también se' pueden utilizar otras cepas microbianas. Las secuencias de control procariotas comúnmente utilizadas que son definidas en la presente para incluir promotores para la iniciación de transcripción, opcionalmente con un operador, junto con las secuencias de enlace de ribosoma, incluyen tales promotores comúnmente utilizados como los sistemas de promotores de beta lactamasa (penicilinasa) y lactosa (lac) (Chang y colaboradores (1977) Nature 198:1056), el sistema promotor de triptofano (trp) (Goeddel y colaboradores (1980) Nucleic Acids Res. 8:4057) y el promotor PL derivado de lambda y el sitio de enlace de ribosoma de N-gen (Shimatake y colaboradores (1981) Nature 292:128). La inclusión de marcadores de selección en vectores de DNA transfectados en · E. coli también es útil. Ejemplos de tales marcadores incluyen genes que especifican la resistencia a ampicilina, tetraciclina o cloranfenicol . El vector se selecciona para permitir la introducción en la célula hospedera apropiada. Los vectores bacterianos son típicamente de origen de plásmido o de fago. Las células bacterianas apropiadas se infectan con las partículas del vector de fago o se transfectan con el DNA del vector de fago desnudo. Si se utiliza un vector de plásmido, las células bacterianas se transfectan con el DNA de vector de plásmido. Los sistemas de expresión para expresar una proteina de la presente invención están disponibles usando Bacillus sp y Salmonella (Palva y colaboradores (1983) Gene 22:229-235); Mosbach y colaboradores (1983) Nature 302:543-545) . Una variedad de sistemas de expresión eucarióticos tales como levadura, lineas de células de insectos, células de plantas y mamiferas son conocidos por aquellos expertos en la técnica. Como es explicado brevemente después, un polinucleótido de la presente invención puede ser expresado en estos sistemas eucarióticos. En algunas modalidades, las células de plantas transformadas/transfectadas, como es discutido infra, se emplean como sistemas de expresión para la producción de las proteínas de la presente invención. Las síntesis de secuencias de nucleótidos heterólogas en levadura es bien conocido. Dos levaduras ampliamente utilizadas para la producción de proteínas eucarióticas son Saccharomyces cerevisiae y Pichia pastoris . Los vectores, cepas y protocolos para la expresión en Saccharomyces y Pichia son conocidos en la técnica y disponibles de proveedores comerciales (por ejemplo Invitrogen) . Los vectores adecuados usualmente tienen secuencias de control de expresión, tales como promotores, incluyendo 3-fosfoglicerato quinasa o alcohol oxidasa y un origen de replicación, secuencias de terminación y similares como sea deseado.

Una proteína de la presente invención, una vez expresada, puede ser aislada de la levadura al lisar la células y al aplicar técnicas de aislamiento de proteína estándares a la lisis. La inspección del proceso de purificación se puede realizar al usar técnicas de manchado de Western o radioinmunoensayo u otras técnicas de inmunoensayo estándares. Las secuencias de la presente invención también pueden ser ligadas a varios vectores de expresión para el uso en la transfección de cultivos de células de, por ejemplo, origen mamífero, insecto o planta. Los cultivos de células ilustrativos útiles para la producción de los péptidos son células mamíferas. Un número de líneas de células hospederas adecuadas capaces de la expresión de proteínas intactas se han desarrollado en la técnica e incluyen las líneas de células HEK293, 3HK21 y CHO. Los vectores de expresión para estas células pueden incluir secuencias -de control, de expresión, tal como un gen de replicación, un promotor (por ejemplo, el promotor CMV, un promotor HSV tk o promotor pgk (fosfoglicerato quinasa) promotor) , un mej orador (Queen y colaboradores" (1985) Immunol. Rev. 82:49), y sitio de información de procesamiento innecesarios tales como los sitios de enlace de ribosoma, sitios de empalme de RNA, sitios de poliadenilación (por ejemplo, un sitio de adición de poli A de T Ag grande de SV40), y secuencias de terminador transcripcional . Otras células animales útiles para la producción de proteina de la presente invención están disponibles, por ejemplo, de la Colección Americana de Cultivos Tipo. Los vectores apropiados para expresar proteínas de la presente invención en células de insectos son usualmente derivados del baculovirus SF9. Las líneas de células de insecto adecuadas incluyen líneas de células de larvas de mosquitos, gusano de seda, gusano desvastador, polilla y Drosophila tal como una línea de células Schneider (Ver, Schneíder (1987) J. Embryol. Exp. Morphol. 27:353-365). Como con la levadura, cuando se emplean células hospederas de animales superiores o plantas, las secuencias de terminador de poliadenilación o transcripción son típicamente incorporadas en el vector. Un ejemplo de una secuencia de terminador es la secuencia de poliadenilación del gen de hormona de crecimiento bovino. También se pueden incluir secuencias para el. empalme preciso de . la transcripción. Un ejemplo de una secuencia de empalme es el intrón VP1 de SV40 (Sprague y colaboradores (1983) J. Virol. 45:773-781). Adicionalmente, las secuencias de gen para controlar la replicación en la célula hospedera pueden ser incorporadas en el vector tales como aquellas encontradas en los vectores de tipo duros de papiloma bovino (Saveria-Campo (1985) DNA Cloning Vol. II a Practical Approach, D.M. Glover, Ed., IRL Press, Arlington, Virginia, p. 213-238). Las células hospederas de animales y eucarióticos menores (por ejemplo, levadura) son competentes o se vuelven competentes para la transfección por varios medios. Existen varios métodos bien conocidos para introducir DNA en células animales. Estos incluyen: precipitación con fosfato de calcio, fusión de las células recipientes con protoplastos bacterianos que contienen DNA, tratamiento de las células recipientes con liposomas que contienen el DNA, DEAE dextrina, electroporación, biolistica y microinyección del DNA directamente de las células. Las células transíectadas se cultivan por medios bien conocidos en la técnica (Kuchler (1997) Biochemical Methods in Cell Culture and Virology, Dowden, Hutchinson and Ross, Inc.). Se reconoce que con estas secuencias de nucleótidos, se pueden construir construcciones de antisentido, complementarias a por lo menos una porción del RÑA mensajero (mRNA) para las secuencias semejantes a CLV3. Los nucleótidos antisentido se construyen para hibridar con el mRNA correspondiente. Las modificaciones de las secuencias antisentido se pueden hacer mientras que las secuencias hibriden a, e interfieran con la expresión del mRNA correspondiente. De esta manera, se pueden utilizar construcciones antisentido que tienen 70%, de preferencia 80%, más de preferencia 85% de identidad de secuencia a las secuencias antisentido correspondientes. Además las porciones de los nucleótidos antisentido se pueden usar para interrumpir la expresión del gen objetivo. Generalmente, se pueden utilizar secuencias de por lo menos 50 nucleótidos, 100 nucleótidos, 200 nucleótidos o más grandes. Las secuencias de nucleótidos de la presente invención se pueden utilizar en la orientación de sentido para suprimir la expresión de los genes endógenos en plantas. Los métodos para suprimir la expresión del gen en plantas usando secuencias de nucleótidos en la orientación de sentido son conocidos en la técnica. Los métodos generalmente implican la transformación de plantas con una construcción de DNA que comprende un promotor que induce la expresión en una planta operablemente enlazada a por lo menos una porción de la secuencia de nucleótidos que corresponde a la transcripción de gen endógeno. Típicamente, tal secuencia de nucleótidos tiene identidad de secuencia sustancial- a la secuencia de la transcripción del gen endógeno, de preferencia mayor que aproximadamente 65% de identidad de secuencia, más de preferencia mayor que aproximadamente 85% de identidad de secuencia, mucho más de preferencia mayor que aproximadamente 95% de identidad de secuencia. Ver las patentes norteamericanas Nos. 5,283,184 y 5,034,323; incorporadas en la presente por referencia. El uso del término "construcciones de nucleótidos" en la presente no se proponen para limitar la presente invención a construcciones de nucleotidos que comprenden DNA. Aquellos expertos ordinarios en la técnica reconocerán que las construcciones de nucleotidos, particularmente polinucleótidos y oligonucleótidos, comprendidos de ribonucleótidos y combinaciones de ribonucleótidos y desoxirribonucleótidos también se pueden emplear en los métodos descritos en la presente. Asi, las construcciones de nucleotidos de la presente invención comprenden todas las construcciones de nucleotidos que pueden ser empleados en los métodos de la presente invención para transformar plantas incluyendo, pero no limitados, a aquellos comprendidos de desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos y combinaciones de los mismos. Tales desoxirribonucleótidos y ribonucleótidos incluyen moléculas que surgen de manera natural y análogos sintéticos. Las construcciones de nucleotidos de la invención también comprenden todas las formas de construcciones- de nucleotidos incluyendo, pero no limitados a formas de una sola hebra, formas de doble hebra, horquillas, estructuras de tallo y vuelta, y similares. Además, se reconoce que los métodos de la invención pueden emplear una construcción de nucleotidos que es capaz de dirigir, en una planta transformada, la expresión de por lo menos una proteina, o por lo menos un RNA, tal como, por ejemplo, un RNA antisentido que es complementario a por lo menos una porción de un mRNA. Típicamente, tal construcción de nucleótidos está comprendida de una secuencia de codificación para una proteína o un RNA . operablemente enlazado a las regiones reguladoras de transcripción 5' y 3' . Alternativamente, también se reconoce que los métodos de la invención pueden emplear una construcción de nucleótidos que no es capaz de dirigir, en una planta transformada, la expresión de una proteína o un RNA. Además, -se reconoce que los métodos de la presente invención no dependen de la incorporación de la construcción de nucleótidos completa en el genoma, solamente que la planta o célula de la misma sea alterada como un resultado de la introducción de la construcción de nucleótidos a una célula. En una modalidad de la invención, el genoma puede ser alterado después de la introducción de la construcción de nucleótidos en una célula. Por ejemplo, la construcción de nucleótidos, o cualquier parte de la · misma, puede incorporarse en el genoma de la planta. Las alteraciones al genoma de la presente invención incluyen, pero no están limitados a, adiciones, supresiones y sustituciones de nucleótidos .en el genoma. Mientras que los métodos de la presente invención no dependen de las adiciones, supresiones o sustituciones de cualquier número particular de nucleótidos, se reconoce que tales adiciones, supresiones o sustituciones comprenden por lo menos un nucleótido.

Las construcciones de nucleótidos de la invención también comprenden construcciones de nucleótidos que pueden ser empleadas en métodos para alterar o mutar una secuencia de nucleótidos genómica en un organismo, incluyendo, pero no limitados a, vectores quiméricos, vectores mutacionales quiméricos, vectores de reparación quiméricos, oligonucleótidos mezclados-dúplex, oligonucleótidos quiméricos autocomplementarios y oligonucleobases recombinogénicas . Tales construcciones de nucleótidos y métodos de uso, tales como, por ejemplo, quimeraplastia, son conocidos en la técnica. La quimeraplastia implica el uso de tales construcciones de nucleótidos para introducir cambios específicos del sitio en la secuencia del DNA genómico dentro de un organismo. Ver, las patentes norteamericanas Nos. 5,565,350; 5,731,181; 5,767,325; 5,760,012; 5,795,972; y 5,871,984; todas las cuales son incorporadas en la presente por referencia. Ver también, WO 98/49350, WO 99/07865,. WO 9-9/25821, y Beetham y colaboradores (1999) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 96:8774-8778; incorporadas 'en la presente por referencia. Métodos de Uso La presente invención proporciona métodos y composiciones para modular el nivel y/o actividad de los polipéptidos seme antes a CLV3 en una célula hospedera, particularmente, una planta o célula de planta. En algunas modalidades, el nivel y/o actividad del polipéptido semejante a CLV3 de la presente invención es modulado al alterar, in vivo o in vitro, el promotor de un gen para regular hacia arriba o hacia abajo la expresión del gen. En algunas modalidades, las regiones de codificación de los genes nativos de la presente invención pueden ser alteradas por medio de la sustitución, adición, inserción o supresión para disminuir la actividad de la enzima codificada. Ver, por ejemplo, la patente norteamericana 5,565,350 y PCT/US93/03868. En otras modalidades, un ácido nucleico aislado (por ejemplo un vector) que comprende una secuencia de promotor, es transfectado en una célula de planta. Subsecuentemente, una célula de planta que comprende el promotor operablemente enlazado a un polinucleótido de la presente invención se selecciona por medios conocidos para aquellos expertos en la técnica tales como, pero no limitados a, manchado de Southern, secuenciación de DNA, o análisis de PCR usando cebadores específicos al promotor y al gen y detectando amplicones producidos a partir de los mismos. Una planta o parte de planta alterada o modificada por las modalidades anteriores se cultiva bajo condiciones de formación de planta durante un tiempo suficiente para modular el nivel y/o actividad de los polipéptidos de la presente invención en la planta. Las condiciones de formación de la planta son bien conocidas en la técnica y discutidas brevemente, supra. Alternativamente, el nivel y/o actividad del polipéptido de la invención se puede modular en una planta o célula de planta al poner en contacto la planta o célula de planta con el polipéptido de la invención en la forma de un rocío químico. En general, la actividad y/o nivel del polipéptido semejante a CLV-3 es modulado (incrementado o disminuido) por al menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% o 90% con relación a una planta de control nativa, parte de planta, o célula que carece del cásete de expresión recombinante mencionado en lo anterior. La modulación en la presente invención puede ocurrir durante y/o subsecuentemente al crecimiento de la planta a la etapa de desarrollo deseada. La modulación de la expresión de ácido nucleico temporalmente ' y/o en tejidos particulares puede ser controlada al emplear el promotor apropiado operablemente enlazado a un polinucleótido de la presente invención en, por ejemplo, la orientación de sentido o antisentido como es discutido en mayor detalle, supra. La inducción de la expresión de un polinucleótido de la presente invención también puede ser controlada mediante la administración exógena de- una cantidad efectiva de compuesto de inducción. Los promotores inducibles y compuestos de inducción, que activan la expresión de estos promotores, son bien conocidos en la técnica, en modalidades preferidas, los polipéptidos de la presente invención son modulados en monocotiledóneas, particularmente maíz. La presente invención, además proporciona composiciones y métodos para modular el desarrollo de la planta y/o rutas de desarrollo. Por consiguiente, las secuencias semejantes a CLV3 de la invención encuentran uso en controlar o modular la división, diferenciación y desarrollo celular. En particular, las secuencias de la presente invención encuentran uso en modular el desarrollo del meristemo. Por "modular el desarrollo del meristemo" se propone cualquier alteración en el fenotipo del meristemo incluyendo, por ejemplo, una alteración en la formación y mantenimiento del meristemo y/o una alteración del tamaño y aparición de meristemos de retoño y florales. Tales modulaciones en el desarrollo del meristemo pueden dar por resultado un rendimiento incrementado o disminuido de hojas, flores y/o frutos. ' La interrupción de la ruta de CLAVATA en los mutantes fea2 de maíz produjo hasta dos veces el número normal de hileras de semillas en la mazorca de maíz (Taguch-i-Shiobara y colaboradores, (2001) Genes and Development 15:2755-2766) . Como el número de hileras o las variantes de densidad o espiguitas son de importancia en otros cereales tales como cebada, trigo y arroz, la modulación de la ruta de CLV puede encontrar uso en la mejora de los rendimientos del cultivo. Por consiguiente, los métodos de la presente invención encuentran uso en modular en nivel del polipéptido CLV3 en una planta. Como las secuencias semejantes a CLV3 de la presente invención, se producen para limitar el crecimiento de las estructuras del meristemo al regular la división celular en el meristemo. Por consiguiente, las modalidades de la presente invención comprenden la expresión de las secuencias semejantes a CLV3 tal que ocurre un nivel y/o actividad disminuida de las secuencias semejantes a CLV3 endógenas. La disminución en la actividad o nivel semejante a CLV3 puede ocasionar pérdidas del control normal de la división celular en los meristemos apicales de retoño y en meristemos florales. En cualquier caso, la pérdida de la división células se presentará como un agrandamiento del meristemo. En los meristemos apicales de retoño este agrandamiento puede conducir a la fasciación, donde el meristemo crece grande, ocasionando que el tallo se vuelva semejante a una banda, y las hojas 'y flores sean producidas en gran profusión. En las flores, el agrandamiento conduce a un incremento en el número de órganos florales, incluyendo un incremento en el número de carpelos, que incrementa el tamaño del fruto y los números de semillas. Por consiguiente, la expresión de las secuencias semejantes a CLV3 de la invención de una manera que da por resultado una actividad o nivel disminuido del polipéptido semejante a CLV3 puede resultar en: 1) la generación de hojas adicionales antes de que comience la floración, proporcionando de esta manera plantas que tienen mayor producción de energía y de esta manera un rendimiento incrementado; 2) un incremento en el número de carpelos que llevan semillas, permitiendo de esta manera la producción de semillas adicionales; 3) la generación de un tallo más grueso para de esta manera prevenir la fijación del cultivo, incrementando la resistencia al viento, etc.; 4) una alteración del fruto de las plantas es decir, un incremento en el tamaño, la forma y el número de frutos por planta) ; y 5) un incremento en el número de flores. Las plantas que muestran desarrollo del meristemo modulado como es descrito en lo anterior, pueden ser seleccionados usando la observación visual. Ver, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 5,637,785; 6,002,069; 5,859,338; 6,025,483 y Fle-cher y colaboradores (1999) Science 283: 1911-1914, todas las cuales son incorporadas en la presente por referencia. Como se discutió en más detalle anteriormente, se conocen métodos en la técnica que darán por resultado un nivel y/o actividad disminuida del polipéptido semejante a CLV3. Por ejemplo, una construcción antisentido de una secuencia semejante a CLV3 puede ser expresada en una planta o célula de planta para reducir el nivel o actividad de la secuencia semejante CLV3 endógena. En esta modalidad, el nivel de un polipéptido en una célula hospedera es modulado y comprende proporcionar una célula de planta que comprende un mRNA que tiene la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 1, 3, 4 o una variante o fragmento de las mismas; y, introducir una secuencia de nucleótidos que comprende por lo menos 15 nucleótidos consecutivos de la SEQ ID NO:' 1, 3 o 4 en la planta o la célula de planta, en donde la expresión de la secuencia de nucleótidos inhibe la expresión del mRNA en la plata o célula de la planta. Alternativamente, la transformación con una secuencia semejante a CLV3 puede resultar en la cosupresión de las secuencias semejantes a CLV3 endógena. Además, se pueden hacer modificaciones a las secuencias semejantes a CLV3 de la invención que resultan en las secuencias semejantes a CLV3 que tienen una actividad negativa dominante. En cada uno de los casos descritos en lo "anterior, la transformación de una planta o una célula de planta con las secuencias semejantes a CLV3 apropiadas dará por resultado un nivel o actividad disminuida de las secuencias semejantes a CLV3 endógenas, dando por resultado agrandamxento del merxstemo. Alternativamente, el polipéptido que tiene actividad negativa dominante se puede poner en contacto con la planta o célula de planta en la forma de un roció químico.

En una modalidad, el nivel o actividad de las secuencias semejantes a CLV3 son regulados hacia abajo en el maíz. Como las secuencias de la invención se producen para regular negativamente los genes de mantenimiento del meristemo, tal como un homólogo de maíz para USCHEL o POLTERGEIST, el método por lo tanto se espera que regule la capacidad de producción. Esto a , su vez afectará los rendimientos. En el maíz, una capacidad de producción incrementada podría ser reflejada por un incremento en el tamaño y la forma de la mazorca y de esta manera afectar la capacidad de producción de granos de la mazorca. Para una revisión, ver, Fletcher y colaboradores, (2002) Annul Revíew ¦ of Plant Biology 53:45-66, incorporada en la presente por referencia . · En otra modalidad de la invención, se proporcionan métodos para incrementar el nivel y/o actividad de la secuencia a CLV3 endógena en una planta o célula de planta. El incremento en la actividad o nivel semejante a. CLV3 se predice que ocasiona una disminución en el crecimiento del meristemo. Tal alteración en el crecimiento puede presentarse como una mazorca más corta y como una disminución en la formación de espiguitas. Tal fenotipo encuentra uso la producción de plantas que tienen un potencial más alto para llevar granos y una estabilidad del rendimiento mejorada bajo una variedad de condiciones propensas a estrés (es decir, sequía, plantaciones de alta densidad, etc.). Por ejemplo, la sobreexpresión de las secuencias semejantes a CLV3 de la invención puede encontrar uso en incrementar los rendimientos de granos bajo condiciones de sequía. Muchos factores se han identificado que contribuyen al desempeño más alto déla planta bajo deficiencias de agua. El desempeño mejorado del rendimiento del maíz bajo estrés de sequía fue acompañado por mazorcas más cortas (posiblemente debido a mejores sincronizaciones de maduración que dan por resultado eficientes polinizaciones o escape más rápido del estrés mediante la duración del desarrollo de la mazorca acortado) . Además, los cambios fenotípicos en las plantas de maíz tolerantes a la sequía incluyen la capacidad incrementada para llevar granos debido a la esterilidad reducida bajo condiciones de sequía. De hecho, el maíz tolerante a la sequía tiene una reducción en el número de espiguitas formadas en la mazorca y así el conjunto de semillas total es facilitado al reducir los requerimientos de agua y carbono por espiguita. Así, mientras que menos espiguitas son formadas en la mazorca, cada espiguita es finalmente más exitosa en la formación de grano, especialmente bajo condiciones de sequía. Ver para una revisión, Bruce y colaboradores, (2002) Journal of Experimental Botany 53:1-13, la cual es incorporada en la presente por referencia. Por consiguiente el incremento del nivel y/o actividad de las secuencias semejantes a CLV3 de la invención en una planta o célula de planta puede encontrar uso en la producción de plantas que tienen una capacidad más alta para llevar granos sobre un pie cuadrado de tierra y además mejorar la estabilidad del rendimiento en una variedad de condiciones propensas al estrés (es decir, sequía o plantaciones de alta densidad) . Cualquier medio conocido en la técnica se puede utilizar para incrementar el nivel y/o actividad de las secuencias semejantes a CLV3 en una planta. En una modalidad, el polipéptido se pone en contacto con la planta en la forma de un rocío químico en el momento de la sequía. Todavía en otra modalidad, la secuencia semejante a CLV3 se expresa en la planta. En esta modalidad, la secuencia semejante a CLV3 puede ser operablemente enlazada a un promotor inducible por sequía. Tales promotores son conocidos en la técnica y · se han descrito en otra parte en la presente. Como es discutido en lo anterior, los . polipéptidos semejantes a CLV3 y variantes y fragmentos de los mismos de la presente invención se pueden presentar a la planta o célula de planta -como un rocío químico. En esta modalidad, el polipéptido semejante a CLV3 o variantes o fragmentos del mismo, se presentan a la planta o célula de planta durante una etapa del desarrollo adecuada o bajo las condiciones ambientales apropiadas en cantidades suficientes para el polipéptido para modular el desarrollo del meristemo. Las composiciones se pueden aplicar a la planta o célula de planta mediante, por ejemplo, rociado, atomización, espolvoreo, dispersión, recubrimiento o vaciado. Se reconoce que cualquier medio para llevar los polipéptidos semejantes a CLV3 en contacto con la planta se puede usar en la práctica de la invención. Los polipéptidos de la invención se pueden formular con un portador aceptable en una composició (es) que es(son), por ejemplo como una suspensión, una solución, una emulsión, un polvo para espolvorear, un granulo dispersable, un polvo humectable, un concentrado emulsificable, un aerosol, un gránulo impregnado, un adyuvante, una pasta recubrible, y también encapsulaciones en, por ejemplo, sustancias poliméricas. Tales composiciones descritas en lo anterior se pueden obtener mediante la adición de un agente activo en la superficie, un portador inerte, un preservador, un humectante, un estimulante de alimentación y un agente atrayente, un agente encapsulante, · un aglutinante, un emulsificante, un tinte, un protector de luz UV, una solución reguladora, un agente de flujo o fertilizantes, 'donadores de micronutrientes u otras preparaciones que influyen en el crecimiento de la planta. Uno o más agroquimicos incluyen pero no limitados a, .herbicidas, insecticidas, funguicidas, bacteriocidas, nematocidas, molusquicidas, acaricidas, reguladores del crecimiento de plantas, auxiliares de cosecha y fertilizantes, pueden ser combinados con portadores, agentes tensoactivos o adyuvantes usualmente empleados en .la técnica de formulación u otros componentes para facilitar el manejo y la aplicación del producto para micotoxinas objetivo particulares. Los portadores y adyuvantes adecuados pueden ser sólidos o líquidos y ¦ corresponden a las sustancias ordinariamente empleadas en la tecnología de formulación, por ejemplo, sustancias minerales naturales o regeneradas, solventes, dispersantes, agentes humectantes, pegajosificantes, aglutinantes o fertilizantes. Los ingredientes activos de la presente invención normalmente se aplican en la forma de composiciones y pueden ser aplicadas al área de cultivo o a la planta a ser tratada, simultáneamente o en sucesión, con otros compuestos. ' Los agentes activos en la superficie adecuados incluyen, pero no están limitados a, compuestos _anióriicos> tal como un carboxilato de, por ejemplo, un metal; un carboxilato de un ácido graso de cadena larga; un N-acilsarcosinato; mono o di-ésteres de ácido fosfórico con etoxilatos de alcohol graso o sales de tales ásteres; sulfato de alcohol graso tales como dodecil sulfato de sodio, octadecil sulfato de sodio o cetil sulfato de sodio; sulfatos de alcohol graso etoxilado; sulfatos de alquilfenol etoxilado; sulfatos de lignina; sulfonatos de petróleo; alquil aril sulfonatos tal como alquil-benceno sulfonatos o alquilnaftaleno inferior sulfonatos, por ejemplo, butil- naftaleno sulfonato; sales de condensados de naftaleno- formaldehido sulfonado; sales de condensados de fenol- formaldehido sulfonado; sulfonatos más complejos tales como los sulfonatos de amida, por ejemplo, el producto de condensación sulfonado de ácido oleico y N-metil taurina; o los dialquil sulfosuccinatos, por ejemplo el sulfonato de sodio o succinato de dioctilo. Los agentes no iónicos incluyen los productos de condensación de ésteres de ácido graso, alcoholes · grasos, amidas de ácido graso o fenoles sustituidos con alquilo o alquenilo graso con óxido de etileno, ésteres grasos de éteres de .alcohol polihidrico, por ejemplo, ésteres de ácido graso de sorbitan, productos de ¦ condensación de tales ésteres con óxido de etileno, por ejemplo, ésteres de ácido graso de polioxietilen sorbitan, copolímeros de bloque de óxido de etileno y oxido de propileno, glicoles acetilénicos tal como 2, 4, 7 , 9-tetraetil- 5-decin-4, 7-diol, o glicoles acetilénicos etoxilados. Ejemplos de agentes activos de la superficie catiónicos incluyen, por ejemplo, una mono, di-, o poliamina alifática tal como un acetato, naftemato u oleato; o amina que contiene oxigeno tal como un óxido de amina de polioxietilen alquilamina; una amina enlazada a mida preparada mediante la condensación de un ácido carboxilico con una di-o poliamina; o una sal de amonio cuaternaria. Ejemplos de materiales inertes incluyen, pero no están limitados a, minerales inorgánicos tales como caolín, filosilicatos, carbonatos, sulfonatos, fosfatos, o materiales botánicos tales como corcho, olotes en polvo, cáscaras de cacahuate, cáscaras de arroz y cáscaras de nuez. Las composiciones de la presente invención pueden estar en una forma adecuada para la aplicación directa o como un concentrado de composición primaria, que requiere dilución con una cantidad de agua adecuada u otro diluyentes antes de la aplicación. La concentración variará dependiendo de la naturaleza de la formación particular, específicamente, sí es un concentrado o para ser usada directamente. En una modalidad adicional, las composiciones, así como los polipéptidos de la presente invención se pueden tratar antes de la formulación para prolongar la actividad cuando son aplicados a la planta o célula de planta mientras que el pretratamiento no sea perjudicial para la actividad. Tal tratamiento puede ser cualquier medio químico y/o físico mientras que el tratamiento no afecte perjudicialmente las propiedades de la(s) composición (es) . Ejemplos de reactivos químicos incluyen, pero no están limitados a, agentes de halogenación; aldehidos tales como formaldehído y glutaraldehído; antiinfecciosos, tal como cloruro de zefirano; alcoholes, tal como isopropanol y etanol; y fijadores histológicos tal como el fijador de Bouin y el fijador de Helly (ver, por ejemplo, Humason (1967) Animal Tissue Techniques (W.H. Freeman y Co.). La presente invención además proporciona un método de formar el genotipo de una planta usando el polinucleótido de la presente invención. Como es discutido en lo anterior, las secuencias semejantes a CLV3 de la invención regulan el desarrollo del meristemo. Las secuencias por lo tanto encuentran uso como marcadores moleculares para la selección de plantas que tendrán el fenotipo de desarrollo deseado. Por ejemplo, los alelos específicos de las secuencias semejantes a CLV3 de la invención podrían ser usados para rastrear híbridos de maíz que forman mazorcas largas o cortas. Opcionalmente, la planta es una monocotiledónea, tal como maíz o sorgo. La formación de genotipo proporciona un medio para distinguir homólogos de un par de cromosomas y se puede usar para diferenciar segregantes en una población de planta. Se pueden ' utilizar métodos marcadores moleculares para estudios filogenéticos, caracterización de las relaciones genéticas entre variedades de cultivo, identificación de cruzas o híbridos somáticos, localización de segmentos cromosómicos que afectan los atributos monogénicos, clonación basada en mapa, y el estudio de la herencia cuantitativa. Ver, por ejemplo, Plant Molecular Biology: A Laboratory Manual, Chapter 7, Clark, Ed. , Springer-Verlag, Berlín (1997) . Para métodos de marcador molecular, ver generalmente, Paterson (1996) The DNA Revolution (Chapter 2) in: Genome mapping in Plants (ed. Andre H. Paterson), Academic Press/R.G. Lands Company, Austin, Texas, 7-21. El método particular de formación de genotipo en la presente invención puede emplear cualquier número de técnicas analíticas de marcador molecular tales como, pero no limitadas a, polimorfismos de longitud de fragmento de restricción (RFLPs) . Los RFLPs son el producto de diferencias alélicas entre los fragmentos de restricción de DNA que resultan de la variabilidad de la secuencia de nucleótidos. Como es bien conocido para aquellos expertos en la técnica, los RFLPs típicamente se detectan mediante la extracción del DNA genómico y la digestión con una enzima de restricción. Generalmente, los fragmentos resultantes se separan de acuerdo con el tamaño y se hibridan con una sonda; . se prefieren sondas de copia individual. Se revelan fragmentos de restricción de cromosomas homólogos. 'Las diferencias en el tamaño del fragmento entre los alelos representan un RFLP. sí, la presente invención además proporciona un método para permitir la segregación de un gen o ácido nucleico de la presente invención así como las secuencias cromosómicas genéticamente enlazadas a estos genes o ácidos nucleicos usando tales técnicas como el análisis de RFLP. Las secuencias cromosómicas enlazas están dentro de 50 centi organs (cM) , frecuentemente dentro de 40 o 30 c , de preferencia dentro de 20 0 10 cM, más de preferencia dentro de 5, 3, 2, o 1 cM de un gen de la presente invención. En la presente invención, las sondas de ácido nucleico empleadas para el mapeo de marcador molecular de los genomas nucleares de la planta selectivamente hibridan bajo condiciones de hibridación selectivas, a un gen que codifica un polinucleótido de la presente invención. En modalidades preferidas, las sondas se seleccionan a partir de polinucleótidos de la presente invención. Típicamente, estas sondas son sondas de cDNA o clones genómicos tratados con enzima de restricción (por ejemplo, PST I) . La longitud de la sonda se discute en mayor detalle, supra,. pero típicamente es de por lo menos 15 bases en longitud, más de preferencia por lo menos. 20, 25, 30, 35, 40 o 50 bases en longitud. Generalmente, sin embargo, las sondas son menos de aproximadamente 1 'kilobase en longitud. De preferencia, las sondas son sondas de copia individual que hibridan a un sitio único en el cumplimiento del cromosoma haploide. Algunas enzimas de restricción ejemplares, empleadas en el mapeo de RFLP son EcoRI, EcoRv, y Sstl. Como se utiliza en la presente, el término enzima de restricción" incluye la referencia a una composición que reconoce y, sola o en conjunción con otra composición, segmenta una secuencia de nucleótidos especifica. El método de detección de una RFLP comprende las etapas de (a) digerir el DNA genómico de una planta con una enzima de restricción; (b) hibridar una sonda de ácido nucleico, bajo condiciones de hibridación selectivas, a una secuencia de un polinucleótido de la presente del DNA genómico; (c) Detectar del mismo un RFLP. Otros métodos para diferenciar las variantes polimórficas (alélicas) de polinucleótidos de la presente invención se pueden tener, al utilizar técnicas de marcador molecular bien conocidos para aquellos expertos en la técnica incluyendo tales técnicas como: 1) análisis de conformación de una sola hebra (SSCA) ; 2) electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante (DGGE) ; 3) ensayos de protección de RNasa; 4 ) oligonucleótidos específicos de alelos (ASOs) ; 5) el uso de proteínas que reconoces desigualaciones de nucleótidos, tal como la proteína mutS de E. coli; y 6) específica de alelo.- Otros procedimientos basados en l-a detección de desigualaciones entre las dos hebras de DNA complementarias incluyen la electroforesis en gel desnaturalizantes sujetada (CDGE) ; análisis de heterodúplex (HA) ; y la segmentación de desigualación química (CMC) .· Así la presente invención además proporciona un método de formación de genotipo que comprende las etapas de poner en contacto, bajo condiciones de hibridación severas, una muestra que se sospecha de comprender un polinucleotido de la presente invención con una sonda de ácido nucleico. Generalmente, la muestra es una muestra de planta, de preferencia, una muestra que se sospecha de comprender un polinucleotido de maíz de la presente invención (por ejemplo, gen, mRNA) . La sonda de ácido nucleico selectivamente híbrida, bajo condiciones severas, una subsecuencia de un polinucleotido de la presente invención que comprende un marcador polimórfico. La hibridación selectiva de la sonda de ácido nucleico a la secuencia de ácido nucleico de marcador polimórfico produce un complejo de hibridación. La detección del complejo de hibridación indica la presencia de ese marcador polimórfico en la muestra. En modalidades preferidas, la sonda de ácido nucleico comprende un polinucleotido de la presente invención. EXPERIMENTAL Ejemplo 1. Aislamiento de Secuencias Semejantes a CLV3 y Patrones de Expresión en el Maíz. CLAVATA3 es una proteína secretada corta que actúa como un "ligando" e interactúa con un complejo de -quinasa receptor (CLAVATA1 & CLAVATA2) y de esta manera regula la agrupación de células madres en el meristemo del retoño de planta. El complejo de señalización negativamente regula los genes de homeodominio que son necesarios para mantener una estructura del meristemo. En Arabidopsis, WUSCHEL es regulado por la ruta de CLV. El gen CLV3 original fue descrito en Arabidopsis pero ningún homólogo funcional se ha descrito en otra especie de planta. Usando una versión extendida de la región conservada de AtCLV3 (LHEELRTVPSGPDPLHHHVNPPRQR) (SEQ ID NO: 6) la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 1 se identificó en una biblioteca de maíz (5 días después de la maduración de óvulos) que puede tener incluidos tejidos meristemáticos . La proteína predicha es de aproximadamente la misma longitud como AtCLV3 y contiene la secuencia de aminoácidos conservada como se expone en las Figuras 1 y 3. Un clon genómico de la secuencia semejante a CLV3 de maíz de la invención también se aisló. Específicamente, los cebadores de punto de inserción de mutador a partir de una biblioteca de maíz patentada se utilizaron para generar a partir de la clonación con PCR el fragmento genómico de ma±2 expuesto en la SEQ ID NO: 4. Los codones .de inicio y de detección son resaltados en negritas 'en la Figura 4. Este fragmento genómico contiene dos iritrones (similarmente colocados al gen CLV3 de Arabidopsis) que se han indicado por las secuencias en letras minúsculas cursivas en la Figura 4. Se observa que la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 4 (la secuencia semejante a CLV3 derivada del clon genómico) y la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 1 y 3 difieren ligeramente. Las diferencias son posiblemente debido a diferencias en los genotipos usados en la elaboración de las bibliotecas de EST. Por lo tanto, los "polimorfismos" de la SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 pueden ser reales . Un homólogo de CVL3 se predice que es más activo en el tejido de mazorca inmaduro de una linea de mazorca corta que en una linea de mazorca larga, puesto que este gen regularla negativamente los genes de mantenimiento del meristemo tal como un homólogo de maíz de WUSCHEL o POLTERGEIST. Un experimento de MPSS del Lynx se realizó sobre muestras de dos lineas endogámicas de élite con el desarrollo de mazorca temprana contrastante. Se analizaron niveles de expresión de ortólogos de maiz de CLV3 y CLV2 en mazorcas inmaduras completas de lineas endogámicas de mazorca larga (LE) y mazorca corta (SE) en dos etapas vegetativas, Vil y V12. EL RNA total se preparó a partir de agrupaciones de mazorcas inmaduras disectadas de aproximadamente 40 plantas cultivadas en el campo por etapa de desarrollo y genotipo. El RNA se usó en un análisis de MPSS por Lynx Th'erapeutics (Haywood, CA) y los datos se reportan como partes por millón (ppm) esencialmente como es descrito en Brenner y colaboradores (2000) Nature Biotechnology 18:630:634. Ver Figura 2. CLV2 se refiere al gen FEA2 de maiz (Taguchi-Shiobara y colaboradores, (2001) Genes & Rev 15:2755-66) y CLV3 se refiere al clon CLV3 de maiz de la presente invención . Como es predicho para un homólogo de CLV3, la expresión de la secuencia semejante a CVL3 de maíz (SEQ ID NO: 1) se mostró en los datos de MPSS de Lynx que es más activo en una línea de maíz de élite de mazorca corta (A) que en una línea de mazorca larga (D) . Ver la Figura 2. Estos datos sustentan que la secuencia semejante a CLV3 de la presente invención es un homólogo de maíz para el gen CLV3 de Arabidopsis. Por consiguiente, al regular negativamente los genes de mantenimiento del meristemo, ¦ CLV3 puede desempeñar una -función fuerte en la regulación del tamaño y la forma de la mazorca de maíz afectando de esta manera la capacidad de producción de granos de la mazorca. Esto a su vez puede desempeñar una función en afectar los rendimientos. Además se observa que CLV3 es débilmente expresado solo en las regiones meristemáticas por toda la mazorca y por lo tanto la señal funcional fue dependiente de CLV3 · cuya expresión es más altamente restringida y limitada en proporción que la expresión FEA2. Ejemplo 2: Transformación y Regeneración de Plantas Transgénicas Embriones de maíz inmaduros de plantas donantes de invernadero se bombardean con un plásmido que contiene la secuencia semejante a CLV3 operablemente enlazada a un promotor inducible por sequía, el promotor RAB17 (Vilardell y colaboradores (1990) Plant Mol Biol 14:423-432) y el gen marcador seleccionable PAT, que confiere resistencia al herbicida Bialaphos. Alternativamente, el gen marcador seleccionable se proporciona sobre un plásmido separado. La transformación es realizada como sigue. Las recetas de los medios siguen a continuación. Preparación del Tejido Objetivo: Las mazorcas se despinochan y se esterilizan en la superficie con blanqueador Chlorox al 30% más detergente Micro al 0.5% durante 20 minutos y se enjuagan dos veces con agua estéril. Los embriones inmaduros se extirpan y se colocan con el lado del eje del embrión hacia abajo (lado del escutelo hacia arriba) , 25 embriones por placa, sobre medio 560Y durante 4 horas y luego se alinean dentro de la zona objetivo de 2.5 cm en la preparación para el bombardeo. Preparación del DNA: Se hace un vector de plásmido que comprende la secuencia semejante a CLV3 operablemente ' enlazada a un promotor ubicuitin. Este- DNA de plásmido más DNA de plásmido que contiene un marcador seleccionable PAT se precipita sobre pelotillas de tungsteno de 1.1 x (diámetro promedio), utilizando un procedimiento de precipitación de CaCl2 como sigue : 100 µ? de partículas de tungsteno preparadas en agua 10 µ? de DNA (1 µg) en solución reguladora de Tris EDTA (1 ]ig de DNA total) 100 µ? de CaCl2 2.5 M 10 µ? de espermidina 0.1 M Cada reactivo se agrega secuencialmente a la suspensión de partículas de tungsteno, mientras que se mantiene sobre el aparato formador de vórtice de tubos múltiples. La mezcla final se sónica brevemente y se deja incubar bajo formación de vórtice constante durante 10 minutos. Después del período de precipitación, los tubos se centrifugan brevemente, el líquido se retira, se lavan con 500 mi de etanol al 100% y se centrifugan durante 30 segundos. Nuevamente el líquido se retira y 105 µ? de etanol al 100% se agregan a la pelotilla final de partículas de tungsteno. Para el bombardeo con pistola de partículas, las partículas de tungsteno/DNA se sonican brevemente y 10 µ? se depositan sobre el centro de cada macroportador y se dejan secar aproximadamente 2 minutos antes del bombardeo. Tratamiento con Pistola de Partículas : ¦ Las placas de muestras se bombardean en el nivel #4 en la pistola de partículas #HE34-1 o #HE34-2. Todas las muestras reciben un solo disparo a 650 PSI, con un total de diez alícuotas tomadas de cada tubo de partículas preparadas/DNA. Tratamiento Subsecuente: Después del bombardeo, los embriones se mantienen sobre el medio 560Y durante 2 días, luego se transfieren al medio de selección 560R que contiene 3 mg/litro de Bialaphos y se subcultivan cada 2 semanas. Después de aproximadamente 10 semanas de selección, los clones del callo resistente a la selección se transfieren al medio 288J para iniciar la regeneración de la planta. Después de la maduración somática del embrión (2-4 semanas) , los embriones somáticos bien desarrollados se transfieren al medio para la germinación y se transfieren al cuarto de cultivo alumbrado. Aproximadamente 7-10 días después, las plantitas en desarrollo se transfieren al medio libre de hormona 272V en tubos durante 7-10 dias hasta que las plantitas están bien establecidas. Las plantas luego se transfieren a insertos en semilleros de cajón (equivalente a maceta de 2,5") que contienen tierra de maceta y se cultivan durante 1 semana en una cámara de crecimiento, subsecuentemente se cultivan 1-2 semanas adicionales en el invernadero, luego se transfieren a 600 macetas clásicas (1.6 galones) y .se cultivan hasta la madurez. Las plantas se inspeccionan y se registran para la tolerancia a la sequía incrementada. Los ensayos para medir la tolerancia a la sequía mejorada son de rutina en la técnica e incluyen, por ejemplo, los rendimientos de capacidad de formación de mazorcas con granos incrementados bajo condiciones de sequía, cuando se comparan con las plantas de maíz de control bajo condiciones ambientales idénticas. Alternativamente, las plantas transformadas pueden ser inspeccionadas para una modulación en el desarrollo del meristemo (es decir, una disminución en la formación de espiguitas sobre la mazorca). Ver, por ejemplo, Bruce y colaboradores (2002) Journal of Experimental Botany 53:1-13. Medios de Bombardeo y de Cultivo: El medio de bombardeo (560Y) comprende 4.0 g/1 de sales básales N6 (SIGMA C-1416) , 1.0 ml/1 de Mezcla de Vitamina de Eriksson (1000X SIGMA-1511), 0.5 mg/1 de tiamina HC1, 120.0 g/1 de sacarosa, 1.0 mg/1 de 2,4-D y 2.88 g/1 de L-prolina (llevada al volumen con D-I H20 después del ajuste a pH 5.8 con KOH) ; 2.0 g/1 de Gelrite (agregado después de llevar al volumen con D-I H20) ; y 8.5 mg/1 de nitrato de plata (adicionado después de la esterilización del medio y el enfriamiento a temperatura ambiente) . El medio de selección (560R) comprende 4.0 g/1 de sales básales N6 (SIGMA C-1416), 1.0 ml/1 de Mezcla de Vitamina de Eriksson (1000X SIGMA-1511), 0.5 mg/1 de tiamina HC1, 30.0 g/1 de sacarosa y 2.0 mg/1 de 2,4-D (llevada al volumen con D-I H20 después del ajuste a pH 5.8 con KOH); 3.0 g/1 de Gelrite (agregado después de llevar al volumen con D-I H20) ; y 0.85 mg/1 de nitrato de plata y 3.0 mg/1 de bialaphos (ambos adicionados después de la esterilización del medio y el enfriamiento a temperatura ambiente) .

El medio de regeneración de planta (288J) comprende 4.3 g/1 de sales S (GIBCO 11117-074), 5.0 ml/1 de solución base de vitaminas MS (0.100 g de ácido nicotinico, 0.02 g/1 de tiamina HCL, 0.10 g/1 de piridoxina HCL y 0.40 g/1 de glicina llevada al volumen con D-I H20 refinada) (Murashige y Skoog (1962) Physiol. Plant. 15:473), 100 mg/1 de mioinositol, 0,5 mg/1 de zeatina, 60 g/1 de sacarosa y 1.0 ml/1 de ácido abscisico 0.1 mM (llevado al volumen con D-I H20 refinada . después de ajustar al pH 5.6); 3.0 g/1 de Gelrite (agregado después de llevar al volumen con D-I H20) ; y 1.0 mg/1 de ácido indolacético y 3.0 mg/1 de bialaphos (agregado después de la esterilización del medio y el enfriamiento a 60 °C) . El medio libre de hormona (272V) comprende 4.3 g/1 de sales MS (GIBCO 11117-074), 5.0 ml/1 de solución base de. itaminas MS (O'.lOO g/1 de ácido nicotinico, 0.02 g/1 de tiamina HCL, 0.10 g/1 de piridoxina HCL y 0.40 g/1 de glicina llevada al volumen con D-I H20 refinada)-, 0.1 g/1 de mioinositol . y 40.0 g/1 de sacarosa (llevada al volumen con D-I H20 refinada después de ajustar el pH a 5.6); y 6 g/1 de bacto-agar (agregado después de llevar al volumen con D-I H20) , esterilizado y enfriado a 60°C. Ejemplo 3: Transformación mediada por Agrobacterium Para la transformación del maiz mediada por Agrrojbacterium con una secuencia antisentido de la secuencia semejante a CLV3 de la presente invención, de preferencia se emplea el método de Zhao (patente norteamericana No. 5,981,840 y publicación de patente PCT, W098/32326; los contenidos de las cuales son incorporados en la presente por referencia) . Brevemente, los embriones inmaduros se aislan del maíz y los embriones se ponen en contacto con una suspensión de Agrobacterium, donde las bacterias son capaces de transferir las secuencias semejantes a CLV3 antisentido a por lo menos una célula de por lo menos uno de los embriones inmaduros (etapa 1: la etapa de infección). En esta etapa los embriones inmaduros de preferencia se sumergen en una suspensión de Agrobacterium para la iniciación de la inoculación. Los embriones se co-cultivan durante un tiempo con el Agrobacterium (etapa 2: la etapa de co-cultivo) . De preferencia los embriones inmaduros se cultivan sobre medio sólido después de la etapa de infección. Después de este periodo de co-cultivo, se contempla una etapa "latente" opcional. En esta etapa latente, los embriones se incuban en la presencia de por lo menos un antibiótico conocido que inhibe el crecimiento del Agrobacterium . sin la adición de una agente selectivo para transformantes de planta (etapa 3: etapa latente) . De preferencia los embriones inmaduros se cultivan sobre medio sólido con antibiótico, pero sin un agente de selección, para la eliminación del Agrobacterium y para una fase latente para las células infectadas. Enseguida, los embriones inoculados se cultivan sobre un medio que contiene una agente selectivo y se recupera el callo transformado en crecimiento (etapa 4: la etapa de selección). De preferencia, los embriones inmaduros se cultivan sobre medio sólido con un agente selectivo que da por resultado el crecimiento selectivo de las células transformadas. El callo luego se regenera en plantas (etapa 5: la etapa de regeneración) y de preferencia, los callos crecidos sobre el medio selectivo se cultivan sobre medio sólido para regenerar las plantas. Las plantas se inspeccionan y se registran para una modulación en el desarrollo del meristemo. Por ejemplo, las alteraciones del tamaño y la aparición de los meristemos del retoño y florales y/o rendimientos incrementados de hojas, flores y/o frutos. Ejemplo 4: Transformación del Embrión de Soya Embriones de soya se bombardean con un plásmido que contiene una secuencia semejante a CLV3 " antisentido operablemente enlazado a un promotor ubicuitin como sigue. Para inducir embriones somáticos, las cotiledones, 3-5 mm en longitud seccionados de semillas inmaduras, esterilizadas en la ' superficie del cultivo de soya ?2872, se cultivan en la luz. u oscuridad a 26°C sobre un medio de agar ' apropiado durante seis a diez semanas. Los embriones somáticos que producen embriones secundarios luego se extirpan y se colocan en un medio liquido adecuado. Después de la selección repetida para agrupaciones de embriones somáticos que se multiplicaron como embriones en etapa globular, temprana, las suspensiones son mantenidas como es descrito en lo siguiente. Los cultivos de suspensión embriogénica de soya pueden mantenerse en 35 mi de medio liquido sobre un agitador rotatorio, 150 rpm, a 26°C con luces fluorescentes en un programa de dia/noche de 16:8 horas. Los cultivos se subcultivan cada dos semanas al inocular aproximadamente 35 mg de tejido en 35 mi de medio liquido. Los cultivos de suspensión embriogénica de soya luego pueden ser transformados mediante el método de bombardeo con pistola de partículas (Klein y colaboradores (1987) Nature (Londres) 327:70-73, patente norteamericana No. 4,945,050). Un instrumento Du Pont Biolistic PDS1000/HE (retroajuste de helio) puede ser utilizado para estas transformaciones . Un gen marcador seleccionable que puede ser utilizado para facilitar la transformación de la soya es un transgen compuesto del promotor 35S del Virus de Mosaico de Coliflor- (Odell y colaboradores (1985). Nature 313:810-812), el gen de higromicina fosfotransferasa del plásmido pJR225 (de E. Coli; Gritz y colaboradores (1983) Gene 25:179-188) y la región 3' del gen de nopalina sintasa del T-DNA del plásmido Ti de Agrobacterium turnef'aciens. · El cásete de expresión que comprende una secuencia semejante a CLV3 antisentido operablemente enlazado al promotor ubicuitin, puede ser aislado como un fragmento de restricción. Este fragmento luego puede ser insertado en un sitio de restricción único del vector que lleva el gen marcador. ? 50 µ? de una suspensión de partículas de oro de 1 µp? de 60 mg/ml se agrega (en orden): 5 µ? de DNA (1 µ?/µ?) , 20 µ? de espermidina (0.1 M) y 50 µ? de CaCl2 (2.5 M) . La preparación de partículas luego se agita durante tres minutos, se gira en una microcentrífuga durante 10 segundos y el sobrenadante se retira. Las partículas recubiertas de DNA luego se lavan una vez en 400 µ? de etanol al 70% y se resuspenden en 40 µ? de etanol anhidro. La suspensión de DNA/partícula puede ser sonicada tres veces durante un segundo cada vez. Cinco microlitros de las partículas de oro recubiertas de DNA luego se cargan sobre cada plato macroportador . Aproximadamente 300-400 mg de un cultivo en suspensión de dos semanas se colocan -en una caja de Petri vacía de 60 x- 15 mm y el líquido residual retirado del tejido con una pipeta. Para cada experimento de transformación, aproximadamente 5-10 placas de tejido son · normalmente bombardeadas. La presión de ruptura de la membrana es ajustada a 1100 psi y la cámara se evac a a un vacio de 28 pulgadas de mercurio. El tejido es colocado aproximadamente 3.5 pulgadas lejos de la criba de retención y bombardeado tres veces. Después del bombardeo, el tejido puede ser dividido a la mitad y colocado nuevamente en liquido y cultivado como es descrito en lo anterior. Cinco a siete dias después del bombardeo, el medio liquido puede ser intercambiado con medio fresco, y siete a doce dias después del bombardeo con medio fresco que contiene 50 mg/ml de higromicina. Este medio selectivo puede ser renovado cada semana. Siete a ocho semanas después del bombardeo, tejido transformado, verde, puede ser observado creciendo de las agrupaciones embriogénicas necróticas, no transformadas. El tejido verde aislado es retirado e inoculado en matraces individuales para generar nuevos cultivos de suspensión embriogénica transformados, clonalmente propagados. Cada linea nueva puede ser tratada como un evento de transformación independiente. Estas suspensiones luego pueden ser subcultivadas y mantenidas como agrupaciones de embriones inmaduros o regeneradas en plantas enteras mediante maduración y germinación de embriones-somáticos individuales. Ejemplo .5 Transformación del Tejido del Meristemo de Girasol Tejidos del meristemo de girasol se transforman con un cásete de expresión que contienen secuencias semejantes a CLV3 antisentido operablemente enlazado a un promotor ubiquitin como sigue (ver también la patente Europea número EP 0 486233, incorporada en la presente por referencia, y · Malone-Schoneberg y colaboradores, (1994) Plant Science 103:199-207). Semillas de girasol maduras {Helianthus annuus L.) se descascaran usando una trilladora de cabezas de trigo individual. Las semillas se esterilizan en la superficie durante 30 minutos en una solución blanqueadora de Clorox al 20% con la adición de dos gotas de Tween 20 por 50 mi de solución. Las semillas se -enjuagas dos veces con agua destilada estéril. Explantaciones del eje embriónico divididas se preparan mediante una modificación de los L procedimientos descritos por Schrammeijer y colaboradores (Schrammeij er y colaboradores, (1990) Plant Cell Rep. 9:55-60). Las semillas se empapan en agua destilada durante 60 minutos después del procedimiento de esterilización de la superficie. Los cotiledones de cada semilla luego se rompen, produciendo una fractura limpia en el plano del eje embriónico. Después de la · escisión de la punta de la raiz, las explantaciones se bisectan longitudinalmente entre las hojas primordiales. Las dos hojas se colocan, cortadas en la superficie hacia arriba, en el medio GBA que consiste de elementos minerales de Murashige y Skoog (Murashige y colaboradores, (1962) Physiol. ¦ Plant., 15: 473-497), adiciones de vitamina de Shepard (Shepard (1980) in Emergent Techniques for the Genetic Improvement of Crops (üniversity of Minnesota Press, St. Paul, Minnesota) , 40 mg/1 de sulfato de adenina, 30 g/1 de sacarosa, 0.5 mg/1 de 6-bencil-aminopurina (BAP ) , 0.25 mg/1 de ácido indol-3-acético ( IAA) , 0.1 mg/1 de ácido giberélico (GA3) , pH 5.6, y 8 g/1 de Phytagar. Las explantaciones se someten al bombardeo de microproyectiles antes del tratamiento de Agrobacterium (Bidnye y colaboradores, (1992) Plant Mol. Biol. 18:301-313). Treinta a cuarenta explantaciones se colocan en un circulo en el centro de una placa de 60 x 20 mm para este tratamiento. Aproximadamente 4.7 mg de microproyectiles de tungsteno de 1.8 mm se resuspenden en 25 mi de solución reguladora de TE estéril (Tris HCl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 8.0) y alícuotas de 1.5 mi - se usan por bombardeo. Cada placa se bombardea dos veces a través de una criba nitex de 150 mm colocada 2 cm arriba de las muestras en un dispositivo de aceleración e partículas PDS 1000®. La cepa EHA105 de Agrohacteriun tumefaciens desactivada se utiliza en todos los experimentos de formación. Un vector de plásmido binario que comprende el cásete de expresión que contiene el gen semejante a CLV3 operablemente enlazado al promotor ubiquitin se introduce en la cepa EHA105 de Agrohacteriun por medio de la congelación-descongelación como es descrito por Holsters y colaboradores, (1978) Mol. Gen. Genet. 163:181-187. Este plásmido además comprende un gen marcador seleccionable de canamicina (es decir nptll) . Las bacterias para los experimentos de transformación de planta se cultivan durante la noche (28 °C y agitación continua de 100 RPM) en el medio YEP líquido (10 gm/l de extracto de levadura, 10 gm/1 de Bactopeptona y 5 gm/1 de NaCl, pH 7.0) con los antibióticos apropiados requeridos para la sepa bacteriana y el mantenimiento del plásmido binario. La suspensión se usa cuando alcanza una OD60o de aproximadamente 0.4 a 0.8. las células de Agrobacteriun se forman en pelotillas y se resuspenden a una OD600 final de 0.5 en un medio de inoculación comprendido de 12.5 mM MES pH 5.7, 1 gm/1 NH4C1, y 0.3 gm/1 MgS04. Las explantaciones recientemente bombardeadas se colocan en una suspensión de Agrobacteriun, se mezclan y se dejan sin alterar durante 30 minutos. Las explantaciones luego se transfieren al medio de GBA y se co-cultivan, la superficie cortada hacia abajo, a 26°C y dias de 18 .horas. Después de 3 dias de co-cultivo, las explantaciones se transfieren a 37 B (medio de GBA que carece de .reguladores de crecimiento y un nivel de sacarosa reducido de 1%) suplementado con 250 mg/1 de cefotaxima y 50- mg/1 de sulfato de canamicina. Las explantaciones se cultivan durante dos a cinco semanas en la selección y luego se transfieren al medio 374B fresco que carece de canamicina durante una o dos semanas de desarrollo continuo. Las explantaciones con áreas de crecimiento resistentes al antibiótico, diferenciantes que no han producido retoños adecuados para la escisión se transfieren a un medio GBA que contiene 250 mg/1 de cefotaxima durante un segundo tratamiento de fxtohormona de 3 días. Las muestras de hojas de retoño resistentes a canamicina, verdes se analizan para la presencia de NPTII mediante ELISA y para la presencia de la expresión del transgen al analizar una modulación en el desarrollo del meristemo (es decir, una alteración del tamaño y la aparición de meristemos de retoño y florales) . Los retoños positivos de NPTII se injertan al rizoma de plántula de girasol cultivado in vitro en Pioneer® Irbid 6440. Las semillas esterilizadas en la superficie se germinan en el medio 48-0 (sales de urashige y Skoog de mediana concentración, sacarosa al 0.5%, gelrite al 0.3%, pH 5.6) y se cultivan bajo condiciones descritas para el cultivo de explantaciones. La porción superior de la plántula se retira, se hace un corte vertical de 1 cm en el hipocótilo, y el retoño transformado se inserta en el corte. El área completa se envuelve con parafilm para asegurar el retoño. Las plantas injertadas se pueden transferir a la tierra después de una semana de cultivo in vitro. Los injertos en la tierra se mantienen bajo condiciones dé alta humedad seguido por una aclimatación lenta al medio 'ambiente del invernadero. Los sectores transformados de las plantas T0 (generación de origen) que maduran en el invernadero son identificados por ELISA de NPTII y/o mediante el análisis de actividad semejante a CLV3 de los extractos de hoja mientras que las semillas transgénicas cosechadas de las plantas T0 positivas de PTII son identificadas mediante el análisis de la actividad semejante a CLV3 de pequeñas porciones de cotiledón de semilla seca. Un protocolo de transformación de girasol alternativo permite la recuperación de la progenie transgénica sin el uso de la presión de selección química. Las semillas se descascarán y se esterilizan en la superficie durante 20 minutos en una solución blanqueadora de Clorox al 20% con la adición de dos a tres gotas de Tween 20 por 100 mi de solución, luego se enjuagan tres veces con agua destilada. Las semillas esterilizadas se empapan en la oscuridad a 26°C durante 20 horas sobre papel filtro humedecido con agua. Los cotiledones y los radicales de raíz se retiran y las explantaciones del meristemo se cultivan en 374E (medio GBA que consiste de sales MS, vitaminas Shepard, 40 mg/1 de sulfato de adenina, sacarosa al 3%, 0.5 mg/1 de 6-BAP, 0.25 mg/1 de iAA, 0.1 mg/1 de GA y 0.8% de Phytagar en pH 5.6) durante 24 horas bajo la oscuridad. Las hojas primarias se retiran para exponer el meristemo apical, alrededor de 40 explantaciones se colocan con el domo apical enfrentado hacia arriba en un círculo de 2 cm en el centro de 374M (medio de GBA con Phytagar al 1.2%), y luego se cultivan en el medio durante 24 horas en la oscuridad. Aproximadamente 18.8 mg de partículas de tungsteno de 1.8 µp? se resuspenden en 150 µ? de etanol puro. Después de la. sonicación, 8 µ? de esto, se deja caer sobre el centro de la superficie del macroportador . Cada placa se bombardea dos veces con discos de ruptura de 650 psi en el primer instante a un vacio de pistola de helio de 26 mm de Hg. El plásmido de interés se introduce en la cepa EHA105 de Agrobacteriun tumefaciens por medio de la congelación-descongelación como es descrito previamente. La pelotilla de bacterias cultivadas durante la noche a 28 °C en un medio YEP líquido (10 g/1 de extracto de levadura, 10 g/1 de Bactopeptona y 5 g/1 de NaCl, pH 7.0). en presencia de 50 ug/l de canamicina se resuspende en un medio de inoculación (ácido 2- (N-morfolino) etanosulfónico 12.5 mM 2-mM, MES, lg/1 de NH4C1 y 0.3 g/1 de MgS04 a pH 5.7) para alcanzar una concentración final de 4,0 a OD 600. Las explantaciones ¦ bombardeadas con partículas se transfieren al medio GBA (374E) , y una gota de suspensión de bacteria se coloca directamente sobre la parte superior del meristeitto. Las explantaciones se co-cultivan en el medio durante. 4 días, después de lo cual las explantaciones se transfieren al medio 374C (GBA con sacarosa al 1% y sin BAP, ???, GA3 y suplementado con 250 µg/ml de cefotaxima) . Las plantitas se cultivan en el medio durante aproximadamente dos semanas bajo el día de 16 horas y condiciones de incubación de 26°C. Las explantaciones (alrededor de 2 cm de largo) de dos semanas de cultivo en el medio 374C se clasifican para una modulación en el desarrollo del meristemo (es decir, una alteración del tamaño y la aparición de meristemos de retoño y florales) . Después de que se identifican las explantaciones positivas (es decir, una disminución en la expresión semejante a CLV3), aquellos retoños que no logran exhibir una actividad en la actividad- semejante a CLV3 se descartan, y cada explantacion positiva se subdivide en explantaciones nodales. Una explantación nodal contiene por lo menos un nudo potencial, los segmentos nodales se cultivan en el medio GBA durante tres a cuatro dias para promover la formación de brotes auxiliares desde cada nudo. Luego se transfieren al medio 374C y se dejan desarrollar durante cuatro semanas adicionales. Los brotes en desarrollo se separan y se cultivan durante cuatro semanas adicionales en el medio 374C. Muestras de hojas agrupadas de cada retoño recientemente recuperado se clasifican nuevamente mediante el análisis de actividad de proteina apropiada. En este" tiempo, los retoños positivos recuperados de un nudo individual generalmente se han enriquecido en el sector transgénico detectado en el análisis inicial antes del cultivo nodal. Los retoños recuperados positivos para una expresión semejante a CLV3 disminuida, se injertan al rizoma de plántula de girasol cultivado in vitro en Pionner Hybrid 6440. Los rizomas, se prepararan de la siguiente manera. Las semillas se descascaran y se esterilizan en la superficie durante 20 minutos en una solución blanqueadora de Clorox al 20% con la adición de dos a tres gotas de Tween 20 por 100 mi de solución, y se enjuagan tres veces con agua destilada. Las semillas esterilizadas se germinan en el filtro humedecido con agua durante tres días, luego se transfieren al medio 48 (sal de MS de mediana concentración, sacarosa al 0.5%, gelrite al 0.3% Ph 5.0) y se cultivan a 26°C bajo la oscuridad por tres dias, luego se incuban en condiciones de cultivo de dias de 16 horas. La porción superior de plántulas seleccionadas se retira, un corte vertical se hace en cada hipocótilo y un retoño transformado se inserta en un corte V. El área cortada se envuelve con parafilm. Después de una semana de cultivo en el medio, las plantas injertadas se transfieren a la tierra. En las primeras dos semanas, ellas se mantienen bajo condiciones de alta humedad para aclimatarse a un medio ambiente de invernadero. Ejemplo 6. Análisis de Transcripción inversa-PCR cuantitativa del Gen Semejante a CLV3 en mazorcas en desarrollo de maiz. El ejemplo 1 describió las diferencias de expresión de MPSS de Lynx para el gen .semejante a CLV3 en las muestras de RNA de mazorca de dos lineas endogámicas de élite, A y D que producen mazorcas cortas y largas, respectivamente. Las muestras de RNA de la punta de la mazorca de tres etapas de desarrollo se averiguaron mediante la RT-PCR cuantitativa esencialmente como es descrito. Las puntas de mazorca inmaduras (0.5-1 mm) de A y D se cosecharon en las etapas Vil y V12. Del RNA total se aisló de los tejidos de la punta de mazorca inmadura usando el reactivo Trizol (Invitrogen, Carisbad CA, USA) con el sistema Phase Lock Gel System (Eppendorf, estbury, N.Y., USA). Veinte microgramos de RNA total se pretrataron con Dnasa I libre de Rnasa (Ambion, Austin, TX, USA) de la cual 3 g se usaron para la síntesis de cDNA de primera hebra (Superscript II Kit, Invitrogen, Carisbad, CA, USA) . La PCR múltiple se realizó usando 1 µL de cDNA de primera hebra como patrón en una reacción de transcriptasa inversa de 25 µL junto con Tostar Taq DNA polimerasa (Qiagen, Valencia, CA, USA) de acuerdo de las recomendaciones del fabricante. Treinta ciclos se usaron para la amplificación simultánea de un gen semejante a CLV3 (0.5 µ?, 62559 Zmclv3-F, 5' -TCTTCGTCGACCTTGAACCCACTGT-3' ) (SEQ ID NO: 9) y (0.5 µ? 62561 Zmclv3-R, 5'AAGACCACAAACTTCCAGGAAGCGAGG-3' ) (SEQ ID NO: 10) y tubulina (0.1 µ?, 62961 Zmtub-F, 5' -TCTTCGTCGACCTTGAACCCACTGT-3' ) . (SEQ ID NO: ??) y (0.1 µ?' 47209 Zmtub-R, 5' AACACCAAGAATCCCTGCAG CCCAGTGC-3') (SEQ ID NO: 12) CDAN. La' PCR se realizó usando un protocolo de tres etapas de fue precedido por una incubación inicial a 95 °C durante 15 minutos: desnaturalización, 94 °C durante 45 seg.; templado, 60°C durante 45 seg.; extensión, 72 °C durante 1.5 min. En un experimento separado, el número de ciclos de PCR y las concentraciones de cebador y patrón se mostraron que están en el intervalo lineal de amplificación de ambos genes de la reacción de PCR. Los amplicones se separaron en un gel de agarosa manchado con bromuro de etidio al 1.5%. Los geles de agarosa se . analizaron en un transiluminador de UV de onda corta (310nm) y se capturaron usando la formación de imagen de CCD y el software de análisis/cuantificación Quantity One image de Bio-Rad (Hercules, CA, USA) . Este mismos software se utilizó para la identificación y normalización de fluorescencia de los fragmentos de DNA amplificados. El nivel de expresión relativo del gen semejante a CLV3 de la linea endogámica A de maiz fue casi 2 veces más grande (P < 0.007) que el nivel de expresión de la linea endogámica D para las dos etapas tempranas de desarrollo de la mazorca. La expresión diferencial del gen semejante a CLV3 entre las dos lineas endogámicas fue menos pronunciadas una vez que las mazorcas han completamente terminado el desarrollo de nuevos flósculos, esencialmente cuando se detiene la inflorescencia del meristemo. Estos datos muestran una correlación indirecta con la abundancia de mRNA semejante a CLV3 y la duración de la duración de la actividad IM. Entre menor es la expresión semejante a CLV3, más larga es la actividad IM existente durante el desarrollo de la mazorca que da por resultado más espiguitas por hilera y rendimientos potencialmente más grandes.

Ejemplo 7. Arabidopsis transformado con el gen semejante a CLV3 35: :malz El gen semejante a CLV3 y un gen de control, región que circunda el embrión 1 (ESR1; Opsahi-Ferstad, y colaboradores, (1997) Plant J. 12:235-46) se clonaron en un vector que contiene promotor 35S de CaMV de tal manera que los productos de gen se producen a niveles constitutivos en las plantas de Arabidopsis transgénicas . Estas dos construcciones se transformaron en las lineas de Arabidopsis, Columbia (Col, tipo silvestre) y las lineas mutantes clvl-4 y clv3-l mediante el siguiente método: las secuencias de codificación de longitud completa de los genes semejante a CLV3 y ESRl se amplificaron usando los clones de cDNA correspondientes como patrones y siguiendo los ajustes de los cebadores. 1) pares de cebadores para la amplificación semejante a CLV3 : (zmCLV3-l, 5' AAGGTCTCCTCGAGATGGCTCACGCGGCCGTCGTC-3' ) (SEQ ID NO: . 13) y (zmCLV3-2, 5 ' AGGTCTCCTCGAGATCAAGGCGACTGCCGCCTTG-3 ' ) (SEQ ID NO: 14); 2) pares de cebadores para amplificación de ESRl: (ESR1-1, 5' ACTCGAGATTCCATGGCATCAAGG-3' ) (SEQ ID NO: 15) y (ESR1-2, 5'AATCTCGAGCTAGTATCTATCCGATAATG-3' ) (SEQ ID NO: 16). Los fragmentos de DNA se amplificaron en pGEM-T Easy (Promega) . Clones individuales se aislaron y se secuenciaron para confirmar que el DNA clonado no contuvo cambios de secuencia de nucleótido en ORFs . Los fragmentos de DNA correctos se aislaron del vector usando las enzimas de restricción, Bsal y X ol, para semejante a CLV3 y ESRl, respectivamente. Estos fragmentos se ligaron en el vector binario digerido con .Xhol, pBE851, que dio por resultado la fusión de cada ORF con el promotor 35S de CaMV y el terminador 3 'Nos. El vector binario llevó el gen bar como un marcador selectivo en las plantas y KanR como un marcador selectivo en bacterias. Las construcciones . binarias con genes correspondientes se transformaron en Arabidopsis tumefaciens y subsecuentemente en tres diferentes antecedentes de Arabidopsis, Columbra tipo silvestre, mutantes cIvl-4 y elv3-l usando el método de transformación in planta descrito por Bechtold, N. y G. . Pelletier (1998). "In planta Agrobacterium-mediated transformation of adult Arabidopsis thaliana plants by vacuum infiltration" . Méthods Mol Biol 82: 259-66. La semilla producida por las plantas transformadas se uso para seleccionar plantas transgénicas TI al aplicar el herbicida BASTA varias veces en la etapa de plántula. Más de 20 planta TI para cada construcción y el antecedente se analizaron para sus fenotipos. Se mostró previamente que CLV3- de' Arabidopsis inducido con 35S de CaMV transformado en Arabidopsis produjo planta diminutas donde el meristemo apical de retoño se consumió temprano en el desarrollo de la planta (Brand y colaboradores, (2000) Science 289:617-619). Un fenotipo similar se observó cuando el gen semejante a CLV3 de maíz inducido por 35S de CaMV se transformó en la linea Col de Arabidopsis . Unas cuantas hojas se produjeron pero no se desarrolló estructura floral. Adicionalmente cuando el gen semejante a CLV3 se transformó en la linea mutante de Arabidopsis clvl-4, las plantas fueron capaces de soportar el desarrollo floral y la morfología similar la línea mutante clvl-4 sola. Estos datos sugieren que el gen semejante a CLV3 constitutivamente expresado funciona lo mismo como el gen CLV3 de Arabidopsis constitutivamente expresado en plantas transgénicas y que funciona en la misma ruta como CLV1, como previsto . Las Figuras 5, 6 y 7 son representaciones fotográficas de los patrones de expresión descritos observados por toda la transformación de Arabidopsis. El • 35S : : zmCLV3 no se espera para completar la mutación de- clv3-l debido al hecho de que el promotor 35S produce mucho más producto abrumando de esta manera el receptor CLAVTA y generando un fenotipo similar a los tipos silvestres transformados con 35S : : zmCLV3. Las secuencias reguladoras atCLV3 fueron necesarias para expresar el gen atCLV3 apropiadamente en la Arabidopsis transgénica para restaurar el mutante nuevamente ' a lo normal. (Brand y colaboradores, (2000) Science 289:617-619). La falta de fenotipo atrofiado en 35S::zmCLV3 expresado en la línea de Arabidopsis- mutante clvl-4 claramente demuestra que el zmCLV3 funciona en la ruta de CLAVATA, requiriendo que la proteina CLV1 funcional imparta su fenotipo atrofiado derivado-sobreexpresado . En otras palabras, el producto 35S::zmCLV3 está afectando la Arabidopsis sp transgénica de una manera similar como el producto 35S::atCLV3 (Brand y colaboradores, (2000) Science 289:617-619) de mostrando que zmCLV3 es un ortólogo funcional de atCLV3. En todos los casos, el 35S::zmESRl en Arabidopsis, que actúa como un control, no confirió ninguno de los fenotipos imitantes o alterados como es esperado sugiriendo que solamente CLE de maíz puede actuar como una contraparte para la función atCLV3. Ejemplo 8. Secuencia de CLV3 de Arroz El gen semejante a CLV3 de maíz se mapeó a una región en Bin 4 del Cromosoma 2 al enlazar un polimorfismo segregante entre los alelos semejantes a CLV3 B73 y M017 en la población IBM descrita por Sharopova y colaboradores, {Plant Mol Biol, 2002. 38:463-81) a cuatro marcadores diferentes todos que mapean a este sitio. Esta región en el maíz es sinténica a una región en el cromosoma 4 en el arroz. Un clon BAC individual del arroz, OSJNBb0022F23 , que mapea al cromosoma 4 contiene un homólogo ORF al gen semejante CLV3 de maíz en las coordenadas 14468 a 14897 nt. Basado en el programa de predicción de gen de Fgenesh (from Softberry, Inc., Mount Kisco, NY 10549), dos intrones se ubicaron dentro de la secuencia de codificación pronosticada del arroz y en casi en los mismos sitios como aquel de los genes CLV3 de Arabidopsis y semejante a CLV3 de maíz. La SEQ ID NO: 7 es una secuencia de ácido nucleico genómica semejante a 0sCLV3 del arroz- (GCTCATCCTCATTGTGCCGTCAAGCCGTGCTGCTGCTTCTGCTGCTGCTGC CTCCTCGTCGCCGCCGTGCTCGCCGTCGCCGTCTTTCTGGCCATGTCGCCG CCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCATCGTCGTCACAACCAGataaattcaaaaaqt ac^qaatct ttc^qtaacxitqagttc^qacgacacaactttttci aqCGGCGGCGGCGGCATrGCA ACGGGCCGAGACGACGGCGACCATGTACACCGCGAAGGAGTTGCGGGAGA AG AGGACGTGACC GatcaatctQaactcaaaaaaaqqtqqctctmcatqqcfflcttqccctcittc qatcqatctcatqgtqqtqtaaqqtttcttqat-tq qqqqttqcaqGGCGCGGAGGAGGACGTGAC CACGACGACGACGACGACGGGGTTCGGCGCGGAGTCGGAGAGGGAGGTGC CCACCGGGCCGGACCCGATCCACCACCACGGCCGGGGGCCCAGGCGGCA GTCACCGTGAGTGCGAATCCCCCGTCGCCGTCGCCGGGTTAACGAATCGGG CGTGAACCCAGAATCCCATGAGACGCGATGGTCTATGAAAGAAAGATTGTGC TCTTCAATTCGTTTTGCTGAATCTGTGATGCACTTGGGGATTTTATTCAGATTC ATTTCTTGCTGTAGGGAACACAGTAGTATGTCTGAA ) (SEQ ID NO; 7) ("observar: el inicio y la detención en negritas; los intrones son indicados por las letras subrayadas y minúsculas) . -La secuencia ID NO 8 es la proteina prevista 0sCLV3 codificada por la secuencia de ácido nucleico de la Seq ID NO: 7. La Figura 8 contiene la alineación de la secuencia de proteina derivada de CLUSTALW de gen semejante a CLV3 del arroz y el maíz con la secuencia de proteínas CLV3 de Arabidopsis usando ajustes de error.

Todas las publicaciones y solicitudes de patente mencionadas en la especificación son indicativas del nivel de aquellos expertos en la técnica a la cual está invención pertenece. Todas las publicaciones y solicitudes de patente se incorporan en la presente por referencia al mismo grado como si cada publicación individual o solicitud de patente fuera específicamente o individualmente indicada que es incorporada por referencia. La presente invención se describió más completamente en lo anterior, con referencia a los dibujos acompañantes, en los cuales se muestran modalidades preferidas de la invención. Esta invención, sin embargo, puede ser englobada en muchas formas diferentes y no debe ser considerada como limitada a las modalidades expuestas en la - presente; más bien, se proporcionan estas modalidades de modo que esta descripción será detallada y completa, y completamente conducirá el "alcance de la invención a aquellos expertos en la técnica. Números similares se refieren a elementos similares en todo respecto. Muchas modificaciones y otras modalidades de la invención vendrán a la mente a un experto en la técnica a la cual está invención pertenece teniendo el beneficio de las enseñanzas presentadas en las descripciones anteriores y los dibujos asociados. Por lo tanto, se va a entender que la invención no va a ser limitada a las modalidades específicas descritas y que las modificaciones y otras modalidades se proponen para ser incluidas dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Aunque se emplean términos específicos en la presente, ellos se utilizan en un sentido genérico y descriptivo solamente y no para propósitos de limitación .

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un polipéptido aislado, caracterizado porque comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de: (a) un polipéptido que codifica un polipéptido de desarrollo del meristemo semejante a Clavata3 de maíz; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de nucleótidos que híbrida bajo condiciones severas al complemento de una secuencia de nucleótidos que comprende las secuencias expuestas en las SEQ ID NOS: 1, 3, 4 o 7, en donde las condiciones severas comprenden la hibridación en formamida al 50%, NaCl 1M, SDS al 1% a 37°C y un lavado en 0.1 X SSC en 60°C a 65°C; (c) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia a la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 2 u 8, en donde la secuencia modula el desarrollo del meristemo; -y (d) un polipéptido que comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de la SEQ ID ÑO: 2 u 8. 2. Una molécula de ácido nucleico aislada, caracterizada porque se selecciona del grupo que consiste de : . (a) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7; (b) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 2 u 8 ; (c) una molécula de ácido nucleico que comprende por lo menos 15 nucleótidos consecutivos del complemento de la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7; (d) una molécula de ácido nucleico que comprende por lo menos 15 nucleótidos consecutivos de la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7; (e) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que híbrida bajo condiciones severas al complemento de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7, en donde las condiciones severas comprenden la hibridación en formamida al 50%, NaCl 1M, SDS al 1% a 37 °C y un lavado en 0.1 X SSC en 60°C a 65°C; y (f) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia a la secuencia expuesta en la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7, en donde la secuencia codifica un polipéptido que modula el desarrollo del meristemo. 3. Un cásete de expresión, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de la reivindicación 2 operablemente enlazado a un elemento regulador que induce expresión . 4. Un vector de expresión, caracterizado porque comprende el cásete de expresión de la reivindicación 3. 5. Una célula hospedera, caracterizada porque comprende el vector de expresión de la reivindicación 4. 6. La célula de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la célula es una célula de planta. 7. La célula de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la célula es una célula bacteriana. 8. Una planta que tiene establemente incorporada en su genoma por lo menos una construcción de nucleotidos que comprende una secuencia de nucleotidos operablemente enlazada a un promotor heterólogo que induce expresión en la planta, caracterizada porque la secuencia de nucleotidos se selecciona del grupo que consiste de: (a) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleotidos expuesta en la SEQ ID N0:1, 3, 4 o 7; (b) una molécula de ácido nucleico que " comprende una secuencia de nucleotidos que codifica una secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 2 u 8; (c) una molécula de ácido nucleico que comprende por lo menos 15 nucleotidos consecutivos del complemento de la SEQ ID N0:1, 3, 4 o 7; (d) una molécula de ácido nucleico que comprende por lo menos 15 nucleotidos consecutivos de la SEQ ID N0:1, (e) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que híbrida bajo condiciones severas al complemento de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID N0:1, 3, 4 o 7, en donde las condiciones severas comprenden la hibridación en formamida al 50%, NaCl 1M, SDS al 1% a 37 °C y un lavado en 0.1 X SSC en 60°C a 65°C; y (f) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia a la secuencia expuesta en la SEQ ID N0:1, 3, 4 o 7, en donde la secuencia codifica un polipéptido que modula el desarrollo del meristemo. 9. La planta de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el promotor es un promotor · constitutivo. 10. La planta de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el promotor es un promotor preferido de tejido. 11. La planta de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el promotor es un promotor inducible . 12. La planta de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la planta es una monocotiledónea . 13. La planta de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque la monocotiledónea es maíz, trigo, arroz, cebada, sorgo o centeno. 1 . La planta de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la planta es una dicotiledónea. 15. La semilla transformada de la planta de la reivindicación 8. 16. Un método para modular el nivel de un polipéptido en una planta, caracterizado porque comprende: (a) introducir en la planta una molécula de ácido nucleico que codifica al polipéptido, la molécula de ácido nucleico se selecciona del grupo que consiste de: (i) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 1 , 3 , 4 o 7 ; (ii) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos expuesta en la.SEQ ID NO: 2 u 8; (iii) una molécula de 'ácido nucleico · que comprende por lo menos 30 nucleótidos consecutivos de la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7; (iv) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que híbrida bajo condiciones severas al complemento de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO:l, 3, 4 o 7, en donde las condiciones severas comprenden ' la hibridación en formamida al 50%, NaCl 1M, SDS al 1% a 37 °C y un lavado en 0.1 X SSC en 60°C a 65°C; y (v) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia a la secuencia expuesta en la SEQ ID N0:1, 3, 4 o 7, en donde la secuencia codifica un polipéptido que modula el desarrollo del meristemo; (b) expresar la molécula de ácido nucleico durante un tiempo suficiente para modular el nivel del polipéptido. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la planta es una monocotiledónea . 18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la monocotiledónea es maiz, trigo, arroz, cebada, sorgo o centeno. 19. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la planta es una dicotiledónea. 20. Un método para modular el nivel -de un polipéptido en una célula de planta, caracterizado porque comprende : (a) proporcionar una secuencia de nucleótidos que comprende por lo menos 15 nucleótidos consecutivos del complemento.de la SEQ ID N0:1, 3, 4 o 7; (b) proporcionar una célula de planta que comprende un mRNA que tiene la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 1, 3, 4 o 7; e (c) introducir la secuencia de nucleótidos de la etapa (a) en la célula de planta, en donde la secuencia de nucleótidos inhibe la expresión del mRNA en la célula de planta . 21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la célula de planta es de una monocotiledonea . 22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la monocotiledonea es maíz, trigo, arroz, cebada, sorgo o centeno. 23. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la célula de planta es de una dicotiledónea . 24. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la regulación hacia arriba del polinucleótido se usa para incrementar la capacidad de producción de semilla de maíz al incrementar el tamaño y la forma de las mazorcas de la planta de maíz, para de esta manera afectar la capacidad de producción de grano. 25. El método de conformidad 'con la reivindicación 20, caracterizado porque la regulación hacia arriba del polinucleótido se usa para modificar el potencial de portar grano de las mazorcas de maíz, para de esta manera mejorar la estabilidad de rendimiento bajo condiciones propensas al estrés. 26. ün método para la aplicación de un polipéptido. de la reivindicación 1 que tiene actividad negativa dominante, caracterizado porque el polipéptido se pone en contacto con la planta o célula de planta en la forma de un rocío químico.