MXPA04002445A - Analogos de wortmanina y metodos para utilizar los mismos. - Google Patents

Abstract

Se describen en la presente nuevos analogos de Wortmanina y su uso para inhibir actividad de quinasa PI-3 en mamiferos asi como tambien formacion de tumor en un sujeto.

Description

ANÁLOGOS DE WO TMANINA Y METODOS PARA UTILIZAR LOS MISMOS REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Este documento reivindica la prioridad de la Solicitud Provisional de E.U. No. 60/322,139 presentada el 14 de Septiembre, 2001, que está incorporada para referencia en su totalidad en la presente.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a análogos de wortmanina, y tiene aplicación a métodos para utilizar estos derivados para inhibir la actividad de quinasa PI-3 y para tratar ciertos tumores malignos. Wortmanina es un inhibidor potente conocido de la fosfotidilinositol-3-quinasa (??-3-quinasa) y un agente anticáncer. Wortmanina es un compuesto aislado que ocurre de manera natural de caldos de cultivo de hongos de Prenicillium wortmannin y tiene la estructura básica mostrada en la Patente de E.U. No. 5,480,906, que se incorpora en la presente para referencia. Una de las desventajas de wortmanina es su toxicidad a las criaturas vivas. Aún en bajas dosis, wortmanina en su forma pura era regularmente letal en animales de laboratorio.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona nuevos análogos de wortmanina asi como el método para inhibir el cáncer en un sujeto que comprende la administración de una dosis farmacéuticamente efectiva a un sujeto, de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de aquellos análogos de wortmanina descritos en las figuras 1 -3. La presente invención también proporciona un método de inhibición de la actividad de quinasa PI-3 en los mamíferos por medio de la administración de una cantidad efectiva de uno de los compuestos de esta invención. Ya que la actividad de quinasa PI-3 es un factor en ciertos tipos de cáncer, la invención también proporciona el uso de los compuestos como agentes anticáncer (antitumor) y también para formulaciones farmacéuticas que incluye el compuesto en combinación con un vehículo, receptor o disolvente farmacéuticamente aceptable. La presente invención también proporciona un método de inhibición de la actividad de quinasa PI-3 en los mamíferos por medio de la administración de una cantidad efectiva de uno de los compuestos de esta invención . Ya que la actividad de quinasa PI-3 es un factor en ciertos tipos de cáncer, la invención también proporciona el uso de los compuestos como agentes anticáncer (antitumor) y también para formulaciones farmacéuticas que incluye el compuesto en combinación con un vehículo, excipiente o disolvente farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad , la invención proporciona análogos de wortmanina útiles en la inhibición de restenosis en un sujeto. La invención comprende endoprótesis u otros dispositivos tales como implantes bioprostéticos que pueden revestirse con los análogos de wortmanina. La presente invención está también dirigida a métodos que comprenden administrar análogos de wortmanina a un sujeto en una dosis farmacéuticamente efectiva de un compuesto. Los análogos de wortmanina pueden ser cualquiera de aquellos descritos en la presente, pero son preferentemente seleccionados del grupo que consiste de aquellos análogos de wortmanina descritos en las figuras 1 -3, aún más preferentemente la figura 2. Los análogos de wortmanina de la presente invención que se espera sean útiles en el tratado de restenosis están representados por la siguiente fórmula química general: En la cuál Y es un heteroátomo, de preferencia N o S, y R1 o R2 son alquilo no saturado , alquilo no lineal , alquilo ramificado, alquilo substituido o alquilo cíclico.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra la estructura básica del análogo de wortmanina de acuerdo con la presente invención ; La figura 2 muestra la estructura de ciertas estructuras de análogo de wortmanina de acuerdo con la presente invención; La figura 3 muestra la estructura de ciertas otras estructuras de análogo de wortmanina de acuerdo con la presente invención; La figura 4 muestra el efecto de wortmanina y análogos (ver figura 2) contra Cáncer de Próstata de Humano PC-3; La figura 5 muestra el efecto de wortmanina y análogos contra Cáncer de Colón de Humano HT-29; La figura 6 muestra el efecto de wortmanina y análogos contra Tumor Ovárico de Humano OVCAR-3; La figura 7 muestra el efecto de la pérdida de peso debido a wortmanina y análogos; La figura 8 muestra la Actividad Anitumor de Wortmanina; y La figura 9 es un resumen de la información de wortmanina y análogos de wortmanina mostrados en las figuras 2 y 3 DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCIÓN La actual invención trata el descubrimiento de que análogos de wortmanina son útiles en la inhibición del cáncer. La figura 1 muestra la estructura general de los compuestos de acuerdo con la presente invención. La figura 2 muestra análogos de wortmanina específicos de acuerdo con la presente invención y la figura 3 muestra ciertos otros análogos de wortmanina que pueden ser útiles de acuerdo con la presente invención. La producción biosintetica de wortmanina es bien conocida en el arte y los análogos son sintetizados de wortmanina. Patente de E. U . No.5,480,906, incorporada en la presente para referencia, describe esquemas sintéticos típicos. Comúnmente, wortmanina es producida por la fermentación de cualquiera de un número de microorganismos previamente revelados como tales como Talaromyes wortmannin y Penicillium wortmannin, Myrothecium roridium, and Fusarium. En seguida de la fermentación , wortmanina es extraída y purificada por medio de métodos conocidos. De preferencia, wortmanina es sintetizado microbianamente y aislada en forma substancialmente pura a partir de un cultivo de fermentación (dicho cultivo de fermentación está identificado como A24603.1 ). Cultivar la cepa bajo condiciones aeróbicas sumergida en un medio de cultivo conveniente hasta que una cantidad recuperable de wortmanina es producida, produce wortmanina. Wortmanina puede ser recuperada usando distintos procedimientos de aislamiento y purificación entendidos en el arte. El medio usado para hacer crecer el cultivo puede ser cualquiera de un número de medios. Para la economía en la producción , producción óptima, y facilidad de aislamiento de producto, de cualquier manera, fuentes de carbono preferidas en fermentación a gran escala son glucosa y almidón soluble tal como almidón de maíz. Maltosa, ribosa, xilosa, fructosa, galactosa, mañosa , manitol, dextrina de papa, oleato de metilo, aceites tales como aceite de soya y lo similar también pueden ser usados. Las fuentes de nitrógeno preferidas son caseína hidrolizada de enzima y harina de semilla de algodón, aunque leche pepsinizada , alimento de soya digerido, alimento de pescado, licor de maíz remojado , extracto de levadura, caseína hidrolizada de ácido, extracto de carne, y lo sirmiar también pueden ser usados. Entre las sales nutrientes inorgánicas que pueden ser incorporadas al medio de cultivo están las sales solubles acostumbradas capaces de producir calcio, magnesio, sodio, amonio, cloruro, carbonato, sulfato, nitrato, zinc, e iones semejantes. Los elementos necesarios de indicio esenciales para el crecimiento y desarrollo del organismo también deben ser incluidos en el medio de cultivo. Tales elementos de indicio comúnmente ocurren como impurezas en otros sustitutos del medio en cantidades suficientes para satisfacer los requerimientos de crecimiento del organismo. Para la producción de cantidades sustanciales de wortmanina se prefiere la fermentación sumergida aeróbica en bioreactores agitados. Cantidades pequeñas de wortmanina pueden ser obtenidas por cultivo de agitación de matraz. Debido al retraso de tiempo en la producción comúnmente asociado con la inoculación de grandes bioreactores con la forma espórica del organismo, es preferible usar inóculos vegetativos. Los inóculos vegetativos son preparados inoculando un pequeño volumen de medio de cultivo con la forma esporica o fragmentos miceliales del organismo para obtener un cultivo activamente en crecimiento, fresco del organismo. El medio de inoculo vegetativo puede ser el mismo que el usado para fermentaciones grandes, pero otros medio son también convenientes. Después de la producción, wortmanina puede ser recuperada del medio de fermentación por métodos usados en el arte. Wortmanina producida durante la fermentación del organismo A24603.1 , por ejemplo ocurre principalmente en el caldo. Típicamente, wortmanina puede ser recuperada de la biomasa por una variedad de técnicas. Una técnica preferida incluye filtrar el caldo de fermentación completo con un filtro de cerámica. El filtrado es levigado con un solvente orgánico tal como etil acetato y concentrarse. El concentrado es suspendido en alcohol hasta que la cristalización ocurre y la solución es filtrada, lavada y secada . Para confirmar, el material cristalino es disuelto en un solvente orgánico y cromatografiado en un absorbente de gel de sílice en fase inversa (C8 o C 8). Las fracciones son levigadas en un regulador acuoso orgánico tal como el 60% acetonitrilo. Wortmanina puede ser manipulada posteriormente para llegar a los compuestos de la presente invención. Aunque la síntesis de análogos de wortmanina particulares es mostrada abajo, otros esquemas sintéticos comunes en el arte permitirán a un experto en el arte sintetizar compuestos de acuerdo con la presente invención y los esquemas sintéticos establecidos adelante , de ninguna manera deben ser considerados limitantes Ácido acético 4-dlallilaminometileno-6-hidroxi-1 -a-metoximetil-10 , 13p-dlmetil-3,7, 17-trioxo-1 ,3,4,7 , 10, 1 1 ß, 12, 13, 14a, 1 5, 16, 17-dodecaidro-2-oxa-ciclopenta[a]fenantren-1 1 -il ester (djm2-166).

- - A una solución de wortmanina (10.7 mg, 25.0 µ????) en CH2CI2 (125 µ?) fue agregada una solución de diallilamina recientemente preparada de reserva de 0.2 (138 µ?, 27.5 µ?t???) en CH2CI2. La mezcla de la reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 h. El solvente y el exceso de amina fueron removidos in vacuo, y el producto fue purificado vfa cromatografía en Si02 (hexanos/etil acetato, 1:9) para dar djm2-166 (9.0 mg, 17 µ?t???, 68%) como un aceite naranja: [oc]D -630 (c 0.0015, CH2CI2, 23°C); IR (KBr) 3391, 1743, 1695, 1685, 1622, 1569, 1222, 1111, 1100 cm"1; 1H NMR d 8.20 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.06 (dd, 1H, J=7.4, 4.8 Hz), 5.85 (br s, 1H) , 5.62 (br, 1H), 5.44-5.04 (m, 4H), 4.48 (dd, 1H, J=7.2, 1.9 Hz), 4.05-3.60 (m, 4H), 3.26 (s, 3H), 3.27-3.20 (m, 1H), 3.16 (dd, 1H, J= 10.9, 7.2 Hz), 3.00-2.90 (m, 2H), 2.59 (dd, 1H, J=19.4, 8.6 Hz), 2.40 (dd, 1H, J= 14.4, 7.7 Hz), 2.35-2.07 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.83 (dd, 1H, J=14.4, 4.7Hz), 1.54 (s, 3H), 0.86 (s, 3 H); 13C NMR d 217.0, 178.5, 169.6, 164.8, 156.3, 151.5, 139.0, 136.9, 132.2, 131.3, 127.7 (2C), 119.2, 89.0, 81.9, 73.1, 67.6, 59.1, 50.9 (2 C), 48.9, 42.3, 42.2, 37.5, 36.0, 24.6, 22.2, 20.8, 16.1; MS(EI) m/z (intensidad reí.) 525 (M+, 11), 466 (17), 391 (15), 350 (14), 323 (13), 266 (17), 239 (17), 60 (100); HRMS (El) calculado para C29H36N08525.2363, encontrado 525.2386. Acido Acético 6-hidroxi -1a-metoximetil-10p,13p-dimetil-3,7,17-trioxo-4-pirrolidin-1 -il-metileno-1 ,3,4,7,10, 1 ß, 12, 13, 14o, 15, 16,17-dodecahidro-2-oxa-ciclopenta[a]fenantren-11-il (djm2-167).

A una solución de wortmanina (30.0 mg, 70.0 µG???) en CH2CI2 (200 µ?) fue agregada pirrolidina (7.0 µ?, 84 µ?t???) en CH2CI2. La mezcla de la reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 h. El solvente y el exceso de tiol fueron removidos in vacuo, y el producto fue purificado vfa cromatografía en Si02 (hexanos/etil acetato 9:1, luego 1:1) para dar djm2-167 (30.0 mg, 60.6 µp???, 86%) como un aceite naranja: [ ]D - 390 (c 0.0073, CH2CI2, 23°C) IR (KBr) 3337, 1740, 1684, 1617, 1570, 1261, 1221, 1099, 1018cm"1 ; 'H NMR d 8.29 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.07 (dd, 1H, J = 6.9, 4.8 Hz), 4.47 (dd, 1H, J = 7.0, 1.9 Hz), 3.80-3.70 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.25-3.14 (m, 2H), 3.02-2.90 (m, 2H), 2.69 (br s, 1H ), 2.58 (dd, 1H, J = 19.1, 8.4 Hz), 2.39 (dd, 1H, J = 14.6, 7.8 Hz), 2.32-2.08 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.99-1.95 (m, 5H), 1.84 (dd, 1H, J = 14.5, 4.2 Hz), 1.56 (s, 3H), 0.86 (s 3 H); 13C NMR d 217.5, 178.9, 169.9, 164.9, 153.9, 151.3, 137.6, 137.1, 129.2, 89.4, 82.1, 73.3, 67.7, 59.3, 55.2, 49.2, (2 C), 42.6, 42.4, 37.8, 36.3, 25.6, (2 C), 24.5, 22.4, 21.0, 16.3; MS (El) m/z (intensidad reí.) 499 (M+, 1), 439 (2), 365 (7), 167 (35), 149 (100); HRMS (El) calculado para CayHsaNOs 499.2206, encontrado 499.2191. Acido acético 4-[(bencilmetilamino)metileno]-6-h¡droxi-1<x-metoximetil-10p,13 -dimetil-3,7,17-trioxo-1,3,4,7,10,11p,12,13l14a,15,16,17-dodecahidro-2-oxa- ciclopenta[a]fenantren-11-il éster (djm2-181).

A una solución de wortmanina (10.7 mg, 25.0 µ?t???) en CH2CI2 (125 µ?.) fue agregada una solución de /V-metilbencilamina recientemente preparada de 0.2 (185 µ?, 37.0 µ????) en CH2CI2. La mezcla de la reacción fue agitada a temperatura ambiente por 2 h. El solvente fue removido in vacuo, y el producto fue purificado vía cromatografía en Si02 (hexanos/etil acetato 1:9) para dar djm2-181 (13.3 mg, 24.2 µ????, 97%) como un aceite naranja: [a]D - 835 (c 0.0014, CH2CI2, 23°C); IR (solo) 1742, 1685, 1618, 1589, 1575, 1224 cm" , 1HNMR d 8.36 (br s, 1H), 7.36-7.27 (m, 5H), 6.60 (bs s, 1H), 6.10-6.00 (m 1H), 4.68-4.63 (m, 1H), 4.53 -4.47 (m, 2H), 3.25 (s 3H), 3.25-3.11 (m, 2H), 2.99-2.84 (m, 2H), 2.71 (br 2H), 2.55 (dd, 1H, J = 19.5, 8.9 Hz), 2.38 (dd, 1H, J = 14.4, 7.6 Hz), 2.32-2.05 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.85 (br s, 1H), 1.80 (dd, 1H, J = 14.5, 4.7 Hz), 1.52 (S, 3H), 0.82 (s, 3H); 13C NMR d 217.3, 178.9, 169.9, 164.7, 158.3, 151.7, 138.8, 137.1, 134.9, 129.0 (3 C), 128.6, 128.1 (2 C), 88.7, 82.2, 73.4, 67.9, 64.3, 59.4, 49.1, 42.7, 42.5, 37.8 (2 C), 36.3, 25.2, 22.5, 21.1, 16.3; S (El) m/z (intensidad reí) 549 (M+, 14), 489 (37), 415 (15), 120 (23), 91 (100); HRMS (El) calculado para C31H35NO8 549.2363, encontrado 549.2340.

Para un tratamiento terapéutico de las indicaciones especificadas, un análogo de wortmanina de las figuras 1 -3 puede ser administrado como tal, o puede ser compuesto y formulado dentro de composiciones farmacéuticas en forma de dosis única para administración parenteral, transdermal, rectal, nasal, intravenosa local, o preferentemente oral. Tales composiciones farmacéuticas son preparadas de una manera bien conocidas en el arte y comprenden al menos un compuesto activo seleccionado del grupo que consiste de aquellos análogos de wortmanina de las figuras 1 -3 asociados con un vehículo farmacéutico. El término "compuesto activo", usado por toda esta especificación, se refiere a al menos un compuesto seleccionado de los compuestos de las formulas o las sales farmacéuticamente aceptables de las mismas. El término "cantidad efectiva" usado aquí, significa una cantidad de un compuesto de la presente invención que es capaz de inhibir, bloquear o revertir la activación, migración , o proliferación de células. La actividad contemplada por los presentes métodos incluye tanto terapia médica como tratamiento profiláctico, según sea apropiado. La dosis especifica de un compuesto administrada de acuerdo a esta invención para obtener efectos terapéuticos y/o profilácticos estará determinada, claramente, por las circunstancias particulares que rodean el caso, incluyendo por ejemplo, el compuesto administrado, la vía de administración, y la condición que se este tratando. Los compuestos son efectivos sobre un amplio rango de dosis, y por ejemplo, dosis al día estarán normalmente dentro del rango de desde 0.001 a 10 mg/kg , y más usualmente en el rango de desde 0.01 a 1 mg/kg.

- - De cualquier manera, se comprenderá que la cantidad efectiva administrada estará determinada por el médico de acuerdo a las circunstancias relevantes incluyendo la condición a ser tratada, la elección del compuesto que será administrado, y la ruta elegida de administración , y por esto los rangos de dosis anteriores no pretenden limitarse al alcance de la invención de ninguna manera. El término "inhibir" incluye la administración de un compuesto de la presente invención para prevenir el comienzo de los síntomas, aliviar los síntomas, o eliminar la enfermedad, condición o desorden. En tal composición, el compuesto activo es conocido como "ingrediente activo". Al hacer las composiciones, el ingrediente activo será mezclado usualmente con un veh ículo, o diluido por un vehículo, o encerrado dentro de un vehículo que puede ser en forma de una cápsula, saco, papel u otro contenedor. Cuando el vehículo sirve como diluyente, puede ser sólido, semisólido o material líquido que actúa como un vehículo, excipiente del medio para el ingrediente activo. Así, la composición puede ser en forma de tabletas, pildoras, polvo, pastillas, sacos, cápsulas, elixires, emulsiones, soluciones, jarabes, suspensiones, cápsulas de gelatina suave y dura , soluciones inyectables estériles, y sacos compactados estériles. Algunos ejemplos de vehículos, excipientes, y diluyentes convenientes incluyen la lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma de acacia , alginatos de fosfato de calcio, calcio silicatos, celulosa macrocristalina , polivinilpirrolidona, celulosa , tragacanto, gelatina, jarabe, metil celulosa, metil y propilhidroxibenzoatos, talco, estearato de magnesio, agua, y aceite mineral. Las formulaciones pueden incluir adicionalmente agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes emulsificantes y de suspensión , agentes conservadores, agentes endulzantes o agentes saborizantes. Las composiciones pueden ser formuladas así para proveer una rápida, sostenida, o retrasada liberación del ingrediente activo. Antes de la administración al paciente empleando procedimientos bien conocidos en el arte. Para la administración oral un compuesto puede ser mezclado con vehículos y diluyentes, moldeado en tabletas, o encerrado en cápsulas de gelatina. Las mezclas pueden ser disueltas alternativamente en líquidos tal como 10% de solución de glucosa acuosa, salina isotónica, agua estéril, o lo similar, y administrarse intravenosamente o por inyección . Por "farmacéuticamente aceptable", es entendido que el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial al receptor de estos. El suministro local de las cantidades inhibitorias del compuesto activo para el tratamiento de cáncer puede ser por una variedad de técnicas que administren el compuesto cerca del sitio de proliferación. Ejemplos de técnicas de suministro local no están determinadas para limitar sino para ser ilustrativos de las técnicas disponibles. Los ejemplos incluyen catéteres de suministro local, vehículos específicos del sitio, implantes, inyección directa, o aplicaciones directas. El suministro local por un catéter permite la administración de un agente farmacéutico directo al sitio de proliferación.

El suministro local por un implante describe la colocación quirúrgica de una matriz que contiene el agente farmacéutico dentro de la lesión proliferativa. La matriz implantada libera al agente farmacéutico por difusión, reacción química, o activadores solventes. Otro ejemplo es el suministro de un agente farmacéutico por un sello endoluminal polimérico. Esta técnica utiliza un catéter para aplicar un implante polimérico a la superficie interior del lumen. El agente farmacéutico incorporado dentro del implante de polímero biodegradable es, por ello, liberado en un sitio quirúrgico. Está descrito en PCT WO 90/01969 (Schindler, Ago. 23, 1989). Un ejemplo final del suministro local por un implante es por inyección directa de vesículas o micropartículas dentro del sitio proliferativo. Estas micropartículas pueden estar compuestas de sustancias como proteínas, lípidos, carbohidratos o polímeros sintéticos. Estas micropartículas tienen al agente farmacéutico incorporado en toda la micropartícula o encima de la micropartícula como una cubierta. Los sistemas de suministro incorporando micropartículas están descritos en Lange, Science 249: 1527-1533 (Septiembre, 1990) y Mathiowitz, et al., J. App. Poly. Sci., 26:809 (1981). El suministro local por vehículos específicos de sitio describe la unión del agente farmacéutico a un vehículo, el cual dirigirá el medicamento a la lesión proliferativa. Ejemplos de esta técnica de distribución incluyen el uso de vehículos tales como un ligando de proteína o un anticuerpo monoclonal. El suministro local por aplicación directa incluye el uso de aplicaciones locales. Un ejemplo de un suministro local por aplicación directa es aplicar el agente farmacéutico al tumor arterial o al área sobrante después de la resección del tumor. La formulación de los análogos de wortmanina es bien conocida en el arte como lo es el proceso de fermentación. En lugar de entrar en detalles exhaustivos considerando el esquema sintético o la formulación, la presente invención confía en el experto para usar esas técnicas comunes sintéticas y técnicas de formulación para sintetizar compuestos de la siguiente fórmula general: En la cual Y es un heteroátomo y R1 o R2 son alquilo no saturado, alquilo no lineal, alquilo ramificado, alquilo sustituido o alquilo cíclicos. De preferencia, la presente invención tiene una fórmula química correspondiente a aquellas mostradas en las figuras 1-3. Aún más preferentemente, la presente invención tiene una fórmula química de acuerdo con aquella mostrada en la figura 2. La proliferación de células depende de la trayectoria de señalización de Pl 3-quinasa-AKT-mTOR. Además la señalización a través de Pl 3-quinasa y AKT parece Inhibir apoptosis.

La siguiente Tabla 1 muestra la Actividad y toxicidad in vivo de la Enzima de inhibición de análogos de wortmanina TAB LA 1 N D = no determinado, NE = no evaluable, droga insuficiente a Ensayo de 2 días TT , significa 60 líneas celulares. b Toxicidad de linfocito en una dosis probada de MTD o mayor expresada relativa a wortmanina . c Toxicidad del hígado medida por % ALT y AST a u na dosis probada de MTD o mayor expresada relativa a wortmanina. d Toxicidad del h ígado con medición relativa a wortma nina/d isminución en li nfocitos de sangre relativo a wortman ina . e MTD = > 10% de perdida de peso corporal. ' Valor estimado La habilidad de wortmanina y los análogos para inhibir fosfatidilinositol-3-qu inasa y mTOR está expresada como la dosis q ue causa 50% de inhibición (IC5o). Citotoxicidad - La inhibición del crecimiento de las células de cáncer de ma ma humano MCF-7 fue medido sobre 4 d ías usando la m uestra MTT expresada como la d osis que ca usa 50% de inhibición (IC6o). Toxicidad-grupos de 3 ratones C57BL6 fueron administrados con wortmanina en dosis de 1, 2 o 3 mg/kg o análogos en 1, 3, 9, o 18 mg/kg donde suficiente compuesto estaba disponible para la ruta intraperitoneal diaria durante 4 días. Los animales fueron muertos 24 hrs. después que la última dosis y conteos de sangre diferencial y suero químico fueron determinados. Las toxicidades principales observadas fueron la toxicidad del hígado y linfocitopenia con conteos decrecientes de glóbulos rojos y glucosa de suero incrementada a dosis mayores. Las toxicidades son medidas en la dosis máxima tolerada o la mayor dosis probada. La toxicidad del hígado es medida como el incremento den por ciento principal en suero ALT y AST expresado en relación a wortmanina como 1.0. Linfocitopenia está expresada como el por ciento reducido en los conteos de linfocito en relación a wortmanina como 1.0. Una baja toxicidad del hígado y alta toxicidad del linfocito como sustituto de inhibición de crecimiento de células del tumor es una característica deseable. Son notables los compuestos que están siendo hechos para pruebas antitumor. Basado en la evidencia anterior, parecería que un inhibidor de Pl 3-quinasa inhibirá el crecimiento de las células y supervivencia. Además, inhibidores de Pl 3-quinasa deberán inhibir la respuesta inflamatoria local, especialmente en el caso de un implante bioprostético que será un factor favorable para el injerto a largo plazo u otro implante bioprostético. En principio, los derivados de wortmanina podrían ser agentes ideales para un bloqueo temporal de la trayectoria de Pl 3-quinasa-AKT-mTOR.

Las figuras 4-9 muestran el efecto de ortmanina y análogos (ver figura 2) contra el Cáncer de Próstata de Humano PC-3; contra Cáncer de Colón de Humano HT-29; contra Tumor Ovárico de Humano OVCAR-3; en pérdida de peso; y actividad anti-tumor. En otra modalidad, la presente invención puede ser utilizada para tratar restenosis vascular. La restenosis vascular es una complicación mayor a largo plazo que sigue a la intervención quirúrgica de arterias bloqueadas por angioplastia coronaria translum'mal percutánea (PTCA), ateroctomia, angioplastia por láser y cirugía de injerto arterial bipaso. En aproximadamente 35% de los pacientes que reciben PTCA, la reobstrucción ocurre dentro de los siguientes tres a seis meses después del procedimiento. Las estrategias recientes para tratar la restenosis vascular incluyen intervención mecánica por aparatos tales como endoprótesís o terapias farmacológicas incluyendo heparina, heparina de bajo peso molecular, coumarina, aspirina, aceite de pescado, antagonista de calcio, esferoides, y prostaciclina. La restenosis vascular después de la angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA) ha mostrado ser una respuesta de tejido caracterizada por una fase temprana y una tardía. La fase temprana que ocurre de horas a días después de PTCA se debe a la trombosis con algunos vasosepasmos mientras que la fase tardía parece ser dominada por una excesiva proliferación y migración de células lisas musculares. En esta enfermedad , la incrementada movilidad y colonización de la célula por células lisas musculares y macrófagos contribuye significativamente a la patogénesis de la enfermedad. La excesiva proliferación y migración de las células lisas musculares puede ser el mecanismo primario para la reobstrucción de las arterias coronarias que sigue a PTCA, ateroctomia, angioplastia por láser y cirugía de injerto arterial bipaso. En la patogénesis de la restenosis, excesiva proliferación y migración celular ocurre como resultado de los factores de crecimiento producidos por constituyentes celulares en la sangre y las paredes dañadas de vasos arteriales que median la proliferación de células lisas musculares en la restenosis vascular. Los agentes que inhiben la proliferación y/o migración de músculo liso son útiles en el tratamiento y prevención de la restenosis. Por otra parte, los agentes que inhiben la respuesta inflamatoria de músculo liso son útiles en el tratamiento y prevención de la restenosis. La presente invención provee el uso de wortmanina y ciertas análogos como inhibidores de la restenosis. La invención esta compuesto de endoprótesis u otros dispositivos así como los implantes bioprostéticos que puedes estar cubiertos por análogos de wortmanina. La presente invención también se dirige a los métodos que comprenden la administración de análogos de wortmanina a un sujeto en una dosis farmacéutica efectiva de un compuesto. Los análogos de wortmanina pueden ser cualquiera de aquellos descritos aquí, pero preferentemente se selecciona del grupo que consiste de aquellos análogos de wortmanina descritos en las figuras 1 -3, aún más preferida la figura 2. Los análogos de wortmanina de la presente invención esperan ser útiles en el tratamiento de restenosis y están representados por medio de la siguiente formula química general.

- - En donde Y es un heteroatomo, preferentemente N o S, y R1 o R2 son alquilo no saturado, alquilo no lineal , alquilo ramificado, alquilo substituido o alquilo cíclico. Como se mencionó anteriormente, el suministro local de las cantidades inhibidoras de compuesto activo para el tratamiento de la restenosis puede ser por medio de una variedad de técnicas para administrar el compuesto sobre o cerca del sitio proliferativo. Ejemplos de las técnicas de suministro local no pretenden ser limitadas pero si ilustrativas de las técnicas disponibles. Ejemplos incluyen catéteres de suministro local, vehículos de un sitio especifico, implantes, implantes cubiertos, inyección directa o aplicaciones directas. El suministro local por medio de catéter permite la administración de un agente farmacéutico directamente a la lesión proliferativa. Ejemplos de suministro local usando un catéter de globo están descritos en EPO 383 492 A2 y en la patente de E. U. No. 4, 636, 195 (Wolinsky, Enero 13, 1987). El suministro local por medio de un implante describe la colocación quirúrgica de una matriz que contiene un agente farmacéutico dentro de la lesión proliferativa. La matriz implantada libera agentes farmacéuticos por medio de activadores de difusión, reacción química o solventes. Un ejemplo de suministro local por medio de implante es el uso de una endoprótesis. Las endoprótesis esta designadas para prevenir mecánicamente el colapso y reclusión de las arterias coronarias. Incorporando un agente farmacéutico dentro de la endoprótesis distribuye la droga directamente en el sitio proliferativo. El suministro local por medio de esta técnica se describe en ohn, Pharmaceutical Technology (Octubre 1990). Otro ejemplo es un sistema de suministro en donde el polímero que contiene el agente farmacéutico se inyecta dentro de la lesión en forma líquida. El polímero se cura entonces para formar el implante ¡n situ. Esta técnica está descrita en PCT WO 90/03768 (Donn, Abril 19,1990). El suministro local por medio de vehículos específicos de sitio describe la unión del agente farmacéutico a un vehículo que dirigirá la droga a la lesión proliferativa. Ejemplos de esta técnica de suministro incluyen el uso de vehículos tales como proteínas o un anticuerpo monoclonal. El suministro local por medio de aplicación directa incluye el uso de aplicaciones locales. Un ejemplo de suministro local por medio de aplicación directa es aplicando el agente farmacéutico directamente al injerto arterial durante el procedimiento quirúrgico. La formulación de análogos de wortmanina es bien conocida en esta técnica como lo es el proceso de fermentación. La presente invención es confiable para que los expertos ordinarios utilicen esas técnicas de formulación comunes y sintéticas para sintetizar compuestos de la siguiente formula general: Donde Y es un heteroatomo y R1 o R2 son alquilo no saturado, alquilo no lineal, alquilo ramificados, alquilo substituido o alquilo cíclico. Preferentemente, la presente invención tiene una formula química correspondiente a la mostrada en las figuras 1 -3. Aún mas preferente, la presente invención tiene una formula química de acuerdo a la mostrada en la figura 2. La restenosis es un grave problema clínico después de la intervención coronaria con una implantación de una endoprótesis coronaria. En este caso el músculo liso que está alrededor de la arteria coronaria afectada sufre hiperplasia y proliferación ya sea debido a la hipoxia transitoria o a la respuesta inflamatoria (o una combinación de estos factores) como un resultado de la intervención. La proliferación de las células del músculo liso vascular son fuertemente dependientes de la trayectoria de señalización de Pl 3-quinasa-AKT-mTOR. Además la señalización a través del Pl 3-quinasa y AKT aparece para inhibir la apoptosis de las células musculares lisas, que también podría incrementar la masa de una capa de músculo liso en la arteria enferma. Basado en la evidencia anterior parecerá que el inhibidor de Pl 3-quinasa inhibirá el crecimiento de las células del músculo liso y sobrevivir cuando se impregne en el dispositivo de endoprótesis. Además, los inhibidores de Pl 3- quinasa pueden también inhibir la respuesta de inflamación local del implante, que puede ser un factor favorable para el injerto de la endoprótesis a largo plazo u otros implantes bioprostéticos. Principalmente, los derivados de wortmanina pueden ser agentes ideales para inducir un bloqueo temporal de la trayectoria de Pl 3-quinasa-AKT-mTOR en el microambiente que está alrededor de la endoprótesis implantada. Es entendido que los ejemplos y modalidades descritos aqui son solo para propósitos ilustrativos y que varias modificaciones o cambios en vista de los mismos pueden ser sugeridos a las personas expertas en el arte y pueden ser incluidos dentro del espíritu y revisión de esta solicitud y alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en la presente se incorpora para referencia en su totalidad para todos los propósitos.

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de la formula en donde Y es un heteroatomo y R1 o R2 son alquilo no saturado, alquilo no lineal, alquilo ramificado, alquilo substituido o alquilo cíclico respectivamente.
2. 2. El compuesto de la reivindicación 1, donde la formula química corresponde a:
3. 3. El compuesto de la reivindicación 1, donde la formula química corresponde a:
4. 4. El compuesto de la reivindicación 1, donde la formula química corresponde a:
5. 5. El compuesto de la reivindicación 1, donde la formula química corresponde a: corresponde a:
6. 6. El compuesto de la reivindicación 1, donde la formula química corresponde a:
7. 7. El compuesto de la reivindicación 1 , donde la formula química corresponde a:
8. 8. Un método de tratamiento de cáncer que comprende la administración a un sujeto de una cantidad farmacéuticamente efectiva del compuesto de la reivindicación 1 .
9. 9. Un método de tratamiento de cáncer que comprende la administración a un sujeto de una cantidad farmacéuticamente efectiva del compuesto de la reivindicación 3.
10. 10. Un método de tratamiento de cáncer que comprende la administración a un sujeto de una cantidad farmacéuticamente efectiva del compuesto de la reivindicación 5. 1 1 . Un método de tratamiento de cáncer que comprende la administración a un sujeto de una cantidad farmacéuticamente efectiva del compuesto de la reivindicación 7. 12. Un método de inhibición de la actividad de quinasa PI-3 en mamíferos que comprende la administración a un mamífero de una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 1 . 13. Un método de inhibición de la actividad de quinasa PI-3 en mamíferos que comprende la administración a un mamífero de una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 3. 14. Un método de inhibición de la actividad de quinasa PI-3 en mamíferos que comprende la administración a un mamífero de una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 5. 15. Un método de inhibición de la actividad de quinasa PI-3 en mamíferos que comprende la administración a un mamífero de una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 7. 16. Una formulación farmacéutica que comprende una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 1 , y un vehículo, diluyente o excipiente del mismo farmacéuticamente aceptable. 17. Una formulación farmacéutica que comprende una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 3, y un vehículo, diluyente o excipiente del mismo farmacéuticamente aceptable. 18. Una formulación farmacéutica que comprende una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 5, y un vehículo, diluyente o excipiente del mismo farmacéuticamente aceptable. 19. Una formulación farmacéutica que comprende una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 7, y un vehículo, diluyente o excipiente del mismo farmacéuticamente aceptable. 20. Un implante bioprostético que comprende un cuerpo revestido con un compuesto que inhibe una respuesta inflamatoria, dicho compuesto teniendo la fórmula general de la reivindicación 1. RES UMEN Se describen en la presente nuevos análogos de Wortmanina y su uso para inhibir actividad de quinasa PI-3 en mamíferos así como también formación de tu mor en un sujeto .