MXPA01010100A

MXPA01010100A - Composiciones de pirazol utiles como inhibidores de erk

Info

Publication number: MXPA01010100A
Application number: MXPA/A/2001/010100A
Authority: MX
Inventors: Hale Michael; Janetka James; Maltais Francois; Cao Jingrong; Green Jeremy; Baker Christopher; Mullican Michael; Bemis Guy; Xie Xiaoling; Straub Judith; Tang Qing; Mashall Robert
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date: 2000-02-05
Filing date: 2001-10-05
Publication date: 2002-05-09

Abstract

Se describen en la presente compuestos que sonútiles como inhibidores de la proteína cinasa que tienen la fórmula:(I) en donde R1-4, Q y T se describen en la especificación. Los compuestos sonútiles para tratar estados de enfermedad en mamíferos que se alivian mediante un inhibidor de proteína cinasa, en particular enfermedades tales como cáncer, trastornos inflamatorios, restenosis y enfermedad cardiovascular.

Description

COMPOSICIONES DE PIRAZOL ÚTILES COMO INHIBIDORES DE ERK Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de los Estados Unidos, número de serie 60/180,506 presentada el 5 de febrero de 2000; y la solicitud provisional de los Estados Unidos, número de serie 60/242,935 presentada el 24 de octubre de 2000 y la solicitud provisional de los Estados Unidos, número de serie 60/191,956 presentada el 24 de marzo de 2000.

CAMPO DE A INVENCIÓN La presente invención está en el campo de la química medicinal y se relaciona con compuestos de pirazol que son inhibidores de la proteina cinasa, en especial inhibidores de ERK, las composiciones que contienen estos compuestos y los métodos de uso. Los compuestos son útiles para tratar el cáncer y otros estados de enfermedad que se alivian mediante los inhibidores de la proteina cinasa.

* ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las proteinas cinasas activadas por mitógeno (MAP)l de mamífero son ser ina / t reonina cinasas que í . intervienen en las trayectorias de transducción de la señal intracelular (Cobb y Goldsmith, 1995, J Biol. Chem. , 270, 14843; Davis, 1995, Mol. Reprod. Dev. 42, 459) . Los miembros de la familia cinasa de MAP 5 comparten similitud de secuencia y conservan los dominios estructurales e incluyen la ERK (cinasa regulada por señal extracelular), JNK (Cinasa N terminal Jun) , y cinasas p38. Las JNK y las cinasas p38 se activan en respuesta a las citocinas pro- 10 inflamatorias TNF-alfa e interleucina- 1 , y mediante tensión celular tal como por ejemplo, choque térmico, hiperosmolar idad, radiación ultravioleta, 1 ipopol i sacar idos e inhibidores de síntesis de proteina (Derijard et al., 1994, Cell 76, 1025; Han et al., 1994, Science 265, 808; Raingeaud et al., 1995, J Biol. Chem. 270, 7420; Shapiro y Dinarello, 1995, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 92, 12230) . Por contraste, las ERK se activan por mitógenos y factores de crecimiento (Bokemeyer et al. 1996, Kidney Int. 49, 1187) . La ERK2 es una proteina cinasa ampliamente distribuida que alcanza la máxima actividad cuando tanto la Thrl83 como la Tyrl85 se fosforilan mediante la cinasa en la dirección 5', MEKl (Anderson et al., 1990, Nature 343, 651; Crews et al., 1992, Science 258, 478) . En el momento de la activación, la ERK2 fosforila muchas proteinas reguladoras, entre las que se incluyen las proteinas cinasas Rsk90 (Bjorbaek et al., 1995, J. Biol. Chem. 270, 18848) y MAPKAP2 (Rouse et al., 1994, Cell 78, 1027), y factores de transcripción tales como ATF2 (Raingeaud et al., 1996, Mol. Cell Biol. 16, 1247), Elk-1 (Raingeaud et al. 1996), c-Fos (Chen et al., 1993 Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90, 10952), y c-Myc (Oliver et al., 1995, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 210, 162). ERK2 también es un blanco en dirección 3' de las trayectorias dependientes Ras/Raf (Moodie et al., 1993, Science 260, 1658) y puede ayudar a reemplazar las señales provenientes de estas proteinas potencialmente oncogénicas. ERK2 ha mostrado desempeñar una función importante en el control de crecimiento negativo de las células de cáncer de mama (Frey y Mulder, 1997, Cáncer Res. 57, 628} y se ha reportado la hiperexpresión de ERK2 en cáncer de mama humano (Sivaraman et al., 1997, J. Clin. Invest. 99, 1478) . La ERK2 activada también ha estado implicada en la proliferación de las células de músculo liso de las vias respiratorias estimuladas por endotelio, lo que sugiere una función para esta cinasa en asma (Whelchel et al., 1997, Am . J. Respir. Cell Mol. Biol . 16, 589) . La familia JNK de las cinasas (MAP) 1 se han implicado en tener una función que interviene en la respuesta celular a una variedad de trastornos entre los que se incluye el cáncer ( Oncogene 1996, 13, 135-42), trastornos hepáticos (Hepatology 1998, 28, 1022-30), enfermedad cardiovascular (Circ. Res. 1998, 83, 167-78; Circulación 1998, 97:1731-7; J. Biol. Chem. 1997, 272, 28050-6; Circ. Res. 1996, 79, 162-73; Circ. Res. 1996, 78, 947-53; J. Clin. Invest. 1996, 97, 508-14), y trastornos inmunológicos (J. Immunol . 1999, 162, 3176-87; Eur. J. Immunol . 1998, 28, 3867-77; J. Exp. Med. 1997, 186, 941-53; Eur. J. Immunol. 1996, 26, 989-94, entre otros) . Aurora2 es una proteina cinasa serina /treonina que se ha visto implicada en cáncer humano, tal como de colon, de mama y otros tumores sólidos. Se cree que esta cinasa estaré implicada en los eventos de fosforilación de proteina que regulan el ciclo celular. Específicamente, aurora2 puede desempeñar una segregación precisa de cromosomas 4 durante la mitosis. La desregulación del ciclo celular puede conducir a proliferación celular y otras anormalidades. En tejido de cáncer de colon humano, se ha encontrado que la proteina aurora2 estará sobre-expresada. Véase, Bischoff et al., EMBO J. , 1998, 17, 3052-3065; Schumacher et al., J. Cell Biol. , 1998, 143, 1635-1646; Kimura et al., J. Biol. Chem. r 1997, 272, 13766-13771. La glicógeno sintasa cinasa-3 (GSK-3) es una ser ina / t reonina proteina cinasa compuesta de isoformas a y ß que se codifican cada una por genes distintos [Coghlan et al., Chemistry & Biology , 7, 793-803 (2000); Kim y Kimmel, Curr. Opinión Genetics Dev. , 10, 508-514 (2000)] . La GSK-3 ha estado implicada en diversas enfermedades entre la que se incluyen diabetes, Enfermedad de Alzheimer, Trastornos CNS tales como por ejemplo trastorno depresivo maniaco y enfermedades neurodegenerativas, e hipertrofia cardiomiocelar [WO 99/65897; WO 00/38675; y Haq et al., J. Cell Biol. (2000) 151, 117] . Estas enfermedades pueden ser provocadas por la operación anormal de ciertas trayectorias de señalización celular, o dar por resultado en las mismas, en las cuales GSK-3 desempeña una función. KDR es un receptor de tirosina cinasa que 4 también se une a VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) (Neufeld et al., 1999, FASEB J. , 13, 9) . La unión de VEGF al receptor KDR conduce a angiogénesis, que es el brote de vasos capilares provenientes de vasos sanguíneos preexistentes. Se encuentran altos niveles de VEGF en diversos cánceres que provocan angiogénesis tumoral y permiten el rápido crecimiento de las células cancerosas. Por lo tanto, la supresión de la actividad VEGF es una forma de inhibir el crecimiento tumoral, y ha mostradoq ue esto se puede alcanzar al inhibir la tirosina cinasa del receptor KDR. AKT, también conocida como proteina cinasa B, es una ser ina /treonina cinasa que desempeña una función central para estimular la supervivencia de una amplia gama de tipos de células [Kh aja, A., Na t u re , pp . 33-34 (1990)] . Se ha mostrado por Zang, et a l , qu e l a s células cancerosas de ovario humano exhiben elevados niveles de AKT-1 y AKT-2. La inhibición de AKT induce la apoptosis de estas células cancerosas de ovario humano que demuestra que AKT puede ser un blanco importante para el tratamiento de cáncer ovárico [Zang, Q. Y., et al, On co gen e , 19 (2000) ] y otros trastornos prol i ferat ivos . La trayectoria de AKT también se ha 4 visto implicada en la supervivencia motoneuronal y la regeneración nerviosa [Kazuhiko, N., et al, The Jo u rn a l of Ne u ros ci en ce , 20 (2000)].

Existe una importante necesidad sin cumplir por desarrollar inhibidores de proteina cinasa, en especial inhibidores de ERK, que son útiles para tratar las diversas condiciones asociadas con la activación de la ERK, en especial considerando las opciones de tratamiento relativamente inadecuado disponible actualmente para la mayoría de estas condiciones . Por consiguiente, todavía existe una gran necesidad por desarrollar potentes inhibidores de la proteina cinasa, entre los que se incluyen Inhibidores de la ERK, que son útiles para tratar diversas condiciones asociadas con la activación de la proteina cinasa.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se ha encontrado que los compuestos de esta invención y las composiciones de los mismos son eficaces como inhibidores de la proteina cinasa, en especial como inhibidores de la ERK. Estos compuestos tienen la fórmula general I: I o un derivado farmacéuticamente aceptable de la misma, en donde: R1 se selecciona de R, halógeno, N ( R8 ) 2 , OR, NRCOR, NRCON(R8)2, CON(R8)2, S02R, NRS02R, o S02N(R8)2; T se selecciona de un enlace de valencia o un grupo enlazante; cada R se selecciona independientemente de hidrógeno o un grupo alifático sustituido opcionalmente que tiene de uno a seis átomos de carbono; R2 se selecciona de hidrógeno, CN, halógeno, arilo, aralquilo, heteroarilo, heterociclilo, un grupo de cadena alifática aciclico sustituido opcionalmente que tiene de uno a seis átomos de carbono, o un grupo alifático cíclico sustituido opcionalmente que tiene de cuatro a diez átomos de carbono; R3 se selecciona de R, OH, OR, N(R8)2, 4 halógeno, o CN; Q es un enlace de valencia, J, o una cadena de alquilideno C?_6 sustituida opcionalmente en donde hasta dos átomos de carbono no adyacentes de la cadena de alquilideno se reemplazan cada uno opcional e independientemente por J; J se selecciona de -C(=0)-, -C02-, -C(0)C(0)-, -NRCONR8-, -N(R)N(R8)-, -C(=0)NR8-, NRC(=0)-, -O-, -S-, -SO-, -S02-, -N(R)0-, -ON(R8)-, -OC (=0) N (R8) -, -N(R)COO-, -S02N(R8)-, -N(R)S02-, o -N (R8) -; R' se selecciona de •Rc RX -NH; -NHR- -N(R5)2, o -NR5(CH2)yN (R5)2; cada R5 se selecciona independientemente de de R6, R7, - (CH2)yCH(R6) (R7) , -(CH2)yR6, - ( CH2 ) yCH ( R6 ) 2 , - (CH2) yCH (R7) 2 , o -(CH2)yR\- y es 0 - 6 ; cada R6 es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado independientemente de un grupo arilo, aralquilo, aralcoxi, heteroarilo, heteroarilalquilo, he teroar ilalcoxi , heterociclilo, het erocicli lalquilo , o heterociclilalcoxi, alifático; cada R7 se selecciona independientemente de de un hidroxialquilo, alcoxialquilo, ariloxialquilo, o alcoxicarbonilo sustituido opcionalmente; 4 g cada R se selecciona independientemente de de R, o dos R8 en el mismo nitrógeno tomados juntos con el nitrógeno forman opcionalmente un anillo heterociclico saturado o insaturado de cuatro a ocho miembros que tiene de uno a tres heteroátomos; • y cada anillo de nitrógeno que se puede sustituir se sustituye opcionalmente por R, NR2, COR, C02(alquilo C?-C6 sustituido opcionalmente), S02(alquilo C?-C6 sustituido opcionalmente), CONR2, y S02NR2. En el sentido en el que se utiliza en la presente, se deben aplicar las siguientes definiciones a menos que se indique de otra manera. También, las combinaciones de sustituyentes o variables son aceptables únicamente si estas combinaciones dan por resultado en compuestos estables . El término "alifático", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa hidrocarburos C?-C?2 ramificados o cíclicos de cadena recta que están completamente saturados o que contienen una o más unidades de insaturación. Por ejemplo, los grupos alifáticos adecuados incluyen grupos alquilo, alquenilo, alquinilo lineales, ramificados o cíclicos e híbridos de los mismos tales 4 como por ejemplo, (cicloalquil) alquilo, ( cicloalquenil ) alquilo , o (cicloalquil) alquenilo. El término "alquilo" y "alcoxi" utilizado solo o como parte de una entidad mayor se refiere a cadenas tanto rectas como ramificadas que contienen de uno a doce átomos de carbono. Los términos "alquenilo" y "alquinilo" utilizados solos o como parte de una entidad mayor deben incluir cadenas tanto rectas como ramificadas que contienen de dos a doce átomos de carbono. Los términos "haloalquilo" y "haloalquenilo" y "haloalcoxi" significan alquilo, alquenilo o alcoxi, como puede ser el caso, sustituidos con uno o más átomos de halógeno. El término "halógeno" significa F, Cl, Br, o I. El término "heteroátomo" significa N, O, o S y debe incluir cualquier forma oxidada de nitrógeno y azufre y la forma cuaternizada de cualquier nitrógeno básico. El término "arilo", utilizado solo o como parte de una entidad mayor como en "aralquilo", se refiere a grupos de anillo aromático que tienen de cinco a catorce miembros, tales como fenilo, bencilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 1-antracilo y 2-antracilo y grupos aromáticos heterociclicos o grupos heteroarilo tales como 2-furanilo, 3-furanilo, N- imida zol i lo , 2- 4 imidazolilo, 4 - imida zol i lo , 5 -imida zol i lo , 3-isoxazolilo, 4 -isoxazol i lo , 5- isoxa zol i lo , 2-oxadiazolilo, 5-oxadiazolilo , 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2 -pi r imidi lo , 4-pirimidilo, 5-pi r imidi lo , 3 -pir idacinilo , 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 5 - 1 e t ra zol i lo , 2-triazolilo, 5- tria zol i lo , 2-tienilo, o 3-tienilo. El término "anillo de arilo" también se refiere a anillos que se sustituyen opcionalmente. Los grupos arilo también incluyen sistemas de anillo aromático policiclico fusionado en los cuales un anillo aromático carbociclico o anillo de heteroarilo se fusiona a uno o más de los otros anillos. Los ejemplos incluyen te t rahidrona f t i lo , bencimida zoli lo , benzot ieni lo , benzofuranilo, indolilo, imidazolilo, quinolinilo, benzotiazolilo, benzooxazoli lo , bencimida zol i lo , isoquinolinilo, isoindolilo, acridinilo, benzoisoxazolilo, y lo semejante. También se incluye dentro del alcance del término "arilo", según se utiliza en la presente, un grupo en el cual un o más anillos aromáticos carbociclicos y/o anillos de heteroarilo se fusionan a un cicloalquilo o un anillo heterociclico no aromático, por ejemplo, indanilo o t et rahidrobenzopi rani lo . 4 Los anillos heterociclicos no aromáticos son anillos carbociclicos no aromáticos en los cuales uno o más átomos de carbono en el anillo se reemplazan mediante un heteroátomo tal como nitrógeno, oxigeno o azufre en el anillo. El anillo puede ser de cinco, seis, siete u ocho miembros y/o estar fusionado a otro anillo, tal como un anillo de cicloalquilo o aromático. Los ejemplos incluyen 3 - lH-bencimida zol -2-ona, 3- ( 1-alquil ) -bencimidazol-2 -ona , 2-tetrahidrofuranilo , 3-t et rahidrofurani lo , 2-tetrahidrot iofenilo, 3-tet rahidrot iofenilo , 2-morfolino, 3-morfolino, 4-morfolino, 2 -t iomor fol ino , 3-tiomorfolino, 4 - 1 iomor folino , 1-pirrol idini lo , 2-pirrolidinilo, 3-pirrolidinilo , 1 -piperacini lo , 2-piperacini lo , 1-piperidinilo , 2-piperidinilo , 3-piperidinilo , 4 -piper idinilo , 4 -1 ia zol idini lo , diazolonilo , diazolonilo N- sustituido, 1 -fftt aall iimmiiddiinnii lloo ,, benzoxano, benzot r ia zol - 1 - i lo , benzopi rrol idina , benzopiperidina , benzoxolano, benzot iolano , y benzotiano. El término "anillo heterociclico", sin importar que sea saturado o insaturado, también se refiere a anillos que se sustituyen opcionalmente. Un grupo arilo ( carbocicl ico y heterociclico) o un grupo aralquilo tal como bencilo o fenetilo, 4 puede contener uno o más sustituyentes. Los ejemplos de sustituyentes adecuados en el átomo de carbono insaturado de un grupo arilo incluyen un halógeno, -R, -OR, -SR, OH protegido (tal como aciloxi), fenilo (Ph), Ph sustituido, -OPh, -OPh sustituido, -N02, -CN, -N(R)2, -NRN(R)2, -NRCON(R)2, -NRCOR, -NRC02 (alifático) , -C02R, -COR, -C(0)C(0)R, -CON(R)2, -CONRN(R)2, -S(0)2R, -SON(R)2, - S ( O ) ( a 1 i f á t ico ) , -S02N(R)2, o -NRS(0)2R, donde cada R se selecciona independientemente de - hidrógeno , un grupo alifático o un grupo alifático sustituido. Un grupo alifático o un anillo heterociclico no aromático puede contener uno o más sustituyentes. Los ejemplos de sustituyentes adecuados en el átomo de carbono saturado de un grupo alifático o de un anillo heterociclico no aromático incluyen aquellos listados anteriormente para los átomos de carbono insaturados asi como también los siguientes: =0, =S, =NNHR, =NNR2, =N-, OR, =NNHC0R, =NNHC02 ( a 1 i fát ico ) , =NNHS02 ( al i f át ico ) , o =NR, donde cada R se selecciona-independientemente de hidrógeno, un grupo alifático o un grupo alifático sustituido. El término "cadena de alquilideno" se refiere a una cadena de carbono recta o ramificada, sustituida opcionalmente, que puede estar 4 completamente saturada o tener una o más unidades de insaturación. Los sustituyentes opcionales son como se describieron anteriormente para un grupo alifático. Los sustituyentes opcionales de la cadena de alquilideno C?_6 de Q incluyen aquellos descritos anteriormente para un grupo alifático. Un átomo de nitrógeno que se puede sustituir en un anillo heterociclico aromático o no aromático puede estar sustituido opcionalmente. Los sustituyentes adecuados en el nitrógeno incluyen R, COR, N(R)2, CON(R)2, CONRN(R)2, S(0)2R, y C02R, donde R se selecciona independientemente de hidrógeno, un arilo o grupo alifático sustituido opcionalmente. El término "grupo enlazante" significa una entidad orgánica que une dos partes de un compuesto, los enlazantes tipicamente constan de un átomo tal como oxigeno o azufre, una unidad tal como -NH- o -CH2-, o una cadena de átomos, tal como una cadena de alquilideno. La masa molecular de un enlazante normalmente está en el intervalo de entre aproximadamente 14 y 200. Los ejemplos de enlazantes incluyen una cadena C?_5 saturada o insaturada de alquilideno que se sustituye opcionalmente y en donde se reemplazan opcionalmente hasta dos átomos de carbono saturado de la cadena por -C(=0)-, -CONH-, 4 CONHNH-, -C02- -NHC02-, -O-, -NHCONH-, -OC(=0)-, -OC(=0)NH-, -NHNH-, -NHCO-, -O-, -S-, -SO-, -S02-, -NH-, -S02NH-, o NHS02-.

Será evidente para alguien con experiencia en la técnica que ciertos compuestos de esta invención pueden existir en formas tautoméricas, todas estas formas tautoméricas de los compuestos están dentro del alcance de la invención. A menos que se establezca de otra manera, las estructuras representadas en la presente también pretenden incluir todas las formas estereoquímicas de la estructura; es decir, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico. Por lo tanto, los isómeros estereoquimicos individuales, asi como también las mezclas enantioméricas y dias tomér icas de los compuestos de la presente están dentro del alcance de la invención. A menos que se establezca de otra manera, las estructuras representadas en la presente también pretenden incluir los compuestos que difieren únicamente en presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, los compuestos que tienen las estructuras de la presente excepto para el reemplazo de un átomo de hidrógeno mediante un deuterio o tritio, o el reemplazo de un átomo de carbono mediante un carbono enriquecido 13C o 4 1 C están dentro del alcance de esta invención. Una modalidad de esta invención se relaciona con los compuestos de la fórmula II: II en donde R1, R2 , R3 , R4 , T, y Q son como se describió anteriormente . Una modalidad preferida de esta invención se relaciona con compuestos que tienen la fórmula: II-A en donde T, R2 , y R4 son como se describió anteriormente y R1 y R3 son cada uno hidrógeno. Los compuestos preferidos incluyen aquellos que tienen una o más, y de mayor preferencia todas las siguientes características: (a) Q es -CO-, -C02-, o -CONH-; (b) T es un enlace de valencia; R1 es hidrógeno o NHR; (d) R2 es un anillo de arilo 4 sustituido opcionalmente, de mayor preferencia un anillo de fenilo sustituido opcionalmente; (c) R3 es hidrógeno; (e) R4 se selecciona de R5 , -NHR5, -N(R5)2, -NR5R6, -NHCHR5R6, o -NHCH2R5; y/o (f) R5 es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado del grupo arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo, het erocicli lalqui lo , (CH2)yR6, (CH2)yR , o (CH2) yCH (R6) (R7) . Los ejemplos de sustituciones del grupo fenilo R2 incluyen halo, nitro, alcoxi, y amino. Cuando R4 es R5, los ejemplos de los grupos R5 preferidos incluyen pir rol idin- 1 - ilo , mor folin- 1- ilo , piper idin- 1 - ilo y piperacin- l-i lo en donde cada grupo se sustituye opcionalmente. Cuando R4 es -NHR5 o -N(R5)2, los grupos R5 preferidos incluyen además (CH2)yR6, (CH2)yR7, y ( CH2 ) yCH ( R6 ) ( R7 ) . Los ejemplos de R6 y R7 preferidos incluyen pir idin- 3- ilo , piridin-4-ilo, imidazolilo, furan-2-ilo, tet rahidrofuran-2 - i lo , ciciohexilo, fenilo, -CH2OH, -(CH2)2?H, e isopropilo, en donde cada grupo se sustituye opcionalmente. En la siguiente Tabla 1 se muestran estructuras ejemplificativas de la fórmula II, en donde R1 y R3 son cada uno H.

Tabla 1. Compuestos II II Otra modalidad preferida de esta invención se relaciona con los compuestos de la fórmula II-B: II-B en donde T, R, R2 , y R son como se describió anteriormente . Los compuestos II-B preferidos incluyen aquellos que tienen una o más, y de mayor preferencia, todas las siguientes características: (a) T es un enlace de valencia; (b) R3 es hidrógeno; y/o (c) R2 es un anillo de arilo sustituido opcionalmente, de mayor preferencia un anillo de fenilo sustituido opcionalmente. Las estructuras ejemplificativas de la fórmula II-B, en donde R3 es H, se muestran en la siguiente Tabla.

Los compuestos de la presente se pueden preparar en general mediante los métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica para los compuestos análogos, como se ilustra por los Esquemas generales I y II y los ejemplos sintéticos mostrados enseguida .

Esquema I Reactivos y condiciones: (a) PhCH2COCl, A1C13, CH2C12, 2 horas, RT (b) DMF, 24 hrs, temperatura ambiente (c) (Me2N) 2-Ot-Bu, THF, 24 hrs, temperatura ambiente (d) H2NNH2, EtOH, 12 horas, reflujo El Esquema I anterior muestra una ruta sintética general que se utilizó para preparar los compuestos de esta invención cuando R2 es un grupo fenilo sustituido opcionalmente. En el paso (a) , un cloruro de benzoilo sustituido opcionalmente se combinó con el compuesto 1_ en diclorometano y tricloruro de aluminio para formar el compuesto 2_. Para esta reacción es aceptable una amplia variedad de sustituciones en el anillo de fenilo. Los ejemplos de grupos R2 adecuados incluyen de manera enunciativa aquellos mostrados en la Tabla 1 anterior . La formación de la amida 4_ se alcanzó mediante el tratamiento del compuesto 2_ con una amina 3 en DMF. Cuando la amina 3_ fue una amina primaria, la reacción prosiguió a temperatura ambiente. Cuando la amina 3_ fue una amina secundaria, la reacción se calentó a 50°C para alcanzar la reacción completa y proporcionar la amida 4. La formación de la enamina 5_ en el paso (c) se alcanzó al tratar la amida 4_ con ( Me2N ) 2-Ot-Bu a temperatura ambiente. Alternativamente, la reacción para formar la enamina 5_ en el paso (c) también se logró al utilizar dimet i 1 formamide-dimet i lace tal (DMF-DMA) . La reacción utilizando DMF-DMA requiere una temperatura elevada para proporcionar la enamina 5_ mientras que utilizando (Me2N)2-OtBu tiene . la ventaja de proseguir a temperatura ambiente para proporcionar la enamina 5_ en alta pureza. La formación del compuesto de pirazol 6_ en el paso (d) se alcanzó mediante el tratamiento de la enamina 5_ con hidrato de hidracina a temperatura 4 elevada. Los compuestos de la fórmula II sintetizados mediante este método, como se ejemplificó en la Tabla 1, se aislaron mediante HPLC preparatoria (fase inversa, 10~ 90% de MeCN en agua durante 15 minutos) . Los detalles de las condiciones utilizadas para la producción de estos compuestos se muestran en los Ejemplos.

Esquema II II-B-16 Reactivos y condiciones: (a) 3-C1 - PhCH2COCl , A1C13, CH2C12, 2 horas, RT (b) DMF, 24 hrs, temperatura ambiente (c) NBS, CC14, reflujo (d) iPrOH, reflujo (e) ácido fórmico, reflujo 2 horas.

El Esquema II anterior muestra un método sintético general que se puede utilizar para preparar los compuestos de la fórmula II-B, utilizando el compuesto II-B-16 como un ejemplo. Este método se modifica a partir de Jira, T., et al, Ph a rma z i e , pp . 401-406 (1994) . Los compuestos de la fórmula II-B también se pueden preparar mediante métodos similares a aquellos de Woller, J . , et al, Pha rm a z i e , pp . 937-940 (1996), Rychmans, T., et al, Te t ra h edron , pp . 1729-1734 (1997), y Tupper, D. E., et al, Synthesis, pp. 337-341 (1997) . De acuerdo con otra modalidad, la invención proporciona un método para inhibir la actividad de la cinasa en una muestra biológica. Este método comprende el paso de poner en contacto la muestra biológica con un compuesto de esta invención. El término "muestra biológica", en el sentido en el que se utiliza en la presente, incluye cultivos celulares o extractos de los mismos; material sometido a biopsia obtenido de un mamífero o extractos del mismo; y fluidos sanguíneos, de saliva, de orina, heces, semen, lágrimas, u otros fluidos o extractos de los mismos. El término "muestra biológica" también incluye organismos vivos, en cuyo caso "poner en contacto un compuesto de esta invención con una muestra biológica" es sinónimo con 4 el término "administrar el compuesto (o composición que comprende el compuesto) a un mamífero". Otro aspecto de esta invención se relaciona con un método para tratar un estado de enfermedad en mamíferos que se alivia mediante el tratamiento con un inhibidor de proteina cinasa, cuyo método comprende administrar a un mamífero que necesita de este tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la fórmula o un derivado farmacéuticamente aceptable de la misma, en donde: R1 se selecciona de R, halógeno, N(R8)2, OR, NRCOR, NRCON(R8)2, CON(R8)2, S02R, NRS02R, o S02N(R8)2; T se selecciona de un enlace de valencia o un grupo enlazante; cada R se selecciona independientemente de hidrógeno o un grupo alifático sustituido opcionalmente que tiene de uno a seis átomos de carbono; R2 se selecciona de hidrógeno, CN, halógeno, 4 arilo, aralquilo, heteroarilo, heterociclilo, un grupo de cadena alifática acrilica, sustituido opcionalmente que tiene de uno a seis átomos de carbono, o un grupo alifático cíclico sustituido opcionalmente que tiene de cuatro a diez átomos de carbo o; R" se selecciona de R, OH, OR, N (Rc halógeno, o CN; Q es un enlace de valencia, J, o una cadena de alquilideno C?-6 sustituida opcionalmente en donde hasta dos átomos de carbono no adyacentes de la cadena de alquilideno cada una se reemplaza opcional e independientemente por J; J se selecciona de -C(=0)-, -C02-, -C(0)C(0)-, -NRCONR8-, -N(R)N(R8)-, -C(=0)NR8-, -NRC(=0)-, -O-, -S-, -SO-, -S02-, -N(R)0-, -ON(R8)-, -OC (=0)N(R8)-, -N(R)COO-, -S02N(R8)-, -N(R)S02-, o -N(R8)-; R4 se selecciona" de -R8, -R5, -NH2, -NHR5, -N(R5)2, o -NR5 (CH2)yN (R5)2; cada R5 se selecciona independientemente de R6, R7, - (CH2)yCH(R6) (R7) , -(CH2)yR6, - ( CH2 ) yCH ( R6 ) 2 , - (CH2) yCH (R7) 2, o -(CH2)yR7; y es 0 - 6 ; cada R6 es un grupo sustituido opcionalmente 4 seleccionado independientemente de un grupo alifático, arilo, aralquilo, aralcoxi, heteroarilo, heteroarilalquilo, he t eroar i lalcoxi , heterociclilo, heterociclilalquilo , o heterocicl ilalcoxi , cada R7 se Selecciona independientemente de un hidroxialquilo, alcoxialquilo, ariloxialquilo, o alcoxicarbonilo alifático sustituido opcionalmente; cada R8 se selecciona independientemente de R, o dos R8 en el mismo nitrógeno tomados juntos con el nitrógeno opcionalmente forman un anillo heterociclico saturado o insaturado de cuatro a ocho miembros, que tiene de uno a tres heteroátomos; y cada anillo de nitrógeno se puede sustituir opcionalmente por R, NR2, COR, C02 (alquilo Ci-Ce sustituido opcionalmente), S02 (alquilo C?~C6 sustituido opcionalmente), CONR2 y S02NR2. Una modalidad comprende administrar un compuesto de la fórmula II. Una modalidad preferida comprende administrar un compuesto de la fórmula II-A, y de mayor preferencia un compuesto listado en la Tabla 1. Otra modalidad preferida comprende administrar un compuesto de la fórmula II-B, y de mayor preferencia un compuesto listado en la Tabla 2. Las composiciones farmacéuticas útiles para estos 4 métodos se describen más adelante. El presente método en especial es útil tratar un estado de enfermedad que se alivia por el uso de un inhibidor de ERK, JAK, JNK, Aurora, GSK, KDR, o AKT. En el sentido en el que se utiliza en la presente, a menos que se indique de otra manera, los términos "ERK", "JAK", "JNK", "Aurora", "GSK", "KDR", y "AKT" se refiere a todas las isoformas de las enzimas respectivas entre las que se incluyen de manera enunciativa ERK1, ERK2, ERK3, ERK4 , ERK5, ERK6, ERK7, JAKl, JAK2 , JAK3, JAK4, JNK1, JNK2, JNK3, Auroral, Aurora2, GSK3-alfa, GSK3-beta, KDR, AKT-1, AKT-2, y AKT-3. La actividad de los compuestos como inhibidores de la proteina cinasa, por ejemplo como inhibidores de la ERK, se pueden analizar i n vi t ro , i n vi vo o en una linea celular. Utilizando ERK como un ejemplo, los análisis i n vi t ro incluyen análisis que determinan la inhibición ya sea de la actividad cinasa o la actividad ATPasa de la ERK activada. Los análisis i n vi t ro alternativos cuantifican la capacidad del inhibidor a unirse a ERK y se pueden medir ya sea al radiomarcar al inhibidor antes de la unión, aislando el complejo inhibidor /ERK y determinando la cantidad del enlace radiomarcado, o 4 al correr un experimento de competición donde nuevos inhibidores se incuban con ERK enlazada a radioligandos conocidos. Una forma de utilizar cualquier tipo o isoforma de ERK, dependiendo de cuál tipo o isoforma ERK se inhibirá. Los compuestos de esta invención son potentes inhibidores de ERK como se determina por análisis enzimático. Estos compuestos también han mostrado inhibir la ERK en un análisis de proliferación celular. Los detalles de las condiciones utilizadas para los análisis enzimáticos como para la proliferación celular se muestran en los Ejemplos más adelante . Los compuestos de esta invención también son inhibidores de JNK, Aurora, GSK, KDR y AKT como se determina por análisis enzimático. Los detalles de las condiciones utilizadas para este análisis se muestran en los Ejemplos más adelante. Sin estar limitados por la teoría, también se espera que los compuestos de esta invención inhiban otras proteinas cinasas . Los inhibidores de la proteina cinasa de esta invención, o sales farmacéuticas de la misma, se puede preparar en composiciones farmacéuticas para administrarse a animales o humanos. Estas 4 composiciones farmacéuticas eficaces para tratar o prevenir una condición en la que interviene una proteina cinasa que comprende el inhibidor de la proteina cinasa en una cantidad suficiente para inhibir de manera detectable la actividad de la proteina cinasa y un portador farmacéuticamente aceptable, son otra modalidad de la presente invención. El término "inhibir de manera detectable", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa un cambio medible de actividad entre una muestra que contiene el inhibidor y una muestra que contiene únicamente una proteina cinasa. El término "condición en la que interviene la ERK", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa cualquier estado de enfermedad u otra condición dañina en la cual se sable que la ERK desempeña una función. Estas condiciones incluyen, sin limitación, cáncer, accidente vascular cerebral, diabetes, hepat omegalia , enfermedad cardiovascular que incluye cardiomegalia , enfermedad de Alzheimer, fibrosis cistica, enfermedad viral, enfermedades autoimmunes, aterosclerosis, restenosis, psoriasis, trastornos alérgicos que incluyen asma, inflamación, trastornos neurológicos y enfermedades relacionadas con hormonas. El término "cáncer" incluye de manera 4 enunciativa los siguientes cánceres: de mama, ovárico, cervical, prostético, testicular, del tracto genitourinario, esofágico, laríngeo, de glioblastoma, de neuroblastoma, estomacal, de la piel, queratoacantoma, pulmonar, de carcinoma epidermoideo , de carcinoma de célula grande, de carcinoma de célula pequeña, de adenocarcinoma pulmonar, óseo, de colon, de adenoma, pancreático, de adenocarcinoma, de la tiroides, de carcinoma folicular, de carcinoma no diferenciado, de carcinoma papilar, de seminoma, de melanoma, de sarcoma, de carcinoma vesicular, de carcinoma hepático y pasajes biliares, de carcinoma renal, por trastornos mieloideos, por trastornos linfoides, de Hodgkin, de las células pilosas, de la cavidad bucal y faringe (oral), de labios, lingual, bucal, faríngeo, del intestino delgado, de colon-recto, del intestino grueso, rectal, cerebral y del sistema nervioso central, y leucemia. Los compuestos de la presente invención también son útiles como inhibidores de las cinasas relacionadas. El término "cinasas relacionadas" se refiere a proteinas cinasas que tienen residuos que son similares a aquellos residuos que se alinean con el sitio de unión de la ERK. Sin desear estar limitados por la teoria, los solicitantes suponen que 4 esta actividad inhibidora es debida a la similitud estructural cercana entre los sitios activos de la ERK y las cinasas relacionadas. La alineación de la secuencia ERK con otras cinasas se puede derivar de programas de software comunes tales como el programa "bestfit" disponible de Genetics Computer Group. Este programa utiliza el algoritmo de homología local descrito por Smith y Wuaterman en Adva n ces i n Appl i ed Ma th ema t í cs 2_; 482 (1981) . Las cinasas relacionadas inhibidas por los compuestos de esta invención podrían contener residuos, identificados por el software de alineación de secuencias de proteinas estándar anterior, que corresponde a los residuos ERK: 131, E33, G34, A35, Y36, G37, M38, V39, A52, KS4, R67, T68, E71, L75, 184, 186, 1103, Q105, D106, L107, M108, E109, Dlll, K|14, D149, K151, S153, N154, L156, C166 y D167, con una marca de similitud de 80% o mayor. La amrca de similitud se puede determinar utilizando tablas para substitución de aminoácidos estándar tales como aquellas descritas por Dayhoff (Dayhoff, M.O., et al, Atlas of Protein Sequence and Structure, 1979) y Blosom-Henikof f ( Blosum-Heni kof f , S y Henikoff, J.G., PNAS, 1992, 89:10915-10919) . El término "cinasas relacionadas" también incluye aquellas que contienen 4 residuos con una marca de similitud del 80% o mayor para los siguientes Residuos ERK: 131, G37, A52, 1103, E109, y N154.

Los compuestos de la presente invención también son útiles como inhibidores de las cinasas de la familia JAK. Sin desear estar limitados por la teoria, los solicitantes suponen que esta actividad inhibidora es debida a la similitud estructural cercana entre los sitios activos de la ERK y la JAK como se determina mediante los métodos estándar descritos anteriormente. Se ha encontrado, a partir de experimentos con estructuras cristalinas por rayos x internos con inhibidores enlazados a ERK, que los tres residuos de aminoácidos en el sitio activo de la ERK forman interacciones de unión al hidrógeno clave con estos tipos de inhibidores. Estos tres residuos de aminoácidos son M108, D106 y Q105. Esta numeración de aminoácidos corresponde a la entrada de base de datos Swiss-Prot para el acceso #P28482. La base de datos Swiss-Prot es una base de datos de la secuencia de proteinas internacional distribuida por el Instituto Europeo de Bioinformát ica (EBI, por sus siglas en inglés) en Ginebra, Suiza. La base de datos se puede encontrar en www.ebi.ac.uk/swissprot. 4 Los átomos estructurales de M108 y D106, y las interacciones asociadas, son comunes para todas las cinasas. ML08 proporciona un enlace de hidrógeno tanto donador como aceptor y D106 proporciona un enlace aceptor de hidrógeno a través de su estructura CO. Un inhibidor que podria formar un enlace de hidrógeno para uno o más de estos grupos para enlace de hidrógeno dentro del sitio activo se esperarla que se una a la enzima y, por lo tanto, muestre inhibición . El residuo de glutamina Q105 está implicado en un subconjunto de cinasas que incluyen la ERK y la JAK como se determinó por el examen de los datos de alineación obtenidos de los programas de software mencionados anteriormente. Q105 proporciona una cadena lateral CO clave que acepta un enlace de hidrógeno. Los experimentos de modelaje revelan que tanto para ERK como para JAK, el donador de enlace de hidrógeno del anillo Ht está dentro de la distancia que une al hidrógeno para el residuo Q105. Debido a estas interacciones de sitio activo similares, los inhibidores de la ERK de la presente invención también inhiben la JAK. Por consiguiente, estos compuestos son útiles para tratar las condiciones en las que interviene la JAK. 4 El término "condición en la que interviene la JAK", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa cualquier estado de enfermedad u otra condición dañina en la cual se sabe que la JAK desempeña una función. Estas condiciones incluyen, sin limitación, trastornos alérgicos tales como asma y dermatitis atópica, enfermedades autoimmunes tales como lupus SLE y psoriasis, y condiciones asociadas con el trasplante de órganos. Los compuestos de esta invención también son útiles como inhibidores de las cinasas de la familia JNK. Por consiguiente, estos compuestos son útiles para tratar las condiciones en las que interviene la JNK. El término "condición en la que interviene la JNK", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa cualquier estado de enfermedad u otra condición dañina en la cual se sabe que la JNK desempeña una función. Estas condiciones incluyen, sin limitación, enfermedades neurodegenerativas conducidas por apoptosis tales como Enfermedad de Alzheimer, Enfermedad Parkinson, ALS (Esclerosis Lateral Amiot rópica ) , epilepsia y ataques de apoplejía, Enfermedad Huntington, lesiones cerebrales traumáticas, asi como también accidente vascular cerebral isquémico y hemorrágico, enfermedad 4 cardiaca, trastornos por inmunodeficiencia, enfermedades inflamatorias, trastornos alérgicos, enfermedades autoimmunes, trastornos - óseos destructivos tales como osteoporosis, trastornos proliferat ivos , enfermedades infecciosas, enfermedades viral, trastornos que se relacionan con la muerte celular e hiperplasia que incluye reper fus ion/ i squemia en accidente vascular cerebral, ataques cardiacos, e hipoxia de órganos, agregación de plaquetas inducida por trombina, leucemia mielógena crónica (CML, por sus siglas en inglés), artritis reumatoide, asma, osteoartritis, isquemia, enfermedad hepática por cáncer que incluye isquemia hepática, enfermedad cardiaca tal como infarto al miocardio e insuficiencia cardiaca congestiva, condiciones inmune patológicas que incluyen la activación de la célula T y los trastornos neurodegenerativos. Los compuestos de esta invención también son útiles como inhibidores de Aurora. Por consiguiente, estos compuestos son útiles para tratar condiciones en las que interviene Aurora. El término "condición en la que interviene Aurora", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa cualquier enfermedad u otra condición dañina en la cual se sabe 4 que Aurora desempeña una función. Estas condiciones incluyen, sin limitación, cáncer. El término "cáncer" incluye, de manera enunciativa los siguientes cánceres: de colon y ovárico. Los compuestos de esta invención también son útiles como inhibidores de las cinasas de la familia GSK. Por consiguiente, estos compuestos son útiles para tratar las condiciones en las que interviene la GSK. El término "condición en la que interviene la GSK", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa cualquier estado de enfermedad u otra condición dañina en cual se sabe que la GSK desempeña una función. Estas condiciones incluyen, sin limitación, diabetes, enfermedad de Alzheimer, enfermedades neurodegenerativas, y trastornos por CNS tales como trastorno maniaco depresivo y esquizofrenia. Los compuestos de esta invención también son útiles como inhibidores de las cinasas de la familia KDR. Por consiguiente, estos compuestos son útiles para tratar las condiciones en las que interviene la KDR. El término "condición en la que interviene la KDR", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa cualquier estado de enfermedad u 4 otra condición dañina en la cual se sabe que la KDR desempeña una función. Las enfermedades o condiciones en las que interviene la KDR incluyen, de manera enunciativa: cáncer tal como cáncer cerebral, cáncer del tracto genitourinario, cáncer del sistema linfático, cáncer estomacal, cáncer de la laringe, cáncer pulmonar, cáncer pancreático, cáncer de mama, sarcoma de Kaposi, y leucemia; endometriosis, hiperplasia prostética benigna, enfermedades vasculares tales como restenosis y aterosclerosis; enfermedades autoinmunes tales como artritis reumatoide y psoriasis, condiciones oculares tales como retinopatia proliferativa o angiogénica y degeneración macular y enfermedades inflamatorias tales como dermatitis por contacto, asma y reacciones de hipersensibilidad retardada. Los compuestos de esta invención también son útiles como inhibidores de las cinasas de la familia AKT. Por consiguiente, estos compuestos son útiles para tratar condiciones en las que interviene la AKT. El término "condición en la que interviene la AKT", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa cualquier estado de enfermedad u otra condición dañina en la cual se sabe que la AKT desempeña una función. Las enfermedades o 4 condiciones en las que interviene la AKT incluyen de manera enunciativa: trastornos prol i ferat i vos ; cáncer y trastornos neurodegenerativos.

Además de los compuestos de esta invención, derivados o pro fármacos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención también se pueden emplear en las composiciones para tratar o prevenir los trastornos identificados anteriormente. Un "derivado o pro fármaco farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sal, éster, sal de un éster u otro derivado farmacéuticamente aceptable de un compuesto de esta invención que, en el momento de la administración a un recipiente, es capaz de proporcionar, ya sea directa o indirectamente, un compuesto de esta invención o un metabolito de inhibición activo o residuo del mismo. Los derivados o pro fármacos favorecidos particularmente son aquellos que aumentan la biodisponibilidad de los compuestos de esta invención cuando estos compuestos se administran a un mamífero (por ejemplo, al permitir que un compuesto administrado oralmente se absorba más fácilmente en la sangre) o que intensifican la administración del compuesto precursor a un compartimiento biológico (por ejemplo, al cerebro o sistema linfático) con relación a la 4 especie precursora. Los pro fármacos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen, sin limitación, esteres, esteres de aminoácidos, fosfato esteres, sales metálicas y sulfonato esteres. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen aquellas derivadas de ácidos y bases inorgánicas y orgánicas farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de sales acidas adecuadas incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canfor sul fonato , ciclopentanpropionat o , digluconato, dodeciisulfato, etansulfonato, formiato, fumarato, glucohept anoat o , glicerofosfato, glicolato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietansul fona t o , lactato, maleato, malonato, metansulfonato, 2 -na ftalensul fonat o , nicotinato, nitrato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Otros ácidos, tales como oxálici, mientras que en si mismos no sean farmacéuticamente aceptables, se pueden emplear en la 4 preparación de las sales útiles como intermediarios para obtener los compuestos de la invención y sus sales de adición acidas farmacéuticamente aceptables.

Las sales derivadas de bases adecuadas incluyen sales de metal alcalino (por ejemplo, sodio y potasio), metal alcalinotérreo (por ejemplo, magnesio), amonio y N+ ( alquilo C?-4) . Esta invención también considera la cuaternización de cualesquiera grupos que contienen nitrógeno básico de los compuestos expuestos en la presente. Los productos solubles o dispersables en agua o aceite se pueden obtener mediante esta cuaternización. Los portadores farmacéuticamente aceptables que se pueden utilizar en estas composiciones farmacéuticas incluyen de manera enunciativa: intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteinas de suero, tales como albúmina de suero humano, sustancias amortiguadoras tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicérido parcial de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrólitos, tales como sulfato de protamina, fosfato ácido disódico, fosfato ácido potásico, cloruro de sodio, sales de zinc, silice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias con base de 4 celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque de poliet ileno-polioxipropileno , polietilenglicol y grasa de lana . Las composiciones de la presente invención se pueden administrar oralmente, parenteralmente, mediante roclo para inhalación, tópicamente, rectalmente, nasalmente, bucalmente, vaginalmente o mediante un reservorio implantado. El término "parenteral", en el sentido en el que se utiliza en la presente, incluye técnicas de inyección e infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, int ra-s inovial , int raes ternal , intratecal, int rahepát ica , int ralesional e intracraneal. De preferencia, las composiciones se administran oral, intraperitoneal, o intravenosamente. Las formas inyectables estériles de las composiciones de esta invención pueden ser acuosas o una suspensión oleaginosa. Estas suspensiones se pueden preparar de acuerdo con técnicas conocidas en este campo utilizando agentes de dispersión o humectantes adecuados y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un 4 diluyente o solvente parenteralmente aceptable, por ejemplo como una solución en 1 , 3-but andiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden emplear están el agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente ace ites fijos estériles como un solvente o medio de suspensión. Para este fin, se puede emplear cualquier aceite fijo insípido que incluye mono o di-gl icér idos sintéticos. Los ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados glicéridos son útiles en la preparación de soluciones inyectables, como pueden ser aceites farmacéuticamente aceptables, tales como aceite de oliva o aceite de ricino, en especial sus versiones polioxiet i ladas . Estas soluciones o suspensiones oleosas también pueden contener un diluyente o dispersante de cadena larga, tal como carboximetilcelulosa o agentes dispersantes similares que se utilizan comúnmente en la preparación de las formas de dosificación farmacéuticamente aceptables entre las que se incluyen emulsiones y suspensiones. Otros tensioactivos comúnmente utilizados, tales como Tweens, Spans y otros agentes emulsionantes o intensificadores de biodisponibilidad que se utilizan normalmente en la fabricación de las formas de 4 dosificación sólidas, liquidas y otras formas farmacéuticamente aceptables también se pueden utilizar para los fines de la preparación.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención se pueden administrar oralmente en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable entre las que se incluyen de manera enunciativa: cápsulas, tabletas, suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de tabletas para uso oral, los portadores comúnmente utilizados incluyen lactosa y almidón de maiz. También se agregan normalmente agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio. Para administración oral en una forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maiz seco. Cuando se requieren suspensiones acuosas para uso oral, el ingrediente activo se combina agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, también se pueden agregar ciertos agentes edulcorantes, saborizantes o colorantes . Alternativamente, las composiciones farmacéuticas de esta invención se pueden administrar en la forma de supositorios para administración rectal. Éstos se pueden preparar al mezclar el agente con un excipiente no irritante adecuado que es 4 sólido a temperatura ambiente, aunque liquido a temperatura rectal y por lo tanto se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Estos materiales incluyen manteca de cacao, cera de abeja y polietilenglicoles. Las composiciones farmacéuticas de esta invención ' también se pueden administrar tópicamente, en especial cuando el blanco del tratamiento incluye áreas u órganos que sean accesibles fácilmente mediante aplicación tópica, incluyendo enfermedades del ojo, la piel, o el tracto intestinal inferior. Las formulaciones tópicas adecuadas se preparan fácilmente para cada una de estas áreas u órganos. La aplicación tópica para el tracto intestinal inferior se puede realizar en una preparación de supositorio rectal (véase en lo anterior) o en una formulación de enema adecuada. También se pueden utilizar parches t ransdérmicos tópicos . Para aplicaciones tópicas, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar en un ungüento adecuado que contiene el componente activo suspendido o disuelto en uno o más portadores. Los portadores para administración tópica de los compuestos de esta invención incluyen de manera enunciativa: aceite 4 mineral, petrolato liquido, petrolato blanco, compuestos de propilenglicol, polioxietileno, polioxipropileno, cera emulsionante y agua.

Alternativamente, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar en una loción o crema adecuada que contiene los componentes activos suspendidos o disueltos en uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Los portadores adecuados incluyen de manera enunciativa: aceite mineral, monostearato de sorbitán, polysorbate 60, cera de cet i les teres , alcohol cetearilico, 2 -oct i ldodecanol , alcohol bencílico y agua. Para uso oftálmico, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar como suspensiones micronizados en solución salina estéril isotónica, ajustada en el pH, o, de preferencia, como soluciones en solución salina estéril isotónica, ajustada en el pH con o sin un conservador tal como cloruro de benci lalconio . Alternati amente, para usos oftálmicos, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar en un ungüento tal como petrolato. Las composiciones farmacéuticas de esta invención también se pueden administrar mediante aerosol o inhalación nasal. Estas composiciones se preparan de acuerdo con técnicas bien conocidas en el 4 campo de las preparaciones farmacéuticas y se pueden preparar como soluciones en solución salina, que emplea alcohol bencílico u otros conservadores adecuados, promotores de absorción para intensificar la biodisponibilidad, f luorocarburos , y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes convencionales. La cantidad de inhibidor de la proteina cinasa de esta invención que se puede combinar con los materiales portadores para producir una forma de dosificación individual variará dependiendo del hospedero tratado, la forma de administración particular. De preferencia, las composiciones se deben preparar de tal forma que se pueda administrar una dosificación de entre aproximadamente 0.01 y 100 mg/kg de peso corporal/dia del inhibidor a un paciente que recibe estas composiciones. También se debe entender que un régimen de dosificación y tratamiento especifico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores, entre los que se incluyen la actividad del compuesto especifico empleado, la edad, el peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos, y la opinión del médico que está realizando el tratamiento y la gravedad de la 4 enfermedad particular que será tratada. La cantidad del inhibidor también dependerá del compuesto particular en la composición.

Los inhibidores de cinasa de esta invención o las composiciones farmacéuticas de los mismos también se pueden incorporar en las composiciones para recubrir un dispositivo médico que se puede implantar, tal como prótesis, válvulas artificales, injertos vasculares, sujetadores y catéteres. Los sujetadores vasculares, por ejemplo, se han utilizado para superar la restenosis (re-estrechamiento de la pared vascular después de una lesión) . Sin embargo, los pacientes que utilizan sujetadores u otros dispositivos para implante tienen el riesgo de formar coágulos o activación de plaquetas. Estos efectos no deseados se pueden prevenir o mitigar al recubrir previamente el dispositivo con una composición que comprende un inhibidor de cinasa. Los recubrimientos adecuados y la preparación general de los dispositivos implantables recubiertos se describen en las patentes de los Estados Unidos 6,099,562; 5,886,026; y 5,304,121. Los recubrimientos son materiales poliméricos normalmente biocompatibles tales como un polimero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, 4 polietilenglicol, ácido poliláctico, acetato et ilenvinilico , y mezclas de los mismos. Los recubrimientos se pueden cubrir opcionalmente mediante una cubierta superior adecuada de f luorosilicona , polisacáridos, polietilenglicol, fosfolipidos o combinat iones de los mismos para impartir las características de liberación controlada en la composición. Los dispositivos para implante recubiertos con un inhibidor de cinasa de esta invención son otra modalidad de la presente invención . De acuerdo con otra modalidad, la invención proporciona los métodos para tratar o prevenir una condición o estado de enfermedad en la que interviene la ERK-, JAK-, JNK-, Aurora-, GSK-, KDR-, o AKT-, que comprende el paso de administrar a un paciente una de las composiciones farmacéuticas descritas anteriormente. El término "paciente", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa un mamífero, de preferencia un ser humano. De preferencia, el método se utiliza para tratar o prevenir una condición, o estado de enfermedad, seleccionado de cánceres tales como cánceres de mama, colon, prostético, piel, pancreático, cerebral, del tracto genitourinario, del 4 sistema linfático, estomacal, laríngeo y pulmonar, entre los que se incluyen adenocarcinoma pulmonar y cáncer pulmonar de célula pequeña, accidente cerebral vascular, diabetes, hepat omega 1 ia , cardiomegal ia , enfermedad cardiovascular, enfermedad de Alzheimer, fibrosis cistica, y enfermedad viral, o cualquier enfermedad o trastorno especifico descrito anteriormente. Dependiendo de la condición particular, o estado de enfermedad, que será tratada o prevenida, se pueden administrar agentes terapéuticos adicionales, que normalmente se administran para tratar o prevenir esa condición junto con los inhibidores de esta invención. Por ejemplo, se pueden combinar agentes quimioterapéuticos u otros agentes ant i -proli ferat i vos con los inhibidores de esta invención para tratar enfermedades proliferativas y cáncer. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos conocidos incluyen de manera enunciativa: adriamicina, dexametasona, vincristina, ciclofosfamida, fluorouracilo, topotecan, taxol, interferones, y derivados de platino. También se pueden combinar otros ejemplos de agentes inhibidores de esta invención que incluyen, sin limitación: agentes ant i inflamator ios tales como 4 corticoesteroides, bloqueadores de TNF, IL-1 RA, azatioprina, ciclofosfamida y sul fasalacina ; agentes inmunomoduladores e inmunosupresores tales como ciclosporina, tacrolimus, rapamicina, micofenolato mofetil, interferones, corticoesteroides, ciclofofamida , azatioprina, y sul fasa lacina ; factores neurotróf icos tales como inhibidores de acet ilcolinesterasa , inhibidores MAO, interferones, ant i -convul s ivos , bloqueadores de canal iónico, riluzol y agentes anti-Parkinsonianos; agentes para tratar enfermedades cardiovasculares tales como beta-bloqueadores, inhibidores ACE, diuréticos, nitratos, bloqueadores de canal de calcio, y estatinas; agentes para tratar enfermedades hepáticas tales como corticoesteroides, colestiramina, interferones, y agentes antivirales; agentes para tratar trastornos sanguíneos tales como corticosteroides, agentes anti-leucémicos y factores de crecimiento; agentes para tratar diabetes tales como insulina, análogos de insulina, inhibidores de alfa glucosidasa, biguanidas, y sensibilizadores a la insulina; y agentes para tratar trastornos de inmunodeficiencia tales como gamma globulina. Estos agentes adicionales se pueden administrar por separado, como parte de un régimen de 4 dosificación múltiple, de la composición que contiene el inhibidor. Alternativamente, estos agentes pueden ser parte de una forma de dosificación individual, mezclados junto con el inhibidor en una composición individual . Con el fin de que la invención descrita en la presente se pueda entender de manera más completa, se exponen los siguientes ejemplos. Se debe entender que estos ejemplos tienen fines ilustrativos y no se deben interpretar como limitantes de esta invención en cualquier forma.

EJEMPLOS Ejemplo 1 2,2,2-Tricloro-l- ( 4-feniloacetil-lH-pirrol-2-il) -etanona (1_) : En un matraz seco, se combinó cloruro de fenilacetilo (1 equivalente) con 2 - 1 r icloroacet i 1 pirrol (1 equivalente) en una cantidad minima de diclorometano (DCM) . A la solución resultante, a temperatura ambiente, se agregó tricloruro de aluminio (1 equivalente) . Después de dos horas, la mezcla de reacción se aplicó directamente sobre una columna de gel de silice. La elución de gradiente con acetato de etilo del 10% al 50% en hexanos proporcionó el compuesto 1_ en 60% de rendimiento. H NMR (CDC13) d 4.0 (s, 2H), 7.1-7.35 (m, 7H), 9.7 (br s, NH) . La HPLC utilizando el método B (como se describe más adelante para el Ejemplo 5) proporcionó un tiempo de retención de 4.9 minutos. LC/MS (M+l) 330.2, (M-l) 328.1.

Ejemplo 2 Bencila ida del ácido 4-fenilacetil-lH-pirrol-2 -carboxilico (2) : A una solución del compuesto 1_ (1 equivalente) en DMF, a temperatura ambiente, se agregó bencilamina (1.2 equivalentes) . Después de 24 horas, el solvente se evaporó y el producto crudo 2_ se utilizó sin purificación. La HPLC utilizando el método B (como se describe más adelante por el Ejemplo 5) proporcionó el tiempo de redención de 3.8 minutos. FIA/MS (M+l) 319.3, (M-l) 317.2.

Ejemplo 3 Bencilamida del ácido 4- ( 3-dimetilamino-2-fenil-acriloil) -lH-pirrol-2 -carboxilico (3^) : A una solución del compuesto 2_ (1 equivalente) en THF, a temperatura ambiente; se agregó (Me2-N ) 2CHOt-Bu (3 equivalentes) . Después de 24 horas, el solvente se evaporó y el producto crudo 3_ se utilizó sin purificación. 1 H NMR (CDC13) d 4.4 (s, 2H), 4.8 (s, NH) , 6.8-7.4 (m, 13H) .

Ejemplo 4 Bencilamida del ácido 4- ( 4-fenil-lH-pirazol-3-ilo) -lHtpirrol-2-carboxílico (II-5) : A una solución del compuesto 3_ (1 equivalente) en etanol, a temperatura ambiente, se agregó hidrato de hidracina (3 equivalentes) y la mezcla resultante se calentó a reflujo. Después de 12 horas, el solvente se evaporó y el producto crudo se purificó mediante HPLC preparatoria (fase inversa; 10 - 90 % MeCN en agua; 15 minutos) para proporcionar el compuesto deseado 11 - 5. LC/MS (M+l) 343.3, (M-l) 341.2.

Ejemplo 5 Se han preparado otros compuestos de la fórmula II mediante métodos sustancialmente similares a aquellos descritos en los Ejemplos 1-4 anteriores y aquellos ilustrados en el Esquema I. Los datos de caracterización para estos compuestos se resumen en la siguiente Tabla 3 e incluye LC/MS, HPLC, y datos de 1 R NMR. Para los compuestos donde el Método HPLC se designa como "A", se utilizó el siguiente método: un gradiente de agua:MeCN, TFA al 0.1% (95:5 -> 0:100) se corrió durante 22 minutos a 1 mL/min y 214 nm. Para los compuestos donde el Método HPLC se designa como "B", se utilizó el siguiente método: un gradiente de agua:MeCN, TFA al 0.1% (90:10 - 0:100) se corrió 4 durante 8 minutos a 1 mL/min y 214 nm . Cada uno de los métodos A y B utilizan la columna YMC ODS-AQ 55 120A con un tamaño de 3.0 x 150 mm . El término "T et(min)" se refiere al tiempo de retención, en minutos, asociado con los compuestos utilizando el método HPLC designado. Cuando sea aplicable, los datos de XH NMR también se resumen en la siguiente Tabla 3 en donde "Y" designa que los datos 1 ti NMR están disponibles y se encontró que fueron consistentes con la estructura. Los números del compuesto corresponden a los números del compuesto listado en la Tabla 1.

Tabla 3. Datos de caracterización para compuestos seleccionados Ejemplo 6 Análisis para inhibición de ERK: Los compuestos se analizaron para la inhibición de ERK2 mediante un análisis espectrofotométrico de enzima acoplada (Fox et al (1998) Pro t e i n Sci 7, 2249) . En este análisis, una concentración fija de ERK2 activada (10 nM) se incubó con varias concentraciones del compuesto en DMSO (2.5%) durante 10 min. a 30°C en amortiguador HEPES 0.1 M, pH 7.5, que contenia MgCl2 lOmM, fosfoenolpiruvato 2.5 mM, 200 µM de NADH, 150 µg/mL de piruvato cinasa, 50 µg/mL de lactato deshidrogenasa y 200 µM de péptido erktide. La reacción se inició mediante la adición de 65 µM de ATP. Se monitoreó la velocidad de disminución de absorbancia a 340 nM . IC50 se evaluó a partir de los datos de velocidad como una función de la concentración del inhibidor. La Tabla 4 muestra los resultados de la actividad de los compuestos seleccionados de esta invención en el análisis para inhibición de ERK2.

Los números de los compuestos corresponden a los 4 números del compuesto de la Tabla 1. Los compuestos que tienen una actividad designada como "A" proporcionaron un valor KS menor a 1 micromolar; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron un valor KS entre 1 y 5 micromolar; y los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron un valor Kx mayor a 5 micromolar .

Tabla 4. Actividad inhibidora de ERK2 de compuestos seleccionados Ejemplo 7 Análisis de proliferación celular para inhibición de ERK Los compuestos se analizaron para la inhibición de ERK2 mediante un análisis de proliferación celular. En este análisis, se preparó un medio completo mediante la adición de suero bovino fetal al 10% y solución de penici 1 ina /es t rept omicina para el medio RPMI 1640 ( JRH Biosciences) . Las Células de cáncer de colon (linea celular HT-29) se agregaron a cada una de las 84 cavidades de una placad e 96 cavidades a una densidad de sembrado de 10,000 células/cavidad/ 150 µL . Las células se dejaron adherir a la placa mediante incubación a 37 °C durante 2 horas. Se preparó una solución del compuesto de prueba en medio completo mediante dilución en serie para obtener las siguientes concentraciones: 20 µM, 6.7 µM, 2.2 µM, 0.74 µM, 0.25 µM, y 0.08 µ . La solución del compuesto de prueba (50 µL) se agregó a cada una de las 72 cavidades que contienen células. A las 12 cavidades restantes que contienen células, se agregó únicamente medio 4 completo (200 µL) para formar un grupo control para medir la proliferación máxima. A las 12 cavidades vacias restantes se agregó medio completo para formar un grupo control vehículo con el fin de medir la información básica. Las placas se incubaron a 37°C durante 3 dias. Una solución concentrada de 3H-timidina (1 mCi/mL, New England Nuclear, Boston, MA) se diluyó a 20 µCi/mL en medio RPMI luego 20 µL de esta solución se agregaron a cada cavidad. Las placas se incubaron adicionalmente a 37°C durante 8 horas luego se recolectaron y analizaron para ingestión de 3H-timidina utilizando un contador de centelleo para líquidos. Los compuestos seleccionados de esta invención que inhiben la ERK en el análisis de proliferación celular en colon, con un IC50 de menos de 10 µM incluyen: 11-43, 11-48 y 11-45.

Ejemplo 8 Análisis para inhibición de JAK: La inhibición del compuesto de JAK se puede analizar mediante el método descrito por G. R. Brown, et al, Bi oorg . Med . Chem . Let t . 2000, vol. 10, pp 575-579 de la siguiente forma. En placas Maxisorb, recubiertas previamente a 4°C con Poly (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 luego se 4 lavaron con solución salina amortiguada con fosfate al 0.05% y Tween (PBST), se agregaron 2 µM de ATP, MgCl2 5 mM, y una solución del compuesto en DMSO. La reacción se inició con la enzima JAK y las placas se incubaron durante 60 minutos a 30°C. Las placas se lavaron entonces con PBST, se agregaron 100 µL de anticuerpo HRP-conjugado 4G10, y la placa se incubó durante 90 minutos a 30°C. La placa se lavó nuevamente con PBST, se agregaron 100 µL de solución TMB, luego las placas are incubaron durante otros 30 minutos a 30°C. Se agregó ácido sulfúrico (100 µL de 1M) para detener la reacción y la placa se leyó a 450 nM para obtener las densidades ópticas de análisis para determinar los valores IC50- Ejemplo 9 Análisis de inhibición para JNK: Los compuestos se seleccionaron de la siguiente manera por su capacidad para inhibir la JNK utilizando un análisis espectrofotométrico de enzima acoplada. A una solución concentrada de amortiguador para análisis que contenia amortiguador HEPES 0.1 M (pH 7.5), MgCl2 10 m , fos foenolpiruva t o 2.5 mM , 200 µM de NADH, 150 µg/mL de piruvato cinasa, 50 µg/mL de lactato deshidrogenasa, y péptido receptor EGF 200 µM (con la secuencia KRELVEPLTPSGEAPNQALLR) se agregaron 4 varias concentraciones del compuesto en DMSO y una concentración fija (10 nM) de JNK activada. La mezcla resultante se incubó a 30°C durante 10 minutos, luego la reacción se inició mediante la adición de 10 µM de ATP. La disminución de absorbancia a 340 nM a 30°C se monitoreó como una función de tiempo y los datos resultantes se ajustaron para un modelo cinético de inhibición competitiva para determinar el KS . La Tabla 5 muestra los resultados de la actividad de los compuestos seleccionados de esta invención en el análisis de inhibición para JNK. Los números de los compuestos que tienen una actividad designada como "A" proporcionaron un valor K± mejor a 1 micromolar; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron un valor Ki entre 1 y 5 micromolar; y los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron un valor Kx mayor a 5 micromolar.

Tabla 5. Actividad inhibidora para JNK de compuestos seleccionados Ejemplo 10 Análisis para inhibición de Aurora: Los compuestos se seleccionaron de la siguiente forma para su capacidad de inhibir Aurora utilizando un análisis de enzima acoplada estándar. A una solución amortiguadora concentrada para análisis que contenia HEPES 7.5 0.1M, MgCl2 10 mM, NaCl 25 mM, fosfoenolpiruvato 2.5 mM, 300 µM de NADH, 30 µg/mL de piruvato cinasa, 10 µg/mL de lactato deshidrogenasa, 40 µM de ATP, 800 µM de péptido (LRRASLG, American Peptide, Sunnyvale, CA) se agregaron 30 µM de la solución del compuesto en DMSO y la mezcla resultante se incubó a 30°C durante 10 min. La reacción se inició mediante la adición de 10 µL de Aurora 70 nM y DTT 1 mM . Las velocidades de reacción se obtuvieron al monitorear la absorbancia a 340 nM durante 5 minutos de tiempo de lectura a 30°C utilizando un lector de placa BioRad Ultramark (Hercules, CA) . El IC50 se determinó a partir de los datos de velocidad como una función de la concentración inhibidora. La Tabla 6 muestra los resultados de la actividad de los compuestos seleccionados de esta 4 invención en el análisis para inhibición de Aurora2. Los números de compuestos corresponden a los números de compuesto en la Tabla 1. Los compuestos que tienen una actividad designada como "A" proporcionaron un valor IC50 menor a 5 micromolar; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron un valor IC50 entre 5 y 10 micromolar; y los compuestos que tiene una actividad designada como "C" proporcionaron un valor IC50 mayor a 10 micromolar.

Tabla 6. Actividad inhibidora para Aurora2 de compuestos seleccionados Ejemplo 11 Análisis para inhibición de GSK-3: Los compuestos se seleccionaron de la siguiente forma por su capacidad para inhibir la Glicógeno Sintasa Cinasa 3 (GSK-3) utilizando un análisis de enzima acoplada estándar (Fox et al (1998) Pro t e i n Sci 7, 2249) . A una solución concentrada amortiguada para análisis que contenia HEPES 7.5 0.1M, MgCl2 10 mM , NaCl 25 mM, fosfoenolpiruvato 2.5 m , NADH 300 µM, DTT 1 mM, 30 µg/mL de piruvato cinasa, 10 µg/mL de lactato deshidrogenasa, 300 µM de péptido ( HSS PHQp-SEDEEE , American Peptide, Sunnyvale, CA), y GSK-3 60 nM, se agregaron 30 µM de solución del compuesto en DMSO y la mezcla resultante se incubó a 30°C durante 5 min. La reacción se inició por la adición de 10 µM de ATP. Las velocidades de reacción se obtuvieron mediante monitoreo de absorbancia a 340 nM durante unos 5 minutos de tiempo de lectura a 30CC utilizando un lector de placa Molecular • Devices (Sunnyvale, CA) . El IC40 se determinó a partir de los datos de velocidad como una función de la concentración 4 inhibidora . La Tabla 7 muestra los resultados de la actividad de los compuestos seleccionados de esta invención en el análisis para inhibición de GSK-3. Los números del compuesto corresponden a los números del compuesto en la Tabla 1. Los compuestos que tienen una actividad designada como "A" proporcionaron un valor IC50 menor a 10 micromolar; los compuestos que tiene una actividad designada como "B" proporcionaron un valor IC50 entre 10 y 20 micromolar; y los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron un valor IC50 superior a 20 micromolar.

Tabla 7 Actividad inhibidora de GSK-3 de compuestos seleccionados Ejemplo 12 Análisis para inhibición de KDR: Los compuestos se seleccionaron por su capacidad para inhibir KDR utilizando un análisis de enzima acoplada estándar (Fox et al., Protein Sci., (1998) 7, 2249) . Los análisis se llevaron a cabo en una mezcla de HEPES 7.5 200 mM, MgCl2 10 mM, NaCl 25 mM, DTT lmM y DMSO al 1.5%. Las concentraciones de substrato final en el análisis fueron 300 µM ATP (Sigma Chemicals) y 10 µM poly E4Y (Sigma) . Los análisis se llevaron a cabo a 37°C y KDR 30 nM. Las concentraciones finales de los componentes del sistema de enzima acoplada fueron fos foenolpiruva to 2.5 mM, NADH 200 µM, 30 µg/ML piruvato cinasa y 10 µg/ml de lactato deshidrogenasa. Se preparó una solución amortiguadora concentrada para análisis que contenia todos los reactivos listados anteriormente, con la excepción de ATP y el compuesto para prueba de interés. 177 µL de la solución concentrada se colocaron en una placa de 96 cavidades seguida por la adición de 3 µl de DMSO 2 mM concentrado que contiene el compuesto de prueba (concentración de compuesto final 30 µM) . La placa se preincubó durante aproximadamente 10 minutos a 37°C y la reacción se inició mediante la adición de µl de ATP (concentración final 300 µM) . Las * velocidades de reacción se obtuvieron utilizando un lector de placa Molecular Devices (Sunnyvale, CA) durante 5 minutos de tiempo de lectura a 37°C. Los compuestos que mostraron más del 50% de inhibición contra cavidades estándar que contenían la mezcla para análisis y DMSO sin el compuesto de prueba se titularon para determinar los valores IC o- Los compuestos seleccionados de esta invención que inhiben KDR a concentración 2µM en el análisis anterior, con un porcentaje de inhibición mayor al 40%, incluyen: 11-43, 11-48, 11-304, y II-305.

Ejemplo 13 Análisis de inhibición para AKT: Los compuestos se seleccionaron por su capacidad para inhibir AKT utilizando un análisis de enzima acoplada estándar (Fox et al., Protein Sci., (1998) 7, 2249) . Los análisis se llevaron a cabo en una mezcla de HEPES 7.5 100 mM , MgCl2 10 mM , NaCl 25 mM, DTT 1 mM y DMSO al 1.5%. Las concentraciones de substrato final en el análisis fueron 170 µM de ATP (Sigma Chemicals) y 200 µM de péptido (RPRAATF, American Peptide, Sunnyvale, CA) . Los análisis se llevaron a cabo a 30°C y AKT 45nM. Las 4 concentraciones finales de los componentes del sistema de enzima acoplada fueron fos foenolpiruvato 2.5 mM, NADH 300 pM, 30 µg/ML de piruvato cinasa y 10 µg/ml de lactato deshidrogenasa. Se preparó una solución concentrada amortiguada para análisis que contenia todos los reactivos listados anteriormente, con excepción de AKT, DTT, y el compuesto para prueba de interés. 56 µl de la solución concentrada se colocaron en una placa de 384 cavidades seguida por la adición de 1 µl de DMSO 2 mM concentrado que contenia el compuesto de prueba (concentración de compuesto final 30 µM) . La placa se preincubó durante aproximadamente 10 minutos a 30CC y la reacción se inició mediante la adición de 10 µl de enzima (concentración final 45 nM) y DTT 1 m . Las velocidades de reacción se obtuvieron utilizando un lector de placa BioRad Ultramark (Hercules, CA) durante un tiempo de lectura de 5 minutos a 30°C. Los compuestos que mostraron más del 50% de inhibición contra cavidades estándar que contenían la mezcla para análisis y DMSO sin el compuesto para prueba se titularon para determinar los valores IC50. Los compuestos seleccionados de esta 4 invención que inhiben AKT incluyen: 11-89, 11-94, y 11-305.

Mientras que se han descrito varias de las modalidades de esta invención, es evidente que los ejemplos básicos se pueden alterar para proporcionar otras modalidades que utilizan los compuestos y métodos de esta invención. Por lo tanto, se apreciará que el alcance de esta invención se definirá por las reivindicaciones anexas en lugar de las modalidades especificas que se hayan representado a manera de ejemplo.

Claims

REIVINDICACIONES Un compuesto de la fórmula I o un derivado o pro fármaco farmacéuticamente aceptable de la misma, en donde: R1 se selecciona de R, halógeno, N ( R8 ) 2 , OR, NRCOR, NRCON(R8)2, CON(R8)2, S02R, NRS02R, o S02N(R8)2; T se selecciona de un enlace de valencia o un grupo enlazante; cada R se selecciona independientemente de hidrógeno o un grupo alifático sustituido opcionalmente que tiene de uno a seis átomos de carbono; R2 se selecciona de hidrógeno, CN, halógeno, arilo, aralquilo, heteroarilo, heterociclilo, un grupo de cadena alifática aciclico sustituido opcionalmente que tiene de uno a seis átomos de carbono, o un grupo alifático cíclico sustituido opáionalmente que tiene de cuatro a diez átomos de carbono; R- se selecciona de R, OH OR, N (Rl halógeno, o CN; Q es un enlace de valencia, J, o una cadena de alquilideno C?-6 sustituida opcionalmente en donde hasta dos átomos de carbono no adyacentes de la cadena de alquilideno se reemplazan cada uno opcional e independientemente por J; J se selecciona de -C(=0)-, -C02-, -C(0)C(0)-, -NRCONR8-, -N(R)N(R8)-, -C(=0)NR8-, -NRC(=0)-, -O-, -S-, -SO-, -S02-, -N(R)0-, -ON(R8)-, -OC (=0) N (R8) -, -N(R)COO-, -S02N(R8)-, -N(R)S02-, o -N(R8) -; R4 se selecciona de -R8, -R5, -NH2, -NHR5, -N(R5)2, o -NR5(CH2)yN(R5)2; cada R5 se selecciona independientemente de de R6, R7, - (CH2)yCH(R6) (R7) , -(CH2)yR6, - ( CH2 ) yCH ( R6 ) 2 , - (CH2)yCH(R7)2, o - (CH2)yR7; y es 0 - 6 ; cada R6 es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado independientemente de un grupo arilo, aralquilo, aralcoxi, heteroarilo, heteroarilalquilo, het eroari lalcoxi , heterociclilo, het erocicl i lalqui lo , 4 o heterociclilalcoxi, alifático; cada R7 se selecciona independientemente de de un hidroxialquilo, alcoxialquilo, ariloxialquilo, o alcoxicarbonilo sustituido opcionalmente; cada R8 se selecciona independientemente de de R, o dos R8 en el mismo nitrógeno tomados juntos con el nitrógeno forman opcionalmente un anillo heterociclico saturado o insaturado de cuatro a ocho miembros que tiene de uno a tres heteroátomos; y cada anillo de nitrógeno que se puede sustituir se sustituye opcionalmente por R, NR2, COR, C02(alquilo Ci-Cß sustituido opcionalmente), S02(alquilo C?-C6 sustituido opcionalmente), C0NR2, y S02NR2; con la condición de que QR4 sea distinto de CON(CH3)2 cuando R1 y R3 sean cada uno hidrógeno y cuando TR2 sea un anillo de fenilo sin sustituir unido a la posición 4 del anillo de pirazol.
2. El compuesto según la reivindicación 1, que tiene la fórmula II-A o un derivado o pro fármaco farmacéuticamente aceptable de la misma.
3. The compuesto según la reivindicación 2 que tiene una o más de las siguientes características: (a) Q es -CO-, -C02-, o -CONH-; (b) T es un enlace de valencia; R1 es hidrógeno o NHR; (d) R2 es un anillo de arilo sustituido opcionalmente, (c) R3 es hidrógeno; (e) R4 se selecciona de R5, -NHR5, tN(R5)2, -NR5R6, -NHCHR5R6, o -NHCH2R5; o (f) R5 es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado del grupo arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo, het erocic 1 ilalqui lo , (CH2)yR6, (CH2)yR7, o (CH2) yCH (R6) (R7) .
4. El compuesto según la reivindicación 3 que tiene la fórmula II-A o 4 un derivado o pro fármaco farmacéuticamente aceptable de la misma.
5. El compuesto según la reivindicación 4 que tiene las siguientes características: (a) T es un enlace de valencia; (b) R2 es un anillo de arilo sustituido opcionalmente; (c) R4 se selecciona de R , -NIIR5, -N(R5)2, -NR5R6, -NHCHR5R6, o -NHCH2R5; (d) R5 es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado del grupo arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroari.lal quilo, heterociclilo, hete ocicli] alquilo, CH2) yR CH- ,R' (CH2) yCH (R6) (R7) .
6. El compuesto según la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de aquellos listados en la Tabla 1, el compuesto será distinto del compuesto número 1.
7. El compuesto según la reivindicación 1, que tiene la fórmula: II-B o un derivado o pro fármaco farmacéuticamente aceptable de la misma.
8. Los compuesto según la reivindicación 7, en donde el compuesto tiene una o más de las siguientes características: (a) T es un enlace de valencia; (b) R2 es un anillo de arilo sustituido opcionalmente; (c) R4 se selecciona de R5, -NHR5, -N(R )2, -NR ,53nR6b, -NHCHR ,53,RB, o -NHCH2RD; o (d) R° es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado del grupo arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo, het erociclilalqui lo , (CH2)yR6, (CH2)yR7, o (CH2) yCH (R6) (R7) .
9. El compuesto según la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de aquellos listados en la Tabla 2.
10. Una composición que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en una cantidad suficiente para inhibir de manera detectable la actividad de la proteina cinasa, la 4 proteina cinasa se selecciona de una o más de ERK, JAK, JNK, Aurora, GSK, KDR, AKT, o una proteina cinasa relacionada con las mismas; y un portador farmacéuticamente aceptable.
11. La composición según la reivindicación 10, en donde el compuesto se prepara de una forma farmacéuticamente aceptable para la administración a un paciente .
12. La composición según la reivindicación 11, que comprende además un agente terapéutico, ya sea como parte de una forma de dosificación múltiple junto con el compuesto o como una forma de dosificación por separado.
13. Un método para inhibir la actividad de la proteina cinasa en una muestra biológica, en donde la proteina cinasa se selecciona de ERK, JAK, JNK, Aurora, GSK, KDR, AKT, o una proteina cinasa relacionada con las mismas, que comprende el paso de poner en contacto la muestra con un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
14. Un método para tratar un estado de enfermedad en el que interviene la proteina en un paciente, en donde la proteina cinasa se selecciona de una o más de ERK, JAK, JNK, Aurora, KDR, AKT, o una proteina cinasa relacionada con las mismas, que comprende el paso de administrar al paciente una composición según la reivindicación 11.
15. El método según la reivindicación 14, que comprende el paso adicional de administrar al paciente un agente terapéutico ya sea como parte de una forma de dosificación múltiple junto con el compuesto o como una forma de dosificación por separado .
16. Un método para tratar un estado de enfermedad en un paciente, en donde el estado de enfermedad se selecciona de cáncer, accidente cerebral vascular, diabetes, hepat omegal ia , enfermedad cardiovascular, enfermedad Alzheimer, fibrosis cistica, enfermedad viral, enfermedades autoinmunes, aterosclerosis, restenosis, psoriasis, trastornos alérgicos, inflamación, trastornos neurológicos, una enfermedad relacionada con las hormonas, condiciones asociadas con el trasplante de 4 órganos, trastornos de inmunodeficiencia, trastornos óseos destructivos, trastornos prol i fera t ivos , enfermedades infecciosas, condiciones asociadas con 10! la muerte celular, agregación de plaquetas inducida por trombina, leucemia mielógena crónica (CML), enfermedad hepáticas, condiciones inmunes patológicas que incluyen la activación de la célula T, o trastornos CNS, que comprende el paso de administrar al paciente una composición según la reivindicación 10.
17. El método según la reivindicación 16, en donde el estado de enfermedad es cáncer.
18. The método según la reivindicación 17, en donde el estado de enfermedad es un cáncer seleccionado de mama; ovárico; cervical; prostético; testicular, del tracto genitourinario; esofágico; laríngeo, de glioblastoma; de neuroblastoma; estomacal; de la piel, querat oacant orna ; pulmonar, carcinoma epidermoide, carcinoma de célula grande, carcinoma de célula pequeña, adenocarcinoma pulmonar; óseo; de colon, adenoma; pancreático, adenocarcinoma; de la tiroides, carcinoma folicular, carcinoma no diferenciado, carcinoma papilar; seminoma; melanoma; 4 sarcoma; vesicular carcinoma; carcinoma hepático y de pasajes biliares; carcinoma renal; trastornos mieloideos; trastornos linfoideos, de Hodgkin, de células pilosas; de la cavidad bucal y la faringe (oral), de labios, de lengua, boca, faringe; intestino delgado; colon-recto, del intestino grueso, rectal; cerebral y del sistema nervioso central; o leucemia .
19. El método según cualquiera de las reivindicaciones 17 ó 18 que comprende el paso adicional de administrar al paciente un agente quimioterapéutico ya sea como parte de una forma de dosificación múltiple junto con el compuesto o como una forma de dosificación por separado.
20. El método según la reivindicación 16 en donde el estado de enfermedad es una enfermedad cardiovascular .
21. The método según la reivindicación 20, en donde el estado de enfermedad es una enfermedad cardiovascular seleccionada de restenosis, cardiomegal ia , arterosclerosis, infarto al miocardio, o deficiencia cardiaca congestiva.
22. El método según cualquiera de las reivindicaciones 20 ó 21, que comprende el paso adicional de administrar al paciente un agente terapéutico para tratar la enfermedad cardiovascular ya sea como parte de una forma de dosificación múltiple junto con el compuesto o como una forma de dosificación por separado.
23. Una composición para recubrir un dispositivo de implante que comprende un compuesto según la reivindicación 1 y un portador adecuado para recubrir el dispositivo de implante.
24. Un dispositivo de implante recubierto con una composición según la reivindicación 23.