MX2013004047A - Proteina antimicrobiana. - Google Patents

Proteina antimicrobiana.

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Abstract

Los inventores proveen una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para usarse en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por terapia o profilaxis, tal como para usarse en un método de tratar o prevenir una infección en o sobre un sujeto por un microorganismo. También se provee el uso de una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para matar, o inhibir el crecimiento de, un microorganismo que es patógeno a un humano o un animal en un sitio que no está sobre o en el cuerpo humano o animal.

Description

PROTEÍNA ANTI ICROBIANA CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere al campo de agentes antimicrobianos, y en especial aquellos que se enfocan en patógenos humanos/animales.
INTRODUCCIÓN Infecciones bacterianas Las bacterias son, por mucho, los agentes etiológicos más comunes de infección humana. Más de un tercio de la población mundial probablemente está infectada por patógenos bacterianos, y dos millones fatalidades ocurren por año de infecciones bacterianas. De acuerdo con el Centro para Control de Enfermedades (CDC) y la Organización Mundial de la Salud (WHO (OMS)), las siguientes ¦infecciones bacterianas están incluidas en la lista de las enfermedades infecciosas más comunes en todo el mundo hoy en día: Cólera: ésta es una enfermedad extendida en su mayoría a través de agua para beber contaminada y condiciones insalubres. Es endémica en el subcontinente de la India, Rusia, y África del sub-Sahara. Es una infección aguda del intestino con la bacteria Vibrio cholerae. El síntoma principal es diarrea copiosa. Entre 5% y 10% de aquellos infectados con la enfermedad desarrollará síntomas severos, los cuales incluyen vómito y calambres en las piernas. En esta forma severa, el cólera puede causar muerte por deshidratación. Un estimado de 200,000 casos son reportados a la OMS anualmente.
Meningitis: a menudo conocida como meningitis espinal, que es una infección de la espina dorsal. Usualmente es el resultado de una infección viral o bacteriana. La meningitis bacteriana es más severa que la meningitis viral y puede causar daño cerebral, pérdida de oído, y discapacidades de aprendizaje. Puede ser causada, por ejemplo, por Haemophilus influenzae tipo b, Neisseria meningitidis, o Streptococcus pneumoniae. Un estimado de 1.2 millones de casos de meningitis bacteriana ocurren cada año, sobre una décima parte de los cuales son fatales. Los síntomas incluyen dolor de cabeza severo, fiebre, nausea, vómito, letargo, delirio, fotofobia y un cuello rígido.
Neumonía: ésta tiene muchas causas posibles, pero usualmente es una infección de bacteria de Streptococcus o micoplasma. Estas bacterias pueden vivir en el cuerpo humano sin causar infección durante años, y sólo surgen cuando otra enfermedad ha reducido la inmunidad a la enfermedad. Streptococcus pneumoniae causa neumonía de estreptococo, la clase más común, que es más severa que neumonía de micoplasma. S. pneumoniae es responsable por más de 100,000 hospitalizaciones para neumonía anualmente, así como 6 millones de casos de otitis medio y más de 60,000 casos de enfermedades invasivas tal como meningitis.
Shigellosis: esta infección causa un estimado de 60,000 muertes a nivel mundial cada año. Es más común en países en vías de desarrollo con salubridad pobre. La bacteria de Shigellia causa disentería bacteriana, o shigellosis. Los síntomas incluyen diarrea con heces con sangre, vómito y calambres en el estómago.
Amigdalitis: ésta es causada por bacteria de Streptococcus. Varios millones de casos de amigdalitis ocurren cada año. Los síntomas incluyen una garganta irritada, fiebre, dolor de cabeza, fatiga y nausea.
Tuberculosis: esto causa casi 2 millones de muertes cada año, y la OMS estima que casi mil millones de personas serán infectadas entre 2000 y 2020 si no se adoptan procedimientos más efectivos. La bacteria de TB (por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis) muy a menudo se encuentra en los pulmones, en donde causa dolor en el pecho y una tos mala que produce flemas con sangre. Otros síntomas incluyen fatiga, pérdida de peso, pérdida de apetito, escalofríos, fiebre y sudoración nocturna.
Tifoidea: la fiebre de tifoidea es causada por la bacteria Salmonella typhi, y causa un estimado de 600,000 muertes anualmente, de 12-17 millones de casos. Usualmente se extiende a través de alimentos infectados o agua. Los síntomas incluyen una fiebre repentina y sostenida, dolor de cabeza severo, nausea, pérdida de apetito severa, constipación y a veces diarrea.
Sin embargo, los números de casos precisos son difíciles de determinar, en especial porque muchos de estos casos son endémicos para países en vías de desarrollo, en donde mucha gente no tiene acceso a atención médica moderna. Aproximadamente la mitad de todas las muertes causadas por enfermedades infecciosas cada año se puede atribuir justo a tres enfermedades: tuberculosis, malaria, y SIDA. Juntas, estas enfermedades causan más de 300 millones de enfermedades y más de 5 millones de muertes cada año.
La era moderna de uso de antibiótico comenzó en el siglo diecinueve principios del veinte, con la identificación del ingrediente activo penicilina, producido por Pen ¡cillium notatum, que tuvieron actividad antimicrobiana potente. Sin embargo, antes de 1955, su venta no fue controlada y excesiva y el uso no controlado condujo a la aparición de bacteria resistente. La resistencia a antibiótico se convirtió en un problema principal, y las epidemias de infecciones resistentes a estafilococo comenzaron a surgir en hospitales.
El comienzo del siglo veinte también vio el desarrollo de antibióticos tales como sulfonamidas, estreptomicina, neomicina, cloranfenicol, cefalosporinas y tetraciclinas. Muchos de estos compuestos todavía están en uso hoy en día aunque todos han enfrentado el reto del desarrollo de resistencia y algunos han enfrentado temas de toxicidad. Por ejemplo, estreptomicina puede causar daño a^l riñon y sordera y cloranfenicol puede causar efectos laterales serios (por ejemplo, trastornos de sangre serios, incluyendo anemia y leucemia).
Más investigación ocurrió durante los 1960's, lo que condujo al desarrollo de la segunda generación de antibióticos. Entre estos estuvo meticilina, un derivado semi-sintético de penicilina producida específicamente para superar el problema de resistencia a penicilina. Meticilina fue aclamada como un gran descubrimiento en la lucha contra la resistencia bacteriana para penicilina, pero, desafortunadamente, ése no fue el caso, y ahora hay bacteria que es resistente a meticilina. Ampicilina también es un derivado de penicilina. Se desarrolló para ampliar el rango de infecciones que la penicilina podría tratar y ahora ha reemplazado penicilina a un grado grande. A menudo es la primer elección en el tratamiento de un rango entero de infecciones, incluyendo infecciones respiratorias y del tracto urinario. Amoxicilina es otro derivado de penicilina ampliamente usado. Como ampicilina, tiene un rango amplio de actividades. Gentamicina está en la misma familia de antibióticos como estreptomicina (el fármaco anti-TB descubierto en 1943). En general se reserva para infecciones serias, ya que puede tener efectos laterales tóxicos severos en los oídos y ríñones.
Recientemente, una familia nueva de antibióticos llamada quinolonas, también referidas como fluoroquinolonas, ha sido desarrollada por laboratorios farmacéuticos. Además de ser efectivos contra un rango amplio de bacteria, estos antibióticos pueden alcanzar una concentración alta en el torrente sanguíneo cuando son tomados oralmente. Esto significa que muchas más infecciones que una vez pudieron haber requerido una estancia en el hospital, ahora pueden ser tratadas en casa. Las fluoroquinolonas sólo se usan para pacientes que están gravemente enfermos y/o cuando se requieren cursos largos de antibióticos (semanas a meses).
A pesar del desarrollo de dichos compuestos de segunda generación, la aparición sin cesar de resistencia sigue siendo un problema. Típicamente, la resistencia sigue al uso, y en especial uso extendido o mal uso de un fármaco, que finalmente conducirá a su pérdida de efectividad para tratar una enfermedad humana. El uso continuo de agentes antimicrobianos aumenta la presión de selección favoreciendo la aparición, multiplicación y extensión de cepas resistentes. El uso inapropiado y no controlado de agentes antimicrobianos contribuye a esto, incluyendo recetar sin control, administración de dosis subóptimas, duración insuficiente de tratamientos, mal diagnóstico que conduce a elección inapropiada de fármaco, y al uso (y, específicamente, uso excesivo) de productos domésticos antibacterianos en hogares, escuelas, etc.
En algunos casos, la resistencia aparece con rapidez (por ejemplo, resistencia a Staphylococcus aureus para oxalina fue desarrollada en sólo pocos años), pero en otros puede ser más tardado (por ejemplo, Enterococcus faecium tardó casi 30 años de desarrollar resistencia a vancomicina). Las razones por las diferencias en marcos de tiempo no son claras y probablemente multifactoriales. Sin embargo, la habilidad de la bacteria de evadir la acción asesina de agentes antimicrobianos claramente ha impedido la habilidad de tratar pacientes individuales y controlar brotes grandes de enfermedades infecciosas. Por ejemplo, la OMS estima que hay casi la mitad de un millón de casos nuevos de tuberculosis resistente a multifármaco (MDR-TB) al año, lo que es aproximadamente 5% de nueve millones de casos nuevos de TB de todos los tipos.
Algunas cepas de Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) tienen una facilidad particular para transmisión nosocomial. En algunos hospitales en los Estados Unidos, más del 70% del S. aureus aislado de pacientes son MRSA, y estas cepas a menudo son resistentes a todos los fármacos autorizados excepto vancomicina, linezolid, daptomicina y tigeciclina. Recientemente, las cepas de S. aureus completamente resistentes a vancomicina también se aislaron de pacientes en los Estados Unidos además complicando la terapia. MRSA se ha hecho altamente endémico en muchos hospitales, y una vez introducido en un hospital, este organismo es muy difícil de erradicar.
Los problemas con erradicación también son ciertos para cepas resistentes a vancomicina de E. faecium (VRE), que a menudo son resistentes a todos los demás fármacos clínicamente aprobados. La resistencia a vancomicina es enterococos a menudo es plásmido mediado y puede resultar de varios determinantes únicos resistentes. La combinación de resistencia a penicilina y glicopéptido en E. faecium causa infecciones que no se pueden tratar de manera efectiva. Por fortuna, la mayoría de VRE causan colonización y no infección. Cuando ocurre infección, quizá no pueda ser tratable con antibióticos. La resistencia a quinolonas puede evolucionar con rapidez, incluso durante el curso de un tratamiento.
En el presente, algunas bacterias han logrado el estado de "bacterias asesinas", como Staphylococcus aureus resistente a meticilina, enterococos resistente a vancomicina, y Streptococcus pneumonía resistente a quinolona. Para estos patógenos hay pocos o ningún antibiótico disponible para terapia. Pero, de manera sorprendente, sólo pocas clases de antibióticos novedosos han sido introducidos en los últimos 40 años, y todo desde 1999, incluyendo la combinación de esireptogramina quinupristina/dalfopristina (Synercid), el linezolid de oxazolidinona, y la daptomicina de lipopéptido.
Hay una necesidad en crecimiento por antibióticos novedosos para tratar enfermedades inducidas por patógenos bacterianos, en particular debido al tema de resistencia antimicrobiano. Como se mencionó previamente, muchos patógenos están desarrollando resistencia a antibióticos potentes usados para tratamiento. De manera alarmante, a menudo la resistencia no se restringe a un solo agente sino puede involucrar resistencia a múltiples antibióticos. La búsqueda por fármacos nuevos y más efectivos continúa hoy en día, en especial para antibióticos de espectro dirigido para evadir mecanismos resistentes a multifármaco. Sin embargo, el ritmo de esta búsqueda ha bajado de manera notable, ya que ahora es mucho más difícil para compañías farmacéuticas obtener aprobación para fármacos nuevos. Además, el costo involucrado y el retraso de tiempo entre la identificación de un antibiótico novedoso en el laboratorio y la aprobación para producirlo comercialmente son tan grandes que ha llevado a algunas compañías a abandonar el mercado por completo.
Infecciones fúngicas La incidencia de infecciones fúngicas ha aumentado en las últimas tres décadas como una consecuencia, en parte, del número aumentado de pacientes que tienen un sistema inmune disfuncional. Esto es un resultado directo de avances principales en medicina en años recientes, en particular en terapia de cáncer, resultando en un número aumentado de pacientes inmunosuprimidos. Se han propuesto varias otras razones para el aumento de infecciones fúngicas, incluyendo nutrición parenteral y varios catéteres venosos, tratamiento con antibiótico de espectro amplio, embarazo, pacientes con diabetes no controlada, recipientes de trasplante de órgano sólido, pacientes con SIDA, pacientes con cáncer que están pasando por quimioterapia citotóxica, pacientes con quemaduras o neutropenia, y patologías gastrointestinales.
Las infecciones fúngicas más serias son las infecciones fúngicas invasivas ( I F I s ) (por ejemplo, infección en el torrente sanguíneo) que se asocian con mortalidad alta. Las especies Candida son los agentes causativos más frecuentes de IFIs con una velocidad de mortalidad promedio de 30%. Candida albicans es responsable por aproximadamente 50% de los casos de infección invasiva por Candida, pero ha habido un aumento estable en las frecuencias relativas de especies no albicans, a saber de Candida glabrata, Candida parapsilosis, Candida tropicalis y Candida krusei. Las especies Aspergillus son los mohos invasivos más comúnmente aislados, con una predominancia de la especie Aspargillus fumigatus. Como infecciones por Candida, aspergillosis invasivo usualmente se asocia con pacientes críticamente enfermos, pero su velocidad de mortalidad es mucho mayor, no obstante dependiente de la infección individual específica considerada, por ejemplo, 85% o más para enfermedad diseminada o del sistema nervioso central, y 60% para enfermedad pulmonar difusa.
La prevalencia y velocidad de mortalidad de IFIs han aumentado en las últimas tres décadas. Los datos de Estados Unidos muestran que en 1980 este grupo de enfermedades fue responsable por 828 muertes y fue la décima causa más prominente de infección fatal. En 1997, la misma serie de datos mostró que el número de muertes ha subido a 2370 y a la séptima causa más prevalente de infección terminal. Los datos recientes muestran que Candida se ha hecho más prevalente que las especies Escherichia coli y Pseudomonas y ahora es la cuarta infección fatal más común en los Estados Unidos.
Las IFIs por Candida también están aumentando en el marco nosocomial, y se anticipa otro aumento conforme sigan aumentando los factores de riesgo de estas infecciones. Las especies Candida justifican 8 a 10% de todas las IFIs nosocomiales y ocurren a una velocidad de 6 a 23 infecciones para 100,000 personas anualmente en los Estados Unidos. La preocupación principal con candidiasis invasiva no sólo es su velocidad de mortalidad alta, sino también la longitud excesiva de estancia en hospital para pacientes infectados, de 3 a 10 días, dando un costo estimado global atribuible a candidemia de aproximadamente mil millones de dólares por año en los Estados Unidos. Un estudio recientemente publicado sobre la población portuguesa mostró que hay una incidencia de fungemia nosocomial de 2.7 por 1,000 admisiones a hospital, con una velocidad de mortalidad de 39.3%. De acuerdo con otro estudio reciente publicado sobre la incidencia de IFIs en Europa, este número parece estar más próximo a las incidencias encontradas en otros países europeos, pero es considerablemente menor que aquél encontrado para la población de Estados Unidos. Otro reporte reciente mostró que en Escocia la incidencia de candidemia es 4.8 casos por 100,000 población por año.
Desde finales de los 1950s, el estándar de cuidado para tratamiento de vida amenazando infección fúngica ha sido anfotericina B. Este compuesto dirige y se une a esteróles en la membrana celular fúngica para crear poros iónicos, resultando en pérdida de potencial de membrana y colapso posterior. Aunque permanece el agente fungicida de espectro más amplio disponible, su alta toxicidad y requerimiento para administración parenteral ha limitado su uso.
Los 1990s vieron la introducción de formulaciones lípidas de anfotericina B, así como los triazoles, fluconazol y itraconazoL Los < triazoles actúan por síntesis de ergosterol a través de la inhibición de lanosterol 14a-desmetilasa dependiente de CYP-450, lo que interfiere con crecimiento celular, finalmente conduciendo a muerte celular. Aunque estos agentes exhibieron ventajas claras sobre anfotericina B, se limitaron por formulación, espectro de actividad y/o desarrollo de resistencia.
Desde 2000, se han desarrollado agentes antifúngicos nuevos para superar las limitaciones fuertes de los fármacos pre-existentes, tales como triazoles de espectro extendido (voriconazol y posaconazol), y equinocandinas (caspofurigin.a, micafungina y anidulafungina). Las equinocandinas inhiben la síntesis de (3-1, 3-D-glucanos, conduciendo a desestabilización de la pared celular fúngica, lisis celular y muerte celular. Están activas, in vitro, contra especies Candida y Aspergillus, pero no contra un rango amplio de otros hongos patógenos emergentes. Incluso entre estos agentes nuevos, todavía hay limitaciones como efectos de fármaco adversos (en especial para voriconazol), interacciones de fármaco-fármaco asociadas con triazoles, y falta de preparaciones alternativas (por ejemplo, preparaciones intravenosas son carentes para posaconazol y preparaciones orales son carentes para equinocandinas).
Los antifúngicos ahora disponibles también son ineficientes | para la erradicación profiláctica de colonización de Candida albicans. De hecho, esta levadura exhibe la capacidad por crecimiento de biopelícula, que exhibe tolerancia intrínseca aumentada a antifúngicos tales como azoles, poüenos y 5-fluorocitosina. Por esta razón, candidiasis a menudo se asocia con dispositivos médicos permanentes (por ejemplo, implantes dentales, válvulas de corazón, injertos de bypass vasculares, lentes oculares, articulaciones artificiales, y derivaciones del sistema nervioso central), que pueden actuar como sustratos para crecimiento de biopelícula. En un estudio de multicentro de 427 pacientes consecutivos con candidemia, la velocidad de mortalidad para pacientes con candidemia relacionada con catéter se descubrió ser 41%. Por lo tanto, a pesar del desarrollo de antifúngicos nuevos, la velocidad de mortalidad de infección fúngica nosocomial sigue siendo inaceptablemente alta. Además, también hay una lista creciente de patógenos fúngicos nuevos y emergentes, incluyendo especies no albican de especies Candida y no fumigatus de Aspergillus, que por lo general son difíciles de diagnosticar y tratar, haciéndolas responsables de velocidades mayores de mortalidad.
Entre los objetivos de la presente invención está intentar una solución a estos problemas, y específicamente, por ejemplo, proveer un agente antimicrobiano alternativo con actividad de espectro potente y amplio contra patógenos humanos/animales al mismo tiempo teniendo baja toxicidad.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los inventores de manera sorprendente han descubierto que el polipéptido Blad de Lupinus muestra actividad antimicrobiana potente contra un número grande de diversos organismos bacterianos y fúngicos que son patógenos a humanos o animales. Los inventores también han descubierto que el polipéptido Blad es no tóxico a humanos, por tanto haciendo a Blad un compuesto excelente para usarse como antimicrobiano contra patógenos humanos y animales en un rango de ajustes.
Por consiguiente, los inventores proveen una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para usarse en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por terapia o profilaxis. Los inventores también proveen dicha composición para usarse en un método de tratar o prevenir una infección en o sobre un sujeto por un microorganismo. En modalidades preferidas, la composición comprende además un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable y/o un - agente quelante. Preferiblemente, la composición se usa en dicho método en donde el sujeto tiene un sistema inmune comprometido o está críticamente enfermo.
Los inventores también proveen el uso de una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano quj comprende Blad o un variante activo del mismo para matar, o inhibir el crecimiento de, un microorganismo que es patógeno a un humano o un animal en un sitio que no está sobre o en el cuerpo humano o animal. Preferiblemente dicha composioión se usa para desinfectar, con respecto a un microorganismo patógeno humano o animal, un artículo que debe ser ingerido por, o colocado directamente sobre o en, un humano o animal, o una superficie que está en necesidad del mismo, de preferencia en donde dicho artículo es un alimento o un dispositivo o instrumento médico o en donde dicha superficie se ubica dentro de un medio ambiente en donde se sitúa: (a) examinación médica, diagnosis o tratamiento debe ocurrir; (b) un alimento se debe preparar o de io contrario manejar o almacenar; (c) lavado personal y/o sanidad debe ocurrir; y/o (d) una persona en riesgo particular de (i) adquirir una infección por un microorganismo; y/o (ii) siendo incapaz de evitar una infección microbiana sin intervención médica.
En modalidades preferidas de estos usos, dicha composición comprende además un agente quelante.
En modalidades preferidas, el microorganismo es una bacteria o un hongo, preferiblemente en donde: la bacteria es una especie patógena de uno de los siguientes géneros: Pseudomonas, L^steria, Bacillus, Staphylococcus y Salmonella; o el hongo es una especie patógena de uno de los siguientes géneros: Candida, Aspergillus, Alternaría, Fusarium, Cryptococcus y Trychosporon , preferiblemente en donde el hongo puede causar infección fúngica invasiva, preferiblemente C. albicans, A. Fumigatus o Alternaría altérnala.
Los inventores también proveen: un método de tratar un humano o animal que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo; un método de prevenir o tratar una infección por un microorganismo que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo; y un método de matar, o inhibir el crecimiento de, un microorganismo que es patógeno a un humano o un animal en un sitio que no está en o dentro del cuerpo · humano o animal, dicho método que comprende administrar a dicho sitio una composición que comprende una cantidad efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La invención ahora será descrita con referencia a los dibujos acompañantes, en donde: La figura 1 muestra curvas para hacer tiempo para Listeria monocytogenes y Pseudomonas aeruginosa; La figura 2 muestra ambientes para Staphylococcus aureus Bacillus subtitis, P. aeruginosa y L. monocytogenes; La figura 3A muestra una curva para hacer tiempo para C. albicans; Las figuras 3B y 4 muestran curvas para C. albicans; Las figuras 5 a 8 muestran colectivamente ambientes de inhibición para C. albicans, Cryptococcus neofromans y A. Fumigatus; La figura 9 muestra curvas para hacer tiempo para L. monocytogenes, P. aeruginosa y C. albicans; La figura 10 muestra la secuencia codificadora precursora de ß-conglutina de Lupinus albus (SEC ID NO: 1); y La figura 11 muestra el fragmento interno de la secuencia codificadora precursora de ß-conglutina que corresponde a Blad (SEC ID NO: 3).
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Blad ("banda de Lupus albus doce" - banda de L. albus dulce) fue el nombre dado a un producto en descomposición estable e intermediario de ß-conglutina, la proteína de almacenamiento principal presente en semillas del género Lupinus. Se caracterizó como un polipéptido 20 kD, compuesto de 173 de residuos de aminoácidos, y codificado por un fragmento interno (519 nucleótidos, depositados en GenBank bajo el número de acceso ABB13526) del gen codificando el precursor de ß-conglutina de Lupinus (1791 nucleótidos, publicados en GenBank, bajo el número de acceso AAS97865). Cuando secuencias terminales de Blad codificadoras de cebadores se usan para ampliar una secuencia de ADN de Lupinus genómico, se obtiene un producto de -620 bp, indicando la presencia de un intron en el fragmento de genes codificando Blad. Blad que ocurre de manera natural es el componente principal de un glicooligómero de 210 kD que se acumula exclusivamente (siguiendo proteólisis limitada intensiva de ß-conglutina) en los cotiledones de especie Lupinus, entre los días 4 y 12 después del comienzo de germinación. Pese a que dicho oligómero es glicosilado, Blad que ocurre de manera natural no es glicosilado. El glicooligómero que contiene Blad está compuesto de varios poiipéptidos, los principales exhibiendo masas moleculares de 14, 17, 20, 32, 36, 48 y 50 kD. El polipéptido de 20 kD, Blad, es por mucho el polipéptido más E abundante dentro del oligómero y parecer ser el único con actividad de lectina. Blad que ocurre de manera natural constituye aproximadamente 80% de la proteina cotiledonaria total en plántulas 5 de 8 días de edad.
La secuencia codificadora precursora de ß-conglutina de L. albus (SEC ID NO: 1) es dada en la figura 10. La secuencia codificadora de subunidad origen de ß-conglutina se ubica en los residuos 70 a 1668. La subunidad codificada origen de ß-conglutina 10 de residuo de 533 aminoácidos (SEC ID NO: 2) es: MGKMRVRFPTLVLVLGIVFE AVSIGIAYGEKDVL SH RPEEREQEEWQ QRPQSRREEREQEQEQGSPS Y P R RQ SG Y E R RQ Y 11 E R S EQ R E E R EQ EQ QQGSPSYSRRQR YHFSSQRFQTLY NRNG IRVLERI7DQRT LENLQ 15 N Y R I V E FQ S K PNT L I L P K H S D A D Y V L V V L N G R ATI T I V N P D R RQ A Y N L E Y G DALRIPAGSTSYILNPDDNQKLRVVKLAIPINNPGYFYDFY SSTKDQQSYF SGFSRNTLEATFNTRYEEIQRIILGNEDEQEYEEQRRGQEQSDQDEGVIVIV SK QIQKLTKHAQSSSG D PSDSGPFNLRSNEPIYSNKYGNFYEITPDRN PQVQDLNISLTYIKINEGALLLPHY SKAI YVVVVDEDEGN YELVGIRDQQ 20 RQQDEQEE EEEVI YSARLSEGDIFVIPAGYPISI ASSNLRLLGFGINADE NQRNFLAGSKDNVIRQLDRAV ELTFPGSAEDIERLIKNQQQSYFANGQP QQQQQQQSE EG RG RGSSLPF I El fragmento interno de la secuencia codificadora precursora de ß-conglutina que corresponde a Blad (SEC ID NO: 3) es dado en la figura 11. El polipéptido Blad (SEC ID NO: 4) es: RRQRNPYHFSSQRFQTLY NRNG IRVLERFDQRTNRLENLQN YRI VEFQS PNTLILP HSDADYVLVVLNGRATITIVNPDRRQAYNLEYGDALRIPAGS TS YILNPDDNQ LRVV LAIPINNPGYFYDF YPSSTKDQQS YFSGFSRNTLE ATFNTRYEEIQRIILGNED La invención se refiere a una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo. Por lo tanto, se refiere a una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende la secuencia de polipéptido de SEC ID NO: 4 o un variante activo del mismo. En modalidades alternativas, la composición consiste en esencia de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo y/o el polipéptido antimicrobiano consiste en esencia de Blad o un variante activo del mismo. En otras modalidades, el polipéptido antimicrobiano que comprende (o consiste en esencia de) Blad o un variante activo del mismo se puede usar en forma aislada.
Un variante activo de Blad es un variante de Blad que retiene la habilidad de actuar como un antimicrobiano (es decir, tiene actividad antimicrobiana - ver más adelante para una descripción del nivel de dicha actividad y cómo medirla). "Un variante activo de Blad" incluye dentro de su alcance un fragmento de SEC ID NO: 4. En modalidades preferidas, un fragmento de SEC ID NO: 4 se selecciona que es al menos 10% de la longitud de SEC NO: 4, preferiblemente por lo menos 20%, preferiblemente por lo menos 30%, preferiblemente por lo menos 40%, preferiblemente por lo menos 50%, preferiblemente por lo menos 60%, preferiblemente por lo menos 70%, preferiblemente por lo menos 80%, preferiblemente por lo menos 90% y muy preferible al menos 95% de la longitud de SEC NO: 4. Blad o un variante del mismo en general tiene por lo menos 10 residuos de aminoácidos, tales como al menos 20, 25, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 120, 140, 160 ó 173 residuos de aminoácidos.
"Un variante activo de Blad" también incluye dentro de su alcance una secuencia de polipéptido que tiene homología con SEC ID NO: 4, tal como al menos 40% de identidad, preferiblemente por lo menos 85%, preferiblemente al menos 90%, preferiblemente al menos 95%, preferiblemente al menos 97%, y muy preferible al menos 99% de identidad, por ejemplo, sobre la secuencia completa o sobre una región de por lo menos 20, preferiblemente por lo menos 30, preferiblemente por lo menos 40, preferiblemente por lo menos 50, preferiblemente por lo menos 60, preferiblemente por lo menos 80, preferiblemente por lo menos 100, preferiblemente por lo menos 120, preferiblemente por lo menos 140, y muy preferible al menos 160 o más residuos de aminoácidos contiguos. Los métodos de medir homología de proteína son bien conocidos en la técnica y serán entendidos por aquellos expertos en la técnica en el presente contexto, la homología es calculada sobre la base de identidad de aminoácido (a veces referida como "homología dura").
El variante de Blad activo homólogo típicamente difiere de la secuencia de polipéptido de SEC ID NO: 4 por sustitución, inserción u omisión, por ejemplo, de 1, 2, 3, 4, 5 a 8 o más sustituciones, omisiones o inserciones. Las sustituciones preferiblemente son 'conservadoras', es decir que un aminoácido se puede sustituir con un aminoácido similar, por lo que aminoácidos similares comparten uno de los siguientes grupos: residuos aromáticos (F/H/W/Y), residuos alifáticos no polares (G/A/P/l/L/V), alifáticos polares-no cargados (C/S/T/M/N/Q) y alifáticos polares-cargados (D/E/K/R). Los sub-grupos preferidos comprenden: G/A/P; l/L/V; C/S/T; N/Q; D/E y K/R.
Un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo (como se describió antes) puede consistir de Blad o un variante activo del mismo con cualquier número de residuos de aminoácidos agregados a la terminal N y/o terminal C siempre y cuando el polipéptido retenga actividad antimicrobiana (una vez más, ver más adelante una descripción del nivel de dicha actividad y cómo medirla). Preferiblemente, no más de 300 residuos de aminoácidos se agregan a cualquiera o ambos extremos de Blad o un variante activo del mismo, más preferible no más de 200 residuos de aminoácidos, preferiblemente no más de 150 residuos de aminoácidos, preferiblemente no más de 100 residuos de aminoácidos, preferiblemente no más de 80, 60 ó 40 residuos de aminoácidos, muy preferible no más de 20 residuos de aminoácidos.
Un polipéptido antimicrobiano que comprende (o consiste en esencia de) Blad o un variante activo del mismo (como se describió antes) se puede utilizar en la invención en la forma de una proteína purificada (por ejemplo, eliminada de una fuente vegetal, animal o microbiana) y/o recombinante. La producción de una forma recombinante permite la producción de variantes activos de Blad.
Los métodos de purificar Blad que ocurre de manera natural ya se describen en la técnica (por ejemplo, Ramos y otros (1997) Planta 203(1): 26-34 y Monteiro y otros (2010) PLoS ONE 5(1): e8542). Una fuente adecuada de Blad que ocurre de manera natural es una planta de género Lupinus, tal como Lupinus albus, preferiblemente un cotiledón de dicha planta, preferiblemente cosechada entre alrededor de 4 y aproximadamente 14 días después del inicio de germinación, más preferible cosechada 6 a 12 días después del inicio de germinación (tal como 8 días después del comienzo de germinación). Se describen métodos en la técnica para una extracción de proteína total conduciendo a un extracto crudo que comprende Blad, y para una purificación de proteína de dicho extracto conduciendo a un extracto parcialmente purificado, por ejemplo, comprendiendo el glicooligómero que contiene Blad que comprende Blad. Para aislar Blad en sí entonces uno puede usar SDS-PAGE y/o, preferiblemente, HPLC de fase invertida (RP) en una columna de C-18.
Una manera alternativa de obtener un extracto parcialmente purificado que comprende el glicooiigomero que comprende Blad es utilizar la actividad de unión de quitina de Blad. El glicooiigomero se une en una manera muy fuerte a una columna de quitina como parte de una purificación de cromatografía de afinidad a quitina, siendo eludido con 0.05 N HCI. Detalles de un ejemplo de este método de purificación son los siguientes: Cotiledones de plantas de lupina de 8 dias de edad se cosecharon y homogenizaron en Milli-Q más agua (pH ajustado a 8.0), conteniendo 10 mM CaCI2 y 10 mM MgCI2. El homogenizado se filtró a través de estopilla y se centrifugó a 30,000 g durante 1 hora a 4°C. La bolita posteriormente se suspendió en 100 mM de regulador de Tris-HCI, pH 7.5, conteniendo 10% (p/v) NaCI, 10 mM EDTA y 10 mM EGTA, agitado durante 1 hora a 4°C, y centrifugado a 30,000 g durante 1 hora a 4°C. La fracción de globulina total, contenida en el sobrenadante, se precipitó con sulfato de amonio (561 g/l), se dejó agitando en frío durante 1 hora y se centrifugó a 30,000 g durante 30 minutos a 4°C. La bolita obtenida se disolvió en 50 mM regulador de Tris-HCI, pH 7.5, desalado en columnas PD-10 equilibradas en el mismo regulador y pasaron a través de una columna de cromatografía de afinidad a quitina pre-equilibrada en el mismo regulador. La columna fue lavada con 50 mM regulador de Tris-HCI, pH 7.5, y las proteínas unidas eludidas con 0.05 N HCI. Las fracciones eludidas se neutralizaron de inmediato con 2 M Tris y las fracciones pico se agruparon, liofilizaron y analizaron por SDS-PAGE. , Para la preparación de la columna de quitina, se obtuvo quitina cruda de Sigma y se procesó de la siguiente manera: la muestra de quitina se lavó extensivamente con Milli-Q más agua, seguido por 0.05 N HCI. Después se lavó con 1% (p/v) carbonato de sodio y después con etanol, hasta que la absorbencia del lavado fue menos de 0.05. Después se empacó quitina en una punta de pipeta y se equilibró con 50 m regulador de Tris-HCI, pH 7.5 Los métodos de producir proteínas recombinantes son bien conocidos en la técnica. Dichos métodos como se aplican aquí involucrarán insertar el polinucleótido codificando un polipéptido que comprende Blad o un variante activo del mismo en un vector de expresión adecuado - permitiendo la yuxtaposición de dicho polinucleótido con uno o más promotores (por ejemplo, un promotor inducible, tal como T7lac) y con otros polinucleótidos o genes de interés -- introduciendo el vector de expresión en una célula u organismo adecuado (por ejemplo, Escherichia coli), expresando el polipéptido en la célula u organismo transformado y eliminando el polipéptido recombinante expresado de esa célula u organismo. Para ayudar a dicha purificación, el vector de expresión se pu^de construir de modo que el polinucleótido adicionalmente codifica, por ejemplo, una etiqueta terminal que puede ayudar en la purificación: por ejemplo, una etiqueta de residuos de histidina para purificación de afinidad. Una vez purificado el polipéptido re,combinante, la etiqueta de purificación se puede eliminar del polipéptido, por ejemplo, por corte proteolítico.
En una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende (o consiste en esencial de) Blad o un variante activo del mismo, dicho polipéptido está de preferencia en forma parcialmente purificada, más preferible en forma purificada. Dicho polipéptido está de preferencia en forma parcialmente purificada, más preferible en forma purificada. Dicho polipéptido es parcialmente purificado cuando está presente en un ambiente carente de uno o más otros polipéptidos con el cual se asocia de manera natural y/o es representado por al menos aproximadamente 10% de la proteina total presente. Dicho polipéptido se purifica cuando está presente en un ambiente carente de todo, o a lo mucho, otros polipéptidos con los cuales se asocia de manera natural. Por ejemplo, Blad purificado significa que Blad representa por lo menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, por lo menos aproximadamente 70% al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98%, o al menos aproximadamente 99% de la proteina total en una composición.
En una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende (o consiste en esencia de) Blad o un variante activo del mismo, el contenido de proteína Lupinus puede consistir en esencia del glicooligómero que contiene Blad que comprende un polipéptido que comprende (o consiste en esencia de) Blad o un variante activo del mismo.
Una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende (o que consiste en esencia de) Blad también puede ser una formulación que comprende otro compuesto(s) agregado a la composición por el experto en la técnica. En modalidades preferidas, dicha formulación es una formulación farmacéutica que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende (o que consiste en esencia de) Blad y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Agentes microbianos La invención se refiere al uso de Blad como un compuesto antimicrobiano, es decir, para inhibir el crecimiento de o matar microorganismos que son patógenos a humanos o animales. Dichos microorganismos incluyen, en particular, bacteria y hongo. Dichos microorganismos patógenos son capaces de causar enfermedad infecciosa o cualquier otra salud | pobre (por ejemplo, envenenamiento por alimento, alergia) en humanos y/o animales, y pueden afectar o infectar, por ejemplo, los ojos, la piel, heridas, el tracto respiratorio superior, los pulmones, el tracto gastrointestinal, el tracto genitourinario, los ríñones, el hígado, el sistema nervioso y/o el sistema cardiovascular (por ejemplo, el torrente sanguíneo). Dichos microorganismos patógenos pueden ser inherentemente patógenos o pueden ser oportunistas (es decir, no causar enfermedad en un huésped sano sino en un huésped con un sistema inmune comprometido). Dichos microorganismos patógenos adicional o alternativamente pueden causar salud pobre al liberar compuestos que son tóxicos para humanos o animales.
Se puede usar Bled como un antimicrobiano contra patógenos bacterianos Gram-positivo y Gram-negativo. Dianas bacterianas particularmente preferidas incluyen especie Pseudomonas patógenas, tales como P. aeruginosa, Pseudomonas oryzihabitans y Pseudomonas plecoglossicida (muy preferible P. aeruginosa) , especie Listeria, tal como L. monocytogenes y Listeria ivanovii (muy preferible, L. monocytogenes) , especie Bacillus pagóteno, tal como B, Subtilis, Bacillus anthracis y Bacillus cereus (muy preferible B. Subtilis), especie Staphylococcu s patógeno, tal como S. aureus (incluyendo Staphylococcus aureus resistente a meticilina [MRSA]), Staphylococcus pseudintermedius, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus schleiferi y Staphylococcus caprae (muy preferible S. aureus), especie Salmonella'^ patógeno, tal como sub-especie Salmonella entérica tal como Salmonella arizonae, Salmonella choleraesuis, Salmonella enteritidis, Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Salmonella dublin¿ Salmonella typhisuis y Salmonella brandenburg (muy preferible S. enteritidis o S. typhi) y especie Campyiobacter patógeno tal como Campyiobacter jejuni y Camptylobacter coli (muy preferible C. jejuni). En modalidades preferidas, Blad se usa contra patógenos que pueden causar inflamación y sepsis generalizados (por ejemplo, p. aeruginosa), cólera (por ejemplo, V. cholerae), Meningitis (por ejemplo, L. monocytogenes, Haemophilus influenzae tipo b, Neisseria meningitidis, o Streptococcus pneumoniae) , neumonía (por ejemplo, S. pneumoniae, Streptococcus agalactiae o S. aureus), estreptococo (por ejemplo, Streptococcus pyogenes) , tuberculosis (por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium africanum, Mycobacterium canetti y Mycobacterium microti), tifoidea (S. typhi), o envenenamiento de alimento (por ejemplo, especies patógenas de uno de los siguientes géneros: Listeria, Staphylococcus y Salmonella).
Blad se puede usar como un antimicrobiano contra patógenos fúngicos unicelulares (levadura) y multicelulares (filamentosos, moho). Las dianas fúngicas particularmente preferidas incluyen especies Candida patógena, tales como C. albicans, Candida glabrata, Candida lusitaneae, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Candida^ krusei y Candida dubliniensis, especie patógena Alternaría , tales como A. Altérnate y Alternaría molesta, especie Aspargillus patógena, tales como A. Fumigatus, Aspergillus niger, Aspergillus flavus y Aspergillus clavatus, especie Fusarium patógena, tales como Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium verticillioides y Fusarium proliferatum , especie Cryptococcus patógena, tales como Cryptococcus neoformans, Cryptococcus laurentii, Cryptococcus albidus y Cryptococcus gattii, y especie Trichosporon patógena, tales como Trichosporon ovoides, Trichosporon inkin, Trichosporon asahii, Trichosporon mucoides, Trichosporon asteroides y Trichosporon cutaneum (todas previamente consideradas bajo el nombre general de Trichosporon beigelii), y Trichosporon dermatis, Trichosporon dohaense y Trichosporon loubieri. En modalidades preferidas, Blad se usa contra patógenos que pueden causar infección fúngica invasiva (IFI), que usualmente se define como una infección fúngica sistémica, generalizada y visceral que a menudo es severa y/o amenazante de vida (en contraste a enfermedades fúngicas superficiales, locales, benignas, auto-limitantes). Las IFI particularmente preferidas causando hongos incluyen especies patógenas Candida, Aspergillus o Alternaría como se definió antes, preferiblemente C. albicans, A. Fumigatus o A. Alt rnala, muy preferible C. albicans o A. Fumigatus.
El experto en la técnica podrá identificar, a través de métodos de rutina, una concentración adecuada con la cual usar un polipéptido antimicrobiano que comprende (o consiste en esencia de) Blad ( un variante activo del mismo) como un antimicrobiano en cualquier ajuste particular. Preferiblemente, por ejemplo, Blad se usa a una concentración de por lo menos 1 µg/ml, por lo menos 5 ug/ml, por lo menos 10 µ?/???, por lo menos 20 µ9/?t??, por lo menos 50 µ?/???, o por lo menos 100 µ9/???, y hasta 500 µ?/???, hasta 600 µ?/???, hasta 1 mg/ml, hasta 2.5 mg/ml, hasta 5 mg/ml o hasta 10 mg/ml. Preferiblemente la concentración de Blad seleccionada es entre 10 µ9/p?? y 5 µ9/G??, más preferible entre 50 µ?/p?? y 2.5 mg/ml, más preferible entre 100 µ?/??? y 1 mg/ml, e incluso más preferible entre 100 9/?t?? y 600 9/??? (tal como aproximadamente 250 µ?/???). Los inventores han provisto evidencia (ver ejemplos 4 y 5) que Blad no es tóxico al huésped hasta por lo menos 400 µg/ml.
De manera sorprendente, los inventores han descubierto que una combinación de Blad con un agente quelante (por ejemplo, EDTA) produce un efecto antimicrobiano sinergístico. Por lo tanto, preferiblemente, un agente quelante se usa para mejorar la actividad antimicrobiana de un polipéptido que comprende (o que consiste en esencia de) Blad (o variante activo del mismo), y el uso de tal agente quelante puede disminuir la concentración de dicho polipéptido antimicrobiano requerido para lograr un nivel particular de actividad antimicrobiana. Un agente quelante (también conocido como un quelante, un quelatador o un agente secuestrante) es cualquier compuesto que une a un ión metálico para formar un complejo no covalente y reduce la actividad del ión. Agentes quelantes adecuados incluyen carboxilatos de poliamino tales como EDTA (ácido etileno-diaminatetraacético) y EGTA (etilenglicol bis(p-aminoetil éter)-/V, ?, ?/', ?/ '-tetra acético ácido). Preferiblemente, se usa EDTA como el agente quelante, preferiblemente a una concentración de por lo menos 10 µ?/???, por lo menos 50 µ?/?t??, o por lo menos 100 µ?/???, y hasta 500 µ?/???, hasta 1 mg/ml, hasta 5 mg/ml, hasta 10 mg/ml, o hasta 20 mg/ml. Preferiblemente, EDTA se usa a una concentración de entre 0.1 mg/ml y 1 mg/ml.
Resultados El polipéptido antimicrobiano que comprende (o que consiste en esencia de) Blad (o un variante activo del mismo) se puede usar para inhibir el crecimiento de un microorganismo patógeno humano/animal (significando que tiene actividad microbiestática) y/o para matar dicho, microorganismo (significando que tiene actividad microbicida). El experto en la técnica podrá identificar una dosis adecuada y/o concentración para obtener una inhibición de crecimiento particularmente deseado o asesinato del microorganismo.
Preferiblemente, cuando se usa como un agente microbiestático, el polipéptido antimicrobiano reduce la velocidad de crecimiento por 10%, más preferible por 50%, más preferible por 75%, más preferible por 90%, más preferible por 95%, más preferible por 98%, más preferible por 99%, e incluso más preferible por 99.9% en comparación con condiciones equivalentes en donde el polipéptido antimicrobiano no está presente. Muy preferible el polipéptido antimicrobiano previene cualquier crecimiento del microorganismo.
Preferiblemente, cuando se usa como un agente microbicida, el polipéptido antimicrobiano mata 10% de la población de los microorganismos, más preferible 50% de dicha población, más preferible 75% de dicha población, más preferible 90% de dicha población, más preferible 95% de dicha población, más preferible 98% de dicha población, más preferible 99% de dicha población, e incluso más preferible 99.9% de dicha población en comparación con condiciones equivalentes en donde el polipéptido antimicrobiano no está presente. Muy preferible, el polipéptido antimicrobiano mata toda la población del microorganismo.
Cuando se usan para prevenir o tratar una infección en o sobre un humano o animal el polipéptido antimicrobiano se usa preferiblemente en una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir una cantidad que provee un nivel de inhibición de crecimiento y/o asesinato de un microorganismo de modo que se logra un nivel clínicamente detectable de prevención o abrogación de infección. Preferiblemente, la cantidad terapéuticamente efectiva del polipéptido antimicrobiano no es tóxica al sujeto humano o animal. Se pretende que dicha cantidad terapéuticamente efectiva del polipéptido antimicrobiano es terapéuticamente efectivo cuando se administra como parte de una composición que comprende el polipéptido antimicrobiano.
De manera sorprendente, los inventores han descubierto que, a concentraciones similares (por masa), Blad es aproximadamente tan potente como anfotericina B y más potente que fluconazol contra C. albicans y A. Fumigatus (en términos de actividad fungicida o f ungiestática). Esto es un resultado sorprendente dado (i) la masa molecular mucho mayor de Blad en comparación con las moléculas orgánicas relativamente pequeñas de anfotericina B y fluconazol y (ii) la naturaleza no tóxica y comestible de Blad a humanos y otros animales.
Usos y métodos médicos La invención provee una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para usarse en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por terapia o profilaxis. A este extremo también se provee un método de tratar un humano o animal que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo.
Los inventores también proveen una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para usarse en un método de prevenir o tratar una infección en o sobre un sujeto humano o animal por un microorganismo. A este extremo también proveen: un método de prevenir o tratar una infección por un microorganismo que comprende administrar un sujeto en necesidad del mismo una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo; y uso de una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo en la fabricación de un medicamento para prevenir o tratar una infección en o sobre un sujeto humano o animal por un microorganismo Dicha composición se puede administrar por inyección (tales como ¡ntradérmica, subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraósea e intraperitoneal), administración de partícula transdérmica, inhalación, tópicamente, oralmente o transmucosalmente (tal como nasal, sublingual, vaginal o rectal).
Preferiblemente, dicha composición comprende un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Dicha composición farmacéutica se puede formular como una preparación farmacéutica convencional. Esto se puede hacer usando químicas y metodologías de formulación farmacéutica estándar, que están disponibles a aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad (o un variante activo del mismo) se puede combinar con uno o más portadores o diluyentes farmacéuticamente aceptables para proveer una preparación líquida. También puede haber sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsores, sustancias reguladoras de pH y similares.
Los portadores, diluyentes y sustancias auxiliares en general son agentes farmacéuticos que se pueden administrar sin toxicidad indebida y que por sí mismos no inducirán una respuesta inmune en el individuo que recibe la composición. Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, líquidos tales como agua, solución salina, polietilenglicol, ácido hialurónico, glicerol y etanol. Las sales farmacéuticamente aceptables también se pueden incluir en la presente, por ejemplo, sales de ácido mineral tales como clorhidratos, bromhidratos, fosfato, sulfatos, y similares; y las sales de ácidos orgánicos tales como acetatos, propionatos, malonatos, benzoatos y similares. También se prefiere, aunque no se requiere, que la preparación contenga un portador farmacéuticamente aceptable que sirva como un estabilizador, particularmente ventajoso para una composición que comprende un polipéptido como Blad. Ejemplos de portadores adecuados que también actúan como estabilizadores para polipéptidos incluyen, sin limitación, grados farmacéuticos de dextrosa, sacarosa, lactosa, trehalosa, manitol, sorbitol, ¡nositol, dextrano y similares. Otros portadores adecuados incluyen, una vez más sin limitación, almidón, celulosa, fosfatos de sodio o calcio, ácido cítrico, ácido tartárico, glicina, polietilenglicoles de peso molecular alto (PEGs) y combinación de los mismos.
Una vez formulada, la composición se puede administrar a un sujeto in vivo usando una variedad de rutas y técnicas conocidas. Por ejemplo, las preparaciones líquidas se pueden proveer como una solución, suspensión o emulsión inyectable y administradas vía inyección parenteral, subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraósea o intraperitoneal usando una aguja y jeringa convencional, o usando un sistema de inyección de chorro líquido. También se pueden administrar preparaciones líquidas tópicamente a los ojos, a la piel, cabello o tejido mucoso (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal o rectal), o provistas como un aspersor finamente dividido adecuado para administración respiratoria o pulmonar. Otros modos de administración incluyen administración oral, supositorios y técnicas de administración transdérmica activa o pasiva. En modalidades preferidas, el polipéptido antimicrobiano se formula en una composición adecuada como una loción tópica, crema para manos, solución de gotas para ojos, champú o acondicionador.
El sujeto en necesidad del polipéptido antimicrobiano puede ser cualquier individuo humano o animal. En modalidades preferidas, el polipéptido antimicrobiano se puede usar para prevenir infección en sujetos en riesgo particular de adquirir una infección por un microorganismo y/o para tratar infección en sujetos en riesgo particular de ser incapaz de depurar una infección microbiana sin intervención médica, tal como los jóvenes (tal como un individuo menor de 16 años, tal como un individuo menor de 5 años, 3 años, 2 años, 1 año, 6 meses o 1 mes), los ancianos (tal como un individuo mayor de 70 años, tal como un individuo mayor de 80 años o 90 años), aquellos con un sistema inmune comprometido (tales como aquellos con una inmunodeficiencia primaria, aquellos con una inmunodeficiencia adquirida (por ejemplo, aquellos con SIDA) y aquellos con un sistema inmune suprimido como resultado» de tratamiento tal como quimioterapia o regímenes de fármaco inmunosupresor), aquellos que están críticamente enfermos, o aquellos que pueden tener una exposición particularmente alta a microorganismos patógenos (por ejemplo, profesionales médicos).
Otros usos y métodos antimicrobianos Los inventores también proveen el uso de una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para matar, o inhibir el crecimiento de, un microorganismo que es patógeno a un humano o un animal en un sitio que no está sobre o en el cuerpo humano o animal. A este extremo, también proveen un método de matar o inhibir el crecimiento de un microorganismo que es patógeno a un humano o un animal en un sitio que no está sobre o en él cuerpo humano o animal, dicho método que comprende administrar a dicho sitio una composición que comprende · una cantidad efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo. Dicha cantidad efectiva es una cantidad que provee un nivel de inhibición de crecimiento y/o asesinato de un microorganismo de modo que se logra un nivel detectable de prevención o abrogaciór de colonización microbiana. Preferiblemente, la cantidad efectiva del polipéptido antimicrobiano es no tóxico al sujeto humano o animal.
Se pretende que dicha cantidad efectiva del polipéptido antimicrobiano sea efectiva cuando se administra como parte de una composición que comprende el polipéptido antimicrobiano.
En estas modalidades, se pretende que el polipéptido antimicrobiano se usa como un desinfectante para prevenir el crecimiento de y/o matar un microorganismo patógeno en un artículo que se debe ingerir por, o colocar directamente sobre o en, un humano o animal, o una superficie que está en necesidad del mismo (por ejemplo, una superficie que puede, directa o indirectamente, tener contacto con un humano o animal) de modo que se reduce el riesgo de: (i) un humano o animal siendo infectado con dicho microorganismo patógeno; o (ii) un humano o animal que hace contacto con una toxina liberada por un microorganismo patógeno.
En modalidades preferidas, el polipéptido antimicrobiano se usa * dentro o en un alimento para prevenir el crecimiento de un microorganismo patógeno humano/animal en o dentro de ese alimento o para matar un microorganismo patógeno humano/animal ya presente en o dentro de ese alimento. En esta manera, el polipéptido antimicrobiano se puede usar para reducir el riesgo de un humano o animal siendo infectado con un microorganismo patógeno, o de un humano o animal ingiriendo una toxina liberada por un microorganismo patógeno, como resultado de ingerir ese alimento.
En estas modalidades es particularmente preferido que dicho microorganismo patógeno sea capaz dec causar envenenamiento de alimentos (por ejemplo, directamente o vía una toxina liberada). Por alimento se quiere decir cualquier sustancia líquida o sólida destinada para el consumo por razones de nutrición o placer. La composición que comprende el polipéptido antimicrobiano se puede mezclar, por ejemplo, con otros componentes del alimento durante la preparación para el alimento o se puede aplicar, por ejemplo, a la superficie del alimento (por ejemplo, como una película líquida o un aspersor). Los alimentos particulares son considerados en estas modalidades incluyen agua, bebidas gaseosas tales como jugos de frutas, bebidas alcohólicas, carne cruda, carne de ave cocinada, huevos, leche, crema, helado, queso, vegetales crudos y frutas, alimentos procesados (en particular relevante a, por ejemplo, L. monocytogenes, V. cholerae, especie patógena Staphylococcus , especie Salmonella y especie patógena Campyiobacter) , y nueces y alimentos con almidón tales como pan, arroz y papas (en particular relevantes para especie patógena Aspergillus).
En una modalidad preferida alternativa, el polipéptido antimicrobiano se usa dentro o en un dispositivo o instrumento médico - cualquier dispositivo colocado en o dentro del cuerpo para llevar a cabo una función diagnóstica, terapéutica o quirúrgica - tal como tejido de cuerpo artificial, mar^apasos, stents, andamios proteicos (scaffolds), válvulas, termómetros, jeringas, agujas hipodérmicas, equipo de monitoreo, ventiladores, desfibriladores cardiacos, máquinas de corazón pulmón, unidades de EEG y ECG, dispositivos de ultrasonido, taladros, serruchos, cuchillos, bisturís, lengüetas, tijeras, clips y puntos y similares. En tal manera, el polipéptido antimicrobiano se puede usar para prevenir infección de un cuerpo que hace contacto con un dispositivo o instrumento durante un procedimiento médico.
En modalidades preferidas alternativas, el polipéptido antimicrobiano se usa sobre una superficie en necesidad del mismo (por ejemplo, una superficie que, directa o indirectamente, puede hacer contacto con un humano o animal). La superficie a la cual el polipéptido antimicrobiano se puede aplicar se puede ubicar dentro de un medio ambiente en donde: (a) examinación médica, diagnosis o tratamiento debe ocurrir; (b) un alimento se debe preparar o de lo contrario manejar o almacenar; (c.) lavado personal y/o sanidad debe ocurrir; y/o (d) una persona en riesgo particular de (i) adquirir una infección por un microorganismo; y/o (¡i) siendo incapaz de evitar una infección microbiana srn intervención médica; y/o se sitúa (y ejemplos de dichas personas se describieron antes).
Ejemplos de dichas superficies incluyen cualquiera dentro de una fábrica industrial de alimentos y anaqueles/bancas dentro de un supermercado.
La superficie a la cual se puede aplicar el polipéptido antimicrobiano pufede ser un piso o pared de un edificio (o una habitación del mismo) o una superficie de un artículo dentro de dicha habitación o edificio.
Los edificios particulares concebidos incluyen hospitales y otros edificios para el cuidado de la salud, escuelas y otros centros de cuidado de niños, edificios para el cuidado de personas de la tercera edad, restaurantes y otros comedores, lugares para preparación, procesamiento y/o almacenamiento de alimentos (por ejemplo, mercados, tiendas de alimentos, supermercados y fábricas industriales de alimentos), y viviendas privadas. Las habitaciones particulares concebidas incluyen todas aquellas dentro de un marco para el cuidado de la salud, en especial teatros en operación, departamentos de accidentes y urgencias, salas de cuidado intensivo y pacientes, así como cocinas, baños, sanitarios, restaurantes y salones de preparación/procesamiento de alimentos.
EJEMPLOS En los siguientes ejemplos BLAD denota el glicooligómero conteniendo Blad que ocurre de manera natural comprendiendo el polipéptido de Blad de 20 kD, purificado como Ramos y otros (1997) Planta 203(1): 2¾-34: ver partes de "Plant material and growth conditions" (Material de planta y condiciones de crecimiento) y "Purification of proteins" (Purificación de proteínas) de la sección de Materiales y Métodos de ese documento.
Definiciones: MIC - Concentración mínima inhibidora: la concentración más baja de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento visible de un microorganismo.
MFC/ BC - Concentración mínima fungicida/bactericida (o concentración mínima letal): la concentración más baja de un agente antimicrobiano necesario para matar 99.9% del inoculo inicial después de 24 horas bajo una serie estandarizada de condiciones. Curvas para hacer tiempo: Determinación del "asesinato" de un aislado con el tiempo por uno o más agentes antimicrobianos bajo condiciones controladas es conocida como el método para hacer tiempo. Es un método basado en caldo en donde la velocidad de matar un inoculo fijo se determina al tomar muestras de tubos o frascos que contienen control y agente microbiano (organismo, no fármaco), a ciertos intervalos de tiempo, y determinando el conteo de colonia sobreviviente (cfu/ml) al extender cada muestra en placa de agar.
I Actividad bactericida de BLAD MIC y MBC de BLAD para varias especies bacterianas (usando medio de ueller-Hinton): Especie bacteriana MIC í^g/ml) MBC ^g/ml) Pseudomonas aeruginosa 32-256 128-256 Listeria monocytogenes 8 > 512 Badil us subtilis 4 > 512 Staphylococcus aureus 8 > 512 Salmonella thyphimurium 64 128 Curvas para hacer tiempo para BLAD con (A) Listeria monocytogenes y (B) Pseudomonas aeruginosa: ver figura 1.
Contra L. monocytogenes y P. aeruginosa , BLAD es bacterioestático a 100 ¿ig/ml y bactericida a 250 ug/ml.
Datos de atmósfera de inhibición para BLAD contra (A) Staphylococcus aureus, (B) Bacillus subtilis, (C) Pseudomonas aeruginosa y (D) Listeria monocytogenes: ver figura 2.
El crecimiento de todas las especies bacterianas probadas en PCA fue inhibido en aumento con cantidades de BLAD en aumento en los discos de tratamiento, de 20 g (discos derechos inferiores) a 100 µg (discos izquierdos inferiores) y a 200 µg (discos superiores) (incubación 24 horas - los efectos fueron observados durante varios días).
Ejemplo 2 - Actividad fungicida de BLAO.
MIC y MFC de BLAD para especie Candida (usando medio de RPMI) Especie Candida MIC (µ?/G??) MBC ^g/ml) Candida albicans 16-32 256 Candida dubliniensis 32-64 256 Candida glabrata 1-2 - > 512 Candida lusitaneae 32-64 > 512 Candida parapsilosis 32 > 512 Candida tropicalis 16-32 > 512 MIC y MFC de BLAD para especie Candida (usando medio de PDB a pH 7.5) Especie Candida MIC (µ?/G??) MBC ^glm\) Candida albicans 2-4 4-8 Candida dubliniensis 2-4 8 Candida glabrata 2 16-64 Candida lusitaneae 2-4 8-32 Candida parapsilosis 2-4 64 Candida tropicalis 4 4-16 MIC y MFC de BLAD para varios hongos filamentosos (usando medio de RPMI) Especie fúngica MIC (µ?/ml) MBC ^g/ml) Alternaría sp. 64 > 512 Aspergillus fumigatus 32 > 512 Aspergillus niger 32-64 > 512 Botrytis cinérea 128 512 Colletotrichum acutatum 64 > 512 Colletotrichum gloesporioides 64 > 512 Fusarium oxysporum 64 > 512 NB - MIC para Cryptococcus neoformans medido a 0.25 - 1.0 µg/ml.
Curva para hacer tiempo (A) y curva de crecimiento (B) para BLAD con Candida albicans en medio de PDB: ver figuras 3A y 3B Contra C. albicans, BLAD es fungiestático a 10 µ?/??? y fungicida a 100 g/ml.
Curva de crecimiento para BLAD con Candida albicans en medio de PDB a pH 7: ver figura 4.
Contra C. albicans, BLAD y anfotericina B son fungiestáticos a 10 µg/ml. A 100 µg/ml fluconazol meramente retrasa el crecimiento.
Datos de atmósfera de inhibición para (A y B) BLAD y (C) anfotericina B o fluconazol contra Candida albicans: ver figura 5.
El crecimiento de C. albicans en agar de dextrosa de papa (PDA) pH 7.5 fue inhibido con cantidades de BLAD en aumento en los discos de tratamiento, de 20 µ9 (A, disco inferior) a 50 µ9 (B, disco inferior) a 100 µ9 (B, disco superior) y a 200 µg (A, disco superior) (3 días de incubación). Esto se compara muy favorablemente con la inhibición lograda con 20 µg de anfotericina B (C, disco superior) y 25 µ9 fluconazol (C, disco inferior).
Datos de atmósfera de inhibición para BLAD contra Cryptococc us neoformants en (A) PDA y (B) PDA pH 7.5 (incubación de 3 días): ver figura Jo.
El crecimiento de C. neoformans fue inhibido en ambos medios con cantidades de BLAD en aumento en los discos de tratamiento, aunque con mayor eficacia en PDA. I - discos superiores 200 µ9, discos inferiores 10 µg; II - discos izquierdos superiores 50 g, disco derecho superior 20 µ9, disco inferior 100 µg.
Datos de atmósfera de inhibición para BLAD contra Aspergillus fumigatus en (A) medio de Mueiler-Hinton (regla M44-A), (B) PDA o (C) PDA pH 7.5 (incubación de 3 días): ver figura 7.
El panel izquierdo muestra placas vistas desde arriba; el panel derecho muestra placas vistas desde abajo.
El crecimiento de A. Fumigatus fue inhibido en todos los medios con cantidades de BLAD en aumento en los discos de tratamiento, aunque con mayor eficacia en PDA pH 7.5. I - discos superiores 200 discos inferiores 10 µg^, II - discos izquierdos superiores 50 µ9, disco derecho superior 20 ^ig, disco inferior 100 µ9- Datos de atmósfera de inhibición para (A y B) BLAD y (C) anfotericina B o fluconazol contra Aspergillus fumigatus en PDA pH 7.5 (incubación de 6 días): ver figura 8.
El crecimiento de A.. Fumigatus en PDA pH 7.5 fue inhibido con cantidades de BLAD en aumento en los discos de tratamiento, de 20 µ9 (A, disco inferior) a 50 9 (B, disco inferior) a 100 µ9 (B, disco superior) y a 200 µ9 (A, disco superior). Esto se compara muy favorablemente con la inhibición lograda con 10 mg de anfotericina B (C, disco superior) y 100 mg fluconazol (C, disco inferior). Se observaron resultados muy similares para Trichosporon cutaneum (datos no mostrados).
Ejemplo 3 - Efecto sinergístico de EDTA con BLAD con respecto a actividad bactericida/fungicida contra patógenos humanos.
Curvas para hacer tiempo de BLAD y/o EDTA con (A) Listeria monocytogenes, (B) Pseudomonas aeruginosa y (C) Candida albicans: ver figura 9.
Contra L. monocytogenes ni BLAD a 10 µg/ml ni EDTA a 0.1 mg/ml inhibe crecimiento sino una combinación de los dos es bacterioestática. Contra P. aeruginosa, BLAD a 50 µg/ml o EDTA a 1 mg/ml inhibe crecimiento (es decir, ambos son bacterioestáticos) sino una combinación de los dos es bactericida. Contra C. albicans, BLAD a 10 µg/ml o EDTA a 0.1 mg/ml inhibe crecimiento (es decir, ambos son fungiestáticos) sino una combinación de los dos es fungicida.
Ejemplo 4 - Estudio de toxicidad ^dérmica de BLAD en conejillos de indias.
El estudio convencional llevado a cabo en la Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Técnica de Lisboa, a nombre del Instituto Superior de Agronomía (18 de julio de 2006 - 1 de agosto de 2006) usando Guía de OECD para probar químicos, No. 402, Toxicidad Dérmica Aguda. El estudio fue conducido de conformidad con buena práctica de laboratorio y bienestar de animales.
La toxicidad dérmica aguda de BLAD fue evaluada después de exposición a dosis única en conejillos de indias, que son ampliamente aceptados como animales adecuados para estudios de toxicidad dérmica. BLAD se aplicó a la piel lampiña en dos grupos de 10 animales cada uno, con dosificación a 200 g/ml y 400 g/ml respectivamente. Después de exposición, los animales se mantuvieron bajo observación durante un periodo de 15 días, durante el cual la masa corporal, morbidez y mortalidad fueron registrados.
Materiales y Métodos -1. Materiales Artículo de prueba: BLAD fue suministrado a 5 mg/ml (líquido opaco amarillento, 0-4°C) y almacenado a -80°C.
Animales: conejillos de indias albinos; cepa: Dunkin Hartley (HsdPoc: DH) por Harían Ibérica, Barcelona.
Número de animales usados: 30; peso corporal: 400-449 g; edad: 6 semanas.
Alojamiento: los animales fueron colocados de manera individual en cajas de polietileno con virutas de' madera esterilizada (Lignocel). Condiciones de ambiente: a) Fotoperiodo: ciclos de luz/oscuridad durante 12 horas en 12 horas. b) Ambiente controlado: una temperatura promedio de 19/22°C y humedad promedio de 60%.
Adaptación: los animales se mantuvieron bajo condiciones ambientales de la prueba durante siete días antes del comienzo de la prueba.
Alimento: Dieta Global 2014, Dieta de mantenimiento de roedores suministrada por Harían Ibérica, Barcelona, agua ad libitum. 2. Métodos Administración: los animales fueron rasurados 48 horas antes de la prueba y sólo los animales que tuvieron piel libre de lesiones fueron tomados en el estudio. Una alícuota de 1 mi (a 200 µ?/Gp? o 400 µg/ml) se aplicó a la piel rasurada de cada animal.
Diseño de estudio: los 30 animales del estudio se dividieron en cuatro grupos, dos grupos de diez animales cada uno y dos grupos con cinco animales cada uno. Un grupo de ten animales fue expuesto a BLAD a 200 µg/ml (grupo de prueba 1) y otro grupo de diez animales fue expuesto a BLAD a 400 µg/ml (grupo de prueba 2). Los dos grupos de cinco animales sirvieron como controles: un grupo fue expuesto a agua (alícuota de 1 mi) mientras otro grupo no fue sometido a ninguna administración sino manejada como todos los demás grupos.
Resultados: después de la exposición los animales fueron observados diariamente durante 15 días para registrar cualquier signo de morbidez o incluso muerte En términos de morbidez^, se puso atención particular a apariencia posible de lesiones en la piel en el sitio de exposición y signos posibles de toxicidad general tales como cambios en patrones de comportamiento normal. El peso corporal fue evaluado de manera individual antes de la exposición y al final del periodo de prueba.
Resultados - A ninguna concentración de BLAD hubo signos de ningún cambio físico en el área de administración dérmica o cambios en beber/comercialmente disponible o comportamiento general. No ocurrieron reacciones o muerte con la administración de BLAD. El aumento en masa corporal fue similar en todos los grupos (y fue consistente con el aumento esperado de animales en desarrollo de dicha edad joven).
Conclusiones - BLAD a concentraciones de hasta 400 µglm\ (y posiblemente mayor) no muestra toxicidad dérmica.
Ejemplo 5 - Estudio de toxicidad oral de BLAD en ratas albinas.
Se llevó a cabo estudio confidencial en la Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Técnica de Lisboa, a nombre del Instituto Superior de Agronomía, usando Guía de OECD para probar químicos, No. 401, Toxicidad Oral Aguda. El estudio fue conducido de conformidad con buena práctica de laboratorio y\ bienestar de animales.
La toxicidad oral aguda de BLAD fue evaluada después de exposición a dosis única en ratas, que son ampliamente aceptados como animales adecuados para estudios de toxicidad oral. BLAD se administró por gavaje en dos grupos de 10 animales cada uno, con dosificación a 200 µg/ml y 400 µg/m\ respectivamente. Después de exposición, los animales se mantuvieron bajo observación durante un periodo de 15 días, durante el cual la masa corporal, morbidez y mortalidad fueron registrados. Después del periodo de observación, a los animales se les practicó la eutanasia y necropsia.
Materiales y Métodos -1. Materiales Artículo de prueba: BLAD fue suministrado a 5 mg/ml (líquido opaco amarillento, 0-4°C) y almacenado a -80°C.
Animales: Rattus norvegicus; cepa: Wistar Hannover adquirido por el vivero de la Facultad de Medicina Veterinaria de Lisboa de Harían Ibérica, Barcelona.
Número de animales usados: 30; peso corporal: 250-300 g; edad. 10 semanas.
Alojamiento: los animales fueron colocados de manera individual en cajas de polietileno con virutas de madera esterilizada (Lignocel). Condiciones de ambiente: a) Fotoperíodo. ciclos de luz/oscurida'jd durante 12 horas en 12 horas. b) Ambiente controlado: una temperatura promedio de 19/22°C y humedad promedio de 60%.
Adaptación: los animales se mantuvieron bajo condiciones ambientales de la prueba durante siete días antes del comienzo de la prueba.
Alimento: Dieta Global 2014, Dieta de mantenimiento de roedores suministrada por Harían Ibérica, Barcelona, agua ad libitum. 2. Métodos Administración: una alícuota de 1 mi (a 200 ug/ml o 400 ug/ml) se aplicó a cada animal por intubación oral (oro-esofágico), comúnmente conocido como gavaje. La administración se llevó a cabo con una sonda de metal apropiada para la especie de animal usado. Los animales se sometieron a ayuno durante 18 horas antes de la administración y alimentados 3 horas después de la administración.
Diseño de estudio: los 30 animales del estudio se dividieron en cuatro grupos, dos grupos de diez animales cada uno y dos grupos con cinco animales cada uno. Un grupo de ten animales fue expuesto a BLAD a 200 µg/ml (grupo de prueba 1) y otro grupo de diez animales fue expuesto a BLAD a 400 µg/ml (grupo de prueba 2). Los dos grupos de cinco animales sirvieron como controles: un grupo fue expuesto a agua (alícuota d'fe 1 mi) mientras otro grupo no fue sometido a ninguna administración sino manejada como todos los demás grupos.
Resultados: después de la administración, los animales fueron observados diariamente durante 15 días para registrar cualquier signo de morbidez o incluso muerte. El peso corporal fue evaluado de manera individual antes de la exposición y al final del periodo de prueba. Después del periodo de observación, a los animales se les aplicó la eutanasia (por asfixia en una atmósfera saturada con dióxido de carbono) para examinación post-mortem posterior.
Resultados - A ninguna concentración de BLAD hubo signos de ningún cambio físico en el área de administración dérmica o cambios en beber/comercialmente disponible o comportamiento general. No ocurrieron reacciones o muerte con la administración de BLAD. El aumento en masa corporal fue similar en todos los grupos (y fue consistente con el aumento esperado de animales en desarrollo de dicha edad joven). La observación de la necropsia/macroscópica de los órganos de la cavidad torácica y abdominal reveló ningún cambio.
Conclusiones - BLAD a concentraciones de hasta 400 ng/ml (y posiblemente mayor) no muestra toxicidad oral.
I

Claims (17)

REIVINDICACIONES
1. - Una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para usarse en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por terapia o profilaxis.
2. - Una composición de conformidad con la reivindicación 1 para usarse en un método de tratar o prevenir una infección en o sobre un sujeto por un microorganismo.
3.- Una composición de conformidad con la reivindicación 1 o reivindicación 2 que comprende además un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
4.- Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que comprende además un agente quelante.
5.- Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para usarse en dicho método en donde el sujeto tiene un sistema inmune comprometido o está críticamente enfermo.
6. - Uso de una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para matar, o inhibir el crecimiento de, un microorganismo que es patógeno a un humano o un animal en un sitio que no está en o sobre|el cuerpo humano o animal.
7. - Un uso de conformidad con la reivindicación 6, en donde dicha composición se usa para desinfectar, con respecto a un microorganismo patógeno humano o animal, un artículo que se debe r ingerir por, o colocar directamente sobre o en, un humano o animal, o una superficie que está en necesidad del mismo.
8.- Un uso de conformidad con la reivindicación 7, en donde 5 dicho artículo es un alimento o un dispositivo o instrumento médico.
9 - Un uso de conformidad con la reivindicación 7, en donde dicha superficie se ubica dentro de un ambiente en donde: (a) examinación médica, diagnosis o tratamiento debe ocurrir; (b) un alimento se debe preparar o de lo contrario manejar o 10 almacenar; (c) lavado personal y/o sanidad debe ocurrir; y/o (d) una persona en riesgo particular de (i) adquirir una infección por un microorganismo; y/o (ii) siendo incapaz de evitar una infección microbiana sin 15 intervención médica.
10. - Un uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, en donde dicha composición comprende además un agente quelante.
11. - Una composición de conformidad con cualquiera de las 20 reivindicaciones 2 a 5, o un uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en donde el microorganismo es una bacteria o un hongo.
12.- Una composición o uso de conformidad con la rei indicación 11, en donde la bacteria es una especie patógena a partir de uno de los siguientes géneros: Pseudomonas, Listeria, Bacillus, Staphylococcus y Salmonella.
13. - Una composición o uso de conformidad con la reivindicación 11, en donde el hongo es una especie patógena a partir de uno de los siguientes géneros: Candida, Aspergitlus, Alternaría, Fusarium, Cryptococcus y Trichosporon.
14. - Una composición o uso de conformidad con la reivindicación 13, en donde el hongo puede causar infección fúngica invasiva, preferiblemente Candida albicans, Aspergillus fumigatus o Alternaría alternata.
15. - Un método de tratar un humano o animal que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo.
16 - Un método de prevenir o tratar una infección por un microorganismo que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo.
17.- Un método de matar, o inhibir el crecimiento de, un microorganismo que es patógeno a un humano o un animal en un sitio que no está sobre o en el cuerpo humano o animal, dicho método que comprende administrar a dicho sitio una composición que comprende una cantidad efectiva de un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo. RESUMEN DE LA INVENCIÓN Los inventores proveen una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para usarse en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por terapia o profilaxis, tal como para usarse en un método de tratar o prevenir una infección en o sobre un sujeto por un microorganismo. También se provee el uso de una composición que comprende un polipéptido antimicrobiano que comprende Blad o un variante activo del mismo para matar, o inhibir el crecimiento de, un microorganismo que es patógeno a un humano o un animal en un sitio que no está sobre o en el cuerpo humano o animal.
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2011315525B2 (en) * 2010-10-12 2016-05-12 Consumo Em Verde - Biotecnologia Das Plantas, S.A. Antimicrobial protein
PT105332A (pt) * 2010-10-12 2012-04-12 Cev Biotecnologia Das Plantas S A Agentes para utilização com antimicrobianos
BR122019022170B1 (pt) 2013-10-03 2021-03-02 Syngenta Participations Ag composição fungicida e método para controle de doenças em plantas úteis ou em seus materiais de propagação causadas por fitopatogênios
AU2017334047A1 (en) * 2016-09-30 2019-05-16 Instituto Superior De Agronomia Therapeutic protein
CN108633921A (zh) * 2018-04-19 2018-10-12 张友兰 含有β-羽扇豆球蛋白多肽和啶菌噁唑的杀菌组合物
CN112724257B (zh) * 2019-10-14 2023-09-19 江西缘生生物科技有限公司 具有强杀菌效果的杂合抗菌蛋白及其应用

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2125494A1 (en) * 1991-12-09 1993-06-24 Barry Berkowitz Composition and treatment with biologically active peptides and chelating agents
AUPO427596A0 (en) 1996-12-20 1997-01-23 Cooperative Research Centre For Tropical Plant Pathology Anti-microbial protein
FR2762512B1 (fr) 1997-04-24 2000-10-13 Pharmascience Lab Compositions a base d'huile de lupin, notamment a base d'huile de lupin et d'huile de germe de ble et leur utilisation en cosmetologie, en pharmacie et en tant que complement alimentaire
FR2792202B1 (fr) 1999-04-19 2003-06-13 Pharmascience Lab Extrait peptidique de lupin et composition pharmaceutique ou cosmetique ou nutraceutique comprenant un tel extrait
JP3757268B2 (ja) * 2001-08-22 2006-03-22 独立行政法人農業・生物系特定産業技術研究機構 ペプチドとキレート剤を含む殺菌性組成物
SE0102864D0 (sv) * 2001-08-29 2001-08-29 Svenska Miljoebolaget Svv Ab Antimicrorobial agent
US20040138176A1 (en) * 2002-05-31 2004-07-15 Cjb Industries, Inc. Adjuvant for pesticides
JP2004131500A (ja) 2002-09-19 2004-04-30 Fancl Corp 皮膚老化防止剤又は改善剤
BR0316776A (pt) * 2002-12-10 2005-10-25 Biosynexus Inc Formula para anti-infeccioso tópico
ITMI20030237A1 (it) 2003-02-11 2004-08-12 Indena Spa Uso della conglutina di lupino per il trattamento del
EP1664095B1 (en) * 2003-06-11 2008-12-31 Novozymes A/S Antimicrobial polypeptides
FR2865647B1 (fr) 2004-02-02 2006-04-07 Silab Sa Activites d'un principe actif obtenu a partir de poudre de semences d'alfalfa (medicago sativa), principe actif utilise et peocede d'obtention
FR2868703B1 (fr) 2004-04-08 2008-06-13 Expanscience Sa Lab Extrait total de lupin constitue d'un extrait de sucres de lupin et d'un extrait peptidique de lupin, procede d'obtention et utilisation
ITMI20041308A1 (it) 2004-06-29 2004-09-29 Fraunhofer Ges Zur Foerderung... Processo per la purificazione da seme di lupiom di frazioni proteiche attive sul metabolismo lipidico
PT2221383E (pt) * 2005-07-21 2015-07-24 Virgílio Borges Loureiro Sequência de nucleótidos que codifica um polipéptido antifúngico
US20070258996A1 (en) 2005-12-23 2007-11-08 The Sterilex Corporation Antimicrobial compositions
EP2018144A2 (en) 2006-04-13 2009-01-28 The Boots Company PLC Composition and uses thereof
JP2008099635A (ja) * 2006-10-20 2008-05-01 Nissan Chem Ind Ltd 新規抗菌タンパク質、その製造方法およびその用途
US7790188B2 (en) * 2006-12-27 2010-09-07 Food Industry Research And Development Institute Antifungal protein and usage thereof
FR2921836B1 (fr) * 2007-10-05 2013-01-18 Limousine D Applic Biolog Ditesilab Soc Ind Utilisation d'un principe actif combinant des principes actifs issus de medicago sativa et de lupinus albus pour lutter contre les poches sous les yeux
JP5071940B2 (ja) * 2008-12-25 2012-11-14 独立行政法人産業技術総合研究所 抗真菌剤
PT105332A (pt) * 2010-10-12 2012-04-12 Cev Biotecnologia Das Plantas S A Agentes para utilização com antimicrobianos
PT105331A (pt) * 2010-10-12 2012-04-12 Cev Biotecnologia Das Plantas S A Conservante alimentar
AU2011315525B2 (en) * 2010-10-12 2016-05-12 Consumo Em Verde - Biotecnologia Das Plantas, S.A. Antimicrobial protein
JP5564023B2 (ja) * 2011-09-08 2014-07-30 株式会社東芝 不揮発性記憶装置の製造方法

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