MX2013000281A - Polipeptidos de factor ix y metodos para usarlos. - Google Patents

Polipeptidos de factor ix y metodos para usarlos.

Info

Publication number
MX2013000281A
MX2013000281A MX2013000281A MX2013000281A MX2013000281A MX 2013000281 A MX2013000281 A MX 2013000281A MX 2013000281 A MX2013000281 A MX 2013000281A MX 2013000281 A MX2013000281 A MX 2013000281A MX 2013000281 A MX2013000281 A MX 2013000281A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
around
dose
activity
factor
polypeptide
Prior art date
Application number
MX2013000281A
Other languages
English (en)
Other versions
MX356527B (es
Inventor
Glenn Pierce
Haiyan Jiang
Samantha Truex
Robert T Peters
Original Assignee
Biogen Idec Hemophilia Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45441870&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MX2013000281(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Biogen Idec Hemophilia Inc filed Critical Biogen Idec Hemophilia Inc
Publication of MX2013000281A publication Critical patent/MX2013000281A/es
Publication of MX356527B publication Critical patent/MX356527B/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

La presente invención proporciona métodos de administración del Factor IX, métodos de administración de polipéptidos quiméricos e híbridos que comprenden Factor IX, polipéptidos e híbridos que comprenden Factor IX, polinucleótidos que codifican tales polip´ptidos quiméricos e híbridos, células que comprenden tales polinucleótidos y métodos para producir tales pilipéptidos quiméricos e híbridos empleando tales células.

Description

POLIPEPTIDOS DE FACTOR IX Y METODOS PARA USARLOS Campo de la Invención En líneas generales, la presente invención se refiere al campo del tratamiento de trastornos hemostáticos.
Antecedentes de la Invención La hemofilia B (también conocida como enfermedad de Christmas) es uno de los trastornos hemorrágicos más comúnmente heredados en el mundo. Esta tiene como consecuencia la disminución de la actividad coagulante in vivo e in vitro y requiere amplio seguimiento médico a lo largo de la vida del individuo afectado. En casos en los que no se interviniera, el individuo afectado sufriría hemorragias espontáneas en las articulaciones, que producen dolor agudo e inmovilidad debilitante, también prevalecen hemorragias en los músculos que resultaría en la acumulación de sangre en esos tejidos; hemorragia espontánea en la garganta y cuello que podría ocasionar asfixia si no se tratara en forma inmediata; hemorragia renal y hemorragia aguda posterior a cirugía, heridas accidentales menores o extracciones dentales .
Como mínimo, la coagulación sanguínea normal in vivo requiere las serín proteasas factores II (protrombina) , VII, IX, X y XI (proteínas soluble del plasma) ; cofactores que incluyen la proteína transmembrana factor tisular y las REF: 238060 proteínas plasmáticas Factores V y VIII; fibrinógeno, el Factor XIII transglutaminasa, fosfolípido (incluso plaquetas activadas) y calcio. Se requieren proteínas adicionales que incluyen calicreína, cininógenos de alto peso molecular y factor XII para algunos análisis de coagulación y pueden desempeñar un rol in vivo en condiciones patológicas.
En la hemofilia, la coagulación sanguínea se ve perturbada por la falta de determinados factores de coagulación del plasma. La hemofilia B es causada por una deficiencia del Factor IX que puede deberse tanto a la síntesis disminuida de la proteína de Factor IX o a una molécula defectuosa con actividad reducida. El tratamiento de la hemofilia se lleva a cabo mediante el reemplazo del factor de coagulación faltante por concentrados de factor endógenos altamente enriquecidos en Factor IX. Sin embargo, la generación de tal concentrado de sangre presenta dificultades técnicas, tal como se describe a continuación.
La purificación del Factor IX a partir de plasma (Factor IX derivado de plasma, pdFIX) produce casi exclusivamente Factor IX activo. Sin embargo, tal purificación de factor IX a partir de plasma resulta muy difícil dado que el Factor IX solo se encuentra presente en baja concentración en el plasma (5 µg/mL. Andersson, Thrombosis Research 7: 451 459 (1975). Adicionalmente , la purificación a partir de la sangre requiere la eliminación o inactivación de agentes infecciosos tales como el VIH y el VHC. Además, pdFIX tiene una semivida breve y, por lo tanto, requiere dosificación frecuente. El factor IX recombinante (rFIX) también se encuentra disponible, pero padece de la misma semivida breve y la necesidad de dosificación frecuente (por ejemplo, 2-3 veces por semana para profilaxis) tal como pdFIX. Asimismo, rFIX presenta una recuperación gradual menor (valor K) en comparación con pdFIX, y requiere el uso de dosis mayores de rFIX que aquellas para pdFIX.
La reducción de la mortalidad, la prevención del daño en articulaciones y la mejora en la calidad de vida han sido algunos de los logros importantes debidos al desarrollo del Factor IX recombinante y derivado del plasma. La protección prolongada de hemorragia representaría otro avance clave en el tratamiento de pacientes con hemofilia B. Sin embargo, hasta la fecha no se han desarrollado productos que permitan la protección prolongada. Por lo tanto, persiste una necesidad de métodos mejorados para tratar la hemofilia ocasionada por deficiencia del Factor IX que sean más tolerables y más eficaces que las terapias actuales.
Breve Descripción de la Invención La presente invención proporciona métodos de administración del Factor IX que emplean polipéptidos quiméricos que comprenden Factor IX e híbridos de tales polipéptidos quiméricos, polipéptidos quiméricos que comprenden Factor IX e híbridos de tales polipéptidos quiméricos, polinucleótidos que codifican tales polipéptidos quiméricos e híbridos, células que comprenden tales polinucleótidos y métodos para producir tales polipéptidos quiméricos e híbridos empleando tales células. En algunas modalidades el polipéptido quimérico de Factor IX es un polipéptido quimérico compañero de unión (BP, por sus siglas en inglés) de Factor IX FcRn tal como un polipéptido quimérico de Factor IX Fe. En otras modalidades, el polipéptido quimérico de Factor IX es un polipéptido de Factor IX-XTEN.
La presente invención proporciona un método de administración del Factor IX a un sujeto que lo necesita que comprende la administración al sujeto de una dosis de al menos alrededor de 10, al menos alrededor de 20 o al menos alrededor de 25 Ul/kg de un polipéptido quimérico BP de Factor IX FcRn, por ejemplo, un polipéptido quimérico de Factor IX-Fe o un polipéptido quimérico de Factor IX-XTEN, al menos alrededor de una vez por semana o intervalos de dosificación mayores.
En algunas modalidades, el nivel de plasma de un polipéptido quimérico alcanza una concentración mínima promedio de al menos alrededor de 1 Ul/dl luego de al menos alrededor de 6 días en al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 90%, o alrededor de 100% de una población de pacientes o alcanza una concentración mínima de al menos alrededor de 1, 2, 3, 4, o 5 Ul/dl luego de al menos alrededor de 6 días en un sujeto. En algunas modalidades, el nivel de plasma del polipéptido' quimérico alcanza una concentración mínima promedio de alrededor de 1-5 o 1-3 Ul/dl. La concentración mínima o concentración mínima promedio puede alcanzarse luego de alrededor de 6, alrededor de 7, alrededor de 8, alrededor de 9, alrededor de 10, alrededor de 11, alrededor de 12, alrededor de 13, alrededor de 14, alrededor de 15, alrededor de 16, alrededor de 17, alrededor de 18, alrededor de 19, alrededor de 20, alrededor de 21, alrededor de 22, alrededor de 23, alrededor de 24, alrededor de 25, alrededor de 26, alrededor de 27, alrededor de 28, alrededor de 29, alrededor de 30, alrededor de 31, alrededor de 32, alrededor de 33, alrededor de 34, alrededor de 35, alrededor de 36, alrededor de 37, alrededor de 38, alrededor de 39 o alrededor de 40 días .
En algunas modalidades el polipéptido quimérico presenta gran reducción en la fosforilación y la sulfatación en comparación con el Factor IX derivada del plasma. En algunas modalidades, el polipéptido quimérico se encuentra menos de 25% fosforilado y menos de 25% sulfatado, por ejemplo, menos de 25% completamente fosforilado y sulfatado. En algunas modalidades, el polipéptido quimérico se encuentra menos de alrededor de 10% fosforilado y menos de alrededor de 9% sulfatado. ' En algunas modalidades, el polipéptido quimérico tiene un patrón/distribución de carboxilación gamma, un contenido de carboxilación gamma, un patrón/distribución de sialilación y/o un contenido de sialilación similar a (es decir, dentro de un intervalo de 10% de) o los mismos que aquellos del polipéptido quimérico Factor IX Fe en Ejemplos 5-6.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico tiene una recuperación gradual mayor de 0.7 o mayor de 0.75 g/ml o (antígeno) . En algunas modalidades, el polipéptido quimérico tiene una recuperación gradual (valor K) promedio (actividad; observada) de al menos alrededor de 0.8, al menos alrededor de 0.9 o al menos alrededor de 1 UI/dL por Ul/kg.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico presenta uno o más parámetros farmacocinéticos en la población de pacientes o en el sujeto, seleccionado del grupo que consiste en: (a) un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 3.36 ± 0.93 mL/hora/kg, un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 3.0-3.72, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7 o 3.72 mL/hora/kg, un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes que es 2.5 veces inferior que el aclaramiento de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP, un aclaramiento (CL) (actividad) en el sujeto de alrededor de 1.84-4.58 mL/hora/kg; (b) un tiempo medio de residencia (TMR) promedio (actividad) en la población de pacientes de al menos alrededor de 68.05 ± 11.16 horas, un TMR promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76 o 78 horas , un TMR promedio (actividad) en la población de pacientes que es alrededor de 3 veces mayor que el TMR promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP, un tiempo de residencia promedio (TMR) (actividad) en el sujeto de alrededor de 53.1-85.8 horas, un tiempo medio de residencia (TMR) (actividad) en el sujeto de al menos alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70, alrededor de 75, alrededor de 80, alrededor de 85 o alrededor de 90 horas; (c) un ti2beta promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 52.5 ± 9.2 horas; un ti2beta promedio (actividad) en la población de pacientes que es alrededor de 47-60 horas, alrededor de 47, alrededor de 48, alrededor de 49, alrededor de 50, alrededor de 51, alrededor de 52, alrededor de 53, alrededor de 54, alrededor de 55, alrededor de 56, alrededor de 57, alrededor de 58, alrededor de 59, alrededor de 60 horas; un ti2beta promedio (actividad) en la población de pacientes que es aproximadamente 3 veces mayor que el ti/2beta promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP, un t1/2beta (actividad) en el sujeto de alrededor de 40-67.4, alrededor de 40, alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70 o alrededor de 75 horas; (d) una recuperación gradual (valor K) (actividad, observada) en la población de pacientes de alrededor de 0.93 + 0.18 UI/dL por Ul/kg; una recuperación gradual (valor K) (actividad, observada) en la población de pacientes de alrededor de 0.85-1.0, alrededor de 0.85, alrededor de 0.86, alrededor de 0.87, alrededor de 0.88, alrededor de 0.89, alrededor de 0.90, alrededor de 0.91, alrededor de 0.92, alrededor de 0.93, alrededor de 0.94, alrededor de 0.95, alrededor de 0.96, alrededor de 0.97, alrededor de 0.98, alrededor de 0.99, alrededor de 1.0, alrededor de 1.05, alrededor de 1.10 o alrededor de 1.15 UI/dL por Ul/kg; una recuperación gradual (valor K) (actividad, observada) en la población de pacientes que es alrededor de 24% mejor que la recuperación gradual promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; una recuperación gradual (valor K) (actividad; observada) en el sujeto de alrededor de 0.62-1.17 UI/dL por Ul/kg; (e) un Vss promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 226 + 67.76 (corregido a 69.8) mL/kg; un Vss promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 200-300, alrededor de 200, alrededor de 210, alrededor de 220, alrededor de 230, alrededor de 240, alrededor de 250, alrededor de 260, alrededor de 270, alrededor de 280, alrededor de 290 o alrededor de 300 mL/kg; un Vss (actividad) en el sujeto de alrededor de 145-365 mL/kg; (f) una AUC/dosis promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 32.44 ± 10.75 UI*h/dL por Ul/kg; una AUC/dosis promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 26-40, alrededor de 26, alrededor de 27, alrededor de 28, alrededor de 29, alrededor de 30, alrededor de 31, alrededor de 32, alrededor de 33, alrededor de 34, alrededor de 35, alrededor de 36, alrededor de 37, alrededor de 38, alrededor de 39 o alrededor de 40 UI*h/dL por Ul/kg; una AUC/dosis promedio (actividad) en el sujeto de alrededor de 21.80-54.30 UI*h/dL por Ul/kg.
En algunas modalidades, la dosis de polipéptido quimérico contiene un nivel (0.01-0.001%) significativamente menor (10-100 veces) de FIX activado (FlXa) que los productos de Factor IX tales como MONONINE™ (pdFIX; CSL Behring) ) o BENEFIX™ (Wyeth; rFIX) (0.1%) actualmente disponibles comercialmente . Tal nivel puede ser 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100 veces menor que en los productos actualmente comercializados, o o.oi, 0.05, 0.0033, 0.0025, 0.002, 0.00167, 0.00142, 0.00125, 0.00111 O 0.001%.
En algunas modalidades el intervalo de dosificación es 6-18, 6-10, 9-18, al menos 6, al menos 7, al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 16, al menos 17 o al menos 18 días, semanalmente, dos veces al mes o una vez al mes. El intervalo de dosificación puede ser un intervalo de dosificación profiláctica, un intervalo de dosificación profiláctica fijo o un intervalo de dosificación profiláctica individual.
Los métodos de la invención son puestos en práctica en un sujeto que requiere control o prevención de hemorragia o episodios hemorrágicos, que necesita tratamiento intermitente, que necesita tratamiento profiláctico o que necesita tratamiento a demanda.
La dosis terapéuticas utilizadas en los métodos de la invención son alrededor de 25-180, alrededor de 20-180, alrededor de 20-50, alrededor de 20-100, alrededor de 10-180, alrededor de 10-50, alrededor de 10-30 o alrededor de 50-100 Ul/kg. La dosis puede ser una dosis fija o individual.
En algunas modalidades, el polipéptido quimérico es administrado en forma intravenosa o subcutánea.
El sujeto en los métodos de la invención puede ser un sujeto humano o puede ser un mamífero no humano. Los mamíferos no humanos incluyen ratones, perros, primates, monos, gatos, caballos, vacas, cerdos, y otros animales domésticos y pequeños animales.
El polipéptido quimérico puede encontrarse en la forma de un híbrido que comprende un segundo polipéptido asociado al polipéptido quimérico, donde el segundo polipéptido comprende o consiste esencialmente en un FcRn BP, por ejemplo, un Fe. El polipéptido quimérico puede ser al menos 90%, al menos 95% o 100% idéntico a la secuencia del Factor IX, la secuencia de Fe o tanto la secuencia del Factor IX como la de Fe en las Tablas 2A (SEC ID N° : 2) y/o 2B (SEC ID N° : 4), con o sin la o las secuencias de señalización y propéptido .
El polipéptido quimérico o híbrido puede ser administrado como parte de una composición farmacéutica que comprende al menos un excipiente.
Además, la invención proporciona los propios polipéptidos quiméricos e híbridos descritos anteriormente, los polinucleótidos que los codifican, células embrionarias humanas de cultivo que comprenden polinucleótidos y métodos para producir tales polipéptidos quiméricos e híbridos, y los polipéptidos producidos mediante tales métodos.
Breve Descripción de las Figuras FIG. 1. Esquema de un tipo de polipéptido quimérico de Factor IX, un híbrido de Factor IX-Fc.
FIG. 2. Concentración FIXFc promedio grupal en función de perfiles de tiempo; comparación de dosis nominales.
FIG. 3. Actividad FIXFc promedio grupal en función de perfiles de tiempo; comparación de dosis nominales.
FIG. 4. Árbol de decisión de sustracción de valores de referencia .
FIG. 5. Aumento proporcional de dosis en Cmax y AUC para la actividad de FIX.
FIGS . 6A - 6B. Duración terapéutica estimada de rFIXFc a 50 (fig. 6A) y 100 (fig. 6B) Ul/kg.
FIG. 7. Aumento proporcional de dosis en Cmax y AUC para el antígeno de FIX.
FIGS. 8A - 8B. Estimados farmacocinéticos para antígeno rFIXFc a dosis nominales de 50 (fig. 8A) y 100 (fig. 8B) Ul/kg.
FIG. 9. Excelente correlación entre la actividad de rFIXFc y los niveles de antígeno. Debe observarse que debido al recálculo de la actividad PK, tal como se menciona en el Ejemplo 11, R2 = 0.946.
FIG. 10. Modificaciones postraduccionales y de estructura de dominio de rFIX-Fc. PRO: Propéptido escindido mediante enzima de procesamiento. GLA: contiene 12 residuos de ácido glutámico (Gla) ?-carboxilados . ACT PEP: péptido de activación escindido para proporcionar proteasa activa. Otras modificaciones: N- y O- glicosilación, ß-hidroxilación Asp(64), sulfatación de Tyr, fosforilación de Ser.
FIG. 11. Gel SPS-PAGE de monómeros de FIXFc purificado e intermedios de purificación. Se analizaron muestras de diferentes etapas en la purificación de FIXFc mediante SDS-PAGE no reductor. Carril 1: Marcadores de peso molecular SeeBlue Plus (Invitrogen) . Carril 2: Carril vacío Carril 3: Carga de proteína A. Carril 4: Eluido de proteína A. Carril 5: Eluido de fractogel DEAE . Carril 6: Eluido Q Seph FF. Carril 7: FIXFc final a granel. Carril 8: Carril vacío Carril 9: FIXFc reducida final a granel.
FIG. 12. Actividad funcional de FIXFc en ratones con deficiencia de FIX. En tiempo = 0 se administraron dosis intravenosas de 219 Ul/kg FIXFc (3 o 4 por grupo, 6 grupos, n = 23) o 200 Ul/kg rFIX (3 o 4 por grupo, 5 grupos, n = 23) a ratones con deficiencia de FIX. Se recolectaron muestras de sangre en varios momentos luego de la dosificación (0.25 horas a 96 horas) y se analizaron para determinar la actividad coagulante mediante ensayo de actividad de FIX. *La actividad de rFIX no es detectable en todos los ratones posteriormente a 48 horas luego de la dosificación.
FIG. 13. Tiempo de coagulación de sangre entera de FIXFc en función de FIX recombinante en ratones con deficiencia de FIX. Se administraron dosis intravenosas de 50 Ul/kg de FIXFc o 50 Ul/kg de rFIX a ratones con deficiencia de FIX (6 por grupo) . Se recolectaron muestras de sangre antes de la dosificación y en diversos momentos después de ella. Se incubaron las muestras de sangre a 37 °C y se revisaron visualmente una vez por minuto para determinar la presencia de un coágulo de sangre. Se registró el tiempo necesario para la formación de un coágulo y, una vez que la actividad coagulante vuelve a la referencia (es decir, a la no formación de coágulos) , no se obtuvieron muestras adicionales (las muestras fueron recolectadas 15 minutos a 144 horas para FIXFc o 15 minutos a 72 horas para rFIX) .
FIGS. 14A - 14B. Farmacodinámica de FIXFc en ratones con deficiencia de FIX. Se administraron dosis de 219 Ul/kg FIXFc (5 o 6 por grupo, 6 grupos, n = 30) o 200 Ul/kg rFIX (4 o 5 por grupo, 6 grupos, n = 28) en los días 0, 4 y 8 a ratones con deficiencia de FIX. Se recolectaron muestras de plasma mediante punción cardiaca 15 minutos y 96 horas después de cada dosis y se midió la actividad coagulante mediante ensayo de actividad de FIX. También se recolectó plasma mediante sangrado de cola a 8, 24, 48 y 72 horas de cada dosis. Se midieron los niveles de FIXFc en todas las muestras usando ELISA específico para FIXFc. (fig. 14A) Actividad medida contra actividad calculada. Se midió la actividad coagulante de FIXFc mediante ensayos de actividad FIX 15 minutos y 96 horas después de tres dosis. Se determinó que la actividad coagulante in vitro para FIXFc era de 43.8 + 5.4 Ul/mg. Se tomaron como base esta actividad (Ul/mg) y los niveles de proteína medidos para determinar un nivel de actividad coagulante del plasma calculado para los puntos de 15 minutos, 8, 24, 48, 72 y 96 horas luego de cada dosis, (fig. 14B) En ratones con deficiencia de FIX tratados con hasta tres dosis de 200 UI/kg de rFIX se midieron los niveles de FIX con ELISA específico para FIX. A partir de las actividades específicas de FIXFc y rFIX medidas fue posible comparar la actividad coagulante calculada para todas las muestras analizadas por ELISA.
FIGS . 15A - 15C. Farmacocinética y farmacodinámica de FIXFc en perros con deficiencia de FIX. Se administraron 140 UI/kg de FIXFc por vía intravenosa a dos perros con hemofilia B. Se tomaron muestras de sangre 5, 15 y 30 minutos y 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 27, 30, 48, 51, 54, 72, 80, 96, 126, 144 y 168 horas luego de la dosis, (fig. 15A) Se empleó un ensayo ELISA tipo sandwich con un anticuerpo de captura de FIX y un anticuerpo de detección de Fc-HRP para medir la concentración de FIXFc intacto en las muestras de plasma del perro con hemofilia B. (fig. 15B) Se midió la actividad coagulante de FIX para todos los puntos de tiempo respecto a una curva estándar generada con FIXFc. (fig. 15C) Se analizó inmediatamente la sangre tomada de animales para determinar el tiempo de coagulación de la sangre entera. Las muestras de sangre se incubaron a 28 °C y se inspeccionaron visualmente una vez por minuto para determinar la presencia de coágulos y se registró el tiempo de formación de un coágulo.
FIG. 16. Farmacocinética de FIXFc en monos Cynomolgus . Se administró una dosis única (0.5, 2 y 10 mg/kg( que corresponde aproximadamente a 25, 100 o 500 Ul/kg) de FIXFc (n = 2, 3 y 3, respectivamente) a los monos. Se tomaron muestras de sangre 0.25, 0.5, 1, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144 y 168 horas después de la dosis y se preparó el plasma para analizar la concentración de proteínas mediante ELISA específico para FIXFc.
FIGS. 17A - 17D. rFIXFc y BENEFIX™ exhiben actividad y respuesta a la dosis comparables en la sangre entera de ratones HemB. (fig. 17A) Parámetros ROTEM"5' Se colocaron rFIX o BENEFIX™ en la sangre de ratones HemB y se midieron los parámetros de coagulación mediante ROTEM* . (fig. 17B)-(fig. 17D) Respuesta a la dosis por medición de (fig. 17B) CT, (fig. 17C) CFT y (fig. 17D) ángulo Alfa.
FIG. 18. Evaluación de la eficiencia aguda en modelo de sangrado de cortes de la cola de ratones hemofílicos.
FIGS. 19A - 19B. (fig. 19A) Pérdida de sangre ocasionada por el corte en la cola de un ratón HemB individual tratado con rFIXFc o BENEFIX™. (fig. 19B) Respuesta a la dosis de rFIXFc y BENEFIX™ en pérdida media de sangre luego del corte en la cola de ratones HemB .
FIG. 20. Modelo de sangrado de corte transversal de la vena de la cola (TVT, por sus siglas en inglés) de ratones HemB: un modelo de sangrado venosos característico para pacientes con hemofilia grave.
FIGS. 21A - 2ID. Actividad prolongada de rFIXFc relativa a BENEFIX™ en ratones HemB tratados mediante sangre entera ROTEM* . (fig. 21A) CT, (fig. 21B) CFT, (fig. 21C) ángulo Alfa y (fig. 21D) correlación parcial entre actividad coagulante de sangre entera (CT) mediante ROTEM contra la actividad del plasma mediante aPTT.
FIG. 22. Eficacia prolongada de FIXFc relativa a BENEFIX™ en modelo de sangrado de corte transversal de vena de la cola (TVT, por sus siglas en inglés) de ratones HemB. (A) Supervivencia: Las tasas de supervivencia fueron comparables en ratones que recibieron BENEFIX™ 24 horas antes de TVT y en ratones que recibieron rFIXFc 72 horas antes de TVT y (B) Nuevo sangrado: Las tasas de sangrado fueron comparables en ratones que recibieron BENEFIX™ 24 horas antes de TVT y en ratones que recibieron rFIXFc 72 horas antes de TVT.
FIG. 23. Correlación entre la recuperación gradual de la actividad de rFIXFc en función del peso corporal en 12 sujetos que recibieron una única dosis de 12.5 a 100 Ul/kg de rFIXFc.
FIGS. 24A - 24C. El método de simulación de Monte Cario que emplea el modelo de PK estructural de la actividad de rFIXFc para construir los perfiles de actividad-tiempo y alcanzar el mínimo de 1 UI/dL sobre la referencia luego de regímenes de dosificación semanal (Fig. 24A) , cada 10 días (fig. 24B) o cada dos semanas (fig. 24C) . Se adoptaron los parámetros medios PK de la población y las variaciones relevantes entre sujetos e intrasujeto de la Fase l/2a del estudio clínico. Se simularon 1000 sujetos por régimen de dosificación con 14 a 16 puntos de muestreo para cada sujeto, y el promedio ± SD de los perfiles de actividad-tiempo de los 1000 sujetos fue construido gráficamente para diferentes regímenes de dosificación.
FIGS. 25A - 25C. El método de simulación de Monte Cario para dosis de rFIXFc que alcancen la concentración mínima de 1 Ul/dL (1%) basada en datos farmacocinéticos recalculados . (fig. 25A) una vez por semana, (fig. 25B) cada 10 días y (fig. 25C) cada dos semanas.
Descripción Detallada de la Invención La presente invención proporciona un método para tratar la deficiencia de Factor IX, por ejemplo, la hemofilia B, con el Factor IX, usando un intervalo de dosificación menor y/o parámetros farmacocinéticos mejorados respecto a lo que es posible con los productos de Factor IX conocidos en la actualidad. Asimismo, la presente invención proporciona polipéptidos quiméricos de Factor IX, polinucleótidos quiméricos de Factor IX y métodos de producción.
Tal como se usa en la presente, "administración" significa proporcionar un polipéptido de Factor IX farmacéuticamente aceptable de la invención a un sujeto mediante una vía farmacéuticamente aceptable. Las vías de administración preferidas son la intravenosa, por ejemplo, inyección intravenosa, e infusión intravenosa, por ejemplo, vía acceso venoso central. Vías de administración adicionales incluyen la administración subcutánea, intramuscular, oral, nasal y pulmonar, preferentemente la subcutánea. Los polipéptidos quiméricos de Factor IX y las proteínas híbridas pueden ser administradas como parte de una composición farmacéutica que comprende al menos un excipiente. Algunas ventajas de la presente invención incluyen: mejora del cumplimiento del régimen, reducción de hemorragias intermenstruales, aumento de protección de las articulaciones ante hemorragias, prevención de daño en articulaciones, reducción de la morbilidad, reducción de la mortalidad, protección prolongada contra hemorragias, disminución de eventos trombóticos y mejora en la calidad de vida.
Tal como se usa en la presente, "polipéptido quimérico" significa un polipéptido que incluye al menos dos polipéptidos (o porciones de ellos, tales como subsecuencias o péptidos) de diferentes fuentes. Los polipéptidos quiméricos pueden incluir dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete o más polipéptidos o partes de ellos de diferentes orígenes, tales como diferentes genes, diferentes ADNc o diferente animal u otras especies . Los polipéptidos quiméricos pueden incluir uno o más enlaces que unen diferentes polipéptidos o partes de ellos. Por lo tanto, los polipéptidos o partes de ellos pueden unirse directamente o pueden encontrarse unidos en forma indirecta, por enlaces, o ambos, en un único polipéptido quimérico. Los polipéptidos quiméricos pueden incluir péptidos adicionales tales como secuencias de señalización y secuencias tales como 6His y FLAG que asisten en la purificación o detección de proteínas. Además, los polipéptidos quiméricos pueden presentar adiciones de aminoácidos o péptidos en el N-terminal y/o el extremo C. Los polipéptidos quiméricos de Factor IX-FcRn BP son ejemplos de polipéptidos quiméricos de la invención, por ejemplo, polipéptidos quiméricos de Factor IX-Fe tales como FIXFc en la Figura 1, SEC ID N° : 2 (Tabla 2) y los Ejemplos 1-4, con o sin su secuencia de señalización y propéptido. Otros ejemplos de polipéptidos quiméricos de la invención incluyen, de modo no taxativo, polipéptidos quiméricos de Factor IX-XTEN. El Factor IX puede fusionarse ya sea al N-terminal o al C-terminal de XTEN.
El polipéptido quimérico puede comprender una secuencia al menos 90% o al menos 95% o al menos 100% idéntica al Factor' IX y FcRn BP, por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de Fe presentada en la Tabla 2A si secuencia de señalización y secuencia de propéptido (aminoácidos 1 a 642 de la SEC ID N° : 2); o, en forma alternativa, con secuencia de propéptido; o, en forma alternativa, con una secuencia de señalización y una secuencia de propeptido.
Tal como se usan en la presente, "cultivo" y "cultivar" significan incubar células en condiciones in vitro que permiten la reproducción o división celular, o mantener las células en estado vivo. "Células cultivadas", tal como se usa en la presente, significa células que se propagan in vi tro.
Tal como se usan en la presente, "Factor IX" y "FIX" significan polipéptido de Factor IX funcional en su rol usual en la coagulación, salvo que se especifique lo contrario. Por lo tanto, el término Factor IX incluye polipéptidos variantes que son funcionales y los polinucleótidos que codifican los polipéptidos variantes funcionales. Los polipéptidos de Factores IX preferidos incluyen polipéptidos Factores IX humanos, bovinos, porcinos, caninos, felinos y murinos . Las secuencias de polinucleótidos y polipéptidos de longitud completa de Factor IX son conocidas, así como diversas variantes funcionales, por ejemplo, fragmentos, mutaciones y versiones modificadas. Los polipéptidos de Factor IX incluyen Factor IX de longitud completa, Factor IX de longitud completa menos Met en el extremo N, Factor IX de longitud completa menos la secuencia de señalización, Factor IX maduro (menos la secuencia de señalización y el propéptido) y Factor IX maduro con un Met adicional en el extremo N. Preferentemente, el Factor IX es producido por medios recombinantes ("Factor IX recombinante" o "rFIX"), es decir, no tiene origen natural o deriva de plasma.
Se conoce gran cantidad de variantes funcionales del Factor IX. La publicación internacional número WO 02/040544 A3 , que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, describe mutaciones que exhiben resistencia aumentada a la inhibición por heparina en la página 4, líneas 9-30 y página 15, líneas 6-31. La publicación internacional número WO 03/020764 A2, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, describe mutaciones de Factor IX con inmunogenicidad de linfocitos T reducida en las Tablas 2 y 3 (en las páginas 14-24) y en la página 12, líneas 1-27. La publicación internacional número WO 2007/149406 A2 , que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, describe moléculas de Factor IX con mutaciones funcionales que exhiben estabilidad proteica aumentada, semivida in vivo e in vitro aumentada y resistencia aumentada a las proteasas en la página 4, línea 1, a página 19, línea 11. WO 2007/149406 A2 también describen moléculas variantes o quiméricas de Factor IX en la página 19, línea 12 a página 20, línea 9. La publicación internacional número WO 08/118507 A2, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, describe mutaciones de Factor IX que exhiben actividad coagulante aumentada en la página 5, línea 14 y página 6, línea 5. La publicación internacional número WO 09/051717 A2, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, describe mutaciones de Factor IX que presentan un número mayor de sitios de glicosilación N y/u O enlazados, que tiene como resultado una semivida y/o recuperación aumentadas en la página 9, línea 11 a página 20, línea 2. La publicación internacional número WO 09/137254 A2, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, también describe mutaciones de Factor IX con cantidades mayores de sitios de glicosilación en la página 2, párrafo [006] a página 5, párrafo [011] y página 16, párrafo [044] a página 24, párrafo [057] . La publicación internacional número WO 09/130198 A2 , que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, describe moléculas de Factor IX con mutaciones funcionales que presentan un número mayor de sitios de glicosilación, que tiene como resultado una semivida aumentada, en la página 4, línea 26 a página 12, línea 6. La publicación internacional número WO 09/140015 A2, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, describe mutaciones funcionales de Factor IX que presentan un número mayor de residuos Cys, que pueden ser usadas en la conjugación de polímeros (por ejemplo, PEG) , en la página 11, párrafo
[0043] a página 13, párrafo
[0053] .
Además, se han identificado cientos de mutaciones no funcionales en Factor IX en pacientes con hemofilia, muchas de las que se presentan en la Tabla 1 en las páginas 11-14 de la publicación internacional número O 09/137254 A2 , que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia. Tales mutaciones no funcionales no están incluidas en la invención, pero proporciona guía adicional sobre cuáles mutaciones tienen mayor o menor probabilidad de resultar en un polipéptido funcional de Factor IX.
El Factor IX (o parte del Factor IX de un polipéptido quimérico) puede ser al menos 90% o al menos 95% o 100% idéntico a una secuencia de aminoácidos de Factor IX que se presenta en la Tabla 2A sin una secuencia de señalización y secuencia de propéptido (aminoácidos 1 a 415 de SEC ID N°: 2) o, de forma alternativa, con una secuencia de propéptido o con una secuencia de señalización y propéptido (Factor IX de longitud completa) .
La actividad coagulante de Factor IX se expresa en unidades internacionales (UI) . Una UI de actividad de Factor IX corresponde aproximadamente a la cantidad de Factor IX en un mililitro de plasma humano normal. Se encuentran disponibles varios ensayos para medir la actividad de Factor IX, que incluyen el ensayo de coagulación en una etapa (tiempo de tromboplastina parcial activada; aPTT) , tiempo de generación de trombina (TGA) y tromboelastometría rotacional (ROTEM*) . Véase, por ejemplo, el Ejemplo 3.
Tal como se usa en la presente, "compañero de unión de FcRn" o "FcRn BP" significa compañeros de unión del receptor de Fe neonatal funcional (FcRn) , a menos que se especifique otra cosa. Un compañero de unión de FcRn es cualquier molécula que puede unirse específicamente con el receptor FcRn con el consiguiente transporte activo del compañero de unión de FcRn por el receptor FcRn. Por lo tanto, el término FcRn BP incluye cualquier variante funcional de IgG Fe. Por ejemplo, la región de la porción Fe de la IgG que se une al receptor FcRn se describió en función de la cristalografía de rayos X (Burmeister et ál . 1994, Nature 372:379, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia) . La principal área de contacto de Fe con FcRn se encuentra cerca de la unión de los dominios CH2 y CH3. Los contactos de Fe-FcRn se encuentran todos dentro de una única cadena pesada de Ig. FcRn BP incluye IgG total, el fragmento De de IgG y otros fragmentos de IgG que incluyen la región de unión de FcRn completa. Los principales sitios de contacto incluyen los residuos de aminoácidos 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 y 314 del dominio CH2 y los residuos de aminoácidos 385-387, 428 y 433-436 del dominio CH3. Las referencias a la numeración de aminoácidos de inmunoglobulinas o fragmentos o regiones de inmunoglobulina, se basan en Kabat et ál. 1991, Sequences of Proteins of Intmunological Interest, Departamento de Salud Pública de los EE.UU., Bethesda; MD, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia. (Se ha aislado el receptor FcRn de diversas especies de mamíferos que incluyen los seres humanos. Se conocen las secuencias de FcRn humano, FcRn de rata y FcRn de ratón (Story et ál . 1994, J. Exp. Med. 180: 2377), que se incorporas en la presente en su totalidad mediante esta referencia.) Un FcRn BP puede comprender los dominios CH2 y CH3 de una inmunoglobulina con o sin la región bisagra de la inmunoglobulina. Se proporcionan variantes de FcRn BP de ejemplo en WO 2004/101740 y WO 2006/074199, que se incorporan a la presente en su totalidad mediante esta referencia .
FcRn BP también incluye albúmina y fragmentos de ella que se unen al FcRn. Preferentemente la albúmina es albúmina humana. El Factor IX puede unirse al N-terminal de la albúmina o al C-terminal de la albúmina, siempre que el componente Factor IX de la proteína de fusión albúmina-Factor IX pueda ser procesada por una proproteína convertasa enzimáticamente activa para proporcionar un polipéptido que contiene un Factor IX procesado. Son conocidos ejemplos de albúmina, por e emplo, fragmentos de ella, que pueden ser empleados en la presente invención, por ejemplo en patente estadounidense N° 7,592,010; patente estadounidense N° 6,686,179 y Schulte, Thrombosis Res. 124 Suppl . 2:S6-S8 (2009) , todas las que se incorporan en la presente en su totalidad mediante esta referencia.
FcRn BP (o la parte FcRn BP de un polipéptido quimérico) puede contener una o más mutaciones y combinaciones de mutaciones.
FcRn BP (o la parte FcRn BP de un polipéptido quimérico) puede contener mutaciones que le confieren una semivida aumentada tales como M252Y, S254T, T256E y combinaciones de ellas, tal como se describe en Oganesyan et ál., Mol. Immunol . 46:1750 (2009), que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia; H433K, N434F y combinaciones de ellas, tal como se describen en Vaccaro et ál. , Nat . Biotechnol. 23:1283 (2005), que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia; las mutaciones presentadas en las páginas 1-2, párrafo
[0012] y en Ejemplos 9 y 10 de U.S. 2009/0264627 Al, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, y las mutaciones descritas en la página 2, párrafos
[0014] a
[0021] de U.S. 20090163699 Al, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia .
Además, FcRn BP (o la parte FcRn BP de un polipéptido quimérico) puede contener las siguientes mutaciones: La región Fe de IgG puede ser modificada de acuerdo con procesos reconocidos tales como la mutagénesis de sitio dirigido y similares para proporcionar IgG modificado o partes o fragmentos de Fe de ella que puedan unirse con FcRn. Tales modificaciones incluyen modificaciones alejadas de los sitios de contacto de FcRn, así como modificaciones dentro de los sitios de contacto que preservan o incluso mejoran la unión a FcRn. Por ejemplo, los siguientes residuos de aminoácidos simples en IgGl Fe (Fcyl) humana pueden ser sustituidos sin pérdida significativa de afinidad de unión dei Fe por FcRn: P238A, S239A, K246A, K248A, D249A, M252A, T256A, E258A, T260A, D265A, S267A, H268A, E269A, D270A, E272A, L274A, N276A, Y278A, D280A, V282A, E283A, H285A, N286A, T289A, K290A, R292A, E293A, E294A, Q295A, Y296F, N297A, S298A, Y300F, R301A, V303A, V305A, T307A, L309A, Q311A, D312A, N315A, K317A, E318A, K320A, K322A, S324A, K326A, A327Q, P329A, A330Q, A330S, P331A, P331S, E333A, K334A, T335A, S337A, K338A, K340A, Q342A, R344A, E345A, Q347A, R355A, E356A, M358A, T359A( K360A, N361A, Q362A, Y373A, S375A D376A, A378Q, E380A, E382A, S383A, N384A, Q386A, E388A, N389A, N390A, Y391F, K392A, L398A, S400A, D401A, D413A, K414A, R416A, Q418A, Q419A, N421A, V422A, S424A, E430A, N434A, T437A, Q438A, K439A, S440A, S444A y K447A ., donde, por ejemplo, P238A representa prolina de tipo salvaje sustituida con alanina en la posición número 238. Además de la alanina, pueden sustituirse otros aminoácidos con aminoácidos de tipo salvaje en las posiciones especificadas anteriormente. Es posible introducir mutaciones en Fe en forma individual y como resultado tener más de cien compañeros de unión de FcRn diferentes a Fe de origen natural. De manera adicional, es posible introducir combinaciones de dos, tres o más de estas mutaciones individuales en conjunto, y obtener cientos más de compañeros de unión de FcRn. Algunas de estas mutaciones pueden conferir nueva funcionalidad al compañero de unión de FcRn. Por ejemplo, una modalidad incorpora N297A y elimina un sitio de N-glicosilación muy conservado. Esta mutación tiene como efecto la reducción de la inmunogenicidad, asi mejora la semivida circulante del compañero de unión de FcRn, y el hacer que el compañero de unión de FcRn sea incapaz de unirse a FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB y FcyRIIIA sin comprometer la afinidad por FcRn (Routledge et ál. 1995, Transplantation 60:847, que se incorpora en la presente en su totalidad mediante esta referencia; Friend et ál . 1999, Transplantation 68:1632, que se incorpora en la presente en su totalidad mediante esta referencia; Shields et ál . 1995, J. Biol. Chem. 276:6591, que se incorpora en la presente en su totalidad mediante esta referencia) . Asimismo, parece que al menos tres receptores gamma de Fe humano reconocen un sitio de unión en IgG en el área de la bisagra inferior, generalmente en los aminoácidos 234-237. Por lo tanto, puede surgir otro ejemplo de nueva funcionalidad y de inmunogenicidad disminuida potencialmente a partir de las mutaciones de esta región como, por ejemplo, al reemplazar los aminoácidos 233-236 de IgGl "ELLG" humano en la secuencia correspondiente de IgG2 "PVA" (con la eliminación de un aminoácido) . Se ha demostrado que FcyRI, FcyRII y FcyRIII, que median en varias funciones efectoras, no se unirán a IgGl cuando las mutaciones hayan sido introducidas (Ward y Ghetie 1995 Therapeutic Immunology 2:77, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia y Armour et ál.1999, Eur. J. Immunol . 29:2613, que se incorpora en la presente en su totalidad mediante esta referencia) . La afinidad por FcRn puede ser aumentada más allá que la de tipo salvaje en algunas circunstancias, como ejemplo adicional de nueva funcionalidad que surge de las mutaciones anteriormente descritas. Esta afinidad aumentada puede reflejar un aumento en la tasa "directa", una disminución en la tasa "inversa" o un aumento en la tasa "directa" y una disminución en la tasa "inversa" . Las mutaciones que se cree que imparten una mayor afinidad para FcRn incluyen T256A, T307A, E380A y N434A (Shields et ál. 2001, J. Biol. Chem. 276:6591, que se incorpora en la presente en su totalidad mediante esta referencia) .
El FcRn BP (o parte de FcRn BP de un polipéptido quimérico) puede ser al menos 90% o al menos 95% o 100% idéntico a la secuencia de aminoácidos de Fe que se presenta en la Tabla 2A o 2B sin una secuencia de señalización (aminoácidos 1 a 227 de SEC ID N° : 2) o, de forma alternativa, con una secuencia de señalización.
Tal como se usa en la presente, polipéptidos y proteínas "híbridos" significa una combinación de un polipéptido quimérico con un segundo polipéptido. El polipéptido quimérico y el segundo polipéptido en un híbrido pueden asociarse entre sí por medio de interacciones proteína-proteína no covalentes, tales como interacciones carga-carga o hidrofóbicas . El polipéptido quimérico y el segundo polipéptido en un híbrido pueden asociarse entre sí por medio de enlaces covalentes, tales como puentes disulfuro. El péptido quimérico y el segundo péptido pueden asociarse entre sí por medio de más de un tipo de enlace, tal como enlaces no covalentes y disulfuro. En WO 2004/101740, O2005/001025 , patente estadounidense N° 7,404,956, patente estadounidense N° 7,348,004 y WO 2006/074199, cada una de las cuales se incorpora en su totalidad a la presente mediante esta referencia, se describen los híbridos. El segundo polipéptido puede ser una segunda copia del mismo polipéptido quimérico o puede ser un polipéptido quimérico no idéntico. En modalidades preferidas, el segundo polipéptido es un polipéptido que comprende un FcRn BP, por ejemplo, Fe. En modalidades preferidas, el polipéptido quimérico es un Factor IX-FcRn BP, por ejemplo, polipéptido quimérico de Factor IX-Fe, y el segundo polipéptido consiste esencialmente de Fe. Véase, por ejemplo, la Figura 1, los Ejemplos 1-3 y la Tabla 2 (SEC ID °s: 2 y 4) . Véase, por ejemplo, US 7404956, que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia.
El segundo polipéptido en un híbrido puede comprender o consistir esencialmente de una secuencia al menos 90% o al menos 95% o 100% idéntica a la secuencia de aminoácidos que se presenta en la Tabla 2B sin una secuencia de señalización (aminoácidos 1 a 227 de SEC ID N° : 4) o, de forma alternativa, con una secuencia de señalización.
El polipéptido de la presente invención también incluye Factor IX fusionado a uno o más polipéptidos de XTEN. Schellenburger et ál . , Nat. Biotech. 27:1186-90 (2009), que se incorpora en su totalidad a la presente mediante esta referencia. El Factor IX puede fusionarse al N-terminal del polipéptido XTEN o al C-terminal del polipéptido XTEN. Los polipéptidos XTEN incluyen, de modo no taxativo, aquellos descritos en WO 2009/023270, WO 2010/091122, WO 2007/103515, US 2010/0189682 y US 2009/0092582, cada una de las cuales se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia.
Tal como se usa en la presente, "intervalo de dosificación" significa la cantidad de tiempo que trascurre entre la administración de múltiples dosis a un sujeto. El intervalo de dosificación en los métodos de la invención que emplea un FIX-FcRn BP quimérico, por ejemplo un FIX-Fc quimérico, puede ser al menos alrededor de una y una vez y media a ocho veces más largo que el intervalo de dosificación requerido por una cantidad equivalente (en Ul/kg) del Factor IX sin el FcRn BP, por ejemplo, parte Fe (es decir, un polipéptido que consiste en el FIX) . El intervalo de dosificación cuando se administra, por ejemplo, un polipéptido quimérico de Factor IX-Fc (o un híbrido) de la invención puede ser al menos alrededor de una y una vez y media más largo que el intervalo de dosificación requerido por una cantidad equivalente el Factor IX sin el FcRn BP, por ejemplo, parte Fe (es decir, un polipéptido que consiste en el Factor IX) . El intervalo de dosificación puede ser al menos alrededor de una y una vez y media a ocho veces más largo que el intervalo de dosificación requerido por una cantidad equivalente del Factor IX sin, por ejemplo, la parte Fe (o un polipéptido que consiste en el Factor IX) .
En algunas modalidades el intervalo de dosificación es 6-18, 6-10, 9-18, al menos 6, al menos 7, al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 16, al menos 17 o al menos 18 días. El intervalo de dosificación puede ser al menos una vez a la semana y puede ser 6-10 días, por ejemplo, alrededor de 7-10, alrededor de 7-9, alrededor de 7-8, alrededor de 8-10, alrededor de 9-10, alrededor de 6-7, alrededor de 8-9, alrededor de 6, alrededor de 7, alrededor de 8, alrededor de 9 o alrededor de 10 días.
El intervalo de dosificación puede ser 9-18 días, por ejemplo, alrededor de 9-17, alrededor de 9-16, alrededor de 9-15, alrededor de 9-14, alrededor de 9-13, alrededor de 9-12, alrededor de 9-11, alrededor de 9-10, alrededor de 10-18, alrededor de 11-18, alrededor de 12-18, alrededor de 13-18, alrededor de 14-18, alrededor de 15-18, alrededor de 16-18, alrededor de 17-18, alrededor de 10-11, alrededor de 11-12, alrededor de 12-13, alrededor de 13-14, alrededor de 14-15, alrededor de 15-16, alrededor de 16-17 días, alrededor de 9, alrededor de 10, alrededor de 11, alrededor de 12, alrededor de 13, alrededor de 14, alrededor de 15, alrededor de 16, alrededor de 17 o alrededor de 18 días. El intervalo de dosificación puede ser de 10-14 días. El intervalo de dosificación puede ser alrededor de dos semanas o dos veces al mes. El intervalo de dosificación puede ser mayor de 18 días, por ejemplo, alrededor de 19, alrededor de 20, alrededor de 21, alrededor de 22, alrededor de 23, alrededor de 24, alrededor de 25, alrededor de 26, alrededor de 27, alrededor de 28, alrededor de 29, alrededor de 30, alrededor de 31, alrededor de 32, alrededor de 33, alrededor de 34, alrededor de 35, alrededor de 36, alrededor de 37, alrededor de 38, alrededor de 39 o alrededor de 4o días. El intervalo de dosificación puede ser un intervalo fijo, por ejemplo, 7 días para 25-50 Ul/kg, 10-13 días para 50-100 Ul/kg o 14 días para 100-150 Ul/kg. El intervalo fijo y la dosis son determinados de forma tal que la combinación de intervalo y dosis resultará en mínimo de al menos alrededor de 1-5 o al menos alrededor de 1-3 o al menos alrededor del, al menos alrededor de 3 o al menos alrededor de 3 Ul/dl de actividad de FIX en una población de sujetos o en un sujeto individual. El intervalo de dosificación fijo también puede ser de 7 días para 20-50 Ul/kg, 10-14 días para 50-100 Ul/kg, 14-16 días para 100-150 Ul/kg, 7 días para 10-50 Ul/kg, 10-13 días para 15-100 Ul/kg o 14-15 días para 50-150 Ul/kg. El intervalo de dosificación fijo también puede ser de 7 días para 10-30 Ul/kg, 10 días para 15-50 Ul/kg, 11 días para 20-70 Ul/kg, 12 días para 25-85 Ul/kg, 13 días para 30-100 Ul/kg, 14 días para 40-125 Ul/kg y 15 días para 50-150 Ul/kg.
En modalidades preferidas el intervalo de dosificación es 20 Ul/kg una vez por semana, 40 Ul/kg cada 10 días o 100 Ul/kg cada dos semanas (dos veces al mes) .
El intervalo de dosificación puede, de manera alternativa, ser un intervalo individual que es determinado para cada sujeto en base a datos farmacocinéticos u otra información sobre el sujeto. La combinación de dosis/intervalo de dosificación individual puede ser la misma que aquella para regímenes de intervalos fijos en los párrafos anteriores o puede diferir, tal como se ilustra en los Ejemplos. Inicialmente, el régimen puede incluir un intervalo de dosificación fijo y luego puede cambiar a un intervalo de dosificación individual.
Tal como se usa en la presente, "tratamiento a demanda" significa tratamiento que se pretende tenga lugar durante un corto período de tiempo y que se desarrolla en respuesta a una condición existente, tal como un episodio hemorrágico, o una necesidad a corto plazo tal como una cirugía planificada. Algunas afecciones que pueden requerir tratamiento a demanda incluyen un episodio hemorrágico, hemartrosis, sangrado muscular, sangrado oral, hemorragia, hemorragia en músculos, hemorragia oral, traumatismo, trauma capitis, sangrado gastrointestinal, hemorragia intracraneal, hemorragia intraabdominal , hemorragia intratorácica, fractura ósea, sangrado en el sistema nervioso central, sangrado en el espacio retrofaríngeo, sangrado en la cavidad retroperitoneal o sangrado en la envoltura del músculo iliopsoas. Se incluyen episodios de hemorragia diferentes a estos. El sujeto puede tener necesidad de profilaxis quirúrgica, administración perioperativa o tratamiento para la cirugía. Tales cirugías incluyen cirugías menores, cirugías mayores, extracciones dentales, amigdalectomía, otras cirugías dentales o torácicas/faciales, cirugía de hernia inguinal, sinovectomía, reemplazo total de rodilla, reemplazo de otra articulación, craneotomía, osteosíntesis , cirugía de emergencia, cirugía intracraneal, cirugía intraabdominal, cirugía intratorácica. También se incluyen cirugías que no fueron enumeradas. Otras afecciones que pueden requerir tratamiento a demanda incluyen aquellas enumeradas en la Tabla 26.
Algunas afecciones adicionales que pueden requerir tratamiento a demanda incluyen hemorragias menores, hemartrosis, hemorragia de músculo superficial, hemorragia de tejido blando, hemorragia moderada, hemorragia intramuscular o de tejido blando con disección, hemorragia de la membrana mucosa, hematuria, hemorragia masiva, hemorragia de la faringe, hemorragia de la retrofaringe, hemorragia retroperitoneal , hemorragia del sistema nervioso central, hematomas, cortes, raspaduras, hemorragia de las articulaciones, sangrado por la nariz, sangrado por la boca, sangrado por las encías, sangrado intracraneal, sangrado intraperitoneal , hemorragia espontánea menor, sangrado luego de una lesión importante, hematomas moderados en la piel, o hemorragia espontánea en las articulaciones, músculos, órganos internos o el cerebro. Otras razones adicionales para tratamiento a demanda incluyen la necesidad de manejo perioperativo para cirugía o extracción dental, cirugía mayor, cirugía oral mayor, cirugía urológica, cirugía de hernia, cirugía ortopédica tal como reemplazo de rodilla, cadera o de otra articulación mayor.
Abreviaturas : AUCINF Área bajo la curva de concentración-tiempo de cero a infinito AUCa Área bajo la curva de concentración-tiempo en la fase de distribución AUCp Área bajo la curva de concentración- tiempo en la fase de eliminación Alfa HL Semivida de la fase de distribución Beta HL Semivida de la fase de eliminación; también se hace referencia a ella como tx/2 C168 Actividad de FIXFc estimada sobre la referencia aproximadamente 168 horas luego de la dosis nax Concentración máxima a Tmax cv% Coeficiente porcentual de variación Cl Aclaramiento IVR Recuperación in vivo (%) Valor K Recuperación gradual TMR Tiempo medio de residencia N Número NC No calculable NR No informado SD Desviación estándar SE Error estándar TBLP1 Tiempo luego de la dosis previsto por el modelo en el que la actividad de FIXFc ha decaído a aproximadamente 1 UI/dL sobre la referencia TBLP3 Tiempo luego de la dosis previsto por el modelo en el que la actividad de FIXFc ha decaído a aproximadamente 3 UI/dL sobre la referencia TBLP5 Tiempo luego de la dosis previsto por el modelo en el que la actividad de FIXFc ha decaído a aproximadamente 5 UI/dL sobre la referencia VSs Volumen de distribución en estado estacionario Vx Volumen de distribución del compartimiento central Los parámetros farmacocinéticos (PK, por sus siglas en inglés) incluyen los términos antemencionados y los siguientes, que tienen su significado usual en la técnica, a menos que se indique lo contrario. Algunos de los términos se explican en mayor detalle en los Ejemplos. Los parámetros PK pueden basarse en el nivel de antígeno FIX (a menudo se indica como "antígeno" entre paréntesis en la presente) o el nivel de actividad de FIX (a menudo se indica como "actividad" entre paréntesis en la presente) . En la bibliografía los parámetros PK a menudo se basan en el nivel de actividad de FIX debido a la presencia de FIX endógeno e inactivo en el plasma de algunos pacientes, el cual interfiere con la capacidad de medir FIX administrado (es decir, exógeno) utilizando anticuerpo contra FIX. Sin embargo, cuando se administra FIX como parte de una proteína de fusión que contiene un polipéptido heterólogo tal como un FcRn BP, es posible medir con precisión el antígeno FIX administrado (es decir, exógeno) usando un anticuerpo para el polipéptido heterólogo. Además, determinados parámetros PK pueden basarse en datos previstos por modelos (a menudo se indican como "modelos previstos" entre paréntesis en la presente) o en datos observados (a menudo se indican como "observados" entre paréntesis en la presente) , y preferentemente se basan en datos observados .
Tal como se usa en la presente, "referencia" es el nivel más bajo medido de Factor IX en plasma en un sujeto antes de la administración de una dosis. En el primer estudio en seres humanos descrito en el Ejemplo 1, los niveles de Factor IX en plasma fueron medidos en dos momentos antes de la dosificación: en una vista de evaluación e inmediatamente antes de la dosificación. Los puntos de tiempo anteriores a la dosis fueron tratados como cero (referencia) para los fines de cálculos, es decir, para generar datos "con sustracción de valores de referencia". Véase, por ejemplo, la Figura 4. De manera alternativa, (a) se define la referencia en pacientes cuya actividad de FIX antes del tratamiento es <1%, que no presentan antigeno FIX detectable y que presentan genotipos sin sentido, como 0%, (b) se fija la referencia para pacientes con actividad de FIX antes del tratamiento <1% y que presentan antígeno FIX detectable en 0.5%, (c) la referencia para pacientes cuya actividad de FIX antes del tratamiento se encuentra entre 1-2% es Cmin (la menor actividad a lo largo del estudio PK) y (d) la referencia para pacientes cuya actividad FIX antes del tratamiento es =2% es 2%. La actividad sobre la referencia antes de la dosificación es considerada fármaco residual de tratamiento anterior y se llevó a la referencia y restó de los datos PK luego de la dosis de rFIXFc . Véase el Ejemplo 11. "Área bajo la curva de concentración de plasma en función de tiempo" ("AUC") , que, tal como se usa en la presente, se basa en la tasa y grado de eliminación del Factor IX luego de su administración. AUC es determinada en un período de tiempo específico tal como 12, 18, 24, 36, 48 o 72 horas, o para infinito mediante la extrapolación basada en la pendiente de la curva. A menos que se especifique lo contrario en la presente, AUC es determinada para infinito (AUCINF) · La AUC puede también ser calculada en base a la dosis. Así como en el caso de muchos de los otros parámetros PK, la determinación de AUC puede ser llevada a cabo en un único sujeto o en una población de sujetos, para lo que se calcula el promedio. En el Ejemplo 1 la AUC/dosis promedio en la población de pacientes fue 32.44 UI*h/dL por Ul/kg y el intervalo para sujetos individuales fue 21.80-54.30 UI*h/dL por Ul/kg. (Véase en la Tabla 13 AUC/dosis promedio basada en actividad.) Por lo tanto, AUC/dosis promedio en una población de pacientes puede ser de alrededor de 26-40, alrededor de 26, alrededor de 27, alrededor de 28, alrededor de 29, alrededor de 30, alrededor de 31, alrededor de 32, alrededor de 33, alrededor de 34, alrededor de 35, alrededor de 36, alrededor de 37, alrededor de 38, alrededor de 39 o alrededor de 40 UI*h/dL por Ul/kg. Véase en la Tabla 14 AUC/dosis y otros parámetros de AUC basados en el antígeno.
La "recuperación in vivo" ("IVR" por sus siglas en inglés) se encuentra representada por la recuperación gradual (valor K) , la cual es la actividad pico observada menos el nivel de predosis y luego dividida por la dosis. La IVR también puede calcularse en base a un porcentaje, tal como se describe en los Ejemplos. Con fines de claridad, se utilizan en la presente las unidades (valor K o Ul/dl por Ul/kg en función de %) . La IVR puede determinarse en una población de pacientes, o la IVR individual puede determinarse en solo un sujeto. El FIXFc utilizado en el primer estudio realizado en humanos descrito en el Ejemplo 1 mostró una IVR promedio de alrededor de 0.93 Ul/dl por Ul/kg en la población de pacientes y una IVR en cada sujeto que varia entre 0.62 y 1.17 Ul/dl por Ul/kg (Tabla 13). Por lo tanto, el polipéptido quimérico de la invención muestra una IVR promedio en una población de pacientes de 0.85-1.15 (por ejemplo, alrededor de 0.85, alrededor de 0.86, alrededor de 0.87, alrededor de 0.88, alrededor de 0.89, alrededor de 0.90, alrededor de 0.91, alrededor de 0.92, alrededor de 0.93, alrededor de 0.94, alrededor de 0.95, alrededor de 0.96, alrededor de 0.97, alrededor de 0.98, alrededor de 0.99, alrededor de 1.0, alrededor de 1.05, alrededor de 1.10, alrededor de 1.15) y una IVR en un sujeto de al menos alrededor de 0.6, alrededor de 0.7, 0.8, alrededor de 0.9, alrededor de 1.0, alrededor de 1.1 o alrededor de 1.2 Ul/dl por Ul/kg.
"Aclaramiento" ("CL", por sus siglas en inglés), tal como se usa en la presente, es una medida de la capacidad del cuerpo para eliminar un fármaco y se expresa como el volumen de plasma que queda libre de fármaco por tiempo. El FIXFc utilizado en el estudio descrito en el Ejemplo 1 mosbró un CL promedio de alrededor de 3.36 ml/hora/kg (véase Tabla 13), que es alrededor de 2.5 veces menor que el CL (8.2 ml/hora/kg) de un polipéptido que consta de Factor IX (BENEFIX™) ; el intervalo de los valores CL en sujetos individuales fue de 1.84-4.58 ml/h/kg. Por lo tanto, un polipéptido quimérico de la invención muestra un CL promedio en una población de 3.0-3.72, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7 o 3.72 mL/hora/kg. Para un CL basado en un antígeno, véase Tabla 14.
El "tiempo medio de residencia" ("TMR"), tal como se usa en la presente, es una medida de vida promedio de las moléculas de fármaco en el cuerpo. El FIXFc utilizado en el estudio descrito en el Ejemplo 1 mostró un TMR promedio de alrededor de 68.05 horas (véase Tabla 13); el intervalo de valores TMR era de 53.1-85.8 horas en pacientes individuales. Por lo tanto, un polipéptido quimérico de la invención muestra un TMR promedio en una población de 60-78, alrededor de 60, alrededor de 62, alrededor de 64, alrededor de 66, alrededor de 68, alrededor de 70, alrededor de 72, alrededor de 74, alrededor de 76 o alrededor de 78 horas y un MRT en un sujeto de al menos alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70, alrededor de 75, alrededor de 80, alrededor de 85 o alrededor de 90 horas . Para un TMR basado en un antxgeno véase la Tabla 14. " i2p, " o 11 2 beta" o "Beta HL", tal como se usan en la presente, es una semivida asociada con la fase de eliminación, ti2p= (ln2) /constante de velocidad de eliminación asociada con la fase terminal. En el estudio descrito en el Ejemplo 1, el FIXFc utilizado mostró un promedio ti2Z en una población de pacientes que fue alrededor de 52.5 horas (véase Tabla 13) y el intervalo de los valores f ti2 en sujetos individuales fue de 47-60 horas. Por lo tanto, un polipéptido quimérico de la invención muestra un promedio ti2p mayor que alrededor de 47, alrededor de 48, alrededor de 49, alrededor de 50, alrededor de 51, alrededor de 52, alrededor de 53, alrededor de 54, alrededor de 55, alrededor de 56, alrededor de 57, alrededor de 58, alrededor de 59 o alrededor de 60 horas. Para ti2 basado en un antígeno véase la Tabla 14.
"Concentración mínima" tal como se usa en la presente, es el nivel de actividad del Factor IX en el plasma más bajo alcanzado luego de administrar una dosis de un polipéptido quimérico de la invención u otra molécula de Factor IX y antes de la administración de la siguiente dosis, si la hubiere. La concentración mínima se utiliza en la presente de manera intercambiable con "umbral". Los niveles del Factor IX de referencia se sustraen de los niveles medidos del Factor IX para calcular el nivel de concentración mínima. En algunas modalidades, la concentración mínima es 1-5 o 1-3 Ul/dl luego de alrededor de 6, alrededor de 7, alrededor de 8, alrededor de 9, alrededor de 10, alrededor de 11, alrededor de 12, alrededor de 13 o alrededor de 14 días. En algunas modalidades, el nivel de plasma de un polipéptido quimérico alcanza un promedio de concentración mínima de al menos alrededor de 1 Ul/dl luego de al menos alrededor de 6 días en al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 90% o alrededor de 100% de una población de pacientes o alcanza una concentración mínima de al menos alrededor de 1, 2, 3, o 5 Ul/dl luego de al menos alrededor de 6 días en un sujeto. En algunas modalidades, el nivel de plasma del polipéptido quimérico alcanza una concentración mínima promedio de alrededor de 1-5 o 1-3 Ul/dl. La concentración mínima o concentración mínima promedio puede alcanzarse luego de alrededor de 6, alrededor de 7, alrededor de 8, alrededor de 9, alrededor de 10, alrededor de 11, alrededor de 12, alrededor de 13, alrededor de 14, alrededor de 15, alrededor de 16, alrededor de 17, alrededor de 18, alrededor de 19, alrededor de 20, alrededor de 21, alrededor de 22, alrededor de 23, alrededor de 24, alrededor de 25, alrededor de 26, alrededor de 27, alrededor de 28, alrededor de 29, alrededor de 30, alrededor de 31, alrededor de 32, alrededor de 33, alrededor de 34, alrededor de 35, alrededor de 36, alrededor de 37, alrededor de 38, alrededor de 39 o alrededor de 40 días .
El "volumen de distribución en estado estacionario (Vss, por sus siglas en inglés)" tal como se usa en la presente, es el espacio evidente (volumen) en el cual se distribuye un fármaco. Vss = la cantidad de fármaco en el cuerpo dividido entre la concentración de plasma en estadio estacionario. En el Ejemplo 1, el Vss promedio encontrado en la población fue alrededor de 226 mL/kg y el intervalo para sujetos fue alrededor de 145-365 mL/kg. (Véase la Tabla 13) . Por lo tanto, el Vss promedio en una población de paciente puede ser 200-300, alrededor de 200, alrededor de 210, alrededor de 220, alrededor de 230, alrededor de 240, alrededor de 250, alrededor de 260, alrededor de 270, alrededor de 280, .alrededor de 290 o alrededor de 300 mL/kg. El Vss para sujetos individuales puede ser alrededor de 145, alrededor de 150, alrededor de 160, alrededor de 170, alrededor de 180, , alrededor de 190, alrededor de 200, alrededor de 210, alrededor de 220, alrededor de 230, alrededor de 240, alrededor de 250, alrededor de 260, alrededor de 270, alrededor de 280, alrededor de 290, alrededor de 300, alrededor de 310, alrededor de 320, alrededor de 330, alrededor de 340, alrededor de 350, alrededor de 360 o alrededor de 370 ml/kg. Para un Vss basado en un antígeno véase la Tabla 14.
"Polipéptid " , "péptido" y "proteína" se usan de manera intercambiable y se refieren a un compuesto polimérico que comprende residuos de aminoácidos unidos de forma covalente .
"Polinucleótido" y "ácido nucleico" se usan de manera intercambiable y se refieren a un compuesto polimérico que comprende residuos de nucleótidos unidos de forma covalente. Los polinucleótidos pueden ser ADN, ADNc, ARN, monocatenarios o de doble cadena, vectores, plásmidos, fagos o virus. Los polinucleótidos incluyen aquellos en la Tabla 1 que codifican los polipéptidos de la Tabla 2 (véase Tabla 1) . Los polinucleótidos también incluyen fragmentos de los polinucleótidos de la Tabla 1, por ejemplo, aquellos que codifican fragmentos de los polipéptidos de la Tabla 2, tales como el Factor IX, Fe, secuencia de señalización, propéptido, 6His y otros fragmentos de los polipéptidos de la Tabla 2.
"Tratamiento profiláctico", tal como se usa en la presente, significa administrar un polipéptido Factor IX en múltiples dosis a un sujeto durante un tiempo para aumentar el nivel de la actividad del Factor IX en el plasma de un sujeto. Preferentemente, el nivel aumentado es suficiente para disminuir la incidencia de sangrado espontáneo o para prevenir el sangrado en caso de una herida imprevista. El tratamiento profiláctico disminuye o previene episodios de sangrado, por ejemplo, aquellos descritos en tratamiento a demanda. El tratamiento profiláctico puede ser fijo o puede ser individual, tal como se discute en "intervalo de dosificación", por ejemplo, para compensar por la variabilidad interpaciente .
"Sujeto" tal como se usa en la presente significa un ser humano o un mamífero no humano. Los mamíferos no humanos incluyen ratones, perros, primates, monos, gatos, caballos, vacas, cerdos y otros animales domésticos y pequeños animales. Los sujetos también incluyen humanos pediátricos. Los sujetos humanos pediátricos son de nacimiento a 20 años, preferentemente de nacimiento a 18 años, de nacimiento a 16 años, de nacimiento a 15 años, de nacimiento a 12 años, de nacimiento a 11 años, de nacimiento a 6 años, de nacimiento a 5 años, de nacimiento a 2 años y de 2 a 11 años de edad.
Los métodos de la invención pueden practicarse en un sujeto que necesita controlar o prevenir el sangrado o episodios de sangrado. Los sujetos incluyen aquellos que necesitan controlar o prevenir el sangrado en hemorragias menores, hemartrosis, hemorragia de músculo superficial, hemorragia de tejido blando, hemorragia moderada, hemorragia intramuscular o de tejido blando con disección, hemorragia de la membrana mucosa, hematuria, hemorragia masiva, hemorragia de la faringe, hemorragia de la retrofaringe, hemorragia retroperitoneal , hemorragia del sistema nervioso central, hematomas, cortes, raspaduras, hemorragia de las articulaciones, sangrado por la nariz, sangrado por la boca, sangrado por las encías, sangrado intracraneal, sangrado intraperitoneal , hemorragia espontánea menor, sangrado luego de una lesión importante, hematomas moderados en la piel, o hemorragia espontánea en las articulaciones, músculos, órganos internos o el cerebro. Los sujetos también incluyen aquellos que necesitan un tratamiento perioperativo, tal como un tratamiento del sangrado asociado con cirugía o extracción dental .
"Dosis terapéutica" tal como se usa en la presente, significa una dosis que alcanza un propósito terapéutico, tal como se describe en la presente. El cálculo de la dosis requerida de plasma derivada del Factor IX (pdFIX) se basa en el descubrimiento empírico que, aproximadamente, 1 UI de pdFIX por kg de peso corporal aumenta la actividad del Factor IX en el plasma en aproximadamente 1 UI/dL (1%) . Basándose en eso, la dosificación requerida se determina utilizando la siguiente fórmula: Unidades requeridas = peso corporal (kg) x aumento deseado de Factor IX (UI/dL o % de normal) x l (Ul/kg por UI/dL) Dado que FIXFc, por ejemplo, tal como se describe en los Ejemplos y en la Figura 1, tiene una recuperación gradual similar a pdFIX (diferente a la de BENEFIX™) , la dosis requerida se determina mediante el uso de la fórmula antemencionada o ajustándola levemente. Véase también la Tabla 26 para dosis específicas recomendadas para varias necesidades de tratamientos a demanda. Para los sujetos pediátricos que utilizan pdFIX, la guía de dosificación es la misma que para los adultos. Sin embargo, los pacientes pediátricos pueden tener una recuperación gradual más baja y la dosificación deberá por lo tanto ser aumentada.
Las dosis terapéuticas que pueden ser utilizadas en los métodos de la invención son 10-180, 20-180 o 25-180 Ul/kg, más específicamente, las dosis preferidas para un intervalo de dosificación de 6-10 días son los siguientes: alrededor de 25-110, alrededor de 30-110, alrededor de 40-110, alrededor de 50-110, alrededor de 60-110, alrededor de 70-110, alrededor de 80-110, alrededor de 90-110, y alrededor de 100-110; alrededor de 30-100, alrededor de 30-90, alrededor de 30-80, alrededor de 30-70, alrededor de 30-60, alrededor de 30-50, alrededor de 30-40 Ul/kg; alrededor de 40-110, alrededor de 50-100, alrededor de 60-90, and alrededor de 70-80 Ul/kg; alrededor de 40-50, alrededor de 50-60, alrededor de 60-70, alrededor de 70-80, alrededor de 80-90, alrededor de 90-100, and alrededor de 100-110 Ul/kg; alrededor de 25, alrededor de 30, alrededor de 35, alrededor de 40, alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70, alrededor de 75, alrededor de 80, alrededor de 85, alrededor de 90, alrededor de 95, alrededor de 100, alrededor de 105 y alrededor de 110 Ul/kg. Un intervalo de dosificación de 6-10 días incluye un intervalo de dosificación semanal. Las dosis terapéuticas adicionales para un intervalo de dosificación 6-10 días, por ejemplo, semanalmente , incluyen 20-50, 20-100 y 20-180 Ul/kg, más específicamente, las dosis preferidas para un intervalo de dosificación de 6-10 días, por ejemplo, semanalmente, son los siguientes: alrededor de 20-110, alrededor de 20-100, alrededor de 20-90, alrededor de 20-80, alrededor de 20-70, alrededor de 20-60, alrededor de 20-50, alrededor de 20-40, alrededor de 20-30, alrededor de 20-40 y alrededor de 20 Ul/kg. Véase también los Ejemplos 10 y 11. Las dosis pueden ser menores que 20 Ul/kg si son eficaces para un paciente determinado, por ejemplo, alrededor de 10, alrededor de 11, alrededor de 12, alrededor de 13, alrededor de 14, alrededor de 15, alrededor de 16, alrededor de 17, alrededor de 18 o alrededor de 19 Ul/kg.
Las dosis terapéuticas preferidas para un intervalo de dosificación de 9-18 días, por ejemplo, dos veces al mes, son las siguientes: alrededor de 50-180, alrededor de 60-180, alrededor de 70-180, alrededor de 80-180, alrededor de 90-180, alrededor de 100-180, alrededor de 110-180, alrededor de 120-180, alrededor de 130-180, alrededor de 140-180, alrededor de 150-180, alrededor de 160-180, alrededor de 170-180 ül/kg y alrededor de 90-170, alrededor de 90-160, alrededor de 90-150, alrededor de 90-140, alrededor de 90-130, alrededor de 90-120, alrededor de 90-110, alrededor de 90-100 Ul/kg; alrededor de 100- 170, alrededor de 110-160, alrededor de 120-150, and alrededor de 130-140 Ul/kg; alrededor de 90-100, alrededor de 100-110, alrededor de 110-120, alrededor de 120-130, alrededor de 130-140, alrededor de 140-150, alrededor de 150-160 y alrededor de 160-170 Ul/kg; alrededor de 60, alrededor de 70, alrededor de 80, alrededor de 90, alrededor de 95, alrededor de 100, alrededor de 105, alrededor de 110, alrededor de 115, alrededor de 120, alrededor de 125, alrededor de 130, alrededor de 135, alrededor de 140, alrededor de 145, alrededor de 150, alrededor de 155, alrededor de 160, alrededor de 165, alrededor de 170, alrededor de 175 y alrededor de 180 Ul/kg. Véase también los Ejemplos 10 y 11.
Las dosis terapéuticas preferidas son 10-50, 15-100, 20-100, 20-50, 50-100, 10, 20, 40, 50 y 100 Ul/kg.
Las dosis terapéuticas pueden ser de alrededor de 20-50, alrededor de 20-100, alrededor de 20-180, alrededor de 25-110, alrededor de 30-110, alrededor de 40-110, alrededor de 50-110, alrededor de 60-110, alrededor de 70-110, alrededor de 80-110, alrededor de 90-110, alrededor de 100-110, alrededor de 30-100, alrededor de 30-90, alrededor de 30-80, alrededor de 30-70, alrededor de 30-60, alrededor de 30-50, alrededor de 30-40 Ul/kg; alrededor de 40-110, alrededor de 50-100, alrededor de 60-90, alrededor de 70-80 Ul/kg; alrededor de 40-50, alrededor de 50-60, alrededor de 60-70, alrededor de 70-80, alrededor de 80-90, alrededor de 90-100, alrededor de 100-110 Ul/kg; alrededor de 20, alrededor de 25, alrededor de 30, alrededor de 35, alrededor de 40, alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70, alrededor de 75, alrededor de 80, alrededor de 85, alrededor de 90, alrededor de 95, alrededor de 100, alrededor de 105 y alrededor de 110 Ul/kg. Las dosis son preferidas ante los intervalos de dosificación de alrededor de 6-10, alrededor de 7-10, alrededor de 7-9, alrededor de 7-8, alrededor de 8-10, alrededor de 9-10, alrededor de 6-7, alrededor de 8-9, alrededor de 6, alrededor de 7, alrededor de 8, alrededor de 9 y alrededor de 10 días, y una vez a la semana.
La dosis terapéutica puede ser alrededor de 90-180, alrededor de 100-180, alrededor de 110-180, alrededor de 120-180, alrededor de 130-180, alrededor de 140-180, alrededor de 150-180, alrededor de 160-180 y alrededor de 170-180 Ul/kg. La dosis terapéutica puede ser alrededor de 90-170, alrededor de 90-160, alrededor de 90-150, alrededor de 90-140, alrededor de 90-130, alrededor de 90-120, alrededor de 90-110 y alrededor de 90-100 Ul/kg. La dosis puede ser alrededor de 100-170, alrededor de 110-160, alrededor de 120-150 y alrededor de 130-140 Ul/kg. La dosis terapéutica puede ser alrededor de 90-100, alrededor de 100-110, alrededor de 110-120, alrededor de 120-130, alrededor de 130-140, alrededor de 140-150, alrededor de 150-160 y alrededor de 160-170 Ul/kg. La dosis puede ser alrededor de 90, alrededor de 95, alrededor de 100, alrededor de 105, alrededor de 110, alrededor de 115, alrededor de 120, alrededor de 125, alrededor de 130, alrededor de 135, alrededor de 140, alrededor de 145, alrededor de 150, alrededor de 155, alrededor de 160, alrededor de 165, alrededor de 170, alrededor de 175, alrededor de 180 Ul/kg. Las dosis se prefieren para los intervalos de dosificación de alrededor de 9-18, alrededor de 9-17, alrededor de 9-16, alrededor de 9-15, alrededor de 9-14, alrededor de 9-13, alrededor de 9-12, alrededor de 9-11, alrededor de 9-10, alrededor de 10-18, alrededor de 11-18, alrededor de 12-18, alrededor de 13-18, alrededor de 14-18, alrededor de 15-18, alrededor de 16-18, alrededor de 17-18, alrededor de 10-11, alrededor de 11-12, alrededor de 12-13, alrededor de 13-14, alrededor de 14-15, alrededor de 15-16 y alrededor de 16-17 días, alrededor de 9, alrededor de 10, alrededor de 11, alrededor de 12, alrededor de 13, alrededor de 14, alrededor de 15, alrededor de 16, alrededor de 17 y alrededor de 18 días, una vez al mes o dos veces al mes (cada dos semanas) .
Las dosis terapéuticas preferidas y los intervalos de dosificación son los siguientes: 20 Ul/kg una vez a la semana, 40 Ul/kg cada 10 días y 100 Ul/kg cada dos semanas (dos veces al mes) . Combinaciones adicionales de dosis e intervalos de dosis incluyen: una dosis de al menos alrededor de 50 Ul/kg y un intervalo de dosificación de al menos alrededor de 7 días, una dosis de al menos alrededor de 100 Ul/kg y un intervalo de dosificación de al menos alrededor de 9 días, una dosis de al menos alrededor de 100 Ul/kg y un intervalo de dosificación de al menos alrededor de 12 días, una dosis de al menos alrededor de 150 Ul/kg y un intervalo de dosificación de al menos alrededor de 14 días, 20-50 o 20-100 Ul/kg y el intervalo de dosificación es una vez a la semana, una dosis de 20-50 Ul/kg y un intervalo de dosificación de 7 días, una dosis de 50-100 Ul/kg y un intervalo de dosificación de 10-14 días o una dosis de 100-150 Ul/kg y un intervalo de dosificación de 14-16 días. Las combinaciones preferidas de intervalos de dosificación y dosis también incluyen 10-50 Ul/kg por 7 días, 15-100 Ul/kg por 10-13 días, 50-150 Ul/kg por 14-15 días, 10-30 Ul/kg por 7 días, 15-50 Ul/kg por 10 días, 20-70 Ul/kg por 11 días, 25-85 Ul/kg por 12 días, 30 a 100 Ul/kg por 13 días, 40 a 125 Ul/kg por 14 días y 50-150 Ul/kg por 15 días.
"Variante", como se utiliza en la presente, se refiere a un polinucleótido o polipéptido que difiere del polinucleótido o polipéptido original, pero que retiene propiedades esenciales de estos, por ejemplo, la actividad coagulante del Factor IX o la actividad Fe (FcRn de unión) . Usualmente, las variantes son en general bastante similares, y, en muchas regiones, idénticas al polinucleótido o polipéptido original. Las variantes incluyen fragmentos, eliminaciones, inserciones de polipéptidos y polinucleótidos , y versiones modificadas de los polipéptidos originales.
Los polinucleótidos variantes pueden comprender, o alternativamente constar de, una secuencia de nucleótidos que es al menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a, por ejemplo, la secuencia de codificación de nucleótido en la SEC ID N°:l o 3 (la porción del Factor IX, la porción Fe, individualmente o juntos) o la cadena complementaria de estos, la secuencia de codificación de nucleótido del Factor IX o Fe mutante y recombinante tales como aquellos descritos en las publicaciones y patentes citadas en la presente o la cadena complementaria de estos, una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido de la SEC ID N°:2 o 4 (la porción del Factor IX, la porción Fe, individualmente o juntos) , y/o fragmentos de polinucleótidos de cualquiera de estas moléculas de ácido nucleico (por ejemplo, aquellos fragmentos descritos en la presente) . Los polinucleótidos que se hibridan con estas moléculas de ácido nucleico en condiciones de hibridación restrictivas o condiciones restrictivas más bajas se encuentran incluidos como variantes, tal como lo están los polipéptidos codificados por estos polinucleótidos siempre y cuando sean funcionales.
Los polipéptidos variantes pueden comprender, o alternativamente constar de, una secuencia de aminoácidos que sea al menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% idéntica a, por ejemplo, la secuencia de polipéptidos mostrada en la SEC ID N° : 2 o 4 (la porción del Factor IX, la porción Fe, individualmente o juntos) y/o fragmentos de polipéptidos de cualquiera de estos polipéptidos (por ejemplo, aquellos fragmentos descritos en la presente) .
Por un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos al menos, por ejemplo, 95% "idéntica" a una secuencia de nucleótidos de referencia pretende significar que la secuencia de nucleótidos de ácidos nucleicos es idéntica a la secuencia de referencia salvo que la secuencia de nucleótidos puede incluir mutaciones de hasta cinco puntos por cada 100 nucleótidos de la secuencia de nucleótidos de referencia. En otras palabras, para obtener un ácido nucleico con una secuencia de nucleótidos al menos 95% idéntica a una secuencia de nucleótidos de referencia, hasta 5% de los nucleótidos en la secuencia de referencia puede ser eliminado o sustituido por otro nucleótido o una cantidad de nucleótidos de hasta 5% del total de nucleótidos de la secuencia de referencia puede ser insertado en la secuencia de referencia. La secuencia problema puede ser, por ejemplo, la secuencia completa mostrada en la SEC ID N° : 1 o 3, el ORF (por sus siglas en inglés) "marco de lectura abierto" o cualquier fragmento especificado tal como se describe en la presente .
Por una cuestión práctica, si cualquier molécula de ácido nucleico particular o polipéptido es al menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de nucleótidos o polipéptidos de la presente invención, se puede determinar de forma convencional utilizando programas de computadora conocidos. Un método preferido para determinar la mejor coincidencia en general entre una secuencia problema (secuencia de referencia u original) y una secuencia sujeto, también referida como un alineamiento de secuencia global, puede determinarse utilizando el programa de computadora FASTDB basado en el algoritmo de Brutlag et ál . (Comp. App. Biosci. (1990) 6:237-245), que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia. En un alineamiento de secuencia las secuencias problema y sujeto son ambas secuencias de ADN. Se puede comparar una secuencia ARN al convertir las U en T. El resultado del alineamiento de secuencia global se encuentra en porcentaje de identidad. Los parámetros preferidos utilizados en una alineación FASTDB de secuencias de ADN para calcular el porcentaje de identidad son: Matriz = Unitario, k-tupia = 4, Penalidad por discordancia = 1, Penalidad de unión = 30, Largo de grupo de aleatorización = 0, Resultado de corte = 1, Penalidad por hueco = 5, Penalidad por tamaño de hueco 0.05, Tamaño de ventana = 500 o el largo de la secuencia sujeto de nucleótidos, la que sea más corta.
Si la secuencia sujeto es más corta que la secuencia problema debido a las eliminaciones .5' o 3' y no debido a las eliminaciones internas, se debe realizar una corrección manual a los resultados. Esto se debe a que el programa FASTDB no estima los truncamientos 5' and 3' de la secuencia sujeto cuando calcula el porcentaje de identidad. Para las secuencias sujeto truncadas en los extremos 5' o 3', relativas a la secuencia problema, el porcentaje de identidad se corrige al calcular el número de bases de la secuencia problema que son 5' o 3 de la secuencia sujeto, que no están emparejadas/alineadas, como un porcentaje del total de las bases de la secuencia problema. Se determina si un nucleótido se encuentra emparejado/alineado por los resultados del alineamiento de la secuencia FASTDB. Este porcentaje luego se resta del porcentaje de identidad, calculado por el programa FASTDB antemencionado utilizando los parámetros especificados para llegar un resultado final de porcentaje de identidad. Este resultado corregido es lo que se utiliza para los propósitos de la presente invención. Solo las bases fuera de las bases 5' y 3' de la secuencia sujeto, tal como se muestra en el alineamiento FASTDB, que no están emparejados/alineados con la secuencia problema, se calculan con el fin de poder ajustar manualmente el resultado del porcentaje de identidad.
Por ejemplo, una secuencia sujeto de 90 bases se alinea con una secuencia problema de 100 bases para determinar el porcentaje de identidad. Las eliminaciones ocurren en el extremo 5' de la secuencia sujeto y por lo tanto, el alineamiento FASTDB no muestra un emparejamiento/alineamiento de las primeras 10 bases en el extremo 5' . Las 10 bases no apareadas representan un 10% de la secuencia (número de bases en los extremos 5' y 3' no emparejadas/número total de bases en la secuencia problema) entonces se sustrae 10% al resultado del porcentaje de identidad calculado por el programa FASTDB. Si las 90 bases restantes se correspondiesen perfectamente, el porcentaje final de identidad sería 90%. En otro ejemplo, una secuencia sujeto de 90 bases se compra con una secuencia problema de 100 bases. Esta vez las eliminaciones son eliminaciones internas de manera que no hay bases en el 5' o 3' de la secuencia sujeto que no se encuentren emparejadas/alineadas con la secuencia problema. En este caso el porcentaje de identidad calculado por FASTDB no se corrige manualmente. Una vez más, solo las bases 5' y 3' de la secuencia sujeto que no se encuentran emparejadas/alineadas con la secuencia problema se corrigen manualmente. A los efectos de la presente invención, no se realizarán otras correcciones manuales.
Con un polipéptido que presenta una secuencia de aminoácidos al menos, por ejemplo, 95% "idéntica" a una secuencia problema de aminoácidos de la presente invención, se pretende que la secuencia de aminoácidos del polipéptido sujeto sea idéntica a la secuencia problema excepto en que la secuencia de polipéptido sujeto puede incluir hasta cinco alteraciones de aminoácidos por cada 100 aminoácidos de la secuencia de aminoácidos de la secuencia problema de aminoácidos. En otras palabras, para obtener un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos al menos 95% idéntica a una secuencia problema de aminoácidos, hasta un 5% de los residuos de aminoácidos en la secuencia sujeto pueden ser insertados, eliminados, (indels) o sustituidos con otro aminoácido. Estas alteraciones a la secuencia de referencia pueden ocurrir en las posiciones terminales amino o carboxi de la secuencia de aminoácidos de referencia o en cualquier lugar entre las posiciones terminales, intercaladas, ya sea en forma individual entre los residuos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia.
Por una cuestión práctica, si cualquier polipéptido particular es al menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntico a, por ejemplo, las secuencias de aminoácidos de la SEC ID N° : 2 (la porción del Factor IX, la porción Fe, individualmente o juntos) o 4, o una secuencia de polipéptidos Fe o Factor IX conocidos, se puede determinar de forma convencional utilizando programas de computadora conocidos. Un método preferido para determinar la mejor coincidencia en general entre una secuencia problema (secuencia de referencia u original) y una secuencia sujeto, también referida como un alineamiento de secuencia global, puede determinarse utilizando el programa de computadora FASTDB basado en el algoritmo de Brutlag et ál . , Com . App .
Biosci. 6:237-245(1990), que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia. En un alineamiento de secuencia las secuencias problema y sujeto son ambas secuencias de nucleótidos o ambas secuencias de aminoácidos. El resultado del alineamiento de secuencia global se encuentra en porcentaje de identidad. Los parámetros preferidos utilizados en un alineamiento de aminoácidos FASTDB son: Matriz = PAM 0, k-tupia = 2, Penalidad discordante = 1, Penalidad de unión = 20, Largo de grupo de aleatorización = 0, Resultado de fecha límite = 1, Tamaño de ventana = largo de secuencia, Penalidad por hueco = 5, Penalidad por tamaño de hueco 0.05, Tamaño de ventana = 500 o el largo de la secuencia sujeto de aminoácidos, la que sea más corta.
Si la secuencia sujeto es más corta que la secuencia problema debido a las eliminaciones de las terminales N- o C-y no debido a las eliminaciones internas, se debe realizar una corrección manual a los resultados. Esto se debe a que el programa FASTDB no estima los truncamientos de los N- o extermínales de la secuencia sujeto cuando calcula el porcentaje de identidad. Para las secuencias sujeto truncadas en los N- o C-terminales , relativas a la secuencia problema, el porcentaje de identidad se corrige al calcular el número de residuos de la secuencia problema que son N- o extermínales de la secuencia sujeto, que no están emparejadas/alineadas con un residuo sujeto correspondiente, como un porcentaje del total de las bases de la secuencia problema. Se determina si un residuo se encuentra emparejado/alineado por los resultados del alineamiento de la secuencia FASTDB. Este porcentaje luego se resta del porcentaje de identidad, calculado por el programa FASTDB antemencionado utilizando los parámetros especificados para llegar un resultado final de porcentaje de identidad. El resultado final de porcentaje de identidad es lo que se utiliza para los propósitos de la presente invención. Solo los residuos de los extremos N- y C- de la secuencia sujeto, que no están empare ados/alineados con la secuencia problema, se consideran con el fin de poder ajustar manualmente el resultado del porcentaje de identidad. Esto es, solo las posiciones de residuos problema fuera de los más alejados residuos de los extremos N- y C- de la secuencia sujeto.
Por ejemplo, una secuencia sujeto de 90 aminoácidos se alinea con una secuencia problema de 100 residuos para determinar el porcentaje de identidad. La eliminación ocurre en el extremo N- de la secuencia sujeto y por lo tanto, el alineamiento FASTDB no muestra un emparejamiento/alineamiento de los primeros 10 residuos en el extremo N- . Los 10 residuos no apareados representan un 10% de la secuencia (número de residuos en los extremos N- y C- no emparej adas/número total de residuos en la secuencia problema) , entonces se sustrae 10% del resultado al porcentaje de identidad calculado por el programa FASTDB. Si los 90 residuos restantes se correspondiesen perfectamente, el porcentaje final de identidad sería 90%. En otro ejemplo, una secuencia sujeto de 90 residuos se compara con una secuencia problema de 100 residuos. Esta vez las eliminaciones son eliminaciones internas de manera que no hay residuos en los N- o extermínales de la secuencia su eto que no se encuentren emparejadas/alineadas con la problema. En este caso el porcentaje de identidad calculado por FASTDB no se corrige manualmente. Una vez más, solo las posiciones de residuo fuera de los extremos N- y C- de la secuencia sujeto, tal como se demuestra en el alineamiento FASTDB, que no se encuentran emparejadas/alineadas con la secuencia problema se corrigen manualmente. A los efectos de la presente invención, no se realizarán otras correcciones manuales.
Las variantes de polinucleótidos pueden contener alteraciones en las regiones codificantes, no codificantes o ambas. Se prefieren especialmente las variantes de polinucleótido que contienen alteraciones que producen sustituciones silenciosas, adiciones o eliminaciones, pero que no alteran las propiedades o actividades del polipéptido codificado. Se prefieren las variantes de nucleótidos producidos por sustituciones silenciosas debido a la degeneración del código genético. Además, también se prefieren las variantes en que 5-10, 1-5 o 1-2 aminoácidos son sustituidos, eliminados o agregados en cualquier combinación. Las variantes de polinucleótido pueden producirse por una diversidad de motivos, por ejemplo, para optimizar la expresión del codón de un hospedador particular (cambiar los codones del ARNm humano a aquellos preferidos por un hospedador bacteriano tal como E. coli) .
Las variantes de origen natural se llaman "variantes alélicas" y se refieren a una de varias formas alternativas de un gen que ocupa un lugar dado en un cromosoma de un organismo (Genes II, Lewin, B., ed. , John iley & Sons, Nueva York (1985) ) . Estas variantes alélicas pueden variar ya sea a nivel del polinucleótido y/o polipéptido y están incluidas en la presente invención. De manera alternativa, las variantes de origen no natural pueden ser producidas por técnicas de mutagénesis o por síntesis directa.
Las variantes pueden ser generadas para mejorar o alterar las características de los polipéptidos , mediante el uso de métodos conocidos de modificación de proteínas y tecnología de ADN recombinante . Por ejemplo, se puede eliminar uno o más aminoácidos del extremo N- o el extremo C-de la proteína secretada sin causar una pérdida sustancial de la función biológica. Los autores de Ron et ál . , J. Biol. Chem. 268: 2984-2988 (1993), que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia, presentaron proteínas KGF variantes que tenían actividad de unión de heparina incluso luego de eliminar 3, 8 o 27 residuos de aminoácidos amino-terminales . De manera similar, Interferón gamma mostró una actividad hasta diez veces mayor luego de eliminar 8-10 residuos de aminoácidos de los extremos carboxilo de esta proteína. (Dobeli et ál. , J. Biotechnology 7:199-216 (1988), que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia.) Además, existen abundantes pruebas que demuestran que las variantes usualmente retienen una actividad biológica similar a aquella de la proteína de origen natural . Por ejemplo, Gayle y colaboradores (J. Biol. Chem. 268:22105-22111 (1993) , que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia) llevaron a cabo análisis mutacionales extensivos sobre la citocina IL-Ia humana. Utilizaron mutagénesis aleatoria para generar más de 3,500 mutantes IL-la individuales que promediaban 2.5 cambios de aminoácidos por variante sobre el largo total de la molécula. Se examinaron múltiples mutaciones en cada posición de aminoácido posible. Los investigadores encontraron que "la mayor parte de la molécula podía ser alterada causando poco efecto en [la actividad de unión o biológica] . " (Véase el Resumen.) De hecho, solo 23 secuencias de aminoácidos únicas de más de 3,500 secuencias de nucleótidos examinadas produjeron una proteína que era considerablemente diferente en cuanto a la actividad con respecto a la de tipo salvaje.
Tal como se estableció anteriormente, las variantes de polipéptidos incluyen polipéptidos modificados. Las modificaciones incluyen acetilación, acilación, ADP-ribosilación, amidación, unión covalente de flavina, unión covalente de un resto de hemo, unión covalente de un nucleótido o derivado de nucleótido, unión covalente de un lípido o derivado de lípido, unión covalente de fosfotidilinositol , reticulación, ciclización, formación de enlaces disulfuro, desmetilación, formación de enlaces cruzados covalentes, formación de cisteína, formación de piroglutamato, formilación, gamma-carboxilación, glicosilación, formación de moléculas de anclaje GPI, hidroxilación, yodación, metilación, miristoilación, oxidación, pegilación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, selenoilación, sulfatación, adición de aminoácidos a proteínas mediada por ARN de transferencia, como arginilación y ubiquitinación .
El término "alrededor de" se utiliza en la presente con el significado de aproximadamente, cerca de o en la cercanía de. Cuando se utiliza el término "alrededor de" junto con un intervalo numérico, este modifica ese intervalo extendiendo los límites por encima y por debajo de los valores numéricos establecidos. En general, el término "alrededor de" se utiliza en la presente para modificar un valor numérico por encima y por debajo del valor indicado con una variación del 10%, hacia arriba y hacia abajo (más alta o más baja) .
Habiendo descrito la presente invención en detalle, esta será entendida con más claridad mediante referencia a los siguientes ejemplos, los cuales se incorporan a la presente con fines únicamente ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes de la invención. Todas las patentes y publicaciones mencionadas en la presente . se incorporan explícitamente en la presente mediante referencia. Ejemplo 1. Primer ensayo en seres humanos (FiH) El primer estudio en seres humanos fue un estudio abierto, con escalado de dosis, de Fase 1/2 para determinar los parámetros de seguridad, tolerabilidad y farmacocinética (PK, por sus siglas en inglés) de FIXFc (proteína de fusión del factor IX de coagulación humana recombinante) . La FIXFc es una proteína de fusión recombinante que comprende el factor IX de coagulación humano unido al dominio Fe de la IgGl humana. La proteína de fusión se expresa en células embrionarias de riñon humanas (HEK 293) . Véase Ejemplo 3.
La FIXFc se encuentra en desarrollo para controlar y prevenir los episodios de hemorragia en pacientes con hemofilia B (deficiencia del factor IX congénita o enfermedad de Christmas) , que incluye el control y la prevención del sangrado en escenarios quirúrgicos.
La FIXFc es una proteína de fusión recombinante que comprende el Factor IX de coagulación (FIX) y un dominio Fe de un anticuerpo humano (isotipo IgGl) . La molécula de FIXFc es heterodimérica con una sola cadena de FIXFc (FIXFc-se) y una sola cadena de Fe (Fe-se) unidas a través de dos enlaces de disulfuro en la región bisagra de Fe. Véase la Figura 1 y la Tabla 2.
El producto fármaco rFIXFc es una solución clara incolora destinada a la administración intravenosa (IV) . El rFIXFc se administra en 1000 UI por un volumen de 5 mL en un vial de 10 mL de un único uso. El producto fármaco se encuentra envasado en viales de vidrio de tipo I USP con tapón de bromobutil y tapas de sello de aluminio simples fácil de quitar. El producto fármaco rFIXFc contiene 200 UI/mL en amortiguador de fosfato de sodio lOmM pH 7.0 con una adición de NaCl 145 mM y polisorbato 20 0.1%. La solución rFIXFc no debe diluirse.
Diseño del estudio. Un total de 14 pacientes previamente tratados con hemofilia B grave se enlistaron y fueron tratados con FIXFc en una infusión intravenosa (IV) durante aproximadamente 10 minutos. Se evaluaron seis niveles de dosis, 1, 5, 12.5, 25, 50 y 100 Ul/kg en el estudio. Se enlistó un paciente por nivel de dosis en los niveles de dosis 1, 5, 12.5 y 25 Ul/kg, y al menos tres pacientes evaluables por nivel de dosis se enlistaron en 50 y 100 Ul/kg.
Luego del chequeo (programado dentro de los 14 días de la dosis de FIXFc) , comenzó el período de tratamiento para los pacientes. El período de tratamiento para cada nivel de dosis incluía una dosis única de FIXFc (Día 1) hasta la culminación del período de observación por seguridad de 72 horas (3 días) para los niveles de dosis 1 y 5 Ul/kg o hasta que se tomara la última muestra PK para los pacientes en niveles de dosis 12.5 a 100 Ul/kg (aproximadamente 10 días). Los pacientes tratados con 1, 5, 12.5 o 25 Ul/kg se enlistaron y fueron tratados de forma secuencial comenzando en 1 Ul/kg. Los pacientes que recibieron 50 Ul/kg no fueron tratados el mismo día y al menos un día de dosificación separada. Luego del tratamiento de los pacientes 50 Ul/kg, comenzó el tratamiento de los pacientes 100 Ul/kg.
El período post-tratamiento fue un período de 30 días de observación por seguridad que comenzó el día en que el paciente recibió la dosis de FIXFc y que se superpuso con el período de tratamiento dado que los pacientes estaban siendo sometidos a las evaluaciones de estudio requeridas, tales como el muestreo de PK, durante este tiempo.
A los pacientes asignados a los niveles de dosis de 12.5 a 100 Ul/kg se les tomaron muestras de sangre para evaluar la actividad FIX y la concentración FIXFc. Se debía tomar las muestras de sangre justo antes de la administración de FIXFc; 15 minutos luego de la finalización- de la infusión; y a 1, 3, 6, 9, 24, 48, 72, 96, 120, 168 y 240 horas luego de la finalización de la infusión o hasta que se alcanzaron los niveles FIX de referencia. Si un paciente seguía teniendo niveles FIX que sobrepasaren los de referencia al punto de tiempo de 240 horas (Día 11 de estudio) , se tomaban muestras a^ las 288 horas (Día 13 de estudio) y una vez más a las 336 horas (Día 15 de estudio) si el nivel FIX estaba por sobre la referencia en el Día 13 de estudio.
Se trató al paciente 10 con BENEFIX™ para luego tomar una muestra de sangre antes del muestreo de FIXFc programado a 216 horas luego de la dosificación. Como consecuencia, la actividad FIXFc y la información del antígeno para las 216 horas y los siguientes puntos de tiempo fueron excluidas del análisis . No ocurrieron más desviaciones que se considere afectaron los resultados del análisis interino de este estudio.
Para el antígeno del Factor IX, se llevaron a cabo análisis farmacocinéticos sobre la concentración de FIXFc observada en el paciente individual en función de la información de tiempo seguido de una infusión IV de FIXFc. Se llevó a cabo un análisis primario utilizando metodología modelo dependiente. La información de la concentración FIXFc se ingresó en la computadora en un modelo abierto de dos compartimientos con eliminación desde el compartimiento central usando estimativos de parámetros iniciales definidos por el usuario para el cálculo de valores de parámetros iniciales. Se generaron constantes de índices microscópicos estimados por inNonlin y se valoró la información de concentración FIXFc con la función de 1/ (Y"hat * La información observada en dos sujetos (por ejemplo, Pacientes 5 y 6) fue descrita de forma inadecuada por el modelo de dos compartimientos. Como consecuencia, se realizó un análisis independiente del modelo en estos dos pacientes utilizando análisis no compartimental WinNonlin del modelo de ingreso de Infusión por IV (regla trapezoidal lineal para el cálculo de AUC) . Para el análisis no compartimental, la semivida fue calculada desde la fase beta utilizando los puntos de información que describen la disminución log- lineal terminal en la regresión. Se utilizó un mínimo de tres puntos para describir la fase de eliminación. Esto ocurrió aproximadamente entre los días 4 y 1 . Para los análisis PK del antígeno, se utilizaron los equivalentes a la dosis "mg/kg" . Estos valores fueron determinados basándose en una actividad específica para FIXFc de 60.2 Ul/mg. Se utilizaron las horas de muestreo, dosis y duraciones de infusión verdaderas para los cálculos. Se utilizaron las horas y dosis de muestreo nominales para la creación de tablas y figuras de tiempo de concentración. Se presentan los parámetros PK individuales y promedios así como estadísticas descriptivas. No se llevó a cabo un análisis estadístico formal porque el intervalo de dosis y el número de sujetos en cada cohorte eran muy pequeños para análisis significativos.
Para la actividad del Factor IX, se aplicó un método de sustracción de los valores de referencia a la actividad en función del perfil de tiempo según el árbol de decisión de sustracción de los valores de referencia (Figura 4) . Los valores de actividad de < 1% se definieron a 1 UI/dL por disminución de referencia. Los tiempos de anteriores a la dosis se tomaron como cero a los efectos de realizar los cálculos. Además, la información de actividad corregida de referencia fue truncada en puntos de tiempo que representaban un regreso a los niveles de referencia. Se realizaron análisis farmacocinéticos en la actividad FIX sustraída de referencia en función de la información del tiempo obtenida luego de la administración de la infusión por IV de FIXFc. Se utilizó una evaluación dependiente del modelo para el análisis de los grupos de dosis por infusión IV. Los datos con sustracción de valores de referencia fueron ingresados en la computadora en un modelo abierto de dos compartimientos con eliminación desde el compartimiento central utilizando estimativos de parámetros límites definidos por WinNonlin para el cálculo de los valores de parámetros iniciales. Se generaron constantes de índices microscópicos estimadas por WinNonlin y se pesó la información de actividad de FIXFc con la función de 1/ (Y"hat . y-natj _ Se utilizaron las horas de muestreo, dosis y duraciones de infusión verdaderas para los cálculos. Se utilizaron las horas y dosis de muestreo nominales para la creación de tablas y figuras de tiempo de concentración .
Cuando se encontraba disponible de la información actual, se obtuvo la actividad a las 168 horas luego de la dosificación (C168) y el tiempo a 1 UI/dL sobre la referencia (TBLP1) de rFIXFc utilizando constantes de índice microscópico generadas por WinNonlin para estimular el nivel de actividad de FIXFc en función de la información de tiempo. Se presentan los parámetros PK individuales y promedios así como estadísticas descriptivas en este Ejemplo. No se llevó a cabo un análisis estadístico formal porque_ el intervalo de dosis y el número de sujetos en cada cohorte eran muy pequeños para análisis significativos.
Los resultados para la farmacocinética del antígeno FIXFc mostraron que las concentraciones de FIXFc en el plasma aumentaban considerablemente luego de la infusión IV corta de FIXFc, con valores de Cmax promedio (+SD) de 1670 (n=l) , 2730 (n=l) , 7510 + 2480 y 15400 ± 3960 ng/mL para los niveles de dosis nominal de 12.5, 25, 50 y 100 Ul/kg, respectivamente, y fue alcanzado dentro de la primera media hora en todos los pacientes. Todos los pacientes tratados con FIXFc- tuvieron aumentos relacionados a las dosis en la exposición al plasma FIXFc sistémico (tal como se evaluó por Cmax y AUCiNF) . Aunque se limitó a un solo paciente evaluable en la dosis nominal 12.5 y 25 Ul/kg, el aumento observado en ambos Craax y AUCiNF fue razonablemente proporcional a la dosis sobre el intervalo de dosis evaluado. (La Tabla 3 muestra la concentración del antígeno FIXFc promedio de grupo y de paciente individual en función de la información del tiempo; clasificados por dosis nominal, dosis real, duración de la infusión y número del paciente. La Tabla 4 muestra la información PK resumida promedio del antígeno de FIXFc de grupo y de paciente individual; clasificada por dosis nominal, dosis real, dosis equivalente a "mg/kg" y número del paciente, muestra la información PK resumida promedio del antígeno de FIXFc de grupo y de paciente individual; clasificada por dosis nominal, dosis real, dosis equivalente a "mg/kg", y número del paciente [sic] y véase la Tabla 11.) Las concentraciones de FIXFc en el plasma disminuyeron en una forma biexponencial luego de la infusión IV corta. Ambos valores semivida de distribución (alfa) y eliminación (beta) aparentaban ser independientes de la dosis en el intervalo de dosis evaluado con valores de semivida alfa y beta de los pacientes individuales que variaban entre 9.79 a 21.2 horas y 71.0 a 140 horas, respectivamente. Los valores semivida alfa promedio (±SD) para los niveles de dosificación nominal de 50 y 100 Ul/kg fueron 13.1 ± 4.77 y 12.1 ± 2.33 horas , respectivamente . Los valores semivida beta promedio (±SD) para los niveles de dosificación nominal de 50 y 100 Ul/kg fueron 110 + 26.5 y 95.8 + 11.1 horas, respectivamente. Además, se determinaron los valores de parámetros de PK primario para Cl, VSs y TMR y, en general, todos aparentaban ser independientes de la dosis en el intervalo de dosis evaluado. Tal como se indicó, esta evaluación se encuentra limitada por información de un solo paciente en los niveles de dosificación nominal de 12.5 y 25 Ul/kg. (Tabla 12 y Figuras 2 , 7 y 8. ) Además, los valores de Cl promedio fueron 2.28 ± 0.374 y 2.11 + 0.464 mL/h/kg para los niveles de dosificación nominal de 50 y 100 Ul/kg, respectivamente. Los valores de VSs promedio fueron 259 ± 78.5 y 238 ± 52.2 mL/h/kg para los niveles de dosificación nominal de 50 y 100 Ul/kg, respectivamente. Además, los valores TMR promedio fueron 112 + 21.5 y 114 ± 17.1 horas para los niveles de dosificación nominal de 50 y 100 Ul/kg.
Los resultados farmacocinéticos de la actividad FIXFc corregida de referencia mostraron que la actividad FIXFc aumentó considerablemente luego de la infusión IV corta de FIXFc, con valores Cmax previstos para el modelo (±SD) promedio de 11.9 (n=l) , 19.9 (n=l) , 41.6 ± 8.97 y 98.2 ± 8.21 UI/dL para los niveles de dosificación nominal de 12.5, 25, 50 y 100 Ul/kg, respectivamente, y fue alcanzado en la primera media hora en todos los pacientes. (La Tabla 5 muestra la actividad FIXFc corregida de referencia promedio de grupo y de paciente individual en función de los datos de tiempo; clasificados por dosis nominal, dosis real, duración de la infusión y número del paciente y. La Tabla 6 muestra el resumen de datos PK de la actividad FIXFc promedio de grupo y de paciente individual; clasificada por dosis nominal, dosis actual, dosis equivalente a "mg/kg" y número del paciente.) Todos los pacientes tratados con FIXFc tuvieron aumentos relacionados con las dosis en la actividad FIX (relativa a la respuesta de referencia de la predosis) . Aunque se limitó a un solo paciente evaluable en ambos niveles de dosis nominal 12.5 y 25 Ul/kg, el aumento observado en ambos Cmax y AUCiNF fue razonablemente proporcional a la dosis en el intervalo de dosis evaluado. (Tablas 6, 9 y 13 y Figuras 3 y 5.) Al final de la infusión, la disminución en la actividad FIX corregida de referencia mostró un decaimiento biexponencial , caracterizado por una fase de distribución (alfa) rápida seguida de una fase de eliminación (beta) log-lineal. Durante la fase alfa, el índice de disminución en la actividad FIXFc fue fluctuante con valores de semivida en pacientes alfa individuales que varían entre 0.140 y 16.6 horas. El aparente aumento dependiente de la dosis en valores de semivida alfa promedio fue confundido por un solo paciente en los niveles de dosis nominales de 12.5 y 25 Ul/kg. Por el gontrario, los valores semivida de eliminación (beta) aparentaban ser independientes de la dosis en el intervalo de dosis con valores semivida beta en pacientes individuales que variaban entre 42.1 y 67.4 horas sobre el intervalo de dosis de 25 a 100 Ul/kg. Aunque se estimó y se informó, la eliminación semivida para el paciente 1 tratado con 12.5 Ul/kg de FIXFc no se incluye en la evaluación resumen dado que los niveles FIX de este paciente fueron detectados solo por hasta 96 horas lo cual tuvo como resultado una fase terminal truncada y contribuyó a una subestimación de la semivida de eliminación terminal . Los valores semivida beta promedios (±SD) para los niveles de dosis nominales de 50 y 100 Ul/kg fueron 52.1 ± 10.4 y 52.5 ± 10.1 horas, respectivamente, y 52.5 ± 9.2 (intervalo 40-67.4) horas para dosis nominales combinadas de 25, 50 y 100 Ul/kg. (Tablas 6, 8 y 13.) Además, se determinaron los valores de parámetros PK primario para Cl, Vi, Vss y TMR y, en general, todos aparentaban ser independientes de la dosis en el intervalo de dosis evaluado.
Además, los valores Cl promedio fueron 3.77 ± 1.12 y 2.89 ± 0.615 mL/h/kg para los niveles de dosis nominales 50 y 100 Ul/kg, respectivamente, y 3.36 ±0.928 mL/h/kg para las dosis nominales combinadas de 25, 50 y 100 Ul/kg. (Tablas 6, 8 y 13.) Los valores Vss promedio fueron 264 ± 77.6 y 179 ± 31.1 mL/kg para los niveles de dosis nominales de 50 y 100 Ul/kg, respectivamente, y 226 + 69.8 mL/kg para las dosis nominales combinadas de 25, 50 y 100 Ul/kg. (Tablas 6, 8 y 13.) Además, los valores TMR promedio fueron 71.7 ± 13.0 y 62.8 ± 8.82 horas para los niveles de dosis nominales 50 y 100 Ul/kg, respectivamente, y 68.05 ± 11.16 horas para las dosis nominales combinadas de 25, 50 y 100 Ul/kg. (Tablas 6, 8 y 13. ) Además de los parámetros PK primarios, los parámetros PK secundarios (por ejemplo, C168, valores K, IVR, etc.) se determinaron para evaluar la duración del efecto de FIXFc . Tal como se anticipó, se observaron los aumentos dependientes de la dosis en los valores C168, TBLP1, TBLP3 y TBLP5. Por el contrario, los valores K y IVR aparentaban ser independientes de la dosis en el intervalo de dosis evaluado. En el intervalo de la dosis total, el paciente individual previsto para el modelo y los valores K observados variaban entre 0.61 y 1.02 y entre 0.62 y 1.17 UI/dL por Ul/kg, respectivamente. Los valores K promedio previstos para el modelo para los niveles de dosis nominales de 50 y 100 Ul/kg fueron 0.76 y 0.90 UI/dL por Ul/kg, respectivamente, y 0.821 ± 0.1387 (intervalo 0.61-1.02) horas para dosis nominales combinadas de 25, 50 y 100 Ul/kg. Los valores IVR previstos para el modelo promedio para los niveles de dosis nominal de 50 y loo Ul/kg fueron 34.5 y 35.1%, respectivamente. Los valores K observados promedio para los niveles de dosis nominales de 50 y 100 Ul/kg fueron 0.86 y 1.02 UI/dL por Ul/kg, respectivamente, y 0.926 ± 0.1787 (intervalo 0.97-1.17) UI/dL por 1 Ul/kg para dosis nominales combinadas de 25, 50 y 100 Ul/kg. Los valores IVR observados promedio para los niveles de dosis nominal de 50 y 100 Ul/kg fueron 39.2 y 39.8% respectivamente. (Tablas 6, 7, 8 y 13.) La Tabla 7A-7B muestra el resumen de información de la actividad secundaria PK del FIXFc promedio de grupo y de paciente individual, clasificada por dosis nominal, dosis real y número del paciente .
Cada 1 Ul/kg de rFIXFc infundido aumentaba la actividad de FIX en el plasma en un 0.93 + 0.18 Ul/dl en promedio, y esta recuperación gradual (valor K) mostró una correlación positiva débil con el peso corporal (R2=0.336, p=0.048) (Figura 23) .
Los estimados farmacocinéticos para la actividad FIXFc fueron consistentes con aquellos para el antígeno rFIXFc (por ejemplo, comparar las Tablas 13 y 14) . Además, hubo una excelente correlación entre la actividad rFIXFc y los niveles de antígeno, lo cual indica la preservación de la actividad rFIXFc in vivo. (Figura 9.) Además, relacionado con la información histórica para BENEFIX™ (Wyeth) , el rFIXFc demostró (Tabla 8) lo siguiente: Linealidad de dosis desde 25-100 UI/kg aumento de 3 veces en ti2be a aumento de 3 veces en tiempo medio de residencia 24% recuperación gradual mejorada reducción de 2.5 veces en aclaramiento La FIXFc es una proteína de fusión recombinante que comprende FIX unido al dominio Fe de la IgGl humana. El FIXFc ha sido diseñado para ser una versión de acción prolongada de FIX. Estudios preclínicos con FIXFc han mostrado una prolongación de la semivida de la actividad FIX comparada con BENEFIX™, el producto FIX recombinante comercialmente disponible. El fundamento para este estudio fue evaluar la seguridad y PK del FIXFc en pacientes con hemofilia B grave. Para este estudio, 12 sujetos evaluables con edades entre 18 y 76 años estaban disponibles para la evaluación PK. Cada sujeto recibió una única administración de FIXFc a una dosis nominal de 12.5, 25, 50 o 100 UI/kg de peso corporal infundido en forma intravenosa durante aproximadamente 10 minutos. Se obtuvieron muestras de plasma para evaluaciones PK de la actividad FIXFc y de las concentraciones de antígeno antes de la infusión, así como hasta 14 días luego de la dosificación. La PK de ambos, el antígeno y la actividad FIXFc, se caracterizó independientemente en este estudio utilizando métodos dependientes e independientes del modelo.
El FIXFc se toleró bien luego de la administración de dosis IV únicas de 12.5, 25, 50 y 100 Ul/kg de peso corporal. No se manifestaron eventos adversos serios relacionados al fármaco en el presente estudio. No se detectaron anticuerpos neutralizantes o de unión a rFIXFc en ningún sujeto.
Se observaron aumentos proporcionales a la dosis aproximados en Cmax y AUCiNF en el antígeno y la actividad FIXFc luego de la administración de dosis de 12.5 a 100 Ul/kg, pero el V y Cl eran similares a través de todas las dosis. Estos resultados indican que el antígeno y actividad FIXFc mostraron PK lineal sobre el intervalo de dosis evaluado. Los valores de parámetro V relativamente pequeños pueden indicar que el FIXFc entra en el fluido intersticial pero no cruza la membrana celular hacia los fluidos intracelulares .
Se observaron niveles pico en el plasma del antígeno y la actividad FIXFc hasta 0.5 horas antes de la finalización de la infusión y se mantuvieron detectables por varios días luego de la dosificación. Se observaron indicios de aclaramiento reducido y semivida prolongada en el antígeno y la actividad FIXFc.
Los valores semivida de eliminación terminal y aclaramiento promedio asociados con las concentraciones de antígeno FIXFc para los niveles de dosis de 50 y 100 Ul/kg fueron 2.28 y 2.11 mL/h/kg y 110 y 95.8 horas, respectivamente . De manera similar, los valores semivida de eliminación terminal y aclaramiento promedio asociados con los niveles de actividad de FIXFc en el mismo intervalo de dosis fueron 3.77 y 2.89 mL/h/kg y 52.1 y 52.5 horas, respectivamente. La comparación de los resultados de la actividad PK de FIXFc observados en el estudio actual con los que presentaron PK para la actividad BENEFIX™ (Summary of Product Characteristics of BENEFIX™; 18 de noviembre de 2009) reveló una reducción aproximada de 3 veces en el aclaramiento FIXFc y un aumento aproximado de 3 veces en la semivida de eliminación terminal de FIXFc y en el tiempo medio de residencia en comparación con BENEFIX™.
Con las mejoras observadas en PK, el FIXFc proporcionará una protección prolongada contra el sangrado, lo cual permitirá que las inyecciones en los individuos con Hemofilia B sean menos frecuentes. En base a los resultados de este ensayo, el rFIXFc podrá ser administrado cada dos semanas o dos veces al mes utilizando dosis de 100 Ul/kg y al menos una vez a la semana utilizando dosis más bajas. El método requiere menos inyecciones. Además, el uso de rFIXFc tendrá otros impactos clínicos potenciales tales como: acceso venoso central, cumplimiento del método mejorado, reducción de sangrado frecuente y aumento en la protección de las articulaciones de los sangrados.
Ejemplo 2. Ensayo de fase 1/2/3 de B-LONG Esta es una evaluación abierta, multicéntrica de la seguridad, farmacocinética y eficacia de la fusión del Factor IX Fe recombinante coagulante de acción prolongada (rFIXFc) en la prevención y tratamiento de sangrado en sujetos con hemofilia B grave previamente tratados. El tratamiento con los productos de FIX que se encuentran actualmente disponibles en el mercado requiere dosificación 2-3 veces por semana. La comunidad médica podría considerar que un producto con una semivida prologada que extiende el intervalo de dosificación requerido a una vez a la semana o más representa una mejora significativa en el tratamiento de los pacientes con hemofilia grave.
Los niveles de dosificación varían ampliamente para los productos de rFIX en estudios de profilaxis clínica: las dosis informadas varían desde 10 a 171 Ul/kg (Roth et ál., Blood 98:3600 (2001)) o 40 a 100 Ul/kg (MASAC Recommendation 177, Fundación Nacional de Hemofilia (octubre de 2006)). Asimismo, se prevé que los niveles mínimos de actividad de FIX durante el tratamiento profiláctico en sujetos que no presentaban signos clínicos de sangrado varíen entre 0.2 y 3.8 UI/dL (Carlsson et ál. , Hemophilia 4:83 (1998)). Los regímenes de dosificación individuales basados en el estado clínico de un paciente son de práctica común dada la variabilidad entre pacientes individuales.
Los resultados del estudio de fase l/2a (Ejemplo 1) que evalúa la seguridad y la farmacocinética de una dosis única de una formulación líquida congelada de rFIXFc han demostrado que el fármaco es bien tolerado en dosis que varían ente 1 y 100 Ul/kg, y la caracterización farmacocinética sugiere diversas ventajas sobre los tratamientos actualmente disponibles, a saber, semivida y TMR 3 veces mayores que la previamente informada para BENEFIX™ (61 horas contra 19 horas) . El propósito de este estudio es la eventual determinación de parámetros PK estimados de rFIXFc liofilizado en humanos para compararlos con estimados de parámetros PK de BENEFIX™ en humanos y demostrar la eficacia de rFIXFc liofilizado en la prevención y tratamiento de sangrado y la seguridad de su dosificación repetida para sujetos con hemofilia B grave previamente tratados.
El . estudio implicará cuatro grupos: un régimen profiláctico de dosis baja (n=25) , un régimen profiláctico de dosis elevada (n=25) , un régimen a demanda (n=20) y un régimen de cirugía mayor (n=5) . El grupo de régimen de dosis baja incluirá un subgrupo PK (n=16) con dosis de BENEFIX™ seguida por cambio a rFIXFc.
Los principales objetivos de estudio son: evaluar la seguridad y tolerabilidad de rFIXFc en todos los grupos de tratamiento, evaluar la eficacia de rFIXFc en todos los grupos de tratamiento y evaluar la eficacia profiláctica en terapia a demanda (comparación de la cantidad anual de episodios de sangrado entre los Grupos 1 y 2 y contra el Grupo 3 de régimen a demanda) .
Los objetivos secundarios del estudio son: comparar los parámetros PK estimados de rFIXFc y BENEFIX™, evaluar la eficacia de rFIXFc en los grupos a demanda y quirúrgico, evaluar y comparar los parámetros PK estimados de rFIXFc en la referencia y en la Semana 26 (+ 1 semana) en el subgrupo PK, evaluar la respuesta de los sujetos al tratamiento en todos los grupos y evaluar el consumo de rFIXFc en todos los grupos .
Principales criterios de inclusión: Sexo masculino, de 12 años en adelante y con peso de al menos 40 kg Diagnóstico de hemofilia B (nivel de referencia de Factor IX menor o igual que 2%) Historial de al menos 100 días de exposición a cualquier producto de Factor IX Conteo de plaquetas =100,000 células/ L INR, por sus siglas en inglés (relación internacional normalizada) = 1.40 tal como se define por el intervalo normal de laboratorio que realiza el análisis Conteo de CD4 = 200 células/pL Principales criterios de exclusión Historial de inhibidores de Factor IX Disfunción renal o hepática Diagnóstico de otro defecto de coagulación que no sea hemofilia B Historial previo de anafilaxis asociada con administración de cualquier FIX o inmunoglobulina IV.
Ingesta de fármacos inmunosupresores (por ejemplo, corticoesteroides sistémicos, sin embargo, se permite la ingesta de TARGA (terapia antirretroviral de gran actividad) ) .
Ejemplo 3. Producción de FIXFc en células HEK293 Se produjo FIXFc en células HEK293 transfectadas en forma estable que contienen un cásete de expresión de FIXFc (FIX de origen natural directamente fusionado a la región Fe) y un c sete de expresión de Fe solo. Además, las células fueron transfectadas con un cásete de expresión para PC5, que es una enzima de procesamiento que permite que se procese por completo del propéptido de FIX. Las células transfectadas fueron cultivadas en medio de suspensión libre de suero que contenía vitamina K, y secretaron las tres proteínas. Dímero de FIXFc, monómero de FIXFc (una cadena de FIXFc y una cadena de Fe) y dímero de Fe. Se purificó el monómero FIXFc ("FIXFc") mediante cromatografía en columna (elución de pseudo-afinidad con Proteína A, Fractogel DEAE y Q Sepharose con CaCl2 de fuerza iónica baja) , se inactivo viralmente y se filtró para su administración a sujetos humanos. Véase también Peters et ál . , Blood 11 de marzo de 2010; 115 (10) : 2057-64 (Epub 7 de enero de 2010) y la patente estadounidense N° 7,566,565; que se incorporan a la presente en su totalidad mediante esta referencia.
Se midió la actividad coagulante de FIXFc a través de la cuantificación de su capacidad para devolver la actividad coagulante a plasma con deficiencia de FIXFc y se empleó MLA Electra 1600C (Medical Laboratory Automation/Instrument Labs, Pleasantville , NY) . Se compararon los resultados a la curva de calibración generada utilizando diluciones serial de un estándar de FIX de la Organización Mundial para la Salud.
Se considera que la fosforilación de serina y la sulfatación de tirosina del Factor IX son importantes para la recuperación in vivo. Se ha informado que MONONINE™ (Factor IX purificado por plasma (pdFIX) comercializado por CSL Berhing) presenta una mejor recuperación in vivo que BENEFIX™ (FIX recombinante (rFIX) comercializado por Wyeth) debido al nivel más elevado de fosforilación/sulfatación de MONONINE™ (>90%/>90% contra <10%/5%) . Sin embargo, FIXFc producido en células HEK293 prácticamente no presenta fosforilación/sulfatación (<10%/4 , muy similar a BENEFIX™) y exhibe mejor IVR (1.0 Ul/dl por Ul/kg) que BENEFIX™ (0.7).
De manera adicional, el FIXFc producido tal como se describe anteriormente presentó un nivel (0.01-0.001%) significativamente menor (10-100 veces) de FIX activado (FlXa) , una impureza vinculada al producto, que MONONINE™ (pdFIX) o BENEFIX™ (rFIX) (0.1%). El FIXFc resultante tendrá raenos eventos trombóticos no deseados luego de la administración de MONONINE™ o BENEFIX™.
Ejemplo 4. Estudios pediátricos: Extrapolación e interrelación entre el desarrollo en poblaciones adultas y pediátricas.
Las características de los pacientes que demuestran relación con la farmacocinética de FIX incluyen cambios fisiológicos que dependen de la edad (Bjórkman y Berntorp, Clin. Pharmacokinetics 40:815-32 (2001) y Bjórkman, Hemophilia 9(supl. 1):101-10 (2003)) y tamaño y composición corporal (Shapiro, Hemophilia 11:571-82 (2005)). Por lo tanto, se ha determinado que generalmente el aclaramiento ajustado al peso (CL) de FIX disminuye con la edad y/o peso corporal durante el crecimiento de infancia a adultez, con un correspondiente aumento de la semivida terminal (ti/2) . Para el producto de rFIX (BENEFIX™) , CL y volumen de distribución en estado estacionario (Vss) aumentan en niños y luego permanecen constantes durante la adultez, por lo que estos parámetros se monitorean de cerca en los estudios pediátricos .
Los niveles máximos de actividad procoagulante de FIX (FIX:C) dependen del volumen inicial de distribución de FIX: C luego de una única dosis y/o de repetidas dosis de FIX. La distribución inicial de FIX es rápida. Sin embargo, se ha demostrado que la recuperación in vivo (recuperación gradual promedio) para BENEFIX™ fue normalmente 30% menor que la de un factor de coagulación derivado de plasma purificado con anticuerpo monoclonal (pdFIX) (Roth et ál . , Blood 98:3600-3606 (2001) ) . Además, estudios con pdFIX han demostrado que los sujetos de 15 años o menores presentan una recuperación significativamente menor que aquellos que son mayores (White et ál., Thromb. Haemost. 73:779-84 (1995)). Por lo tanto, también se monitorearán los niveles mínimos y máximos en los estudios pediátricos .
Dado que estudios han demostrado que los niños pueden responder de forma distinta a los adultos, se llevarán a cabo evaluaciones farmacocinéticas en la referencia con 50 Ul/kg de rFIXFc en niños con muestreo farmacocinético abreviado.
El estudio de fase l/2a (SYN-FIXFc-07- 001) que evaluó la seguridad y el perfil farmacocinético de una única administración intravenosa de rFIXFc en PTP de 18 años o más con hemofilia B grave fue completado recientemente. Los resultados preliminares de esta exploración inicial en seres humanos demuestra un aumento de aproximadamente 3 veces en los parámetros farmacocinéticos (semivida terminal promedio, TMR y AUC) de rFIXFc en comparación con lo que ha sido informado en la bibliografía respecto a BENEFIX™ (véase anteriormente) . De manera adicional, rFIXFc fue tolerado bien y no hubo señales de reacciones en el sitio de inyección, ni se desarrollaron inhibidores. En conjunto, estos resultados de seguridad y farmacocinéticos apoyan el inicio de un estudio informativo de fase 1/2/3 (Estudio 998HB102 (B-LONG) , véase anteriormente) para evaluar la seguridad, farmacocinética y eficacia de rFIXFc en la prevención y tratamiento de sangrado en 104 PTP (con al menos 100 ED de tratamiento para productos previos) de 12 años o más con hemofilia B grave (<2%) . Una vez que se encuentran disponibles datos del estudio de registro, se iniciará un programa pediátrico para investigar adicionalmente la seguridad y eficacia de rFIXFc en niños. Si se demostrara semivida de rFIXFc prolongada en humanos, significaría que serán necesarias inyecciones menos frecuentes a individuos con hemofilia B para la prevención y tratamiento de sangrado.
Estudio pediátrico de PTP de Fase 2/3 en niños previamente tratados (<12 años) Una vez que se encuentran disponibles los datos de 10 PTP (>12 años) para 26 ED del estudio de registro (Estudio 998HB 102), se iniciará 'un estudio pediátrico de fase 3. Este estudio pediátrico de fase 2/3 en PTP en pacientes que presentaron al menos 50 ED para productos FIX antes de su participación, se llevará a cabo globalmente en aproximadamente 25 sitios clínicos. Se analizarán aproximadamente 25 PTP (para asegurar 20 sujetos evaluables) de edades 2-11 con hemofilia B grave (<2 UI/dL [<2%] FIX endógeno) y se seleccionarán de acuerdo con los criterios anteriormente definidos. Todos los sujetos evaluables completarán la parte farmacocinética del estudio (PK con producto FIX anterior al estudio y luego PK con rFIXFc) y recibirán dosis semanales de rFIXFc durante 52 semanas. Este estudio registrará la recuperación gradual, la semivida in vivo, la AUC y el aclaramiento de rFIXFc. Todos los sujetos se someterán a evaluación farmacocinética en la referencia con FIX anterior al estudio y rFIXFc, y la duración del estudio para cada uno de los sujetos será de aproximadamente 69 semanas, que incluyen el análisis y el seguimiento.
Cada sujeto recibirá 50 UI/kg de rFIXFc en la referencia para evaluación farmacocinética seguido de una dosis semanal repetida de 50-60 UI/kg de rFIXFc. En lo que respecta a la observancia de los pacientes, el muestreo farmacocinético abreviado será empleado para un producto anterior al estudio y para rFIXFc de la siguiente forma: antes de la dosis, al fin de la inyección, 30 + 10 minutos, 3 ± 1 horas, 24 + 3 (Día 1), 72 ± 3 (Día 3), 120 ± 3 (Día 5) y 168 ± 3 horas (Día 7) luego del fin de la inyección. Respecto a la inmunogenicidad, todos los sujetos serán tratados con rFIXFc semanalmente por un mínimo de 50 ED. Se incluirán parámetros de seguridad para la determinación de seguridad y tolerabilidad inmediatas tales como: (a) signos vitales (pulso, presión sanguínea, frecuencia respiratoria, temperatura) antes de la inyección rFIXFc y 30 minutos después de la inyección; (b) parámetros hematológicos y de coagulación; (c) bioquímica clínica; (d) determinaciones frecuentes de inhibidor de FIX con el ensayo Bethesda modificado con Nijmegen (inmediatamente antes de la primera exposición, ED4 [semana 4], ED12, ED24, ED36 y ED50 y (e) eventos adversos .
Se evaluará la eficacia mediante la valoración de la cantidad de episodios de sangrado, intervalos de sangrado y cantidad de tratamientos y consumo de FIX por año anualizado y por evento.
Estudio pediátrico de PUP de Fase 2/3 en niños sin tratamiento previo (0-11 años) Una vez que se encuentran disponibles los datos de 10 niños previamente tratados (2-11 años) con farmacocinética completa y se encuentran disponibles 50 ED en el estudio anterior, se iniciará un estudio pediátrico de PUP [paciente sin tratamiento previo, según sus siglas en inglés] de fase 2/3. Este estudio se llevará a cabo en forma global en aproximadamente 60 sitios clínicos. Se analizarán aproximadamente 30 PUP (para asegurar 20 sujetos evaluables) de 0 años e adelante con hemofilia B grave (<2 UI/dL [<2%] FIX endógeno) y se seleccionarán de acuerdo con los criterios anteriormente definidos.
La participación en el estudio variará dado que el tratamiento inicial puede comenzar con rFIXFc como régimen profiláctico modificado. Se espera que la participación de cada paciente en el estudio de aproximadamente cuatro años, que incluyen análisis y seguimiento. Durante este tiempo, se espera que los pacientes alcancen 50 ED para rFIXFc. Respecto a la inmunogenicidad, todos los sujetos serán tratados con aproximadamente 50 ED de rFIXFc o hasta cuatro años. Se incluirán parámetros de seguridad para la determinación de seguridad y tolerabilidad inmediatas: (a) determinaciones frecuentes de inhibidor de FIX con el ensayo Bethesda modificado con Nijmegen y (b) eventos adversos.
Se evaluará la eficacia mediante la valoración de la cantidad de episodios de sangrado, intervalos de sangrado y cantidad de tratamientos y consumo de FIX por año anualizado y por evento.
Ejemplo 5. Caracterización bioquímica, actividad y análisis PK en animales no humanos El rFIXFc producido en el Ejemplo 3 se caracterizó para su modificación postraduccional y se obtuvieron los siguientes resultados (véanse Tabla 15 y Figura 11) . El propéptido de rFIXFc se procesó en forma adecuada durante la producción. El patrón de carboxilación gamma de rFIXFc fue similar a aquel de rFIX. Adicionalmente , Gla/molécula total (11.2 ± 0.7) de rFIXFc fue comparable a rFIX. Debido a que la carboxilación gamma en determinados residuos es esencial para la actividad FIX, estos son resultados importantes. Además, la fosforilación de Ser 158 y la sulfatación de Tyr 155 de rFIXFc fueron comparables a rFIX. Los glucanos N enlazados en FIX no se encuentran completamente sialilados, como en rFIX. La glicosilación 0 enlazada de rFIXFc en el primer dominio EGF fue la misma que FIX, pero en diferentes proporciones relativas . La Asp 64 de rFIXFc presentó un grado mayor de beta-hidroxilación que rFIX o FIX derivado del plasma (pdFIX) . El FIX activado se presentó a nivel mucho menor en la preparación de rFIXFc que en las preparaciones de rFIX o pdFIX, tal como se discute en detalle en el Ejemplo 3.
De manera adicional, se administró rFIXFc a varias especies de animales para determinar su actividad y parámetros PK. Los resultados se presentan en la Tabla 16 y en las Figuras 12-16.
Ejemplo 6. Carboxilación gamma Analizar y caracterizar la ?-carboxilación de los ácidos glutámicos (Gla) en una cantidad preclínica de material FIXFc y de productos FIX comercialmente disponibles fueron los objetivos de este estudio, para caracterizar el contenido de Gla en una fracción "pico" enriquecida y una fracción de "cinta" de elución de sal elevada que se origina de una etapa de intercambio iónico de cromatografía de pseudo-afinidad, y para separar adicionalmente un "pico" enriquecido y una fracción de "cinta" de elución de sal elevada mediante HPLC de intercambio iónico y caracteriza adicionalmente las especies separadas.
Para alcanzar estos objetivos, se desarrolló una cantidad de métodos analíticos complementarios. Estos incluyen el análisis de aminoácidos (AAA) con hidrólisis básica para determinar el contenido (total) de Gla, mapa peptídico (LC/MS) mediante péptidos Lys-C para determinar la distribución de Gla, HPLC analítica de intercambio iónico de moléculas intactas para separar isoformas y tiempo de tromboplastina parcial activada (aPTT) para determinar la actividad biológica.
Los dos péptidos que contienen Gla (E) son: -K1K2 : Y SGKL7B8BFVQGNL1SB 17ECM20E21BK • [M+H] +6 Gla = 2953.9 • [M+H] +5 Gla = 2909.9 -K3 : CSF26E27EAR3°EVF33JBNT36£RTT4°£FWK · [M+H] +6 Gla = 2959.9 • [M+H] +5 Gla = 2915.9 • [M+H] +4 Gla = 2871.9 Se desnaturalizaron, redujeron, alquilaron y digirieron con Lys-C (1:20 E:S) treinta microgramos de muestra (originada a partir de fracción pico enriquecida, fracción cinta de sal elevada y cada especie de la HPLC analítica de intercambio iónico) . El digerido se inactivo con TFA al 2% y se inyectó en una columna Phenomenex Júpiter C18 (2.0 x 250 mm) . La separación se llevó a cabo en un sistema Agilent 1100. La columna se mantuvo a 25 °C y los péptidos se eluyeron con un gradiente de acetonitrilo de etapas múltiples. Se llevó a cabo espectrometría de masas (Thermo-Fisher LCQ) en modo "Triple Play" .
Se desarrollaron métodos complementarios para analizar y caracterizar el contenido de Gla y la distribución preclínica de material rFIXFc . El contenido y la distribución de la ?-carboxilación de ácidos glutámicos (Gla) en una cantidad preclínica de rFIXFc (fracción pico enriquecida) se llevó a cabo y se comparó a productos comercialmente disponibles. Mediante análisis se demostró que el contenido de Gla y la distribución son similares a los de productos comercialmente disponibles. Se analizó una fracción "cinta" de elución de sal elevada y se comparó a la fracción de pico enriquecida. El análisis indicó un nivel reducido de ?-carboxilación .
Se aisló el FIXFc (fracción de pico enriquecida) de la etapa de intercambio iónico de cromatografía de pseudo-afinidad y se separó adicionalmente en 3 isoformas mediante HPLC analítica de intercambio iónico. Las especies cargadas y separadas por columna ??? se encontraban muy ?- carboxiladas . (La carga de la columna AEXes la fracción de cinta recolectada durante una etapa de elución de sal elevada de la etapa de intercambio iónico de cromatografía de pseudo-afinidad . Las especies cargadas y separadas por columna AEX eran biológicamente activas. El contenido y la distribución de Gla fueron similares a rFIX. El mapa de péptidos indica la distribución de 4/5/6 Gla en el péptido K3. El mapa de péptidos indica una población elevada de 6 Gla en el péptido K1K2 y un nivel de traza de 5 Gla.
Se aisló el FIXFc (fracción de cinta) de la etapa de intercambio iónico de cromatografía de pseudo-afinidad y se separó adicionalmente en 2 isoformas mediante HPLC analítica de intercambio iónico. Las especies cargadas y separadas por columna AEX se redujeron en nivel de ?-carboxilación . El contenido relativo de Gla era reducido en relación a la fracción pico enriquecida de FIXFc. Se observó un nivel disminuido de actividad biológica. El mapa de péptidos indica una población aumentada de 5 Gla en K1K2 relativa a la fracción de pico enriquecida y puede sugerir un impacto en la actividad biológica.
Referencias (cada una de las que se incorpora en su totalidad a la presente mediante esta referencia) : Dumont JA, et ál . , Monomeric Fe Fusión Molecules in Therapeutic Abs-From Bench to Clinic, Ch. 33 pág. 779-795; Gillis S, et ál., Protein Science (1997) 6:185; White GC, efc ál . , J. Thrombosis and Haemostasis (1997) 78:261; Hansson K y Stenflo J, Journal Thrombosis and Haemostasis (2005) 3:2633 y Peters RT, et ál . , Blood (2010) 115:2057.
Ejemplo 7. Efecto de la actividad procoagulante de rFIXFc en modelos de sangrado de ratones HemB Se demostró la potencia comparable de rFIXFc y BENEFIX™ en sangre entera de ratón HemB ROTE in vitro y en un modelo sangrado de cortes en la cola de ratón HemB in vivo.
Se evaluó la capacidad de rFIXFc para formar coágulos estables y firmes mediante tromboelastometría rotatoria (ROTEM", Pentapharm GmbH, Múnich, Alemania) con cloruro de calcio como activador (NATEM) . Los grupos de sangre completa recolectados de la vena cada de ratones HemB se dividió en siete alícuotas a las que se agregó rFIXFc hasta una concentración final de 7.4%, 0.74% y 0.074% de actividad de FIX normal o BENEFIX™ hasta 10%, 1%, 0.1% de normal. Se agregó solución amortiguadora de formulación de FIX a la muestra de sangre, como control negativo. Se generó un total de 10 grupos de sangre de 5 ratones HemB para completar la evaluación. Se inició la reacción de NATEM con la adición de CaCl2. Se evaluaron los parámetros de coagulación que incluyen tiempo de coagulación (CT) , tiempo de formación de coágulo (CFT) y ángulo Alfa. Se resumen los promedios y SD de CT, CFT y ángulo Alfa en la Tabla 17. Se grafican las respuestas a las dosis para los tres parámetros en la Figura 17. Los tres parámetros son comparables entre rFIXFc y BENEFIX™ en el intervalo de dosificación analizado ((p>0.05 mediante análisis de una vía ANOVA (Kruskal-Wallis) ) .
También se evaluó la eficacia aguda de rFIXFc en modelos de sangrado en cortes en la cola de ratón HemB . (Figura 18) . Se dispuso ratones HemB macho en estratos para lograr una presentación de igual peso corporal y edad en diferentes grupos de tratamiento. Antes de que se realizaran los cortes en la cola, se anestesió a los ratones con un cóctel de 50mg/kg de ketamina y 0.5 mg/kg de dexmedetomidina y se los colocó sobre una almohadilla eléctrica para mantener la temperatura corporal . Luego se sumergieron las colas de los ratones en agua a 37 °C durante 10 minutos para dilatar la vena lateral. Cuando las venas se dilataron, se inyectó rFIXFc, BENEFIX™ o vehículo en la vena de la cola y 5 minutos después se cortaron los 4 mm distales de la cola con un escalpelo #11 con borde recto. Se recogió la sangre que salió de la herida sobre 13 mi de solución salina tibia durante 30 minutos y se cuantificó la pérdida de sangre en forma gravimétrica . Se analizaron seis grupos de tratamiento con rFIXFc (720, 360, 240, 120, 80, 40 Ul/kg, n=15) y tres grupos de tratamiento con BENEFIX™ (360, 120, 40 Ul/kg, n=15) . En la Figura 19A se muestran las curvas de valores de pérdida de sangre y respuesta a la dosis para la pérdida promedio de sangre y en la Tabla 18 se resumen los volúmenes promedio de pérdida de sangre de cada grupo de tratamiento. La respuesta a la dosis en volúmenes promedio de pérdida de sangre para rFIXFc y BENEFIX™ son comparables (p = 0.9315 según corrección por prueba t de Welch desapareada) .
Los inventores de la presente evaluaron la eficacia de rFIXFc y BENEFIX™ tanto en un ensayo ROTEM* ex vivo como en un modelo de sangrado de corte transversal de cola (TVT, por sus siglas en inglés) en ratones HemB para determinar si la semivida extendida en 3 veces de rFIXFc en relación con BENEFIX™ tuvo como resultado la eficacia prolongada de rFIXFc. Figura 20.
En ROTEM* ex vivo, los ratones HemB recibieron 50 Ul/kg de rFIXFc o 100 Ul/kg de BENEFIX™ por inyección intravenosa. Se recolectó sangre entera de la vena cava de animales tratados 5 minutos, 24, 72, 96, 120, 168 y 216 horas después de la dosis de rFIXFc (n=8 ratones en cada punto de tiempo) o 5 minutos, 24, 48, 72 y 96 horas después de la dosis de BENEFIX™ (n=4 ratones/punto de tiempo) . Las muestras de sangre se analizaron inmediatamente por NATEM. Se presentan los promedios y SD de CT, CFT y ángulo alfa en la Tabla 19, y las curvas de CT, CFT y ángulo alfa en función de tiempo se exponen en la Figura 21. En comparación con BENEFIX™, rFIXFc demostró CT, CFT y ángulo alfa comparables a 5 minutos, pero CT, CFT y ángulo alfa significativamente aumentados luego de 72 horas, a pesar de una dosis 2 veces menor en relación con BENEFIX™ .
Se dispuso ratones HemB macho en estratos para lograr una representación igualitaria de peso corporal y edad en 9 grupos de tratamiento diferentes para evaluar la eficacia de rFIXFc y BENEFIX™. Se administró rFIXFc por inyección intravenosa en dosis de 4 Ul/kg, 13 Ul/kg ,40 Ul/kg y 120 Ul/kg 72 horas antes del corte transversal en la vena de la cola, mientras que se administraron las mismas dosis de BENEFIX™ 24 horas antes de la herida. Antes de que se realizaran los cortes transversales en la vena de la cola, se anestesió a los ratones con un cóctel de 50mg/kg de ketamina/0.125 mg/kg de dexmedetomidina/O .1 mg/kg de buprenex. Para que los ratones mantengan actividad normal luego del corte transversal en la vena de la cola, se les administra 1 mg/kg de solución de atipamezol para revertir el efecto de la dexmedetomidina, que se administró inmediatamente después del corte transversal en la vena de la cola con un escalpelo número 11 de borde recto en un área en la que el diámetro de la cola es de aproximadamente 3 mm. La sangre que brotó se lavó con solución salina tibia para garantizar buena visión de la herida y luego se colocó el ratón solo en una jaula limpia con papel blanco como lecho durante las siguientes 24 horas. Se observó y registró cada hora hasta 12 horas después de la herida el nuevo sangrado y la actividad física. Se practicó eutanasia a los ratones moribundos inmediatamente después de que fueron identificados y se llevó a cabo un control 24 horas después de la herida para completar el estudio. La curva de Kaplan-Meier de tiempo de eutanasia y el cuadro de tasas de supervivencia 24 horas después de TVT se muestran en la Figura 22. Se determinó mediante la prueba log-rank que todos los grupos de tratamiento con dosis mayores a 4 UI/kg eran significativamente mejores que el grupo de vehículo (p< 0.001). Además, la supervivencia es comparable entre ratones que recibieron la misma dosis de rFIXFc 72 horas antes de la herida y aquellos con BENEFIX™ 24 horas antes de la herida (p= 0.4886, 0.9268, 0.7279 y 0.5209 para grupos de dosis de 4, 13, 40 y 120 UI/kg, respectivamente). Se graficaron las tasas de supervivencia 24 horas después de TVT y se extrapoló el valor de ED50 para cada molécula a partir de la curva. El valor de ED50 para ambos tratamientos fue similar, 17.8 UI/kg para rFIXFc y 15.4 UI/kg para rFIX. Por lo tanto, rFIXFc proporcionó una duración 3 veces mayor de la protección en ratones HemB en relación con una dosis comparable de BENEFIX™ tal como se midió por la supervivencia y por el nuevo sangrado posterior a la herida por corte transversal en la vena de la cola. Por lo tanto, rFIXFc proporcionó una duración 3 veces mayor de la protección en ratones HemB en relación con una dosis comparable de BENEFIX™ tal como se midió por la supervivencia y por el nuevo sangrado posterior a la herida por corte transversal en la vena de la cola.
En conclusión, tal como lo demuestran los datos, mientras que 15.4 UI/kg de BENEFIX™ tuvieron como resultado la supervivencia 24 horas después de la dosis de 50% de los ratones HemB a los que se les realizó un corte transversal en la vena de la cola, 17.8 Ul/kg de rFIXFc alcanzó 50% de supervivencia 72 horas después de la dosis en animales que sufrieron heridas. Por lo tanto, rFIXFc demostró una eficacia profiláctica 3 veces mayor correlativa a la extensión de su semivida en relación con BENEFIX™. Se corroboraron adicionalmente los resultados de los modelos de sangrado mediante análisis ROTEM* ex vivo de sangre entera de ratones HemB tratados ya sea con 100 Ul/kg de BENEFIX™ o 50 Ul/kg de rFIXFc. Se observó una mejora en la formación de coágulos comparable en ambos grupos de tratamiento 5 minutos después de la dosis. Sin embargo, los parámetros de ROTEM"5 más importantes tales como el tiempo de coagulación, el tiempo de formación del coágulo y ángulo alfa mejoraron en forma significativa en los ratones tratados con rFIXFc entre 72 y 216 horas después de la dosis a pesar de la dosis 2 veces menor de rFIXFc en relación con BENEFIX™.
En resumen, la potencia aguda de rFIXFc es comparable con aquella de BENEFIX™ tal como se muestra en sangre entera ROTElvf in vitro y en el modelo de sangrado de corte en la cola en ratones HemB. Se demostró la eficacia profiláctica prolongada de rFIXFc en sangre entera ROTEM^ ex vivo de ratones HemB tratados y se determinó que era aproximadamente 3 veces más larga en comparación con BENEFIX™ en el modelo de sangrado de corte transversal en la vena de la cola de ratones HemB. La eficacia prolongada de rFlXFc se correlaciona con la ??/2 3 veces mayor de rFIXFc en relación con BENEFIX™ previamente demostrada en estudio farmacociné ico en ratones HemB. Por lo tanto, rFIXFc es completamente activa para tratamiento a demanda mientras que alcanza una protección profiláctica significativamente prolongada con el potencial de reducir la frecuencia de dosis, que se encuentra bajo investigación en el estudio de fase 3.
Ejemplo 8. Análisis farmacocinético y farmacodinámico de rFIXFc y BENEFIX™ luego de una única dosis subcutánea en ratones con deficiencia de FIX Se determinaron los perfiles farmacocinético (PK, por sus siglas en inglés) y farmacodinámico (PD, por sus siglas en inglés) del Factor IX-Fe recombinante (rFIXFc) y BENEFIX™ (rFIX) luego de una única inyección intravenosa o subcutánea de 200 o 400 Ul/kg en ratones con deficiencia de FIX. Se recolectó sangre entera por la vena cava (n=4 ratones/punto de tiempo/tratamiento) . Se determinaron las concentraciones de rFIXFc y BENEFIX™ en plasma mediante un ensayo ELISA específico para FIX humano. Se determinaron las actividades de rFIXFc y BENEFIX™ utilizando un ensayo de tiempo de tromboplastina parcial activada (aPTT) . Se llevaron a cabo análisis PK usando una metodología dependiente del modelo con WinNonLin. Los resultados se muestran en las Tablas 22 y 23.
La biodisponibilidad en ratones con deficiencia de FIX fue de 38% para la dosis de 200 Ul/kg y de 38-46% para la dosis combinada (ELISA para antígenos) y 29% para la dosis de 200 Ul/kg y 29-39% para la dosis combinada (ensayo de actividad de aPTT) para FIXFc en comparación con rFIX, 23% y 19%, respectivamente. El rFIXFc presentó una biodisponibilidad mejorada en 1.5-1.7 veces (dosis de 200 Ul/kg) y 1.5-2.5 veces (dosis combinadas) en comparación con BENEFIX™.
La semivida terminal (ELISA para antígenos) fue de 62 horas para la dosis de 200 Ul/kg y de 51-62 horas para las dosis combinadas y la semivida terminal (ensayo de actividad de aPTT) fue de 42 horas para la dosis de 200 Ul/kg y de 40-42 horas para las dosis combinadas para rFIXFc, mientras que para BENEFIX™ la semivida terminal fue de 24 horas (ELISA para antígenos) para la dosis de 200 Ul/kg y de 17 horas (ensayo de actividad de aPTT) para la dosis de 200 Ul/kg. Esto indica una mejore de 2.5-2.6 veces (dosis de 200 Ul/kg y dosis combinada) en la semivida con rFIXFc.
Además, tal como muestran las Tablas 22 y 23, rFIXFc presentó un aumento de 4.5-5.6 veces en AUC/dosis y un aumento de 1.9-3.7 veces en Cmax/dosis en función de BENEFIX™ .
La proteína de fusión de factor recombinante IX Fe (rFIXFc) es una forma de acción prolongada de FIX recombinante (rFIX) que proporcionará dosis menos frecuentes de rFIX para el tratamiento de la hemofilia B. Desde ratones a primates no humanos y pacientes con hemofilia B, rFIXFc tiene una semivida aproximadamente 3 veces mayor que rFIX (BENEFIX™) . La administración intravenosa de rFIX continúa siendo un método de administración trabajoso para el tratamiento profiláctico, especialmente para niños y pacientes con venas poco accesibles. La administración subcutánea de rFIX se presenta como una vía de administración más atractiva que es menos invasiva y que tiene menor frecuencia de dosificación. Como tal, la administración subcutánea de rFIXFc causará menos dolor e incomodidad que la administración intravenosa y tendrá como consecuencia mejor cumplimiento dado que es más fácil de administrar y se administra en menos tiempo que la vía intravenosa. Los regímenes profilácticos también mejorarán la calidad de vida y los resultados clínicos incluirán menor incidencia de sangrado .
Se midió la concentración de rFIXFc en plasma de ratón usando un ELISA específico para FIX humano que midió la parte de FIX de la molécula y se empleó la dosis nominal mg/kg en el análisis. Se presenta un resumen de los parámetros PK para rFIXFc y BENEFIX™ en la Tabla 20 (ELISA para antígenos) y la Tabla 21 (ensayo de actividad de aPTT) para n=4/grupo. Tanto el análisis por antígeno como el análisis por actividad mostraron que Cmax y AUC fueron mejorados en forma significativa para rFIXFc contra BENEFIX™. La biodisponibilidad (F %) fue de 38% para rFIXFc contra 23% para BENEFIX™ utilizando ELISA para antígenos. En forma similar, la biodisponibilidad fue de 29% para rFIXFc contra 19% para BENEFIX™ usando el ensayo de actividad de aPTT. Por lo tanto, rFIXFc demostró un aumento en la biodisponibilidad de 1.5 a 1.6 veces sobre BENEFIX™ . Las medidas de semivida de eliminación demostraron que rFIXFc aumentó en forma marcada la semivida ya sea medida mediante ensayos de antígeno (62 horas rFIXFc contra 24 horas BENEFIX™) o actividad (42 horas rFIXFc contra 17 horas BENEFIX™) . Estos datos muestran que rFIXFc presentó una semivida extendida 2.6 a 2.5 veces con respecto a BENEFIX™.
El rFIXFc administrado por vía subcutánea a ratones con deficiencia de FIX demostró perfiles PK y Pd con aumentos en Cmax y AUC para rFIXFc en comparación con BENEFIX™. En líneas generales, la biodisponibilidad para rFIXFc varió entre 29% (actividad) y 38% (antígeno) con una semivida de 42 horas (actividad) a 62 horas (antígeno) en comparación con BENEFIX™, que presentó una biodisponibilidad de 19-23% y una semivida de 17-24%, respectivamente. Por lo tanto, la semivida para rFIXFc administrada por vía subcutánea a ratones con deficiencia de FIX demostró un aumento de 2.2 (antígeno) a 3.3 (actividad) veces sobre los productos de rFIX comercialmente disponibles en la actualidad que se administran por vía intravenosa. En líneas generales, estos datos apoyan la noción de que rFIXFc administrado por vía subcutánea resultará clínicamente beneficioso para el tratamiento profiláctico de pacientes con hemofilia B.
Ejemplo 9. Análisis farmacocinético de rFIXFc luego de una única dosis subcutánea en monos Cynomolgus Se estudió el perfil farmacocinético (PK, por sus siglas en inglés) del Factor IX-Fc recombinante (rFIXFc) luego de una única dosis subcutánea de 50 Ul/kg, 100 Ul/kg o 200 Ul/kg en monos cynomolgus. Se midió la concentración de rFIXFc en plasma utilizando ELISA específico para FIX. Se llevó a cabo un análisis primario utilizando metodología dependiente del modelo con WinNonLin. Véase las Tablas 22-25.
Los análisis farmacocinéticos de la concentración del plasma en función de los datos de tiempo (medidos por ELISA específica para FIX) demostraron que la biodisponibilidad y la semivida terminal eran similares entre las dosis. Las biodisponibilidades para rFIXFc fueron de 40% (50 Ul/kg) , 34% (100 Ul/kg) , 36% (200 Ul/kg) y 36-45% (dosis combinadas) . Las semividas terminales para rFIXFc fueron de 61 horas (50 Ul/kg) , 45 horas (100 Ul/kg), 49 horas (200 Ul/kg) y 44-58 horas (dosis combinadas) .
Se midió la concentración de rFIXFc en plasma de mono usando un ELISA específico para FIX que midió la parte de FIX de la molécula y se empleó la dosis nominal mg/kg en el análisis. El análisis del aumento y la recuperación demostró la precisión de este ensayo ELISA específico para FIX para detectar rFIXFc fuera del intervalo de concentraciones de plasma evaluadas. Se presenta un resumen de los parámetros PK para rFIXFc en la Tabla 22 (50 Ul/kg) , Tabla 23 (100 Ul/kg) y Tabla 24 (200 Ul/kg) para n=3/grupo. Para rFIXFc SC los promedios geométricos y CV% del promedio geométrico de Cmax fueron de 860 + 22 (50 Ul/kg), 1630 + 97 (100 Ul/kg) y 3,750 + 26 (200 Ul/kg) , respectivamente, que indican un aumento que depende de la dosis. Se observaron aumentos similares para AUC. Los promedios geométricos de biodisponibilidad (F %) fueron 40 + 16 (50 Ul/kg) , 30 + 75 (100 Ul/kg) y 36 + 27 (200 Ul/kg) , que demostraron que la biodisponibilidad era similar entre dosis. Las medidas de la semivida terminal demostraron que la semivida era similar entre dosis a 58 + 39 horas (50 Ul/kg) , 45 + 13 horas (100 Ul/kg) y 46 + 44 horas (200 Ul/kg) .
El rFIXFc administrado por vía subcutánea a monos cynomolgus demostró un perfil PK con aumentos de Cmax y AUC que dependen de la dosis. En líneas generales, la biodisponibilidad varió entre 30-40% con una semivida de 45-58 horas. Por lo tanto, la semivida para rFIXFc administrada por vía subcutánea a monos demostró un aumento de 2.8 veces sobre los productos de rFIX comercialmente disponibles en la actualidad que se administran por vía intravenosa. En líneas generales, estos datos apoyan la noción de que rFIXFc administrado por vía subcutánea resultará clínicamente beneficioso para el tratamiento profiláctico de pacientes con hemofilia B.
Ejemplo 10. Regímenes de dosificación profiláctica previstos En comparación con el régimen de dosificación estándar recomendado de 25 a 40 Ul/kg de FIX dos o tres veces por semana, los resultados de actividad PK de rFIXFc del estudio de fase l/2a descritos anteriormente sugieren que una dosificación de aproximadamente una vez por semana de rFIXFc de alrededor de 22.5 Ul/kg, o aproximadamente cada 10 días de alrededor de 45 Ul/kg, o aproximadamente cada 2 semanas de alrededor de 120 Ul/kg es suficiente para mantener un mínimo de 1% sobre la referencia (Figura 24) . Estos estimados de modelos de simulación son validados por los datos disponibles del ensayo de fase l/2a, que caen totalmente dentro del intervalo de confianza de 95% de la curva simulada de actividad-transcurso de tiempo. A menudo estos regímenes servirán al principio de la terapia. Si se considera la heterogeneidad de los brotes clínicos de eventos de sangrado relacionados con niveles mínimos de actividad FIX en el plasma, las dosis de mantenimiento deberán ser ajustadas en forma individual .
Luego de que se recalculan los resultados PK del estudio de fase 1/2 (véase Ejemplo 11) , el nuevo régimen de dosificación previsto, por ejemplo para profilaxis, es de 20 Ul/kg una vez por semana, 40 Ul/kg cada 10 días o 100 Ul/kg cada dos semanas (dos veces por mes) . Véanse también la Tabla 27 y la Figura 25.
Ejemplo 11. Recálculo de datos farmacocinéticos del primer estudio en seres humanos (estudio FiH, según sus siglas en inglés) (Ejemplo 1) Se incluyeron sujetos con una variedad de genotipos de hemofilia B, tales como mutaciones de codón de terminación/sin sentido y de cambio de sentido en el estudio FiH discutido en el Ejemplo 1. Varios de los sujetos presentaron niveles de antígeno FIX endógeno reducidos en forma marcada que se correlacionaban con actividad de FIX reducida en forma marcada, mientras que pocos sujetos con genotipos de cambio de sentido presentaron más antígeno que la actividad medida, lo que indica una proteína circulante disfuncional. La actividad de FIX previa al tratamiento excedió 2 UI/dL en 2 sujetos, probablemente debido a un lavado incompleto de su última infusión de concentrado de FIX según historial de análisis y fenotipo de la enfermedad. Con esta información como base, los datos PK del Ejemplo 1 fueron recalculados sin sustracción de los valores de referencia, tal como se describe a continuación en detalle. Véase la Tabla 27.
En contraste con los cálculos de PK (basados en la actividad) en Ejemplo 1, si la actividad PK de rFIXFc se modela sin la sustracción de los valores de referencia, tal como se informó recientemente para el análisis PK de un rFIX glicoPEGilado (Negrier et ál., Blood DOI 10.1182/blood 2011 02 335596 (2011) , que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia) , los estimados resultantes de la semivida de eliminación y TMR son mucho mayores que los estimados en Ejemplo 1, de 82.2 ± 21.6 y 96.8 + 22.0 horas (promedio + SD) , respectivamente. Sin embargo, dado que sabían que no todos los pacientes con hemofilia B grave tienen 0% de actividad de FIX endógeno, y tomando en cuenta el genotipo del paciente y el nivel de antígeno de FIX endógeno, los presentes inventores adoptaron un método de análisis de sustracción de los valores de referencia en su modelado PK. Específicamente, (a) se definió la referencia en dos pacientes como 0% dado que su actividad de FIX previa al tratamiento fue <1%, no presentaban antígeno FIX detectable y no presentaban genotipos sin sentido; (b) se fijó la referencia para tres pacientes en 0.5% dado que su actividad de FIX previa al tratamiento fue <1% y presentaban antígeno FIX detectable; (c) se definió Cmin (la menor actividad a lo largo del estudio PK) como referencia para los pacientes cuya actividad de FIX previa al tratamiento fue entre 1-2% y (d) para pacientes cuya actividad de FIX previa al tratamiento fue =2%, 2% (que fue el limite superior para participar del ensayo) fue la referencia. La actividad por encima de la referencia antes de la dosificación es considerada fármaco residual de tratamiento anterior, y se llevó a la referencia y se restó de los datos PK luego de la dosis de rFlXFc.
La semivida terminal promedio resultante (56.7 ± 10.9 horas, intervalo 42.4 - 74.5 horas) y T R (71.8 ± 10 horas, intervalo 53.2 - 85.9 horas) de rFIXFc es aproximadamente 3 veces mayor que la informada para rFIX. La semivida terminal informada de rFIX es 19.3 ± 4.97 horas (intervalo 11.1 - 36.4 horas) y TMR 26.0 ± 6.07 horas (intervalo 15.8 - 46.1 horas). Roth et ál . , Blood 98:3600-3606 (2001); y el resumen de características del producto para BENEFIX™, Electronic Medicines Compendium (2010) (http: / /www. medicines .org. uk/emc/medicine/20376/SPC/BENEFIX™/ #PHARMACODYNAMIC_PROPS) , que se incorporan a la presente en su totalidad mediante esta referencia. Por lo tanto, los intervalos para rFIXFc no se superponen a los intervalos de rFIX. De manera similar, el CL promedio de la actividad de rFIXFc (3.18 ± 0.78 mL/hr/kg, intervalo 2.05 - 4.18 mL/hr/kg) es aproximadamente 2.6 veces menor que el informado para rFIX (8.40 ± 2.01 mL/hr/kg, intervalo 4.66 - 13.64 mL/hr/kg), mientras que los Vss de ambas proteínas son comparables a 4-5 veces el volumen de plasma.
Aunque se observó la misma tendencia a la mejora en la PK del antígeno rFIXFc, tanto ??/2a y ??/2ß del antígeno de rFIXFc fueron significativamente mayores que las derivadas de las medidas de actividad de FIX. Claramente las ??/2a estimadas para el antígeno de rFIXFc se desvían de las que se asocian normalmente a FIX (2 - 3 horas) . Además, algunas veces el probable lavado incompleto de la terapia de reemplazo previa al estudio antes de la infusión de rFIXFc tuvo como resultado un valor mayor de la referencia, que, a su vez, podría llevar a una subestimación de ??/2ß de rFIXFc tal como fue medida por actividad de FIX. Una cantidad de sujetos presentó una actividad de aPTT de hasta 3 UI/dL, muy por encima del límite de cuantificación (1 UI/dL) para el ensayo de aPTT, en puntos de tiempo posteriores a 336 horas (14 días) después de la dosis. Sin embargo, estos puntos de tiempo fueron excluidos del estimado de semivida terminal debido a que los valores se encontraban en o un poco por encima de las referencias previas al tratamiento y, por lo tanto, se consideró que habían vuelto a la referencia. En contraste, los niveles terminales bajos pero detectables de rFIXFc pueden ser descubiertos por ELISA para antígenos de rFIXFc de alta sensibilidad, que detecta cantidades tan bajas como 0.1 UI/dL en comparación con un límite inferior de aPTT de 1.0 UI/dL.
Los parámetros PK restantes (actividad) cambiaron en una cantidad pequeña relacionada a la semivida de eliminación y a TMR. Véase la Tabla 27(B). Se observó un aumento lineal, proporcional a la dosis, en la actividad de FIX basándose en Cmax ocurrente inmediatamente después de la infusión y AUCiNF (Tabla 4) . La actividad de FIX exhibió disminución biexponencial luego de la infusión de rFIXFc y fue caracterizado por una fase de distribución rápida (alfa) seguida de una fase de eliminación log- lineal (beta) . La semivida de distribución promedio (??/20?) fue muy variable para sujetos individuales (promedio de 3.4 y 10.3 horas para los dos grupos de dosis más elevadas) (Tabla 27(B)). La semivida de eliminación promedio (??/2ß) no dependió de la dosis para el intervalo de dosis evaluado, es decir, 53.5 horas, 57.5 + 8.2 horas y 56.5± 14.1 horas a 25 Ul/kg, 50 Ul/kg y 100 Ul/kg, respectivamente. El momento de 1% (1 Ul/kg) sobre la referencia, una evaluación de la actividad de rFIXFc, exhibió un aumento proporcional a la dosis. Este fue de 7.3, 10. l ± 1.5 y 12.3 ± 2.5 días para dosis de 25, 50 y 100 Ul/kg, respectivamente. La actividad de FIX en el plasma 168 horas (1 semana) después de la dosis se mantuvo a 1.1 UI/dL, 2.5 ± 0.9 UI/dL y 4.6 ± 1.7 UI/dL sobre la referencia para los grupos de dosis de 25, 50 y 100 Ul/kg, respectivamente. Tampoco dependieron de la dosis TMR, CL y Vss para el intervalo de dosis de 25 a 100 Ul/kg.
Además, cada 1 UI/kg de rFIXFc infundido aumentó la actividad de FIX en el plasma en un 0.93 + 0.18 Ul/dl en promedio (Tabla 27(B)) y esta recuperación gradual (K) mostró una correlación positiva débil con el peso corporal (R2=0.336, p=0.048) .
La experiencia empírica ha sugerido que una actividad sostenida de factor en el plasma baja como 1 a 2 Ul/dL será adecuada para prevenir eventos de sangrado espontáneos en muchos pacientes con hemofilia A y B grave (Nilsson et ál . , J. Intern. Med. 232:25-32 (1992) , que se incorpora en su totalidad a la presente mediante esta referencia.), y el aumento de episodios de sangrado se asocian con la cantidad de tiempo por debajo de 1% de actividad normal de FVIII. Collins et ál., Thromb Haemost 7:413-420 (2009), que se incorpora en su totalidad a la presente mediante esta referencia. Por lo tanto, los análisis PK proporcionan un medio para optimizar el tratamiento profiláctico con modelado de dosis individualizadas para lograr niveles mínimos sostenidos sobre 1% (1 UI/dL) de la referencia, variación de pico/mínimo reducida y mejorar el costo/efectividad del tratamiento. Carlsson et ál., Haemophilia 4:83-88 (1998); KisJcer et ál., Haemophilia 9:279-284 (2003) , que se incorporan en su totalidad a la presente mediante esta referencia.
Para construir los perfiles de concentración/tiempo luego de los diferentes regímenes de dosificación, se llevó a cabo el método de simulación de Monte Cario con el modelo PK de población de rFIXFc. Los estimados promedio de los parámetros modelo (CL, volumen de distribución, aclaramiento intercompartimental y volumen del segundo compartimiento) en la población analizada, la varianza entre individuos y la variabilidad residual fueron adoptados para este estudio de fase l/2a. Wang et ál . , J. Clin. Pharmacol . 49:1012-1024 (2009) , que se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia. Se estimularon mil sujetos por régimen de dosificación con 14 a 16 puntos de muestreo para cada sujeto. Hubo 14 puntos de muestreo para la dosificación semanal, 15 para dosificación cada 10 días y 16 para dosificación semana por medio. Se generó el peso corporal (B ) de acuerdo con el método publicado, Wang et ál. (2009). Es decir, se toma como base la ecuación de potencia de Z=BW-0.5. Se asumió que el BW promedio en 1000 sujetos era de 75 kg. Se tomaron como base los perfiles de concentración/tiempo simulados y se construyó en forma gráfica el promedio ± desviación estándar (SD, por sus siglas en inglés) de los perfiles de concentración/tiempo de los 1000 sujetos para diferentes regímenes de dosificación. Figura 25.
En comparación con el régimen de dosificación estándar recomendado de 25 a 40 Ul/kg de FIX dos veces por semana, los resultados de actividad PK de rFIXFc promedio de este estudio muestran que una dosificación de una vez por semana de rFIXFc de 20 Ul/kg, o de 40 Ul/kg aproximadamente cada 10 días, o de 100 Ul/kg aproximadamente cada 2 semanas es suficiente para mantener un mínimo de 1% sobre la referencia. Figura 25. Estos estimados de modelos de simulación son validados por los datos disponibles del ensayo de fase l/2a, que caen totalmente dentro del intervalo de confianza de 95% de la curva simulada de actividad- transcurso de tiempo. Sin embargo, al considerar la heterogeneidad de los brotes clínicos de eventos de sangrado relacionados con el nivel mínimo de actividad de FIX en el plasma (Bjorkman, Haemophilia 9:101-110 (2003); Ahnstrom et ál . , Haemophilia 10:689-697 (2004), que se incorporan a la presente en su totalidad mediante esta referencia) , probablemente la dosis de mantenimiento requeriría ajuste individual.
Tablas Tabla 1: Secuencias de polinucleótidos : FIX- Fe A. Secuencia de ADN de cadena de FIX-Fc (SEC ID N° : 1, que codifica SEC ID N° : 2) Secuencia de nucleótidos (nt [nucleótido] 1 a 7583) pSY -FIX-030 : Exón 1 de FIX (péptido señal, primer propéptido de aminoácido) : nt 690-777 Mini intrón de FIX: nt 778-1076 Secuencia de propéptido de FIX: nt 1077-1126 Secuencia de FIX maduro: nt 1127-2371 Fe: nt 2372-3052 gcgcgcgttgacattgattattgactagttattaatagtaatcaattacggggtcattagt tcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctga ccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaa tagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagt acatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggccc gcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacg tattagtcatcgctattaccatggtgatgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggata gcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttt tggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacgcaaa tgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctctctggctaactagaga acccactgcttactggcttatcgaaattaatacgactcactatagggagacccaagcttcg cgacgtacggccgccaccatgcagcgcgtgaacatgatcatggcagaatcaccaggcctca tcaccatctgccttttaggatatctactcagtgctgaatgtacaggtttgtttcctttttt aaaatacattgagtatgcttgccttttagatatagaaatatctgatgctgtcttcttcact aaattttgattacatgatttgacagcaatattgaagagtctaacagccagcacgcaggttg gtaagtactgtgggaacatcacagattttggctccatgccctaaagagaaattggctttca gattatttggattaaaaacaaagactttcttaagagatgtaaaattttcatgatgttttct tttttgctaaaactaaagaattattcttttacatttcagtttttcttgatcatgaaaacgc caacaaaattctgaatcggccaaagaggtataattcaggtaaattggaagagtttgttcaa gggaatctagagagagaatgtatggaagaaaagtgtagttttgaagaagcacgagaagttt ttgaaaacactgaaagaacaactgaattttggaagcagtatgttgatggagatcagtgtga gtccaatccatgtttaaatggcggcagttgcaaggatgacattaattcctatgaatgttgg tgtccctttggatttgaaggaaagaactgtgaattagatgtaacatgtaacattaagaatg gcagatgcgagcagttttgtaaaaatagtgctgataacaaggtggtttgctcctgtactga gggatatcgacttgcagaaaaccagaagtcctgtgaaccagcagtgccatttccatgtgga agagtttctgtttcacaaacttctaagctcacccgtgctgagactgtttttcctgatgtgg actatgtaaattctactgaagctgaaaccattttggataacatcactcaaagcacccaatc atttaatgacttcactcgggttgttggtggagaagatgccaaaccaggtcaattcccttgg caggttgttttgaatggtaaagttgatgcattctgtggaggctctatcgttaatgaaaaat ggattgtaactgctgcccactgtgttgaaactggtgttaaaattacagttgtcgcaggtga acataatattgaggagacagaacatacagagcaaaagcgaaatgtgattcgaattattcct caccacaactacaatgcagctattaataagtacaaccatgacattgcccttctggaactgg acgaacccttagtgctaaacagctacgttacacctatttgcattgctgacaaggaatacac gaacatcttcctcaaatttggatctggctatgtaagtggctggggaagagtcttccacaaa gggagatcagctttagttcttcagtaccttagagttccacttgttgaccgagccacatgtc ttcgatctacaaagttcaccatctataacaacatgttctgtgctggcttccatgaaggagg tagagattcatgtcaaggagatagtgggggaccccatgttactgaagtggaagggaccagt ttcttaactggaattattagctggggtgaagagtgtgcaatgaaaggcaaatatggaatat ataccaaggtgtcccggtatgtcaactggattaaggaaaaaacaaagctcactgacaaaac tcacacatgcccaccgtgcccagctccggaactcctgggcggaccgtcagtcttcctcttc cccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtgg tggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggt gcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagc gtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctcca acaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgaga accacaggtgtacaece gcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctg acctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggc agccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgttggactccgacggctccttcttcct ctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctcc gtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggta aatgagaattcagacatgataagatacattgatgagtttggacaaaccacaactagaatgc agtgaaaaaaatgctttatttgtgaaatttgtgatgctattgctttatttgtaaccattat aagctgcaataaacaagttggggtgggcgaagaactccagcatgagatccccgcgctggag gatcatccagccggcgtcccggaaaacgattccgaagcccaacctttcatagaaggcggcg gtggaatcgaaatctcgtagcacgtgtcagtcctgctcctcggccacgaagtgcacgcagt tgccggccgggtcgcgcagggcgaactcccgcccccacggctgctcgccgatctcggtcat ggccggcccggaggcgtcccggaagttcgtggacacgacctccgaccactcggcgtacagc tcgtccaggccgcgcacccacacccaggccagggtgttgtccggcaccacctggtcctgga ccgcgctgatgaacagggtcacgtcgtcccggaccacaccggcgaagtcgtcctccacgaa gtcccgggagaacccgagccggtcggtccagaactcgaccgctccggcgacgtcgcgcgcg gtgagcaccggaacggcactggtcaacttggccatggtttagt cctcaccttgtcgtatt atactatgccgatatactatgccgatgattaattgtcaacacgtgctgatcagatccgaaa atggatatacaagctcccgggagctttttgcaaaagcctaggcctccaaaaaagcctcctc actacttctggaatagctcagaggcagaggcggcctcggcctctgcataaataaaaaaaat tagtcagccatggggcggagaatgggcggaactgggcggagttaggggcgggatgggcgga gttaggggcgggactatggttgctgactaattgagatgcatgctttgcatacttctgcctg ctggggagcctggggactttccacacctggttgctgactaattgagatgcatgctttgcat acttctgcctgctggggagcctggggactttccacaccctcgtcgagctagcttcgtgagg ctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttgggggga ggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatg tcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagt cgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacaggtaagtgccgtgtgt ggttcccgcgggcctggcctctttacgggttatggcccttgcgtgccttgaattacttcca cctggctccagtacgtgattcttgatcccgagctggagccaggggcgggccttgcgctt a ggagccccttcgcctcgtgcttgagttgaggcctggcctgggcgctggggccgccgcgtgc gaatctggtggcaccttcgcgcctgtctcgctgctttcgataagtctctagccatttaaaa tttttgatgacctgctgcgacgctttttttctggcaagatagtcttgtaaatgcgggccag gatctgcacactggtatttcggtttttggggccgcgggcggcgacggggcccgtgcgtccc agcgcacatgttcggcgaggcggggcctgcgagcgcggccaccgagaatcggacgggggta gtctcaagctggccggcctgctctggtgcctggcctcgcgccgccgtgtatcgccccgccc tgggcggcaaggctggcccggtcggcaccagttgcgtgagcggaaagatggccgcttcccg gccctgctccagggggctcaaaatggaggacgcggcgctcgggagagcgggcgggtgagtc acccacacaaaggaaaggggcctttccgtcctcagccgtcgcttcatgtgactccacggag taccgggcgccgtccaggcacctcgattagttctggagcttttggagtacgtcgtctttag gttggggggaggggttttatgcgatggagtttccccacactgagtgggtggagactgaagt taggccagcttggcacttgatgtaattctccttggaatttgccctttttgagtttggatct tggttcattctcaagcctcagacagtggttcaaagtttttttcttccatttcaggtgtcgt gaacacgtggtcgcggccgcgccgccaccatggagacagacacactcctgctatgggtact gctgctctgggttccaggttccactggtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagca cctgaactcctgggaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctca tgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctga ggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgg gaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggact ggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcga gaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgccccca tcccgcgatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatc ccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccac gcctcccgtgttggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaag agcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaacc actacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgactcgagagatctggccggct gggcccgtttcgaaggtaagcctatccctaaccctctcctcggtctcgattctacgcgtac cggtcatcatcaccatcaccattgagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgccttct agttgccagccatctgttgtttgcccctcccccgtgccttccttgaccctggaaggtgcca ctcccactgtcctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtca ttctattctggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagc aggcatgctggggatgcggtgggctctatggcttctgaggcggaaagaaccagtggcggta atacggttatccacagaatcaggggataacgcaggaaagaacatgtgagcaaaaggccagc aaaaggccaggaaccgtaaaaaggccgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccc tgacgagcatcacaaaaatcgacgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataa agataccaggcgtttccccctagaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgc ttaccggatacctgtccgcctttctcccttcgggaagcgtggcgctttctcatagctcacg ctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaaccc cccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagtccaacccggtaa gacacgacttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagcagagcgaggtatgt aggcggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaagaacagta tttggtatctgcgctctgctgaagccagttaccttcggaaaaagagttggtagctcttgat ccggcaaacaaaccaccgctggtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcg cagaaaaaaaggatctcaagaagatcctttgatcttttctacggggtctgacgctcagtgg aacgaaaactcacgttaagggattttggtcatgacattaacctataaaaataggcgtatca cgaggccctttcgtctcgcgcgtttcggtgatgacggtgaaaacctctgacacatgcagct cccggagacggtcacagcttgtctgtaagcggatgccgggagcagacaagcccgtcagggc gcgtcagcgggtgttggcgggtgtcggggctggcttaactatgcggcatcagagcagattg tactgagagtgcaccatatatgcggtgtgaaataccgcacagatgcgtaaggagaaaatac cgcatcaggcgccattcgccattcaggctgcgcaactgttgggaagggcgatcggtgcggg cctcttcgctattacgcca B. Secuencia de ADN de Fe (péptido señal de IgK de ratón) (SEC ID N° : 3 que codifica la SEC ID N° : 4) Este es el cásete de Fe de pSYN-FIX-030. Adicionalmente existe un cásete de expresión de Fe separado que fue transfectado a la linea celular en el plásmido pSYN-Fc-015 que codifica la misma secuencia de aminoácidos, pero contiene algunos cambios no codificantes . La segunda copia de la secuencia codificante de Fe hace posible una mejor relación monómero : dímero .
Atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtg acaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctgggaggaccgtcagtctt cctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgc gtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcg tggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgt ggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaag gtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagc cccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgcgatgagctgaccaagaaccaggt cagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagc aatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgttggactccgacggctcct tcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctc atgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtct ccgggtaaa Tabla 2 : Secuencias de Polipéptidos Híbrido de monómero FIX-Fc: creado al coexpresar cadenas de FIX-Fc y Fe.
A. Cadena FIX-Fc (SEC ID N° : 2): (Secuencia de señal de 28 aminoácidos subrayada, propéptido de 18 aminoácidos subrayado doble, porción Fe en cursiva.) La lisina del C-terminal no se encuentra presente en ninguna subunidad. Este procesamiento se observa generalmente en proteínas recombinantes producidas en cultivos de células mamíferas, así como con proteínas derivadas del plasma.
SUBUNIDAD DE FIXFC-SC: Péptido señal de FIX: -46 MQRVNMIMAE SPGLITICLL GYLLSAEC Propéptido de FIX: -18 TVFLDHENAN KILNRPKR 1 YNSGKLEEFV QGNLERECME EKCSFEEARE VFENTERTTE FWKQYVDGDQ 51 CESNPCLNGG SCKDDINSYE CWCPFGFEGK NCELDVTCNI KNGRCEQFCK 101 NSADNKWCS CTEGYRLAEN QKSCEPAVPF PCGRVSVSQT SKLTRAETVF 151 PDVDYVNSTE AETILDNITQ STQSFNDFTR WGGEDAKPG QFPWQWLNG 201 KVDAFCGGSI VNEKVflVTAA HCVETGVKIT WAGEHNIEE TEHTEQKRNV 251 IRIIPHHNYN AAINKYNHDI ALLELDEPLV LNSYVTPICI ADKEYTNIFL 301 KFGSGYVSGW GRVFHKGRSA LVLQYLRVPL VDRATCLRST KFTIYNNMFC 351 AGFHEGGRDS CQGDSGGPHV TEVEGTSFLT GIISWGEECA MKGKYGIYTK 401 VSRYVNWIKE KTKLTDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR 451 TPEVTCWVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRWSV 502 LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR 551 DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF 601 LYSKLTWKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK B. Cadena Fe (SEC ID N° : 4) Péptido señal heterólogo de 20 aminoácidos de cadena ligera Ig de ratón (subrayado) : -20 METDTLLLWV LLLWVPGSTG Secuencia Fe Madura (que corresponde a los aminoácidos de IgGl humanos 221 a 447, numeración EU) 1 DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVWDVSHED 51 PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RWSVLTVLH QDWLNGKEYK 101 CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK 151 GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG 201 NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK Tabla 3. Concentración de antígeno de FIXFc de paciente individual en función de datos de tiempo, clasificado por dosis nominal, dosis real, duración de la infusión, y número de paciente. 5 10 Tabla 3. Concentración de antigeno de FIXFc de paciente individual en datos de tiempo, clasificado por dosis nominal, dosis real, duración de infusión, y número de paciente (continuación) .
Tabla 3. Concentración de antígeno de FIXFc de paciente individual en función de datos de tiempo, clasificado por dosis nominal, dosis real, duración de la infusión, y número de paciente (continuación) .
Tabla 4. Resumen de información farmacocinética del antígeno FIXFc de paciente individual y promedio de grupo .
* CL, Vss, TMR, Tl/2 y ?1/2ß para dosis combinadas de 12.5-100 Ul/kg son 2.30±0.46 (1.51-2.72), 250±58.2 (156-366), 110±18.5 (84.5-144) , 12.0±4.0 (10.1-18.6, sin incluir a dos pacientes cuyos parámetros PK fueron determinados por análisis no compartimental) y 101±20.9 (78-140), respectivamente. Debido a correcciones por redondeo u otros errores (a) debería ser 207,000 y (b) debería ser 0.468, (c) debería ser 52.1.
Tabla 5. Actividad de FIXFc y actividad de FIXFc corregida por la referencia en función de datos de tiempo de paciente individual y promedio de grupo, clasificado por dosis nominal, dosis real, duración de la infusión y número de paciente.
Nota: Los datos en negrita representan un regreso a la referencia y fueron excluidos de los análisis .
Tabla 5. Actividad de FIXFc y actividad de FIXFc corregida por la referencia en función de datos de tiempo de paciente individual y promedio de grupo, clasificado por dosis nominal, dosis real, duración de la infusión y número de paciente. 10 Nota: Los datos en negrita representan un regreso a la referencia fueron excluidos de los análisis. 15 Tabla 5. Actividad de FIXFc y actividad de FIXFc corregida por la referencia en función de datos de tiempo de paciente individual y promedio de grupo, clasificado por dosis nominal, dosis real, duración de la infusión y número de paciente (continuación) .
Nota: Los datos en negrita representan un regreso a la referencia ron excluidos de los análisis. 15 Tabla 5 . Actividad de FIXFc y actividad de FIXFc corregida por la referencia en función de datos de tiempo de paciente individual y promedio de grupo , clasificado por dosis nominal , dosis real , duración de la infusión y número de paciente ( continuación) .
Nota: Los datos en negrita representan un regreso a la referencia y fueron excluidos de los análisis.
Tabla 6. Resumen de datos f armacocinéticos de la actividad de FIXFc de paciente individual y promedio de grupo, clasificado por dosis nominal, dosis real, duración de la infusión y número de paciente.
Debido a correcciones por redondeo u otros errores (a) debería ser 8.98, (b) debería ser 8.23, (c) debería ser 892 y (d) debería ser 42.2.
Tabla 7A-7B. Resumen de datos farmacocinéticos secundarios de la actividad de FIXFc de paciente individual y promedio de grupo, clasificado por dosis nominal, dosis real y número de paciente. a C168 = Actividad de FIX estimada sobre los valores de referencia aproximadamente 168 horas luego de la dosis. Los valores en cursiva se estimaron a partir de simulaciones llevadas a cabo utilizando un modelo de un compartimiento y constantes de índices microscópicos del paciente. b TBLP1 = Tiempo luego de la dosis previsto por el modelo cuando la actividad de FIX ha disminuido a aproximadamente 1 IU/dL sobre la referencia. Los valores en cursiva se estimaron a partir de simulaciones llevadas a cabo utilizando un modelo de un compartimiento y constantes de índices microscópicos del paciente. c TBLP3 = Tiempo luego de la dosis previsto por el modelo cuando la actividad de FIX ha disminuido a aproximadamente 3 IU/dL sobre la referencia. d TBLP5 = Tiempo luego de la dosis previsto por el modelo cuando la actividad de FIX ha disminuido a aproximadamente 5 IU/dL sobre la referencia. e El Valor K se calculó utilizando el valor Cmax previsto por el modelo generado por resultados a los que se sustrajeron los antecedentes, divididos por la dosis . f El Valor K se calculó utilizando el resultado máximo observado de la muestra luego de la dosis; valor K = (Valor de referencia menos el Cmax observado) /Dosis) . 9 Recuperación In-vivo = 100 x (Cmax previsto por el modelo a partir de los datos a los que se sustrajeron los valores de referencia/Dosis) x Volumen del Plasma (dL)/ Dosis en UI; donde el volumen de plasma en mL = (23.7 x altura en cm) + (9.0 x peso en kg) - 1709. h Recuperación In-vivo = 100 x (Valor de referencia menos el Cmax observado) x Volumen de Plasma (dL) /Dosis en UI; donde el volumen de plasma en mL = (23.7 x altura en cm) + (9.0 x peso en kg) - 1709.
Tabla 7B Tabla 8. Estudio de fase l/2a: Comparación de parámetros PK para rFIXFc y BENEFIX * Estimados de análisis de 2 compartimentos de actividad de FIX en las dosis nominales 25, 50 y 100 Ul/kg (n=ll) tBreve descripción de características de producto de BENEFIX™ (18 de noviembre de 2009) ; Promedio e intervalo (n=56) a. Intervalo corregido debido a redondeo u otros errores como 0.63 - 1.18.
Referido a información histórica para BENEFIX™, rFix-Fc demostró : - un aumento de 3 veces en la semivida y tiempo medio de residencia - 24% de recuperación gradual mejorada relativa - aclaramiento reducido 2.5 veces Tabla 9. Estudio de fase l/2a: Aumento proporcional dosis en Cmax y AUC de rFIXFc (actividad) Véase también la Figura 5.
Tabla 10A-10B. Duración terapéutica estimada de rFIXFc en dosis de 50 y 100 UI/kg.
Véanse también las Figuras 6A-6B.
Tabla 11. Aumento proporcional de dosis en Cmax y AUC del antígeno rFIXFc .
Véase también la Figura 7.
Tabla 12. Estimados farmacocinéticos para el antígeno rFIXFc .
Véase también las Figuras 8A-8B.
Tabla 13. Valores PK promedio basados en la actividad. 5 Notas al pie: Nota: Los valores de parámetros PK se determinaron por un método de 2 compartimentos .
Prom. geo. = Promedio Geométrico [1] C168 = actividad FIX sobre la referencia 168 horas luego de la dosis. [2] TBLP1 - Tiempo estimado luego de la dosis cuando la actividad FIX ha disminuido a 1 UI/dL sobre la referencia [3] TBLP3 = Tiempo estimado luego de la dosis cuando la actividad FIX ha disminuido a 3 UI/dL sobre la referencia. [4] TBLP5 = Tiempo estimado luego de la dosis cuando la actividad FIX ha disminuido a 5 UI/dL sobre la referencia [5] La recuperación gradual se calculó utilizando un valor Cmax previsto por modelo generado a partir de resultados a los que se sustraen los antecedentes, divididos por la dosis. [6] La recuperación gradual se calculó utilizando el resultado máximo observado de la muestra luego de la dosis; Recuperación gradual = (Cmax menos la referencia observada) /Dosis . [7] Recuperación In vivo = 100 x (Cmax predicho por modelo de la información menos la referencia/Dosis) x Volumen de Plasma (dL) /Dosis en UI; donde el volumen de plasma en mL = (23.7 x altura en cm) + (9.0 x peso en kg) - 1709. [8] Recuperación In vivo = 100 x (Cmax observado menos la referencia) x Volumen de Plasma (dL) /Dosis en UI; donde el volumen de plasma en mL = {23.7 x altura en cm) + (9.0 x peso en kg) - 1709.
Tabla 14. Valores promedio PK basados en el nivel de antígeno.
Debido a corrección por redondeo u otros errores (a) debería ser 0.46, (b) debería ser 110, (c) debería ser 12.0, (d) debería ser 3.95 y (e) debería ser 101.
Tabla 15: Caracterización bioquímica del Factor IX.
Tabla 16 : Breve descripción de las semividas terminales de FIXFc y BENEFIX™ luego de una sola dosis por vía intravenosa .
Brinkhous et ál, Blood, 1996; 88: 2603-2610.
McCarthy et ál, 2002, Thromb Haemost, 2002 Tabla 17. Resumen de los parámetros in vitro ROTEM*" para rFIXFc y BENEFIX™ agregados en grupos de sangre entera de ratón HemB Tabla 18. Promedio de pérdida de sangre luego del corte en la cola de los ratones HemB tratados con rFIXFc o BENEFIX™ Tabla 19. Parámetro ex vivo ROTEM® en ratones HemB tratados con rFIXFc y BENEFIX Tabla 20A. Parámetros PK de rFIXFc y BENEFIX™ (200 Ul/kg) luego de la inyección subcutánea de una única dosis en ratones con deficiencia de FIX (ELISA para antígenos) .
Tabla 20B. Parámetros PK de rFIXFc y BENEFIX™ (200 Ul/kg) luego de la inyección subcutánea de una única dosis en ratones con deficiencia de FIX (ensayo de actividad aPTT) .
Tabla 21. Análisis PK y PD de rFIXFc y BENEFIX™ luego de una única dos subcutánea en ratones con deficiencia de FIX.
Tabla 22. Parámetros PK de rFIXFc (50 Ul/kg) luego de la inyección subcutánea de una única dosis en monos cynomolgus .
Tabla 23. Parámetros PK de rFIXFc (100 Ul/kg) luego de la inyección subcutánea de una única dosis en monos cynomolgus .
Tabla 24. Parámetros PK de rFIXFc (200 Ul/kg) luego de la inyección subcutánea de una única dosis en monos cynomolgus .
Tabla 25. Parámetros PK de rFIXFc luego de una única dosis subcutánea en monos cynomolgus. 10 Biodisponibilidad que varía entre 35.5 y 44.5% para rFIXFc. 15 Semivida de eliminación varía entre 43.8 y 57.9 horas para rFIXFc.
Tabla 26. Pautas de dosificación para el tratamiento de Hemofilia B con rFIXFc.
Factor IX Frecuencia de Nivel Requerido dosis % Tipo de hemorragia (hrs) Menor Epistaxis Hemartrosis, no complicada 48 Muscular superficial 48 Tejido blando superficial 20- 48 Moderada Epistaxis Intramuscular con disección 48 Tejido blando con disección 48 Membranas mucosas 48 Extracciones dentales 48 Hematuria 48 Hemartrosis, con movimiento 48 limitado Mayor Epistaxis 24-48 Faringe 24-48 Retrofaringe 24-48 Retroperitoneo 24-48 Cirugía 24-48 SNC 24-48 El paciente debería consultar con su médico, pero debería tomar solo una dosis de seguimiento no menos de 24-48 horas luego de la dosis inicial.
Tablas 27A y 27B. Comparación de información utilizando cálculos en la Tabla 27A Ejemplo 1 y tabla 27B Ejemplo 11.
TABLA 27A TABLA 27B 5 15 Los resultados presentados son Promedio ± SD con el intervalo mencionado entre paréntesis.
Cmax indica la concentración máxima; AUCiNF, el área bajo la curva (tiempo cero extrapolado a tiempo infinito) ; CL, el aclaramiento; Vss, el volumen de distribución en estado estacionario; TMR, el tiempo medio de residencia; Tl/2 , la semivida de distribución; ?1/2ß, la semivida de eliminación; NA, no corresponde.
La recuperación gradual se ..ilizando Cmax menos el valor de referencia ante¿xu¿ di cratamiento y dividido por la dosis.
† Actividad FIX en el plasma sobre el valor de ferencia 168 horas (7 Días) luego de la dosis.
* Tiempo previsto por el modelo luego de la dosis cuando la actividad FIX disminuyó a 1 UI/dL sobre la referencia del sujeto.
La información no corresponde porque los parámetros no son independientes de la dosis, por lo tanto los valores promedio y SD no se calcularon a través de los diferentes grupos de dosis.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (121)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un método para administrar el Factor IX a un sujeto humano que lo necesita, caracterizado porque comprende administrarle al sujeto una dosis de al menos alrededor de 25 Ul/kg de un polipéptido quimérico que comprende el Factor IX y un compañero de unión de FcRn (FcRn BP) alrededor de una vez por semana o en un intervalo de dosificación mayor.
2. Un método para administrar el Factor IX a un sujeto humano que lo necesita, caracterizado porque comprende administrarle al sujeto una dosis de al menos alrededor de 10 Ul/kg o al menos alrededor de 20 Ul/kg de un polipéptido quimérico que comprende el Factor IX y un compañero de unión de FcRn (FcRn BP) alrededor de una vez por semana o en un intervalo de dosificación mayor.
3. Un método para administrar el Factor IX a un sujeto humano que lo necesita, caracterizado porque comprende administrarle al sujeto una dosis de al menos alrededor de 10 Ul/kg de un polipéptido quimérico que comprende el Factor IX y XTEN alrededor de una vez por semana o en un intervalo de dosificación mayor.
4. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque el nivel de plasma del polipéptido quimérico alcanza una concentración mínima de al menos alrededor de 1 Ul/dl luego de al menos alrededor de 6 días en al menos alrededor de 80% de una población de pacientes o alcanza una concentración mínima de 1 Ul/dl luego de al menos alrededor de 6 días en el sujeto.
5. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque el nivel de plasma del polipéptido quimérico alcanza una concentración mínima promedio de alrededor de 1-5 Ul/dl en una población de pacientes; o una concentración mínima de alrededor de 1-5 Ul/dl en el sujeto.
6. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque menos del 25% del polipéptido quimérico del Factor IX en la dosis se encuentra completamente fosforilado y menos del 25% del polipéptido quimérico del Factor IX en la dosis se encuentra completamente sulfatado.
7. El método de conformidad con la reivindicación 6 , caracterizado porque alrededor del 10% del polipéptido quimérico en la dosis se encuentra fosforilado y menos de alrededor del 9% del polipéptido quimérico en la dosis se encuentra sulfatado.
8. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque la dosis tiene una recuperación gradual promedio (valor ) (actividad; observada) mayor que 0.75 UI/dL por Ul/kg.
9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la dosis tiene una recuperación gradual (valor K) (actividad; observada) de al menos alrededor de 0.8, al menos alrededor de 0.9 o al menos alrededor de 1 iu/dL por iu/kg.
10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque el polipéptido quimérico presenta uno o más parámetros farmacocinéticos en la población de pacientes o en el sujeto, seleccionado del grupo que consiste en: un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 3.36 + 0.93 mL/hora/kg; un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 3.0-3.72, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7 o 3.72 mL/hora/kg; un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes que es alrededor de 2.5 veces menor que el aclaramiento de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; un aclaramiento (CL) (actividad) en el sujeto de alrededor de 1.84-4.58 mL/hora/kg; un tiempo medio de residencia (TMR) (actividad) en la población de pacientes de al menos alrededor de 68.05 ± 11.16 horas ; un TMR promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76 o 78 horas,- un TMR promedio (actividad) en la población de pacientes que es alrededor de 3 veces más larga que el TMR promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; un tiempo medio de residencia (TMR) (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 53.1-85.8 horas; un tiempo medio de residencia (TMR) (actividad) en el sujeto de al menos alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70, alrededor de 75, alrededor de 80, alrededor de 85 o alrededor de 90 horas; un ti2beta promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 52.5 + 9.2 horas; un ti/2beta promedio (actividad) en la población de pacientes que es alrededor de 47-60 horas, alrededor de 47, alrededor de 48, alrededor de 49, alrededor de 50, alrededor de 51, alrededor de 52, alrededor de 53, alrededor de 54, alrededor de 55, alrededor de 56, alrededor de 57, alrededor de 58, alrededor de 59, alrededor de 60 horas; un ti2beta promedio (actividad) en la población que es al menos 3 veces mayor que el ti2be a promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; un tx 2beta (actividad) en el sujeto de alrededor de 40-67.4, alrededor de 40, alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70 o alrededor de 75 horas,- una recuperación gradual promedio (valor ) (actividad; observada) en la población de pacientes de alrededor de 0.93 ± 0.18 UI/dL por Ul/kg; una recuperación gradual promedio (valor K) (actividad; observada) en la población de pacientes de alrededor de 0.85- 1 .15, alrededor de 0.85, alrededor de 0 .86, alrededor de 0. .87, alrededor de 0.88, alrededor de 0 .89, alrededor de 0. .90, alrededor de 0.91, alrededor de 0 .92, alrededor de 0. ,93, alrededor de 0.94, alrededor de 0 .95, alrededor de 0. .96, alrededor de 0.97, alrededor de 0 .98, alrededor de 0. .99, alrededor de 1.0, alrededor de 1.05 alrededor de 1 .10 o alrededor de 1 .15 UI/dL por Ul/kg; una recuperación gradual promedio (valor K) (actividad; observada) en la población de pacientes que es alrededor de 24% mejor que la recuperación gradual promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; una recuperación gradual (valor K) (actividad; observada) en el sujeto de alrededor de 0.62-1.17 UI/dL por Ul/kg; un Vss promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 226 ± 67.76 mL/kg; un Vss promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 200-300, alrededor de 200, alrededor de 210, alrededor de 220, alrededor de 230, alrededor de 240, alrededor de 250, alrededor de 260, alrededor de 270, alrededor de 280, alrededor de 290 o alrededor de 300 mL/kg; un Vss (actividad) en el sujeto de alrededor de 145-365 mL/kg; un AUC/dosis promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 32.44 ± 10.75 UI*h/dL por Ul/kg; una AUC/dosis promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 26-40, alrededor de 26, alrededor de 27, alrededor de 28, alrededor de 29, alrededor de 30, alrededor de 31, alrededor de 32, alrededor de 33, alrededor de 34, alrededor de 35, alrededor de 36, alrededor de 37, alrededor de 38, alrededor de 39 o alrededor de 40 UU*h/dL por Ul/kg. una AUC/dosis en el sujeto de alrededor de 21.80-54.30 UI*h/dL por Ul/kg.
11. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque el intervalo de dosificación es de 6-10 días.
12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 25-110, alrededor de 30-110, alrededor de 40-110, alrededor de 50-110, alrededor de 60-110, alrededor de 70-110, alrededor de 80-110, alrededor de 90-110 y alrededor de 100-110 Ul/kg.
13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 30-100, alrededor de 30-90, alrededor de 30-80, alrededor de 30-70, alrededor de 30-60, alrededor de 30-50 y alrededor de 30-40 Ul/kg.
14. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 40-110, alrededor de 50-100, alrededor de 60-90, y alrededor de 70-80 Ul/kg.
15. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 40-50, alrededor de 50-60, alrededor de 60-70, alrededor de 70-80, alrededor de 80-90, alrededor de 90-100 y alrededor de 100-110 Ul/kg.
16. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 25, alrededor de 30, alrededor de 35, alrededor de 40, alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70, alrededor de 75, alrededor de 80, alrededor de 85, alrededor de 90, alrededor de 95, alrededor de 100, alrededor de 105 y alrededor de 110 Ul/kg.
17. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11-16, caracterizado porque el intervalo de dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 7-10, alrededor de 7-9 y alrededor de 7-8 días.
18. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11-16, caracterizado porque el intervalo de dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 8-10 y alrededor de 9-10 días.
19. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11-16, caracterizado porque el intervalo de dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 6-7 y alrededor de 8-9 días.
20. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11-16, caracterizado porque el intervalo de dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 6, alrededor de 7, alrededor de 8, alrededor de 9 y alrededor de 10 días.
21. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la dosis es alrededor de 30-50 Ul/kg y el intervalo de dosificación es alrededor de 7 días.
22. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4-21, caracterizado porque el mínimo se alcanza en al menos alrededor de 90% de la población de pacientes .
23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el mínimo se alcanza en alrededor de 100% de la población de pacientes.
24. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, 22 y 23, caracterizado porque la dosis es alrededor de 50 Ul/kg y el intervalo de dosificación es alrededor de 7 días .
25. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4-11, caracterizado porque la dosis es alrededor de 50 Ul/kg, el intervalo de dosificación es alrededor de 7 días, y el mínimo se alcanza en alrededor de 100% de la población de pacientes.
26. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque el intervalo de dosificación es de 9-18 días.
27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 90-180, alrededor de 100-180, alrededor de 110-180, alrededor de 120-180, alrededor de 130-180, alrededor de 140-180, alrededor de 150-180, alrededor de 160-180 y alrededor de 170-180 Ul/kg.
28. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 90-170, alrededor de 90-160, alrededor de 90-150, alrededor de 90-140, alrededor de 90-130, alrededor de 90-120, alrededor de 90-110 y alrededor de 90-100 Ul/kg.
29. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 100-170, alrededor de 110-160, alrededor de 120-150 y alrededor de 130-140 Ul/kg.
30. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 90-100, alrededor de 100-110, alrededor de 110-120, alrededor de 120-130, alrededor de 130-140, alrededor de 140-150, alrededor de 150-160 y alrededor de 160-170 Ul/kg.
31. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la dosis se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 90, alrededor de 95, alrededor de 100, alrededor de 105, alrededor de 110, alrededor de- 115, alrededor de 120, alrededor de 125, alrededor de 130, alrededor de 135, alrededor de 140, alrededor de 145, alrededor de 150, alrededor de 155, alrededor de 160, alrededor de 165, alrededor de 170, alrededor de 175 y alrededor de 180 Ul/kg.
32. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26-31, caracterizado porque el intervalo de dosificación se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 9-17, alrededor de 9-16, alrededor de 9-15, alrededor de 9-14, alrededor de 9-13, alrededor de 9-12, alrededor de 9-11 y alrededor de 9-10 días.
33. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26-31, caracterizado porque el intervalo de dosificación se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 10-18, alrededor de 11-18, alrededor de 12-18, alrededor de 13-18, alrededor de 14-18, alrededor de 15-18, alrededor de 16-18 y alrededor de 17-18 días.
34. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26-31, caracterizado porque el intervalo de dosificación se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 10-11, alrededor de 11-12, alrededor de 12-13, alrededor de 13-14, alrededor de 14-15, alrededor de 15-16 y alrededor de 16-17 días.
35. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26-31, caracterizado porque el intervalo de dosificación se selecciona del grupo que consiste en alrededor de 9, alrededor de 10, alrededor de 11, alrededor de 12, alrededor de 13, alrededor de 14, alrededor de 15, alrededor de 16, alrededor de 17 y alrededor de 18 días.
36. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la dosis es alrededor de 100 Ul/kg y el intervalo de dosificación es al menos alrededor de 12 días.
37. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque el mínimo es al menos alrededor de 1 Ul/dl en al menos alrededor de 70%, alrededor de 80% o alrededor de 90% de la población de pacientes.
38. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el intervalo de dosificación es alrededor de 12-13 días.
39. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la dosis es alrededor de 100 Ul/kg y el intervalo de dosificación es al menos alrededor de 9 días.
40. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la concentración mínima es al menos alrededor de 1 Ul/dl en alrededor de 100% de la población de pacientes.
41. El método de conformidad con la reivindicación 26 o 39, caracterizado porque el intervalo de dosificación es alrededor de 9-15 días.
42. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la dosis es alrededor de 150 Ul/kg y el intervalo de dosificación es al menos alrededor de 14 días.
43. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el mínimo es al menos alrededor de lUl/dl en alrededor de 100% de la población de pacientes.
4 . El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-43, caracterizado porque el sujeto necesita controlar o prevenir sangrados o episodios de sangrado .
45. El método de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque el sujeto necesita controlar o prevenir el sangrado en hemorragias menores, hemartrosis, hemorragia de músculo superficial, hemorragia de tejido blando, hemorragia moderada, hemorragia intramuscular o de tejido blando con disección, hemorragia de la membrana mucosa, hematuria, hemorragia masiva, hemorragia de la faringe, hemorragia de la retrof ringe, hemorragia retroperitoneal , hemorragia del sistema nervioso central, hematomas, cortes, raspaduras, hemorragia de las articulaciones, sangrado por la nariz, sangrado por la boca, sangrado por las encías, sangrado intracraneal, sangrado intraperitoneal , hemorragia espontánea menor, sangrado luego de una lesión importante, hematomas moderados en la piel o hemorragia espontánea en las articulaciones, músculos, órganos internos o el cerebro.
46. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-43, caracterizado porque el sujeto necesita administración perioperatoria .
47. El método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el sujeto necesita un control del sangrado asociado con cirugía o extracción dental.
48. El método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el sujeto tendrá, tiene o ha tenido una cirugía mayor.
49. El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque la cirugía mayor es una cirugía ortopédica, cirugía oral extensiva, cirugía urológica o cirugía de hernia.
50. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la cirugía ortopédica es un reemplazo de rodilla, cadera u otra articulación mayor.
51. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-43, caracterizado porque el sujeto necesita tratamiento profiláctico.
52. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-43, caracterizado porque el sujeto necesita tratamiento a demanda.
53. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el sujeto necesita tratamiento por un episodio de sangrado.
54. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque el sujeto necesita un tratamiento para la hemartrosis, sangrado muscular, sangrado oral, hemorragia, hemorragia en músculos, hemorragia oral, traumatismo, trauma capitis, sangrado gastrointestinal, hemorragia intracraneal, hemorragia intraabdominal , hemorragia intratorácica, fractura ósea, sangrado en el sistema nervioso central, sangrado en el espacio retrofaríngeo, sangrado en la cavidad retroperitoneal o sangrado en la envoltura del músculo iliopsoas.
55. El método de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque el sujeto necesita profilaxis quirúrgica, administración perioperativa o tratamiento para cirugía .
56. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la cirugía es una cirugía menor, cirugía mayor, extracción dental, amigdalectomía, cirugía de hernia inguinal, sinovectomía, reemplazo total de rodilla, craneotomía, osteosíntesis , cirugía de emergencia, cirugía intracraneal, cirugía intraabdominal , cirugía intratorácica o cirugía de reemplazo articular.
57. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-56, caracterizado porque el sujeto es un ser humano .
58. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-57, caracterizado porque el Factor IX en el polipéptido quimérico es un Factor IX humano.
59. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-58, caracterizado porque el Factor IX en el polipéptido quimérico es un Factor IX mutante.
60. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-59, caracterizado porque el FcRn BP en el polipéptido quimérico es un Fe humano.
61. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-60, caracterizado porque el FcRn BP en el polipéptido quimérico es un Fe mutante.
62. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque el Factor IX es al menos 90% o 95% idéntico a una secuencia de aminoácidos de Factor IX mostrado en la Tabla 2A sin una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos 1 a 415 de la SEC ID N° : 2) .
63. El método de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque el Factor IX es idéntico a una secuencia de aminoácidos de Factor IX mostrado en la Tabla 2A sin una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos 1 a 415 de la SEC ID N° : 2) .
64. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque el Fe es al menos 90% o 95% idéntico a una secuencia de aminoácidos de Fe mostrada en la Tabla 2B sin una secuencia de señal (aminoácidos 1 a 227 SEC ID N° : 4) .
65. El método de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado porque el Fe es idéntico a una secuencia de aminoácidos de Fe mostrada en la Tabla 2B sin una secuencia de señal (aminoácidos 1 a 227 de la SEC ID N° : 4) .
66. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-65, caracterizado porque el polipéptido quimérico se encuentra en la forma de un híbrido que comprende un segundo polipéptido en asociación con el polipéptido quimérico, donde el segundo polipéptido comprende un FcRn BP.
67. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque el polipéptido quimérico comprende una secuencia al menos 90% o 95% idéntica a una secuencia de aminoácidos de Factor IX y Fe mostrada en la Tabla 2A sin una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos 1 a 642 de la SEC ID N° : 2) .
68. El método de conformidad con la reivindicación 67, caracterizado porque el polipéptido quimérico comprende una secuencia idéntica a la secuencia de aminoácidos de Factor IX y Fe mostrada en la Tabla 2A sin una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos 1 a 642 de la SEC ID N° : 2) .
69. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 66-68, caracterizado porque el segundo polipéptido comprende una secuencia al menos 90% o 95% idéntica a una secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 2B sin una secuencia de señal (aminoácidos 1 a 227 de la SEC ID N° : 4) .
70. El método de conformidad con la reivindicación 69, caracterizado porque el segundo polipéptido comprende una secuencia idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 2B sin una secuencia de señal (aminoácidos 1 a 227 de la SEC ID N° : 4) .
71. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-70, caracterizado porque el paciente necesita un tratamiento de larga duración en intervalos de dosificación semanales o más largos.
72. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-71, caracterizado porque el polipéptido quimérico se administra como parte de una composición farmacéutica que comprende al menos un excipiente.
73. Un polipéptido caracterizado porque comprende un Factor IX al menos 90% o 95% idéntico a una secuencia de aminoácidos de Factor IX mostrado en la Tabla 2A sin una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos 1 a 415 de la SEC ID N° : 2), y un FcRn BP.
74. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque el Factor IX es idéntico a una secuencia de aminoácidos de Factor IX mostrado en la Tabla 2A sin una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos 1 a 415 de la SEC ID N° : 2) .
75. Un polipéptido caracterizado porque comprende un Factor IX al menos 90% o 95% idéntico a una secuencia de aminoácidos de Factor IX mostrado en la Tabla 2A con una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos -46 a 415 de la SEC ID N" : 2) , y un FcRn BP.
76. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 75, caracterizado porque el Factor IX es idéntico a una secuencia de aminoácidos de Factor IX mostrado en la Tabla 2A con una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos -46 a 415 de la SEC ID N° : 2) .
77. El polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 73-65, caracterizado porque el FcRn BP es al menos 90% o 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos Fe mostrada en la Tabla 2B sin una secuencia de señal (aminoácidos 1 a 227 de la SEC ID N° : 4).
78. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 77, caracterizado porque el Fe es idéntico a la secuencia de aminoácidos de Fe mostrada en la Tabla 2B (aminoácidos 1 a 227 de la SEC ID N° : 4) .
79. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 73 o 75, caracterizado porque comprende una secuencia al menos 90% o 95% idéntica a una secuencia de aminoácidos de Factor IX y Fe mostrada en la Tabla 2A sin una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos 1 a 642 de la SEC ID N° : 2) .
80. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 79, caracterizado porque comprende una secuencia idéntica a la secuencia de aminoácidos de Factor IX y Fe mostrada en la Tabla 2A sin una secuencia de señal y propéptido (aminoácidos 1 a 642 de la SEC ID N° : 2) .
81. El polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 73-80, caracterizado porque se encuentra en la forma de un híbrido que comprende un segundo polipéptido, donde el segundo polipéptido comprende un FcRn BP.
82. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque el segundo polipéptido comprende una secuencia al menos 90% o 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 2B sin una secuencia de señal (aminoácidos 1 a 227 de la SEC ID N° : 4) o al menos 90% o 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 2B con una secuencia de señal {aminoácidos -20 a 227 de la SEC ID N° : 4) .
83. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque el segundo polipéptido comprende una secuencia idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 2B sin una secuencia de señal (aminoácidos 1 a 227 de la SEC ID N° : 4) o al menos 90% o 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 2B con una secuencia de señal (aminoácidos -20 a 227 de la SEC ID N°:4).
84. El polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 73-83, caracterizado porque ha reducido la fosforilación y la sulfatación considerablemente en comparación con el Factor IX derivado del plasma.
85. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 84, caracterizado porque se encuentra menos de alrededor de 10% fosforilado y menos de alrededor de 9% sulfatado.
86. El polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 73-85, caracterizado porque tiene un valor K mayor que 0.7 o 0.75.
87. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 86, caracterizado porque tiene un valor K de al menos alrededor de 0.8, al menos alrededor de 0.9 o al menos alrededor de 1.
88. El polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 73-87, caracterizado porque presenta uno o más parámetros farmacocinéticos en la población de pacientes o en el sujeto, seleccionado del grupo que consiste en: un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 3.36 ± 0.93 mL/hora/kg; un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 3.0-3.72, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7 o 3.72 mL/hora/kg; un aclaramiento promedio (CL) (actividad) en la población de pacientes que es alrededor de 2.5 veces menor que el aclaramiento de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; un aclaramiento (CL) (actividad) en el sujeto de alrededor de 1.84-4.58 mL/hora/kg un tiempo medio de residencia (TMR) promedio (actividad) en la población de pacientes de al menos alrededor de 68.05 ± 11.16 horas; un TMR promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76 o 78 horas; un TMR promedio (actividad) en la población de pacientes que es alrededor de 3 veces mayor que el TMR promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; un tiempo medio de residencia (TMR) (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 53.1-85.8 horas; un tiempo medio de residencia (TMR) (actividad) en el sujeto de al menos alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70, alrededor de 75, alrededor de 80, alrededor de 85 o alrededor de 90 horas; un ti/2beta promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 52.5 ± 9.2 horas; un ti2beta promedio (actividad) en la población de pacientes que es alrededor de 47-60 horas, alrededor de 47, alrededor de 48, alrededor de 49, alrededor de 50, alrededor de 51, alrededor de 52, alrededor de 53, alrededor de 54, alrededor de 55, alrededor de 56, alrededor de 57, alrededor de 58, alrededor de 59, alrededor de 60 horas,- un t^beta promedio (actividad) en la población que es al menos 3 veces mayor que el tl/2beta promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; un ti2beta (actividad) en el sujeto de alrededor de 40-67.4, alrededor de 40, alrededor de 45, alrededor de 50, alrededor de 55, alrededor de 60, alrededor de 65, alrededor de 70 o alrededor de 75 horas; una recuperación gradual promedio (valor K) (actividad; observada) en la población de pacientes de alrededor de 0.93 ± 0.18 UI/dL por Ul/kg; una recuperación gradual promedio (valor K) (actividad; observada) en la población de pacientes de alrededor de 0.85- 1 , .15, alrededor de 0.85, alrededor de 0 .86, alrededor de 0. .87, alrededor de 0.88, alrededor de 0 .89, alrededor de 0. .90, alrededor de 0.91, alrededor de 0 .92, alrededor de 0. .93, alrededor de 0.94, alrededor de 0 • 95, alrededor de 0. .96, alrededor de 0.97, alrededor de 0 .98, alrededor de 0. .99, alrededor de 1 .0 , alrededor de 1.05, alrededor de 1 , .10 o alrededor de 1.15 UI/dL por Ul/kg; una recuperación gradual promedio (valor K) (actividad; observada) en la población de pacientes que es alrededor de 24% mejor que la recuperación gradual promedio de un polipéptido que comprende el Factor IX sin el FcRn BP; una recuperación gradual (valor K) (actividad; observada) en el sujeto de alrededor de 0.62-1.17 UI/dL por Ul/kg; un Vss promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 226 ± 67.76 mL/kg; un Vss promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 200-300, alrededor de 200, alrededor de 210, alrededor de 220, alrededor de 230, alrededor de 240, alrededor de 250, alrededor de 260, alrededor de 270, alrededor de 280, alrededor de 290 o alrededor de 300 mL/kg; un Vss (actividad) en el sujeto de alrededor de 145-365 mL/kg; una AUC/dosis promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 32.44 + 10.75 UI*h/dL por UI/kg; una AUC/dosis promedio (actividad) en la población de pacientes de alrededor de 26-40, alrededor de 26, alrededor de 27, alrededor de 28, alrededor de 29, alrededor de 30, alrededor de 31, alrededor de 32, alrededor de 33, alrededor de 34, alrededor de 35, alrededor de 36, alrededor de 37, alrededor de 38, alrededor de 39 o alrededor de 40 UI*h/dL por UI/kg. una AUC/dosis en el sujeto de alrededor de 21.80-54.30 UI*h/dL por UI/kg.
89. Un polinucleótido caracterizado porque codifica el polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 73-80.
90. Un polinucleótido caracterizado porque codifica el polipéptido Factor IX-FcRn BP y el segundo péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 81-88.
91. El polinucleótido de conformidad con la reivindicación 89 o 90, caracterizado porque es un vector, un plásmido, un fago o un virus.
92. El polinucleótido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 89-91, caracterizado porque es ADN o ARN.
93. Una célula embrionaria humana cultivada caracterizada porque comprende el polinucleótido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 89-92.
94. La célula de conformidad con la reivindicación 93 caracterizada porque es una célula HEK293.
95. Un método para producir una proteína híbrida de Factor IX-FcRn BP caracterizado porque comprende cultivar la célula de conformidad con la reivindicación 93 o 94 en condiciones que permitan la expresión del polipéptido quimérico Factor IX-FcRn BP codificado y el polipéptido codificado que consiste esencialmente de FcRn BP; y recuperar la proteína híbrida Factor IX-FcRn BP codificada.
96. Una proteína híbrida caracterizada porque es producida por el método de conformidad con la reivindicación 95.
97. La proteína híbrida de conformidad con la reivindicación 96, caracterizada porque ha reducido la fosforilación y la sulfatación considerablemente en comparación con el Factor IX derivado del plasma.
98. La proteína híbrida de conformidad con la reivindicación 97, caracterizada porque se encuentra menos de alrededor de 10% fosforilada y menos de alrededor de 9% sulfatada .
99. La proteína híbrida de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 96-98, caracterizada porque tiene un valor K mayor que 0.7 o 0.75.
100. La proteína híbrida de conformidad con la reivindicación 99, caracterizada porque tiene un valor K de al menos alrededor de 8 , alrededor de 9 o alrededor de l .
101. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 66-72, caracterizado porque el polipéptido quimérico se encuentra en la forma de un híbrido, donde el híbrido consiste esencialmente de una cadena simple del polipéptido quimérico y una cadena simple del segundo polipéptido, y donde las cadenas están asociadas a través de (a) interacciones no covalentes, (b) dos enlaces de disulfuro o (c) ambos (a) y (b) .
102. El polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 81-88 y 96-100, caracterizado porque el polipéptido quimérico se encuentra en la forma de un híbrido, donde el híbrido consiste esencialmente de una cadena simple de el polipéptido quimérico y una cadena simple del segundo polipéptido, y donde las cadenas están asociadas a través de (a) interacciones no covalentes, (b) dos enlaces de disulfuro o (c) ambos (a) y (b) .
103. Una preparación factor IX recombinante (rFIX), caracterizada porque tiene una recuperación gradual (Valor K) en humanos mayor que 0.75 UI/dL por Ul/kg y donde menos del 25% del rFIX en la preparación se encuentra completamente fosforilada y sulfatada.
104. La preparación rFIX de conformidad con la reivindicación 103, caracterizada porque tiene una recuperación gradual (valor K) de al menos alrededor de 0.8, al menos alrededor de 0.9 o al menos alrededor de 1 UI/dL por Ul/kg.
105. La preparación rFIX de conformidad con la reivindicación 103, caracterizada porque el rFIX comprende un FcRn BP.
106. La preparación rFIX de conformidad con la reivindicación 105, caracterizada porque comprende la región de unión FcRn de Fe .
107. La preparación rFIX de conformidad con la reivindicación 105, caracterizada porque comprende la región de unión FcRn de albúmina.
108. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque la dosis es 10-50, 10-30, 20-50, 20-100, 10 o 20 Ul/kg y el intervalo de dosificación es una vez por semana.
109. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque la dosis es 15-50 o 40 Ul/kg y el intervalo de dosificación es cada 10 días.
110. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque la dosis es 100 Ul/kg y el intervalo de dosificación es cada dos semanas o dos veces al mes .
111. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque el intervalo de dosificación es una vez a la semana.
112. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque la dosis es 15-100 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 10-13 días.
113. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque la dosis 50-100 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 10-14 días, la dosis es 50-150 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 14-15 días, o la dosis es 100-150 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 14-16 días.
114. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque la dosis es 15-50 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 10 días, la dosis es 20-70 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 11 días, la dosis es 25-85 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 12 días, la dosis es 30-100 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 13 días, la dosis es 40-125 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 14 días, o la dosis es 50-150 Ul/kg y el intervalo de dosificación es 15 días.
115. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque consiste en un intervalo de dosificación profiláctico de una vez por semana.
116. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque consiste en un intervalo de dosificación profiláctico de 10-14 días.
117. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque consiste en un intervalo de dosificación profiláctico de 15-18 o 16-18 días.
118. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque consiste en un intervalo de dosificación profiláctico de dos veces al mes.
119. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque consiste en un intervalo de dosificación profiláctico de una vez por mes.
120. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque es una dosis profiláctica y/o intervalo de dosificación fijo o individual.
121. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque la dosis se administra de forma intravenosa o subcutánea.
MX2013000281A 2010-07-09 2011-07-11 Polipeptidos de factor ix y metodos para usarlos. MX356527B (es)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US36306410P 2010-07-09 2010-07-09
US201061424555P 2010-12-17 2010-12-17
US201161430819P 2011-01-07 2011-01-07
US201161438572P 2011-02-01 2011-02-01
US201161442079P 2011-02-11 2011-02-11
US201161470951P 2011-04-01 2011-04-01
PCT/US2011/043569 WO2012006624A2 (en) 2010-07-09 2011-07-11 Factor ix polypeptides and methods of use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MX2013000281A true MX2013000281A (es) 2013-03-22
MX356527B MX356527B (es) 2018-06-01

Family

ID=45441870

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2013000281A MX356527B (es) 2010-07-09 2011-07-11 Polipeptidos de factor ix y metodos para usarlos.
MX2020009702A MX2020009702A (es) 2010-07-09 2013-01-08 Polipeptidos de factor ix y metodos para usarlos.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2020009702A MX2020009702A (es) 2010-07-09 2013-01-08 Polipeptidos de factor ix y metodos para usarlos.

Country Status (17)

Country Link
US (13) US9670475B2 (es)
EP (2) EP3552619A1 (es)
JP (5) JP2013534426A (es)
KR (5) KR20190104442A (es)
CN (1) CN103140237A (es)
AU (5) AU2011274414B2 (es)
BR (1) BR112013000650A8 (es)
CA (1) CA2804274A1 (es)
CL (1) CL2013000058A1 (es)
EA (2) EA037095B1 (es)
IL (3) IL223990B (es)
MX (2) MX356527B (es)
MY (2) MY192639A (es)
NZ (1) NZ605348A (es)
SG (3) SG10201505218YA (es)
UA (2) UA115120C2 (es)
WO (1) WO2012006624A2 (es)

Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
WO2010091122A1 (en) 2009-02-03 2010-08-12 Amunix, Inc. Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same
US20120263701A1 (en) 2009-08-24 2012-10-18 Volker Schellenberger Coagulation factor vii compositions and methods of making and using same
UA115120C2 (uk) 2010-07-09 2017-09-25 Байоджен Хемофіліа Інк. Спосіб застосування химерного поліпептиду фактора ix
KR20140002601A (ko) 2010-07-09 2014-01-08 바이오겐 이데크 헤모필리아 인코포레이티드 키메라 응고 인자
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
US10656167B2 (en) 2011-07-25 2020-05-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Assays to monitor bleeding disorders
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
ES2911677T3 (es) 2011-10-03 2022-05-20 Modernatx Inc Nucleósidos, nucleótidos y ácidos nucleicos modificados, y sus usos
DE12858350T1 (de) 2011-12-16 2021-10-07 Modernatx, Inc. Modifizierte mrna zusammensetzungen
EA029560B1 (ru) * 2012-01-12 2018-04-30 Байоджен Эмэй Инк. Применение химерного фактора свертывания крови для уменьшения ингибирующего иммунного ответа у субъекта
LT2814840T (lt) 2012-02-15 2020-02-25 Bioverativ Therapeutics Inc. Faktoriaus viii kompozicijos ir jų gavimo ir naudojimo būdai
EP2822577B1 (en) 2012-02-15 2019-02-06 Bioverativ Therapeutics Inc. Recombinant factor viii proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
EP3501550A1 (en) 2012-04-02 2019-06-26 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
US10317376B2 (en) 2012-04-11 2019-06-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of detecting glycosaminoglycans
EP4079316A1 (en) 2012-06-08 2022-10-26 Bioverativ Therapeutics Inc. Procoagulant compounds
WO2013185114A2 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Biogen Idec Ma Inc. Chimeric clotting factors
US10001495B2 (en) 2012-07-25 2018-06-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Blood factor monitoring assay and uses thereof
WO2014052490A1 (en) * 2012-09-25 2014-04-03 Biogen Idec Ma Inc. Methods of using fix polypeptides
EP2908847B1 (en) * 2012-10-18 2022-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
EP2922871B1 (en) * 2012-11-20 2019-06-19 The University of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions for modified factor ix proteins
US9597380B2 (en) 2012-11-26 2017-03-21 Modernatx, Inc. Terminally modified RNA
US10717965B2 (en) 2013-01-10 2020-07-21 Gloriana Therapeutics, Inc. Mammalian cell culture-produced neublastin antibodies
DK3889173T3 (da) 2013-02-15 2023-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc Optimeret faktor viii-gen
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
UY35463A (es) * 2013-03-15 2014-10-31 Biogen Idec Inc Formulaciones de polipéptido fc-factor ix.
EP3033097B1 (en) 2013-08-14 2021-03-10 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii-xten fusions and uses thereof
HUE057005T2 (hu) 2013-09-25 2022-04-28 Bioverativ Therapeutics Inc Oszlopon történõ vírusinaktiváló eljárások
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US10325687B2 (en) 2013-12-06 2019-06-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Population pharmacokinetics tools and uses thereof
JP2017500017A (ja) 2013-12-20 2017-01-05 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． 生物薬剤フェドバッチ生産能力及び生産物品質を改善するための灌流シード培養の使用
EP3086804A4 (en) * 2013-12-23 2017-07-19 CSL Limited Fusion proteins comprising factor ix for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof
KR20230136616A (ko) 2014-02-04 2023-09-26 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 번역 후 변형을 강화시키기 위한 통류 방식 양이온교환 크로마토그래피의 용도
KR102385372B1 (ko) * 2014-03-24 2022-04-11 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 동결건조된 ix 인자 제형
WO2016004113A1 (en) 2014-06-30 2016-01-07 Biogen Ma Inc. Optimized factor ix gene
MA40864A (fr) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc Hypotaurine, gaba, bêta-alanine et choline pour la régulation de l'accumulation de sous-produits résiduaires dans des procédés de culture de cellules mammifères
AU2016301303B2 (en) 2015-08-03 2021-10-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX fusion proteins and methods of making and using same
PT3411478T (pt) 2016-02-01 2022-09-13 Bioverativ Therapeutics Inc Genes do fator viii otimizados
EA201892347A1 (ru) 2016-04-15 2019-04-30 Баксалта Инкорпорейтед Способ и устройство для предоставления фармакокинетической схемы дозирования лекарственных препаратов
TW201739448A (zh) * 2016-05-06 2017-11-16 安成生物科技股份有限公司 用於治療及/或預防血液相關疾病之方法及配方
AU2017294555B2 (en) 2016-07-08 2022-04-28 CSL Behring Lengnau AG Subcutaneous administration of long-acting factor IX in humans
EP3502143A4 (en) 2016-08-19 2020-07-15 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. BINDING PEPTIDE FOR THE CONSTRUCTION OF A FUSION PROTEIN
CN106279437B (zh) 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
CN106317226B (zh) 2016-08-19 2017-09-05 安源医药科技（上海）有限公司 用于构建融合蛋白的连接肽
EP3548066A1 (en) 2016-12-02 2019-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
TW201831521A (zh) 2017-01-31 2018-09-01 美商生物化學醫療公司 因子ｉｘ融合蛋白以及其製備方法及使用方法
US11045128B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intra-abdominal pressure
US10813589B2 (en) 2017-06-03 2020-10-27 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring uterine contraction pressure
US11185245B2 (en) 2017-06-03 2021-11-30 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure for muscle compartment syndrome
US10799131B2 (en) 2017-06-03 2020-10-13 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intrauterine pressure to protect the fallopian tubes
US11045143B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter with connectable hub for monitoring pressure
MX2019014651A (es) 2017-06-29 2020-02-07 CSL Behring Lengnau AG Regimen de dosificacion de 21 dias para proteinas de fusion que comprenden el factor ix y albumina humana para el tratamiento profilactico de hemofilia y metodos del mismo.
SG11202000764RA (en) 2017-08-09 2020-02-27 Bioverativ Therapeutics Inc Nucleic acid molecules and uses thereof
MX2020003351A (es) 2017-09-27 2020-10-12 Sigilon Therapeutics Inc Metodos, composiciones y elementos implantables que comprenden celulas activas.
US20210145889A1 (en) 2018-04-04 2021-05-20 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising stem cells
TW202014181A (zh) 2018-04-04 2020-04-16 美商希吉隆醫療公司 可植入顆粒及相關方法
AU2019270184A1 (en) 2018-05-18 2020-11-26 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilia A
MX2021001599A (es) 2018-08-09 2021-07-02 Bioverativ Therapeutics Inc Moleculas de acido nucleico y sus usos para la terapia genica no viral.
UY38389A (es) 2018-09-27 2020-04-30 Sigilon Therapeutics Inc Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados
US11672457B2 (en) 2018-11-24 2023-06-13 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11779263B2 (en) 2019-02-08 2023-10-10 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring intra-abdominal pressure for assessing preeclampsia
KR20210141608A (ko) 2019-03-19 2021-11-23 체에스엘 베링 렝나우 아게 치료요법에서 인자 ix 변이체 및 이의 용도
KR20220009389A (ko) 2019-04-17 2022-01-24 코디악 바이오사이언시즈, 인크. 엑소좀 및 aav 의 조성물
CN112175088B (zh) * 2019-07-02 2023-03-28 江苏晟斯生物制药有限公司 改进的fix融合蛋白、缀合物及其应用
WO2021026020A1 (en) 2019-08-08 2021-02-11 Sentinel Medical Technologies, LLC Cable for use with pressure monitoring catheters
US11617543B2 (en) 2019-12-30 2023-04-04 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11981718B2 (en) 2020-05-27 2024-05-14 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. Dual-function protein for lipid and blood glucose regulation
EP4362971A1 (en) * 2021-07-01 2024-05-08 CSL Behring Lengnau AG Factor ix subcutaneous administration with enhanced safety
WO2024081309A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
WO2024081310A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4786726A (en) * 1986-01-06 1988-11-22 Blood Systems, Inc. Factor IX therapeutic blood product, means and methods of preparing same
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US6406697B1 (en) 1989-02-23 2002-06-18 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
ATE92107T1 (de) 1989-04-29 1993-08-15 Delta Biotechnology Ltd N-terminale fragmente von menschliches serumalbumin enthaltenden fusionsproteinen.
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
EP1132471A3 (de) 1989-09-12 2001-11-28 F. Hoffmann-La Roche Ag TNF-bindende Proteine
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
EP0517895B1 (en) 1990-12-14 1996-11-20 Cell Genesys, Inc. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
US6037452A (en) 1992-04-10 2000-03-14 Alpha Therapeutic Corporation Poly(alkylene oxide)-Factor VIII or Factor IX conjugate
ES2252732T3 (es) 1992-05-26 2006-05-16 Immunex Corporation Nueva citoquina que une cd30.
US6277975B1 (en) 1992-10-23 2001-08-21 Genetics Institute, Inc. Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same
US5621039A (en) 1993-06-08 1997-04-15 Hallahan; Terrence W. Factor IX- polymeric conjugates
EP0742830B1 (en) 1994-02-01 2001-07-18 THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Fusion proteins that include antibody and nonantibody portions
GB9415379D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
NZ292124A (en) 1994-07-29 1998-10-28 Smithkline Beecham Plc Il-4 antagonist comprising a fusion of a mutant il-4-antibody fragment
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
ATE331438T1 (de) 1995-01-17 2006-07-15 Brigham & Womens Hospital Rezeptorspezifischer transepithelealer transport von immunogenen
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
CA2249195A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
ES2340008T3 (es) 1997-02-14 2010-05-27 American Red Cross Expresion de factor ix humano activo en tejido mamario de animales transgenicos.
BR9815975A (pt) 1998-07-31 2001-12-04 Wallace E Carroll Método e aparelho para a determinação defatores de terapia anticoagulante
US20010031721A1 (en) 1999-05-05 2001-10-18 Chandra Webb Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor IX formulations
US20030096355A1 (en) * 1999-07-09 2003-05-22 Ke Zhang Isolation, identification and characterization of ymkz5, a novel member of the TNF-receptor supergene family
CA2399832C (en) 2000-02-11 2011-09-20 Stephen D. Gillies Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
EP1276756A4 (en) 2000-04-12 2004-06-09 Human Genome Sciences Inc ALBUMIN FUSION PROTEINS
AU2001252084B2 (en) 2000-04-28 2006-07-06 Inflazyme Pharmaceuticals Limited 3-nitrogen-6,7-dioxygen steroids and uses related thereto
WO2002040544A2 (en) 2000-11-14 2002-05-23 Board Of Regents, University Of Texas Systems Mutant human factor ix with an increased resistance to inhibition by heparin
US20030203845A1 (en) 2001-02-05 2003-10-30 Knudsen Jens Bjerre Combined use of factor VII polypeptides and factor IX polypeptides
WO2003020764A2 (en) 2001-09-04 2003-03-13 Merck Patent Gmbh Modified factor ix
SG159381A1 (en) 2001-10-10 2010-03-30 Novo Nordisk As Remodeling and glycoconjugation of peptides
WO2003059934A2 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
ES2545090T3 (es) 2001-12-21 2015-09-08 Human Genome Sciences, Inc. Proteínas de fusión de albúmina y GCSF
KR101204712B1 (ko) * 2003-03-18 2012-11-27 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 Ｇｌａ-잔기 함유 세린 프로테아제의 제조 방법
WO2006127896A2 (en) 2005-05-25 2006-11-30 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor ix
MXPA05010846A (es) 2003-04-09 2006-03-30 Nektar Therapeutics Tratamiento de hemofilia mediante inhalacion de factores de coagulacion.
TWI353991B (en) * 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
EP1624891B2 (en) 2003-05-06 2013-04-10 Biogen Idec Hemophilia Inc. Clotting factor-fc chimeric proteins to treat hemophilia
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7212798B1 (en) * 2003-07-17 2007-05-01 Cisco Technology, Inc. Adaptive AGC in a wireless network receiver
EP1653996A2 (en) 2003-08-08 2006-05-10 Novo Nordisk Health Care AG Use of galactose oxidase for selective chemical conjugation of protractor molecules to proteins of therapeutic interest
JP2007531707A (ja) * 2003-10-15 2007-11-08 ピーディーエル バイオファーマ， インコーポレイテッド ＩＧの重鎖定常領域の位置２５０、３１４および／または４２８の変異誘発によるＦｃ融合タンパク質血清半減期の改変
AU2004296860B2 (en) 2003-12-03 2010-04-22 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
BRPI0514396A2 (pt) 2004-08-17 2009-05-12 Csl Behring Gmbh polipeptìdeos dependentes de vitamina k modificada
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
EP1831363A1 (en) 2004-12-21 2007-09-12 Novo Nordisk Health Care AG Expression of gamma-carboxylated polypeptides in gamma-carboxylation deficient host systems
US20060162552A1 (en) 2005-01-26 2006-07-27 Mohawk Valley Energy Solutions, Inc. Systems and methods for controlling room air quality
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
WO2007053533A2 (en) 2005-11-01 2007-05-10 Wyeth Sodium chloride solution for drug reconstitution or dilution
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
EP1816201A1 (en) 2006-02-06 2007-08-08 CSL Behring GmbH Modified coagulation factor VIIa with extended half-life
EP1996937A4 (en) 2006-03-06 2009-04-08 Amunix Inc GENETIC PACKS AND USES THEREOF
LT2004683T (lt) 2006-03-24 2016-10-10 Biogen Hemophilia Inc. Pc5, kaip faktoriaus ix pro-peptidą apdorojantis fermentas
PL2007885T3 (pl) * 2006-04-11 2010-12-31 Csl Behring Gmbh Sposób zwiększania odzysku peptydów terapeutycznych in vivo
BRPI0712008A2 (pt) 2006-05-24 2012-01-10 Novo Nordisk Healthcare Ag derivados e análogos de fix prolongados
US7939632B2 (en) 2006-06-14 2011-05-10 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion proteins with high molar specific activity
KR101641899B1 (ko) 2006-06-14 2016-08-01 체에스엘 베링 게엠베하 혈액 응고 인자를 포함하는 단백질분해적으로 절단가능한 융합 단백질
EP2084274A2 (en) 2006-06-19 2009-08-05 Nautilus Technology LLC Modified coagulation factor ix polypeptides and use thereof for treatment
JP2009543841A (ja) 2006-07-17 2009-12-10 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 増加した活性を有する第ｖｉｉａ因子アナログの新規用途
WO2008022151A1 (en) 2006-08-15 2008-02-21 Inspiration Biopharmaceuticals, Inc. Prophylactic treatment of hemophilia
US20100113339A1 (en) * 2006-09-08 2010-05-06 Ablynx N. V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
WO2008119815A1 (en) 2007-04-02 2008-10-09 Novo Nordisk A/S Subcutaneous administration of coagulation factor ix
US8933197B2 (en) 2007-08-15 2015-01-13 Amunix Operating Inc. Compositions comprising modified biologically active polypeptides
JP5613876B2 (ja) 2007-10-15 2014-10-29 ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル 延長された半減期を備えるヒト第ｉｘ因子変異体
CN102065887A (zh) 2008-04-16 2011-05-18 拜耳医药保健有限公司 因子ix的定点修饰
CN102083856A (zh) 2008-04-16 2011-06-01 拜耳医药保健有限公司 经修饰的因子ix多肽及其用途
EP2268807A2 (en) 2008-04-21 2011-01-05 Novo Nordisk A/S Hyperglycosylated human coagulation factor ix
CA2722169A1 (en) 2008-04-24 2009-10-29 Celtic Pharma Peg Ltd. Factor ix conjugates with extended half-lives
US20090282865A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Ortloff Engineers, Ltd. Liquefied Natural Gas and Hydrocarbon Gas Processing
AU2009284113B2 (en) 2008-08-21 2015-05-14 Octapharma Ag Recombinantly produced human factor VIII and IX
CN102164943A (zh) 2008-09-24 2011-08-24 稳定技术有限公司 使用糖和聚乙烯亚胺保存多肽的方法
WO2010091122A1 (en) 2009-02-03 2010-08-12 Amunix, Inc. Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same
JP5936112B2 (ja) 2009-02-11 2016-06-15 アルブミディクス アクティーゼルスカブ アルブミン変異体及び複合体
WO2011030641A1 (ja) 2009-09-08 2011-03-17 コニカミノルタホールディングス株式会社 身体用装具
CA2776241A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Novozymes Biopharma Dk A/S Albumin variants
EP2353588B1 (en) 2010-01-21 2015-04-15 Agricultural Technology Research Institute A sustained release preparation of factor IX
WO2011124718A1 (en) 2010-04-09 2011-10-13 Novozymes A/S Albumin derivatives and variants
UA115120C2 (uk) 2010-07-09 2017-09-25 Байоджен Хемофіліа Інк. Спосіб застосування химерного поліпептиду фактора ix
CA2830660A1 (en) 2011-05-05 2012-11-08 Novozymes Biopharma Dk A/S Albumin variants
EP2780364A2 (en) 2011-11-18 2014-09-24 Eleven Biotherapeutics, Inc. Proteins with improved half-life and other properties
WO2014052490A1 (en) 2012-09-25 2014-04-03 Biogen Idec Ma Inc. Methods of using fix polypeptides
WO2014125082A1 (en) 2013-02-16 2014-08-21 Novozymes Biopharma Dk A/S Pharmacokinetic animal model
UY35463A (es) 2013-03-15 2014-10-31 Biogen Idec Inc Formulaciones de polipéptido fc-factor ix.
EP3086804A4 (en) 2013-12-23 2017-07-19 CSL Limited Fusion proteins comprising factor ix for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof

Also Published As

Publication number Publication date
US9675676B2 (en) 2017-06-13
US9867873B2 (en) 2018-01-16
EA028067B1 (ru) 2017-10-31
EA037095B1 (ru) 2021-02-05
EP3552619A1 (en) 2019-10-16
AU2011274414B2 (en) 2016-10-06
MY192639A (en) 2022-08-29
CN103140237A (zh) 2013-06-05
KR20230156435A (ko) 2023-11-14
US20210023185A1 (en) 2021-01-28
US10561714B2 (en) 2020-02-18
UA126265C2 (uk) 2022-09-14
IL284368A (en) 2021-07-29
JP2019023242A (ja) 2019-02-14
AU2020200118B2 (en) 2022-04-07
US20160346365A1 (en) 2016-12-01
US20130202595A1 (en) 2013-08-08
JP2022044828A (ja) 2022-03-17
US10568943B2 (en) 2020-02-25
AU2017268650B2 (en) 2019-10-10
NZ605348A (en) 2015-01-30
SG10201913700SA (en) 2020-03-30
EA201291480A1 (ru) 2013-09-30
US20190192640A1 (en) 2019-06-27
JP2017036328A (ja) 2017-02-16
KR20220097518A (ko) 2022-07-07
KR20190104442A (ko) 2019-09-09
WO2012006624A2 (en) 2012-01-12
UA115120C2 (uk) 2017-09-25
AU2022204643A1 (en) 2022-07-21
US20160166657A1 (en) 2016-06-16
EP2590668A4 (en) 2014-04-02
US10548954B2 (en) 2020-02-04
KR20140017480A (ko) 2014-02-11
US9629903B2 (en) 2017-04-25
AU2016228243A1 (en) 2016-10-06
SG10201505218YA (en) 2015-08-28
BR112013000650A2 (pt) 2016-05-31
AU2011274414A1 (en) 2013-01-24
US20180228878A1 (en) 2018-08-16
AU2020200118A1 (en) 2020-01-30
WO2012006624A3 (en) 2012-08-02
EP2590668A2 (en) 2013-05-15
AU2017268650A1 (en) 2017-12-21
US20130171175A1 (en) 2013-07-04
KR20180118808A (ko) 2018-10-31
US20180228879A1 (en) 2018-08-16
IL277432A (en) 2020-11-30
US10898554B1 (en) 2021-01-26
US20180207244A1 (en) 2018-07-26
US9670475B2 (en) 2017-06-06
US9623091B2 (en) 2017-04-18
BR112013000650A8 (pt) 2017-10-17
CL2013000058A1 (es) 2014-03-28
MY166954A (en) 2018-07-25
US20160257943A1 (en) 2016-09-08
US20190192641A1 (en) 2019-06-27
MX2020009702A (es) 2020-10-07
US20210008178A1 (en) 2021-01-14
IL223990B (en) 2020-10-29
US9233145B2 (en) 2016-01-12
US20160243206A1 (en) 2016-08-25
IL277432B (en) 2021-07-29
JP2013534426A (ja) 2013-09-05
EA201790876A1 (ru) 2017-12-29
JP2016034973A (ja) 2016-03-17
SG186856A1 (en) 2013-02-28
MX356527B (es) 2018-06-01
CA2804274A1 (en) 2012-01-12
AU2016228243B2 (en) 2017-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10898554B1 (en) Factor IX polypeptides and methods of use thereof
JP6641340B2 (ja) 第ＶＩＩＩ−Ｆｃ因子キメラおよびハイブリッドポリペプチドならびにその使用法

Legal Events

Date Code Title Description
HC Change of company name or juridical status

Owner name: ESSEX INDUSTRIES, INC.

HC Change of company name or juridical status

Owner name: ESSEX INDUSTRIES, INC.

FG Grant or registration