MX2007006023A - Tratamiento mejorado de cancer usando agonistas de tlr3. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere en general, a los campos de genetica y medicina. Mas especificamente, la presente invencion se refiere a metodos mejorados para tratar canceres usando agonistas de TLR3, valorando la expresion de un receptor de TLR3 por celulas cancerigenas.

Description

TRATAMIENTO MEJORADO DE CÁNCER USANDO AGONISTAS DE TLR3 CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere en general, a los campos de genética y medicina. Más específicamente, la presente invención se refiere a métodos mejorados para tratar cánceres usando agonistas de TLR3.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El cáncer es una de las causas conducentes de muerte en Europa y los Estados Unidos. Existen más de 1.2 millones de casos de cáncer cada año en los Estados Unidos, y el cáncer se espera, sea la causa conducente de muerte por el año 2010. Los cánceres de pulmón y próstata, son los cánceres principales que matan a los hombres en los Estados Unidos. Los cánceres de pulmón y mama, son los cánceres principales que matan mujeres en los Estados Unidos. Aún se encuentra una cura para el cáncer. Las opciones de tratamiento actual, tal como cirugía, quimioterapia y tratamiento por radiación, son algunas veces ya sea infectivas o presentan serios efectos colaterales. Actualmente, la terapia de cáncer puede involucrar cirugía, quimioterapia, terapia hormonal y/o tratamiento por radiación para erradicar células neoplásicas en un paciente. Recientemente, la terapia de cáncer podria también involucrar terapia biológica o inmunoterapia. Todos estos procedimientos poseen desventajas significantes para el paciente. La cirugía por ejemplo, puede ser contraindicada debido a la salud del paciente, o puede ser inaceptable al paciente. Adicionalmente, la cirugía puede no remover completamente el tejido neoplásico. Debido a la disponibilidad de una variedad de agentes quimioterapéuticos, la quimioterapia tiene muchas desventajas. Casi todos los agentes terapéuticos son tóxicos, y la quimioterapia causa efectos significantes y a menudo peligrosos, que incluyen náusea severa, toxicidad de médula ósea, inmunosupresión, etc. Adicionalmente, aún con administración de combinaciones de agentes quimioterapéuticos, muchas células tumorales son resistentes o desarrollan resistencia a los agentes quimioterapéuticos. En efecto, aquellas células resistentes a los agentes quimioterapéuticos particulares usados en el protocolo de tratamiento, a menudo prueban ser resistentes a otros fármacos, aún aquellos agentes que actúan por mecanismos diferentes de los mecanismos de acción de los fármacos usados en el tratamiento especifico; este fenómeno es llamado fármaco pleyotrópico o resistencia a fármacos múltiples. De este modo, debido a la resistencia al fármaco, muchos cánceres son probados refractarios a protocolos de tratamiento quimioterapéutico estándar. Las moléculas de ARN de doble hebra, tales como poli A-poli-U y poli I-poli U, son agentes inmunoestimuladores. Los estudios preclinicos realizados en 1970-1980, mostraron que la incubación de células mononucleares de la sangre con poli A-poli U, induce la secreción de alfa interferón y que la inyección de poli A-poli U, activa las células asesinas naturales in vivo (EP281 380; EP 113 162) . Se ha demostrado recientemente, que el receptor de ARN de doble hebra es el receptor 3 similar a Toll (TLR3) (Alexopoulou et al., 20019. Este receptor ha sido descrito por ser expresado en membranas de células dendriticas y de células de mucosa cólica. El enlace de ARN de doble hebra a este receptor, activa las células dendriticas y activa los linfocitos T. Consecuentemente, se ha intentado el uso de ARN de doble hebra para tratar cáncer. Sin embargo, la velocidad de respuesta no es alta y se desarrollaron aplicaciones no terapéuticas . Por lo tanto, un método para permitir seleccionar el paciente que responde, podria mejorar mayormente la eficacia terapéutica de terapias de doble hebra.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención demuestra la existencia de una correlación entre la expresión de un TLR3 en células, a partir de una muestra de tumor en un sujeto y la capacidad de dicho sujeto para responder al tratamiento con una composición que comprende un agonista de TLR3, preferiblemente, un anticuerpo u otra proteina de enlace a TLR3, una molécula pequeña que contiene fosfato, un organo-fosfoéster, un nucleótido, un compuesto similar a nucleótido, un análogo de nucleótido, o una molécula de ácido nucleico, o más preferiblemente, un ARN de doble hebra. Más específicamente, la presente invención muestra por primera vez, que el TLR3 es expresado en membranas de células tumorales y que el enlace de un agonista de TLR3, en particular, ARN de doble hebra, en dichas células tumorales a través de TLR, conduce a lisis celular tumoral y regresión tumoral. Por el contrario, las células tumorales y otras que no expresan TLR, no son sensibles a un tratamiento de agonista de TLR3, en particular, al tratamiento de ARN de doble hebra. El hallazgo es particularmente sorprendente e importante para el manejo de pacientes con cáncer, debido a que un incremento en la supervivencia es raro si siempre se logra en cualquier régimen activo conocido en cáncer de mama metastásico. El hallazgo usual es un mejoramiento en los puntos finales tempranos (velocidad de respuesta y/o tiempo al progreso, otra forma conocida como supervivencia libre de progreso) , pero el mejoramiento casi nunca se traduce en un incremento significante en la supervivencia total, como se exhibe en pacientes tratados de conformidad con la presente invención. Además, el hallazgo de que la terapia de agonista de TLR3 puede incrementar la supervivencia, permitirá las estrategias terapéuticas que se espera sean eficaces y un tratamiento adecuado para tumores, que incluyen particularmente, tumores de mama, sea que involucren nodos linfáticos axilares o no, esto es, más allá de solamente cánceres de mama que presentan mejoramiento del nudo linfático axilar. Del mismo modo, los agonistas de TLR3, pueden hallar uso en cánceres de mama (y otros), que son metastásicas, recurrentes y/o refractarios. Por consiguiente, en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar un sujeto humano que tiene un tumor que comprende, células que expresan TLR3, en el cual, el método comprende administrar a dicho paciente, una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un agonista de TLR3. En una modalidad preferida, dicho paciente humano tiene un tumor sólido. En una modalidad preferida, dicho paciente humano tiene un cáncer de mama. Por lo tanto, la presente invención se refiere al uso de un agonista de TLR3, para la manufactura de un medicamento para tratar cáncer en un sujeto, en donde dicho cáncer en dicho sujeto, comprende células de cáncer que expresan un receptor TLR3. Más preferiblemente, el agonista de TLR3 es una molécula de ARN de doble hebra.

Opcionalmente, el cáncer es un cáncer metastásico. En una modalidad particular, la presente invención se refiere al uso de una molécula de ARN poli A/poli U de doble hebra, para la manufactura de un medicamento para tratar cáncer en un sujeto, en donde dicho cáncer en dicho sujeto comprende, cáncer de células que expresan un receptor de TLR3. Preferiblemente, el cáncer es un tumor sólido o un carcinoma, por ejemplo, un cáncer de mama. La presente invención también se refiere a un método para valorar la respuesta de un sujeto que tiene cáncer, a un tratamiento usando un agonista de TLR3, el método comprende, determinar si las células cancerosas en dicho sujeto, expresan un receptor de TLR3, la expresión de un receptor de TLR3, es indicativa de un sujeto que responde. Más preferiblemente, el agonista de TLR3 es una molécula de ARN de doble hebra. La presente invención además, se refiere a un método para seleccionar sujetos que tienen un cáncer, que responden a un tratamiento usando un agonista de TLR3, el método comprende determinar si las células cancerosas en dicho sujeto, expresan un receptor de TLR3, la expresión de un receptor de TLR3 es indicativa de un sujeto que responde. Más preferiblemente, el agonista de TLR3 es una molécula de ARN de doble hebra. Además, la presente invención se refiere a un método para tratar un sujeto que tiene un cáncer, el método comprende determinar si las células cancerígenas en dicho sujeto expresan un receptor de TLR3, la expresión de un receptor de TLR3 es indicativa de un sujeto que responde a un agonista de TLR3, y tratar dicho sujeto cuyas células cancerígenas expresan un receptor de TLR3 con un agonista de TLR3. Más preferiblemente, el agonista de TLR3 es una molécula de ARN de doble hebra. En una modalidad relacionada, el método para tratar un sujeto que tiene un cáncer, comprende la etapa adicional de remover quirúrgicamente una porción del cáncer antes de tratar dicho sujeto con un agonista de TLR3. En aún otra modalidad, el método comprende la etapa adicional de tratar dicho paciente con radioterapia en combinación con un agonista de TLR3. En otra modalidad, la invención proporciona un método para tratar un sujeto que tiene cáncer, que comprende las etapas de: administrar a dicho sujeto, un agente que causa expresión incrementada de un receptor de TLR3 en células cancerígenas; y administrar a dicho paciente, un agonista de TLR3. En una modalidad relacionada, este método de tratamiento comprende adicionalmente, la etapa de determinar si las células cancerígenas en dicho sujeto expresan un receptor de TLR3. Esta etapa de determinación puede ser realizada subsecuente a y/o después del tratamiento con el agente que causa expresión incrementada del receptor de TLR3, pero antes de tratar dicho sujeto con un agonista de TLR3. En otra modalidad relacionada, este método comprende la etapa adicional de remover quirúrgicamente una porción del cáncer antes de administrar el agente que causa expresión incrementada de un receptor de TLR3. En aún otra modalidad, el método comprende la etapa adicional de tratar dicho paciente con radioterapia, en combinación con un agonista de TLR3. Sin embargo, los inventores han encontrado de manera sorprendente, en el seguimiento del estudio en el ensayo clínico de 300 pacientes, a pacientes que tienen un tumor sólido y se tratan con un agonista de TLR3, de conformidad con una dosis repetida y con un régimen terapéutico intravenoso que presenta mayor supervivencia que otros pacientes no tratados con el agonista de TLR3. Por consiguiente, en un aspecto, la presente invención proporciona un método para lograr supervivencia prolongada o mejorada en pacientes humanos con cáncer, el cual comprende administrar a dicho paciente, una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos, un agonista de TLR3. En una modalidad preferida, al menos un agonista de TLR3 es administrado intravenosamente. En una modalidad preferida, el cáncer es un cáncer de mama. En una modalidad más particular, el cáncer es un cáncer metastásico de mama recurrente. En otra modalidad preferida, el cáncer es un cáncer de mama de nodo positivo. En aún otra modalidad preferida, el cáncer de mama involucra 1 a 3 nodos linfáticos . Por consiguiente, en un aspecto, la presente invención proporciona un método para lograr supervivencia mejorada en pacientes humanos con cáncer o un método para tratar un sujeto que tiene cáncer, el cual comprende administrar a dicho paciente (a) al menos una primera cantidad de dosis terapéuticamente efectiva de al menos un agonista de TLR3; y (b) al menos una segunda dosis de una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos, un agonista de TLR3. En una modalidad preferida, dicha primera y segunda dosis son administradas a un intervalo de menos de un mes, menos de tres semanas, menos de dos semanas, o menos de una semana. En otra modalidad preferida, el sujeto es administrado con una dosis intravenosa de un agonista de TLR3 aproximadamente una semana por un periodo de seis semanas. En otra modalidad preferida, el agonista de TLR3 es una molécula de ARN de doble hebra. En otra modalidad preferida, el agonista de TLR3 se selecciona de poliA.poliU ó polil-poliC. En una modalidad más preferida, la dosis de poliA.poliU ó polil.poliC, es entre aproximadamente 10 m y 100 mg . En una modalidad preferida de los métodos y usos de conformidad con la presente invención, el sujeto es un sujeto humano.

Se apreciará que los métodos de tratamiento mencionados anteriormente en este documento, pueden ser usados como tratamiento profiláctico; en cualquiera de las modalidades de este documento, una cantidad profilácticamente efectiva del agonista de TLR3 pude ser intercambiada con una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3. En una modalidad preferida de los métodos y usos de conformidad con la presente invención, el cáncer es un tumor sólido o un carcinoma. Preferiblemente, el tumor sólido se selecciona de cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer renal, melanoma maligno invasivo o metastásico, tumor cerebral, cáncer de vejiga y cáncer hepático. Los carcinomas incluyen carcinoma de vejiga, mama, colon, riñon, higado, pulmón, ovario, páncreas, estómago, cerviz, tiroides o piel, que incluyen carcinoma de células escamosas. En una modalidad más preferida, el tumor sólido es un cáncer de mama. Sin embargo, la presente invención también contempla tumores hematopoyéticos tales como leucemia, leucemia linfocitica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkín, linfoma no de Hodgkín, linfoma de células pilosas, linfoma de Burkett, leucemias mielogenosas agudas y crónicas y leucemia promielocitica . La presente invención también es relevante para el tratamiento de metástasis.

En una modalidad preferida, la expresión de un receptor de TLR3 en dicha células cancerígenas es determinada usando un ligando especifico de TLR3.

Preferiblemente, el ligando es un anticuerpo, o un fragmento o derivado del mismo. En una modalidad alternativa, la expresión de un receptor de TLR3 en dicha célula cancerígena, se determina usando un cebador o sonda especifico de TLR3. Preferiblemente, la expresión de un receptor de TLR3 en dicha célula cancerígena, se determina in vitro o ex vivo. Sin embargo, la determinación in vivo, también está abarcada por la presente invención. En una modalidad preferida de los métodos y usos de conformidad con la presente invención, la molécula de ARN de doble hebra, es una molécula de poliA/poliU ("poliAU") . En otra modalidad preferida de los métodos y usos de conformidad con la presente invención, la molécula de ARN de doble hebra es una molécula de polil/poliC. La presente invención además, se refiere a un kit para seleccionar sujetos que responden a un tratamiento usando un agonista de TLR3, más preferiblemente, una molécula de ARN de doble hebra, el kit comprende reactivos para determinar la expresión de un receptor de TLR3 en una célula cancerígena en una muestra. En aún otro aspecto, la invención se refiere a composiciones de materia y métodos de selección y terapéuticos que toman ventaja de la presencia de TLR3 en una superficie de células cancerígenas. En una modalidad, la invención proporciona un complejo que comprende un agente que se enlaza a TLR3 en asociación con un agente citotóxico o tumoricida. En otra modalidad, la invención proporciona un método para tratar un sujeto con un cáncer, caracterizado por la presencia de TLR3 en una superficie de células cancerígenas, que comprende la etapa de administrar a dicho paciente, tal complejo. En otra modalidad, la invención proporciona un método para determinar si un compuesto de prueba es empleado para el tratamiento de cáncer, dicho método comprende la etapa de determinar si dicho compuesto de prueba es un agonista de TLR3. En una modalidad preferida, el método para determinar si un compuesto de prueba es empleado para el tratamiento de cáncer, comprende las etapas de: contactar dicho compuesto de prueba con una célula cancerígena, caracterizado por la presencia de TLR3 en su superficie celular; y determinar si dicho compuesto de prueba induce un efecto biológico mediado por TLR3. Tal método es empleado para seleccionar proteinas, moléculas pequeñas, ácidos nucleicos y otras biomoléculas .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 ilustra la expresión de TLR3 por tumor primario. El TLR3 es sobre expresado por células tumorales en 10% de las muestras (n=8) . La Figura 2 ilustra supervivencia de pacientes con tumores de TLR3 (figura 2) o con tumores TLR3+ (figura 2b), de conformidad con un tratamiento con placebo (observación) o con ARNds .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Un procedimiento a base de marcador para identificación y caracterización de tumor, promete diagnóstico mejorado y confiabilidad de pronóstico. Tipicamente, el diagnóstico de cáncer de mama y otros tipos de cáncer, requieren pruebas histopatológicas de la presencia del tumor. Además del diagnóstico, las examinaciones histopatológicas también proporcionan información acerca del pronóstico y selección de regímenes de tratamiento. El pronóstico puede también ser establecido basado en los parámetros clínicos tales como tamaño de tumor, grado de tumor, edad del paciente, y metástasis de nodo linfático. Con los regímenes de fármaco convencionales disponibles y potentes, asi como también el advenimiento de procedimientos de nueva terapia que dirigen trayectorias biológicas especificas, la determinación de tratamiento óptimo de un cáncer primario, está llegando a ser incrementadamente compleja. Sin embargo, el resultado de un tratamiento de un paciente con cáncer es a menudo impredecible . Solamente una porción de los pacientes responde a un cierto tipo de tratamiento. Los pacientes que reciben un tipo especifico de tratamiento, son sometidos a un sufrimiento innecesario, puesto que reacciones adversas a menudo, se obtienen de ciertos tratamientos usados. Algunos tratamientos provocan más reacción severa del paciente que otros tratamientos. Mayormente, el efecto de un tratamiento no se muestra hasta 3-6 meses después del tratamiento. Podrá por lo tanto, ser de gran importancia si pacientes con alta probabilidad para responder, pueden ser identificados antes del comienzo del tratamiento. A la fecha, no se han identificado series de pronosticadores satisfactorios para respuesta terapéutica o pronóstico, basados en la información clínica sola, para compuestos agonistas de TLR en la terapia de cáncer. Como se describe además en este documento, los estudios descritos aqui, presentan resultados de 300 pacientes con cáncer de mama temprano, que han sido incluidos desde 1972 a 1979, en un ensayo aleatorizado que compara administración post-operativa de poliAU agonistas de TLR sin tratamiento. Cuando el TLR es investigado como un biomarcador potencial, se observa que las biopsias de tumor positivas para TLR demuestran altas relaciones de supervivencia de término largo, y presumiblemente, que esta supervivencia es en respuesta a terapia con el agonista de TLR3. Las biopsias de pacientes se tiñeron con un anticuerpo monoclonal especifico de TLR3 ("mAb") y se determinó la correlación de la expresión de TLR3 con la eficacia de poliAU, 182 muestras de tumor (91%), están disponibles de 20 pacientes incluidos en el ensayo aleatorizado. El TLR3 fue fuertemente expresado por células tumorales en 18 pacientes (10%) . La expresión de TLR3 se correlaciona con una relación de supervivencia de 20 años significantemente incrementada. Por consiguiente, en un aspecto, la presente invención proporciona un método para determinar si un paciente responderá a terapia con un agonista de TLR3. En una modalidad, la presente invención se refiere a un método para seleccionar o identificar un sujeto que tiene un tumor que responderá a un tratamiento usando un agonista de TLR3, el método comprende determinar si las células tumorales en dicho sujeto expresan un TLR3, la expresión de un receptor de TLR3 es indicativa de un sujeto respondedor. En una modalidad preferida, la expresión de TLR3 se determina usando un ensayo inmunohistoquimico, como se usa en los Ejemplos. Preferiblemente, la expresión de TLR3 se determina usando un anticuerpo que se enlaza específicamente a TLR3.

En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para caracterizar una célula o un tumor en un paciente, el método comprende: obtener o proporcionar una muestra biológica a partir del paciente, en donde dicha muestra comprende una célula de tumor o material biológico derivado a partir de este, y determinar si dicha célula expresa un TLR3. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para caracterizar una célula o un tumor en un paciente, el método comprende: obtener o proporcionar una biopsia de tumor del paciente, y determinar si dicha biopsia comprende una célula que expresa un polipéptido TLR3.

DEFINICIONES Como se usa en la especificación, "un" o "uno", puede significar uno o más. Como se usa en la(s) reivindicación (es) , cuando se usa en conjunto con la palabra "que comprende", las palabras "un" o "uno", pueden significar uno o más de uno. Como se usa en este documento "otros", pueden significar al menos un segundo o más. En donde se usa "que comprende", este puede ser preferiblemente reemplazado por "que consiste esencialmente de", más preferiblemente, por "que consiste de". Los términos "cáncer" y "tumor" como se usa en este documento, se definen como un nuevo crecimiento de células o tejidos que comprenden multiplicación no controlada y progresiva. En una modalidad especifica, después de un curso natural el cáncer es fatal . En modalidades especificas, un cáncer es invasivo, metastásico y/o anaplásico (pérdida de diferenciación y orientación de otra y a su estructura axial) . El término "cáncer de mama" como se usa en este documento, es definido como cáncer el cual se origina en la mama. En una modalidad especifica, el cáncer de mama se ha distribuido a otros órganos, tales como nodos linfáticos. En una modalidad especifica, el cáncer de mama es invasivo y puede ser metastásico. El término "invasivo" como se usa en este documento, se refiere a células las cuales tienen la capacidad para infiltrar al tejido circundante. En una modalidad especifica, la infiltración resulta en la destrucción del tejido circundante. En otra modalidad especifica, las células son células cancerígenas. En una modalidad preferida, las células son células de cáncer de mama, y el cáncer se ha distribuido fuera de un ducto en el epitelio de mama circundante. En una modalidad especifica, cáncer de mama "metastásico", está dentro del alcance de El término "metastásico", como se usa en este documento, se define como la transferencia de células de cáncer de un órgano o parte a otro no conectado directamente con éste. En una modalidad especifica, células de cáncer de mama se distribuyen a otro órgano o parte de cuerpo, tal como nodos linfáticos. "Semanalmente", permanece para "aproximadamente una semana" (significando que se hace más de un tratamiento con un intervalo de aproximadamente una semana entre tratamientos), aproximadamente aqui, preferiblemente significa +/- 1 dia (esto es, traducido en "cada 6 a 8 dias"); más preferiblemente, "semanalmente" permanece para "una vez cada 7 dias". El término "biopsia" como se usa en este documento, es definido como remoción de un tejido a partir de un órgano (por ejemplo, mama), para propósitos de examinación, tal como establecer diagnóstico. Ejemplos de tipos de biopsias incluye aplicación de succión, tal como a través de una aguja unida a una jeringa; por remoción instrumental de un fragmento de tejido; por remoción con instrumentos apropiados a través de un endoscopio; por excisión quirúrgica, tal como de la lesión completa; y similares. Como se usa en este documento, el término "adjuntivo", se usa intercambiablemente con "en combinación" o "combinatorial". Tales términos también son usados en donde uno o más agentes terapéuticos o profilácticos, afectan el tratamiento o prevención de la misma enfermedad. Para evitar duda, dos agentes usados "en combinación", pueden ser, pero no son necesariamente coadministrados . Como se usa en este documento, el término "en combinación", se refiere al uso de más de una terapia (por ejemplo, más de un agente profiláctico y/o agente terapéutico) . El uso del término "en combinación", no restringe el orden en el cual son administradas las terapias (por ejemplo, agentes profilácticos o terapéuticos), a un sujeto con cáncer. Una primera terapia puede ser administrada antes de (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas antes), concomitantemente con, o subsecuentemente a (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas después de) la administración de una segunda terapia a un sujeto con cáncer . Por "co-administración" o "co-administrando", significa que los dos agentes son administrados en juxtaposición temporal. La co-administración puede ser efectuada por los dos agentes siendo mezclados en una formulación única, o por los dos agentes siendo administrados separadamente pero simultáneamente, o separadamente y dentro de un tiempo corto del otro. Por ejemplo, en general, los dos agentes son co-administrados dentro del intervalo de tiempo de 12-72 horas. En este caso, los agentes pueden ser administrados en cualquier orden. En una modalidad preferida de la presente invención, los dos agentes son coadministrados en una formulación única, o son co-administrados simultáneamente. Como se usa en este documento, los términos "previene", "que previene" y "prevención", se refieren a la inhibición del desarrollo o comienzo de cáncer (particularmente, un cáncer de mama) , o la prevención, incidencia, comienzo, o desarrollo de uno o más síntomas de cáncer, particularmente un cáncer de mama, en un sujeto que resulta de la administración de terapia (por ejemplo, un agente terapéutico o profiláctico) , o una combinación de terapias (por ejemplo, una combinación de agentes profilácticos y/o terapéuticos) . Como se usa en este documento, el término "cantidad profilácticamente efectiva", se refiere a tal cantidad del agente profiláctico, suficiente para resultar en la prevención de la recurrencia o comienzo de cáncer o uno o más síntomas del mismo.

Como se usa en este documento, un "protocolo", incluye regímenes de dosificación y programas de dosificación. Los protocolos en este documento, son métodos de uso e incluyen, protocolos terapéuticos y profilácticos. Como se usa en este documento, "protocolo profiláctico", se refiere a un régimen para dosificación y sincronización de la administración de uno o más agentes profilácticos . Como se usa en este documento, el término "protocolo terapéutico", se refiere a un régimen para dosificación y sincronización de la administración de uno o más agentes terapéuticos. Como se usa en este documento, la frase "efectos colaterales", abarca efectos adversos e indeseados de una terapia (por ejemplo, agente profiláctico y/o terapéutico) . Efectos adversos son siempre indeseados, pero los efectos indeseados no son necesariamente adversos. Un efecto adverso a partir de un agente profiláctico o terapéutico, podria ser perjudicial o incómodo o arriesgado. Como se usa en este documento, el término "moléculas pequeñas", incluyen pero no se limitan a, compuestos orgánicos o inorgánicos (es decir, que incluyen compuestos hetero-orgánicos y organometálicos), que tiene un peso molecular de menos de 1,000 gramos por mole. En una modalidad preferida, "moléculas pequeñas" abarcan compuestos orgánicos o inorgánicos que tienen un peso molecular de menos de 750 gramos por mole. En aún otra modalidad especifica, "moléculas pequeñas", abarcan compuestos orgánicos o inorgánicos que tienen un peso molecular de menos de 500 gramos por mole. Sales, esteres y otras formas farmacéuticamente aceptables de tales compuestos, también están abarcadas. Como se usa en este documento, los términos "sujeto" y "paciente", son usados intercambiablemente. Como se usa en este documento, los términos "sujeto" y "sujetos", se refieren a un animal, preferiblemente un mamífero que incluye, pero no se limita a, un no primate (por ejemplo, una vaca, cerdo, caballo, gato, perro, rata y ratón) y un primate (por ejemplo, un mono tal como un mono cinomolgus y un humano) , y más preferiblemente, un humano. En una modalidad especifica, el sujeto es un humano con cáncer. En una modalidad preferida, el sujeto es un humano con un tumor sólido, por ejemplo, un cáncer de mama. Como se usa en este documento, el término "sinergistico", se refiere a una combinación de terapias (por ejemplo, agentes profilácticos o terapéuticos), las cuales son más efectivas que los efectos aditivos de cualquiera de dos o más agentes únicos. Por ejemplo, un efecto sinergistico de una combinación de terapias (por ejemplo, agentes profilácticos o terapéuticos), permite el uso de dosificaciones inferiores de uno o más de los agentes y/o menos administración frecuente de dichas terapias, a un sujeto con cáncer. La capacidad para utilizar dosificaciones inferiores de terapias (por ejemplo, agentes profilácticos o terapéuticos), y/o administrar dichas terapias menos frecuentemente, reduce la toxicidad asociada con la administración de dichas terapias, en un sujeto sin reducir la eficacia de dichas terapias en la prevención o tratamiento de cáncer. Además, un efecto sinergistico puede resultar en la eficacia mejorada de terapias en la prevención o tratamiento de cáncer. Finalmente, el efecto sinergistico de una combinación de terapias, puede evitar o reducir los efectos colaterales adversos o indeseados, asociados con el uso de cualquier terapia única. Como se usa en este documento, los términos "agente terapéutico" y "agentes terapéuticos", se refieren a cualquier agente (s) los cuales pueden ser usados en el tratamiento, manejo o alivio de cáncer o uno o más síntomas de los mismos. Preferiblemente, un agente terapéutico es un agente el cual se conoce por ser empleado para, o ha sido o está actualmente siendo usado para el tratamiento, manejo o alivio de cáncer o uno o más síntomas del mismo. Un agente terapéutico único puede ser caracterizado como dos o más diferentes tipos de agentes basados en uno o más efectos que el agente tiene in vivo y/o in vitro. Como se usa en este documento, el término "cantidad efectiva", se refiere a la cantidad de una terapia (por ejemplo, un agente profiláctico o terapéutico) , la cual es suficiente para reducir o aliviar la severidad, duración y/o progreso de cáncer, o uno o más síntomas del mismo, aliviar uno o más síntomas de cáncer, prevenir el avance de cáncer, ocasionar regresión de cáncer, prevenir la incidencia, desarrollo o comienzo de cáncer o uno o más síntomas del mismo, o intensificar o mejorar el (los) efecto (s) terapéuticos o profilácticos de otra terapia (por ejemplo, agente profiláctico o terapéutico) . Como se usa en este documento, el término "cantidad terapéuticamente efectiva", se refiere a tal cantidad de una terapia (por ejemplo, un agente terapéutico) , la cual es suficiente para destruir, modificar, controlar o remover tejido de cáncer metastásico o regional, primario, aliviar cáncer o uno o más síntomas del mismo, o prevenir el avance del cáncer, ocasionar regresión del cáncer, o intensificar o mejorar el (los) efecto (s) terapéutico ( s) de otra terapia (por ejemplo, un agente terapéutico) . Una cantidad terapéuticamente efectiva puede referirse a la cantidad de una terapia (por ejemplo, un agente terapéutico) , suficiente para retardar o minimizar la distribución del cáncer. Una cantidad terapéuticamente efectiva también puede referirse a la cantidad de una terapia (por ejemplo, un agente terapéutico) , que proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento o manejo de cáncer. Además, una cantidad terapéuticamente efectiva con respecto a un agente terapéutico de la invención, significa que la cantidad de agente terapéutico solo, o en combinación con otras terapias, proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento o manejo de cáncer. Usado en conjunto con una cantidad de un agonista de TLR3, el término puede abarcar una cantidad que mejora la terapia total, reduce o evita efectos indeseados, o mejora la eficacia terapéutica de o sinergiza con otra terapia (por ejemplo, un agente terapéutico) . Como se usa en este documento, los términos "tratar" y "tratamiento" y "que trata", se refieren a la reducción o alivio del progreso, severidad y/o duración de cáncer, particularmente un tumor sólido, por ejemplo, un cáncer de mama, o uno o más síntomas del mismo, que resultan de la administración de una o más terapias (por ejemplo, uno o más agentes profilácticos y/o terapéuticos) . Como se usa en este documento, los términos "terapias" y "terapia", pueden referirse a cualquier protocolo ( s) , método (s) y/o agente (s) que pueden ser usados en la prevención, tratamiento, manejo o alivio de cáncer o uno o más síntomas del mismo. En ciertas modalidades, los términos "terapia" y "terapias", se refieren a quimioterapia de cáncer, terapia por radiación, terapia hormonal, terapia biológica, y/o otras terapias empleadas para la prevención, manejo o tratamiento de cáncer conocidos por un oncologista experto en la técnica. Como se usa en este documento, los términos "manejar", "que maneja", y "manejo", se refieren a los efectos benéficos que un sujeto deriva de una terapia (por ejemplo, un agente terapéutico o profiláctico), el cual no resulta en una cura de la enfermedad. En ciertas modalidades, un sujeto es administrado con una o más terapias (por ejemplo, agentes profilácticos o terapéuticos), para "manejar" una enfermedad para prevenir el progreso o empeoramiento de la enfermedad. El término "agonista de TLR3", se refiere a un agente de afinidad (es decir, una molécula que se enlaza a una molécula objetivo), capaz de activar un polipéptido de TLR3 para inducir una respuesta mediada por el receptor parcial o completa. Por ejemplo, un agonista de TLR3 induce una señalización mediada por TLR3, ya sea directamente o indirectamente. Un agonista de TLR3, como se usa en este documento puede, pero no se requiere, enlazar un polipéptido de TLR3, y puede o no puede interactuar directamente con el polipéptido de TLR3. Un "agonista de nucleótido" y "ácido nucleico" se refiere a la situación en donde el agente de afinidad comprende o consiste de nucleótidos y/o ácido (s) nucleico(s). Un "agonista de anticuerpo", se refiere a la situación en donde el agente de afinidad es un anticuerpo. Los términos "polinucleótido" y "ácido nucleico", usados intercambiablemente en este documento, se refieren a formas poliméricas de nucleótidos de cualquier longitud, ya sea ribonucleótidos o desoxinucleótidos. De este modo, estos términos incluyen pero no se limitan a, ADN o ARN de una sola, doble o hebras múltiples, ADN genómico, ADNc, híbridos de ADN-ARN, o un polímero que comprende bases de purina y pirimidina u otras bases de nucleótidos naturales, químicamente o bioquímicamente modificadas, no naturales o derivatizadas. Estos términos además incluyen, pero no se limitan a, ARNm o ADNc que comprenden secuencias intrónicas (véase por ejemplo, Niwa et al., (1999) Cell 99(7) : 691-702). La estructura del polinucleótido puede comprender grupos de azúcares y fosfato (como se pueden encontrar tipicamente en el ARN o ADN) , o grupos de azúcar o fosfato modificados o sustituidos. Alternativamente, la estructura del polinucleótido puede comprender un polímero de subunidades sintéticas tales como fosforamidatos y de este modo, pueden ser un oligodesoxinucleósido fosforamidato u oligómero de fosforamidato-fosfodiéster mezclado. Peyrottes et al. (1996) Nucí. Acids Res. 24:1841-1848; Chaturvedi et al. (1996) Nucí. Acids Res. 24:23181 0 2323. Un polinucleótido puede comprender nucleótidos modificados, tales como nucleótidos metilados y análogos de nucleótidos, uracilo u otros azúcares, y grupos enlazantes tales como fluororibosa y tioato, y nucleótidos ramificados. La secuencia de nucleótidos puede ser interrumpida por componente no nucleótidos. Un polinucleótido puede además, ser modificado después de la polimerización, tal como por conjugación con un componente etiquetado. Otros tipos de modificaciones incluidas en esta definición son cubiertas, sustitución de uno o más de los nucleótidos que se originan naturalmente con un análogo, e introducción de medios para unir el polinucleótido a proteinas, iones metálicos, componentes etiquetados, otros polinucleótidos, o un soporte sólido. Como se usa en este documento, el término "célula hospedera", incluye una célula sujeta particular, transfectada con una molécula de ácido nucleico y la progenie o progenie potencial de dicha célula. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias, es una función del número de posiciones idénticas portadas por las secuencias (es decir, el número de % de identidad de posiciones traslapantes idénticas/número total de posiciones x 100%) . En una modalidad, las dos secuencias son de la misma longitud. La determinación del porcentaje de identidad entre las dos secuencias, también puede ser realizada usando un algoritmo matemático. Un ejemplo preferido, no limitante, de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de dos secuencias, es el algoritmo de Karlin and Altschul, 1990, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264-2268, modificado como en Karlin and Altschul, 1993, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873. Tal algoritmo se incorpora en los programas NBLAST y XBLAST de Altshul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403. Las búsquedas de nucleótidos por BLAST, pueden realizarse con los parámetros de programa de nucleótido NBLAST, establecidos por ejemplo, para el registro = 100, longitud de palabras = 12, para obtener secuencias de nucleótidos usadas. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias, se puede determinar usando técnicas similares a aquellas descritas anteriormente, con o sin permitir aperturas. Calculando el porcentaje de identidad, se cuentan tipicamente solamente apareamientos exactos. Como se usa en este documento, el término "hibridiza bajo condiciones rigurosas", describe condiciones para hibridización y lavado bajo las cuales, las secuencias de nucleótidos de al menos 30% (preferiblemente, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ó 98%) idénticas entre si, tipicamente permanecen hibridizadas entre si. Tales condiciones rigurosas se conocen por aquellos expertos en la técnica y se pueden encontrar en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons., N. Y. (1989). En un ejemplo no limitante, las condiciones de hibridación rigurosas, son hibridación a 6X de cloruro de sodio/citrato de sodio ("SSC") a aproximadamente 45°C, seguida por uno o más lavados en 0. IX SSC, 0.2% de SDS a aproximadamente 68°C. En un ejemplo no limitante, preferido, las condiciones de hibridación rigurosas son hibridación en 6X SSC a aproximadamente 45°C, seguidas por uno o más lavados en 0.2X SSC, SDS al 0.1% a 50-65°C (es decir, uno o más lavados a 50°C, 55°C, 60°C ó 65°C) . Se entiende que los ácidos nucleicos de la invención, no incluyen moléculas de ácido nucleico que hibridizan bajo estas condiciones solamente a secuencias de nucleótidos que consisten de solamente nucleótidos A o T. En una modalidad particular, las condiciones de hibridización rigurosas típicas incluyen, temperaturas arriba de 30°C, preferiblemente arriba de 35°C, más preferiblemente, en exceso de 42°C, y/o salinidad de menos de aproximadamente 500 mM, preferiblemente menos de 200 mM . Las condiciones de hibridación pueden ser ajustadas por la persona experta modificando la temperatura, salinidad y/o la concentración de otros reactivos tales como SDS, SSC, etc.

TLR3 "TLR3", "proteina de TLR3" y "receptor de TLR3", usados intercambiablemente, son usados en este documento para referirse a Receptor 3 Similar a Toll, un elemento de la familia del receptor similar a Toll (TLR) . Su secuencia de aminoácido se muestra en la SEC ID NO. 2 (Número de acceso NCBl NP_003256, descripción la cual es incorporada en este documento por referencia) . El receptor 3 similar a Toll, es un elemento de la familia del receptor similar a Toll (TLR) , el cual juega un papel fundamental en el reconocimiento y activación de patógenos de inmunidad innata. Los TLR son altamente conservados a partir de Drosophila a humanos, y portan similitudes funcionales y estructurales. Reconocen patrones moleculares asociados con el patógeno (PAMP), que se expresan en agentes infecciosos, y median la producción de citocinas necesarias para el desarrollo de inmunidad efectiva. Los varios TLR exhiben diferentes patrones de expresión. Este receptor está más abundantemente expresado en la placenta y el páncreas, y se restringe a la subpoblación dendritica de los leucocitos. Reconoce el ARNds asociado con la infección viral, e induce la activación de NF-KB y la producción de interferones tipo I. Puede asi, jugar un papel en la defensa hospedera contra virus. La secuencia de ARNm de TLR3, es descrita en el número de acceso NCBl NM_003265, la secuencia de la cual se muestra en la SEC ID NO .1. El TLR3 es descrito en el documento WO 98/50547 (descripción del cual se incorpora en este documento por referencia) . Como se usa en la presente solicitud, el término "gen de TLR3", designa el gen del receptor 3 similar a Toll, asi como también variantes, análogos y fragmentos de los mismos, que incluyen alelos de los mismos (por ejemplo, mutaciones de linea germinal) . Tales variantes incluyen, por ejemplo, variantes que se originan naturalmente debido a variaciones alélicas entre individuos (por ejemplo, polimorfismos), formas de empalme alternativas, etc. Las variantes son preferiblemente sustancialmente homologas a la secuencia NM_003265, es decir, exhiben una identidad de secuencia de nucleótido de al menos, aproximadamente 65%, tipicamente al menos aproximadamente 75%, preferiblemente, al menos aproximadamente 85%, más preferiblemente, al menos aproximadamente 95%, con la secuencia NM 003265. Un ejemplo particular de un gen de TLR3, comprende la secuencia NM 003265. Variantes y análogos de un gen de TLR3 también incluyen secuencias de ácido nucleico, las cuales hibridizan a una secuencia como se define anteriormente (o una hebra complementaria de la misma), bajo condiciones de hibridización rigurosas. Los polimorfismos genéticos de la secuencia de ADN de TLR3 humana, se conocen, por ejemplo, de variaciones alélicas en la región citoplásmica del gen TLR3 y en la secuencia al 5' inmediata del gen de TLR3 (véase Priel et al. (2005) Tissue Antigens 66(2) :125, descripción la cual se incorpora en este documento por referencia) , por ejemplo, el polimorfismo C/T en la posición 2593, el polimorfismo C/A en la posición 2642 y el polimorfismo A/G en la posición 2690 en el gen TLR3. Un fragmento de un gen de TLR3 designa cualquier porción de al menos, aproximadamente 8 nucleótidos consecutivos de una secuencia como se describe anteriormente, preferiblemente al menos, aproximadamente 15, más preferiblemente al menos aproximadamente 20 nucleótidos, preferiblemente además, de al menos 30 nucleótidos. Los fragmentos incluyen todos, longitudes de nucleótidos posibles de entre 8 y 100 nucleótidos, preferiblemente entre 15 y 100, más preferiblemente, entre 20 y 100. El término "gen", debe ser construido para incluir cualquier tipo de ácido nucleico codificante, que incluye ADN genómico (ADNg) , ADN complementario (ADNc) , ADN sintético o semi-sintético, asi como también cualquier forma de ARN correspondiente. El término gen particularmente incluye ácidos nucleicos recombinantes que codifican a TLR3, es decir, moléculas de ácido nucleico que no se originan naturalmente, creadas artificialmente, por ejemplo, por secuencias de montaje, corte, ligación, o amplificación. Un gen de TLR3 es tipicamente de doble hebra, aunque otras formas pueden ser contempladas, tales como de una sola hebra. Los genes de TLR3, se pueden obtener de varias fuentes y de conformidad con varias técnicas conocidas en el arte, tal como por selección de bibliotecas de ADN o amplificación de varias fuentes naturales. Los ácidos nucleicos recombinantes pueden ser preparados por técnicas convencionales, que incluyen, síntesis química, diseño por ingeniería genética, técnicas enzimáticas o una combinación de los mismos. Un "polipéptido TLR3", designa cualquier molécula que comprende una extensión de al menos, seis aminoácidos consecutivos, presentes en una proteina de TLR3. Un polipéptido de TLR3 puede ser codificado por un fragmento de un gen de TLR3, puede ser sintéticamente producido o puede ser producido a través de digestión proteolitica de una proteina de TLR3 u otro polipéptido de TLR3. Un polipéptido de TLR3 puede ser modificado, tal como por glicosilaciones y/o acetilaciones y/o reacción química o acoplamiento, y puede contener uno o varios aminoácidos no naturales o sintéticos. Un ejemplo especifico de un polipéptido de TLR3 comprende, toda o una parte de la secuencia de NP_003256.

Agonistas de TLR3 1. Ensayo de Actividad Agonista de TLR3 Un agonista de TLR3 de conformidad con la presente invención, puede ser seleccionado de cualquier agente adecuado que activa el TLR3 y/o la cascada subsecuente de eventos químicos asociados con la activación in vivo de TLR3. Se conocen en la técnica, ensayos para detectar la actividad agonista de TLR3 e incluyen, por ejemplo, la detección de producción de luciferasa (luc) de un plásmido reportero de NF-?B, o la inducción de IL-8 endógeno (K. Kariko et al., J. Immunol . 2004, 172:6545-49, descripción la cual se incorpora en este documento por referencia) . Ensayos para detectar agonismo de TLR3 de compuestos de prueba, también son descritos por ejemplo, en las Publicaciones PCT Nos. WO 03/31573, WO 04/053057, WO 04/053452 y WO 04/094671, descripciones de cada una de las cuales están incorporadas en este documento por referencia. Con respecto al ensayo particular empleado, se puede identificar un compuesto como un agonista de TLR3 si realizando el ensayo con tal compuesto, resulta en al menos, un incremento de umbral de alguna actividad biológica conocida por ser mediada por TLR3. Contrariamente, se puede identificar un compuesto por no actuar como un agonista de TLR3 si, cuando se usa para realizar cualquier ensayo diseñado para detectar la actividad biológica mediada por TLR3, el compuesto falla al provocar un incremento de umbral en la actividad biológica. A menos que se indique de otro modo, un incremento en la actividad biológica, se refiere a un incremento en la misma actividad biológica sobre aquel observado en un control apropiado. Un ensayo puede o no puede ser realizado en conjunto con el control apropiado. Con experiencia, un experto en la técnica puede desarrollar suficiente familiaridad con un ensayo particular (por ejemplo, el intervalo de valores observados en un control apropiado bajo condiciones de ensayo especificas), que realizando un control no siempre puede ser necesario determinar el agonismo de TLR3 del compuesto en un ensayo particular. El incremento de umbral preciso de la actividad biológica mediada por TLR3 para determinar si un compuesto particular es o no es un agonista de TLR3 en un ensayo dado, puede variar de conformidad con factores conocidos en la técnica, e incluyen pero no se limitan a, la actividad biológica observada como el punto final del ensayo, el método usado para medir o detectar el punto final del ensayo, la relación de señal a ruido del ensayo, la precisión del ensayo, y si el mismo ensayo está siendo usado para determinar el agonismo de un compuesto de TLR múltiple. Por consiguiente, no es práctico exponer en general, el incremento de umbral de la actividad biológica mediada por TLR3 requerida para identificar un compuesto por ser un agonista o no agonista de TLR3 para todos los ensayos posibles. Aquellos de habilidad ordinaria en la técnica, sin embargo, pueden fácilmente determinar el umbral apropiado con consideración debida de tales factores. Sin embargo, con respecto al ensayo particular empleado, un compuesto puede ser identificado en general, como un agonista de TLR3 si realizar el ensayo con un compuesto resulta en al menos, un incremento de umbral de alguna actividad biológica mediada por TLR3. Ensayos que emplean células HEK293 transfectadas con el gen estructural de TLR3 que se puede expresar, pueden usar un umbral de, por ejemplo, al menos un incremento de tres veces en la actividad biológica mediada por TLR3 (por ejemplo, activación de NF-KB) , cuando el compuesto se proporciona a una concentración de, por ejemplo, desde aproximadamente 1 µM hasta aproximadamente 10 µM, para identificar un compuesto como un agonista del TLR3 transfectado en una célula. Sin embargo, diferentes umbrales y/o diferentes intervalos de concentraciones pueden ser adecuados en ciertas circunstancias. También, diferentes umbrales pueden ser apropiados para diferentes ensayos. 2. Anticuerpos Agonísticos de TLR3. Un agonista de TLR3 de esta invención, puede ser un anticuerpo agonístico, un fragmento agonístico de tales anticuerpos, una versión quimérica de tales anticuerpos o fragmento, u otro derivado de anticuerpo activo. Los anticuerpos agonistas de TLR3 empleados en esta invención, pueden ser producidos por cualquiera de una variedad de técnicas conocidas en el arte. Tipicamente, se producen por inmunización de un animal no humano, preferiblemente, un ratón, con un inmunógeno que comprende una proteina de TLR3 o péptido de TLR3. El inmunógeno puede comprender las células tumorales que expresan el TLR3 intacto, membranas celulares de células que expresan TLR3, secuencia de longitud completa de la proteina de TLR3 (producida recombinantemente o aislada de una fuente natural), o un fragmento o derivado del mismo, tipicamente un fragmento inmunogénico, es decir, una porción del polipéptido que comprende un epitope expuesto en la superficie de células que expresan TLR3. Un fragmento inmunogénico tipicamente contiene al menos, 7 aminoácidos consecutivos presentes en la secuencia de aminoácido de TLR3 de longitud completa, aún más preferiblemente, al menos, 10 aminoácidos consecutivos del mismo. La secuencia de aminoácido del fragmento, es esencialmente derivada del dominio extracelular de la proteina de TLR3. En modalidades preferidas, la proteina o péptido de TLR3 usada para generar anticuerpos, es una proteina o péptido de TLR3 humano. En una modalidad más preferida, el inmunógeno comprende un polipéptido de TLR3 humano tipo nativo en una membrana lipida, tipicamente derivada de una fracción de membrana de una célula que expresa TLR-3. En una modalidad especifica, el inmunógeno comprende células de tumor que expresan TLR3 completo, intacto u opcionalmente químicamente o físicamente lisado. La preparación de anticuerpos monoclonales o policlonales es bien conocida en la técnica, y cualquiera de un número grande de técnicas disponibles se puede usar (véase por ejemplo, Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4:72 (1983); Colé et al., pp . 77-96 en Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy (1985)) . La etapa de inmunizar un mamífero no humano con un inmunógeno, se puede llevar a cabo en cualquier manera bien conocida en la técnica (véase por ejemplo, E. Harlow and D. Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual . Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1988)) . En general, el inmunógeno es suspendido o disuelto en un amortiguador, opcionalmente con un adyuvante, tal como adyuvante Freund completo. Los métodos para determinar la cantidad de inmunógeno, tipos de amortiguadores y cantidades de adyuvantes, son bien conocidos por aquellos de habilidad en la técnica y no son limitantes en cualquier forma, de la presente invención. De manera similar, la ubicación y frecuencia de suficiente inmunización para estimular la producción de anticuerpos, también es bien conocida en la técnica. En un protocolo de inmunización tipico, los animales no humanos son inyectados intraperitonealmente con antigeno al dia 1 y nuevamente aproximadamente una semana después. Esto es seguido por inyecciones repetidas del antigeno alrededor del dia 20, opcionalmente con un adyuvante tal como adyuvante incompleto Freund. Las inyecciones repetidas son realizadas intravenosamente y pueden ser repetidas por varios dias consecutivos. Esto es seguido por una inyección de refuerzo al dia 40, ya sea intravenosamente o intraperitonealmente, tipicamente sin adyuvante. Este protocolo resulta en la producción de células B que producen anticuerpo especifico del antigeno después de aproximadamente 40 dias. Otros protocolos también se pueden utilizar tan pronto como resulten en la producción de células B que expresan un anticuerpo dirigido al antigeno usado en inmunización. En otra modalidad, los linfocitos de un mamífero no humano no inmunizados, son aislados, se hacen crecer in vitro y después se exponen al inmunógeno en el cultivo celular. Los linfocitos son entonces cultivados y se lleva a cabo la etapa de fusión descrita posteriormente. Para anticuerpos monoclonales, los cuales son preferidos para producir anticuerpos agonísticos para uso en la presente invención, la siguiente etapa es el aislamiento de células, por ejemplo, linfocitos, esplenocitos, o células B, a partir del mamífero no humano inmunizado y la subsecuente fusión de aquellos esplenocitos, o células B, o linfocitos, con una célula inmortalizada para formar un hibridoma que produce anticuerpo. El aislamiento de esplenocitos, por ejemplo, de un mamífero no humano, es bien conocido en la técnica y, por ejemplo, involucra remover el bazo de un mamífero no humano anestesiado, cortar en piezas pequeñas y apretar los esplenocitos de la cápsula esplénica y a través de una malla de nylon de un tamiz celular en un amortiguador apropiado para producir una suspensión celular única. Las células son lavadas, centrifugadas y resuspendidas en un amortiguador que somete a lisis cualquier célula roja de la sangre. La solución es nuevamente centrifugada y los linfocitos restantes en la pelotilla, son finalmente suspendidos nuevamente en el amortiguador fresco. Una vez aislados y presentes en una suspensión celular única, las células que producen anticuerpos son fusionadas a una linea celular inmortal. Esta es tipicamente una linea de células de mieloma de ratón, aunque muchas otras lineas celulares inmortales empleadas para crear hibridomas, se conocen en la técnica. Las lineas de mieloma murina preferidas, incluyen pero no se limitan a, aquellas derivadas de tumores de ratón MOPC-21 y MPC-11, disponibles del Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California U.S.A., células X63 Ag9653 y SP-2, disponibles del American Type Culture Collection, Rockville, Maryland U.S.A. La fusión se efectúa usando polietilenglicol o similares. Los hibridomas resultantes entonces se hacen crecer en medio selectivo que contiene una o más sustancias que inhiben el crecimiento o supervivencia de las células de mieloma parentales, no fusionadas. Por ejemplo, si las células de mieloma parentales carecen de la enzima hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT ó HPRT) , el medio de cultivo para los hibridomas tipicamente incluirá hipoxantina, aminopterina y timidina (medio HAT), en el cual, las sustancias previenen el crecimiento de células deficientes de HGPRT. Los hibridomas se pueden hacer crecer en una capa alimentadora de macrófagos. Los macrófagos son preferiblemente de camadas de mamífero no humano usadas para aislar esplenocitos y son tipicamente cebados con adyuvante Freund incompleto o similares, varios dias antes de plaquear los hibridomas. Los métodos de fusión se describen, por ejemplo, en (Goding, "Monoclonal Antibodies: Principies and Practice", pp . 59-103 (Academic Press, 1986) ) , descripción la cual se incorpora en este documento por referencia. Las células se dejan crecer en el medio de selección por suficiente tiempo para la formación de colonias y producción de anticuerpos. Esto es usualmente entre 7 y 14 dias. Los sobrenadantes de las colonias de hibridoma son entonces sometidos a ensayo para la producción de anticuerpos que activan específicamente la proteina TLR3. Las cavidades positivas para la producción de anticuerpos deseados son examinadas para determinar si una o más colonias distintas están presentes. Sin más de una colonia está presente, las células pueden ser clonadas nuevamente y se hacen crecer para asegurar que solamente una célula única de origen a la colonia que produce el anticuerpo deseado. Las células positivas con una colonia aparente única, son tipicamente clonadas nuevamente y sometidas a ensayo nuevamente para asegurar que solamente un anticuerpo monoclonal sea detectado y producido. Los hibridomas que son confirmados por estar produciendo un anticuerpo monoclonal agonístico de TLR3, entonces se hacen crecer en grandes cantidades en un medio apropiado, tal como DMEM o RPMI-1640. Alternativamente, las células de hibridoma se pueden hacer crecer in vivo como tumores de ascitos en un animal. Después de suficiente crecimiento para producir el anticuerpo monoclonal deseado, el medio de crecimiento que contiene el anticuerpo monoclonal (o el fluido de ascitos), es separado lejos de la célula y el anticuerpo monoclonal presente en este, es purificado. La purificación es tipicamente lograda por electrofóresis en gel, diálisis, cromatografía usando proteina A o Sefarosa de proteina G, o un Ig anti-ratón ligado a un soporte sólido tal como agarosa o perlillas de Sefarosa (todas descritas en por ejemplo, Antibody Purification Handbook, Amersham Biosciences, publicación No. 18-1037-46, Edición AC, descripción de la cual se incorpora en este documento por referencia) . El anticuerpo unido es tipicamente eluido de columnas de proteina A/proteina G, usando amortiguadores de pH bajo (amortiguadores de glicina o acetato de pH 3.0 o menos), con neutralización inmediata de fracciones que contienen anticuerpo. Estas fracciones son combinadas, dializadas y concentradas como sean necesarias. En ciertas modalidades, el ADN que codifica un anticuerpo que agoniza con TLR3, es aislado del hibridoma y colocado en un vector de expresión apropiado para transfección en un hospedero apropiado. El hospedero es entonces usado para la producción recombinante del anticuerpo, variantes del mismo, fragmentos activos del mismo, o anticuerpos humanizados o quiméricos que comprenden la porción de reconocimiento de antigeno del anticuerpo . El ADN que codifica los anticuerpos monoclonales de la invención, puede ser fácilmente aislado y secuenciado usando procedimientos convencionales (por ejemplo, usando sondas de oligonucleótidos que son capaces de enlazarse específicamente a genes que codifican las cadenas pesada y ligera de anticuerpos de murina) . Una vez aislado, el ADN puede ser colocado en vectores de expresión, los cuales son entonces transfectados en células hospederas tales como células E. coli, células COS de simio, células de ovario de Hámster Chino (CHO) , o células de mieloma que no producen de otro modo, proteina de inmunoglobulina, para obtener la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células hospederas recombinantes. La expresión recombinante en bacterias de ADN que codifican el anticuerpo, es bien conocida en la técnica (véase, por ejemplo, Skerra et al. (1993) Curr. Op . Immunol . 5:256; y Pluckthun (1992) Immunol . Revs . 130:151. Los anticuerpos pueden también ser producidos por selección de bibliotecas combinatoriales de inmunoglobulinas, como se describe por ejemplo, en Ward et al. (1989) Nature 341:544. Los anticuerpos agonistas de TLR3, pueden ser anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpo o derivados. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen, fragmentos Fab, Fab' , Fab'-SH, F(ab')2, y Fv; diacuerpos; moléculas Fv de cadena única (scFv) ; péptidos de cadena única que contienen solamente un dominio variable de cadena ligera, o un fragmento del mismo que contiene las tres CDR del dominio variable de cadena ligera, sin una porción de cadena pesada asociada; polipéptidos de cadena única que contienen solamente una región variable de cadena pesada, o un fragmento de la misma que contiene las tres CDR de la región variable de cadena pesada, sin una porción de cadena ligera asociada; y anticuerpos multiespecificos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. Tales fragmentos y derivados y métodos para prepararlos, son también conocidos en la técnica. Por ejemplo, la pepsina puede ser usada para digerir un anticuerpo por debajo de los enlace de disulfuro en la región de articulación para producir el F(ab)'2, un dimero de Fab' el cual el mismo, es una cadena ligera unida a un VH-CH1 por un enlace disulfuro. El F(ab)'2, puede ser reducido bajo condiciones medias, para romper el enlace disulfuro en una región de articulación, con ello, convertir el dimero de F(ab)'2 en un monómero de Fab' . El monómero de Fab' , es esencialmente Fab con parte de al región de articulación (Véase Fundamental Immunology (pAUL ED., 3 ed. 1993)) . Mientras varios fragmentos de anticuerpo se definen en términos de la digestión de un anticuerpo intacto, uno de habilidad en la técnica, apreciará que tales fragmentos pueden ser sintetizados de novo ya sea químicamente o usando metodología de ADN recombinante. 3. Agonistas de TLR3 de Molécula Pequeña Un agonista de TLR3 de molécula pequeña, es preferiblemente una molécula orgánica de menos de aproximadamente 1500 daltons. El diseño y selección (por ejemplo, de una biblioteca combinatorial) o síntesis de un agonista de TLR3 de molécula pequeña, se puede lograr a través del uso de la estructura cristalina conocida de TLR3 (Choe et al., Science, 309, pp . 581-85 (2005), descripción de la cual se incorpora en este documento por referencia) . Este diseño o selección puede comenzar con una selección de las varias porciones las cuales llenan el (los) paquete (s) de enlace putativo en los cuales, se enlaza un agonista de ARN de doble hebra conocido. Existe un número de formas para seleccionar porciones para llenar los paquetes de enlace individuales. Estos incluyen, inspección visual de un modelo fisico o modelo por ordenador del sitio activo elucidado de la estructura cristalina y el marcado de modelos de porciones seleccionadas en varios paquetes de enlace . Se puede usar el software de Modelo que es bien conocido y disponible en la técnica. Estos incluyen, QUANTA [Molecular Simulations, Inc., Burlington, Mass., 1992], y SYBYL [Molecular Modelling Software, Tripos Associates, Inc., St. Louis, Mo . , 1992]. Esta etapa de modelación se puede seguir por minimización de energía con campos de fuerza mecánica moleculares estándares, tales como, CHARMM and AMBER. [AMBER: (S. J. Weiner, P. A. Kollman, D. A. Case, U. C. Singh, C. Ghio, G. Alagona, and P. Weiner, J. Am. Chem. Soc, 1984, 106, 765); CHARMM: (B. R. Brooks, R. E. Bruccoleri, B. D. Olafson, D. J. States, S Swaminathan, and M. Karplus, J. Comp. Chem. 1983, 4, 187) . Además, existe un número de programas de ordenador más especializados para asistir en el proceso de colocar óptimamente ya sea moléculas completas o fragmentos moleculares en los sitios de enlace de agonista de TLR3. Estos incluyen: GRID (Goodford, P. J. A Computational Procedure for Determining Energetically Favorable Binding Sites on Biologically Important Macromolecules. J. Med. Chem. 1985, 28, 849-857) . El GRID está disponible de Oxford University, Oxford, UK; MCSS (Mariner, A.; Karplus, M. Functionality Maps of Binding Sites: A Múltiple Copy Simultaneous Search Method. Proteins: Structure, Function and Genetics 1991, 11, 29-34). El MCSS está disponible de Molecular Simulations, Burlington, Mass.; and DOCK (Kuntz, I. D.; Blaney, J. M.; Oatley, S. J.; Langridge, R.; Ferrin, T. E. A Geometric Approach to Macromolecule-Ligand Interactions. J. Mol. Biol. 1982, 161, 269-288). El DOCK está disponible de la University of California, San Francisco, California. Una vez que se han seleccionado las orientaciones de enlace adecuadas, las moléculas completas pueden ser elegidas para evaluación biológica. En el caso de fragmentos moleculares, pueden ser montadas en un agonista único. Este montaje puede ser realizado conectando las varias porciones a un andamiaje central. El proceso de montaje puede, por ejemplo, realizarse por inspección visual, seguida por construcción de modelo manual, nuevamente usando software tal como Quanta o Sybyl . También se puede usar un número de otros programas, para ayudar a seleccionar las formas para conectar las varias porciones. Estas incluyen: CAVEAT (Bartlett, P. A.; Shea, G. T.; Telfer, S. J.; Waterman, S. CAVEAT: A Program to Facilítate the Structure-Derived Design of Biologically Active Molecules. In "Molecular Recognition in Chemical and Biological Problems," Special Pub., Royal Chem. Soc. 1989, 78, 182-196) . El CAVEAT está disponible de la University of California, Berkeley, California.; sistemas de Base de datos 3D, tales como MACCS-3D (MDL Information Systems, San Leandro, California) . Esta área ha sido revisada por Martin (Martin, Y. C. 3D Datábase Searching in Drug Design. J. Med. Chem. 1992, 35, 2145); and HOOK (available from Molecular Simulations, Burlington, Mass.). Además de la modelación asistida por ordenador anterior, de compuestos agonistas, un agonista de TLR3 puede ser construido "de novo", usando ya sea un sitio de enlace agonista vacio de TLR3 u opcionalmente, incluyendo algunas porciones de un agonista conocido. Tales métodos son bien conocidos en la técnica. Estos incluyen, por ejemplo: LUDÍ (Bohm, H. J. The Computer Program LUDÍ: A New Method for the De Novo Design of Enzyme Inhibitors. J. Comp. Aid. Molec. Design. 1992, 6, 61-78) . El LUDÍ está disponible de Biosym Technologies, San Diego, California.; LEGEND (Nishibata, Y., Itai, A., Tetrahedron, 1991, 47, 8985) . El LEGEND está disponible de Molecular Simulations, Burlington, Mass.; and LeapFrog (disponible de Tripos Associates, St. Louis, Mo . ) . Se puede emplear un número de técnicas comúnmente usadas para modelar fármacos (para una revisión, véase: Cohén, N. C; Blaney, J. M.; Humblet, C; Gund, P.; Barry, D. C, "Molecular Modeling Software and Methods for Medicinal Chemistry", J. Med. Chem., 1990, 33, 883). Esiste del mismo modo, un número de ejemplos en la literatura química de técnicas que pueden ser aplicadas a proyectos de diseño de fármacos específicos. Para una revisión, véase: Navia, M. A. and Murcko, M. A., Current Opinions in Structural Biology . 1992, 2, 202. Algunos ejemplos de estas aplicaciones especificas incluyen: Baldwin, J. J. et al., J. Med. Chem., 1989, 32, 2510; Appelt, K. et al., J. Med. Chem. , 1991, 34, 1925; y Ealick, S. E. et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1991, 88, 11540. Una alternativa para diseñar o modelar agonistas de TLR3 de moléculas pequeñas, es seleccionar bibliotecas químicas de moléculas pequeñas existentes para un agonista de TLR3. Tales bibliotecas pueden ser seleccionadas por cualquier ensayo agonista de TLR3 conocido en la técnica, que incluye aquellos descritos en este documento. Las bibliotecas de compuestos, pueden ser finalmente seleccionadas usando un ensayo de rendimiento superior, tal como un ensayo de competición con un agonista de TLR3 etiquetado, conocido, tal como las moléculas de ARN de doble hebra poliIrpoliC o pol?A:pol?U. Los compuestos que son positivos en el ensayo de competición, entonces son además ensayados para determinar su habilidad para activar el TLR3 y ocasionar la cascada subsecuente de eventos bioquímicos . De este modo, de conformidad con una modalidad, la invención proporciona un kit para determinar si al menos un compuesto es empleado para el tratamiento de cáncer que comprende una célula cancerígena, caracterizada por la presencia de TLR3 en su superficie celular; y un reactivo para detectar apoptósis o muerte celular. Tal kit opcionalmente comprende un reactivo que detecta agonismo de TLR3 por dicho compuesto de prueba. Este componente opcional puede ser usado para confirmar que cualquier apoptósis o muerte celular de la célula cancerígena causada por dicho compuesto de prueba, es mediado por TLR3. 4. Agonistas de TLR3 a Base de Ácido Nucleico Los agonistas de TLR3 a base de ácido nucleico empleados en esta invención, comprenden una región de ácidos ribonucleicos de doble hebra. El término "doble hebra", significa una porción del agonista en donde los ribonucleótidos son hidrógenos unidos (bases apareadas) a ribonucleótidos complementarios, para formar una estructura de doble hebra. Preferiblemente, el agonista de TLR3 a base de ácido nucleico completo, consiste de ribonucleótidos y ribonucleótidos químicamente modificados ("agonista de TLR3 de ARNds") . Más preferiblemente, al menos 50% del agonista de TLR3 de ARNds, está en una conformación de doble hebra bajo condiciones in vivo. Aún más preferido es si al menos 60%, 70%; 80%, 90%, 95% o 97% del agonista de TLR3 de ARNds, está en una conformación de doble hebra bajo condiciones in vivo. La determinación de que porcentaje del agonista de TLR3 de ARNds está en una configuración de doble hebra, se logra dividiendo el número de nucleótidos que son de base apareada por el número total de nucleótidos en una molécula. De este modo, una molécula de 21 bases apareadas que contiene 2 nucleótidos pendientes en ambos extremos al 3' y 5', podria tener 42 nucleótidos que son de base apareada y 4 nucleótidos que no son de base apareada, haciéndolo de 42/46 o 91-3% de doble hebra. De manera similar, una molécula comprendida de 21 hebras de nucleótidos que son complementarias entre si a todos los nucleótidos excepto por dos nucleótidos dentro de la mitad de cada hebra, podria tener 38 (19+19) nucleótidos que son de base apareada y 4 (2+2) que no son de base apareada. Tal molécula podria ser de 38/42 ó 90.5% de doble hebra. Una región de doble hebra de un agonista de TLR3 de ARNds, puede ser formado por una región auto-complementaria de una molécula de ARN único (por ejemplo, una estructura de bucle o troncal, tal como ARN de hairpina y ARNsh) , por dos moléculas de ARN que hibridizan entre si en todo o en parte (como en un ARN de doble hebra), o una mezcla de ambas (por ejemplo, una molécula parcialmente auto-complementaria de ARN y una segunda molécula de ARN que hibridiza a regiones en el precursor en tal hebra única restante después de la formación de la hairpina) . El agonista de TLR3 de ARNds de esta invención, también puede comprender regiones de hebra única, tales como las 3' y/o 5' pendientes en cualquier extremo del agonista, y/o estructuras "desapareadas" o "en bucle" dentro del agonista . En el caso del ARNsh, el agonista de TLR3 de ARNds, es codificado por una secuencia de ADN presente en un vector de expresión. El vector de expresión es la molécula que es administrada al sujeto. El vector de expresión tipicamente comprende un promotor que es activado por la polimerasa II ó III de ARN y secuencias terminadoras, cada una de las cuales es operablemente ligada a una secuencia que codifica a ARNsh para asegurar su transcripción apropiada. Los promotores activados por la polimerasa II de ARN incluyen, pero no se limitan a, U6, tARNval, Hl y versiones modificadas de las mencionadas anteriormente. Los promotores activados por polimerasa III de ARN incluyen, pero no se limitan a, CMV y EFla. En una modalidad preferida, el promotor es un promotor inducible o un promotor especifico de la célula tumoral. Dentro del contexto de la presente invención, el término "agonista de TLR3 de ARNds", designa cualquier compuesto de ARN terapéuticamente o profilácticamente efectivo que comprende, una región de doble hebra. Tales compuestos son tipicamente activos por se, es decir, no codifican un polipéptido o no requieren traducción para ser activos. Un agonista de TLR3 de ARNds, puede ser de cualquier longitud. Preferiblemente, un agonista de TLR3 de ARNds, tiene una longitud de al menos, aproximadamente 10 pares base (pb) , 20?b, 30pb, 50pb, 80pb, lOOpb, 200pb, 400 pb, 600pb, 800pb, ó lOOOpb. En un aspecto, el agonista de TLR3 de ARNds, es un ARNds corto que tiene una longitud de cadena de menos de 30pb, 50pb, 80pb, lOOpb ó 200pb. En otra modalidad, el agonista de TLR3 de ARNds, es un ARNds más largo, pero tiene una longitud de cadena de menos de 400pb, 600pb, 800pb, ó lOOOpb. En otra modalidad, el agonista de TLR3 de ARNds, es un ARNds largo que tiene una longitud de cadena mayor de lOOOpb. En un aspecto, un agonista de TLR3 de ARNds, es una composición que comprende una mezcla heterogénea de moléculas de ARNds, en donde una pluralidad de moléculas tiene diferentes longitudes. Preferiblemente, las moléculas de ARNds en tal composición, tienen una longitud promedio de al menos aproximadamente lOpb, 20pb, 30pb, 50pb, 80pb, lOOpb, 200pb, 400pb, 600pb, 800pb ó lOOOpb. En otra modalidad, una composición agonista de TLR3 de ARNds, comprende una pluralidad de moléculas de ARNds en donde al menos, 20%, 50%, 80%, 90%, ó 98% de moléculas de ARNds, tienen una longitud de al menos aproximadamente lOpb, 20pb, 30pb, 50pb, 80pb, lOOpb, 200pb, 400pb, 600pb, 800pb, ó lOOOpb por hebra. En un ejemplo preferido, el ARNds es un ARNds corto que tiene entre 10 y 30, más preferiblemente, entre 20 y 30pb por hebra. En una modalidad preferida, una composición agonista de TLR3 de ARNds, tiene una mezcla sustancialmente homogénea de moléculas de ARNds, en donde sustancialmente todas las moléculas en cada hebra, no difieren en longitud de cadena por más de 30pb, 50pb, 80pb, lOOpb ó 200pb. La longitud de cadena promedio de agonistas de TLR3 de ARNds en una composición, se puede determinar fácilmente, por ejemplo, por cromatografía de permeación en gel. Una o más de las moléculas de ARNds dentro de tales composiciones, es opcionalmente una molécula de ARNsi dirigida contra un antigeno cancerígeno. Los ribonucleótidos en el agonista de TLR3 de ARNds de esta invención, pueden ser naturales o sintéticos, y pueden ser derivados químicamente modificados o análogos de nucleótidos naturales. Las modificaciones preferidas son modificaciones estabilizantes, y de este modo, pueden incluir al menos, una modificación en el enlace fosfodiéster y/o en el azúcar, y/o en la base. Por ejemplo, una o ambas hebras del ARNds puede incluir independientemente, uno o más enlaces fosforotioato, enlaces fosforoditioato, y/o enlaces de metilfosfonato; modificaciones en la posición 2' del azúcar, tal como modificaciones de 2' -O-metilo, modificaciones de 2'-0-metoxietilo, modificaciones de 2' -amino, modificaciones de 2' -desoxi, modificaciones de 2' -halo tales como, 2' -fluoro; combinaciones de las anteriores, tales como modificaciones 2' -desoxi-2 ' -fluoro; análogos de nucleótidos aciclicos, y pueden también incluir al menos, un enlace de fosfodiéster. Los oligonucleótidos usados en el agonista de TLR3 de ARNds de esta invención, pueden también incluir modificaciones o sustituciones de base. Las bases modificadas incluyen otras bases sintéticas y que se originan naturalmente tales como, 5-metilcitosina (5-Me-C), 5-hidroximetil citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metilo y otros derivados alquilo de adenina e inosina, 2-propilo y otros derivados alquilo de adenina y inosina, 2-tiouracilo y 2-tiocitosina, 5-halouracilo y citosina, 5-propinilo (-C=C-CH3) uracilo y citosina y otros derivados alquinilo de bases de pirimidina, 6-azouracilo y citosina, 5-uracilo (pseudouracilo) , 4-tiouracilo, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, S-tioalquilo, 8-hidroxilo y otras adeninas 8-sustituidas e inosinas, 5-halo particularmente, 5-bromo, 5-trifluorometilo y otros uracilos 5-sustituidos y citosinas, 7-metilinosina y 7-metiladenina, 2-F-adenina, 2-amino-adenina, 8-azainosina y 8-azaadenina, 7-desazainosina y 7-desazaadenina y 3-desazainosina y 3-desazaadenina . Otras modificaciones incluyen, una cubierta terminal al 3' y/o 5', un enlace terminal al 3' -50, y un grupo fosfato terminal al 5' o grupo fosfato modificado. Ejemplos de porciones cubiertas terminales incluyen, pero no se limitan a, una porción abásica de desoxi invertida, un desoxinucleótido invertido, o una porción de glicerilo.

Además, una o ambas hebras (en un agonista de TLR3 de ARNds de doble hebra), pueden ser o incluir un concatámero que consiste de dos o más secuencias de nucleótidos unidas por un enlazador (es ) . Todas estas modificaciones son bien conocidas en la técnica (véase por ejemplo, Kandimalla et al. ((2003) Nucí. Acid. Res. 31(9): 2393-2400). Estudios previos de ARN de doble hebra (ARNds) , que valoran su capacidad para ser inductores de interferón efectivos, sugieren que los agentes de ARNds deben poseer la estructura secundaria de una hélice de doble hebra.

Otros agentes de ARNds los cuales también han sido mostrados por ser adecuados como agonistas de TLR3, incluyen polinucleótidos de doble hebra los cuales no son complementarios o no son perfectamente complementarios; estos también han sido conocidos como, asi llamadas estructuras "desapareadas" o "de bucle", y existen en ARNs que se originan naturalmente, tales como ARNt de transferencia, ARN ribosomal, y estructuras secundarias de ARN viral. Un compuesto de ARNds comúnmente citado, Ampligeno, comprende una estructura en donde algunas partes de citidina en la estructura polil.poliC, son reemplazadas con uridina (es decir, ARN desapareado) ; este compuesto ha sido reportado por tener actividad fisiológica similar a aquella del poliI:poliC precursor. Sin embargo, se apreciará que los agonistas de TLR3 o cualquier tipo y configuración, pueden ser usados de conformidad con esta invención . En general, los polinucleótidos necesitan ser resistentes a nucleasas para permanecer como macromoléculas por una longitud de tiempo suficiente; los polinucleótidos son menos sensibles al ataque de nucleasas, cuando están en un complejo helicoidal. Sin embargo, ciertos análogos tales como Ampligen™, parecen retener su actividad agonista de TLR3. En una modalidad particular, cada hebra de estos ARNds, puede tener una longitud comprendida entre aproximadamente 5 y 50 bases, más preferiblemente, entre 5 y 40, 35, 30, 25 ó 20 bases. Cada hebra es preferiblemente perfectamente complementaria a la otra. Ejemplos preferidos de tales ARNds son homopoliARNs, es decir, ARNds en los cuales, cada hebra comprende esencialmente una repetición de la misma base; o comprende una región homopoliARN. La base en tales hebras de homopoliARN, puede ser cualquier base que se origina naturalmente (por ejemplo, poliA, poliU, poliC, poliG) o bases que no se originan naturalmente (por ejemplo, químicamente sintetizadas o modificadas), (por ejemplo, polil). Los polinucleótidos tipificados por ácido poliinosinico-policitidilico, es decir, poli ( I ) : poli (C) o poliliC y ácido poliadenilico-poliuridilico, es decir, poli (A) : poli (U) o poli A:U, son compuestos bien conocidos en la técnica y han sido conocidos por inducir la producción de interferón por células inmunes. De este modo en modalidades preferidas, el agonista de TLR3 usado de conformidad con la invención, es un ARN de doble hebra seleccionado del grupo que consiste de: ácido poliinosinico y ácido policitidilico, ácido poliadenilico y ácido poliuridilico, análogo de ácido poliinosinico y ácido policitidilico, ácido poliinosinico y análogo de ácido policitidilico, análogo de ácido polinosinico y análogo de ácido policitidilico, análogo de ácido poliadenilico y ácido poliuridilico, ácido poliadenilico y análogo de ácido poliuridilico, y análogo de ácido poliadenilico y análogo de ácido poliuridilico. El término "análogo" como se usa en este documento, significa cualquiera de las modificaciones de nucleótidos descritas anteriormente . Se apreciará que los agonistas de TLR3 de ARNds, pueden comprender cualquier combinación de bases y ser diseñados usando cualquier método adecuado. Preferiblemente, el requerimiento básico de una región de doble hebra, estabilidad y resistencia al ataque de nucleasa y la preferencia por la longitud de cadena, son tomados en cuenta. Estas propiedades, asi como también la actividad agonística de TLR3 relativa de cualquier agonista de TLR3 de ARNds, puede ser probada y valorada con referencia a un complejo de rAn:rUn ó rIn:rCn, por ejemplo. Las mediciones se pueden tomar en cuenta para incrementar la estabilidad y resistencia a las nucleasas, o incrementar o disminuir opcionalmente, la acción inducida por interferón. Otros ejemplos de ARNds incluyen ácidos nucleicos descritos en las Patentes Estadounidenses Nos. 5,298,614 y 6,780,429. La Patente Estadounidense No. 5,298,614, reporta que cuando la longitud de cadena de derivados de ácido nucleico de doble hebra está limitada a ciertos intervalos, las sustancias resultantes exhibirán la actividad biológica deseada con toxicidad marcadamente menor, proporcionando polinucleótidos que tienen una longitud de aproximadamente 50 hasta 10,000, calculada por números de pares base. También se describen derivados en donde el anillo de purina o pirimidina en el polímero de ácido nucleico, es sustituido con al menos un grupo SH, o dicho derivado contiene un enlace disulfuro o ambos (la relación preferida de número de átomos de azufre a ácido citidilico presente en el poliC es 1:6 a 39) . La Patente Estadounidense No. 6,780,429, describe un tipo particular de compuestos de ARNds que son "de cadena corta", que tienen longitudes de aproximadamente 100 a 1,000 como se calcula por el número de pares base, o preferiblemente, de 200 a 800, y más preferiblemente, de 200 a 600. Los últimos compuestos son reportados por contener números bajos de enlaces de 2' -5'-fosfodiéster por un método diseñado para evitar grupos de fosfato que ocasionan reacomodo intramolecular a partir de la posición 3' a la posición 2', a través de un mecanismo llamado pseudo rotación, simultáneamente pueden ocurrir durante la hidrólisis de polinucleótidos, resultando en una porción de enlaces de 3' -5' -fosfodiéster en la molécula de polinucleótido de cadena corta, siendo reemplazados por los enlaces de 2 ' -5' -fosfodiéster . Las descripciones de cada una de estas referencias se incorporan en este documento por referencia. Se proporcionan otros agonistas de ácido nucleico que pueden ser adecuados para usar como agonistas de TLR3 en: Field et al: Proc. Nat. Acad. Sci. U.S. 58, 1004, (1967); Field et al: Proc. Nat. Acad. Sci. U.S. 58, 2102, (1967); Field et al: Proc. Nat. Acad. Sci. U.S. 61, 340, (1968); Tytell et al: Proc. Nat. Acad. Sci. U.S. 58, 1719, (1967); Field et al: J. Gen. Physiol. 56, 905 (1970); De Clercq et al: Methods in Enzymology, 78, 291 (1981). Un número de derivados de ácido nucleico sintéticos, han sido descritos incluyendo, complejos de homopolimero-homopolimero (Polímero de Ácido Nucleico de Doble Hebra tal como aquellos en los cuales poli I:C o poli A:U, son una estructura precursora, en donde estos complejos de homopolimero-homopolimero contienen: (1) modificaciones de base, ejemplificadas por ácido poliinosinico-poli (ácido 5-bromocitidilico) , ácido poliinosinico-poli (ácido 2-tiocitidilico) , poli (ácido 7-desazainosinico) -ácido policitidilico, poli (ácido 7-desazainosinico) -poli (ácido 5-bromocitidilico) y ácido poliinosinico-poli (ácido 5-tiouridilico) ; (2) Modificaciones de azúcar, ejemplificadas por poli (ácido 2' -azidoinosinico) -ácido policitidilico; y (3) Modificaciones de ácido fosfórico, ejemplificadas por ácido poliinosinico-poli (ácido citidil-5' -tiofosfórico) . Otros derivados de ácido nucleico sintéticos que han sido descritos incluyen, copolimeros intercambiados, ejemplificados por poli (ácido adenilico-ácido uridilico) ; y complejos de homopolimero-copolimero, ejemplificados por ácido poliinosinico-poli (ácido citidilico-ácido uridilico) y ácido poliinosinico-poli (ácido citidilico-ácido 4-tiouridilico) . Otros derivados de ácido nucleico sintético que han sido descritos incluyen, complejos de ácido nucleico sintético con policationes, ejemplificados por el complejo de ácido poliinosinico-ácido policitidilico-poli-L-lisincarboxi-metilcelulosa (llamados "Poli ICLC"). Aún otro ejemplo de derivado de ácido nucleico sintético es ácido poliinosinico-poli ( 1-vinilcitosina) . Un ejemplo de un agonista de TLR3 es Ampligen™, (Hemispherx, Inc., of Rockville, Md., U.S.A.), un ARNds formado por complejos de ácido poliriboinosinico y poliribocitidilico/uridilico, tal como rIn:r(CxU o G)n, en donde x tiene un valor desde 4 a 29, por ejemplo, rIn:r(C?2 U)n. Muchos polímeros de ARNds desapareados los cuales portan similitud al Ampligen, han sido estudiados; los ARNds desapareados basados en poli I:C, han incluido complejos de un poliinosinato y un policitidilato que contiene una proporción de bases de uracilo o bases de guanidina, por ejemplo, desde 1 en 5 hasta 1 en 30 de tales bases. La ventaja terapéutica clave de los ARNds desapareados sobre otras formas de ARNds sintéticos y/o naturales, es una reducción reportada en la toxicidad sobre compuestos tales como aquellos descritos en Lampson et al. en la Patente Estadounidense No. 3,666,646. Ejemplos específicos de ARN de doble hebra de conformidad con la presente invención, además incluyen Poliadenur (Ipsen) y Ampligen (Hemispherx) . El poliadenur es una molécula de poliA/ARN U, es decir, contiene una hebra de poli A y una hebra de poli U. El poliadenur ha sido desarrollado para el tratamiento potencial de la infección del virus de la hepatitis B (VHB) . El ampligen es de un compuesto de polil/poliC (o una variante del mismo que comprende una molécula de poliI/poliC12U ARN) . El ampligen es descrito por ejemplo, en los documentos EP 281 380 ó EP 113 162. El ampligen ha sido propuesto para el tratamiento del cáncer, las infecciones virales y trastornos inmunes. Se desarrollan principalmente para el tratamiento potencial de encefalomielitis miálgica (ME, o síndrome de fatiga crónica/sindrome de disfunción inmune de fatiga crónica, CFS/CFIDS) . Un ejemplo particular de un ARNds para uso en la presente invención es un ARNds que comprende, una región poliA/poliU, en donde cada hebra de dicho ARNds contiene menos de 25 bases. Otro ejemplo particular de un ARNds para uso en la presente invención, es un ARNds que comprende una región polil/poliC (U) , en donde cada hebra de dicho ARNds contiene menos de 25 bases. Además, se han descrito ARNds en la literatura o pueden ser desarrollados, los cuales pueden ser usados dentro de la presente invención. Más en general, cualquier homopoliARN de doble hebra sintético, puede ser usado en el contexto de esta invención, asi como también otros ARNds como se describe en este documento. En una modalidad más preferida, el ARNds es una molécula de poliA:poliU completamente de doble hebra (por ejemplo, de extremo romo; sin pendientes), que consisten de entre 19 y 30 pares base (por ejemplo, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ó 30 pares base) y que comprenden entre 1 y 30 modificaciones estabilizantes y/o un 3' y/o un 5' cubierto. La modificación y cubiertas estabilizantes son descritas anteriormente y son bien conocidas en la técnica. Las modificaciones estabilizantes y/o la presencia de una cubierta, hace al ARNds más resistente a la degradación por suero. Las modificaciones estabilizantes preferidas incluyen enlaces de difosforotioato internucleótidos, 2'-dexosi ribonucleótidos, 2' -O-metil ribonucleótidos, 2'-dexosi-2' -fluoro ribonucleótidos, nucleótidos de "base universal", nucleótidos "aciclicos", 5-C-metil nucleótidos, e incorporación de residuos abásicos de desoxi invertidos y/o glicerilos terminales. Estas modificaciones químicas se conocen por incrementar dramáticamente la estabilidad del suero de compuestos de ARNds. Un ejemplo de un ARNds estabilizado es ARNi Stealth™ (comercialmente disponible de Invitrogen, Carisbad, CA USA) . En otra modalidad preferida, el agonista de TLR3 de ARNds, es una molécula de ARNsi o una molécula de ARNsh que es diseñada para hibridizar específicamente, con el ARNm que codifica un antigeno de célula tumoral u otra proteina involucrada en la proliferación del tumor. En esta modalidad, la molécula de ARNds juega un papel dual en el tratamiento de cáncer. Es tanto un agonista de TLR3 como un supresor de una expresión de antigeno de tumor especifico. Se ha demostrado que las moléculas de ARNsi y moléculas d ARNsh dirigidas contra proteinas celulares, exhiben tanto la supresión del gen dependiente de la secuencia, como efectos independientes de la secuencia mediados a través de TLR3 (K. Kariko et al., J. Immunol . , 2004, 172: 6545-6549) . De este modo, se espera que las moléculas de ARNsi y ARNsh especificas de la proliferación de tumor o antigeno de tumor, también serán agonistas de TLR3 en células cancerígenas . La elección de secuencias de ribonucleótido para uso para tales agonistas de TLR3 de ARNds, dependerá del antigeno de tumor especifico o proteina proliferativa del tumor a ser suprimida, asi como también del tipo especifico de cáncer a ser tratado. Por medio del ejemplo, el agonista de TLR3 ARNds, puede tener una secuencia de polinucleótido diseñada para hibridizar a un ARNm que codifica a VEGF, receptores de VEGF, A-Raf, B-Raf, C-Raf, Raf-1, HSP70, HSP90, PDGF, TGF-alfa, EGF, receptor EGF, un elemento de la familia del receptor similar a EGF humano, tal como HER-2/neu, HER-3, HER-4 o un receptor heterodimérico comprendido de al menos, una subunidad HER, antigeno carcinoembriónico, antigeno receptor del péptido liberador de gastrina, Muc-1, CA125, avß3 integrinas, a5ßl integrinas, allbß3-integrinas, CTLA-4, CD20, CD22, CD30, CD33, CD52, CD56, CD80, PDGF beta receptor, Src, VE-cadherina, IL-8, hCG, IL-6, receptor JL-6, IL-15, o un RNAm que codifica cualquiera de las proteinas objetivo adicionales expuestas en http: //oncologyknowledgebase . com/oksite/TargetedTherapeutic s/TT0Exhibit2.pdf y http : //oncologyknowledgebase . com/oksite/TargetedTherapeutic s/TT0Exhibit3. pdf , las descripciones las cuales están en este documento incorporadas por referencia. Las secuencias que codifican estas proteinas se conocen. De este modo, el ARNsi y ARNsh propuestos para suprimir la expresión de estas proteinas pueden por lo tanto, ser diseñadas usando el software y algoritmos bien conocidos (véase por ejemplo, https://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress) .

Detección de Células Cancerigenas que expresan TLR3 También se ha encontrado que ciertas clases de pacientes con cáncer tratados de conformidad con el procedimiento descrito usando un agonista de TLR3, exhiben mayor supervivencia que otros pacientes. Una clase de pacientes en los cuales se encontró la supervivencia mejorada, fueron pacientes que tienen tumores que expresan una proteina de TLR3. Determinar si los tipos de tumores que expresan TLR3, se pueden realizar como se describe en los ejemplos, por ejemplo, detectando la presencia de uno o más polipéptidos de TLR3 en una muestra biológica a partir de un paciente con cáncer, en general, de una biopsia de tumor. Los inventores proporcionan en este documento, que varios tipos tumorales pueden expresar proteinas de TLR3 y que estos tipos de tumores pueden ser tratados con un agonista de TLR3 de conformidad con la invención. En otras modalidades especificas, un ensayo de diagnóstico se realiza en una muestra de tumor a partir de un paciente, para determinar si la muestra de tumor comprende células que expresan TLR3. Tales ensayos se describen en este documento; por ejemplo, se pueden usar ventajosamente, ensayos de inmunohistoquimica a base de anticuerpo. Preferiblemente, se realiza una biopsia de tumor, proporcionando una muestra biológica. Una determinación de que dicha muestra biológica comprende células que expresan TLR3, indica que el paciente puede beneficiarse de la administración de agonista de TLR3. El paciente es entonces tratado con el agonista de TLR3. Preferiblemente, la etapa de determinar si las células cancerigenas en dicho sujeto expresan un receptor de TLR3, es realizada en una muestra tumoral derivada de un paciente. Por ejemplo, la muestra puede ser una biopsia del tumor del paciente, una célula o cultivo de tejido, etc. Tal muestra se puede obtener por métodos convencionales. En una modalidad particular, la muestra se obtiene por métodos no invasivos y/o de colecciones de tejidos. Por lo tanto, en una modalidad de los métodos y usos de conformidad con la presente invención, la etapa para determinar si las células cancerigenas en dicho sujeto expresan un receptor de TLR3, comprende proporcionar una muestra tumoral a partir del paciente y detectar la expresión de un TLR3. La expresión de un TLR3 se puede detectar al nivel de ácido nucleico o al nivel de polipéptido. Se apreciará que la detección de TLR3 se puede llevar a cabo detectando cualquier variante alélica de TLR3 conocida, que incluye pero no se limita a variaciones alélicas en la región citoplásmica del gen TLR3 en la secuencia 5' inmediata del gen de TLR3 (véase, Piriel et al. (2005) Tissue Antigens 66(2): 125, la descripción de la cual se incorpora en este documento por referencia) , por ejemplo, una variante en el polimorfismo C/T en la posición 2593, el polimorfismo C/A en la posición 2642 y el polimorfismo A/G en la posición 2690 en el gen TLR3. Se pueden usar varias técnicas conocidas en la técnica para detectar o cuantificar TLR3 al nivel de nucleótido, que incluyen secuenciamiento, hibridización y amplificación. Los métodos adecuados incluyen, manchado Southern (para ADNs), manchado Norther (para ARN) e hibridación in situ fluorescente (FISH). La detección o cuantificación de TLR3 al nivel de la proteina, se puede lograr por métodos bien conocidos que incluyen, pero no se limitan a, migración en gel, ELISA, radio-inmunoensayos (RÍA), ensayos inmunoenzimáticos (IEMA), manchado Western u otro método para detectar un ligando unido. Los métodos de detección de proteina, requieren el uso de un ligando especifico para la proteina TLR3, preferiblemente, un anticuerpo especifico o una molécula de ARN de doble hebra. El enlace del anticuerpo o molécula de ARNds, pude ser directamente detectado si el ligando es etiquetado con, por ejemplo, un tinte fluorescente, un radioisótopo u otra porción detectable. Alternativamente, el enlace del ligando a TLR3, puede ser indirectamente detectado a través del uso de un segundo reactivo etiquetado que se enlaza al ligando. Tales reactivos incluyen anticuerpos anti-inmunoglobulina etiquetados y anticuerpos anti-inmunoglobulina ligados a la enzima que se enlazan al anticuerpo anti-TLR3, y ácidos nucleicos etiquetados que se pueden enlazar a una o ambas hebras de una molécula de ARNds. Dentro del contexto de esta invención, un anticuerpo designa un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, asi como también fragmentos o derivados del mismo que tienen sustancialmente la misma especificidad de antigeno. Los fragmentos incluyen, Fab, Fab' 2, regiones de CDR, etc. Los derivados incluyen anticuerpos de cadena única, anticuerpos humanizados, anticuerpos poli-funcionales, etc. Los anticuerpos específicos de TLR3 adecuados para uso en la presente invención, son comercialmente disponibles tales como anticuerpos monoclonales TLR3, Ref 12-9039, eBioscience, San Diego, CAUSA; anti-TLR3 policlonales, Ref abl3555, Abeam, UK; Clon 40C1285, Imgenex Corp, Biocarta US, San Diego, CA; y Clon TLR3.7, catálogo no. HM2096, HyCuit biotechnology B.V., Holanda. El anticuerpo puede ser un anticuerpo agonístico (como se describe anteriormente), un anticuerpo agonístico o cualquier otro anticuerpo que se enlaza a TLR3. Los métodos para elaborar cualquiera de tales anticuerpos son bien conocidos en la técnica, asi como también descritos en detalle para anticuerpos agonísticos (con la excepción de la etapa de selección la cual para un anticuerpo de diagnóstico, podria basarse en la afinidad para TLR3 en lugar de la activación de tal receptor) . En una modalidad especifica, el método comprende contactar una muestra del sujeto con un anticuerpo especifico para la proteina TLR3, y determinar la presencia de un complejo inmune. En una modalidad alternativa, la expresión de un receptor de TLR3 en dicha célula cancerígena, se determina usando un cebador o sonda especifico de TLR3. Tal cebador o sondas son diseñados para hibridizar específicamente, con un gen de TLR3, bajo condiciones de hibridización adecuadas, con ello, permitiendo la detección de un gen o ARN que codifica para TLR3. Una modalidad particular comprende contactar una muestra de tumor a partir del paciente, con una sonda o cebador especifico de TLR3, y determinar la existencia de un híbrido o producto de amplificación. La presencia (o cantidad) de ARNm en una muestra, puede proporcionar una indicación a la expresión de dicho receptor. Tal determinación puede ser realizada por varias técnicas conocidas en el arte, que incluyen, a través de TI-RCP. Para tal propósito, el ARN total es aislado a partir de células cancerigenas usando kits comercialmente disponibles, tales como el kit RNeazy Mini (Qiagen, Valencia, CA) . El ARN total tratado con DNase I (3 µg) , es sometido a transcriptasa inversa usando cebadores aleatorios con transcriptasa inversa libre de RNaseH (Invitrogen, San Diego, CA) . El TLR3 puede ser amplificado usando cebadores específicos descritos posteriormente. El TLR3 5'-CTCAGAAGATTACCAGCCGCC-3' (SEC ID NO 3) 5'-CCATTATGAGACAGATCTAATG-3' (SEC ID No 4)) (véase documento US2003/0165479, descripción la cual se incorpora en este documento por referencia) . Antes de determinar la expresión de TLR3, la muestra puede ser tratada para mejorar la disponibilidad de ácidos nucleicos o polipéptidos de TLR3. Tal tratamiento puede incluir por ejemplo, una lisis de las células o tejido (por ejemplo, mecánica, enzimática o fisica) . La invención también se refiere a un kit de diagnóstico que comprende productos y reactivos para detectar en una muestra tumoral de un sujeto, la expresión de un gen o polipéptido de TLR3. Dicho kit de diagnóstico de conformidad con la presente invención, comprende cualquier cebador, cualquier par de cebadores, cualquier sonda de ácido nucleico y/o cualquier ligando, preferiblemente anticuerpo, descrito en la presente invención. Dicho kit de diagnóstico de conformidad con la presente invención, puede además, comprender reactivos y/o protocolos para realizara una hibridización, amplificación o reacción inmune de antigeno-anticuerpo. Además del descubrimiento de que pacientes con cáncer de mama tratados con el agonista de TLR3 demuestran supervivencia incrementada, se encontró que una clase de pacientes en la cual la supervivencia mejorada se encontró cuando se tratan de conformidad con el procedimiento descrito usando un agonista de TLR3, fueron pacientes que tienen cánceres de mama metastásicos o recurrentes o agresivos. Otra clase de pacientes en los cuales se encontró la supervivencia mejorada cuando se tratan de conformidad con el procedimiento descrito usando un agonista de TLR3, fueron pacientes que tienen cánceres de mama positivos de nodos linfáticos. Se proporciona que células a partir de muestras de cáncer de mama, expresan TLR3. Sin embargo, también se contempla que muestras de sujetos que tienen otros tipos de tumores, contendrán células que expresan TLR3, y que estos sujetos pueden ser tratados con agonistas de TLR3; se apreciará que aquellas personas expertas pueden determinar cuales tumores son adecuados para tratamiento usando métodos disponibles, que incluyen métodos descritos en este documento .

Sobre-regulación de Expresión de TLR3 en Células Tumorales Debido a que la eficacia de los métodos de tratamiento descritos en este documento depende de la expresión de TLR3 por las células del cáncer a ser tratado, puede ser ventajoso estimular la expresión de TLR3 antes de administrar un agonista de TLR3. De este modo, de conformidad con una modalidad, la invención proporciona un método para tratar un sujeto que sufre de cáncer que comprende las etapas de a) administrar a dicho paciente, un agente que ocasiona expresión incrementada de TLR3 en una célula cancerígena; y b) administrar a dicho paciente, un agonista de TLR3. Son bien conocidos en la técnica agentes que causan sobre regulación de expresión TLR3 e incluyen, pero no se limitan a citosina inflamatoria tal como interferonas tipo I, virus sincitial respiratorio y forma atenuada del mismo, y moléculas de ARN de doble hebra. Además, la expresión de TLR3 puede ser sobre regulada por técnicas de terapia del gen que resulta en transformación in vivo de células cancerigenas con un vector de expresión que codifica a TLR3. Preferiblemente, tales técnicas hacen uso de sistemas de suministro, tal como sistemas de vector viral o sistemas a base de liposomas que son modificados para dirigir específicamente células cancerigenas. El objetivo es tipicamente logrado modificando la superficie externa del sistema de suministro para incluir un ligando o un anticuerpo especifico a la superficie de la célula cancerígena . La capacidad de un agente para causar sobre regulación de expresión de TLR3, particularmente en las células del cáncer a ser tratado por un agonista de TLR3, puede ser sometida a ensayo antes de la administración de dicho agente a un sujeto. Tal ensayo es preferiblemente llevado a cabo in vitro, usando un cultivo de células derivadas del cáncer a ser tratado. Tal cultivo puede ser una linea de cultivo celular establecido o un cultivo de células derivadas de una muestra del cáncer obtenido del suj eto . De acuerdo con una modalidad relacionada, la invención proporciona una composición de materia para tratar un sujeto que tiene un cáncer que comprende: un agente que causa sobre regulación de la expresión de TLR3; y un agonista de TLR3, en donde dicho agente y dicho agonista están presentes como formas de dosificación separada, pero están asociados entre si. El término "asociado entre si" como se usa en este documento, significa que las formas de dosificación separadas son envasadas juntas o de otra forma unidas a alguna otra, de forma tal que es prontamente aparente que las formas de dosificación separadas, se pretendan vender y administrar como parte del mismo régimen. El agente y el agonista de TLR3, son preferiblemente envasados juntos en un empaque en ampolla u otro empaque de cámara múltiple, o conectado, contenedores separadamente sellados (tales como sacos de lamina o similares) que pueden ser separados por el usuario (por ejemplo, rasgando en las lineas punteadas entre los dos contenedores) . De acuerdo con otra modalidad relacionada, la invención proporciona un kit para determinar si un agente es capaz de sobre regulación de la expresión TLR3 en una célula cancerígena, en donde el kit comprende una célula de cáncer o linea celular cancerígena la cual puede expresar TLR3; un ligando especifico de TLR3; y un reactivo para detectar el enlace de dicho ligando especifico de TLR3 para un TLR3 expresado por dicha célula cancerígena.

Complejos de Ligando de TLR3 Citotóxico y Tumoricidad En una modalidad, la invención proporciona un compuesto que comprende un ligando de TLR3 en asociación con un agente citotóxico. El término "agente citotóxico" como se usa en este documento, es una molécula que es capaz de eliminar o inhibir la proliferación de una célula cancerígena. Tales complejos toman ventajas del hecho que el TLR3 se expresa endosomalmente por células dendriticas, pero está presente en la superficie de las células cancerigenas. Asi, la porción de ligando de TLR3 de complejo, dirige el agente citotóxico específicamente a células cancerigenas con efecto minimo en células del sistema inmune. El término "en asociación con", como se usa en este documento, significa que los dos agentes están ya sea unidos entre si a través de un enlace covalente y/o no covalente; conjugados entre si (por ejemplo, unido o de otra forma conectado entre si directamente a través de una porción enlazante); o están separados entre si, pero presentes en el mismo portador, tal como un liposoma u otro portador. El componente ligando de TLR3 de tales composiciones puede ser seleccionado de cualquier agonista de TLR3 que directamente se enlaza a TLR3, cualquier agonista TLR que directamente se enlaza a TLR3 o cualquier otra molécula que directamente se enlaza a TLR3.

Anticuerpos a TLR3, moléculas de ARN de doble hebra y ligandos de molécula pequeña de TLR3 son todos ligandos de TLR3 potenciales, que pueden ser usados en tales composiciones. Anticuerpos no agonísticos para TLR3 son los componentes de ligando preferidos y, como se describe en este documento, son comercialmente disponible. El agente citotóxico en tales composiciones, se puede seleccionar de cualquier agente conocido o ser desarrollado para el tratamiento de cáncer, incluyendo agentes anti-proliferativos generales, agentes de quimioterapia, agentes anti-proliferativos especifico del tumor, agentes citotóxicos, agentes citoinhibidores, etc. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, radioisótopos, proteinas tóxicas, moléculas pequeñas tóxicas, tales como fármacos, toxinas, inmunomoduladores, hormonas, antagonistas de hormona, enzimas, oligonucleótidos, inhibidores de enzima, radionúclidos terapéuticos, inhibidores de angiogénesis, fármacos quimioterapéuticos, alcaloides vinca, antraciclinas, epidofilotoxinas, taxanos, antimetabolitos, agentes de alquilación, antibióticos, inhibidores COX-2, SN-38, antimitóticos, agentes antiangiogénicos y apoptóticos, particularmente doxorubicina, metotrexato, taxol, CPT-11, camtotecanos, mostazas de nitrógeno, gencitabina, alquil sulfonatos, nitrosoureas, triacenos, análogos de ácido fólico, análogos de pirimidina, análogos de purina, complejos de coordinación de platino. Etotoxinas de pseudomonas, ricino, abrina, 5-fluorouridina, ribonucleasa (ARNasa), DNasa I, enterotoxina A estafilococal, proteina antiviral de fitolaca, gelonina, toxina difterina, endotoxinas de Pseudomonas, endotoxinas de Pseudomonas y otros (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 19ava Ed. (Mack Publishing Co. 1995); Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (McGraw Hill, 2001); Pastan et al. (1986) Cell 47:641; Goldenberg (1994) Cáncer Journal for Clinicians 44:43; Patente Estadounidense No. 6,077,499; http: //oncologyknowledgebase . com/oksite/TargetedTherapeutic s/TTOExhibit4.pdf , y http: //oncologyknowledgebase. com/oksite/TargetedTherapeutic s/TTOExhibit5.pdf, la descripción completa, la cual se incorpora en este documento por referencia) . Se apreciará que una toxina puede ser de origen animal, planta, fúngico o microbiano, o puede ser creada por nuevas síntesis químicas. Si se requiere, las toxinas u otros compuestos pueden estar enlazados al ligando de TLR3 directa o indirectamente, usando cualquiera de un número amplio de métodos disponibles, dependiendo de la naturaleza del ligando de TLR3. Por ejemplo, un agente puede estar unido a la región articulada de un componente de anticuerpo TLR3 via formación de enlace de disulfuro, usando reticuladores tales como 3- (2-piridilditio) propionato de N-succinilo (SPDP) , o via una porción de carbohidrato en la región Fc del anticuerpo (véase, por ejemplo, Yu et al. (1994) Int . J. Cáncer 56: 244; Wong, "Chemistry of Protein Conjugation and Cross-linking", (CRC Press 1991); Upeslacis et al., "Modification of Antibodies by Chemical Methods", in Monoclonal Antibodies: Principies And Applications, Birch et al., (eds.), páginas 187-230 (Wiley-Liss, Inc. 1995); Price, "Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies", in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering And Clinical Application, Ritter et al. (eds.), páginas 60-84 (Cambridge University Press 1995); Catted et al. (1989) Chemistry Today 7:51-58; Delptrino et al. (1993) J. Pharm. Sci 82:699-704; Arpicco et al. (1997) Bioconjugate Chemistry 8:3; Reisfeld et al. (1989) Antibody, Immunoconj . Radiopharma. 2:217; la descripción completa, cada una de las cuales se incorpora en este documento por referencia) . Se pueden conjugar una toxina u otro compuesto de una molécula ARNds, usando una amplia variedad de técnicas bien conocidas. Patentes estadounidenses ejemplares que describen la preparación de conjugados de oligonucleótido incluyen por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717; 5,580,731; 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,508,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,752,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,482,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,51 0,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928 y 5,688,941, cada una de las cuales se incorpora por referencia en este documento en su totalidad. Cuando un ligando de TLR3 y un agente citotóxico están presentes como agentes separados en el mismo vehiculo, es necesario que el ligando de TLR3 sea al menos parcialmente expuesto en la superficie del vehiculo, para que el vehiculo se dirija a la célula de tumor que expresa TLR3. Se conoce bien en la técnica la conjugación de anticuerpos a liposomas para hacer un vehiculo de suministro ("inmunoliposomas"), por ejemplo, se describe por Torchilin et al., 1992, FASEB J. 6:2716-2719; Bondas et al., 1999, International J. of Pharmaceutics 181:79-93; Tana et al., 1998, Japanese J. of Cáncer Res. 89:1201-1211; o Koning et al., 1999, Biochimica et Biophysica Acta 1420:153-167. Se puede llevar a cabo la conjugación de otros ligandos de TLR3 de una manera similar.

Sistemas de Suministro de Formulaciones de Agonista de TLR3 Los métodos de tratamiento de conformidad con esta invención, comprenden las etapas de administrar a un sujeto un agonista de TLR3. Preferiblemente, el agonista de TLR3 es formulado en una composición farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticamente aceptables útiles en la invención adicionalmente comprenden portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables. Portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser usados en las composiciones farmacéuticas útiles en esta invención, incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores iónicos, estearato de aluminio, lecitina, proteinas de suero, tales como albúmina suero humano, sustancias amortiguadoras tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicérido parcial de ácidos grasoso vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato hidrógeno de disodio, fosfato hidrógeno de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, silice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinil pirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilen glicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque polietileno-polioxipropileno, polietilen glicol y lanolina. Las composiciones farmacéuticas de la invención, incluyen aquellas para administración oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal o parenteral (incluyendo subcutáneo, intramuscular, intravenosa e intradérmica). En ciertas modalidades, el compuesto de las formulas en este documento, se administra transdérmicamente (por ejemplo, usando un parche transdérmico o técnicas iontoforéticas ) . Otras formulaciones pueden ser convenientemente presentadas en formas de dosificación unitaria, por ejemplo, tabletas y cápsulas de liberación sostenida, y en liposomas, y pueden ser preparadas por cualquier método bien conocido en la técnica de farmacia. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA (17ava ed. 1985) . Tales métodos preparativos incluyen la etapa de llevar en asociación con la molécula a ser administrada, ingredientes tales como portadores que constituyen uno o más ingredientes accesorios. En general, las composiciones son preparadas uniformemente e intimamente que lleva en asociación, los ingredientes activos con portadores líquidos, liposomas o portadores sólidos finamente divididos o ambos, y los mismos necesariamente formando el producto . En ciertas modalidades preferidas, el compuesto es oralmente administrado. Las composiciones de la presente invención, adecuadas para administración oral pueden estar presentes como unidades discretas tales como cápsulas, saquillos o tabletas, cada una que contiene una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como un polvo o granulos; como una solución o una suspensión en un liquido acuoso o un liquido no acuoso; o como una emulsión liquida aceite en agua o una emulsión liquida agua en aceite, o empaquetadas en liposomas y como bolo, etc. Pueden ser empleadas cápsulas de gelatina suave por contener tales suspensiones, las cuales pueden benéficamente incrementar la velocidad de absorción del compuesto. Una tableta puede ser hecha por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios . Las tabletas comprimidas pueden ser preparadas comprimiendo en una máquina adecuada el ingrediente activo en una forma de circulación libre tal como un polvo o granulos, opcionalmente mezclando con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, preservativo, activo de superficie o agente de dispersión. Las tabletas moldeadas pueden ser hechas moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente liquido inerte. Las tabletas opcionalmente pueden ser revestidas o marcadas y pueden ser formuladas para proporcionar liberación lenta y controlada del ingrediente activo. Métodos de formulación tal como composiciones de liberación lenta o controlada de ingredientes farmacéuticamente activos, tales como aquellos en este documento y otros compuestos conocidos en la técnica, se conocen en la técnica y se describen en varias Patentes Estadounidenses emitidas, algunas de las cuales incluyen, pero no se limita a, Patentes Estadounidenses Nos. 4,369,172; y 4,842,866, y las referencias citadas en este documento. Los revestimientos pueden ser usados para suministrar compuestos a los intestinos (véase, por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 6,638,534, 5,217,720 y 6,569,457, 6,461,631, 6,528,080, 6,800, 663 y referencias citadas en este documento) . En el caso de tabletas para uso oral, portadores que son comúnmente usados incluyen lactosa y almidón de maiz. También son tipicamente agregados, agentes de lubricación, tales como estearato de magnesio. Para administración oral en forma de cápsula, diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maiz seco. Cuando se administran oralmente suspensiones acuosas, el ingrediente activo es combinado con agentes emulsificantes o de suspensión. Si se desea, de pueden agregar ciertos agentes edulcorantes y/o saborizantes y/o colorantes. Pueden ser útiles tensoactivos tales como lauril sulfato de sodio para mejorar la disolución y absorción. Composiciones adecuadas para administración oral, incluyen grajeas, que comprenden los ingredientes en una base saborizada, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto; y pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia . Composiciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estéril acuosas y no acuosas, las cuales pueden contener anti-oxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos y solutos, los cuales pueden proporcionar la formulación isotónica con la sangre del receptor deseado; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas las cuales pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones pueden estar presentes en contenedores de dosis unitarias y dosis múltiples, por ejemplo, ampollas y viales cerrados, y pueden ser almacenados en condiciones de congelamiento en seco (liofilizados) que requieren únicamente la adición del portador liquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes del uso. Se pueden preparar soluciones y suspensiones de inyección extemporáneos a partir de polvos, granulos y tabletas estériles. Tales soluciones de inyección pueden estar en la forma, por ejemplo, de una suspensión oleaginosa o acuosa inyectable estéril. Esta suspensión puede ser formulada de conformidad a técnicas conocidas en la técnica, usando agentes de dispersión o humectación adecuados (tales como, por ejemplo, Tween 80) y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril puede también ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1, 3-butandiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden emplear están manitol, agua, solución Ringer y solución de cloruro de sodio isotónica. Además, aceites fijos, estériles, son convencionalmente empleados como un solvente o agente de suspensión. Para este propósito, se puede emplear cualquier aceite fijo insulso incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Son útiles ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados de glicérido en la preparación de inyectables, como son aceites farmacéuticamente aceptables, tales como aceite de castor, especialmente en sus versiones polioxietiladas . Estas soluciones y suspensiones aceitosas pueden también contener un diluyente o dispersante de alcohol de cadena larga tal como pH . Helv o un alcohol similar. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden ser administradas en la forma de supositorios para administración rectal o vaginal. Estas composiciones se pueden preparar mezclando un compuesto de esta invención con un excipiente no irritante adecuado el cual es sólido a temperatura ambiente, pero liquido a la temperatura rectal y por lo tanto puede fundirse en el recto para liberar los componentes activos. Tal material incluye, pero no se limita a, manteca de coco, cera de abeja y polietilen glicoles . La administración tópica de las composiciones farmacéuticas de esta invención es especialmente útil cuando el tratamiento deseado involucra áreas y órganos fácilmente accesibles para aplicación tópica. Para aplicación tópica a la piel, la composición farmacéutica será formulada con un ungüento adecuado que contiene los componentes activos suspendidos o disueltos en un portador. Portadores para administración tópica de los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limita a, aceite mineral, petróleo liquido, petróleo blanco, propilen glicol, compuesto de polioxietilen polioxipropileno, cera emulsificada y agua. Alternativamente, la composición farmacéutica puede ser formulada con una loción o crema adecuada que contiene el compuesto activo suspendido o disuelto en un portador. Portadores adecuados incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, monoestearato de sorbitan, polisorbato 60, cera de cetil éster, alcohol cetearilico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden también ser tópicamente aplicado al tracto intestinal bajo por formulación de supositorio rectal o en una formulación enema adecuado. También se incluyen en esta invención parches tópicamente transdérmicos y administración iontoforética . Las composiciones farmacéuticas de esta invención se pueden administrar por aerosol nasal o inhalación. Tales composiciones son preparadas de conformidad con técnicas bien conocidas en la técnica de formulación farmacéutica y pueden ser preparadas como soluciones en salina, empleado alcohol bencílico u otros preservativos adecuados, promotores de absorción para mejorar la biodisponibilidad, fluorocarburo y/o otros agentes solubilizantes o dispersantes conocidos en la técnica. Formulaciones en aerosol que se pueden utilizar en los métodos de esta invención también incluyen aquellos descritos en la Patente de los Estados Unidos 6,811,767, la descripción la cual se incorpora en este documento por referencia. Para agonistas de TLR3 de ARNds, particularmente aquellos agonistas de TLR3 de ARNds que también son moléculas de ARNsi, requieren suministro efectivo de al menos una porción del agonista de TLR3 administrado dentro de la célula de tumor. Se conoce el ARNsi desnudo por ingresar lentamente a las células por un mecanismo que aún no ha sido elucidado. Sin embargo, el ARNsi desnudo no es muy estable en suero y por lo tanto se prefiere que las composiciones de ARNsi útiles en esta invención sean formuladas en un vehiculo de suministro. Preferiblemente el vehiculo de suministro para un agonista de TLR3 de ARNds que también es un ARNsi es un liposoma. Los liposomas caen dentro de las dos clases amplias. Los liposomas catiónicos son liposomas positivamente cargados los cuales interactúan con las moléculas de ARNds negativamente cargadas para formar un complejo estable. El complejo ARNds/liposoma positivamente cargado se enlaza a la superficie celular negativamente cargada y se interioriza en un endosoma. Debido al pH acidico dentro del endosoma, los liposomas son rotos, liberando su contenido en el citoplasma celular (Wang et al., Biochem. Biophys. Res. Commun . , 1987, 147, 980-985) . Los liposomas los cuales son de pH sensible o negativamente cargados, atrapa ARNds en lugar de que ocurra la formación del complejo. El ARNds es asi atrapado en el interior acuoso de estos liposomas. Se han usado liposomas sensibles al pH, por ejemplo, para suministro de ARNds que codifica el gen timidina cinasa a monocapas celulares en el cultivo (Zhou et al., Journal of Controlled Reléase, 1992, 19, 269-274) . Un tipo principal de composición de liposoma incluye fosfolipidos diferentes a fosfatidilcolina naturalmente suministrada. Se pueden formular, por ejemplo, composiciones de liposoma neutral a partir de dimiristoil fosfatidilcolina (DMPC) o dipalmitoil fosfatidilcolina (DPPC) . Composiciones de liposoma aniónicos generalmente están formadas de dimiristoil fosfatidilglicerol, mientras los liposomas fusogénicos aniónicos están formados principalmente de dioleoil fosfatidiletanolamina (DOPE) . Otro tipo de composición liposomal es formada de fosfatidilcolina (PC), tal como por ejemplo, soya PC y huevo PC. Otro tipo es formado de mezclas de fosfolipido y/o fosfatidilcolina y/o colesterol. Los liposomas que incluyen ácidos nucleicos se han descrito, por ejemplo, en Thierry et al., WO 96/40062 (método para encapsulación de ácidos nucleicos de peso molecular alto en liposomas); Tagawa et al., Patente Estadounidense No. 5,264,221 (liposomas unidos a la proteina que contienen ARN); Rahman et al., Patente Estadounidense No. 5,665,710 (métodos para encapsular oligodesoxinucleótidos en liposomas); Love et al., WO 97/94787 (liposomas que incluyen oligonucleótidos antisentido) . Otro tipo de liposomas, transfersomas son agregados lipidos altamente deformables los cuales son atractivos para vehículos de suministro del fármaco. (Cove et al., 1998, Biochim Biophys Acta. 1368(2): 201-15). Las transfersomas se pueden describir como gotas de lipido las cuales son altamente deformables que aquellas que penetran a través de los poros, los cuales son más pequeños de la gota. Las transfersomas son adaptables al ambiente en el cual se usan, por ejemplo, pueden ser de forma adaptable, auto-reparables, frecuentemente alcanzan sus objetivos sin fragmentación y a menudo se auto-cargan. Las transfersomas pueden ser hechas, por ejemplo, agregando activadores del borde de la superficie, usualmente tensoactivos, a una composición liposomal estándar. Los agonistas de TLR3 que son ARNsh también requieren entrar en la célula, porque el agente que es administrado al sujeto es un vector de expresión de ADN que codifica el ARNsh. Tal molécula de ADN puede entrar en la célula para ser transcrita. Se entenderá que el término "agonista de TLR3" incluye tanto una molécula de ADN que codifica en la transcripción para un ARNsh que es un agonista de TLR3 de ARNds como el ARNsh transcrito. Los sistemas de suministro liposomal descritos anteriormente son uno en el cual el ADN que codifica un agonista de TLR3 de ARNsh puede entrar en la célula. Alternativamente, el ADN que codifica un agonista de TLR3 de ARNsh se puede preparar en un sistema de vector viral que tiene la capacidad de entrar en las células.

Estos son bien conocidos en la técnica e incluyen Madzak et al., J. Gen. Virol., 73:1533-36 (1992) (papovavirus SV40); Berkner et al., Curr. Top. Microbiol. Immunol . , 158:39-61 (1992) (adenovirus); Moss et al., Curr. Top. Microbiol. Immunol . , 158: 25-38 (1992) (virus vaccinia); Muzyczka, Curr. Top. Microbiol. Immunol . , 158:97-123 (1992) (virus adeno asociado) ; Margulskee, Curr. Top. Microbiol. Immunol. , 158: 67-93 (1992) (virus del herpes simple (VHS) y virus Epstein-Barr (VEB) ) ; Miller, Curr. Top. Microbiol. Immunol . , 158: 1-24 (1992) (retrovirus); Brandyopadhyay et al., Mol. Cell. Biol., 4:749-754 ( 1984 ) (retrovirus ) ; Miller et al., Nature, 357:455-450 ( 1992 ) (retrovirus) ; Anderson, Science, 256:808-813 ( 1992 ) (retrovirus ) ; C. Hofmann et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 1995; 92, pp . 10099-10103 (baculovirus) . Los sistemas liposomales y suministro a base de virus discutidos anteriormente, pueden incluir una molécula objetivo para suministro directo del agonista de TLR3 al cáncer. Tales moléculas objetivo incluyen ligandos y/o anticuerpos (o fragmentos de enlace del mismo) que reconocen una molécula en la superficie celular del tumor. Un antigeno de superficie celular de tumor particular que puede ser objetivo para tales sistemas de suministro es el mismo TLR3. Preferiblemente, el ligando se enlaza como un sitio en TLR3 que se separa de y no interfiere con el sitio de enlace agonista de TLR3. En ciertas modalidades de la invención, es deseable que un agonista de TLR3 de ARNds no entre en la célula. Sin ser ligado por la teoría, los inventores creen que en ciertos ejemplos de TLR3 agonizante expresado en la superficie de una célula cancerígena, es suficiente eliminar las células cancerigenas sin la necesidad de TLR3 citoplásmico agonista. Otros muchos tipos celulares y en particular células dendriticas, expresan TLR3 únicamente internamente, tipicamente en la membrana endosomal . Para distinguir entre diferentes ubicaciones celulares diferentes para TLR3, el agonista debe ser impedido de entrar en las células del sujeto. Una forma de lograr esto, es administrar el agonista de TLR3 de ARNds sin un vehiculo, tal como un liposoma, que mejora la capacidad del agonista para penetrar las células. La capacidad de ARNds desnudo para entrar en las células, parece ser relativamente limitada. El mecanismo por el cual el ARNds entra en las células es desconocido, pero es un proceso relativamente ineficiente y parece que preferencialmente ocurre en tejidos tales como adiposo, hepático y parte del riñon. Asi, administrar un agonista de TLR3 de ARNds que no es formulado en un liposoma u otro vehiculo que mejora la penetración celular, será suficiente para prevenir agonismo de TLR3 citoplásmico en muchos ejemplos. El tratamiento de cáncer, tipicamente es realizado junto con un procedimiento quirúrgico para remover la mayoría de todo el cáncer del sujeto. Una ventaja de tal procedimiento quirúrgico es la capacidad para ya sea implantar un dispositivo que libera un agente terapéutico directamente en el sitio del cáncer o administrar un agente terapéutico localmente al cáncer. Se pueden usar varias técnicas para proporcionar al sujeto, composiciones en el sitio de interés, tal como inyección, uso de catéteres, trocar, proyectiles, gel plurónico, stents, polímeros de liberación sostenida de fármaco y otros dispositivos, los cuales se proporcionan para accesos internos . Asi, de conformidad con otra modalidad, la invención proporciona un método de impregnación o llenado de un dispositivo implantable de liberación de fármaco que comprende las etapas de poner en contacto el dispositivo de liberación del fármaco con un agonista de TLR3 o composición que comprende un agonista de TLR3. Dispositivos implantables de liberación de fármaco incluyen pero no se limitan a, cápsulas o balas de polímero biodegradable, cápsulas de polímero difuso, no degradable y obleas de polímero biodegradables. De acuerdo con otra modalidad, la invención proporciona un dispositivo implantable de liberación de fármaco impregnado con o que contiene un agonista de TLR3 o una composición que comprende un agonista de TLR3, de forma tal que dicho agonista de TLR3 es liberado del dispositivo y es terapéuticamente activo. La invención también proporciona un método para tratar un paciente que sufre de cáncer, que comprende las etapas de: remover quirúrgicamente al menos una porción del cáncer; e implantar un dispositivo de liberación de fármaco impregnado con o que comprende un agonista de TLR3 en el sitio del cáncer. Este método opcionalmente incluye la etapa de determinar si las células del cáncer expresan TLR3 antes de la etapa de implantar el dispositivo de liberación de fármaco.

Composiciones de Combinación de Agonista de TLR3 El tratamiento con un agonista de TLR3 como se describe en este documento, puede opcionalmente ventajosamente continuar con uno o más de otros agentes terapéuticos útiles en el tratamiento de cáncer. Asi, los agonistas de TLR3 descritos en este documento pueden ser usados conjuntamente, o en combinación con otro agente terapéutico útil en el tratamiento de cáncer. Las composiciones del agonista de TLR3 descritas anteriormente pueden asi, adicionalmente incluir otros agentes terapéuticos útiles en el tratamiento de cáncer. El otro agente terapéutico puede estar en el mismo o preferiblemente en un contenedor separado. Tal agente incluye otros agonistas de TLR3 de composición molecular diferente (es decir, ya sea un tipo diferente de molécula o el mismo tipo de molécula con una secuencia de aminoácido o nucleótido diferente o una fórmula química diferente) ; citotoxinas, que incluyen pero no se limitan a aquellas descritas anteriormente para uso en complejos de ligando de TLR3 citotóxicos o tumoricidas; complejos de ligando de TLR3 citotóxicos y tumoricidas; agentes que se dirigen a un antigeno de tumor o una proteina proliferativa de tumor, tales como aquellas descritas anteriormente como objetivos para ARNsi; agentes de quimioterapia que incluyen, pero no se limita a, cisplatino (CDDP) , carboplatino, oxaliplatino, procarbazina, mecloretamina, ciclofosfamida, camptotecina, ifosfamida, melfalan, clorambucil, busulfan, nitrosurea, dactinomicina, daunorubicina, doxorubicina, bleomicina, plicomicina, mitomicina, etopósido (VP16), tamoxifeno, raloxifeno, agentes de enlace del receptor estrógeno, taxol, gencitableno, navelbina, inhibidores de transferasa de proteina famesil, transplatino, 5-fluorouracil, vincristina, vinblastina y metotrexato, o cualquier análogo o variante derivado del anterior; agentes terapéuticos y combinaciones de agentes terapéuticos para el tratamiento de cánceres específicos, tales como para cáncer de mama; doxorubicina, epirubicina, la combinación de doxorubicina y ciclofosfamida (AC) , la combinación de ciclofosfamida, doxorubicina y 5-fluorouracil (CAF) , la combinación de ciclofosfamida, epirubicina y 5-fluorouracil (CEF) , Herceptina™) , tamoxifeno, la combinación de tamoxifeno y una citotoxina, taxanos incluyendo docetaxel y Paclitaxel, la combinación de un taxano más doxorubicina y ciclofosfamida; para cáncer de colon: la combinación de 5-FU y leucovorina, la combinación de 5FU y levamisol, irinotecano (CPT-11) o la combinación de irinotecano, 5-FU y leucovorina (IFL) u oxaliplatino; para cáncer de próstata; un radioisótopo (es decir, paladio, estroncio-89 e Iridio) , leuprólido u otros agonistas LHR, antiandrógenos no esteroidales (flutamida, nilutamida y bicalutamida), antiandrógenos esteroidales (acetato de cirpoterona) , la combinación de leuprólido y flutainida, estrógenos tales como DES, clorotrianiseno, etinil estradiol, estrógenos conjugados U.S.P, DES-difosfato, terapias hormonales de segunda linea tales como aminoglutetimida, hidrocortisona, retiro de flutamida, progesterona y cetoconazol, prednisona de baja dosis y otros agentes de quimioterapia o combinación de agente reportado para producir mejoramiento subjetivo en síntomas y reducción en niveles de PSA incluyendo docetaxol, paclitaxel, estramustina/docetaxel, estramustina/etopósido, estramustina/vinblastina y estramustina/Paclitaxel; para melanoma: dacarbazina (DTIC), nitrosoureas tales como carmustina (BCNU) y lomustina (CCNU) , agentes con actividad de agente único modesto que incluye vinca alcaloides, compuestos de platino y taxanos, el régimen Dartmouth (cisplatino, BCNU y DTIC) interferona alfa (INF-A) e interleucina-2 (IL-2); para cáncer de ovario: Paclitaxel, docetaxel, cisplatino, oxaliplatino, hexametilmelamina, tamoxifeno, ifosfamida, la combinación de paclitaxel (Taxol) o docetaxel (Taxotero) y cisplatino o carboplatino, la combinación de ciclofosfamida y cisplatino, la combinación de ciclofosfamida y carboplatino, la combinación de 5-fluorouracil (5FU) y leucovorina, etopósido, doxorubicina liposomal, gencitabina o topotecano; para cáncer de pulmón; cisplatino, vincristina, vinblastina, mitomicina, doxorubicina y etopósido, solo o en combinación, la combinación de ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina/etopósido y cisplatino (CAV/EP) , la combinación de cisplatino y vinorelbina, paclitaxel, docetaxel o gencitabina, y la combinación de carboplatino y paclitaxel. Los métodos que usan una composición del agonista de TLR3 descritos en este documento, pueden también comprender tratamiento de combinación con un agente anti-angiogénico. Las composiciones de agonista de TLR3 descritas anteriormente, pueden asi también incluir un agente anti-angiogénico . La formación de nuevos vasos sanguíneos (angiogénesis) es un evento fundamental en el proceso de crecimiento del tumor y diseminación metastásica. La trayectoria del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es bien establecida como uno de los reguladores clave de este proceso. Los ejes del receptor VEGF/VEGF se componente de ligandos y receptores múltiples con traslape y especificidades de enlace ligando-receptor distintas, expresión del tipo celular y función. La activación de la trayectoria del receptor VEGF provoca una cadena de procesos de señalización que promueven el crecimiento celular endotelial, migración y supervivencia de vasculatura pre-existente . Además, la permeabilidad del vaso mediada por VEGF, y ha sido asociada con efusiones malignas. La familia del gen relacionado con VEGF comprende seis glicoproteinas secretadas referidas como VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E y factor de crecimiento de placenta (PIGF)-l y -2. Se conocen un número de agentes anti-angiogénicos que actúan de la trayectoria VEGR, cualquiera de los cuales puede ser usado de conformidad con la invención, incluyendo inhibidor de molécula pequeña, estrategias antisentido de anticuerpos de neutralización, aptámeros de ARN y ribozimas contra la familia del gen relacionado a VEGF (por ejemplo, las proteinas VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E) . También pueden ser empleadas variantes de VEGF con propiedades antagonisticas, como se describe en el documento WO 98/16551, específicamente incorporada en este documento por referencia. Agentes anti-angiogénicos ejemplares adicionales que son útiles en conexión con terapia combinada se listan en la Tabla D de la Patente Estadounidense No. 6,524,583, la descripción de los agentes e indicaciones está específicamente incorporada en este documento por referencia. Agentes anti-angiogénicos particularmente preferidos que inhiben la señalización por un receptor de tirosina cinasa incluyen, pero no se limitan a VEGFR1, VEGFR-2,3, PDGFR-beta, Fit-3, c-Kit, p38 alfa y FGFR-1. Agentes anti-angiogénicos adicionales pueden incluir agentes que inhiben uno o más de los reguladores variados de la expresión y producción de VEGF, tal como EGFR, HER-2, COX-2 o HIF-1. Otra clase preferida de agentes incluyen talidomida o el análogo de CC-5013. Inhibidores VEGF/VEGFR seleccionados del anticuerpo monoclonal (mAb) y clase de inhibidor de tirosina cinasa (TKI) incluyen, bevacuzimab (Avastin) (mAb, que inhibe VEGF-A, Genentech) ; IMC-1121B (mAb, que inhibe VEGFR-2, ImClone Systems); CDP-791 (DiFab pegilado, VEGFR- 2, Celltech) ; 2C3 (mAb, VEGF-A, Peregrine Pharmaceuticals); PTK-787 (TKI, VEGR-1, -2, Novartis); AEE788 (TKI, VEGFR-2 y EGFR, Novartis); ZD6474 (TKI, VEGFR-1, -2, -3, EGFR AstraZeneca); AZD2171 (TKI, VEGFR-1, -2, AstraZeneca); SU11248 (TKI, VEGFR-1, -2, PDGFR Pfizer); AG13925 (TKI, VEGFR-1, -2, Pfizer); AG013736 (TKI, VEGFR-1, -2, Pfizer); CEP-7055 (TKI, VEGFR-1, -2, -3, Cephalon); CP-547,632 (TKI, VEGFR-1, -2, Pfizer); VEGF-trap (VEGF-A receptor híbrido soluble, PIGF (factor de crecimiento de placenta) Aventis/Regeneron) ; GW786024 (TKI, VEGFR-1, -2, -3, GlaxoSmithKIine); Bay 93-4006 (TKI, VEGFR-1, -2, PDGFR Bayer/Onyx) ; y AMG706 (TKI, VEGFR-1, -2, -3, Amgen). Más preferidos son inhibidores de tirosina cinasa que inhibe uno o más receptores de tirosina cinasa seleccionados del grupo que consiste de VEGFR1, VEGFR-2,3 PDGFR-beta, Fit-3, c-Kit, p38 alfa y FGFR-1. Ejemplos preferidos incluyen SU11248 (Pfizer) y Bay 93-4006 (sorefanib, Bayer) . Los métodos que usan una composición del agonista de TLR3 descritos en este documento, pueden también comprender tratamiento de combinación con un agente pro-apoptótico. Las composiciones del agonista de TLR3 descritas anteriormente pueden asi también incluir un agente pro-apoptótico. Se conocen en la técnica un número de proteinas útiles como objetivos para modulación por agentes farmacéuticos, incluyendo cualquiera de aquellos revisados en Green and Kroemer, J. (2005) Clin. Investig. 115 ( 10 ): 2610-2617 , descripción la cual se incorpora por referencia en su totalidad. Ejemplos de agentes farmacéuticos pro-apoptóticos incluyen: fármacos que inducen la permeabilización de la membrana fuera de la mitocondria tal como oblimirsen (oligonucleótido antisentido Bcl-1, Genta) , EGCG (molécula pequeña de objetivo Bcl-2, Burnham Inst./Mayo Clinic), Gossypol (molécula pequeña de objetivo Bcl-2, Univ. Michigan), LY2181308 (supervivencia objetivo de oligonucleótidos antisentido (Eli Lilly/Isis), y trióxido de arsénico; fármacos que regulan la actividad p53 tal como Advexina INGN201 (adenovirus que modula p53, Introgen) , SCH58500 (adenovirus que modula p53, Schering-Plough) , ONYX-015 (adenovirus mutado ElB que modula p53, Onyx Pharma.); fármacos que modulan caspasas y/o inhibidores endógenos o caspasas tales como AEG35156 (oligonucleótido anisentido de objetivo XIAP, Aegara/Hybridon) ; fármacos que modulan receptores de eliminación y/o sus ligandos, tales como polipéptidos TNF- alfa, HGS-ETR1 (mAb agonístico de objetivo TRAIL- Rl, Human Genome Sciences), HGS-ETR2 y HGS-TR2J (dos mAb agonístico de objetivo TRAIL-R2, Human Genome Sciences) ; PR01764 (ligandos TRAIN solubles, Genentech/Amgen) ; y fármacos objetivo poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP), tal como AG014699 (molécula pequeña, Cáncer Res. Tech.); fármacos objetivo del proteosoma, tal como bortezomib (Velcade) (inhibidor de proteosoma 26S, Millennium Pharma); e inhibidores de cinasa, tal como herceptina (mAb de objetivo HER2, Roche), centuximab (mAb de objetivo HERÍ, Imclone/BMS) , gefitimib (Iressa) y erlotinib (Tarceva) (inhibidores de molécula pequeña de HERÍ, AstraZeneca y Genentech/OSI respectivamente, CCI-779 (molécula pequeña que actúa en mTOR, Novartis, Bay 43-9006 (inhibidor de molécula pequeña de cinasa que incluye Raf y VEGFR, y mesilato de imatnib (Gleevec, STI- 571) (inhibidor de molécula pequeña de cKit, PDGFR, Ber-Abl, Novartis) . Las composiciones del agonista de TLR3 descritas anteriormente, pueden incluir también otros agentes terapéuticos tales como agentes inmunomoduladores tales como factor de necrosis del tumor, interferón alfa, beta y gama, IL-2, IL-12, IL-15, IL-21, CpG que contiene ADN de hebra sencilla, agonistas de otros TLRs, otras citocinas y agentes de supresión; F42K y otros análogos de citosina; o MI P-l, MIP-I beta, MCP-1, RANTES y otras quimiocinas; agentes que afectan la sobre regulación de los receptores de superficie celular y empalmes GAP; agentes citostáticos y de diferenciación; o inhibidores de adhesión celular. Se reconocerá por aquellos expertos en la técnica, que ciertos agentes terapéuticos mostrados anteriormente, caen en dos o más de las categorías descritas anteriormente. Para el propósito de esta invención, tales agentes terapéuticos son considerados elementos de cada una de aquellas categorías de terapéuticos y la caracterización de cualquier agente terapéutico como es, en una cierta categoría especificada, lo imposibilita también a ser considerado dentro de otra categoría especificada. En aún otra modalidad, la invención proporciona una composición de material que comprende un agonista de TLR3 y otro agente terapéutico útil en el tratamiento de cáncer en formas de dosificación separada, pero asociadas entre si. El término "asociada entre si" como se usa en este documento, significa que las formas de dosificación separadas son envasadas juntas o de otra forma unidas entre si, de forma tal que es fácilmente aparente, que las formas de dosificación separadas sean propuestas para ser vendidas y administradas como parte del mismo régimen. El agente y el agonista de TLR3 son preferiblemente envasados juntos en un empaque de ampolla u otro empaque de cámaras múltiples, o conectados, separadamente en contenedores sellados (tal como bolsas de lámina o similares) que pueden ser separados por el usuario (por ejemplo, desgarrar en las lineas marcadas entre los dos contenedores) . En otra modalidad, un agonista de TLR3 de ARNds puede ser formulado junto en una composición con un inhibidor de endocitosis. El TLR3 expresa células dendriticas en su superficie endosomal y se cree, toma ARNds a través de endocitosis. El agonismo de TLR3 en células dendriticas causa maduración de células dendriticas, producción de interferonas tipo I y la secreción de varias citocinas. En un tumor ambiental, ciertas de aquellas citocinas pueden causar crecimiento de tumor. Asi, en ciertas modalidades es deseable prevenir un agonista de TLR3 de ARNds de entrar en las células dendriticas. Se pueden usar composiciones que comprenden un agonista de TLR3 de ARNds y un agente que bloquea la endocitosis para tratar cáncer caracterizado por una célula cancerígena que expresa TLR3 sin estimulación de TLR3 en células dendriticas. Ejemplos de un agente que inhibe endocitosis incluyen, pero no se limitan a, un agente de estabilización de actina, tal como latrunculina B, y un agente de neutralización de pH endosomal, tal como cloroquina o hidroxicloroquina. En una modalidad relacionada, el inhibidor de endocitosis puede ser conjugado al agonista de TLR3 de ARNds. Los dos agentes pueden ser ya sea covalentemente unidos o conjugados directamente a algún otro o enlazado via un enlazador o porción de atadura. En aún otra modalidad relacionada, un agonista de TLR3 de ARNds y un inhibidor de endocitosis puede estar presente en formas de dosificación separada, pero asociada con algún otro.

Cáncer y Métodos Terapéuticos La presente invención abarca protocolos de tratamiento que proporcionan mejores perfiles profilácticos o terapéuticos que las actúales terapias de agente único o terapias de combinación para cáncer. En particular, la invención abarca el uso de un agonista de TLR3 para la manufactura de un medicamento para la prevención, manejo, tratamiento o mejora de cáncer o uno o más síntomas del mismo. Ejemplos de cánceres que pueden ser prevenidos, manejados, tratados o mejorados de conformidad con los métodos de la invención incluyen, pero no se limita a, tumores sólidos y particularmente cánceres tales como cáncer de la cabeza, cuello, ocular, boca, garganta, esófago, pecho, hueso, pulmón, colon, recto, estómago, próstata, mama, ovarios, riñon, higado, páncreas y cerebro. La invención proporciona métodos para prevenir, manejar, tratar o mejorar cánceres que tiene el potencial para formar metástasis o tiene metastatizado un órgano o tejido (por ejemplo, hueso) o uno o más síntomas del mismo, dichos métodos comprenden administrar a un sujeto en necesidad del mismo, una o más dosis de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente de un agonista de TLR3. La invención también concierne el uso de un agonista de TLR3 para la manufactura de un medicamento para prevenir, manejar, tratar o mejorar cáncer que tiene el potencial para formar metástasis o tiene metastatizado un órgano o tejido (por ejemplo, hueso) o uno o más síntomas del mismo. Preferiblemente, el agonista de TLR3 es un compuesto de ARNds. Preferiblemente, el agonista de TLR3 es administrado más de una vez. Opcionalmente, el agonista de TLR3 es administrado a un intervalo de menos de un mes, menos de tres semanas, menos de dos semanas, o menos de una semana. Opcionalmente, tal tratamiento puede ser repetido, por ejemplo, cada 1, 2, 3, 4, 5, 6 ó 7 dias, o cada 1, 2, 3, 4 y 5 semanas o cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 meses . La presente invención proporciona métodos para prevenir, manejar, tratar o mejorar cáncer o uno o más síntomas del mismo, dichos métodos comprenden administrar a un sujeto en necesidad del mismo una dosificación de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3 en combinación con la administración de una dosificación de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de uno o más de otros agentes útiles para terapia de cáncer. La invención también concierne el uso de un agonista de TLR3 para la manufactura de un medicamento para prevenir, manejar, tratar o mejorar cáncer, en donde dicho agonista de TLR3 es usado en combinación con uno o más agentes útiles para terapia de cáncer. Preferiblemente, el agonista es un compuesto de ARNds. Preferiblemente, el agonista de TLR3 es administrado más de una vez. Opcionalmente, el agonista de TLR3 es administrado a un intervalo de menos de un mes, menos de tres semanas, menos de dos semanas o menos de una semana. Opcionalmente, tal tratamiento puede ser repetido, por ejemplo, cada 1, 2, 3, 4, 5, 6 ó 7 dias, o cada 1, 2, 3, 4 y 5 semanas o cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 meses. La invención proporciona métodos para prevenir, manejar, tratar o mejorar cáncer que ha sido refractario a uno o más agentes o terapias terapéuticos, dichos métodos comprenden administrar a un sujeto en necesidad del mismo una o más dosis de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente de un agonista de TLR3. La invención también concierne el uso de un agonista de TLR3 para la manufactura de un medicamento para prevenir, manejar, tratar o mejorar cáncer que ha sido refractario a uno o más agentes terapéuticos. Preferiblemente, el agonista de TLR3 es un compuesto de ARNds. Preferiblemente, las dosis de administran a un intervalo de menos de un mes, menos de tres semanas, menos de dos semanas o menos de una semana. Opcionalmente, tal tratamiento puede ser repetido, por ejemplo, cada 1, 2, 3, 4, 5, 6 ó 7 dias, o cada 1, 2, 3, 4 y 5 semanas o cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 meses . La presente invención proporciona métodos para prevenir, tratar, manejar o mejorar cáncer o uno o más síntomas del mismo, dichos métodos comprenden administrar a un sujeto en necesidad del mismo, un agonista de TLR3 solo o en combinación con una o más de otras terapias (por ejemplo, uno o más de otros agentes profilácticos o terapéuticos) útiles en la prevención, tratamiento, manejo o mejora de cáncer o uno o más síntomas del mismo. Otras terapias útiles en combinación con la administración del agonista de TLR3, también incluye tratamiento con cualquiera de los agentes descritos anteriormente que son útiles en las composiciones de combinación del agonista de TLR3.

En todos los regímenes de tratamiento se prefiere que el agonista de TLR3 sea un compuesto de ARNds. El tratamiento que involucra la administración de un agonista de TLR3 en combinación con una o más terapias, incluye administración y tratamiento simultáneo ya sea como terapias separadas administradas al mismo tiempo (tal como formas de dosificación múltiple o un tratamiento fisico tal como exposición a radiación, mientras se administra el agonista de TLR3), o como una terapia de combinación única (tal como la combinación de formas de dosificación únicas descritas anteriormente, que contienen un agonista de TLR3 y otro agente terapéutico. Un tratamiento que involucra la administración de un agonista de TLR3 en combinación con una o más terapias, también incluyen tratamientos consecutivos o por etapas, en donde el agonista de TLR3 se administra en un puno de tiempo y la otra terapia de administra de 1 minuto a 1 mes antes o después de este tiempo . En una modalidad, un agonista de TLR3 (preferiblemente, un ARNds) es administrado a un sujeto usando un régimen de dosificación que mantiene la concentración de plasma del agonista a un nivel deseable. En una modalidad especifica, la concentración de plasma del ARNds es mantenida a 10 µg/ml, 15 µg/ml, 20 µg/ml, 25 µg/ml, 30 µg/ml, 35 µg/ml, 40 µg/ml, 45 µg/ml o 50 µg/ml.

La concentración de plasma que es deseable en un sujeto, variará dependiendo de varios factores que incluye, pero no se limitan a, la naturaleza del cáncer, la severidad del cáncer y la circulación de vida media (estabilidad) y afinidad de unión del agonista de TLR3. Las cantidades de dosificación y frecuencia de administración proporcionadas en este documento, se abarcan por los términos terapéuticamente efectivo y profilácticamente efectivo. La dosificación y frecuencia, además tipicamente cariarán de conformidad con los factores específicos para cada paciente, dependiendo de los agentes terapéuticos o profilácticos específicos administrados, la severidad y tipo de cáncer, la ruta de administración, asi como edad, peso corporal. Preferiblemente, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3 (opcionalmente en combinación con otro agente terapéutico o protocolo terapéutico) reduce el tamaño de un tumor o la propagación de un tumor en un sujeto por al menos 5%, preferiblemente al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95% o al menos 99% relativo a un control tal como PBS.

Como se usa en este documento, los términos "no sensible" y "refractario" describen pacientes tratados con una terapia de cáncer actualmente disponible (por ejemplo, quimioterapia, terapia de radiación, cirugía, terapia hormonal y/o terapia biológica/inmunoterapia) , la cual no es clínicamente adecuada para tratar o aliviar uno o más síntomas asociados con cáncer. Tipicamente, tales pacientes sufren de enfermedad severa, persistentemente activa y requieren terapia adicional para mejorar los síntomas asociados con su cáncer. La frase puede también describir pacientes cuya respuesta a terapia aún sufre de efectos colaterales, recaída, desarrollo de resistencia, etc. En varias modalidades, "no sensible/refractario" significa que al menos alguna porción significante de las células cancerigenas no son eliminadas o detienen su división celular. La determinación de si las células cancerigenas son "no sensibles/refractarias" se puede hacer ya sea in vivo o in vitro por cualquier método conocido en la técnica para someter a ensayo la efectividad del tratamiento en células cancerigenas, usando los significados aceptados en la técnica de "refractario" en tal contexto. En varias modalidades, un cáncer es "no sensible refractario" cuando el número de células cancerigenas no ha sido significantemente reducidas, o ha incrementado.

Tipos de cánceres En varias modalidades, la presente invención proporciona métodos para determinar los regímenes de tratamiento para sujetos con cáncer. Los métodos de la invención pueden ser usados para determinar los regímenes de tratamiento de cualquier cáncer, o tumor, por ejemplo, pero no se limita a, malignidades y trastornos relacionados, que incluye pero no se limita a lo siguiente. Leucemias tales como, pero no limitadas a, leucemia aguda, leucemia linfocitica aguda, leucemias mielociticas agudas tales como leucemias mieloblástica, promielocitica, mielomonocitica, monocitica, eritroleucemias y síndrome mielodisplásico, leucemias crónicas tales como, pero no se limitan a leucemia mielocitica crónica (granulocitica) , leucemia linfocitica crónica, leucemia de la célula pilosa; policitemia vera; linfomas tales como, pero no se limitan a enfermedad de Hodgkin, enfermedad no de Hodgkin; mielomas múltiples tales como, pero no se limitan a mieloma múltiple latente, mieloma no secretoria, mieloma osteoesclerótica, leucemia celular de plasma, plasmacitoma solitaria y plasmacitoma extramedularmente; macroglobulinemia de Waldenstrom; gamopatia monoclonal de significado indeterminado; gamopatia monoclonal benigna; enfermedad de cadena pesada; sarcomas de hueso y tejido conectivo tales como, pero no se limitan a sarcoma de hueso, osteosarcoma, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, tumor de célula gigante maligno, fibrosarcoma de hueso, cordoma, sarcoma periosteal, sarcoma de tejido blando, angiosarcoma (hemangiosarcoma) , fibrosarcoma, sarcoma de Kaposi, leiomiosarcoma, liposarcoma, linfangiosarcoma, neurilemoma, rabdomiosarcoma, sarcoma sinovial; tumores cerebrales tales como, pero no se limitan a, glioma, astrocitoma, glioma troncal cerebral, ependimoma, oligodendroglioma, tumor no glial, neurinoma acústico, craniofaringioma, meduloblastoma, meningioma, pineocitoma, pineoblastoma, linfoma cerebral primaria; cáncer de mama que incluye pero no se limita a, adenocarcinoma, carcinoma lobular (célula pequeña), carcinoma intraductal, cáncer de mama medularmente, cáncer de mama mucinoso, cáncer de mama tubular, cáncer de mama papilario, enfermedad de Paget y cáncer de mama inflamatorio; cáncer adrenal tal como, pero no se limita a feocromocitoma y carcinoma adenocortical; cáncer de tiroides tal como, pero no se limita a cáncer de tiroides papilario o folicular, cáncer de tiroides medular y cáncer de tiroides anaplásico; cáncer pancreático tal como, pero no se limita a, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, vipoma, tumor que secreta somatostatina y carcinoide o el mismo tumor celular; cánceres pitutarios tales como, pero no se limitan a enfermedad de Cushing, tumor que secreta prolactina, acromegalia y diabetes insipius; cánceres oculares tales como, pero no se limita a melanoma ocular tal como melanoma del iris, melanoma coroidal, y melanoma del cuerpo ciliar y retinoblastoma; cánceres vaginales tales como carcinoma de la célula escamosa, adenocarcinoma y melanoma; cánceres de la vulva tales como carcinoma de la célula escamosa, melanoma, adenocarcinoma, carcinoma de la célula basal, y sarcoma; cánceres cervicales tales como, pero no se limitan a carcinoma de la célula escamosa y adenocarcinoma; cánceres uterinos tales como, pero no se limita a carcinoma epitelial de ovario, tumor de linea limitante, tumor de célula genn y tumor estromal; cánceres esofageales tales como, pero no se limitan a, cáncer escamoso, adenocarcinoma, carcinoma cistica adenoide, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma adenoescamosa, sarcoma, melanoma, plasmacitoma, carcinoma verrugoso y carcinoma de células de núcleos alargados (célula pequeña); cánceres estomacales tales como, pero no se limitan a adenocarcinoma, ulceración, propagación superficial, propagación difusa, linfoma maligna, liposarcoma, fibrosarcoma y carcinoma; cánceres de colon; cánceres de recto; cánceres del higado tales como, pero no se limitan a carcinoma hepatocelular y hepatoblastoma, cánceres de vejiga tales como adenocarcinoma; coloangiocarcinoma tales como, pero no se limitan a papilario, nodular y difuso; cánceres de pulmón tales como cánceres de pulmón de célula no pequeña, carcinoma de célula escamosa (carcinoma epidemoide) , adenocarcinoma, carcinoma de célula grande y cáncer de pulmón de célula pequeña; cánceres testiculares tales como, pero no se limitan a tumor germinal, seminoma, anaplásico, clásico (tipico), espermatocitico, no seminoma, carcinoma embrional, carcinoma teratoma, coriocarcinoma (tumor de saco vitelino) , cánceres de próstata tales como, pero no se limitan a adenocarcinoma, leiomisarcoma y rabdomiosarcoma; cánceres de pene; cánceres orales tales como, pero no se limitan a carcinoma de la célula escamosa; cánceres básales; cánceres de la glándula salivar tales como, pero no se limitan a adenocarcinoma, carcinoma mucoepidermoide, y carcinoma adenoidecistica; cánceres de la faringe tales como, pero no se limitan a cáncer de la célula escamosa, y venacos; cánceres de la piel tales como, pero no se limitan a carcinoma de la célula basal, carcinoma de la célula escamosa y melanoma, melanoma de propagación superficial, melanoma de nodulo, melanoma de lunar maligno, melanoma acrolentiginoso; cánceres de riñon tales como, pero no se limitan a cáncer de la célula renal, adenocarcinoma, hipernefroma, fibrosarcoma, cáncer de la célula de transición (pelvis renal y/o uréter) ; tumor de Wiikins; cánceres de vejiga tales como, pero no se limita a carcinoma de la célula de transición, cáncer de la célula escamosa, adenocarcinoma, carcinosarcoma . Además, los cánceres incluyen inixosarcoma, sarcoma osteogénico, endoteliosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, mesotelioma, sinovioma, hemangioblastoma, carcinoma epitelial, cistadenocarcinoma, carcinoma broncogénico, carcinoma de la glándula sudorípara, carcinoma de la glándula sebácea, carcinoma papilario y adenocarcinomas papilarios (para una revisión de tales trastornos, véase Fishman et al., 1985, Medicine, 2da. Edición, J.B. Lippincott Co., Philadelphia and Murphy et al., 1997, Informed Decisions: The Complete Book of Cáncer Diagnosis, Treatment and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books U.S.A., Inc., Estados Unidos de América) . Por lo tanto, los métodos de la invención también son útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres u otras enfermedades proliferativas anormales, incluyendo (pero no se limita a) lo siguiente: carcinoma, que incluye la vejiga, mama, colon, riñon, higado, pulmón, ovario, páncreas, estómago, cerviz, tiroides y piel; que incluye carcinoma de la célula escamosa; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide, que incluye leucemia, leucemia linfocitica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de la célula B, linfoma de la célula T, linfoma de Berketts; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, que incluyen leucemias mielogéneas agudas y crónicas y leucemia promielocitica; tumores de origen mesenquimal, que incluyen fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; otros tumores, que incluyen melanoma, seminoma, teratocarcinoma, neuroblastoma y glioma; tumores del sistema nervioso central y periférico, que incluye astrocitoma, neuroblastoma, glioma y scwanomas; tumores de origen mesenquimal, que incluyen fibrosarcoma, rabdomiosarcoma y osteosarcoma; y otros tumores, que incluyen melanoma, xenoderma pigmentoso, ceratoacantoma, seminoma, cáncer folicular de tiroides y teratocarcinoma. En modalidades especificas, malignidad o cambios disproliferativos (tales como metaplasias y displasias), o trastornos hiperproliferativos, son tratados en el ovario, vejiga, mama, colon, pulmón, piel, páncreas o útero. En otras modalidades especificas, se tratan sarcoma, melanoma o leucemia. En modalidades preferidas, los métodos de la invención son usados para tumores sólidos positivos TLR3. Ejemplos de tumores incluyen cánceres y melanoma de mama, colon, ovario, pulmón, cerebro y próstata. En una modalidad preferida, los métodos de la invención se dirigen al tratamiento de cáncer de mama.

Cáncer de Mama Tipos de Cáncer de Mama. La mayoría del cáncer de mama que se desarrolla en tejido glandular se clasifica como adenocarcinoma. La forma más temprana de la enfermedad, carcinoma ductal in situ (DCIS), se desarrolla solamente en conductos lácteos. El tipo más común de cáncer de mama, carcinoma ductal invasivo (IDC), se desarrolla de DCIS, se esparce a través de las paredes de conductos e invade el tejido de la mama. El término "lesión premaligna" como se usa en este documento, se define como una colección de células en una mama con características histopatológicas, las cuales sugieren que al menos una de las células tienen un riesgo incrementado de desarrollar cáncer de mama. Un experto en la técnica reconocerá que las lesiones premalignas más importantes reconocidas actualmente incluyen lóbulos expuestos (UL; notros nombres: adenosis del conducto comprimido, alteración columnar de lóbulos), hiperplasia ductal usual (UDH; otros nombres: enfermedad proliferativa sin atipia, epiteliosis, papilomatosis, enfermedad proliferativa benigna) , hiperplasia ductal atipica (ADH) , hiperplasia lobular atipica (ALH) , carcinoma ductal in situ (DCIS) y carcinoma lobular in situ (LCIS) . Otras lesiones las cuales pueden tener potencial premaligno incluyen papilomas intraductal, adenosis esclerótica y fibroadenomas (especialmente fibroadenomas atipica) . En una modalidad especifica, la colección de células es una protuberancia, tumor, masa, golpe, abombamiento, hinchazón y similares. Otros términos en la técnica, los cuales son intercambiables con "lesión premaligna" incluyen hiperplasia premaligna, neoplasia premaligna y similares. El carcinoma lobular invasivo originado en las glándulas lácteas y cuenta para 10-15% de cánceres de mama invasivos. Tipos menos comunes de cáncer de mama incluyen los siguientes: Inflamatorio (tejido de mama está caliente y aparece rojo, tiende a expandirse rápidamente) Carcinoma medular (se origina en tejido de mama central ) Carcinoma mucinoso (invasivo, usualmente se origina en mujeres después de la menopausia) Enfermedad de Paget del pezón (se origina en los conductos lácteos y se extiende a la piel de los pezones o aureola) Tumor filodes (tumor con una apariencia similar a una hoja que se extiende en los conductos; raramente se forma metástasis) Carcinoma tubular (tumor pequeño que a menudo es indetectable por palpación) Sarcomas (cáncer del tejido conductivo) y linfomas (cáncer del tejido linfático), rara vez se desarrolla en las mamas.

Formación de etapas: La etapa de un cáncer se determina por el tamaño y ubicación en el cuerpo del tumor primario, y si se ha expandido a otras áreas del cuerpo. La formación de etapas involucradas usa las letras T, N y M para valorar los tumores: tamaño del tumor primario (T) ; grado al cual se involucran los nodos linfáticos regionales (N) . Nodos linfáticos son órganos pequeños localizados a lo largo de los canales del sistema linfático del cuerpo el cual almacena células especiales que lucha contra la infección y otras enfermedades); y ausencia o presencia de metástasis distante (M) -cáncer que se ha extendido del tumor original (primario) a órganos distantes o nodos linfáticos distantes. Cada una de estas categorías es además clasificada con un número. Asi un cáncer T1-N1-M0 describirá un tumor TI, participación de nudo linfático NI y sin metástasis. Una vez que los componentes T, N y M son determinados, se asigna una "etapa" de I, II, III ó IV: Etapa I. Los cánceres son pequeños, localizados y usualmente curables. Etapa II y III. Los cánceres tipicamente son localmente avanzados y/o se ha expandido a nodos linfáticos locales.

Etapa IV. Los cánceres son metastáticos (se han expandido a partes distantes del cuerpo) y generalmente se consideran inoperables. Detalles de este sistema de clasificación son proporcionados adicionalmente en: The International Union against Cáncer details the TNM staging system (Tumor/Nodes/Metastasis) , (UICC-TNM Classification of malignant tumors. Editado por L.H. Sobin and C.H.

Wittekind. 5ta edición. New York: Wiley-Liss; 1997) . El término "muestra de una mama" como se usa en este documento, se define como un espécimen de cualquier parte o tejido de una mama. Un experto en la técnica reconocerá que la muestra puede ser obtenida por cualquier método, tal como biopsia. En otra modalidad especifica, la muestra es de epitelio de mama hiperplásica o maligna. En una modalidad especifica, la muestra es del epitelio. En otra modalidad especifica, la muestra es de una lesión premaligna . En modalidades especificas, se administra a un paciente con cáncer de mama una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3. El paciente puede o no puede tener participación de nudo linfático, puede o no puede tener metástasis de órganos distantes o nodos linfáticos distantes, puede o no puede tener cáncer recurrente, o un cáncer que es refractario o no refractario. El cáncer puede ser un cáncer de etapa I, II, III ó IV, más preferiblemente un cáncer de etapa II ó III. El cáncer puede ser un cáncer TI, T2 o T3. Opcionalmente, el cáncer es un cáncer T1-3N0-3M0. Opcionalmente, el paciente ha recibido terapia de radiación seguida por cirugía para remover tejido cancerígeno de mama. En otro aspecto, el paciente no ha recibido terapia de radiación seguida por cirugía para remover tejido cancerígeno de mama. Generalmente, aunque los métodos terapéuticos no se limitan a esto, los pacientes han recibido cirugía para remover tejido cancerígeno de mama. El agonista de TLR3 también puede ser usado como un agente profiláctico antes de la cirugía, o más preferiblemente es usado en combinación con cirugía. El agonista de TLR3 puede ventajosamente ser usado pronto o inmediatamente después de la cirugía (por ejemplo, iniciando el tratamiento con agonista de TLR3 menos de 8, 6, 4, 3, 2, 1 semana después de la cirugía), sin posibles efectos adversos en eficacia del agonista de TLR3 relacionado con inmunosupresión que puede ser esperado con compuestos inmunomoduladores. En otras modalidades especificas, se puede realizar un ensayo de diagnóstico en una muestra de una mama para determinar si unas células de expresión TLR3 comprenden temor del paciente. Tales ensayos de describen en este documento; por ejemplo, se pueden usar ventajosamente ensayos de inmunohistoquimica en base al anticuerpo. Preferiblemente se realiza una biopsia del tumor, proporcionando una muestra biológica. Una determinación que dicha muestra biológica comprende células que expresan TLR3 que indican que el paciente puede beneficiarse de la administración del agonista de TLR3. El paciente es después tratado con el agonista de TLR3. En otras modalidades especificas, se administra a paciente con cáncer de mama una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3 en combinación con una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de una o más terapias útiles para tratar o manejar cáncer de mama que incluyen, pero no se limita a: doxorubicina, epirubicina, la combinación de doxorubicina y ciclofosfamida (AC) , la combinación de ciclofosfamida, doxorubicina y 5-fluorouracilo (CAF) , la combinación de ciclofosfamida, epirubicina y 5-fluorouracilo (CEF) , Herceptin™) , tamoxifeno o la combinación de tamoxifeno y quimioterapia citotóxica. En ciertas modalidades, se administra a pacientes con cáncer de mama metastático una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3 en combinación con la administración de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de taxanos tales como docetaxel y paclitaxel. En otras modalidades, se administra a un paciente con nodo positivo, con cáncer de mama localizado una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista TLR3 en combinación con la administración de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de taxanos más doxorubicina estándar y ciclofosfamida para el tratamiento adyuvante de nodo positivo, cáncer de mama localizado .

Tra tamien to de Cáncer de Colon En modalidades especificas, se administra a un paciente con cáncer de colon una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3. El paciente puede o no puede tener formada metástasis en órganos distantes o nodos linfoides distantes, puede o no puede tener un cáncer recurrente, o un cáncer que es refractario o no refractario. Opcionalmente, el paciente ha recibido terapia de radiación seguida por cirugía para remover tejidos cancerígenos. En otro aspecto, el paciente no ha recibido terapia de radiación seguida por cirugía para remover tejido cancerígeno. Generalmente, aunque los métodos de terapia no están limitados a estos, los pacientes han recibido cirugía para remover tejido cancerígeno. También se puede usar el agonista de TLR3 como un agente profiláctico antes de la cirugía, o más preferiblemente se usa en combinación con cirugía. El agonista de TLR3 puede ventajosamente ser usado pronto o inmediatamente después de la cirugía (por ejemplo, iniciando el tratamiento de agonista TLR3 menos de 8, 6, 4, 3, 2, 1 semana después de la cirugía), sin posibles efectos adversos en eficacia del agonista de TLR3 relacionada con inmunosupresión . En modalidades especificas, se administra a pacientes con cáncer de colon una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista TLR3 en combinación con la administración de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de uno o más de otras terapias útiles para tratamiento o manejo de cáncer de colon que incluyen, pero no se limitan a : la combinación de 5-FU y leucovorina, la combinación de FU y levamisol, irinotecano (CPT-11) o la combinación de irinotecano, 5-FU y leucovorina (IFL) u oxaliplatino.

Tra tamien to de Cáncer de Prós ta ta En modalidades especificas, pacientes con cáncer de próstata son administrados con una cantidad profilácticamente o terapéuticamente de un agonista de TLR3 en combinación con la administración de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente de una o más de otras terapias empleadas para tratamiento o manejo de cáncer de próstata que incluye pero no se limita a: terapia por radiación de haz externo, implante intersticial de radioisótopos (es decir, paladio e iridio) , leuprólido u otros agonistas de LHR, antiandrógenos no esteroidales (flutamida, nilutamida y bicalutamida), antiandrógenos esteroidales (acetato de ciproterona) , la combinación de leuprólido y flutainido, estrógenos tales como DES, clorotrianiseno, etinil estradiol, estrógenos conjugados U.S.P., DES-difosfato, radioisótopos, tales como estroncio-89, la combinación de terapia por radiación de haz externo y estroncio-89, terapias hormonales de segunda linea tales como aminoglutetimida, hidrocortisona, abstención de flutamida, progesterona y cetoconazol, prednisona de baja dosis, u otros regímenes de quimioterapias reportados por producir mejoramiento subjetivo en síntomas y reducción en el nivel de PSA que incluye docetaxel, paclitaxel, estramustina/docetaxel, estramustina/etopósido, estramustina/vinblastina y estramustina/paclitaxel .

Tra tamien to de Melanoma En modalidades especificas, pacientes con melanoma son administrados con una cantidad profilácticamente o terapéuticamente de un agonista de TLR3, en combinación con la administración de una cantidad terapéuticamente o profilácticamente efectiva de una o más terapias empleadas para el tratamiento o manejo de cáncer de melanoma, que incluye pero no se limita a: dacarbazina (DTIC), nitrosoureas tales como carmustina (BCNU) y lomustina (CCNU) , agentes con actividad modesta de agente único que incluyen alcaloides vinca, compuestos de platino y taxanos, el régimen de Dartmouth (cisplatino, BCNU, y DTIC), alfa interferón (IFN-A), e interleucina-2 (IL-2).

Tra tamien to de Cáncer de Ovario En modalidades especificas, pacientes con cáncer de ovario son administrados con una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3 en combinación con una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de una o más de otras terapias empleadas para el tratamiento o manejo de cáncer de ovario que incluyen, pero no se limitan a: terapia por radiación intraperitoneal, terapia por radiación pélvica y abdominal total, cisplatino, oxaliplatino, combinación de paclitaxel (Taxol) o docetaxel (Taxotero) y cisplatino o carboplatino, en combinación de ciclofosfamida y cisplatino, la combinación de ciclofosfamida y carboplatino, la combinación de 5-fluorouracilo (5FU) y leucovorina, etopósido, doxorubicina liposomal, gerucitabina o topotecano. En una modalidad particular, pacientes con cáncer de ovario que es refractario a platino, son administrados con una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3, en combinación con la administración de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de Taxol. La invención abarca el tratamiento de pacientes con cáncer de ovario refractario que incluye, administración de ifosfamida en pacientes con la enfermedad que es refractaria de platino, hexametilmelamina (HAM) , como quimioterapia salvaje después de la falla de regímenes de combinación a base de cisplatino, y tamoxifeno en pacientes con niveles detectables de receptor de estrógeno citoplásmico en sus tumores.

Tra tamien to de Cánceres de Pulmón En modalidades especificas, pacientes con cáncer de pulmón de células pequeñas, son administrados con una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3, en combinación con la administración de una cantidad terapéuticamente o profilácticamente efectiva de una o más terapias empleadas para tratamiento o manejo de cáncer de pulmón, que incluyen pero no se limitan a: terapia por radiación toráxica, cisplatino, vincristina, doxorubicina, y etopósido, solos o en combinación, combinación de ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina/etopósido, y cisplatino (CAV/EP) , paliación local con terapia láser endobronquial, stents bronquiales y/o braquiterapia . En otras modalidades especificas, pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas, administrados con una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de un agonista de TLR3 en combinación con la administración de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente efectiva de una o más de otras terapias empleadas para el tratamiento o manejo de cáncer de pulmón incluyen, pero no se limitan a: terapia por radiación paliativa, combinación de cisplatino, vinblastina y mitomicina, combinación de cisplatino y vinorelbina, paclitaxel, docetaxel o gencitabina, combinación de carboplatino y paclitaxel, terapia por radiación intersticial por lesiones endobronquiales o radiocirugia estereotáctica .

Combinación con quimioterapia , ejemplos preferidos Una terapia adjunta contemplada en la presente invención es la quimioterapia. Las quimioterapias adjuntas pueden incluir, por ejemplo, cisplatino (CDDP) , carboplatino, oxaliplatino, procarbaxina, mecloretamina, ciclofosfamida, camptotecina, ifosfamida, melfalano, clorambucilo, busulfano, nitrosurea, dactinomicina, daunorubicina, doxorubicina, belomicina, plicomicina, mitomicina, etopósido, (VP16) , tarnoxifeno, raloxifeno, agentes de enlace al receptor de estrógeno, taxol, gencitableno, navelbina, inhibidores de transferasa de la proteina farnesilo, transplatino, 5-fluorouracilo, vincristina, vinblastina y metotrexato, o cualquier análogo o variante derivada de los mencionados anteriormente.

TaxoljPa cl i taxel . Paclitaxel, también conocido como taxol, es un alcaloide ditermeno, de este modo, posee un esqueleto de taxano en su estructura. El paclitaxel es extraído de la corteza del tejo Pacifico (Taxus brevifolia), como un compuesto natural que tiene actividad anticancerigena (Fuchus and Johnson, 1978). El paclitaxel funciona contra el cáncer interfiriendo con la mitosis. El paclitaxel es un fármaco taxoide, ampliamente usado como un tratamiento efectivo de cánceres primarios y metastásicos. El paclitaxel (Taxol) es ampliamente usado en el tratamiento de tumores sólidos de mama, ovario y otros. Los ensayos clínicos aleatorizados han mostrado una ventaja de supervivencia entre pacientes con cáncer de mama primario, quienes han recibido paclitaxel además de quimioterapia adyuvante que contiene antraciclina (Eifel et al., 2001) . Además, el paclitaxel es efectivo para tanto cáncer de mama metastásico (Holmes et al., 1991; Nabholtz et al., 1996; Bishop et al., 1999), como cáncer de ovario avanzado (McGuire et al., 1996; Piccart et al., 2000). La actividad antitumoral del paclitaxel es única, debido a que promueve el montaje del microtúbulo y estabiliza los microtúbulos, de este modo, previniendo la mitosis (Huizing et al., 1995). El paclitaxel hace este enlace reversiblemente y específicamente a la subunidad B de tubulina, formando polímeros de microtúbulos con ello, estabilizándolos contra la despolimerización y de este modo, conduciendo a la detención de crecimiento en la fase G2/M del ciclo celular (Gotaskie and Andreassi, 1994). Esto hace al taxol único en comparación con vincristina y vinblastina, el cual causa el desmontaje del microtúbulo (Gatzenicier et al., 1995). Adicionalmente, evidencia reciente indica que el sistema de microtúbulo es esencial para la liberación de varias citocinas y la modulación de la liberación de citocina puede jugar un papel principal en la actividad antitumoral del fármaco (Smith et al., 1995). Sin embargo, algunos pacientes son resistentes a terapia de paclitaxel, y las características de pacientes quienes se beneficiarán del fármaco, no han sido bien definidas. La identificación de características moleculares predictivas de la sensibilidad o resistencia al paclitaxel podrian ayudar en la selección de pacientes para recibir esta terapia. De este modo, en modalidades particulares, la presente invención se refiere a la sensibilidad de paclitaxel en un paciente que tiene cáncer. Reportes previos han demostrado que la resistencia a paclitaxel es debida a una variedad de mecanismos tales como sobre-regulación de elementos de la familia Bcl-2 anti-apoptóticos, tales como Bel-2 y BC1-XL (Tang et al., 1994); sobre regulación de los transportadores de membrana (por ejemplo, mdr-1), que resulta en un flujo de fármaco incrementado (Huang et al., 1997); mutaciones en beta-tubulina que resultan en la abolición de enlace de paclitaxel (Giannakakou et al., 1997); y sobre regulación de ErbB2 (HER2) a través de la inhibición de cinasa-1 dependiente de ciclina (Cdkl), que resultan en mitosis retardada (Yu et al., 1998). Debido a la actividad antimitótica de paclitaxel, es un fármaco citotóxico empleado en tratar varios tumores refractarios clásicos. El paclitaxel ha sido usado principalmente para tratar cáncer de mama y cáncer de ovario. También pueden ser usados en el tratamiento de cáncer de cabeza y cuello, sarcoma Kaposi y cáncer de pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas y células no pequeñas. Pueden también disminuir el curso de melanoma. Las velocidades de respuesta al tratamiento con taxol, varian entre cánceres. El cáncer de ovario refractario de fármaco avanzado, es reportado por responder a una relación de 19-36%, cáncer de mama metastásico previamente tratado a 27-62%, y varios cánceres de pulmón a 21-37%. El taxol también ha sido mostrado por producir completa remisión de tumor en algunos casos (Guchelaar et al. , 1994) . El paclitaxel es dado intravenosamente, puesto que irrita la piel y las membranas mucosas en contacto. Es tipicamente administrado intravenosamente por una infusión de 3 a 24 horas, tres veces por semana (Gychelaar et al., 1994) .

Doxorubicina . Clorhidrato de doxorubicina, 5,12-naftacendiona, ( 8s-ds ) -10- [ (3-amino-2 , 3, 6-tridesoxi-a-L-Iixo-hexopiranosil) oxi] -7, 8, 9, 10-tetrahidro-6, 8, 11-trihidroxi-g- (hidroxiacetil ) -1-metoxi-clorhidrato (clorhidrato de hidroxidaunorubicina, Adriamicina) , se usa en un amplio espectro antineoplásico. Se enlaza a ADN e inhibe la síntesis de ácido nucleico y mitosis, y promueve las aberraciones cromosomales . Se administra solo, si es el fármaco de primera elección para el tratamiento de adenoma de tiroides y carcinoma hepatocelular primario. Es un componente de primera elección en combinación con otros agentes para el tratamiento de tumores de ovario, tumores endometriales y de mama, carcinoma de células de núcleos alargados broncogénicas, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, adenocarcinoma gástrico, retinoblastoma, neuroblastoma, micosis fungoides, carcinoma pancreático, carcinoma prostático, carcinoma de vejiga, mielonia, linfoina histiocitica difusa, tumor de Wilms, enfermedad de Hodgkin, tumores adrenales, sarcoma de tejido suave, sarcoma osteogénico, sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma y leucemia linfocitica aguda. Es un fármaco alternativo para el tratamiento de células de isletas, cánceres cervicales, testiculares y adenocorticales . Es también un inmunosupresor . Puesto que la doxorubicina es escasamente absorbida, se administra intravenosamente. Las farmacocinéticas de este agente quimioterapéutico son multicompartametales . Las fases de distribución tienen vidas medias de 12 minutos y 3.3 horas. La vida media de eliminación es aproximadamente 30 horas. Cuarenta a 50% es secretada en la bilis. La mayoría del resto es metabolizado en el higado, parcialmente en un metabolito activo (doxorubicina), pero algún porcentaje es excretado en la orina. En la presencia de deterioro hepático, la dosis se debe reducir. Las dosis apropiadas son, para un adulto administradas intravenosamente, 60 a 75 mg/m2 a intervalos de 21 dias, ó 25 a 30 mg/m2 en cada uno de 2 ó 3 dias sucesivos repetidos a intervalos de 3 ó 4 semanas, o 20 mg/m2 una vez por semana. La dosis más baja debe ser usada en pacientes de edad avanzada, en donde existe escasa depresión de médula ósea causada por quimioterapia previa o invasión de médula neoplásica, o cuando el fármaco es combinado con otros fármacos supresivos mielopoyéticos . La dosis se debe reducir por 50% si la bilirrubina del suero cae entre 1.2 y 3 mg/dl y por 75% si está arriba de 3 mg/ml. El tiempo de vida total de la dosis, no debe exceder de 550 mg/m2 en pacientes con función cardiaca normal y 400 mg/m2 en personas que tienen irradiación mediastinal recibida. Alternativamente, 30 mg/m2 en cada uno de los 3 dias consecutivos, repetidos cada 4 semanas, pueden ser administrados. Dosis ejemplares pueden ser 10 mg/m2, 20 mg/m, 30 mg/m2, 50 mg/m2, 100 mg/m2, 150 mg/m2, 175 mg/m2, 200 mg/m2, 225 mg/m2, 250 mg/m2, 275 mg/m2, 300 mg/m2, 350 mg/m2, 400 mg/m2, 425 mg/m2, 450 mg/m2, 475 mg/m2, 500 mg/m2. Por su puesto, todas las dosificaciones son ejemplares, y cualquier dosificación entre estos puntos, también se espera sea empleada en la presente invención.

Combinación con Radioterapia La radioterapia, también llamada terapia por radiación, involucra el uso de radiación ionizante para tratar cánceres y otras enfermedades. La radiación ionizante deposita energía que lesiona o destruye las células en el área a ser tratada (el "tejido objetivo"), dañando su material genético, y con ello, inhibiendo la proliferación celular. La radiación ionizante induce la formación de radicales hidroxilo, colocando las células bajo estrés oxidativo. Estos radicales dañan el ADN, lo cual ocasiona citotoxicidad. Los agentes radioterapéuticos que ocasionan daño al ADN son bien conocidos en la técnica, y han sido extensivamente usados. Los agentes radioterapéuticos, a través de la producción de radicales libres relacionados con oxigeno y daño al ADN, pueden conducir a muerte celular o apoptósis. Estos agentes pueden incluir, pero no se limita a, rayos-7, rayos-X, y/o el suministro dirigido de radioisótopos a células tumorales (conocido como radioterapia interna) . La radioterapia interna puede además incluir, pero no se limita a, banquiterapia, irradiación intersticial, e irradiación intracavitaria . Otros agentes terapéuticos que son factores que dañan el ADN, incluyen microondas e irradiación por UV. Estos factores efectúan un amplio rango de daño en el ADN, en los precursores de ADN, en la replicación y reparación de ADN, y en el montaje y mantenimiento de cromosomas. Otros procedimientos a la terapia por radiación están también contemplados en la presente invención. Tales técnicas pueden comprender irradiación intraoperativa en la cual, una dosis grande de radiación externa se dirige al tumor y tejido circundante durante la cirugía; y terapia de radiación de haz de particulas, la cual involucra el uso de particulas subatómicas de rápido movimiento, para tratar cánceres localizados. La radioterapia puede además, involucrar el uso de radiosensibilizadores y/o radioprotectores para incrementar la efectividad de terapia por radiación. Los anticuerpos radioetiquetados pueden también ser usados para suministrar dosis de radiación directamente en el sitio del cáncer, esto se conoce como radioinmunoterapia . Los intervalos de dosificación para rayos-X, varian desde dosis diarias de 50 a 200 roentgens, por periodos prolongados de tiempo (3 a 4 semanas), a dosis únicas de 2000 hasta 6000 roentgens. Los intervalos de dosis para radioisótopos varian ampliamente, y dependen de la vida media del isótopo, la intensidad y tipo de radiación emitida, y la absorción por las células neoplásicas .

Cirugía Aproximadamente 60% de las personas con cáncer, serán sometidas a cirugía de algún tipo, la cual incluye cirugía preventiva, de diagnóstico o por etapas, curativa y paliativa. La cirugía curativa incluye resección en la cual todo o parte del tejido canceroso es físicamente removido, escindido y/o destruido. La resección del tumor se refiere a la remoción fisica de al menos, una parte de un tumor.

Además, a la resección del tumor, el tratamiento por cirugía incluye cirugía láser, criocirugia, electrocirugia, y cirugía microscópicamente controlada. Además, se contempla que la presente invención puede ser usada en conjunto con la remoción de cánceres superficiales, precánceres o cantidades incidentales de tejido normal. Después de la escisión de toda o parte de las células, tejido o tumor cancerosos, se puede formar una cavidad en el cuerpo. El tratamiento puede ser realizado por administración de una terapia anti-cancerigena adicional, más particularmente, un agonista de TLR3. Tal tratamiento puede ser repetido, por ejemplo, cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, ó 7 dias, o cada 1, 2, 3, 4, y 5 semanas o cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 meses. Estos tratamientos pueden ser de dosificaciones variantes también .

Terapia Hormonal La terapia hormonal puede también ser usada en conjunto con la presente invención, o en combinación con cualquier otra terapia de cáncer previamente descrita. El uso de hormonas puede ser empleado en el tratamiento de ciertos cánceres tales como, cáncer de mama, próstata, ovario o cervical, para disminuir el nivel o bloquear los efectos de ciertas hormonas tales como testosterona o estrógeno. Este tratamiento es a menudo usado en combinación con al menos, otra terapia cancerígena tal como una opción de tratamiento o para reducir el riesgo de metástasis .

Otros agentes Se contempla que otros agentes pueden ser usados en combinación con la presente invención, para mejorar la eficacia terapéutica del tratamiento. Estos agentes adicionales incluyen, agentes inmunomoduladores, agentes que afectan la sobre regulación de los receptores de la superficie celular y uniones GAP, agentes citostáticos y de diferenciación, o inhibidores de la adhesión celular. Los agentes inmunomoduladores incluyen, factor necrosis del tumor; alfa, beta y gama interferón; IL-2, IL-12, IL-15, IL-21 y otras citocinas; F42K y otros análogos de citocina; o MIP-1, MIP-1 beta, MCP-i, RANTES y otras quimiocinas. El tratamiento con un agonista de TLR3 y más particularmente, una molécula de ARNds, puede ser realizado como se describe en la literatura citada anteriormente. Además, el tratamiento puede ser realizado ya sea solo o en combinación con otros fármacos o tratamientos. El tratamiento puede incluir una reducción en el tamaño del tumor, una reducción o retardo en el crecimiento del tumor, desarrollo o metástasis, o una regresión de cáncer.

Aspectos y ventajas adicionales de esta invención, serán descritos en los siguientes ejemplos, los cuales deben ser considerados como ilustrativos y no limitantes del alcance de esta invención.

EJEMPLOS Se conoce el receptor 3 similar a Toll (TLR3) por ser expresado en células dendriticas mieloides (DC) e inducir su maduración después del enlace con ARN de doble hebra (ARNds) o sus homólogos sintéticos poliAU y poliI:C. Se han reportado varios ensayos clínicos que la inyección de ARNds está asociada con el beneficio de supervivencia en pacientes con cáncer. En el presente estudio, los inventores han cuestionado si el ARNds podria actuar directamente sobre las células tumorales a través del TLR3. Pacientes y métodos: 300 pacientes con cáncer de mama avanzado, han sido incluidos desde 1972 hasta 1979 en un ensayo aleatorizado que compara administración post-operativa de poliAU sin tratamiento. Los resultados han sido reportados mostrando una tendencia para un beneficio de supervivencia en pacientes con nodos linfáticos axilarmente involucrados (n=200) . Las biopsias de tumor a partir de estos pacientes, se tiñeron con mAb especifico de TLR3 y se determinó la correlación entre la expresión de TLR3 y la eficacia de poliAU. 44 Para investigar directamente los efectos de ARNds, tanto las células tumorales de cáncer recientemente aisladas como las lineas de células cancerigenas, fueron cultivadas con poliI:C, y se midió la apoptósis. La inclusión de TLR3 en la respuesta celular se estableció por interferencia de ARN de TLR3. Resultados: Están disponibles 182 muestras de tumor (91%) a partir de 200 pacientes pTxN+MO incluidos en este ensayo aleatorizado. El TLR3 fue fuertemente expresado por las células tumorales en 18 pacientes (10%) . La Tabla 1 reporta la relación de supervivencia de 20 años, de conformidad con el tratamiento y expresión de TLR.

Receptor 3 similar a Toll objetivo en cáncer de mama: resultados de ensayo aleatorizado y estudios in vitro Materiales y Métodos : Pacientes : Se incluyeron 200 pacientes en el presente estudio. Todos los pacientes han sido previamente incluidos en un ensayo aleatorizado prospectivo que comprada el ARN de doble hebra (poliAU) con placebo. Este ensayo ya ha sido reportado aqui en otra parte. Brevemente, este ensayo aleatorizado incluye pacientes con cáncer de mama T1-3N0-3M0 tratados con cirugía. El tratamiento consiste en inyección iv semanalmente de poliAU (Beaufour Ipsen) . Se realizaron un total de 6 inyecciones. Se administró PoliAU a una dosis fija de 60 mg/inyección. Este ensayo inicialmente incluye 300 pacientes. Puesto que los resultados iniciales del ensayo reportan una tendencia para beneficio solamente en pacientes con inclusión de nodo linfático axilar, solamente los 200 pacientes con inclusión de nudo axilar están incluidos en el presente estudio.

Inmuno teñidos : Bloques tumorales están disponibles en 182 de 200 pacientes incluidos en el presente estudio. Una sección de tejido de 5 um de gruesa sumergida en parafina, de todos los 182 tumores, se tiñó con ya sea antiTLR3 policlonal (donado de Dr . Pobolsky, Massachusetts General Hospital, Boston), o suero preinmune de conejo. Se usó un IgG anticonejo monoclonal de ratón como el anticuerpo secundario. Los inmunoteñidos se valoraron por 2 patologistas quienes fueron blindados para los campos clínicos. La expresión de TLR3 se clasificó de conformidad con el porcentaje de células tumorales teñidas y la intensidad del teñido. Un tumor se clasificó como positivo cuando más del 10% de las células tumorales fueron fuertemente teñidas con el anticuerpo anti-TLR3.

Estadísticas Se determinaron las curvas de supervivencia de conformidad con el método de Kaplan-Meier. Las curvas de supervivencia fueron comparadas usando la prueba de Khi2.

Resultados : Caracteristicas de Pacientes : Se procesaron ciento ochenta y dos tumores. El inmunoteñido no podria ser interpretado en 7 pacientes (ausencia de células tumorales en 4 pacientes, artefacto en 3 pacientes) . Los análisis fueron por lo tanto, realizados en 175 pacientes. Esto representa 87% de los pacientes incluidos en el ensayo aleatorizado. El seguimiento medio de pacientes vivos fue de 23 años (12 a 26 años) . Las caracteristicas de los pacientes se reportan en la Tabla 1. Brevemente, la edad media es 50, el número mediano del número de nodos linfáticos involucrados fue (1-31), 26% del tumor esta en la etapa pT3 y 35% se clasificó como grado III, de conformidad con Scarf and Bloom Richardson.

Tabla 1: Caracteristicas de Pacientes Inmunoteñidos El TLR3 fue fuertemente expresado por células tumorales en 18 muestras (10.4% de tumores valorables) . Se muestran inmunoteñidos en la Figura 1. El TLR3 fue principalmente expresado en la superficie celular y citoplasma de células tumorales. Los tejidos de mama normales y con carcinoma in situ, fueron teñidos con anti- TLR3 en la mayoría de los casos. Los pacientes característicos de los tumores TLR3+ no difieren de aquellos de tumores TLR3 (Tabla 1) .

Correlaciones entre la expresión de TLR3 y la supervivencia después del tratamiento con poliAU Los 20 años OS de pacientes tratados o no con poliAU, fueron 42% y 35% respectivamente (p=0.09) . Cuando solamente se consideraron pacientes con tumores TLR3, los 20 años OS fueron 41% para pacientes tratados con poliAU y 37% para aquellos asignados a un brazo de observación (p=0.52) (Figura 2a). Cuando solamente se consideraron pacientes que presentan tumores TLR3+, los 20 años OS fueron 88% para pacientes tratados con poliAU, y 22% para pacientes asignados al brazo de observación (p=0.01) ( Figura 2b) .

Conclusiones : El TLR3 es sobre expresado por células tumorales en aproximadamente 10% de casos de cáncer. La expresión de TLR3 se correlaciona con el beneficio de terapia adyuvante con poliAU en pacientes con cáncer de mama positivo a nodo linfático.

Claims (49)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiéndose descrito la presente se considera como novedad, y por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar un sujeto que tiene un cáncer, caracterizado porque el método comprende las etapas de: a. determinar si las células de dicho cáncer en dicho sujeto, expresan un receptor de TLR3, la expresión de un receptor de TLR3 es indicativa de un sujeto que responde a un agonista de TLR3, y b. administrar a dicho sujeto cuyas células cancerigenas se determinan por expresar un receptor de TLR3, una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un agonista de TLR3 y un portador farmacéuticamente aceptable.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicho agonista de TLR3 es un agonista de TLR3 de ARNds.

3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque dicho agonista de TLR3 de ARNds, es al menos 90% de doble hebra.

4. El método de conformidad con la reivindicación 2 ó 3, caracterizado porque dicho agonista de TLR3 de ARNds, se selecciona de poliA:poliU, polilipoliC, o polil :poli (Ci2U) .

5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque dicho ARNds es una molécula de poliA:poliU completamente de doble hebra, que consiste de entre 19 y 30 pares base y que comprende entre 1 y 30 modificaciones estabilizantes, o una cubierta 3', o una cubierta 5' .

6. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el cáncer se selecciona de un tumor sólido o un carcinoma.

7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el tumor sólido se selecciona de cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer renal, melanoma maligno invasivo o metastásico, cáncer de próstata, tumor cerebral, cáncer de vejiga y cáncer hepático.

8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque dicho tumor sólido es un cáncer de mama .

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque dicho cáncer de mama es un cáncer de mama positivo de nodo linfático, que involucra 1 a 3 nodos linfáticos.

10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, caracterizado porque dicha determinación de si las células de dicho cáncer en el sujeto expresan un receptor de TLR3, se realiza ex vivo en una muestra de biopsia de dicho cáncer, usando un ligando especifico de TLR3.

11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque dicho ligando especifico de TLR3 es un anticuerpo o un fragmento o un derivado del mismo.

12. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque dicho ligando especifico de TLR3 es un cebador o sonda de ácido nucleico especifico de TLR3.

13. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque comprende la etapa adicional de remover quirúrgicamente, una porción de dicho tumor sólido antes de administrar dicho agonista de TLR3.

14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque dicho sujeto es administrado con dicho agonista de TLR3 aproximadamente una vez cada semana por al menos, aproximadamente seis semanas.

15. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, caracterizado porque comprende la etapa adicional de administrar a dicho sujeto, un segundo agente terapéutico seleccionado de un agonista de TLR3 de diferente composición molecular que el agonista de TLR3 administrado en la etapa b; una citotoxina, un complejo de citotoxina-ligando de TLR3, un agente que inhibe la expresión o una actividad de un antigeno tumoral, un agente que inhibe la expresión o una actividad de una proteina proliferativa tumoral, un agente de quimioterapia, un agente o combinación de agentes tipicamente usados para el tratamiento del cáncer especifico a ser tratado, un agente inmunoestimulador, un agente de inmunosupresión, una citocina o un análogo de citocina, quimiocinas, un agente que afecta la sobre regulación de un receptor de la superficie celular, un agente que afecta las uniones GAP, un agente citostático, un agente que inhibe la diferenciación, o un agente que inhibe la adhesión celular, en donde dicho segundo agente terapéutico es administrado separadamente como parte de un régimen de dosificación múltiple, o como parte de dicha composición farmacéutica.

16. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11-6, caracterizado porque adicionalmente comprende la etapa de tratar dicho sujeto con radioterapia.

17. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque dicha composición agonista de TLR3 es formulada en un dispositivo implantable de liberación de fármaco, que es implantado cerca del sitio de dicho tumor sólido durante el procedimiento quirúrgico.

18. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque dicho agonista de TLR3ds es un ARNsi o un ARNsh que específicamente se enlaza a un ARNm que codifica un antigeno tumoral u otra proteina involucrada en la proliferación del tumor.

19. Un método para tratar un sujeto que tiene cáncer, caracterizado porque el método comprende las etapas de: a. administrar a dicho sujeto, una cantidad efectiva de un agente que causa sobre regulación de la expresión de TLR3, y b. administrar a dicho sujeto, una cantidad efectiva de un agonista de TLR3.

20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque comprende la etapa adicional de determinar si las células de dicho cáncer en dicho sujeto, expresan un receptor de TLR3, dicha etapa adicional es realizada antes de la etapa b.

21. Una composición de materia para tratar un sujeto que tiene un cáncer, caracterizada porque comprende, en formas de dosificación separadas: a. un agente que ocasiona sobre regulación de la expresión de TLR3, y b. un agonista de TLR3, en donde dicho agente y dicho agonista, están asociados entre si en dicha composición de materia.

22. Un kit para determinar si un agente es capaz de incrementar la susceptibilidad de un cáncer para tratamiento con un agonista de TLR3, caracterizado porque el kit comprende: a. una célula cancerígena o una linea de célula cancerígena, la cual expresa TLR3; b. un ligando especifico de TLR3; y c. un reactivo para detectar el enlace de dicho ligando especifico de TLR3 a un TLR3 expresado por dicha célula cancerígena.

23. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : a. un agonista de TLR3; b. un segundo agente terapéutico seleccionado de un agonista de TLR3 de diferente composición molecular de un agonista de TLR3 de parte a; una citotoxina, un complejo de citotoxina-ligando de TLR3, un agente que inhibe la expresión o una actividad de un antigeno tumoral, un agente que inhibe la expresión o una actividad de una proteina proliferativa tumoral, un agente de quimioterapia, un agente o combinación de agentes tipicamente usados para el tratamiento del cáncer especifico a ser tratado, un agente inmunoestimulador, un agente de inmunosupresión, una citocina o un análogo de citocina, quimiocinas, un agente que afecta la sobre regulación de un receptor de la superficie celular, un agente que afecta las uniones GAP, un agente citostático, un agente que inhibe la diferenciación, o un agente que inhibe la adhesión celular, o un inhibidor de endocitosis; y c. un portador farmacéuticamente aceptable.

24. Una composición de materia para tratar un sujeto que tiene un cáncer, caracterizada porque comprende, en formas de dosificación separadas: a . un agonista de TLR3; y b. un segundo agente terapéutico seleccionado de un agonista de TLR3 de diferente composición molecular, el agonista de TLR3 de parte a; una citotoxina, un complejo de citotoxina-ligando de TLR3, un agente que inhibe la expresión o una actividad de un antigeno tumoral, un agente que inhibe la expresión o una actividad de una proteina proliferativa tumoral, un agente de quimioterapia, un agente o combinación de agentes tipicamente usados para el tratamiento del cáncer especifico a ser tratado, un agente inmunoestimulador, un agonista de TLR2, TLR4 , TLR7, TLR8 o TLR9, un agente de inmunosupresión, una citocina o un análogo de citocina, quimiocinas, un agente que afecta la sobre regulación de un receptor de la superficie celular, un agente que afecta las uniones GAP, un agente citostático, un agente pro-apoptótico, un agente que inhibe la diferenciación, un agente que inhibe la adhesión celular, o un inhibidor de endocitosis, en donde dicho agente y dicho agonista, están asociados entre si en dicha composición de materia.

25. Un método para impregnar o llenar un dispositivo implantable de liberación de fármaco, caracterizado porque comprende la etapa de contactar dicho dispositivo de liberación de fármaco con un agonista de TLR3 o una composición que comprende un agonista de TLR3.

26. Un dispositivo implantable de liberación de fármaco impregnado con o que contiene un agonista de TLR3 o una composición que comprende un agonista de TLR3, caracterizado porque dicho agonista de TLR3 es liberado de dicho dispositivo y es terapéuticamente activo.

27. Un método para valorar la respuesta de un sujeto que tiene cáncer a un tratamiento que usa un agonista de TLR3 o seleccionar un sujeto que tiene un cáncer que responde a un tratamiento usando un agonista de TLR3, caracterizado porque el método comprende la etapa de determinar si las células cancerigenas en dicho sujeto, expresan un receptor de TLR3, la expresión de un receptor de TLR3 es indicativa de un sujeto que responde.

28. Un kit para valorar la respuesta de un sujeto que tiene cáncer a un tratamiento que usa un agonista de TLR3 o para seleccionar sujetos que tienen un cáncer que responden a un tratamiento usando un agonista de TLR3, caracterizado porque el kit comprende: a. un ligando especifico de TLR3; y b. reactivos adicionales para detectar la expresión de un receptor de TLR3 en una célula cancerígena en una muestra.

29. El kit de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el ligando especifico de TLR3 se selecciona de un anticuerpo o un fragmento o un derivado del mismo; un cebador o sonda de ácido nucleico especifico de TLR3, o una molécula de ARN de doble hebra.

30. Un complejo, caracterizado porque comprende: a. un ligando de TLR3; y b. un agente citotóxico, en donde dicho agonista y agente citotóxico están unidos entre si directamente a través de un enlace covalente, unidos entre si a través de un enlace no covalente, conjugados entre si directamente o a través de una porción enlazante o están presentes en un portador o vehiculo farmacéutico único.

31. El complejo de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque dicho ligando de TLR3 se selecciona a partir de un anticuerpo, o un fragmento o derivado del mismo que se enlaza específicamente a TLR3; o una molécula de ARN de doble hebra .

32. Un método para determinar si un compuesto de prueba es empleado para el tratamiento de cáncer, caracterizado porque dicho método comprende la etapa de determinar si dicho compuesto de prueba es un agonista de TLR3.

33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque dicha determinación si un compuesto de prueba es empleado para el tratamiento de un cáncer, comprende las etapas de: a. contactar dicho compuesto de prueba con una célula cancerígena, identificado por la presencia de TLR3 en su superficie celular; y b. determinar si dicho compuesto de prueba induce un efecto biológico mediado por TLR3.

34. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque dicho efecto biológico mediado por TLR3 es apoptósis o muerte celular de dicha célula cancerígena.

35. Un kit para determinar si un compuesto de prueba es empleado para el tratamiento de cáncer, caracterizado porque dicho kit comprende: a. un cáncer identificado por la presencia de TLR3 en su superficie celular; y b. un reactivo para detectar si dicho compuesto de prueba ocasiona apoptósis mediada por TLR3 o muerte celular de dicho cáncer; y opcionalmente, que comprende un reactivo que detecta el agonismo de TLR3 por dicho compuesto de prueba.

36. Uso de un agonista de TLR3 para la manufactura de un medicamento para tratar cáncer en un sujeto, en donde dicho cáncer en dicho sujeto comprende células cancerigenas que expresan un receptor de TLR3.

37. El uso de conformidad con la reivindicación 36, en donde dicho agonista de TLR3 es un agonista de TLR3 de ARNds.

38. El uso de conformidad con la reivindicación 37, en donde dicho agonista de TLR3 de ARNds, es al menos 90% de doble hebra.

39. El uso de conformidad con la reivindicación 38, en donde dicho agonista de TLR3 de ARNds, se selecciona de poliA:poliU, poliI:poliC, o polil :poli (Ci2U) .

40. El uso de conformidad con la reivindicación 39, en donde dicho ARNds es una molécula de poliA:poliU completamente de doble hebra, que consiste de entre 19 y 30 pares base y que comprende entre 1 y 30 modificaciones estabilizantes, o una cubierta 3', o una cubierta 5'.

41. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36-40, en donde el cáncer se selecciona de un tumor sólido o un carcinoma.

42. El uso de conformidad con la reivindicación 41, en donde el tumor sólido se selecciona de cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer renal, melanoma maligno invasivo o metastásico, cáncer de próstata, tumor cerebral, cáncer de vejiga y cáncer hepático .

43. El uso de conformidad con la reivindicación 42, en donde dicho tumor sólido es un cáncer de mama.

44. El uso de conformidad con la reivindicación 43, en donde dicho cáncer de mama es un cáncer de mama positivo de nodo linfático, que involucra 1 a 3 nodos linfáticos .

45. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36-44, en donde dicha determinación de si dicho cáncer expresa un receptor de TLR3, se logra usando contactar un ligando especifico de TLR3 ex vivo con una muestra de biopsia de dicho cáncer.

46. El uso de conformidad con la reivindicación 45, en donde dicho ligando especifico de TLR3 es un anticuerpo o un fragmento o un derivado del mismo.

47. El uso de conformidad con la reivindicación 46, en donde dicho ligando especifico de TLR3 es un cebador o sonda de ácido nucleico especifico de TLR3.

48. El uso de conformidad con la reivindicación 41, en donde dicho medicamento está indicado para uso en un sujeto después de la remoción quirúrgica de una porción de dicho tumor sólido.

49. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36-48, en donde dicho medicamento es indicado para administración a dicho paciente aproximadamente una vez cada semana pro al menos aproximadamente seis semanas.