MX2007002169A - Inhibidores de cdk de purina y pirimidina y su uso para el tratamiento de enfermedades inmunes. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere al uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmaceuticamente aceptable, en la preparacion de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 o una sal del mismo farmaceuticamente aceptable se administra en una cantidad suficiente para la regulacion reductora de los niveles de anticuerpos antinucleares. Un aspecto mas de la invencion se refiere a una combinacion que comprende un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmaceuticamente aceptable, y metilprednisolona, y su uso en el tratamiento de enfermedades asociadas con anticuerpos antinucleares, tal como SLE.

Description

INHIBIDORES DE CDK DE PURINA Y PIRIMIDINA Y SU USO PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES INMUNES La presente inve?ción se refiere a un método para tratar I enfermedades asociadas con anticuerpos antinucleares. Más I específicamente, pero n'o exclusivamente, la invención se refiere a 1 métodos para tratar enfermedades reumáticas autoinmunes, tales i como lupus eritematoso ¡ sistémico (SLE) humano, y composiciones y combinaciones farmacéuticas para las mismas. Antecedentes de la Invención i El propósito del sistema inmune es proteger el cuerpo de ! sustancias (antígenos)l potencialmente dañinas, tales como microorganismos, toxinas, células cancerosas y sangre o tejidos extraños de otra persona o especie. Los antígenos son destruidos por la respuesta inmune, la cual incluye la producción de anticuerpos (moléculas que se unen i al antígeno y lo hacen más susceptible a la destrucción) y linfocitos sensibilizadores (células blancas de la sangre i especializadas que reconocen y destruyeron a antígenos particulares). I Los desórdenes del sistema inmune ocurren cuando la respuesta inmune es inapropiada excesiva o deficiente. Los desórdenes I autoinmunes se refieren , a cualquier enfermedad caracterizada por el i funcionamiento anormal del sistema inmune que causa que el sistema inmune produzca anticuerpos contra sus propios tejidos. Esto es causado por una reacción hipersensible donde el sistema inmune i reacciona a sustancias que normalmente ignoraría, es decir, tejidos del cuerpo "mismo" normales. Normalmente, el sistema inmune es capaz de diferenciar tej ido "propio" de "no propio1!1. Algunas células (linfocitos) del sistema inmune se sensibilizan bontra células de tejido "propio" , pero estos I linfocitos deficientes son controlados (suprimidos) usualmente por otros linfocitos. Los desórdenes a utoinmu nes ocu rren cua ndo se trastorna el proceso normal de control, o si el tejido corporal normal es alterado de manera que ya no se reconoce como "propio". Los desórdenes ! autoinmu nes resu ltan típicamente en la ¡ destrucción de uno o más tipos de tejidos corporales , crecimiento anormal de un órgano o cambios en la función del órgano. El desorden puede afectar solamente un tipo de órgano o tejido o puede I afectar múltiples órganos y tejidos. Los órganos y tejidos afectados comúnmente por desórdenes autoinmu nes incluyen componentes de la sangre, tales como células sangu íneas rojas, vasos sangu íneos, tejidos conectivos, glánd ulas endocrinas tales como la tiroides o el I páncreas, órganos taléis como el riñon o el h ígado , músculos, coyu nturas y piel. ¡ Ejemplos de desordenes autoinmunes o relacionados con i autoinmu n idad incluyen :! tiroiditis de Hashimoto, anemia perniciosa , enfermedad de Addisonj, diabetes tipo I , artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, dermatomiositis, síndrome de Sjogren , lupus eritematoso inducido por fármacos, esclerosis múltiple, miasten ia i gravis, sínd rome de Reiter y enfermedad de Grave . Los síntomas de enfermedades a utoin munes varían ampliamente dependiendo del tipo de enfermedad. Sin embargo, las enfermedades autoinmunes están asociadas con frecuencia con síntomas no específicos tales como fatiga, mareo, malestar (sentimiento no específico de no estar bien), fiebre y elevaciones de temperatura de bajo grado. ¡ La enfermedad autoinmune específica resulta en la destrucción i de un órgano o tejido lo que resulta en el funcionamiento disminuido i de un órgano o tejido (por ejemplo, las células de isleta del páncreas son destruidas en la diabetes), y/o un incremento en tamaño de un i órgano o tejido (por ¡ejemplo, agrandamiento de tiroides en la enfermedad de Grave)1. Los síntomas varían dependiendo del desorden específico y eli órgano o tejido afectado. La autoinmunidad se controla a través de la supresión balanceada del sistema ; inmune. El objetivo es reducir la respuesta inmune contra el tejido corporal normal mientras que deja intacto el i sistema inmune contra microorganismos y tejidos anormales. Los tratamientos clínicos para enfermedades autoinmunes involucran típicamente el uso ! de corticosteroides e inmunosupresores (incluyendo ciclofosfamida o azatioprina) que reducen la respuesta inmune. Sin embargo, muchos de los tratamientos disponibles hasta la fecha están asociados^ con severos efectos secundarios adversos. La presente invención busca proporcionar métodos terapéuticos t alternativos para tratar: enfermedades autoinmunes que idealmente i sean capaces de reducir los síntomas y controlar el proceso autoinmune, mientras que se mantiene la habilidad de combatir la enfermedad. Más particularmente, la invención se refiere al tratamiento de enfermedades asociadas con anticuerpos antinucleares, especialmente enfermedades autoinmunes tales como el lupus eritematoso ¡sistémico. La invención busca también proporcionar combinaciones y composiciones farmacéuticas adecuadas para tratar tales desórdenes. i Exposición de la Invención í Un primer aspecto de la invención se refiere al uso de un inhibidor de CDK2 y/q CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable se administra en una cantidad i suficiente para regulación reductora de los niveles de anticuerpos antinucleares. Un segundo aspecto de la invención se refiere a un método para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares en un sujeto, dicho método que comprende administrar al sujeto un inhibidor i de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente I aceptable, en una cantidad suficiente para regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares. Un tercer aspecto! de la invención se refiere a un método para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares en un sujeto mediante la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares en dicho sujeto, dicho método que comprende administrar un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en una cantidad suficiente para regulación productora del nivel de anticuerpos antinucleares. Un cuarto aspecto de la invención se refiere a un método para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares en un sujeto mediante la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares, dicho método que comprende administrar un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, de manera que dicha enfermedad es tratada. Un quinto aspecto de la invención se refiere a un método de regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares en un sujeto, dicho método que comprende administrar un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, a dicho sujeto en una cantidad suficiente para regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares. Un sexto aspecto de la invención se refiere a un método de regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares en una célula, dicho método que comprende poner en contacto dicha célula con un inhibidor de CD^2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en una cantidad suficiente para la regulación reductora del nivel de anticuerpos nucleares en dicha célula. Un séptimo aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, dicha composición que comprende un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, en una cantidad suficiente para la i regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares, mezclar con u n diluyente, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.

Un octavo aspecto de la invención se refiere a u na combinación ! que comprende un inhibidor de C DK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona . i U n noveno aspecto se refiere a una composición farmacéutica que comprende u na combinación de acuerdo con la invención y un portador, diluyente o excipiente fa rmacéuticamente aceptable. U n décimo aspecto de la invención se refiere a un prod ucto farmacéutico q ue comprende u n inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o u na sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona como una preparación combinada para uso simu ltáneo, secuencial o por sepa rado en terapia . U n onceavo aspecto de la invención se refiere a una I composición farmacéutica que comprende: un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; y i metilpredn isolona ; ¡ i mezclados con ¡ un diluyente, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. Un doceavo aspecto se refiere a u na combinación de acuerdo i con la invención en la preparación de u n medicamento pa ra trata r u na i enfermedad asociada con anticuerpos antin ucleares . i U n treceavo aspecto de la invención se refiere a l uso de u n inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la prepa ración de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde el medicamento es para uso en combinación con metilprednisolona. U n decimocuarto aspecto de la invención se refiere al uso de metilprednisolona en la ¡ preparación de u n medicamento para trata r una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde el medicamento es para uso en combinación con un inhibidor de C DK2 y/o C DK7 y/o CDK9, ¡ o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. i Un decimoqu into aspecto de la invención se refiere al uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo i farmacéuticamente aceptable, y metilpred nisolona , en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antin ucleares. U n decimosexto aspecto de la invención se refiere al uso de un i inh ibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 , o u na sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de1 una enfermedad asociada con anticuerpos antin uclea res, en dondß i dicho tratamiento comprende ad m inistrar a un sujeto un inhibidor de CDK2 y/o C DK7 y/o C DK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable y metilprednisolona de manera i simultánea, secuencial o por separado. U n decimoséptimo aspecto de la invención se refiere a u n método para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares en un sujeto, dicho método que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente aceptable de: un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; y metilprednisolona. Para facilidad de referencia, estos y aspectos adicionales de la presente invención se discuten ahora bajo encabezados de sección I apropiados. Sin embargo, las enseñanzas en cada sección no están i limitadas necesariamente a cada sección en particular. Descripción Detallada de la Invención Inhibidores de CDK2 y/o CDK7 v/o CDK9 La presente invención se refiere al uso de uno o más inhibidores de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9. Para evitar dudas, el inhbidor puede ser un inhibidor de cualquiera de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o cualquier combinación de los mismos. En una modalidad preferida, el inhibidor es un inhibidor de CDK2. ! En otra modalidad preferida, el inhibidor es un inhibidor de CDK7. ! En otra modalidad preferida, el inhibidor es un inhibidor de CDK9. i En otra modalidad preferida, el inhibidor es un inhibidor de CDK7 y CDK9. ¡ Los métodos paraj ensayar la actividad de CDK son conocidos por aquellos expertos de la técnica. Detalles adicionales se delinean en la sección adjunta de Ejemplos. De preferencia, el inhibidor inhibe un valor de IC50 para uno o más de CDK2, CDK7 o CDK9 de menos de 1 mM, más preferiblemente menos de 100 µM, aún más preferible menos de 50 µM, más preferiblemente menos de 25 µM, más preferiblemente menos de 10 µM, aún más preferible menos de 1 µM o 0.5 o 0.1 µM. Ejemplos adecuados de inhibidores de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 incluyen derivados de purina, tales como aquellos descritos en EP 0874847B (CNRS), WO 03/002565 (Cyclacel Limited), WO 04/016613 (Cyclacel Limited) y WO ,04/016612 (Cyclacel Limited); y derivados de pirimidina tales como aquellos descritos en WO 01/72745, WO 02/079193, WO 03/029248, WO 04/043953 (todas en el nombre de Cyclacel Limited). En una modalidad preferida de la invención, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 se selecciona de los siguientes: m Bl P] [8] [9] [10] [11] [12] y sales de los mismos farmacéuticamente aceptables. i En una modalidad! particularmente preferida, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 se selecciona de los compuestos [1 ] a [3], [5] a [8], [1 1 ] y [12]. ¡ En otra modalidad particularmente preferida, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 se selecciona de los compuestos [4], [9] y En todavía otra modalidad particularmente preferida, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 es el compuestos [7]. Hasta la fecha , no ha habido sugerencia de que los inhibidores de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 serían efectivos en la reducción del nivel de anticuerpos antinucleares. Tampoco ha habido ninguna enseñanza o sugerencia en la técnica de que tales inhibidores podrían ser usados en terapia en combinación con metilprednisolona en el tratamiento de desórdenes autoinmunes;. En una modalidad ¡preferida , el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 se selecciona de rpscovitina, olomoucina y purvalanol A. En una modalidad aún más preferida de la invención, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 es roscovitina. La roscovitina o ¡2-[(1 -etil-2-hidroxietil)amino]-6-benzilamina-9-isopropilpurina, se describe también como 2-(1 -D, L-hidroximetil propilamino)-6-benzilam?na-9-isopropil purina. Como se usa en la presente, el término "roscovitina" abarca los enantiómeros R y S resueltos, mezclas de los mismos y el racemato de los mismos. Como se usa en la presente, el término "CYC202" se refiere al enantiómero R de ¡ roscovitina, a saber, 2-(1 -R-hidroximetil i propilamino)-6-benzilamino-9-isopropil purina, cuya estructura se muestra a continuación. ! La actividad in vitro de la roscovitina es como sigue : Aunq ue el uso de roscovitina en el tratamiento de desórdenes autoinmu nes está documentado en la técnica, a la fecha , no ha habido sugerencia de q ue sería efectivo en la reducción del nivel de anticuerpos antinucleares. N i tampoco ha habido ningu na enseñanza o sugerencia en la técnica de q ue la roscovitina podría ser usada en terapia en combinación con metilprednisolona en el tratamiento de desórdenes autoinmunes1. Para todas las modalidades de la i nvención , de preferencia la roscovitina está en la forma del enantiómero R, a saber 2- ( 1 -R-hidroximetil propilamino)-6-benzilamino-9-isopropil pu rina , aludida en lo sucesivo como "CYC202". Actividad Terapéutica Como se mencionó antes , la presente invención se refiere al uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, se administra en una cantidad suficiente para la regulación reductora de los niveles de anticuerpos antinucleares. Los anticuerpos antinucleares (ANAs) son anticuerpos inusuales, detectables en la sangre¡, que tienen la capacidad de unirse a ciertas i estructuras dentro del núcleo de las células. Los ANAs se encuentran i en pacientes cuyo sistema inmune puede estar predispuesto para I causar inflamación contra sus propios tejidos corporales. Los anticuerpos que son dirigidos contra los propios tejidos de uno se aluden como auto-anticuerpos. La propensión del sistema inmune para trabajar contra su propio cuerpo se alude como autoinmunidad . La presencia de anticuerpos antinucleares es un distintivo de las enfermedades autoinmunes. Los anticuerpos antinucleares son un grupo diverso de anticuerpos, dirigidos con frecuencia a grandes complejos celulares que¡ contienen componentes de proteína y ácido nucleico. Los anticuerpos antinucleares que ocurren con más ¡ frecuencia reaccionan cbn los componentes de complejos de ADN- ¡ proteína o ARN-proteína '[Van Venrooij W. J. et al; Von Mulen C. A. et al]. Los estudios han indicado que la producción de estos anticuerpos, los cuales son generalmente anticuerpos de IgG de alto título, de alta afinidad, depende de células T y es impulsada por el a utoantígeno anfitrión [Reichlin M . et al] . Para que una enfermedad se defina como autoinmune, debe mostrarse que el daño al tejido es causado por una respuesta inmune adaptativa para auto antígenos. Las enfermedades autoinmunes pueden ser mediadas por auto-anticuerpos y/o por células T auto-reactivas, y el daño al tej ido puede resultar del ataque directo sobre las células que llevan el antígeno, a parti r de la formación de complejo inmune, o de la inflamación local. Las células T pueden involucrarse d irectamente en la inflamación o la destrucción celular, y se requ iere también que mantenga n respuestas auto-anticuerpo. De manera i similar, las células B pueden ser células importantes que presentan antígeno para sostener ¡ respuestas de célula T específicas de auto-antígeno. ¡ Las células T C D4 activan selectivamente aquellas células B que unen epitopes q ue están vinculados físicamente al péptido reconocido por la célula T. así, tanto las células B autoreactivas como las células T autoreactivas son req ueridas para una enfermedad q ue involucra autoinmu nidad . : La producción de¡ anticuerpos anti nucleares puede estudiarse i solamente in vivo puesto que la producción de estos anticuerpos i req uiere un sistema inmune disfuncional que comprenda células tanto B como T, y una fa lla para seleccionar y destruir células i nmunes q ue se reconocen así mismas. Los ensayos in ' vitro para la función de células T son l herra mientas de clasificación apropiadas para identificar compuestos q ue pueden tener la habilidad de mod ular la respuesta inmu ne en la situación compleja de enfermedad autoinmune. Uno de tales ensayos I es un ensayo de proliferación de células T, cuyos detalles adicionales se exponen en los Ejemplos adju ntos. En las enfermedades autoinmunes q ue involucran prod ucción de anticuerpos antinucleares se requiere la función normal de células T para estimular la prod ucción de anticuerpos por células B. En consecuencia , los compuestos que afectan la función de las células T (una medida de la función de las célu las T ¡es la habilidad de proliferar en respuesta a u n estímulo inmune) deben, evitar también la formación de anticuerpos, controlando la habilidad de las células T de comu nicarse con células B y además evitando que las células T emigren al sitio de daño autoinmune. Como se usa en la presente, el término "anticuerpos antinucleares" incluye anticuerpos anti-ADN , anticuerpos anti-ARN y anticuerpos dirigidos contra componentes n ucleares de proteína . I Las enfermedades asociadas con anticuerpos antin ucleares incluyen enfermedades reumáticas autoinmunes y autoinm unidad específica del órgano. De preferencia, la enfermedad reumática autoinmu ne se selecciona de lupus inducido por fármacos, lupus eritematoso sistémico (SLE) y artritis reumatoide. La artritis reumatoide es u na enfermedad autoinmu ne crón ica que involucra la inflamación en el revestimiento de las coyuntu ras y/u otros órganos internos., La artritis reumatoide es una enfermedad sistémica que afecta al cuerpo entero y es una de las formas más comunes de artritis. Se caracteriza por la inflamación de la membrana que recubre la coyuntura, lo cual causa dolor, rigidez, calor, enrojecimiento e hinchazón. El recubrimiento inflamado de la junta, el sinovio, puede invadir y dañar hueso y cartílago. Las células inflamatorias liberan enzimas que pueden digerir hueso y cartílago. La coyuntura involucrada puede perder su forma y alineación, lo que resulta en dolor y pérdida de movimiento. Los síntomas incluyen típicamente la inflamación de las coyunturas, hinchazón, dificultad de movimiento y dolor. Otros síntomas incluyen pérdida de apetito, fiebre, pérdida de energía y anemia. Hasta la fecha, los métodos de tratamiento se enfocan en el alivio del dolor, la reducción de la inflamación, la detención o disminución del daño a la coyuntura y la mejoría de la función y bienestar del paciente. Las medicaciones pueden dividirse en dos grupos: (i) medicaciones sintomáticas (tales como NSAIDS, aspirina, analgésicos y corticosteroides) los cuales ayudan a reducir el dolor en la coyuntura , la rigidez y la hinchazón ; y (ii) fármacos antireumáticos de modificación de la enfermedad, tales como bajas dosis de metotrexato, leflunomida, D-Penicilamina, sulfasalazina, terapia con oro, minociclina , azatioprina, hidroxicloroquina (y otros anti-malarias), ciclosporina y agentes biológicos. Más preferiblemente, la enfermedad reumática autoinmune es lupus eritematoso sistémico (SLE) . Lupus Eritematoso Sistémico En una modalidad preferida, la invención se refiere al tratamiento de lupus eritematoso sistémico (conocido también como lupus eritematoso diseminado; SLE; lupus; lupus eritematoso) es un I desorden autoinmune inflamatorio, crónico que puede afectar muchos sistemas de órganos incluyendo la piel, coyunturas y órganos internos. I Aunque la gente con la enfermedad puede tener mucho síntomas diferentes, algunos de los más comunes incluyen fatiga extrema, I coyunturas dolorosas p hinchadas (artritis), fiebre inexplicable, comezón en la piel y problemas de riñon. Hasta la fecha no hay cura para SLE. J La enfermedad afecta nueve meses más mujeres que hombres y aparece más comúnmente en gente de descendencia africana. Puede ocurrir a cualquier edad< pero aparece más frecuentemente en gente entre las edades de 10 a 50 años. El SLE puede ser causado también por ciertos fármacos. Cuando esto ocurre, se conoce como lupus eritematoso inducido por fármacos y es usualmente reversible cuando se detiene la medicación!. El curso de la enfermedad puede variar desde una enfermedad episódica suave hasta una enfermedad severa fatal. Los síntomas varían también ampliamente en un individuo en particular con el tiempo y están caracterizados por periodos de remisión y exacerbación. Algunos! de los síntomas más comunes del lupus incluyen coyunturas dolorosas o hinchadas (artritis), fiebre inexplicable y fatiga extrema. Otros síntomas del lupus incluyen dolor de pecho, pérdida de cabello, anemia (u na disminución en células rojas de la sangre), úlceras en la boca y dedos de manos y pies pálidos o púrpura a partir del frío o la tensión. Alguna gente experimenta también dolores de cabeza, mareo, depresión, confusión o ataques. Puede continuar la aparición de nuevos síntomas años después de la diagnosis inicial y pueden ocurrir síntomas diferentes en momentos diferentes,. En su comienzo, puede estar involucrado solamente un sistema de órgano. Pueden involucrarse más tarde órganos adicionales. i El lupus se caracteriza por periodos de enfermedad, llamados estallidos, y periodos de¡ bienestar, o remisión. Típicamente, una vez que se ha diagnosticado el SLE, el doctor desarrollará un plan de tratamiento con base en la edad, sexo, salud, síntomas y estilo de vida del paciente. En ' el desarrollo de un plan de tratamiento, el doctor tiene varios objetivos: evitar los estallidos, tratarlos cuando ocurran y minimizar el daño y las complicaciones del órgano. Hasta la fecha, está disponible una cantidad de tratamiento diferentes para los que padecen SLE. Para gente con dolor de articulaciones o pecho o fiebre, se usan con frecuencia fármacos que disminuyen la inflamación, llamados fármacos antiinflamatorios no i esteroidales (NSAI Ds). ¡ Los efectos secundarios comunes de NSAIDs i pueden incluir malestar del estómago, ardor de estómago (acidez), I diarrea y retención de f|uidos. Algunos enfermos desarrollan también complicaciones del hígado, de riñon o aún neurológicas. i Los anti-malariales son otro tipo de fármacos usados comúnmente para tratar, el lupus. Aunque se usan generalmente para tratar la fatiga, el dolor de articulaciones, comezón en la piel y la inflamación de los pulmo¡nes, los estudios clínicos han encontrado que el tratamiento continuo con anti-malariales puede evitar la recurrencia de estallidos. Los efectos secundarios de los antimalariales pueden incluir malestar del estómago y, extremadamente raro, daño a la retina del ojo. i El pilar del tratamiento de lupus involucra el uso de hormonas corticosteroides. Los l corticosteroides trabajan muy rápidamente I suprimiendo la inflamación y pueden ser tomados oralmente, aplicados en cremas a la piel o mediante inyección . Los efectos secundarios a corto término de los corticosteroides incluyen hinchazón , apetito incrementado y ganancia de peso. Estos efectos secundarios generalmente se detienen cuando se interrumpe el fármaco. Sin embargo, con frecuencia puede ser peligroso detener la toma de corticosteroides de madera repentina, así que hay una necesidad de alejar al paciente de ellos en un periodo de tiempo extendido. Los efectos secundarios a ¡largo plazo de los corticosteroides pueden i i incluir marcas de estiramiento en la piel, huesos debilitados o dañados (osteoporosis y osteonecrosis), presión sangu ínea elevada, daño a las arterias, azúcar en sangre elevada (diabetes), infecciones y cataratas. Típicamente, mientras más alta la dosis y más tiempo de ser tomadas, mayor el riesgo y severidad de los efectos secundarios.

Para pacientes cuyos riñones o sistemas nerviosos centrales están afectados por el lupus, se pueden usar los inmunosupresores. Los inmunosupresores ¡ restringen el sistema inmune hiperactivo bloqueando la producción de células inmunes. Los efectos secundarios pueden incluir náusea, vómito, pérdida de cabello, problemas de vejiga, fertilidad disminuida y riesgo incrementado de cáncer e infección . El riesgo de los efectos secundarios aumenta con la longitud del tratamiento. Como con otros tratamientos para el lupus, existe un riesgo de recaída después de haber sido suspendidos los inmunosupresores. La presente invención proporciona tratamientos terapéuticos alternativos para el ¡ SLE y otras enfermedades reumáticas autoinmunes. En particular, la invención apunta a proporcionar tratamientos alternativos a inmunosupresores y esteroides, que tengan, por lo menos en ia fase aguda de la enfermedad , excelentes efectos terapéuticos, pero que carezcan de efectos secundarios a largo plazo. Estudios In Vivo Se llevaron a cabo estudios para investigar la eficacia de CYC202 y combinaciones de CYC202/metilprednisolona en ratones. I Ratones híbridos NZB/W F1 desarrollaron espontáneamente una enfermedad autoinmune ! severa reminiscente de lupus eritematoso humano. La enfermedad se manifiesta con formación temprana de anticuerpos antinucleares, desarrollo de una glomerulonefritis compleja inmune con proteinuria y progresión de insuficiencia renal con el tiempo, que causa también mortalidad prematura en esos i ratones. Es una enfermedad de disfunción de células T y B con la formación de auto-anticuerpos contra antígenos nucleares y endógenos, entre cuyos nucleosomas, el ADN en complejo con histonas, parece ser el más prominente. In vivo, los nucleosomas se generan por apoptosis, un proceso i que parece trastornado ! en el lupus. En condiciones de remoción insuficiente de células apoptóticas, los nucleosomas actúan como autoantígenos para impulsar una respuesta inmune dependiente de células T, cuyos componentes críticos son anticuerpos específicos de nucleosoma y complejos nucleosoma/lgG. Estos se unen a constituyentes intrínsecos de la membrana basal glomerular y promueven la inflamación. Las citocinas y quimioatrayentes generados en cantidad exuberante por células renales residentes y de infiltración amplifican y perpetúan el daño mediado por complejo inmune. Histológicamente, los cambios glomerulares en ratones NZB/W incluyen hipercelularidad endocapilar asociada con proliferación focal extracapilar; los depósitos de tipo inmune se detectan en el mesangio y en aspecto subendotelial de la membrana basal glomerular (GMB). El daño tubular, la inflamación intersticial y la fibrosis son severos. Existe evidencia creciente que muestra que las proteínas regulatorias del ciclo celular positivas (ciclinas y cinasas dependientes de ciclinas) y negativas (inhibidores de cinasa dependientes de ciclina) tienen un papel; crítico en la regulación de las respuestas celulares para formas injmunes y no inmunes de daño, incluyendo la proliferación y la apoptpsis celulares. La proliferación de células glomerulares intrínsecas, tales como células mesangiales, es una respuesta característica para formas de daño glomerular mediado inmu ne tal como nefropatía IgA, lupus y glomerulonefritis membranoproliferativa. La expresión de proteínas de ciclo celu la r positivas (ciclinas D, A, E) así como también los niveles y actividad de proteína CDK2 se incrementan en la glomerulonefritis mesangioproliferativa experimental (nefritis Thy) ca racterizada por proliferación celular mesangial . En este modelo, la inhibición de CDK2 disminuyó la proliferación celula r mesangial y la acumulación de proteína de matriz y mejoró la función renal . Los estud ios in vivo por el solicitante han mostrado que los ratones NZB/W F 1 tratados con CYC202 en dosis de 200 y 1 00 mg/kg , empezando a partir de dos meses de edad , sobrevivieron significativamente más tiempo (P<0.05) que los ratones tratados con vehículo. Al final del estudio (mes 8) mientras solamente cuatro (31 %) de trece ratones NZB/W q ue habían sido tratados con veh ículo estaban vivos, diez (77%) de trece ratones y diez (71 %) de catorce ratones tratados con 200 y 1 00 mg/kg de CYC202 , respectivamente, sobrevivieron . En el g rupo de ratones que se les dio CYC202 ( 1 00 mg/kg) a partir de 5 meses de edad (tratamiento terapéutico) el porcentaje de supervivencia no fue diferente de aq uel registrado en ratones tratados con veh ículo. En una modalidad preferida de la invención , la cantidad del inhibidor de C DK2 y/o CDK7 y/o CDK9 es suficiente para retrasa r el comienzo de proteinuria y función renal afectada . El porcentaje acumulado de ratones con proteinuria intensa (>4 mg/día) se evaluó en etapas diferentes de la enfermedad en todos los í grupos experimentales, j En el grupo de veh ículo el porcentaje de ratones con proteinuria aumentó progresivamente con el tiempo. Al final del estudio, el porcentaje de ratones proteinúricos fue de 85%. El CYC202 dado como una terapia preventiva a partir de los 2 meses de edad retrasó significativamente el comienzo de la proteinuria en comparación con el vehículo, en una manera dependiente de la dosis (% de ratones proteinúricos, mes 8: 200 mg/kg, 23%, P<0.01 vs vehículo; 100 mg/kg, 43%, P<0.05 vs vehículo). Cuando se administró CYC202 a ratones con ¡lupus a partir de los 5 meses de edad se observó una tendencia hacia un porcentaje reducido de ratones proteinúricos con respecto al vehículo, que, sin embargo, no alcanzó el significado estadístico.! La función renal, evaluada mediante nitrógeno de urea en suero sanguíneo (BUN), se midió a los 5 y 8 meses. A los 5 meses los niveles de BUN en suero estuvieron dentro del rango normal (<29 mg/dl) en todos los grupos experimentales. En el grupo de vehículo, la función renal se deterioró con el tiempo y a los 8 meses 50% de los animales sobrevivientes ! tenían niveles de BUN > 30 mg/dl. El CYC202 dado como terapia preventiva a partir de los 2 meses de edad resultó en una mejor función renal de los ratones con lupus, mientras que no fue efectivo cuando se administró a la edad posterior de 5 meses. En una modalidad > preferida de la invención, la cantidad del inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 es suficiente para la regulación reductora de los niveles de anticuerpos antinucleares, específicamente anti-ADN. Los niveles elevados de anticuerpos anti-ADN son característicos de los ratones NZB/W. Los ratones a los que se les dieron vehículo exhibieron niveles incrementados de anticuerpos anti-ADN con el tiempo. A los 5 u 8 meses de edad, los ratones tratados a partir de los 2 meses con CYC202 en ambas dosis mostraron niveles anticuerpos anti-ADN menores que los de vehículo. En el grupo de ratones que recibieron CYC202 a partir de los 5 meses la concentración de anticuerpos anti-ADN fue numérica, aunque no significativamente menor que los de vehículo a los 8 meses. En una modalidad preferida, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para reducir los cambios glomerulares y tubulointersticiales. Al final del estudio los ratones NZB/W que se les dio vehículo revelaron cambios glomerulares con hipercelularidad intracapilar asociada con una proliferación extracapilar focal. Se detectaron depósitos inmunes en eljmesangío y en el aspecto subendotelial de la membrana basal glomerular. El daño tubular y la inflamación intersticial fueron observados también. El tratamiento a partir de los 2 meses de edad con CYC202 limitó marcadamente la hipercelularidad glomerular, los depósitos inmunes y el daño tubulointersticial. Estos efectos fueron más pronunciados cuando se dio CYC202 a la dosis de 200 mg/kg. Solamente se observó un efecto suave sobre la morfología renal en ratones que se les administró CYC202 a partir de los 5 meses de edad. En una modalidad preferida, la cantidad del inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 es suficiente para inhibir la proliferación de células T inducida por PMA y ConA. En una modalidad1 preferida de la invención, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para la regulación reductora de la expresión de Mcl-1 . En una modalidad preferida, la cantidad del inhibidor de CDK2 I y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para reducir la acumulación intersticial d¡e células mononucleares. Se analizaron los riñones para monocitos/macrófagos F4/80 positivos mediante técnica inmunohistoquímica. Estuvo presente una I I acumulación marcada de células positivas F4/80 en el intersticio renal de ratones NZB/W administrados con vehículo. El tratamiento preventivo a partir de los' 2 meses de edad con 200 mg/kg de CYC202 redujo marcadamente el número de monocitos/macrófagos F4/80 positivos con respecto al vehículo. El CYC202 a la dosis de 100 i mg/kg limitó, aunque no hasta un grado significativo estadísticamente, la acumulación intersticial de células mononucleares. Se observó una reducción numérica de ¡ células positivas F4/80 en el estudio terapéutico (tratamiento a; partir de los 5 meses de edad). A manera de resumen , los resultados del presente estudio indican claramente que el CYC202 (200 y 100 mg/kg) dado como una terapia preventiva a partir de los 2 meses de edad , retrasó la manifestación renal de l lupus en ratones NZB/W y prolongó notablemente la vida en comparación con animales a los que se les dio vehículo. Específicamente, el CYC202 retrasó el comienzo de la protein uria y la fu nción renal red ucida , y los cambios glomerular y tubulointersticial incluyendo la acum ulación intersticial de células mononucleares, la h ipercelularidad glomerular y los depósitos inmunes. Los efectos son más pronunciados a la dosis de 200 mg/kg .

U n hallazgo notable deil presente estudio fue la reducción de los n iveles de a nticuerpos anti-ADN mediante el CYC202 , lo cual pod ría i ser atribuido posiblemente a los efectos del CYC202 sobre las células T, q ue a su vez pueden afectar a las célu las B. Mediante experimentos in vitro se ! ha observado u na in hibición dependiente de la concentración de la proliferación de célu las T inducida por PMA y ConA, así como también en la reacción mixta de linfocitos, que siguen al tratamiento con CYC202. Además, existe evidencia de que en SLE , las células T ayudadoras autoinmunes activadas específicas pa ra h istonas o nucleosomas pueden proporcionar ayuda para que las células B se diferencien, en células de plasma productoras de anti- i ADN (para revisión ver ; Rekvij , Artritis y Reumatismo 48: 300-312 , 2003). El CYC202 se conoce también por tener u n efecto sobre la transcripción , incluyendo la regulación reductora de proteína mcl-1 anti-apoptótica y así , es capaz de alterar el balance de señales de supervivencia en las células. Las células T anérg icas pueden ser i sensibles específicamente a este mecanismo de acción . La admin istración de CYC202 ( 1 00 mg/kg) iniciado a los 5 meses de edad resultó en una reducción suave del porcentaje de ratones proteinúricos y de daño ¡renal con respecto a los ratones que tomaron vehículo. La supervivencia no fue mejorada. El efecto modesto fue debido probablemente a la baja dosis. Combinaciones En una modalidad particularmente preferida, el medicamento es para uso en terapia en combinación con metilprednisolona. Como , la frase "terapia en combinación" se refiere a se administran la metilprednisolona y el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, si no simultáneamente, entonces secuencialmente dentro de un marco de tiempo en el que ambos están disponibles para actuar terapéuticamente en el mismo marco de tiempo. ! Otro aspecto de la¡ invención se refiere a una combinación que comprende un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona. De preferencia, la! combinación tiene un efecto sinérgico, es decir la combinación es sinérgica. ! La metilprednisolorjia es un corticosteroides sintético (elaborado i por el hombre). El nojmbre qu ímico es 1 1 , 17,21 -trihidroxi-6-metil- i (6a, 1 1 b)-pregna-1 ,4-dien¡o-3,20-diona. Los corticosteroides son sustancias químicas qué ocurren naturalmente, producidos por las glándulas adrenales ubicadas adyacentes a los riñones. Los corticosteroides bloquean la inflamación y se usan en una amplia variedad de enfermedades inflamatorias. Existen numerosas preparaciones de corticosteroides que incluyen tabletas, cápsulas, líquidos orales, cremas tópicas y geles, inhaladores, gotas para los ojos y soluciones inyectables e intravenosas. La metilprednisolona se prescribe típicamente como una tableta o líquido oral . La metilprednisolona se usa para lograr la supresión inmediata del inflamación . Ejemplos de condiciones inflamatorias para los cuales se usa la metilprednisolona incluyen artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, artritis gotosa aguda, artritis psoríatica, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. Condiciones alérgicas severas que no responden al tratamiento convencional pueden responder también a la metilprednísolona. Los ejemplos incluyen asma bronquial, rinitis alérgica, dermatitis inducida por fármacos y dermatitis por contacto y atópica. Las condiciones crónicas de la piel tratadas con metilprednisolona incluyen dermatitis herpetiformis, pemfigus, psoriasis severa y dermatitis seborreica severa. Las condiciones alérgicas e inflamatorias crónicas de la uvea, iris, conjuntiva y nervios ópticos de los ojos se tratan también con metilprednisolona. Otro aspecto se refiere a una composición farmacéutica que comprende una combinación de acuerdo con la invención y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Otro aspecto de la invención se refiere a un producto farmacéutico que comprende un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona como una preparación combinada para uso simultáneo, secuencial o por separado en terapia.

El inhibidor de CDK2 y/o C DK7 y/o C DK9 y la metilpred nisolona pueden administrarse simultáneamente, en combinación , secuencialmente o por separado (como parte de un régimen de i dosificación) . , Como se usa en la presente, "simultáneamente" se usa para decir q ue los dos agentes se administran concurrentemente, mientras que el término "en combinación" se usa pa ra decir que se administran , si no simu ltáneamente , entonces "secuencialmente, en u n marco de tiempo en el que , ambos están disponibles para actuar ! terapéuticamente dentro del mismo marco de tiempo. Así , la administración "secuencialmente" puede permitir que se administre un agente a los 5 minutos, ,1 0 minutos o en materia de horas después del otro siempre q ue la vida media circulatoria del primer agente administrado sea tal que ambos estén presentes concurrentemente en cantidades terapéuticamente efectivas. El retraso de tiempo entre la i administración de los componentes varia rá dependiendo de la natu raleza exacta de los componentes, la interacción entre ellos y sus vidas medias respectivas. En contraste con "en combinación" o "secuencialmente", "separadamente" se usa: en la presente pa ra decir que el espacio entre la administración de un : agente y el otro es significativo, es decir, el primer agente admi nistrado puede ya no estar presente en la corriente ! sangu ínea en una cantidad terapéuticamente efectiva cuando se admin istra el seg u ndo agente . Todavía otro aspecto de la invención se refiere a u na composición farmacéutica que comprende: (i) un inhibidor dé CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; y (ii) metilprednisolona; mezclados con un diluyente, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. Un aspecto más se refiere a una combinación, de acuerdo con la invención , en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares. Un aspecto adicional de la invención se refiere al uso de un inhibidor de CDK2 y/q CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde el medicamento es para uso en combinación con metilprednisolona. Todavía otro aspecto de la invención se refiere al uso de metilprednisolona en la ; preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde el medicamento es para uso en combinación con un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, ! o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. ¡ Un aspecto más de la invención se refiere al uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o GDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona, en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de un inhibidor de C DK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde dicho tratamiento comprende administrar a un sujeto, i simultáneamente, secuencialmente o separadamente un inhibidor de i CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente i aceptable , y metilprednisolona . Un aspecto más de la invención se refiere a u n método pa ra tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares en un sujeto, dicho método q ue comprende ad min istrar al sujeto u na cantidad farmacéuticamente aceptable de: (i) un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; y (ii) metilprednisolo?a . Para todas las modalidades anteriores , de preferencia, el inh ibidor de CDK2 y/o ¡ C DK7 y/o CDK9 y la metilprednisolona se administran sim ultánea ó secuencialmente. En una modalidad ipreferida , el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o I CDK9 y la metilprednisolona se administra n simultáneamente. En u na modalidad particula rmente preferida , el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o ¡ CDK9, se administra al sujeto antes de administrar metilprednisolona secuencial o separadamente a dicho sujeto. ' Otro aspecto de la invención se refiere a un método para trata r un desorden proliferativ?|que comprende la administración secuencial de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, seguida por una cantidad terapéuticamente efectiva de metilprednisolona. Otro aspecto de la invención se refiere al uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 en la elaboración de un medicamento para uso en el tratamiento de1 desórdenes proliferativos, que comprende la administración secuencial de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, seguida por una I cantidad terapéuticamente efectiva de metilprednisolona. ¡ En una modalidad preferida alternativa, la metilprednisolona se administra al sujeto antes de administrar secuencial o separadamente el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 a dicho sujeto. En una modalidad particularmente preferida, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, y la metilprednisolona se administran secuencialmente. ! En una modalidad preferida de la invención, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 y la metilprednisolona se administran, cada uno, en una cantidad terapéuticamente efectiva con respecto a los componentes individuales. En otra modalidad preferida de la invención, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 y la metilprednisolona se administran, cada uno, en una cantidad sub-terapéutica con respecto a los componentes individuales. ¡ De preferencia, el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 es como se describe anteriormente para el primer aspecto de la invención . Com posiciones Farmacéuticas Como se mencionó antes, varios aspectos de la invención se refieren a composiciones farmacéuticas. Aunque los compuestos de la presente invención (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables, esteres y solvatos farmacéuticamente aceptables) pueden ser administrados solos, serán i administrados generalmente en mezcla con un portador, excipiente o i diluyente farmacéutico, ] particularmente para terapia de seres humanos. Las composiciones farmacéuticas pueden ser pa ra uso humano o animal en medicina humana o veterina ria . Ejemplos de tales excipientes adecuados para las varias formas diferentes de composiciones farmacéuticas descritas en la presente pueden encontrarse en el "Manual de Excipientes Farmacéuticos" , 2a ¡ edición , ( 1994), editado por A Wade y PJ Weller. i Los portadores o diluyentes aceptables para uso terapéutico son bien conocidos en la técnica farmacéutica y se describen, por ejemplo, en Remington 's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. , (A. R . Genna ro edit. 1 985) . ; Ejemplos de portadores adecuados incluyen lactosa, almidón, glucosa, metilcelu losa , éstea rato de magnesio, manitol, sorbitol y los similares . Ejemplos de d iluyentes adecuados incluyen etanol , glicerol i y agua. ; La selección del portador, excipiente o diluyente farmacéutico puede hacerse con respecto a la ruta pretendida de administración y la práctica farmacéutica; normal . Las composiciones farmacéuticas pueden comprender cómo, o además de, el portador, excipiente o diluyente cual(es)q uiera aglutinante(s) , l ubricante(s), agente(s) de i suspensión , agente(s) de recubrimiento, agente(s) de solubilización . Ejemplos de aglutinantes adecuados incluyen almidón , gelatina , i azúcares naturales tales como glucosa , lactosa an h id ra , lactosa de flujo libre, beta-lactosa^ edulcorantes de maíz, gomas natu rales y sintéticas , tales como ¡ acacia , tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa y polietilenglicol. i Ejemplos de lubricantes adecuados incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sod io, acetato de sodio, cloru ro de sodio y los similares. Se pueden proporcionar en la composición farmacéutica conservadores, estabilizadores, colorantes y aún agentes saborizantes. Ejemplos ,de conservadores incluyen benzoato de sodio , ácido sórbico y ésteres ' de ácido p-hidroxibenzóico. Se pueden usar también antioxidantes y agentes de suspensión . Sales/Esteres Los compuestos usados en la invención pueden esta r presentes como sales o esteres, en particular sales o esteres farmacéuticamente i aceptables. i Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención incluyen sales de adición de ácido o base adecuadas de los mismos. U na revisión de sales farmacéuticamente aceptables puede encontrarse en Bérge et al. , J . Pharm. Sci. , 66, 1 -19 (1977). Las sales se forman, por ejemplo, con ácidos inorgánicos fuertes tales como ácidos minerales, por ejemplo ácido sulfúrico, ácido fosfórico o i ácidos hidrohálicos; con j ácidos carboxílicos orgánicos fuertes, tales como ácidos alcancarboxílicos de 1 a 4 átomos de carbono los cuales ! están insustituidos o sustituidos (por ejemplo, por halógeno), tal como ácido acético; con ácidos dicarboxílicos saturados o insaturados, por ejemplo oxálico, malónico, succínico, maleico, fumárico, ftálico o i tetraftálico; con ácido¡s hidroxicarboxílicos, por ejemplo ácido | ascórbico, glicólico, láctico, málico, tartárico o cítrico; con i aminoácidos, por ejemplo ácido aspártico o glutámico; con ácido i glutámico; o con ácidos sulfónicos orgánicos, tales como ácidos alquil- (de 1 a 4 átomos de ¡carbono) o aril-sulfónicos los cuales están I insustituidos o sustituidps (por ejemplo, por un halógeno) tal como ácido metan- o p-toluensulfónico. ¡ Los esteres se fprman usando ya sea ácidos orgánicos o I alcoholes/hidróxidos, dependiendo del grupo funcional a ser i esterificado. Los ácidos orgánicos incluyen ácidos carboxílicos, tales como ácidos alcancarboxílicos de 1 a 12 átomos de carbono los cuales i están insustituidos o sustituidos (por ejemplo, por halógeno), tal como ácido acético; con ácidos dicarboxílicos saturados o insaturados, por ejemplo oxálico, maló?ico, succínico, maleico, fumárico, ftálico o tetraftálico; con ácidos hidroxicarboxílicos, por ejemplo ácido ascórbico, glicólico, jláctico, málico, tartárico o cítrico; con aminoácidos, por ejemplo ácido aspártico o glutámico; con ácido benzoico; o con ácidos sulfónicos orgánicos, tales como ácidos alquil-(de 1 a 4 átomos de carbono) o aril-sulfónicos los cuales están insustituidos o sustituidos (por ejemplo, por un halógeno) tal como ácido metan- o p-toluehsu lfónico. H idróxidos adecuados incluyen hidróxidos inorgánicos, tales como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de calcio, hidróxido de aluminio. Los alcoholes incluyen alcanalcoholes ! de 1 a 12 átomos de carbono, los cuales pueden estar insustituidos o sustitu idos (por ejemplo, por un halógeno) . j Enantiómeros/Tautómeros En todos los aspectos de la presente invención discutidos previamente , la invención incluye el uso de , cuando es apropiado, todos los enantiómeros y tautómeros de los compuestos involucrados.

La persona experta en l¡a técnica reconocerá compuestos que tienen propiedades ópticas (uno o más átomos de carbono qu irales) o características tautoméricas. Los enantiómeros y/o tautómeros correspondientes pueden ser aislados/preparados mediante métodos conocidos en la técnica. ¡ Isómeros Estéreo y Geométricos Los compuestos usados en la invención pueden existir como estereoisómeros y/o isómeros geométricos - por ejemplo, pueden tener uno o más centros asimétricos y/o geométricos y así pueden existir en dos o más formas estereoisoméricas y/o geométricas. La i presente invención contempla el uso de todos los estereoisómeros e isómeros geométricos individ uales de aquellos agentes y mezclas de los mismos. Los términos utilizados en las reivindicaciones abarcan esas formas, siempre que dichas formas retenga n la actividad j fu ncional apropiada (aunq ue no necesariamente en el mismo g rado) . La presente invenóión incluye también el uso de todas las variaciones isotópicas adecuadas del agente o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. U na variación isotópica de un agente de la presente i nvención o u na sal del mismo farmacéuticamente aceptable se define como una en la cual está remplazado por lo menos u n átomo por u n í átomo q ue tiene el mismo número atómico, i pero una masa atómica diferente de la masa atómica encontrada i usualmente en la naturaleza . Ejemplos de isótopos que pueden ser incorporados en el agente y sales del mismo farmacéuticamente aceptables incluyen isótopos de hidrógeno, ca rbono , nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor y cloro tales como H2, H3, C1 3, C14 , N 1 5, O17, O1 8, P31 , P32, S?5, F18 y Cl36, respectivamente. Ciertas i variaciones isotópicas; del agente y sales del mismo farmacéuticamente aceptables , por ejemplo, aquellas en las cuales se incorpora u n isótopo radioactivo tales como H3 o C14, son útiles en estud ios de fármacos y/o distribución de tejido de sustrato. Los isótopos titulados, es decir H3 y carbono 14, es decir C14, son particula rmente preferidos por su facilidad de prepa ración y detectabilidad . Además, i la sustitución con isótopos tal como deuterio, ! es decir H2, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica , por ejemplo, vida media in vivo incrementada o requerimientos red ucidos de dosificación y por lo tanto pueden ser preferidos en algunas circunstancias. Las i variaciones isotópicas del agente de la presente invención y sales del mismo farmacéuticamente aceptables de esta invención pueden prepararse generalmente mediante procedimientos convencionales usando variaciones isotópicas apropiadas de reactivos adecuados. Solvatos ¡ La presente invención incluye también el uso de formas de solvato de los compuestos de la presente invención . Los términos utilizados en las reivindicaciones abarcan estas formas. I Polimorfos La invención se refiere además al uso de compuestos de ia i presente invención en sus varias formas cristalinas, formas polimórficas y formas (an)hidras. Está bien establecido en la industria farmacéutica que los compuestos químicos pueden ser aislados en cualquiera de tales formas mediante la variación ligera del método de purificación y o forma de aislamiento de los solventes utilizados en la preparación sintética de |tales compuestos. Profármacos La invención incluye además el uso de compuestos de la presente invención en forma de profármaco. Tales profármacos son generalmente compuestos en donde han sido modificados uno o más grupos apropiados de manera que la modificación puede ser invertida por la administración a un sujeto humano o mamífero. Tal inversión i se realiza usualmente mediante una enzima naturalmente presente en tal sujeto, aunque es posible que se administre un segundo agente conjuntamente con tal profármaco con el fin de realizar la inversión in vivo. Ejemplos de tales, modificaciones incluyen éster (por ejemplo, cualquiera de aq uellos antes descritos) , en donde la inversión puede llevarse a cabo a partir de una esterasa , etc. Otros de tales sistemas serán bien conocidos por aquellos expertos en la técnica . Administración ' Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser adaptadas ¡ para rutas de administración oral , rectal , vag inal, parenteral , intramuscular, intraperitoneal , intraarterial , i intratecal, intrabronquial , subcutánea , intradérmica , intravenosa , i nasal , bucal o subling ual . ! Para administración oral, se hace uso particular de tabletas i comprimidas, pildoras, i tabletas, geles, gotas y cápsulas. De preferencia, estas composiciones contienen desde 1 mg hasta 5000 ! mg y más preferiblemente desde 1 0 mg hasta 3000 mg , de ingred iente activo por dosis. Otros formas de administración comprenden soluciones o emulsiones las cuales pueden inyectarse de manera intravenosa , i intraarterial , intratecal , ' subcutánea , intradérmica , intraperitoneal o intramuscular y las cuales se preparan a partir de soluciones estériles o q ue se pueden esterilizar. Las composiciones fa rmacéuticas de la i presente invención pueden estar también en forma de supositorios , supositorios vaginales u óvulos, suspensiones, emulsiones, lociones , ¡ u ngüentos, cremas, geles , rocíos, soluciones o polvos para polvear. Un medio alternativo de administración transdérmica es mediante el uso de un parche en la piel. Por ejemplo, el ingrediente : activo puede ser incorporado en una crema que consiste de una emulsión acuosa de polietilenglicoles o parafina líquida. El ingrediente activo puede incorporarse también, en una concentración i entre 1 y 10% en peso, ¡en un ungüento que consiste de una base de cera blanca o parafina suave blanca junto con tales estabilizadores y conservadores como pueda ser requerido. i Las formas inyectables pueden contener entre 10 y 3000 mg, de preferencia entre 10 y 1000 mg, de ingrediente activo por dosis. i Las composiciones pueden ser formuladas en forma de t dosificación unitaria, es decir, en la forma de porciones discretas que contienen una dosis unitaria, o un múltiplo o sub-unidad de una dosis i unitaria. Dosificación Una persona de pericia ordinaria en la técnica puede determinar fácilmente una dosis ¡apropiada de una de las composiciones presentes para administrar a un sujeto sin experimentación indebida.

Típicamente, un facultativo determinará la dosificación real que será la más adecuada para ¡ un paciente individual y dependerá de una i variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico i empleado, la estabilidad metabólica y la duración de acción de ese compuesto, la edad, elj peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el modo y el tiempo de administración, el régimen de excreción, I la combinación de fármacos, la severidad de la condición en particular y la terapia individual que se experimenta. Las dosificaciones descritas en la presente son ejemplos del caso promedio. Por i supuesto, puede haber casos individuales donde se ameritan rangos de dosificación mayores¡ o menores, y tales están dentro del alcance i de esta invención . j Dependiendo de la' necesidad , el agente puede ser administrado i a u na dosis desde 0.01¡ hasta 30 mg/kg de peso corporal, tal como desde 0.1 hasta 1 0 mg/kg , más preferiblemente desde 0.1 hasta 1 mg/kg de peso corporal . ¡ En una modalidad ' de ejemplo, serán administradas al paciente i una o más dosis de 1 0 a' 3500 mg/d ía . La presente invención se ilustra adícionalmente a manera de ejemplo, y con referencia a las siguientes Figu ras, en donde: La Figu ra 1 muestra el porcentaje de supervivencia contra la d uración del tratamiento! (meses) para ratones NZB/W F 1 tratados con I CYC202 en dosificaciones de 1 00 y 200 mg/kg desde dos meses o cinco meses. i i La Figu ra 2 muestra el porcentaje de ratones proteinúricos I contra la duración del tratamiento (meses) para ratones NZB/W F 1 i tratados con CYC202 en, dosificaciones de 1 00 mg/kg o 200 mg/kg . La Figura 3 muestra anticuerpos anti-ADN en suero (U/ml) para ratones NZB/W F 1 tratados con CYC202 a 1 00 mg/kg o 200 mg/kg (versus el veh ículo de control) . La Figura 4 muestra la incorporación de BrdU (arriba) y i viabilidad (fondo) de PBMCs sin estim ular y estimulados y células de control , sin tratar o tratadas con veh ícu lo DMSO .

La Figura 5 muestra la diferencia en incorporación de BrdU entre células PBMC estimuladas con PHA o PMA/I durante 48 horas, cuando se tratan con DMSO ¡(arriba a la izquierda) o compuestos a concentraciones de 4 x IC50, 3 x IC50, 2 x IC50 e IC50, dos horas antes de la estimulación (-2 h)„ en el momento de la estimulación (0 h) y dos horas después de la estimulación (+2 h). La Figura 6 muestra la diferencia en viabilidad entre células PBMC estimuladas con ¡PHA o PMA/I durante 48 horas, cuando se tratan con DMSO (airriba a la izquierda) o compuestos a concentraciones de 4 x IC50, 3 x IC50, 2 x IC5o e IC50, dos horas antes de la estimulación (-2 h)¡ en el momento de la estimulación (0 h) y dos horas después de la estimulación (+2 h). i La Figura 7 muestra la titulación de Concanavalin A mostrando í la estimulación máxima con 10 µg/mL (arriba al izquierda) y viabilidad reducida en concentraciones mayores (arriba a la derecha). El incremento en la incorporación de BrdU es comparable con la estimulación con PHA y PMA/I (abajo a la izquierda). La Figura 8 muestra la incorporación de BrdU (arriba) y ! viabilidad (abajo) en PBMCs estimulados con PHA y ConA y células sin estimular, a las 48¡y 72 horas de tratamiento con DMSO y sin i tratar. i La Figura 9 muestra la incorporación de BrdU en PBMCs estimulados con PHA ¡(izquierda) y ConA (derecha) tratados con compuestos a 4 x IC50, 3 x IC50, 2 x IC50, IC50, 0.5 x IC50 y 0.25 x IC50 y DMSO control durante¡48 y 72 horas.

La Figura 10 muestra la viabilidad de PBMCs estimulados con PHA (izquierda) y ConA (derecha) tratados con compuestos a 4 x IC50, 3 x ICso, 2 x IC50, ICsb, 0.5 x IC50 y 0.25 x IC50 y DMSO control durante 48 y 72 horas. I Ejemplos Inhibidores de CDK2 v/o CDK7 v/o CDK9 ¡ Se prepararon varios compuestos de inhibidor de acuerdo con los métodos descritos en EP 0874847B (CNRS); y WO 03/002565, WO ¡ 04/016613, WO 04/016612, WO 01/72745, WO 02/079193, WO 029248, WO 04/043953 (todos a nombre de Cyclacel Limited). ! Ensayos de Cinasa ¡ Se investigó la acti idad de cinasa midiendo la incorporación de i fosfato radioactivo a p¡artir de ATP en sustratos de polipéptido i apropiados. Se produjeron o se obtuvieron comercialmente cinasas de proteína recombinante y complejos de cinasa. Los ensayos se realizaron usando placas de 96 pozos y buffers de ensayo apropiados (típicamente ß-glicerofosfato 25 mM, MOPS 20 mM, EGTA 5 mM, DTT 1 mM, Na3VO3, pH 7.4),; a los cuales se agregaron de 2 a 4 µg de i enzima activa con sustratos apropiados. Las reacciones fueron iniciadas mediante adición de mezcla de Mg/ATP (MgCI2 15 mM + ATP 100 µM con 30 a 50 kBq por pozo de [?-P32]-ATP) y mezclas incubadas según se requiera a 30°; C. las reacciones fueron detenidas en hielo, seguido por filtración a través de placas de filtro p81 o placas de filtro GF/C (Whatman Polyfiltronics, Kent, UK). Después de lavado tres veces con ácido ortofosfórico acuoso 75 mM, las placas se secaron, se agregó destellante y|se midió la radioactividad incorporada en un contador de destello (TopCount, Packard Instruments, Pangbourne, Berks, UK). Los compuestos para el ensayo de cinasa se hicieron como reservas 10 mM en DMSO y diluidas en DMSO 10% en bufer de i ensayo. La información se analizó usando software de ajuste de curvas (GraphPad Prism versión 3.00 para Windows, GraphPad Software, San Diego, California, E. U. A.) para determinar los valores í de IC5o (concentración dé compuesto de prueba que inhibe la actividad de cinasa en 50%). i Ensayo de CDK 7 y 9 , Sustratos de péptido CTD (biotinil-Ahx-(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro- ! Ser)4-NH2; 1 a 2 mg/mL) y CDK7/ciclina H, CDK9/ciclina T1, o CDK9/ciclina K (0.5 - 2 µg) fueron incubados durante 45 minutos a 30° C en la presencia de cantidades variables de compuesto de prueba en MOPS 20 mM, pH 7.2, ¡B-glicerofosfato 25 mM, EGTA 5 mM, DTT 1 mM, vanadato de sodio 1 mM, MgCI2 15 mM y ATP 100 µM (conteniendo una cantidad de traza de P3 ?ATP) en un volumen total ¡ de 25 µL en una placa¡de microtítulo de 96 pozos. La reacción se i detuvo colocando la placa sobre hielo durante dos minutos. Se agregó Avidin (50 µg) a cada pozo, y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 30 mi?utos. Las muestras fueron transferidas a una placa de filtro P81 de 96 pozos y se lavaron (4 x 200 µL por pozo) con ácido fosfórico 75 mM. ' Se agregó líquido centellante Microscint 40 (50 µL) a cada pozo, y se midió la cantidad de incorporación de P32 de cada muestra usando un contador de destellos de microplaca Packard i I Topcount. CYC202 i i se realizaron estudios para evaluar si la administración del I inhibidor de CDK2 CYC2,02 fue efectiva para retardar el desarrollo de I la enfermedad renal de ratones NZB/WF1 propensos al lupus. Se usaron ratones hembra NZBxNZW F1 (Harían Italy s.r.l., i Milano, Italia) de dos meses de edad al inicio del experimento. El i cuidado y el tratamiento de los animales se condujeron de acuerdo con directrices instituciqnales que están de acuerdo con las leyes y políticas nacionales (Decreto Legislativo . 115, Gazzeta Ufficiale 15 luglio 1994) e internacionales (EEC Council Directive 86/609, OJL358-1, diciembre 1987; Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio, U.S. National Research Council, 1996). Los animales se alojaron en una habitación con temperatura constante con un ciclo de 12 horas de oscuridad/12 horas de luz y se alimentaron con una dieta estándar. Ejemplo 1 | Ratones NZBxMZW F1 fueron ubicados aleatoriamente en los ¡ siguientes grupos: i Grupo 1 (n = 18),: ratones que fueron entubados para recibir diariamente el vehículo (HCl 50 mM); Grupo 2 (n = 17V: ratones que fueron entubados para recibir diariamente CYC202 (200 mg/kg); Grupo 3 (n = 19)¡: ratones que fueron entubados para recibir diariamente CYC202 (100 mg/kg); Los tratamientos empezaron a los dos meses de edad (estudio preventivo) y terminaron hasta los 8 meses; Se sacrificaron de¡ 4 a 5 animales de cada grupo a los cinco meses para evaluación de BUN en suelo y niveles de anticuerpos anti- í ADN circulantes. A un grupo adicional, Grupo 4 (n = 14 ratones), se le dio diariamente mediante eritubamiento CYC202 (100 mg/kg) empezando a los 5 meses de edad, un momento cuando la deposición de complejo inmune está teniendo lugar activamente, hasta los 8 meses (estudio terapéutico). Se usaron cinco ratones CD-1 normales (Charles River Italia, Calco, Italia) como control. Se evaluaron los siguientes parámetros: Excreción urinaria de proteína: determinada cada mes hasta los ¡ 5 meses de edad y después cada dos semanas. En el momento del sacrificio: Anticuerpos anti-ADN en el suero; BUN en suero; j Transaminasa en suero (AST, ALT); Histología renal; Acumulación de mónocitos/macrófagos en el intersticio renal. Ejemplo 2 Ratones con lupus! se ubicaron aleatoriamente en los siguientes grupos: ¡ i Grupo 1 (n = 10):; ratones a los que se les dieron diariamente i mediante entubamiento (HCl 50 mM); Grupo 2 (n = 15): ratones a los que se les dieron diariamente mediante entubamiento CYC202 en dosis de 200 mg/kg; Grupo 3 (n = 12): ratones a los que se les dieron diariamente mediante inyección intraperitoneal de metilprednisolona (MPS, Urbason, Hoechst s.p.a., Milano, Italia) en dosis de 1.5 mg/kg; Grupo 4 (n = 16):! ratones a los que se les dieron diariamente CYC202 (200 mg/kg) en ¡combinación con MPS (1.5 mg/kg). i Los tratamientos iniciaron a los 5 meses de edad, un momento cuando la deposición) de inmunocomplejo está teniendo lugar activamente y duró hasta 12 meses cuando murió el último animal que recibe el tratamiento con vehículo. Se usaron cinco ratones CD-1 I normales (Charles River talia, Calco, Italia) como control. Se evaluaron los siguientes parámetros: Supervivencia; Excreción urinaria ¡de proteína: determinada cada mes hasta los 5 meses de edad y después cada dos semanas; BUN en suero: medido en el mes 5 (antes del tratamiento) y cada mes hasta el final del estudio; Histología renal: ' evaluada en biopsias de ratones que enfermaron de manera terminal y de ratones que sobrevivieron hasta los 12 meses; ¡ ! acumulación de monocitos/macrófagos positivos F4/80 en el intersticio renal (evaluada en las mismas biopsias como I anteriormente). ¡ Ejemplos 1 y 2: Materiales y Métodos Proteinuria y función renal La concentración de proteína urinaria se determinó mediante el ensayo de aglutinamiento de colorante azul G Coomassie con i albúmina de suero de bovino como estándar. La función renal se evaluó como BUN en sangre heparinizada mediante la prueba de Reflotron (Roche Diagnostics Corporation , Indianapolis, EUA). Los ! niveles de BU N que excedieron 30 mg/dl fueron considerados anormales (rango normal en este laboratorio para ratones: 14 a 29 mg/dl). i ' Anticuerpos anti-ADN Los niveles de anticuerpos anti-dsADN fueron evaluados en el suero mediante de un e?zima-inmunoensayo (paquete de anti-dsADN I Diastat, Bouty Laboratory, Milano, Italia) como se describió antes (Kidney I nt, 53: 726-734, 1998). Transaminasa en suero I Los niveles de AST y ALT en suero fueron medidos usando un autoanalizador (CX5, Beckman Instruments Inc. , Fullerton, CA). Morfología renal l i Microscopía con luz: Fragmentos de corteza renal se fijaron en i Dubosq-Brazil, deshidratado en alcohol y embebido en parafina. Se tiñeron secciones (3 µm) con hematoxilin y eosina, tricromo de Masson , y reactivo de Schiff ácido periódico (mancha PAS). i Se evaluó la hipércelularidad glomerular intracapilar en una manera semi-cuantitativa mediante un sistema de registro de 0 a 3+ (0 = sin hipercelularidad; 1 + = suave; 2+ = moderada; 3+ = severa) . Se dio una sola marca para otros cambios con base en los porcentajes de I glomérulos totales involucrados con una lesión . La proliferación extracapilar se graduó de 0 a 3+ (0 = sin hipercelularidad; 1 + = menos I de 25% de glomérulos involucrados; 2+ = de 25% a 50% de glomérulos involucrados; 3+ = más ¡ de 50% de glomérulos involucrados). Los depósitos glomerulares ¡se graduaron desde 0 hasta 3+ (0 = sin i depósitos; 1 + = menos de 25% de glomérulos involucrados; 2+ = de 25% a 50% de glomérulos involucrados; 3+ = más de 50% de I glomérulos involucrados). Los cambios tubulares (atrofia, casts y dilatación) e intersticiales (fibrosis e inflamación) se graduaron de 0 a 3+ (0 = sin cambios; 1 + ¡ = cambios que afectan menos de 25% de la muestra; 2+ = cambios que afectan de 25 a 50% de la muestra; 3+ = cambios que afectan más de 50% de la muestra). Se examinaron por lo menos 100 glomérulos por cada biopsia. Se examinaron por lo menos 10 campos por muestra en baja amplificación (10x) para registro histológico del intersticio. Todas las biopsias renales han sido analizadas por el mismo patólogo, en un modo de ciego sencillo.

Análisis inmunohistoquímico ¡ Se usó anticuerpo monoclonal de rata contra un antígeno citoplásmico en monocitps y macrófagos de ratón (F4/80, 4 µg/ml , Caltag Laboratories, Burlingame, CA) para la detección de células infiltrantes mediante técnica de inmunoperoxidasa. Se incubaron secciones durante 30 minutos con H2O2 0.3% en metanol para apagar i la peroxidasa endógena. Después el tejido se permeabilizó en Tritón X-100 0.1 % en PBS 0.01 ¡ mol/L, pH 7.2, durante 30 minutos y después se incubó con suero de cabra normal (Vector Laboratories) d urante 30 minutos. Se incubó anticuerpo primario dura nte una noche a 4o C , ! seguido por el anticuerpo secu ndario (IgG anti-rata de cabra bioestañado, Vector Laboratories) y solución de complejo de avidin-biotin peroxidasa (ABC) , y finalmente desarrollo con DAB. Las secciones fueron contra ¡teñidas con hematoxilin Harris. Se obtuvieron i controles negativos omitiendo el anticuerpo primario. Se conta ron células etiquetadas F40/80 en por lo menos 1 0 campos microscópicos (x400) de alto poder seleccionados aleatoriamente por cada animal. Análisis estad ístico i Los datos se expresan como media ± Error Estándar (SE) . Se analiza ron las curvas de, supervivencia mediante prueba log-rank. Los i datos de proteinuria sé analiza ron media nte la prueba exacta de Fischer. Todos los otros parámetros se analizaron mediante prueba I de Kruskall Wallis. Lia sig nificancia estad ística se definió como i P<0.05. Ejem plo 1 : Resultados ¡ Peso corporal , ingesta de alimento y agua Como se muestra én la Tabla 1 , los ratones con lupus gana ron peso du rante el estudio. 1 No se observó diferencia en el peso corporal entre los grupos experimentales . La i ngesta de alimento (Tabla 2) y ag ua (Tabla 3) evaluada cada dos semanas de 2 a 5 meses fue compa rable entre los ratones tratados con veh ículo y CYC202. i Supervivencia de ratones con lupus I Los ratones NZB/ F 1 tratados con CYC202 en dosis de 200 y 100 mg/kg, iniciando a ¡ partir de dos meses de edad, sobrevivieron significativamente más tiempo (P<0.05) que los ratones de vehículo (véase Tabla 4 y Figura 1 ) . Realmente, al final del estudio (mes 8) aunque solamente 4 de 13 (31 %) ratones NZB/W que habían sido tratados con veh ículo estaban vivos, 10 de 13 ratones (77%) tratados con 200 y 100 mg/kg de CYC202, respectivamente, sobrevivieron . En el grupo de ratones a los que se les dio CYC202 (100 mg/kg) a partir de 5 meses de edad i (tratamiento terapéutico) el porcentaje de i supervivencia no fue diferente de aquel registrado en ratones de i vehículo. ' Proteinuria y función renal El porcentaje acumulativo de ratones con proteinuria intensa (>4 mg/día) se evaluó en diferentes etapas de la enfermedad en todos los grupos experimentales. Como se muestra en la Tabla 5, en el grupo de vehículo el porcentaje de ratones con proteinuria aumentó i progresivamente con el ¡ tiempo (Figura 2). Al final del estudio el porcentaje de ratones proteinúricos fue de 85% . El CYC202 dado como una terapia preventiva retrasó significativamente el comienzo de la proteinuria en comparación con el vehículo, en una manera dependiente de la dosis (% de ratones proteinúricos, mes 8: 200 mg/kg , 23%, P<0.01 v¿. vehículo; 100 mg/kg, 43%, P<0.05 vs. vehículo). Cuando se administró CYC202 a ratones con lupus a partir de 5 meses de edad se ¡ observó una tendencia hacia un porcentaje reducido de ratones proteinúricos con respecto al vehículo, lo cual, sin ! embargo, no alcanzó la significancia estadística.

La función renal, evaluada mediante BUN en suero, se midió a los 5 y 8 meses. A los 5 meses los niveles de BUN en suero estuvieron dentro del rango normal (<29 mg/dl) en todos los grupos í experimentales. En el grupo de vehículo, la función renal se deterioró con el tiempo y a los 8, meses 50% de los animales sobrevivientes tenían niveles de BUN = 30 mg/dl (Tabla 6). El CYC202 dado como terapia preventiva resultó en una mejor función renal de los ratones con lupus, mientras que no fue efectivo cuando se administró más tarde. , i Anticuerpos anti-ADN i Los niveles elevados de anticuerpo anti-ADN son característicos de ratones NZB/W F1 . Como se muestra en la Tabla 7, los ratones ¡ que tomaron veh ículo exhibieron niveles incrementados de anticuerpos í anti-ADN con el tiempo: Ya sea a los 5 u 8 meses de edad, los ratones tratados a partir de los 2 meses con CYC202 con ambas dosis mostraron niveles de que los de vehículo. En jel grupo de ratones que recibieron CYC202 a partir de los 5 meses la concentración de anticuerpo anti-ADN fue numérica, aunque no significativamente menor, que los de vehículo a ¡ los 8 meses (Figura 3). i Niveles de transaminasa en suero Los niveles de ALT y AST en suero se midieron en ratones NZB/W F1 a los que se les dio 200 mg/kg de CYC202 a partir de los 2 meses o 100 mg/kg de CYC202 a partir de los 5 meses. Los niveles de transaminasa en suero no fueron modificados por los tratamientos y los valores fueron similares a aquellos de los ratones de control (Tabla 8). j Morfolog ía renal í Como se muestra en la Tabla 9, al final del estudio los ratones i NZB/W a los que se les! dio veh ículo revelaron cambios g lomerula res I con hipercelu laridad intracapilar asociada con u na proliferación extracapilar focal. Se .detectaron tipo de depósitos inmu nes en el mesang io y en el aspecto subendotelial de la membrana basal glomerular. Se observaron también daño tubular e inflamación intersticial . El tratamiento a partir de los 2 meses con CYC202 limitó marcadamente la hipercelularidad g lomerular, los depósitos inmunes y el daño tubulointersticial . Estos efectos fueron más pron unciados cuando se dio CYC202 en la dosis de 200 mg/kg . Solamente se observó un efecto suave en la morfolog ía renal en ratones i administrados con CYC202 a partir de los 5 meses. Acumulación intersticial de monocitos/macrófagos Se analizaron ri?ones para monocitos/macrófagos positivos F4/80 med iante técnica inmunohistoqu ímica. U na acumulación j marcada de células positivas F4/80 estaba presente en el intersticio renal de ratones NZB/W a los que se les dio veh ículo (Tabla 1 0) . El tratamiento preventivo con 200 mg/kg de CYC202 red ujo notablemente el número de monocitos/macrófagos positivos F4/80 con respecto al veh ículo. El CYC202 a la dosis de 1 00 mg/kg limitó, aunque no hasta i I un g rado sig nificativo estad ísticamente, la acumulación intersticial de célu las monon ucleares. Se observó una red ucción numérica de células positivas F4/80 en el estudio terapéutico. Los resultados del presente proyecto indican claramente que el CYC202 (200 y 1 00 mg/kg) dado como una terapia preventiva a partir de los 2 meses de edad , retardó la manifestación renal de lupus en ratones NZB/W y prolongó notablemente la vida en comparación con animales a los que se les dio veh ículo. Específicamente, el CYC202 retrasó el comienzo de proteinuria y deficiencia de función renal y limitó los cambios glomerulares y tubulointersticiales incluyendo la acumulación intersticial ele células mononucleares, siendo los efectos i más pron unciados a la dosis de 200 mg/kg . Un hallazgo notable del presente estudio fue la reducción de los niveles de anticuerpos anti- ! ADN mediante CYC202 , lo cual se podría atribuir posiblemente a los efectos del CYC202 en células T lo cual a su vez puede afectar a las células B. Mediante experimentos in vitro ha sido observada una inhibición dependiente de la concentración de la proliferación de célu las T inducida mediante PMA y ConA, así como también en la ! reacción mixta de linfocitos. Por otra parte , existe evidencia de que en SLE, células T autoi?mu nes activadas específicas para h istonas o i nucleosomas pueden proporcionar ayuda para q ue las células B se diferencien en células !de plasma prod uctoras de anti-ADN (para revisión ver Rekvij , Artritis y Reumatismo 48: 300-31 2 , 2003) . i La admin istración de CYC202 ( 1 00 mg/kg) in iciada a los 5 meses i de edad resultó en u na¡ reducción suave del porcentaje de ratones protein úricos y de daño renal con respecto a los ratones de veh ículo. No mejoró la su pervivencia .

Ejemplo 2: Resultados ' Peso corporal ¡ Los ratones NZB/W ganaron peso durante el estudio. No se observó diferencia en el peso corporal entre los grupos experimentales. ¡ Supervivencia ' Los ratones NZB/W, F1 tratados con la combinación de CYC202 y I metilprednisolona (MPS), iniciando a partir de los 5 meses de edad, sobrevivieron significativamente más tiempo (P<0.0001 ) que los i ratones de vehículo (Tabla 1 1 ) . Notablemente, a los 12 meses, cuando todos los ratones; a los que se dio vehículo, murieron, 10 de 16 animales (62%) tratados con la terapia combinada permanecieron vivos. Las curvas de supervivencia de ratones que recibieron las ¡ terapias sencillas no fueron diferentes de aquellas del grupo de I vehículo. J i Proteinuria ¡ La Tabla 12 muestra el porcentaje acumulativo de ratones con proteinuria >4 mg/día ¡ evaluados en etapas diferentes de la enfermedad. La asociación de CYC202 y M PS retrasó significativamente el comienzo de la proteinuria en comparación con el i vehículo. En el intervalo de 7 a 10 meses la proporción de ratones proteinúricos en el grupo de terapia combinada fue significativamente menor que en el grupo d¡e vehículo (6.2 a 43.8% versus 40 a 90%). El I CYC202 o la M PS administrados como terapias sencillas afectaron solamente de manera ¡ parcial el comienzo de la proteinuria en comparación con el vehículo, con una reducción significativa en el porcentaje de ratones proteinúricos que se observó a los 7.5 meses para el grupo de CYC202. Función renal i La función renal, evaluada mediante BUN en suero, se midió mensualmente desde los 5 (antes del tratamiento) hasta los 12 meses.

La Tabla 13 muestra el porcentaje acumulativo de ratones con niveles de BUN de >30 mg/dl. i A los 5 meses los niveles de BUN en suero estaban dentro del rango normal (es decir, de 14 a 29 mg/dl) en todos los grupos experimentales. En el grupo de vehículo, la función renal se deterioró con el tiempo. Así, a los 8 y 12 meses el 80% y el 100% de animales, respectivamente, tenían niveles de BUN de >30 mg/dl. En contraste, solamente 27% y 53% de los ratones en la terapia combinada tenían función renal deficiente en estos puntos de tiempo. El CYC202 o la MPS dados solos exhibieron un efecto menos i renoprotector que cuando se usan en combinación. i Morfología renal ' Se realizó un a?álisis morfológico en especímenes renales tomados ya sea de ratones enfermos de manera terminal en diferentes i momentos o ratones sacrificados a los 12 meses. Los datos se I reportan en la Tabla 14. Los ratones NZB/W a los que se les dio vehículo revelaron cambios glomerulares con hipercelularidad i intracapilar asociada c¡on una proliferación extracapilar focal. Se detectaron depósitos de tipo inmune en el mesangio y en el aspecto subendotelial de la membrana basal glomerular. Se observaron también daño tubular e inflamación intersticial. El tratamiento con CYC202 más MPS limitó marcadamente la hipercelularidad glomerular, los depósitos inmunes ¡y el daño tubulointersticial. Se observó un efecto suave en la mo¡rfología renal en ratones administrados con CYC202 o MPS. Acumulación intersticial de monocitos/macrófagos Se analizaron riñones para monocitos/macrófagos positivos i F4/80 mediante técnica inmunohistoquímica. Una marcada acumulación de células positivas F4/80 estuvo presente en el intersticio renal de ratones NZB/W a los que se dio vehículo (Tabla 15). La administración combinada de CYC202 y MPS resultó en una i reducción de 65% del número de monocitos/macrófagos con respecto al vehículo (P<0.01). j El CYC202 dado sólo produjo infiltrados intersticiales en 33%. En el grupo de ratones tratados con MPS sola la acumulación intersticial de células mononucleares fue similar a I aquella encontrada en el grupo de vehículo. A manera de resumen, los resultados mostraron que el CYC202 combinado con una dosis baja de metilprednisolona prolongó significativamente el periodo de vida de ratones con lupus. De I manera notable, el tratamiento fue iniciado en una fase de enfermedad establecida, es decir, 5 meses de edad, cuando la deposición de complejo inmune estab¡a teniendo lugar activamente. La terapia combinada retrasó el comienzo de la proteinuria, la insuficiencia de la función renal limitada y el desarrollo de hipercelularidad glomerular, los depósitos inmunes y los cambios tubulointersticiales. También se exhibió un efecto anti-inflamatorio, como se indica por una acumulación reducida de (células mononucleares en el intersticio renal. La administración de CYC202 o metilprednisolona como terapias sencillas resultó en un efecto renoprotector suave. En conclusión , los resultados del efecto terapéutico de CYC202 y una baja dosis de MPS combinados en el mejoramiento de la manifestación renal de lupus y la supervivencia prolongada en ratones I con lupus con enfermedad establecida pudieran representar la base para un nuevo tratamiento para nefritis por lupus. i Ejemplos 3 y 4: Materiales y Métodos Se probaron inhibidores de CDK 2, 7 y 9 (inhibidores transcripcionales seleccionados), compuestos [1 ] a [12] en un ensayo de proliferación de células T, seleccionado como un ensayo sucedáneo para efecto en anticuerpos antinucleares. Como se mencionó antes, la producción de anticuerpos antinucleares puede estudiarse solamente in vivo puesto que la producción de estos ¡anticuerpos requiere un sistema inmune I disfuncional que comprende células tanto B como T, y una falla para seleccionar y destruir células inmunes que se auto reconocen . Sin embargo, ensayos in vitro para la función de células T (por ejemplo, i un ensayo de proliferación de células T) son herramientas de clasificación apropiadas para identificar compuestos que pueden tener la habilidad de modular la respuesta inmune en la situación compleja I de enfermedad autoinmune. Así, un ensayo de proliferación de células T es capaz de ! proporcionar una medida del efecto de un compuesto en los anticuerpos antinucleares. Preparación de Células Mononucleares de Sangre Periféricas Se condujeron dos l ensayos separados, Ejemplos 3 y 4. Sangre de cubierta (buffy coat) de tres o cuatro donadores sanos (Ejemplos 3 y 4, respectivamente) se obtuvo de los Scottish National Blood Transfusión Services, y se separó mediante centrifugación en tubos de preparación de células BD Vacutainer™ (4 mL capacidad extraída, con cítrato de sodio, REF362781 ) a 300 g durante 30 minutos, temperatura ambiente (RT). La capa de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se recuperó mediante pipeta y se agrupó en tubos de centrífuga de 50 mL, después se lavó dos veces en tres volúmenes de solución ¡ de sal amortiguada de Hank (w/o CaCI2 y MgCI2, Gibco #14175-05,3) centrifugando a 300 g durante 15 minutos (RT). Las PBMCs se suspendieron en medio de cultivo RPMI 1640 i con suero de ternera fetal 10% y se determinó el número de células viables mediante exclusión Trypan Blue. Estimulación y tratamiento de células Las PBMCs se sembraron en placas de 96 pozos a 1 x 105+++ i I células/pozo, en 50 µL de medio de cultivo por pozo. Como control de I I ensayo, se sembraron células de leucemia CCRF-CEM y de mieloma I múltiple LP-1 a 4000 y 5000 células/pozo en 100 µL/pozo en medio de i cultivo RPM I 1640/suero¡ de ternera fetal (FCS) 10%, respectivamente, y crecieron sin estimulación o tratamiento recompuesto durante la duración del experimento. Todos los estimulantes y compuestos se hicieron hasta una concentración final de 4 x en medio de cultivo de tejido y después se agregaron 25 µL de cada fármaco y estimulante a ¡ los pozos, para un volumen final de 100 µL/pozo. Para controles sin estimular, se agregaron 25 µL de medio de cultivo de tejido a los pozos en lugar de estimulante y para células sin tratar, se agregaron 25 µL/pozo de medio de¡cultivo de tejido conteniendo un volumen igual de DMSO (0.1% final). ¡Se trataron tres pozos adyacentes para cada I condición de estimulación/tratamiento y se calculó el valor medio para análisis. , Para el Ejemplo 3, las células se dejaron asentar durante dos ¡ horas antes de estimular con 50 µg/mL de PHA (Phytohemagglutinin PHA-P, Sigma L9132) O 50/250 ng//mL de PMA/I (Phorbol 12-miristato 13-acetato/lonomicina, ¡Sigma P8139/I0634). Además, las PBMCs i fueron estimuladas con ConA (Concanavalin A, Sigma C5275) en concentraciones que fluctúan desde 0.5 µg/mL hasta 100 µg/mL para identificar su efecto estimulatorio y concentración óptima. Para el Ejemplo 4, las PBMcs fueron estimuladas inmediatamente después de i sembradas, ya sea con; 50 µg/mL, como antes, o con 10 µg/mL de ConA. | Para el Ejemplo 3, las PBMCs estimuladas y sin estimular se trataron con compuesto? [1] a [10] a concentraciones de IC50, 2 x IC 0, 3 x IC50 y 4 x IC50. Se! agregaron compuestos a las dos horas antes de la estimulación (tiempo de sembrado), en el momento de la i estimulación y dos horas después de la estimulación y después las células se incubaron a 37° C, CO25%, durante 50, 48 y 46 horas con compuesto, respectivamente, o hasta 48 horas después de la estimulación. Para el Ejemplo 4, las PBMCs se trataron con los compuestos anteriores, más los compuestos [11] y [12], con todos los I compuestos probados a ¡ 0.5 x IC50 y 0.25 x IC50 además de las concentraciones previas. Los compuestos se agregaron inmediatamente después de la estimulación y las células se incubaron I durante 48 y 72 horas. ¡ Las IC50s estuvieron basadas en las IC50s promedio de 72 horas a partir de ensayos de citotoxicidad en casa en paneles de células de tumor (Tabla 16), excepto para los compuestos i [1] y [3] para los cuales las IC50s estuvieron basadas en IC50s publicadas usadas previamente en casa, ya que no estuvo disponible la información de IC50 en jcasa. Ensayo de ELISA BrdU y Alamar Blue i La actividad de ¡proliferación de PBMCs después de la i estimulación y tratamiento con compuestos se determinó midiendo la incorporación de BrdU, usando ELISA de Proliferación de Células, paquete de BrdU (colorimétrico) (Roche # 1 647 229). Este paquete es un método de reemplazo no radioactivo para incorporación de H3 de timidina. Las células fueron etiquetadas con BrdU durante dos horas antes de la cosecha. Las placas se centrifugaron después durante i diez minutos a 300 g (RT), se removió el sobrenadante de los pozos mediante pipeta y las células se secaron durante una hora a 60° C. Se agregó solución FixDenat a las placas (100 µL/pozo) y se incubaron durante 30 minutos, después se sacudió para remover y la i solución de anti-BrdU-POO se agregó a las placas (100 µL/pozo), las placas se incubaron con solución de sustrato (100 µL/pozo) durante 30 minutos, después se agregó H2SO 1M (25 µL/pozo) y se leyó la densidad óptica a 450 nM, en un lector de placas Ascent Fluoroskan. La viabilidad de las PBMCs fue evaluada usando reactivo Alamar Blue (Biosource # DALMOO). Se hizo Alamar Blue 20% fresco en i medio de cultivo y se' agregaron 100 µL a cada pozo para una i concentración final de 10%. Las placas se incubaron con Alamar Blue a 37°, CO2 5%, durante tres horas antes del momento de la cosecha (48 o 72 horas) y después se lee la florescencia usando longitud de onda de 535 nM de excitación y longitud de onda de 595 nM de emisión, en un lector deiplacas Tecan Ultra. Ejemplo 3: Resultados; La estimulación con PHA aumentó la incorporación de BrdU aproximadamente siete veces en comparación con células sin estimular. El tratamiento con vehículo de DMSO no afectó la incorporación de BrdU o la viabilidad de células estimuladas con PHA, i o sin estimular (Figura 4). Como se muestra en la Figura 5, el i tratamiento de células estimuladas con PHA con todos los compuestos probados redujo la incorporación de BrdU, en muchos casos por debajo del nivel visto én células sin estimular. La reducción en la incorporación de BrdU ¿s evidente a concentraciones tan bajas como IC50 y con las excepciones de los compuestos [9] y [10], la cantidad de incorporación de BrdU ¡ todavía restante no se correlaciona con la j concentración del conipuesto, sugiriendo conjuntamente que los compuestos han alcanzado su efecto inhibidor máximo de proliferación en IC55o- Para los compuestos [9] y [10] el efecto es dependiente claramente de la concentración, con 3 a 4 veces más incorporación de ! BrdU a IC50 cayendo a niveles no estimulados en las concentraciones mayores. ¡ Para la mayoría de j los compuestos, el tiempo de tratamiento de compuesto con relación al tiempo de la estimulación no tuvo un gran i efecto en el nivel de incorporación de Brd U, muy probablemente i porque la estimulación ?o había tenido efecto todavía en aquellas i primeras cuatro horas |después de la siembra de PBMC. Las excepciones a esto son los compuestos [2], [3] y [4] donde, de manera sorprendente, hay menor reducción en la incorporación de BrdU con pretratamiento de compuestos (-2 h) que cuando el tratamiento con compuestos fue iniciado al mismo tiempo, o después de la estimulación (Figura 5). ¡ Similar al tratamiento con PHA, la estimulación con PMA/I resulta en un incremento de alrededor de siete veces en la incorporación de BrdU en células sin estimular, cuando en la ausencia de compuesto (Figura 5). El tratamiento con todos los compuestos diferentes a los compuestos [4], [9] y [10] redujo la incorporación de BrdU aún más que en las células estimuladas con PHA y generalmente hasta niveles inferiores a aquellos vistos en las células sin estimular, I en todas las concentraciones. Las PBMCs estimuladas con PMA/I y i tratadas con DMSO mostraron solamente viabilidad muy baja en ensayo de Alamar Blue,; mientras que la incorporación de BrdU fue incrementada (Figura 4), como se mencionó anteriormente. De manera similar, la incorporación de Brd U aún restante después del tratamiento de células estimuladas con PMA/I con los compuestos [4], [9] y [10] es mayor que en células estimuladas con PHA, a pesar de los valores negativos de Alamar Blue. La titulación de ( oncanavalin A muestra que ConA estimula PBMCs en una manera ' dependiente de la concentración , alcanzando su efecto máximo a 10 µg/mL. La incorporación de BrdU se reduce entonces hasta niveles sin estimular (concentraciones mayores), consistente con la evaluación de viabilidad y observaciones al microscopio que indican que las PBMCs no son viables con las concentraciones mayores de ConA probadas. Cuando se compara con i PHA y PMA/I , la estimulación con 10 µg/mL de ConA aumenta la incorporación de BrdU hasta un nivel comparable, o en I aproximadamente seis ¡veces sobre las PBMCs sin estimular, sin I reducir la viabilidad (Figµra 7). Ejemplo 4: Resultados ¡ I En el Ejemplo 3 se concluyó que todos los compuestos probados ¡ afectan la actividad de ¡proliferación de células PBMC estimuladas a concentraciones tan bajas como IC50. Se llevó a cabo un experimento subsiguiente (Ejemplo i 4) para estudiar la dependencia de la concentración de este efecto en concentraciones de fármaco inferiores ¡ a IC50. Los tratamientos se repitieron como antes, con la adición de tratamientos a concentraciones inferiores, 0.5 x y 0.25 x IC50, y control de DMSO, para todos los compuestos probados previamente más los i compuestos [1 1 ] y [12].¡ Puesto que el tiempo de tratamiento con compuesto con relación a la estimulación no pareció ser central para la inhibición de la actividad de proliferación , las PBMCs fueron estimuladas y tratadas con compuestos al mismo tiempo, inmediatamente después del sembrado. Las célu las fueron estimuladas con PHA como antes, o con 1 0 µg/mL de ConA. La estimulación con PHA aumentó la incorporación de Brd U de células tratadas con DMSO en más de 20 veces y la estimulación con ConA en más de diez veces, a las 48 horas, con incremento ad icional i a las 72 horas, y el veh ículo de DMSO no tuvo efecto ni en la incorporación de Brd U ni en la viabilidad ( Fig ura 8) . Como se muestra en la Figura 9, todos los compuestos redujeron la incorporación de i Brd U en una manera dependiente de la concentración , la mayoría alcanzando el efecto máximo a concentraciones de I C50 o 2 x IC50, cuando se estimularon coin PHA. Esto confirma la observación previa de que la dependencia de la concentración no se detectó en concentraciones por arriba de IC50, puesto q ue el efecto máximo ya había sido alcanzado. Dé manera g lobal , el mismo efecto se vio para PBMCs estimuladas con ConA, aunq ue el efecto máximo se alcanzó a i concentraciones ligeramente menores. Esto puede ser un resultado del hecho de q ue las señales de Brd U caen a niveles de base en el i efecto máximo y, como las señales son solamente la mitad de alto i para células estimuladas con ConA como para células estimu ladas con PHA, la sensibilidad del ensayo puede ser ligeramente menor para las primeras. ¡ i Como a ntes, los compuestos [4] , [9] y [1 0] se comportan de manera ligeramente diferente del resto de los compuestos .

Consistente con el experimento previo , la dependencia de la concentración se vio claramente en los compuestos [9] y [1 0] en concentraciones de I C 0 anteriores, las cuales se extienden entonces a las concentraciones menores. A 4 x IC50 la incorporación de BrdU estuvo disminuyendo aún y las señales se fueron aproximando a niveles de base para células estimu ladas con ConA, pero fueron ligeramente superiores en las célu las estimuladas con PHA. Sin desear estar limitado por u na teoría , esto sugiere que la actividad de proliferación sería completamente inhibida como con los otros compuestos, pero son necesarias concentraciones superiores para alcanzar esto. Para las células tratadas con el compuesto [4] , las señales de I Brd U no reducen a niveles de base con ninguna estimulación , aún a 4 x IC50. Además, se vio¡ poca correlación entre la incorporación de i Brd U y la concentración del compuesto a las concentraciones mayores, consistente con nuestros resultados previos. Sin desear i estar limitado por algu na teoría, esto sugiere que el efecto del compuesto [4] en la actividad de proliferación se maximiza en alrededor de 2 x IC50 como para la mayoría de los otros compuestos, pero el g rado de exhibición log rado es menor. La evaluación de viabilidad med iante el ensayo de Alamar Blue mostró que la viabilidad de PBMCs se reduce ligeramente con la estimulación , pero es generalmente comparable entonces entre las PBMCs tratadas con compuestos, tratadas con DMSO y sin tratar. Además, n ingu na reducción en conteos de Alamar Blue está asociada con las concentraciones ¡crecientes de compuesto , lo que confirma q ue la incorporación de BrdU decreciente no es causada por efectos de citotoxicidad de los compuestos y es meramente representativa de la in hibición de ia actividad de proliferación . A manera de resumen , los experimentos han mostrado que el i tratamiento con cualq uiera de un conju nto de in hibidores tra nscripcionales altera él efecto de la estimulación con PHA o ConA i en linfocitos T, resu ltando en una inhibición completa de la actividad de proliferación en una manera dependiente de la concentración . En general , se ve la misma tendencia para células estimu ladas con PHA y ConA, a unque la in hibición completa de la proliferación parece alcanzarse a concentraciones menores de fármaco en células i estimuladas con ConA q ue en las células estimuladas con PHA. Esto puede ser un artefacto de la estimulación total menor lograda i med iante ConA que con PHA. La mayoría de los compuestos siguen el mismo patrón donde se ve primero alguna in hibición de la actividad de proliferación con concentraciones tan bajas como 0.25 x IC50 o 0.5 i x I C50, alcanzándose entonces la inhibición completa en alrededor de I 2 x I C50, con alg u nas diferencias en cuanto a que tan rápido es la I caída de la actividad , de proliferación con concentraciones de compuesto crecientes. Un ejemplo de interés es el compuesto [7], q ue alca nza la inhibición completa a concentraciones tan bajas como 0.25 x I C50. Sin embargó , la comparación entre concentraciones específicas de compuestos diferentes debe ser enfocada con í precaución , puesto que! los valores de I C50 están basados en promedios a partir de paneles de células diferentes. Se ven excepciones para el patrón descrito para los compuestos [9] y [10], los cuales son necesarios en concentraciones mayores que los otros compuestos para tener el mismo efecto, y para el compuesto [4], que sigue la misma dependencia de la concentración que los otros, pero falla en alcanzar la inhibición completa de la actividad de i proliferación a las concentraciones mayores. Los experimentos han mostrado que la viabilidad de PBMC se reduce ligeramente con la estimulación, pero ninguna reducción adicional significativa ¡ está asociada con el tratamiento con i compuestos. De manera más importante, la viabilidad claramente no es dependiente de la concentración del compuesto y la reducción medida en la incorporación de BrdU , por lo tanto, representa la inhibición verdadera de la actividad de proliferación y no la citotoxicidad de los compuestos. Varias modificaciones y variaciones de la invención serán aparentes para aquellos expertos en la técnica sin apartarse del alcance y el espíritu de la invención . Aunque la invención ha sido i descrita en relación con modalidades específicas preferidas, debe I entenderse que la invención como se reivindica no debe estar limitada i indebidamente a tales modalidades específicas. De hecho, varias modificaciones de los modos descritos para llevar a cabo la invención i que son obvias para aquellos expertos en los campos relevantes se i pretende que estén cubiertas por la presente invención. t Referencias Balomenos D. et al: El inhibidor p21 de ciclo celular controla la I I proliferación de células T y el desarrollo de lupus vinculado con el sexo. Nat. Med., 6: 171-176, 2000. Corna D. et al. Micofenolato mofetil limita el daño renal y prolonga la vida en enfermedad de lupus de murino. Kidney Int, 51: 1583-1589, 1997. I l Foster MH. et al. Modelos en animales de nefritis de lupus eritematoso sistémico para enfermedad humana. Semin Nephrol, 19:12-24, 1999. ¡ Gelfand et al. ¡Estudios terapéuticos en ratones NZB/W.

Sinergia de azatiopriná, ciclofosfamida y metilprednisolona en combinación. Arthritis Rheum, 15: 239-246, 1972. Kewalramani R. et jal. Inmunopatogénesis de lupus y nefritis de lupus: comprensión reciente. Curr Opin Nephrol Hypertens, 11: 273- I 277, 2002. ! Von Mullen C. A. ¡et al. Autoanticuerpos en la Diagnosis de Enfermedades Reumáticas Sistémicas. Semin Arthritis Rheum 1995; 24: 323-58. ! i Peutz-Kootstra et ,al. Nefritis de lupus: lecciones a partir de i modelos animales experimentales. J Lab Clin Med, 137: 244-259, l 2001. ¡ Rekvij OP et al. Anticuerpos ADN anti-doble-hebra, nucleosomas y lupus eritematoso sistémíco. Arthritis & Rheumatism 48: 300-312, 2003. Reichlin M. et al. Anticuerpos Antinucleares: Una Vista General, Lupus Eritematoso de Dubois 5a Edn. eds Wallace D. J. y Hahn B. H., Williams, Wilkins y Baltimore, 1997, p 397-405. Shanklang S.J. et al. Proteínas regulatorias del ciclo celular en enfermedad renal: papel en hipertrofia, proliferación y apoptosis. Am J Physiol Renal Physiol, ,238: F 515-F 529, 2000. Van Venrooij W J., et al. Manual de Marcadores Biológicos de Enfermedad, Sección B:¡Autoantígenos. Kluwer Academic Publishing, 1994. ¡ I Xu L. et al. Células T de lupus humano resisten la inactivación y escapan de la muerte mediante regulación creciente COX-2. Nature Medicine, 10: 411-415, 2004. Zoja C. et al. Expresión renal de proteína-1 quimioatrayente de monocito en ratones autoinmunes de lupus. J Am Soc Nephrol 8: 720-729, 1997. Zoja C. et al. Bindarit retrasa la enfermedad renal y prolonga la supervivencia en enfermedad autoinmune de lupus en murino. Kidney Int, 53: 726-734, 1998. ! Zoja C. et al. Mic¡ofenolato mofetil combinado con un inhibidor i de ciclooxigenasa-2 mejora la nefritis de lupus en murino. Kidney Int, 60: 653-663, 2001.

Tabla 1 : Peso Corporal Los valores se expresan como media ± SE Tabla 2: Consumo de Al imento Los valores se exprjesan como media ± SE Tabla 3: Consumo de Ag ua 2.5 3.5 4.5 5 meses Vehículo 4.62 ± 5.00 ± 5.00 ± 4.54 ± 5.15 ± 5.00 ± 5.08 ± 0.33 i 0.30 0.30 0.39 0.15 0.23 0.23 Los valores se expresan como media ± SE Tabla 4: % Supervivencia Tabla 5: Porcentaje acumulativo de ratones proteinúricos rP<0.05, **P<0.01 ys vehículo Tabla 6: Función renal evaluada mediante BUN en suero Tabla 7: Anticuerpos a ti-ADN en suero (U/ml) Los valores están expresados como media ± SE *P<0.05, **P<0.01 ys vehículo en el tiempo correspondiente. Tabla 8: Transaminasa én Suero IU/L Los valores están expresados como media ± SE i Tabla 9: Histología Renal Los valores están expresados como media ± SE. *P<0.05, **P<0.05, ooP<0.01 vs CYC202 (100 mg/kg) a partir de los 5 meses.

Tabla 10: Monocitos/macrófagos positivos F4/80 en el intersticio renal Tabla 11: % Supervivencia El tratamiento empezó a los 5 meses de edad. CYC202 + MPS prolongaron significativamente (P<0.0001) la vida con respecto al vehículo. Tabla 12: Porcentaje a?umulativo de ratones con proteinuria >4 mg/día ¡ Cada punto refleje el nivel actual de proteinuria en ratones sobrevivientes así como también la última medición en ratones muertos. 0.05, **P<0.01 !vs vehículo. i Tabla 13: Función Renal - % Acumulativo de ratones con BUN>30 mg/dl Niveles de BUN>30¡ mg/dl fueron considerados anormales (rango normal: 14 a 29 mg/dl) Tabla 14: Histología Renal Los valores estári expresados como marca de media ± SE. *p<0.05, **p<0.01 vs vehículo; °p<0.05 vs MPS.

Tabla 15: Monocitos/macrófagos F4/80 en el intersticio renal j (Células/HPF) Los valores están expresados como medía ± SE. HPF = campo í de alta potencia. **p<0.01 vs vehículo, °p<0.05 vs <PS Rango de control de ratones CD-1: 0 - 4 células/HPF. I Tabla 16: Valores (µM) promedio de 72 horas de IC50 para panel de i células en casa y valor redondeado de IC50 usado, para facilidad de cálculos j * Información no ' disponible de citotoxicidad en casa, IC50s publicados para células HCT116 en Raynaud et al., Clin Cáncer Re 11 (13): 4875-87, 2005. ¡ Tabla 17: Valores (µM) promedio de IC50 para compuestos contra CDK/ciclina y enzimas; Aurora a partir de ensayos de cinasa en casa

Claims (1)

1. I ( REIVINDICACIONES i 1. Uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos i antinucleares, en donde |el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 o una sal del mismo farmapéuticamente aceptable se administra en una cantidad suficiente para, la regulación reductora de los niveles de anticuerpos antinucleares. 2. Uso de acue¡rdo con la reivindicación 1, en donde la i enfermedad es una j enfermedad reumática autoinmune o i autoinmunidad específica de órgano. 3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la enfermedad reumática autoinmune se selecciona de lupus inducido por fármaco, lupus eritematoso sistémico (SLE), y artritis reumatoide. 4. Uso de acue;rdo con la reivindicación 3, en donde la enfermedad reumática autoinmune es lupus eritematoso sistémico (SLE). ; i 5. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde los anticuerpos antinucleares son anticuerpos anti-ADN. 6. Uso de acuerdó con cualquier reivindicación precedente, en i donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para la regulación reductora de la expresión de Mcl-1. i i 7. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para retrasar el comienzo de proteinuria e insuficiencia de función renal. < i 8. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en i donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para reducir los cambios glomerulares y tubulointersticiales. i 9. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en i donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para reducir la acumulación intersticial de células i mononucleares. ¡ 10. Uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde el inhibidor de CDJK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para inhibir la ¡proliferación de células T (inducida por PMA y ConA). i i 11. Uso de acuerdó con cualquier reivindicación precedente, en donde el medicamento és para uso en terapia en combinación con metilprednisolona. ¡ t 12. Un método para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares en un sujeto, dicho método que comprende administrar al sujeto un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en una cantidad I suficiente para la regujación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares. ¡ 13. Un método para tratar una enfermedad autoinmune en un sujeto mediante la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares en dicho sujeto, dicho método que comprende administrar un inhibidor ele CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamenlte aceptable, en una cantidad suficiente para la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares. i 14. Un método ¡ para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antínucleares en un sujeto mediante la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares, dicho método que comprende administrar un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, de manera que se I trata dicha enfermedad. | i 15. Un método de¡ regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares en un sujeto, dicho método que comprende administrar i un inhibidor de CDK2 ¡ y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, a dicho sujeto en una cantidad i suficiente para la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares. i I 16. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15;, en donde la enfermedad es una enfermedad reumática autoínmune o autoinmunidad específica de órgano. i 17. Un método de iacuerdo con la reivindicación 16, en donde la enfermedad reumática aútoinmune se selecciona de lupus inducido por fármaco, lupus eritematoso sistémico (SLE) y artritis reumatoide. I 18. Un método de ¡acuerdo con la reivindicación 17, en donde la ¡ enfermedad reumática autoinmune es lupus eritematoso sistémico (SLE). ; i 19. Un método de acuerdo con cualquiera de las I reivindicaciones 12 a 18; en donde los anticuerpos antinucleares son anticuerpos anti-ADN. ¡ 20. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 19j en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para la regulación reductora de i la expresión de Mcl-1. j i 21. Un método de acuerdo con cualquiera de las i reivindicaciones 12 a 20,1 en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o I CDK9 está en una cantidad suficiente para retrasar el comienzo de proteinuria y deficiencia de la función renal. 22. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una ¡cantidad suficiente para reducir cambios i glomerulares y tubulointérsticiales. 23. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 22] en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o i CDK9 está en una cantidad suficiente para reducir la acumulación intersticial de células mononucleares. ! 24. Un método de acuerdo con cualquiera de las t reivindicaciones 12 a 23; en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 está en una cantidad suficiente para inhibir la proliferación de i células T inducida mediante PMA y ConA. 25. Un método de acuerdo con cualquiera de las ! reivindicaciones 12 a i 24 que comprende además administrar i metilprednisolona al sujeto. 26. Un método de acuerdo con la reivindicación 25, en donde la metilprednisolona y el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, se administran ! simultáneamente, secuencialmente o por separado. 27. Un método para la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares en una célula, dicho método que comprende i poner en contacto dicha célula con un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en una i cantidad suficiente para la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares en dicha célula. 28. Una composición farmacéutica para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, dicha composición que comprende un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, en una cantidad i suficiente para la regulación reductora del nivel de anticuerpos antinucleares, mezcladoj con un diluyente, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. 29. Una combinación que comprende un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y i metilprednisolona. ! 30. Una composición farmacéutica que comprende una combinación de acuerdó con la reivindicación 29 y un portador, i diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. 31 . Un producto farmacéutico que comprende un inhibidor de í CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednis¡olona como una preparación combinada para uso simultáneo, secuencial o separado en terapia . 32. Un producto farmacéutico de acuerdo con la reivindicación 31 , en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y la metilprednisolona se administran simultáneamente. 33. Un producto farmacéutico de acuerdo con la reivindicación I 31 o la reivindicación 32, que comprende además un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. i 34. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 31 a ¡ 33 para uso en el tratamiento de una i enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares. 35. Un producto f rmacéutico de acuerdo con la reivindicación I 34, en donde la enfermedad es una enfermedad reumática autoinmune o autoinmunidad específica de órgano. i 36. U n producto farmacéutico de acuerdo con la reivindicación 35, en donde la enfermedad reumática autoinmune se selecciona de lupus inducido por fármaco, lupus eritematoso sistémico (SLE), y artritis reumatoide. 37. Un producto farmacéutico de acuerdo con la reivindicación i 36, en donde la enfermedad reumática autoinmune es lupus i eritematoso sistémico (SLE). 38. Una composición farmacéutica que comprende: (i) un inhibidor de; CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; y (ii) y metilprednisolona; í mezclados con un diluyehte, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. 39. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 28, 30 o 38, o un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 31 a 37, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 es un derivado de purina o un derivado de pirimidina. i 40. Una composición farmacéutica de acuerdo con la I reivindicación 28, 30 o 38, o un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 31 a 37, en donde el inhibidor de t CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 se selecciona de los siguientes: tu [21 [3] [4] [51 [6] [8] [9] [10] [111 [121 y sales de los mismos farmacéuticamente aceptables. 41 . Una composición farmacéutica de acuerdo con la i reivindicación 28, 30 o 38, o un producto farmacéutico de acuerdo con I cualquiera de las reivindicaciones 31 a 37, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 se selecciona de roscovitina , olomoucina y purvalanol A, y sales de los mismos farmacéuticamente aceptable. 42. Una composición farmacéutica de acuerdo con la ! reivindicación 28, 30 o 3 , o un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 31 a 37, en donde el inhibidor de I CDK2 y/o C DK7 y/o QDK9 es roscovitina o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. I 43. Uso de una combinación de acuerdo con la reivindicación 29 i en la preparación de uh medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares. 44. Uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde !el medicamento es para uso en combinación i con metilprednisolona. i 45. Uso de mftilprednisolona en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares, en donde ¡el medicamento es para uso en combinación con un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo i farmacéuticamente aceptable. I 46. Uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona, en la i preparación de un medicamento para tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares. 47. Uso de un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un i medicamento para el tratamiento de una enfermedad asociada con ! anticuerpos antinucleares, en donde dicho tratamiento comprende i administrar a un sujeto; de manera simultánea, secuencial o por i separado, un inhibidor dé CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona. 48. Uso de acuerdó con cualquiera de las reivindicaciones 43 a i I 47, en donde la enfermedad es una enfermedad reumática autoinmune o autoinmunídad específica de órgano. 49. Uso de acuerdo con la reivindicación 48, en donde la eritematoso sistémico (SLE). 51 . Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 43 a i 50, en donde los anticuerpos antinucleares son anticuerpos anti-ADN . i 52. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 43 a i 50, en donde se reduce e¡l nivel de anticuerpos antinucleares. i 53. Un método Jpara tratar una enfermedad asociada con anticuerpos antinucleares en un sujeto, dicho método que comprende administrar al sujeto una ¡cantidad terapéuticamente aceptable de: (i) un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; y (ii) y metilprednisolpna. 54. Un método de acuerdo con la reivindicación 53, en donde un inhibidor de CDK2 y/o ¡ CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona se administran de ¡ manera simultánea, por separado o secuencialmente. 56. Un método de acuerdo con la reivindicación 55, que comprende administrar un inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, a un sujeto antes de administrar secuencialmente o por separado metilprednisolona a dicho sujeto. , 57. Un método ¡de acuerdo con la reivindicación 55, que I comprende administrar ¡ metilprednisolona a un sujeto antes de administrar secuencialménte o por separado un inhibidor de CDK2 y/o t CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. 58. Un métod'o de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 53 a 57,¡ en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o t CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y metilprednisolona se administran cada uno en una cantidad terapéuticamente efectiva con respecto a los componentes individuales. < 59. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 53 a 57,¡ en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y i metilprednisolona se administran cada uno en una cantidad I subterapéutica con respelcto a los componentes individuales. 60. Un métod¡o de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 53 a 57,¡ en donde la enfermedad es una enfermedad reumática autoinmune o autoinmunidad específica de órgano. i 61 . Un método de la reivindicación 60, en donde la enfermedad I reumática autoinmune sé selecciona de lupus inducido por fármaco, lupus eritematoso sistémico (SLE), y artritis reumatoide. Í 62. Un método de acuerdo con la reivindicación 61, en donde la ¡ enfermedad reumática áutoinmune es lupus eritematoso sistémico (SLE). ! 63. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o 43 a 52, o un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 27¡o 53 a 62, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 es un de;rivado de purina o un derivado de pirimidina. 64. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o 43 a 52, o un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 27 ¡o 53 a 62, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 se selecciona de los siguientes: [4] [5] [6] 65. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 o 43 a 52, o un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 27 |o 53 a 62, en donde el inhibidor de CDK2 y/o CDK7 y/o CDK9 se selecciona de roscovitina, olomoucina y purvalanol A. 66. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 o 43 a 52, o un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 27 ¡o 53 a 62, en donde el inhibidor de CDK2 y/o I CDK7 y/o CDK9 es ¡ roscovítina, o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable. ¡ 67. Un método, uso, combinación , composición farmacéutica o producto farmacéutico sustancialmente como se describe en la j presente y con referencia¡ a las Figuras adjuntas.