MD707Z - Метод идентификации полиморфных последовательностей 4а/4б гена эндотелиальной синтетазы оксида азота - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к молекулярно-медицинской генетике, a именно к методу идентификации полиморфных последовательностей 4а/4б гена эндотелиальной синтетазы оксида азота.Сущность метода состоит в том что осуществляют забор цельной крови, экстрагируют ДНК 0,7 M гидроксида аммония, выдерживают при комнатной температуре в течение 5 мин и инкубируют в термостате при температуре 100ºC в течение 30 мин с непрерывным перемешиванием, затем экстрагированную ДНК амплифицируют с использованием смысловых праймеров NOS3: 5´-GCCCTATGGTAGTAGTGCCTTT-3´ и антисмысловых NOS3: 5´- CCTCTTAGTGCTGTGGTCA-3´, при этом осуществляют изначальную денатурацию при температуре 94°C в течение 3 мин, затем осуществляют 30 циклов с денатурацией при температуре 94°C в течение 1 мин, при температуре 54°C в течение 30 с, при температуре 72°C в течение 30 с и при температуре 72°C в течение 5 мин, отделяют амплифицированные фрагменты ДНК в 1,8% агарозном геле, окрашивают 0,5 µg/ml раствором бромистого этидия и идентифицируют полиморфные последовательности.