KR980002260A - 방선균의 단백질 분비에 관여하는 secY 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법 - Google Patents

방선균의 단백질 분비에 관여하는 secY 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR980002260A
KR980002260A KR1019960023808A KR19960023808A KR980002260A KR 980002260 A KR980002260 A KR 980002260A KR 1019960023808 A KR1019960023808 A KR 1019960023808A KR 19960023808 A KR19960023808 A KR 19960023808A KR 980002260 A KR980002260 A KR 980002260A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
secy
gene
secy gene
protein
secretion
Prior art date
Application number
KR1019960023808A
Other languages
English (en)
Other versions
KR100196768B1 (ko
Inventor
서주원
김순옥
김상숙
Original Assignee
서주원
하영칠
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 서주원, 하영칠 filed Critical 서주원
Priority to KR1019960023808A priority Critical patent/KR100196768B1/ko
Publication of KR980002260A publication Critical patent/KR980002260A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100196768B1 publication Critical patent/KR100196768B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/36—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Actinomyces; from Streptomyces (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C12N15/76—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Actinomyces; for Streptomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/101—Plasmid DNA for bacteria

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

B. subtilis와 M. luteus와 같은 그람 양성균으로 자연적 단백질 분리체계가 발달되어 있고 여러 가지 유용한 2차 대사산물을 생산하며 분자생물학적으로 방선균 연구의 모델 시스템으로 이용되고 있는 S. coelicolor와 외래 유전자 산물의 발현균주로 많이 이용되는 Streptomyces lividans로부터 세포의 단백질 분비의 트랜스로케이터의 역할을 하는 것으로 알려진 SecY 단백질의 유전자를 분리하고 이제까지 밝혀진 SecY 유전자 염기서열과의 상동성 여부, 유전자 조직, 아미노산 서열의 상동성과 소수성 분석(hydrophobic analysis) 등으로 SecY 유전자임을 확인하고 이 SecY 유전자를 이용하여 자연적인 단백질 분비체계가 발달된 S. coelicolor와 S. lividans를 유용 이종 단백질 분비증대를 위한 균주로 개발하고자 한다.

Description

방선균의 단백질 분비에 관여하는 secY 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 spc 오페론내에 보존된 지역의 아미노산 서열을 이용하여 제작한 PCR 프라이머를 나타낸 도면.
제2도는 4개의 프라이머를 이용하여 Streptomyces coelicolor(a)와 Srteptomyces lividans(b)의 게놈 (genomic) DNA로부터 얻은 PCR 생성물을 나타낸 도면.
제3도는 Streptomyces coelicolor(a)와 Steptomyces lividans(b)에서 클로닝한 secY 유전자의 제한 효소 지도.
제4도 (a) 및 (b)는 Streptomyces coelicolor와 Streptomyces lividans secY 유전자의 DNA 염기 서열과 추론한 아미노산 서열을 나타낸 도면.
제8도는 B. subtilils (a), M. luteus (b), S. coelicolor (c), S. lividans (d)에서 SecY 단백질의 소수성을 비교하여 나타낸 도면.

Claims (14)

  1. 단백질의 분비에 관여하는 secY 유전자.
  2. 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자는 Streptomyces coelicolor 또는 Streptomyces lividans에서 분리한 secY 유전자.
  3. 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자는 제4도의 DNA 염기서열을 갖는 secY 유전자.
  4. 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자는 adk 오페론에 포함되는 secY 유전자.
  5. 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자의 프로모터 지역이 GTG 번역시작코돈으로부터 -10위치의 AGGA와 -35위치의 TTGACG 염기서열을 갖는 지역이고 리보좀 결합지역은 ORF로부터 -10위치의 GGAGG 염기서열을 갖는 지역이고 GTG 개시코돈으로부터 TGA 종결코돈까지의 1314bp로 되어 있으며 438개의 아미노산을 구성하는 secY 유전자.
  6. 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자는 분자량이 47.4kD이고 10개의 소수성의 트랜스멤브레인 세그먼트를 가지며 세포벽을 10회 통과하는 구조를 가지는 트랜스멤브레인 단백질인 secY 단백질을 코딩하는 secY 유전자.
  7. 제1항의 secY 유전자를 분리하여 상기 유전자 서열을 결정한 DNA 절편을 포함하는 대장균에서 안정한 플라스미드.
  8. 제1항의 secY 유전자를 분리하여 상기 유전자 서열을 결정한 DNA 절편을 포함하는 방선균 플라스미드.
  9. 제1항의 secY 유전자를 벡터 DNA에 삽입하고; 상기 제1항의 secY 유전자가 삽입된 벡터 DNA를 숙주세포에 도입하고; 상기 숙주세포를 배양하여 생산된 단백질의 대량 분비 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 숙주세포는 방선균으로 생산된 단백질의 대량 분비 방법.
  11. 제1항의 secY 유전자에 의하여 발현되어 이종 단백질을 분비하는 secY 단백질.
  12. 제1항에 있어서, 상기 secY 단백질은 제5도의 아미노산 서열을 갖는 secY 단백질.
  13. 제1항의 secY 유전자를 단백질 분비증대를 목적으로 이용 및 변형하여 제작된 벡터.
  14. 제1항의 secY 유전자를 단백질 분비증대를 목정으로 이용 및 변형하여 제작된 균주.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019960023808A 1996-06-26 1996-06-26 방선균의 단백질 분비에 관여하는 sec y 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법 KR100196768B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019960023808A KR100196768B1 (ko) 1996-06-26 1996-06-26 방선균의 단백질 분비에 관여하는 sec y 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019960023808A KR100196768B1 (ko) 1996-06-26 1996-06-26 방선균의 단백질 분비에 관여하는 sec y 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR980002260A true KR980002260A (ko) 1998-03-30
KR100196768B1 KR100196768B1 (ko) 1999-06-15

Family

ID=19463470

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019960023808A KR100196768B1 (ko) 1996-06-26 1996-06-26 방선균의 단백질 분비에 관여하는 sec y 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100196768B1 (ko)

Also Published As

Publication number Publication date
KR100196768B1 (ko) 1999-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Brown et al. Isolation and characterization of the major vegetative RNA polymerase of Streptomyces coelicolor A3 (2); renaturation of a sigma subunit using GroEL
Bartlett et al. Isolation of a gene regulated by hydrostatic pressure in a deep-sea bacterium
Predich et al. Characterization of RNA polymerse and two sigma‐factor genes from Mycobacterium smegmatis
KR940021731A (ko) Crm 단백질 및 디프테리아 독소의 생산을 위한 방법 및 플라스미드
Barbara et al. Immunodominant membrane proteins from two phytoplasmas in the aster yellows clade (chlorante aster yellows and clover phyllody) are highly divergent in the major hydrophilic region
Jacob‐Dubuisson et al. Amino‐terminal maturation of the Bordetella pertussis filamentous haemagglutinin
WO2014102265A1 (en) Methods and compositions relating to crm197
Tan et al. The Streptomyces coelicolor sporulation-specific σWhiG form of RNA polymerase transcribes a gene encoding a ProX-like protein that is dispensable for sporulation
Koller et al. Recombinant Streptomyces lividans secretes a fusion protein of tendamistat and proinsulin
BR9810650A (pt) Vetor para expressão de proteìna heteróloga e métodos para extrair proteìna recombinante e para purificar insulina recombinante isolada
US5858773A (en) Regulatory nucleotide sequence of the initiation of transcription
KR980002260A (ko) 방선균의 단백질 분비에 관여하는 secY 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법
IE831099L (en) Cloning vehicles for polypeptide expression in microbial¹hosts
Cadenas et al. Expression of Streptomyces genes encoding extracellular enzymes in Brevibacterium lactofermentum: secretion proceeds by removal of the same leader peptide as in Streptomyces lividans
Fjellbirkeland et al. The C-terminal part of the surface-associated protein MopE of the methanotroph Methylococcus capsulatus (Bath) is secreted into the growth medium
DK1015579T4 (en) Clostridium toxin as well as process for the preparation of immunogenic compositions
Aziminia et al. Cloning and expression of Clostridium perfringens type D vaccine strain epsilon toxin gene in E. coli as a recombinant vaccine candidate
US11365401B2 (en) Oligosaccharyltransferase polypeptide
KR20090018315A (ko) 대장균 유래 ｐｔｓＬ 프로모터를 함유하는 재조합벡터 및이를 이용한 외래 단백질의 제조방법
Cox et al. Cloning and characterisation of the Pasteurella multocida ahpA gene responsible for a haemolytic phenotype in Escherichia coli
Madu et al. Molecular cloning and in vitro expression of a silent phenoxazinone synthase gene from Streptomyces lividans
Aramaki et al. Nucleotide sequence of the gene encoding a repressor for the cytochrome P-450cam hydroxylase operon on the Pseudomonas putida CAM plasmid
Korepanov et al. General stress protein CTC from Bacillus subtilis specifically binds to ribosomal 5S RNA
JPH11500918A (ja) 細菌系内で修飾組換えタンパク質を発現させるための方法
Cole et al. Molecular genetic studies of UV-inducible bacteriocin production in Clostridium perfringens

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20030224

Year of fee payment: 5

LAPS Lapse due to unpaid annual fee