KR980002260A - 방선균의 단백질 분비에 관여하는 secY 유전자 및 이를 이용한 단백질의 대량 생산 방법 - Google Patents
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Abstract
B. subtilis와 M. luteus와 같은 그람 양성균으로 자연적 단백질 분리체계가 발달되어 있고 여러 가지 유용한 2차 대사산물을 생산하며 분자생물학적으로 방선균 연구의 모델 시스템으로 이용되고 있는 S. coelicolor와 외래 유전자 산물의 발현균주로 많이 이용되는 Streptomyces lividans로부터 세포의 단백질 분비의 트랜스로케이터의 역할을 하는 것으로 알려진 SecY 단백질의 유전자를 분리하고 이제까지 밝혀진 SecY 유전자 염기서열과의 상동성 여부, 유전자 조직, 아미노산 서열의 상동성과 소수성 분석(hydrophobic analysis) 등으로 SecY 유전자임을 확인하고 이 SecY 유전자를 이용하여 자연적인 단백질 분비체계가 발달된 S. coelicolor와 S. lividans를 유용 이종 단백질 분비증대를 위한 균주로 개발하고자 한다.
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 spc 오페론내에 보존된 지역의 아미노산 서열을 이용하여 제작한 PCR 프라이머를 나타낸 도면.
제2도는 4개의 프라이머를 이용하여 Streptomyces coelicolor(a)와 Srteptomyces lividans(b)의 게놈 (genomic) DNA로부터 얻은 PCR 생성물을 나타낸 도면.
제3도는 Streptomyces coelicolor(a)와 Steptomyces lividans(b)에서 클로닝한 secY 유전자의 제한 효소 지도.
제4도 (a) 및 (b)는 Streptomyces coelicolor와 Streptomyces lividans secY 유전자의 DNA 염기 서열과 추론한 아미노산 서열을 나타낸 도면.
제8도는 B. subtilils (a), M. luteus (b), S. coelicolor (c), S. lividans (d)에서 SecY 단백질의 소수성을 비교하여 나타낸 도면.
Claims (14)
- 단백질의 분비에 관여하는 secY 유전자.
- 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자는 Streptomyces coelicolor 또는 Streptomyces lividans에서 분리한 secY 유전자.
- 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자는 제4도의 DNA 염기서열을 갖는 secY 유전자.
- 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자는 adk 오페론에 포함되는 secY 유전자.
- 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자의 프로모터 지역이 GTG 번역시작코돈으로부터 -10위치의 AGGA와 -35위치의 TTGACG 염기서열을 갖는 지역이고 리보좀 결합지역은 ORF로부터 -10위치의 GGAGG 염기서열을 갖는 지역이고 GTG 개시코돈으로부터 TGA 종결코돈까지의 1314bp로 되어 있으며 438개의 아미노산을 구성하는 secY 유전자.
- 제1항에 있어서, 상기 secY 유전자는 분자량이 47.4kD이고 10개의 소수성의 트랜스멤브레인 세그먼트를 가지며 세포벽을 10회 통과하는 구조를 가지는 트랜스멤브레인 단백질인 secY 단백질을 코딩하는 secY 유전자.
- 제1항의 secY 유전자를 분리하여 상기 유전자 서열을 결정한 DNA 절편을 포함하는 대장균에서 안정한 플라스미드.
- 제1항의 secY 유전자를 분리하여 상기 유전자 서열을 결정한 DNA 절편을 포함하는 방선균 플라스미드.
- 제1항의 secY 유전자를 벡터 DNA에 삽입하고; 상기 제1항의 secY 유전자가 삽입된 벡터 DNA를 숙주세포에 도입하고; 상기 숙주세포를 배양하여 생산된 단백질의 대량 분비 방법.
- 제9항에 있어서, 상기 숙주세포는 방선균으로 생산된 단백질의 대량 분비 방법.
- 제1항의 secY 유전자에 의하여 발현되어 이종 단백질을 분비하는 secY 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 secY 단백질은 제5도의 아미노산 서열을 갖는 secY 단백질.
- 제1항의 secY 유전자를 단백질 분비증대를 목적으로 이용 및 변형하여 제작된 벡터.
- 제1항의 secY 유전자를 단백질 분비증대를 목정으로 이용 및 변형하여 제작된 균주.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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KR100196768B1 KR100196768B1 (ko) | 1999-06-15 |
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- 1996-06-26 KR KR1019960023808A patent/KR100196768B1/ko not_active IP Right Cessation
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