KR950023726A - 한국형 씨(c)형 간염 바이러스의 항원 결정부위 융합 단백질인 유비엔에스4 이 12-ii(ubns4e12-ii)의 정제방법 - Google Patents

한국형 씨(c)형 간염 바이러스의 항원 결정부위 융합 단백질인 유비엔에스4 이 12-ii(ubns4e12-ii)의 정제방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 대장균에서 발현된 한국형 C형 간염 바이러스의 항원 결정부위 융합단백질인 UBNS4E12-Ⅱ 단백을 정제하는데 있어서, 세포의 파쇄 및 가용성 단백질의 제거, 단백질 봉입체회수 및 세척, 봉입체 용해, 이온 교환 크로마토그라피, 황산암모늄을 이용한 단백질의 침전 및 세척, 젤 여과 크로마토그라피 및 2회의 투석을 포함하는 정제방법에 관한 것이다.

Description

한국형 씨(C)형 간염 바이러스의 항원 결정부위 융합 단백질인 유비엔에스4이 12-Ⅱ(UBNS4E12-Ⅱ)의 정제방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명에 따라 재조합 대장균으로부터 UBNS4E12-Ⅱ 단백질을 정제하는 정제과정의 개요를 도시한 것이고,
제2도는 본 발명에 따른 정제 과정중 각 단계에서 얻어지는 조생성물 및 최종 정제된 UBNS4E12-Ⅱ 단백질을 SDS-폴리아크릴아미드 젤 전기영동(SDS-PAGE)한 결과를 나타낸 것이고,
제4도는 정제된 UBNS4E12-Ⅱ 단백질을 젤 여과 HPLC하여 얻은 크로마토그람을 나타낸 것이다.

Claims (9)

  1. 대장균에서 발현된 한국형 C형 간염바이러스의 항원 결정부위 융합 단백질인 UBNS4E12-Ⅱ 단백질을 정제하는데 있어서, 가) 세포를 파쇄시켜 가용성 단백질을 제거하고 봉입체를 회수 및 세척하는 단계, 나) 우레아를 이용하여 봉입체를 용해시킨 후 원심 분리하여 상층액을 회수하는 단계, 다) 이온교환 크로마토그라피에 의해 UBNS4E12-Ⅱ 단백질을 용출시키는 단계, 라) 황산 암모늄을 이용하여 단백질을 침전시킨 후 우레아를 이용하여 용해시키는 단계, 마) 젤 여과 크로마노트라피 단계, 바) 우레아를 제거하기 위한 1차 투석 단계, 및 사) 단백질 용액의 pH 조정을 위한 2차 투석 단계를 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 나) 단계의 우레아 농도가 6 내지 8M인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 다) 단계의 이온 교환 수지가 에스-세파로스 또는 큐-세파로스인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 다) 단계의 이온 교환 수지로 에스-세파로스를 사용하고, 6 내지 8M인 우레아를 포함하는 pH 3.5 내지 6.0의 완충액을 사용하여 용출시키는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 다) 단계의 이온 교환 수지로 큐-세파로스를 사용하고, 6 내지 8M의 우레아와 완충제로서 에탄올아민 또는 CAPS를 포함하는 pH 9.0 내지 10.5의 완충액을 사용하여 용출시키는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 라) 단계의 침전시 황산 암모늄의 용액내 최종 농도가 15%이상이고 용액의 pH가 4.0 내지 6.0인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 마) 단계의 젤 여과 수지로 세파로스 CL-4B를 사용하고, 에탄올아민 또는 CAPS를 완충제로서 포함하는 pH 8.5 내지 10.5의 완충액을 사용하여 용출시키는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 바) 단계에서 사용되는 완충액이 완충제로서 에탄올아민 또는 사이클로헥실아미노 프로판설폰산(CAPS)을 포함하는 pH 9.0 내지 10.5의 완충액인 방법.
  9. 제1항에 있어서, 사) 단계에서 사용되는 완충액이 완충제로서 트리스, 인산염 완충 식염수(PBS) 또는 하이드록시에틸 피레라진 에탄설폰산(HEPES)을 포함하는 pH 6.8 내지 7.8의 완충액인 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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KR101242671B1 (ko) 2010-12-21 2013-03-13 한국기초과학지원연구원 인간 유래의 재조합 엠에스티1 사라 도메인과 라스프5 (노어1) 사라 도메인의 이종이합체의 결정화 방법

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