KR20240054896A

KR20240054896A - 항C1s 항체의 사용

Info

Publication number: KR20240054896A
Application number: KR1020230138213A
Authority: KR
Inventors: 히카루 고가
Original assignee: 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2022-10-18
Filing date: 2023-10-17
Publication date: 2024-04-26

Abstract

본 발명은, 보체 개재성의 질환 혹은 상태의 치료에 있어서의 사용을 위한, 항C1s 항체를 포함하는 약학적 제제를 제공한다. 본 발명은 또한, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 치료하기 위한 약학적 제제의 제조에 있어서의, 항C1s 항체의 사용을 제공한다.

Description

항C1s 항체의 사용{USES OF ANTI-C1s ANTIBODY}

본 발명은, 항C1s 항체 등의 항체 및 그 사용 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료에 있어서의 사용을 위한 항C1s 항체를 포함하는 약학적 제제, 및 보체 개재성의 질환 또는 상태를 치료하기 위한 약학적 제제의 제조에 있어서의 항C1s 항체의 사용에 관한 것이다.

C1 복합체는, 고전 경로 캐스케이드의 주요한 개시 인자로서 기능하는 대형의 단백질 복합체이다. C1 복합체는, 몰비가 각각 1:2:2인 C1q, C1r, 및 C1s의 3개의 성분으로 구성된다(비특허문헌 1). 고전 경로는, 항체와 결합한 표적에 C1 복합체가 결합하면 개시된다. 6개의 구상(球狀) 두부(頭部)를 갖는 C1q는, Fc 영역과의 어비디티형 상호작용에 의해 C1 복합체가 항체에 결합하는 것을 매개한다. 표적에 긴밀히 결합하면, C1 복합체 내의 C1r은 자기 활성화되어, 효소적으로 활성이 된다. 활성화된 C1r은 그 후, C1 복합체 내의 프로효소 C1s를 절단하여 활성화시킨다(비특허문헌 2). 그 후, 활성화된 C1s는, 그의 기질인 보체 성분 C2 및 C4를 절단하여, 각각 C2a/C2b 및 C4a/C4b 프래그먼트로 한다. 이것에 의해, C3 컨버타제인 C4b2a의 집합체가 표적의 표면 상에 나타나, C3을 절단하여 C3b를 형성시킨다. C3b는 그 후, C5를 절단하여, C5b, C6, C7, C8, 및 C9의 종말막 침습 복합체의 형성을 개시시키고, 이것이 구멍 형성을 통해서 표적을 용해시킨다.

C1s 및 C1r의 양 단백질은, CUB1-EGF-CUB2-CCP1-CCP2-세린 프로테아제라고 하는 동일한 도메인 구성을 갖는다(비특허문헌 3). CUB1-EGF-CUB2 도메인은, C1r2s2 4량체를 형성하기 위한 C1r과 C1s 사이의 상호작용을 매개하고(비특허문헌 4), 또한 C1r2s2와 C1q 사이의 상호작용도 매개한다(비특허문헌 5). 이에 반해서, C1r 및 C1s의 CCP1-CCP2-세린 프로테아제 도메인은, 그들의 각각의 기질의 단백질 분해 절단을 담당한다(비특허문헌 6, 비특허문헌 7). C1r2s2 4량체는, 이 4량체의 CUB1-EGF-CUB2 도메인 내의 6개의 결합 부위를 통해서, C1q의 6개의 스템부와 상호작용한다(비특허문헌 5).

적절히 기능하는 보체계는 숙주를 병원체로부터 방어하지만, 고전 경로의 이상 조절 또는 부적절한 활성화는, 다양한 보체 개재성의 질환 또는 상태, 예를 들어, 비한정적으로, 자기면역성 용혈성 빈혈(AIHA), 베체트증, 수포성류 천포창(BP), 면역성 혈소판감소성 자반병(ITP) 등을 야기한다. 따라서, 고전 경로의 과잉한 또는 제어되지 않는 활성화의 저해는, 그와 같은 질환 또는 상태를 갖는 환자에게 임상적 이익을 제공할 수 있다.

C1s의 베타 도메인에 결합하는 항체인 HI532는 C1r2s2와 C1q의 상호작용을 저해할 수 있음이 보고되었다(비특허문헌 8). 그러나, 이 항체는, 인간 혈청의 용혈 활성을 완전하게는 중화할 수 없어, 혈청을 이 항체와 함께 24시간 인큐베이트한 후에서조차도 30%의 활성이 잔존했다.

항체는, 혈장 중에서 안정성이 있고, 그들의 표적에 대해서 고도로 특이적이고, 일반적으로 우수한 약물 동태 프로파일을 나타내므로, 매우 매력적인 의약품이다. 그러나, 그들의 큰 분자 사이즈 때문에, 치료용 항체의 용량은 통상, 많다. 표적이 다량으로 존재하는 경우는, 필요해지는 항체의 치료 용량은 더욱 많아진다. 그 결과, 항체의 약물 동태, 약력학, 및 항원 결합 특성을 개선하는 방법은, 치료용 항체에 수반하는 용량 및 높은 제조비를 감소시키는 매력적인 방법이다.

pH 의존적으로 항원에 결합하는 항체(이후, 본 명세서에서 「pH 의존적 항체」 또는 「pH 의존적 결합 항체」라고도 칭해진다)는, 단일한 항체 분자에 의한 복수의 항원 분자의 중화를 가능하게 함이 보고되어 있다(비특허문헌 9, 특허문헌 1). pH 의존적 항체는, 혈장 중의 중성 pH 조건하에서 그 항원에 강하게 결합하지만, 세포의 엔도솜 내의 산성 pH 조건하에서 항원으로부터 해리된다. 항원으로부터 해리되면, 항체는 FcRn 수용체에 의해 혈장 중으로 리사이클되고, 해리된 항원은, 세포의 리소좀 내에서 분해된다. 리사이클된 항체는 그 후, 다시 자유롭게 항원 분자에 결합하여 그것을 중화시키고, 이 프로세스는 항체가 혈중에 머무르는 한 반복된다.

WO2009/125825

Wang et. al. Mol Cell. 2016 Jul 7;63(1):135-45 Mortensen et. al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 Jan 31;114(5):986-991 Gal et. al. Mol Immunol. 2009 Sep;46(14):2745-52 Almitairi et. al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2018 Jan 23;115(4):768-773 Bally et. al. J Biol Chem. 2009 Jul 17;284(29):19340-8 Rossi et. al. 1998 J Biol Chem. 1998 Jan 9;273(2):1232-9 Lacroix et. al. J Biol Chem. 2001 Sep 28;276(39):36233-40 Tseng et. al. Mol Immunol. 1997 Jun;34(8-9):671-9 Igawa et. al. Nat Biotechnol. 2010 Nov;28(11):1203-7

본 발명은, 항C1s 항체 등의 항보체 성분 항체, 그것을 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물), 및 그들의 사용 방법을 제공한다. 본 발명은 또한, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료에 있어서의 사용을 위한 항C1s 항체를 포함하는 약학적 제제, 및 보체 개재성의 질환 또는 상태를 치료하기 위한 약학적 제제의 제조에 있어서의 항C1s 항체의 사용을 제공한다.

일 태양에 있어서, 본 발명은, 항원 결합 영역 및 항체 정상 영역을 포함하고, C1qrs 복합체에 결합하여 C1qrs 복합체로부터의 C1q의 해리를 촉진시키는 해리 촉진 기능(displacement function)을 갖고, 또한/또는 C1r2s2에 결합하여 C1q의 C1r2s2에의 결합을 저해하도록 블로킹 기능을 갖고, 또한 C1s에 pH 의존적으로 결합하는, 항체를 제공한다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명의 항체는, FcγR에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변, 및/또는 Fc 영역의 등전점(pI)을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는, 변이 정상 영역을 갖는다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명의 항체를 포함하는 약학적 제제는, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료에 있어서 사용할 수 있다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명의 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 치료하기 위한 약학적 제제의 제조에 있어서 사용할 수 있다.

구체적으로는, 본 발명은 이하에 관한 것이다:

［A1］

보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료 또는 예방에 있어서의 사용을 위한, 항C1s 항체를 포함하는 약학적 제제로서,

해당 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3의 조합을 포함하는, 약학적 제제:

1) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 60, 61, 및 62로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,

2) 각각 서열 번호 37, 38, 39, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,

3) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,

4) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 48, 49, 및 50으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,

5) 각각 서열 번호 29, 30, 31, 52, 53, 및 54로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3, 및

6) 각각 서열 번호 33, 34, 35, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3.

［A2］

상기 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, ［A1］에 기재된 약학적 제제:

1) 각각 서열 번호 24 및 59로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL,

2) 각각 서열 번호 36 및 55로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL,

3) 각각 서열 번호 24 및 55로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL,

4) 각각 서열 번호 24 및 47로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL,

5) 각각 서열 번호 28 및 51로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL, 및

6) 각각 서열 번호 32 및 55로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL.

［A3］

상기 항체의 중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비인 산성 KD/중성 KD비가 107 이상인, ［A1］ 또는 ［A2］에 기재된 약학적 제제.

［A4］

상기 항체가, 인간 C1s의 CUB1-EGF-CUB2 도메인에 특이적으로 결합할 수 있는, ［A1］~［A3］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제.

［A5］

상기 항체가, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖는, ［A1］~［A4］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제.

［A6］

상기 변이 정상 영역이, EU 넘버링에 의한 위치 235 및 236 중 적어도 하나에 아미노산 개변을 포함하는, ［A5］에 기재된 약학적 제제.

［A7］

상기 항체가 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖고,

해당 아미노산 개변이, 변이 정상 영역의 등전점(pI)을 친(親)정상 영역의 그것과 비교하여 저하시키는, ［A1］~［A6］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제.

［A8］

상기 변이 정상 영역이, EU 넘버링에 의한 위치 137, 268, 274, 355, 및 419 중 적어도 하나에 아미노산 개변을 포함하는, ［A7］에 기재된 약학적 제제.

［A9］

상기 항체의 pI가 7.8 이하인, ［A1］~［A8］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제.

［A10］

상기 항체가, 서열 번호 45로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역 및 서열 번호 23으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 정상 영역을 갖는, ［A1］~［A8］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제.

［A11］

상기 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄(H쇄) 및 경쇄(L쇄)를 포함하는, ［A1］~［A10］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제:

1) 각각 서열 번호 66 및 67로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, H쇄 및 L쇄,

2) 각각 서열 번호 68 및 69로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, H쇄 및 L쇄,

3) 각각 서열 번호 70 및 71로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, H쇄 및 L쇄,

4) 각각 서열 번호 72 및 73으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, H쇄 및 L쇄,

5) 각각 서열 번호 74 및 75로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, H쇄 및 L쇄, 및

6) 각각 서열 번호 76 및 77로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, H쇄 및 L쇄.

［A12］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 개체의 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 이상한 양의 보체 C1s 또는 이상한 레벨의 보체 C1s 단백질 분해 활성을 특징으로 하는, ［A1］~［A11］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제.

［A13］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 자기면역 질환, 암, 혈액 질환, 감염증, 염증 질환, 허혈·재관류 장애, 신경 변성 질환, 신경 변성 장애, 안 질환, 신장 질환, 이식편 거절, 혈관 질환, 및 혈관염 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, ［A1］~［A12］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제.

［A14］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 가령성 황반변성증, 알츠하이머병, 근위축성 측삭경화증, 아나필락시, 기은(嗜銀) 과립성 인지증, 관절염(예를 들어, 관절 류머티즘), 천식, 아테롬성 동맥경화증, 비전형 용혈성 요독증 증후군, 자기면역 질환, 바라케르·시몬즈 증후군(Barraquer-Simons syndrome), 베체트증, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 유천포창, 천포창, 버거병, C1q 신증, 암, 항인지질 항체 증후군, 뇌아밀로이드 혈관병증, 한랭 응집소증, 대뇌피질 기저핵변성증, 크로이츠펠트·야콥병, 크론병, 크리오글로불린혈증성 혈관염, 권투가 치매, 레비소체형 인지증(DLB), 석회화를 수반하는 미만성 신경원섬유 변화병, 원판상 에리테마토데스, 다운 증후군, 소상 분절성 사구체 경화증, 형식적 사고 장애, 전두측두형 인지증(FTD), 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증, 전두측두엽 변성증, 게르스트만·슈트로이슬러·샤인커 증후군, 길랑·바레 증후군, 할러포르덴·스파츠 증후군, 용혈성 요독증 증후군, 유전성 혈관 부종, 저호스파타제증, 특발성 폐렴 증후군, 면역 복합체병, 염증성 근질환(예를 들어, 피부 근염, 괴사성 근염, 봉입체 근염, 항ARS 증후군), 감염증(예를 들어, 세균(예를 들어, 수막염균 혹은 렌사구균), 바이러스(예를 들어, 인간 면역 부전 바이러스(HIV)) 또는 다른 감염 병원체에 의해 야기되는 질환), 염증 질환, 허혈/재관류 장애, 경도 인지 장애, 면역성 혈소판감소성 자반병(ITP), 몰리브덴 보인자 결손증(MoCD) A형, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) I, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) II(덴스데포지트병), 막성 신염, 다발경색성 인지증, 루푸스(전신성 에리테마토데스(SLE)), 사구체신염, 가와사키병, 다소성 운동 신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축증, 중증 근무력증, 심근경색, 근경직성 디스트로피, 시신경 척수염, 니만·픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 파킨슨병, 인지증을 수반하는 파킨슨병, 발작성 야간 혈색소뇨증, 심상성 천포창, 픽병, 뇌염후 파킨슨병, 프리온 단백질뇌아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 건선, 패혈증, 시가 독소 산생성 대장균(E.coli)(STEC)-HuS, 척수성 근위축증, 뇌졸중, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 인지증, 이식편 거절, 혈관염(예를 들어, ANCA 관련 혈관염), 베그나 육아종증, 겸상 적혈구증, 크리오글로불린혈증, 혼합성 크리오글로불린혈증, 본태성 혼합성 크리오글로불린혈증, II형 혼합성 크리오글로불린혈증, III형 혼합성 크리오글로불린혈증, 신염, 약물성 혈소판 감소증, 루푸스 신염, 후천성 표피 수포증, 지발성 용혈성 수혈 반응, 저보체혈증성 담마진양 혈관염 증후군, 위수정체성 수포성 각막증, 혈전성 미소혈관 장애증(TMA), 자기면역성 용혈성 빈혈(AIHA), 시그렌 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발신경염(CIDP), 전신성 경화증(강피증)(SSc), 면역 개재성 괴사성 근육병증(IMNM) 및 혈소판 수혈 불응 상태로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, ［A1］~［A13］ 중 어느 하나에 기재된 약학적 제제.

［B1］

보체 개재성의 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하기 위한 약학적 제제의 제조에 있어서의, 항C1s 항체의 사용으로서,

해당 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3의 조합을 포함하는, 사용:

［B2］

상기 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, ［B1］에 기재된 사용:

［B3］

상기 항체의 중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비인 산성 KD/중성 KD비가 107 이상인, ［B1］ 또는 ［B2］에 기재된 사용.

［B4］

상기 항체가, 인간 C1s의 CUB1-EGF-CUB2 도메인에 특이적으로 결합할 수 있는, ［B1］~［B3］ 중 어느 하나에 기재된 사용.

［B5］

상기 항체가, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖는, ［B1］~［B4］ 중 어느 하나에 기재된 사용.

［B6］

상기 변이 정상 영역이, EU 넘버링에 의한 위치 235 및 236 중 적어도 하나에 아미노산 개변을 포함하는, ［B5］에 기재된 사용.

［B7］

해당 아미노산 개변이, 변이 정상 영역의 등전점(pI)을 친정상 영역의 그것과 비교하여 저하시키는, ［B1］~［B6］ 중 어느 하나에 기재된 사용.

［B8］

상기 변이 정상 영역이, EU 넘버링에 의한 위치 137, 268, 274, 355, 및 419 중 적어도 하나에 아미노산 개변을 포함하는, ［B7］에 기재된 사용.

［B9］

상기 항체의 pI가 7.8 이하인, ［B1］~［B8］ 중 어느 하나에 기재된 사용.

［B10］

상기 항체가, 서열 번호 45로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역 및 서열 번호 23으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 정상 영역을 갖는, ［B1］~［B8］ 중 어느 하나에 기재된 사용.

［B11］

상기 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄(H쇄) 및 경쇄(L쇄)를 포함하는, ［B1］~［B10］ 중 어느 하나에 기재된 사용:

［B12］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 개체의 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 이상한 양의 보체 C1s 또는 이상한 레벨의 보체 C1s 단백질 분해 활성을 특징으로 하는, ［B1］~［B11］ 중 어느 하나에 기재된 사용.

［B13］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 자기면역 질환, 암, 혈액 질환, 감염증, 염증 질환, 허혈·재관류 장애, 신경 변성 질환, 신경 변성 장애, 안 질환, 신장 질환, 이식편 거절, 혈관 질환, 및 혈관염 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, ［B1］~［B12］ 중 어느 하나에 기재된 사용.

［B14］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 가령성 황반변성증, 알츠하이머병, 근위축성 측삭경화증, 아나필락시, 기은 과립성 인지증, 관절염(예를 들어, 관절 류머티즘), 천식, 아테롬성 동맥경화증, 비전형 용혈성 요독증 증후군, 자기면역 질환, 바라케르·시몬즈 증후군(Barraquer-Simons syndrome), 베체트증, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 유천포창, 천포창, 버거병, C1q 신증, 암, 항인지질 항체 증후군, 뇌아밀로이드 혈관병증, 한랭 응집소증, 대뇌피질 기저핵변성증, 크로이츠펠트·야콥병, 크론병, 크리오글로불린혈증성 혈관염, 권투가 치매, 레비소체형 인지증(DLB), 석회화를 수반하는 미만성 신경원섬유 변화병, 원판상 에리테마토데스, 다운 증후군, 소상 분절성 사구체 경화증, 형식적 사고 장애, 전두측두형 인지증(FTD), 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증, 전두측두엽 변성증, 게르스트만·슈트로이슬러·샤인커 증후군, 길랑·바레 증후군, 할러포르덴·스파츠 증후군, 용혈성 요독증 증후군, 유전성 혈관 부종, 저호스파타제증, 특발성 폐렴 증후군, 면역 복합체병, 염증성 근질환(예를 들어, 피부 근염, 괴사성 근염, 봉입체 근염, 항ARS 증후군), 감염증(예를 들어, 세균(예를 들어, 수막염균 혹은 렌사구균), 바이러스(예를 들어, 인간 면역 부전 바이러스(HIV)) 또는 다른 감염 병원체에 의해 야기되는 질환), 염증 질환, 허혈/재관류 장애, 경도 인지 장애, 면역성 혈소판감소성 자반병(ITP), 몰리브덴 보인자 결손증(MoCD) A형, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) I, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) II(덴스데포지트병), 막성 신염, 다발경색성 인지증, 루푸스(전신성 에리테마토데스(SLE)), 사구체신염, 가와사키병, 다소성 운동 신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축증, 중증 근무력증, 심근경색, 근경직성 디스트로피, 시신경 척수염, 니만·픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 파킨슨병, 인지증을 수반하는 파킨슨병, 발작성 야간 혈색소뇨증, 심상성 천포창, 픽병, 뇌염후 파킨슨병, 프리온 단백질뇌아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 건선, 패혈증, 시가 독소 산생성 대장균(E.coli)(STEC)-HuS, 척수성 근위축증, 뇌졸중, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 인지증, 이식편 거절, 혈관염(예를 들어, ANCA 관련 혈관염), 베그나 육아종증, 겸상 적혈구증, 크리오글로불린혈증, 혼합성 크리오글로불린혈증, 본태성 혼합성 크리오글로불린혈증, II형 혼합성 크리오글로불린혈증, III형 혼합성 크리오글로불린혈증, 신염, 약물성 혈소판 감소증, 루푸스 신염, 후천성 표피 수포증, 지발성 용혈성 수혈 반응, 저보체혈증성 담마진양 혈관염 증후군, 위수정체성 수포성 각막증, 혈전성 미소혈관 장애증(TMA), 자기면역성 용혈성 빈혈(AIHA), 시그렌 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발신경염(CIDP), 전신성 경화증(강피증)(SSc), 면역 개재성 괴사성 근육병증(IMNM) 및 혈소판 수혈 불응 상태 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, ［B1］~［B13］ 중 어느 하나에 기재된 사용.

［C1］

보체 개재성의 질환 혹은 상태를 갖는 개체를 치료하거나, 또는 보체 개재성의 질환 혹은 상태를 가질 가능성이 있는 개체를 예방하는 방법으로서, 항C1s 항체를 해당 개체에게 유효량 투여하는 공정을 포함하고, 해당 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3의 조합을 포함하는, 방법:

［C2］

상기 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, ［C1］에 기재된 방법:

［C3］

상기 항체의 중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비인 산성 KD/중성 KD비가 107 이상인, ［C1］ 또는 ［C2］에 기재된 방법.

［C4］

상기 항체가, 인간 C1s의 CUB1-EGF-CUB2 도메인에 특이적으로 결합할 수 있는, ［C1］~［C3］ 중 어느 하나에 기재된 방법.

［C5］

상기 항체가, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖는, ［C1］~［C4］ 중 어느 하나에 기재된 방법.

［C6］

상기 변이 정상 영역이, EU 넘버링에 의한 위치 235 및 236 중 적어도 하나에 아미노산 개변을 포함하는, ［C5］에 기재된 방법.

［C7］

해당 아미노산 개변이, 변이 정상 영역의 등전점(pI)을 친정상 영역의 그것과 비교하여 저하시키는, ［C1］~［C6］ 중 어느 하나에 기재된 방법.

［C8］

상기 변이 정상 영역이, EU 넘버링에 의한 위치 137, 268, 274, 355, 및 419 중 적어도 하나에 아미노산 개변을 포함하는, ［C7］에 기재된 방법.

［C9］

상기 항체의 pI가 7.8 이하인, ［C1］~［C8］ 중 어느 하나에 기재된 방법.

［C10］

상기 항체가, 서열 번호 45로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역 및 서열 번호 23으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 정상 영역을 갖는, ［C1］~［C8］ 중 어느 하나에 기재된 방법.

［C11］

상기 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄(H쇄) 및 경쇄(L쇄)를 포함하는, ［C1］~［C10］ 중 어느 하나에 기재된 방법:

［C12］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 개체의 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 이상한 양의 보체 C1s 또는 이상한 레벨의 보체 C1s 단백질 분해 활성을 특징으로 하는, ［C1］~［C11］ 중 어느 하나에 기재된 방법.

［C13］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 자기면역 질환, 암, 혈액 질환, 감염증, 염증 질환, 허혈·재관류 장애, 신경 변성 질환, 신경 변성 장애, 안 질환, 신장 질환, 이식편 거절, 혈관 질환, 및 혈관염 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, ［C1］~［C12］ 중 어느 하나에 기재된 방법.

［C14］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 가령성 황반변성증, 알츠하이머병, 근위축성 측삭경화증, 아나필락시, 기은 과립성 인지증, 관절염(예를 들어, 관절 류머티즘), 천식, 아테롬성 동맥경화증, 비전형 용혈성 요독증 증후군, 자기면역 질환, 바라케르·시몬즈 증후군(Barraquer-Simons syndrome), 베체트증, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 유천포창, 천포창, 버거병, C1q 신증, 암, 항인지질 항체 증후군, 뇌아밀로이드 혈관병증, 한랭 응집소증, 대뇌피질 기저핵변성증, 크로이츠펠트·야콥병, 크론병, 크리오글로불린혈증성 혈관염, 권투가 치매, 레비소체형 인지증(DLB), 석회화를 수반하는 미만성 신경원섬유 변화병, 원판상 에리테마토데스, 다운 증후군, 소상 분절성 사구체 경화증, 형식적 사고 장애, 전두측두형 인지증(FTD), 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증, 전두측두엽 변성증, 게르스트만·슈트로이슬러·샤인커 증후군, 길랑·바레 증후군, 할러포르덴·스파츠 증후군, 용혈성 요독증 증후군, 유전성 혈관 부종, 저호스파타제증, 특발성 폐렴 증후군, 면역 복합체병, 염증성 근질환(예를 들어, 피부 근염, 괴사성 근염, 봉입체 근염, 항ARS 증후군), 감염증(예를 들어, 세균(예를 들어, 수막염균 혹은 렌사구균), 바이러스(예를 들어, 인간 면역 부전 바이러스(HIV)) 또는 다른 감염 병원체에 의해 야기되는 질환), 염증 질환, 허혈/재관류 장애, 경도 인지 장애, 면역성 혈소판감소성 자반병(ITP), 몰리브덴 보인자 결손증(MoCD) A형, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) I, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) II(덴스데포지트병), 막성 신염, 다발경색성 인지증, 루푸스(전신성 에리테마토데스(SLE)), 사구체신염, 가와사키병, 다소성 운동 신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축증, 중증 근무력증, 심근경색, 근경직성 디스트로피, 시신경 척수염, 니만·픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 파킨슨병, 인지증을 수반하는 파킨슨병, 발작성 야간 혈색소뇨증, 심상성 천포창, 픽병, 뇌염후 파킨슨병, 프리온 단백질뇌아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 건선, 패혈증, 시가 독소 산생성 대장균(E.coli)(STEC)-HuS, 척수성 근위축증, 뇌졸중, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 인지증, 이식편 거절, 혈관염(예를 들어, ANCA 관련 혈관염), 베그나 육아종증, 겸상 적혈구증, 크리오글로불린혈증, 혼합성 크리오글로불린혈증, 본태성 혼합성 크리오글로불린혈증, II형 혼합성 크리오글로불린혈증, III형 혼합성 크리오글로불린혈증, 신염, 약물성 혈소판 감소증, 루푸스 신염, 후천성 표피 수포증, 지발성 용혈성 수혈 반응, 저보체혈증성 담마진양 혈관염 증후군, 위수정체성 수포성 각막증, 혈전성 미소혈관 장애증(TMA), 자기면역성 용혈성 빈혈(AIHA), 시그렌 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발신경염(CIDP), 전신성 경화증(강피증)(SSc), 면역 개재성 괴사성 근육병증(IMNM) 및 혈소판 수혈 불응 상태 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, ［C1］~［C13］ 중 어느 하나에 기재된 방법.

［D1］

보체 개재성의 질환 혹은 상태의 치료 또는 예방에 있어서의 사용을 위한 항C1s 항체로서, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3의 조합을 포함하는, 상기 사용을 위한 항C1s 항체:

［D2］

이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, ［D1］에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체:

［D3］

중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비인 산성 KD/중성 KD비가 107 이상인, ［D1］ 또는 ［D2］에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D4］

인간 C1s의 CUB1-EGF-CUB2 도메인에 특이적으로 결합할 수 있는, ［D1］~［D3］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D5］

Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖는, ［D1］~［D4］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D6］

상기 변이 정상 영역이, EU 넘버링에 의한 위치 235 및 236 중 적어도 하나에 아미노산 개변을 포함하는, ［D5］에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D7］

해당 아미노산 개변이, 변이 정상 영역의 등전점(pI)을 친정상 영역의 그것과 비교하여 저하시키는, ［D1］~［D6］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D8］

상기 변이 정상 영역이, EU 넘버링에 의한 위치 137, 268, 274, 355, 및 419 중 적어도 하나에 아미노산 개변을 포함하는, ［D7］에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D9］

pI가 7.8 이하인, ［D1］~［D8］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D10］

서열 번호 45로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역 및 서열 번호 23으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 정상 영역을 갖는, ［D1］~［D8］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D11］

이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄(H쇄) 및 경쇄(L쇄)를 포함하는, ［D1］~［D10］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체:

［D12］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 개체의 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 이상한 양의 보체 C1s 또는 이상한 레벨의 보체 C1s 단백질 분해 활성을 특징으로 하는, ［D1］~［D11］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D13］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 자기면역 질환, 암, 혈액 질환, 감염증, 염증 질환, 허혈·재관류 장애, 신경 변성 질환, 신경 변성 장애, 안 질환, 신장 질환, 이식편 거절, 혈관 질환, 및 혈관염 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, ［D1］~［D12］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［D14］

상기 보체 개재성의 질환 또는 상태가, 가령성 황반변성증, 알츠하이머병, 근위축성 측삭경화증, 아나필락시, 기은 과립성 인지증, 관절염(예를 들어, 관절 류머티즘), 천식, 아테롬성 동맥경화증, 비전형 용혈성 요독증 증후군, 자기면역 질환, 바라케르·시몬즈 증후군(Barraquer-Simons syndrome), 베체트증, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 유천포창, 천포창, 버거병, C1q 신증, 암, 항인지질 항체 증후군, 뇌아밀로이드 혈관병증, 한랭 응집소증, 대뇌피질 기저핵변성증, 크로이츠펠트·야콥병, 크론병, 크리오글로불린혈증성 혈관염, 권투가 치매, 레비소체형 인지증(DLB), 석회화를 수반하는 미만성 신경원섬유 변화병, 원판상 에리테마토데스, 다운 증후군, 소상 분절성 사구체 경화증, 형식적 사고 장애, 전두측두형 인지증(FTD), 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증, 전두측두엽 변성증, 게르스트만·슈트로이슬러·샤인커 증후군, 길랑·바레 증후군, 할러포르덴·스파츠 증후군, 용혈성 요독증 증후군, 유전성 혈관 부종, 저호스파타제증, 특발성 폐렴 증후군, 면역 복합체병, 염증성 근질환(예를 들어, 피부 근염, 괴사성 근염, 봉입체 근염, 항ARS 증후군), 감염증(예를 들어, 세균(예를 들어, 수막염균 혹은 렌사구균), 바이러스(예를 들어, 인간 면역 부전 바이러스(HIV)) 또는 다른 감염 병원체에 의해 야기되는 질환), 염증 질환, 허혈/재관류 장애, 경도 인지 장애, 면역성 혈소판감소성 자반병(ITP), 몰리브덴 보인자 결손증(MoCD) A형, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) I, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) II(덴스데포지트병), 막성 신염, 다발경색성 인지증, 루푸스(전신성 에리테마토데스(SLE)), 사구체신염, 가와사키병, 다소성 운동 신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축증, 중증 근무력증, 심근경색, 근경직성 디스트로피, 시신경 척수염, 니만·픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 파킨슨병, 인지증을 수반하는 파킨슨병, 발작성 야간 혈색소뇨증, 심상성 천포창, 픽병, 뇌염후 파킨슨병, 프리온 단백질뇌아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 건선, 패혈증, 시가 독소 산생성 대장균(E.coli)(STEC)-HuS, 척수성 근위축증, 뇌졸중, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 인지증, 이식편 거절, 혈관염(예를 들어, ANCA 관련 혈관염), 베그나 육아종증, 겸상 적혈구증, 크리오글로불린혈증, 혼합성 크리오글로불린혈증, 본태성 혼합성 크리오글로불린혈증, II형 혼합성 크리오글로불린혈증, III형 혼합성 크리오글로불린혈증, 신염, 약물성 혈소판 감소증, 루푸스 신염, 후천성 표피 수포증, 지발성 용혈성 수혈 반응, 저보체혈증성 담마진양 혈관염 증후군, 위수정체성 수포성 각막증, 혈전성 미소혈관 장애증(TMA), 자기면역성 용혈성 빈혈(AIHA), 시그렌 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발신경염(CIDP), 전신성 경화증(강피증)(SSc), 면역 개재성 괴사성 근육병증(IMNM) 및 혈소판 수혈 불응 상태 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, ［D1］~［D13］ 중 어느 하나에 기재된 사용을 위한 항C1s 항체.

［E1］

해당 항체가, 중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비인 산성 KD/중성 KD비가 107 이상이고,

항체 정상 영역은, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변과 등전점(pI)을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는, 약학적 제제.

[도 1a] 도 1a는, 수컷 필리핀원숭이에 있어서의 COS0637pHv2-FcgSil, COS0637pHv2-SG1077R, COS0637pHv3-SG1077R 및 COS0637pHv8-SG1077R 항체의 단회 정맥내 투여 후의 혈장중 항체 농도 추이(대수-선형)를 나타낸다. 데이터는 평균치 ± 표준 편차로 나타냈다(N = 3).
[도 1b] 도 1b는, 수컷 필리핀원숭이에 있어서의 COS0637pHv2-FcgSil, COS0637pHv2-SG1077R, COS0637pHv3-SG1077R 및 COS0637pHv8-SG1077R 항체의 단회 정맥내 투여 후의 투여 전에 대한 혈장중 C1s 농도비의 추이(대수-선형)를 나타낸다. 데이터는 평균치 ± 표준 편차로 나타냈다(N = 3).
[도 2a] 도 2a는, 항C1s 항체 COS0637pHv8-TT91R의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv8-TT91R을 인젝트했다.
[도 2b] 도 2b는, 항C1s 항체 COS0637pHv15-TT91R의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv15-TT91R을 인젝트했다.
[도 2c] 도 2c는, 항C1s 항체 COS0637pHv16-TT91R의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv16-TT91R을 인젝트했다.
[도 2d] 도 2d는, 항C1s 항체 COS0637pHv17-TT91R의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv17-TT91R을 인젝트했다.
[도 2e] 도 2e는, 항C1s 항체 COS0637pHv21-TT91R의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv21-TT91R을 인젝트했다.
[도 2f] 도 2f는, 항C1s 항체 COS0637pHv23-TT91R의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv23-TT91R을 인젝트했다.
[도 2g] 도 2g는, 항C1s 항체 COS0637pHv25-TT91R의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv25-TT91R을 인젝트했다.
[도 2h] 도 2h는, 항C1s 항체 COS0637pHv8-G1A3FcgSil+Low pI의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv8-G1A3FcgSil+Low pI를 인젝트했다.
[도 2i] 도 2i는, 항C1s 항체 COS0637pHv15-G1A3FcgSil+Low pI의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv15-G1A3FcgSil+Low pI를 인젝트했다.
[도 2j] 도 2j는, 항C1s 항체 COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI를 인젝트했다.
[도 2k] 도 2k는, 항C1s 항체 COS0637pHv17-G1A3FcgSil+Low pI의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv17-G1A3FcgSil+Low pI를 인젝트했다.
[도 2l] 도 2l은, 항C1s 항체 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI를 인젝트했다.
[도 2m] 도 2m은, 항C1s 항체 COS0637pHv23-G1A3FcgSil+Low pI의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv23-G1A3FcgSil+Low pI를 인젝트했다.
[도 2n] 도 2n은, 항C1s 항체 COS0637pHv25-G1A3FcgSil+Low pI의 C1q 해리 촉진 기능의 평가를 나타낸다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q): 센서그램 1, 일점쇄선은 hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab): 센서그램 2, 파선은 hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab): 센서그램 3을 각각 나타낸다. Ab로서 COS0637pHv25-G1A3FcgSil+Low pI를 인젝트했다.
[도 3a] 도 3a는, 수컷 필리핀원숭이에 있어서의 COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 및 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI 항체의 단회 정맥내 투여 후의 혈장중 항체 농도 추이(대수-선형)를 나타낸다. 데이터는 평균치 ± 표준 편차로 나타냈다(COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 항체 ; N = 3, COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI 항체 ; N = 2).
[도 3b] 도 3b는, 수컷 필리핀원숭이에 있어서의 COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 및 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI 항체의 단회 정맥내 투여 후의 투여 전에 대한 혈장중 C1s 농도비의 추이(대수-선형)를 나타낸다. 데이터는 평균치 ± 표준 편차로 나타냈다(COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 항체 ; N = 3, COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI 항체 ; N = 2).
[도 4] 도 4는, 항C1s 항체의 원숭이에 있어서의 보체 중화 기능의 평가를 나타낸다. 항C1s 항체(COS0637pHv2-FcgSil, COS0637pHv2-SG1077R, COS0637pHv3-SG1077R, COS0637pHv8-SG1077R, COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI, COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI)의 원숭이에 있어서의 보체 중화 활성을 나타낸다. 어느 검체도 투여 직후에 적혈구 용해를 억제했다. 또한 COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 및 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI는 투여 후 56 일째까지 적혈구 용해의 억제가 인정되었다.

본 명세서에 기재 또는 인용되는 수법 및 수순은, 대체로 충분히 이해되어 있고, 예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. ; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)에 기재된 광범위하게 이용되고 있는 기법 등의 종래의 기법을 이용하여, 당업자에 의해 일반적으로 사용된다.

I. 정의

별도 정의하지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 기술 용어 및 과학 용어는, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, N.Y. 1994), 및 March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley & Sons (New York, N.Y. 1992)는, 본 출원에 있어서 사용되는 용어의 대부분에 대한 일반적 지침을 당업자에게 제공한다. 특허 출원 및 간행물을 포함하는, 본 명세서에 인용되는 모든 참고 문헌은, 그 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.

본 명세서를 해석할 목적을 위해서, 이하의 정의가 적용되고, 해당하는 경우는 언제라도, 단수형으로 사용된 용어는 복수형도 포함하고, 그 반대도 또한 마찬가지이다. 본 명세서에서 사용되는 용어는, 특정의 태양을 설명하는 것만을 목적으로 하고 있고, 한정을 의도한 것은 아님이, 이해되어야 한다. 하기의 정의의 어느 것인가가, 참조에 의해 본 명세서에 원용되는 임의의 문서와 모순되는 경우에는, 하기의 정의가 우선하는 것으로 한다.

본 명세서의 취지에서의 「억셉터 인간 프레임워크」는, 아래에서 정의하는 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크에서 유래하는, 경쇄 가변 도메인(VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인(VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는, 프레임워크이다. 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크에서 「유래하는」 억셉터 인간 프레임워크는, 그들의 같은 아미노산 서열을 포함해도 되고, 또는 아미노산 서열의 변경을 포함하고 있어도 된다. 몇몇 태양에 있어서, 아미노산의 변경의 수는, 10 이하, 9 이하, 8 이하, 7 이하, 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 또는 2 이하이다. 몇몇 태양에 있어서, VL 억셉터 인간 프레임워크는, VL 인간 면역글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 컨센서스 프레임워크 서열과 서열이 동일하다.

「어피니티」는, 분자(예를 들어, 항체)의 결합 부위 1개와, 분자의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의, 비공유 결합적인 상호작용의 합계의 강도를 말한다. 특별히 나타내지 않는 한, 본 명세서에서 이용되는 「결합 어피니티」는, 어느 결합쌍의 멤버(예를 들어, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는, 고유의 결합 어피니티를 말한다. 분자 X의 그 파트너 Y에 대한 어피니티는, 일반적으로, 해리 상수(Kd 또는 KD)에 의해 나타낼 수 있다. 어피니티는, 본 명세서에 기재된 것을 포함하는, 당해 기술 분야에 있어서 알려진 통상의 방법에 의해 측정될 수 있다. 결합 어피니티를 측정하기 위한 개개의 구체적인 실례가 되는 및 예시적인 태양에 대해서는, 후술한다. 「어피니티」, 「결합 어피니티」, 「결합능」, 및 「결합 활성」은, 서로 교환 가능하게 이용될 수 있다. 용어 「결합 활성」은, 어느 분자(예를 들어, 항체)의 단일 또는 복수의 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의, 비공유 결합적인 상호작용의 합계의 강도를 말한다. 본 명세서에 있어서, 결합 활성은, 결합쌍의 멤버(예를 들어, 항체와 항원) 사이의 1:1의 상호작용을 반영하는 활성으로 엄밀하게 한정되는 것은 아니다. 결합쌍의 멤버가 1가 결합 및 다가 결합의 양쪽의 양식으로 서로 결합할 수 있는 경우, 결합 활성은, 이들 결합의 합계의 강도이다. 그 파트너 Y에 대한 분자 X의 결합 활성은, 통상, 해리 상수(KD)에 의해 나타낼 수 있다. 혹은, 결합 속도 및 해리 속도(Kon 및 Koff)가, 결합의 평가에 사용될 수 있다. 결합 활성은, 본 명세서에 기재되는 것을 포함하는, 당 기술 분야에서 공지된 일반적 방법에 의해 측정될 수 있다. 결합 어피니티를 측정하기 위한 구체적인 실례가 되는 및 예시적인 태양에 대해서는, 후술한다.

「어피니티 성숙」 항체는, 개변을 갖추지 않은 친항체와 비교하여, 1개 또는 복수의 초가변 영역 (hypervariable region: HVR) 안에 항체의 항원에 대한 어피니티의 개선을 가져오는 1개 또는 복수의 개변을 수반하는, 항체를 말한다.

용어 「항C1s 항체」, 「C1s에 결합하는 항체」, 또는 「C1s에 대한 결합 활성을 갖는 항체」는, 충분한 어피니티로 C1s와 결합할 수 있는 항체이며, 그 결과 그 항체가 C1s를 표적화했을 때에 진단제 및/또는 치료제로서 유용할 것 같은, 항체를 말한다. 일 태양에 있어서, 무관계한 비C1s 단백질에의 항C1s 항체의 결합의 정도는, 예를 들어, 방사면역 측정법(radioimmunoassay: RIA)에 의해 측정했을 때, 항체의 C1s에의 결합의 약 10% 미만이다. 특정의 태양에 있어서, C1s에 결합하는 항체는, 1마이크로몰 농도(μM) 이하, 100nM 이하, 10nM 이하, 1nM 이하, 0.1nM 이하, 0.01nM 이하, 또는 0.001nM 이하(예를 들어, 10^-8M 이하, 예를 들어 10^-8M~10^-13M, 예를 들어, 10^-9M~10^-13M)의 해리 상수(Kd)를 갖는다. 특정의 태양에 있어서, 항C1s 항체는, 상이한 종으로부터의 C1s 사이에서 보존되어 있는 C1s의 에피토프에 결합한다.

본 명세서에 있어서 용어 「항체」는, 가장 넓은 의미로 사용되고, 소망의 항원 결합 활성을 나타내는 한은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중 특이성 항체(예를 들어, 이중 특이성 항체) 및 항체 단편을 포함하는, 여러 가지 항체 구조를 포함한다.

「항체 단편」은, 완전 항체가 결합하는 항원에 결합하는 당해 완전 항체의 일부분을 포함하는, 당해 완전 항체 이외의 분자를 말한다. 항체 단편의 예는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; 다이아보디; 선상 항체; 단쇄 항체 분자(예를 들어, scFv); 및, 항체 단편으로부터 형성된 다중 특이성 항체를 포함한다.

참조 항체와 「동일한 에피토프에 결합하는 항체」는, 경합 어세이에 있어서 그 참조 항체가 자신의 항원에의 결합을 50% 이상, 저지하는 항체를 말하고, 또한 반대로 말하면, 참조 항체는, 경합 어세이에 있어서 전술한 항체가 자신의 항원에의 결합을 50% 이상, 저지한다. 예시적인 경합 어세이가, 본 명세서에서 제공된다.

용어 「키메라」 항체는, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특정의 공급원 또는 종에서 유래하는 한편으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지의 부분이 상이한 공급원 또는 종에서 유래하는 항체를 말한다.

항체의 「클래스」는, 항체의 중쇄에 구비되는 정상 도메인 또는 정상 영역의 타입을 말한다. 항체에는 5개의 주요한 클래스가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이다. 그리고, 이 중 몇몇은 추가로 서브클래스(아이소타입)로 나눠질 수 있다. 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2이다. 상이한 클래스의 면역글로불린에 대응하는 중쇄 정상 도메인을, 각각, α, δ, ε, γ, 및 μ라고 부른다.

본 명세서에서 말하는 용어 「세포 상해제」는, 세포의 기능을 저해하거나 또는 방해하는, 및/또는 세포의 죽음 또는 파괴의 원인이 되는 물질을 말한다. 세포 상해제는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 방사성 동위체(예를 들어, ²¹¹At, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ²¹²Bi, ³²P, ²¹²Pb, 및 Lu의 방사성 동위체); 화학요법제 또는 화학요법약(예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카알칼로이드류(빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포사이드), 독소루비신, 멜팔란, 마이트마이신 C, 글로람부실, 다우노루비신, 또는 다른 인터캘레이트제); 증식 저해제; 핵산 분해 효소 등의 효소 및 그 단편; 항생 물질; 예를 들어, 저분자 독소 또는 세균, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소(그 단편 및/또는 변이체를 포함한다) 등의, 독소; 및, 이하에 개시되는, 여러 가지의 항종양제 또는 항암제를 포함한다.

「이펙터 기능」은, 항체의 Fc 영역에 기인하는, 항체의 아이소타입에 따라서 상이한 생물 활성을 말한다. 항체의 이펙터 기능의 예에는 다음의 것이 포함된다: C1q 결합 및 보체 의존성 세포 상해(complement dependent cytotoxicity: CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 개재성 세포 상해(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: ADCC); 탐식 작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하방 제어; 및, B 세포 활성화.

어느 제(예를 들어, 약학적 제제)의 「유효량」은, 소망의 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위해서 유효한, 필요한 용량에 있어서의 및 필요한 기간에 걸쳐서의 양을 말한다.

용어 「에피토프」는, 항체에 의해 결합될 수 있는 임의의 결정기를 포함한다. 에피토프는, 항원을 표적으로 하는 항체에 의해 결합되는 해당 항원의 영역이며, 항체에 직접 접촉하는 특정의 아미노산을 포함한다. 에피토프 결정기는, 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기 또는 설폰일기 등의 화학적으로 활성인 표면 분자군을 포함할 수 있고, 또한 특이적인 삼차원 구조 특성 및/또는 특정의 전하 특성을 구비할 수 있다. 일반적으로, 특정의 표적 항원에 특이적인 항체는, 단백질 및/또는 거대 분자의 복잡한 혼합물 중에서 그 표적 항원 상의 에피토프를 우선적으로 인식한다.

본 명세서에서 용어 「Fc 영역」은, 적어도 정상 영역의 일부분을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C말단 영역을 정의하기 위해서 이용된다. 이 용어는, 천연형 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일 태양에 있어서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226으로부터, 또는 Pro230으로부터, 중쇄의 카복실 말단까지 연장된다. 단, Fc 영역의 C말단의 리신(Lys447) 또는 글리신-리신(잔기446-447)은, 존재하고 있어도 하고 있지 않아도 된다. 본 명세서에서는 특별히 특정하지 않는 한, Fc 영역 또는 정상 영역 중의 아미노산 잔기의 번호 붙이기는, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 1991에 기재된, EU 넘버링 시스템(EU 인덱스라고도 불린다)에 따른다.

「프레임워크」 또는 「FR」은, 초가변 영역 (HVR) 잔기 이외의, 가변 도메인 잔기를 말한다. 가변 도메인의 FR은, 통상 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3, 및 FR4로 이루어진다. 그에 따라서, FR 및 HVR의 서열은, 통상 다음의 순서로 VH(또는 VL)에 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

용어 「전장 항체」, 「완전 항체」, 및 「전부 항체」는, 본 명세서에서는 서로 교환 가능하게 이용되고, 천연형 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖는, 또는 본 명세서에서 정의하는 Fc 영역을 포함하는 중쇄를 갖는 항체를 말한다.

용어 「숙주 세포」, 「숙주 세포주」, 및 「숙주 세포 배양물」은, 서로 교환 가능하게 이용되고, 외래 핵산이 도입된 세포(그와 같은 세포의 자손을 포함한다)를 말한다. 숙주 세포는 「형질 전환체」 및 「형질 전환 세포」를 포함하고, 이것에는 초대의 형질 전환 세포 및 계대수에 상관 없이 그 세포에서 유래하는 자손을 포함한다. 자손은, 친세포와 핵산의 내용에 있어서 완전히 동일하지 않아도 되고, 변이를 포함하고 있어도 된다. 오리지널의 형질 전환 세포가 스크리닝되었을 또는 선택되었을 때에 이용된 것과 동일한 기능 또는 생물 활성을 갖는 변이체 자손도, 본 명세서에서는 포함된다.

「인간 항체」는, 인간 혹은 인간 세포에 의해 산생된 항체 또는 인간 항체 레퍼터리 혹은 다른 인간 항체 코드 서열을 이용하는 비인간 공급원에서 유래하는 항체의 아미노산 서열에 대응하는 아미노산 서열을 구비하는 항체이다. 이 인간 항체의 정의는, 비인간의 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를, 명확히 제외하는 것이다.

「인간 컨센서스 프레임워크」는, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택군에 있어서 가장 공통되게 생기는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 통상, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은, 가변 도메인 서열의 서브그룹으로부터이다. 통상, 서열의 서브그룹은, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3에 있어서의 서브그룹이다. 일 태양에 있어서, VL에 대해, 서브그룹은 상기의 Kabat 등에 의한 서브그룹 κI이다. 일 태양에 있어서, VH에 대해, 서브그룹은 상기의 Kabat 등에 의한 서브그룹 III이다.

「인간화」 항체는, 비인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는, 키메라 항체를 말한다. 어느 태양에서는, 인간화 항체는, 적어도 1개, 전형적으로는 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함하고, 당해 가변 영역에 있어서는, 모든 혹은 실질적으로 모든 HVR(예를 들어 CDR)은 비인간 항체의 것에 대응하고, 또한, 모든 혹은 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 것에 대응한다. 인간화 항체는, 임의로, 인간 항체에서 유래하는 항체 정상 영역의 적어도 일부분을 포함해도 된다. 항체(예를 들어, 비인간 항체)의 「인간화된 형태」는, 인간화를 거친 항체를 말한다.

본 명세서에서 이용되는 용어 「초가변 영역」 또는 「HVR」은, 서열에 있어서 초가변이며(「상보성 결정 영역」 또는 「CDR」(complementarity determining region)), 및/또는 구조적으로 정해진 루프(「초가변 루프」)를 형성하고, 및/또는 항원 접촉 잔기(「항원 접촉」)를 포함하는, 항체의 가변 도메인의 각 영역을 말한다. 통상, 항체는 6개의 HVR을 포함한다, 즉, VH에 3개(H1, H2, H3), 및 VL에 3개(L1, L2, L3)의, 합계 6개의 HVR을 포함한다. 본 명세서에서의 예시적인 HVR은, 이하의 것을 포함한다:

(a) 아미노산 잔기 26-32(L1), 50-52(L2), 91-96(L3), 26-32(H1), 53-55(H2), 및 96-101(H3)의 장소에서 생기는 초가변 루프(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987));

(b) 아미노산 잔기 24-34(L1), 50-56(L2), 89-97(L3), 31-35b(H1), 50-65(H2), 및 95-102(H3)의 장소에서 생기는 CDR(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));

(c) 아미노산 잔기 27c-36(L1), 46-55(L2), 89-96(L3), 30-35b(H1), 47-58(H2), 및 93-101(H3)의 장소에서 생기는 항원 접촉(MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)); 및,

(d) HVR 아미노산 잔기 46-56(L2), 47-56(L2), 48-56(L2), 49-56(L2), 26-35(H1), 26-35b(H1), 49-65(H2), 93-102(H3), 및 94-102(H3)를 포함하는, (a), (b), 및/또는 (c)의 조합.

특별히 나타내지 않는 한, HVR 잔기 및 가변 도메인 중의 다른 잔기(예를 들어, FR 잔기)는, 본 명세서에서는 상기의 Kabat 등에 따라 번호 붙여진다.

「이뮤노컨주게이트」는, 1개 또는 복수의 이종의 분자에 컨주게이트된 항체이다(이종의 분자는, 이것으로 한정되는 것은 아니지만, 세포 상해제를 포함한다).

「개체」 또는 「대상」은 포유동물이다. 포유동물은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 사육 동물(예를 들어, 소, 양, 고양이, 개, 말), 영장류(예를 들어, 인간, 및 원숭이 등의 비인간 영장류), 토끼, 및, 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한다. 특정의 태양에서는, 개체 또는 대상은, 인간이다.

「단리된」 항체는, 그 원래의 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 몇몇 태양에 있어서, 항체는, 예를 들어, 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 분리법 (isoelectric focusing: IEF), 캐필러리 전기영동) 또는 크로마토그래프(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)로 측정하여, 95% 또는 99%를 초과하는 순도까지 정제된다. 항체의 순도의 평가를 위한 방법의 총설로서, 예를 들어, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)을 참조할 것.

「단리된」 핵산은, 그 원래의 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 말한다. 단리된 핵산은, 그 핵산 분자를 통상 포함하는 세포 중에 포함된 핵산 분자를 포함하지만, 그 핵산 분자는 염색체 외에 존재하고 있거나 또는 본래의 염색체 상의 위치와는 상이한 염색체 상의 위치에 존재하고 있다.

「항C1s 항체를 코딩하는 단리된 핵산」 또는 「항C1r 항체를 코딩하는 단리된 핵산」은, 항체의 중쇄 및 경쇄(또는 그 단편)를 코딩하는 1개 또는 복수의 핵산 분자를 말하고, 1개의 벡터 또는 별개의 벡터에 실려 있는 핵산 분자, 및, 숙주 세포 중의 하나 또는 복수의 위치에 존재하고 있는 핵산 분자를 포함한다.

본 명세서에서 말하는 용어 「모노클로날 항체」는, 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 얻어지는 항체를 말한다. 즉, 그 집단을 구성하는 개개의 항체는, 생길 수 있는 변이 항체(예를 들어, 자연히 생기는 변이를 포함하는 변이 항체, 또는 모노클로날 항체 조제물의 제조 중에 발생하는 변이 항체. 그와 같은 변이체는 통상 약간량 존재하고 있다.)를 제외하고, 동일하고 및/또는 동일한 에피토프에 결합한다. 상이한 결정기(에피토프)에 대한 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 폴리클로날 항체 조제물과는 대조적으로, 모노클로날 항체 조제물의 각 모노클로날 항체는, 항원 상의 단일의 결정기에 대한 것이다. 따라서, 수식어 「모노클로날」은, 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 얻어지는 것이라고 하는 항체의 특징을 나타내고, 어떠한 특정의 방법에 의한 항체의 제조를 요구하는 것이라고 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 이용되는 모노클로날 항체는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 하이브리도마법, 재조합 DNA법, 파지 디스플레이법, 인간 면역글로불린 유전자자리의 전부 또는 일부를 포함하는 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법을 포함하는, 다양한 수법에 의해 작성되어도 되고, 모노클로날 항체를 제작하기 위한 그와 같은 방법 및 다른 예시적인 방법은, 본 명세서에 기재되어 있다.

「나(裸)항체」는, 이종의 부분(예를 들어, 세포 상해 부분) 또는 방사성 표지에 컨주게이트되어 있지 않은 항체를 말한다. 나항체는, 약학적 제제 중에 존재하고 있어도 된다.

「천연형 항체」는, 천연에 생기는 다양한 구조를 수반하는 면역글로불린 분자를 말한다. 예를 들어, 천연형 IgG 항체는, 다이설파이드 결합하고 있는 2개의 동일한 경쇄와 2개의 동일한 중쇄로 구성되는 약 150,000돌턴의 헤테로4량체 당단백질이다. N말단으로부터 C말단을 향해, 각 중쇄는, 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인이라고도 불리는 가변 영역(VH)을 갖고, 추가로 3개의 정상 도메인(CH1, CH2, 및 CH3)이 계속된다. 마찬가지로, N말단으로부터 C말단을 향해, 각 경쇄는, 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인이라고도 불리는 가변 영역(VL)을 갖고, 추가로 정상 경쇄(CL) 도메인이 계속된다. 항체의 경쇄는, 그 정상 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, κ 및 λ로 불리는, 2개의 타입의 하나에 귀속될 수 있다.

용어 「첨부 문서」는, 치료 용품의 상용 패키지에 통상 포함되고, 그와 같은 치료 용품의 사용에 관한, 적응증, 용법, 용량, 투여 방법, 병용 요법, 금기, 및/또는 경고에 대한 정보를 포함하는 사용 설명서를 말하기 위해서 이용된다.

참조 폴리펩티드 서열에 대한 「퍼센트(%) 아미노산 서열 동일성」은, 최대의 퍼센트 서열 동일성을 얻도록 서열을 정렬시키고 또한 필요하면 갭을 도입한 후의, 또한, 어떠한 보존적 치환도 서열 동일성의 일부라고 생각하지 않는다고 했을 때의, 참조 폴리펩티드 서열 중의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 중의 아미노산 잔기의, 백분율비로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정할 목적의 얼라인먼트는, 당해 기술 분야에 있어서의 기술의 범위 내에 있는 여러 가지 방법, 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign(DNASTAR) 소프트웨어, 또는 GENETYX(등록상표)(Genetyx Co., Ltd.) 등의, 공적으로 입수 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하는 것에 의해 달성할 수 있다. 당업자는, 비교되는 서열의 전장에 걸쳐서 최대의 얼라인먼트를 달성하기 위해서 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는, 서열의 얼라인먼트를 취하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.

ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은, 제넨테크사의 저작이며, 그 원시 코드는 미국 저작권청(U.S. Copyright Office, Wasington D.C., 20559)에 사용자용 서류와 함께 제출되어 미국 저작권 등록 번호 TXU510087로서 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은, 제넨테크사(Genentech, Inc., South San Francisco, California)로부터 공적으로 입수 가능하고, 원시 코드로부터 컴파일해도 된다. ALIGN-2 프로그램은, Digital UNIX V4.0D를 포함하는 UNIX operating system 상에서의 사용을 위해서 컴파일된다. 모든 서열 비교 파라미터는, ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되고, 변동하지 않는다. 아미노산 서열 비교에 ALIGN-2가 이용되는 상황에서는, 소여의 아미노산 서열 A의, 소여의 아미노산 서열 B에의, 또는 그것과의, 또는 그에 대한 %아미노산 서열 동일성(혹은, 소여의 아미노산 서열 B에의, 또는 그것과의, 또는 그에 대한, 어느 %아미노산 서열 동일성을 갖거나 또는 포함하는 소여의 아미노산 서열 A라고 할 수도 있다)은, 다음과 같이 계산된다:

분율 X/Y의 100배

여기에서, X는 서열 얼라인먼트 프로그램 ALIGN-2에 의해, 당해 프로그램의 A 및 B의 얼라인먼트에 있어서 동일한 일치로서 스코어링된 아미노산 잔기의 수이며, Y는 B 중의 아미노산 잔기의 전수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우, A의 B에의 %아미노산 서열 동일성은, B의 A에의 %아미노산 서열 동일성과 동일하지 않음이, 이해될 것이다. 별반 특별히 명시하지 않는 한, 본 명세서에서 이용되는 모든 %아미노산 서열 동일성치는, 직전의 단락에서 기술한 대로 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 이용하여 얻어지는 것이다.

용어 「약학적 제제」 및 「약학적 조성물」은, 서로 교환 가능하게 이용되고, 그 중에 포함된 유효 성분의 생물 활성이 효과를 발휘할 수 있는 형태에 있는 조제물이며, 또한 제제가 투여되는 대상에게 허용할 수 없는 정도로 독성이 있는 추가의 요소를 포함하지 않는, 조제물을 말한다.

「약학적으로 허용되는 담체」는, 대상에 대해서 무독인, 약학적 제제 및 약학적 조성물 중의 유효 성분 이외의 성분을 말한다. 약학적으로 허용되는 담체는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 완충액, 부형제, 안정화제, 또는 보존제를 포함한다.

본 명세서에서 이용되는 어구 「특이적으로 결합하는」은, 항체가, 백그라운드 결합(즉, 비특이적 결합)을 포함하지만 유의한 결합(즉, 특이적 결합)을 포함하지 않는 결합 레벨로 관심 대상이 아닌 항원에 결합하는, 활성 또는 특징을 말한다. 바꾸어 말하면, 「특이적으로 결합하는」은, 항체가, 백그라운드 결합(즉, 비특이적 결합)에 더하여 또는 그것 대신에 유의한 결합(즉, 특이적 결합)을 포함하는 결합 레벨로 관심 대상의 항원에 결합하는, 활성 또는 특징을 말한다. 특이성은, 본 명세서에서 언급되어 있거나 또는 당 기술 분야에서 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 상기의 비특이적 결합 또는 백그라운드 결합의 레벨은, 제로일 수 있고, 또는 제로는 아니고 제로 부근일 수 있으며, 또는 당업자에 의해 기술적으로 무시되는 정도로 매우 작은 것일 수 있다. 예를 들어, 당업자가 적당한 결합 어세이에 있어서 항체와 관심 대상이 아닌 항원 사이의 결합에 관해서 유의한(또는 상대적으로 강하다) 시그널을 검출 또는 관찰할 수 없는 경우, 그 항체가 관심 대상이 아닌 항원에 「특이적으로 결합하지 않는다」라고 말할 수 있다. 반대로, 당업자가 적당한 결합 어세이에 있어서 항체와 관심 대상의 항원 사이의 결합에 관해서 유의한(또는 상대적으로 강하다) 시그널을 검출 또는 관찰할 수 있는 경우, 그 항체가 관심 대상의 항원에 「특이적으로 결합한다」라고 말할 수 있다.

본 명세서에서 말하는 용어 「C1s」는, 특별히 나타내지 않는 한, 영장류(예를 들어, 인간) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트) 등의 포유동물을 포함하는, 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연형 C1s를 말한다. 이 용어는, 「전장」의 프로세싱을 받고 있지 않은 C1s도, 세포 중에서의 프로세싱의 결과 생기는 어떠한 형태의 C1s도 포함한다. 이 용어는 또한, 자연히 생기는 C1s의 변이체, 예를 들어, 스플라이스 변이체나 대립 유전자 변이체도 포함한다. 예시적인 인간 C1s의 아미노산 서열을, 서열 번호: 1에 나타낸다. 예시적인 필리핀원숭이 C1s의 아미노산 서열을, 서열 번호: 3에 나타낸다.

본 명세서에서 말하는 용어 「C1r」는, 특별히 나타내지 않는 한, 영장류(예를 들어, 인간) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트) 등의 포유동물을 포함하는, 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연형 C1r를 말한다. 이 용어는, 「전장」의 프로세싱을 받고 있지 않은 C1r도, 세포 중에서의 프로세싱의 결과 생기는 어떠한 형태의 C1r도 포함한다. 이 용어는 또한, 자연히 생기는 C1r의 변이체, 예를 들어, 스플라이스 변이체나 대립 유전자 변이체도 포함한다. 예시적인 인간 C1r의 아미노산 서열을, 서열 번호: 2에 나타낸다. 예시적인 필리핀원숭이 C1r의 아미노산 서열을, 서열 번호: 4에 나타낸다.

본 명세서에서 이용되는 「치료」(및, 그 문법상의 파생어, 예를 들어 「치료하는」, 「치료하는 것」 등)는, 치료되는 개체의 자연 경과를 개변하는 것을 기도한 임상적 개입을 의미하고, 예방을 위해서도, 임상적 병태의 경과 동안에도 실시될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 질환의 발생 또는 재발의 방지, 증상의 경감, 질환에 의한 임의의 직접적 또는 간접적인 병리적 영향의 감약, 전이의 방지, 질환의 진행 속도의 저감, 질환 상태의 회복 또는 완화, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 발명의 항체는, 질환의 발증을 늦추거나, 또는 질환의 진행을 느리게 하기 위해서 이용된다.

용어 「가변 영역」 또는 「가변 도메인」은, 항체를 항원에 결합시키는 것에 관여하는, 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 말한다. 천연형 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은, 통상, 각 도메인이 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는, 유사한 구조를 갖는다(예를 들어, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007) 참조.). 1개의 VH 또는 VL도메인으로, 항원 결합 특이성을 주는 데 충분할 것이다. 더욱이, 어느 특정의 항원에 결합하는 항체는, 당해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 각각 VL 또는 VH 도메인의 상보적 라이브러리를 스크리닝하여, 단리되어도 된다. 예를 들어 Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991) 참조.

본 명세서에서 이용되는 용어 「벡터」는, 그것이 연결된 다른 1개의 핵산을 늘릴 수 있는, 핵산 분자를 말한다. 이 용어는, 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터, 및, 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈 중에 집어넣을 수 있는 벡터를 포함한다. 어느 벡터는, 자신이 동작적으로 연결된 핵산의, 발현을 가져올 수 있다. 그와 같은 벡터는, 본 명세서에서는 「발현 벡터」라고도 칭해진다.

II. 항체

일 국면에 있어서, 본 발명은 일부에는, 항원 결합 영역 및 항체 정상 영역을 포함하는 항체에 근거한다. 특정의 태양에 있어서, C1s에 결합하는 항체가 제공된다. 특정의 태양에 있어서, C1s에 특이적으로 결합하는 항체가 제공된다. 본 발명의 항체는, 예를 들어 보체 개재성의 질환 또는 상태의 진단 또는 치료에 유용하다.

일 태양에 있어서, C1s의 종은 1개 또는 복수의 종으로부터 선택할 수 있다. 특정의 태양에 있어서, 종은, 인간 및 비인간 동물이다. 특정의 태양에 있어서, 종은, 인간, 래트, 및 원숭이(예를 들어, 필리핀원숭이, 히말라야원숭이, 마모셋, 침팬지, 및 비비)이다. 특정의 태양에 있어서, 종은, 인간 및 원숭이(예를 들어, 필리핀원숭이, 히말라야원숭이, 마모셋, 침팬지, 및 비비)이다. 특정의 태양에 있어서, 종은, 인간 및 필리핀원숭이이다.

본 태양에 있어서, 항체는, 항체 단편, 키메라 항체 및 인간화 항체, 인간 항체, 라이브러리 유래 항체, 및 다중 특이성 항체를 포함하는, 다양한 종류의 항체를 포함한다. 본 태양에 있어서, 항체는 전장 항체여도 되고, 예를 들어, 완전 IgG1, IgG2, IgG3, 혹은 IgG4 항체, 또는 본 명세서에서 정의되는 다른 항체 클래스 혹은 아이소타입이어도 된다.

(항체 단편)

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는, 항체 단편이다. 항체 단편은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, Fv, 및 scFv 단편, 및, 후술하는 다른 단편을 포함한다. 특정의 항체 단편에 대한 총설로서, Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)를 참조할 것. scFv 단편의 총설로서, 예를 들어, Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); 더하여, WO93/16185; 및 미국 특허 제5,571,894호 및 제5,587,458호를 참조할 것. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 in vivo에 있어서의 반감기가 길어진 Fab 및 F(ab')₂ 단편에 대한 논설로서, 미국 특허 제5,869,046호를 참조할 것.

다이아보디는, 2가 또는 이중 특이적이어도 되는, 항원 결합 부위를 2개 수반하는 항체 단편이다. 예를 들어, EP404,097호; WO1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993) 참조. 트라이아보디(triabody)나 테트라보디(tetrabody)도, Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)에 기재되어 있다.

싱글 도메인 항체는, 항체의 중쇄 가변 도메인의 모두 혹은 일부분, 또는 경쇄 가변 도메인의 모두 혹은 일부분을 포함하는, 항체 단편이다. 특정의 태양에 있어서, 싱글 도메인 항체는, 인간 싱글 도메인 항체이다(Domantis, Inc., Waltham, MA; 예를 들어, 미국 특허 제6,248,516 B1호 참조).

항체 단편은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 본 명세서에 기재된, 완전 항체의 단백질 분해적 소화, 재조합 숙주 세포(예를 들어, 대장균(E. coli) 또는 파지)에 의한 산생을 포함하는, 여러 가지 수법에 의해 만들 수 있다.

(키메라 항체 및 인간화 항체)

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는, 키메라 항체이다. 특정의 키메라 항체가, 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호; 및, Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)에 기재되어 있다. 일례에서는, 키메라 항체는, 비인간 가변 영역(예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 또는 원숭이 등의 비인간 영장류에서 유래하는 가변 영역) 및 인간 정상 영역을 포함한다. 추가적인 예에 있어서, 키메라 항체는, 친항체의 것으로부터 클래스 또는 서브클래스가 변경된 「클래스 스위치」 항체이다. 키메라 항체는, 그 항원 결합 단편도 포함한다.

특정의 태양에 있어서, 키메라 항체는, 인간화 항체이다. 전형적으로는, 비인간 항체는, 친비인간 항체의 특이성 및 어피니티를 유지한 채로 인간에의 면역원성을 저하시키기 위해서, 인간화된다. 통상, 인간화 항체는 1개 또는 복수의 가변 도메인을 포함하고, 당해 가변 도메인 중, HVR(예를 들어 CDR(또는 그 부분))은 비인간 항체에서 유래하고, FR(또는 그 부분)은 인간 항체 서열에서 유래한다. 인간화 항체는, 임의로, 인간 정상 영역의 적어도 일부분을 포함한다. 몇몇 태양에 있어서, 인간화 항체 중의 몇몇 FR 잔기는, 예를 들어, 항체의 특이성 또는 어피니티를 회복 또는 개선하기 위해서, 비인간 항체(예를 들어, HVR 잔기의 유래가 된 항체)로부터의 대응하는 잔기로 치환되어 있다.

인간화 항체 및 그 제작 방법은, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)에 있어서 총설되어 있고, 또한, 예를 들어, Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); 미국 특허 제5,821,337호, 제7,527,791호, 제6,982,321호, 및 제7,087,409호; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)(특이성 결정 영역(specificity determining region: SDR) 그래프팅을 기재); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)(리서페이싱을 기재); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (FR 셔플링을 기재); 및, Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (FR 셔플링을 위한 「가이드 셀렉션」 어프로치를 기재)에 있어서, 추가로 기재되어 있다.

인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은, 이들로 한정되는 것은 아니지만: 「베스트 피트」법(Sims et al., J. Immunol. 151:2296 (1993) 참조)을 이용하여 선택된 프레임워크 영역; 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정의 서브그룹의 인간 항체의 컨센서스 서열에서 유래하는 프레임워크 영역(Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992) 및 Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993) 참조); 인간 성숙(체세포 변이) 프레임워크 영역 또는 인간 생식 세포계 프레임워크 영역(예를 들어, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008) 참조); 및, FR 라이브러리의 스크리닝에서 유래하는 프레임워크 영역(Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996) 참조)을 포함한다.

(인간 항체)

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는, 인간 항체이다. 인간 항체는, 당해 기술 분야에 있어서 알려진 여러 가지 수법에 따라 제조될 수 있다. 인간 항체는, van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)에, 개설되어 있다.

인간 항체는, 항원 챌린지(부하)에 응답하여 완전 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 수반하는 완전 항체를 산생하도록 개변된 트랜스제닉 동물에 면역원을 투여하는 것에 의해, 조제되어도 된다. 그와 같은 동물은, 전형적으로는 인간 면역글로불린 유전자자리의 전부 혹은 일부분을 포함하고, 인간 면역글로불린 유전자자리의 전부 혹은 일부분은, 내인성의 면역글로불린 유전자자리를 치환하거나, 또는, 염색체 외에 혹은 당해 동물의 염색체 내에 랜덤으로 받아들여진 상태로 존재한다. 그와 같은 트랜스제닉 마우스에 있어서, 내인성의 면역글로불린 유전자자리는, 통상 불활성화되어 있다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 얻는 방법의 총설로서, Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)를 참조할 것. 또한, 예를 들어, XENOMOUSE(등록상표) 기술을 기재한 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호; HUMAB(등록상표) 기술을 기재한 미국 특허 제5,770,429호; K-M MOUSE(등록상표) 기술을 기재한 미국 특허 제7,041,870호; 및, VELOCIMOUSE(등록상표) 기술을 기재한 미국 특허 출원 공개 제2007/0061900호를, 아울러 참조할 것. 이와 같은 동물에 의해 생성된 완전 항체로부터의 인간 가변 영역은, 예를 들어, 다른 인간 정상 영역과 조합 등으로, 추가로 수식되어도 된다.

인간 항체는, 하이브리도마에 기초한 방법으로도 만들 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 제조를 위한, 인간 미엘로마 및 마우스-인간 헤테로미엘로마 세포주는, 이미 기술되어 있다(예를 들어, Kozbor, J. Immunol. 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol. 147: 86 (1991) 참조.). 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 개재시켜 생성된 인간 항체도, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)에 기술되어 있다. 추가적인 방법으로서는, 예를 들어, 미국 특허 제7,189,826호(하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체의 제조를 기재), 및, Ni, Xiandai Mianyixue 26(4):265-268 (2006)(인간-인간 하이브리도마를 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(트리오마 기술)도, Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3):185-91 (2005)에 기재되어 있다.

인간 항체는, 인간 유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리하는 것으로도 생성할 수 있다. 이와 같은 가변 도메인 서열은, 다음에 소망의 인간 정상 도메인과 조합할 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하는 수법을, 이하에 기술한다.

(라이브러리 유래의 항체)

본 발명의 항체는, 소망의 1개 또는 복수의 활성을 수반하는 항체에 대해 컴비너토리얼 라이브러리를 스크리닝하는 것에 의해 단리해도 된다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리의 생성이나, 소망의 결합 특성을 구비하는 항체에 대해 그와 같은 라이브러리를 스크리닝하기 위한, 다양한 방법이 당해 기술 분야에 있어서 알려져 있다. 그와 같은 방법은, Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)에 있어서 총설되어 있고, 더욱이, 예를 들어, McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2):299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004)에 기재되어 있다.

특정의 파지 디스플레이법에 있어서, VH 및 VL 유전자의 레퍼터리는, 폴리메라제 연쇄 반응(polymerase chain reaction: PCR)에 의해 따로따로 클로닝되어, 무작위로 파지 라이브러리 중에서 재결합되며, 당해 파지 라이브러리는, Winter et al., Ann. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994)에 기술되어 있는 바와 같이 하여, 항원 결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는, 전형적으로는, 단쇄 Fv(scFv) 단편으로서 또는 Fab 단편으로서의 어느 것으로, 항체 단편을 제시한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는, 하이브리도마를 구축하는 것을 필요로 하지 않고, 면역원에 대한 고어피니티 항체를 제공한다. 혹은, Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)에 기재되는 바와 같이, 나이브 레퍼터리를 (예를 들어, 인간으로부터) 클로닝하여, 면역화하지 않고, 광범위한 비자기 및 자기 항원에의 항체의 단일한 공급원을 제공할 수도 있다. 최후로, 나이브 라이브러리는, Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227: 381-388 (1992)에 기재되는 바와 같이, 줄기세포로부터 재구성 전의 V-유전자 세그먼트를 클로닝하여, 초가변 CDR3 영역을 코딩하고 또한 in vitro로 재구성을 달성하기 위한 무작위 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 이용하는 것에 의해, 합성적으로 만들 수도 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재한 특허문헌은, 예를 들어: 미국 특허 제5,750,373호, 및, 미국 특허 출원 공개 제2005/0079574호, 제2005/0119455호, 제2005/0266000호, 제2007/0117126호, 제2007/0160598호, 제2007/0237764호, 제2007/0292936호, 및 제2009/0002360호를 포함한다.

인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은, 본 명세서에서는 인간 항체 또는 인간 항체 단편이라고 간주한다.

(다중 특이성 항체)

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는, 다중 특이성 항체(예를 들어, 이중 특이성 항체)이다. 다중 특이성 항체는, 적어도 2개의 상이한 부위에 결합 특이성을 갖는, 모노클로날 항체이다. 특정의 태양에 있어서, 결합 특이성의 하나는, C1s에 대한 것이고, 다른 하나는 다른 임의의 항원에의 것이다. 특정의 태양에 있어서, 이중 특이성 항체는, C1s의 상이한 2개의 에피토프에 결합해도 된다. 이중 특이성 항체는, C1s를 발현하는 세포에 세포 상해제를 국재화하기 위해서 사용되어도 된다. 이중 특이성 항체는, 전장 항체로서 또는 항체 단편으로서 조제될 수 있다.

다중 특이성 항체를 제작하기 위한 수법은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 페어의 재조합 공발현(Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983), WO93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991) 참조), 및 「knob-in-hole」 기술(예를 들어, 미국 특허 제5,731,168호 참조)을 포함한다. 다중 특이성 항체는, Fc 헤테로2량체 분자를 제작하기 위해서 정전 스티어링 효과(electrostatic steering effect)를 조작하는 것(WO2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교하는 것(미국 특허 제4,676,980호 및 Brennan et al., Science 229: 81 (1985) 참조); 류신 지퍼를 이용하여 2개의 특이성을 갖는 항체를 작성하는 것(Kostelny et al., J. Immunol. 148(5):1547-1553 (1992) 참조); 「다이아보디」 기술을 이용하여 이중 특이성 항체 단편을 제작하는 것(Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993) 참조); 및, 단쇄 Fv(scFv) 2량체를 이용하는 것(Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994) 참조); 및, 예를 들어 Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991)에 기재되는 바와 같이 삼중 특이성 항체를 조제하는 것에 의해 제작해도 된다.

「옥토퍼스 항체」를 포함하는, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 수반하는 개변 항체도, 본 명세서에서는 포함된다(예를 들어, 미국 특허출원공개 제2006/0025576 A1호 참조).

본 명세서에서 항체 또는 단편은, C1s와 별도의 상이한 항원에 결합하는 1개의 항원 결합 부위를 포함하는, 「듀얼 액팅 Fab」 또는 「DAF」도 포함한다(예를 들어, 미국 특허출원공개 제2008/0069820호 참조).

A. 단리된 항체

특정의 태양에 있어서, 항체는 단리된 항체이다. 본 태양에 있어서, 단리된 항체는, 항원 결합 영역 및 항체 정상 영역을 포함한다.

본 태양에 있어서, 단리된 항체는, C1s에 특이적으로 결합하여 C1qrs 복합체로부터의 C1q의 해리를 촉진시키는 해리 촉진 기능을 가져도 된다. 본 태양에 있어서, 단리된 항체는, C1s에 특이적으로 결합하여 C1q의 C1r2s2에의 결합을 저해하도록, 블로킹 기능을 가져도 된다. 단리된 항체는, 해리 촉진 기능 및 블로킹 기능의 어느 한쪽 또는 양쪽을 가져도 된다. 바람직하게는, 항체는, 이들 기능의 양쪽을 갖는다.

일 태양에 있어서, 단리된 항체는, pH 의존적으로 C1s에 특이적으로 결합한다. 본 태양의 구체예로서 인간 및/또는 필리핀원숭이 C1s에 대한 해당 항체의 결합 활성을 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하는 경우,

i) 중성 pH 영역에 있어서의 해리 상수(KD)치는 신뢰성을 가지고 계산할 수 있고, 또한 산성 pH 영역에서의 KD치는, 결합 활성이 없거나 혹은 결합 활성이 매우 낮기 때문에 신뢰성을 가지고 계산할 수 없거나, 또는

ii) 중성 pH 영역 및 산성 pH 영역의 양쪽에서의 KD치를 신뢰성을 가지고 계산할 수 있다고 하는 조건에서, 중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비(산성 KD/중성 KD비)는 10보다 크다.

그와 같은 항체는, 환자에 있어서의 용량 및 투여 빈도를 줄일 수 있어, 결과로서 그 총용량을 줄일 수 있기 때문에, 의약품으로서 특히 우수하다고 예상된다. 항C1s 항체는, 혈장으로부터 (C1s에의 결합을 통해서) C1r2s2를 제거할 뿐이며, 혈장으로부터 C1q를 제거하지 않기 때문에, C1qrs 복합체에 결합하여 이것을 혈장으로부터 제거하는 항체와 비교하여 우수한 안전성 프로파일을 갖는다고 예상된다. 그 결과, C1q 결핍에 관련하는 부작용이 회피될 수 있다. 더하여, C1q의 고속 해리 촉진능을 갖는 항체는, 보체 활성의 보다 빠른 중화를 나타낸다고 예상되고, 이것은, 치료 효과의 보다 빠른 발생으로 연결될 수 있다.

(a1) BIACORE(등록상표)/해리 촉진의 컨셉

일 태양에 있어서, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 단리된 항체는, 표면 플라즈몬 공명 어세이용의 칩(예를 들어 BIACORE(등록상표) 칩) 상의 C1qrs 복합체에 결합하여 C1qrs 복합체로부터의 C1q의 해리를 촉진시키는 항체이다. 몇몇 태양에 있어서, 상기의 C1qrs 복합체에 결합하여 C1qrs 복합체로부터의 C1q의 해리를 촉진시키는 기능은, 본 명세서에 있어서 「해리 촉진 기능/활성」 또는 「C1q 해리 촉진 기능/활성」이라고 불린다. 이 기능/활성은, 표면 플라즈몬 공명 어세이, 예를 들어 본 명세서에 기재되는 BIACORE(등록상표) 어세이를 이용하여 정성적으로 또는 정량적으로 적절히 평가될 수 있다. 추가의 태양에 있어서, 항체는, 충분한 시간 경과 후에, 표면 플라즈몬 공명 어세이, 예를 들어 BIACORE(등록상표) 어세이에 의해 결정되는, 그 항체의 존재하에서의 응답 단위(RU)의 값이 그 항체의 비존재하에서의 응답 단위(RU)의 값보다 낮은 경우에, 해리 촉진 기능을 가지는 항체라고 판정될 수 있다. 그와 같은 어세이로부터 얻어지는 센서그램에 있어서, C1q 및 항체의 존재하에서의 곡선의, C1q의 존재하 또한 항체의 비존재하에서의 곡선에의 근접이 특정될 수 있다. 추가의 태양에 있어서, C1q의 존재하 또한 항체의 비존재하에서의 곡선이 C1q 및 항체의 존재하에서의 곡선과 교차하는 「크로스오버 시점」이 특정될 수 있다(상세에 대해서는 실시예를 참조). 엄밀히 말하면, 노이즈, 또는 전자의 곡선과 교차할 때의 후자의 곡선의 진동이 원인으로, 하나의 센서그램에 있어서조차도 복수의 크로스오버 시점이 관찰될 수 있다. 그와 같은 예에 있어서, 복수의 크로스오버 시점 중 어느 하나가 「크로스오버 시점」으로서 선택될 수 있다. 「충분한 시간 경과」는, 측정의 목적상, 응답 단위(RU)의 값의 측정 시점이 「크로스오버 시점」보다도 충분히 후임을 의미한다. 몇몇 태양에 있어서, 응답 단위(RU)의 값의 측정 시점은, 항체 주입 개시 시점의 적어도 60초 후, 100초 후, 150초 후, 200초 후, 500초 후, 700초 후, 1000초 후, 1500초 후, 또는 2000초 후에 있다. 혹은, 측정 시점은, 크로스오버 시점의 적어도 100초 후, 200초 후, 300초 후, 400초 후, 500초 후, 600초 후, 700초 후, 800초 후, 900초 후, 1000초 후, 3000초 후, 5000초 후, 7000초 후, 또는 10000초 후일 수 있다.

일 태양에 있어서, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 단리된 항체는, 예를 들어 「C1r2s2 복합체 및 C1q의 포착량이, 각각 200공명 단위(RU) 및 200공명 단위(RU)이며, 애널라이트로서 500nM의 항체를 10마이크로리터(μL)/분에 주입하는」이라고 하는 조건을 이용하는 BIACORE(등록상표) 어세이에 의해 결정되는 경우의 (예를 들어, BIACORE(등록상표) 어세이에 있어서의) 크로스오버 시점이 항체 주입 개시 시점 후 60초 이내, 100초 이내, 150초 이내, 200초 이내, 500초 이내, 700초 이내, 1000초 이내, 1500초 이내, 또는 2000초 이내인 경우에, 해리 촉진 기능을 갖는 항체라고 판정될 수 있다.

일 태양에 있어서, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 단리된 항체는, 예를 들어 「C1r2s2 복합체 및 C1q의 포착량이, 각각 200공명 단위(RU) 및 200공명 단위(RU)이며, 애널라이트로서 500nM의 항체를 10μL/분에 주입하는」이라고 하는 조건을 이용하는 BIACORE(등록상표) 어세이에 의해 결정되는 경우, 항체 주입 개시 시점 후 100초 이내, 300초 이내, 500초 이내, 700초 이내, 1000초 이내, 1500초 이내, 2000초 이내, 3000초 이내, 5000초 이내, 7000초 이내, 또는 10000초 이내에, C1q의 거의 모두(또는 모두)가 C1qrs 복합체로부터 해리되는 경우에, 해리 촉진 기능을 갖는 항체라고 판정될 수 있다. 예를 들어, 그와 같은 어세이로부터 얻어지는 센서그램에 있어서, C1q 및 항체의 존재하에서의 값(RU)이 항체의 존재하 또한 C1q의 비존재하에서의 값(RU)에 가까운 또는 그 값에 이르는 경우에, 「C1q의 거의 모두(또는 모두)가 C1qrs 복합체로부터 해리되는」이라고 판정될 수 있다. 본 명세서에 있어서, 「(C1q의) 거의 모두」는, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그것보다 높은 비율을 나타내고, 「(C1q의) 모두」는, 비율 100%를 나타낸다. 해리되는 C1q의 비율은, 본 명세서에 기재되는 임의의 어세이에 의해 정량적으로 결정될 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 본 발명은, C1r2s2 복합체로부터의 C1q의 해리를 촉진시키는 항체의 스크리닝 방법이며, 그와 같은 항체의 「해리 촉진 기능/활성」을 측정하는 상기 방법을 이용하는, 스크리닝 방법을 제공한다. 일 태양에 있어서, 이 스크리닝 방법은, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 항체를 선택하는 공정, 즉, C1qrs 복합체에 결합하여 C1qrs 복합체로부터의 C1q의 해리를 촉진시키는 항체를 선택하는 공정을 포함한다. 해리 촉진 기능/활성을 갖는 항체는, 표면 플라즈몬 공명 어세이, 예를 들어 본 명세서에 기재되는 BIACORE(등록상표) 어세이를 이용하여 적절히 선택될 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 이 스크리닝 방법은, 충분한 시간 경과 후에, 표면 플라즈몬 공명 어세이, 예를 들어 BIACORE(등록상표) 어세이에 의해, (i) 항체의 존재하에서의 응답 단위(RU)의 값 및 (ii) 항체의 비존재하에서의 응답 단위(RU)의 값을 결정하는 공정을 포함한다. 이 스크리닝 방법은, 상기 (i)의 값과 상기 (ii)의 값을 비교하는 공정을 포함할 수 있다. 이 스크리닝 방법은, 상기 (i)의 값이 상기 (ii)의 값보다 낮은 경우에, 그 항체를 선택하는 공정을 포함할 수 있다. 이 스크리닝 방법은, C1q의 존재하 또한 항체의 비존재하에서의 곡선이 C1q 및 항체의 존재하에서의 곡선과 교차하는 「크로스오버 시점」을 특정하는 공정을 포함할 수 있다. 상기와 같이, 하나의 센서그램에 있어서조차도 복수의 크로스오버 시점이 관찰될 수 있고, 복수의 크로스오버 시점 중 어느 하나가, 「크로스오버 시점」으로서 선택될 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 이 스크리닝 방법은, 항체 주입 개시 시점의 적어도 60초 후, 100초 후, 150초 후, 200초 후, 500초 후, 700초 후, 1000초 후, 1500초 후, 또는 2000초 후에 응답 단위(RU)의 값을 측정하는 공정을 포함할 수 있다. 혹은, 이 스크리닝 방법은, 크로스오버 시점의 적어도 100초 후, 200초 후, 300초 후, 400초 후, 500초 후, 600초 후, 700초 후, 800초 후, 900초 후, 1000초 후, 3000초 후, 5000초 후, 7000초 후, 또는 10000초 후에 응답 단위(RU)의 값을 측정하는 공정을 포함할 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 이 스크리닝 방법은, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 항체 또는 해리 촉진 기능을 갖는 항체를 선택하는 공정이며, 예를 들어 「C1r2s2 복합체 및 C1q의 포착량이, 각각 200공명 단위(RU) 및 200공명 단위(RU)이며, 애널라이트로서 500nM의 항체를 10마이크로리터(μL)/분에 주입하는」이라고 하는 조건을 이용하는 BIACORE(등록상표) 어세이에 의해 결정되는 경우의 그 항체의 크로스오버 시점이 항체 주입 개시 시점 후 60초 이내, 100초 이내, 150초 이내, 200초 이내, 500초 이내, 700초 이내, 1000초 이내, 1500초 이내, 또는 2000초 이내인 경우에 그 항체를 선택하는 공정을 포함할 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 이 스크리닝 방법은, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 항체 또는 해리 촉진 기능을 갖는 항체를 선택하는 공정이며, 예를 들어 「C1r2s2 복합체 및 C1q의 포착량이, 각각 200공명 단위(RU) 및 200공명 단위(RU)이며, 애널라이트로서 500nM의 항체를 10μL/분에 주입하는」이라고 하는 조건을 이용하는 BIACORE(등록상표) 어세이에 의해 결정되는 경우, 항체 주입 개시 시점 후 100초 이내, 300초 이내, 500초 이내, 700초 이내, 1000초 이내, 1500초 이내, 2000초 이내, 3000초 이내, 5000초 이내, 7000초 이내, 또는 10000초 이내에, C1q의 거의 모두(또는 모두)가 C1qrs 복합체로부터 해리되는 경우에 그 항체를 선택하는 공정을 포함할 수 있다. 상기와 같이, 「(C1q의) 거의 모두」는, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그것보다 높은 비율을 나타내고, 「(C1q의) 모두」은 100%를 나타내고, 해리되는 C1q의 비율은, BIACORE(등록상표) 어세이를 포함하는 본 명세서에 기재되는 임의의 어세이에 의해 정량적으로 결정될 수 있다.

(a2) BIACORE(등록상표)/블로킹의 컨셉

일 태양에 있어서, 본 발명은, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 단리된 항체를 제공하고, 이 항체는, 이 항체가 C1r2s2에 결합하여 C1r2s2에 대한 C1q의 결합을 저해하는 것과 같은 블로킹 기능을 갖는다. 추가의 태양에 있어서, 항체는, 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 그것보다 높은 블로킹 비율을 갖는다. 이 블로킹 기능/활성 또는 블로킹 비율은, BIACORE(등록상표) 어세이를 이용하는 것에 의해 결정될 수 있다. C1q 블로킹의 레벨을 평가하기 위해서, 이하의 조건이 사용될 수 있다: C1r2s2의 포착량은, 50, 100, 200, 400공명 단위(RU)를 목표로 한다. 250, 500, 1000, 2000nM의 항체 변이체를 주입하여 항체 결합을 포화시키고, 계속해서, 250, 500, 1000, 2000nM의 항체 변이체와 함께 또는 그것 없이 50, 100, 200nM의 인간 C1q를 주입한다. 블로킹 비율은, 다음의 식에 의해 산출한다: [1-(항체 변이체의 존재하에서의 인간 C1q 결합 응답/항체 변이체의 비존재하에서의 인간 C1q 결합 응답)]×100%.

(a3) pH 의존성

일 태양에 있어서, 단리된 항체는, pH 의존적으로 C1s에 특이적으로 결합한다. 바람직한 태양에 있어서, 산성 pH 영역(예를 들어 pH 6.0)에서의 C1s에 대한 항체의 결합 활성은, 중성 pH 영역(예를 들어 pH 7.4)에서의 결합 활성보다도 낮다.

본 태양에 있어서, 항체는, 결합 활성을 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하고, 그 데이터에 근거해 해리 상수(KD) 치를 계산하는 경우, 산성 pH 영역에서의 KD치의 신뢰성이 낮은지, 또는 산성 pH 영역에 있어서 C1s에 대한 결합 활성을 측정할 수 없을 수록에, 산성 pH 영역에 있어서 C1s에 대해서 매우 낮은 결합성을 가져도 된다. 즉, 인간 및/또는 필리핀원숭이 C1s에 대한 항체의 결합 활성을 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하는 경우,

i) 중성 pH 영역에서의 KD치는 신뢰성을 가지고 계산할 수 있고, 또한 산성 pH 영역에서의 KD치는, 결합 활성이 없거나 혹은 결합 활성이 매우 낮기 때문에 신뢰성을 가지고 계산할 수 없거나, 또는

ii) 중성 pH 영역 및 산성 pH 영역의 양쪽에서의 KD치가 신뢰성을 가지고 계산할 수 있다고 하는 조건에서, 중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비(산성 KD/중성 KD비)는 10보다 크다.

본 태양에 있어서, 상기 ii)의 산성 KD/중성 KD비는, 바람직하게는 14 이상, 44 이상, 45 이상, 72 이상, 99 이상, 100 이상, 107 이상, 110 이상, 117 이상, 120 이상, 138 이상, 181 이상, 209 이상, 225 이상, 278 이상이다. 본 태양에 있어서, 상기 ii)의 산성 KD/중성 KD비는, 보다 바람직하게는 44 이상, 45 이상, 72 이상, 99 이상, 100 이상, 107 이상, 110 이상, 117 이상, 120 이상, 138 이상, 181 이상, 209 이상, 225 이상, 278 이상이다.

본 사례에 있어서의 용어 「신뢰성을 가지고」가 의미하는 바를 이하에 기재한다. 각 샘플의 pH 7.4 및 pH 6.0에 있어서의 KD치는, 37℃에서 BIACORE(등록상표) T200 기기(Cytiva)를 이용하여 결정된다. 정제 마우스 항인간 Igκ 경쇄(GE Healthcare)는, 아민 커플링 키트(GE Healthcare)를 이용하여 CM5 센서 칩의 모든 플로 셀 상에 고정화 될 수 있다. 20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 1mg/mL 소 혈청 알부민(BSA)(IgG 비함유), 1mg/mL CMD(CM-덱스트란 나트륨염), 0.05% Tween(등록상표) 20, 및 0.005% NaN₃(pH 7.4 또는 pH 6.0)을 포함하는 완충액이, 러닝 버퍼로서 사용된다. 각 항체는, 항인간 Igκ 경쇄를 개재시켜 센서 표면 상에 포착될 수 있다. 항체 포착량은 50공명 단위(RU)로 조정된다. pH 7.4에서의 KD치에 대해서는, 인간 C1r2s2 복합체를, 0, 25, 40, 100, 200, 400nM, 0, 12.5, 25, 40, 100, 200nM, 또는 0, 6.3, 12.5, 25, 50, 100nM의 당해 단백질 복합체를 30μL/분으로 주입할 수 있도록, 조제한다. pH 6.0에서의 KD치에 대해서는, 인간 또는 필리핀원숭이 C1r2s2 복합체를, 예를 들어 글리신 pH 2.0(GE Healthcare)을 이용하여, 0, 200, 400, 800, 1600, 3200nM, 또는 0, 50, 100, 200, 400, 800nM의 당해 단백질 복합체를 30μL/분으로 주입할 수 있도록, 조제한다. 사이클마다, 예를 들어 글리신 pH 2.0(GE Healthcare)을 이용하여 센서 표면을 재생한다. BIACORE(등록상표) T200 평가 소프트웨어, 버전 2.0(Cytiva)을 이용하여, KD치를 취득한다. pH 6.0에서의 KD치를, pH 7.4에서의 KD치와 비교한다(산성 KD/중성 KD비). BIACORE(등록상표) 소프트웨어의 정밀도 관리(quality control) 결과가, 항체에 대해 「속도 상수를 일의적으로 결정할 수 없다」("kinetics constants cannot be uniquely determined")라고 기술했을 경우, 당해 항체의 KD치는 신뢰성을 가지고 계산할 수 없다고 간주했다.

본 사례의 일 태양에 있어서, 표면 플라즈몬 공명에 의한 결합 활성의 측정은, 인간 Igκ 경쇄를 개재시켜 50공명 단위의 각 항체가 포착된 센서 칩과, 20mM ACES(N-(2-아세트아마이드)-2-아미노에테인설폰산), 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 1mg/mL 소 혈청 알부민(BSA), 1mg/mL CM-덱스트란 나트륨염(CMD), 0.05% 폴리소르베이트 20, 0.005% NaN₃을 포함하는 러닝 버퍼를 이용하여 37℃에서 행해진다.

본 태양에 있어서, 상기 항체에는, 결합 활성이 없거나 또는 결합 활성이 매우 낮기 때문에 중성 pH 영역에서의 KD치를 신뢰성을 가지고 계산할 수 없는 항체는 포함되지 않는다.

pH 의존적인 양식으로의 C1s에의 결합에 더하여, C1s에 대한 pH 의존적 항체의 어피니티에 대한 칼슘의 영향이, 다른 중요한 특성일 수 있다. C1s는, 고칼슘 농도하에서 2량체를 형성하지만, 저칼슘 농도하에서는 단량체로 해리된다. C1s가 2량체 상태에 있을 때, 2가 항체는, 복수의 C1s 분자를 가교하는 것에 의해 면역 복합체를 형성할 수 있다. 이것에 의해, 항체는, 어피니티형 및 어비디티형의 양쪽의 상호작용에 의해 복합체 내의 C1s 분자에 결합할 수 있고, 그에 따라 그 항체의 겉보기의 어피니티가 증가한다. 이것에 대해서, C1s가 단량체 상태에 있을 때, 항체는 어피니티형 상호작용에 의해서만 C1s에 결합한다. 이것은, pH 의존적 C1s 항체는 혈장 중의 2량체 C1s와 면역 복합체를 형성할 수 있지만, 산성의 엔도솜 내에 들어가면 C1s는 단량체로 해리됨을 의미한다. 이것에 의해, 면역 복합체가 해체되어, 그것이 항원으로부터의 항체의 pH 의존적 해리를 증강한다.

일 국면에 있어서, 단리된 항C1s 항체에 대해, 중성 pH 및 산성 pH의 양쪽에 있어서 고칼슘 농도하에서 측정되었을 경우, 중성 pH에서의 그 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 그 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 10보다 크다. 일 국면에 있어서, 단리된 항C1s 항체에 대해, 중성 pH에 있어서의 고칼슘 농도하 및 산성 pH에 있어서의 저칼슘 농도하에서 측정되었을 경우, 중성 pH에서의 그 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 그 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 10보다 크다. 몇몇 태양에 있어서, 단리된 항C1s 항체에 대해, 중성 pH 및 산성 pH의 양쪽에 있어서 저칼슘 농도하에서 측정되었을 경우, 중성 pH에서의 그 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 그 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는 10보다 크고, 여기에서 해당 항C1s 항체는 2량체 상태의 C1s에 결합한다.

특정의 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 1) 항체에 의해 결합되는 C1s의 에피토프 구조가 칼슘의 비존재에 의해 입체 구조적으로 변화할 수 있고, 그에 따라 항체의 어피니티가 바뀌는 경우, 또는 2) 항체의 상호작용(어피니티형 혹은 어비디티형)이 C1s 상태(단량체 상태 혹은 2량체 상태)에 의존하여 변화할 수 있는 경우, KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))를 평가하기 위해서, 특정의 조건(중성 pH에 있어서의 고칼슘 농도하 및 산성 pH에 있어서의 저칼슘 농도하)을 사용하는 측정이 사용될 수 있다.

환언하면, 항체는, 이하의 (i) 또는 (ii)에 기재되는 바와 같이 산성 pH보다도 중성 pH에 있어서 높은 어피니티로 C1s에 결합한다:

(i) 중성 pH 및 산성 pH의 양쪽에 있어서 고칼슘 농도하에서 측정되었을 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))가 10보다 크다,

(ii) 중성 pH에 있어서의 고칼슘 농도하 및 산성 pH에 있어서의 저칼슘 농도하에서 측정되었을 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))가 10보다 크다.

보다 일반적으로는, 특정의 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 1) 항체에 의해 결합되는 특정의 항원의 에피토프 구조가 칼슘의 비존재에 의해 입체 구조적으로 변화할 수 있고, 그에 따라 항체의 어피니티가 바뀌는 경우, 또는 2) 항체의 상호작용(어피니티형 혹은 어비디티형)이 항원 상태(단량체 상태 혹은 2량체 상태)에 의존하여 변화할 수 있는 경우, KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))를 평가하기 위해서 특정의 조건(중성 pH에 있어서의 고칼슘 농도하 및 산성 pH에 있어서의 저칼슘 농도하)을 사용하는 측정이 사용될 수 있다.

따라서, 항체는, 이하와 같이 산성 pH보다도 중성 pH에 있어서 높은 어피니티로 항원에 결합한다: 중성 pH에 있어서의 고칼슘 농도하 및 산성 pH에 있어서의 저칼슘 농도하에서 측정되었을 경우, 중성 pH에 있어서의 항원 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에 있어서의 항원 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))가 10보다 크다.

상기의 KD비, 즉 KD(산성 pH)/KD(중성 pH)는, 친항체(즉, 본 발명의 개변 전의 원래의 항체)와 당해 원래의 (친)항체에 대해서 1개 또는 복수의 아미노산 변이(예를 들어, 부가, 삽입, 결실 또는 치환)가 도입된 항체 사이에서 비교될 수 있다. 원래의 (친)항체는, 그것이 C1s에 특이적으로 결합하는 한, 임의의 공지된 항체 또는 새롭게 단리된 항체일 수 있다. 따라서, 일 국면에 있어서, 단리된 항C1s 항체에 대해, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는, 그 원래의 (친)항체의 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))보다도 적어도 1.2배, 1.4배, 1.6배, 1.8배, 2배, 3배, 3.5배, 4배, 5배, 8배, 10배 높다. 환언하면, 본 발명은, 친(원래의)항체에 1개 또는 복수의 아미노산 변이(예를 들어, 부가, 삽입, 결실 또는 치환)가 도입되어, 이하의 (ii)에 대한 (i)의 비가 적어도 1.2, 1.4, 1.6, 1.8, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 5, 8 또는 10인, 단리된 항C1s 항체를 제공한다: (i) 단리된 항C1s 항체의 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH)); (ii) 친(원래의)항체의 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH)). 이들 KD비는, 임의의 (높은 또는 낮은) 칼슘 농도하에서 측정될 수 있고, 예를 들어, 중성 pH 및 산성 pH의 양쪽에 있어서 고칼슘 농도하에서 측정될 수 있고, 또는 중성 pH에 있어서의 고칼슘 농도하 및 산성 pH에 있어서의 저칼슘 농도하에서 측정될 수 있다.

일 국면에 있어서, 항체는, 세포내 조건과 세포외 조건의 사이에서 상이한 항원 결합 활성을 갖는다. 세포내 조건 및 세포외 조건은, 세포의 내부와 외부 사이의 상이한 조건을 말한다. 조건의 카테고리에는, 예를 들어, 이온 농도, 보다 구체적으로는 금속 이온 농도, 수소 이온 농도(pH) 및 칼슘 이온 농도가 포함된다. 「세포내 조건」은, 바람직하게는, 엔도솜 내의 환경에 특징적인 환경을 말하고, 「세포외 조건」은, 바람직하게는, 혈장 중의 환경에 특징적인 환경을 말한다. 이온 농도에 따라서 변화하는 항원 결합 활성을 갖는다고 하는 특성을 가지는 항체는, 그와 같은 특성을 갖는 도메인에 대해 다수의 항체를 스크리닝하는 것에 의해 취득될 수 있다. 예를 들어, 상기의 특성을 갖는 항체는, 그 서열이 서로 상이한 다수의 항체를 하이브리도마법 또는 항체 라이브러리법에 의해 산생하여, 상이한 이온 농도하에서 그들의 항원 결합 활성을 측정하는 것에 의해 취득될 수 있다. B 세포 클로닝법은, 그와 같은 항체를 스크리닝하는 방법의 예의 하나이다. 더욱이, 후술과 같이, 이온 농도에 따라서 변화하는 항원 결합 활성을 갖는다고 하는 특성을 항체에 부여할 수 있는 적어도 1개의 특징적인 아미노산 잔기가 특정되고, 당해 특징적인 아미노산 잔기를 공통 구조로서 공유하면서 상이한 서열을 갖는 다수의 항체의 라이브러리가 조제된다. 그와 같은 라이브러리는, 상기의 특성을 갖는 항체를 효과적으로 단리하기 위해서 스크리닝될 수 있다.

일 국면에 있어서, 본 발명은, 산성 pH보다도 중성 pH에 있어서 높은 어피니티로 C1s에 결합하는 항체를 제공한다. 다른 국면에 있어서, 본 발명은, C1s에 대해서 pH 의존적 결합을 나타내는 항C1s 항체를 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 표현 「pH 의존적 결합」은, 「중성 pH에서의 결합과 비교하여 저하된, 산성 pH에서의 결합」을 의미하고, 양 표현은 교환 가능할 수 있다. 예를 들어, 「pH 의존적 결합 특성을 갖는」 항C1s 항체에는, 산성 pH보다도 중성 pH에 있어서 높은 어피니티로 C1s에 결합하는 항체가 포함된다.

특정의 태양에 있어서, 중성 pH 및 산성 pH의 양쪽에 있어서 고칼슘 농도하에서 측정되었을 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는, 10보다 크다. 특정의 태양에 있어서, 항체는, 중성 pH에 있어서, 산성 pH에 있어서의 것보다도 적어도 11, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배, 또는 그것보다 높은 어피니티로 C1s에 결합한다.

특정의 태양에 있어서, 중성 pH에 있어서의 고칼슘 농도하 및 산성 pH에 있어서의 저칼슘 농도하에서 측정되었을 경우, 중성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치에 대한 산성 pH에서의 C1s 결합 활성의 KD치의 비(KD(산성 pH)/KD(중성 pH))는, 10보다 크다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명의 항체는, 중성 pH에 있어서, 산성 pH에 있어서의 것보다도 적어도 11, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배, 또는 그것보다 높은 어피니티로 C1s에 결합한다.

상기의 예에 있어서, 예를 들어, 산성 pH는 6.0이며, 중성 pH는 7.4이며, 따라 KD(산성 pH)/KD(중성 pH)는, KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)이다. 이것에 관해서, 산성 pH 및 중성 pH의 예가, 본 명세서에 있어서 상세히 후기되어 있다. 몇몇 태양에 있어서, KD(산성 pH)/KD(중성 pH), 예를 들어 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)는, 11~10,000일 수 있다.

항원이 가용성 단백질인 경우, 항체가 항원 자신보다도 혈장 중에서 긴 반감기를 가질 수 있고 또한 항원의 캐리어로서 기능할 수 있기 때문에, 항체의 항원에의 결합은, 항원의 혈장중 반감기의 연장(즉, 혈장으로부터의 항원의 클리어런스의 저감)을 가져올 수 있다. 이것은, 세포 내의 엔도솜 경로를 개재시킨 FcRn에 의한 항원-항체 복합체의 리사이클에 기인한다(Roopenian and Akilesh (2007) Nat Rev Immunol 7(9): 715-725). 그러나, 중성의 세포외 환경하에서는 항원에 결합하지만 세포내에의 침입 후는 산성의 엔도솜 구획 내에 항원을 방출하는, pH 의존적 결합 특성을 갖는 항체는, pH 비의존적 양식으로 결합하는 대응물에 비해 항원의 중화 및 클리어런스의 점에서 우수한 특성을 갖는다고 예상된다(Igawa et al (2010) Nature Biotechnol 28(11); 1203-1207; Devanaboyina et al (2013) mAbs 5(6): 851-859; 국제 특허 출원 공개 번호: WO 2009/125825).

일 국면에 있어서, 본 발명은, 저칼슘 농도 조건하보다도 고칼슘 농도 조건하에 있어서 높은 어피니티로 C1s에 결합하는 항체를 제공한다.

일 태양에 있어서, 바람직한 금속 이온에는, 예를 들어, 칼슘 이온이 포함된다. 칼슘 이온은, 근육, 예를 들어 골격근, 평활근 및 심근의 수축; 백혈구의 운동, 식작용 등의 활성화; 혈소판의 형상 변화, 분비 등의 활성화; 림프구의 활성화; 히스타민의 분비를 포함하는 비만 세포의 활성화; 카테콜아민 알파 수용체 또는 아세틸콜린 수용체에 의해 매개되는 세포 응답; 엑소사이토시스; 뉴런 말단으로부터의 전달 물질의 방출; 및 뉴런에 있어서의 축색류를 포함하는, 많은 생물학적 현상의 조정에 관여한다. 공지된 세포내 칼슘 이온 수용체에는, 트로포닌 C, 칼모듈린, 파르브알부민 및 미오신경쇄가 포함되고, 이들은, 몇몇 칼슘 이온 결합 부위를 갖고, 분자 진화의 점에서 공통 기원으로부터 파생하고 있다고 생각되고 있다. 또한, 많은 칼슘 결합 모티프가 공지가 되어 있다. 그와 같은 주지의 모티프에는, 예를 들어, 카드헤린 도메인, 칼모듈린의 EF 핸드, 프로틴 키나제 C의 C2 도메인, 혈액 응고 단백질 제IX 인자의 Gla 도메인, 아시아로 당단백질 수용체 및 만노스 결합 수용체의 C형 렉틴, LDL 수용체의 A 도메인, 아넥신, 트롬보스폰딘 3형 도메인 및 EGF양 도메인이 포함된다.

일 태양에 있어서, 금속 이온이 칼슘 이온인 경우에는, 고칼슘 이온 농도 조건하에 있어서의 항원 결합 활성보다도 저칼슘 이온 농도 조건하에 있어서의 항원 결합 활성이 낮은 편이 바람직하다. 한편, 세포내 칼슘 이온 농도는, 세포외 칼슘 이온 농도보다도 낮다. 반대로, 세포외 칼슘 이온 농도는, 세포내 칼슘 이온 농도보다도 높다. 일 태양에 있어서, 저칼슘 이온 농도는, 바람직하게는 0.1μM~30μM이고, 보다 바람직하게는 0.5μM~10μM이며, 특히 바람직하게는 생체내의 조기 엔도솜 내의 칼슘 이온 농도에 가까운 1μM~5μM이다. 한편, 일 태양에 있어서, 고칼슘 이온 농도는, 바람직하게는 100μM~10μM이고, 보다 바람직하게는 200μM~5mM이며, 특히 바람직하게는 혈장 중(혈중)의 칼슘 이온 농도에 가까운 0.5mM~2.5mM이다. 일 태양에 있어서, 저칼슘 이온 농도가 엔도솜 내의 칼슘 이온 농도이며, 고칼슘 이온 농도가 혈장 중의 칼슘 이온 농도인 것이 바람직하다. 항원 결합 활성의 레벨을 저칼슘 이온 농도하와 고칼슘 이온 농도하에서 비교했을 경우, 항체의 결합은, 저칼슘 이온 농도하보다도 고칼슘 이온 농도하에서 강한 것이 바람직하다. 환언하면, 항체의 항원 결합 활성은, 고칼슘 이온 농도하보다도 저칼슘 이온 농도하에서 낮은 것이 바람직하다. 결합 활성의 레벨을 해리 상수(KD)로 나타내는 경우, KD(저칼슘 이온 농도)/KD(고칼슘 이온 농도)의 값은 1보다 크고, 바람직하게는 2 이상이며, 보다 더 바람직하게는 10 이상이고, 보다 더 바람직하게는 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, 또는 그것보다 크다. KD(저칼슘 이온 농도)/KD(고칼슘 이온 농도)의 값의 상한은 특별히 한정되지 않고, 당업자의 기술에 있어서 제작 가능한 한, 100, 400, 1000, 또는 10000 등, 어떠한 값이어도 된다. KD 대신에 해리 속도 상수(kd)를 이용하는 것도 가능하다. KD치를 계산하는 것이 곤란한 경우는, BIACORE(등록상표)에 있어서 동일한 농도로 애널라이트를 흘렸을 때의 결합 반응성의 레벨에 기초하여 활성을 평가해도 된다. 항체를 고정화한 칩 상에 항원을 흘렸을 경우, 저칼슘 농도하에서의 결합 반응성은, 고칼슘 농도하에서의 결합 반응성의 바람직하게는 1/2 이하이고, 보다 바람직하게는 1/3 이하이며, 보다 더 바람직하게는 1/5 이하이고, 특히 바람직하게는 1/10 이하이다. 일반적으로, 생체 내의 세포외(예를 들어 혈장 중)의 칼슘 이온 농도는 높고, 세포내(예를 들어 엔도솜내)의 칼슘 이온 농도는 낮음이 알려져 있다. 그 때문에 일 태양에 있어서, 세포외 조건이 고칼슘 이온 농도이며, 세포내 조건이 저칼슘 이온 농도인 것이 바람직하다. 세포외의 칼슘 이온 농도 조건하에 비해 세포내의 칼슘 이온 농도 조건하에서는 항원 결합 활성이 낮다고 하는 특성을 항체에 부여하는 경우, 세포 외에서 항체에 결합한 항원은 세포 내에서 항체로부터 해리되고, 그에 따라 세포 외로부터 세포 내에의 항원의 흡수가 증강된다. 그와 같은 항체를 생체에 투여하는 경우, 혈장 중의 항원 농도를 저하시켜, 생체에 있어서의 항원의 생리 활성을 저감시키는 것이 가능해지므로, 항체는 유용하다. 고칼슘 이온 농도 조건에 비해 저칼슘 이온 농도 조건하에서 항원 결합 활성이 낮은 항원 결합 영역 또는 항체를 스크리닝하는 방법에는, 예를 들어 WO2012/073992(예를 들어, 단락 0200~0213)에 기재된 방법이 포함된다. 고칼슘 이온 농도 조건에 비해 저칼슘 이온 농도 조건하에서 항원에 약하게 결합하는 특성을 항원 결합 영역에 부여하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 어떠한 방법에 의해 행해져도 된다. 구체적으로는, 그 방법은, 예를 들어, 항원 결합 영역에 있어서, 적어도 1개의 아미노산 잔기를, 금속 킬레이트 작용을 갖는 아미노산 잔기로 치환하는 방법, 및/또는 금속 킬레이트 작용을 갖는 적어도 1개의 아미노산 잔기를 항원 결합 도메인에 삽입하는 방법을 포함한다. 항원 결합 영역의 적어도 1개의 아미노산 잔기가 금속 킬레이트 작용을 갖는 아미노산 잔기로 치환되어 있는, 및/또는 금속 킬레이트 작용을 갖는 적어도 1개의 아미노산 잔기가 항원 결합 도메인에 삽입되어 있는 항체는, 항체의 바람직한 태양의 하나이다.

금속 킬레이트 작용을 갖는 아미노산 잔기는, 바람직하게는, 예를 들어, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 아스파라긴산 및 글루타민산을 포함한다. 또한, 칼슘 이온 농도에 따라서 항원 결합 영역의 항원 결합 활성을 변화시키는 아미노산 잔기는, 바람직하게는, 예를 들어, 칼슘 결합 모티프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. 칼슘 결합 모티프는, 당업자에게 주지이며, 상세히 보고되어 있다(예를 들어, Springer et al., (Cell (2000) 102, 275-277); Kawasaki and Kretsinger (Protein Prof. (1995) 2, 305-490); Moncrief et al., (J. Mol. Evol. (1990) 30, 522-562); Chauvaux et al., (Biochem. J. (1990) 265, 261-265); Bairoch and Cox (FEBS Lett. (1990) 269, 454-456); Davis (New Biol. (1990) 2, 410-419); Schaefer et al., (Genomics (1995) 25, 638 to 643); Economou et al., (EMBO J. (1990) 9, 349- 354); Wurzburg et al., (Structure. (2006) 14, 6, 1049-1058)). 트로포닌 C, 칼모듈린, 파르브알부민, 및 미오신경쇄의 EF 핸드; 프로틴 키나제 C의 C2 도메인; 혈액 응고 단백질 제IX 인자의 Gla 도메인; 아시아로 당단백질 수용체 및 만노스 결합 수용체, ASGPR, CD23, 및 DC-SIGN의 C형 렉틴; LDL 수용체의 A 도메인; 아넥신 도메인; 카드헤린 도메인; 트롬보스폰딘 3형 도메인; 및 EGF양 도메인이, 칼슘 결합 모티프로서 호적하게 사용된다.

항원 결합 영역에는, 상기의 금속 킬레이트 작용을 갖는 아미노산 잔기나 칼슘 결합 모티프를 형성하는 아미노산 잔기 등의 칼슘 이온 농도에 따라서 항원 결합 활성을 변화시키는 아미노산 잔기가 포함될 수 있다. 항원 결합 영역 내에서의 그와 같은 아미노산 잔기의 위치는 특별히 한정되지 않고, 칼슘 이온 농도에 따라서 항원 결합 활성이 변화하는 한, 어떠한 위치여도 된다. 또한, 칼슘 이온 농도에 따라서 항원 결합 활성을 변화시키는 한, 그와 같은 아미노산 잔기가 단독으로 포함되어 있어도 되고, 2개 이상 조합되어 포함되어 있어도 된다. 그와 같은 아미노산 잔기로서는, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 아스파라긴산 및 글루타민산이 호적하게 예시된다. 항원 결합 영역이 항체의 가변 영역인 경우, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역에 그들의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 바람직한 태양에 있어서, 그들의 아미노산 잔기가 중쇄 가변 영역의 CDR3에 포함되어 있어도 되고, 보다 바람직하게는 중쇄 가변 영역의 CDR3의 Kabat 넘버링으로 표시되는 95위, 96위, 100a위 및/또는 101위에 포함되어 있어도 된다.

다른 바람직한 태양에 있어서, 그들의 아미노산 잔기가 경쇄 가변 영역의 CDR1에 포함되어 있어도 되고, 보다 바람직하게는 경쇄 가변 영역의 CDR1의 Kabat 넘버링으로 표시되는 30위, 31위 및/또는 32위에 포함되어 있어도 된다. 또 다른 바람직한 태양에 있어서, 그들의 아미노산 잔기가 경쇄 가변 영역의 CDR2에 포함되어 있어도 되고, 보다 바람직하게는 경쇄 가변 영역의 CDR2의 Kabat 넘버링으로 표시되는 50위에 포함되어 있어도 된다. 또 다른 바람직한 태양에 있어서, 그들의 아미노산 잔기가 경쇄 가변 영역의 CDR3에 포함되어 있어도 되고, 보다 바람직하게는 경쇄 가변 영역의 CDR3의 Kabat 넘버링으로 표시되는 92위에 포함되어 있어도 된다.

더욱이, 상기의 태양은 조합해도 되고, 예를 들어 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3으로부터 선택되는 2개 또는 3개의 CDR에 당해 아미노산 잔기가 포함되어 있어도 되고, 보다 바람직하게는, 경쇄 가변 영역의 Kabat 넘버링으로 표시되는 30위, 31위, 32위, 50위 및/또는 92위의 어느 1개 이상에 포함되어 있어도 된다.

상기와 같은 칼슘 이온 농도에 따라서 항원 결합 활성을 변화시키는 아미노산 잔기를 공통의 구조로서 가지면서 서로 서열이 상이한 다수의 항원 결합 영역을 라이브러리로서 제작하고, 그와 같은 라이브러리 중에서 스크리닝을 행하는 것에 의해, 소망의 항원에 대한 결합 활성을 갖고, 게다가 칼슘 이온 농도에 따라서 항원 결합 활성이 변화하는 항원 결합 영역을 효율적으로 취득할 수 있다.

C1s에 대한 항체의 「어피니티」는, 본 개시의 목적에서는, 그 항체의 KD로 표시된다. 항체의 KD는, 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 가리킨다. 그 항원에 대한 항체의 결합의 KD치가 클수록, 당해 특정의 항원에 대한 그 결합 어피니티는 약하다. 따라서, 본 명세서에서 사용되는 표현 「산성 pH에서보다도 중성 pH에 있어서 높은 어피니티」(또는 동등의 표현 「pH 의존적 결합」)는, 산성 pH에서의 항체의 KD가 중성 pH에서의 항체의 KD보다 큼을 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 문맥에 있어서, 산성 pH에서의 항체의 C1s에의 결합의 KD가 중성 pH에서의 항체의 C1s에의 결합의 KD와 비교하여 10배보다 큰 경우, 당해 항체는, 산성 pH보다도 중성 pH에 있어서 높은 어피니티로 C1s에 결합한다고 간주된다. 따라서, 본 발명은, 중성 pH에서의 항체의 C1s에의 결합의 KD보다도 적어도 11, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배, 또는 그 이상 큰 KD로 산성 pH에 있어서 C1s에 결합하는 항체를 포함한다. 다른 태양에 있어서, 중성 pH에서의 해당 항체의 KD치는, 10^-7M, 10^-8M, 10^-9M, 10^-10M, 10^-11M, 10^-12M, 또는 그 미만일 수 있다. 다른 태양에 있어서, 산성 pH에서의 해당 항체의 KD치는, 10^-9M, 10^-8M, 10^-7M, 10^-6M, 또는 그 이상일 수 있다.

특정의 항원에 대한 결합 특성은 또한, 항체의 kd로 표시될 수 있다. 항체의 kd는, 특정의 항원에 대한 항체의 해리 속도 상수를 가리키고, 초의 역수(즉, sec^-1)의 단위로 표시된다. kd치의 증가는, 항체의 그 항원에의 결합이 보다 약함을 의미한다. 따라서, 본 발명은, 중성 pH보다도 산성 pH에 있어서 높은 kd치로 C1s에 결합하는 항체를 포함한다. 본 발명은, 중성 pH에 있어서의 C1s에 대한 항체의 결합의 kd보다도 적어도 11, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배, 또는 그 이상 큰 kd로 산성 pH에 있어서 C1s에 결합하는 항체를 포함한다. 다른 태양에 있어서, 중성 pH에서의 항체의 kd치는, 10^-21/s, 10^-3 1/s, 10^-4 1/s, 10^-5 1/s, 10^-6 1/s, 또는 그 미만일 수 있다. 다른 태양에 있어서, 산성 pH에서의 항체의 kd치는, 10^-3 1/s, 10^-2 1/s, 10^-1 1/s, 또는 그 이상일 수 있다.

특정의 예에 있어서, 「중성 pH에서의 결합과 비교하여 저하된, 산성 pH에서의 결합」은, 중성 pH에서의 항체의 KD치에 대한 산성 pH에서의 항체의 KD치의 비(또는 그의 역)로 표시된다. 예를 들어, 항체가 10 이상의 산성/중성 KD비를 나타내는 경우, 본 발명의 목적에 관해서, 그 항체는 「중성 pH에서의 C1s에의 결합과 비교하여 저하된, 산성 pH에서의 C1s에의 결합」을 나타낸다고 간주할 수 있다. 특정의 예시적인 태양에 있어서, 항체에 있어서의 산성/중성 KD비는, 11, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배, 또는 그 이상일 수 있다. 다른 태양에 있어서, 중성 pH에서의 항체의 KD치는, 10^-7M, 10^-8M, 10^-9M, 10^-10M, 10^-11M, 10^-12M, 또는 그 미만일 수 있다. 다른 태양에 있어서, 산성 pH에서의 항체의 KD치는, 10^-9M, 10^-8M, 10^-7M, 10^-6M, 또는 그 이상일 수 있다.

특정의 예에 있어서, 「중성 pH에서의 결합과 비교하여 저하된, 산성 pH에서의 결합」은, 중성 pH에서의 항체의 kd치에 대한 산성 pH에서의 항체의 kd치의 비(또는 그의 역)로 표시된다. 예를 들어, 항체가 2 이상의 산성/중성 kd비를 나타내는 경우, 목적상, 그 항체는 「중성 pH에서의 C1s에의 결합과 비교하여 저하된, 산성 pH에서의 C1s에의 결합」을 나타낸다고 간주될 수 있다. 특정의 예시적인 태양에 있어서, 항체에 있어서의 산성/중성 kd비는, 11, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000배, 또는 그 이상일 수 있다. 다른 태양에 있어서, 중성 pH에서의 항체의 kd치는, 10^-2 1/s, 10^-3 1/s, 10^-4 1/s, 10^-5 1/s, 10^-6 1/s, 또는 그 미만일 수 있다. 다른 태양에 있어서, 산성 pH에서의 항체의 kd치는, 10^-3 1/s, 10^-2 1/s, 10^-1 1/s, 또는 그 이상일 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 표현 「산성 pH」는, pH 4.0~6.5를 의미한다. 표현 「산성 pH」에는, pH치 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 및 6.5가 포함된다. 특정의 국면에 있어서, 「산성 pH」는 6.0이다.

본 명세서에서 사용되는 표현 「중성 pH」는, pH 6.7~약 10.0을 의미한다. 표현 「중성 pH」에는, pH치 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 및 10.0이 포함된다. 특정의 국면에 있어서, 「중성 pH」는 7.4이다.

본 명세서에서 사용되는 표현 「고칼슘 농도 조건하」 또는 「고칼슘 농도하」는, 100μM~10mM, 보다 바람직하게는 200μM~5mM, 특히 바람직하게는 혈장중(혈중)의 칼슘 이온 농도에 가까운 0.5mM~2.5mM를 의미한다. 표현 「고칼슘 농도 조건하」 또는 「고칼슘 농도에 있어서」는, 100μM, 200μM, 300μM, 400μM, 500μM, 600μM, 700μM, 800μM, 900μM, 0.5mM, 0.7mM, 0.9mM, 1mM, 1.2mM, 1.4mM, 1.6mM, 1.8mM, 2.0mM, 2.2mM, 2.4mM, 2.5mM, 3mM, 4mM, 5mM, 6mM, 7mM, 8mM, 9mM 및 10mM Ca²⁺의 칼슘 농도치를 포함한다. 특정의 국면에 있어서, 「고칼슘 농도 조건하」 또는 「고칼슘 농도하」는 1.2mM Ca²⁺를 나타낸다.

본 명세서에서 사용되는 표현 「저칼슘 농도 조건하」 또는 「저칼슘 농도하」는, 0.1μM~30μM, 보다 바람직하게는 0.5μM~10μM, 특히 바람직하게는 생체내의 조기 엔도솜 내의 칼슘 이온 농도에 가까운 1μM~5μM를 의미한다. 표현 「저칼슘 농도 조건하」 또는 「저칼슘 농도에 있어서」는, 0.1μM, 0.5μM, 1μM, 1.5μM, 2.0μM, 2.5μM, 2.6μM, 2.7μM, 2.8μM, 2.9μM, 3.0μM, 3.1μM, 3.2μM, 3.3μM, 3.4μM, 3.5μM, 4.0μM, 5.0μM, 6.0μM, 7.0μM, 8.0μM, 9.0μM, 10μM, 15μM, 20μM, 25μM 및 30μM Ca²⁺의 칼슘 농도치를 포함한다. 특정의 국면에 있어서, 「저칼슘 농도 조건하」 또는 「저칼슘 농도하」는, 3.0μM Ca²⁺를 나타낸다.

본 명세서에서 표시되는 KD치 및 kd치를, 표면 플라즈몬 공명에 기초하는 바이오센서를 이용하여 결정하여, 항체-항원 상호작용을 특징지을 수 있다(예를 들어, 본 명세서의 실시예 5가 참조되고자 한다.). KD치 및 kd치는, 섭씨 25도(℃) 또는 37℃에서 결정될 수 있다. 이 결정은, 150mM NaCl의 존재하에서 실시될 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 이 결정은, 항체를 고정화하고, 항원을 애널라이트로서 이용하고, 이하의 조건을 사용하는 표면 플라즈몬 공명 기술을 이용하여 실시될 수 있다: 섭씨 37도(℃)에서 20mM ACES 및 150mM NaCl.

일 국면에 있어서, 본 발명은, 개체에 있어서의 혈장으로부터의 C1s의 클리어런스를 증강하는 방법을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 이 방법은, 혈장으로부터의 C1s의 클리어런스를 증강하는 데 유효한 양의 항C1s 항체를 개체에게 투여하는 공정을 포함한다. 본 발명은 또한, 개체에 있어서의 혈장으로부터의 C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스를 증강하는 방법을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 이 방법은, 혈장으로부터의 C1r 및 C1s의 복합체의 클리어런스를 증강하는 데 유효한 양의 항C1s 항체를 개체에게 투여하는 공정을 포함한다. 몇몇 태양에 있어서, 이 방법은, 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강하는 데 유효한 양의 항C1s 항체를 개체에게 투여하는 공정을 포함한다. 몇몇 태양에 있어서, 이 방법은, 혈장으로부터의 C1q의 클리어런스를 증강하지 않고 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강하는 데 유효한 양의 항C1s 항체를 개체에게 투여하는 공정을 포함한다.

다른 국면에 있어서, 본 발명은, 혈장으로부터 C1s를 제거하는 방법으로서, (a) 그 혈장으로부터 C1s를 제거할 필요가 있는 개체를 동정하는 공정; (b) C1s에 결합하는 항체를 제공하는 공정으로서, 해당 항체가, 해당 항체의 항원 결합(C1s 결합) 도메인을 통해서 C1s에 결합하고, 또한 11~10,000인 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)치를 갖고, 여기에서 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)는, KD가 표면 플라즈몬 공명 기술을 이용하여 결정되었을 경우의 pH 6.0에 있어서의 C1s에 대한 KD와 pH 7.4에 있어서의 C1s에 대한 KD의 비라고 정의되고, 해당 항체가, 생체 내의 혈장 중의 C1s에 결합하고, 생체 내의 엔도솜 내에 존재하는 조건하에서는, 결합한 C1s로부터 해리되며, 해당 항체가 인간 IgG 또는 인간화 IgG인, 공정; 및 (c) 해당 항체를 개체에 투여하는 공정을 포함하는 방법을 제공한다. 추가의 국면에 있어서, 그와 같은 표면 플라즈몬 공명 기술은, 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 국면에 있어서, 그와 같은 표면 플라즈몬 공명 기술, 항체를 고정화하고, 항원을 애널라이트로서 사용하고, 또한 조건 「37℃에서 20mM ACES, 및 150mM NaCl」을 이용하여, 사용될 수 있다.

다른 국면에 있어서, 본 발명은, 대상에 있어서 혈장으로부터 C1s를 제거하는 방법으로서, (a) 제 1 항체를 동정하는 공정으로서, 제 1 항체가 제 1 항체의 항원 결합 영역을 통해서 C1s에 결합하는, 공정; (b) 제 2 항체를 동정하는 공정으로서, 제 2 항체가, (1) 제 2 항체의 항원 결합(C1s 결합) 도메인을 통해서 C1s에 결합하고, (2) 제 1 항체의 가변 영역의 적어도 1개의 아미노산이 히스티딘으로 치환되어 있는 것, 및/또는 제 1 항체의 가변 영역에 적어도 1개의 히스티딘이 삽입되어 있는 것을 제외하고, 제 1 항체와 아미노산 서열이 동일하고, (3) 제 1 항체의 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)치보다 높고 또한 11~10,000인 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)치를 갖고, 여기에서 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)는, KD가 표면 플라즈몬 공명 기술을 이용하여 결정되었을 경우의 pH 6.0에 있어서의 C1s에 대한 KD와 pH 7.4에 있어서의 C1s에 대한 KD의 비라고 정의되고, (4) 생체 내의 혈장 중의 C1s에 결합하고, (5) 생체 내의 엔도솜 내에 존재하는 조건하에서는, 결합한 C1s로부터 해리되고, 또한 (6) 인간 IgG 또는 인간화 IgG인, 공정; (c) 혈장중 C1s 레벨을 감소시킬 필요가 있는 대상을 특정하는 공정; 및 (d) 대상의 혈장중 C1s 레벨이 감소하도록 제 2 항체를 대상에게 투여하는 공정을 포함하는 방법을 제공한다. 추가의 국면에 있어서, 그와 같은 표면 플라즈몬 공명 기술은, 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 국면에 있어서, 그와 같은 표면 플라즈몬 공명 기술은, 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 국면에 있어서, 그와 같은 표면 플라즈몬 공명 기술은, 항체를 고정화하고, 항원을 애널라이트로서 사용하고, 또한 이하의 조건 「37℃에서 20mM ACES 및 150mM NaCl」을 이용하여, 사용될 수 있다.

다른 국면에 있어서, 본 발명은, 대상에 있어서 혈장으로부터 C1s를 제거하는 방법으로서, (a) 제 1 항체를 동정하는 공정으로서, 제 1 항체가, (1) 제 1 항체의 항원 결합 영역을 통해서 C1s에 결합하고, (2) 제 1 항체의 적어도 1개의 가변 영역이, 제 2 항체의 대응하는 가변 영역보다도 적어도 1개 많은 히스티딘 잔기를 갖는 것을 제외하고, 제 2 항체의 항원 결합(C1s 결합) 도메인을 통해서 C1s에 결합하는 제 2 항체와 아미노산 서열이 동일하고, (3) 제 2 항체의 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)치보다도 높고 또한 11~10,000인 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)치를 갖고, 여기에서 KD(pH 6.0)/KD(pH 7.4)는, KD가 표면 플라즈몬 공명 기술을 이용하여 결정되었을 경우의 pH 6.0에 있어서의 C1s에 대한 KD와 pH 7.4에 있어서의 C1s에 대한 KD의 비라고 정의되고, (4) 생체 내의 혈장 중의 C1s에 결합하고, (5) 생체 내의 엔도솜 내에 존재하는 조건하에서는, 결합한 C1s로부터 해리되고, 또한 (6) 인간 IgG 또는 인간화 IgG인, 공정; (b) 혈장중 C1s 레벨을 감소시킬 필요가 있는 대상을 특정하는 공정; 및 (c) 대상의 혈장중 C1s 레벨이 감소하도록 제 1 항체를 대상에게 적어도 1회 투여하는 공정을 포함하는 방법을 제공한다. 추가의 국면에 있어서, 그와 같은 표면 플라즈몬 공명 기술은, 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 국면에 있어서, 그와 같은 표면 플라즈몬 공명 기술은, 37℃ 및 150mM NaCl에서 사용될 수 있다. 추가의 국면에 있어서, 그와 같은 표면 플라즈몬 공명 기술은, 항체를 고정화하고, 항원을 애널라이트로서 사용하고, 또한 조건 「37℃에서 20mM ACES 및 150mM NaCl」을 이용하여, 사용될 수 있다. 몇몇 예에 있어서, 항체는 고전적 보체 경로의 성분을 저해하고, 몇몇 예에 있어서, 고전적 보체 경로의 성분은 C1s이다.

(a4) 단리된 항체의 pI

일 태양에 있어서, 단리된 항체의 등전점(pI)은, 정상 영역의 개변에 의해 저하된다. 본 태양에 있어서, pI가 저하된 단리된 항체는, 정상 영역에 있어서, 그 친정상 영역과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 개변(예를 들어 아미노산의 부가, 삽입, 결실 또는 치환)을 포함한다. 추가의 태양에 있어서, 각 아미노산 개변은, 정상 영역의 등전점(pI)을 친정상 영역과 비교하여 저하시킨다. 추가의 태양에 있어서, 당해 아미노산은 당해 영역의 표면에 노출되어 있어도 된다. pI는, 친항체(본 발명의 개변 전의 원래의 항체)와, 당해 원래의 (친)항체의 항체 정상 영역(친정상 영역)에 대해서 1개 또는 복수의 아미노산 변이(예를 들어, 부가, 삽입, 결실 또는 치환)가 도입된 개변 후의 본 발명의 항체 사이에서 비교될 수 있다. 해당 아미노산 개변이, 변이 정상 영역의 등전점(pI)을 친정상 영역의 그것과 비교하여 저하시킨다. 즉, 본 발명의 항체는, 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖고, 해당 아미노산 개변이, 변이 정상 영역의 등전점(pI)을 친정상 영역의 그것과 비교하여 저하시키는, 항체이다. 원래의 (친)항체는, 그것이 C1s에 특이적으로 결합하는 한, 임의의 공지의 항체 또는 새롭게 단리된 항체일 수 있다. 일 국면에 있어서, 개변된 항C1s 항체의 pI는, 그 원래의 (친)항체의 pI보다도, 적어도, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 또는 2.0 낮다. 개변된 항C1s 항체의 pI는 그 원래의 (친)항체의 pI보다도, 바람직하게는, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 또는 1.0 낮고, 보다 바람직하게는, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5 낮고, 더 바람직하게는 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 또는 2.0 낮다. 추가의 태양에 있어서, 단리된 항체는, 정상 영역 및 항원 결합 도메인을 포함한다. 추가의 태양에 있어서, 항원 결합 도메인의 항원 결합 활성은 이온 농도 조건에 의해 변화한다.

추가의 태양에 있어서, 본 발명의 pI가 저하된 정상 영역은, EU 넘버링에 의한 137, 268, 274, 285, 311, 312, 315, 318, 333, 335, 337, 341, 342, 343, 355, 384, 385, 388, 390, 399, 400, 401, 402, 413, 419, 420, 422, 및 431로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 위치에 있어서의 적어도 하나의 아미노산 개변을 포함한다. 바람직하게는, pI가 저하된 변이 정상 영역은, EU 넘버링에 의한 위치 137, 268, 274, 355, 및 419 중 적어도 하나의 위치에 아미노산 개변을 포함한다. 추가의 태양에 있어서, pI가 저하된 정상 영역은, 선택된 각 위치에 있어서 아미노산이 아르기닌, 글루타민산, 세린, 글루타민의 어느 것인가로 치환되어 있다.

특정의 태양에 있어서, pI가 저하된 정상 영역은, 137, 268, 274, 355, 419의 아미노산이 아르기닌, 글루타민산, 세린, 글루타민의 어느 것(어느 번호도 EU 넘버링 시스템에 의한다)으로 치환되어 있다.

일 태양에 있어서, 단리된 항체의 등전점(pI)은, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 개변에 의해서도 저하될 수 있다. 본 태양에 있어서, pI가 저하된 단리된 항체는, 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역에 있어서, 그 친영역과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 개변을 포함한다. 당해 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 개변에 의한 pI의 저하, 및/혹은 정상 영역의 개변에 의한 pI의 저하는, 단리된 항체의 PK의 개선에 기여할 수 있다.

단리된 항체의 일 태양에 있어서, 항체의 pI는 7.8 이하이거나, 7.7 이하이거나, 7.6 이하이거나, 또는 7.5 이하이다. 바람직하게는, pI는 7.7 이하이고, 보다 바람직하게는 7.6 이하이며, 더 바람직하게는 7.5 이하이다. pI가 이들 어느 점 이하인 경우, 항체의 혈중 반감기는 연장된다. 한편, pI의 가능한 최저치는 통상 4.28 이상이다.

일 태양에 있어서, 항체의 pI는, 캐필러리 등전점 전기영동(cIEF)에 의해 측정할 수 있다. 본 태양의 일례로서, cIEF는, 불화 탄소로 코팅된 캐필러리 카트리지를 이용하여, 프로틴 심플 iCE3 홀 캐필러리 이미징 시스템 상에서 실시된다. 양극액 및 음극액은, 각각, 0.1%m/v 메틸 셀룰로스(MC) 중의 0.08M 인산, 및 0.1%m/v MC 중의 0.1M 수산화 나트륨이다. 분석되는 모든 샘플은, 작용 0.2mg/mL 항체, 0.35%m/v MC, 6mM IDA(이미노이아세트산), 10mM 아르기닌, 0.5w/v% pI 마커 5.85 및 0.5w/v% pI 마커 9.99, 및 2vol% pharmalyte 8-10.5 및 2vol% pharmalyte 5-8을 함유한다. 모든 샘플은, 오토샘플러의 컴파트먼트에 들어가기 전에 볼텍스되어, 짧게 원심된다. 샘플은, 측정 개시 전에 오토샘플러 내에서 2시간 인큐베이트된다. 1분간 1.5kV로 계속되는 각 7분간 3.0kV의 조건에서 집속된다. 오토샘플러의 컴파트먼트는, 10℃로 유지된다. 각 샘플에 대해 측정을 2회 반복하고, n=2의 측정치의 평균을 계산하는 것에 의해, 각 샘플의 pI치를 얻었다.

혹은, 일 태양에 있어서, 항체의 pI는, 캐필러리 등전점 전기영동(cIEF)에 의해 측정할 수 있다. 본 태양의 일례로서, cIEF는, 불화 탄소로 코팅된 캐필러리 카트리지를 이용하여, 프로틴 심플 iCE3 홀 캐필러리 이미징 시스템 상에서 실시된다. 양극액 및 음극액은, 각각, 0.1%m/v 메틸 셀룰로스(MC) 중의 0.08M 인산, 및 0.1%m/v MC 중의 0.1M 수산화 나트륨이다. 분석되는 모든 샘플은, 작용 0.35%m/v MC, 4mM IDA(이미노이아세트산), 10mM 아르기닌, pI 마커(3.21 또는 4.22 또는 4.65 또는 5.12 또는 5.85 또는 6.14 또는 6.61 또는 7.05 또는 7.65 또는 8.40 또는 8.79 또는 9.46 또는 9.77 또는 10.1), 및, 이하의 v/v 혼합물 중 1개: 4% pharmalyte 3-10를 함유한다. 모든 샘플은, 오토샘플러의 컴파트먼트에 들어가기 전에 볼텍스되어, 짧게 원심된다. 1분간 1.5kV로 계속되는 각 8분간 3.0kV의 조건에서 집속된다. 오토샘플러의 컴파트먼트는, 10℃로 유지된다. 각 샘플에 대해 측정을 2회 반복하고, n=2의 측정치의 평균을 계산하는 것에 의해, 각 샘플의 pI치를 얻었다.

본 사례의 일 태양에 있어서, pI는, 0.1%m/v 메틸 셀룰로스(MC) 중에 0.08M 인산을 포함하는 용액을 양극액으로서 이용하고, 0.1%m/v MC 중에 0.1M 수산화 나트륨을 포함하는 용액을 음극액으로서 이용하고, 0.5mg/mL 항체, 0.3%m/v MC, 6.0mM 이미노이아세트산(IDA), 10mM 아르기닌, 4M 요소, 및 pI 마커(7.65 및 9.77)를 포함하는 용액을 항체 용해용의 작용 용액으로서 이용하는 캐필러리 등전점 전기영동에 의해 측정된다.

(a5) 항원 결합 영역

일 태양에 있어서, 항체는 항원 결합 영역을 포함한다. 바람직한 태양에 있어서, 항원 결합 영역은, C1s의 CUB1-EGF-CUB2 도메인 내의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 추가적인 바람직한 태양에 있어서, 항원 결합 영역은, C1s의 CUB1-EGF-CUB2 도메인에 특이적으로 결합할 수 있다. 이들 태양에 있어서, C1s는 인간 C1s를 포함하지만, 이것으로 한정되지 않는다. C1s는 바람직하게는 인간 C1s이다.

일 태양에 있어서, 항원 결합 영역은 항체 가변 영역이어도 된다. 항원 결합 영역이, 해리 촉진 기능 및/또는 블로킹 기능 등의 단리된 항체의 특성을 해치지 않고, 또한, 항체의 이하의 결합 활성:

표면 플라즈몬 공명에 의해 항체의 인간 및/또는 필리핀원숭이 C1s에 대한 결합 활성을 측정하는 경우에 있어서,

i) 중성 pH 영역에서의 해리 상수(KD)치는 신뢰성을 가지고 계산할 수 있고, 또한 산성 pH 영역에서의 KD치는, 결합 활성이 없거나 혹은 결합 활성이 매우 낮기 때문에 신뢰성을 가지고 계산할 수 없거나, 또는

ii) 중성 pH 영역 및 산성 pH 영역의 양쪽에서의 KD치가 신뢰성을 가지고 계산할 수 있다고 하는 조건에서, 중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비(산성 KD/중성 KD비)가 10보다 크다

를 해치지 않는 한 항체 가변 영역은 항체 가변 영역의 전부 또는 일부여도 된다.

본 태양에 있어서, 항체 가변 영역은 인간화되어 있다. 항원 결합 영역은, 바람직하게는 인간화 항체 가변 영역이다. 그와 같은 인간화 항체가 의약으로서 사용되는 경우, 비인간화 항체와 비교하여 부작용이 회피될 것이 기대된다.

일 태양에 있어서, 단리된 항C1s 항체의 항원 결합 영역은, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3의 조합을 포함한다:

본 발명의 다른 태양에 있어서, 단리된 항C1s 항체는, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 및 항체 정상 영역을 포함한다. 본 태양에 있어서, 단리된 항C1s 항체는, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다:

(a6) 항체 정상 영역

일 태양에 있어서, 단리된 항체의 항체 정상 영역은, 인간 항체의 정상 영역을 포함하지만 그것에 한정되지 않는다. 인간 항체의 정상 영역은 중쇄 및 경쇄를 포함해도 된다. 인간 항체는 인간 IgG1을 포함하지만 그것에 한정되지 않는다. 인간 항체는, 바람직하게는 인간 IgG1이다.

일 태양에 있어서, 항체 정상 영역은, 적어도 하나의 아미노산이며, 당해 적어도 하나의 아미노산을 포함하지 않는 단리된 항체와 비교하여, 산성 pH 영역에 있어서의 단리된 항체의 FcRn에의 결합능을 증강할 수 있는, 적어도 하나의 아미노산을 포함한다.

본 태양에 있어서, 정상 영역은 이하를 포함한다:

(a) EU 넘버링에 의한 434위의 Ala; 438위의 Glu, Arg, Ser, 혹은 Lys; 및 440위의 Glu, Asp, 혹은 Gln;

(b) EU 넘버링에 의한 434위의 Ala; 438위의 Arg 혹은 Lys; 및 440위의 Glu 혹은 Asp;

(c) EU 넘버링에 의한 428위의 Ile 혹은 Leu; 434위의 Ala; 436위의 Ile, Leu, Val, Thr, 혹은 Phe; 438위의 Glu, Arg, Ser, 혹은 Lys; 및 440위의 Glu, Asp, 혹은 Gln;

(d) EU 넘버링에 의한 428위의 Ile 혹은 Leu; 434위의 Ala; 436위의 Ile, Leu, Val, Thr, 혹은 Phe; 438위의 Arg 혹은 Lys; 및 440위의 Glu 혹은 Asp;

(e) EU 넘버링에 의한 428위의 Leu; 434위의 Ala; 436위의 Val 혹은 Thr; 438위의 Glu, Arg, Ser, 혹은 Lys; 및 440위의 Glu, Asp, 혹은 Gln; 또는

(f) EU 넘버링에 의한 428위의 Leu; 434위의 Ala; 436위의 Val 혹은 Thr; 438위의 Arg 혹은 Lys; 및 440위의 Glu 혹은 Asp.

WO2013/046704에는, 산성 조건하에서의 FcRn에 대한 결합성을 증강할 수 있는 아미노산 치환과 조합한 경우에, 류마토이드 인자에 대한 결합성의 유의한 저하를 가져오는, EU 넘버링에 의한 Q438R/S440E, Q438R/S440D, Q438K/S440E, 및 Q438K/S440D의 이중 아미노산 잔기 치환이 구체적으로 보고되어 있다.

본 태양에 있어서, 정상 영역은 바람직하게는, 이하로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 치환의 조합을 포함한다:

(I) EU 넘버링에 의한, (a) N434A/Q438R/S440E; (b) N434A/Q438R/S440D; (c) N434A/Q438K/S440E; (d) N434A/Q438K/S440D; (e) N434A/Y436T/Q438R/S440E; (f) N434A/Y436T/Q438R/S440D; (g) N434A/Y436T/Q438K/S440E; (h) N434A/Y436T/Q438K/S440D; (i) N434A/Y436V/Q438R/S440E; (j) N434A/Y436V/Q438R/S440D; (k) N434A/Y436V/Q438K/S440E; (l) N434A/Y436V/Q438K/S440D; (m) N434A/R435H/F436T/Q438R/S440E; (n) N434A/R435H/F436T/Q438R/S440D; (o) N434A/R435H/F436T/Q438K/S440E; (p) N434A/R435H/F436T/Q438K/S440D; (q) N434A/R435H/F436V/Q438R/S440E; (r) N434A/R435H/F436V/Q438R/S440D; (s) N434A/R435H/F436V/Q438K/S440E; (t) N434A/R435H/F436V/Q438K/S440D; (u) M428L/N434A/Q438R/S440E; (v) M428L/N434A/Q438R/S440D; (w) M428L/N434A/Q438K/S440E; (x) M428L/N434A/Q438K/S440D; (y) M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; (z) M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440D; (aa) M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440E; (ab) M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440D; (ac) M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E; (ad) M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440D; (ae) M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440E; (af) M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440D; (ag) L235R/G236R/S239K/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; (ah) L235R/G236R/A327G/A330S/P331S/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; 또는

(II) EU 넘버링에 의한, (a) N434A/Q438R/S440E; (b) N434A/Y436T/Q438R/S440E; (c) N434A/Y436V/Q438R/S440E; (d) M428L/N434A/Q438R/S440E; (e) M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; (f) M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E; (g) L235R/G236R/S239K/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E; 및(h) L235R/G236R/A327G/A330S/P331S/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E.

다른 태양에 있어서, 정상 영역은 바람직하게는, 428위의 류신, 434위의 알라닌, 및 436위의 트레오닌(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 의한다)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산을 포함한다. 본 태양에 있어서, 정상 영역은 보다 바람직하게는, 428위의 류신, 434위의 알라닌, 및 436위의 트레오닌(모든 번호는 EU 넘버링 시스템에 의한다)을 포함한다.

Fc 영역 변이체

(스위핑 기술)

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체의 Fc 영역에 1개 또는 복수의 아미노산 개변을 도입하여, 그것에 의해 Fc 영역 변이체를 생성해도 된다. Fc 영역 변이체는, 1개 또는 복수의 아미노산 포지션의 장소에서 아미노산 개변(예를 들어, 치환)을 포함하는, 인간 Fc 영역 서열(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4의 Fc 영역)을 포함해도 된다. 몇몇 태양에 있어서, Fc 영역은 인간 IgG1의 Fc 영역이다.

혈장중 항원 농도의 저하를 촉진하기 위해 및/또는 항체의 약물 동태를 개선하기 위해, IgG의 Fc 영역 내의 FcRn에 대한 결합 부위의 아미노산 잔기가, 그들의 세포 내로의 흡수를 촉진하도록 개변될 수 있다. pH 의존성을 갖는 항체가 이와 같이 개변되는 경우, 그 변이체는, 보다 강하게 FcRn에 결합하여, 항원을 (pH가 산성인) 엔도솜 내로 효율적으로 이송하여 분해할 수 있지만, 그것 자신은 보다 효율적으로 세포 표면에 리사이클될 수 있는, 「스위핑」 항체일 것이다. 그와 같은 개변된 「스위핑」 항체는, 그 개변을 갖지 않는 원래의(친) 항체와 비교하여, 중성 pH에 있어서 세포 표면 상의 FcRn에 강하게 결합하여, 항원의 흡수 및 분해를 향상시킬 수 있다(Semin Immunopathol. 2018; 40(1): 125-140).

몇몇 국면에 있어서, 항체는, 혈장중 항원 농도의 저하를 촉진하고 또한/또는 항체의 약물 동태를 개선하도록 적어도 1개의 아미노산 개변을 Fc 영역 내에 갖는 Fc 영역을 포함한다.

본 발명의 항체 정상 영역으로서는, 특히 Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 것이 바람직하다. 예를 들어, 본 발명의 항체는, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖는다. 여기에서, Fcγ 수용체(본 명세서에서는 Fcγ 리셉터, FcγR 또는 FcgR이라고 기재하는 경우가 있다)란, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4의 Fc 영역에 결합할 수 있는 수용체를 말하고, 실질적으로 Fcγ 리셉터 유전자에 코딩되는 단백질의 패밀리의 어떠한 멤버도 의미한다. 인간에서는, 이 패밀리에는, 아이소폼 FcγRIa, FcγRIb 및 FcγRIc를 포함하는 FcγRI(CD64); 아이소폼 FcγRIIa(알로타입 H131(H형) 및 R131(R형)을 포함한다), FcγRIIb(FcγRIIb-1 및 FcγRIIb-2를 포함한다) 및 FcγRIIc를 포함하는 FcγRII(CD32); 및 아이소폼 FcγRIIIa(알로타입 V158 및 F158을 포함한다) 및 FcγRIIIb(알로타입 FcγRIIIb-NA1 및 FcγRIIIb-NA2를 포함한다)를 포함하는 FcγRIII(CD16), 및 어떠한 미발견의 인간 FcγR류 또는 FcγR 아이소폼 또는 알로타입도 포함되지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. FcγR은, 인간, 마우스, 래트, 토끼 및 원숭이 유래의 것이 포함되지만, 이들로 한정되지 않고, 어떠한 생물 유래여도 된다. 마우스 FcγR류에는, FcγRI(CD64), FcγRII(CD32), FcγRIII(CD16) 및 FcγRIII-2(CD16-2), 및 어떠한 미발견의 마우스 FcγR류 또는 FcγR 아이소폼 또는 알로타입도 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다. 이와 같은 Fcγ 수용체의 호적한 예로서는 인간 FcγRI(CD64), FcγRIIa(CD32), FcγRIIb(CD32), FcγRIIIa(CD16) 및/또는 FcγRIIIb(CD16)를 들 수 있다.

FcγR에는, ITAM(Immunoreceptor tyrosine-based activation motif)를 가지는 활성형 리셉터와 ITIM(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif)를 가지는 억제형 리셉터가 존재한다. FcγR은 FcγRI, FcγRIIa R, FcγRIIa H, FcγRIIIa, FcγRIIIb의 활성형 FcγR과, FcγRIIb의 억제형 FcγR로 분류된다.

FcγRI의 폴리뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은, 각각 NM_000566.3 및 NP_000557.1에, FcγRIIa의 폴리뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은, 각각 BC020823.1 및 AAH20823.1에, FcγRIIb의 폴리뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은, 각각 BC146678.1 및 AAI46679.1에, FcγRIIIa의 폴리뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은, 각각 BC033678.1 및 AAH33678.1에, 및 FcγRIIIb의 폴리뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은, 각각 BC128562.1 및 AAI28563.1에 기재되어 있다(RefSeq 등록 번호). 한편, FcγRIIa에는, FcγRIIa의 131번째의 아미노산이 히스티딘(H형) 혹은 아르기닌(R형)으로 치환된 2종류의 유전자다형이 존재한다(J. Exp. Med, 172, 19-25, 1990). 또한, FcγRIIb에는, FcγRIIb의 232번째의 아미노산이 아이소류신(I형) 혹은 트레오닌(T형)으로 치환된 2 종류의 유전자다형이 존재한다(Arthritis. Rheum. 46: 1242-1254 (2002)). 또한, FcγRIIIa에는, FcγRIIIa의 158번째의 아미노산이 발린(V형) 혹은 페닐알라닌(F형)으로 치환된 2종류의 유전자다형이 존재한다(J. Clin. Invest. 100(5): 1059-1070 (1997)). 또한, FcγRIIIb에는, NA1형, NA2형의 2종류의 유전자다형이 존재한다(J. Clin. Invest. 85: 1287-1295 (1990)).

Fcγ 수용체에 대한 결합 활성이 저하되어 있는지 여부는, FACS, ELISA 포맷, ALPHA 스크린(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)이나 표면 플라즈몬 공명(SPR) 현상을 이용한 BIACORE법 등, 주지된 방법에 의해 확인할 수 있다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2006) 103 (11), 4005-4010).

예를 들어, pH 7.4에 있어서의 각 샘플의 FcγR에 대한 결합 특성을, 25℃에서 BIACORE(등록상표) T200 기기(Cytiva)를 이용하여 결정한다. 우선 프로틴 L(BioVision)은, Amine Coupling Kit, type2(Cytiva)를 이용하여 CM4 센서 칩의 모든 플로 셀 상에 고정화된다. 150mM NaCl, 0.05% Tween(등록상표) 20을 포함하는 50mM 인산 완충액(pH 7.4)을 러닝 버퍼로서 사용하여, 결합 리스폰스가 500RU 혹은 2000RU가 되도록 조제된 항체가 센서 표면에 포착된다. 여기에, 러닝 버퍼로 희석한 FcγR(예를 들어 인간 또는 원숭이의 FcγR)을 주입하고, 항체에의 결합량이 측정된다. 사이클마다, 10mM 글리신 염산 용액, pH 1.5를 이용하여 센서 표면이 재생된다. 얻어진 측정 결과로부터, BIACORE(등록상표) T200 evaluation software, version2.0(Cytiva)을 이용하여, FcγR의 결합량을, 포착한 각 항체의 결합량으로 나눈 값(Binding/capture)을 산출한다. 즉, FcγR의 결합량은, 포착한 항체의 양에 의존하기 때문에, 각 항체의 포착량으로 FcγR의 결합량을 나눈 보정치를 산출하여, 항체 사이에서 비교한다.

본 발명의 항체에 있어서, FcγR의 결합량을, 포착한 각 항체의 결합량으로 나눈 값(Binding/capture)은, 1.0, 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0.09, 0.08, 0.07, 0.06, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 또는 0.01 이하를 나타내고, 바람직하게는 0.05, 0.04, 0.03, 0.02 이하, 특히 바람직하게는 0.01 이하, 또는 결합 활성이 없거나 혹은 결합 활성이 매우 낮기 때문에 신뢰성을 가지고 계산할 수가 없다, 이다. 또한, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖는 본 발명의 항체의, 당해 아미노산 개변을 포함하지 않는 (친)정상 영역을 갖는 항체와 비교한, Fcγ 수용체에 대한 상대적 결합 활성은, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖는 본 발명의 항체에서 얻어진 Binding/capture치를, 당해 아미노산 개변을 포함하지 않는 항체(예를 들어 Herceptin)에서 얻어진 Binding/capture치로 나눈 상대치(FcγRs에의 상대 결합 비율)로 나타낼 수 있고, 당해 상대치는, 0.06 이하, 0.05 이하, 0.04 이하, 0.03 이하, 0.02 이하, 0.01 이하, 또는 0.00 이하이며, 바람직하게는 0.00 이하, 또는 결합 활성이 없거나 혹은 결합 활성이 매우 낮기 때문에 신뢰성을 가지고 계산할 수가 없다, 이다.

ALPHA 스크린은, 도너와 억셉터의 2개의 비즈를 사용하는 ALPHA 테크놀로지에 의해 하기의 원리에 기초하여 실시된다. 도너 비즈에 결합한 분자가, 억셉터 비즈에 결합한 분자와 생물학적으로 상호작용하여, 2개의 비즈가 근접한 상태일 때에만, 발광 시그널이 검출된다. 레이저에 의해 여기된 도너 비즈 내의 포토센서타이저는, 주변의 산소를 여기 상태의 일중항 산소로 변환한다. 일중항 산소는 도너 비즈 주변에 확산하여, 근접하고 있는 억셉터 비즈에 도달하면 비즈 내의 화학 발광 반응을 야기하여, 최종적으로 광이 방출된다. 도너 비즈에 결합한 분자와 억셉터 비즈에 결합한 분자가 상호작용하지 않을 때는, 도너 비즈의 산생하는 일중항 산소가 억셉터 비즈에 도달하지 않기 때문에, 화학 발광 반응은 일어나지 않는다.

예를 들어, 항체가 FcRn 결합 도메인으로서 항체의 Fc 영역을 포함하는 경우, 야생형 Fc 영역을 갖는 항체와, Fcγ 수용체에 대한 결합을 변화시키기 위한 아미노산 변이가 가해진 변이 Fc 영역을 갖는 항체를 준비하고, 도너 비즈에 비오틴 표지된 항체를 결합시키고, 억셉터 비즈에는 글루타티온 S 트랜스페라제(GST)로 태그화된 Fcγ 수용체를 결합시킨다. 변이 Fc 영역을 갖는 항체의 존재하에서는, 야생형 Fc 영역을 갖는 항체와 Fcγ 수용체는 상호작용하여 520-620nm의 시그널을 발생시킨다. 변이 Fc 영역을 갖는 항체를 태그화하지 않는 경우, 야생형 Fc 영역을 갖는 항체와 Fcγ 수용체 사이의 상호작용과 경합한다. 경합의 결과 나타나는 형광의 감소를 정량하는 것에 의해 상대적인 결합 친화성이 결정될 수 있다. 항체를 Sulfo-NHS-비오틴 등을 이용하여 비오틴화하는 것은 공지이다. Fcγ 수용체를 GST로 태그화하는 방법으로서는, Fcγ 수용체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 GST를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 인프레임으로 융합한 융합 유전자를 발현 가능한 벡터를 보지한 세포 등에 있어서 발현하여, 글루타티온 컬럼을 이용하여 정제하는 방법 등이 적절히 채용될 수 있다. 얻어진 시그널은 예를 들어 GRAPHPAD PRISM(GraphPad사, San Diego) 등의 소프트웨어를 이용하여 비선형 회귀 해석을 이용하는 일부위 경합(one-site competition) 모델에 적합시키는 것에 의해 호적하게 해석된다.

상호작용을 관찰하는 물질의 한쪽(리간드)을 센서 칩의 금 박막 상에 고정하고, 센서 칩의 이측(裏側)으로부터 금 박막과 유리의 경계면에서 전반사하도록 광을 쬐면, 반사광의 일부에 반사 강도가 저하된 부분(SPR 시그널)이 형성된다. 상호작용을 관찰하는 물질의 다른 쪽(애널라이트)을 센서 칩의 표면에 흘려 리간드와 애널라이트가 결합하면, 고정화되어 있는 리간드 분자의 질량이 증가하여, 센서 칩 표면의 용매의 굴절률이 변화한다. 이 굴절률의 변화에 의해, SPR 시그널의 위치가 시프트한다(반대로 결합이 해리되면 시그널의 위치는 되돌아온다). Biacore 시스템은 상기의 시프트하는 양, 즉 센서 칩 표면에서의 질량 변화를 세로축에 취하고, 질량의 시간 변화를 측정 데이터로서 표시한다(센서그램). 센서그램의 커브로부터 키네틱스: 결합 속도 상수(ka)와 해리 속도 상수(kd)가, 당해 상수의 비로부터 어피니티(KD)가 구해진다. BIACORE법에서는 저해 측정법도 호적하게 이용된다. 저해 측정법의 예는 Proc.Natl.Acad.Sci.USA (2006) 103 (11), 4005-4010에 있어서 기재되어 있다.

본 명세서에 있어서, 「Fcγ 수용체에 대한 결합 활성이 저하되어 있는」, 또는 「Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는」이란, 예를 들어, 상기의 해석 방법에 기초하여, 대조로 하는 항체 정상 영역을 갖는 항체(예를 들어 친항체, 즉 본 발명의 개변 전의 원래의 항체)의 Fcγ 수용체에 대한 결합 활성과, 당해 원래의 (친)항체의 항체 정상 영역에 대해서 1개 또는 복수의 아미노산 변이(예를 들어, 부가, 삽입, 결실 또는 치환)가 도입된 개변 후의 본 발명의 항체의 Fcγ 수용체에 대한 결합 활성 사이에서 비교되어, 친항체의 결합 활성과 비교하여, 개변 후의 본 발명의 항체의 결합 활성이, 50% 이하, 바람직하게는 45% 이하, 40% 이하, 35% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하, 9% 이하, 8% 이하, 7% 이하, 6% 이하, 특히 바람직하게는 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하, 1% 이하, 또는 0%의 결합 활성을 나타내는 것을 말한다.

대조로 하는 항체(친항체)로서는, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 모노클로날 항체의 Fc 영역을 포함하는 도메인을 가지는 개변 전의 항체가 적절히 사용될 수 있다. 또한, 어느 특정의 아이소타입의 항체의 Fc 영역의 변이체를 갖는 항체를 피험 물질로서 사용하는 경우에는, 당해 특정의 아이소타입의 항체의 Fc 영역을 갖는 항체를 대조로서 이용하는 것에 의해, 당해 변이체가 갖는 변이에 의한 Fcγ 수용체에의 결합 활성에 대한 효과가 검증된다. 상기와 같이 하여, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성이 저하되어 있음이 검증된 Fc 영역의 변이체를 갖는 항체가 적절히 제작된다.

이와 같은 변이체의 예로서는, EU 넘버링에 따라 특정되는 아미노산인 231 A-238S의 결실(WO 2009/011941), C226S, C229S, P238S, (C220S)(J.Rheumatol (2007) 34, 11), C226S, C229S(Hum.Antibod.Hybridomas (1990) 1(1), 47-54), C226S, C229S, E233P, L234V, L235A(Blood (2007) 109, 1185-1192) 등의 변이체가 공지이다.

즉, 특정의 아이소타입의 항체의 Fc 영역을 구성하는 아미노산 중, EU 넘버링에 따라 특정되는 하기의 몇몇 아미노산: 220위, 226위, 229위, 231위, 232위, 233위, 234위, 235위, 236위, 237위, 238위, 239위, 240위, 264위, 265위, 266위, 267위, 269위, 270위, 295위, 296위, 297위, 298위, 299위, 300위, 325위, 327위, 328위, 329위, 330위, 331위, 332위가 치환되어 있는 Fc 영역을 갖는 항체를 호적하게 들 수 있다. 특히 바람직하게는 235위, 236위를 들 수 있다. Fc 영역의 기원인 항체의 아이소타입로서는 특별히 한정되지 않고, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 모노클로날 항체를 기원으로 하는 Fc 영역이 적절히 이용될 수 있지만, 천연형 인간 IgG1 항체를 기원으로 하는 Fc 영역이 호적하게 이용된다.

예를 들어, IgG1 항체의 Fc 영역을 구성하는 아미노산 중, EU 넘버링에 따라 특정되는 하기의 몇몇 치환(숫자가 EU 넘버링에 따라 특정되는 아미노산 잔기의 위치, 숫자 앞에 위치하는 1문자의 아미노산 기호가 치환 전의 아미노산 잔기, 숫자 뒤에 위치하는 1문자의 아미노산 기호가 치환 후의 아미노산 잔기를 각각 나타낸다):

(a) L234F, L235E, P331S,

(b) C226S, C229S, P238S,

(c) C226S, C229S,

(d) C226S, C229S, E233P, L234V, L235A

가 실시되어 있는 Fc 영역, 또는, 231위에서 238위의 아미노산 서열이 결실된 Fc 영역을 갖는 항체도 적절히 사용될 수 있다.

또한, IgG2 항체의 Fc 영역을 구성하는 아미노산 중, EU 넘버링에 따라 특정되는 하기의 몇몇 치환(숫자가 EU 넘버링에 따라 특정되는 아미노산 잔기의 위치, 숫자 앞에 위치하는 1문자의 아미노산 기호가 치환 전의 아미노산 잔기, 숫자 뒤에 위치하는 1문자의 아미노산 기호가 치환 후의 아미노산 잔기를 각각 나타낸다):

(e) H268Q, V309L, A330S, P331S

(f) V234A

(g) G237A

(h) V234A, G237A

(i) A235E, G237A

(j) V234A, A235E, G237A

가 실시되어 있는 Fc 영역을 갖는 항체도 적절히 사용될 수 있다.

또한, IgG3 항체의 Fc 영역을 구성하는 아미노산 중, EU 넘버링에 따라 특정되는 하기의 몇몇 치환(숫자가 EU 넘버링에 따라 특정되는 아미노산 잔기의 위치, 숫자 앞에 위치하는 1문자의 아미노산 기호가 치환 전의 아미노산 잔기, 숫자 뒤에 위치하는 1문자의 아미노산 기호가 치환 후의 아미노산 잔기를 각각 나타낸다):

(k) F241A

(l) D265A

(m) V264A

또한, IgG4 항체의 Fc 영역을 구성하는 아미노산 중, EU 넘버링에 따라 특정되는 하기의 몇몇 치환(숫자가 EU 넘버링에 따라 특정되는 아미노산 잔기의 위치, 숫자 앞에 위치하는 1문자의 아미노산 기호가 치환 전의 아미노산 잔기, 숫자 뒤에 위치하는 1문자의 아미노산 기호가 치환 후의 아미노산 잔기를 각각 나타낸다):

(n) L235A, G237A, E318A

(o) L235E

(p) F234A, L235A

그 외의 바람직한 예로서, 천연형 인간 IgG1 항체의 Fc 영역을 구성하는 아미노산 중, EU 넘버링에 따라 특정되는 하기의 몇몇 아미노산: 233위, 234위, 235위, 236위, 237위, 327위, 330위, 331위가, 대응하는 IgG2 또는 IgG4에 있어서 그 EU 넘버링이 대응하는 아미노산으로 치환되어 있는 Fc 영역을 갖는 항체를 들 수 있다.

그 외의 바람직한 예로서, 천연형 인간 IgG1 항체의 Fc 영역을 구성하는 아미노산 중, EU 넘버링에 따라 특정되는 하기의 어느 1개 또는 그 이상의 아미노산: 235위, 236위가 다른 아미노산에 의해 치환되어 있는 Fc 영역을 갖는 항체를 호적하게 들 수 있다. 치환 후에 존재하는 아미노산의 종류는 특별히 한정되지 않지만, 235위, 236위의 어느 1개 또는 2개의 아미노산이 아르기닌으로 치환되어 있는 Fc 영역을 갖는 항체가 특히 바람직하다.

특정의 태양에 있어서, 모두는 아니지만 몇몇의 이펙터 기능을 구비하는 항체 변이체도, 본 발명의 고려 내이며, 당해 이펙터 기능은, 항체를, 그 in vivo에서의 반감기가 중요하지만, 특정의 이펙터 기능(보체 및 ADCC등)은 불요 또는 유해한 경우의 적용에 바람직한 후보로 하는 것이다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 저하/결핍을 확인하기 위해서, in vitro 및/또는 in vivo의 세포 상해 측정을 행할 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 측정은, 항체가 FcγR 결합성을 결여하는(따라서 ADCC 활성을 결여할 개연성이 높은) 한편으로 FcRn 결합능을 유지함을 확인하기 위해서 행해질 수 있다. ADCC를 매개하는 프라이머리 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하지만, 한편 단구는 FcγRI, FcγRII, FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR의 발현은, Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)의 제464페이지의 Table 3에 정리되더 있다. 목적하는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 in vitro 측정법(어세이)의 비한정적인 예는, 미국 특허 제5,500,362호(예를 들어, Hellstrom I. et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986) 참조) 및 Hellstrom I. et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 미국 특허 제5,821,337호(Bruggemann M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987) 참조)에 기재되어 있다. 혹은, 비방사성의 측정법을 이용해도 된다(예를 들어, 플로 사이토메트리용의 ACT1(등록상표) 비방사성 세포 상해성 어세이(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및, CytoTox 96(등록상표) non-radioactive cytotoxicity assays 법 (Promega, Madison, WI) 참조). 이와 같은 측정법에 유용한 이펙터 세포는, 말초혈 단핵세포(peripheral blood mononuclear cell: PBMC) 및 내추럴 킬러(natural killer: NK) 세포를 포함한다. 혹은 또는 더하여, 목적하는 분자의 ADCC 활성은, 예를 들어, Clynes et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)에 기재되는 바와 같은 동물 모델에 있어서, in vivo로 평가되어도 된다. 또한, 항체가 C1q에 결합할 수 없는 것, 따라서 CDC 활성을 결여하는 것을 확인하기 위해서, C1q 결합 측정을 행해도 된다. 예를 들어, WO2006/029879 및 WO2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조할 것. 또한, 보체 활성화를 평가하기 위해서, CDC 측정을 행해도 된다(예를 들어, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg M.S. and M.J. Glennie et al., Blood 103:2738-2743 (2004) 참조). 더욱이, FcRn 결합성 및 in vivo에서의 클리어런스/반감기의 결정도, 당해 기술 분야에 있어서 알려진 방법을 이용하여 행할 수 있다(예를 들어 Petkova S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006) 참조).

일 태양에 있어서, 본원 항체는, 항체 정상 영역이, 서열 번호 45로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 H쇄 정상 영역 및 서열 번호 23으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 L쇄 정상 영역을 포함하는, 항체이다.

일 태양에 있어서, 본원 항체는, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄(H쇄) 및 경쇄(L쇄)를 포함하는, 항체이다:

(a7) 다른 태양

(항체 변이체)

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체의 아미노산 서열 변이체도, 고려 내이다. 예를 들어, 항체의 결합 어피니티 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이, 바람직한 경우도 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는, 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 수식을 도입하는 것, 또는, 펩티드 합성에 의해, 조제되어도 된다. 그와 같은 수식은, 예를 들어, 항체의 아미노산 서열로부터의 결실, 및/또는 항체의 아미노산 서열 중에의 삽입, 및/또는 항체의 아미노산 서열 중의 잔기의 치환을 포함한다. 최종 구축물이 소망의 특징(예를 들어, 항원 결합성)을 구비하는 것을 전제로, 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합이, 최종 구축물에 이르기 위해서 행해질 수 있다.

a7-1) 치환, 삽입, 및 결실 변이체

특정의 태양에 있어서, 1개 또는 복수의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환적 변이 도입의 목적 부위는, HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환을, 표 A의 「바람직한 치환」의 표제하에 나타낸다. 보다 실질적인 변경을, 표 A의 「예시적인 치환」의 표제하에 제공함과 함께, 아미노산 측쇄의 클래스에 언급하면서 아래에서 상술한다. 아미노산 치환은 목적하는 항체에 도입되어도 되고, 산물은, 예를 들어, 유지/개선된 항원 결합성, 저하된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC 등의, 소망의 활성에 대해 스크리닝되어도 된다.

(표 A)

아미노산은, 공통의 측쇄 특성에 의해 군으로 나눌 수 있다:

(1) 소수성: 노르류신, 메티오닌(Met), 알라닌(Ala), 발린(Val), 류신(Leu), 아이소류신(Ile);

(2) 중성의 친수성: 시스테인(Cys), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 아스파라긴(Asn), 글루타민(Gln);

(3) 산성: 아스파라긴산(Asp), 글루타민산(Glu);

(4) 염기성: 히스티딘(His), 리신(Lys), 아르기닌(Arg);

(5) 쇄 배향에 영향을 주는 잔기: 글리신(Gly), 프롤린(Pro);

(6) 방향족성: 트립토판(Trp), 티로신(Tyr), 페닐알라닌(Phe).

비보존적 치환은, 이들의 클래스의 하나의 멤버를, 다른 클래스의 것으로 교환하는 것을 말한다.

치환 변이체의 하나의 타입은, 친항체(예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 또는 복수의 초가변 영역 잔기의 치환을 포함한다. 통상, 그 결과로서 생기고 추가적인 시험을 위해서 선택된 변이체는, 친항체와 비교하여 특정의 생물학적 특성에 있어서의 수식(예를 들어, 개선)(예를 들어, 증가된 어피니티, 저하된 면역원성)을 갖고, 및/또는 친항체의 특정의 생물학적 특성을 실질적으로 유지하고 있을 것이다. 예시적인 치환 변이체는, 어피니티 성숙 항체이며, 이것은, 예를 들어 파지 디스플레이 베이스의 어피니티 성숙 기술(예를 들어 본 명세서에 기재되는 것)을 이용하여 적절히 제작될 수 있다. 간결히 설명하면, 1개 또는 복수의 HVR 잔기를 변이시키고, 그리고 변이 항체를 파지 상에 제시시켜, 특정의 생물 활성(예를 들어, 결합 어피니티)에 관해서 스크리닝을 행한다.

개변(예를 들어, 치환)은, 예를 들어 항체의 어피니티를 개선하기 위해서, HVR에 있어서 행해질 수 있다. 그와 같은 개변은, HVR의 「핫스폿」, 즉, 체세포 성숙 프로세스 사이에 고빈도로 변이가 일어나는 코돈에 의해 코딩되는 잔기(예를 들어, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)을 참조할 것) 및/또는 항원에 접촉하는 잔기에 있어서 행해질 수 있고, 얻어진 변이 VH 또는 VL이 결합 어피니티에 관해서 시험될 수 있다. 2차 라이브러리로부터의 구축 및 재선택에 의한 어피니티 성숙이, 예를 들어, Hoogenboom et al., in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))에 기재되어 있다. 어피니티 성숙의 몇몇 태양에 있어서, 다양성은, 임의의 다양한 방법(예를 들어, 에러-프론 PCR, 체인 셔플링 또는 올리고뉴클레오티드 지향 변이 도입)에 의해 성숙을 위해서 선택된 가변 유전자에 도입된다. 그 다음에, 2차 라이브러리가 제작된다. 그 다음에, 이 라이브러리는, 소망의 어피니티를 갖는 임의의 항체 변이체를 동정하기 위해서 스크리닝된다. 다양성을 도입하는 다른 방법은, 몇몇 HVR 잔기(예를 들어, 한 번에 4~6잔기)를 무작위화하는 HVR 지향 어프로치를 포함한다. 항원 결합에 관여하는 HVR 잔기는, 예를 들어 알라닌 스캐닝 변이 도입 또는 모델링을 이용하여, 구체적으로 특정될 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 자주 표적화된다.

특정의 태양에 있어서, 치환, 삽입, 또는 결실은, 그와 같은 개변이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 저하시키지 않는 한, 1개 또는 복수의 HVR 내에서 행해질 수 있다. 예를 들어, 결합 어피니티를 실질적으로 저하시키지 않는 보존적 개변(예를 들어, 본 명세서에서 제공되는 바와 같은 보존적 치환)이, HVR에 있어서 행해질 수 있다. 그와 같은 개변은, 예를 들어, HVR의 항원 접촉 잔기의 외측일 수 있다. 상기의 변이 VH 및 VL 서열의 특정의 태양에 있어서, 각 HVR은 개변되어 있지 않거나, 불과 1개, 2개, 혹은 3개의 아미노산 치환을 포함한다.

변이 도입을 위해서 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역을 동정하는 데 유용한 방법은, Cunningham and Wells (1989), Science 244:1081-1085에 의해 기재되는, 「알라닌 스캐닝 변이 도입」이라고 불리는 것이다. 이 방법에 있어서, 1잔기 또는 일군의 표적 잔기(예를 들어, 하전 잔기, 예를 들어 아르기닌, 아스파라긴산, 히스티딘, 리신, 및 글루타민산)가 동정되어, 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예를 들어, 알라닌 혹은 폴리알라닌)으로 치환되어, 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지 여부가 결정된다. 이 초기 치환에 대해서 기능적 감수성을 나타낸 아미노산 위치에, 추가적인 치환이 도입될 수 있다. 혹은 또는 더하여, 항체와 항원 사이의 접촉점을 동정하기 위해서, 항원 항체 복합체의 결정 구조를 해석해도 된다. 그와 같은 접촉 잔기 및 근린의 잔기를, 치환 후보로서 표적화해도 되고, 또는 치환 후보로부터 제외해도 된다. 변이체는, 그들이 소망의 특성을 포함하는지 여부를 결정하기 위해서 스크리닝될 수 있다.

아미노산 서열의 삽입은, 서열 내부에의 단일 또는 복수의 아미노산 잔기의 삽입과 마찬가지로, 아미노 말단 및/또는 카복실 말단에 있어서의 1잔기 내지 100잔기 이상을 포함하는 폴리펩티드의 길이의 범위에서의 융합도 포함한다. 말단의 삽입의 예는, N말단에 메티오닐 잔기를 수반하는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는, 항체의 N- 또는 C-말단에, 효소(예를 들어, ADEPT를 위한) 또는 항체의 혈장중 반감기를 증가시키는 폴리펩티드를 융합시킨 것을 포함한다.

a7-2) 글리코실화 변이체

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는, 항체가 글리코실화 되는 정도를 증가시키도록 또는 감소시키도록 개변되어 있다. 항체에의 글리코실화 부위의 추가 또는 삭제는, 1개 또는 복수의 글리코실화 부위를 만들어 내도록 또는 제거하도록 아미노산 서열을 개변하는 것에 의해, 간편히 달성 가능하다.

항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 거기에 부가되는 탄수화물이 개변되어도 된다. 포유동물 세포에 의해 산생되는 천연형 항체는, 전형적으로는, 분기한 2분기의 올리고당을 포함하고, 당해 올리고당은 통상 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-링키지에 의해 부가되어 있다. 예를 들어, Wright et al., TIBTECH 15:26-32 (1997) 참조. 올리고당은, 예를 들어, 만노스, N-아세틸글루코사민(GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산 등의 여러 가지 탄수화물, 또한, 2분기의 올리고당 구조의 「줄기」 중의 GlcNAc에 부가된 푸코스를 포함한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 발명의 항체 중의 올리고당의 수식은, 특정의 개선된 특성을 수반하는 항체 변이체를 만들어 내기 위해서 행해져도 된다.

일 태양에 있어서, Fc 영역에(직접적 또는 간접적으로) 부가된 푸코스를 결여하는 탄수화물 구조체를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 그와 같은 항체에 있어서의 푸코스의 양은, 1%~80%, 1%~65%, 5%~65% 또는 20%~40%일 수 있다. 푸코스의 양은, 예를 들어 WO2008/077546에 기재되는 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분석에 의해 측정되는, Asn297에 부가된 모든 당 구조체(예를 들어, 복합, 하이브리드, 및 고만노스 구조체)의 합에 대한, Asn297에 있어서의 당쇄 내의 푸코스의 평균량을 계산하는 것에 의해 결정된다. Asn297은, Fc 영역의 297위의 근처에 위치하는 아스파라긴 잔기를 나타낸다(Fc 영역 잔기의 EU 넘버링). 그러나, 복수의 항체 사이의 근소한 서열의 다양성에 기인하여, Asn297은, 297위의 ±3아미노산 상류 또는 하류, 즉 294위~300위의 사이에 위치하는 경우도 있을 수 있다. 그와 같은 푸코실화 변이체는, 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허출원공개 제2003/0157108호(Presta, L.); 제2004/0093621호(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)를 참조할 것. 「탈푸코실화」 또는 「푸코스 결손」 항체 변이체에 관한 간행물의 예는, US2003/0157108; WO2000/61739; WO2001/29246; US2003/0115614; US2002/0164328; US2004/0093621; US2004/0132140; US2004/0110704; US2004/0110282; US2004/0109865; WO2003/085119; WO2003/084570; WO2005/035586; WO2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al., J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)를 포함한다. 탈푸코실화 항체를 산생할 수 있는 세포주의 예는, 단백질의 푸코실화를 결여하는 Lec13 CHO 세포(Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); US2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11) 및 녹아웃 세포주, 예를 들어 알파-1,6-푸코실트랜스페라제 유전자 FUT8 녹아웃 CHO 세포(예를 들어, Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda Y. et al., Biotechnol. Bioeng. 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107을 참조)를 포함한다.

예를 들어 항체의 Fc 영역에 부가된 2분지형 올리고당이 GlcNAc에 의해 2분되어 있는, 2분된 올리고당을 갖는 항체 변이체가 추가로 제공된다. 그와 같은 항체 변이체는, 감소한 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체의 예는, 예를 들어, WO2003/011878(Jean-Mairet et al.); 미국 특허 제6,602,684호(Umana et al.); 및 US2005/0123546(Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부가된 올리고당 중에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체도 제공된다. 그와 같은 항체 변이체는, 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체는, 예를 들어, WO1997/30087(Patel et al.); WO1998/58964(Raju, S.); 및 WO1999/22764(Raju, S.)에 기재되어 있다.

a7-3) 시스테인 개변 항체 변이체

특정의 태양에 있어서, 항체의 하나 또는 복수의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된, 시스테인 개변 항체(예를 들어, 「thioMAb」)를 만들어 내는 것이 바람직할 것이다. 특정의 태양에 있어서, 치환을 받는 잔기는, 항체의, 액세스 가능한 부위에 생긴다. 그들 잔기를 시스테인으로 치환하는 것에 의해, 반응성의 싸이올기가 항체의 액세스 가능한 부위에 배치되고, 당해 반응성의 싸이올기는, 당해 항체를 다른 부분(약제 부분 또는 링커-약제 부분 등)에 컨주게이트하여 본 명세서에서 추가로 상술하는 바와 같이 이뮤노컨주게이트를 만들어 내는 데 사용되어도 된다. 특정의 태양에 있어서, 이하의 잔기의 임의의 하나 또는 복수가, 시스테인으로 치환되어도 된다: 경쇄의 V205(Kabat 넘버링); 중쇄의 A118(EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400(EU 넘버링). 시스테인 개변 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제7,521,541호에 기재되는 바와 같이 하여 생성되어도 된다.

a7-4) 항체 유도체

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는, 당해 기술 분야에 있어서 알려져 있고 또한 용이하게 입수 가능한 추가의 비단백질 부분을 포함하도록, 추가로 수식되어도 된다. 항체의 유도체화에 호적한 부분은, 이것으로 한정되는 것은 아니지만, 수용성 폴리머를 포함한다. 수용성 폴리머의 비한정적인 예는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 폴리에틸렌 글라이콜(PEG), 에틸렌 글라이콜/프로필렌 글라이콜의 코폴리머, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리바이닐 알코올, 폴리바이닐피롤리돈, 폴리-1,3-다이옥솔레인, 폴리-1,3,6-트라이옥세인, 에틸렌/무수 말레산 코폴리머, 폴리아미노산(호모폴리머 또는 랜덤 코폴리머의 어느 것도), 및, 덱스트란 또는 폴리(n-바이닐피롤리돈) 폴리에틸렌 글라이콜, 폴리프로필렌 글라이콜 호모폴리머, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 코폴리머, 폴리옥시에틸화 폴리올류(예를 들어 글리세롤), 폴리바이닐 알코올, 및, 이들의 혼합물을 포함한다. 폴리에틸렌 글라이콜 프로피온 알데하이드는, 그 물에 대한 안정성 때문에, 제조에 있어서 유리할 것이다. 폴리머는, 어떠한 분자량이어도 되고, 분기하고 있어도 하고 있지 않아도 된다. 항체에 부가되는 폴리머의 수에는 폭이 있어도 되고, 2개 이상의 폴리머가 부가된다면 그들은 동일한 분자여도 되고, 상이한 분자여도 된다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 폴리머의 수 및/또는 타입은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 개선되어야 할 항체의 특정의 특성 또는 기능, 항체 유도체가 규정의 조건하에서의 요법에서 사용되는지 여부 등에의 고려에 기초하여, 결정할 수 있다.

다른 태양에 있어서, 항체와, 방사선에 폭로하는 것에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질 부분의, 컨주게이트가 제공된다. 일 태양에 있어서, 비단백질 부분은, 카본 나노튜브이다(Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사선은 어떠한 파장이어도 되고, 또한 이들로 한정되는 것은 아니지만, 통상의 세포에는 해를 주지 않지만 항체-비단백질 부분에 근접한 세포를 사멸시키는 온도까지 비단백질 부분을 가열하는 파장을 포함한다.

B. 재조합의 방법 및 구성

예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호에 기재되는 바와 같이, 항체는 재조합의 방법이나 구성을 이용하여 제조할 수 있다. 일 태양에 있어서, 본 명세서에 기재된 항C1s 항체를 코딩하는, 단리된 핵산이 제공된다. 그와 같은 핵산은, 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩해도 된다. 추가의 태양에 있어서, 이와 같은 핵산을 포함하는 1개 또는 복수의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가의 태양에 있어서, 이와 같은 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 이와 같은 태양의 하나에서는, 숙주 세포는, (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는, (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제 1 벡터와, 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제 2 벡터를 포함한다(예를 들어, 형질 전환되어 있다). 일 태양에 있어서, 숙주 세포는, 진핵성이다(예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포) 또는 림프계의 세포(예를 들어, Y0, NS0, SP2/0 세포)). 일 태양에 있어서, 항C1s 항체의 발현에 호적한 조건하에서, 전술한 바와 같이 당해 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것, 및 임의로, 당해 항체를 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수하는 것을 포함하는, 항C1s 항체를 제작하는 방법이 제공된다.

항C1s 항체의 재조합 제조를 위해서, (예를 들어, 전술한 것 등의) 항체를 코딩하는 핵산을 단리하고, 새로운 클로닝 및/또는 숙주 세포 중에서의 발현을 위해서, 1개 또는 복수의 벡터에 삽입한다. 그와 같은 핵산은, 종래의 순서를 이용하여 용이하게 단리 및 서열 결정될 것이다(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용함으로써).

항체를 코딩하는 벡터의 클로닝 또는 발현에 호적한 숙주 세포는, 본 명세서에 기재된 원핵세포 또는 진핵세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요해지지 않는 경우는, 세균으로 제조해도 된다. 세균에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 관해서, 예를 들어, 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호, 및 제5,840,523호를 참조할 것. (더하여, 대장균에 있어서의 항체 단편의 발현에 대해 기재한 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254도 참조할 것.) 발현 후, 항체는 세균 세포 페이스트로부터 가용성 프랙션 중에 단리되어도 되고, 또한 추가로 정제할 수 있다.

원핵생물에 더하여 부분적인 또는 완전한 인간의 글리코실화 패턴을 수반하는 항체의 산생을 가져오는, 글리코실화 경로가 「인간화」되어 있는 균류 및 효모의 주를 포함하는, 사상균 또는 효모 등의 진핵성의 미생물은, 항체 코드 벡터의 호적한 클로닝 또는 발현 숙주이다. Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004) 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)를 참조할 것.

다세포 생물(무척추 생물 및 척추 생물)에게 유래하는 것도 또한, 글리코실화된 항체의 발현을 위해서 호적한 숙주 세포이다. 무척추 생물 세포의 예는, 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와의 접합, 특히 Spodoptera frugiperda 세포의 형질 전환에 이용되는, 수많은 바큘로바이러스주가 동정되어 있다.

식물세포 배양물도, 숙주로서 이용할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,959,177호, 제6,040,498호, 제6,420,548호, 제7,125,978호, 및 제6,417,429호(트랜스제닉 식물로 항체를 산생하기 위한, PLANTIBODIES(등록상표) 기술을 기재)를 참조할 것.

척추동물 세포도 또한 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 부유 상태에서 증식하도록 적응된 포유동물 세포주는, 유용할 것이다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는, SV40으로 형질 전환된 원숭이 신장 CV1주(COS-7); 인간 태아성 신주(Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977) 등에 기재된 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 셀트리 세포(Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980) 등에 기재된 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프라키녹색개구리 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁 경부암 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK); Buffalo계 래트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유방암(MMT 060562); TRI 세포(예를 들어, Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)에 기재); MRC5 세포; 및, FS4 세포 등이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는, DHFR^- CHO 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포; 및 Y0, NS0, 및 Sp2/0 등의 골수종 세포주를 포함한다. 항체 산생에 호적한 특정의 포유동물 숙주 세포주의 총설로서, 예를 들어, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)을 참조할 것.

pH 의존성을 갖는 항체는, 예를 들어 WO 2009/125825에 기재되는 바와 같은, 스크리닝 방법 및/또는 변이 유발 방법을 이용하는 것에 의해 취득될 수 있다. 당해 스크리닝 방법은, 특정의 항원에 특이적인 항체의 집단 내로부터 pH 의존적 결합 특성을 갖는 항체를 동정하는 임의의 프로세스를 포함할 수 있다. 특정의 태양에 있어서, 당해 스크리닝 방법은, 산성 pH 및 중성 pH의 양쪽에 있어서 초기 항체 집단 내의 개개의 항체의 하나 또는 복수의 결합 파라미터(예를 들어, KD 또는 kd)를 측정하는 것을 포함할 수 있다. 항체의 결합 파라미터는, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명, 또는 특정의 항원에 대한 항체의 결합 특성의 정량적 혹은 정성적인 평가를 가능하게 하는 임의의 다른 분석 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 특정의 태양에 있어서, 당해 스크리닝 방법은, 2 이상의 산성 KD/중성 KD비로 항원에 결합하는 항체를 동정하는 것을 포함할 수 있다. 혹은, 당해 스크리닝 방법은, 2 이상의 산성 kd/중성 kd비로 항원에 결합하는 항체를 동정하는 것을 포함할 수 있다.

다른 태양에 있어서, 변이 유발 방법은, 항원에 대한 항체의 pH 의존적 결합성을 증강하기 위해서 항체의 중쇄 내 및/또는 경쇄 내에 아미노산의 결실, 치환 또는 부가를 짜넣는 것을 포함할 수 있다. 특정의 태양에 있어서, 변이 유발은, 항체의 하나 또는 복수의 가변 도메인 내, 예를 들어 1개 또는 복수의 HVR(예를 들어, CDR) 내에서 행해질 수 있다. 예를 들어, 변이 유발은, 항체의 하나 또는 복수의 HVR(예를 들어, CDR) 내의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 특정의 태양에 있어서, 변이 유발은, 항체의 적어도 1개의 HVR(예를 들어, CDR) 내의 하나 또는 복수의 아미노산을 히스티딘으로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 특정의 태양에 있어서, 「증강된 pH 의존적 결합성」은, 변이형의 항체가, 변이 유발 전의 원래의 「친」항체(즉, pH 의존성이 낮은 항체)보다도 큰 산성 KD/중성 KD비 또는 큰 산성 kd/중성 kd비를 나타내는 것을 의미한다. 특정의 태양에 있어서, 변이형의 항체는, 2 이상의 산성 KD/중성 KD비를 갖는다. 혹은, 변이형의 항체는, 2 이상의 산성 kd/중성 kd비를 갖는다.

폴리클로날 항체는 바람직하게는, 관련되는 항원 및 아주반트의 복수회의 피하(sc) 또는 복강내(ip) 주사에 의해 동물에 있어서 산생된다. 관련되는 항원을, 면역화되는 종에 있어서 면역원성인 단백질에, 예를 들어, 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 싸이로글로불린, 또는 대두 트립신 저해 인자에, 2작용성 물질 또는 유도체화제, 예를 들어, 말레이미드벤조일설포석신이미드에스터(시스테인 잔기를 개재시키는 컨주게이션), N-하이드록시석신이미드(리신 잔기를 개재시킨다), 글루타르 알데하이드, 무수 석신산, SOCl₂, 또는 R¹N=C=NR(여기서 R 및 R¹은 상이한 알킬기이다)를 이용하여, 컨주게이트하는 것이 유용할 수 있다.

동물(통상은 비인간 포유동물)은, 예를 들어, (토끼 또는 마우스에 대해 각각) 100μg 또는 5μg의 단백질 또는 컨주게이트를 3배 용량의 프로인트 완전 아주반트와 조합하여 그 용액을 복수 부위에 피내 주사하는 것에 의해, 항원, 면역원성 컨주게이트, 또는 유도체에 대해서 면역화된다. 1개월 후, 복수 부위에 피하 주사하는 것에 의해, 최초의 양의 1/5~1/10의, 프로인트 완전 아주반트 중의 펩티드 또는 컨주게이트로 해당 동물을 추가 면역한다. 7~14일 후, 해당 동물로부터 채혈하고, 혈청을 항체 역가에 대해 어세이한다. 역가가 플랫에 이를 때까지 동물을 추가 면역한다. 바람직하게는, 동일 항원이지만 별도의 단백질에 컨주게이트된 및/또는 상이한 가교 시약을 개재시켜 컨주게이트된 컨주게이트를 이용하여, 해당 동물을 추가 면역한다. 컨주게이트는, 재조합 세포 배양물 중에서 단백질 융합체로서 조제하는 것도 가능하다. 또한, 면역 응답을 증강하기 위해서, 명반 등의 응집제도 호적하게 사용된다.

모노클로날 항체는, 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 얻어지고, 즉, 해당 집단을 구성하는 개개의 항체는, 약간량 존재할 수 있는 자연히 생기는 잠재적인 돌연변이 및/또는 번역 후 수식(예를 들어, 이성화, 아마이드화)을 제외하고 동일하다. 따라서, 수식어 「모노클로날」은, 별개의 항체의 혼합물은 아니라고 하는 항체의 특징을 나타내고 있다.

예를 들어, 모노클로날 항체는, Kohler et al., Nature 256(5517):495-497 (1975)에 최초로 기재된 하이브리도마법을 이용하여 제작할 수 있다. 하이브리도마법에서는, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예를 들어 햄스터를 본 명세서에 상기한 바와 같이 면역화하여, 면역화에 사용된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 제조하거나 제조하는 능력이 있는 림프구를 유도한다. 혹은, 림프구를 in vitro로 면역화할 수도 있다.

면역화제는, 전형적으로는, 항원 단백질 또는 그 융합 변이체를 포함한다. 일반적으로, 인간 기원의 세포가 바람직한 경우에는 말초혈 림프구(PBL)가 사용되고, 비인간 포유동물원이 바람직한 경우에는 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 그 후, 림프구는, 폴리에틸렌 글라이콜 등의 적절한 융합제를 이용하여 불사화 세포주와 융합되어, 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp. 59-103).

불사화 세포주는 통상, 형질 전환된 포유동물 세포, 특히, 설치류, 소 및 인간 기원의 미엘로마 세포이다. 통상은, 래트 또는 마우스의 미엘로마 세포주가 이용된다. 이와 같이 하여 제작된 하이브리도마 세포를, 미융합의 친미엘로마 세포의 증식 또는 생존을 저해하는 1종 이상의 물질을 바람직하게는 함유하는 적절한 배양 배지 중에 파종하여 증식시킨다. 예를 들어, 친미엘로마 세포가 효소 하이포잔틴구아닌포스포리보실트랜스페라제(HGPRT 또는 HPRT)를 결여하는 경우, 하이브리도마용의 배양 배지는, 전형적으로는, HGPRT 결손 세포의 증식을 방해하는 물질인 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘(HAT 배지)을 포함할 것이다.

바람직한 불사화 미엘로마 세포란, 효율적으로 융합하여, 선택된 항체 산생 세포에 의한 항체의 안정된 고레벨의 제조를 보조하고, 또한 HAT 배지와 같은 배지에 대해서 감수성인, 세포이다. 이들 중에서도, 마우스 미엘로마주, 예를 들어, 미국 캘리포니아주 샌디에고의 Salk Institute Cell Distribution Center로부터 입수할 수 있는 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양에서 유래하는 것, 및 미국 버지니아주 머내서스의 American Type Culture Collection으로부터 입수할 수 있는 SP-2 세포(및 그 유도체, 예를 들어 X63-Ag8-653)가 바람직하다. 인간 모노클로날 항체의 제조에 대해, 인간 미엘로마 세포주 및 마우스-인간 헤테로미엘로마 세포주도 또한, 기재되어 있다(Kozbor et al., J Immunol. 133(6):3001-3005 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, pp. 51-63 (1987)).

하이브리도마 세포가 증식하고 있는 배양 배지를, 항원에 대한 모노클로날 항체의 제조에 대해 어세이한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 제조된 모노클로날 항체의 결합 특이성은, 면역 침강에 의해, 또는 in vitro 결합 측정법, 예를 들어 방사 면역 측정법(RIA) 혹은 효소 결합 면역 흡착 측정법(ELISA)에 의해 결정된다. 이와 같은 기술 및 측정법은 당 기술 분야에서 공지이다. 예를 들어, 결합 어피니티는, Munson, Anal Biochem. 107(1):220-239 (1980)의 스캐처드(Scatchard) 해석에 의해 구할 수 있다.

소망의 특이성, 어피니티, 및/또는 활성의 항체를 제조하는 하이브리도마 세포가 특정된 후, 해당 클론을 한계 희석법에 의해 서브클로닝하여, 표준적인 방법(Goding, 전게)에 의해 증식시킬 수 있다. 이 목적을 위한 적절한 배양 배지로서는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 들 수 있다. 또한, 하이브리도마 세포는 포유동물 내의 종양으로서 in vivo로 증식시킬 수 있다.

서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는, 배양 배지, 복수, 또는 혈청으로부터, 예를 들어, 프로틴 A-세파로스, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 어피니티 크로마토그래피 등의 종래의 면역글로불린 정제법에 의해, 적절히 분리된다.

III. 측정법(어세이)

본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체는, 당해 기술 분야에 있어서 알려져 있는 여러 가지 측정법에 의해, 동정되고, 스크리닝되고, 또는 물리적/화학적 특성 및/또는 생물 활성에 대해 밝혀져도 된다.

A. 결합 측정법 및 다른 측정법

일 국면에 있어서, 본 발명의 항체는, 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯 등의 공지된 방법에 의해, 그 항원 결합 활성에 관해서 시험된다.

다른 국면에 있어서, C1s에의 결합에 관해서, 본 명세서에 기재되는 몇몇 항C1s 항체와 경합하는 항체를 동정하기 위해서, 또는 본 명세서에 기재되는 몇몇 항C1s 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 동정하기 위해서, 경합 어세이가 사용될 수 있다. 특정의 태양에 있어서, 그와 같은 경합 항체가 과잉으로 존재하는 경우, 이것은, C1s에 대한 참조 항체의 결합을 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 또는 그 이상 저지한다(예를 들어 저감시킨다). 특정의 태양에 있어서, 그와 같은 경합 항체는, 본 명세서에 기재되는 몇몇 항C1s 항체에 의해 결합되는 것과 동일한 에피토프(예를 들어, 선상 또는 입체 구조 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 매핑하는, 상세한 예시적 방법은, Morris (1996), "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)에 제공되어 있다. 특정의 태양에 있어서, 그와 같은 경합 어세이를 중성 pH 조건에서 실시할 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 경합 어세이는, 예를 들어 Octet(등록상표) 시스템을 이용하는, 탠덤 경합 어세이이다.

예시적인 경합 어세이에 있어서, 고정화된 C1s는, C1s에 결합하는 제 1 표지된 항체(예를 들어, 본 명세서에 기재되어 있는 것 중 하나) 및 C1s에의 결합에 관해서 제 1 항체와 경합하는 능력에 관해서 시험되는 제 2 미표지의 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이트된다. 제 2 항체는, 하이브리도마 상청에 존재할 수 있다. 대조로서 고정화된 C1s가, 제 1 표지된 항체를 포함하지만 제 2 미표지의 항체를 포함하지 않는 용액 중에서 인큐베이트된다. 제 1 항체의 C1s에의 결합을 허용하는 조건하에서의 인큐베이션 후, 여분의 미결합의 항체가 제거되고, 고정화된 C1s에 결합한 표지의 양이 측정된다. 고정화된 C1s에 결합한 표지의 양이 대조 샘플과 비교하여 시험 샘플에 있어서 실질적으로 감소하고 있는 경우, 그것은 제 2 항체가 C1s에의 결합에 관해서 제 1 항체와 경합하고 있음을 나타낸다. Harlow and Lane (1988), Antibodies: A Laboratory Manual ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)를 참조할 것.

다른 국면에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 또는 본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체와 C1s에의 결합에 관해서 경합하는 항체는, 샌드위치 어세이를 이용하여 동정될 수 있다. 샌드위치 어세이는 2개의 항체를 사용하는 것을 포함하고, 당해 항체는 각각, 검출하고 싶은 단백질이 상이한 면역원성 부분 또는 에피토프에 결합할 수 있다. 샌드위치 어세이에 있어서, 고체 지지체 상에 고정화된 제 1 항체에 시험 샘플 애널라이트가 결합하고, 계속해서 제 2 항체가 애널라이트에 결합하고, 그에 의해 불용성의 3자 복합체가 형성된다. David & Greene, 미국 특허 제4,376,110호를 참조할 것. 제 2 항체는, 그 자체가 검출 가능 부분에서 표지되어도 되고(직접 샌드위치 어세이), 검출 가능 부분에서 표지된 항면역 글로불린 항체를 이용하여 측정되어도 된다(간접 샌드위치 어세이). 예를 들어, 샌드위치 어세이의 하나는 ELISA 어세이이며, 이 예에 있어서, 검출 가능 부분은 효소이다. 본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체와 동시에 C1s에 결합하는 항체는, 당해 항C1s 항체와 상이한 에피토프에 결합하는 항체라고 판정될 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체와 동시에는 C1s에 결합하지 않는 항체는, 당해 항C1s 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 또는 당해 항C1s 항체와 C1s에의 결합에 관해서 경합하는 항체라고 판정될 수 있다.

B. 활성 어세이

일 국면에 있어서, 생물 활성을 갖는 항C1s 항체를 동정하기 위한 어세이가 제공된다. 생물 활성에는, 고전 경로의 활성화의 저지, 및 당해 경로의 활성화에 의해 생기는 절단 산물인 C2a, C2b, C3a, C3b, C4a, C4b, C5a, 및 C5b의 생성의 저지가 포함될 수 있다. in vivo 및/또는 in vitro로 그와 같은 생물 활성을 갖는 항체도 제공된다.

특정의 태양에 있어서, 본 발명의 항체는, 그와 같은 생물 활성에 대해 시험된다. 몇몇 태양에 있어서, 본 발명의 항체는, 양(羊) 적혈구(RBC) 항원에 대한 항체에 의해 감작된 양 RBC의 보체 개재성 용혈을 저해하는 그 능력에 대해, 즉 RBC 어세이를 이용하여, 평가될 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 본 발명의 항체는, 닭 적혈구(cRBC) 항원에 대한 항체에 의해 감작된 cRBC의 보체 개재성 용혈을 저해하는 그 능력에 대해 평가될 수 있다. 보체 단백질의 공급원으로서 인간 혈청을 이용하면, 방출된 헤모글로빈의 양을 분광 광도법에 의해 측정하는 것에 의해, 본 발명의 항체의 활성을 결정할 수 있다.

RBC 어세이는, 공지된 방법, 예를 들어 J. Vis. Exp. 2010; (37): 1923에 개시되는 방법을 이용하여 적절히 실시될 수 있다. 이 문헌은, RBC 용해 어세이로서 50% 용혈성 보체(CH50) 어세이를 실시하는 방법에 대해 기재하고 있다. 간결히 말하면, 이 어세이는, 고전적 보체 경로의 활성화를 측정하여, 그 경로의 임의의 성분의 감소, 비존재, 또는 불활성을 검출한다. 그것은, 혈청 중의 보체 성분의 적혈구 용해 활성을 평가한다. 항체가 시험 혈청과 함께 인큐베이트되면, 이 경로가 활성화되어 용혈이 야기된다. 고전적 경로의 하나 또는 복수의 성분이 감소되면, CH50치가 감소한다. CH50 어세이는, 보체 성분에 의한 세포 용해에 대한 저해%를 측정하는 본 명세서의 실시예에 있어서 사용된 어세이와 완전하 동일하지는 않지만, 컨셉 및 기본 구성은 본 발명과 실질적으로 동일하다. 일 태양에 있어서, RBC 어세이는 이하와 같이 하여 실시된다. 인간 혈청을, 관심 대상의 항체와 함께 프레인큐베이트한다(예를 들어, 섭씨 37도(℃)에서 3시간). 그 다음에 이 혈청을 등량의 감작 양 적혈구에 첨가하고, 적혈구가 용해되도록 인큐베이트한다(예를 들어, 37℃에서 1시간). 그 다음에 이 반응을 정지시킨다. 이 혼합물을 원심분리하여 미용해 세포를 펠릿화하고, 상청을 꺼내고, 415nm에서의 흡광도(OD)를 이용하여 헤모글로빈의 방출을 분석한다. 적혈구 용해의 저해율(%)을 계산하기 위해, 0% 저해를, 항체를 첨가하지 않는(완충액만의) 조건으로 설정하고, 100% 저해를, 종농도 5mM의 EDTA를 첨가하는 조건으로 설정한다(예를 들어, 실시예 7을 참조). 항체가 일정한 적혈구 용해 저해율(%)을 나타낼 때, 이것은, 그 항체가 인간 혈청 보체에 대한 중화 활성, 예를 들어, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 활성을 가짐을 의미한다.

이와 같이, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 활성을 평가하기 위해서, RBC 어세이를 이용하여, 항체의 인간 혈청 보체에 대한 중화 활성을 평가할 수 있다. 일 태양에 있어서, 본 발명은, RBC 어세이에 있어서 적어도 70%의 인간 혈청 보체에 대한 중화 활성을 갖는, C1q와 C1r2s2 복합체 사이의 상호작용을 저해하는 단리된 항체를 제공한다.

C. 면역원성의 평가

항체의 면역원성은, WO2018/124005(Kubo C. 등)에 기재되어 있는 바와 같이, 활발한 증식을 나타내기 전의 IL-2 분비 CD4⁺ T 세포의 비율을 지표로서 사용함으로써 평가된다. 구체적으로는, 인간 PBMC로부터 CD8-CD25^low PBMC(말초혈 단핵구 세포)를 조정하고, 해당 세포를 항체 존재하에서 67시간 배양한다.

IV. 이뮤노컨주게이트

본 발명은 또한, 1개 또는 복수의 세포 상해제(예를 들어 화학요법제 또는 화학요법약, 증식 저해제, 독소(예를 들어 세균, 진균, 식물 혹은 동물 기원의 단백질 독소, 효소적으로 활성인 독소, 혹은 그들의 단편) 또는 방사성 동위체)에 컨주게이트된 본 명세서의 항C1s 항체를 포함하는 이뮤노컨주게이트를 제공한다.

일 태양에 있어서, 이뮤노컨주게이트는, 항체가, 이들로 한정되는 것은 아니지만 이하를 포함하는 1개 또는 복수의 약제에 컨주게이트된, 항체-약제 컨주게이트(antibody-drug conjugate: ADC)이다: 메이탄시노이드(미국 특허 제5,208,020호, 제5,416,064호, 및 유럽 특허 제0,425,235호 B1 참조); 예를 들어 모노메틸오리스타틴 약제 부분 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(미국 특허 제5,635,483호 및 제5,780,588호 및 제7,498,298호 참조) 등의 오리스타틴; 돌라스타틴; 칼리케아마이신 또는 그 유도체(미국 특허 제5,712,374호, 제5,714,586호, 제5,739,116호, 제5,767,285호, 제5,770,701호, 제5,770,710호, 제5,773,001호, 및 제5,877,296호; Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998) 참조); 다우노마이신 또는 독소루비신 등의 안트라사이클린(Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002); 및 미국 특허 제6,630,579호 참조); 메토트렉세이트; 빈데신; 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀, 및 오르타탁셀 등의 탁세인; 트리코테센; 및 CC1065.

다른 태양에 있어서, 이뮤노컨주게이트는, 이들로 한정되는 것은 아니지만 이하를 포함하는 효소적으로 활성인 독소 또는 그 단편에 컨주게이트된, 본 명세서에 기재된 항체를 포함한다: 디프테리아 A쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A쇄(녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A쇄, 아브린 A쇄, 모데신 A쇄, 알파사르신, 유동나무(Aleurites fordii) 단백질, 다이안틴 단백질, 미국 자리공(Phytolacca americana) 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 여주(momordica charantia) 저해제, 쿠르신(curcin), 크로틴, 비누풀(saponaria officinalis) 저해제, 겔로닌, 미토겔린(mitogellin), 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센.

다른 태양에 있어서, 이뮤노컨주게이트는, 방사성 컨주게이트를 형성하기 위해서 방사성 원자에 컨주게이트된 본 명세서에 기재된 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위체가 방사성 컨주게이트의 제조에 이용 가능하다. 예는, ²¹¹At, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ²¹²Bi, ³²P, ²¹²Pb, 및 Lu의 방사성 동위체를 포함한다. 방사성 컨주게이트를 검출을 위해서 사용하는 경우, 방사성 컨주게이트는, 신티그래피 검사용의 방사성 원자(예를 들어 Tc-99m 혹은 ¹²³I), 또는, 핵자기 공명(NMR) 이미징(자기 공명 이미징, MRI로서도 알려짐)용의 스핀 표지(예를 들어 여기에서도 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간, 또는 철)를 포함할 수 있다.

항체 및 세포 상해제의 컨주게이트는, 다양한 2작용성 단백질 연결제를 이용하여 제작될 수 있다. 예를 들어 N-석신이미딜3-(2-피리딜다이싸이오)프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜4-(N-말레이미드메틸)사이클로헥세인-1-카복실레이트(SMCC), 이미노싸이올란(IT), 이미드에스터의 2작용성 유도체(예를 들어, 아디프이미드산 다이메틸 HCl), 활성 에스터(예를 들어, 수베르산 다이석신이미딜), 알데하이드(예를 들어, 글루타르알데하이드), 비스아자이드 화합물(예를 들어, 비스(p-아자이도벤조일)헥세인다이아민), 비스다이아조늄 유도체(예를 들어, 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이아이소사이아네이트(예를 들어, 톨루엔2,6-다이아이소사이아네이트), 및 비스 활성 불소 화합물(예를 들어, 1,5-다이플루오로-2,4-다이나이트로벤젠)이다. 예를 들어, 리신 면역 독소는, Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)에 기재되는 바와 같이 하여 조제될 수 있다. 탄소-14 표지된 1-아이소싸이오사이아네이토벤질3-메틸다이에틸렌트라이아민 5아세트산(MX-DTPA)은, 항체에의 방사성 핵종의 컨주게이션을 위한 예시적인 킬레이트제이다. WO94/11026을 참조할 것. 링커는, 세포 내에서의 세포 상해약의 방출을 촉진하는 「절단 가능한 링커」일 수 있다. 예를 들어, 산불안정성 링커, 펩티다제 감수성 링커, 광불안정성 링커, 다이메틸 링커, 또는 다이설파이드 함유 링커(Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); 미국 특허 제5,208,020호)가 사용될 수 있다.

본 명세서의 이뮤노컨주게이트 또는 ADC는, (예를 들어, Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A로부터) 시판되고 있는 BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB, 및 SVSB(석신이미딜(4-바이닐설폰)벤조에이트)를 포함하지만 이들로 한정되지 않는 가교 시약을 이용하여 조제되는 컨주게이트를 명시적으로 고려하지만, 이들로 한정되지 않는다.

V. 진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물

특정의 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체의 모두, 생물학적 샘플에 있어서의 C1s의 존재를 검출하는 데 유용하다. 본 명세서에서 이용되는 용어 「검출」은, 정량적 또는 정성적인 검출을 포함한다. 특정의 태양에 있어서, 생물학적 샘플은, 세포 또는 조직, 예를 들어, 혈청, 전혈, 혈장, 생검 샘플, 조직 샘플, 세포 현탁물, 타액, 담, 구강액, 뇌척수액, 양수, 복수, 모유, 초유, 유선 분비물, 림프액, 소변, 땀, 누액, 위액, 활액, 복수, 안용 렌즈액, 또는 점액을 포함한다.

일 태양에 있어서, 진단 방법 또는 검출 방법에 있어서 사용하기 위한 항C1s 항체가 제공된다. 추가의 국면에 있어서, 생물학적 샘플 중의 C1s의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정의 태양에 있어서, 이 방법은, C1s에의 항C1s 항체의 결합이 허용되는 조건하에서 본 명세서에 기재된 항C1s 항체와 생물학적 샘플을 접촉시키는 것, 및 항C1s 항체와 C1s 사이에 복합체가 형성되었는지 여부를 검출하는 것을 포함한다. 그와 같은 방법은, in vitro의 방법 또는 in vivo의 방법일 수 있다. 일 태양에 있어서, 항C1s 항체는, 예를 들어 C1s가 환자를 선택하기 위한 바이오마커인 경우, 항C1s 항체를 이용하는 치료에 호적한 대상을 선택하기 위해서 사용된다. 특정의 태양에 있어서, 개체 유래의 생물학적 샘플(예를 들어, 개체의 세포, 조직, 또는 체액)에 있어서 이상한 양(예를 들어, 과잉인 양)의 보체 C1s 또는 이상한 레벨의 보체 C1s 단백질 분해 활성이 검출되는 경우, 당해 개체를 본 발명의 항C1s 항체를 이용하는 치료에 호적하다고 선택할 수 있다.

본 발명의 항체를 이용하여 진단될 수 있는 질환 또는 상태의 예에는, 가령성 황반변성증, 알츠하이머병, 근위축성 측삭경화증, 아나필락시, 기은 과립성 인지증, 관절염(예를 들어, 관절 류머티즘), 천식, 아테롬성 동맥경화증, 비전형 용혈성 요독증 증후군, 자기면역 질환, 바라케르·시몬즈 증후군(Barraquer-Simons syndrome), 베체트증, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 유천포창, 천포창, 버거병, C1q 신증, 암, 항인지질 항체 증후군, 뇌아밀로이드 혈관병증, 한랭 응집소증, 대뇌피질 기저핵변성증, 크로이츠펠트·야콥병, 크론병, 크리오글로불린혈증성 혈관염, 권투가 치매, 레비소체형 인지증(DLB), 석회화를 수반하는 미만성 신경원섬유 변화병, 원판상 에리테마토데스, 다운 증후군, 소상 분절성 사구체 경화증, 형식적 사고 장애, 전두측두형 인지증(FTD), 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증, 전두측두엽 변성증, 게르스트만·슈트로이슬러·샤인커 증후군, 길랑·바레 증후군, 할러포르덴·스파츠 증후군, 용혈성 요독증 증후군, 유전성 혈관 부종, 저호스파타제증, 특발성 폐렴 증후군, 면역 복합체병, 염증성 근질환(예를 들어, 피부 근염, 괴사성 근염, 봉입체 근염, 항ARS 증후군), 감염증(예를 들어, 세균(예를 들어, 수막염균 혹은 렌사구균), 바이러스(예를 들어, 인간 면역 부전 바이러스(HIV)) 또는 다른 감염 병원체에 의해 야기되는 질환), 염증 질환, 허혈/재관류 장애, 경도 인지 장애, 면역성 혈소판감소성 자반병(ITP), 몰리브덴 보인자 결손증(MoCD) A형, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) I, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) II(덴스데포지트병), 막성 신염, 다발경색성 인지증, 루푸스(전신성 에리테마토데스(SLE)), 사구체신염, 가와사키병, 다소성 운동 신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축증, 중증 근무력증, 심근경색, 근경직성 디스트로피, 시신경 척수염, 니만·픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 파킨슨병, 인지증을 수반하는 파킨슨병, 발작성 야간 혈색소뇨증, 심상성 천포창, 픽병, 뇌염후 파킨슨병, 프리온 단백질뇌아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 건선, 패혈증, 시가 독소 산생성 대장균(E.coli)(STEC)-HuS, 척수성 근위축증, 뇌졸중, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 인지증, 이식편 거절, 혈관염(예를 들어, ANCA 관련 혈관염), 베그나 육아종증, 겸상 적혈구증, 크리오글로불린혈증, 혼합성 크리오글로불린혈증, 본태성 혼합성 크리오글로불린혈증, II형 혼합성 크리오글로불린혈증, III형 혼합성 크리오글로불린혈증, 신염, 약물성 혈소판 감소증, 루푸스 신염, 후천성 표피 수포증, 지발성 용혈성 수혈 반응, 저보체혈증성 담마진양 혈관염 증후군, 위수정체성 수포성 각막증, 혈전성 미소혈관 장애증(TMA), 자기면역성 용혈성 빈혈(AIHA), 시그렌 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발신경염(CIDP), 전신성 경화증(강피증)(SSc), 면역 개재성 괴사성 근육병증(IMNM) 및 혈소판 수혈 불응 상태가 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다.

특정의 태양에 있어서, 표지된 항C1s 항체가 제공된다. 표지는, 직접적으로 검출되는 표지 또는 부분(예를 들어, 형광 표지, 발색 표지, 고전자 밀도 표지, 화학 발광 표지, 및 방사성 표지) 및, 예를 들어 효소 반응 또는 분자간 상호작용을 통해서 간접적으로 검출되는 부분(예를 들어 효소 또는 리간드)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 예시적인 표지는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 이하를 포함한다: 방사성 동위체 ³²P, ¹⁴C, ¹²⁵I, ³H 및 ¹³¹I, 희토류 킬레이트 등의 발형광단 또는 플루오레세인 및 그 유도체, 로다민 및 그 유도체, 단실, 움벨리페론, 반딧불 루시페라제 및 세균 루시페라제(미국 특허 제4,737,456호) 등의 루시페라제, 루시페린, 2,3-다이하이드로프탈라진다이온, 서양와사비 퍼옥시다제(horseradish peroxidase: HRP), 알칼리 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 단당 옥시다제(예를 들어 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제 및 글루코스-6-인산 데하이드로제나제), 과산화 수소를 이용하여 색소 전구체를 산화하는 효소(예를 들어 HRP, 락토퍼옥시다제, 또는 마이크로퍼옥시다제)와 연결된 것, 우리카제 및 잔틴 옥시다제 등의 헤테로환 옥시다제, 비오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파지 표지, 안정된 프리 라디칼류, 및 이들과 유사한 것.

VI. 약학적 제제

본 명세서에 기재된 항C1s 항체의 약학적 제제는, 소망의 순도를 갖는 항체를, 1개 또는 복수의 임의의 약학적으로 허용되는 담체(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합하는 것에 의해, 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로, 조제된다. 약학적으로 허용되는 담체는, 대체로, 이용될 때의 용량 및 농도에서는 레시피언트에 대해서 비독성이며, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 이하의 것을 포함한다: 인산염, 시트르산염, 및 다른 유기산 등의 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는, 항산화제; 보존료(옥타데실다이메틸벤질 염화 암모늄; 염화 헥사메토늄; 염화 벤즈알코늄; 염화 벤제토늄; 페놀, 뷰틸, 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤 등의 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르신올; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸 등); 저분자(약 10잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린 등의 단백질; 폴리바이닐 피롤리돈 등의 친수성 폴리머; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신 등의 아미노산; 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는, 단당, 이당, 및 다른 탄수화물; EDTA 등의 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 소르비톨 등의, 설탕류; 나트륨 등의 염 형성 짝이온류; 금속 착체(예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 폴리에틸렌 글라이콜 (PEG) 등의 비이온계 표면 활성제.

예시적인 동결건조 항체 제제는, 미국 특허 제6,267,958호에 기재되어 있다. 수용액 항체 제제는, 미국 특허 제6,171,586호 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하고, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충액을 포함하고 있다.

본 명세서의 제제는, 치료되는 특정의 적응증을 위해서 필요하면 1개보다 많은 유효 성분을 포함해도 된다. 서로 악영향을 주지 않는 상보적인 활성을 수반하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 병용 요법에 이용되는 제제를 추가로 제공하는 것이 바람직한 경우가 있다. 이와 같은 유효 성분은, 의도된 목적을 위해서 유효한 양으로, 호적하게 조합되어 존재한다.

유효 성분은, 예를 들어 액적 형성(코아세르베이션) 수법에 의해 또는 계면중합에 의해 조제된 마이크로캡슐(각각, 예를 들어, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴 마이크로캡슐, 및 폴리(메타크릴산 메틸) 마이크로캡슐)에 혼입되어도 되고, 콜로이드상 약제 송달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 소구체, 마이크로에멀션, 나노입자, 및 나노캡슐)에 혼입되어도 되고, 매크로에멀션에 혼입되어도 된다. 이와 같은 수법은, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에 개시되어 있다.

서방성 제제를 조제해도 된다. 서방성 제제의 호적한 예는, 항체를 포함하는 고체 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 당해 매트릭스는 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐 등의 조형품의 형태이다.

생체내(in vivo) 투여를 위해서 사용되는 제제는, 통상 무균이다. 무균 상태는, 예를 들어 멸균 여과막을 통과시켜 여과하는 것 등에 의해, 용이하게 달성된다.

VII. 치료적 방법 및 치료용 조성물

본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체의 모두, 치료적인 방법에 있어서 사용되어도 된다.

일 국면에 있어서, 의약품으로서의 사용을 위한, 항C1s 항체가 제공된다. 추가의 국면에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료에 있어서의 사용을 위한, 항C1s 항체 또는 항C1s 항체를 포함하는 약학적 제제(이하, 정리해 항C1s 항체라고 칭하는 일이 있다)가 제공된다. 특정의 태양에 있어서, 치료 방법에 있어서의 사용을 위한, 항C1s 항체가 제공된다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명은, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체를 치료하는 방법으로서, 당해 개체에게 항C1s 항체의 유효량을 투여하는 공정을 포함하는 방법에 있어서의 사용을 위한, 항C1s 항체를 제공한다. 이와 같은 태양의 하나에 있어서, 방법은, 당해 개체에게 적어도 1개의 추가 치료제의 유효량을 투여하는 공정을, 추가로 포함한다. 특정의 태양에 있어서, 방법은, 개체 유래의 생물학적 샘플(예를 들어, 개체의 세포, 조직, 또는 체액)에 있어서의 보체 C1s의 양 및 단백질 분해 활성 중 하나 또는 양쪽을 측정하는 공정을 포함하고, 당해 개체 유래의 생물학적 샘플(예를 들어, 개체의 세포, 조직, 또는 체액)에 있어서 이상한 양(예를 들어, 과잉인 양)의 보체 C1s 또는 이상한 레벨의 보체 C1s 단백질 분해 활성이 검출되는 경우, 당해 개체는 본 발명의 항C1s 항체를 이용하는 치료에 호적하다고 선택된다. 생물학적 샘플에 있어서의 C1s의 양 및 단백질 분해 활성은, 당업자에게 공지된 수법에 따라 측정할 수 있다. 상기 태양의 임의의 것에 의한 「개체」는, 호적하게는 인간이다.

추가의 태양에 있어서, 본 발명은, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료에 사용하기 위한 항C1s 항체를 제공한다. 추가의 태양에 있어서, 항C1s 항체는, 혈장으로부터의 C1s의 클리어런스의 증강에 사용하기 위한 것일 수 있다. 추가의 태양에 있어서, 항C1s 항체는, 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스의 증강에 사용하기 위한 것일 수 있다. 추가의 태양에 있어서, 항C1s 항체는, 혈장으로부터의 C1q의 클리어런스를 증강하지 않고 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강하는 데 사용하기 위한 것일 수 있다. 몇몇 예에 있어서, 당해 항체는 고전적 보체 경로의 성분을 저해하고, 몇몇 예에 있어서, 고전적 보체 경로의 성분은 C1s이다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명은, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료 방법에 있어서 사용하기 위한 항C1s 항체를 제공한다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명은, 혈장으로부터의 C1s의 클리어런스를 증강하는 방법에 있어서 사용하기 위한 항C1s 항체를 제공한다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명은, 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강하는 방법에 있어서 사용하기 위한 항C1s 항체를 제공한다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명은, 혈장으로부터의 C1q의 클리어런스를 증강하지 않고 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강하는 데 사용하기 위한 항C1s 항체를 제공한다. 특정의 태양에 있어서, 본 발명은, 고전적 보체 경로의 성분을 저해하는 방법에 있어서 사용하기 위한 항C1s 항체를 제공하고, 몇몇 예에 있어서, 고전적 보체 경로의 성분은 C1s이다. 상기 태양의 어느 것에 있어서, 「개체」는 바람직하게는 인간이다.

일 국면에 있어서, 본 개시는, 보체 활성화를 조정하는 방법을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 이 방법은, 예를 들어 C4b2a의 산생을 감소시키도록, 보체의 활성화를 저해한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 있어서 보체의 활성화를 조정하는 방법으로서, 본 개시의 항C1s 항체 또는 본 개시의 약학적 제제(약학적 조성물)를 개체에게 투여하는 공정을 포함하고, 약학적 제제(약학적 조성물)가 본 개시의 항C1s 항체를 포함하는, 방법을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 그와 같은 방법은, 보체 활성화를 저해한다. 몇몇 태양에 있어서, 개체는 포유동물이다. 몇몇 태양에 있어서, 개체는 인간이다. 투여는, 본 명세서에서 개시되는 것을 포함하는, 당업자에게 공지된 임의의 경로에 의하는 것일 수 있다. 몇몇 태양에 있어서, 투여는 정맥내 투여 또는 피하 투여이다. 몇몇 태양에 있어서, 투여는 골수강내 투여이다.

보체 개재성의 질환 또는 상태는, 개체의 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 이상한 양의 보체 C1s 또는 이상한 레벨의 보체 C1s 단백질 분해 활성에 의해 특징지어지는 질환 또는 상태이다.

몇몇 예에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 증가된(통상보다 많은) 양의 C1s 또는 상승한 레벨의 보체 C1s 활성의 존재에 의해 특징지어진다. 예를 들어, 몇몇 예에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 뇌 조직 및/또는 뇌척수액에 있어서의 증가한 양의 C1s 및/또는 상승한 활성의 C1s의 존재에 의해 특징지어진다. 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 「통상보다 많은」 양의 C1s는, 그 세포, 조직, 또는 체액 중의 C1s의 양이 통상의 대조 레벨보다도 많은, 예를 들어, 동일한 연령 그룹의 개체 또는 개체 집단의 통상의 대조 레벨보다도 많은 것을 나타낸다. 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 「통상보다 높은」 레벨의 C1s 활성은, 그 세포, 조직, 또는 체액에 있어서 C1s에 의해 초래되는 단백질 분해 절단이 통상의 대조 레벨보다도 높은, 예를 들어, 동일한 연령 그룹의 개체 또는 개체 집단의 통상의 대조 레벨보다도 높은 것을 나타낸다. 몇몇 예에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체는, 그와 같은 질환 또는 상태의 하나 또는 복수의 추가적인 증상을 나타낸다.

다른 예에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 통상보다도 적은 양의 C1s 또는 낮은 레벨의 보체 C1s 활성의 존재에 의해 특징지어진다. 예를 들어, 몇몇 예에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 뇌 조직 및/또는 뇌척수액에 있어서의 적은 양의 C1s 및/또는 낮은 활성의 C1s의 존재에 의해 특징지어진다. 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 「통상보다도 적은」 양의 C1s는, 그 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 C1s의 양이 통상의 대조 레벨보다도 적은, 예를 들어, 동일한 연령 그룹의 개체 또는 개체 집단의 통상의 대조 레벨보다도 적은 것을 나타낸다. 세포, 조직, 또는 체액에 있어서의 「통상보다도 낮은」 레벨의 C1s 활성은, 그 세포, 조직, 또는 체액에 있어서 C1s에 의해 초래되는 단백질 분해 절단이 통상의 대조 레벨보다도 낮은, 예를 들어, 동일한 연령 그룹의 개체 또는 개체 집단의 통상의 대조 레벨보다도 낮은 것을 나타낸다. 몇몇 예에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체는, 그와 같은 질환 또는 상태의 하나 또는 복수의 추가적인 증상을 나타낸다.

보체 개재성의 질환 또는 상태는, 보체 C1s의 양 또는 활성이 개체에 있어서 질환 또는 상태를 야기하는 정도의 것인 질환 또는 상태이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 자기면역 질환, 암, 혈액 질환, 감염증, 염증 질환, 허혈·재관류 장애, 신경 변성 질환, 신경 변성 장애, 안 질환, 신장 질환, 이식편 거절, 혈관 질환, 및 혈관염 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 자기면역 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 암이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 감염 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 염증 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 혈액 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 허혈·재관류 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 안 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 신장 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 이식편 거절이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 항체에 의한 이식편 거절이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 혈관 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 혈관염 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 신경 변성 질환 또는 장애이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환은, 신경 변성 질환이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성 상태는, 신경 변성 장애이다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 타우병증이다.

보체 개재성의 질환 또는 상태의 예에는, 가령성 황반변성증, 알츠하이머병, 근위축성 측삭경화증, 아나필락시, 기은 과립성 인지증, 관절염(예를 들어, 관절 류머티즘), 천식, 아테롬성 동맥경화증, 비전형 용혈성 요독증 증후군, 자기면역 질환, 바라케르·시몬즈 증후군(Barraquer-Simons syndrome), 베체트증, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 유천포창, 천포창, 버거병, C1q 신증, 암, 항인지질 항체 증후군, 뇌아밀로이드 혈관병증, 한랭 응집소증, 대뇌피질 기저핵변성증, 크로이츠펠트·야콥병, 크론병, 크리오글로불린혈증성 혈관염, 권투가 치매, 레비소체형 인지증(DLB), 석회화를 수반하는 미만성 신경원섬유 변화병, 원판상 에리테마토데스, 다운 증후군, 소상 분절성 사구체 경화증, 형식적 사고 장애, 전두측두형 인지증(FTD), 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증, 전두측두엽 변성증, 게르스트만·슈트로이슬러·샤인커 증후군, 길랑·바레 증후군, 할러포르덴·스파츠 증후군, 용혈성 요독증 증후군, 유전성 혈관 부종, 저호스파타제증, 특발성 폐렴 증후군, 면역 복합체병, 염증성 근질환(예를 들어, 피부 근염, 괴사성 근염, 봉입체 근염, 항ARS 증후군), 감염증(예를 들어, 세균(예를 들어, 수막염균 혹은 렌사구균), 바이러스(예를 들어, 인간 면역 부전 바이러스(HIV)) 또는 다른 감염 병원체에 의해 야기되는 질환), 염증 질환, 허혈/재관류 장애, 경도 인지 장애, 면역성 혈소판감소성 자반병(ITP), 몰리브덴 보인자 결손증(MoCD) A형, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) I, 막성 증식성 사구체신염(MPGN) II(덴스데포지트병), 막성 신염, 다발경색성 인지증, 루푸스(전신성 에리테마토데스(SLE)), 사구체신염, 가와사키병, 다소성 운동 신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축증, 중증 근무력증, 심근경색, 근경직성 디스트로피, 시신경 척수염, 니만·픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 파킨슨병, 인지증을 수반하는 파킨슨병, 발작성 야간 혈색소뇨증, 심상성 천포창, 픽병, 뇌염후 파킨슨병, 프리온 단백질뇌아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 건선, 패혈증, 시가 독소 산생성 대장균(E. coli)(STEC)-HuS, 척수성 근위축증, 뇌졸중, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 인지증, 이식편 거절, 혈관염(예를 들어, ANCA 관련 혈관염), 베그나 육아종증, 겸상 적혈구증, 크리오글로불린혈증, 혼합성 크리오글로불린혈증, 본태성 혼합성 크리오글로불린혈증, II형 혼합성 크리오글로불린혈증, III형 혼합성 크리오글로불린혈증, 신염, 약물성 혈소판 감소증, 루푸스 신염, 후천성 표피 수포증, 지발성 용혈성 수혈 반응, 저보체혈증성 담마진양 혈관염 증후군, 위수정체성 수포성 각막증, 혈전성 미소혈관 장애증(TMA), 자기면역성 용혈성 빈혈(AIHA), 시그렌 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발신경염(CIDP), 전신성 경화증(강피증)(SSc), 면역 개재성 괴사성 근육병증(IMNM) 및 혈소판 수혈 불응 상태가 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다.

알츠하이머병 및 특정의 형태의 전두측두형 인지증(픽병, 산발성 전두측두형 인지증, 및 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증)은, 가장 일반적인 형태의 타우병증이다. 따라서, 본 발명은, 타우병증이 알츠하이머병, 픽병, 산발성 전두측두형 인지증, 및 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증인 상기의 임의의 방법에 관련된다. 다른 타우병증에는, 진행성 핵상성 마비(PSP), 대뇌피질 기저핵변성증(CBD), 및 아급성 경화성 전뇌염이 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다.

신경 변성 타우병증에는, 알츠하이머병, 근위축성 측삭경화증/파킨슨 인지증 복합, 기은 과립성 인지증, 영국형 아밀로이드 혈관병증, 뇌아밀로이드 혈관병증, 대뇌피질 기저핵변성증, 크로이츠펠트·야콥병, 권투가 치매, 석회화를 수반하는 미만성 신경원섬유 변화병, 다운 증후군, 전두측두형 인지증, 17번 염색체에 연쇄하여 파킨스니즘을 수반하는 전두측두형 인지증, 전두측두엽 변성증, 게르스트만·슈트로이슬러·샤인커 증후군, 할러포르덴·스파츠 증후군, 봉입체 근염, 다계통 위축증, 근경직성 디스트로피, 니만·픽병 C형, 신경원섬유 변화를 나타내는 비괌형 운동 뉴런 질환, 픽병, 뇌염후 파킨슨병, 프리온 단백질뇌아밀로이드 혈관증, 진행성 피질하 글리오시스, 진행성 핵상성 마비, 아급성 경화성 전뇌염, 신경원섬유형 인지증, 다발경색성 인지증, 허혈성 뇌졸중, 만성 외상성뇌증(CTE), 외상성뇌손상(TBI), 및 뇌졸중이 포함된다.

본 개시는 또한, 시누클레인병증, 예를 들어, 파킨슨병(PD); 레비소체형 인지증(DLB); 다계통 위축증(MSA) 등을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 인지증을 수반하는 PD(PDD)가, 본 개시의 방법을 이용하여 치료될 수 있다.

몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 알츠하이머병을 포함한다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 파킨슨병을 포함한다. 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 이식편 거절을 포함하는, 몇몇 태양에 있어서, 보체 개재성의 질환 또는 상태는, 항체에 의한 이식편 거절이다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 개체에 있어서 보체 개재성의 질환 또는 상태의 적어도 1개의 증상의 발증을 막거나 또는 늦춘다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 개체에 있어서 보체 개재성의 질환 또는 상태의 적어도 1개의 증상을 경감하거나 또는 제거한다. 증상의 예에는, 자기면역 질환, 암, 혈액 질환, 감염 질환, 염증 질환, 허혈·재관류 질환, 신경 변성 질환, 신경 변성 장애, 신장 질환, 이식편 거절, 안 질환, 혈관 질환 또는 혈관염 질환에 관련되는 증상이 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다. 증상은, 신경학적 증상, 예를 들어, 인지 기능 장애, 기억 장애, 운동 기능 상실 등일 수 있다. 증상은 또한, 개체의 세포, 조직, 또는 체액 중의 C1s 단백질의 활성일 수 있다. 증상은 또한, 개체의 세포, 조직, 또는 체액 중에서의 보체 활성화의 정도일 수 있다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체의 세포, 조직, 또는 체액에 있어서 보체 활성화를 조정한다. 몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체의 세포, 조직, 또는 체액에 있어서 보체 활성화를 저해한다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에게 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 보체 활성화와 비교하여, 개체에 있어서의 보체 활성화를 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과 저해한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 적혈구에의 C3 침착을 감소시킨다, 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, RBC에의 C3b, iC3b 등의 침착을 감소시킨다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 적혈구 용해를 저해한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 혈소판에의 C3의 침착을 감소시킨다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 혈소판에의 C3b, iC3b 등의 침착을 감소시킨다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 이하로 이루어지는 군으로부터 선택되는 결과를 가져온다: (a) 보체 활성화의 저감, (b) 인지 기능의 개선, (c) 뉴런 상실의 저감, (d) 뉴런에 있어서의 인산화 Tau 레벨의 저하, (e) 신경교 세포 활성화의 저감, (f) 림프구 침윤의 저감, (g) 매크로파지 침윤의 저감, (h) 항체 침착의 감소, (i) 신경교 세포 상실의 저감, (j) 올리고덴드로사이트 상실의 저감, (k) 수상 세포 침윤의 저감, (l) 호중구 침윤의 저감, (m) 적혈구 용해의 저감, (n) 적혈구 식작용의 저감, (o) 혈소판 식작용의 저감, (p) 혈소판 용해의 저감, (q) 이식편 생존의 개선, (r) 매크로파지에 의해 매개되는 식작용의 저감, (s) 시력의 개선, (t) 운동 제어의 개선, (u) 혈전 형성의 개선, (v) 응고의 개선, (w) 신장 기능의 개선, (x) 항체에 의해 매개되는 보체 활성화의 저감, (y) 자기 항체에 의해 매개되는 보체 활성화의 저감, (z) 빈혈의 개선, (aa) 탈골수의 저감, (ab) 호산구 증가의 저감, (ac) 적혈구 세포에의 C3 침착의 감소(예를 들어, RBC에의 C3b, iC3b 등의 침착의 감소), 및 (ad) 혈소판에의 C3 침착의 감소(예를 들어, 혈소판에의 C3b, iC3b 등의 침착의 감소), 및 (ae) 아나필라톡신 산생의 저감, (af) 자기 항체에 의해 매개되는 수포 형성의 저감, (ag) 자기 항체에 의해 유도되는 소양의 저감, (ah) 자기 항체에 의해 유도되는 에리테마토데스의 저감, (ai) 자기 항체에 의해 매개되는 피부 미란의 저감, (aj) 수혈 반응에 기인하는 적혈구 파괴의 저감, (ak) 동종 항체에 기인하는 적혈구 용해의 저감, (al) 수혈 반응에 기인하는 용혈의 저감, (am) 동종 항체에 의해 매개되는 혈소판 용해의 저감, (an) 수혈 반응에 기인하는 혈소판 용해의 저감, (ao) 비만 세포 활성화의 저감, (ap) 비만 세포 히스타민 방출의 저감, (aq) 혈관 투과성의 저감, (ar) 부종의 저감, (as) 이식편 내피에의 보체 침착의 감소, (at) 이식편 내피에 있어서의 아나필라톡신 생성의 저감, (au) 진피 표피 접합부의 분리의 저감, (av) 진피 표피 접합부에 있어서의 아나필라톡신 생성의 저감, (aw) 이식편 내피에 있어서의 동종 항체에 의해 매개되는 보체 활성화의 저감, (ax) 항체에 의해 매개되는 신경관계 접합부의 상실의 저감, (ay) 신경관계 접합부에 있어서의 보체 활성화의 저감, (az) 신경관계 접합부에 있어서의 아나필라톡신 생성의 저감, (ba) 신경관계 접합부에 있어서의 보체 침착의 감소, (bb) 마비의 저감, (be) 저림의 저감, (bd) 방광 제어의 향상, (be) 배변 관리의 향상, (bf) 자기 항체에 관련되는 죽음의 감소, 및 (bg) 자기 항체에 관련되는 병적 상태의 저감.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 이하의 결과: (a) 보체 활성화; (b) 인지 기능의 저하; (c) 뉴런의 상실; (d) 뉴런에 있어서의 인산화 Tau 레벨; (e) 신경교 세포 활성화; (f) 림프구 침윤; (g) 매크로파지 침윤; (h) 항체 침착; (i) 신경교 세포의 상실; (j) 올리고덴드로사이트의 상실; (k) 수상 세포 침윤; (l) 호중구 침윤; (m) 적혈구 용해; (n) 적혈구 식작용; (o) 혈소판 식작용; (p) 혈소판 용해; (q) 이식편 거절; (r) 매크로파지에 의해 매개되는 식작용; (s) 시력 저하; (t) 항체에 의해 매개되는 보체 활성화; (u) 자기 항체에 의해 매개되는 보체 활성화; (v) 탈골수; (w) 호산구 증가 중 하나 또는 복수를, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 결과의 레벨 또는 정도와 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 저감하는 데 유효하다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 이하의 결과: a) 인지 기능; b) 이식편 생존; c) 시력; d) 운동 제어; e) 혈전 형성; f) 응고; g) 신장 기능, 및 h) 적혈구 용적률(적혈구수) 중 하나 또는 복수를, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 결과의 레벨 또는 정도와 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 개선하는 데 유효하다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 보체 활성화를 저감한다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 보체 활성화를, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 보체 활성화와 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 저감한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 인지 기능을 개선한다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 인지 기능을, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 인지 기능과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 개선한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 인지 기능의 저하율을 저하시킨다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 인지 기능의 저하율을, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 인지 기능의 저하율과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 저하시킨다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 뉴런 상실을 저감한다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 뉴런 상실을, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 뉴런 상실과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 저감한다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 인산화 Tau 레벨을 저하시킨다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 인산화 Tau를, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 인산화 Tau 레벨과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 감소시킨다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 신경교 세포 활성화를 저감한다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 글리어 활성화를, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 신경교 세포 활성화와 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 저감한다. 몇몇 태양에 있어서, 신경교 세포는, 아스트로사이트 또는 마이크로글리어이다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 림프구 침윤을 저감한다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 림프구 침윤을, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 림프구 침윤과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 저감한다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 매크로파지 침윤을 저감한다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 매크로파지 침윤을, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 매크로파지 침윤과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 저감한다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 항체 침착을 감소시킨다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 항체 침착을, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 항체 침착과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 감소시킨다.

몇몇 태양에 있어서, 개체에의 본 개시의 항C1s 항체의 투여는, 개체에 있어서의 아나필라톡신(예를 들어, C3a, C4a, C5a) 산생을 감소시킨다. 예를 들어, 몇몇 태양에 있어서, 본 개시의 항C1s 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 단독 요법으로서 또는 병용 요법에 있어서 1개 또는 복수의 용량으로 투여되었을 경우, 개체에 있어서의 아나필라톡신 산생을, 항C1s 항체를 이용한 처치 전의 개체에 있어서의 아나필라톡신 산생 레벨과 비교하여, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과, 감소시킨다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체를 치료하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 또는 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)의 사용을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체를 치료하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체의 사용을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체를 치료하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)의 사용을 제공한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체를 치료하기 위한 의약품의 제조에 있어서의, 본 개시의 항C1s 항체의 사용을 제공한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 활성화를 저해하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 또는 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)의 사용을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 있어서 보체 활성화를 저해하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 또는 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)의 사용을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 있어서 보체 활성화를 저해하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체의 사용을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 있어서 보체 활성화를 저해하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)의 사용을 제공한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 활성화를 조정하기 위한 의약품의 제조에 있어서의, 본 개시의 항C1s 항체의 사용을 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 해당 의약품은, 보체 활성화를 저해한다. 몇몇 태양에 있어서, 해당 의약품은, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에 있어서 보체 활성화를 저해한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 약물 요법에 있어서 사용하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 또는 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)를 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 약물 요법에 있어서 사용하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체를 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 약물 요법에 있어서 사용하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)를 제공한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체를 치료하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 또는 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)를 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체를 치료하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체를 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체를 치료하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)를 제공한다.

몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 활성화를 조정하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 또는 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)를 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 활성화를 조정하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체를 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 본 개시는, 보체 활성화를 조정하기 위한, 본 개시의 항C1s 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제제(약학적 조성물)를 제공한다. 몇몇 태양에 있어서, 항C1s 항체는, 보체 활성화를 저해한다.

추가의 국면에 있어서, 본 발명은, 의약품의 제조 또는 조제에 있어서의 항C1s 항체의 사용을 제공한다. 일 태양에 있어서, 의약품은, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료를 위한 것이다. 추가의 태양에 있어서, 의약품은, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에게 유효량의 해당 의약품을 투여하는 공정을 포함하는 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료 방법에 있어서 사용하기 위한 것이다. 하나의 그와 같은 태양에 있어서, 해당 방법은 추가로 유효량의 적어도 하나의 추가적인 치료제(예를 들어 후술하는 것)를 개체에게 투여하는 공정을 포함한다. 추가의 태양에 있어서, 의약품은, 혈장으로부터의 C1s의 클리어런스를 증강(또는 혈장으로부터 C1s를 제거)하는 데 사용하기 위한 것이다. 추가의 태양에 있어서, 의약품은, 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강(또는 혈장으로부터 C1r2s2를 제거)하는 데 사용하기 위한 것이다. 추가의 태양에 있어서, 의약품은, 혈장으로부터의 C1q의 클리어런스를 증강(또는 혈장으로부터 C1q를 제거)하지 않고 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강(또는 혈장으로부터 C1r2s2를 제거)하는 데 사용하기 위한 것이다. 추가의 태양에 있어서, 의약품은, 고전적 보체 경로의 성분의 저해에 있어서 사용하기 위한 것이고, 몇몇 예에 있어서, 고전적 보체 경로의 성분은 C1s이다.

추가의 태양에 있어서, 의약품은, 유효량의 해당 의약품을 개체에게 투여하는 공정을 포함하는, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체의 치료 방법에 있어서 사용하기 위한 것이다. 상기 태양의 어느 것에 있어서, 「개체」는 인간일 수 있다.

추가의 국면에 있어서, 본 발명은, 보체 개재성의 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다. 일 태양에 있어서, 해당 방법은, 그와 같은 보체 개재성의 질환 또는 상태를 갖는 개체에게 유효량의 항C1s 항체를 투여하는 공정을 포함한다. 하나의 그와 같은 태양에 있어서, 해당 방법은 추가로 유효량의 적어도 하나의 추가적인 치료제(후술되는 것)를 개체에게 투여하는 공정을 포함한다. 상기 태양의 어느 것에 있어서, 「개체」는 인간일 수 있다.

추가의 국면에 있어서, 본 발명은, 개체에 있어서 혈장으로부터의 C1s의 클리어런스를 증강(또는 혈장으로부터 C1s를 제거)하는 방법을 제공한다. 추가의 국면에 있어서, 본 발명은, 개체에 있어서 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강(또는 혈장으로부터 C1r2s2를 제거)하는 방법을 제공한다. 추가의 태양에 있어서, 본 발명은, 개체에 있어서 혈장으로부터의 C1q의 클리어런스를 증강(또는 혈장으로부터 C1q를 제거)하지 않고 혈장으로부터의 C1r2s2의 클리어런스를 증강(또는 혈장으로부터 C1r2s2를 제거)하는 방법을 제공한다. 몇몇 예에 있어서, 본 발명은, 개체에 있어서 고전적 보체 경로의 성분을 저해하는 방법을 제공하고, 몇몇 예에 있어서, 고전적 보체 경로의 성분은 C1s이다. 일 태양에 있어서, 「개체」는 인간이다.

추가의 국면에 있어서, 본 발명은, 예를 들어 상기의 치료 방법의 어느 것에 있어서 사용하기 위한, 본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체의 어느 것을 포함하는 약학적 제제를 제공한다. 일 태양에 있어서, 약학적 제제는, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료 또는 예방에 있어서의 사용을 위한 약학적 제제이며, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료제 또는 예방제라고도 칭해진다. 일 태양에 있어서, 약학적 제제는, 본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체의 어느 것과, 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 다른 태양에 있어서, 약학적 제제는, 본 명세서에서 제공되는 항C1s 항체의 어느 것과, 적어도 하나의 추가적인 치료제(예를 들어 후술되는 것)를 포함한다.

본 발명의 항체는, 요법에 있어서, 단독 또는 다른 제와의 조합의 어느 것으로도 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는, 적어도 하나의 추가의 치료제와 동시 투여되어도 된다.

전술한 바와 같은 병용 요법은, 병용 투여(2개 이상의 치료제가, 동일한 또는 상이한 제제에 포함된다), 및 개별 투여를 포함하고, 개별 투여의 경우, 본 발명의 항체의 투여가 추가 치료제의 투여에 앞서, 그와 동시에, 및/또는, 계속해서, 행해질 수 있다. 일 태양에 있어서, 항C1s 항체의 투여 및 추가 치료제의 투여는, 서로, 약 1개월 이내, 또는 약 1, 2, 또는 3주간 이내, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일 이내에 행해진다. 본 발명의 항체는, 방사선 요법과 조합하여 이용할 수 있다.

본 발명의 항체(및, 임의의 추가 치료제)는, 비경구 투여, 폐내 투여, 및 경비 투여, 또한 국소적 처치를 위해서 요망되는 경우는 병소내 투여를 포함하는, 임의의 호적한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은, 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는, 투여가 단기인지 장기인지에 일부 따르고, 예를 들어, 정맥내 주사 또는 피하 주사 등의 주사에 의하는 등, 임의의 호적한 경로에 의해 이루어질 수 있다. 이들로 한정되는 것은 아니지만, 단회투여 또는 여러 가지 시점에 걸친 반복 투여, 볼러스 투여, 및, 펄스 주입을 포함하는, 여러 가지 투여 스케줄이 본 명세서의 고려 내이다.

본 발명의 항체는, 우량 의료 규범(good medical practice)에 일치한 방식으로, 제제화되고, 투여되고, 또한 투여된다. 이 관점에서 고려되어야 할 인자는, 치료되고 있는 그 특정의 질환 또는 상태, 치료되고 있는 그 특정의 포유동물, 개개의 환자의 임상 증상, 질환 또는 상태의 원인, 제를 송달하는 부위, 투여 방법, 투여의 스케줄, 및 의료 종사자에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 항체는, 반드시 그렇지 않아도 되지만, 임의로, 문제의 질환 또는 상태를 예방하는 또는 치료하기 위해서 실제로 사용되고 있는 1개 또는 복수의 제와 함께, 제제화된다. 그와 같은 다른 제의 유효량은, 제제 중에 존재하는 항체의 양, 질환 혹은 상태 또는 치료의 타입, 및 전술한 다른 인자에 의존한다. 이들은 통상, 본 명세서에서 기술한 바와 같은 용량 및 투여 경로로, 또는 본 명세서에서 기술한 용량의 약 1 내지 99%로, 또는 경험적/임상적으로 적절하다고 판단되는 임의의 용량 및 임의의 경로로, 사용된다.

질환의 예방 또는 치료를 위해서, 본 발명의 항체의 적절한 용량(단독으로 이용될 때 또는 1개 또는 복수의 다른 추가 치료제와 함께 이용될 때)은, 치료되는 질환의 타입, 항체의 타입, 질환의 중증도 및 경과, 항체가 예방적 목적으로 투여되는지 치료적 목적으로 투여되는지, 약력, 환자의 임상력 및 항체에 대한 응답, 및, 주치의의 재량에 의존할 것이다. 항체는, 환자에 대해서, 1회로, 또는 일련의 처치에 걸쳐서, 호적하게 투여된다. 질환의 타입 및 중증도에 따라서, 예를 들어, 1회 또는 복수회의 따로따로의 투여에 의한다고 해도 연속 주입에 의한다고 해도, 약 1μg/kg 내지 15mg/kg(예를 들어, 0.1mg/kg~10mg/kg)의 항체가, 환자에 대한 투여를 위한 최초의 후보 용량이 될 수 있다. 하나의 전형적인 1일 용량은, 전술한 인자에 의존하여, 약 1μg/kg으로부터 100mg/kg 이상까지, 폭이 있어도 된다. 수일 또는 보다 장기간에 걸친 반복의 투여의 경우, 상황에 따라, 치료는 통상 질환 증상의 소망의 억제가 일어날 때까지 유지된다. 항체의 하나의 예시적인 용량은, 약 0.05mg/kg으로부터 약 10mg/kg의 범위 내이다. 따라서, 약 0.5mg/kg, 2.0mg/kg, 4.0mg/kg, 혹은 10mg/kg의 1개 또는 복수의 용량(또는 이들의 임의의 조합)이, 환자에게 투여되어도 된다. 이와 같은 용량은, 단속적으로, 예를 들어 1주간마다 또는 3주간마다(예를 들어, 환자가 약 2 내지 약 20, 또는 예를 들어 약 6용량의 항체를 받도록), 투여되어도 된다. 높은 초회 부하 용량 후에, 1회 또는 복수회의 저용량이 투여되어도 된다. 그렇지만, 다른 투여 레지멘이 유용한 경우도 있다. 이 요법의 경과는, 종래의 수법 및 측정법에 의해, 용이하게 모니터링 된다.

전술한 제제 또는 치료적 방법의 어느 것에 대해서도, 항C1s 항체 대신에 또는 그것에 추가하여, 본 발명의 이뮤노컨주게이트를 이용하여 실시해도 됨이, 이해될 것이다.

VIII. 제품

본 발명의 다른 국면에 있어서, 전술한 질환 또는 상태의 치료, 예방, 및/또는 진단에 유용한 기재를 포함하는 제품이, 제공된다. 제품은, 용기, 및 당해 용기 상의 라벨 또는 당해 용기에 부속되는 첨부 문서를 포함한다. 바람직한 용기로서는, 예를 들어, 보틀, 바이알, 시린지, IV 용액 백 등이 포함된다. 용기류는, 유리나 플라스틱 등의, 다양한 재료로부터 형성되어 있어도 된다. 용기는 조성물을 단체로 보지해도 되고, 증상의 치료, 예방, 및/또는 진단을 위해서 유효한 다른 조성물과 조합하여 보지해도 되고, 또한, 무균적인 액세스 포토를 갖고 있어도 된다(예를 들어, 용기는, 피하 주사바늘에 의해 꿰뚫을 수 있는 스토퍼를 갖는 정맥내 투여용 용액 백 또는 바이알이어도 된다). 조성물 중의 적어도 1개의 유효 성분은, 본 발명의 항체이다. 라벨 또는 첨부 문서는, 조성물이 선택된 증상을 치료하기 위해서 사용되는 것임을 나타낸다. 추가로 제품은, (a) 제 1 용기로서, 그 중에 수납된 본 발명의 항체를 포함하는 조성물을 수반하는, 제 1 용기; 및, (b) 제 2 용기로서, 그 중에 수납된 추가적인 세포 상해제 또는 그 이외에 치료적인 제를 포함하는 조성물을 수반하는, 제 2 용기를 포함해도 된다. 본 발명의 이 태양에 있어서의 제품은, 추가로 조성물이 특정의 증상을 치료하기 위해서 사용될 수 있음을 나타내는, 첨부 문서를 포함해도 된다. 혹은 또는 더하여, 제품은 추가로 주사용 제균수(BWFI), 인산 완충 생리 식염수, 링거 용액, 및 덱스트로스 용액 등의, 약학적으로 허용되는 완충액을 포함하는, 제 2(또는 제 3) 용기를 포함해도 된다. 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘, 및 시린지 등의, 다른 상업적 관점 또는 유저의 입장에서 바람직한 기재를 추가로 포함해도 된다.

전술한 제품의 어느 것에 대해서도, 항C1s 항체 대신에 또는 그것에 추가하여, 본 발명의 이뮤노컨주게이트를 포함해도 됨이, 이해될 것이다.

실시예

이하는, 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 전술한 일반적인 기재에 비추어, 여러 가지 다른 태양이 실시될 수 있음이, 이해될 것이다.

전술한 발명은, 명확한 이해를 돕는 목적 아래, 실례 및 예시를 이용하여 상세히 기재했지만, 본 명세서에 있어서의 기재 및 예시는, 본 발명의 범위를 한정하는 것이라고 해석되어서는 안 된다. 본 명세서에서 인용한 모든 특허문헌 및 과학문헌의 개시는, 그 전체에 걸쳐서, 참조에 의해 명시적으로 본 명세서에 원용된다.

실시예 1

재조합 C1r2s2의 조제

1.1. 인간 C1r2s2 4량체(hC1r2s2)의 발현 및 정제

발현 및 정제에 사용한 서열은, 인간 C1s(NCBI 레퍼런스 서열: NP_958850.1)(서열 번호: 1) 및 인간 C1r(NCBI 레퍼런스 서열: NP_001724.3)이다. 인간 C1r 서열은, R463Q 및 S654A 변이를 갖는다(서열 번호: 2). 재조합 인간 C1r2s2 4량체의 발현을 위해서, HEK293(Expi293(등록상표)) 세포주(Thermo Fisher, Carlsbad, CA, USA) 또는 FreeStyle(등록상표) 293-F 세포주(Thermo Fisher, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 인간 C1s 및 인간 C1r을 일과적으로 공발현시켰다. 재조합 인간 C1r2s2를 발현하는 배양 상청을 MilliQ(등록상표)수로 3배로 희석하고, 최종 농도 2mM이 되도록 CaCl₂(Wako)를 가하고, 1N NaOH로 pH를 8에 조정하고, 50mM Tris-HCl, 2mM CaCl₂, pH 8.0으로 평형화된 Q 세파로스 HP 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼(GE healthcare)에 제공하고, NaCl 구배를 이용하여 용출시켰다. 재조합 인간 C1r2s2 4량체를 포함하는 용출 획분을 수집하고, 농축하고, 계속해서, 1×TBS(Wako), 2mM CaCl₂ 완충액으로 평형화된 Superdex(등록상표) 200 겔 여과 컬럼(GE healthcare)에 제공했다. 그 다음에 재조합 인간 C1r2s2 4량체를 포함하는 획분을 풀링하고, 필요에 따라서 농축하고, -80℃에서 보관했다.

1.2. 필리핀원숭이 C1r2s2 4량체(cyC1r2s2)의 발현 및 정제

발현 및 정제에 사용한 서열은, 필리핀원숭이 C1s(서열 번호: 3) 및 필리핀원숭이 C1r이다. 필리핀원숭이 C1r 서열은 R463Q 및 S654A 변이를 갖는다(서열 번호: 4). 재조합 필리핀원숭이 C1r2s2 4량체의 발현을 위해서, HEK293(Expi293(등록상표)) 세포주(Thermo Fisher, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 필리핀원숭이 C1s 및 필리핀원숭이 C1r을 일과적으로 공발현시켰다. 재조합 필리핀원숭이 C1r2s2를 발현하는 배양 상청을 MilliQ(등록상표)수로 3배로 희석하고, 최종 농도 2mM가 되도록 CaCl₂(Wako)를 가하고, 1N NaOH로 pH를 8로 조정하고, 50mM Tris-HCl, 2mM CaCl₂, pH 8.0으로 평형화된 Q 세파로스 HP 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼(GE healthcare)에 제공하고, NaCl 구배를 이용하여 용출시켰다. 재조합 인간 C1r2s2 4량체를 포함하는 용출 획분을 수집하고, 농축하고, 계속해서, 1×TBS(Wako), 2mM CaCl₂ 완충액으로 평형화된 Superdex(등록상표) 200 겔 여과 컬럼(GE healthcare)에 제공했다. 그 다음에 재조합 필리핀원숭이 C1r2s2 4량체를 포함하는 획분을 풀링하고, -80℃에서 보관했다.

실시예 2

재조합 Fc감마 수용체의 조제

2.1 필리핀원숭이 Fc감마 수용체(cyFcγRs)의 조제

필리핀원숭이 Fc감마 수용체의 세포외 도메인의 유전자는, 당업자에게 알려져 있는 방법을 사용하여, 필리핀원숭이로부터 각 Fc감마 수용체의 cDNA를 클로닝하는 것에 의해 구축되었다. Fc감마 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 서열은 서열목록에 다음과 같이 나타난다: (필리핀원숭이 Fc감마 수용체 Ia [cyFcγRIa]에 대해서는 서열 번호 5, 필리핀원숭이 Fc감마 수용체 IIa1[cyFcγRIIa1]에 대해서는 서열 번호 6, 필리핀원숭이 Fc감마 수용체 IIa2[cyFcγRIIa2]에 대해서는 서열 번호 7, 필리핀원숭이 Fc감마 수용체 IIa3[cyFcγRIIa3]에 대해서는 서열 번호 8, 필리핀원숭이 Fc감마 수용체 IIb[cyFcγRIIb]에 대해서는 서열 번호 9, 필리핀원숭이 Fc감마 수용체 IIIa(R)[cyFcγRIIIa(R)]에 대해서는 서열 번호 10, 필리핀원숭이 Fc감마 수용체 IIIa(S)[cyFcγRIIIa(S)]에 대해서는 서열 번호 11). 다음에, His 태그를 코딩하는 유전자 서열은 각 유전자의 3´말단에 부가되었다. 얻어진 각 유전자는 포유동물 세포 발현용으로 설계된 발현 벡터에 당업자 공지의 방법에 따라 삽입되었다. 발현 벡터는 인간 태아 신장 세포 유래의 FreeStyle293 세포(Invitrogen)에 도입되고, 표적 단백질은 발현되었다. 배양 후, 얻어진 배양 상청은, 원칙적으로 이하의 4공정으로 여과·정제되었다. 최초의 스텝으로서 SP 세파로스 FF를 사용한 양이온 교환 크로마토그래피가 실행되었다. 2번째의 스텝으로서 His 태그에 대한 어피니티 크로마토그래피(HisTrap HP)가 실행되었다. 3번째의 스텝으로서 겔 여과 컬럼 크로마토그래피(Superdex200)가 실행되었다. 4번째의 스텝으로서 멸균 여과가 실행되었다. 정제 단백질의 280nm에서의 흡광도는 분광 광도계를 사용하여 측정되고, 정제 단백질의 농도는 PACE의 방법(Protein Science 4: 2411-2423(1995))에 의해 계산된 흡광 계수를 사용하여 결정되었다.

2.2 인간 Fc감마 수용체(hFcγRs)의 조제

인간 Fc감마 수용체의 세포외 도메인의 유전자 서열은, 인간 Fc감마 수용체 Ia(NCBI 레퍼런스 서열: NM_000566.3) 인간 Fc감마 수용체 IIa(NCBI 레퍼런스 서열: NM_001136219.1) 인간 Fc감마 수용체 IIb(NCBI 레퍼런스 서열: NM_004001.3) 인간 Fc감마 수용체 IIIa(NCBI 레퍼런스 서열: NM_001127593.1) 인간 Fc감마 수용체 IIIb(NCBI 레퍼런스 서열: NM_000570.3)로부터 취득되고, 다형 부위에 관해서는 다음의 문헌을 참고로 하여 설계되었다(인간 Fc감마 수용체 IIa에 대해서는 Warmerdam, P. A. M. et al., 1990, J. Exp. Med. 172:19-25, 인간 Fc감마 수용체 IIIa에 대해서는 Wu, J. et al., 1997, J. Clin. Invest. 100(5):1059-1070, 인간 Fc감마 수용체 IIIb에 대해서는 Ory, P. A. et al., 1989, J. Clin. Invest. 84:1688-1691).

발현 및 정제에 사용한 Fc감마 수용체의 세포외 도메인의 아미노산 서열은 서열목록에 다음과 같이 나타났다: (인간 Fc감마 수용체 Ia [hFcγRIa]에 대해서는 서열 번호 12, 인간 Fc감마 수용체 IIa_167R [hFcγRIIa_167R]에 대해서는 서열 번호 13, 인간 Fc감마 수용체 IIa_167H [hFcγIIa_167H]에 대해서는 서열 번호 14, 인간 Fc감마 수용체 IIb [hFcγRIIb]에 대해서는 서열 번호 15, 인간 Fc감마 수용체 IIIa_176F [hFcγRIIIa_176F]에 대해서는 서열 번호 16, 인간 Fc감마 수용체 IIIa_176V [hFcγRIIIa_176V]에 대해서는 서열 번호 17, 인간 Fc감마 수용체 IIIb_NA1[hFcγRIIIb_NA1]에 대해서는 서열 번호 18, 인간 Fc감마 수용체 IIIb_NA2[hFcγRIIIb_NA2]에 대해서는 서열 번호 19). 다음에, His 태그를 C말단에 부가하고, 얻어진 각 유전자는 포유동물 세포 발현용으로 설계된 발현 벡터에 당업자 공지의 방법에 따라 삽입되었다. 발현 벡터는 인간 태아 신장 세포 유래의 FreeStyle293 세포(Invitrogen)에 도입되고, 표적 단백질은 발현되었다. 배양 후, 얻어진 배양 상청은, 원칙적으로 이하의 4공정, 혹은 최초의 음이온 교환 크로마토그래피의 공정을 제외한 3공정으로 여과·정제되었다. 최초의 스텝으로서 Q Sepharose Fast Flow(GE Healthcare)를 사용한 음이온 교환 크로마토그래피가 실행되었다. 2번째의 스텝으로서 HisTrap HP(GE Healthcare)를 사용하여 His 태그에 대한 어피니티 크로마토그래피가 실행되었다. 3번째의 스텝으로서 HiLoad 26/600 Superdex 200 pg(GE Healthcare)를 이용하여 겔 여과 컬럼 크로마토그래피가 실행되었다. 4번째의 스텝으로서 멸균 여과가 실행되었다. 정제 단백질의 280nm에서의 흡광도는 분광 광도계를 사용하여 측정되고, 정제 단백질의 농도는 PACE의 방법(Protein Science 4:2411-2423(1995))에 의해 계산된 흡광 계수를 사용하여 결정되었다.

실시예 3

항C1s 항체의 조제

3.1. IPN009VH2VK3-SG1148의 조제

항C1s 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역인 IPN009VH2(서열 번호: 20) 및 IPN009VK3(서열 번호: 21)(WO2019/098212에 기재와 같이)의 폴리뉴클레오티드를 합성했다. 이 중쇄 및 경쇄 가변 영역을, 각각 중쇄 정상 영역 SG1148(서열 번호: 22) 및 경쇄 정상 영역 SK1(서열 번호: 23)을 함유하는 발현 벡터에 클로닝했다.

제조원의 지시에 따라 Expi293(등록상표) F 세포(Life technologies)를 이용하여, 항C1s 항체 IPN009VH2VK3-SG1148을 일과적으로 발현시켰다. 재조합 항체는 프로틴 A(GE Healthcare)를 이용하여 정제하여, D-PBS, Tris 완충 생리 식염수(Tris Buffered Saline; TBS) 또는 His 완충액(20mM 히스티딘, 150mM NaCl, pH 6.0)에 용출시켰다. 필요에 따라서, 사이즈 배제 크로마토그래피를 추가로 행하여, 고분자량 및/또는 저분자량 성분을 제거했다.

3.2. pH 의존성 및 등전점이나 Fc감마 수용체에의 결합성을 최적화한 항C1s 항체의 창제, 및 각종 항C1s 항체의 조제

혈장으로부터의 C1s의 클리어런스를 증강하는 항C1s 스위핑 항체를 창제하고, 장기간의 혈중 C1s의 중화를 달성하기 위해서, FcγR에의 결합이 증강된 중쇄 정상 영역 SG1077R(인간용 TT91R에 대응한 필리핀원숭이 서로게이트 Fc)이 3개의 Fab(COS0637pHv2, COS0637pHv3, COS0637pHv8(일본 특허출원 2019-189148))에 각각 연결된 3항체가 조제되었다(서열은 표 1 참조.). 이들 항체를 이용하여 원숭이 약물 동태(PK) 시험이 실시되었지만, 모든 항체의 PK 프로파일은 일반적인 치료용 항체보다도 뒤떨어지고, 보체 활성도 장기간 억제할 수 없었다 (실시예 4, 10). 가장 PK가 뒤떨어진 COS0637pHv2-SG1077R과 약간 PK가 우수한 COS0637pHv3-SG1077R, COS0637pHv8-SG1077R을 비교한 바, COS0637pHv3-SG1077R, COS0637pHv8-SG1077R은 COS0637pHv2-SG1077R에 비해 이론 등전점(pI)이 낮았다(각각, 8.76(COS0637pHv3-SG1077R), 8.76(COS0637pHv8-SG1077R), 9.27(COS0637pHv2-SG1077R)). 또한 Fab의 결합성을 비교한 바, COS0637pHv3, COS0637pHv8은 COS0637pHv2에 비해 pH 의존성이 강했다(일본 특허출원 2019-189148: KD(pH 5.8)/KD(pH 7.4)=44(COS0637pHv2), 278(COS0637pHv3), 117(COS0637pHv8)). 그래서 항C1s 항체의 PK는 pH 의존성의 추가적인 증강과 pI의 저하에 의해 더 개선될 수 있을 것이라는 가설을 세워 검증을 행했다. 또한, FcγR에의 결합과 PK에의 영향을 고찰하기 위해서, COS0637pHv2-SG1077R과 COS0637pHv2-SG1077R의 필리핀원숭이 FcγR에의 결합을 모두 사일런트로 한 COS0637pHv2-FcgSil(표 9, 10)의 원숭이 PK 시험이 행해졌다(실시예 4). 그 결과, 항C1s 항체 COS0637pHv2-SG1077R의 PK는 FcγR에의 결합을 사일런트로 함으로써 개선됨을 알 수 있었다. 이상의 결과에 기초하여, Fab와 Fc의 양면으로부터의 최적화에 의한 동태 개선이 실시되었다. 원숭이 PK 시험에 사용한 항체 일람 및 서열 번호는 표 1에 나타났다. 또한 결합 시험의 컨트롤에 이용된 항체 COS0637pHv8-TT91R, COS0637pHv3-TT91R의 서열도 표 1에 나타났다.

(표 1) 원숭이 PK 시험에 이용한 항체 및 결합 시험의 컨트롤에 이용한 항체 명칭 및 서열 번호 대응

약물 동태 및 약효 개선을 목적으로 한 항체 최적화를 위해서, 높은 pH 의존성이 확인된 COS0637pHv8-TT91R의 Fab(실시예 5)를 주형으로 하여 pH 의존성을 향상시키는 Fab 상의 아미노산 개변과 pI 저하 및 FcγR에의 결합을 저감시키는 Fc 상의 아미노산 개변이 탐색되었다.

우선, pH 의존성을 향상시키기 위해서, COS0637pHv8에 아미노산 개변을 가함으로써, 표 2에 기재된 pH 의존성이 개선된 항체가 작성되었다(pH 의존성의 개선은 실시예 5에 나타났다).

(표 2) pH 의존성을 향상시킨 항체 명칭 및 서열 번호 대응

또한, 이들 항체는 모두 C1q와 C1r2s2 복합체(C1qrs 복합체)에 결합하여 C1qrs 복합체로부터의 C1q의 해리를 촉진하는 「해리 촉진 기능/활성」 또는 「C1q 해리 촉진 기능/활성」을 가짐이 나타났다(실시예 6).

더욱이, pI가 저하되어 FcγR에의 결합이 억제된 중쇄 정상 영역 (G1A3FcgSil+Low pI)이 작성되었다(실시예 7, 8). 천연형 IgG1 서열에 대해서 도입된 G137E, H268Q, K274Q, R355Q, Q419E(어느 번호도 EU 넘버링 시스템에 의한다)의 개변은 pI를 저하시켰다. 또한, 천연형 IgG1 서열에 대해서 도입된 L235R, G236R의 개변은 FcγR에의 결합을 억제했다.

이들 Fab 서열과 중쇄 정상 영역 서열을 조합하는 것에 의해 pH 의존성이 개선되어 pI가 저하되고, FcγR에의 결합성이 억제된 분자가 작성되었다(표 3). 또한, pH 의존성이 더 개선된 이들 항C1s Fab 서열은 예를 들어 TT91R나 SG1077R 등의 FcγR에의 결합이 증강된 스위핑 항체용의 Fc와 조합함으로써 pH 의존성이 낮았던 항체보다, 보다 높은 스위핑 능력 및 보다 장기간의 보체 활성 중화능을 발휘할 수 있다.

(표 3) pH 의존성을 향상시킨 Fab에 pI를 저하 및 FcγR에의 결합을 억제한 Fc를 조합한 항체 명칭 및 서열 번호 대응

각 항체 서열은 중쇄 가변 영역(VH)을 코딩하는 유전자를 합성하고, 개변된 인간 IgG1 중쇄 정상 영역(CH)(SG1, 서열 번호: 65), 개변 인간 IgG1 CH, 예를 들어, SG1077R(서열 번호: 42), FcgSil(서열 번호: 43), TT91R(서열 번호: 44), G1A3FcgSil+Low pI(서열 번호: 45), 및 SG1148(서열 번호: 22)과 조합했다. 경쇄 가변 영역(VL)을 코딩하는 유전자를 합성하고, 인간 경쇄 정상 영역(CL)(SK1, 서열 번호: 23)과 조합했다. 조합한 이들 서열은 발현 벡터에 당업자 공지의 방법으로 클로닝되었다.

중쇄 및 경쇄의 발현 벡터의 혼합물이 공도입된 HEK293 세포에 항체를 발현시키고, 각 항체는 회수한 배양 상청으로부터 프로틴 A 혹은 프로틴 G에 의해 당업자 공지의 방법으로 정제되었다. 필요에 따라서, 추가로 겔 여과가 했해졌다.

실시예 4

항C1s 항체의 in vivo 시험

필리핀원숭이에 의한 in vivo 시험

항C1s 항체 투여 후의 혈장 중의 항체 및 내인성 C1s 농도를 캄보디아산의 3세 내지 5세의 필리핀원숭이를 이용한 in vivo 시험으로 평가했다(주식회사 신닛폰 과학). 항C1s 항체는, 디스포저블 주사통 및 유치침(留置針)을 이용하여 전완 요측피(撓側皮) 정맥 내에 10mg/kg의 용량으로 투여했다. 0.5mL/kg/min 혹은 2mL/min의 속도로 투여했다. COS0637pHv2-SG1077R에 대해서는, 투여 전, 투여 5분 후, 2시간 후, 8시간 후, 1일 후, 2일 후, 4일 후, 7일 후, 14일 후, 21일 후, 28일 후, 42일 후 및 56일 후에 혈액을 채취했다. 그 외의 항체에 대해서는, 추가로 투여 10일 후에도 채혈을 실시했다. 혈액은 대퇴 정맥으로부터 헤파린나트륨가 주사통을 이용하여 채취했다. 혈액은 신속하게 빙랭한 후, 원심분리(4℃, 1700×g, 5분 혹은 10분간)하여, 혈장을 분취했다. 혈장은 초저온 냉각기(허용 범위: -70℃ 이하)에서 동결 보관했다. 투여된 항C1s 항체는, COS0637pHv2-SG1077R, COS0637pHv3-SG1077R, COS0637pHv8-SG1077R 및 COS0637pHv2-FcgSil의 4항체이다.

전기 화학 발광(ECL)법에 의한 혈장중 항체 농도 측정

필리핀원숭이 혈장 중의 COS0637pHv2-SG1077R 및 COS0637pHv2-FcgSil 농도는 ECL법에 의해 측정했다. MULTI-ARRAY 96-well 플레이트(Meso Scale Discovery)에 항인간 IgG Fc 마우스 항체(SouthernBiotech, 9040-01)를 분주하고, 실온에서 1시간 정치하여 고상화했다. 검량선 및 필리핀원숭이 혈장 샘플은 100배 이상 희석했다. 검량선은, 필리핀원숭이 혈장중 농도로서 0.410, 1.02, 2.56, 6.40, 16.0, 40.0 및 100μg/mL로 조제했다. 항인간 IgG Fc항체를 고상화한 플레이트를 세정한 후, 희석한 샘플을 플레이트에 첨가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 플레이트를 세정 후, 비오틴화한 항인간 IgG 항체(Bethyl Laboratories, A80-319A)를 첨가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 플레이트를 세정 후, SULFO-TAG Streptavidin(Meso Scale Discovery)을 첨가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 플레이트를 세정 후, Read Buffer T(x2)(Meso Scale Discovery)를 즉시 플레이트에 첨가하고, SECTOR Imager 2400(Meso Scale Discovery)으로 시그널을 검출했다. 각 항체 농도는, 검량선의 시그널을 기초로 해석 소프트웨어 SOFTmax PRO(Molecular Devices)를 이용하여 산출했다. 본 측정에 의해 얻어진 혈장중 항체 농도 추이는 도 1a에 나타낸다.

고속 액체 크로마토그래피 접속형 일렉트로스프레이 이온화 질량 분석계 (LC/ESI-MS/MS)에 의한 혈장중 항체 농도 측정

필리핀원숭이 혈장 중의 COS0637pHv3-SG1077R 및 COS0637pHv8-SG1077R 농도는 LC/ESI-MS/MS에 의해 측정했다. 검량선은, 필리핀원숭이 혈장중 농도로서 0.781, 1.56, 3.13, 6.25, 12.5, 25.0 및 50μg/mL로 조제했다. 검량선 및 혈장 샘플 2μL를 50μL의 COS0637pHv3-SG1077R 내지 COS0637pHv8-SG1077R에 특이적으로 결합하는 항체를 고상화한 자기 비즈(Magnosphere MS300/Low Carboxyl, JSR)에 첨가하고, 25℃에서 1.5시간 진탕했다. 샘플 중의 자기 비즈를 0.2mL의 0.05% Tween 20 들어간 PBS로 3번 세정 후, 0.2mL의 PBS로 세정했다. 자기 비즈는 24μL의 7.5mol/L 요소, 8mmol/L 다이싸이오트레이톨 및 0.1μg/mL 리소자임(chicken egg white)을 포함하는 50mmol/L ammonium bicarbonate 중에서 현탁된 후, 56℃에서 45분간 진탕했다. 계속해서, 500mmol/L 아이오딘 아세트아마이드 2μL를 첨가하고, 차광하에서, 37℃에서 30분간 진탕했다. 계속해서, 0.5μg/mL sequencing grade modified trypsin(Promega)을 포함하는 50mmol/L ammonium bicarbonate를 160μL 첨가했다. 샘플은 37℃에서 16시간 진탕하고, 10% 트라이플루오로아세트산을 5μL 첨가하여 반응을 정지했다. 효소 소화 샘플 50μL를 LC/ESI-MS/MS에 의한 분석에 사용했다. LC/ESI-MS/MS 분석에는 I-class UPLC(Waters)를 접속한 Xevo TQ-S triple quadrupole instrument(Waters)를 사용했다. 항C1s 항체 특이적 펩티드 NQVSLTC(Carbamidomethyl) LVK는 선택적 반응 모니터링(SRM)으로 검출했다. SRM 트랜지션은, 항C1s 항체의 친이온이 [M+2H]²⁺(m/z 581.3), 딸 이온이 y⁷ ion(m/z 820.4)이다. 내부 교정 검량선은, 농도와 피크 면적을 이용한 직선 회귀에 의해 1/x²의 가중으로 작성되었다. 필리핀원숭이 혈장 중의 항체 농도는, 해석 소프트웨어 Masslynx Ver. 4.1(Waters)을 이용하여 산출되었다. 본 측정에 의해 얻어진 혈장중 항체 농도 추이는 도 1a에 나타낸다.

고속 액체 크로마토그래피 접속형 일렉트로스프레이 이온화 질량 분석계 (LC/ESI-MS/MS)에 의한 혈장중 내인성 C1s 농도 측정

필리핀원숭이 혈장 중의 C1s 농도는 LC/ESI-MS/MS에 의해 측정했다. 검량선은, 필리핀원숭이 C1r2s2를 마우스 혈장으로 희석하여 필리핀원숭이 C1s 혈장중 농도로서 0.477, 0.954, 1.91, 3.82, 7.63, 15.3 및 30.5μg/mL로 조제했다. 필리핀원숭이 혈장 샘플은 마우스 혈장을 이용하여 5배로 희석했다. 검량선 및 혈장 샘플 2μL는 26μL의 50mmol/L ammonium bicarbonate 혼합 용액(7.5mol/L 요소/100mmol/L 다이싸이오트레이톨/10μg/mL 리소자임(chicken egg white)/100μg/mL 인간 C1s = 20/2/2/2)과 혼합된 후, 56℃에서 45분간 진탕했다. 인간 C1s는 내부 표준으로서 사용했다. 계속해서, 500mmol/L 아이오딘 아세트아마이드 2μL를 첨가하고, 차광하에서, 37℃에서 30분간 진탕했다. 계속해서, 0.5μg/mL sequencing grade modified trypsin(Promega)을 포함하는 50mmol/L ammonium bicarbonate를 160μL 첨가했다. 샘플은 37℃에서 16시간 진탕한 후, 10% 트라이플루오로아세트산을 5μL 첨가하여 반응을 정지했다. 효소 소화 샘플 50μL를 LC/ESI-MS/MS에 의한 분석에 사용했다. LC/ESI-MS/MS 분석에는 I-class UPLC(Waters)를 접속한 Xevo TQ-S triple quadrupole instrument(Waters)를 사용했다. 필리핀원숭이 C1s 특이적 펩티드 LLEVPEAR은 선택적 반응 모니터링(SRM)으로 검출했다. SRM 트랜지션은, 항C1s 항체의 친이온이 [M+2H]²⁺(m/z 463.8), 딸 이온이 y⁶ ion(m/z 700.4)이다. 내부 교정 검량선은, 농도와 피크 면적을 이용한 직선 회귀에 의해 1/x²의 가중으로 작성되었다. 필리핀원숭이 혈장 중의 C1s 농도는, 해석 소프트웨어 Masslynx Ver. 4.1(Waters)을 이용하여 산출되었다. 본 측정에 의해 얻어진 혈장중 C1s 농도 추이는 도 1b에 나타낸다.

필리핀원숭이에 있어서의 항C1s 항체 농도 및 보체 저해 활성에 대한 pH 의존성 및 FcγR silent 항체의 효과

원숭이 FcγRIIa 및 FcγRIIb 에 대한 결합 증강 개변을 가한 Fc를 갖는 3종의 항C1s 항체(COS0637pHv2-, COS0637pHv3- 및 COS0637pHv8-SG1077R)는, 투여 2일 후에까지 혈장 중의 C1s 농도를 최대로 투여 전의 18.9%로부터 26.4%까지 저하시켰다(도 1b). 그러나, 이들 항체의 소실은 통상의 치료용 IgG 항체에 비해 빨라(도 1a), 투여 후 14일 이후에 혈장 중의 항체 농도의 저하와 함께 총C1s 농도의 재증가가 보였다. 단, 항원 결합에 대한 pH 의존성을 개선한 COS0637pHv3- 및 COS0637pHv8-SG1077R에서는, COS0637pHv2- SG1077R에 비해 항체 PK의 개선이 보였다. 이것에 의해, COS0637pHv2- SG1077R 투여 시의 보체 저해 활성이 투여 후 7일까지인데 반해, COS0637pHv3- 및 COS0637pHv8-SG1077R 투여 시의 보체 저해 활성은 투여 후 14일 및 21일까지 지속되어, 장기간의 항원 중화 및 보체 저해를 나타냈다(도 4).

한편, 원숭이 FcγRs에 대한 결합을 저하시키는 개변을 가한 Fc를 갖는 항C1s 항체인 COS0637pHv2-FcgSil은, 원숭이 FcγRIIa 및 FcγRIIb 결합 증강 개변 항체와 비교하여 양호한 PK를 나타냈다(도 1a). COS0637pHv2-FcgSil 투여 시의 보체 저해 활성은 투여 후 14일까지 지속했다(도 4). COS0637pHv2-FcgSil 투여 시의 총C1s 농도는, 최대로 투여 전의 75.5%까지밖에 저하되지 않았지만(도 1b), PK의 개선에 의해 COS0637pHv2- SG1077R과 비교하여 장기간의 항원의 중화 및 보체 저해 활성을 나타냈다.

실시예 5

Biacore(등록상표)를 이용한 다른 pH 조건하에서의 결합 평가

pH 7.4 및 pH 6.0에 있어서의 각 샘플의 결합 특성은, 37℃에서 BIACORE(등록상표) T200 기기(Cytiva)를 이용하여 결정되었다. 우선 항인간 C1r2s2 항체 IPN009VH2Vk3-SG1148(IPN009)이, Amine Coupling Kit, type2(Cytiva)를 이용하여 CM5 센서 칩의 모든 플로 셀 상에 고정화되었다. 20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 1mg/mL BSA(IgG 비함유), 1mg/mLCMD, 0.05% Tween(등록상표) 20, 0.005w/v% NaN₃, pH 7.4 또는 pH 6.0 완충액이 러닝 버퍼로서 이용되었다. 다음에, 결합 리스폰스가 100Resonance unit(RU)이 되도록 조제된 재조합 인간 C1r2s2 4량체(hC1r2s2) 및 재조합 필리핀원숭이 C1r2s2 4량체(cyC1r2s2)가, IPN009에 의해 센서 표면에 포착되었다. 여기에, 30μL/min으로 항체 용액이 120초 주입된 후, 30μL/min으로 러닝 버퍼가 180초 주입됨으로써, hC1r2s2 및 cyC1r2s2에 대한 각 항체의 해리 상수(KD)가 산출되었다. 한편, pH 7.4에서의 KD치의 산출에는, pH 7.4의 러닝 버퍼를 이용하여 0, 0.8, 1.6, 3.1, 6.3, 13nM이 되도록 희석된 항체 용액이 주입되고, pH 6.0에서의 KD치의 산출에는, pH 6.0의 러닝 버퍼를 이용하여 0, 6.3, 12.5, 25, 50, 100nM이 되도록 조제된 항체 용액이 주입되었다. 사이클마다, 3M MgCl₂(자가 조제품)를 이용하여 센서 표면이 재생되었다. K_D치는 BIACORE(등록상표) T200 evaluation software version 2.0(Cytiva)을 이용하여 산출되었다. 또한, 각 pH 조건에서의 결합의 강도는, pH 6.0에서의 KD치를 pH 7.4에서의 KD치로 나누는 것에 의해 비교되었다. (표 4)

(표 4) 인간 C1r2s2 항체에 대한 산성 조건하 및 중성 조건하의 결합 활성

Biacore를 이용하여 산출한 인간 C1r2s2에 대한 pH 6.0 및 pH 7.4에 있어서의 KD치 및, pH 7.4에서의 KD치에 대한 pH 6.0에서의 KD치의 비를 나타냈다.

(표 5) 필리핀원숭이 C1r2s2 항체에 대한 산성 조건하 및 중성 조건하의 결합 활성

Biacore를 이용하여 산출한 원숭이 C1r2s2에 대한 pH 6.0 및 pH 7.4에 있어서의 KD치 및, pH 7.4에서의 KD치에 대한 pH 6.0에서의 KD치의 비를 나타냈다.

실시예 6

항C1s 항체의 C1q 해리 촉진 기능의 평가

항체의 C1q 해리 촉진 기능은, 37℃에서 BIACORE(등록상표) T200 기기(Cytiva)를 이용한 C1r2s2 포착법에 의해 실증되었다. 항인간 C1r2s2 항체 IPN009VH2Vk3-SG1148은, Amine Coupling Kit, type2(Cytiva)를 이용하여 CM5 센서 칩 상에 고정화되었다. 항체, 재조합 인간 C1r2s2 4량체(hC1r2s2), 및 천연형 인간 C1q(CompTech, hC1q)는, pH 7.4의 러닝 버퍼(20mM ACES, 150mM NaCl, 1.2mM CaCl₂, 1mg/mL BSA(IgG 비함유), 1mg/mL CMD, 0.05% Tween(등록상표) 20, 0.005w/v% NaN₃, pH 7.4)로 조제되었다. 최초에, hC1r2s2가, IPN009VH2Vk3-SG1148에 의해 센서 표면에 포착되었다. 포착량은, 200공명 단위(RU)를 목표로 했다. 다음에, 100nM이 되도록 러닝 버퍼로 희석된 hC1q가 주입되고, 그 후 즉시 러닝 버퍼로 500nM에 희석된 항체 용액이 10μL/분으로 1500초간 주입되었다. 센서 표면은 사이클마다 3M MgCl₂(자가 조제품)를 이용하여 재생되었다. 결과를 도 2a~2-14에 나타낸다. 센서그램은 BIACORE(등록상표) T200 evaluation software, version 2.0(Cytiva)을 이용하여 취득되었다. 실선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입한 후에 완충액을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+C1q)이며, 센서 칩 표면의 C1qrs 복합체 형성을 반영하고 있다(이후, 센서그램 1로 기재). 일점쇄선은, hC1r2s2에 hC1q를 주입 후, 항체의 주입을 실시했을 때의 센서그램(C1r2s2+C1q+Ab)이며, 센서 칩 표면의 C1qrs 복합체에 항체가 미치는 영향을 반영하고 있다(이후, 센서그램 2로 기재). 파선은, hC1r2s2에 hC1q는 주입하지 않고 항체만을 주입했을 때에 취득된 센서그램(C1r2s2+Ab)이며, 센서 칩 표면의 hC1r2s2만에의 항체의 결합을 도시하고 있다(이후, 센서그램 3으로 기재). 도 2a~2-14는 센서그램 1~3을 나타낸다. 이들 센서그램의 비교를 위해, C1r2s2의 결합 응답을 100RU로서 노멀라이즈했다.

항C1s 항체는, C1qrs에 결합하기 때문에, C1q 첨가 후의 타임 포인트로부터, 항체를 첨가하면 센서그램의 응답이 상승한다. C1q 해리 촉진 기능을 갖지 않는 C1s 항체에 대해서는, C1q 첨가 후의 타임 포인트로부터, 항체를 첨가하면 센서그램의 응답이 상승하고, 그 응답 단위가 항체 첨가 종료 시에 거의 변화하지 않는다(인용: WO2019198807, Fig2A의 COS0583).

C1q 해리 촉진 기능을 갖는 항체에 대해서는, C1q 첨가 후의 타임 포인트로부터, 항체를 첨가하면 센서그램의 응답이 상승하지만, 항체 첨가 종료 시의 응답 단위는, C1q 첨가 후에 Buffer만을 첨가했을 경우에 있어서의 응답 단위보다도 낮거나, 또는 항체 첨가 개시 직후에 대한 첨가 종료 시의 저하 정도가, Buffer만을 첨가했을 경우의 저하 정도보다도 크다.

도 2a~2n에 있어서의 센서그램 3으로부터, 각 Ab는, C1q의 비존재하에서 C1r2s2에 안정적으로 결합할 수 있다고 생각되었다. 센서그램 1에서는, Ab의 비존재하에서 C1q가 안정적으로 C1r2s2에 결합했다. 게다가, 대부분의 항체에 있어서, 센서그램 2의 항체 첨가 종료 후의 응답 단위는, 센서그램 1보다 낮아지고, 몇몇 항체에서, 센서그램 2에서의 항체 첨가 직후에 대한 첨가 종료 시의 응답 단위의 저하 정도가, 센서그램 1에서의 저하 정도보다도 컸다. 이 결과로부터, 모든 개변 항체는, C1qrs 복합체로부터 C1q를 해리시킬 수 있었다.

실시예 7

항C1s 항체의 등전점(pI)의 평가

4.1. 캐필러리 등전점 전기영동(cIEF)을 이용한 항C1s 항체의 등전점(pI)의 측정

cIEF는, 캐필러리 카트리지를 이용하여 Maurice(Protein simple)에서 행해졌다. 양극액 및 음극액은, 각각 0.1w/v% 메틸 셀룰로스(MC)를 포함하는 0.08 M 인산, 및 0.1w/v% MC를 포함하는 0.1M 수산화 나트륨이었다. 모든 해석 샘플은, 작용 0.2mg/mL 항체, 0.35w/v% MC, 6.0mM IDA(이미노 2아세트산), 10mM 아르기닌, 0.5w/v% pI 마커 5.85 및 0.5w/v% pI 마커 9.99, 및 2vol% pharmalyte 8-10.5 및 2vol% pharmalyte 5-8을 포함하고 있었다. 모든 샘플은, 오토샘플러의 컴파트먼트에 들어가기 전에 볼텍스되어, 짧게 원심되었다. 샘플은 1분간 1.5kV로 계속되는 각 7분간 3.0kV의 조건에서 집속되었다. 오토샘플러의 컴파트먼트는, 10℃로 유지되었다. 각 샘플의 pI치는, 측정을 2회 반복하여, n=2의 측정치의 평균을 계산하는 것에 의해 얻어졌다. 산출된 pI치는 표 6에 나타낸다.

(표 6) pI를 저하 및 FcγRs에의 결합을 억제한 Fc를 갖는 각 항C1s 항체의 실측 pI

Maurice(Protein simple)를 이용하여 측정한 각 항체의 pI를 나타낸다. pI의 값은 2회 측정한 값의 평균치이다.

실시예 8

FcγR에의 결합 확인

pH 7.4에 있어서의 각 샘플의 FcγRs에 대한 결합 특성은, 25℃에서 BIACORE(등록상표) T200 기기(Cytiva)를 이용하여 결정되었다. 우선 프로틴 L(BioVision)은, Amine Coupling Kit, type 2(Cytiva)를 이용하여 CM4 센서 칩의 모든 플로 셀 상에 고정화되었다. 150mM NaCl, 0.05% Tween(등록상표) 20을 포함하는 50mM 인산 완충액(pH 7.4)를 러닝 버퍼로서 사용하여, 결합 리스폰스가 500RU 혹은 2000RU가 되도록 조제된 항체가 센서 표면에 포착되었다. 여기에, 러닝 버퍼로 희석한 인간 및 원숭이 FcγRs를 주입하여, 항체에의 결합량이 측정되었다. 이 때, hFcγRIa 및 cyFcγRIa는 8nM로 희석하고, 그 외는 1000nM로 희석했다. 사이클마다, 10mM 글리신 염산 용액, pH 1.5(자가 조제품)를 이용하여 센서 표면이 재생되었다. 얻어진 측정 결과로부터, BIACORE(등록상표) T200 evaluation software, version 2.0(Cytiva)을 이용하여, FcγR의 결합량을, 포착한 각 항체의 결합량으로 나눈 값(Binding/capture)을 산출했다(표 7 및 표 9). 추가로 이 결과로부터, Herceptin(추가이 제약 주식회사)(인간 IgG1/kappa)에서 얻어진 Binding/capture의 값을 1로 했을 때의, 그 외의 검체에서의 Binding/capture의 값을 표에 나타냈다(표 8 및 표 10).

(표 7) 인간 FcγRs에의 포착 항체 1RU당의 응답치

Biacore를 이용하여 산출한 인간 FcγRs에 대한 Binding/capture의 값을 나타냈다.

(표 8) 인간 FcγRs에의 상대 결합 비율

Biacore를 이용하여 산출한 인간 FcγRs에 대한 Binding/capture의 값으로부터, Herceptin에 대한 개발 항체의 상대 결합 비율을 산출했다.

(표 9) 필리핀원숭이 FcγRs에의 포착 항체 1RU당의 응답치

Biacore를 이용하여 산출한 원숭이 FcγRs에 대한 Binding/capture의 값을 나타냈다.

(표 10) 필리핀원숭이 FcγRs에의 상대 결합 비율

Biacore를 이용하여 산출한 원숭이 FcγRs에 대한 Binding/capture의 값으로부터, Herceptin에 대한 개발 항체의 상대 결합 비율을 산출했다.

실시예 9

필리핀원숭이에 의한 in vivo 시험

실시예 4와 마찬가지의 방법으로 시험을 실시했다. 투여된 항C1s 항체는, COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 및 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI의 2항체이다.

고속 액체 크로마토그래피 접속형 일렉트로스프레이 이온화 질량 분석계(LC/ESI-MS/MS)에 의한 혈장중 항체 농도 측정

필리핀원숭이 혈장 중의 COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 및 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI 농도는 LC/ESI-MS/MS에 의해 측정했다. 검량선은, 필리핀원숭이 혈장중 농도로서 0.781, 1.56, 3.13, 6.25, 12.5, 25.0 및 50μg/mL로 조제했다. 검량선 및 혈장 샘플 2μL를 50μL의 COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 내지 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI에 특이적으로 결합하는 항체를 고상화한 자기 비즈(Magnosphere MS300/Low Carboxyl, JSR)에 첨가하고, 원심 후 25℃에서 1.5시간 진탕했다. 샘플 중의 자기 비즈를 0.2mL의 0.05% Tween 20 들어간 PBS로 3번 세정 후, 0.2mL의 PBS로 세정했다. 자기 비즈는 24μL의 7.5mol/L 요소, 8.3mmol/L 다이싸이오트레이톨 및 0.083μg/mL 리소자임(chicken egg white)을 포함하는 50mmol/L ammonium bicarbonate 중에서 현탁된 후, 56℃에서 45분간 진탕했다. 계속해서, 500mmol/L 아이오딘 아세트아마이드 2μL를 첨가하고, 차광하에서, 37℃에서 30분간 진탕했다. 계속해서, 0.5μg/mL sequencing grade modified trypsin(Promega)을 포함하는 50mmol/L ammonium bicarbonate를 160μL 첨가했다. 샘플은 37℃에서 하룻밤 진탕하고, 10% 트라이플루오로아세트산을 5μL 첨가하여 반응을 정지했다. 효소 소화 샘플 50μL를 LC/ESI-MS/MS에 의한 분석에 사용했다. LC/ESI-MS/MS 분석에는 I-class UPLC(Waters)를 접속한 Xevo TQ-S triple quadrupole instrument(Waters)를 사용했다. 항C1s 항체 특이적 펩티드 GPSVFPLAPSSR을 선택적 반응 모니터링(SRM)으로 검출했다. SRM 트랜지션은, 항C1s 항체의 친이온이 [M+2H]²⁺(m/z 607.8), 딸 이온이 y⁷ ion(m/z 727.4)이다. 내부 교정 검량선은, 농도와 피크 면적을 이용한 직선 회귀에 의해 1/x²의 가중으로 작성되었다. 필리핀원숭이 혈장 중의 항체 농도는, 해석 소프트웨어 Masslynx Ver. 4.2(Waters)를 이용하여 산출되었다. 본 측정에 의해 얻어진 혈장중 항체 농도 추이는 도 3a에 나타낸다.

필리핀원숭이 혈장 중의 C1s 농도는 LC/ESI-MS/MS에 의해 측정했다. 검량선은, 필리핀원숭이 C1r2s2를 마우스 혈장으로 희석하여 필리핀원숭이 C1s 혈장중 농도로서 0.477, 0.954, 1.91, 3.82, 7.63, 15.3 및 30.5μg/mL로 조제했다. 필리핀원숭이 혈장 샘플은 마우스 혈장을 이용하여 5배로 희석했다. 검량선 및 혈장 샘플 2μL는 26μL의 50mmol/L ammonium bicarbonate 혼합 용액(7.5mol/L 요소/100mmol/L 다이싸이오트레이톨/10μg/mL 리소자임(chicken egg white)/300μg/mL 인간 C1s2r2= 20/2/2/2)과 혼합된 후, 56℃에서 45분간 진탕했다. 인간 C1s는 내부 표준으로서 사용했다. 계속해서, 500mmol/L 아이오딘 아세트아마이드 2μL를 첨가하고, 차광하에서, 37℃에서 30분간 진탕했다. 계속해서, 0.5μg/mL sequencing grade modified trypsin(Promega)을 포함하는 50mmol/L ammonium bicarbonate를 160μL 첨가했다. 샘플은 37℃에서 16시간 진탕한 후, 10% 트라이플루오로아세트산을 5μL 첨가하여 반응을 정지했다. 효소 소화 샘플 50μL를 LC/ESI-MS/MS에 의한 분석에 사용했다. LC/ESI-MS/MS 분석에는 I-class UPLC(Waters)를 접속한 Xevo TQ-S triple quadrupole instrument(Waters)를 사용했다. 필리핀원숭이 C1s 특이적 펩티드 LLEVPEAR은 선택적 반응 모니터링(SRM)으로 검출했다. SRM 트랜지션은, 항C1s 항체의 친이온이 [M+2H]²⁺(m/z 463.8), 딸 이온이 y⁶ ion(m/z 700.4)이다. 내부 교정 검량선은, 농도와 피크 면적을 이용한 직선 회귀에 의해 1/x²의 가중으로 작성되었다. 필리핀원숭이 혈장 중의 C1s 농도는, 해석 소프트웨어 Masslynx Ver. 4.2(Waters)를 이용하여 산출되었다. 본 측정에 의해 얻어진 혈장중 C1s 농도 추이는 도 3b에 나타낸다.

필리핀원숭이에 있어서의 항C1s 항체 농도 및 보체 저해 활성에 대한 pH 의존성 및 pI의 효과

원숭이 FcγRs에 대한 결합을 저하시키는 개변을 가한 Fc를 갖는 항C1s 항체에 대해, 추가로 항원 결합에 대한 pH 의존성을 개선하여, 항체의 pI를 저하시키는 개변을 가한 COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 및 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI의 항체 및 항원 농도 추이를 확인했다. 항체 투여 후의 C1s 농도 추이는 COS0637pHv2-FcgSil 투여 시와 큰 차이는 인정되지 않았던 한편, 투여 후 56일 후의 항체 농도는 COS0637pHv2-FcgSil과 비교하여 20배 이상 높은 농도를 나타내어, 대폭적인 PK의 개선이 나타났다. 각 항체 투여 시의 보체 저해 활성은, 적어도 투여 후 56일까지 지속되었다(도 4). COS0637pHv16-G1A3FcgSil+Low pI 및 COS0637pHv21-G1A3FcgSil+Low pI에서는, PK의 대폭적인 개선에 의해 장기간의 항원의 중화 및 보체 저해 활성을 나타냈다.

실시예 10

원숭이에 있어서의 보체 중화 기능의 평가(RBC 용해 저해 효과)

항체의 보체 저해 활성은 감작된 닭의 적혈구를 사용하여, 이하와 같이 하여 평가했다. 원숭이로부터 채취한 혈장을, 어세이 완충액(0.05% BSA를 포함하는 HBSS Ca²⁺ Mg²⁺)으로 10%로 희석했다. 항닭 적혈구 항체(Rockland)를 이용하여 닭 적혈구(Japan Bio Serum)를 감작하고, 린스 후에 계수하여, 어세이 완충액 중 1×10⁸세포/mL로 조정했다. 그 다음에 원숭이 유래 혈장을, 등량의 감작 닭 적혈구에 첨가하고, 37℃에서 7분간 인큐베이트하여 적혈구를 용해시켰다. 이 반응물 중에서의 원숭이 혈장의 종농도는 5%였다. 반응은, EDTA를 포함하는 냉(冷)어세이 완충액으로 정지시켰다. 이 혼합물을 원심분리하여 미용해 세포를 펠릿화시키고, 상청을 꺼내, 415nm에서의 흡광도(OD)를 이용하여 헤모글로빈의 방출을 분석했다. 적혈구 용해율(%)을 계산하기 위해, 항체 투여 전의 혈장에 의한 적혈구 용해를100%로 하고, 혈장을 가하지 않는 조건에서의 용해율을 0%로 하여 각 타임 포인트에서의 적혈구 용해율을 산출했다. 원숭이 3마리의 혈장을 이용하여, 1타임 포인트당 각각 1웰을 평가했다. 도 4에 나타나는 데이터는, 항항체가 음성이라고 판단된 데이터의 평균±SD를 나타내고 있다.

PK가 개선된 본 발명의 항체는, 장기간에 걸쳐서 혈중 C1s의 중화 및 보체 저해 활성을 나타낸다. 이와 같은 본 발명의 항체는, 보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료 또는 예방에 있어서 이용할 수 있다.

Claims

보체 개재성의 질환 또는 상태의 치료에 있어서의 사용을 위한, 항C1s 항체를 포함하는 약학적 제제로서,
해당 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3의 조합을 포함하는, 약학적 제제:
1) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 60, 61, 및 62로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,
2) 각각 서열 번호 37, 38, 39, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,
3) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,
4) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 48, 49, 및 50으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,
5) 각각 서열 번호 29, 30, 31, 52, 53, 및 54로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3, 및
6) 각각 서열 번호 33, 34, 35, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3.
제 1 항에 있어서,
상기 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 약학적 제제:
1) 각각 서열 번호 24 및 59로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL,
2) 각각 서열 번호 36 및 55로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL,
3) 각각 서열 번호 24 및 55로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL,
4) 각각 서열 번호 24 및 47로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL,
5) 각각 서열 번호 28 및 51로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL, 및
6) 각각 서열 번호 32 및 55로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, VH 및 VL.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 항체가, 중성 pH 영역에서의 KD치에 대한 산성 pH 영역에서의 KD치의 비인 산성 KD/중성 KD비가 107 이상인, 약학적 제제.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체가, 인간 C1s의 CUB1-EGF-CUB2 도메인에 특이적으로 결합할 수 있는, 약학적 제제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체가, Fcγ 수용체에 대한 결합 활성을 저하시키는 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖는, 약학적 제제.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체가 적어도 1개의 아미노산 개변을 포함하는 변이 정상 영역을 갖고,
해당 아미노산 개변이, 변이 정상 영역의 등전점(pI)을 친(親)정상 영역의 그것과 비교하여 저하시키는, 약학적 제제.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체가, 서열 번호 45로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역 및 서열 번호 23으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 정상 영역을 갖는, 약학적 제제.
보체 개재성의 질환 또는 상태를 치료하기 위한 약학적 제제의 제조에 있어서의, 항C1s 항체의 사용으로서,
해당 항체가, 이하의 1)~6)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3의 조합을 포함하는, 사용:
1) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 60, 61, 및 62로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,
2) 각각 서열 번호 37, 38, 39, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,
3) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,
4) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 48, 49, 및 50으로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3,
5) 각각 서열 번호 29, 30, 31, 52, 53, 및 54로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3, 및
6) 각각 서열 번호 33, 34, 35, 56, 57, 및 58로 이루어지는 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3.