KR20240046521A - 만성 간 질환에서 간암 발증의 진단 마커 - Google Patents
만성 간 질환에서 간암 발증의 진단 마커 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240046521A KR20240046521A KR1020247006286A KR20247006286A KR20240046521A KR 20240046521 A KR20240046521 A KR 20240046521A KR 1020247006286 A KR1020247006286 A KR 1020247006286A KR 20247006286 A KR20247006286 A KR 20247006286A KR 20240046521 A KR20240046521 A KR 20240046521A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- gdf15
- liver cancer
- subject
- risk
- level
- Prior art date
Links
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 314
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 313
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 title description 50
- 238000011161 development Methods 0.000 title description 32
- 239000003550 marker Substances 0.000 title description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 107
- 101000893549 Homo sapiens Growth/differentiation factor 15 Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 102100040896 Growth/differentiation factor 15 Human genes 0.000 claims abstract 28
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 115
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 107
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims description 29
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 29
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 28
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 25
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 25
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 16
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 claims description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 13
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 7
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 claims description 7
- 102000000597 Growth Differentiation Factor 15 Human genes 0.000 description 261
- 108010041834 Growth Differentiation Factor 15 Proteins 0.000 description 261
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 84
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 74
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 50
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 description 41
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 39
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 30
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 30
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 30
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 30
- 229940125371 direct-acting antiviral drugs Drugs 0.000 description 24
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 24
- 238000011160 research Methods 0.000 description 15
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 14
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 14
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 14
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 14
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 13
- 230000008859 change Effects 0.000 description 13
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 13
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 12
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 12
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 12
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000012552 review Methods 0.000 description 10
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 9
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 8
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 8
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 8
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 8
- 102000046181 human GDF15 Human genes 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- -1 Fib4 Proteins 0.000 description 6
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 6
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 5
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010019837 Hepatocellular injury Diseases 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 231100000849 liver cell damage Toxicity 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000000101 novel biomarker Substances 0.000 description 4
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 3
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 3
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 3
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 3
- 238000000491 multivariate analysis Methods 0.000 description 3
- 231100001223 noncarcinogenic Toxicity 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000007473 univariate analysis Methods 0.000 description 3
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 3
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000756632 Homo sapiens Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000662009 Homo sapiens UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 102100037921 UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Human genes 0.000 description 2
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N Valproic acid Chemical compound CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[[2,5-dimethoxy-4-[(4-nitrophenyl)diazenyl]phenyl]diazenyl]-n-methylanilino]butanoic acid Chemical compound COC=1C=C(N=NC=2C=CC(=CC=2)N(C)CCCC(O)=O)C(OC)=CC=1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCKQPPQRFNHPRJ-UHFFFAOYSA-N 4-[[4-(dimethylamino)phenyl]diazenyl]benzoic acid Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WCKQPPQRFNHPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000006154 Chronic hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 102000012437 Copper-Transporting ATPases Human genes 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 201000005624 HELLP Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000018565 Hemochromatosis Diseases 0.000 description 1
- 208000027761 Hepatic autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019728 Hepatitis alcoholic Diseases 0.000 description 1
- 208000002972 Hepatolenticular Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 208000023768 LCAT deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000003465 Lecithin Cholesterol Acyltransferase Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 206010024604 Lipoatrophy Diseases 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 201000007981 Reye syndrome Diseases 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N Ritonavir Natural products C=1C=CC=CC=1CC(NC(=O)OCC=1SC=NC=1)C(O)CC(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 244000025012 Spondias pinnata Species 0.000 description 1
- 235000005658 Spondias pinnata Nutrition 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101150050863 T gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 201000000839 Vitamin K Deficiency Bleeding Diseases 0.000 description 1
- 206010047634 Vitamin K deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000018839 Wilson disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 208000005652 acute fatty liver of pregnancy Diseases 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 208000002353 alcoholic hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006682 alpha 1-Antitrypsin Deficiency Diseases 0.000 description 1
- IYIKLHRQXLHMJQ-UHFFFAOYSA-N amiodarone Chemical compound CCCCC=1OC2=CC=CC=C2C=1C(=O)C1=CC(I)=C(OCCN(CC)CC)C(I)=C1 IYIKLHRQXLHMJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005260 amiodarone Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229960002118 asunaprevir Drugs 0.000 description 1
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 229960005449 daclatasvir Drugs 0.000 description 1
- FKRSSPOQAMALKA-CUPIEXAXSA-N daclatasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C1=NC(C=2C=CC(=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C=2N=C(NC=2)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CN1 FKRSSPOQAMALKA-CUPIEXAXSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 229940072240 direct acting antivirals Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- SVPWXLXHFSKQRN-QZUDGTEMSA-N elbasvir and grazoprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@@H]2CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)O[C@@H]1C[C@H]1CCCCCC1=NC3=CC=C(C=C3N=C1O2)OC)C(C)(C)C)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C.COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C1N=C(C=2C=C3O[C@H](N4C5=CC=C(C=C5C=C4C3=CC=2)C=2NC(=NC=2)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)C=2C=CC=CC=2)C=N1 SVPWXLXHFSKQRN-QZUDGTEMSA-N 0.000 description 1
- 238000001861 endoscopic biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000019691 hematopoietic and lymphoid cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 108010034897 lentil lectin Proteins 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004769 mitochondrial stress Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000013188 needle biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N ombitasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC1=CC=C([C@H]2N([C@@H](CC2)C=2C=CC(NC(=O)[C@H]3N(CCC3)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)C=C1 PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N 0.000 description 1
- 229960000518 ombitasvir Drugs 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000002262 pancreatoduodenectomy Methods 0.000 description 1
- 235000016236 parenteral nutrition Nutrition 0.000 description 1
- UAUIUKWPKRJZJV-MDJGTQRPSA-N paritaprevir Chemical compound C1=NC(C)=CN=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2C[C@H](OC=3C4=CC=CC=C4C4=CC=CC=C4N=3)C[C@H]2C(=O)N[C@]2(C(=O)NS(=O)(=O)C3CC3)C[C@@H]2\C=C/CCCCC1 UAUIUKWPKRJZJV-MDJGTQRPSA-N 0.000 description 1
- 229960002754 paritaprevir Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 230000011506 response to oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 229960000311 ritonavir Drugs 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N ritonavir Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960002063 sofosbuvir Drugs 0.000 description 1
- TTZHDVOVKQGIBA-IQWMDFIBSA-N sofosbuvir Chemical compound N1([C@@H]2O[C@@H]([C@H]([C@]2(F)C)O)CO[P@@](=O)(N[C@@H](C)C(=O)OC(C)C)OC=2C=CC=CC=2)C=CC(=O)NC1=O TTZHDVOVKQGIBA-IQWMDFIBSA-N 0.000 description 1
- 229940118849 sofosbuvir and ledipasvir Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 1
- 208000016794 vitamin K deficiency hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/475—Assays involving growth factors
- G01N2333/495—Transforming growth factor [TGF]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 본 발명의 방법은 (1) 대상체의 GDF15 수준을 측정하는 단계 및 (2) 상기 GDF15 수준을 간암의 발증 위험과 연관시키는 단계를 포함한다. 단계 (1)에서 측정된 GDF15 수준이 미리 설정된 컷오프 값 이상인 경우에는 해당 대상체의 간암의 발증 위험이 높다는 것의 지표가 되고, 상기 GDF15 수준이 컷오프 값 미만인 경우에는 간암의 발증 위험이 낮다는 것의 지표가 된다. 또한, 본 발명은, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 대상체의 GDF15 수준을 측정하기 위한 키트 및 항-GDF15 특이적 항체를 포함하는 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 진단제를 제공한다.
Description
본 발명은 질환 진단 마커를 이용함으로써 질환의 발병 위험을 평가하는 방법에 관한 것이다. 구체적으로, 만성 간 질환에서 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 방법에 관한 것이다.
만성 B형 간염 및 만성 C형 간염, 비알콜성 지방간염 등의 다양한 만성 간 질환은 간암을 유발한다(비특허 문헌 1 및 2). 다양한 만성 간 질환에서는 간 세포 손상이 관찰되고, 지속적인 간 세포 손상으로 인해 간 발암에는 산화 스트레스가 관여한다(비특허 문헌 3 및 4). 만성 간 질환은 바이러스성 만성 간 질환과 비바이러스성 만성 간 질환으로 분류된다. 바이러스성 만성 간 질환은 주로 C형 간염 바이러스에 의한 C형 간염과, B형 간염 바이러스에 의한 B형 간염으로 분류된다. 비바이러스성 만성 간 질환은 지방간 질환과 자가면역성 간 질환으로 분류된다.
C형 간염
C형 간염에 대한 신규 치료제인 직접 작용 항바이러스제(이하 "DAA"라 함)의 등장에 의해 다수의 사례에서 C형 간염 바이러스(HCV)가 배제되어 왔다. C형 간염 바이러스가 배제된 후에도, 더 정확하게는, 지속 바이러스 반응(이하 "SVR"라 함) 달성 후에도, 간 발암, 더 정확하게는, 간암의 발증 위험이 있다(비특허 문헌 5). 따라서, 다수의 C형 간염의 사례에서, 치료 완료 후에 정기적 영상 검사와 혈액 검사를 실시한다. 그러나, 최근 DAA 치료의 보급에 의해 SVR을 달성한 사례가 증가하고 있으며, SVR을 달성한 모든 사례에서 일률적으로 정기적 검사를 실시하는 것은 의료 경제적 측면에서 문제가 있다. 따라서, 간 발암 위험을 계층화하여, 간 발암 위험이 높은 모집단에 대한 검사를 중점적으로 검사할 필요가 있다. 혈액 검사에서 종양 마커로서 AFP(α-태아단백), 혈소판, 연령으로부터 계산된 FIB-4 지수(Fib-4 또는 Fib4라고도 함, 비특허 문헌 6 내지 8) 등이 발암 예측에 사용되지만, 이의 진단 능력이 충분하지 않고 보다 정밀한 계층화 기술이 필요하다.
B형 간염
2019년 시점에서, HBs 항원 양성 환자는 전 세계적으로 약 2억 9,600만명 정도로 추정되며, 연간 약 82만명이 B형 간염 바이러스(HBV)로 인한 간경변증 및 간암으로 사망하고 있다. 핵산 유사 제제(NUC)에 의해 혈청 중의 HBV DNA를 저하시킴으로써 간암의 발증 위험은 감소하지만, HBV DNA 수치가 낮은 경우에도 발암 사례가 관찰되고 있다(비특허 문헌 9). HBs 항원 소실 후의 간암 발증률은 0.0368/년이다. 반면, HBs 항원 지속 양성 사례의 간암 발증률은 0.1957/년이고, 유의하게 간암 발증률은 높다(비특허 문헌 10). 발암 위험을 높이는 인자로서, 연령(40세 이상), 성별(남성), 높은 바이러스 양, 알콜 섭취, 간암의 가족력, HCV, HDV 및/또는 HIV 공감염, 간 섬유화의 진행, 간 섬유화의 진행을 반영하는 혈소판 수의 감소, 유전자형 C, 코어 프로모터 돌연변이 등이 있다(비특허 문헌 11). 그러나, 이러한 인자를 고려하더라도 NUC 투여하에서의 간암 발증의 예측은 곤란하며, 신규한 간 발암 마커는 임상적으로 중요하다.
지방간 질환
비바이러스성 간 질환의 대부분은 지방간 질환(소위 지방간)이다. 지방간 질환은 간 세포의 5% 이상에 지방이 축적된 질환을 지칭한다. 지방간 질환은 또한 비알콜성 지방간 질환(NAFLD)과 이차성 지방간으로 분류된다. 여기서, 비알콜성 지방간은 에탄올로 환산하여 남성 30g/일 및 여성 20g/일 미만인 알콜 섭취량을 지칭한다. NAFLD는 또한 조직학적으로 간 세포 손상을 수반하지 않는 비알콜성 지방간(NAFL)과, 조직학적으로 간 세포 손상 및 염증을 수반하는 비알콜성 지방간염(NASH)으로 분류된다. 이차성 지방간은 알콜성, 약물 유발성(아미오다론, 메토트렉세이트, 타목시펜, 스테로이드, 발프로산, 항레트로바이러스제 등), 질환 관련성(C형 간염(유전자형 3), 윌슨병(Wilson disease), 지방 위축증, 기아, 비경구 영양, 라이 증후군(Reye syndrome)), 급성 임신 지방간, HELLP 증후군, 선천성 대사 이상(무β-지단백혈증, 혈색소 침착증, α1-항트립신 결핍증, 레시틴 콜레스테롤 아실트랜스퍼라제 결핍증, 리소좀 생성 리파제 결핍증 등) 및 기타(췌장-십이지장 절제술 후)로 분류된다.
일본의 인구를 1억 2,700만명이라고 가정하면, 그 모집단의 약 30%(3,000만 내지 4,000만명)가 NAFLD를 앓고, 그 중 약 10%가 NASH를 앓고 있는 것으로 추정된다. 이러한 환자 수는 C형 간염(200만명), B형 간염(100만명) 및 알콜성 간염(200만명)의 것보다 많으며, 바이러스성 간염 환자의 총수에 거의 필적하거나 초과하는 수이다.
NAFL의 일부 사례에서는 섬유화가 서서히 진행되지만, NASH의 일부 사례에서는 섬유화가 진행되어 간경변증 또는 간암을 유도하는 사례도 있다. 그러나, 이 둘 사이에는 상호 이행이 있는 것으로 공지되어 있다(비특허 문헌 12 및 13). 예후에 대한 비교 연구의 결과로부터, NAFL인지 NASH인지 여부보다 섬유화 진행 여부가 예후에는 더 중요한 것으로 보고되었다(비특허 문헌 14). 또 다른 예후 비교 연구로부터, 간 섬유화 진행의 사례에서는 예후가 나쁘다는 보고도 있다(비특허 문헌 15). 1995년부터 2015년까지의 일본에서 원발성 간암의 원인에 대한 연구 결과로부터, 비바이러스성 간 질환을 배경으로 한 간 발암이 증가하고 있는 것으로 나타났다(비특허 문헌 16).
비-바이러스성 간 질환으로부터 간암 발증 예측 마커와 FIB-4 지수의 유용성도 보고되었다[참조: Gastroenterology. 2018 Dec; 155(6):1828-1837.e2]. 그러나, 그 진단 능력은 충분하지 않으며, 추가적 계층화 기술이 필요하다.
산화 스트레스는 C>A/G>T 유전자 돌연변이를 유도하고(비특허 문헌 17), 이러한 돌연변이 패턴은 간암에서는 다른 암보다 높은 비율로 발견되어(비특허 문헌 18), 간 발암에 대한 산화 스트레스의 관여가 시사되고 있다. 성장 분화 인자 15(GDF15)는 TGF-β 슈퍼패밀리에 속하며, 산화 스트레스 및 미토콘드리아 스트레스에 반응하여 그 발현이 증가한다(비특허 문헌 19 내지 22). GDF15는 간 섬유화 진행 사례에서 상승하며, 간암 사례에서는 GDF15의 높은 값이 예후에 악영향을 미치는 요인으로 보고되었다(비특허 문헌 23). 그러나, GDF15가 C형 간염에서 SVR 후의 간암 발증, B형 간염에서 NUC 투여하에서의 간암 발증, NASH로부터의 간암 발증 등을 포함하는 만성 간 질환과 관계되어 있는지 여부는 완전히 공지되지 않았다.
[인용 목록]
[비특허 문헌]
비특허 문헌 1: Sagnelli E, et al. Infection. 2020 Feb;48(1):7-17.
비특허 문헌 2: Zhang CH, et al. Liver Int. 2022 doi: 10.1111/liv.15251.
비특허 문헌 3: Hikita H, et al. J Hepatol. 2012 Jul;57(1):92-100.
비특허 문헌 4: Hikita H, et al. Cancer Prev Res (Phila). 2015 Aug;8(8):693-701.
비특허 문헌 5: Janjua NZ et al., J Hepatol 2017;66:504-513
비특허 문헌 6: Watanabe T et al., J Med Virol 2020;92:3507-3515.
비특허 문헌 7: Kanwal F, Singal AG, Gastroenterology 2019;157:54-64.
비특허 문헌 8: Nagata H et al., J Hepatol 2017;67:933-939.
비특허 문헌 9: Liaw YF, et al. N Engl J Med. 2004;351:1521-1531.
비특허 문헌 10: Simonetti J, et al. Hepatology. 2010; 51:1531-1537.
비특허 문헌 11: Yim HJ, Lok AS. HEPATOLOGY 2006;43:S173-S181.
비특허 문헌 12: Tokushige, K, et al. Hepatology Research.2021;51:1013-1025.
비특허 문헌 13: Yoshiji, H. et al. J Gastroenterol, 2021;56:593-619.
비특허 문헌 14: Angulo P, et al. Gastroenterology. 2015; 149:389-97.
비특허 문헌 15: Hagstrom H, et al. J Hepatol. 2017; 67:1265-1273.
비특허 문헌 16: Tateishi R, et al. J Gastroenterol. 2019; 54:367-376.
비특허 문헌 17: van Loon B, et al. DNA Repair (Amst) 2010;9:604-16
비특허 문헌 18: Guichard C, et al. Nat Genet 2012;44:694-8.
비특허 문헌 19: Han ES, et al. Physiol Genomics. 2008; 34:112-26.
비특허 문헌 20: Tsai VWW et al., Cell Metab 2018;28:353-368.
비특허 문헌 21: Kim J et al., Nat Metab 2021;3:410-427.
비특허 문헌 22: Kang SG et al., iScience 2021;24:102181
비특허 문헌 23: Myojin Y et al., Gastroenterology 2021;160:1741-1754.
본 발명은 만성 간 질환으로부터 간암 발증을 예측하는 신규 바이오마커(biomarker)를 제공하는 것이다. 본 발명은 또한 신규 바이오마커를 포함하는, C형 간염에서 SVR 후의 간 발암, B형 간염에서 NUC 투여하에서의 간 발암 및 NAFLD로 인한 간 발암을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 만성 간 질환의 간 발암 위험 평가 및/또는 계층화를 위한 신규 기술을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은 상기와 같은 목적을 달성하기 위해 연구한 결과, 혈청 중의 GDF15 단백질의 수준 또는 간 조직 중의 GDF15 전사 산물(transcription product)의 수준에 따라 만성 간 질환으로 인한 발암을 예측할 수 있음을 발견하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 대상체(subject)의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은
(1) 대상체의 GDF15 수준을 측정하는 단계, 및
(2) 상기 언급한 GDF15 수준을 간암의 발증 위험과 연관시키는 단계
를 포함한다.
본 발명의 방법에서, 상기 대상체는 C형 간염 바이러스(HCV)에 대한 지속된 바이러스 반응(sustained virological response; SVR)을 달성한 대상체, B형 간염에 대한 NUC 투여 중인 대상체 및 NAFLD를 갖는 대상체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 1종의 대상체일 수 있다.
본 발명의 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 방법에 있어서, 상기 대상체의 GDF15 수준이 미리 설정된 컷오프 값(cutoff value) 이상의 경우에는 상기 대상체가 간암의 발증 위험이 높다는 것의 지표(indicator)가 되고, 상기 컷오프 값 미만인 경우에는 상기 대상체가 간암의 발증 위험이 낮다는 것의 지표로서 사용될 수 있다.
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에서, 단계 (1)에서 측정되는 GDF15 수준은 혈청 또는 혈장 중의 GDF15 단백질의 수준 및/또는 간 조직 또는 순환 혈액 중의 GDF15 전사 산물의 수준일 수 있다.
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에서, 상기 컷오프 값은 상기 GDF15 수준의 통계적 분석 또는 ROC 분석에 기초하여 설정될 수 있다.
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에서, 단계 (1)에서 측정되는 GDF15 수준은 혈청 중의 GDF15 단백질의 수준일 수 있다.
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에서, 상기 컷오프 값은 각 개별 만성 간 질환에 대한 대상체의 GDF15 단백질 수준의 중앙값(median value)일 수 있으며, 개별 만성 간 질환의 ROC 곡선으로부터 결정될 수 있다.
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에서, 상기 혈청 중의 GDF15 단백질 수준에 대한 컷오프 값은 SVR을 달성한 C형 간염 환자에 대해 약 1400pg/mL일 수 있다. GDF15의 컷오프 값은 NUC 투여 중의 B형 간염 환자에 대해 약 845pg/mL일 수 있다. GDF15의 컷오프 값은 비알콜성 지방간염 환자에 대해 약 2000pg/mL일 수 있다.
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에서, 상기 혈청 중의 GDF15 단백질의 수준은 ELISA 방법에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 방법에서, 상기 간암의 발증 위험을 판정하는 단계에서, AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값을 추가로 조합하여 판정할 수 있다.
본 발명의 방법에서, 상기 AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값은 C형 간염의 SVR을 달성한 대상체 및 B형 간염에서 NUC 투여 중인 대상체에 대해 각각 약 5ng/mL 및 약 3.25일 수 있다. NAFLD가 발생한 대상체의 경우, 각각 약 5ng/mL 및 약 2.67일 수 있다.
본 발명은 본 발명의 방법에 사용하기 위한 대상체의 GDF15 수준을 측정하기 위한 키트(kit)를 제공한다. 본 발명의 키트는 항-GDF15 항체 및/또는 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍(primer pair) 또는 프로브(probe)를 포함한다.
본 발명은 본 발명의 방법에 의해 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 진단제를 제공한다. 본 발명의 진단제는 항-GDF15 항체 및/또는 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍 및 프로브를 포함한다.
본 발명은, (1) 대상체의 GDF15 수준을 측정하는 단계 및 (2) 상기 GDF15 수준을 간암의 발증 위험과 연관시키는 단계를 포함하는, 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 바이오마커로서 GDF15의 용도를 제공한다.
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 바이오마커로서 본 발명의 GDF15의 용도에서, 상기 대상체는 C형 간염 바이러스(HCV)에 대한 지속된 바이러스 반응(SVR)을 달성한 대상체, B형 간염에서 NUC 투여 중인 대상체 및 NAFLD를 갖는 대상체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 1종의 대상체일 수 있다.
본 발명은 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에 의해 간암의 발증 위험이 높은 것으로 평가된 대상체를 간암의 유무를 검사하기 위해 간암의 발증 위험이 낮은 것으로 평가된 대상체보다 높은 빈도로 검사하는 것을 포함하는, 계층화된 대상체의 간암 스크리닝 방법을 제공한다. 상기 언급한 간암 발증 여부는 초음파, 조영 CT 영상, MRI 및/또는 간 생검 조직의 소견에 기초하여 검사할 수 있다. 간암의 발증 위험이 높은 것으로 평가된 대상체에 대해서는 상기 언급한 간암 발증 여부를 초음파, 조영 CT 영상 및 MRI의 소견에 기초하여 검사할 수 있다. 간암의 발증 위험이 낮은 것으로 평가된 대상체에 대해서는 상기 간암 발증 유무를 검사하기 위한 검사를 수행하지 않을 수도 있거나, 또는 본 발명의 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법을 포함하여 혈액 종양 마커의 검사만을 일정 간격으로 수행할 수도 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 혈액 종양 마커는 GDF15 외에 AFP(α-태아단백질), AFP-L3(LCA(렌틸 렉틴) 강력 결합성 분획), PIVKA-II(비타민 K 결핍 또는 길항제 II에 의해 유도되는 단백질)를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 발명은 본 발명의 간암 스크리닝 방법에 의해 간암의 발증 위험이 높다고 평가된 대상체에 대해 당해 간암 발증 예방용 약물을 투여하는 것을 포함하는 간암의 예방 방법을 제공한다. 본 발명은 본 발명의 간암 스크리닝 방법에 의해 간암의 발증 위험이 높다고 평가된 대상체에서 간암 발증을 예방하기 위한 약물을 제공한다.
본 발명의 C형 간염에 대한 간암 스크리닝 방법에서, 대상체는 BMI 값이 25kg/m2 미만인 자로 한정할 수 있다.
본 발명에 따르면, 대상체의 GDF15 수준에 기초하여 간암의 발증 위험을 높은 정확도로 평가할 수 있다. 이에 따라, 대상체 중에서, 간암의 발증 위험에 따라 상이한 빈도 및/또는 내용의 검사에 의해 간암의 유무를 검사하는 것을 포함하는, 계층화된 대상체의 간암 스크리닝 방법을 실시할 수 있다.
[도 1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 및 검증 코호트의 사례 상세를 나타내는 표.
[도 2-1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트(derivation cohort)의 각 시점에서 수집한 보존 혈청 중의 GDF15 수준 분포를 나타내는 피라미드 그래프. 종축은 혈청 GDF15 수준(pg/mL)를 나타낸다. 좌측 그래프는 치료 전(Pre Treatment)에 수집한 혈청 중의 GDF15 수준 분포를 나타내고, 중앙 그래프는 치료 완료 시점(End of Treatment)에 수집한 혈청 중의 GDF15 수준 분포를 나타내고, 우측 그래프는 SVR 달성 24주 후(Post 24 weeks)에 수집한 혈청 중의 GDF15 수준 분포를 나타낸다. 별표(*)는 도 2-1의 3개 그래프 각각의 사이에 터키 크레이머(Turkey Kramer) 검정에 의한 p<0.0001의 유의차가 있음을 나타낸다.
[도 2-2]
SVR에 도달한 C형 간염 환자의 DAA 치료 전의 보존 간 조직 중의 GDF15 mRNA 수준과, 보존 혈청 중의 GDF15 수준 사이의 상관관계를 나타내는 그래프. 종축은 혈청 GDF15 수준(pg/mL)를 나타내고, 횡축은 GDF15의 상대적 mRNA 수준(임의 단위, AU)를 나타낸다.
[도 3]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 GDF15가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 사례의 상세를 나타내는 표이다.
[도 4-1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 섬유화 스코어 그룹에서 혈청 중 GDF15 수준의 분포를 나타내는 피라미드 그래프. 종축은 혈청 중의 GDF15 수준(pg/mL)를 나타낸다. 좌측으로부터, 각 섬유화 스코어(F0 내지 F4) 그룹 각각의 혈청 중의 GDF15 수준의 분포를 나타낸다. 별표(*)는 도 4-1의 각 그래프 사이에서 일원 분산분석(one-way ANOVA) 후의 선형 추세(Test for linear trend) 검정에서 p<0.0001의 유의차가 있음을 나타낸다.
[도 4-2]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 혈청 중의 GDF15 수준과 FIB-4 지수 값의 상관관계를 나타내는 그래프. 종축은 혈청 중의 GDF15 수준(pg/mL)을 나타내고, 횡축은 FIB-4 지수 값을 나타낸다.
[도 4-3]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 혈청 중의 GDF15 수준과 다양한 파라미터 사이의 상관관계를 나타내는 그래프. 횡축은 혈청 중의 GDF15 수준(pg/mL)을 나타내고, 종축은 연령(A), 헤모글로빈(B), 혈소판 수(C), AST(D), ALT(E), γGTP(F), eGFR(G), 알부민(H), 프로트롬빈 시간(I), AFP(J) 및 ALBI 스코어(K)를 표시한다.
[도 5]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트 사례의 상세를 나타내는 표.
[도 6-1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에서 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다.
[도 6-2]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 치료 전(Pre Treatment), 치료 완료 시점(End of Treatment), SVR 달성 24주 후(Post 24 weeks)의 3개 시점에서 간암 발증의 유무에 따른 혈청 중의 GDF15 수준의 분포를 나타내는 피라미드 그래프. 종축은 혈청 GDF15 수준(pg/mL)을 나타낸다. 좌측으로부터, 치료 전(Pre Treatment), 치료 완료 시점(End of Treatment) 및 SVR 달성 24주 후(Post 24 weeks)의 3개 시점에서 간암 발증의 유(Present)무(Absent)에 따른 혈청 중의 GDF15 수준의 분포를 나타낸다. 별표(*)는 도 6-2의 시점에서 간암 발증의 유(Present)무(Absent)의 그래프 사이에서 터키 크레이머(Turkey Kramer) 검정에 의한 p<0.005의 유의차가 있음을 나타낸다.
[도 6-3]
SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 간암 발증 사례당 간암 발증 1년 전 및 간암 발증 시점의 혈청 중의 GDF15 수준의 변동을 나타내는 그래프. 종축은 혈청 중의 GDF15 수준(pg/mL)을 나타내고, 횡축은 간암 발증 1년 전(-1 year) 및 간암 발증 시점(-1 year), 및 간암 발증 시점(End of Observation)을 포함한 관찰 기간을 나타낸다.
[도 6-4]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 GDF15가 높은 그룹 및 낮은 그룹에서 누적 간암 발증률을 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "GDF15 높음" 및 "GDF15 낮음"의 화살표는 각각 높은 GDF15 그룹 및 낮은 GDF15 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 7]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에서 간암 발증 후의 위험비를 나타내는 표.
[도 8]
SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 GDF15(A), AFP(B) 및 FIB-4 지수(C)를 사용하여 간암 발증을 예측하기 위한 ROC 곡선을 나타내는 그래프. (D)는 ROC 곡선의 곡선하 면적(AUC)이다. (E)는 GDF15, AFP 및 FIB-4 지수에 대한 간암 발증 예측의 ROC 곡선으로부터 계산된 컷오프 값, 감도 및 특이도를 나타낸다.
[도 9]
A는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 AFP가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. B는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 FIB-4 지수가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. A와 B 모두에서, 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "AFP 높음", "AFP 낮음", "FIB4 지수 높음" 및 "FIB4 지수 낮음"의 화살표는 각각 높은 AFP 그룹, 낮은 AFP 그룹, 높은 FIB-4 지수 그룹 및 낮은 FIB-4 지수 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 10]
GDF15, AFP 또는 FIB-4 지수의 각각 높은 값에 1점을 부여하는 스코어 시스템(scoring system)에 의해 계층화한 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 고위험 그룹(3점), 중위험 그룹(1-2점), 저위험 그룹(0점)의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "높음", "중간", "낮음"의 화살표는 각각 고위험 그룹, 중위험 그룹, 저위험 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 11]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 검증 코호트의 사례의 상세를 나타내는 표.
[도 12]
SVR에 도달한 C형 간염 환자의 검증 코호트에서 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다.
[도 13]
A는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 GDF15가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. B는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 AFP가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. C는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 FIB-4 지수가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. A, B 및 C에서, 종축은 누적 간암 발증률, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "GDF15 높음", "GDF15 낮음", "AFP 높음", "AFP 낮음", "FIB4 지수 높음", "FIB4 지수 낮음"의 화살표는 각각 높은 GDF15 그룹, 낮은 GDF15 그룹, 높은 AFP 그룹, 낮은 AFP 그룹, 높은 FIB-4 지수 그룹 및 낮은 FIB-4 지수 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 14]
본 발명의 스코어 시스템에 따른 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 고위험 그룹(3점), 중위험 그룹(1-2점), 저위험 그룹(0점)의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "높음", "중간", "낮음"의 화살표는 각각 고위험 그룹, 중위험 그룹 및 저위험 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 15-1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에 대하여, 본 발명의 스코어 시스템에 따른 고위험 그룹(2점), 중위험 그룹(1점) 및 저위험 그룹(0점)의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(주)을 나타낸다. "높음", "중간" 및 "낮음"의 화살표는 각각 고위험 그룹, 중위험 그룹 및 저위험 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 15-2]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에 대하여, 공지된 마커인 AFP 및 FIB-4 지수 값이 낮은 그룹에서 GDF15 수준이 높은 모집단과 낮은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(주)을 나타낸다. "높음"의 화살표는 AFP 및 FIB-4 지수 값은 낮지만, GDF15 수준 값이 높은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다. "낮음"의 화살표는 AFP 및 FIB-4 지수 값이 낮고, GDF15 수준 값이 낮은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 15-3]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에 대하여, 공지된 마커인 AFP 및 FIB-4 지수가 높은 모집단에서 GDF15 수준의 높은 모집단 및 낮은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(주)을 나타낸다. "높음"의 화살표는 AFP 및 FIB-4 지수 값이 높고 GDF15 수준 값이 높은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다. "낮음"의 화살표는 AFP 및 FIB-4 지수 값은 높지만, GDF15 수준 값이 낮은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 16]
기준에 따라 선택된 NUC 투여 중의 B형 간염 사례의 보존 혈청의 산포도. 흑색 원은 비발암 사례를 나타내고, 백색 원은 발암 사례를 나타낸다. 종축은 보존 혈청 중의 GDF15 농도(ng/mL)를 나타낸다.
[도 17]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체의 환자 배경을 나타내는 표.
[도 18]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체의 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 발암률을 나타내고, 횡축은 관찰 시간(일)을 나타낸다.
[도 19]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체의 환자 배경을 GDF15의 혈청 농도 중앙값(0.833ng/mL)에 따라 그룹화한 표.
[도 20]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체의 환자 배경을 간암 발증 여부에 따라 그룹화한 표.
[도 21]
NUC 투여 중의 B형 간염 환자 코호트 전체에서, GDF15, Fib4, AFP 및 Plt에 대해 각각 보존 혈청 포인트로부터 5년 시점에서 발암 유무의 시간 경과에 따른 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타낸 그래프. 각 그래프의 종축은 감도 또는 진양성률을 나타내고, 횡축은 위양성률(1-특이성)을 나타내고, AUC는 각 그래프의 ROC 곡선하의 면적(Area under the curve)을 나타낸다.
[도 22]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체에서, GDF15, Fib4, AFP 및 Plt에 대하여 각각 보존 혈청 포인트로부터 10년 시점에서 발암 유무의 시간 경과에 따른 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타낸 그래프. 각 그래프의 종축은 감도 또는 진양성률을 나타내고, 횡축은 위양성률(1-특이성)을 나타내고, AUC는 각 그래프의 ROC 곡선하의 면적(Area under the curve)을 나타낸다.
[도 23]
ROC 곡선에서 계산된 컷오프 값(0.845ng/mL)을 사용하여 NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체에서 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 24]
COX 비례 위험도 모델에 의한 발암에 기여하는 인자의 단변량/다변량 분석의 결과를 나타내는 표.
[도 25]
AFP 및 GDF15의 2개 마커에 대해 각각 5ng/mL 및 0.845ng/mL를 초과하는 컷오프 값을 갖는 사례에 1점을 부여하여 스코어에 따라 그룹화하여 플롯한 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 26]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 GDF15의 혈청 농도의 산포도. 흑색 원은 간암 비발증 사례이고, 백색 원은 간암 발증 사례이다. 발증한 간암의 6건 사례 중 5건 사례는 원발성 간 세포암(HCC)이었고, 화살표로 표시된 1건 사례는 담관세포암(CCC)이었다.
[도 27]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 환자 배경을 나타내는 표.
[도 28]
NAFL을 앓고 있는 환자와 NASH을 앓고 있는 환자로 구분한 환자 배경을 나타내는 표.
[도 29]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자 코호트 전체에서 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 30]
간 섬유증에 대해 브런트 스테이지(Brunt Stage)의 0~4형으로 분류된 사례의 GDF15의 혈청 농도 산포도.
[도 31]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 GDF15의 혈청 농도 및 Fib-4 지수 사이의 상관관계를 조사한 산포도.
[도 32]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 다양한 속성, 혈액 마커, Fib-4 지수 등의 위험비를 나타내는 표.
[도 33]
GDF15 및 Fib-4 지수에 대해 각각 보존 혈청 포인트로부터 5년 시점에서 발암 유무에 대한 시간 경과 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타내는 그래프.
[도 34-1]
컷오프 값이 2.00ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 34-2]
컷오프 값이 1.35ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 35-1]
오가키 시민 병원(Ogaki Municipal Hospital) 183건 사례의 환자 배경.
[도 35-2]
관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 환자 170명의 환자 배경.
[도 36-1]
오가키 시민 병원에서 환자 183명의 NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 보존 혈청의 산포도. 흑색 원은 비발암 사례이고, 회색 원은 발암 사례이다. 종축은 보존 혈청 중의 GDF15 농도(ng/mL)를 나타낸다. 간암 발증의 9건 사례는 모두 원발성 간 세포암(HCC)이었다.
[도 36-2]
관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 170명 환자의 보존 혈청의 산포도. 흑색 원은 비발암 사례이고, 회색 원은 발암 사례이다. 종축은 보존 혈청 중의 GDF15 농도(ng/mL)를 나타낸다. 간암 발증의 8건 사례 중 7건 사례는 원발성 간 세포암(HCC)이었고, 화살표로 표시된 1건 사례는 담관세포암(CCC)이었다.
[도 37-1]
오가키 시민 병원에서 183건 사례의 간암 발증률.
[도 37-2]
관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 간암 발증률.
[도 38-1]
오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 총 353건 사례에 대해 보존 혈청 포인트로부터 5년 시점에서 발암 유무에 대해 시간 경과 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타내는 그래프.
[도 38-2]
오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 총 353건 사례에 대해 보존 혈청 포인트로부터 7년 시점에서 발암 유무의 시간 경과 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타내는 그래프.
[도 39-1]
오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 총 353건 사례에 대해 컷오프 값이 2.00ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 39-2]
오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 총 353건 사례에 대해 컷오프 값이 1.74ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 및 검증 코호트의 사례 상세를 나타내는 표.
[도 2-1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트(derivation cohort)의 각 시점에서 수집한 보존 혈청 중의 GDF15 수준 분포를 나타내는 피라미드 그래프. 종축은 혈청 GDF15 수준(pg/mL)를 나타낸다. 좌측 그래프는 치료 전(Pre Treatment)에 수집한 혈청 중의 GDF15 수준 분포를 나타내고, 중앙 그래프는 치료 완료 시점(End of Treatment)에 수집한 혈청 중의 GDF15 수준 분포를 나타내고, 우측 그래프는 SVR 달성 24주 후(Post 24 weeks)에 수집한 혈청 중의 GDF15 수준 분포를 나타낸다. 별표(*)는 도 2-1의 3개 그래프 각각의 사이에 터키 크레이머(Turkey Kramer) 검정에 의한 p<0.0001의 유의차가 있음을 나타낸다.
[도 2-2]
SVR에 도달한 C형 간염 환자의 DAA 치료 전의 보존 간 조직 중의 GDF15 mRNA 수준과, 보존 혈청 중의 GDF15 수준 사이의 상관관계를 나타내는 그래프. 종축은 혈청 GDF15 수준(pg/mL)를 나타내고, 횡축은 GDF15의 상대적 mRNA 수준(임의 단위, AU)를 나타낸다.
[도 3]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 GDF15가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 사례의 상세를 나타내는 표이다.
[도 4-1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 섬유화 스코어 그룹에서 혈청 중 GDF15 수준의 분포를 나타내는 피라미드 그래프. 종축은 혈청 중의 GDF15 수준(pg/mL)를 나타낸다. 좌측으로부터, 각 섬유화 스코어(F0 내지 F4) 그룹 각각의 혈청 중의 GDF15 수준의 분포를 나타낸다. 별표(*)는 도 4-1의 각 그래프 사이에서 일원 분산분석(one-way ANOVA) 후의 선형 추세(Test for linear trend) 검정에서 p<0.0001의 유의차가 있음을 나타낸다.
[도 4-2]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 혈청 중의 GDF15 수준과 FIB-4 지수 값의 상관관계를 나타내는 그래프. 종축은 혈청 중의 GDF15 수준(pg/mL)을 나타내고, 횡축은 FIB-4 지수 값을 나타낸다.
[도 4-3]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 혈청 중의 GDF15 수준과 다양한 파라미터 사이의 상관관계를 나타내는 그래프. 횡축은 혈청 중의 GDF15 수준(pg/mL)을 나타내고, 종축은 연령(A), 헤모글로빈(B), 혈소판 수(C), AST(D), ALT(E), γGTP(F), eGFR(G), 알부민(H), 프로트롬빈 시간(I), AFP(J) 및 ALBI 스코어(K)를 표시한다.
[도 5]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트 사례의 상세를 나타내는 표.
[도 6-1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에서 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다.
[도 6-2]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 치료 전(Pre Treatment), 치료 완료 시점(End of Treatment), SVR 달성 24주 후(Post 24 weeks)의 3개 시점에서 간암 발증의 유무에 따른 혈청 중의 GDF15 수준의 분포를 나타내는 피라미드 그래프. 종축은 혈청 GDF15 수준(pg/mL)을 나타낸다. 좌측으로부터, 치료 전(Pre Treatment), 치료 완료 시점(End of Treatment) 및 SVR 달성 24주 후(Post 24 weeks)의 3개 시점에서 간암 발증의 유(Present)무(Absent)에 따른 혈청 중의 GDF15 수준의 분포를 나타낸다. 별표(*)는 도 6-2의 시점에서 간암 발증의 유(Present)무(Absent)의 그래프 사이에서 터키 크레이머(Turkey Kramer) 검정에 의한 p<0.005의 유의차가 있음을 나타낸다.
[도 6-3]
SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 간암 발증 사례당 간암 발증 1년 전 및 간암 발증 시점의 혈청 중의 GDF15 수준의 변동을 나타내는 그래프. 종축은 혈청 중의 GDF15 수준(pg/mL)을 나타내고, 횡축은 간암 발증 1년 전(-1 year) 및 간암 발증 시점(-1 year), 및 간암 발증 시점(End of Observation)을 포함한 관찰 기간을 나타낸다.
[도 6-4]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 GDF15가 높은 그룹 및 낮은 그룹에서 누적 간암 발증률을 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "GDF15 높음" 및 "GDF15 낮음"의 화살표는 각각 높은 GDF15 그룹 및 낮은 GDF15 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 7]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에서 간암 발증 후의 위험비를 나타내는 표.
[도 8]
SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 GDF15(A), AFP(B) 및 FIB-4 지수(C)를 사용하여 간암 발증을 예측하기 위한 ROC 곡선을 나타내는 그래프. (D)는 ROC 곡선의 곡선하 면적(AUC)이다. (E)는 GDF15, AFP 및 FIB-4 지수에 대한 간암 발증 예측의 ROC 곡선으로부터 계산된 컷오프 값, 감도 및 특이도를 나타낸다.
[도 9]
A는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 AFP가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. B는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 FIB-4 지수가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. A와 B 모두에서, 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "AFP 높음", "AFP 낮음", "FIB4 지수 높음" 및 "FIB4 지수 낮음"의 화살표는 각각 높은 AFP 그룹, 낮은 AFP 그룹, 높은 FIB-4 지수 그룹 및 낮은 FIB-4 지수 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 10]
GDF15, AFP 또는 FIB-4 지수의 각각 높은 값에 1점을 부여하는 스코어 시스템(scoring system)에 의해 계층화한 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 고위험 그룹(3점), 중위험 그룹(1-2점), 저위험 그룹(0점)의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "높음", "중간", "낮음"의 화살표는 각각 고위험 그룹, 중위험 그룹, 저위험 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 11]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 검증 코호트의 사례의 상세를 나타내는 표.
[도 12]
SVR에 도달한 C형 간염 환자의 검증 코호트에서 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다.
[도 13]
A는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 GDF15가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. B는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 AFP가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. C는 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 FIB-4 지수가 높은 그룹 및 낮은 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. A, B 및 C에서, 종축은 누적 간암 발증률, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "GDF15 높음", "GDF15 낮음", "AFP 높음", "AFP 낮음", "FIB4 지수 높음", "FIB4 지수 낮음"의 화살표는 각각 높은 GDF15 그룹, 낮은 GDF15 그룹, 높은 AFP 그룹, 낮은 AFP 그룹, 높은 FIB-4 지수 그룹 및 낮은 FIB-4 지수 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 14]
본 발명의 스코어 시스템에 따른 SVR을 달성한 C형 간염 환자에서 고위험 그룹(3점), 중위험 그룹(1-2점), 저위험 그룹(0점)의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(개월)을 나타낸다. "높음", "중간", "낮음"의 화살표는 각각 고위험 그룹, 중위험 그룹 및 저위험 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 15-1]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에 대하여, 본 발명의 스코어 시스템에 따른 고위험 그룹(2점), 중위험 그룹(1점) 및 저위험 그룹(0점)의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(주)을 나타낸다. "높음", "중간" 및 "낮음"의 화살표는 각각 고위험 그룹, 중위험 그룹 및 저위험 그룹의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 15-2]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에 대하여, 공지된 마커인 AFP 및 FIB-4 지수 값이 낮은 그룹에서 GDF15 수준이 높은 모집단과 낮은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(주)을 나타낸다. "높음"의 화살표는 AFP 및 FIB-4 지수 값은 낮지만, GDF15 수준 값이 높은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다. "낮음"의 화살표는 AFP 및 FIB-4 지수 값이 낮고, GDF15 수준 값이 낮은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 15-3]
SVR을 달성한 C형 간염 환자의 도출 코호트에 대하여, 공지된 마커인 AFP 및 FIB-4 지수가 높은 모집단에서 GDF15 수준의 높은 모집단 및 낮은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 누적 간암 발증률을 나타내고, 횡축은 관찰 기간(주)을 나타낸다. "높음"의 화살표는 AFP 및 FIB-4 지수 값이 높고 GDF15 수준 값이 높은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다. "낮음"의 화살표는 AFP 및 FIB-4 지수 값은 높지만, GDF15 수준 값이 낮은 모집단의 누적 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프를 나타낸다.
[도 16]
기준에 따라 선택된 NUC 투여 중의 B형 간염 사례의 보존 혈청의 산포도. 흑색 원은 비발암 사례를 나타내고, 백색 원은 발암 사례를 나타낸다. 종축은 보존 혈청 중의 GDF15 농도(ng/mL)를 나타낸다.
[도 17]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체의 환자 배경을 나타내는 표.
[도 18]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체의 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프. 종축은 발암률을 나타내고, 횡축은 관찰 시간(일)을 나타낸다.
[도 19]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체의 환자 배경을 GDF15의 혈청 농도 중앙값(0.833ng/mL)에 따라 그룹화한 표.
[도 20]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체의 환자 배경을 간암 발증 여부에 따라 그룹화한 표.
[도 21]
NUC 투여 중의 B형 간염 환자 코호트 전체에서, GDF15, Fib4, AFP 및 Plt에 대해 각각 보존 혈청 포인트로부터 5년 시점에서 발암 유무의 시간 경과에 따른 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타낸 그래프. 각 그래프의 종축은 감도 또는 진양성률을 나타내고, 횡축은 위양성률(1-특이성)을 나타내고, AUC는 각 그래프의 ROC 곡선하의 면적(Area under the curve)을 나타낸다.
[도 22]
NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체에서, GDF15, Fib4, AFP 및 Plt에 대하여 각각 보존 혈청 포인트로부터 10년 시점에서 발암 유무의 시간 경과에 따른 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타낸 그래프. 각 그래프의 종축은 감도 또는 진양성률을 나타내고, 횡축은 위양성률(1-특이성)을 나타내고, AUC는 각 그래프의 ROC 곡선하의 면적(Area under the curve)을 나타낸다.
[도 23]
ROC 곡선에서 계산된 컷오프 값(0.845ng/mL)을 사용하여 NUC 투여 중의 B형 간염 사례 코호트 전체에서 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 24]
COX 비례 위험도 모델에 의한 발암에 기여하는 인자의 단변량/다변량 분석의 결과를 나타내는 표.
[도 25]
AFP 및 GDF15의 2개 마커에 대해 각각 5ng/mL 및 0.845ng/mL를 초과하는 컷오프 값을 갖는 사례에 1점을 부여하여 스코어에 따라 그룹화하여 플롯한 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 26]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 GDF15의 혈청 농도의 산포도. 흑색 원은 간암 비발증 사례이고, 백색 원은 간암 발증 사례이다. 발증한 간암의 6건 사례 중 5건 사례는 원발성 간 세포암(HCC)이었고, 화살표로 표시된 1건 사례는 담관세포암(CCC)이었다.
[도 27]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 환자 배경을 나타내는 표.
[도 28]
NAFL을 앓고 있는 환자와 NASH을 앓고 있는 환자로 구분한 환자 배경을 나타내는 표.
[도 29]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자 코호트 전체에서 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 30]
간 섬유증에 대해 브런트 스테이지(Brunt Stage)의 0~4형으로 분류된 사례의 GDF15의 혈청 농도 산포도.
[도 31]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 GDF15의 혈청 농도 및 Fib-4 지수 사이의 상관관계를 조사한 산포도.
[도 32]
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 다양한 속성, 혈액 마커, Fib-4 지수 등의 위험비를 나타내는 표.
[도 33]
GDF15 및 Fib-4 지수에 대해 각각 보존 혈청 포인트로부터 5년 시점에서 발암 유무에 대한 시간 경과 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타내는 그래프.
[도 34-1]
컷오프 값이 2.00ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 34-2]
컷오프 값이 1.35ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 35-1]
오가키 시민 병원(Ogaki Municipal Hospital) 183건 사례의 환자 배경.
[도 35-2]
관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 환자 170명의 환자 배경.
[도 36-1]
오가키 시민 병원에서 환자 183명의 NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 보존 혈청의 산포도. 흑색 원은 비발암 사례이고, 회색 원은 발암 사례이다. 종축은 보존 혈청 중의 GDF15 농도(ng/mL)를 나타낸다. 간암 발증의 9건 사례는 모두 원발성 간 세포암(HCC)이었다.
[도 36-2]
관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 170명 환자의 보존 혈청의 산포도. 흑색 원은 비발암 사례이고, 회색 원은 발암 사례이다. 종축은 보존 혈청 중의 GDF15 농도(ng/mL)를 나타낸다. 간암 발증의 8건 사례 중 7건 사례는 원발성 간 세포암(HCC)이었고, 화살표로 표시된 1건 사례는 담관세포암(CCC)이었다.
[도 37-1]
오가키 시민 병원에서 183건 사례의 간암 발증률.
[도 37-2]
관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 간암 발증률.
[도 38-1]
오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 총 353건 사례에 대해 보존 혈청 포인트로부터 5년 시점에서 발암 유무에 대해 시간 경과 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타내는 그래프.
[도 38-2]
오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 총 353건 사례에 대해 보존 혈청 포인트로부터 7년 시점에서 발암 유무의 시간 경과 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타내는 그래프.
[도 39-1]
오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 총 353건 사례에 대해 컷오프 값이 2.00ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
[도 39-2]
오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간이 연장된 실시예 3의 코호트에서 총 353건 사례에 대해 컷오프 값이 1.74ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프.
정의
본 발명에서, GDF15는 형질전환 성장 인자(TGF) 베타 슈퍼패밀리에 속하는 사이토카인으로, 전체 길이가 308개 아미노산으로 이루어지는 단백질이다. 태반에서 고도로 발현되고, 태반 이외의 정상 조직에서는 약하게 발현된다. 염증 중에 급속하게 상향 조절된다. 인간 GDF15 단백질의 아미노산 서열, 및 GDF15 mRNA의 뉴클레오티드 서열은 NCBI 참조 서열: NP_004855.2 및 NM_004864.4로 각각 공개되어 있으며, 그 자체로 공지된 방법에 의해 단리할 수 있다.
본 발명에서, GDF15 수준은 GDF15 단백질 및/또는 GDF15 전사 산물의 수준을 지칭한다. GDF15 단백질 및 GDF15 전사 산물의 수준은 각각 소정 양의 샘플 중의 GDF15 단백질 및 GDF15 mRNA의 함량을 의미한다. 본 발명에서, GDF15 단백질 및 GDF15 전사 산물의 생물학적 종은 대상체의 생물학적 종과 동일하다. GDF15 단백질 및 GDF15 전사 산물의 수준은 하기에 언급된 측정 방법에 따라 당업자에게 공지된 방식으로 표현될 수 있다. 예를 들면, GDF15 단백질 및 GDF15 전사 산물의 농도로 표현하거나, 또는 표준 샘플의 측정값에 기초한 상대값으로 표현할 수 있다.
GDF15 단백질 수준을 측정하는 방법은 GDF15 단백질에 대해 특이적인 항체를 기반으로 하는 면역학적 방법을 사용한다. GDF15 단백질 수준은 항체 어레이, 유세포 분석, 방사성 동위원소 면역 분석법(RIA 방법), ELISA(Engvall E, Methods in Enzymol. 1980; 70:419-439.), 웨스턴 블롯팅, 면역 조직 염색, 효소 면역 분석법(EIA 방법), 형광 면역 분석법(FIA), 면역 크로마토그래피법, 면역비탁법, 면역비탁 계측법 등을 사용하여 측정할 수 있다. 감도 및 실시의 용이성 관점에서 ELISA가 바람직하다. ELISA에 대한 상세는 실시예에 설명되어 있다.
GDF15 전사 산물 수준의 측정 방법으로는, 노던 블롯팅 방법, RNase 보호 분석법, 역전사 폴리머라제 연쇄 반응법(RT-PCR)[참조: Weis JH et al., Trends in Genetics 1992; 8:263-264.], 정량적 실시간 RT-PCR 방법[참조: Held CA et al., Genome Research 1996; 6:986-994.] 등이 사용될 수 있다. 감도 및 실시 용이성 관점에서 정량적 실시간 RT-PCR이 바람직하다. 정량적 실시간 RT-PCR 방법에 대한 상세는 실시예에 설명되어 있다.
본 발명의 대상체는 임의의 포유류일 수 있으나, 만성 간 질환을 갖는 포유동물이 바람직하다. 포유동물의 예로는 실험동물(마우스, 랫트, 햄스터, 기니피그 등과 같은 설치류 및 래빗 등), 개, 고양이 등과 같은 애완동물, 소, 돼지, 염소, 말, 양 등과 같은 가축, 원숭이, 오랑우탄, 침팬지 등과 같은 영장류, 인간 등을 포함하며, 특히 인간이 바람직하다. 여기서, 만성 간 질환은 바이러스성 간염 및 지방간 질환을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 바이러스성 간염은 C형 간염 및 B형 간염을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 지방간 질환은 비알콜성 지방간 질환(NAFLD) 및 이차성 지방간을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. NAFLD는 비알콜성 지방간(NAFL) 및 비알콜성 지방간염(NASH)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 본 발명에서 대상체는 간암의 발증 위험을 평가해야 하는 만성 간 질환 환자를 포함한다. 본 발명의 대상체는 C형 간염에서 SVR 후의 대상체, B형 간염에서 NUC 투여하의 대상체 및 NASH를 앓고 있는 대상체를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 발명에서, 만성 간 질환을 위한 검사 및 만성 간 질환으로부터 간암 발증의 유무를 검사하기 위한 검사는, 예를 들면, 비특허 문헌 3 및 4에 상세히 설명되어 있다.
본 발명에서, HCV의 지속 바이러스 반응(SVR) 및 SVR을 달성하기 위한 치료 및 SVR 달성 후의 간암 발증의 유무를 검사하는 검사는 각각 C형 간염 바이러스 감염 관리 가이드라인(일본 간학회 간염 관리 가이드라인 작성위원회 편집, 8판, 2020년 7월에 발행, https://www.jsh.or.jp/lib/files/medical/guidlines/jsh_guidlines/C_v8_20201005.pdf), 이의 영문판(Hepatology Research 2020; 50: 791-816.)) 및 간암 진료 가이드라인(일본 간학회 편집, 2017년 10월 발행, 2017년판(https://www.jsh.or.jp/medical/guidelines/jsh_guidlines/medical/examination_jp_2017.html), 이의 영문판(https://www.jsh.or.jp/English/examination_en/guidelines_hepatocellular_carcinoma_2017.html)), Ghany MG 및 Morgan TR. (Hepatitis C Guidance 2019 Update: American Association for the Study of Liver Diseases-Infectious Diseases Society of America Recommendations for Testing, Managing, and Treating Hepatitis C Virus Infection. Hepatology 2020;71:686-721.）、Clinical Practice Guidelines Panel （EASL recommendations on treatment of hepatitis C: Final update of the series. J Hepatol 2020;73:1170-1218.)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 간염 및/또는 간암의 권위 있는 전문가들의 정의를 따른다.
본 발명에서, B형 간염에서 NUC 투여에 의한 치료는 일본 간학회 편집부, B형 간염 바이러스 감염 치료 가이드라인(버전 3.4) 2021년 5월(https://www.jsh.or.jp/lib/files/medical/guidelines/jsh_guidlines/B_v3.4.pdf), 이의 영문판(Hepatology Research, 2020; 50: 892-923.)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 간염의 권위 있는 전문가들의 정의를 따른다.
본 발명에서, 지방간 질환, 비알콜성 지방간 질환(NAFLD), 비알콜성 지방간(NAFL) 및 비알콜성 지방간염(NASH)은 NAFLD/NASH 진료 가이드라인 2020(일본 소화기 학회 · 일본 간학회 편집, 2020년 11월 개정 2판 발행, 난코도 주식회사), (https://www.jsge.or.jp/guideline/guideline/pdf/nafldnash2020.pdf)), 이의 영문판(Tokushige, K. et al. HepatologyResearch.2021; 51:1013-1025. 및 Tokushige, K. et al. Journal of Gastroenterology 2021; 56: 951-963.)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 권위 있는 간염의 전문가들의 정의에 따른다.
본 발명에서, 바이러스성 만성 간염, 지방간 질환 및 기타 간 질환으로부터 간암 발증의 유무를 검사하기 위한 검사는 간암 진료 가이드라인(일본 간학회 편집, 2017년판, 이하 상기와 같음)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 간암에 대한 권위 있는 전문가들의 정의를 따른다.
본 발명에서, 간암의 발증 위험을 결정하는 것은 일정 기준에 따라 평가 및 검사를 실시하는 것을 포함한다. 구체적으로, HCV에 대한 SVR을 달성한 후, 간암이 발증하지 않은 대상체, HBV에 대한 NUC 투여에 의한 치료 중에서 간암이 발증하지 않은 대상체 및 NAFL, NASH 등과 같은 기타 지방 간 질환을 앓고 있으나 간암이 발증하지 않은 대상체를 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 만성 간 질환을 앓고 있으나 간암이 발증하지 않은 대상체가 장래에 간암의 발증 위험이 있는지를 결정하는 것 및 이의 발증 위험의 고저를 결정하는 것이 포함된다. 특히, 본 발명에서 간암의 발증 위험도를 결정하는 것은 간암의 발증 위험도에 따라 대상체를 계층화하고, 간암의 발증 위험이 낮은 대상체보다 간암의 발증 위험이 높은 대상체에게 간암 스크리닝 검사를 위한 자원을 구배 배분하는 것을 한 가지 목적으로 한다.
본 발명에서, 간암의 발증 위험은 대상체의 GDF15 수준과 연관된다. 구체적으로, 대상체의 GDF15 수준이 미리 결정된 컷오프 값과 비교하여 높은지 또는 낮은지는 대상체의 간암의 발증 위험이 높은지 또는 낮은지를 나타내는 지표가 된다.
본 발명의 컷오프 값은 만성 간질환 환자 모집단에 대하여 개별 GDF15 수준과 간암 발증의 유무를 추적하는 데이터베이스를 준비한 후, 간암 발증자와 간암 비발증자의 GDF15 수준 데이터의 통계적 분석 또는 ROC 분석에 기초하여 미리 값을 설정할 수 있다. 상기 컷오프 값을 통계적 분석에 의해 결정하는 경우, 예를 들면, 상기 평가용 모집단의 GDF15 수준 데이터의 중앙값, 산술 평균 또는 기타 평균값을 사용할 수 있다. 상기 언급한 컷오프 값이 ROC 분석에 의해 결정되는 경우, 예를 들면, ROC 분석에 따른 컷오프 값은 ROC 곡선 그래프의 종축(감도 또는 진양성률)이 1.0이고 횡축(1-특이성)이 0.0인 포인트 사이의 거리가 최소가 되는 ROC 곡선 상의 포인트에서의 GDF15 수준이 될 수 있다. 또는, ROC 곡선의 유덴 지수(Youden index)로부터 유도된 컷오프 값일 수도 있다(Cancer 1950; 3:32-35.). 일단 확립되면, 만성 간 질환 환자의 모집단 데이터베이스는 전혀 변경되지 않고서 본 발명의 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법에서 컷오프 값의 설정에 사용될 수 있다. 또는, 본 발명의 대상체를 포함하는 신규 만성 간 질환 환자를 상기 평가용 모집단에 도입하여, 만성 간 질환 환자의 평가용 모집단 데이터베이스를 적절히 업데이트하면서, 본 발명에 따른 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법에서 컷오프 값의 설정에 사용할 수 있다. 본 명세서의 실시예에서 설명한 바와 같이, 본 발명자들에 의한 관찰 연구에서 ROC 곡선에 의해 결정된 간암 발증 예측의 커트라인 값은 본 발명자로부터의 관찰 연구에서 대상체의 혈청 중의 GDF15 수준의 중앙값의 90% 이상 및 110% 이내의 수치 범위 내에 포함된다. 따라서, 상술한 중앙값은 상술한 컷오프 값으로 채택될 수 있다.
대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에서, 상기 혈청 중의 GDF15 단백질 수준의 컷오프 값은 SVR을 달성한 C형 간염 환자에 대해 약 1400 pg/mL가 될 수 있다. GDF15의 컷오프 값은 NUC 투여 중의 B형 간염 환자에 대해 약 845pg/mL가 될 수 있다. GDF15의 컷오프 값은 비알콜성 지방간염 환자에 대해 약 2000pg/mL일 수 있다. 본 발명의 방법에서, 상기 간암의 발증 위험을 결정하는 단계에서, AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값을 추가로 조합하여 결정할 수 있다. 본 발명의 방법에서, 상술한 AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값은 SVR을 달성한 C형 간염 환자에 대해 각각 약 5ng/mL 및 약 3.25일 수 있다.
이하, 본 발명의 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법은 대상체의 GDF15 단백질 수준에 기초하는 방법과 대상체의 GDF15 전사 산물 수준에 기초하는 방법으로 설명한다.
1. 대상체의 GDF15 단백질 수준에 기초하여 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법
본 발명의 한 가지 실시양태에서, 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법으로서,
(1) 상기 대상체의 GDF15 단백질 수준을 측정하는 단계, 및
(2) 상기 언급한 GDF15 단백질 수준을 간암의 발증 위험과 연관시키는 단계를 포함하는, 방법이 제공된다.
대상체의 GDF15 단백질 수준은 대상체의 혈청 또는 혈장 샘플을 사용하여 측정된다. 대상체의 혈장 및 혈청은 대상체로부터 수집된 말초 혈액 샘플로부터 자체 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 이들은 GDF15 단백질 수준의 측정 방법에 따라 공지된 완충액 등을 사용하여 적절하게 희석될 수 있다. 예를 들면, GDF15 단백질 인간 효소결합 면역흡착 분석(ELISA) 키트(#DGD150, R&D systems, Minneapolis, MN)에 부착된 희석 완충액 등을 사용하여 75 내지 100배 이상 희석할 수 있다. 혈액 수집으로부터 측정까지 시간이 걸리는 경우는 동결보존 혈장 및/또는 혈청을 측정할 수 있다.
단계 (1)에서 GDF15 단백질 수준은 GDF15 단백질을 특이적으로 인식하는 항체(즉, GDF15 특이적 항체)를 사용하는 면역학적 방법에 의해 측정할 수 있다. 면역학적 방법에는, 예를 들면, 항체 어레이, 유세포 분석, 방사성 동위원소 면역 분석법(RIA 방법), ELISA(Methods in Enzymol. 70: 419-439 (1980)), 웨스턴 블롯팅, 면역조직 염색, 효소 면역 분석법(EIA 방법), 형광 면역 분석법(FIA), 면역 크로마토그래피 방법, 면역비탁법, 면역비탁 계측법 등이 있다. 감도 및 실시의 용이성 관점에서 ELISA가 바람직하다.
항체에 의한 항원 X의 "특이적 인식"은 항원-항체 반응에서 항원 X에 대한 항체의 친화력이 항원 X 이외의 항원에 대한 친화력보다 더 강력하다는 것을 의미한다. 본 명세서에서, 항원 X를 특이적으로 인식하는 항체를 "항-X 항체" 또는 "X-특이적 항체"로 약칭하기도 한다.
GDF15-특이적 항체는 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체, 또는 이들의 결합 단편일 수 있다.
상술한 항체는 직접 또는 간접적으로 표지 물질에 의해 표지될 수 있다. 표지 물질은 형광 물질(예를 들면, FITC, 로다민), 방사성 물질(예를 들면, 32P, 35S, 14C, 3H), 효소(예를 들면, 알칼리성 포스파타제, 퍼옥시다제), 유색 입자(예를 들면, 금속 콜로이드 입자, 착색 라텍스), 비오틴 등을 포함한다.
또한, 상술한 항체는 다른 결합이 없는 가용성 상태에서 사용될 수 있지만, 고상에 결합될 수도 있다. "고상"의 예로는 플레이트(예: 마이크로웰 플레이트), 튜브, 비드(예: 플라스틱 비드, 자기 비드), 크로마토그래피 담체(예: 니트로셀룰로스 막 등과 같은 흡수성 매트릭스, 세파로스), 막(예: 니트로셀룰로스 막, PVDF 막), 겔(예: 폴리아크릴아미드 젤), 금속 막(예: 금 막) 등을 포함한다. 이 중에서, 플레이트, 비드, 크로마토그래피 담체 및 막이 바람직하게 사용되며, 취급이 용이하다는 점에서 플레이트가 가장 바람직하게 사용된다. 상기한 결합의 예로는 공유 결합, 이온 결합, 물리적 흡착 등이 포함되지만 이들로 특별히 한정되지 않는다. 공유 결합 및/또는 물리적 흡착은 충분한 결합 강도를 수득할 수 있기 때문에 바람직하다. 고상에 대한 결합은 고상에 대한 직접 결합 또는 자체 공지된 물질을 사용하여 고상에 대한 간접 결합에 의해 수행될 수 있다. 또한, 비특이적 흡착 및 비특이적 반응을 억제하기 위해 소 혈청 알부민(BSA) 또는 소 밀크 단백질을 포함하는 인산염 완충액을 일반적으로 고상과 접촉시키고, 항체가 코팅되지 않은 고상의 표면 부분을 상기 언급한 BSA, 소 밀크 단백질 등으로 차단한다.
GDF15-특이적 항체와 대상체로부터 유래된 혈장 또는 혈청 사이의 접촉은 이들 항체가 혈장 또는 혈청 중의 GDF15와 상호작용할 수 있는 한, 모드, 순서, 특정 방법 등은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 항체가 고정된 플레이트에 혈장 또는 혈청을 첨가하여 접촉할 수 있다. 또는, 혈장 또는 혈청의 단백질을 SDS-PAGE와 같은 방법으로 분리하여 막으로 옮기고, 고정시킨 다음, 항체와 접촉시킬 수도 있다.
상기 접촉을 유지하는 시간은 상기 항체와, 상기 대상체로부터 유래된 혈장 또는 혈청 중에 포함된 GDF15가 결합하여 복합체를 형성하기에 충분하다면, 특별히 한정되지 않는다는 점에 유의한다. 일반적으로, 수 초에서 수십 시간이 걸린다. 접촉을 실행하는 온도 조건은 일반적으로 4℃ 내지 50℃, 바람직하게는 4℃ 내지 37℃, 가장 바람직하게는 약 15℃ 내지 30℃의 실온이다. 또한, 반응의 pH 조건은 5.0 내지 9.0, 특히 6.0 내지 8.0의 중성 범위가 바람직하다.
GDF15 단백질의 농도를 측정할 때, 시판되는 GDF15 단백질을 사용하여 이의 희석 계열의 ELISA 결과를 형광, 발색 또는 기타 반응에 의해 정량화함으로써 GDF15 단백질의 농도의 절대값을, 예를 들면, pg/mL 단위로 용이하게 측정할 수 있다.
이어서, 단계(2)에서는, 단계(1)에서 측정된 대상체의 혈장 및/또는 혈청 중의 GDF15 단백질의 수준을 간암의 발증 위험과 상관시킨다. 혈장 및/또는 혈청 중의 GDF15 단백질의 수준과 간암의 발증 위험과의 상관관계는 대상체의 데이터가 간암의 발증 위험을 시사(또는 지시)하는지를 판단하는 것을 의미한다.
대상체의 데이터와 간암의 발증 위험은 일반적으로 대상체의 데이터와 대상체 이외의 만성 간질환 환자의 데이터를 비교하여 상관시킨다. 본 발명의 실시예에 제시된 바와 같이, GDF15 단백질 수준이 미리 설정된 컷오프 값보다 높은 그룹(높은 GDF15 그룹)은 미리 설정된 컷오프 값보다 낮은 그룹(낮은 GDF15 그룹)보다 간암의 발증 위험이 높다는 것이 명확히 밝혀졌다. 이를 통해, 대상체의 간암의 발증 위험을 평가할 수 있다.
본 발명의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법은 GDF15 단백질 수준의 컷오프 값에 기초하여 간암의 발증 위험을 결정하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 대상체의 GDF15 단백질 수준이 상기 컷오프 값 이상인 경우, 상기 대상체의 간암의 발증 위험은 높은 것으로 간주하고, 상기 대상체의 GDF15 단백질 수준이 상기 컷오프 값 미만인 경우, 상기 대상체의 간암의 발증 위험은 낮은 것으로 간주한다. 추가로, 상기 컷오프 값은 상기 대상체 모집단의 GDF15 단백질 수준의 중앙값일 수 있다.
본 명세서에서, 수치 값을 수식하는 형용사 "약"은 해당 수치 값의 90% 이상 및 110% 이내의 수치 범위를 의미한다. 예를 들면, "1400pg/mL"은 1260pg/mL 이상 1540pg/mL 이하의 수치 범위를 지칭한다.
본 발명의 방법에서, SVR을 달성한 C형 간염 환자의 혈청 중의 GDF15 단백질 농도의 중앙값으로 결정되는 컷오프 값은 약 1400pg/mL일 수 있다. 이는 본 명세서의 실시예에서, 상술한 ROC 곡선에 의해 유덴 지수가 최대값에 도달하는 GDF15의 혈청 농도로서 결정된 SVR을 달성한 C형 간염 환자의 컷오프 값은 1448pg/mL이고, 상술한 중앙값으로 결정된 1400pg/mL의 90% 이상 및 110% 이내의 수치 범위 내에 포함되기 때문이다.
본 발명의 방법에서, 상술한 간암의 발증 위험을 결정하는 단계에서, AFP 및/또는 FIB-4 지수의 컷오프 값은 추가로 조합하여 결정될 수 있다. SVR을 달성한 C형 간염 환자의 경우, GDF15와 더불어 AFP 및 FIB-4 지수를 함께 사용하여 결정할 수 있다. NUC에 의한 치료 중의 B형 간염 환자의 경우, GDF15와 더불어 AFP를 함께 사용하여 판정할 수 있다. 종래부터, AFP 및 FIB-4 지수를 마커로 사용하여 DAA 치료 후 SVR을 달성한 대상체의 간암의 발증 위험의 계층화 방법이 공지되어 있기 때문이다. 당업자에게 공지된 종래의 기술에서, 상기 언급한 AFP 및 FIB-4 지수에 대한 컷오프 값은 각각 5ng/mL 및 3.25가 사용되어 왔다.
2. 대상체의 GDF15 전사 산물 수준에 기초하여, 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법
본 발명의 한 가지 실시양태에서, 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법으로서,
(1) 상기 대상체의 GDF15 전사 산물 수준을 측정하는 단계, 및
(2) 상기 언급한 GDF15 전사 산물 수준을 간암의 발증 위험과 연관시키는 단계를 포함하는, 방법이 제공된다.
대상체의 GDF15 전사 산물 수준은 대상체의 생물학적 조직, 혈청 또는 혈장 샘플을 사용하여 측정된다. 상술한 생물학적 조직은, 예를 들면, 경피적 생검(바늘 생검), 내시경 생검 또는 외과적 생검을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 방법으로 대상체의 생물학적 조직의 일부를 수집함으로써 수득할 수 있다. 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 본 발명의 방법에서, 생물학적 조직은 바람직하게는 간 조직이다. 혈청 또는 혈장 샘플에 포함된 순환 GDF15 전사 산물 또는 이의 일부도 측정할 수 있다. 대상체의 GDF15 전사 산물 수준을 측정하기 위해, 종래의 방법에 따라 생물학적 샘플로부터 RNA를 단리할 수 있다. RNA를 추출하는 일반적 방법은 당해 기술분야에서 널리 공지되어 있으며, 문헌[참조: A Laboratory Manual (3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)(Sambrook, J 및 Russell, DW] 등의 분자 생물학 실험 프로토콜에 개시되어 있다. 특히, RNA는 RNeasy 컬럼(Qiagen, Hulsterweg, Germany) 등과 같은 시판의 정제 키트를 사용하여 제조업자의 지침에 따라 단리할 수 있다.
단리된 RNA로부터 GDF15 전사 산물 수준을 측정하기 위해, 예를 들면, 역전사 폴리머라제 연쇄 반응법(RT-PCR), 정량적 실시간 RT-qPCR 방법 등을 사용할 수 있다. RNA로부터 GDF15 특이 프라이머를 사용하여 역전사하여 상보적 DNA를 제조하고, 상보적 DNA를 주형으로 사용하여 GDF15 특이적 PCR 프라이머 쌍 및 형광 표지된 프로브를 포함하는 반응 용액을 실시간 PCR 장치로 증폭하고 형광을 정량화할 수 있다. 구체적으로는, Thunderbird qPCR Master Mix(일본 오사카 토요보) 및 TaqMan 프로브(인간 GDF15, Hs00171132_m1, 인간 베타 액틴 Hs 9999902_m3, Applied Biosystems, Waltham, MA)를 사용하여 정량적 실시간 역전사 폴리머라제 연쇄 반응으로 분석할 수 있다. GDF15 전사 산물 수준의 측정에서, 미리 합성된 GDF15 mRNA 또는 이의 일부 정제된 RNA의 농도를 측정하고, 이의 희석 계열을 실시간 PCR 장치로 증폭하고, 형광을 정량화함으로써 RNA 중의 GDF15 전사 산물의 농도의 절대값을 정량화할 수 있다. 대체적으로는, 동일한 농도의 대조군 RNA 중의 GDF15 전사 산물의 측정값에 대한 측정 대상 샘플로부터 유래된 RNA 중의 GDF15 전사 산물의 측정값의 상대값을 정량화할 수 있다. GDF15 전사 산물의 측정값의 상대값의 경우, 단위는 임의 단위(Arbitrary Units, AU)를 사용할 수 있다.
단계(1)에서 사용되는 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍 및 프로브는 NCBI 참조 서열: NM_004864.4로 공개된 인간 GDF15 mRNA의 뉴클레오티드 서열에 기초하여 합성할 수 있다. 프라이머 및 프로브의 염기 길이는 특별히 제한되지 않는다. 상기 프라이머는 상기 인간 GDF15 mRNA의 뉴클레오티드 서열 중 일부의 뉴클레오티드 서열과, 상기 인간 GDF15 mRNA의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열 중 일부를 전방향 프라이머로 포함하고, 다른 하나를 역방향 프라이머로 포함할 수 있다. 각 프라이머의 염기 길이는 10 내지 50 뉴클레오티드, 바람직하게는 15 내지 30 뉴클레오티드 일 수 있다. 상기 프로브는 상기 인간 GDF15 mRNA의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열의 일부의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 프로브의 염기 길이는 10 뉴클레오티드 내지 상기 인간 GDF15 mRNA의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열의 전체 길이의 범위이고, 바람직하게는 20 내지 150 뉴클레오티드이다.
단계(1)에서 사용되는 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍 및 프로브는 RNA, DNA 등과 같은 천연 핵산일 수 있고, 필요에 따라 천연 핵산과 화학적으로 변형된 핵산 및 유사 핵산의 조합일 수 있다. 화학적으로 변형된 핵산 및 유사 핵산의 예로는 PNA(펩티드 핵산), LNA(잠금 핵산, 등록상표), 메틸포스포네이트형 DNA, 포스포로티오에이트형 DNA, 2'-O-메틸형 RNA 등이 있다. 또한, 프라이머 및 프로브는 형광 물질 및/또는 퀀처 물질 또는 방사성 동위원소(예: 32P, 33P, 35S) 등과 같은 표지 물질 또는 비오틴 또는 (스트렙토)아비딘 또는 자기 비드 등과 같은 변형 물질을 사용하여 표지 또는 변형될 수 있다. 표시 물질은 한정되지 않으며 시판되는 물질을 사용할 수 있다. 예를 들면, 형광 물질로는 FITC, 텍사스(Texas), Cy3, Cy5, Cy7, 시아닌3, 시아닌5, 시아닌7, FAM, HEX, VIC, 플루오레스아민 및 이의 유도체, 로다민 및 이의 유도체 등을 사용할 수 있다. 퀀처 물질로는 AMRA, DABCYL, BHQ-1, BHQ-2 또는 BHQ-3 등을 사용할 수 있다. 프라이머 및 프로브에서 표지 물질의 표지 위치는 변형 물질의 특성 및 사용 목적에 따라 적절하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 5' 또는 3' 말단에서 변형되는 경우가 많다. 또한, 하나의 프라이머 및 프로브 분자에 하나 이상의 표지 물질을 표지할 수 있다. 프라이머 및 프로브의 뉴클레오티드 서열의 설계 및 표지 물질의 선택은 공지되어 있고, 문헌[참조: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001, Sambrook, J and Russell, DW] 등의 분자생물학의 실험 프로토콜에 개시되어 있다.
이어서, 단계(2)에서는, 단계(1)에서 측정된 대상체의 GDF15 전사 산물의 수준을 간암의 발증 위험과 상관시킨다. GDF15 전사 산물의 수준과 간암의 발증 위험과의 상관관계는, 대상체의 데이터가 간암의 발증 위험을 시사(또는 지시)하는지를 판단하는 것을 의미한다.
대상체의 데이터와 간암의 발증 위험은 일반적으로 대상체의 데이터와 대상체 이외의 만성 간질환 환자들의 데이터를 비교하여 상관관계를 수행한다. 본 발명의 실시예에 제시된 바와 같이, GDF15 전사 산물 수준이 미리 설정한 컷오프 값보다 높은 그룹(높은 GDF15 그룹)은 미리 설정한 컷오프 값보다 낮은 그룹(낮은 GDF15 그룹)보다 간암의 발증 위험이 높다는 것이 명확히 밝혀졌다. 이를 통해, 대상체의 간암의 발증 위험을 평가할 수 있다.
본 발명의 간암의 발증 위험 평가 방법은 GDF15 전사 산물 수준의 컷오프 값에 기초하여 간암의 발증 위험을 결정하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 대상체의 GDF15 전사 산물 수준이 상기 컷오프 값 이상인 경우, 상기 대상체의 간암의 발증 위험은 높은 것으로 간주되고, 상기 대상체의 GDF15 전사 산물 수준이 상기 컷오프 값 미만인 경우, 상기 대상체의 간암의 발증 위험은 낮은 것으로 간주된다. 추가로, 상기 컷오프 값은 상기 대상체 모집단의 GDF15 전사 산물 수준의 중앙값일 수 있다.
본 발명의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법은, GDF15 전사 산물 수준의 컷오프 값에 기초하여 간암의 발증 위험을 결정하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 대상체의 GDF15 전사 산물 수준이 상기 컷오프 값 이상인 경우, 상기 대상체의 간암의 발증 위험은 높은 것으로 간주하고, 상기 대상체의 GDF15 전사 산물 수준이 상기 컷오프 값 미만인 경우, 상기 대상체의 간암의 발증 위험은 낮은 것으로 간주한다. 추가로, 컷오프 값은 상기 언급한 대상체 모집단의 GDF15 전사 산물 수준의 중앙값일 수 있다.
본 발명의 방법에서, 상기 간암의 발증 위험을 결정하는 단계에서, AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값을 추가로 조합하여 결정할 수 있다. 종래부터, AFP 및 FIB-4 지수를 마커로서 사용하여 DAA 치료 후 SVR을 달성한 대상체의 간암의 발증 위험을 계층화하는 방법이 공지되어 있기 때문이다. 당업자에게 공지된 종래의 기술에서는 상기 언급한 AFP 및 FIB-4 지수에 대한 컷오프 값으로 각각 5ng/mL 및 3.25가 사용되어 왔다.
3. 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 대상체의 GDF15 수준 측정용 키트
본 발명은 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 대상체에서 GDF15 수준을 측정하기 위한 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 항-GDF15 항체 및/또는 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍 및 프로브를 포함한다. 본 발명의 키트에 포함되는 항-GDF15 특이적 항체는 본 명세서 "1. 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 GDF15 단백질 수준에 기초하여 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법"에 기재된 바와 같다. 본 발명의 키트에 포함된 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍 및 프로브는 본 명세서의 "2. 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 GDF15 전사 산물 수준에 기초하여 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법"에 기재된 바와 같다.
4. 본 발명의 방법에 의해 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 진단제
본 발명은 본 발명의 방법에 따라 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 진단제를 제공한다. 본 발명의 진단제는 항-GDF15 항체 및/또는 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍 및/또는 프로브를 포함한다. 본 발명의 진단제에 포함되는 항-GDF15 특이적 항체는 본 명세서의 "1. 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 GDF15 단백질 수준에 기초하여 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법"에 설명된 바와 같다. 본 발명의 진단제에 포함된 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍 및/또는 프로브는 본 명세서의 "2. 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 GDF15 전사 산물 수준에 기초하여 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법"의 섹션에 설명된 바와 같다.
5. 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 바이오마커로서 GDF15의 사용
본 발명은 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 바이오마커로서 GDF15의 사용을 제공한다. 본 발명에서 GDF15를 사용하는 단계는 본 명세서의 "1. 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 GDF15 단백질 수준에 기초하여 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법" 및 "2. 만성 간 질환을 앓고 있는 대상체의 GDF15 전사 산물 수준에 기초하여 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하는 방법"의 섹션에 설명된 바와 같다.
본 명세서에 언급된 모든 문서는 그 전체가 인용에 의해 본 명세서에 도입되어 있다.
하기에 설명된 본 발명의 실시예는 예시적 목적으로만 제공되며, 본 발명의 기술적 범위를 한정하기 위한 것이 아니다. 본 발명의 기술적 범위는 [청구범위]에 의해서만 한정된다. 본 발명의 정신을 벗어나지 않는 범위 내에서, 본 발명의 구성 요소의 추가, 삭제 및 치환과 같은 본 발명의 변경이 이루어질 수 있다.
실시예
실시예 1: C형 간염 바이러스(HCV) 지속 바이러스 반응(SVR)을 달성한 대상체의 간암의 발증 위험 평가
A. 재료 및 방법
(1) 연구 대상체의 사례 모집단
오사카 간 포럼에 참여한 26개 의료 기관의 C형 간염 사례가 기준선 시점에 등록되었으며, 일본 간학회 가이드라인(Hepatol Res 2020; 50:791-816.)에 따라 인터페론 비함유 DAA 치료를 받았다. B형 간염 바이러스 또는 인간 면역결핍 바이러스에 공-감염, 비대상성 간경변증, 또는 다른 간 질환(자가면역 간염 또는 원발성 담즙성 담관염 등)의 합병증, 간 이식 후 사례, 또는 20세 미만의 사례는 등록으로부터 제외되었다. 2017년 12월까지 총 2840건의 C형 간염 사례가 등록되어 DAA 치료가 완료되었다. 2840건 사례 중, SVR을 달성하지 못한 사례, 기준선 시점의 혈청을 입수할 수 없는 사례, 및 간암 치료 이력이 있는 사례를 제외한 20개 기관의 1609건의 사례가 본 발명의 대상이 되었다. 이 중 823건의 사례는 DAA 치료 전에 간 생검을 실시했다. 이에 대한 조직학적 분석은 메타비르(Metavir) 스코어에 의해 수행되었다.
(2) 임상 연구 검토
본 발명에 참여한 사례의 모든 구성원은 사전 동의서를 제출했다. 본 발명의 설계는 헬싱키 선언을 준수한다. 본 발명의 환자 정보 및 샘플 수집 프로토콜은 오사카 대학병원 윤리 심의위원회 및 각 기관의 윤리위원회의 승인을 받았으며(IRB 14148, 14419, 15080, 15325, 16314, 16494, 12449), 분석 프로토콜은 오사카 대학병원 기관 심의위원회의 승인을 받았다(IRB 번호 17032).
(3) 방바이러스 치료 및 SVR
DAA 치료는 아수나프레비르(asunaprevir) 및 다클라타스비르(daclatasvir) 24주, 소포스부비르(sofosbuvir) 및 레디파스비르(ledipasvir) 12주, 옴비타스비르(ombitasvir) 및 파리타프레비르(paritaprevir), 리토나비르(ritonavir) 병용 12주, 소포스부비르(sofosbuvir) 및 리바비린(ribavirin) 12주, 엘바스비르(elbasvir) 및 그라조프레비르(grazoprevir) 12주 프로토콜로 진행했다. 본 발명에서 SVR은 치료 완료 24주 후에 HCV RNA 수준이 검출되지 않는 것을 의미한다. 사례의 모든 구성원은 HCV 만성 감염증의 치료에 관한 상기 언급한 일본 간 학회의 가이드라인에 따라 치료되었다.
(4) 추적 관찰 및 간암 감시
DAA 치료 전의 모든 사례는 초음파 검사, CT 및/또는 MRI 스캔을 받았고, 간암 발증 사례를 제외했다. DAA 치료 중의 사례는 혈액학적, 생화학적 및 바이러스학적 검사를 포함한 혈액 검사를 2주마다 받았다. 치료 후의 사례는 초음파 및/또는 CT/MRI를 사용하여 간암 감시를 6개월마다 받았다. EASL-EORTC(European Association for the Study of the Liver - European Organisation for Research and Treatment of Cancer) 및 AASLD (American Association for the Study of Liver Diseases)의 권고에 따라 전형적 조영 CT 이미지 및/또는 MRI에 의해 진단을 수행했다[참조: J Hepatol 2012; 56:908-943. and Hepatology 2018; 67:358-380.]. 이미지가 간암 진단에 한계가 있는 경우, 종양의 표적 생검을 시행하고, 조직학적 진단을 시행했다. 추적 관찰 개시일은 DAA 치료 종료일이었다. 종점은 간암이 발생한 날 또는 최종 추적 간암 감시 이미지 검사 날이었다. 생존율의 전체 파라미터는 모든 원인으로 인한 사망일 또는 최후의 추적 관찰일이었다.
(5) 혈청학적 검사
등록된 사례의 혈청은 전향적 연구 프로토콜에 따라 결정된 시점에서 오사카대학의 -80℃ 냉동고에 보관되었다. 혈청 중의 GDF15 농도는 제조업자의 프로토콜에 따라 인간 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA) 키트(#DGD150, R&D systems, Minneapolis, MN)를 사용하여 검사했다. 흡광도는 바리오스캔(Varioscan) LUX(Thermo Scientific, Waltham, MA)로 검사했다.
(6) mRNA 발현 분석
간 조직 RNA를 RNeasy 컬럼(Qiagen, Hulsterweg, Germany)을 사용하여 추출하고, 상보성 DNA로 역전사시켰다. 메신저 RNA 발현은 썬더버드(Thunderbird) qPCR 마스터 믹스(Master Mix)(토요보, 일본 오사카) 및 TaqMan 프로브(인간 GDF15, Hs00171132_m1, 인간 베타 액틴 Hs 9999902_m3, Applied Biosystems, Waltham, MA)를 사용한 정량적 실시간 역전사 폴리머라제 연쇄 반응으로 분석했다. 표적 유전자 발현은 베타-액틴으로 정규화했다.
(7) 통계 분석
파라메트릭 값 및 비파라메트릭 값의 비교를 위한 통계 분석은 각각 스튜던트 t 검정과 맨-휘트니(Mann-Whitney) U 검정으로 수행되었다. 파라메트릭 및 비파라메트릭 다중 비교를 위해 각각 일원 분산 분석(one-way ANOVA)과 터키-크레이머(Turkey-Kramer) 사후 검정 또는 크러스칼-월리스 검정(Kruskal-Wallis test)을 수행했다. 간암 발증률의 분석은 DAA 종료일을 지표로 하고, 간암 발증, 사망 또는 2020년 12월 31일 이전의 간암 감시 최종일 중 먼저 도래하는 날까지 사례를 추적하고, 카플란-마이어 곡선을 표시했다. 2개 그룹 사이의 간암 발증률을 비교하기 위해 로그-랭크(log-rank) 검정을 사용했다. 간암 예측을 분석하기 위해 로지스틱 회귀 분석을 사용하고, 간암의 발증 위험을 비교하기 위해 콕스(Cox) 비례 위험 모델을 사용했다. 분석에는 Windows용 Prism 버전 8.4.2(그래프 패드 PRISM RRID, SCR_014242)가 사용되었다.
B. 결과
(1) DAA 치료 후 간암 발증 사례는 혈청 GDF15 수준이 간암 비발증 사례보다 높았다.
간암 치료 이력이 없는 사례는 치료 종료 시점 및 치료 종료 24주 후의 둘 다의 보존 혈청이 존재하는 도출(Derivation) 코호트와 어떤 시점에서도 보존 혈청이 존재하지 않은 검증(Varidation) 코호트의 2개 그룹으로 나뉘었다. 도출 코호트 및 검증 코호트의 사례에 대한 상세는 도 1에 제시되어 있다.
도출 코호트에서는 치료 전(전 또는 치료 전), 치료 종료 시점(EOT), SVR 달성 24주 후(p24w 또는 Post 24 weeks) 등 3개 시점에서 보전 혈청이 존재한다. 3개 시점에 보존 혈청의 GDF15 수준을 분석한 결과, DAA 치료 후의 혈청 GDF15 수준이 치료 전보다 낮아졌다(도 2-1). 또한, DAA 치료 전의 간 조직이 동결보존된 55건 사례에서는 혈청 중의 GDF15 수준과 간에서 GDF15의 발현 사이에 약한 상관관계가 관찰되었다(도 2-2).
치료 전의 혈청 중 GDF15 수준의 중앙값인 1400pg/mL을 기준으로 사례를 2개 그룹으로 나누었다. 도 3에 높은 GDF15 그룹 및 낮은 GDF15 그룹의 상세를 나타내고, 치료 전의 높은 GDF15 그룹은 치료 전의 낮은 GDF15 그룹보다 고령이고, 혈소판 수가 작고, AST, ALT, GGT, 트리글리세라이드, 공복시 혈당, HbA1c, AFP, FIB-4 지수 및 ALBI 스코어가 높고, HCV RNA 수준, 헤모글로빈, eGFR 및 알부민 수준이 낮았다. 혈청 중의 GDF15 수준은 섬유화 스코어와 상관관계가 있었다(도 4-1). 혈청 중의 GDF15 수준은 FIB-4 지수 값과 상관관계가 있었다(도 4-2). 도 4-3에 제시된 바와 같이, 혈청 중의 GDF15 수준은 고령(도 4-3A), 높은 AST(도 4-3D), 낮은 eGFR(도 4-3G), 낮은 알부민(도 4-3H), 높은 ALBI 스코어(도 4-3K)와도 상관관계가 있었다.
도출 코호트에서, 본 발명의 관찰 기간 내에 DAA 치료 후 간암이 발증한 것은 49건 사례였다. 이의 상세는 도 5에 제시되어 있다. 도출 코호트에서 간암 발증률은 1년 1.59%, 2년 2.85%, 3년 5.02%였다(도 6-1). 치료 후 간암 발증 사례는 치료 전(Pre Treatment), 치료 종료 시점(End Of Treatment), 및 SVR 달성 24주 후(Post 24 weeks)의 3개 시점 모두에서 혈청 GDF15 수준이 치료 후 간암 비발증 사례보다 높았다(도 6-2). 간암 발증 시점의 GDF15 수준은 간암 발증 1년 전의 GDF15 수준과 비교하여 유의한 변화가 없었다(도 6-3). 이는 혈청 GDF15 수준이 AFP 및 PIVKA2와 같은 종양 마커와는 달리 각 사례의 해당 시점에서 간 질환의 중증도를 반영할 수 있음을 시사한다.
1, 2 및 3년간의 누적 간암 발증률은 높은 GDF15 그룹에서 각각 2.80%, 4.44% 및 8.31%였고, 낮은 GDF15 그룹에서 각각 0.47%, 1.12% 및 1.93%였다. 1년, 2년 및 3년간의 누적 간암 발증률은 낮은 GDF15 그룹이 높은 GDF15 그룹보다 유의하게 낮았다(도 6-4).
(2) 혈청 GDF15 수준은 DAA 치료 후의 간암 발증을 예측하는 신규 바이오마커가 될 수 있다.
간암 발증을 예측하는 바이오마커로서 치료 전의 혈청 GDF15 수준을 검토하기 위해 간암 발증과 연관되는 치료 전의 변수를 콕스 해저드(Cox Hazard) 모델을 사용하여 분석했다. FIB-4 지수가 3.25보다 큰 사례(>3.25)는 과거 소견(Gastroenterology 2017; 153:996-1005.e1001. 및 Hepatology 2007; 46:32-36.)에 기초하여 간섬유화 진행성 사례로 간주했다. 다른 변수는 중앙값 또는 과거 소견(Clin Gastroenterol Hepatol 2014; 12:1186-1195.)에 기초하여 2개 그룹으로 할당되었다. 단변량 분석에 의해, 고령, 낮은 혈소판, 높은 AST, 높은 ALT, 낮은 알부민, 낮은 프로트롬빈 활성, 높은 AFP, 높은 혈청 GDF15, 높은 FIB-4 지수 및 높은 ALBI 스코어는 간암의 발증 위험의 증가와 관련이 있는 것으로 나타났다(도 7).
성별, 종양 마커로서의 AFP, GDF15 수준, 연령, AST, ALT, 및 혈소판으로 계산된 섬유화의 진행으로서의 FIB-4 지수와, 알부민 및 빌리루빈으로 계산된 ALBI 스코어의 파라미터가 다변량 콕스 회귀 모델에 선택되었다. 이 중 파라미터 중, AFP[참조: J Med Virol 2020; 92:3507-3515. and J Hepatol 2017; 67:933-939.], FIB-4 지수[참조: Gastroenterology 2017; 153:996-1005.e1001., J Med Virol 2020; 92:3507-3515. and J Hepatol 2017; 68:25-32.], 및 ALBI 스코어[참조: Dig Liver Dis 2019; 51:681-688.]는 HCV 배제 후의 간암 위험 인자로 공지되어 있다. 높은 GDF15 값(HR 2.52 95% CI 1.17-6.09), 높은 AFP(HR 2.26 95% CI 1.16-4.69) 및 높은 FIB-4 지수(HR 2.40 95%CI 1.18-5.24)는 간암의 발증 위험 증가와 독립적으로 연관되어 있었다(도 7). AFP, FIB-4 지수 및 GDF15 사이에는 간암 발증 예측에 유의차가 없었다(도 8). 누적 간암 발증률은 높은 AFP 그룹 또는 높은 FIB-4 지수 그룹에서 3년간 8 내지 9%이고, 낮은 AFP 그룹 또는 낮은 FIB-4 지수 그룹에서 2 내지 3%였다(도 9A 및 9B).
간암 발증을 예측하기 위한 GDF15, AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값은 유덴(Youden) 지수[참조: Cancer 1950; 3:32-35.]에서의 ROC 곡선에 의해 결정되었다. 혈청 GDF15, AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값은 각각 1448pg/mL, 6.020ng/mL 및 3.025였다(도 8E). 이러한 컷오프 값은 치료 전의 혈청 중의 GDF15 수준의 중앙값인 1400pg/mL, 5ng/mL 및 3.25와 유사했다(도 7).
간암의 발증 위험을 계층화하기 위해, GDF15, AFP 또는 FIB-4 지수의 값이 높은 각 사례를 1점으로 하여 각 사례의 총점을 계산했다. 0점은 저위험 그룹, 1점 또는 2점은 중위험 그룹, 3점은 고위험 그룹으로 정의했다. 1년, 2년 및 3년간의 간암 발증 누적 위험은 각각 저위험 그룹에서 0%, 0.40% 및 0.40%, 중위험 그룹에서 1.18%, 1.89% 및 4.44%, 고위험 그룹에서 4.95%, 8.26% 및 13.2%였다(도 10).
저위험 그룹 248명 중 단 한 명만이 간암으로 발증했다. 이 사례의 BMI는 31.4kg/m2, HbA1c는 6.4%였다. 일본에서는 BMI가 30kg/m2을 초과하는 모집단은 희소하며, 본 발명에서도 BMI가 30g/m2을 초과하는 사례의 비율은 도출 및 검증 코호트 모두에서 2.5%였다. 따라서, GDF15가 30kg/m2를 초과하는 사례에서 간암의 발증 위험의 예측에 정상 BMI를 갖는 사례와 동일한 방식으로 효과적인지 여부를 조사하는 것은 향후 과제이다.
(3) GDF15 수준, AFP 및 FIB-4 지수를 사용하는 스코어 시스템은 검증 코호트에서 간암의 발증 위험을 계층화할 수 있다.
도출 코호트 연구에서, 간암의 발증 위험은 GDF15 수준, AFP 및 FIB-4 지수를 사용하는 스코어 시스템에 의해 계층화되었다. DAA 치료 전의 혈청만이 사용할 수 있는 751건 사례의 검증 코호트를 사용하여 이 스코어 시스템을 검증했다. 검증 코호트에서는 관찰 기간 중에 39건의 사례에서 DAA 치료 후 간암을 발증했다(도 11). 검증 코호트에서 간암 발증률은 1년 동안 1.95%, 2년 동안 4.54%, 3년 동안 5.82%였다(도 12). 도출 코호트와 검증 코호트 사이의 누적 간암 발증률에는 유의차가 없었다(p=0.57). 낮은 GDF15 그룹, 낮은 AFP 그룹 및 낮은 FIB-4 지수 그룹의 누적 간암 발증률은 각각 높은 GDF15 그룹, 높은 AFP 그룹 및 높은 FIB-4 지수 그룹보다 유의하게 낮았다(도 13A-13C).
이 스코어 시스템은 고위험 모집단과 저위험 모집단을 세분화하여 간암의 발증 위험을 명확하게 계층화했다(도 14). 1, 2 및 3년간의 누적 간암의 발증 위험은 고위험 그룹(3점, N=183)에서 6.12%, 13.43% 및 14.2%, 중위험 그룹(1-2점, N=322)에서 1.0%, 2.91% 및 5.52%였다. 중요한 것은 저위험 그룹(0점, N=236)에서는 간암이 전혀 발증하지 않았다는 점이다(도 14).
신규 바이오마커 GDF15와 공지 마커 AFP 및 FIB-4 지수를 조합한 스코어링 시스템에 의한 SVR 후의 간암의 발증 위험 계층화의 유의성을 더욱 명확히 하기 위해, 이하에서는 본 발명의 도출 코호트에서 공지 마커 AFP 및 FIB-4 지수만을 사용한 스코어링 시스템에 의한 SVR 후의 간암의 발증 위험 계층화 결과와 비교했다.
도출 코호트의 경우, 각 공지된 마커 AFP 및 FIB-4 지수의 높은 값을 1점으로 하여 각 사례에 대한 총 스코어를 계산했다. 0점은 저위험 그룹, 1점은 중위험 그룹, 2점은 고위험 그룹으로 정의했다. 도 15-1에 제시된 바와 같이, 각 위험 그룹별 카플란-마이어 곡선의 계층화 정도는 거칠었고, 저위험 그룹에서도 중위험 그룹에 필적하는 간암 발증률이 관찰되었다.
공지된 마커인 AFP 및 FIB-4 지수만을 이용한 스코어링 시스템에서 저위험 그룹,을 AFP 및 FIB-4 지수는 모두 낮지만 GDF15 수준이 높은 모집단과, AFP 및 FIB-4 지수 모두 낮고 GDF15 수준이 낮은 모집단으로 계층화하면, 도 15-2에 도시된 바와 같이, AFP 및 FIB-4 지수 모두 낮고 GDF15 수준이 낮은 모집단에서 간암 발증률은 0으로 나타났다. 따라서, 신규 바이오마커인 GDF15와 기존에 공지된 마커인 AFP 및 FIB-4 지수를 함께 사용하는 스코어링 시스템에 의한 SVR 후의 간암의 발증 위험 계층화에 의해, 낮은 GDF15, 낮은 AFP 및 낮은 FIB-4 지수의 그룹에서는 간암 발증 사례가 없기 때문에, DAA 치료 후 간암의 발증 위험이 매우 낮음을 본 발명은 최초로 입증했다.
반면, AFP 및 FIB-4 지수가 낮고 GDF15 수준이 높은 모집단에서는 간암 발증률이 1년간 약 7%로 나타났다. 따라서, 낮은 AFP 및 낮은 FIB-4 지수에 의한 계층화만으로는 DAA 치료 후의 간암의 발증 위험은 충분히 낮지 않다는 것을 확인했다.
공지된 마커인 AFP 및 FIB-4 지표만을 이용한 스코어링 시스템에서 고위험 그룹을, GDF15 수준이 높은 모집단과 낮은 모집단으로 계층화하면, 도 15-3에 제시된 바와 같이, DAA 치료 후의 간암 발증률은 AFP 및 FIB-4 지수는 모두 높지만, GDF15 수준이 낮은 모집단과 AFP 및 FIB-4 지수는 모두 높은 값을 가졌고, GDF15 수준도 높은 값의 모집단과 큰 차이가 있는 것으로 나타났다. 이는 DAA 치료 후의 간암 발증률 예측에는 GDF15에 의한 계층화가 공지된 마커인 AFP 및 FIB-4 지수에 의한 계층화보다 더 기여한다는 것을 나타낸다. 이상의 분석으로부터, 신규 바이오마커 GDF15를 포함한 스코어링 시스템의 유용성을 확인할 수 있었다.
본 발명의 실시예는 보존 혈청을 이용한 후향적 연구이고, 혈청의 적용 가능성과 관련된 바이어스를 부정할 수 없다. 이러한 우려를 없애기 위해, 도출 코호트와 검증 코호트를 비교하여 적어도 간암 발증률에서는 유의차가 없음을 나타냈다. 문헌[참조: Myojin, Y. et al. (Aliment Pharmacol Ther. 2022; 55:422-433)]는 본 실시예 사례의 도출 코호트 및 검증 코호트를 3:2로 랜덤으로 나누어 도출 코호트(964건 사례) 및 검증 코호트(642건 사례)를 분석했다. 그 결과, 혈청 GDF15, AFP 및 FIB-4 지수의 ROC 곡선에 의해 유덴 지수가 최대값에 도달되도록 결정된 컷오프 값은 각각 1350pg/mL, 5ng/mL 및 3.25였다. 이러한 수치는 본 실시예에서 치료 전의 혈청 중의 GDF15 수준의 중앙값과 유사했다.
실시예 2: B형 간염 바이러스(HBV)에 대하여 NUC 투여에 의한 치료 중에 간암을 발증하지 않은 대상체의 간암의 발증 위험 평가
A. 재료 및 방법
(1) 연구 대상의 사례 모집단
본 실시예의 연구 대상체는 장기간 경과 조사가 가능한 보존 혈청으로 핵산 유사체(NUC) 투여 사례이다. 여기서, 보존 혈청의 선택 기준은 보존 혈청 포인트(복수 존재하는 경우는 해당하는 가장 오래된 혈청에 대한 보존 혈청 포인트)에서 8개월 이상의 NUC 투여 이력이 있는 것, 및 보존 혈청 포인트에서 혈청 HBV DNA 3.0 log IU/ml 미만의 사례이다. 혈청 포인트 시점에서 간암 병력이 있는 환자 및 B형 간염 이외의 간 질환이 동반된 환자는 제외된다.
(2) 임상 연구 검토
본 발명의 설계는 헬싱키 선언을 준수한다. 본 발명의 환자 정보 및 샘플 수집, 분석 프로토콜은 오사카대학 부속병원 임상 연구 윤리 심의위원회의 승인을 받았으며(IRB 17032), 오사카대학 의학부 부속병원을 포함한 각 시설의 허가를 받았다.
(3) 항바이러스 치료
치료는 일본 간학회에서 편집한 "B형 간염 바이러스 감염 관리 가이드라인"(초판) 2013년 4월 내지 (3.4판) 2021년 5월(https://www.jsh.or.jp/lib/files/medical/guidelines/jsh_guidlines/B_v3.4.pdf), 이의 영문판(Hepatology Research, 2020; 50: 892-923.) 등 당시 이용 가능한 가이드라인에 따라 실시했다. 구체적으로, NUC 치료 개시 후는 당시 사용 가능했던 NUC의 경구 투여를 계속했다.
(4) 추적 관찰 및 간암 감시
HBV에 대해 NUC 투여에 의한 치료 중의 환자의 추적 관찰 및 간암 감시는 HCV의 항바이러스 치료 환자의 추적 관찰 및 간암 감시와 동일한 방식으로 수행되었다.
(5) 혈청학적 검사 및 통계 분석
HBV에 대해 NUC 투여에 의한 치료 중의 환자의 혈청학적 검사 및 통계 분석은 HCV에 대해 항바이러스 치료 환자의 혈청학적 검사 및 통계 분석과 동일한 방식으로 수행되었다.
B. 결과
(1) HBV에 대한 NUC 투여에 의한 치료 중의 간암 발증 사례는 혈청 GDF15 수준이 간암 비발증 사례보다 더 높았다.
NUC 투여에 의한 치료 중의 사례의 GDF15의 혈청 농도의 산포도, 환자 배경 및 금회의 전체 코호트에서 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 각각 도 16, 도 17 및 도 18에 제시한다. 도 16과 도 17에 제시된 바와 같이, 전체 코호트에서 GDF 혈청 농도의 중앙값 및 25%-75% 구간은 0.833ng/mL 및 0.555-1.206ng/mL였다.
도 19는 환자 배경을 GDF15 혈청 농도의 중앙값(0.833ng/mL)에 따라 그룹화한 표이다. 도 20은 환자 배경을 간암 발증 유무에 따라 그룹화한 표이다. 도 21 및 도 22는 GDF15, Fib4, AFP 및 Plt에 대해 각각 보존 혈청 포인트로부터 5년 및 10년 후의 발암 유무에 대해 시간 경과 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타내는 그래프이다. 각 그래프의 종축은 감도 또는 진양성률을 나타내고, 횡축은 위양성률(1-특이성)을 나타내고, AUC는 각 그래프의 ROC 곡선하 면적(Area under the curve)을 나타낸다. 도 23은 ROC 곡선으로부터 유덴 지수가 최대가 되는 값으로 결정된 컷오프 값(0.845ng/mL)을 사용하여 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. 도 24는 COX 비례 위험도 모델을 사용하여 발암에 기여하는 인자에 대한 단변량/다변량 분석 결과를 나타내는 표이다. 도 25는, 다변량 분석에서 양호한 결과를 나타낸 AFP 및 GDF15의 2종류 마커에 대해 각각 5ng/mL 및 0.845ng/mL 이상의 컷오프 값을 갖는 사례에 1점을 부여하고 스코어에 따라 사례를 그룹화하여 플롯팅한, 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. 신규 바이오마커 GDF15를 단독으로 사용하거나 공지된 마커 AFP와 함께 사용하는 스코어링 시스템에 의한 계층화는 NUC 투여에 의한 치료 중의 HBV 환자의 간암 발증 예측에 유용한 것으로 나타났다.
상기 결과로부터, B형 간염 바이러스(HBV)에 대한 NUC 투여에 의한 치료 중에 간암을 발증하지 않은 대상체에서도 GDF15의 혈청 농도 마커는 간 발암 예측에 유용한 것으로 검증되었다.
실시예 3: NAFL 또는 NASH을 앓고 있지만 간암을 발증하지 않은 대상체의 간암의 발증 위험 평가
A. 재료 및 방법
(1) 연구 대상체로서의 사례 모집단
본 실시예의 연구 대상체는, 2012년부터 2020년까지 간 생검에서 NAFLD로 진단된 사례 중, 이후 경과를 조사할 수 있는 간 생검시의 보존 혈청이 있는 사례이다. 혈청 포인트 시점에서 간암 병력이 있는 환자 및 NAFLD 이외의 간 질환이 동반된 환자는 제외된다.
(2) 임상 연구 검토
본 발명에 참여한 사례의 모든 구성원은 사전 동의서를 제출했다. 본 발명의 설계는 헬싱키 선언을 준수한다. 본 발명의 환자 정보 및 샘플 수집, 분석 프로토콜은 오사카대학 부속병원 임상연구 윤리심의위원회의 승인을 받았으며(IRB 17032, 19551), 오사카대학 의학부 부속병원을 포함한 각 시설의 허가를 받았다.
(3) NAFL 또는 NASH 치료
비알콜성 지방간(NAFL) 및 비알콜성 지방간염(NASH)은 "NAFLD/NASH 임상 진료 가이드라인 2020"(일본 소화기학회 · 일본 간학회 편집, 개정 2판, 2020년 11월 발행, 난코도 주식회사), 이의 영문판(https://www.jsge.or.jp/guideline/guideline/pdf/nafldnash2020.pdf)), 이의 영문판(Tokushige, K. et al. HepatologyResearch.2021; 51:1013-1025. and Tokushige, K. et al. Journal of Gastroenterology 2021; 56: 951-963.] 등 당시에 이용 가능한 가이드라인에 준거하여 치료되었다.
(4) 추적 관찰 및 간암 감시
NAFL 또는 NASH 환자에 대한 추적 관찰 및 간암 감시는 HCV 항바이러스 치료 환자에 대한 추적 관찰 및 간암 감시와 동일한 방식으로 수행되었다.
(5) 혈청학적 검사 및 통계 분석
NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자에 대한 혈청학적 검사 및 통계 분석은 HCV에 대한 항바이러스 치료 환자의 혈청학적 검사 및 통계 분석과 동일한 방식으로 수행되었다.
B. 결과
도 26은 NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 GDF15 혈청 농도를 나타낸 산포도이다. 도 26의 산포도에서는 흑색 원은 간암 비발증 사례이고, 백색 원은 간암 발증 사례를 나타낸다. 간암 발증 6건 사례 중 5건 사례는 원발성 간 세포암(HCC)이었고, 화살표로 표시된 1건 사례는 담관세포암(CCC)이었다. 도 27은 NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 환자 배경을 나타내는 표이다. 도 28은 NAFL을 앓고 있는 환자와 NASH을 앓고 있는 환자로 그룹화한 환자 배경을 나타내는 표이다. 도 28에 제시된 바와 같이, NAFL 환자 전체 코호트에서 GDF 혈청 농도의 중앙값 및 25%-75% 구간은 1.07ng/mL 및 0.69-1.49ng/mL였고, NASH 환자 전체 코호트에서 GDF 혈청 농도의 중앙값 및 25%-75% 구간은 1.41ng/mL 및 0.98-1.94 ng/mL였다. 도 29는 NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 전체 환자 코호트에서 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다.
도 30은 브런트 스테이지(Brunt Stage) 0형 내지 4형으로 그룹화한 사례마다의 GDF15 혈청 농도의 산포도이다. 브런트 스테이지 0형으로부터 4형으로 스테이지가 진행됨에 따라 각 그룹의 GDF15의 혈청 농도가 상승하는 경향을 존크히어-터프스트라(Jonckheere-Terpstra) 경향 검정(trend test)으로 검증한 결과, 유의차 P는 0.003이었다. 따라서, 도 30으로부터, GDF15의 혈청 농도와 섬유화 사이에 유의한 상관관계가 관찰되었다.
도 31은 NAFL 또는 NASH를 앓고 있는 환자에서 GDF15의 혈청 농도 및 Fib-4 지수 사이의 상관관계를 조사한 산포도이다. 유의차 P는 0.0001 미만이고, 결정 계수 R2는 0.245로 유의한 상관관계가 관찰되었다.
도 32는 NAFL 또는 NASH을 앓고 있는 환자의 다양한 속성, 혈액 마커, Fib-4 지수 등의 위험비를 나타낸 표이다. 도 32에서 알 수 있는 바와 같이, GDF15의 P값은 0.0001 미만이고, 다른 속성, 혈액 마커, Fib-4 지수 등에 비해 현저히 낮다.
도 33은 GDF15 및 Fib-4 지수에 대해 각각 보존 혈청 포인트로부터 5년 시점에서 발암 유무에 대한 시간 경과에 따른 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타낸 그래프이다. 각 그래프의 종축은 감도 또는 진양성률을 나타내고, 횡축은 위양성률(1-특이성)을 나타내고, AUC는 각 그래프의 ROC 곡선하 면적(Area under the curve)을 나타낸다. NAFL 또는 NASH 환자 코호트에서는 5년간 경과 관찰을 수행한 76건 사례 중 5건 사례에서 간암이 발증했다. AUC의 비교로부터, Fib-4 지수보다 GDF15가 5년 이내의 간암 발증의 예측 능력이 더 높은 것으로 나타났다.
도 34-1 및 도 34-2는 각각 컷오프 값이 2.00ng/mL 및 1.35ng/mL인 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. 2.00ng/mL은 NAFL 또는 NASH 환자 코호트에서 5년 이내의 발암의 ROC 곡선으로부터 유덴 지수의 최대값으로 결정된 컷오프 값이다. 1.35ng/mL은 실시예 1에서 SVR을 달성한 C형 간염 환자 도출 코호트의 ROC 곡선으로부터 유덴 지수의 최대값으로 결정된 컷오프 값이다. 2.00ng/mL을 컷오프 값으로 사용한 계층화는 NAFL 및 NASH의 간암 발증률의 예측에 크게 기여하는 것으로 나타났다.
이상의 결과로부터, NAFL 및 NASH를 포함한 NAFLD을 앓고 있는 대상체에서도 혈청 GDF15 농도의 마커는 간 발암 예측에 유용한 것으로 검증되었다.
실시예 4: 오가키 시민 병원의 코호트를 추가한 검사
오가키 시민 병원의 183건 사례를 추가하여 추가로 검토했다.
A. 재료 및 방법
(1) 연구 표적으로서의 사례 모집단
본 실시예의 연구 대상체는, 2005년부터 2020년까지 간 생검에서 NAFLD로 진단된 사례 중, 이후 경과를 조사할 수 있는 간 생검 당시의 보존 혈청이 있는 사례이다. 혈청 포인트 시점에서 간암 병력이 있는 환자 및 NAFLD 이외의 간질환이 동반된 환자는 제외된다.
(2) 임상 연구 검토
본 발명에 참여한 사례의 모든 구성원은 사전 동의서를 제출했다. 본 발명의 설계는 헬싱키 선언을 준수한다. 본 발명의 환자 정보 및 샘플 수집, 분석 프로토콜은 오사카대학 부속병원 임상연구 윤리심의위원회의 승인을 받았으며(IRB 17032), 오사카대학 의학부 부속병원 및 오가키 시민 병원에서 허가를 받았다.
(3) NAFLD의 치료
NAFLD 치료는 실시예 3에서와 동일한 방식으로 수행했다.
(4) 추적 관찰 및 간암 감시
NAFLD을 앓고 있는 환자에 대한 추적 관찰 및 간암 감시는 HCV에 대한 항바이러스 치료 환자에 대한 추적 관찰 및 간암 감시와 동일한 방식으로 수행되었다.
(5) 혈청학적 검사 및 통계 분석
NAFLD을 앓고 있는 환자의 혈청학적 검사 및 통계 분석은 HCV에 대한 항바이러스 치료 환자의 혈청학적 검사 및 통계 분석과 동일한 방식으로 수행되었다.
B. 결과
도 35-1 및 도 35-2는 각각 오가키 시민 병원 및 관찰 기간을 연장한 실시예 3의 코호트의 환자 배경을 나타낸다.
도 36-1은 오가키 시민 병원에서 NAFLD을 앓고 있는 환자의 혈청 중의 GDF15 농도의 산포도이다. 도 36-1의 산포도에서, 흑색 원은 간암 비발증 사례이고, 회색 원은 간암 발증 사례이다. 간암 발증 9건 사례는 모두 원발성 간 세포암(HCC)이었다. 도 36-2는 관찰 기간을 연장한 실시예 3의 코호트에서 NAFLD을 앓고 있는 환자의 혈청 GDF15 농도의 산포도이다. 도 36-2의 산포도에서, 흑색 원은 간암 비발증 사례이고, 회색 원은 간암 발증 사례이다. 간암 발증 8건 사례 중 7건 사례는 원발성 간 세포암(HCC)이었고, 화살표로 표시된 1건 사례는 담관세포암(CCC)이었다.
도 37-1 및 도 37-2는 각각 오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간을 연장한 실시예 3의 코호트에서 간암 발증률의 수년 경과에 따른 변화를 나타낸다.
도 38-1, 도 38-2 및 도 38-3은 각각 오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간을 연장한 실시예 3의 코호트를 조합하여 각각 보존 혈청 포인트로부터 5년 및 7년에서 발암의 유무에 대해 시간 경과에 따른 ROC(수신자 동작 특성) 곡선 분석을 수행한 결과를 나타낸 그래프이다. 각 그래프의 종축은 감도 또는 진양성률을 나타내고, 횡축은 위양성률(1-특이성)을 나타내고, AUC는 각 그래프의 ROC 곡선하 면적(Area under the curve)을 나타낸다.
도 39-1 및 도 39-2는 각각 오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간을 연장한 실시예 3의 코호트를 조합하여 GDF15에 대해 2.00ng/mL 및 1.74 ng/mL의 컷오프 값을 갖는 간암 발증률의 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. 2.00ng/mL은 5년간 관찰 기간의 NAFLD 환자 코호트의 ROC 곡선으로부터 유덴 지수의 최대값으로 결정된 컷오프 값이다. 1.74ng/mL은 7년간 관찰 기간의 NAFLD 환자 코호트의 ROC 곡선으로부터 유덴 지수의 최대값으로 결정된 컷오프 값이다. 2.00ng/mL 및 1.74ng/mL를 컷오프 값으로 사용한 계층화는 NAFLD의 간암 발증률의 예측에 크게 기여하는 것으로 나타났다.
상기 결과로부터, 오가키 시민 병원 코호트 및 관찰 기간을 연장한 실시예 3의 코호트를 조합한 검토에서도, 혈청 GDF15 농도의 마커는 간 발암 예측에 유용한 것으로 검증되었다.
본 출원은 일본에 출원된 특허 출원번호 2021-121873(출원일: 2021년 7월 26일) 및 일본에 출원된 특허 출원번호 2022-084132(출원일: 2022년 5월 23일)를 기초로 하며, 그 내용의 전체가 참조에 의해 본 명세서에 도입된다.
본 발명에 따르면, GDF15 수준에 기초하여 대상체의 간암의 발증 위험을 보다 정확하게 평가할 수 있게 된다. 또한, 평가된 간암의 발증 위험에 따라 대상체를 계층화하여, 간암의 발증 위험이 높은 대상체가 간암의 발증 위험이 낮은 대상체보다 높은 빈도로 간암 스크리닝 검사를 받을 수 있도록 구배 분포할 수 있다. 결과적으로, 대상체 개인의 검사 부담과 사회 전체로서의 의료적 및 경제적 손실을 모두 경감시킬 수 있다.
Claims (14)
- (1) 대상체의 GDF15 수준을 측정하는 단계,
(2) GDF15 수준을 간암(liver cancer) 발증의 위험과 연관시키는 단계
를 포함하는, 대상체(subject)의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 방법. - 제1항에 있어서, 상기 대상체가 C형 간염 바이러스(HCV)에 대해 지속된 바이러스 반응(sustained virological response; SVR)을 달성한 대상체, B형 간염에 대해 NUC 투여 중인 대상체, 및 NAFLD을 갖는 대상체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 1종류의 대상체인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 미리 설정된 컷오프 값(cutoff value) 이상의 대상체의 GDF15 수준은 대상체가 간암의 발증 위험이 높다는 것의 지표(indicator)이고, 컷오프 값 미만의 GDF15 수준은 대상체가 간암의 발증 위험이 낮다는 것의 지표인, 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GDF15 수준이 혈청 또는 혈장 중의 GDF15 단백질의 수준 및/또는 간 조직 또는 순환 혈액 중의 GDF15 전사 산물(transcription product)의 수준인, 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 컷오프 값이 상기 GDF15 수준의 통계 분석 또는 ROC 분석에 기초하여 설정되는, 방법.
- 제5항에 있어서, 상기 컷오프 값이 상기 대상체의 GDF15 수준의 중앙값(median value) 또는 상기 대상체의 ROC 곡선의 유덴 지수(Youden index)가 최대값을 갖는 GDF15 수준의 수치 값인, 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 대상체가 HCV에 대한 SVR을 달성한 대상체이고, 상기 GDF15 수준의 컷오프 값이 약 1400pg/mL의 혈청 GDF15 단백질 농도이거나, 상기 대상체가 B형 간염에 대한 NUC 투여 중인 대상체이고, 상기 GDF15 수준의 컷오프 값이 약 845pg/mL의 혈청 GDF15 단백질 농도이거나, 상기 대상체가 NAFLD를 갖는 대상체이고, 상기 GDF15 수준의 컷오프 값이 약 2000pg/mL의 혈청 GDF15 단백질 농도인, 방법.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청 중의 GDF15 단백질의 수준이 ELISA 방법에 의해 결정되는, 방법.
- 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 대상체가 HCV에 대한 SVR을 달성한 대상체이고, 혈청 GDF15 수준이 약 1400pg/mL의 컷오프 값을 가지며, 간암의 발증 위험을 결정하는 단계에서 AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값을 추가로 조합하여 결정하는, 방법.
- 제9항에 있어서, 상기 AFP 및 FIB-4 지수의 컷오프 값이 각각 5ng/mL 및 3.25인, 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 방법에 사용하기 위한 키트(kit)로서,
항-GDF15 특이적 항체, 및/또는 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍(primer pair) 또는 프로브(probe)를 포함하는, 키트. - 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 방법에 사용하기 위한 진단제(diagnostic agent)로서,
항-GDF15 특이적 항체, 및/또는 GDF15 전사 산물을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 쌍 또는 프로브를 포함하는, 진단제. - (1) 대상체의 GDF15 수준을 측정하는 단계, 및
(2) GDF15 수준을 간암의 발증 위험과 연관시키는 단계
를 포함하는, 대상체의 간암의 발증 위험을 평가하기 위한 바이오마커(biomarker)로서의, GDF15의 용도. - 제13항에 있어서, 상기 대상체가 C형 간염 바이러스(HCV)에 대해 지속된 바이러스 반응(SVR)을 달성한 대상체, B형 간염에 대해 NUC 투여 중인 대상체, 및 NAFLD를 갖는 대상체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 1종류의 대상체인, 용도.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2021121873 | 2021-07-26 | ||
| JPJP-P-2021-121873 | 2021-07-26 | ||
| JPJP-P-2022-084132 | 2022-05-23 | ||
| JP2022084132 | 2022-05-23 | ||
| PCT/JP2022/028776 WO2023008427A1 (ja) | 2021-07-26 | 2022-07-26 | 慢性肝疾患における肝発癌の診断マーカー |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240046521A true KR20240046521A (ko) | 2024-04-09 |
Family
ID=85087709
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020247006286A KR20240046521A (ko) | 2021-07-26 | 2022-07-26 | 만성 간 질환에서 간암 발증의 진단 마커 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP4382912A1 (ko) |
| JP (1) | JPWO2023008427A1 (ko) |
| KR (1) | KR20240046521A (ko) |
| WO (1) | WO2023008427A1 (ko) |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007192557A (ja) * | 2006-01-17 | 2007-08-02 | Perseus Proteomics Inc | Ｃ型肝炎患者の肝疾患の重篤化をモニターする方法および肝癌の診断方法 |
| JP2010243406A (ja) * | 2009-04-08 | 2010-10-28 | F Hoffmann La Roche Ag | Ａｆｐおよびｐｉｖｋａ−ｉｉの測定値を特徴値とした識別関数を利用する、肝臓癌および慢性肝疾患の病態進行度の検出方法 |
| JP5648905B2 (ja) * | 2010-11-12 | 2015-01-07 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | 肝臓がん発症の検出又はリスクの予測方法 |
| WO2012108527A1 (ja) * | 2011-02-10 | 2012-08-16 | 独立行政法人理化学研究所 | 肝細胞癌への進展予測マーカー |
| JP6887278B2 (ja) | 2016-06-20 | 2021-06-16 | 株式会社東芝 | 加熱装置、画像形成装置 |
| CN107462720B (zh) * | 2017-06-19 | 2019-07-19 | 上海长海医院 | 一种opn、gdf15、nse、trap5和opg联合诊断试剂盒 |
| KR102010652B1 (ko) * | 2017-08-21 | 2019-08-13 | 서울대학교병원 | 간질환 예측 또는 진단용 조성물 및 이를 이용한 간질환 예측 또는 진단 방법 |
| CN109781984A (zh) * | 2019-01-29 | 2019-05-21 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 一种同时定量检测多个肝癌标志物的抗体芯片试剂盒 |
| CN114560938B (zh) * | 2020-03-30 | 2023-05-23 | 中国人民解放军第四军医大学 | 抗gdf15中和性单克隆抗体及其应用 |
| JP2022084132A (ja) | 2020-11-26 | 2022-06-07 | 大和製衡株式会社 | 組合せ秤 |
-
2022
- 2022-07-26 KR KR1020247006286A patent/KR20240046521A/ko unknown
- 2022-07-26 WO PCT/JP2022/028776 patent/WO2023008427A1/ja active Application Filing
- 2022-07-26 EP EP22849488.6A patent/EP4382912A1/en active Pending
- 2022-07-26 JP JP2023538551A patent/JPWO2023008427A1/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPWO2023008427A1 (ko) | 2023-02-02 |
| WO2023008427A1 (ja) | 2023-02-02 |
| EP4382912A1 (en) | 2024-06-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6546318B2 (ja) | 心血管系リスクイベントの予測およびその使用 | |
| KR101870123B1 (ko) | 폐암 바이오마커 및 그것의 용도 | |
| KR101658347B1 (ko) | 폐암 바이오마커 및 그것들의 용도 | |
| US10670610B2 (en) | Biomarker test for prediction or early detection of preeclampsia and/or HELLP syndrome | |
| EP2847354A1 (en) | Methods and compositions for providing a preeclampsia assessment | |
| JP6691617B2 (ja) | 子癇前症の評価を提供するための方法及び組成物 | |
| WO2019099706A1 (en) | Markers for the diagnosis and treatment of non-alcoholic steatohepatitis (nash) and advanced liver fibrosis | |
| US10859573B2 (en) | Nourin molecular biomarkers diagnose angina patients with negative troponin | |
| WO2017181367A1 (en) | Methods and compositions for prognosing preterm birth | |
| CN113234830B (zh) | 用于肺癌诊断的产品及用途 | |
| KR102302682B1 (ko) | 우울증 진단용 바이오마커 및 이의 용도 | |
| CN113502326B (zh) | 基于生物标志物的肺动脉高压的诊断产品及其应用 | |
| CN113493829B (zh) | 生物标志物在肺动脉高压诊疗中的应用 | |
| CN110656169B (zh) | 心房颤动的诊断标志物 | |
| WO2023008427A1 (ja) | 慢性肝疾患における肝発癌の診断マーカー | |
| US20210087634A1 (en) | Determination of risk for development of cardiovascular disease by measuring urinary levels of podocin and nephrin messenger rna | |
| JP7239139B2 (ja) | 肝硬変の診断方法、非アルコール性脂肪肝炎及び肝細胞がんの合併症の診断方法並びに非アルコール性脂肪肝炎及び食道胃静脈瘤の合併症の診断方法 | |
| CN117957445A (zh) | 慢性肝疾病中的肝癌发生的诊断标志物 | |
| JP2007515155A (ja) | 異なって発現される冠動脈疾患関連遺伝子 | |
| WO2024004675A1 (ja) | 肝臓癌の発症可能性を検査する方法 | |
| EP2607493A1 (en) | Diagnosis of steatohepatitis | |
| CN116287207B (zh) | 生物标志物在诊断心血管相关疾病中的应用 | |
| CN113430263B (zh) | 基于生物标志物的诊断青光眼的产品及其应用 | |
| US20100120080A1 (en) | Cancer diagnosis using ki-67 | |
| CN117925807A (zh) | Uhrf2基因在早发性卵巢功能不全的诊断中的应用 |