KR20230145407A - 암 치료를 위해 다중 면역요법과 암 백신을 조합한 치료 조성물 및 방법 - Google Patents

암 치료를 위해 다중 면역요법과 암 백신을 조합한 치료 조성물 및 방법 Download PDF

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데이비드 그레인저 보스트윅
브라이언 래퍼티 보스트윅
피터 존 리트룹
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램파트 헬스, 엘.엘.씨.
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Abstract

본 발명은 i) 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제, ii) 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물, 및 iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성 암 세포를 생성하는 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체로부터 제조된 암 백신을 포함하는 치료 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 환자에서 종양 또는 암을 치료하는 방법으로서, 치료를 필요로 하는 환자에게 종양 또는 암을 치료하기에 효과적인 양의 치료 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

Description

암 치료를 위해 다중 면역요법과 암 백신을 조합한 치료 조성물 및 방법
본 출원은 2021년 2월 12일에 출원된 미국 가출원 번호 63/148,922에 대한 우선권을 주장하며, 이는 전체가 참조로 본원에 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 암 치료를 위해 면역학적 및 화학치료적 방법과 암 백신을 조합한 치료 조성물에 관한 것이다.
암은 미국에서 두 번째로 흔한 사망 원인으로, 매년 580,000명, 매일 1,500명 초과의 미국인이 사망한다. 국립보건원(NIH)은 직접적 의료 비용으로 890억 달러를 포함한 연간 총 암 치료 비용을 2,270억 달러(2007년 기준) 초과로 추정하였다. 암 치료의 전반적인 의료 비용의 대부분은 방사선 및 기존 화학요법의 유해한 부작용 관리로부터 유래된다.
암의 부위 및 조직학적 유형(예컨대, 편평세포 암종, 요로상피 암종, 선암종, 육종, 림프종, 흑색종 등)에 따라 다양한 전이성 고형암에 대해 화학요법, 면역요법, 수술, 외부 빔 방사선 요법, 근접요법, 냉동수술과 같은 조작 요법, 및 호르몬 요법(특정 암의 경우)을 포함한 다수의 요법이 이용되어 왔다. 이러한 요법 중 다수는 생존 이익을 부여하지만, 이 집단에서 중대한 유해 사례의 발생률에 대해 평가할 필요가 있다.
예컨대, 면역학적 암 치료는 종양학적 치료제의 판도를 완전히 바꿀 준비가 되어 있다. CTLA-4 및 PD-1과 같은 체크포인트 억제제는 이미 전이성 흑색종 및 비-소세포 폐암 치료에 큰 영향을 미치고 있다. 이러한 약물은 현재 효능을 개선하기 위해 조합하여 사용되고 있다. 이러한 약물의 전달은 일반적으로 체내 이러한 살세포제의 비특이적 분포로 인해 심각하고 때로는 치명적인 전신 독성을 가질 수 있는 정맥내로 수행되며, 이는 암 세포 및 정상 세포 둘 다를 사멸시키고 치료 레지멘 및 환자 결과에 부정적인 영향을 미칠 수 있다.
조작은 세포, 기관 또는 비정상적인 성장(예컨대, 암)을 선택적으로 손상 또는 파괴하는 데 이용되는 수술적 기술이다. 냉동수술 동결은 환자의 항원 제시 세포 및 수지상 세포에 종양 관련된 항원의 고유한 배열을 제시함으로써 환자의 면역 반응을 유도하는 것으로 공지되어 있다. 그러나, 이러한 "냉동면역 효과"는 가변적이며 경우에 따라서는 해로울 수도 있는 것으로 공지되어 있다.
WO 2017/123981은 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제 및 적어도 1종의 시토카인을 포함하는 약제학적 조성물, 및 조작 단계와의 조합에 관한 것이다. 시토카인은 다수의 자극에 대한 반응으로 면역계 세포 또는 비-면역 세포(예컨대, 상피 세포)에 의해 분비되는 자연적으로 발생하는 단백질이며, 면역 이펙터 세포의 발달을 조절하는 데 도움을 준다. 시토카인은 궁극적으로 표적 세포에서 유전자 발현을 변경하는 메커니즘을 통해 작용하는 면역조절제이다. 2종의 면역 체크포인트 억제제와 시토카인의 조합은 독점적인 면역학적 작용제를 사용함으로써 면역요법의 범위 내에 있다.
현재까지 암 면역요법에서의 많은 노력은 약물의 작용 메커니즘에 초점을 맞추고 있으며, 암 항원의 방출 및 제시의 과정 및 메커니즘에 대해서는 덜 고려하고 있다. 암 백신은 종종 단지 하나의 항원에 대한 공격으로 제기되는 위협에 대응하는 암의 적응 가능성을 고려하지 않고 단일 항원에 초점을 맞추고 있다. 종양 관련된 항원(TAA)의 전체 페이로드가 암 세포로부터 방출된 후, 인접한 미성숙 수지상 세포가 활성화되고 동일한 항원을 발현하는 체내 다른 곳의 다른 온전한 암 세포를 확인하는 과정을 시작하여 암을 에워싸고 파괴하는 세포독성 T 세포를 모집할 수 있다.
적응 면역계는 종양 거부의 주요 매개체이면서 또한 인간 암의 성장에서 보호 역할을 한다. 결과적으로, TReg 세포를 비활성화시키고 이 비활성화를 연장하기 위해 면역치료 항체를 사용함으로써 암 세포의 최대 면역 파괴를 허용하도록 이 반응을 제어하거나 둔화시키려는 노력이 이루어졌다. 이는 세포독성 T 세포 암 세포 파괴가 조기에 자가 중단되지 않도록 한다. 그러나, 이러한 치료 방법은 암 항원 중 하나에만 초점을 맞춘다.
암 말기에 진단된 대상체에 더하여, 국소 암에 대한 1차 요법에 실패한 대상체도 암이 진행될 수 있고, 일부 경우엔 전이 상태에 도달할 수 있다. 예컨대, 전이성 전립선암의 경우, 안드로겐 박탈 요법이 표준 치료이며, 혈청 PSA 수준 및 방사선 사진 평가에 기초하여 대다수의 대상체에서 일시적인 제어 또는 퇴행을 달성한다. 그러나, 전이성 전립선암을 갖는 많은 대상체는 결국 이 요법을 받는 동안 질환이 진행되어 전이성 안드로겐 독립적 전립선암 상태에 도달하게 된다.
전립선 산 포스파타제로 펄싱된 자가 수지상 세포(문헌[Harzstark et al., "Immunotherapy for prostate cancer using antigen-loaded antigen-presenting cells: APC8015 (Provenge)," Expert Opin Biol Ther. 7(8):1275-1280 (2007)] 참고); GM-CSF를 분비하도록 형질감염된 전체 동종이계 세포주(문헌[Small et al., "Granulocyte macrophage colony-stimulating factor--secreting allogeneic cellular immunotherapy for hormone-refractory prostate cancer," Clin Cancer Res. 13(13):3883-3891 (2007)] 참고); 및 전립선 특이적 항원 및 3개의 면역 공동자극 분자, ICAM-1, B7.1 및 림프구 기능 관련된 항원-3을 발현하도록 조작된 재조합 약독화된 백시니아 바이러스(문헌[Doehn et al., "Drug evaluation: Therion's rV-PSA-TRICOM + rF-PSA-TRICOM prime-boost prostate cancer vaccine," Curr Opin Mol Ther. 9(2):183-189 (2007)] 참고)를 포함한 여러 치료 암 백신이 이용 가능하거나 임상 시험으로 평가되고 있다. 여러 치료 백신 접근법이 논의되었다(문헌[Sonpavde et al., "Vaccine therapy for prostate cancer. Urol Oncol. 25(6):451-459 (2007); Slovin, "Emerging role of immunotherapy in the management of prostate cancer," Oncology (Williston Park) 21(3):326-333; discussion 334, 338, 346-348 (2004); Karnes et al., "Immunotherapy for prostate cancer," Curr Pharm Des. 2(7):807-817 (2006); Ragde et al., "Dendritic cell based vaccines: progress in immunotherapy studies for prostate cancer," J Urol. 172(6 Pt 2):2532-2538 (2004)] 참고). 예컨대, 전립선암의 경우, 시풀류셀-T(Sipuleucel-T) 임상 시험은 재조합 항원(각각 PAP 및 PSMA)이 로딩된 세포 애주번트로 DC를 사용하여 투여 전에 성숙한 표현형을 유도하였다. 이들 및 다른 DC 면역요법 시험으로부터의 결과는 특정한 면역 반응을 나타내어 (예컨대, 시풀류셀-T의 경우) 평균 4개월의 수명 연장을 가져왔다. 그러나, 이러한 요법은 전형적으로 10만 달러 초과의 비용이 들며, 환자는 여전히 곧 사망할 수 있다. 이러한 발견은 현재의 면역치료 처치가 대부분의 환자에게 제한된 가치가 있음을 나타낸다.
항원 인식 및 T 세포 활성화를 향상시키기 위해 암 백신에 애주번트 또는 다른 방식이 추가되었으며, 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 1) 세포 기반 백신의 유전적 또는 화학적 변형, 2) 수지상 세포를 끌어들임으로써 종양 관련된 항원을 T 세포에 교차 프라이밍, 3) T 세포 입양 요법, 4) 비-특이적 면역조절제, 톨(toll) 유사 수용체 효능제, 시토카인, 케모카인 또는 호르몬에 의한 세포독성 염증 자극; 5) 항체, 소분자를 사용한 면역억제의 감소 및/또는 항종양 이펙터 세포의 자극; 및 6) 화학요법을 포함한 다양한 세포증식억제(cytostatic) 또는 세포감소 방식. 그러나, 암 백신과 이러한 방식을 조합한 현재 기술은 완전한 임상 잠재력에 도달하지 못하였으며, 이는 적어도 부분적으로 독성, 및 종양 미세환경에서 면역 인식을 능동적으로 끄고/끄거나 이펙터 T 세포를 무력화하는 기존의 내성 메커니즘으로 인해 대상체에게 유의미한 항암 반응을 일으키는 데 있어서의 어려움 때문이다.
따라서, 종래의 전신적 암 치료와 관련된 독성을 감소시킬 뿐만 아니라 암의 개선된 치료를 위한 최적의 암 면역 반응을 제공하는 개선된 방법을 개발할 필요성이 당업계에 남아 있다. 본 개시내용은 이러한 필요에 부응한다.
본 발명의 일 측면은 i) 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제, ii) 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물, 및 iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성(necrotic) 및/또는 세포자멸괴사성(necroptotic) 암 세포를 생성하는 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체로부터 제조된 암 백신을 포함하는 치료 조성물에 관한 것이다. 임의적으로, 치료 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 i) 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제, ii) 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물, 및 iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성 암 세포를 생성하는 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체로부터 제조된 암 백신을 포함하는 치료 조성물을 종양 또는 암을 치료하기에 효과적인 양으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양 또는 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 추가적인 측면, 이점 및 특색은 본 명세서에 기재되어 있으며, 부분적으로 하기를 검토함으로써 당업자에게 명백해지거나 본 발명의 실시에 의해 학습될 수 있다. 본 출원에 개시된 본 발명은 측면, 이점 및 특색의 임의의 특정 세트 또는 조합에 제한되지 않는다. 언급된 측면, 이점 및 특색의 다양한 조합이 본 출원에 개시된 발명을 구성하는 것으로 고려된다.
본 개시내용은, 적어도 부분적으로, 종양 지향적 면역학적 암 치료와 조작 기술과 같은 생체외 처리를 통해 제조된 암 백신의 조합을 통해 암 면역 반응을 유도하기 위한 새로운 조성물 및 방법의 개발에 기초한다.
본 발명자들은 (예컨대, UV 조사 및/또는 다른 조작을 통해) 생체외에서 생성된 암 백신(예컨대, 자가유래)과 다수의 체크포인트 억제제 및 시토카인 또는 저용량 화학치료제를 조합하여, 적대적 상호작용 및 유해 사례를 최소화하면서 전신적 암 사멸의 부가적 또는 상승적 메커니즘을 이용하는 접근법을 발견하였다. 본 발명에 기재된 치료 조성물 및 치료 방법은 세포 파괴의 필요성과 항원의 구조적 보존 및 방출의 필요성의 균형을 맞추기 위해 신중하게 제어된 괴사 및 세포자멸괴사 유도와 함께 수많은 항원을 방출함으로써 특정 환자의 암 전반에 걸쳐 존재하는 (단 하나가 아닌) 모든 암 항원을 이용할 수 있다(개인 맞춤형 암 치료).
용어 "생체외"는 (예컨대, 조사를 포함할 수도 있는 조작 또는 조작들에 의한) 암 검체의 처리가 "자연" 환경을 변경하는 대가로 (환자에서) 생체내 처리로 가능한 것보다 더 제어된 조건 하에서 환자 외부에서 이루어지는 것을 의미한다. 생체외 조직 또는 세포 사용의 주요 이점은 살아있는 대상체에서는 복잡하고 위험한(예컨대, 중요 구조 손상 및 척추 또는 전신 마취 노출) 처리(예컨대, 조작/조사) 또는 시험을 수행할 수 있다는 점이다. 조직 또는 세포는 부분적으로, 전체 기관 또는 더 큰 기관계를 포함하여 다양한 방식으로 제거될 수 있다.
조직 검체로부터 수득된 암의 생체외 처리 및 이러한 생체외 생성된 암 백신의 후속 투여는 항암 약물의 종래의 전신적 전달에 비해 상당한 이점을 가질 수 있다. 본원에 개시된 치료 조성물 및 치료 방법은 (예컨대, 치료 조성물이 피부에 직접적으로 투여되는 실시양태에서) 대상체에게 투여되는 종래의 용량보다 더 적은 양, 종양 항원에 대한 면역계의 자극, 및 약물 및 종양 항원을 면역 염증 과정에 근접하게 배치함으로써 개선된 결과를 가능하게 할 수 있다. 생체외 처리는 치료 동안 전신(전반) 마취의 필요성을 피할 수 있고, 환자와 접촉하여 사용되는 냉동 수술 또는 다른 조작 장비와 같은 치료 장비의 필요성을 피할 수 있고(이로써 조작으로 유발된 위험 감소), 각각의 치료에 필요한 시간 길이를 줄일 수 있다.
이에 비해, 마이크로파 및 HIFU(고강도 집중 초음파)와 같이 열을 사용하는 다른 많은 세포 파괴 방법은 항원 단백질을 변성시켜 항원을 자연 상태로부터 변경하고 다른 암 세포 상의 암 항원 표적에 대한 정확한 신호로 작용할 수 없게 만든다.
본원에 기재된 치료 조성물 및 치료 방법에 의해 제공되는 이러한 항원 처리의 차이는 항원이 변성 없이 완전히 노출되고 보존되도록 보장할 수 있으며, 전이 부위에서 확인될 수 있는 환자 특이적 및 암 특이적 항원을 갖는 미성숙 수지상 세포의 표적화 및 활성화를 가능하게 할 수 있다.
본 발명자들은 놀랍게도 면역 체크포인트 억제제, 시토카인 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물과 (조직 검체, 예컨대 생검, 절제물, 흡인물 등으로부터 수득된) 생체외 처리된 암으로부터 유래된 암 백신의 조합을 사용함으로써 치료 방법이 적어도 하기를 포함하는 이익을 제공한다는 것을 발견하였다: (1) 생체외 처리와 조합된 다중 조합 면역요법의 연조직 주사는 저용량(종래의 용량보다 낮음) 면역요법을 허용함; (2) 저용량 면역요법의 부작용 프로파일은 더 유리하고 환자를 종래의 투여보다 적은 위험에 노출시킴; (3) 열적 파괴를 사용하지 않거나 최소화하여 암 신생항원을 보존함(예컨대, 열적 조작이 없거나 최소화됨); (4) 기존 생체내 처리보다 합병증 및 위험이 더 낮음(예컨대, 생체내 조작이 아닌 생체외 조작).
또한, 본원에 기재된 접근법은 하기로 인해 유익하다:
ㆍ 환자 특이적 및 암 특이적 항원의 전체 범위 또는 적어도 더 넓은 범위가 면역계에 노출되도록 보장함. 이는 환자의 암에 의해 발현될 수 있거나 발현되지 않을 수 있는 미리 결정된 단일 암 항원을 인식하는 현재의 암 백신(예컨대, 전립선암을 위한 프로벤지(Provenge))과 상이함;
ㆍ (변성되면 잘 작동하지 않을 것이기 때문에) 이러한 단백질을 크게 변성시키지 않으면서 괴사 및 세포자멸괴사를 유발하는 특수화된 방법을 이용함으로써 노출된 종양 항원의 양 및 질을 최대화하거나 적어도 증가시키고, 면역계 수지상 및 세포독성 T 세포의 출입을 허용하도록 혈관계를 보존함;
ㆍ 염증 환경과 함께 괴사 또는 세포자멸괴사에 의해 유발된 암 용해물에서 자연적인 범위의 공동자극제를 활용함;
ㆍ 암 용해물 및 약제를 피내 또는 종양내에 주사함으로써 종양 항원 및 염증 면역 과정을 근접하게 만듬;
ㆍ 하나 또는 소수의 미리 선택된 항원에 집중하기 보다는 암 세포를 파괴하고 암 특이적 항원의 전체 레퍼토리 또는 적어도 많은 수를 방출함으로써 표적화된 개인 맞춤형 백신을 가능하게 함.
일 측면에서, 본 개시내용은 i) 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제, ii) 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물, 및 iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 암을 사멸시키는(예컨대, 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성 암 세포를 생성하는) 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체로부터 제조된 암 백신의 조합을 포함하거나, 이로 필수적으로 이루어지거나, 이로 이루어진 종양 또는 암 치료를 위한 치료 조성물을 제공한다. 임의적으로, 치료 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
면역 체크포인트 억제제는 T 세포와 같은 일부 유형의 면역계 세포 및 일부 암 세포에 의해 생성되는 특정 단백질을 차단하는 일 유형의 약물이다. 이러한 단백질은 면역 반응을 억제하고 T 세포가 암 세포를 사멸시키는 것을 막을 수 있다. 이러한 단백질이 차단되면, 면역계의 "브레이크"가 풀리고 T 세포가 암 세포를 더 잘 사멸시킬 수 있다. 따라서. 체크포인트 억제제는 종양을 공격하도록 면역계를 활성화시켜 면역계의 하향조절을 담당하는 면역 반응 단백질을 억제한다. 이러한 체크포인트 억제제는 소분자 억제제를 포함할 수 있거나, 면역 체크포인트 수용체에 결합하여 이를 차단 또는 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 면역 체크포인트 수용체 리간드에 결합하여 이를 차단 또는 억제하는 항체를 포함할 수 있다.
예컨대, PD-1 및 CTLA-4는 독립적인 분자 메커니즘을 통해 T 세포 활성을 약화시킨다. 문헌[Das et al., "Early B cell changes predict autoimmunity following combination immune checkpoint blockade." J Clin Invest. 128(2):715-720 (2018); Das et al., "Combination therapy with anti-CTLA-4 and anti-PD-1 leads to distinct immunologic changes in vivo." J Immunol. 194(3):950-959 (2015)]을 참조하면, 그 전문이 참조로 포함된다. 조합 체크포인트 억제제 차단의 향상된 이익은 각각의 단일요법의 세포 및 분자 메커니즘이 부가적 개입에 의하기 보다는 성분 단일요법과는 상이한 다수의 메커니즘에 의해 매개될 가능성이 있다. 문헌[Wei et al., "Fundamental Mechanisms of Immune Checkpoint Blockade Therapy. Cancer Discov." 8(9):1069-1086 (2018)]을 참조하며, 그 전문이 참조로 포함된다. 생리학적 수준을 넘어서는 차단에 의한 긍정적 공동자극은 향상된 세포용해 능력 또는 정규 T 세포 집단에 의해 보여지지 않는 새로운 특성의 획득을 촉진하여 효능을 향상시킬 수 있다. 치료 효능에 대한 PD-1 및 CTLA-4 차단의 여러 가지 공지된 분자 메커니즘 각각에 대한 상대적 기여에 대해서는 공지된 바가 거의 없다. 조합 체크포인트 억제제 차단 요법은 전임상 및 임상 연구 모두에서 단일요법에 비해 치료 효능을 개선할 수 있다. 문헌[Curran et al., "PD-1 and CTLA-4 combination blockade expands infiltrating T cells and reduces regulatory T and myeloid cells within B16 melanoma tumors." Proc Natl Acad Sci U S A. 107(9):4275-4280 (2010); Postow et al., "Immunologic correlates of the abscopal effect in a patient with melanoma." New England Journal of Medicine. 366(10):925-931 (2012); Wolchok et al., "Ipilimumab monotherapy in patients with pretreated advanced melanoma: a randomised, double-blind, multicentre, phase 2, dose-ranging study." Lancet Oncol. 11(2):155-164 (2010)]을 참조하며, 그 전문이 참조로 포함된다. PD-1 및 CTLA-4 차단과 조합 요법으로 치료된 전이성 흑색종을 갖는 환자는 36%의 반응 및 일부 경우에서는 50% 초과의 반응을 달성할 수 있으며, 3년 전체 생존율은 57%이다. 문헌[Larkin et al., "Combined Nivolumab and Ipilimumab or Monotherapy in Untreated Melanoma." N Engl J Med. 373(1):23-34 (2015)]을 참조하며, 그 전문이 참조로 포함된다. 조합 요법은 표준 치료와 비교 시 전이성 신장 세포 암종에서 전반적인 생존 이익을 제공할 수 있다. 문헌[Motzer et al., "Nivolumab plus Ipilimumab versus Sunitinib in Advanced Renal-Cell Carcinoma." N Engl J Med. 378(14):1277-1290 (2018)]을 참조하며, 그 전문이 참조로 포함된다.
체크포인트 억제제는 CD137(4-1BB); CD134; PD-1; KIR; LAG-3; PD-L1; PDL2; CTLA-4; B7 패밀리 리간드, 예컨대 B7.1 (또는 CD80) 또는 B7.2 (또는 CD86), B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3 (또는 CD276), B7-H4, B7-H5, B7-H6 및 B7-H7; BTLA (또는 CD272); LIGHT; HVEM; GAL9; TIM-3; TIGHT; VISTA; 2B4; CGEN-15049; CHK1; CHK2; A2aR; TGF-β, PI3Kγ, GITR; ICOS; IDO; TLR; IL-2R; IL-10; PVRIG (B7/CD28); CCRY; OX-40; CD160; CD20; CD52; CD47; CD73; CD27-CD70; 및 CD40의 억제제와 같은 억제제를 포함한다.
적합한 CD137(4-1BB) 억제제는 유토밀루맙, 우렐루맙 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CD134 또는 OX40 억제제는 OX40-면역글로불린(OX40-Ig), GSK3174998(항-OX40 항체), 9B12, MOXR 0916, PF-04518600(PF-8600), MEDI6383, MEDI0562, INCAGN01949, 또는 이들의 조합를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 KIR 억제제는 IPH4102, 1-7F9(KIR2DL1/2L3에 결합하는 인간 모노클로날 항체), 리릴루맙 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 LAG-3 억제제는 렐라틀리맙, IMP321(Immuntep®), GSK2831781(LAG3에 대한 효능제 항체), BMS-986016, LAG525 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CTLA-4 억제제는 이필리무맙, 트레멜리무맙 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 PD-1 억제제는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 피딜리주맙, MK-3475, MED 14736(모노클로날 항체), CT-011, 스파르탈리주맙 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 PD-L1 또는 PD-L2 억제제는 두르발루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, AMP224, BMS-936559, MPLDL3280A(항-PD-L1 항체), MSB0010718C(항-PD-L1 항체), 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 B7.1 (또는 CD80) 또는 B7.2 (또는 CD86) 억제제는 루덱스, 아바타셉트 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 B7-H3 억제제는 에노블리투주맙(MGA271), MGD009, 8H9(B7-H3에 대한 모노클로날 항체) 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CD20 억제제는 리툭시맙, 오파투무맙 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CD52 억제제는 알렘투주맙을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CD47 억제제는 Hu5F9-G4, TTI-621(SIRPαFc) 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CD73 억제제는 MEDI9447을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CD27-CD70 억제제는 ARGX-110, BMS-936561(MDX-1203), 바릴루맙 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CD40 억제제는 CP-870893, APX005M, ADC-1013, JNJ-64457107, SEA-CD40, RO7009789 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
적합한 BTLA (또는 CD272) 억제제는 40E4; 40E4 mIgG1; D265A 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 LIGHT (또는 CD272) 억제제는 T5 39; 17-2589-42(CD258(LIGHT) 모노클로날 항체), TNFSF14 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 HVEM 억제제는 항-CD270을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 TIM-3 억제제는 MBG453, MEDI9447 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 TIGHT 억제제는 OMP-31M32를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 VISTA 억제제는 JNJ-61610588, CA-170 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 CGEN-15049 억제제는 항-CGEN-15049를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 A2aR 억제제는 CPI-444를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 TGF-β 억제제는 트라베데르센(AP12009), M7824, 갈루세르티닙(LY2157299) 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 PI3Kγ 억제제는 IPI-549를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 GITR 억제제는 TRX-518, BMS-986156, AMG 228, MEDI1873, MEDI6469, MK-4166, INCAGN01876, GWN323 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 ICOS 억제제는 JTX-2011, GSK3359609, MEDI-570 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 IDO 억제제는 BMS-986205, 인독시모드, 에파카도스타트 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 TLR 억제제는 MEDI9197, PG545(픽사티모드, pINN), 폴리이노신-폴리시티딜산 폴리리신, 카르복시메틸셀룰로스(폴리-ICLC) 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 IL-2R 억제제는 NKTR-214를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 IL-10 억제제는 AM0010을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 PVRIG(B7/CD28) 억제제는 COM701을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용하기에 적합한 추가의 체크포인트 억제제는 또한, 그 전문이 참조로 본원에 포함되는 문헌[Marin-Acevedo et al., "Next generation of immune checkpoint therapy in cancer: new developments and challenges," Journal of Hematology & Oncology 11:39 (2018)]에 기재된 것을 포함한다.
치료 조성물은 2종 이상의 체크포인트 억제제의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 이들은 동일한 유형의 체크포인트 억제제일 수 있거나, 상이한 체크포인트 억제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 체크포인트 억제제는 CTLA-4 억제제 및 PD-1 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 체크포인트 억제제는 CTLA-4 억제제 및 PD-L1 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙이고 PD-1 억제제는 펨브롤리주맙이다.
숙련된 기술자는 체크포인트 억제제의 다른 많은 조합도 치료 조성물에 적합하다는 것을 인식할 것이다. 조합의 비제한적인 목록은 CD137 억제제 및 CD134 억제제; PD-1 억제제 및 KIR 억제제; LAD-3 억제제 및 PD-L1 억제제; CTLA-4 억제제 및 CD40 억제제; CD 134 억제제 및 PD-1 억제제; KIR 억제제 및 LAG-3 억제제; PD-L1 억제제 및 CTLA-4 억제제; CD40 억제제 및 CD 137 억제제; CTLA-4 억제제 및 PD-L1 억제제; PD-1 억제제 및 CD40 억제제; 또는 당업계에 공지된 체크포인트 억제제 중 2종 이상의 임의의 다른 조합을 포함한다.
치료 조성물은 또한 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물을 포함할 수 있다.
약물은 시토카인 약물일 수 있다. 용어 "시토카인"은 세포 신호전달을 매개하고 면역, 염증 및 조혈을 조절하는 면역계의 특정 세포에 의해 분비될 수 있는 세포 단백질 성분 또는 약물의 큰 그룹을 지칭한다.
적합한 시토카인은 에리트로포이에틴, G-CSF, GM-CSF, IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, TNF, 인터페론, 예컨대 INF-α-2a, INF-α-2b, INF-β 및 INF-γ, 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 시토카인은 GM-CSF이다.
대안적으로, 약물은 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물일 수 있다. 용어 "세포독성" 또는 "세포증식억제"는 암 세포의 세포 성장 및 증식을 억제하거나 암 세포를 사멸시킬 수 있는 세포 성분 또는 약물을 지칭한다.
적합한 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 악티노마이신, 알데슬류킨, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알트레타민, 암사크린, 아나스트로졸, 삼산화비소, 아스파라기나제, 아자시티딘, 아자티오프린, 바실루스 칼메트-게린 백신(bacillus calmette-geurin: BCG), 베바시주맙, 벡사로텐, 비칼루타미드, 블레오마이신, 보르테조밉, 보툴리눔 독소(보톡스), 부술판, 카페시타빈, 카르보플라틴, 카르무스틴, 세트로렐릭스 아세테이트, 세툭시맙, 클로람부실, 클로람페니콜, 클로르메틴 히드로클로라이드, 성선 자극 호르몬 알파, 시클로스포린, 시도포비르, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로파라빈, 클로람부실, 콜키신, 크리산타스파제, 사이클로포스파미드, 시타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다나졸, 다사티닙, 다우노루비신 HCl, 데시타빈, 데닐루킨, 디에노스트롤, 디에틸스틸베스트롤, 디노프로스톤, 디트라놀 함유 제품, 도세탁셀, 독소루비신, 두타스테리드, 에피루비신, 에르고메트린/메틸에르고메트린, 에스트라디올, 에스트라무스틴 인산나트륨, 에스트로겐-프로게스틴 조합, 복합 에스트로겐, 에스테르화된 에스트로겐, 에스트론, 에스트로피페이트, 에토포시드, 엑세메스탄, 피나스테리드, 플록수리딘, 플루다라빈, 플루오로우라실, 플루옥시메스테론, 플루타미드, 풀베스트란트, 간시클로비르, 가니렐릭스 아세테이트, 젬시타빈, 겜투주맙 오조가미신, 곤다오트로핀, 융모막 고세렐린(졸라덱스), 히드록시카르바미드, 이브리투모맙 티우세탄, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티닙 메실레이트, 인터페론 알파-2b, 인터페론 함유 제품, 이리노테칸 HCl, 레플루노미드, 레트로졸, 류프로렐린 아세테이트, 로무스틴, 림포글로불린, 메드록시프로게스테론, 메게스트롤, 멜팔란, 메노트로핀, 메르캅토푸린, 메세나, 메토트렉세이트, 메틸테스토스테론, 미페프리스톤, 미토마이신, 미토탄, 미톡산트론 HCl, 미코페놀레이트, 모페틸, 나파렐린, 나탈리주맙, 닐루타미드, 에스트로겐 함유 제품, 옥살리플라틴, 옥시토신(신토시논 및 신토메트린 포함), 파클리탁셀, 파르알데히드, 페가스파르가제, 페메트렉세드 이나트륨, 펜타미딘 이세티오네이트, 펜토스타틴, 퍼포스파미드, 피포브로만, 피리트렉심 이세티오네이트, 플리카마이신, 포도플릴록스, 포도필린, 포도필룸 수지, 프레드니무스틴, 프로카르바진, 프로게스테론 함유 제품, 프로게스틴, 랄록시펜, 랄티트렉세드, 리바비린, 리툭시맙, 시롤리무스, 스트렙토조신, 타크로리무스, 타목시펜, 테모졸로미드, 테니포시드, 테스톨락톤, 테스토스테론, 탈리도미드, 티오구아닌, 티오테파, 티모글로불린, 티오구아닌, 토포테칸, 토레미펜 시트레이트, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트레오술판, 트레티노인, 트리플루리딘, 트리메트렉세이트 글루코로네이트, 트립토렐린, 우라무스틴, 백신(생백신), 발간시클로비르, 발루비신, 비다라빈, 빈블라스틴 술페이트, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈 타르트레이트, 지도부딘, 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
예시적인 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 아스파라기나제, 블레오마이신, 부술판, 카르보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, BCG, 클로람페니콜, 콜키신, 사이클로스포린, 다카르바진, 독소루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 로무스틴, 멜팔란, 메토트렉세이트, 미토마이신미톡산트론, 파클리탁셀, 프로카르바진, 리툭시맙, 테모졸로미드, 티테파, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 지도부딘, 및 이들의 조합이다. 한 실시양태에서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 사이클로포스파미드이다.
2종 이상의 체크포인트 억제제와 시토카인의 조합은 2종 이상의 체크포인트 억제제와 사이클로포스파미드와 같은 화학치료제(세포증식억제 또는 세포독성)의 조합과 상이하다. 또한, 2종 이상의 체크포인트 억제제와 화학치료제(세포증식억제 또는 세포독성)의 조합은 2종 이상의 체크포인트 억제제와 시토카인과 같은 또 다른 면역 치료제의 조합과 상이하다. 근본적으로, 후자 조합의 다약제 조합의 약물 부류 및 작용 메커니즘은 전자의 조합과 상이하다. 특히, 화학치료제는 일반적으로 항-대사물질이고 단백질 약물이 아닌 합성 약물인 반면, 시토카인은 자연적으로 발생하는 단백질이고 생물제제로 간주된다. 이러한 작용제의 부류 둘 다가 면역계에 다면 발현적 영향을 미치지만, 효과의 레퍼토리 및 이러한 효과를 유도하는 작용 메커니즘은 이러한 두 상이한 부류의 작용제에 대해 현저하게 상이하다. 또한, 시토카인(시토카인 신호전달 단백질의 억제인자)의 억제 메커니즘은 화학치료 약물의 억제 메커니즘과 상이하다.
시토카인은 일반적으로 다수의 자극에 반응하여 면역계 세포 또는 비-면역 세포(예컨대, 상피 세포)에 의해 분비되는 저분자량 조절 단백질 또는 당단백질이며, 면역 이펙터 세포의 발달을 조절하는 데 도움이 된다. 시토카인은 표적 세포의 막 상의 특정 수용체에 결합하여 신호 전달 경로를 촉발하며 궁극적으로 표적 세포의 유전자 발현을 변경한다. 시토카인의 작용은 광범위한 생물학적 과정에 관여한다.
한편, 화학치료제는 직접 또는 간접적으로 면역원성 세포사를 유도함으로써 암 면역을 촉진할 수 있다. 화학요법의 직접 작용은 세포자멸괴사 또는 자가포식 유도를 포함한다. 간접 작용은 세포 신호전달 경로 변경, 면역 조절을 피하기 위해 암이 사용하는 노력을 방해(문헌[Emens et al., "Chemotherapy: friend or foe to cancer vaccines?" Curr Opin Mol Ther. 3(1):77-84 (2001)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다); 예컨대, CXCL8에 의한 케모카인 신호전달이 세포 표면에 칼레티쿨린을 노출시킴으로써 수지상 세포 확인 및 손상된 암 세포의 소모를 자극할 때와 같은 암 신생항원 및 위험 관련된 분자 패턴(DAMP)의 제시의 방출 및 향상(문헌[Sukkurwala et al., "Immunogenic calreticulin exposure occurs through a phylogenetically conserved stress pathway involving the chemokine CXCL8." Cell Death Differ. 21(1):59-68 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다); MHC 부류 1 발현, 공동자극 분자, 예컨대 B7-1, 또는 암 신생항원 자체를 상향조절함으로써 또는 공동억제 분자, 예컨대 PD-L1/B7-H1 또는 B7-H4를 하향조절함으로써 이펙터 T 세포 활성의 향상(문헌[Chen et al., "Chemoimmunotherapy: reengineering tumor immunity." Cancer Immunol Immunother. 62:203-216 (2013)]을 참고하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)을 포함한다. 암의 화학요법 유도된 T 세포 매개된 암 사멸은 파스, 퍼포린 및 그랜자임 B 의존적 메커니즘을 수반할 수 있다. 문헌[Chen et al., "Chemoimmunotherapy: reengineering tumor immunity." Cancer Immunol Immunother. 62:203-216 (2013]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
세포증식억제 및 세포독성 화학치료제 단독은 면역계에 용량 의존적 효과를 나타내었다. 문헌[Emens, "Chemoimmunotherapy." Cancer J 16:295-303 (2010); Chen et al., "Chemoimmunotherapy: reengineering tumor immunity." Cancer Immunol Immunother 62:203-216 (2013)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다.
화학치료제는 직접적 세포 사멸에 필요한 고용량과 관련된 독성을 피하면서 암 면역을 조절하는 데 사용되어 왔다. 이러한 조절은 사이클로포스파미드, 파클리탁셀, 시스플라틴 및 테모졸로미드와 같은 여러 화학치료제에 의해 입증되었다. 예컨대, 사이클로포스파미드는, 예컨대 Treg 고갈을 포함하여 다면 발현적 면역 조절 특성을 나타내었다. 문헌[Machiels et al., "Cyclophosphamide, doxorubicin, and paclitaxel enhance the antitumor immune response of granulocyte/macrophage-colony stimulating factor-secreting whole-cell vaccines in HER-2/neu tolerized mice." Cancer Res. 61(9):3689-3697 (2001)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다. 파클리탁셀과 같은 탁산은 또한 Treg를 고갈시키고 수지상 세포 성숙을 촉진하며 CD4+ T 헬퍼 표현형을 2형에서 1형으로 전환하여 전염증성 시토카인 분비 및 CD8+ T 세포의 프라이밍 및 용해 활성을 향상시킬 수 있다. 독소루비신은 면역조절의 메커니즘이 확실하지 않지만 종양 성장을 지연시키고 백신 활성을 향상시킬 수 있다. 사이클로포스파미드와 독소루비신의 조합은 또한 일부 마우스의 암을 Treg의 선택적 고갈로 치유하고 높은 결합력의 암 특이적 T 세포를 모집하는 것을 허용하는 유리한 효과를 나타내었다. HER2þ, GM-CSF 분비 유방암 백신과 면역 조절 용량의 사이클로포스파미드 및 독소루비신의 조합은 이펙터 T 세포에 비해 CD4+ Treg를 선택적으로 고갈시켜 이펙터 T 세포를 활성화할 수 있다. 문헌["Immediate versus deferred treatment for advanced prostatic cancer: initial results of the Medical Research Council Trial. The Medical Research Council Prostate Cancer Working Party Investigators Group." Br J Urol. 79(2):235-246 (1997)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다. 젬시타빈과 같은 다른 화학치료제는 세포자멸사(apoptosis) 유도, 수지상 세포 암 항원 제시 촉진, CD8+ T 세포의 교차 프라이밍 촉진을 포함하여 면역계에 효과를 나타내었다. 문헌[Nowak et al., "Induction of tumor cell apoptosis in vivo increases tumor antigen cross-presentation, cross-priming rather than cross-tolerizing host tumor-specific CD8 T cells." J Immunol. 170(10):4905-4913 (2003)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다.
2종 이상의 체크포인트 억제제와 시토카인 또는 화학치료제(세포증식억제 또는 세포독성)의 조합은 새로운 분자, 조직 작용 부위, 면역 세포 집단, 및 생물학적 과정과 같은 암 면역 수명 주기의 다른 비-중복 측면을 표적으로 하는 이익이 있을 수 있다. 예컨대, 전이성 전립선암 환자에서 이필리무맙(항-CTLA-4) 치료 후 면역글로불린 슈퍼패밀리(IgSF)로부터의 분자인 VISTA가 주로 M2 대식세포에서 발현된다. 문헌[Gao et al., "VISTA is an inhibitory immune checkpoint that is increased after ipilimumab therapy in patients with prostate cancer. Nat Med. 2017;23(5):551-555]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다. VISTA 및 PD-1은 T 세포에 대해 비-중복 억제 효과를 갖는다. 문헌[Liu et al., "Immune-checkpoint proteins VISTA and PD-1 nonredundantly regulate murine T-cell responses." Proc Natl Acad Sci U S A. 112(21):6682-6687 (2015)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다. 또 다른 예로, 젬시타빈은 뮤린 췌장암 모델에서 T 세포 트래피킹을 증가시키고 종양 세포를 T 세포 매개된 용해에 민감하게 함으로써 수지상 세포 기반 백신의 효능을 향상시킬 수 있다. 문헌[Bauer et al., "Concomitant gemcitabine therapy negatively affects DC vaccine-induced CD8(+) T-cell and B-cell responses but improves clinical efficacy in a murine pancreatic carcinoma model." Cancer Immunol Immunother. 63(4):321-333 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다. 전이성 신장 세포 암종을 갖는 환자의 II상 임상 시험에서, 추가의 예는 멀티펩티드 면역 반응이 발생한 이들의 생존을 개선할 수 있는 [0040] 사이클로포스파미드 및 멀티펩티드 백신 IMA901의 사용이며, 이는 다중 항원에 의해 발생되는 다양한 종양 특이적 면역 반응을 시사한다. 문헌[Walter et al., "Multipeptide immune response to cancer vaccine IMA901 after single-dose cyclophosphamide associates with longer patient survival." Nat Med. 18(8):1254-1261 (2012)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다.
비-소세포 폐암 및 흑색종을 갖는 환자에서의 특정 시험은 화학요법과 이필리무맙의 조합이 안전할 수 있음을 나타내었다(문헌[Weber et al. "Randomized phase I pharmacokinetic study of ipilimumab with or without one of two different chemotherapy regimens in patients with untreated advanced melanoma," Cancer Immunology 13:7 (2013)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함됨). 그러나, 아마도 정맥내 투여로 인해 트랜스아미니티스(transaminitis)와 같은 특정 유해 효과가 증가하였다는 보고도 있었다(문헌[Robert et al., "Ipilimumab plus dacarbazine for previously untreated metastatic melanoma. New England Journal of Medicine 11;364(26):2517-26 (2011)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함됨).
용량, 치료 일정, 투여 경로 등과 같은 인자가 독성을 최소화하는 데 기여할 수 있다. 그러나, 면역 체크포인트 차단과 시토카인 또는 저용량 화학치료제를 조합하는 것에 대한 효능 데이터는 매우 제한적이다. 2종 이상의 체크포인트 억제제와 시토카인 또는 저용량 화학치료제(세포독성 또는 세포증식억제)의 조합은 적대적 상호작용 및 유해 사례를 최소화하면서 전신적 암 사멸의 부가적 또는 상승적 메커니즘을 이용할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료 조성물 중의 약물은 시토카인과 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 조합을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료 조성물 중의 약물은 시토카인 약물을 포함하고, 치료 조성물은 제2 시토카인을 추가로 포함할 수 있다. 제2 시토카인 약물은 제1 시토카인 약물과 동일하거나 상이할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료 조성물 중의 약물은 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함하고, 치료 조성물은 제2 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 추가로 포함할 수 있다. 제2 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 제1 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물과 동일하거나 상이할 수 있다.
면역 체크포인트 억제제는 치료 조성물에 치료학적 유효량으로 존재한다. 예컨대, 각각의 면역 체크포인트 억제제의 농도는 약 0.1 내지 약 500 mg/ml, 예컨대 약 0.1 내지 약 300 mg/ml, 약 0.1 내지 약 200 mg/ml, 약 0.1 내지 약 100 mg/ml, 약 0.5 내지 약 100 mg/ml, 약 0.5 내지 약 50 mg/ml, 약 0.5 내지 약 30 mg/ml, 약 0.5 내지 약 20 mg/ml, 약 0.5 내지 약 10 mg/ml, 약 1 내지 약 10 mg/ml, 약 1 내지 약 5 mg/ml, 또는 약 1 내지 약 2 mg/ml의 범위일 수 있다.
시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 존재하는 경우 또한 치료 조성물에 치료학적 유효량으로 존재한다.
예컨대, 각각의 시토카인 약물의 농도는 약 1 μg/ml 내지 약 1000 mg/ml, 약 1 내지 약 1000 mg/ml, 약 1 내지 약 500 mg/ml, 약 10 내지 약 500 mg/ml, 약 50 내지 약 500 mg/ml, 약 100 내지 약 500 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 50 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 30 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 20 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 10 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 5 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 1 mg/ml, 약 1 내지 약 500 μg/ml, 약 1 내지 약 500 μg/ml, 약 1 내지 약 300 μg/ml, 약 1 내지 약 200 μg/ml, 약 1 내지 약 100 μg/ml, 약 1 내지 약 50 μg/ml, 약 1 내지 약 30 μg/ml, 약 1 내지 약 20 μg/ml, 약 5 내지 약 50 μg/ml, 약 5 내지 약 30 μg/ml, 약 5 내지 약 20 μg/ml, 또는 약 5 내지 약 10 μg/ml의 범위일 수 있다. 일부 경우에서, 시토카인 약물은 GM-CSF이며, 조성물 중의 농도는 약 100 내지 약 500 mg/ml의 범위일 수 있다.
각각의 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 농도는 약 1 μg/ml 내지 약 100 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 50 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 30 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 20 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 10 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 5 mg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 1 mg/ml, 약 1 내지 약 500 μg/ml, 약 1 내지 약 500 μg/ml, 약 1 내지 약 300 μg/ml, 약 1 내지 약 200 μg/ml, 약 1 내지 약 100 μg/ml, 약 1 내지 약 50 μg/ml, 약 1 내지 약 30 μg/ml, 약 1 내지 약 20 μg/ml, 약 5 내지 약 50 μg/ml, 약 5 내지 약 30 μg/ml, 약 5 내지 약 20 μg/ml, 또는 약 5 내지 약 10 μg/ml의 범위일 수 있다. 일부 경우에서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 사이클로포스파미드이며, 조성물 중의 농도는 약 10 내지 약 500 μg/ml 범위일 수 있다.
일부 경우에서, 치료 조성물은 약 0.5 내지 10 mg/ml 농도의 CTLA-4 억제제, 약 0.5 내지 20 mg/ml 농도의 PD-1 억제제, 및 약 1 내지 1000 mg/ml 농도(예컨대, 100 내지 500 mg/ml)의 시토카인 약물 또는 약 1 내지 1000 μg/ml 농도(예컨대, 10 내지 500 μg/ml)의 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 또는 이로 이루어진다, 일부 경우에서, 조성물은 약 1 내지 2 mg/ml 농도의 CTLA-4 억제제, 약 1 내지 10 mg/ml 농도의 PD-1 억제제, 및 약 10 내지 약 500 mg/ml 농도(예컨대, 약 250 mg/ml)의 시토카인 약물 또는 약 10 내지 약 500 μg/ml 농도(예컨대, 약 250 μg/ml)의 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함한다. 예컨대, 조성물은 약 3.3 mg/ml 농도의 CTLA-4 억제제, 약 6.6 mg/ml 농도의 PD-1 억제제, 및 약 250 mg/ml 농도의 시토카인 약물 또는 약 16.6 μg/ml 농도의 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함할 수 있다. 일부 경우에서, 조성물은 약 0.5 내지 10 mg/ml 농도의 CTLA-4 억제제, 약 0.5 내지 20 mg/ml 농도의 PD-1 억제제, 및 약 100 내지 약 500 mg/ml 농도(예컨대, 약 250 mg/ml)의 GM-CSF 또는 약 10 내지 약 500 μg/ml 농도(예컨대, 약 250 μg/ml)의 사이클로포스파미드를 포함한다. 일부 경우에서, 조성물은 적어도 또는 약 15 ml의 부피이다. 일부 경우에서, 조성물은 적어도 또는 약 10 ml의 부피이다. 일부 경우에서, 조성물은 약 1.0 ml 미만의 부피이다.
적어도 2종의 체크포인트 억제제와 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 조합은, 이들 면역 자극 약물이 종양내 조절 T 세포(Treg)를 고갈시키는 능력에 대한 부가적 또는 상승적 효과로 인해, (시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물이 없는) 적어도 2종의 체크포인트 억제제의 조합보다 우월하다. 또한, 효율적인 전신적 적응 항암 면역 반응의 생성은 Treg 고갈과 면역원성 종양 세포사 및 수지상 세포의 활성화를 조합하는 연조직(예컨대, 피내, 근육내 등) 면역화 전략을 통해 달성될 수 있다. 전통적으로, 체크포인트 억제제는 정맥으로 투여되며, 이는 이러한 살세포제가 체내에 비-특이적으로 분포하여 심각하고 때로는 치명적인 전신 독성을 유발할 수 있다. 이러한 작용제의 비-특이적 분포는 암 세포 및 정상 세포를 모두 사멸시키며, 치료 레지멘 및 환자 결과에 부정적인 영향을 미칠 수 있다. 연조직 주사 방법은 약물을 연조직 미세환경에 격리하고 약물의 독성으로부터 정상 세포 및 조직을 보호함으로써 전신 독성을 줄이고 더 적은 부작용을 낳을 수 있다(문헌[Marabelle et al., "Intratumoral Immunization: A New Paradigm for Cancer Therapy" Clin. Cancer Res. 20(7): 1747-56 (2014)]을 참고하며, 전체가 참조로 본원에 포함된다).
다수의 공동자극 및 코히비토리(cohibitory) 수용체는 CTLA-4를 포함하여 제어 T 세포 활성화, 증식 및 이펙터 기능의 획득 또는 상실에 영향을 미친다. CTLA4는 B7-1 및 B7-2 리간드와 결합하여 CD8+ 세포독성 T 세포를 활성화하고 동시에 CD4+ Treg를 고갈시킴으로써 항암 활성을 촉진한다(Selby et al., "Anti-CTLA-4 antibodies of IgG2a isotype enhance antitumor activity through reduction of intratumoral regulatory T cells" Cancer Immunol Res 1:32-42; 2013, 전체가 참조로 본원에 포함됨). 이러한 결과는 항-CTLA-4를 국소적으로 저용량으로 전달한 마우스 모델에서 발생된 전신적 항암 면역 반응을 설명할 수 있다. 확립된 마우스 결장 암종 주위에 주사된 저용량의 항-CTLA-4 항체는 암 특이적 CD8+ T 세포 반응의 직접적 향상에 의해 국소 종양을 박멸하고 멀리 있는 비-주사된 부위에서 암 발달을 방지할 수 있었다(압스코팔 효과). 문헌[Fransen et al., "Controlled local deliver of CTLA-4 blocking antibody induces CD8+ T-cell-dependent tumor eradication and decreases risk of toxic side effects" Clin Cancer Res 19: 5381-9; 2013]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
또한, 암 세포 및 면역계 둘 다를 표적으로 하는 기술을 조합함으로써, 치료 조성물은 암을 억제할 뿐만 아니라 효과적인 항종양 면역 반응을 촉발하는 데 더 효과적일 수 있다. 이어서, 이러한 항종양 면역 반응은 전이 부위를 표적으로 하고 대상체 전체에 걸쳐 암을 제거할 수 있다.
치료 조성물은 암 항원의 파괴를 최소화하면서 암 세포를 사멸시키는(예컨대, 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성 암 세포를 생성하는) 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체로부터 제조된 암 백신을 추가로 포함한다.
암 백신은 전형적으로 일 유형의 암에 특이적인 면역 반응을 유도하여 해당 암의 발달을 치료 또는 예방하는 백신이다. 이는 종양 관련된 항원 기반(TAA) 백신 및 수지상 세포 기반(DC) 백신으로 분류될 수 있다. 종양 관련된 항원 기반 백신은 면역 세포를 활성화하기 위한 종양 특이적 항원을 함유한다. 수지상 세포 기반 백신은 수지상 세포에 의한 항원 제시를 촉진하여 항종양 반응을 유도하는 것을 목표로 한다. 암 백신의 비제한적 예는 종양 세포 백신, 항원 백신, 수지상 세포 백신, DNA 백신, 및 벡터 기반 백신을 포함한다.
암 백신은 종양 관련된 항원(TAA) 또는 항원 에피토프를 제공함으로써 세포 면역 반응을 프라이밍한다. MHC 특이적 합성 또는 암 정제된 펩티드, 전체 또는 부분 단백질, RNA 및 DNA 플라스미드, 재조합 바이러스 및 박테리아 벡터, 수지상 세포의 직접적 표적화 또는 생체외 펄싱, 및 암 유래된 전체 세포 용해물, 단편, 세포자멸사 바디, 또는 엑소좀의 주사를 포함한 다양한 백신 전달 플랫폼이 있다. 문헌[Patel et al., "Next generation approaches for tumor vaccination." Chin Clin Oncol 6:19 (2017); Gonzalez et al., "Tumor cell lysates as immunogenic sources for cancer vaccine design. Hum Vaccin Immunother 10:3261 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다. 많은 백신이 임상적 유용성을 방해하는 한계가 있다. 예컨대, 암을 박멸하고 재발을 방지하려면 광범위한 TAA를 표적으로 삼아야 하는 데, 이는 미리 선택된 펩티드 또는 단백질, 플라스미드 또는 재조합 벡터를 사용하는 전략의 주요 단점이다. 수지상 세포 백신접종을 위해서는 생체외에서 임상 등급 수지상 세포를 생성한 후 암 관련된 항원 또는 전체 암 세포를 로딩해야 하는 데, 이 과정은 비용이 많이 들고 시간이 오래 걸리며 힘들기 때문에 이 접근법의 광범위한 임상 적용에 걸림돌이 되어 왔다.
항원은 암 백신의 면역 표적을 포함한다. 암을 제어하기 위해, 백신은 숙주 면역계를 자극하여 임상적으로 중요한 암의 대량의 디포짓을 박멸 (또는 저지)한다. 인간 대상체에 도입되는 항원 물질은 애주번트와 함께 또는 없이 "네이키드" 단백질 또는 펩티드, 바이러스 벡터에 의해 발현되고 바이러스 입자로 도입되는 단백질, 광범위한 가능한 항원을 발현하는 전체 암 세포 또는 용해물, 또는 수지상 세포와 같은 항원 제시 세포에 로딩된 재조합 또는 자가 단백질의 형태를 취할 수 있다.
따라서, 암 백신은 전체 암 세포, 세포 단편, 조직 단편, 용해물, 준세포(subcellular) 유도체, 예컨대 세포자멸사 수포 또는 엑소좀, 또는 이들의 조합을 사용하여 생성될 수 있으며, 신선하고, 조사되고, 고정(예컨대, 포르말린 고정, 에탄올 고정 또는 글루타르알데히드 고정)되고, 용해물을 생성하도록 조작될 수 있다.
괴사 종양 세포는 아마도 치료 후 죽은 세포로부터 방출되는 풍부한 열 충격 단백질(HSP) 70 및 90에 기인하여 애주번트 없이도 DC에서 부분 성숙을 유도하는 것으로 나타났다(문헌[Sauter et al., "Consequences of cell death: exposure to necrotic tumor cells, but not primary tissue cells or apoptotic cells, induces the maturation of immunostimulatory dendritic cells," J Exp Med. 191(3):423-34 (2000); Somersan et al, "Primary tumor tissue lysates are enriched in heat shock proteins and induce the maturation of human dendritic cells," J Immunol. 167(9):4844-52 (2001)]을 참고하며; 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 이러한 HSP는 DC에서 발현되는 톨 유사 수용체4(TLR4)에 의해 인식되어 세포내 항원 처리 및 제시를 가능하게 한다(문헌[Asea et al. "HSP70 stimulates cytokine production through a CD14-dependant pathway, demonstrating its dual role as a chaperone and cytokine," Nat Med. 6(4):435-42 (2000)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 전염증 인자 고이동성 그룹 박스 1(HMGB1)도 괴사성 세포사 동안 방출되고, DC 상의 TLR4와 상호작용하며, 항원의 처리 및 제시를 자극한다(문헌[Scaffidi et al., "Release of chromatin protein HMGB1 by necrotic cells triggers inflammation," Nature 418(6894):191-95 (2002); Apetoh et al., "Molecular interactions between dying tumor cells and the innate immune system determine the efficacy of conventional anticancer therapies," Cancer Res. 68(11):4026-30 (2008)]을 참고하며; 전체가 참조로 본원에 포함됨). HMGB1은 TLR4와 결합하여 파고좀과 리소좀의 융합을 차단함으로써 항원의 분해를 방지하고 항원 제시 세포에 대한 트래피킹을 돕는다. HMGB1의 중화 또는 녹다운 또는 TLR4의 녹아웃은 시험관내 및 생체내 모두에서 항종양 반응을 유도하는 죽어가는 종양 세포의 능력을 제거한다. 내인성 위험 신호인 요산은 손상되거나 죽어가는 세포에서 퓨린 분해된 후 축적되며 또한 DC 성숙을 유도하여 백신접종을 향상시킨다(문헌[Shi et al., "Molecular identification of a danger signal that alerts the immune system to dying cells," Nature 425(6957):516-21 (2003)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨).
프로그래밍된 세포사의 다수의 메커니즘 중 하나인 세포자멸괴사는 혼합된 계통 키나제 유사 단백질(MLKL)을 통한 빠른 막 투과성 및 RIPK1/RIPK3 네크로좀 복합 경로의 활성화를 특징으로 한다. 세포자멸괴사는 세포자멸사와 달리 위험 관련된 막 단백질 (DAMP)과 같은 세포내 내용물의 방출, 염증성 케모카인 및 시토카인 생성, 및 APC에 의한 항원 로딩의 RIPK3 촉진으로 인해 면역 반응을 강력하게 자극한다. 마우스에서 세포자멸괴사성 세포의 종양내 주사는 CD8+ 백혈구 의존적 항종양 면역을 유발할 수 있다.
한 실시양태에서, 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체는 신선한 전체 세포이다.
종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체는 암 백신을 제조할 때 생체외에서 처리될 수 있다. 처리 또는 조작은 하기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 암의 최대 순도를 보장하기 위해 물리적 또는 화학적 방법에 의한 비-암 조직 제거; 세포자멸사, 세포자멸괴사 또는 괴사의 메커니즘에 의해 종양 관련된 항원을 방출 및 노출시키고 주사된 백신이 생존 가능한 암 세포를 함유하지 않도록 보장하기 위한 조작 또는 세포 변경(예컨대, 조사, 냉동수술 동결, 고열, 고주파 조작 등); 및/또는 시토카인(예컨대, GM-CSF)과 같은 유리한 작용제의 생성을 가능하게 하는 유전자 형질감염(신선한 샘플에서만).
한 실시양태에서, 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체는 분리 또는 절개, 고정, 원심분리, 재현탁, 농축, 다른 조작 및 이들의 조합과 같은 하나 이상의 처리에 의해 제조된 암 세포 용해물이다.
암 백신은 대상체로부터 제거된 실제 암 세포로부터 제조될 수 있다. 일단 제거되면, 암 세포는 실험실에서, 예컨대 생체외 처리를 통해 변형되어 괴사성 및 세포자멸괴사성 암 세포를 생성할 수 있으므로 더 이상 종양을 형성할 수 없다. 예컨대, 암 세포는 화학물질 또는 새로운 유전자의 첨가로 변형되어 면역계에 의해 세포가 이물질로 보일 가능성이 더 높아질 수 있다. 이어서, 생체외 처리된 세포는 대상체에게 주사된다. 면역계는 이러한 세포 상의 항원을 인식할 수 있으며 자연 생리학적 과정을 통해 의도된 항원을 발현하는 세포를 찾아 공격/사멸시킨다.
대상체로부터 제거된 생검 또는 흡인 샘플은 전형적으로 절개 및 농축되어 암 세포의 높은 수율을 보장하며, 이후 세포자멸괴사성 또는 괴사성이 된다. 이 방법은 파괴된 막의 세포 단편, 미토콘드리아와 같은 세포내 소기관, 세포 RNA 및 DNA의 조 혼합물을 함유하는 세포 물질을 생성한다.
한 실시양태에서, 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체는, 예컨대 포르말린, 에탄올 또는 글루타르알데히드에 의해 고정된 암 세포 용해물이다. 더 많은 고정 방법은 그 전문이 참조로 본원에 포함되는 문헌[Wang, et al., "Protective antitumor immunity induced by tumor cell lysates conjugated with diphtheria toxin and adjuvant epitope in mouse breast tumor models" Chin J Cancer 31:295-305 (2012); Baogang et al., "Fixed-tumor vaccine: A practical formulation with cytokine-microspheres for protective and therapeutic antitumor immunity" Chinese-German Journal of Clinical Oncology 2:196-202 (2003)]에서 찾아질 수 있다.
한 실시양태에서, 암 백신은 전체 암 세포 또는 용해물을 사용한다. 전체 암 세포 또는 용해물의 사용은 하기를 포함하는 다수의 이점을 제공한다: (1) 모든 잠재적 종양 관련된 항원의 제공 및 표적화; (2) 항원 손실 방지; (3) 선호 항원의 사전 확인 필요성 제거; (4) HLA 유형에 관계없이 치료에 적격인 모든 대상체를 표적으로 함; (5) 세포내 및/또는 세포막 상에서 발현된 항원 에피토프가 가용성 비결합 형태의 동일한 펩티드보다 더 큰 면역원성을 유도하기 때문에 MHC 의존적 면역 자극을 일으킬 더 높은 가능성을 포함한 면역원성 개선; (6) 항원적으로 다양한 세포를 함유하는 조직학적으로 동일한 종양으로부터 항원의 포함을 보장; 및 (7) 다양한 유형의 스캐빈저 수용체, 예컨대 LOX-1, CD36 및 MARCO, 및 가능하게는 면역 세포 상의 톨 유사 수용체를 동시에 관여시키고 활성화할 수 있는 단백질, 지질 및 당단백질을 포함한 풍부한 항원 및 생체분자의 제공. 문헌[Chiang et al., "Whole Tumor Antigen Vaccines: Where Are We? Vaccines" (Basel) 3:344 (2015); Seledtsov et al., "Clinically feasible approaches to potentiating cancer cell-based immunotherapies." Hum Vaccin Immunother 11:851 (2015)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다.
암 백신은 자가유래이거나 동종이계일 수 있다.
한 실시양태에서, 암 백신은 동종이계이며, 즉 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체는 환자에 대해 동일한 종의 또 다른 구성원으로부터 유래된 물질로부터 생성된다. 다시 말해서, 암 세포는 대상체에게서 취하여 변형된 다음 제2의 다른 대상체에게 다시 주사된다. 일반적으로 사용되는 동종이계 물질은 특정 종양 유형의 TAA를 발현하는 것으로 공지된 확립된 실험실 배양된 암 세포주의 사용을 포함한다.
한 실시양태에서, 암 백신은 자가유래이며, 즉 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체는 환자의 종양 또는 암으로부터 유래된 물질로부터 생성된다. 다시 말해서, 암 세포는 대상체에게서 취하여 변형한 다음 동일한 대상체에게 다시 주사된다.
자가 백신은 동종이계 백신과 비교할 때 우수한 생존율을 제공할 수 있다(문헌[Dillman et al., "Randomized phase II trial of autologous dendritic cell vaccines versus autologous tumor cell vaccines in metastatic melanoma: 5-year follow up and additional analyses." J Immunother Cancer 6:19 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 자가 세포의 사용은 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응을 프라이밍하기 위한 다수의 항원 에피토프를 함유하는 다가 환자 특이적 백신 치료를 효과적으로 전달하여 개인 암 백신을 생성할 수 있다. 예컨대, 난소암의 임상 시험은 수지상 세포를 로딩하기 위한 항원의 공급원으로 전체 암 용해물을 성공적으로 활용하였으며, 백신은 세포성 및 체액성 면역 반응을 모두 일으키는 안전하고 실현 가능한 것으로 나타났다. 인간 흑색종, 신경아교종, 신장 세포 암종, 전립선암 및 췌장암에서의 다른 시험은 조사 및/또는 냉동조작된 동종이계 또는 자가 종양 세포를 애주번트 단백질과 함께 사용하여 유의미한 독성 없이 적당한 반응을 보였다. 문헌[Furukawa et al., "A practical approach to pancreatic cancer immunotherapy using resected tumor lysate vaccines processed to express alpha-gal epitopes" PLoS One 12: e0184901 (2017); Plautz et al., "T cell adoptive immunotherapy of newly diagnosed gliomas" Clin Cancer Res 6:2209-2218 (2000); Mehrotra et al., "Vaccination with poly(IC:LC) and peptide-pulsed autologous dendritic cells in patients with pancreatic cancer" J Hematol Oncol 10:82 (2017); Simons et al., "Induction of immunity to prostate cancer antigens: results of a clinical trial of vaccination with irradiated autologous prostate tumor cells engineered to secrete granulocyte-macrophage colony-stimulating factor using ex vivo gene transfer" Cancer Res 59:5160-68 (1999); Jocham et al., "Adjuvant autologous renal tumour cell vaccine and risk of tumour progression in patients with renal-cell carcinoma after radical nephrectomy: phase III, randomised controlled trial. Lancet 363:594-99 (2004)]을 참고하며; 이들 모두 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
흉막 삼출액으로부터 수거된 진행성 비-소세포 폐암 세포로부터 생성된 자가 백신은 피내로 투여되어 유의미한 면역 독성 없이 TAA에 대한 특이적 항체 반응을 일으킬 수 있다(문헌[Sanborn et al., "A pilot study of an autologous tumor-derived autophagosome vaccine with docetaxel in patients with stage IV non-small cell lung cancer" J Immunother Cancer 5:103 (2017)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 유잉 육종에 대한 자가 피내 암 백신은 낮고 허용 가능한 유해 사례 수준(3 등급 초과의 독성 없음)으로 생존 이익을 제공할 수 있다(문헌[Ghisoli et al., "Three-year Follow up of GMCSF/bi-shRNA(furin) DNA-transfected Autologous Tumor Immunotherapy (Vigil) in Metastatic Advanced Ewing's Sarcoma" Mol Ther 24:1478-83 (2016)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨).
한 실시양태에서, 암 백신은 자가유래이고 포르말린 고정과 같은 고정에 의해 제조된다.
자가 포르말린 고정된 종양 백신(AFTV)은 환자 자신의 수술로 적출된 파라핀 포매된 암 조직으로부터 맞춤 제조되고 피내 주사되어 개인 맞춤형 종양 관련된 항원의 편리한 공급원을 제공한다. 문헌[Ishikawa et al., "Prospect of Immunotherapy for 교모세포종: Tumor Vaccine, Immune Checkpoint Inhibitors and Combination Therapy" Neurol Med Chir (Tokyo) 57: 321-330; 2017]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
포르말린 고정은 암 세포의 항원성을 보존하여 저장된 수술 조직이 항종양 면역 반응을 일으키는 데 사용될 수 있게 한다. 암 특이적 자가 세포독성 T 세포는 포르말린 고정된 섹션의 주사에 의해 생성될 수 있으며, 배양된 세포에 의해 유도된 것과 유사한 활성 및 특이성을 갖는다. 문헌[Liu et al., "Induction of human autologous cytotoxic T lymphocytes on formalin-fixed and paraffin-embedded tumour sections" Nat Med 1995;1: 267-271, 1995]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
AFTV는 자가 암이 다양한 미확인된 환자 특이적 항원의 공급원 역할을 한다는 점에서 펩티드와 같은 미리 결정된 분자 표적 작용제로부터 생성된 백신과 상이하다. 따라서. AFTV로 유도된 세포독성 T 세포 및 수지상 세포는 본질적으로 다클론성이어서 TAA(종양 관련된 항원) (예컨대, 간세포 암종에서 자주 발현되는 단백질인 글리피칸-3)에 대한 특정한 세포성 면역 반응을 일으킨다. 문헌[Kawashima et al., "Suppression of postsurgical recurrence of hepatocellular carcinoma treated with autologous formalin-fixed tumor vaccine, with special reference to glypican-3" Clin Case Rep 3: 444-447, 2015]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
AFTV는 백혈구 및 림프구, CD3+ T 세포의 수, CD4+ T 세포에서 Th1의 백분율, 및 Th1과 조절 T 세포의 비율을 증가시킬 수 있다. 문헌[Kuranishi et al., "Rate of Clinical Complete Response for 1 Year or More in Bone-Metastatic Breast Cancer after Comprehensive Treatments including Autologous Formalin-Fixed Tumor Vaccine" Int J Breast Cancer 4879406, 2018]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. AFTV는 또한 다른 백신보다 제조 및 취급이 더 쉽고 비용이 적게 들기 때문에 외래 진료를 용이하게 한다. AFTV의 효능은 설치류 뇌종양 및 뮤린 간암에서 전임상으로 입증되었으며, 유방암, 다형 교모세포종, 간세포 암종, 악성 섬유성 조직구종, 재발성 복막 장액 암종, 자궁경부 소세포 암종, 상부 요로상피 암종, 담관암종 및 결장암을 갖는 환자에서 임상적으로 확인되었다.
그러나, AFTV 면역요법은 생검과 같은 조직 공급원이 소량의 암 조직을 함유하는 경우에 제한적이었다. 또한, 이질적 암이 있거나 양성 세포가 많은 혼합되어 있는 경우 각각의 백신에 최소량의 암 항원이 포함되도록 변형이 필요하다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 암 백신이 자가 포르말린 고정된 종양 백신을 사용하는 경우, AFTV 공급원은 대부분 악성 세포를 포함해야 하며 가능한 한 전체 표적 암을 대표해야 한다.
항원 인식 및 T 세포 활성화를 향상시키기 위해 하기를 포함한 다른 애주번트 또는 방식이 종종 암 백신에 추가된다: 1) 세포 기반 백신의 유전적 또는 화학적 변형; 2) 수지상 세포를 끌여들임으로써 T 세포에 대해 종양 관련된 항원을 교차 프라이밍; 3) T 세포 입양 요법; 4) 비-특이적 면역조절제, 톨 유사 수용체 효능제, 시토카인, 케모카인 또는 호르몬에 의한 세포독성 염증의 자극; 5) 항체, 소분자를 사용한 항종양 이펙터 세포의 면역억제 및/또는 자극의 감소; 및 6) 화학요법을 포함한 다양한 세포증식억제 또는 세포감소 방식. 문헌[Patel et al., "Next generation approaches for tumor vaccination." Chin Clin Oncol 6:19 (2017), 전체가 참조로 포함됨). 백신과 면역조절제를 조합하면 결과가 개선되지만 면역 인식을 능동적으로 끄고/끄거나 종양 미세환경에서 이펙터 T 세포를 무력하게 하는 기존의 내성 메커니즘으로 인해 대상체에게 상당한 항암 반응을 일으키기 어려울 수 있기 때문에 완전한 임상 잠재력에 도달하지 못하였다(Chiang et al., "Whole Tumor Antigen Vaccines: Where Are We? Vaccines" (Basel) 3:344 (2015); Seledtsov et al., "Clinically feasible approaches to potentiating cancer cell-based immunotherapies." Hum Vaccin Immunother 11:851 (2015); Godoy-Calderon et al., "Autologous tumor cells/bacillus Calmette-Guerin/formalin-based novel breast cancer vaccine induces an immune antitumor response" Oncotarget 9: 20222-38 (2018)]을 참고하며, 이들 모두가 그 전문이 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 암 용해물은 원래의 출발 조직으로부터 생성될 수 있고 약 100만개 내지 약 10억개 암 세포의 전체 세포 또는 이의 유도체를 포함한다. 용해물은 약 0.1 내지 약 10 ml, 또는 약 0.25 내지 약 5 ml의 누적 부피로 전달될 수 있다. 용해물은 동시에 하나 초과의 부위로 전달될 수 있다.
일부 경우에서, 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체를 제조하기 위한 생체외 처리는 생체외 방사선 및/또는 조작의 하나 이상의 단계를 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
본원에 사용된 용어 "조작" 또는 "조작하는"은 세포를 손상시키거나 파괴하기 위한 최소 침습 수술 방법을 지칭하며, 용어 "절제" 또는 "절제하는"와 상호교환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "냉동수술 동결"은 암 세포 또는 조직을 파괴하기 위해 동결 온도를 사용하는 과정을 지칭하며, 용어 "냉동절제" 또는 "냉동절제하는"과 상호교환될 수 있다.
생체외 방사선 및/또는 조작은 당업계에 공지된 다양한 방사선 및/또는 조작 방법 또는 이들의 조합을 이용하여 수행될 수 있다.
적합한 조작 방법은 저온 조작, 예컨대 냉동수술 동결; 열적 조작, 예컨대 고주파(RF) 조작, 마이크로파 조작, 레이저, 광 또는 플라즈마 조작, 초음파 조작, 고강도 집중 초음파(HIFU) 조작, 또는 스팀 조작; 전기 조작, 예컨대 가역적 전기천공(RE), 비가역적 전기천공(IRE), 고주파 전기 막 파괴(RF-EMB), RF-EMB 유형 조작, 초단 전기 펄스로의 조작; 광역학 요법을 이용한 조작; 기계적 또는 물리적 조작, 예컨대 비-열적 충격파, 캐비테이션, 또는 세포 파괴를 일으키는 다른 기계적 물리적 수단을 사용한 조작; 화학적 조작, 예컨대 화학물질, 예컨대 알콜, 고장성 식염수, 아세트산 등의 주사에 의한 조작; 생물제제, 예컨대 종양용해 바이러스로의 조작; 또는 이들의 조합을 포함한다.
적합한 조사 또는 방사선 방법은 레이저 방사선(예컨대, 자외선 또는 근적외선 레이저 방사선), X선 방사선 또는 감마 방사선을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 방사선은 고체 및 액체 모두를 포함한다. 예컨대, 방사선 공급원은 고체 공급원으로서 1-125, 1-131, Yb-169, Ir-192, 고체 공급원으로서 I-125, 또는 광자, 베타 입자, 감마 방사선 또는 다른 치료 광선을 방출하는 다른 방사성핵종일 수 있다. 방사성 물질은 또한 방사성핵종(들)의 임의의 용액, 예컨대 I-125 또는 1-131의 용액으로부터 만들어진 유체일 수 있거나, 방사성 유체는 Au-198, Y-90과 같은 고체 방사성핵종의 작은 입자를 함유하는 적합한 유체의 슬러리를 사용하여 생성될 수 있다. 또한, 방사성핵종(들)은 겔 또는 방사성 미소구로 구현될 수 있다.
적어도 2종의 체크포인트 억제제 및 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 함유하는 약제학적 조성물을 생체외 처리된(예컨대, 조작된) 암 백신 조성물 방법과 조합하는 것은 전신성, 지속성 및 재현성 암 면역을 제공할 수 있다. 냉동요법 및 방사선 요법과 같은 조작 기술은 단독으로 이용될 때 조절 T 세포 억제, 이펙터 T 및 B 세포 활성화 및 암 관련된 항원 방출을 제공하여(문헌[Maia et al., "A comprehensive review of immunotherapies in prostate cancer." Crit Rev Oncol Hematol. 113:292-303 (2017)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨), 세포독성 T 림프구 반응을 자극하는 애주번트 효과를 효과적으로 일으킨다. 예컨대, 동결-해동에 의해 괴사된 세포는 공동주사된 항원에 대한 T 세포 반응을 향상시키기 때문에 생체내 주사 시 면역자극 활성을 갖는다. 문헌[Shi et al., "Cell injury releases endogenous adjuvants that stimulate cytotoxic T cell responses." Proc Natl Acad Sci U S A. 97(26):14590-14595 (2000)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
면역치료 약물과 생체외 조작된 암 조성물의 조합의 주사는 아마도 상이한 작용 메커니즘의 이익을 이용함으로써 면역 반응을 향상시킬 수 있다.
본원에 기재된 생체외 조작은 조작된 종양에 대한 면역학적 반응에 영향을 미치는 것으로 공지된 적어도 두가지 인자에 영향을 미친다. 하나는 단백질 구조 및 따라서 종양 단백질의 항원성에 대한 조작 과정의 영향이다. 제2 인자는 조작 방식과 관련된 세포사의 메커니즘이다.
괴사(즉각적인 세포사)는 특정 조건 하에서 세포막을 파열시키고, 세포막 단편 및 광범위한 세포내 내용물이 실활된 세포에서 수지상 세포의 공동자극을 유발하는 세포외 환경으로 유출되어 T 세포 증식 및 활성화로 이어진다. 이와는 대조적으로, 비가역적인 손상의 또 다른 형태인 세포자멸사(프로그래밍된 세포사)는 시간이 지남에 따라 세포가 오그라들고 보통 며칠 내에 죽는다. 세포자멸사는 세포를 그대로 두고 세포 내용물을 제한하며 공동자극을 방지한다. 이러한 세포내 노출 및 공동자극의 결여는 T 세포 활성화 및 증식을 방지함으로써 면역학적 효과를 약화시킨다. 따라서, 괴사는 면역원성 자극을 크게 유발하는 반면, 세포자멸사는 일반적으로 면역 반응을 거의 또는 전혀 유발하지 않는다.
암 세포의 생체외 조작 및 연조직으로의 후속 투여는 이를 제거하기 위한 신체의 방어 및 치유 메커니즘을 유도한다. 이는 신체의 면역 방어 메커니즘을 이용하여 죽은 종양을 인식하고 본질적으로 잠재적 암 신생항원(즉, 환자 자신의 암)에 대해 환자를 자동면역화하는 기회를 만든다(문헌[Veenstra et al., "In situ immunization via non-surgical manipulation to prevent local and distant tumor recurrence" Oncoimmunology 4(3): e989762 (2015)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 또한, 본원에 개시된 치료적 접근법은 암 세포 항원에 대해 면역계를 자극함으로써 (i) 원발성 종양을 치료하고; (ii) 암 세포 항원에 대한 면역 반응을 활성화하고; 및 (iii) 전이성 병변의 면역계 표적화를 유도할 수 있다.
상이한 유형의 조작 방법은 단백질 구조 및 세포사의 메카니즘에 대해 상이한 결과를 가질 수 있다. 예컨대, 열 조작은 단백질 변성으로 인해 구조를 파괴하고 조직의 기본 콜라겐 매트릭스도 파괴한다. 단백질 및 조직의 이러한 파괴는 강력한 면역학적 반응을 거의 불가능하게 만든다. 저온 조작(예컨대, 냉동수술 동결)은 단백질을 변성시킬 수 있으며 단백질 및 조직 구조를 모두 파괴할 수 있다. 비가역적 전기천공(IRE) 및 비-열적 조작 방식, 예컨대, RF-EMB는 구조에 위해를 가하지 않으므로 췌장, 중앙 간, 및 머리 및 목과 같은 다른 영역의 암을 치료하는 데 이용될 수 있다. IRE는 세포막의 투과성을 증가시키기 위해 세포에 전기장을 인가하는 기술이다. IRE의 고전압은 인접한 세포는 영향을 받지 않게 하면서 표적 세포를 파괴한다. 고주파 전기 막 파괴(RF-EMB)는 전기적으로 세포막의 완전한 파괴에 의해 괴사를 일으키는 또 다른 비-열적 방식이다(WO 2015/085162, 전체가 참조로 본원에 포함됨). 특정 조건에서 RF-EMB를 이용하여 DNA 플라스미드를 전달할 수도 있다. 가역적 전기천공(RE)도 DNA 플라스미드를 전달하는 데 이용될 수 있다. RE는 IRE와 유사하지만 표적 세포에 인가되는 전기는 표적 세포의 전기장 임계값 미만이다. 따라서, 전기장이 제거되면 세포가 회복되어 세포막을 재건하고 세포 기능을 계속할 수 있다. RE는 가역적 요소가 핵산(예컨대, DNA 플라스미드)을 생존 가능한 세포에 도입할 수 있게 하므로 유전자 요법을 위한 도구로 이용될 수 있다. 예시적인 생체외 조작 치료 방법 및 이의 메커니즘에 대한 간략한 설명이 표 1에 요약되어 있다.
암 백신을 생성하기 위한 암 세포의 생체외 처리를 위해, 본원에 기재된 임의의 조작 방법을 단독으로 또는 하나 이상의 다른 조작 방법과 조합하여 이용할 수 있다. 2개 이상의 조작 방법을 순차적으로 또는 공동으로 적용할 수 있다. 일부 경우에서, 조작 방법의 조합은 조직에 상승적 효과를 가질 수 있다. 조합의 비제한적 목록은, 예컨대 열 조작 및 RF-EMB, 냉동수술 동결 및 RF-EMB, IRE 및 RF-EMB, RE 및 RF-EMB, IRE 및 냉동수술 동결, 열 조작 및 냉동수술 동결, 열 조작 및 IRE, RE 및 IRE, 열 조작과 RE, 및 2개 이상의 방법이 이용되는 임의의 조작을 포함한다.
일부 경우에서, 본원에 기재된 생체외 조작 방법은 RF-EMB 및 냉동수술 동결 기술의 조합을 이용하여 RF-EMB 유형 병변을 생성한다. 이러한 조작 방법의 조합은 조직에 상승적 효과를 낼 수 있다. 상승적 효과는 다른 수단보다 적은 에너지 입력으로 RF-EMB 유형 병변을 생성할 수 있다. 예컨대, 간 조직에서의 결과는 하기를 포함한다: 무균성 비-염증 응고 괴사에 인접한 영역에서, 담소관의 확장을 포함한 간 구조의 변경 뿐만 아니라 미토콘드리아 크리스테의 왜곡 및 세포질세망의 액포화를 포함한 세포질 소기관의 고유한 확산 변경이 있다.
당업자는 본원에 기재된 조작 방법이 생체외 적용 및 암의 개별 측면, 예컨대 암 검체의 크기, 혼합된 비-암 조직의 양 등에 따라 적응될 수 있음을 이해할 것이다. 당업자는 다양한 조작 방법 각각의 변수가 당업계에 공지되고 설명되어 있음을 이해할 것이다(예컨대, 경피적 전립선 냉동절제 포함(편집: Onik, Rubinsky, Watson, and Ablin. Quality Medical Publishing, St Louis, MO, 1995), 전체가 참조로 본원에 포함됨).
조작 파라미터의 가변성 및 다양성의 예로서, 냉동수술 동결 과정은 동결-해동 사이클의 수, 동결 속도, 사이클의 해동 부분과 같은 조정 가능한 변수를 포함하여 조작, 예컨대 암 검체의 크기 및 병변에 대한 면역 반응의 결과에 영향을 미친다. 마찬가지로, RF-EMB 과정은 전기장의 강도, 주파수, 극성, 모양 지속 시간, 수 및 간격 등과 같은 조정 가능한 변수를 포함하며, 이는 조작 결과에 유사하게 영향을 미칠 수 있다. 전기 펄스에 대한 종양 세포의 근접성은 특정 세포에 대한 RF-EMB의 강도 및 결과를 결정할 것이다. 예컨대, 전기장 강도가 투여 지점(예컨대, 프로브)에서 감소함에 따라 투여 지점에서 가장 먼 세포는 더 낮은 전기장 강도로 처리되며, 따라서 조작되지 않고 오히려 가역적으로 전기천공될 수 있다.
일부 경우에서, 종양 세포 또는 이의 유도체의 제1 부분 또는 전부는 제1 조작/조사 방법을 이용하여 생체외에서 조작/조사되고 종양 세포 또는 이의 유도체의 제2 부분 또는 전부는 제2 조작/조사 방법을 이용하여 생체외에서 조작/조사된다. 제1 및 제2 조작/조사 방법은 동일하거나 상이할 수 있다. 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체의 제1 및 제2 부분은 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체의 동일하거나 상이한 부분일 수 있다.
일부 실시양태에서, 생체외 조작은 RF-EMB 및 냉동수술 동결을 모두 이용하여 수행된다.
일부 경우에서, 생체외 조작/조사 단계는 적어도 부분적으로 냉동수술 동결을 이용하여 수행된다. 상기에서 논의한 바와 같이, 냉동수술 동결은 냉기를 사용하여 조직을 파괴하고 탈수 및 얼음 형성으로 괴사를 일으키는 과정이다. 냉동수술 동결은 항종양 면역 유도에 필요한 종양 관련된 항원(TAA)의 전체 보완물을 방출하여 세포자멸괴사성 및 괴사성 암 세포사를 유발한다. 그러나, "냉동면역 효과"는 가변적이다.
본원에서 사용되는 냉동수술 동결은 기존의 냉동수술 동결과 상당히 상이하다: 전형적인 냉동수술은 암(응고 괴사)의 완전하고 즉각적인 파괴 및 음성 수술 마진의 생성을 위해 사용되는 반면, 본원에서의 냉동수술 동결은 압스코팔 효과(세포자멸괴사 및 괴사 모두)를 유도하기 위해 면역계에 온전한 암 항원의 제시를 보장하기 위해 사용된다. 또한, 본 발명의 목적 중 하나는 냉동수술 동결의 3가지 세포사 메커니즘(세포 및 핵막 및 세포질 소기관의 파열) 중 하나를 이용하고 다른 두 메커니즘(단백질의 변성 및 국소 미세혈관 파괴)을 최소화하는 것이다. 이는 동결 온도를 -40℃로 설정하고(온도 제한) 신선한 암 조직 또는 세포의 생체외 냉동수술 동결을 이용하여 달성될 수 있다. 이 조합 요법은 종래의 전신적 암 치료와 관련된 전신 독성을 줄이고 면역계의 항원 특이적 자극을 제공하여 개인 맞춤형 종양 표적화된 면역 반응을 유도할 수 있다.
냉동수술 동결 기술은 전형적으로 속이 빈 바늘(냉동프로브)을 조직에 삽입한 다음 냉동프로브의 팁에 한제를 공급하는 것을 포함한다. 냉동수술 동결은 하나 초과의 냉동프로브를 사용하여 수행될 수 있다. 냉동수술 동결은 또한 본원에 기재된 임의의 다목적 프로브를 사용하여 수행될 수 있다.
조직 온도는 완전한 응고 괴사와 관련된 온도로 감소된다. 일반적인 냉동수술 동결 기술은 고압(예컨대, 약 80 psi) 액체 질소 시스템 또는 고압(예컨대, 3000-4500 psi) 아르곤 가스 시스템의 사용을 포함한다. 일반적으로, 조직이 동결되면 해동(일반적으로 헬륨 가스 또는 저항 가열 사용)이 뒤따르며, 이는 세포막을 파괴하고 세포 파괴를 유도한다. 동결-해동 사이클을 반복하면 세포 파괴가 더욱 가속화된다. 일부 경우에서, 생체외 냉동수술 동결은 적어도 1회의 동결-해동 사이클을 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어질 수 있다. 예컨대, 냉동수술 동결은 1 내지 4회의 동결-해동 사이클을 포함할 수 있다. 동결-해동 사이클의 동결 부분은, 예컨대 적어도 또는 약 30초 길이일 수 있다. 동결-해동 사이클의 동결 부분은 약 30초 내지 약 15분, 약 30초 내지 약 12분, 약 30초 내지 약 10분, 또는 30초 내지 약 5분의 범위일 수 있다. 해동 시간은 적어도 또는 약 30초일 수 있다. 예컨대, 해동 시간은 약 30초 내지 약 15분, 약 30초 내지 약 12분, 약 30초 내지 약 10분, 또는 30초 내지 약 5분의 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, 전체 냉동수술 동결 단계는 30분 이하, 25분 이하, 20분 이하, 15분 이하, 10분 이하, 5분 이하, 또는 1분 이하 동안 지속된다.
상기에서 논의된 바와 같이, 본원에 제공된 치료 조성물 및 치료 방법의 한 가지 이익은 생체외 조작에 의해 면역 자극 괴사를 유도하는 것이다. 일부 실시양태에서, 생체외 조작은 단일 프로브(예컨대, 냉동수술 바늘 프로브)의 삽입에 의해 수행되며; 조작 처리 단계는 원하는 온도 및 효과를 얻기 위해 5분 이하 동안 지속된다.
동결-해동 사이클의 동결 부분은, 예컨대 약 -30℃ 내지 약 -196℃, 예컨대 약 -30 내지 약 -80℃, -35 내지 약 -45℃, 약 -35 내지 약 -40℃, 약 -40 내지 약 -50℃, 약 -40 내지 약 -45℃, 또는 약 -40℃의 온도에서 수행될 수 있다.
상기에서 논의된 바와 같이, 본원에 제공된 치료 조성물 및 치료 방법의 한 가지 이익은 최소한의 열적 조작을 이용하여 암 신생항원을 보존하는 것이다. 암 신생항원은 세포막의 내부 및 외부 표면에 존재하는 독특한 외래 단백질이다. 이러한 신생항원은 면역결정인자이며, 항원 특이적 T 세포에 의한 조기 암 인식 및 파괴를 위한 면역요법 치료에 영향을 줄 수 있다. 문헌[Desrichard et al., "Cancer neoantigens and applications for immunotherapy" Clin. Cancer Res. 22: 807-12 (2016)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 신생항원의 보존은 면역 활성화에 필요하다. 면역계는 암-신생항원 특이적 수지상 세포 및 세포독성 CD8+ T 세포를 생성하고 활성화함으로써 암 발달을 제어하고 퇴행을 중재할 수 있다. 이를 통해 면역 세포는 림프절 및 뼈와 같은 전이 부위에서 암 세포의 신생항원을 인식하고 표적으로 할 수 있다.
대부분의 암 조작 방법은 괴사를 유도하지만 다수는 암 신생항원의 3차원 단백질 구조를 보존하지 못한다(문헌[Onik et al., "Electrical membrane breakdown (EMB): Preliminary findings of a new method of non-thermal tissue ablation" J. Clin. Exp. Pathol. 7:5-11 (2017)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 이는 면역 세포에 의한 신생항원 확인을 방지하기 때문에 바람직하지 않을 수 있다.
따라서, 일부 실시양태에서, 신생항원의 3차원 구조를 보존하기 위해 통상적인 -80℃보다는 약 -40℃의 비교적 낮은 온도에서의 생체외 냉동수술 동결이 이용된다. 약 -40℃에서의 냉동수술 동결은 단백질 신생항원 파괴의 열적 파괴를 피하거나 최소화하면서 세포사의 임계값을 초과하여 면역 자극 괴사를 일으킨다. 문헌[Larson et al., "In vivo interstitial temperature mapping of the human prostate during cryosurgery with correlation to histopathologic outcomes" Urology 55:547-52 (2000)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
일부 경우에서, 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체의 생체외 처리는 일련의 전기 펄스를 투여하는 것을 추가로 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다. 일부 경우에서, 전기 펄스의 투여는 조작과 동시에 수행된다. 일부 경우에서, 전기 펄스의 투여는 조작 전에 수행된다. 일부 경우에서, 전기 펄스의 투여는 조작 후에 수행된다. 전기 펄스는 냉동프로브를 통해 투여될 수 있다. 일부 경우에서, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 1000개의 펄스를 포함하고/하거나 100 내지 500 kHz의 주파수를 포함한다. 일부 경우에서, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 4000개의 펄스를 포함하고/하거나 100 내지 500 kHz의 주파수를 포함한다. 일부 경우에서, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 4000개의 펄스를 포함한다. 일부 경우에서, 일련의 전기 펄스는 100 내지 500 kHz의 주파수를 포함한다. 전기 펄스는, 예컨대 이극성일 수 있고/있거나 즉각적인 전하 역전을 가질 수 있다.
종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체의 적어도 일부의 생체외 조작은 RF-EMB를 이용하여, 예컨대 프로브를 사용하여 수행될 수 있다. 프로브는 본원에 개시된 임의의 프로브일 수 있다. 일부 경우에서, 프로브는 일련의 전기 펄스를 투여하여 조작을 일으킨다. 일부 경우에서, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 1000개의 펄스를 포함한다. 일부 경우에서, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 4000개의 펄스를 포함한다. 일부 경우에서, 전기 펄스는 100 내지 500 kHz의 주파수를 포함한다. 전기 펄스는 양극성일 수 있다. 전기 펄스는 또한 즉각적인 전하 역전을 가질 수 있다.
일부 경우에서, 특정한 생체외 조작 방법은 많은 열적 조작(예컨대, 냉동수술 동결) 및 RF-EMB를 포함하여 세포막의 파괴를 특징으로 하는 독특한 조직 괴사를 일으킬 수 있다. 세포막이 파괴되면 세포내 성분 및 세포막의 구성 부분을 세포외 공간으로 분산하여 면역학적 확인 및 반응이 향상된다. 이는 조직 세포자멸사를 일으키는 다른 유형의 조작 방법(예컨대, IRE)과 상이하다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "RF-EMB 유형 조작"은 수행될 때 본질적으로 RF-EMB 조작과 동일한 결과를 산출하는 임의의 조작 기술 또는 기술들의 조합을 지칭한다.
이러한 생체외 조작은 하기 이익 중 적어도 하나를 가져온다: 세포의 세포내 성분 및 막 항원은 조작에 의해 변성되지 않거나 최소한으로 변성됨; 세포의 노출된 세포내 성분 및 막 항원의 양이 면역계를 자극하기에 충분함; 및/또는 세포의 노출된 세포내 성분 및 세포의 막 항원의 양은 면역 내성을 일으키지 않거나 최소한으로 일으킴. 한 실시양태에서, 생체외 조작은 항원이 면역계를 자극하도록 암 신생항원의 구조를 보존한다.
특정 실시양태에서, 암 백신은 조사 및 조작(예컨대, 냉동외과 동결) 중 하나 이상을 포함하는 생체외 처리에 의해 제조되고, 적어도 1종의 약물(시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 또는 이들의 조합)에 노출된다.
일부 경우에서, 암 백신은 UV 조사 및 냉동수술 동결을 포함하는 생체외 처리에 의해 제조되고, 저용량의 적어도 1종의 시토카인(예컨대, GM-CSF) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(예컨대, 사이클로포스파미드)에 노출된다. 한 실시양태에서, 냉동수술 동결은 약 -35 내지 약 -100℃ 범위의 온도, 예컨대 약 -40℃에서 수행된다. 한 실시양태에서, 냉동수술 동결은 단일 프로브를 사용하여 10분 이하의 총 조작 시간으로 수행될 수 있다. 한 실시양태에서, 암 백신은 GM-CSF(예컨대, 250 mg의 용량) 또는 사이클로포스파미드(예컨대, 200-300 mg/m2의 용량)의 저용량 용액에 현탁된다.
치료 조성물은 단일 투여로 필요한 대상체에게 투여되거나 투여되지 않을 수 있다. 치료 조성물의 다양한 성분은 대상체에게 공동으로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 예컨대, 체크포인트 억제제, 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물 및 생체외 처리된 암 백신은 대상체에게 공동으로 투여될 수 있다. 대안적으로, 각각의 체크포인트 억제제의 투여는, 예컨대 각각의 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물 및/또는 생체외 처리된 암 백신의 투여 전에, 투여와 공동으로 및/또는 투여 후에 수행될 수 있다. 각각의 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 투여는, 예컨대 각각의 체크포인트 억제제 및/또는 생체외 처리된 암 백신의 투여 전에, 투여와 공동으로 및/또는 투여 후에 수행될 수 있다. 생체외 처리된 암 백신의 투여는, 예컨대 각각의 체크포인트 억제제 및/또는 각각의 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 투여 전에, 투여와 공동으로 및/또는 투여 후에 수행될 수 있다.
한 실시양태에서, 시토카인 약물(예컨대, GM-CSF) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(예컨대, 사이클로포스파미드)은 암 백신접종 시점에 투여된다. 이는, 예컨대 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 현탁액에서 암 백신을 제조함으로써 달성될 수 있다.
한 실시양태에서, 시토카인 약물(예컨대, GM-CSF) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(예컨대, 사이클로포스파미드)은 암 백신접종 후 (예컨대, 피하 또는 경구) 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 시토카인 약물(예컨대, GM-CSF) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(예컨대, 사이클로포스파미드)은 암 백신접종 시 투여되고, 동일하거나 상이한 시토카인 약물(예컨대, 피하) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 추가 투여(예컨대, 경구)가 암 백신접종을 뒤따른다.
조절 T 림프구(TReg) 집단은 화학요법제인 사이클로포스파미드의 준임상 용량에 민감하다. 저용량의 사이클로포스파미드에서, 동물 모델의 순환하는 TReg는 감소하고 다른 백혈구 집단에는 거의 영향을 미치지 않는다. 사이클로포스파미드 또는 GM-CSF의 준세포독성 용량은 면역 향상 결과를 초래하지 않은 것으로 나타났다. 사이클로포스파미드 또는 GM-CSF가 진행성 암에 대한 활성 특이적 면역요법(예컨대, 암 백신) 연구의 여러 임상 시험에서 면역강화제로 사용되었지만, 저용량(일반적으로 250-300 mg/m2) 사이클로포스파미드 또는 GM-CSF는 전형적으로 백신 레지멘 3-4일 전에 투여된다. 여기서, 암 백신접종 시 사이클로포스파미드 또는 GM-CSF의 투여는 백신접종 시 T 세포 및 다른 면역 자극 세포의 동원을 촉진할 수 있고; 백신 요법 후, 동안 또는 후의 추가 투여는 초기 면역 반응을 꺽을 수 있는 TReg의 임의의 "반동"을 처리하기 위해 백신 요법 후 지속적이지만 제한된 레지멘을 실시할 수 있다.
특정 실시양태에서, 암 백신은 생체외 UV 조사, 저용량 사이클로포스파미드 또는 GM-CSF에 대한 노출, 및 암 조직 샘플의 온도 제한 냉동수술 동결에 의해 제조되어 (예컨대, 피내 또는 종양내) 주사 시 암 세포를 표적으로 하도록 면역계를 프라이밍할 수 있는 괴사성 및 세포자멸괴사성 세포 및 온전한 종양 관련된 항원의 개인 맞춤형 백신 용해물을 생성한다. 한 실시양태에서, 이러한 암 백신 용해물의 주사 후, 2종의 면역치료 약물(예컨대, PD-1 억제제 모노클로날 항체 니볼루맙 (또는 펨브롤리주맙) 및 항-CTLA-4 모노클로날 항체 이필리무맙)은 즉시, 바람직하게는 동일한 부위에 순차적으로 (예컨대, 피내 또는 종양내) 주사된다. 또한, 저용량 GM-CSF는 면역 반응을 연장하기 위해 소정의 시간(예컨대, 6주) 후에 투여될 수 있으며; 경구용 저용량 사이클로포스파미드는 면역 반응을 연장하기 위해 소정의 기간(예컨대, 6주) 후에 투여될 수 있다.
전이성 고형암을 치료하기 위한 하나의 예시적인 치료 조성물 및 치료 방법은 하기의 3가지 치료 성분 및 치료 레지멘을 수반한다:
(a)
a. 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성 및 세포자멸괴사성 암 세포의 개인 맞춤형 백신 용해물을 생성하여 우수한 면역 반응을 보장하고;
b. 암 세포로부터 방출되는 종양 관련된 항원 및 관련된 시토카인 및 다른 면역자극제의 완전한 보완물을 제공하며;
c. T 조절 세포의 억제 신호를 억제하는 과정을 시작하기 위해
UV 조사, 저용량 사이클로포스파미드 또는 GM-CSF, 및 온도 제한된 냉동수술 동결에 의한 생검 또는 바늘 흡인물로부터의 신선한 암 세포의 생체외 처리;
이어서
(b) 암 용해물 백신(자가유래), 및 상승적 또는 강화된 항암 효과를 일으키기 위해 상이한 경로를 표적으로 하는 상보적인 역할을 하는 2종의 체크포인트 억제제, 예컨대
a. T 조절 세포로부터의 억제 신호를 억제하고 항종양 세포독성 T 세포 반응을 연장하기 위한 CTLA-4 억제제, 및
b. T 세포 고갈을 역전시키고 암 신생항원을 "벗겨냄"으로써 항종양 활성을 강화하여 세포독성 T 세포의 항종양 활성을 촉진하면서 암 세포 항원을 수지상 세포 및 세포독성(킬러) T 세포에 노출시키기 위한 PD-1 억제제
의 순차적 피내 또는 종양내 주사;
이어서
(c) 면역 세포 동원을 연장하기 위해 저용량 사이클로포스파미드(예컨대, 경구) 또는 GM-CSF(예컨대, 피하)의 후속 투여.
이론에 구애됨이 없이, 암 용해물 백신 내에 함유된 암 신생항원 및 시토카인과 같은 면역자극제는 미성숙 수지상 세포 및 다른 면역 세포의 풍부한 공급원인 피부 주사 부위의 진피에서 또는 종양내에서 이용 가능할 수 있다. 이어서, 상주하는 미성숙 항원 제시 세포(APC) (예컨대, 수지상 세포), T 세포 및 주사 부위에 있는 다른 면역 세포는 암 특이적 항원 단백질을 인식하기 위해 활성화되도록 신생항원을 내재화할 수 있다. 활성화된 수지상 세포는 인근 림프절로 배출되고 암 특이적 신생항원을 표적으로 하는 T 세포를 활성화하고 다른 세포독성 T 림프구를 모집하여 정확한 항원 에피토프를 보유하는 신체 전반에 걸친 암 세포를 파괴함으로써 압스코팔(방관자) 효과를 자극할 수 있다. 이러한 방식으로, 수지상 세포는 세포독성 T 세포와 조합하여 세포 매개된 전신적 항종양 면역 반응을 개시할 수 있다. 세포 매개된 항원 특이적 면역 반응을 약화시키거나 중단시키는 것과 관련된 조절 T 림프구는 항-CTLA-4 모노클로날 항체 및 저용량 사이클로포스파미드 또는 GM-CSF에 의해 선택적으로 고갈될 수 있다. 약물의 피내 또는 종양내 주사는 전신 요법보다 더 적은 부작용을 유발한다.
치료 조성물은 암 치료에 효과적인 것으로 당업계에 공지된 하나 이상의 치료학적 유효량의 치료제 및/또는 생물학적 작용제, 즉 항암제, 또는 면역계 자극에 효과적인 것으로 당업계에 공지된 작용제, 즉 면역자극제 또는 면역조절제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 치료 조성물은 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 데 사용될 수 있다.
치료 조성물은 또한 하나 이상의 치료학적 유효량의 핵산 약물을 포함할 수 있다. 핵산 약물은, 예컨대 DNA, DNA 플라스미드, nDNA, mtDNA, gDNA, RNA, siRNA, miRNA, mRNA, piRNA, 안티센스 RNA, snRNA, snoRNA, vRNA 등일 수 있다. 예컨대, 핵산 약물은 DNA 플라스미드일 수 있다. 일부 경우에서, DNA 플라스미드는 GM-CSF, IL-12, IL-6, IL-4, IL-12, TNF, IFNy, IFNa, 및/또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 유전자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어질 수 있다. 핵산 약물은, 예컨대 세포의 치료 효과를 향상시키거나 환자에게 치료제를 제공하는 데 임상적 유용성을 가질 수 있다. 또 다른 경우에서, 핵산 약물은 마커 또는 내성 유전자로 기능할 수 있다. 뉴클레오티드 서열은 세포로부터 분비될 수 있거나 세포로부터 분비될 수 없는 유전자를 코딩할 수 있다. 핵산 약물은 유전자 및 유전자의 발현을 증가시키기 위한 프로모터 서열을 코딩할 수 있다.
치료 조성물은 또한 하나 이상의 치료학적 유효량의 톨 유사 수용체(TLR)를 포함할 수 있다. 톨 유사 수용체는 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12, TLR13, 및/또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 톨 유사 수용체는 TLR3일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 조성물은 제1 TLR 및 제2 TLR을 포함할 수 있다. 일부 경우에서, 제1 및 제2 TLR은 동일하고; 다른 경우에서, 이들은 상이하다. TLR은 약 0.01 내지 약 5 mg/m2의 농도로 전달될 수 있다.
당업자는 치료 조성물이 암 및/또는 대상체의 개별 측면, 예컨대 종양의 크기, 종양의 위치, 대상체, 약물 반응의 임상 증거 등에 따라 적응될 수 있음을 이해할 것이다.
치료 조성물은 전달제 또는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제"는 약제학적 투여에 적합한 용매, 분산 매질, 코팅제, 항세균제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 이러한 담체 또는 부형제는 이의 약리학적 활성을 파괴하지 않으며, 조성물의 치료량을 전달하기에 충분한 용량으로 투여될 때 비독성이다. 보충 활성 화합물이 또한 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 치료 조성물을 위한 제형에 혼입될 수 있다.
치료 조성물은 경구 또는 비경구, 예컨대 정맥내, 근육내, 피하, 종양내, 안와내, 피막내, 복강내, 직장내, 수조내, 맥관내, 피내(예컨대, 피부 또는 연조직을 통해); 예컨대, 각각 피부 패치 또는 경피 이온영동을 이용하여 피부를 통한 수동 또는 촉진 흡수에 의해; 예컨대, 종양을 공급하는 혈관으로 정맥내 또는 동맥내로 병리학적 병태의 부위에 투여함으로써; 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 투여 경로를 위해 제형화될 수 있다.
적합한 치료학적/약제학적 조성물을 제형화하는 방법은 당업계에 공지되어 있다(예컨대, 문헌[Troy, "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (21st Ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2006); Willig, "Drugs and the Pharmaceutical Sciences: a Series of Textbooks and Monographs" (M. Dekker, 1975)]을 참고하며; 둘 다 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 예컨대, 비경구, 피내 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기 성분을 포함할 수 있다: 주사용수, 식염수, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매와 같은 멸균 희석제; 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤과 같은 항세균제; 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨과 같은 항산화제; 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)과 같은 킬레이트제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 버퍼 및 염화나트륨 또는 덱스트로스와 같은 장성 조절제. pH 값은 염산 또는 수산화나트륨과 같은 산 또는 염기로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 앰플, 일회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱으로 만든 다회 용량 바이알에 동봉될 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료 조성물 및 이의 성분은 피내 또는 피하 투여용으로 제형화되고, 피내 또는 피하 주사될 수 있다. 예컨대, 치료 조성물의 성분은 피부 또는 연조직 투여와 같은 피내 투여용으로 제형화되고, 피부 또는 연조직을 통해 피내 주사될 수 있다.
치료 조성물 또는 치료 조성물의 다양한 성분(예컨대, 체크포인트 억제제, 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 암 백신, 핵산 약물, 및/또는 이들의 조합)은 연조직 전달을 위해 제형화될 수 있다. 예컨대, 치료 조성물 또는 치료 조성물의 다양한 성분은 주사 장치를 통해 피내 전달될 수 있다. 주사 장치는 프로브의 일부일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 프로브는 다양한 조작 방법을 위해 구성될 수 있다. 추가로, 프로브는 또한 본원에 기재된 방법을 조합하도록 구성될 수 있으며, 예컨대, 냉동프로브는 전기 펄스, 한제, 화학적 또는 생물학적 조작제, 및/또는 약물의 조성물을 투여하도록 구성될 수 있다.
양성 또는 암성 연조직에 투여되는 적어도 2종의 체크포인트 억제제와 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 조합은 정맥내로 투여되는 (시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물이 없는) 2종의 체크포인트 억제제의 조합보다 더 적은 부작용 및/또는 면역 관련된 유해 사례를 일으킨다. 양성 또는 암성 연조직에 전달되는 이러한 3개 초과의 면역 자극 약물의 조합은 마우스에서 중추 신경계를 포함하여 멀리 있는 전이성 종양 부위를 박멸할 수 있는 전신적 CD4+ 및 CD8+ T 세포 매개된 항종양 면역 반응을 촉발하기에 충분할 수 있다. 이 국소 조합 전략은 또한 항체의 전신적 전달과 반대로 후기 종양 재발을 방지하기 때문에 더 나은 CD8+ 기억 항종양 면역 반응을 일으킬 수 있다.
피부는 항암 백신의 전달을 위한 바람직한 관문이며, 정맥 주사 또는 수술적 종양내 조작 및 약물 조작에 대한 필요성 및 위험을 제거하는 편리한 주사 부위 역할을 하여 암 세포 용해물 및 애주번트가 안전하게 투여되게 한다. 문헌[Patel et al., "Next generation approaches for tumor vaccination." Chin Clin Oncol 6:19 (2017)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함된다. 피내 약물 주사는 전신 독성을 감소시키고 피부 미세환경에 약물을 격리함으로써 더 적은 부작용을 일으킬 수 있다(문헌[Marabelle et al., "Intratumoral Immunization: A New Paradigm for Cancer Therapy" Clin. Cancer Res. 20(7): 1747-56 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 피내 주사는 항원 제시 수지상 세포 및 이펙터 T 세포를 포함한 조밀하고 다양한 면역 세포 집단을 함유하는 해부학적 부위인 피부에 항원을 직접적으로 전달하며, 면역원성에 대해 주어진 양의 항원을 근육내 주사하는 것보다 더 큰 잠재력을 갖는다(문헌[Kenney et al., "Dose Sparing with Intradermal Injection of Influenza Vaccine" N Eng J Med 351, 2295-301 (2004); Patel et al., "Next generation approaches for tumor vaccination." Chin Clin Oncol 6:19 (2017)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 포함됨). 예컨대, 바실루스 칼메트-게린 백신 백신은 통상적으로 피내 주사된다.
암 용해물 생성물의 피내 투여는 림프절 이동 피부 수지상 세포(DC)의 5개의 서브세트(랑게르한스 세포, 랑게린, CD103-, CD103+, CD11b+, 및 CD11b-)에 의한 섭취를 강화한다(문헌[Vardam et al., "Langerhans Cells Orchestrate TFH-Dependent Humoral Immunity" J Invest Dermatol 137:1826-1828 (2017)]을 참고하며, 전체가 참조로 포함됨). 모집 및 활성화 후, 이러한 DC는 종양 관련된 항원(TAA)을 CD8+ T 세포의 경우 주요 조직적합성 복합체 1(MHC-1) 또는 CD4+ T 세포의 경우 MHC-II에 결합된 펩티드로 처리한 다음, 피부에서 배액 림프절로 이동하고, TAA를 동족 T 세포에 교차 제시하여 이펙터 T 세포의 프라이밍 및 확장 및 소포 중심 T 세포 분화의 유도를 자극한다. 문헌[Ruben et al., "In situ loading of skin dendritic cells with apoptotic bleb-derived antigens for the induction of tumor-directed immunity" Oncoimmunol 3; 7: e946360 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 따라서. 림프절의 면역 반응은 항원 인식(DC 및 T 림프구의 T 세포 수용체에 의한 MHC 분자의 맥락에서 TAA 제시)과 면역 활성화(세포독성 T 림프구를 생성하는 1형 헬퍼 T 세포 반응 뿐만 아니라 세포 매개된 세포사를 유도하기 위한 항원 특이적 항체를 생성하는 2형 헬퍼 T 세포 반응의 생성)의 조합에 의해 촉발된다(문헌[Dillman et al., "Randomized phase II trial of autologous dendritic cell vaccines versus autologous tumor cell vaccines in metastatic melanoma: 5-year follow up and additional analyses." J Immunother Cancer 6:19 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함됨). 이어서, 활성화된 항원 특이적 T 세포는 케모카인 구배 및 다른 염증 신호에 의해 안내될 수 있는 암 부위로 이동하여 암 세포 상의 MHC 분자의 존재 하에 T 림프구 상의 T 세포 수용체와 항원 사이의 상호 작용을 통해 종양 세포를 인식한다. 세포독성 T 세포는 퍼포린 및 그랜자임 B와 같은 효소를 방출하여 세포 괴사를 일으키고, 종양 세포에 대한 이러한 용해 효과는 더 많은 항원을 방출하여 "암-면역 사이클"를 다시 시작하는 양성 피드백 루프를 유발한다. 다른 항원의 방출은 또한 "항원 확산"으로도 지칭되는 확장된 반응을 유발한다. 문헌[Patel et al., "Next generation approaches for tumor vaccination." Chin Clin Oncol 6:19 (2017)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
피내 암 백신 투여는 또한, 수지상 세포 활성화와 조합하여, 외래 항원(병원체, TAA 등)에 대한 내구성 보호 적응 및 선천 면역을 부여하는 오래가는 기억 CD8C T 세포의 2개의 서브세트: (1) CD69 및 CD103을 구성적으로 발현하는 많은 비-림프 조직(피부, 위장관, 뇌 및 폐 포함)에서 보초를 서는 상주 기억 세포(Trm); 및 (2) 혈액과 비-림프 조직 사이를 순환하고 조직 귀소 수용체를 발현하는 이펙터-기억 세포(Tem)를 포함하여 정상 인간 피부에 상주하는 100만개 T 세포/cm2의 다수의 세포를 자극한다. 기억 CD8C T 세포의 제3 서브세트인 중앙 기억 세포(Tcm)는 혈액과 림프 조직 사이를 순환하며 CD62L 및 CCR7을 발현한다. 항원 재접종 시, 이러한 T 세포 모두가 활성화되고 증식하지만, Trm 세포는 최초이자 가장 강력한 국소 성벽으로서 Tcm, Te, B 세포 및 다른 면역 세포의 표적화된 개입을 초래하는 풍부한 이펙터 시토카인 및 케모카인(예컨대, IFN-g, 그랜자임 B)을 분비한다. 백신접종의 피내 경로는 국소적으로 및 백신접종되지 않은 피부에 축적되는 항원 특이적 Trm 세포의 생성을 자극할 수 있다. 문헌[Galvez-Cancino et al., "Vaccination-induced skin-resident memory CD8(+) T cells mediate strong protection against cutaneous melanoma" Oncoimmunology 7:e1442163 (2018)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
면역 자극 약물의 피부 주사는 혈액에서 고농도의 즉각적인 순환을 방지함으로써 전신 독성을 줄이고 더 적은 부작용을 일으킬 수 있다. 이 전달 경로는 또한 전신 주입보다 미세환경에서 훨씬 더 높은 농도의 면역자극 생성물을 생성하여 더 나은 효능을 강화한다. 다른 한편으로, 이러한 전달 경로는 또한 치료학적으로 효과적이도록 하는 데 필요한 투여되는 조성물의 양을 낮추는 것을 가능하게 한다. 예컨대, 진피에 적용된 암 용해물 백신은 항원의 5-10배 용량 감소에도 불구하고 근육 주사와 같은 다른 바늘 기반 백신과 동등하거나 우수한 강력한 면역치료 반응을 일으킨다. 문헌[Depelsenaire et al., "Colocalization of cell death with antigen deposition in skin enhances vaccine immunogenicity" J Invest Dermatol 134:2361-2370 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
암 백신의 전임상 피내(ID) 전달은 크고 다양한 암에서 안전하고 효과적인 것으로 입증되었다. 첸(Chen) 및 동료는 GM-CSF와 조합된 전체 세포 암 용해물 백신으로 주사된 마우스가 피내 DC를 자극하고 활성화하여 암 포식작용, 암 특이적 종양 항원의 제시, DC의 이동 및 다른 면역 세포의 자극을 초래한다는 것을 발견하였다. 문헌[Chen et al., "Leveraging Engineering of Cells for Drug Delivery" Acc Chem Res 51:668-77 (2018)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 뮤린 모델에서 항원 특이적 Trm 세포 자극 백신의 ID 투여는 순환하는 CD83 T 세포와 독립적인 흑색종 성장의 침윤 및 억제를 초래하였다. 문헌[Galvez-Cancino et al., "Vaccination-induced skin-resident memory CD8(+) T cells mediate strong protection against cutaneous melanoma" Oncoimmunology 7: e1442163 (2018)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 열 충격 단백질 단편 및 디프테리아 독소와 조합된 유방암 세포 용해물의 뮤린 주사는 유리한 체액성 및 세포성 면역 반응 및 방어적인 항종양 면역을 초래하였다. 문헌[Wang, et al., "Protective antitumor immunity induced by tumor cell lysates conjugated with diphtheria toxin and adjuvant epitope in mouse breast tumor models" Chin J Cancer 31:295-305 (2012)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 뮤린 모델에서 전체 결장암의 절반이 배큘로바이러스, CT26 결장암 용해물 및 세포독성 T 세포 에피토프 펩티드로 이루어진 암 백신으로 ID 면역화에 의해 박멸되었고; 항종양 효과는 CD8C T 세포의 종양 항원 특이적 반응과 상관관계가 있었다. 문헌[Kawahara, et al. "A tumor lysate is an effective vaccine antigen for the stimulation of CD4(+) T-cell function and subsequent induction of antitumor immunity mediated by CD8(+) T cells" Cancer Biol Ther 16:1616-25 (2015)]을 참고하며,그 전문이 참조로 본원에 포함된다. IL-2 및 GM-CSF와 조합된 자가 B 세포 림프종 세포막 단편의 개에서의 ID 주사는 유의미한 독성 없이 특정한 세포 매개된 면역 및 지연형 과민 반응을 일으켰다. 문헌[Henson et al., "Immunotherapy with autologous tumour antigen-coated microbeads (large multivalent immunogen), IL-2 and GM-CSF in dogs with spontaneous B-cell lymphoma" Vet Comp Oncol 9:95-105 (2011)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 조사된 GM-CSF 생성 암 세포로의 백신접종은 뇌에 종양이 이식된 마우스의 생존율을 증가시켰다. 문헌[Sampson et al., "Immunotherapy for Brain Tumors" J Clin Oncol 356:2450-56 (2017)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. IL-18 및 GMCSF를 생성하도록 형질감염된 조사된 루이스 폐암 세포주로의 백신접종은 뮤린 모델에서 세포독성 T 세포의 증식 및 연장된 생존을 포함하는 항암 반응을 일으켰다. 문헌[Tian et al., "Cellular immunotherapy using irradiated lung cancer cell vaccine co-expressing GM-CSF and IL-18 can induce significant antitumor effects" BMC Cancer 14:48 (2014)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
전임상 발견과 유사하게, 환자에서 ID 암 백신접종으로의 치료는 또한 다수의 암에서 안전하고 내약성이 우수하며 효과적인 것으로 입증되었다. 메로트라(Mehrotra) 등은 췌장암을 갖는 8명의 환자에게 Poly-ICLC와 HLA-A2 제한된 펩티드 hTERT, CEA 및 서바이빈으로 펄싱된 자가 DC 백신의 조합을 피내로 전달하였다. 문헌[Mehrotra et al., "Vaccination with poly(IC:LC) and peptide-pulsed autologous dendritic cells in patients with pancreatic cancer" J Hematol Oncol 10:82 (2017)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 치료는 내약성이 우수하였으며 피로 및/또는 자가 제한적 독감 유사 증상의 일반적인 증상이 있었다. 4명의 환자는 안정적인 질환을 경험한 반면, 4명의 환자는 질환이 진행되었으며; 중앙값 전체 생존은 7.7개월이었다. 백신접종 전후의 MHC 부류 I-사량체 분석에서 안정적인 질환을 갖는 3명의 환자에서 항원 특이적 T 세포의 효과적인 생성이 밝혀졌다. 자가 암 세포 용해물과 함께 로딩된 수지상 세포의 피내 주사로 상이한 부위에 전이성 암을 갖는 환자의 치료는 내약성이 우수하였으며 주사 부위의 발열, 무력증 및 통증과 같은 1등급 및 2등급 유해 사례로 제한되었다. 문헌[Alfaro et al., "Pilot clinical trial of type 1 dendritic cells loaded with autologous tumor lysates combined with GM-CSF, pegylated IFN, and cyclophosphamide for metastatic cancer patients" J Immunol 187:6130-42 (2011)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. BCG와 함께 다수의 흑색종 세포주로부터의 조사된 전체 세포를 사용한 피내 다가 백신접종 치료는 최소한의 유해 사례로 높은 단계 환자에서 19개월에 걸쳐 26%의 반응을 보였다. 문헌[Vilella et al., "Treatment of patients with progressive unresectable metastatic melanoma with a heterologous polyvalent melanoma whole cell vaccine" Int J Cancer 106:626-31 (2003)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 자가 합텐 변형된 흑색종 백신의 사용으로 폐 전이가 퇴행되었다. 문헌[Berd et al., "Induction of cell-mediated immunity to autologous melanoma cells and regression of metastases after treatment with a melanoma cell vaccine preceded by cyclophosphamide" Cancer Res 46: 2572-77 (1986)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 높은 단계 흑색종에서 다가 백신으로 치료 시 백신 요법 전에 전이가 (종종 여러 부위로) 완전히 절제된 경우 다른 치료와 비교할 때 5년 생존율이 개선되었다. 문헌[Vilella et al., "Treatment of patients with progressive unresectable metastatic melanoma with a heterologous polyvalent melanoma whole cell vaccine" Int J Cancer 106:626-31 (2003)]을 참고하며, 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
한 실시양태에서, 치료 조성물은 종양내 투여용으로 제형화되고 종양내 주사될 수 있다.
인간에서 면역 자극 약물의 종양내 주사는 정맥내 주사와 비교할 때 전신 면역요법의 유해 사례 비율을 상당히 낮출 수 있다. PD1/PD-L1(예컨대, 키트루다, 옵디보) 및 항-CTLA-4(예컨대, 여보이)와 같은 면역요법 약물 조합의 전신 투여는 유해 사례 비율이 높다. 종양내 주사는 많은 유해 사례를 피하고, 작용 메커니즘이 상이한 약물의 조합의 이용을 가능하게 한다.
동물 모델에서의 연구는 효능제 항체를 사용한 국소 공동자극이 전신적 항종양 효과를 유도하고 전신 치료로부터 예상되는 것보다 독성이 적은 T 세포 의존적 항종양 면역학적 기억을 유도함을 나타내었다. 종양 내 또는 근처에 주사하면 전신적 종양 효과를 일으키는 데 도움이 된다. 예컨대, 종양 내 또는 근처에 주사하면 전신 투여에 비해 종양 배액 림프절에 축적이 증가하고 Cmax(최대 혈청 농도)가 감소할 수 있다.
주사에 적합한 치료 조성물은 멸균 수용액(수용성인 경우), 분산액, 및 멸균 주사액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함할 수 있다. 정맥내 투여를 위한 적합한 담체는 생리 식염수, 정균수, Cremophor EL™(BASF, 뉴저지주 파시파니) 또는 포스페이트 완충된 식염수(PBS)를 포함한다. 조성물은 멸균되고 쉽게 주사할 수 있는 정도로 유체인 것이 바람직하다. 치료 조성물은 제조 및 보관 조건 하에서 안정해야 하고, 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는, 예컨대 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예컨대 레시틴과 같은 코팅의 사용, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
미생물 작용의 방지는 다양한 항세균제 및 항진균제, 예컨대 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에서, 등장화제, 예컨대 슈가, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 및 염화나트륨을 치료 조성물에 포함하는 것이 바람직하다. 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 치료 조성물에 포함시킴으로써 야기될 수 있다.
멸균 주사 가능한 용액은 필요에 따라 상기에 나열된 성분 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매에 필요한 양의 활성 화합물을 혼입한 다음 여과 멸균하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 기본 분산 매질 및 상기에 나열된 성분 중 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클에 혼입하여 제조된다. 멸균 주사 가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조이며, 이는 활성 성분과 이전에 멸균 여과된 용액으로부터의 임의의 추가 목적 성분의 분말을 생성한다. 일부 실시양태에서, 치료 조성물은 이식물 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제제와 같이 신체로부터의 급속한 제거에 대해 활성 화합물을 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다.
치료 조성물은 투여 설명서와 함께 용기, 팩, 카트리지 또는 디스펜서에 포함될 수 있다.
방법과 관련하여 용어 "투여하다" 또는 "투여"는 의사가 처방 및/또는 지시를 하는 행위 뿐만 아니라 환자가 처방 및/또는 지시를 받는 행위 및 환자가 조성물 또는 치료 단계를 실제로 취하는 행위를 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 종양 또는 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 종양 또는 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 i) 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제, ii) 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물, 및 iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성 암 세포를 생성하는 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체로부터 제조된 암 백신을 포함하고, 각각이 종양 또는 암을 치료하기에 치료학적으로 효과적인 양으로 존재하는 치료 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어질 수 있다. 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 임의적으로 함유할 수 있다. 예컨대, 투여되는 조성물은 본원에 기재된 치료 조성물일 수 있다.
적합한 면역 체크포인트 억제제, 적합한 시토카인 약물 또는 적합한 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 적합한 생체외 처리 방법에 의한 암 백신 및 이의 제제, 적합한 임의의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 치료 조성물, 종양 또는 암을 치료하기 위한 이들의 유효량, 및 다양한 투여 경로를 위한 치료 조성물의 제형의 측면에 관한 상기 모든 실시양태는 대상체에서 종양 또는 암을 치료하는 방법의 이러한 측면에 적용 가능하다.
일부 실시양태에서, 방법은 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체로부터 생체외 처리에 의해 암 백신을 생성하는 단계를 추가로 포함한다. 암 백신의 제조를 위한 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체의 생체외 처리는 치료 조성물의 측면에서 본원에 기술되었으며, 종양 또는 암을 치료하는 방법의 이러한 측면에 적용할 수 있다.
한 실시양태에서, 방법은 기계적, 효소적, 또는 당업자에게 공지된 다른 방법을 이용하여 생체외에서 종양 또는 암 검체로부터 세포 또는 세포 성분을 분리시키는 단계, 및 원심분리하고 조작과 같은 추가 조작 전에 완충된 식염수와 같은 멸균 유체에 세포를 재현탁하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 경우에서, 방법은 치료 조성물을 환자에게 피내, 종양내로 투여하는 단계를 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다. 일부 경우에서, 방법은 치료 조성물을 환자의 피부 또는 연조직에 투여하는 단계를 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다. 투여는 주사 장치를 사용하여 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 방법은 i) 각각 CD137, CD134, PD-1, KIR, LAG-3, PD-L1, PDL2, CTLA-4, B7.1, B7.2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, B7-H7, BTLA, LIGHT, HVEM, GAL9, TIM-3, TIGHT, VISTA, 2B4, CGEN-15049, CHK 1, CHK2, A2aR, TGF-β, PI3Kγ, GITR, ICOS, IDO, TLR, IL-2R, IL-10, PVRIG, CCRY, OX-40, CD160, CD20, CD52, CD47, CD73, CD27-CD70, 및 CD40으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역 체크포인트 분자의 억제제인 적어도 2종의 상이한 면역 체크포인트 억제제; ii) 적어도 1종의 시토카인 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성 암 세포를 생성하는 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체로부터 제조된 암 백신을 포함하는 조성물을 종양 또는 암을 치료하기에 효과적인 양으로 환자에게 투여하는 단계를 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 체크포인트 억제제는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 체크포인트 억제제는 CTLA-4 억제제 및 PD-L1 억제제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 i) 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제; ii) 에리트로포이에틴, G-CSF, GM-CSF, IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, TNF, 인터페론, 예컨대 INF-α2a, INF-α2b, INF-β, INF-γ, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 시토카인; 또는 아스파라기나제, 블레오마이신, 부술판, 카르보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, BCG, 클로람페니콜, 콜키신, 사이클로스포린, 다카르바진, 독소루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 로무스틴, 멜팔란, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 파클리탁셀, 프로카르바진, 리툭시맙, 테모졸로미드, 티테파, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 지도부딘, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성 암 세포를 생성하는 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포 또는 이의 유도체로부터 제조된 암 백신을 포함하는 조성물을 종양 또는 암을 치료하기에 충분한 양으로 환자에게 투여하는 단계를 포함하거나, 필수적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다. 한 실시양태에서, 조성물은 적어도 1종의 시토카인을 포함하고, 시토카인 중 적어도 하나는 GM-CSF이다. 한 실시양태에서, 조성물은 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함하고, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물 중 적어도 하나는 사이클로포스파미드이다.
상기에서 논의된 바와 같이, 치료 조성물은 단일 투여로 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있거나 투여되지 않을 수 있다. 치료 조성물 및/또는 치료 조성물의 다양한 성분의 투여 방법은 치료 조성물의 측면에서 본원에 기술되었으며, 종양 또는 암을 치료하는 방법의 이러한 측면에 적용 가능하다.
한 실시양태에서, 방법은 대상체에게 체크포인트 억제제, 시토카인 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 생체외 처리된 암 백신을 공동으로 투여하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 방법은 하기 단계를 포함한다:
i) 각각의 체크포인트 억제제를 투여하는 단계,
ii) i) 이전, 이와 공동으로, 및/또는 이후에 각각의 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 투여하는 단계, 및
iii) i) 또는 ii) 이전, 이와 공동으로, 및/또는 이후에 생체외 처리된 암 백신을 투여하는 단계.
한 실시양태에서, 방법은 암 백신접종 시점에 시토카인 약물(예컨대, GM-CSF) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(예컨대, 사이클로포스파미드)을 투여하는 단계를 포함한다. 이는, 예컨대 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 현탁액에서 암 백신을 제조함으로써 달성될 수 있다.
한 실시양태에서, 방법은 암 백신접종 후 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(예컨대, 사이클로포스파미드, 경구)을 투여하거나 시토카인 약물(예컨대, GM-CSF)을 투여하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 방법은 암 백신접종 시 시토카인 약물(예컨대, GM-CSF)을 투여하고, 암 백신접종 후 동일하거나 상이한 시토카인 약물을 (예컨대, 피내) 투여하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 방법은 암 백신접종 시 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(예컨대, 사이클로포스파미드)을 투여하고, 암 백신접종 후에 동일하거나 상이한 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 경우에서, 방법은 치료학적 유효량의 핵산 약물을 종양 또는 암에 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 경우에서, 방법은 치료 조성물의 투여 후, 시토카인 약물(예컨대, GM-CSF) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(예컨대, 사이클로포스파미드)을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 피하로 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 방법은 1) 생체외 UV 조사, 저용량 GM-CSF 또는 사이클로포스파미드에 대한 노출, 및 암 조직 샘플의 온도 제한 냉동수술 동결에 의해 암 백신을 제조하는 단계, 2) 암 백신 용해물을 대상체에게 (예컨대, 피내) 주사하는 단계, 3) 2종의 면역치료 약물(예컨대, PD-1 억제제 모노클로날 항체 펩브롤리주맙 (또는 니볼루맙) 및 항-CTLA-4 모노클로날 항체 이필리무맙)를 대상체에게 바람직하게는 동일한 부위에 (예컨대, 피내 또는 종양내) 주사하는 단계, 및 4) 저용량 GM-CSF(예컨대, 피하) 또는 저용량 사이클로포스파미드(예컨대, 경구)를 대상체에게 소정의 기간 동안(예컨대, 6주) 투여하는 단계를 포함한다.
상기에서 논의된 바와 같이, 치료 조성물 또는 이의 성분의 투여는 경구 또는 비경구, 예컨대 정맥내, 근육내, 피하, 종양내, 안와내, 피막내, 복강내, 직장내, 수조내, 혈관내, 피내 투여; 예컨대, 각각 피부 패치, 경피 이온영동 또는 코팅된 미세바늘을 사용하여 피부를 통한 수동 또는 촉진 흡수에 의한 투여; 예컨대, 종양을 공급하는 혈관으로 정맥내 또는 동맥내로 병리학적 병태의 부위에 투여; 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 경로를 통해 수행될 수 있다.
치료 조성물 또는 이의 성분은 원하는 결과를 달성하는 데 필요한 기간 동안 유효량, 용량으로 투여될 수 있다. 유효량은 하나 이상의 투여, 적용 또는 용량으로 투여될 수 있다. 치료 조성물의 치료학적 유효량(즉, 유효 용량)은 선택된 치료 조성물에 따라 달라진다. 조성물은 1일 1회 이상 내지 1주 1회 이상 투여될 수 있으며; 격일로 1회 투여를 포함한다. 숙련된 기술자는 질환 또는 장애의 중증도, 이전 치료, 대상체의 전반적인 건강 및/또는 연령, 및 존재하는 다른 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는 특정 인자가 대상체를 효과적으로 치료하는 데 필요한 용량 및 시간에 영향을 미칠 수 있음을 인식할 것이다. 또한, 본원에 기재된 치료 조성물의 치료학적 유효량으로 대상체를 치료하는 것은 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다.
일부 경우에서, 치료 조성물은 주사 장치를 사용하여 환자에게 투여된다. 주사 장치는 다수의 타인 또는 단일 타인을 포함할 수 있다. 조성물은 본원에 기재된 바와 같이 (상이한 목적을 제공하는) 프로브를 사용하여 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 이러한 1회 이상의 투여는, 예컨대 피하, 정맥내, 근육내, 종양내, 피내 또는 이들의 임의의 조합으로 본원에 기재된 것과 동일하거나 상이한 투여 방법일 수 있다.
일부 실시양태에서, 제1 조성물 (또는 이의 성분)은 종양내로 투여되고 제2 조성물 (또는 이의 성분)은 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 조성물은 동시에, 순차적으로 또는 일련의 치료로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 조성물은 동일하거나, 상이하거나, 부분적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 치료 방법은 2회 이상의 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 투여는 적어도 2종의 체크포인트 억제제(예컨대, PD-1 억제제 및 CTLA-4 억제제), 적어도 1종의 시토카인 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 생체외 조작 후의 암 세포 백신의 피내 투여이다.
투여 레지멘은 원하는 치료 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 예컨대, 여러 분할 용량을 매일 투여하거나 용량을 치료 상황의 요구 사항에 따라 비례적으로 줄일 수 있다. 당업자는 본원에 개시된 새로운 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 대상체에게 투여하기에 적합한 용량 및 투여 레지멘을 알고 있을 것이다(예컨대, 그 전문이 참조로 본원에 포함되는 문헌[Physicians' Desk Reference 2008 (62nd Ed., Thomson Reuters, 2008)]을 참고한다). 예컨대, 치료 화합물의 용량, 독성 및 치료 효능은, 예컨대 LD50(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에 치료학적으로 효과적인 용량)을 결정하기 위해 세포 배양 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 사이의 용량 비율이 치료 지수이며, LD50/ED50 비율로 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 화합물이 사용될 수 있지만, 감염되지 않은 세포에 대한 잠재적 손상을 최소화하여 부작용을 줄이기 위해 병든 조직 부위에 이러한 화합물을 표적화하는 전달 시스템을 설계하는 데 주의를 기울여야 한다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에게 사용하기 위한 용량 범위를 공식화하는 데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 용량은 바람직하게는 독성이 거의 또는 전혀 없는 ED50을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있다. 용량은 사용된 투여 형태 및 활용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 변할 수 있다. 치료 방법에 사용되는 임의의 화합물에 대해, 치료학적 유효량은 초기에 세포 배양 검정으로부터 추정될 수 있다. 용량은 세포 배양에서 결정된 IC50(즉, 증상의 최대 억제의 절반을 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하기 위해 동물 모델에서 공식화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에서 유용한 용량을 보다 정확하게 결정하는 데 사용될 수 있다. 혈장 내 수준은, 예컨대 고성능 액체 크로마토그래피로 측정될 수 있다.
조성물은 단일 용량으로 투여될 수 있거나 1회 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 면역 체크포인트 억제제, 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물 및 암 백신에 대한 용량 범위는 치료 조성물의 측면에서 본원에서 논의되었으며 대상체에서 종양 또는 암을 치료하는 방법의 이러한 측면에서 적용 가능하다.
일부 실시양태에서, 조성물은 약 1.0 ml 미만의 부피로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 15 ml의 부피로 투여된다.
일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제의 용량은 대상체의 체중을 기준으로 측정할 때 약 0.01 내지 약 10 mg/kg, 예컨대 약 0.05 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 내지 약 5 mg/kg, 약 0.1 내지 약 3 mg/kg, 약 0.1 내지 약 2 mg/kg, 약 0.1 내지 약 1 mg/kg, 또는 약 0.5 내지 약 1 mg/kg의 범위일 수 있다.
일부 실시양태에서, 시토카인 약물의 용량은 대상체의 체중을 기준으로 측정할 때 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 예컨대 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 2 내지 약 500 mg/kg, 약 2 내지 약 100 mg/kg, 약 2 내지 약 50 mg/kg, 또는 약 2 내지 약 10 mg/kg의 범위일 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 용량은 대상체의 체중을 기준으로 측정할 때 약 1 μg/kg 내지 약 10 mg/kg, 예컨대 약 1 μg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 2 μg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 2 μg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 2 μg/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 2 μg/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 2 μg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 2 내지 약 500 μg/kg, 약 2 내지 약 100 μg/kg, 약 2 내지 약 50 μg/kg, 또는 약 2 내지 약 10 μg/kg의 범위일 수 있다.
일부 경우에서, 치료 조성물에 함유된 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 약 0.1 내지 약 1000 mg/m2, 예컨대 약 10 내지 약 600 mg/m2 범위의 용량으로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 치료 조성물에 함유된 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 저용량, 예컨대 약 500 mg/m2 미만, 약 400 mg/m2 미만, 또는 약 300 mg/m2 미만으로 투여된다.
한 실시양태에서, 각각의 투여에서 치료 조성물에 함유된 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 용량은 종래의 투여 레지멘 후 이의 최대 허용 용량의 약 0.25% 내지 약 75%이다. 예컨대, 치료 조성물에 함유된 시토카인 약물 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물은 투여당 용량이 최대 허용 용량의 약 1%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 또는 약 75%인 저용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 조성물의 연조직 투여는 동일한 조성물의 기존 IV 투여와 비교할 때 더 적은 부작용 및/또는 면역 관련된 유해 사례를 일으킨다. 기존 IV 투여의 부작용 및 면역 관련된 유해 사례는 위장, 호흡기, 신경계, 내분비, 피부, 피로, 신장 및 간에 대한 영향을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 조성물의 투여는 생체외 처리된 암 백신 없이 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제 및 시토카인 약물(들) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(들)을 포함하는 동일한 치료 조성물의 투여와 비교할 때, 또는 시토카인 약물(들) 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물(들) 없이 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제 및 생체외 처리된 암 백신을 포함하는 동일한 치료 조성물의 투여와 비교할 때 더 적은 유해 부작용 및/또는 면역 관련된 유해 사례를 일으킨다.
일부 경우에서, 방법은 조성물을 투여하기 전에 연조직 투여를 위한 프로브의 위치를 시험하는 단계를 추가로 포함한다. 프로브 위치의 시험은 프로브를 통한 시험 주사 투여 및 시험 주사 투여 동안 연조직 압력 측정을 포함할 수 있다. 일부 경우에서, 방법은 주변 종양 조직의 압력과 비교하여 시험 주사 동안 연조직 압력의 증가 또는 감소가 검출될 때 프로브를 재배치하는 단계를 포함한다. 예컨대, 증가된 압력은 프로브가 흉터 조직 내에 있음을 나타낼 수 있고 감소된 압력은 프로브가 혈관 내에 있음을 나타낼 수 있다.
치료하는 동안 숙련된 기술자는 치료 프로토콜을 계획, 목표 지정, 배치, 전달, 모니터링, 조정, 이미지화 및/또는 시험하기 위해 시스템, 예컨대 컴퓨터 시스템, 계산 유닛, 소프트웨어 및/또는 알고리즘을 사용할 수 있다. 숙련된 기술자는 각각의 주사 방법이 조정될 수 있고 주사를 제어하고 설계하기 위해 알고리즘을 사용할 수 있는 많은 파라미터 및 변수를 포함한다는 것을 이해할 것이다. 당업계에 공지된 임의의 알고리즘이 본원에 기재된 방법에 이용될 수 있다. 조작 기술에 사용하기 위한 컴퓨터 시스템, 계산 유닛, 소프트웨어 및/또는 알고리즘의 예는 당업계에 공지되어 있다.
이용된 조작/조사 방법에 따라, 생체외 조작/조사 단계는 당업계에 공지된 조작/조사 기술 및 시스템에 의해 수행될 수 있다. 하기의 논의는 다양한 조작 방법 및 장치의 비제한적인 예를 제공한다.
예컨대, 냉동수술 동결은 PCT 출원 공보 번호 WO 2004/086936 및 WO 2008/142686; 미국 특허 번호 6,074,412; 6,579,287; 6,648,880; 6,875,209; 7,220,257; 및 7,001,378(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다. 예시적인 장치는 Endocare™ CryoCare® 시리즈, 예컨대 CryoCare™ 및 CryoCare CN2(HealthTronics, Inc., 텍사스주 오스틴); CryoCor™ 심장 냉동절제 시스템(CryoCor Inc.); Arctic Front™ 심장 냉동절제 카테터 시스템(Medtronic, 미네소타주 미니애폴리스); Cryo Painblocker™(Epi-Med, 텍사스주 달라스)을 포함한다.
고주파(RF) 조작은 미국 특허 번호 5,246,438; 5,540,681; 5,573,533; 5,693,078; 6,932,814; 및 8,152,801(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
마이크로파 조작은 미국 특허 번호 6,325,796; 6,471,696; 7,160,292; 7,226,446; 및 7,301,131; 및 미국 출원 공개 번호 US 2003/0065317(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
레이저, 광 또는 플라즈마 조작은 미국 특허 번호 4,785,806; 5,231,047; 5,487,740; 6,132,424; 8,088,126; 9,204,918; 및 10,023,858; 및 미국 출원 공개 번호 US 2007/0129712(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
초음파 조작은 미국 특허 번호 5,342,292; 6,821,274; 7,670,335; 및 8,974,446; 및 미국 출원 공개 번호 US 2006/0052706 및 US 2009/00184(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
고강도 집중 초음파(HIFU) 조작은 미국 특허 번호 6,488,639; 6,936,046; 7,311,701; 및 7,706,882; 및 미국 출원 공개 번호 US 2008/0039746(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
스팀 조작은 미국 특허 번호 6,813,520 및 9,345,532; 및 미국 출원 공개 번호 US 2013/0178910(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
가역적 전기천공(RE) 조작은 미국 출원 공개 번호 US 2010/0023004 및 US 2012/0109122(전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
비가역적 전기천공법(IRE) 조작은 미국 특허 번호 7,655,004 및 8,048,067; PCT 출원 공개 번호 WO2012071526; 및 미국 출원 공개 번호 US 2012/0109122 및 US 2013/0253415(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
고주파 전기적 막 파괴 조작은 미국 특허 출원 US 2015/0150618, PCT 출원 공개 번호 WO 2015/085162, WO 2016/123608, WO 2016/127162, WO 2016/126905, WO 2016/126778, 및 WO 2016/126811(전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
초단 전기 펄스를 사용한 조작 방법은 미국 특허 번호 8,926,606; 및 미국 출원 공개 번호 US 2006/0056480, US 2010/0261994, 및 US 2018/015414(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다. 예시적인 장치는 Nano-Pulse StimulationTM 장치(Pulse Biosciences, Inc., 캘리포니아주 헤이워드)를 포함한다.
광역학 요법을 이용한 조작 방법은 미국 특허 번호 6,811,562; 7,996,078; 및 8,057,418(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
비-열적 충격파를 사용한 조작 방법은 미국 특허 번호 5,524,620 및 8,556,813; 미국 출원 공개 번호 US 2016/0008016; 및 일본 출원 번호 JP2009061083(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
화학물질 및/또는 생물제제를 사용한 조작은 미국 특허 번호 6,428,968; PCT 출원 공개 번호 WO 2004/035110; WO 2006/095330, WO 2007/093036, 및 WO 2014/070820; 및 미국 출원 공개 번호 US 2004/0002647, US 2005/0255039, US 2009/0192505, US 2010/0178684, US 2010/0145304, US 2012/0253192; US 2012/0046656, US 2016/0310200, 및 US 2016/0074626(모두 전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 방법 및 장치로 수행될 수 있다.
숙련된 기술자는 상기 조작 기술 및 장치의 임의의 파라미터가 생체외 사용을 위해 필요에 따라 변형되고 원하는 조작을 달성하기 위해 조합될 수 있음을 인식할 것이다. 예컨대, 냉동수술 동결을 RF-EMB 조작과 조합하는 것이 바람직한 경우 방법 및 장치를 변형하거나 조합할 수 있다.
냉동수술 동결, 전기천공 및/또는 RF-EMB를 조합할 수 있는 다양한 장치에 관한 추가 설명은 PCT 출원 공개 번호 WO 2017/123981(전체가 참조로 본원에 포함됨)에 자세히 설명되어 있다. 냉동프로브 및/또는 전극으로서 다목적 프로브를 사용하는 것에 관한 보다 상세한 설명은 또한 WO 2017/123981에 기재되어 있다.
상기에서 논의된 바와 같이, 생체외 조사 또는 방사선을 수행하기 위한 기술 또는 시스템은 레이저 방사선(예컨대, 자외선 또는 근적외선 레이저 방사선), X선 방사선 또는 감마 방사선에 대해 당업계에 널리 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "핵산 약물" 또는 "치료 핵산"은 원하는 치료 효과를 달성하기 위해 사용되는 뉴클레오티드, 뉴클레오시드, 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 예시적인 핵산 약물은, 예컨대 DNA, nDNA, mtDNA, gDNA, RNA, siRNA, miRNA, mRNA, piRNA, 안티센스 RNA, snRNA, snoRNA, vRNA 등을 포함한다. 예컨대, 핵산 약물은 DNA 플라스미드일 수 있다.
용어 "대상체"는 본 발명의 방법에 따른 치료가 제공되는 동물, 인간 또는 비-인간을 설명하기 위해 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된다. 수의학적 적용은 본 발명에 의해 명백히 예상된다. 이 용어는 조류, 파충류, 양서류 및 포유류, 예컨대 인간, 다른 영장류, 돼지, 마우스 및 래트와 같은 설치류, 토끼, 기니피그, 햄스터, 소, 말, 고양이, 개, 양 및 염소를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 바람직한 대상체는 인간, 농장 동물, 고양이 및 개와 같은 집에서 기르는 애완동물이다. 용어 "치료"는 병태, 예컨대 암을 앓고 있는 환자의 발병을 지연시키거나, 억제하거나, 영향을 완화하거나, 생명을 연장하는 것을 나타내기 위해 본원에서 사용된다.
"유효량"은 유익한 또는 원하는 결과를 초래하기에 충분한 양이다. 예컨대, 치료학적 유효량은 원하는 치료 효과를 달성하거나 원하는 생리학적 반응을 촉진하는 양이다. 본 발명에서 사용하기 위한 본원에 기재된 조성물의 유효량은, 예컨대 종양 및/또는 종양 세포에 대한 면역 반응을 향상시키고, 암을 앓고 있거나 암에 걸릴 위험이 있는 환자에 대한 결과를 개선하고, 다른 암 치료의 결과를 개선하는 양을 포함한다. 임상 반응을 갖는 암 환자의 경우, 유효량은 질환의 진행을 감소, 개선, 안정화, 역전 또는 지연시키기에 충분하거나 질환의 병리학적 결과의 감소의 다른 양이다. 유효량은 하나 이상의 투여, 적용 또는 용량으로 투여될 수 있다. 치료 조성물의 치료학적 유효량(즉, 유효 용량)은 선택된 치료 조성물에 따라 달라진다. 치료 조성물의 치료학적 유효량은 선택된 투여 방법에 따라 달라진다.
일부 경우에서, 조성물의 종양내 투여는 정맥내 투여(예컨대, 기존 IV 투여)와 비교할 때 조성물의 치료학적 유효량을 감소시킨다. 숙련된 기술자는 질환 또는 장애의 중증도, 이전 치료, 대상체의 전반적인 건강 및/또는 연령, 및 존재하는 다른 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는 특정 인자가 대상체를 효과적으로 치료하는 데 필요한 용량 및 시간에 영향을 미칠 수 있음을 인식할 것이다. 또한, 본원에 기재된 치료 조성물의 치료학적 유효량으로 대상체를 치료하는 것은 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다.
"세포주" 또는 "세포 배양물"은 시험관내 또는 고등 진핵 세포에서 유지되는 배양물을 지칭한다. 자손은 모 세포와 (형태학적으로, 유전자형으로, 또는 표현형으로) 동일할 수 있음을 이해해야 한다.
단수형 또는 복수형으로 사용되는 용어 "종양 세포" 또는 "암성 세포"는 숙주 유기체의 병리학적 세포로의 악성 형질전환을 지칭한다. 잘 정립된 기술, 특히 조직화학적 검사에 의해 원발성 암 세포(즉, 수득된 악성 형질전환 부위 근처의 세포)는 비-암성 세포와 쉽게 구별된다. 본원에서 정의된 암은 원발성 암 세포 뿐만 아니라 암 세포 조상으로부터 유래된 모든 세포를 포함한다. 이는 암 세포로부터 유래된 전이된 암 세포 및 시험관내 배양물 및 세포주를 포함한다.
본원에 기재된 치료 방법은 단독으로 또는 환자에서 암을 치료하기 위한 다른 방법과 조합하여 이용될 수 있다. 따라서, 일부 경우에서, 본원에 기재된 방법은 (예컨대, 종양의 일부를 제거하기 위한) 수술, 화학요법, 면역요법, 유전자 요법 및/또는 방사선 요법을 이용하여 환자를 치료하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 본원에 기재된 조성물 및 방법은, 예컨대 수술, 화학요법, 면역요법, 유전자 요법 및/또는 방사선 요법 전, 동안 및/또는 후에 임의의 시점에서 환자에게 투여될 수 있다.
본원에 기재된 치료 조성물 및 치료 방법은 대상체에서 암을 치료하는 데 특히 유용하다. 용어 "암"은 자율적 성장 능력을 갖는 세포를 지칭한다. 이러한 세포의 예는 신속하게 증식하는 세포 성장을 특징으로 하는 비정상 상태 또는 병태를 갖는 세포를 포함한다. 이 용어는 암 성장, 예컨대 종양; 조직병리학적 유형 또는 침습 단계에 관계없이 전이성 조직 및 악성으로 변형된 세포, 조직 또는 기관을 포함하는 것을 의미한다. 또한, 호흡기, 심혈관, 신장, 생식, 혈액, 신경, 간, 위장 및 내분비와 같은 다양한 기관계의 악성종양 뿐만 아니라; 다수의 결장암, 신장 세포 암종, 전립선암 및/또는 고환 종양, 폐의 비-소세포 암종, 소장암 및 식도암과 같은 악성종양을 포함하는 선암종이 포함된다.
본원에 기재된 치료 조성물 및 치료 방법은 대상체에서 자연적으로 발생하는 암을 치료하기 위해 이용될 수 있다. "자연적으로 발생하는" 암은 암 세포를 대상체에 이식하여 실험적으로 유발되지 않은 임의의 암을 포함하며, 예컨대 자발적으로 발생하는 암, 환자가 발암물질(들)에 노출됨으로써 발생되는 암, 트랜스제닉 발암 유전자의 삽입 또는 종양 억제인자 유전자의 녹아웃으로부터 발생되는 암, 및 바이러스 감염과 같은 감염으로 유발되는 암을 포함한다.
본원에 기재된 치료 조성물 및 치료 방법으로 치료될 암은 또한 암종, 선암종, 육종 및 혈액암을 포함한다. 용어 "암종"은 당업계에서 인식되고 있으며 상피 또는 내분비 조직의 악성종양을 지칭한다. 이 용어는 또한 암종 및 육종 조직으로 구성된 악성 종양을 포함하는 암육종을 포함한다. "선암종"은 선 조직으로부터 유래되거나 종양 세포가 인식할 수 있는 선 구조를 형성하는 암종을 지칭한다. 용어 "육종"은 당업계에서 인식되고 있으며 중간엽 유래의 악성 종양을 지칭한다. 용어 "림프종"은 혈액학적 유래의 악성 종양을 지칭한다.
본원에 기재된 치료 방법 및 치료 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 암 또는 종양은, 예컨대 위, 결장, 직장, 입/인두, 식도, 후두, 간, 췌장, 폐, 유방, 자궁경부, 자궁체부, 난소, 전립선, 고환, 방광, 피부, 뼈, 신장, 뇌/중추신경계, 머리, 목, 갑상선, 인후 및 혈액의 암 또는 종양; 특히 육종, 융모막암종 및 림프종을 포함한다. 치료될 예시적인 종양 또는 암은 전립선, 췌장, 피부, 결장, 폐 및 방광의 암 또는 종양이다.
전이성 종양 또는 암(단계 IV)은 본원에 기재된 치료 방법 및 약제학적 조성물을 사용하여 치료될 수 있다. 예컨대, 대상체 신체의 한 부위에 위치된 종양 또는 암(예컨대, 원발성 종양)에 대해 본원에 기재된 치료 방법을 수행하는 것은 종양 또는 암에 대한 대상체의 면역 방어를 자극할 수 있고, 대상체의 신체의 또 다른 부위(들)에서 동일한 또는 심지어 상이한 유형의 종양 또는 암(예컨대, 전이성 종양)에 대한 면역 공격을 유발할 수 있다. 전이성 종양 또는 암은 뇌, 전립선, 결장, 폐, 유방, 뼈, 복막, 부신, 근육 및 간 기원을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다수의 원발성 종양 또는 암 유형으로부터 발생할 수 있다. 전이는, 예컨대 원발성 종양으로부터 떨어져 나온 종양 세포가 혈관 내피에 부착하고 주변 조직으로 침투하고 성장하여 원발성 종양과 분리된 부위에서 독립적인 종양을 형성할 때 발생한다.
숙련된 기술자는 본원에 기재된 치료 방법 및 치료 조성물이 또한 암 또는 종양의 다른 단계, 예컨대 제자리암종(단계 0), 국소화된 초기 단계 암(단계 I) 및 더 큰 종양 또는 암(단계 II 및 단계 III)을 치료하는 데 사용될 수 있음을 이해할 것이다.
숙련된 기술자는 본원에 기재된 치료 조성물 및 치료 방법이 비-암성 성장, 예컨대 비-암성 종양을 치료하는 데 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 예시적인 비-암성 성장은, 예컨대 양성 종양, 선종, 선근상피종, 관 또는 소엽 증식, 섬유선종, 섬유종, 섬유증 및 단순 낭종, 선증 종양, 혈종, 과오종, 관내 유두종, 유두종, 과립 세포 종양, 혈관종, 지방종, 수막종, 근종, 모반, 골연골종, 엽상 종양, 신경종(예컨대, 청신경종, 신경섬유종 및 화농성 육아종), 또는 사마귀(예컨대, 족저 사마귀, 생식기 사마귀, 편평 사마귀, 손발톱주위 사마귀 및 사상 사마귀)를 포함한다.
숙련된 기술자는 대상체가 의사 (또는 진단받는 대상체에 적합한 경우 수의사)에 의해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예컨대 환자의 병력을 평가, 진단 시험을 수행, 및/또는 이미지화 기술을 이용하여 본원에 기재된 병태, 예컨대 암을 앓거나 위험에 처한 것으로 진단될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
본원에 기재된 바와 같이, 환자에서 종양을 치료하는 하나의 예시적인 방법은 (i) 생검 또는 수술적 절제에 의해 환자 내의 종양 또는 암의 대표적인 샘플을 수득하는 단계; (ii) 종양 또는 암의 적어도 일부를 생체외 조작/방사선 조사하는 단계; (iii) 종양 또는 암에 대해 본원에 기재된 치료 조성물(예컨대, 자가 생체외 조작된 암 조성물과 함께 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제 및 적어도 1종의 시토카인 또는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함하는 치료 조성물)을 연조직 투여하는 단계; 및 (iv) 임의적으로 치료학적 유효량의 핵산 약물을 종양에 투여하는 단계를 포함한다.
또한, 본원에 기재된 치료 조성물 중 하나 이상을 포함하는 키트가 제공된다. 키트는 일반적으로 하기의 주요 요소를 포함한다: 패키징, 상기에서 기재된 바와 같은 결합 조성물을 포함하는 시약, 임의적으로 대조군 및 설명서. 패키징은 상기 결합 조성물을 함유하는 바이알 (또는 다수의 바이알), 대조군을 함유하는 바이알 (또는 다수의 바이알) 및/또는 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 설명서를 보유하기 위한 상자형 구조일 수 있다. 일부 경우에서, 패키징은 체계적인 설명서에 따라 디지털 장치에 의해 제어될 수 있는 카트리지를 함유한다. 당업자는 개체의 필요에 맞게 패키징을 쉽게 변형할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 키트는 적어도 하나(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5개, 또는 그 초과)의 본원에 기재된 조성물을 함유하는 적어도 하나(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5개, 또는 그 초과)의 조성물, 및 적어도 하나(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5개, 또는 그 초과)의 다른 조성물을 암 치료에 효과적인 것으로 당업계에 공지된 치료제 또는 생물학적 작용제를 함유하는 별도의 바이알에 포함할 수 있다.
본원에 제공된 바와 같은 조성물 및 키트는 상기 기재된 임의의 방법(예컨대, 치료 방법)에 따라 사용될 수 있다. 예컨대, 조성물 및 키트를 사용하여 암 또는 종양을 치료할 수 있다. 당업자는 본원에 제공된 조성물 및 키트에 대한 다른 적합한 용도를 알고 있을 것이며, 이러한 용도를 위해 조성물 및 키트를 사용할 수 있을 것이다.
실시예
하기 실시예는 단지 예시를 위한 것이며 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하려는 의도가 아니다.
실시예 1 - 치료 레지멘
시토카인 약물을 사용한 치료 레지멘
시토카인 약물을 포함하는 각각의 치료 사이클은 하기의 예시적인 치료를 포함한다:
자가 암 백신: 250 mg/m2의 농도로 GM-CSF(류킨)에 희석된 최소 100만개의 용해된 암 세포를 함유하는 UV 조사된 자가 암 용해물 백신의 피내(상완) 또는 종양내 주사, 총 1.0 ml.
PD-1 억제제 항체 펨브롤리주맙(키트루다): 동일한 부위에 피내 또는 종양내 주사, 0.5 ml.
항-CTLA-4 항체 이필리무맙(여보이): 동일한 부위에 피내 또는 종양내 주사, 0.5 ml.
GM-CSF: 피하 투여, 총 약 6주 동안 매일 250 mg.
필요에 따라 1회 또는 2회의 추가 치료 사이클을 취할 수 있다.
세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 사용한 치료 레지멘
세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함하는 각각의 치료 사이클은 하기의 예시적인 치료를 포함한다:
자가 암 백신: 250 mg/m2의 농도로 사이클로포스파미드(시톡산)에 희석된 최소 100만개의 용해된 암 세포를 함유하는 UV 조사된 자가 암 용해물 백신의 피내(상완) 또는 종양내 주사, 총 1.0 ml.
PD-1 억제제 항체 니볼루맙(옵디보): 동일한 부위에 피부내 또는 종양내 주사, 0.5 ml.
항-CTLA-4 항체 이필리무맙(여보이): 동일한 부위에 피내 또는 종양내 주사, 0.5 ml.
사이클로포스파미드: 경구 투여, 25 mg 1일 2회 또는 50 mg 1일 1회 (총 약 6주 동안 치료 후 제1일에 시작하여 2주 투여, 2주 휴약, 이어서 2주 다시 투여).
필요에 따라 1회 또는 2회의 추가 치료 사이클을 취할 수 있다.
실시예 2 - 자가 암 용해물 백신의 제조
대표적인 종양 조직 검체(예컨대, 생검) 및 세침 세포 흡인물은 일상적인 절차에 따라 국소 치료 의사에 의해 수득되며, 식염수에 담그고, 멸균 용기에 밀봉한다.
모든 암 용해물 백신 생성 절차는 우수 제조관리 기준(GMP)에 따라 수행된다. 각각의 환자 샘플에 대해 일상적인 취급 방법이 이용된다(예컨대, 실험실 검체의 배송, 수령 및 확인, 요청 요구 사항 처리, 유해 폐기물 취급 등에 표준 운영 절차가 적용됨).
멸균 조제실에서 하기 처리 단계가 수행된다:
조직 검체에서 유체를 따라내고 검사하여 암의 존재 및 범위를 결정한다. 이어서, 멸균 메스로 조직을 절개하여 (절개에 의해 비-암성 조직의 대부분을 제거함으로써) 암의 양을 최대화하고, 암성 및 비-암성 세포의 상대적 백분율을 추정하고 기록한다. 이어서, 조직을 잘게 다지고, 소량을 시험관에 넣고, 30초 동안 볼텍싱한다. 이러한 단계는 전체 검체를 포괄하도록 반복된다. 이어서, 조직을 시험관에서 10 mg 분취량(대략적인 중량)으로 나누어 각각 적어도 100만개의 암 세포의 존재를 보장한다.
세침 흡인물을 광학 현미경으로 신속하게 검사하고, 암성 및 비-암성 세포의 상대적 백분율을 추정하고 기록한다. 이어서, 흡인물을 1분 동안 1000 rpm에서 부드럽게 원심분리하여 온전한 세포의 펠릿을 생성하고, 상청액을 따라내고, 펠릿을 시험관에 10 mg 분취량(대략적인 중량)으로 나누어 적어도 100만개의 암 세포의 존재를 보장한다.
실시예 1의 치료 레지멘에 따라, 각각의 분취물은 치료 레지멘이 시토카인 약물을 포함하는 경우 GM-CSF(0.9% 멸균 염화나트륨 중)로 희석하거나, 치료 레지멘이 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함하는 경우 사이클로포스파미드(2% 농도로 재구성됨(20 mg/ml))로 희석된다.
이어서, 이 희석된 분취물을 스트라타링커 UV 크로스링커 1800(Stratalinker UV Crosslinker 1800) (Stratagene)을 사용하여 300 mJ/cm2 UV 조사로 괴사(면역원성 세포사)를 유도하도록 처리하고, 37℃에서 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이션하여 세포자멸괴사를 진행시킨다. 이어서, 반복적인 동결(-40℃ 드라이아이스/에탄올조) 및 해동(37℃ 수조) 사이클의 2회의 사이클에 의해 괴사를 유도한다. 제3 사이클에서 분취물은 드라이아이스에서 냉동 상태로 유지되고, 치료 의사에게 다시 배송되며, (실온으로의) 최종 해동은 면역치료 약제와 조합하여 환자 주사 직전에 수행된다.
실시예 3 - 백신 및 약물 전달
종양내 주사
작업자는 바이알 내용물(주사 직전에 미리 해동하여 실온이 되게 한 자가 암 백신; 총 1.0 ml)을 18 게이지, 1.5인치 드로잉-업 바늘이 장착된 멸균 주사기로 끌어들인다. 이어서, 작업자는 18 게이지, 20 cm Chiba® 생검 바늘(Cook Medical, Inc., 인디아나주 블루밍턴)을 주사기에 부착한다.
작업자는 미리 결정된 위치에 바늘 끝이 도달할 때까지 이미징 안내 하에 바늘을 종양에 삽입한 다음 백신을 축적한다.
작업자는 바늘을 제자리에 두고, 이제 비어 있는 주사기를 제거하고, 이를 1.0 ml의 제1 면역치료 약물(항-PD-1 항체)을 함유하는 제2 주사기로 대체하고, 이 약물을 제1 주사 투여와 동일한 방식으로 주변 조직을 포함하도록 풍부한 오버플로우로 이전 주사 부위 전반에 걸쳐 축적한다.
이어서, 작업자는 1.0 ml의 제2 면역치료 약물(항-CTLA-4 항체)을 함유하는 제3 주사기에 대해 이 절차를 반복하고, 제3 약물을 축적한다.
피내 주사
암 백신, 항-PD-1 항체 또는 항-CTLA-4 항체의 피내 주사를 준비하기 위해, 작업자는 바이알 내용물(주사 직전에 미리 해동하여 실온이 되게 한 자가 암 백신; 총 0.5 ml)를 18 게이지, 1.5인치 드로잉-업 바늘이 장착된 멸균 주사기로 끌어들인다. 이어서, 작업자는 1/4" 내지 1/2" 길이 및 26 또는 27 게이지 두께의 바늘을 주사기에 부착한다. 대안적으로, 작업자는 주사기를 FDA 승인 마이크로바늘(예컨대, Micronjet 600, Nano Pass Technologies, 이스라엘 리호바트)에 부착할 수 있다.
암 백신 투여를 위해, 작업자는 바늘 또는 미세바늘을 피부에 삽입한다. 보통 크기의 바늘은 바늘을 5 내지 15도의 투여 각도로 배치하고 주사기 내용물을 천천히 완전히 주사하는 망토우 절차를 이용한다. 암 백신 주사기가 부착된 미세바늘을 피부에 직접 놓는다. 항 PD-1 항체 및 항 CTLA-4 항체에 대한 주사 방법은 동일하다.
항-PD-1 항체 및 항-CTLA-4 항체의 투여를 위해, 작업자는 바늘 또는 미세바늘을 제1 자국의 가장자리에 있는 피부에 삽입하여 이 유체가 이전에 투여된 암 백신 및 항체의 것과 피내 접촉되게 한다. 항 PD-1 항체 및 항 CTLA-4 항체에 대해 주사 방법은 동일하다.
저용량 GM-CSF의 피하 투여
실시예 1에 기재된 바와 같은 시토카인 약물을 포함하는 치료 레지멘에 대해, 백신 치료를 위해 매일 250 mg의 GM-CSF(Cy)의 피하 레지멘이 30일 동안 계속된다.
저용량 사이클로포스파미드의 경구 메트로놈 투여
실시예 1에 기재된 바와 같은 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물을 포함하는 치료 레지멘에 대해, 25 mg b.i.d.(1일 2회) 또는 50 mg q.d. (1일 1회)의 사이클로포스파미드(Cy)의 경구 레지멘이 각각의 치료 직후 14일 동안 계속되고, 이어서 14일 동안 약물이 투여되지 않고, 추가의 14일 동안 경구 투여가 반복된다.

Claims (48)

  1. 종양 또는 암 치료용 치료 조성물로서,
    i) 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제,
    ii) 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물,
    iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성(necroptotic) 암 세포를 생성하는 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체로부터 제조된 암 백신, 및
    임의적으로 약제학적으로 허용되는 담체
    를 포함하는 치료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 상이하고, 각각 CD137, CD134, PD-1, KIR, LAG-3, PD-L1, PDL2, CTLA-4, B7.1, B7.2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, B7-H7, BTLA, LIGHT, HVEM, GAL9, TIM-3, TIGHT, VISTA, 2B4, CGEN-15049, CHK 1, CHK2, A2aR, TGF-β, PI3Kγ, GITR, ICOS, IDO, TLR, IL-2R, IL-10, PVRIG, CCRY, OX-40, CD160, CD20, CD52, CD47, CD73, CD27-CD70 및 CD40으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역 체크포인트 분자의 억제제인 치료 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제가 i) CTLA-4 억제제, 및 ii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 것인 치료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 약물이 에리트로포이에틴, G-CSF, GM-CSF, IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, TNF, INF-α, INF-β, INF-γ 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 시토카인 약물인 치료 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 시토카인 약물이 GM-CSF인 치료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 약물이 아스파라기나제, 블레오마이신, 부술판, 카르보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, BCG, 클로람페니콜, 콜키신, 사이클로스포린, 다카르바진, 독소루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 로무스틴, 멜팔란, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 파클리탁셀, 프로카르바진, 리툭시맙, 테모졸로미드, 티테파, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 지도부딘 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물인 치료 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물이 사이클로포스파미드인 치료 조성물.
  8. 제3항에 있어서, CTLA-4 억제제의 농도가 약 0.5 내지 약 10 mg/ml 범위이고, PD-1 또는 PD-L1 억제제의 농도가 약 0.5 내지 약 20 mg/ml 범위이고, 적어도 1종의 약물의 농도가 시토카인 약물의 경우 약 1 내지 약 1000 mg/ml 범위이거나 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 경우 약 10 내지 약 500 μg/ml 범위인 치료 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 전체 세포, 세포 단편, 조직 단편, 용해물, 준세포 유도체 또는 이들의 조합인 치료 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 신선한 전체 세포인 치료 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 분리 또는 절개, 고정, 원심분리, 재현탁, 농축, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 처리에 의해 제조된 암 세포 용해물인 치료 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 포르말린, 에탄올 또는 글루타르알데히드에 의해 고정된 암 세포 용해물인 치료 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 생체외 처리가 생체외 방사선 및/또는 조작의 하나 이상의 단계를 포함하는 것인 치료 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 생체외 방사선 및/또는 조작이 냉동수술 동결; 고주파(RF) 조작; 마이크로파 조작; 레이저, 광 또는 플라즈마 조작; 초음파 조작; 고강도 집중 초음파(HIFU) 조작; 스팀 조작; 가역적 전기천공(RE); 비가역적 전기천공(IRE); 고주파 전기 막 파괴(RF-EMB); RF-EMB 유형 조작; 초단 전기 펄스에 의한 조작; 광역학 요법을 이용한 조작; 비-열적 충격파를 사용한 조작; 캐비테이션; 화학적 조작; 생물제제에 의한 조작; 조사; 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 치료 조성물.
  15. 제13항에 있어서, 암 백신이 조사 및 냉동수술 동결 중 하나 이상을 포함하는 생체외 처리에 의해 제조되고, 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물에 노출되는 것인 치료 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 암 백신이 UV 조사 및 냉동수술 동결을 포함하는 생체외 처리에 의해 제조되고, GM-CSF 또는 사이클로포스파미드의 저용량 용액에 현탁되는 것인 치료 조성물.
  17. 제13항에 있어서, 생체외 처리가 10분 이하의 총 조작 시간으로 단일 프로브를 사용하여 수행되는 냉동수술 동결을 포함하는 것인 치료 조성물.
  18. 제13항에 있어서, 생체외 처리가 약 -35 내지 약 -100℃의 온도에서 수행되는 냉동수술 동결을 포함하는 것인 치료 조성물.
  19. 제1항에 있어서, 암 백신이 자가유래인 치료 조성물.
  20. 제1항에 있어서, 암 백신이 동종이계인 치료 조성물.
  21. 제1항에 있어서, 치료 조성물이 피부 또는 연조직 투여용으로 제형화되는 것인 치료 조성물.
  22. 제1항에 있어서, 치료 조성물이 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12, TLR13 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 톨 유사 수용체(TLR)를 추가로 포함하는 것인 치료 조성물.
  23. 종양 또는 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 종양 또는 암을 치료하는 방법으로서,
    i) 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제,
    ii) 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물,
    iii) 암 항원의 파괴를 최소화하면서 괴사성 및/또는 세포자멸괴사성 암 세포를 생성하는 생체외 처리를 통해 제조된 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체로부터 제조된 암 백신
    을 포함하는 치료 조성물을 종양 또는 암을 치료하기에 효과적인 양으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 치료 조성물이 대상체에게 피내, 종양내, 결절내, 근육내 또는 피하로 투여되는 것인 방법.
  25. 제23항에 있어서, 치료 조성물이 주사 장치를 사용하여 대상체의 피부 또는 연조직에 투여되는 것인 방법.
  26. 제23항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 상이하고, 각각 CD137, CD134, PD-1, KIR, LAG-3, PD-L1, PDL2, CTLA-4, B7.1, B7.2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, B7-H7, BTLA, LIGHT, HVEM, GAL9, TIM-3, TIGHT, VISTA, 2B4, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, TGF-β, PI3Kγ, GITR, ICOS, IDO, TLR, IL-2R, IL-10, PVRIG, CCRY, OX-40, CD160, CD20, CD52, CD47, CD73, CD27-CD70 및 CD40으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역 체크포인트 분자의 억제제인 방법.
  27. 제26항에 있어서, 적어도 2종의 면역 체크포인트 억제제가 i) CTLA-4 억제제, 및 ii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 것인 방법.
  28. 제23항에 있어서, 약물이 에리트로포이에틴, G-CSF, GM-CSF, IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, TNF, INF-α, INF-β, INF-γ 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 시토카인 약물인 방법.
  29. 제28항에 있어서, 시토카인 약물이 GM-CSF인 방법.
  30. 제23항에 있어서, 약물이 아스파라기나제, 블레오마이신, 부술판, 카르보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, BCG, 클로람페니콜, 콜키신, 사이클로스포린, 다카르바진, 독소루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 로무스틴, 멜팔란, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 파클리탁셀, 프로카르바진, 리툭시맙, 테모졸로미드, 티테파, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 지도부딘 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물인 방법.
  31. 제30항에 있어서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물이 사이클로포스파미드인 방법.
  32. 제27항에 있어서, CTLA-4 억제제의 농도가 약 0.5 내지 약 10 mg/ml 범위이고, PD-1 또는 PD-L1 억제제의 농도가 약 0.5 내지 약 20 mg/ml 범위이고, 약물의 농도가 시토카인 약물의 경우 약 1 내지 약 1000 mg/ml 범위이거나 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물의 경우 약 10 내지 약 500 μg/ml 범위인 방법.
  33. 제23항에 있어서, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 전체 세포, 세포 단편, 조직 단편, 용해물, 준세포 유도체 또는 이들의 조합인 방법.
  34. 제33항에 있어서, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 신선한 전체 세포인 방법.
  35. 제33항에 있어서, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 분리 또는 절개, 고정, 원심분리, 재현탁, 농축, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 처리에 의해 제조된 암 세포 용해물인 방법.
  36. 제35항에 있어서, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 포르말린, 에탄올 또는 글루타르알데히드에 의해 고정된 암 세포 용해물인 방법.
  37. 제23항에 있어서, 생체외 처리가 생체외 방사선 및/또는 조작의 하나 이상의 단계를 포함하는 것인 방법.
  38. 제37항에 있어서, 생체외 방사선 및/또는 조작이 냉동수술 동결; 고주파(RF) 조작; 마이크로파 조작; 레이저, 광 또는 플라즈마 조작; 초음파 조작; 고강도 집중 초음파(HIFU) 조작; 스팀 조작; 가역적 전기천공(RE); 비가역적 전기천공(IRE); 고주파 전기 막 파괴(RF-EMB); RF-EMB 유형 조작; 초단 전기 펄스에 의한 조작; 광역학 요법을 사용한 조작; 비-열적 충격파를 사용한 조작; 캐비테이션; 화학적 조작; 생물제제에 의한 조작; 조사; 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 방법.
  39. 제37항에 있어서, 암 백신이 조사 및 냉동수술 동결 중 하나 이상을 포함하는 생체외 처리에 의해 제조되고, 시토카인, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 적어도 1종의 약물에 노출되는 것인 방법.
  40. 제39항에 있어서, 암 백신이 UV 조사 및 냉동수술 동결을 포함하는 생체외 처리에 의해 제조되고, GM-CSF 또는 사이클로포스파미드의 저용량 용액에 현탁되는 것인 방법.
  41. 제39항에 있어서, 생체외 처리가 10분 이하의 총 조작 시간으로, 단일 프로브를 사용하여 수행되는 냉동수술 동결을 포함하는 것인 방법.
  42. 제39항에 있어서, 생체외 처리가 약 -35 내지 약 -100℃의 온도에서 수행되는 냉동수술 동결을 포함하는 것인 방법.
  43. 제23항에 있어서, 암 백신이 자가유래이고, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 치료되는 대상체로부터 유래된 것인 방법.
  44. 제23항에 있어서, 암 백신이 동종이계이고, 종양 또는 암 세포, 또는 이들의 유도체가 암 세포주로부터 유래된 것인 방법.
  45. 제23항에 있어서, 치료 조성물의 투여 후,
    시토카인 약물, 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 약물 ii)를 대상체에게 매일 투여하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 약물 ii)가 GM-CSF 또는 사이클로포스파미드인 방법.
  47. 제45항에 있어서, 약물 ii)가 피하 투여되는 시토카인 약물이거나, 경구 투여되는 세포독성 또는 세포증식억제 화학치료 약물인 방법.
  48. 제23항에 있어서, 치료 조성물이 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12, TLR13 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 톨 유사 수용체(TLR)를 추가로 포함하는 것인 방법.
KR1020237030949A 2021-02-12 2022-02-11 암 치료를 위해 다중 면역요법과 암 백신을 조합한 치료 조성물 및 방법 KR20230145407A (ko)

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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3011460A1 (en) * 2016-01-15 2017-07-20 Rfemb Holdings, Llc Immunologic treatment of cancer

Family Cites Families (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4785806A (en) 1987-01-08 1988-11-22 Yale University Laser ablation process and apparatus
US4945912A (en) 1988-11-25 1990-08-07 Sensor Electronics, Inc. Catheter with radiofrequency heating applicator
US5383917A (en) 1991-07-05 1995-01-24 Jawahar M. Desai Device and method for multi-phase radio-frequency ablation
US20040002647A1 (en) 1991-10-18 2004-01-01 Ashvin Desai Gel injection treatment of body parts
WO1993008750A2 (en) 1991-11-04 1993-05-13 Baxter International Inc. Ultrasonic ablation device adapted for guidewire passage
US5524620A (en) 1991-11-12 1996-06-11 November Technologies Ltd. Ablation of blood thrombi by means of acoustic energy
US5231047A (en) 1991-12-19 1993-07-27 Energy Conversion Devices, Inc. High quality photovoltaic semiconductor material and laser ablation method of fabrication same
US5573533A (en) 1992-04-10 1996-11-12 Medtronic Cardiorhythm Method and system for radiofrequency ablation of cardiac tissue
US5540681A (en) 1992-04-10 1996-07-30 Medtronic Cardiorhythm Method and system for radiofrequency ablation of tissue
US5487740A (en) 1994-03-02 1996-01-30 Energy Life Systems Corporation Laser device for ablation of human tissue
US6813520B2 (en) 1996-04-12 2004-11-02 Novacept Method for ablating and/or coagulating tissue using moisture transport
US5800487A (en) 1996-07-23 1998-09-01 Endocare, Inc. Cryoprobe
US7220257B1 (en) 2000-07-25 2007-05-22 Scimed Life Systems, Inc. Cryotreatment device and method
US6132424A (en) 1998-03-13 2000-10-17 Lasersight Technologies Inc. Smooth and uniform laser ablation apparatus and method
US7001378B2 (en) 1998-03-31 2006-02-21 Innercool Therapies, Inc. Method and device for performing cooling or cryo-therapies, for, e.g., angioplasty with reduced restenosis or pulmonary vein cell necrosis to inhibit atrial fibrillation employing tissue protection
FR2778573B1 (fr) 1998-05-13 2000-09-22 Technomed Medical Systems Reglage de frequence dans un appareil de traitement par ultrasons focalises de haute intensite
US20050255039A1 (en) 1998-06-26 2005-11-17 Pro Surg, Inc., A California Corporation Gel injection treatment of breast, fibroids & endometrial ablation
US6428968B1 (en) 1999-03-15 2002-08-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Combined therapy with a chemotherapeutic agent and an oncolytic virus for killing tumor cells in a subject
US6325796B1 (en) 1999-05-04 2001-12-04 Afx, Inc. Microwave ablation instrument with insertion probe
US7226446B1 (en) 1999-05-04 2007-06-05 Dinesh Mody Surgical microwave ablation assembly
US6306132B1 (en) 1999-06-17 2001-10-23 Vivant Medical Modular biopsy and microwave ablation needle delivery apparatus adapted to in situ assembly and method of use
US7033352B1 (en) 2000-01-18 2006-04-25 Afx, Inc. Flexible ablation instrument
US7706882B2 (en) 2000-01-19 2010-04-27 Medtronic, Inc. Methods of using high intensity focused ultrasound to form an ablated tissue area
US6595934B1 (en) 2000-01-19 2003-07-22 Medtronic Xomed, Inc. Methods of skin rejuvenation using high intensity focused ultrasound to form an ablated tissue area containing a plurality of lesions
US6471696B1 (en) 2000-04-12 2002-10-29 Afx, Inc. Microwave ablation instrument with a directional radiation pattern
AU2001271586A1 (en) 2000-07-10 2002-01-21 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services National Institutes Of Health Radiofrequency probes for tissue treatment and methods of use
US6811562B1 (en) 2000-07-31 2004-11-02 Epicor, Inc. Procedures for photodynamic cardiac ablation therapy and devices for those procedures
US6821274B2 (en) 2001-03-07 2004-11-23 Gendel Ltd. Ultrasound therapy for selective cell ablation
US6648880B2 (en) 2001-02-16 2003-11-18 Cryocath Technologies Inc. Method of using cryotreatment to treat brain tissue
AU2002326952A1 (en) 2001-09-19 2003-04-01 Urologix, Inc. Microwave ablation device
US20040260328A1 (en) 2001-09-27 2004-12-23 Roni Zvuloni Cryoplasty apparatus and method
US6579287B2 (en) 2001-10-09 2003-06-17 Cryocath Technologies Inc. Cryosurgical ablation device having sequential injection and method therefor
US8974446B2 (en) 2001-10-11 2015-03-10 St. Jude Medical, Inc. Ultrasound ablation apparatus with discrete staggered ablation zones
WO2004035110A2 (en) 2002-10-17 2004-04-29 Pro Surg, Inc. Gel injection apparatus and treatment of breast, fibroids and endometrial ablation
CA2521019A1 (en) 2003-04-03 2004-10-14 Galil Medical Ltd. Apparatus and method for accurately delimited cryoablation
US7311701B2 (en) 2003-06-10 2007-12-25 Cierra, Inc. Methods and apparatus for non-invasively treating atrial fibrillation using high intensity focused ultrasound
US7670335B2 (en) 2003-07-21 2010-03-02 Biosense Webster, Inc. Ablation device with spiral array ultrasound transducer
CA2550846C (en) 2003-12-24 2018-01-23 The Regents Of The University Of California Tissue ablation with irreversible electroporation
US20060052706A1 (en) 2004-08-20 2006-03-09 Kullervo Hynynen Phased array ultrasound for cardiac ablation
US20060056480A1 (en) 2004-09-15 2006-03-16 Mielke Michael M Actively stabilized systems for the generation of ultrashort optical pulses
US8420078B2 (en) 2005-03-10 2013-04-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods and immunogenic cell preparations for treating antigen-associated diseases
US20070129712A1 (en) 2005-12-01 2007-06-07 Ceramoptec Industries, Inc. Benign prostate hyperplasia treatment using photosensitizer and laser ablation
US20070190032A1 (en) 2006-02-13 2007-08-16 Oncolytics Biotech Inc. Use of Local Immune Suppression to Enhance Oncolytic Viral Therapy
WO2007140331A2 (en) 2006-05-25 2007-12-06 Medtronic, Inc. Methods of using high intensity focused ultrasound to form an ablated tissue area containing a plurality of lesions
US20090000184A1 (en) 2006-07-21 2009-01-01 Garwood Anthony J Method of processing bio-mass matter into renewable fluid fuels (synthetic diesel)
WO2008021321A2 (en) 2006-08-17 2008-02-21 Rjf Holdings Iv, Inc Method and apparatus for plasma incision of cardiovascular tissue
US9320794B2 (en) * 2006-11-13 2016-04-26 Immunovative Therapies, Ltd. Ablative immunotherapy
WO2008070562A1 (en) 2006-12-06 2008-06-12 Boston Scientific Limited Tissue ablation using pulse modulated radio frequency energy
US20100178684A1 (en) 2006-12-21 2010-07-15 Woo Savio L C Transgenic oncolytic viruses and uses thereof
US7655004B2 (en) 2007-02-15 2010-02-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Electroporation ablation apparatus, system, and method
CA2679405C (en) 2007-02-27 2015-12-22 Erik N. K. Cressman Thermochemical ablation of bodily tissue
US8057418B2 (en) 2007-03-01 2011-11-15 Nanospectra Biosciences, Inc. Devices and methods for extracorporeal ablation of circulating cells
WO2008142686A2 (en) 2007-05-21 2008-11-27 Uc-Care Ltd. Ablation probe
JP4635233B2 (ja) 2007-09-06 2011-02-23 株式会社ハイレックスコーポレーション 衝撃波アブレーションシステム
TW200942282A (en) 2007-12-05 2009-10-16 Reset Medical Inc Method for cryospray ablation
US7996078B2 (en) 2007-12-31 2011-08-09 St. Jude Medical, Atrial Fibrillation Division, Inc. Systems and methods of photodynamic-based cardiac ablation via the esophagus
WO2012071526A2 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Irreversible electroporation using tissue vasculature to treat aberrant cell masses or create tissue scaffolds
US8926606B2 (en) 2009-04-09 2015-01-06 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Integration of very short electric pulses for minimally to noninvasive electroporation
US9867652B2 (en) 2008-04-29 2018-01-16 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Irreversible electroporation using tissue vasculature to treat aberrant cell masses or create tissue scaffolds
US8221411B2 (en) 2008-07-28 2012-07-17 Medtronic, Inc. Systems and methods for cardiac tissue electroporation ablation
DK3117784T3 (en) 2009-07-08 2019-04-08 Sanuwave Inc USE OF INTRACORPORAL PRESSURE SHOCK WAVES IN MEDICINE
CA2781843A1 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Regents Of The University Of Minnesota Methods and systems for chemical ablation
US8690866B2 (en) 2010-08-23 2014-04-08 Covidien Lp Ablation devices utilizing exothermic chemical reactions, system including same, and methods of ablating tissue using same
WO2012088149A2 (en) 2010-12-20 2012-06-28 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. High-frequency electroporation for cancer therapy
US9486229B2 (en) 2011-05-13 2016-11-08 Broncus Medical Inc. Methods and devices for excision of tissue
US9204918B2 (en) 2011-09-28 2015-12-08 RELIGN Corporation Medical ablation system and method of use
CN104254366B (zh) 2011-12-09 2017-03-08 麦特文申公司 用于神经调节的设备、***和方法
US10537375B2 (en) 2015-04-24 2020-01-21 Neurotronic, Inc. Chemical ablation and method of treatment for various diseases
JP6389185B2 (ja) 2012-11-02 2018-09-12 ニューロトロニック・インコーポレイテッドＮｅｕｒｏｔｒｏｎｉｃ， Ｉｎｃ． 化学的アブレーション用製剤および種々疾患の治療方法
US10154869B2 (en) 2013-08-02 2018-12-18 Gary M. Onik System and method for creating radio-frequency energy electrical membrane breakdown for tissue ablation
KR102171496B1 (ko) 2013-12-05 2020-10-30 알에프이엠비 홀딩스, 엘엘씨 면역 요법을 위한 보조 메커니즘으로서의 고주파 전기막 파괴(rf-emb)에 의한 암 항원의 항원표출세포로의 개선된 표출 시스템
US10023858B2 (en) 2014-05-29 2018-07-17 U.S. Patent Innovations, LLC System and method for selective ablation of cancer cells with cold atmospheric plasma
US10376674B2 (en) 2014-09-15 2019-08-13 Ethicon, Inc. System and method for targeted delivery of therapeutic agents to tissue
KR102128856B1 (ko) 2015-01-30 2020-07-02 알에프이엠비 홀딩스, 엘엘씨 고주파 전기적 막 파괴를 이용하여 생명체의 바람직하지 않은 연조직을 절제하는 시스템
CA2975938A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Rfemb Holdings, Llc Radio-frequency electrical membrane breakdown for reducing restenosis
CA2975931A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Rfemb Holdings, Llc Radio-frequency electrical membrane breakdown for the treatment of adipose tissue and removal of unwanted body fat
US20180028267A1 (en) 2015-02-04 2018-02-01 Rfemb Holdings, Llc Radio-frequency electrical membrane breakdown for the treatment of benign prostatic hyperplasia
CA2975888A1 (en) 2015-02-06 2016-08-11 Rfemb Holdings, Llc Radio-frequency electrical membrane breakdown for the treatment of cardiac rhythm disorders and for renal neuromodulation
AU2016220549B2 (en) 2015-02-17 2021-09-23 Nanyang Technological University Regenerable draw solute for osmotically driven processes
CA3011460A1 (en) 2016-01-15 2017-07-20 Rfemb Holdings, Llc Immunologic treatment of cancer
BR112021017691A2 (pt) * 2019-03-06 2022-01-04 Univ Chile Formulações imunogênicas para o tratamento do câncer
US20210154281A1 (en) * 2019-11-26 2021-05-27 Massachusetts Institute Of Technology Cell-based cancer vaccines and cancer therapies

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