KR20230077720A - Mucin-1에 특이적인 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

Mucin-1에 특이적인 항체 및 이의 사용 방법 Download PDF

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페넬로페 엠. 드레이크
윤 철 김
로빈 엠. 바필드
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아요델 오군코야
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Abstract

본 발명은 뮤신 1에 특이적인 항체를 제공한다. 또한, 본 발명의 항체의 가변 사슬 중 하나 또는 둘 모두를 암호화하는 핵산도 제공되며, 이러한 핵산을 포함하는 세포들도 제공된다. 또한, 경우에 따라, 약학적 조성물을 포함하는, 본 발명의 항체를 포함하는 조성물도 제공된다. 본 발명의 항체를 제조하여 사용하는 방법도 제공된다. 특정 양태에서, 세포 증식성 질환에 걸린 개체에게 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법도 제공되는데, 이 경우 상기 항체는 개체에게 투여되어 세포 증식성 질환의 비정상적으로 증식하는 세포에 대한 면역 반응, 예컨대 T 세포 반응을 향상시킨다. 본 항체는 다양한 진단 용도 및 모니터링 용도로도 유용하며, 이러한 용도도 제공된다.

Description

MUCIN-1에 특이적인 항체 및 이의 사용 방법
관련 출원의 인용
본 출원은 2020년 7월 31일에 출원된 미국 가출원 63/059,497호의 우선권의 이익을 주장하며, 그 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
텍스트 파일로 제공되는 서열 목록의 인용에 의한 포함
서열 목록은 2021년 7월 27일에 생성한 29 KB 크기의 텍스트 파일 "RDWD-035WO SEQ LIST_ST25.txt"로서 본원에 제공된다. 텍스트 파일의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
Mucin-1 (MUCIN 1 또는 MUC1이라고도 함)은 뮤신 계열의 구성원이다. 뮤신은 상피 표면에 보호용 점액성 장벽을 형성하는데 필수적인 역할을 하는 O-글리코실화된 단백질이다. MUC1은 폐, 유방, 위 및 췌장을 비롯한 여러가지 다른 조직들의 점막 표면안을 막처럼 싸고 있는 상피 세포의 정단 표면에서 발현된다. 이 단백질은 이종이합체성 복합체를 형성하는 알파 및 베타 소단위로 단백질 분해에 의해 절단된다. N-말단 알파 소단위는 세포 부착에 있어서 기능하고, C-말단 베타 소단위는 세포 신호전달에 관여한다. 이 단백질의 과발현, 비정상적인 세포내 국소편재화 및 글리코실화에서의 변화는 암종과 관련이 있다.
MUC1과 관련된 질환, 예컨대 암의 진단과 치료를 위해 MUC1을 표적으로 하는 안전하고 효과적인 작용제가 당업계에 필요한 실정이다.
본 발명은 MUC1에 특이적인 항체를 제공한다. 본 발명의 항체의 가변 사슬 폴리펩타이드 중 하나 또는 둘 다를 암호화하는 핵산도 제공되며, 이러한 핵산을 포함하는 세포도 마찬가지로 제공된다. 경우에 따라서는, 약학적 조성물을 포함하는, 본 발명의 항체를 포함하는 조성물이 제공된다. 본 발명의 항체를 제조 및 사용하는 방법도 제공된다. 특정 양태에서, 세포 증식성 질환에 걸린 대상체에게 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공되며, 이때 항체는 세포 증식성 질환의 비정상적으로 증식하는 세포에 대한 면역 반응, 예컨대 T 세포 반응을 강화하기 위해 대상체에게 투여된다. 상기 항체는 다양한 진단, 및 모니터링 용도로 유용하며, 이들도 역시 제공된다.
도 1은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정시, 항-MUC1 항체들인 MUC1 gB06, MUC1 G12 및 MUC1 H02가 각각 99% 이상, 99% 이상 및 98% 이상의 단량체성임을 나타낸 것이다.
도 2a-2c는 ELISA에 의해 평가시, 항-MUC1 항체들인 MUC1 gB06, MUC1 G12 및 MUC1 H02가 재조합 20mer MUC1 글리코실화된 비오틴에는 결합하지만 재조합 60mer MUC1 글리코실화되지 않은 비오틴 또는 글리코실화된 유인 펩타이드에는 결합하지 않음을 나타낸 것이다.
도 3a-3c는 코팅되지 않은 스트렙타비딘 또는 Maxisorp 플레이트에 항-MUC1 항체들인 MUC1 gB06, MUC1 G12 및 MUC1 H02가 결합하는 수준을 나타낸 것이다.
도 4는 3벌로 시험된 상기 명시한 항체들의 지정된 세포주에 대한 결합을 보여주는 중첩된 히스토그램을 나타낸 것이다.
도 5는 상기 명시한 항체들의 지정된 세포주에 대한 결합을 보여주는 엇갈리게 배열된 히스토그램을 나타낸 것이다.
도 6은 시차주사 형광측정법에 의해 측정된 B06, G12 및 H02 항-MUC1 항체들의 CH2 및 Fab 영역의 용융 온도를 나타낸 것이다.
도 7은 T47D 이종이식편에 대한 항-MUC1 항체 B06의 생체내 효능을 나타낸 것이다. n = 10 마리의 마우스/그룹; 화살표는 항체 또는 비히클이 투여된 날을 가리킨다.
정의
용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 임의의 아이소타입(isotype)의 항체 또는 면역글로불린 (예를 들어, IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), IgE, IgD, IgA, IgM 등), 전체 항체 (예를 들어, 차례로 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드의 2개의 이량체로 구성된 사량체로 구성된 항체); 단일 사슬 항체 (예를 들어, scFv); 이에 제한되는 것은 아니나, Fab, Fv, scFv, 및 Fd 단편을 포함하는, 항원에 대한 특이적 결합을 유지하는 항체의 단편 (예를 들어, 전체 또는 단일 사슬 항체의 단편), 키메라 항체, 인간화된 항체, 단일 사슬 항체, 및 항체 및 비-항체 단백질의 항원 결합 부분을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 항체는, 예를 들어, 방사성 동위원소, 검출가능 산물을 생성하는 효소, 형광 단백질 등으로 검출가능하게 표지될 수 있다. 항체는 다른 모이어티(moiety), 예컨대 특이적 결합 쌍의 구성원, 예를 들어, 비오틴 (비오틴-아비딘 특이적 결합 쌍의 구성원) 등에 추가로 접합될 수 있다. 항체는 또한, 이에 제한되는 것은 아니나, 폴리스티렌 플레이트 또는 비드 등을 포함하는 고체 지지체에 결합될 수 있다. 또한, 상기 용어에는 Fab', Fv, F(ab')2, 및 또는 항원에 대한 특이적 결합을 유지하는 다른 항체 단편, 및 단일클론 항체가 포함된다. 항체는 1가 또는 2가일 수 있다.
"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 예를 들어, 온전한 항체의 항원 결합 영역 또는 가변 영역를 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 이원항체(diabody); 선형 항체 (Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); 단일 사슬 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. 항체의 파파인 분해는, 각각 단일 항원 결합 부위를 갖는 "Fab" 단편이라고 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편과, 쉽게 결정화할 수 있는 능력을 반영한 명칭인 잔류 "Fc" 단편을 생산한다. 펩신 처리는 2개의 항원 조합 부위를 가져 항원에 가교 결합 가능한 F(ab')2 단편을 수득한다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 단단하게 비-공유 회합된 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 각 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에서 항원 결합 부위를 한정하는 것이 이러한 입체구성이다. 집합적으로, 6개의 CDR이 항체에 대한 항원 결합 특이성을 부여한다. 하지만, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)도, 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도를 갖지만, 항원을 인식하여 그에 결합할 수 있는 능력을 갖는다.
"Fab" 단편도 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. Fab 단편은 항체 힌지 영역의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에서 소수의 잔기들이 추가되어서 Fab' 단편과는 다르다. Fab'-SH는 본원에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올 기를 함유하는 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 Fab' 단편들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 제조되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 공지되어 있다.
임의의 척추동물 종의 항체 (면역글로불린)의 "경쇄"는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파와 람다라고 불리는 2개의 명백하게 구분되는 유형들 중 하나로 지정될 수 있다. 면역글로불린은, 이들의 중쇄 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 서로 다른 클래스로 지정될 수 있다. 면역글로불린의 5가지 주요 클래스는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 있고, 이들 중 다수는 하위 클래스 (아이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 더 세분될 수 있다.
"단일 사슬 Fv" 또는 "sFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 이들 도메인은 단일 폴리펩타이드 사슬에 존재한다. 일부 양태에서, Fv 폴리펩타이드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 더 포함하는데, 이것은 sFv가 항원 결합에 바람직한 구조를 형성할 수 있게 한다.
용어 "이원항체"는 2개의 항원 결합 부위를 가진 작은 항체 단편을 가리키는데, 이 단편은 동일한 폴리펩타이드 사슬에서 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH) (VH-VL)을 포함한다. 너무 짧아서 동일한 사슬 상의 2개의 도메인 사이에서 쌍 형성을 할 수 없는 링커를 사용함으로써, 상기 도메인들이 또 다른 사슬의 상보적인 도메인과 쌍을 형성하여 2개의 항원 결합 부위를 생성하게끔 강제한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "친화도"는 두 작용제의 가역적인 결합에 대한 평형 상수를 지칭하며, 해리 상수 (Kd)로 표현된다. 친화도는 무관한 아미노산 서열에 대한 항체의 친화도보다 적어도 1배 초과, 적어도 2배 초과, 적어도 3배 초과, 적어도 4배 초과, 적어도 5배 초과, 적어도 6배 초과, 적어도 7배 초과, 적어도 8배 초과, 적어도 9배 초과, 적어도 10배 초과, 적어도 20배 초과, 적어도 30배 초과, 적어도 40배 초과, 적어도 50배 초과, 적어도 60배 초과, 적어도 70배 초과, 적어도 80배 초과, 적어도 90배 초과, 적어도 100배 초과, 또는 적어도 1000배 초과, 또는 그 이상일 수 있다. 표적 단백질에 대한 항체의 친화도는, 예를 들어, 약 100 나노몰 (nM) 내지 약 0.1 nM, 약 100 nM 내지 약 1 피코몰 (pM), 또는 약 100 nM 내지 약 1 펨토몰 (fM) 또는 그 이상일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "결합력"은 2개 이상의 작용제 복합체의 희석 후 해리에 대한 저항성을 나타낸다. 용어 "면역반응성" 및 "~에 우선적으로 결합하다"는 본원에서 항체 및/또는 항원 결합 단편에 관하여 서로 교환하여 사용된다.
용어 "~에 결합하는"은, 예를 들어, 염 다리(salt bridge) 및 물 다리(water bridge)와 같은 상호작용을 포함하는, 공유, 정전기적, 소수성, 및 이온성 및/또는 수소-결합 상호작용으로 인한 두 분자 간의 직접적인 회합을 나타낸다. 대상 (subject) 항-MUC1 항체는 MUC1 폴리펩타이드, 예컨대 인간 MUC1 폴리펩타이드, 예를 들어 글리코실화된 MUC1 또는 이의 단편 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 비-특이적 결합이란 약 10-7 M 미만의 친화도로 결합하는 것, 예를 들어, 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M 등의 친화도로 결합하는 것을 의미한다.
항체 및 항원의 내용에서 용어 "~에 특이적으로 결합하다"는 항체가, 예를 들어, 약 105 M-1 이상의 친화도 또는 Ka (즉, 1/M의 단위를 갖는 특정 결합 상호작용의 평형 회합 상수)로 항원에 결합하거나 또는 항원과 회합한다는 것을 의미한다.
"고친화도" 결합은 적어도 107 M-1, 적어도 108 M-1, 적어도 109 M-1, 적어도 1010 M-1, 적어도 1011 M-1, 적어도 1012 M-1, 적어도 1013 M-1, 또는 그 이상의 Ka로 결합함을 가리킨다. 다르게는, 친화도는 M의 단위 (예를 들어, 10-5 M 내지 10-13 M, 또는 그 이하)를 갖는 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수 (KD)로 정의될 수 있다. 일부 실시형태에서, 특이적 결합은 항체가 약 10-5 M 이하, 약 10-6 M 이하, 약 10-7 M 이하, 약 10-8 M 이하, 또는 약 10-9 M 이하, 10-10 M, 10-11 M, 또는 10-12 M 또는 그 이하의 KD로 항원에 결합한다는 것을 의미한다. 항원에 대한 항체의 결합 친화도는 통상적인 기술을 사용하여, 예를 들어, 경쟁적 ELISA (효소 결합 면역흡착 검정), 평형 투석에 의해, 표면 플라스몬 공명 (SPR) 기술 (예를 들어, BIAcore 2000 장비, 제조업체에 의해 개괄된 일반적인 절차를 사용함)의 사용; 방사선 면역 검정; 등에 의해 쉽게 측정될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 모두의 가변 영역 내에서 발견된 인접하지 않은 항원 조합 부위를 의미하고자 한 것이다. CDR은 문헌 [Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)]; [Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of immunological interest" (1991)]; [Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]; 및 [MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)]에 기재되어 있으며, 상기 정의들은 서로에 대해 비교할 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 하위군도 포함한다. 하지만, 항체 또는 이식된 항체 또는 이들의 변이체의 CDR을 의미하는 정의 중 하나를 적용함에 있어서는 본원에서 정의되고 사용된 용어의 범위 내에 두고자 한다. 상기 인용된 각 참고문헌들에 정의된 CDR들을 포함하는 아미노산 잔기들을 비교를 위해 하기 표 1에 제시한다.
Figure pct00001
본 발명의 전반에 걸쳐, 면역글로불린 중쇄 및 면역글로불린 경쇄에서 잔기의 넘버링은 명백하게 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]에서와 같다.
본원에서 사용된 바와 같이, 항체 가변 영역에 관하여 사용된 용어 "프레임워크"는 항체의 가변 영역 내에서 CDR 영역 이외의 모든 아미노산 잔기들을 의미하고자 한 것이다. 가변 영역 프레임워크는 일반적으로 길이가 약 100-120개의 아미노산의 불연속적인 아미노산 서열이지만, CDR의 이외의 아미노산만을 언급하고자 한 것이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "프레임워크 영역"은 CDR에 의해 분리된 프레임워크의 각 도메인을 의미하고자 한 것이다.
"모체 Ig 폴리펩타이드"는 본원에 기재된 바와 같이 알데하이드가 태깅된 불변 영역이 없는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드이다. 모체 폴리펩타이드는 천연의 서열 불변 영역을 포함할 수 있거나, 또는 기존의 아미노산 서열 변형 (예컨대 부가, 결실 및/또는 치환)을 갖는 불변 영역을 포함할 수도 있다.
Ig 폴리펩타이드의 내용에서, 용어 "불변 영역"은 당업계에 익히 알려져 있는 것으로, Ig 중쇄, 또는 Ig 경쇄의 C-말단 영역을 지칭한다. Ig 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2, 및 CH3 도메인 (및 CH4 도메인, 이때 중쇄는 μ 또는 ε 중쇄임)을 포함한다. 천연 Ig 중쇄에서, CH1, CH2, CH3 (및 존재하는 경우, CH4) 도메인은 중쇄 가변 (VH) 영역 (에 대한 C-말단) 바로 다음부터 시작하고, 길이가 각각 약 100개의 아미노산 내지 약 130개의 아미노산이다. 천연 Ig 경쇄에서, 불변 영역은 경쇄 가변 (VL) 영역 (에 대한 C-말단) 바로 다음부터 시작하고, 길이가 약 100개의 아미노산 내지 120개의 아미노산이다.
"에피토프"는 항체가 결합하는 항원 상의 부위 (예를 들어, MUC1 상의 부위)이다. 에피토프는 단백질의 폴딩 (folding) (예를 들어, 3차 폴딩)에 의해 병치된 인접한 아미노산 또는 비인접한 아미노산 모두로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매에 노출시 유지되는 반면, 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매로 처리시 손실된다. 에피토프는 일반적으로 선형 또는 공간적 입체구조 내에 적어도 3개, 및 보다 일반적으로는 적어도 5개 또는 8-10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 입체구조를 측정하는 방법으로는, 예를 들어, x-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed (1996)]을 참조한다. 수개의 상용 실험실에서 에피토프 맵핑 서비스를 제공한다. 막 결합된 항원과 면역반응성인 항체에 의해 결합된 에피토프는 세포의 표면 상에 (예를 들어, 막관통 단백질의 세포외 영역에) 존재함으로써, 이러한 에피토프들은 세포 표면에 접근가능하고, 용매에 접근가능하고/하거나, 세포 표면에 노출되는 것으로 간주된다.
폴리펩타이드, 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열에 관하여 사용된 "유전적으로 암호화가능한"이라는 말은, 아미노산 서열이 해당 아미노산 서열을 암호화하는 핵산의 전사 및 번역에 의해 생성될 수 있는 아미노산 잔기들로 구성되며, 이 경우 전사 및/또는 번역은 세포에서 또는 무세포 시험관 내 전사/번역 시스템에서 이루어질 수 있음을 의미한다.
용어 "대조군 서열"은 특정 발현 시스템, 예컨대 포유류 세포, 박테리아 세포, 무세포 합성 등에서 작동가능하게 연결된 암호화 서열의 발현을 촉진하는 DNA 서열을 나타낸다. 원핵생물 시스템에 적합한 대조군 서열은, 예를 들어, 프로모터, 선택적으로 작동자 서열, 및 리보좀 결합 부위를 포함한다. 진핵생물 세포 시스템은 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서를 이용할 수 있다.
한 핵산이 또 다른 핵산 서열과 기능적인 관계에 놓일 때 "작동가능하게 연결된다". 예를 들어, 전구서열 또는 분비성 리더 서열에 대한 DNA는, 한 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 전구단백질로서 발현되는 경우에 해당 폴리펩타이드에 대한 DNA에 작동가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는, 암호화 서열의 전사에 영향을 미치는 경우에 해당 암호화 서열에 작동가능하게 연결되거나; 또는 리보좀 결합 부위는 번역의 시작을 촉진하기 위해 위치된 경우에 암호화 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"이라는 말은, 연결되는 DNA 서열이 인접하여 있고, 분비성 리더 서열의 경우에는, 인접하여 리딩 프레임 내에 있다는 것을 의미한다. 연결은 결찰에 의해 또는 증폭 반응을 통해 달성된다. 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커들이 통상적인 실시에 따라 서열들을 연결하는데 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "발현 카세트"는 (예를 들어, 관심대상 작제물로의 결찰과 상용가능한 제한 부위의 사용에 의해, 또는 관심대상 작제물 또는 숙주 세포 게놈으로의 상동 재조합에 의해) 핵산에 삽입될 수 있는 핵산, 일반적으로는 DNA의 세그먼트를 가리킨다. 일반적으로, 핵산 세그먼트는 관심대상 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 카세트 및 제한 부위는 전사와 번역에 적절한 리딩 프레임에서 카세트의 삽입이 용이하게 되도록 설계된다. 발현 카세트는 숙주 세포, 예를 들어, 포유류 숙주 세포에서 관심대상 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 발현을 촉진하는 요소들도 포함할 수 있다. 이러한 요소들은, 이에 제한되지는 않지만, 프로모터, 최소 프로모터, 인핸서, 반응 요소, 종결자 서열, 폴리아데닐화 서열 등을 포함할 수 있다.
"단리된" 항체는 그의 천연 환경의 성분으로부터 확인되어 분리 및/또는 회수된 것이다. 그의 천연 환경의 오염 성분들은 해당 항체에 대한 진단적 또는 치료적 사용을 방해하는 물질들로서, 효소, 호르몬, 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 용질들을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 (1) 로우리 (Lowry) 방법에 의해 측정시, 항체의 중량을 기준으로 90% 초과, 95% 초과, 또는 98% 초과, 예를 들어, 중량 기준 99% 초과까지, (2) 회전 컵 서열분석기 (spinning cup sequenator)의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 은 염색을 사용하는 환원성 또는 비환원성 조건 하에 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의해 균질한 정도까지 정제될 것이다. 단리된 항체는 해당 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않기 때문에, 재조합 세포 내 동일반응계에서 해당 항체를 포함한다. 경우에 따라서는, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
용어 "천연 항체"는 항체의 중쇄 및 경쇄가 만들어져 다세포성 유기체의 면역 시스템에 의해 쌍이 형성된 항체를 지칭한다. 비장, 림프절, 골수 및 혈청이 천연 항체를 생성하는 조직의 예이다. 예를 들어, 항원으로 면역화시킨 제1 동물로부터 단리된 항체 생산 세포에 의해 생산된 항체는 천연 항체이다.
용어 "인간화된 항체" 또는 "인간화된 면역글로불린"은 상응하게 위치된 인간 항체의 아미노산으로 치환된 (예를 들어, 프레임워크 영역, 불변 영역 또는 CDR 내의) 하나 이상의 아미노산을 함유하는 비-인간 (예를 들어, 마우스 또는 토끼) 항체를 나타낸다. 일반적으로, 인간화된 항체들은, 동일한 항체의 비-인간화된 형태와 비교하였을 때, 인간 숙주에서 감소된 면역 반응을 나타낸다. 항체는, 예를 들어, CDR-이식, 베니어링(veneering) 또는 리서페이싱(resurfacing), 사슬 셔플링(shuffling) 등을 비롯하여 해당 분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 인간화될 수 있다. 특정 실시형태에서, 프레임워크 치환은 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기들을 확인하기 위한 CDR과 프레임워크 잔기들의 상호작용 모델링 및 특정 위치에서 흔치 않은 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 서열 비교에 의해 확인된다. 따라서, 상기 기재된 항체들은 해당 분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 인간화될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 항체 분자들은 본원에 제공된 가변 중쇄 영역과 UniProt: P01857-1, 버전 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 불변 영역을 포함하는 중쇄를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본원에 개시된 항체 분자들은 본원에 제공된 가변 경쇄 영역 및 인간 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 특정 실시형태에서, 인간 경쇄 불변 영역은 UniProtKB/Swiss-Prot: P01834.2에 제시된 아미노산을 갖는 인간 카파 경쇄 불변 영역이다. 특정 실시형태에서, 대상 항체에 존재하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역은 돌연변이, 예를 들어 Fc 기능을 조절하기 위한 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, LALAPG 이펙터 기능 돌연변이 (L234A, L235A 및 P329G) 또는 N297A 돌연변이를 도입하여 항체 의존형 세포성 세포독성 (ADCC)을 감소시킬 수 있다. 치환 넘버링은 EU 넘버링 시스템을 기반으로 한다. "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 인덱스"는 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 잔기를 언급할 때 일반적으로 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에 보고된 EU 인덱스). "카바트에서의 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 가리킨다.
용어 "키메라 항체"는 통상적으로 경쇄 및 중쇄 유전자가 서로 다른 종들에 속하는 항체 가변 및 불변 영역 유전자들로부터 유전 공학에 의해 작제된 항체를 지칭한다. 예를 들어, 마우스 단일클론 항체 유전자의 가변 세그먼트는 인간 불변 세그먼트, 예컨대 감마 1 및 감마 3에 결합될 수 있다. 치료적 키메라 항체의 예로는 마우스 항체의 가변 또는 항원 결합 도메인 및 인간 항체의 불변 또는 이펙터 도메인으로 구성된 하이브리드 단백질을 들 수 있지만, 다른 포유류 종의 도메인들도 사용될 수도 있다.
용어 "폴리펩타이드", "펩타이드", 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체 형태를 지칭하기 위해 본원에서 서로 교환하여 사용된다. 달리 명시하지 않는 한, "폴리펩타이드", "펩타이드", 및 "단백질"은 유전적으로 암호화 및 비-암호화된 아미노산, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형 또는 유도체화된 아미노산, 및 변형된 펩타이드 백본을 갖는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 상기 용어는, 이에 제한되는 것은 아니나, 이종성 아미노산 서열을 갖는 융합 단백질, 이종성 및 상동성 리더 서열을 갖는 융합체, (예를 들어, 재조합 숙주 세포에서 생산을 촉진하기 위해) 적어도 하나의 N-말단 메티오닌 잔기를 함유하는 단백질; 면역학적으로 태깅된 단백질; 등을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 항체의 내용에서, 사슬 또는 도메인이 폴리펩타이드를 포함한다는 것은 명백하다.
"천연 아미노산 서열" 또는 "모체 아미노산 서열"은 변형된 아미노산 잔기를 포함시키기 위한 변형 전의 폴리펩타이드의 아미노산 서열을 가리키기 위해 본원에서 서로 교환하여 사용된다.
용어 "아미노산 유사체", "비천연 아미노산" 등은 서로 교환하여 사용될 수 있고, 자연 발생 단백질에서 흔히 발견되는 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y)과 구조 및/또는 전반적인 형상이 유사한 아미노산 유사 화합물들을 포함한다. 아미노산 유사체는 변형된 측쇄 또는 백본을 가진 천연 아미노산들도 포함한다. 아미노산 유사체는 아미노산 유사체의 자연 발생 D-형태 뿐만 아니라 L-형태와 동일한 입체화학을 갖는 아미노산 유사체들도 포함한다. 경우에 따라서는, 아미노산 유사체들은 하나 이상의 천연 아미노산의 백본 구조 및/또는 측쇄 구조를 공유하며, 해당 분자에서 하나 이상의 변형된 기에서 차이가 있다. 이러한 변형으로는, 이에 제한되지는 않지만, 관련 원자 (예컨대, S)에 대한 원자 (예컨대, N)의 치환, 기 (예컨대, 메틸 또는 하이드록실 등) 또는 원자 (예컨대, Cl 또는 Br 등)의 부가, 기의 결실, 공유 결합의 치환 (이중 결합에 대한 단일 결합의 치환 등), 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 유사체는 α-하이드록시 산, 및 α-아미노산 등을 포함할 수 있다.
용어 "아미노산 측쇄" 또는 "아미노산의 측쇄" 등은 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 및 아미노산 유사체를 포함한, 아미노산 잔기의 α-탄소에 부착된 치환기를 나타내는데 사용될 수 있다. 아미노산 측쇄는 본원에 기재된 변형된 아미노산 및/또는 접합의 내용에서 기재된 아미노산 측쇄들도 포함할 수 있다.
용어 "접합된"은 관심대상인 한 분자와 관심대상인 제2 분자를 근위에서 회합시키는, 공유 또는 비-공유, 일반적으로는 공유의 화학적 연결을 일반적으로 지칭한다. 일부 실시형태에서, 작용제는 반감기 연장 모이어티, 표지제 및 치료제로부터 선택된다. 반감기 연장을 위해, 예를 들어, 본 발명의 항체는 개선된 약물동태 프로파일을 제공하도록 (예컨대, PEG화, 과글리코실화(hyperglycosylation) 등에 의해) 선택적으로 변형시킬 수 있다. 혈청 반감기를 향상시킬 수 있는 변형은 관심대상이다.
용어 "탄수화물" 등은 단당류, 이당류, 올리고당류, 및 다당류의 단량체 단위 및/또는 중합체를 지칭하는데 사용될 수 있다. 용어 "당"은 더 작은 탄수화물, 예컨대 단당류, 이당류를 지칭하는데 사용될 수 있다. 용어 "탄수화물 유도체"는 관심대상 탄수화물의 하나 이상의 작용기가 치환 (임의의 적절한 치환기로 대체)되거나, 변형 (임의의 적절한 화학법을 사용하여 또 다른 기로 변환)되거나, 또는 부재하는 (예컨대, 제거되거나 H로 대체된) 화합물을 포함한다. 다양한 탄수화물과 탄수화물 유도체들이 이용가능하고, 대상 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 조정될 수도 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료", "치료하는" 등은 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 의미한다. 상기 효과는 질환 또는 그 증상을 완전히 또는 부분적으로 방지하는 측면에서 예방적일 수 있고/있거나, 질환 및/또는 해당 질환에 기인하는 부작용에 대한 부분적인 또는 완전한 치유의 측면에서 치료적일 수도 있다. 본원에 사용된 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서 질환에 대한 임의의 치료를 포함하고, (a) 질환에 취약할 수도 있지만 아직 해당 질환에 걸린 것으로 진단되지 않은 대상체에서 해당 질환의 발생을 방지하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 즉 해당 질환의 발달을 중지시키는 것; 및 (c) 질환을 완화하는 것, 즉 해당 질환의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다.
본원에서 서로 교환하여 사용되는 용어 "개체", "대상체", "숙주", 및 "환자"는, 이에 제한되는 것은 아니나, 쥐과 (랫트, 마우스), 비-인간 영장류, 인간, 개, 고양이, 유제류 (예를 들어, 말, 소, 양, 돼지, 염소) 등을 포함하는 포유동물을 지칭한다.
"치료적 유효량" 또는 "효과적인 양"은, 질환을 치료하기 위해 포유동물 또는 다른 대상체에 투여될 때, 해당 질환에 대한 이러한 치료가 유효하기에 충분한 대상 항-MUC1 Ab의 양을 가리킨다. "치료적 유효량"은 항-MUC1 Ab, 해당 질환과 그의 중증도 및 치료되는 대상체의 나이, 체중 등에 따라 달라질 것이다.
"생물학적 샘플"은 개체로부터 얻어진 다양한 샘플 유형들을 망라하며, 진단 또는 모니터링 분석에서 사용될 수 있다. 그 정의는 생물학적 기원의 혈액 및 다른 유체 샘플, 고체 조직 샘플, 예컨대 생검 표본 또는 조직 배양물 또는 이들로부터 유래된 세포 및 그 자손을 포함한다. 또한, 정의는 입수 후 임의의 방식으로, 예컨대 시약을 이용한 처리, 가용화, 또는 특정 성분들, 예컨대 폴리뉴클레오타이드에 대한 집적화에 의해 조작된 샘플들도 포함한다. 용어 "생물학적 샘플"은 임상 샘플을 망라하고, 배양 중인 세포, 세포 상청액, 세포 용해물, 혈청, 혈장, 생물학적 유체, 및 조직 샘플들도 포함한다. 경우에 따라서는, 생물학적 샘플은 간세포를 포함할 것이다.
본 발명을 더 기술하기 전에, 본 발명은 기재된 특정 실시형태들로 한정되지 않으며, 물론 변형될 수도 있다는 것을 이해해야 한다. 또한, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 한정되기 때문에, 본원에 사용된 용어들은 단지 특정 실시형태들을 설명하기 위한 것이지 한정하려는 것이 아니다.
값들의 범위가 제공되는 경우, 문맥상 달리 명백하게 언급되지 않는 한, 하한 단위의 10분의 1까지, 해당 범위의 상한과 하한 사이에 있는 각 중간 값과 상기 언급된 범위 내에서 언급된 임의의 다른 값 또는 중간 값들도 본 발명에 포함되는 것으로 이해한다. 이러한 더 작은 범위의 상한과 하한은 더 작은 범위 내에 독립적으로 포함될 수 있으며, 언급된 범위에서 구체적으로 배제된 임의의 한계에 따라 본 발명에 포함된다. 언급된 범위가 한계값 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 포함된 한계값 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위도 본 발명에 포함된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 과학 기술 용어들은 본 발명이 속하는 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동일한 방법과 재료들도 본 발명을 실시하거나 시험하는데 사용될 수 있지만, 바람직한 방법과 재료들을 이제 설명한다. 본원에 언급된 모든 간행물들은 해당 간행물들에 인용된 것과 관련된 방법 및/또는 물질들을 개시하고 설명하기 위해 본원에 참조로 포함된다.
본원 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥상 달리 명백하게 언급하지 않는 한 복수의 지시대상도 포함한다는 점에 유의해야 한다. 따라서, 예를 들어, "하나의 항체"에 대한 언급은 복수의 이러한 항체들도 포함하고, "상기 CDR"은 하나 이상의 CDR 및 당업자에게 공지된 그의 균등물 등에 대한 언급도 포함한다. 또한, 청구범위는 임의의 선택적 요소를 배제하도록 작성될 수 있다. 이와 같이, 이러한 진술은 청구항 요소들의 언급, 또는 "부정적" 제한의 사용과 관련하여 "오직", "단지" 등과 같은 이러한 배타적인 용어의 사용에 대한 선행적인 근거 역할을 하고자 한 것이다.
본원에서 논의된 간행물들은 본 출원의 출원일 전에 개시된 것만이 제공된다. 본원에서 그 어떠한 것들도 본 발명이 선행 발명으로 인해 이러한 간행물을 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 또한, 제공된 공개일은 실제 공개일과 상이할 수 있으며 이것은 독립적으로 확인될 필요가 있다.
상세한 설명
본 발명은 MUC1에 특이적인 항체를 제공한다. 본 발명의 항체의 가변 사슬 폴리펩타이드 중 하나 또는 둘 다를 암호화하는 핵산도 제공되며, 이러한 핵산을 포함하는 세포도 제공된다. 또한, 본 발명의 항체를 포함하는 조성물도 제공되며, 여기에는 경우에 따라서 약학적 조성물도 포함된다. 본 발명의 항체를 제조하고 사용하는 방법도 제공된다. 특정 양태에서, 세포 증식성 질환이 있는 개체에게 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공되는데, 이 경우 항체는 세포 증식성 질환의 비정상적으로 증식하는 세포에 대한 면역 반응, 예를 들어, T 세포 반응을 향상시키기 위해 개체에게 투여된다. 항체는 다양한 진단 및 모니터링 용도에 유용하며, 이것들도 제공된다.
MUC1 항체
상기 개괄된 바와 같이, 본 발명은 항-MUC1 항체를 제공한다.
일부 실시형태에 따르면, 본 발명의 항체는 MUC1에 특이적으로 결합하여, MUC1 결합에 대해 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다:
하기 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) 사슬의 중쇄 CDR 1-3 (HCDR 1-3)을 포함하는 가변 VH 사슬:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTDHTMHWIKQRPGKGLEWMGYFYPRDDSTNYNEKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLRYALDYWGQGTLVTVSS (서열번호 1); 및
하기 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) 사슬의 경쇄 CDR 1-3 (LCDR 1-3)을 포함하는 가변 VL 사슬:
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIYGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYAWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 2);
EIVLTQSPATLLSPGERATLSCRASSSVGSSNLYWYQQKPGQAPRLWIYRSTKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYRWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 3); 또는
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIIGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYSWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 4).
MUC1에 대한 결합에 있어서 제1 항체가 제2 항체와 경쟁하는지의 여부를 판단하기 위한 임의의 적절한 접근법이 사용될 수 있다. 제1 항체가 MUC1에 대한 결합에 대해 제2 항체와 "경쟁"하는지의 여부는 당업계에 공지된 경쟁적 결합 분석을 사용하여 쉽게 판단할 수 있다. 경쟁하는 항체들은, 예를 들어 항체 경쟁 분석을 통해 확인할 수 있다. 예를 들어, 제1 항체 샘플은 고체 지지체에 결합될 수 있다. 그런 다음, 이러한 제1 항체와 경쟁할 수 있을 것으로 의심되는 제2 항체 샘플을 첨가한다. 두 항체들 중 한 항체를 표지시킨다. 상기 표지된 항체와 표지되지 않은 항체가 MUC1 상의 별도의 개별 부위에 결합하는 경우라면, 상기 표지된 항체는 의심되는 경쟁 항체의 존재 여부에 상관없이 동일한 수준으로 결합할 것이다. 그러나, 상호작용 부위가 동일하거나 중첩되는 경우라면, 표지되지 않은 항체가 경쟁하게 될 것이고, MUC1에 결합된 표지된 항체의 양이 줄어들게 될 것이다. 표지되지 않은 항체가 과도하게 존재하는 경우라면, 표지된 항체가 결합하는 경우가 있다손 치더라도 매우 적을 것이다.
본 발명의 목적상, 경쟁하는 항체들은 MUC1에 대한 항체의 결합을 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상 또는 약 99% 이상 감소시키는 항체이다. 이러한 경쟁 분석을 수행하는 절차의 자세한 내용들은 당업계에 잘 알려져 있다. 이러한 분석은 정제된 항체를 사용하여 정량적으로 수행될 수 있다. 표준 곡선은 하나의 항체를 자체에 대해 적정하여 확립할 수 있는데, 즉 동일한 항체를 표지와 경쟁자 모두에 사용한다. 표지된 항체의 항원에 대한 결합을 억제하는 표지되지 않은 경쟁 항체의 능력도 적정할 수 있다. 상기 결과를 플롯팅할 수 있고, 원하는 정도의 결합 억제를 달성하는데 필요한 농도를 비교할 수 있다.
일부 실시형태에 따르면, 본 발명의 항체는 MUC1에 특이적으로 결합하며 다음을 포함한다:
하기 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) 사슬의 중쇄 CDR 1-3 (HCDR 1-3)을 포함하는 가변 VH 사슬:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTDHTMHWIKQRPGKGLEWMGYFYPRDDSTNYNEKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLRYALDYWGQGTLVTVSS (서열번호 1); 및
하기 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) 사슬의 경쇄 CDR 1-3 (LCDR 1-3)을 포함하는 가변 VL 사슬:
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIYGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYAWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 2);
EIVLTQSPATLLSPGERATLSCRASSSVGSSNLYWYQQKPGQAPRLWIYRSTKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYRWSPPTFGQGTKLEIK(서열번호 3); 또는
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIIGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYSWSPPTFGQGTKLEIK(서열번호 4).
HCDR 1-3과 LCDR 1-3은 초티아, 카바트 또는 IMGT 명명법에 의해 정의될 수 있다. 열거된 명명법에 따라 정의된 바와 같이 본원에 개시된 항-MUC1 항체의 HCDR 1-3은 하기와 같을 수 있다:
Figure pct00002
본원에 개시된 항-MUC1 항체의 LCDR 1-3은 표 3-5에 열거된 명명법에 따라 정의될 수 있다.
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
특정 실시형태에서, 항-MUC1 항체의 VH 사슬은 본원에 제시된 바와 같은 HCDR 1-3을 포함하고, 항-MUC1 항체의 VL 사슬은 LCDR 1-3을 포함하며, 여기서 카바트 정의에 따라,
LCDR1은 아미노산 서열 RASSSVG/SSSYLY (서열번호 41)를 포함하고;
LCDR2는 아미노산 서열 G/RT/SS/TN/KLAS (서열번호 42)를 포함하며;
LCDR3은 아미노산 서열 HQYA/R/SWSPPT (서열번호 43)를 포함한다.
특정 실시형태에서, 항-MUC1 항체의 VH 사슬은 본원에 제시된 HCDR 1-3을 포함하고, 서열번호 1에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 항-MUC1 항체의 VH 사슬과 서열번호 1 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 외부의 영역, 예를 들어 하나 이상의 프레임워크 영역 (FR), 예를 들어 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4로 제한될 수 있다.
특정 실시형태에서, 항-MUC1 항체의 VL 사슬은 본원의 표 3에 기재된 LCDR 1-3을 포함하고, 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항-MUC1 항체의 VL 사슬은 본원의 표 4에 기재된 LCDR 1-3을 포함하고, 서열번호 3에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항-MUC1 항체의 VL 사슬은 본원의 표 5에 기재된 LCDR 1-3을 포함하고, 서열번호 4에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 항-MUC1 항체의 VL 사슬과 서열번호 2, 3 및 4 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 외부의 영역, 예를 들어 하나 이상의 프레임워크 영역 (FR), 예를 들어 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4로 제한될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 항-MUC1 항체는 a) 서열번호 1에 기재된 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 포함하는 중쇄; 및 b) 서열번호 2, 3 또는 4에 기재된 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있다.
본 발명의 항-MUC1 항체는, ELISA로 측정시, 약 0.4-1 nM, 예컨대 0.5-0.9 nM, 0.6-0.8 nM 또는 0.65-0.75 nM의 EC50으로 MUC-1에 결합할 수 있다. 최대 반응의 절반 (예: 최대 형광 강도의 절반)을 제공하는 항체의 농도를 EC50으로 측정한다. MUC-1은 실시예 1에 개시된 바와 같이 20mer 글리코실화된 MUC1 펩타이드일 수 있다.
본 발명의 항-MUC1 항체는, 실시예 1에 개시된 바와 같이, 20mer MUC1 글리코실화 펩타이드에는 결합할 수 있지만 재조합 60mer MUC1 비-글리코실화 펩타이드에는 결합하지 않는다.
본 발명의 항-MUC1 항체는 암성 조직에는 결합할 수 있지만, 정상 조직에 대한 결합은 나타내지 않을 수 있다 (예를 들어, 면역조직화학으로 측정시 미미한 결합 또는 면역조직화학으로 검출되지 않는 결합). 예를 들어, 본원에 기재된 항-MUC1 항체는 암성 세포가 있는 인간 위, 유방 및/또는 폐 조직에 결합할 수 있지만, 암성 세포가 없는 인간 위, 유방 및/또는 폐 조직에는 검출가능한 결합을 나타내지 않는다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 항-MUC1 항체의 VH 영역은 하기 핵산 서열에 대해 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된다:
GAGGTCCAGCTGGTACAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCTACAGTGAAAATCTCCTGCAAGGTTTCTGGATACACCTTCACCGACCATACCATGCACTGGATCAAACAGCGACCTGGAAAAGGGCTTGAGTGGATGGGATACTTCTACCCTAGAGATGATTCCACAAATTACAACGAGAAGTTCAAGGGCAGAGTCACCCTTACCGCGGACAAATCTACAGACACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGTGGTCTTCGATACGCTCTTGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (서열번호 19)
특정 실시형태에서, 본 발명의 항-MUC1 항체의 VL 영역은 하기 핵산 서열에 대해 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된다:
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTTCAAGTGTTAGCAGCAGCTACTTATACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCTGGATCTATGGTACCTCCAACCTTGCCTCCGGCGTCCCAGCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTACACTCTCACCATCAGCTCCCTGGAGCCTGAAGATGCGGCAGTTTATTACTGTCACCAATACGCCTGGTCCCCGCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAAATCAAA (서열번호 38);
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTTCAAGTGTTGGCAGCAGCAACTTATACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCTGGATCTATAGGTCCACCAAACTTGCCTCCGGCGTCCCAGCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTACACTCTCACCATCAGCTCCCTGGAGCCTGAAGATGCGGCAGTTTATTACTGTCACCAATACAGATGGTCCCCGCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAAATCAAA (서열번호 39); 또는
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTTCAAGTGTTAGCAGCAGCTACTTATACTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCTGGATCATTGGTACCTCCAACCTTGCCTCCGGCGTCCCAGCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTACACTCTCACCATCAGCTCCCTGGAGCCTGAAGATGCGGCAGTTTATTACTGTCACCAATACTCCTGGTCCCCGCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGTTGGAAATCAAA (서열번호 40).
항체는 US20120141375A1호, US20160145343A1호 (전문이 여하의 모든 목적을 위해 본원에 참고로 포함됨)에 기술된 임의의 방법을 수행하기 위한 것을 비롯한 다양한 연구, 진단 및 치료 용도로 사용된다.
대상 항체는 MUC1 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는데, 이 경우 에피토프는 하기 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 MUC1 항원 내의 아미노산 잔기들을 포함한다:
MTPGTQSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQGQDVTLAPATEPASGSAATWGQDVTSVPVTRPALGSTTPPAHDVTSAPDNKPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDNRPALGSTAPPVHNVTSASGSASGSASTLVHNGTSARATTTPASKSTPFSIPSHHSDTPTTLASHSTKTDASSTHHSSVPPLTSSNHSTSPQLSTGVSFFFLSFHISNLQFNSSLEDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKQGGFLGLSNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAATSANL (서열번호 20).
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 항-MUC1 항체에 의해 결합된 MUC1 에피토프는 글리코실화된다. 특정 실시형태에서, 본원에 개시된 항-MUC1 항체에 의해 결합된 MUC1 에피토프는 폐외 선암종 세포주 및 폐 상피 세포에 의해 발현되는 MUC1 상에 존재한다.
대상 항체는 MUC1에 대한 높은 친화도 결합을 나타낸다. 예를 들어, 대상 항체는 적어도 약 10-7 M, 적어도 약 10-8 M, 적어도 약 10-9 M, 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M, 또는 적어도 약 10-12 M, 또는 10-12 M 초과의 친화도로 MUC1에 결합한다. 대상 항체는 약 10-7 M 내지 약 10-8 M, 약 10-8 M 내지 약 10-9 M, 약 10-9 M 내지 약 10-10 M, 약 10-10 M 내지 약 10-11 M, 또는 약 10-11 M 내지 약 10-12 M, 또는 10-12 M 초과의 친화도로 MUC1 상에 존재하는 에피토프에 결합한다.
본 발명의 항-MUC1 항체는, 경우에 따라서는, 세포 표면 상에서 MUC1을 발현하는 세포에서 아폽토시스를 유도할 수도 있다.
"MUC1 항원" 또는 "MUC1 폴리펩타이드"는 서열번호 20에 대해 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역글로불린"은 면역글로불린 유전자에 의해 실질적으로 암호화되는 하나 이상의 폴리펩타이드로 이루어진 단백질을 가리킨다. 알려진 인간 면역글로불린 유전자로는 카파, 람다, 알파 (IgA1 및 IgA2), 감마 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타, 엡실론 및 뮤 불변 영역 유전자; 및 다양한 면역글로불린 가변 영역 유전자들을 포함한다. 전장 면역글로불린 경쇄 (약 25 kD 또는 214개의 아미노산)는 N-말단에서 가변 영역 유전자 (약 110개의 아미노산)에 의해 암호화되며 C-말단에서 카파 또는 람다 불변 영역에 의해 암호화된다. 전장 면역글로불린 중쇄 (약 50 kD 또는 446개의 아미노산)은 N-말단에서 가변 영역 유전자 (약 116 아미노산)에 의해 암호화되며 C-말단에서 상기 언급한 다른 불변 영역 유전자들 중 하나, 예컨대 (약 330개의 아미노산을 암호화하는) 감마에 의해 암호화된다. 일부 실시형태에서, 대상 항체는 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄를 포함하지 않는 대신, 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 단편들은 별개의 폴리펩타이드 사슬들 상에 함유되고; 다른 실시형태에서, 항원 결합 단편들은 하나의 폴리펩타이드 사슬 내에 함유된다. 용어 "항원 결합 단편"은, 상기 기재된 바와 같이, MUC1에 특이적으로 결합할 수 있는 전장 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 결합 단편의 예로는 (i) Fab 단편 (VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편); (ii) F(ab')2 단편 (힌지 영역에서 이황화 다리에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편); (iii) Fd 단편 (VH 및 CH1 도메인으로 이루어짐); (iv) Fv 단편 (항체의 단일 아암(arm)의 VH 및 VL 도메인으로 이루어짐); (v) dAb 단편 (VH 도메인으로 이루어짐); (vi) 단리된 CDR; (vii) 단일 사슬 Fv (scFv) (VH 및 VL 도메인 쌍이 1가 분자를 형성하도록 재조합 수단을 사용해 합성 링커에 의해 결합된 항체 단일 아암의 VH 및 VL 도메인으로 이루어짐); (viii) 이원항체 (2개의 scFv로 이루어는데, 여기서 VH 및 VL 도메인이 결합되어서, 이들은 쌍을 형성하여 1가 분자를 형성하지 않고; scFv의 각 하나의 VH가 다른 scFv의 VL 도메인과 쌍을 형성하여 2가 분자를 형성함); (ix) 이중특이적 항체 (각각 서로 다른 에피토프에 결합하는, 적어도 2개의 항원 결합 영역으로 이루어짐)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상 항체 단편은 Fab 단편이다. 일부 실시형태에서, 대상 항체 단편은 단일 사슬 항체 (scFv)이다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 재조합 또는 변형된 항체, 예를 들어, 키메라, 인간화, 탈면역화 항체 또는 시험관 내에서 생성된 항체이다. 용어 "재조합" 또는 "변형된" 항체는 본원에서 사용된 바와 같이 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 단리된 모든 항체들, 예컨대 (i) 숙주 세포에 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체; (ii) 재조합, 조합적 항체 라이브러리로부터 단리된 항체; (iii) 인간 면역글로불린 유전자를 유전자이식한 동물 (예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체; 또는 (iv) 인간 면역글로불린 유전자 서열의 다른 DNA 서열로의 스플라이싱을 수반하는 임의의 다른 방법에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함하고자 한다. 이러한 재조합 항체는 인간화, CDR 이식, 키메라, 탈면역화 항체, 및 시험관 내에서 생성된 항체를 포함하고; 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 불변 영역을 선택적으로 포함할 수 있다.
전장 이중특이적 항체는, 예를 들어, 시험관 내 무세포 환경에서 뚜렷이 구분되는 특이성을 갖는 2개의 항체 반분자의 이종이량체 형성을 촉진하도록 각 반분자의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하거나 또는 공동 발현을 사용함으로써, 2개의 단일특이적 2가 항체 사이의 Fab 아암 교환 (또는 반분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있다. Fab 아암 교환 반응은 CH3 도메인의 이황화 결합 이성질화 반응과 해리-결합의 결과이다. 모체 단일특이적 항체의 힌지 영역에서 중쇄 이황화 결합은 감소된다. 생성된 모체 단일특이적 항체 중 한 항체의 유리 시스테인은 제2 모체 단일특이적 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화 결합을 형성하고, 그와 동시에 모체 항체의 CH3 도메인은 해리-결합에 의해 방출되어 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화보다 이종이량체화를 촉진하도록 조작될 수 있다. 생성된 산물은 각각 별개의 에피토프에 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 반분자를 갖는 이중특이적 항체이다.
"놉-인-홀 (knob-in-hole)" 전략 (예를 들어, PCT 공보 WO 2006/028936호 참조)을 사용하여 전장 이중특이적 항체를 생성할 수도 있다. 간략히 설명하면, 인간 IgG에서 CHS 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산들을 CH3 도메인 상호작용에 영향을 미치는 위치에서 돌연변이시켜 이종이량체 형성을 촉진토록 할 수 있다. 작은 측쇄 (홀)을 갖는 아미노산을 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄로 도입하고 큰 측쇄 (놉)를 갖는 아미노산은 제2 항원에 특이적으로 결합하는 중쇄로 도입한다. 두 항체를 공동 발현시킨 후, "홀"을 갖는 중쇄와 "놉"을 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 놉과 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환쌍은 T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T3945/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S/L368A/Y407V이다 (제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로 표현됨).
미국 특허 공보 US2010/0015133호; 미국 특허 공보 US2009/0182127호; 미국 특허 공보 U82010/028637호 또는 미국 특허 공보 US2011/0123532호에 기재된 바와 같이, 제1 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기들과 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기들을 치환하여 정전기적 상호작용을 이용하는 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략들도 사용될 수 있다. 다른 전략으로, 이종이량체화는 미국 특허 공보 US2012/0149876호 또는 미국 특허 공보 US2013/0195849호에 기재된 바와 같이, 다음 치환에 의해 촉진될 수 있다 (제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로 표현됨): L351 Y/F405A/Y407V/T394W, T366I/K392M/T394W/F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W/F405A/Y407V, L351Y/Y407A/T366A/K409F, L351Y/Y407A/T366V/K409F, Y407A/T366A/K409F 또는 T350V/L351Y/F405A/Y407V, T350V/T366L/K392L/T394W.
또한, 단일 사슬 이중특이적 항체도 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 단일 사슬 이중특이적 항체는 이중특이적 scFv이다. 대상 항체는 인간화될 수 있다. 불변 영역(들)이 존재한다면, 실질적으로 또는 전적으로 인간 면역글로불린으로부터 유래될 수 있다.
인간화된 항체를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 인간 가변 도메인 프레임워크로의 마우스 CDR의 치환은 올바른 공간적 배향을 유지할 수 있는데, 예를 들어, 인간 가변 도메인 프레임워크는 해당 CDR이 기원하는 마우스 가변 프레임워크와 동일하거나 유사한 입체구조를 채택한다. 이것은 해당 CDR이 유래한 쥐과의 가변 프레임워크 도메인과 서열 동일성 정도가 높은 프레임워크 서열을 갖는 인간 항체 유래의 인간 가변 도메인을 얻음으로써 달성될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 가변 프레임워크 영역은 동일한 또는 상이한 인간 항체 서열로부터 유래될 수 있다. 인간 항체 서열은 자연 발생 인간 항체의 서열일 수 있거나 또는 여러가지 인간 항체의 컨센서스 서열일 수도 있다.
쥐과의 공여체 면역글로불린 및 적절한 인간 수용체 면역글로불린의 상보성 결정 영역이 확인되면, 다음 단계는 이러한 구성요소들의 잔기들이 존재한다면, 어떠한 잔기들을 치환해야 생성된 인간화된 항체의 성질이 최적화될 수 있을지를 결정하는 일이다. 일반적으로, 인간 아미노산 잔기를 쥐과의 아미노산 잔기로 치환하는 일은 최소화되어야 하는데, 그 이유는 쥐과 잔기들의 도입이 인간에서는 항체가 인간-항-마우스-항체 (HAMA) 반응을 유발할 위험을 증가시키기 때문이다. 당업계에 알려진 면역 반응을 측정하는 방법들을 수행하여 특정 환자에서 또는 임상 시험 동안에 HAMA 반응을 모니터링할 수 있다. 인간화된 항체를 투여받은 환자들은 상기 요법의 시작시와 투여 전과정에 걸쳐 면역원성 평가를 받을 수 있다. HAMA 반응은, 예를 들어, 표면 플라스몬 공명 기술 (BIACORE) 및/또는 고체상 ELISA 분석을 비롯한, 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 환자의 혈청 샘플에서 인간화된 치료 시약에 대한 항체를 검출함으로써 측정된다. 다수의 실시형태에서, 인간화된 대상 항체는 인간 대상체에서 HAMA 반응을 실질적으로 유도하지 않는다.
치환을 위해서, 인간 가변 영역 프레임워크 잔기들의 특정 아미노산은 CDR 입체구조 및/또는 항원으로의 결합에 대한 이들의 가능한 영향을 기초로 하여 선택된다. 쥐과의 CDR 영역과 인간 가변 프레임워크 영역의 비천연 병치는 비천연 입체구조적 제한을 초래할 수 있는데, 이는 특정 아미노산 잔기들의 치환에 의해 수정되지 않는 한, 결합 친화도의 손실로 이어지게 된다. 치환을 위한 아미노산 잔기의 선택은, 부분적으로는, 컴퓨터 모델링에 의해 결정될 수 있다. 면역글로불린 분자의 3차원 이미지를 생성하기 위한 컴퓨터 하드웨어 및 소프트웨어는 해당 분야에 공지되어 있다. 일반적으로, 면역글로불린 사슬 또는 이의 도메인에 대해 해독된 구조들로부터 시작하여 분자 모델을 생성한다. 모델링되는 사슬들을 해독된 3차원 구조의 사슬 또는 도메인과의 아미노산 서열 유사성에 대해 비교하고, 가장 높은 서열 유사성을 나타내는 사슬 또는 도메인을 분자 모델의 구성을 위한 출발점으로 선택한다. 적어도 50%의 서열 동일성을 공유하는 사슬 또는 도메인을 모델링을 위해 선택하고, 바람직하게는 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상의 서열 동일성을 공유하는 것들을 모델링을 위해 선택한다. 상기 해독된 출발 구조들은, 모델링되고 있는 면역글로불린 사슬 또는 도메인 내의 실제 아미노산들과 출발 구조의 아미노산들 간의 차이를 허용하도록 변형시킨다. 이후, 상기 변형된 구조들을 복합 면역글로불린으로 조립한다. 마지막으로, 에너지 최소화에 의해서, 그리고 모든 원자들이 서로 적절한 거리 내에 있고 결합 길이와 각도가 화학적으로 허용가능한 한계 내에 있음을 검증하여 상기 모델을 정밀하게 한다.
상기 카바트에 의해 정의된 바와 같이, 프레임워크 잔기들이 상기 초티아에 의해 정의된 구조적 루프 잔기를 구성하는 경우, 마우스 항체에 존재하는 아미노산들이 인간화된 항체로의 치환을 위해 선택될 수 있다. "CDR 영역에 인접한" 잔기들은, 인간화된 면역글로불린 사슬의 1차 서열 내의 하나 이상의 CDR에 바로 인접한 위치에서, 예컨대 카바트에 의해 정의된 CDR 또는 초티아에 의해 정의된 CDR에 바로 인접한 위치의 아미노산 잔기들을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Chothia and Lesk JMB 196:901 (1987)] 참조). 이러한 아미노산들은 특히 CDR 내의 아미노산들과 상호작용할 가능성이 크고, 수용체로부터 선택된다면, 공여체 CDR을 뒤틀어 친화도를 감소시킬 가능성이 크다. 더욱이, 인접한 아미노산들은 항원과 직접적으로 상호작용할 수 있어서 (Amit et al., Science, 233:747 (1986)), 공여체로부터 이러한 아미노산들을 선택하는 것이 본래의 항체에서 친화도를 제공하는 모든 항원 접촉을 유지하는데 바람직할 수도 있다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 scFv 다량체를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 대상 항체는 scFv 이량체 (예를 들어, 2개의 탠덤 scFv를 포함함 (scFv2)), scFv 삼량체 (예를 들어, 3개의 일렬 scFv를 포함함 (scFv3)), scFv 사량체 (예를 들어, 4개의 탠덤 scFv를 포함함 (scFv4))이거나, 또는 4개 초과의 scFv의 다량체 (예를 들어, 탠덤)이다. scFv 단량체는 길이가 약 2개의 아미노산 내지 약 10개의 아미노산, 예를 들어, 길이가 2개의 aa, 3개의 aa, 4개의 aa, 5개의 aa, 6개의 aa, 7개의 aa, 8개의 aa, 9개의 aa, 또는 10개의 aa의 링커를 통해 탠덤으로 연결될 수 있다. 적합한 링커는, 예를 들어, (Gly)x (여기서, x는 2 내지 10의 정수의 글리신-세린 중합체 등임)를 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체를 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커를 통해 작용제에 접합시킨다. 대상 항체를 사용하기에 적합한 링커는 "유연성 링커"를 포함한다. 링커 분자가 존재하는 경우, 이는 일반적으로 연결된 영역 사이에 약간의 유연한 움직임을 허용하기에 충분한 길이이다. 링커 분자는 일반적으로 약 6-50개 원자로 된 길이이다. 또한, 링커 분자는, 예를 들어 아릴 아세틸렌, 2-10개의 단량체 단위를 함유하는 에틸렌 글리콜 올리고머, 디아민, 이산, 아미노산, 또는 이들의 조합일 수 있다. 폴리펩타이드에 결합할 수 있는 다른 링커 분자들도 본 개시내용을 고려하여 사용할 수 있다.
일부 실시형태에 따르면, 링커는 중성 pH (혈류 pH 7.3-7.5)에서는 안정하지만 표적 세포 (예를 들어, 암 세포)의 약산성 엔도솜 (pH 5.0-6.5) 및 리소좀 (pH 4.5-5.0)으로 내재화 시에 가수분해를 거치게 되는 화학적으로 불안정한 링커, 예컨대 산으로 절단가능한 링커이다. 화학적으로 불안정한 링커로는 히드라존계 링커, 옥심계 링커, 카르보네이트계 링커, 에스터계 링커 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 특정 실시형태에서, 링커는 효소 불안정성 링커, 예컨대 혈류에서는 안정하지만, 예를 들어, 표적 세포 (예를 들어, 암 세포)의 리소좀에서 리소좀 프로테아제 (예컨대 카텝신 또는 플라스민)에 의해, 표적 세포로의 내재화 시에 효소적 절단을 거치게 되는 효소 불안정성 링커이다. 효소 불안정성 링커는 펩타이드 결합을 포함하는 링커, 예컨대 디펩타이드계 링커, 예컨대 발린-시트룰린 (VC) 링커, 예컨대 말레이미도카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질 (MC-vc-PAB) 링커, 발릴-알라닐-파라-아미노벤질옥시 (Val-Ala-PAB) 링커 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 면역글로불린의 불변 영역 (예를 들어, Fc 영역)을 포함한다. Fc 영역이 존재하는 경우, 이는 인간 Fc 영역일 수 있다. 불변 영역이 존재하는 경우라면, 항체는 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 모두 함유할 수 있다. 본원에 기재된 항체로는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 비롯한 모든 유형의 불변 영역과, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 임의의 아이소타입을 갖는 항체를 포함한다. 적합한 중쇄 Fc 영역의 예로는 인간 아이소타입 IgG1 Fc를 들 수 있다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 대상 항체 (예를 들어, 인간화된 대상 항체)는 하나 이상의 클래스 또는 아이소타입의 서열을 포함할 수 있다. 항체는 2개의 경쇄와 2개의 중쇄를 함유하는 사량체로서, 별개의 중쇄, 경쇄로서, Fab, Fab' F(ab')2 및 Fv로서, 또는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 스페이서를 통해 연결되는 단일 사슬 항체로서 발현될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 항-MUC1 항체는 Fc 영역에 도입되는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 아미노산 치환 중 하나 이상은 Fc 영역의 위치 239, 298, 326, 330 및 332에 존재할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 항-MUC1 항체는 Fc 영역에 도입되는 다음 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함할 수 있다: I332E; S239D/A330L/I332E; S239D/S298A/I332E; S239D/K326T/I332E; S239D/S298A/K326T/I332E; 또는 S239D/A330L/I332E/D356E/L358M.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 카르복시 말단에 유리 티올 (-SH) 기를 포함하는데, 이 경우 상기 유리 티올 기는 해당 항체를 제2 폴리펩타이드 (예를 들어, 또 다른 항체, 대상 항체를 포함), 스캐폴드, 담체 등에 부착시키는데 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 하나 이상의 비자연 발생적 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 비자연적으로 암호화된 아미노산은 카르보닐 기, 아세틸 기, 아미노옥시 기, 히드라진 기, 히드라지드 기, 세미카르바지드 기, 아지드 기 또는 알킨 기를 포함한다. 비자연 발생적 아미노산을 포함시키면 중합체, 제2 폴리펩타이드, 스캐폴드 등으로의 연결을 제공할 수 있다. 이러한 비자연 발생적 아미노산의 예로는 N-아세틸글루코사미닐-L-세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌, 및 O-포스포티로신을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 관심대상인 부착된 모이어티, 예컨대 검출가능한 표지, 약물, 반감기 연장 모이어티 등을 갖는 항-MUC1 항체도 제공한다. 항체의 변형은 다양한 합성 및/또는 재조합 방법에 의해 달성될 수 있다. 항체에 부착된 모이어티(들)은 광범위하게 다양한 기능 또는 특징들 중 하나 이상을 제공할 수 있다. 예시의 모이어티로는 검출가능한 표지 (예를 들어, 염료 표지 (예컨대, 발색단, 형광단), 생물리학적 프로브 (회전 표지, 핵 자기 공명 (NMR) 프로브), 형광 공명 에너지 전달 (FRET)-유형 표지 (예를 들어, FRET 쌍의 적어도 하나의 구성원, 형광단/퀸처(quencher) 쌍의 적어도 하나의 구성원을 포함), 생체발광 공명 에너지 전달 (BRET)-유형 표지 (예를 들어, BRET 쌍의 적어도 하나의 구성원), 면역검출가능한 태그 (예를 들어, FLAG, His(6) 등); 수용성 중합체 (예를 들어, PEG화); (예를 들어, 친화도 크로마토그래피에 의한 단리 (예를 들어, FLAG 에피토프의 부착)를 촉진하기 위한) 정제 태그; 막 국소화 도메인 (예를 들어, 지질 또는 글리코포스파티딜이노시톨 (GPI)-유형 앵커); (예를 들어, 선택적 부탁을 비롯한, 표면으로의 폴리펩타이드의 부착을 용이하게 하기 위한) 고정화 태그; (예를 들어, 항체로의 약물의 부착을 통해, 약물 표적화를 용이하게 하기 위한) 약물 등을 포함한다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 중합체 (예를 들어, 폴리펩타이드 이외의 중합체)에 (예를 들어, 공유) 연결된다. 적합한 중합체로는, 예를 들어, 생체적합성 중합체, 및 수용성의 생체적합성 중합체를 포함한다. 적합한 중합체로는 합성 중합체 및 자연 발생적 중합체를 포함한다. 적합한 중합체로는, 예를 들어, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리알킬렌, 폴리알케닐렌 또는 폴리옥시알킬렌 중합체 또는 분지형 또는 비분지형 다당류, 예를 들어, 동종- 또는 이종-다당류를 포함한다. 적합한 중합체는, 예를 들어, 에틸렌 비닐 알콜 공중합체 (흔히 일반명 EVOH 또는 상표명 EVAL로 공지되어 있음); 폴리부틸메타크릴레이트; 폴리(하이드록시발러레이트); 폴리(L-락트산); 폴리카프로락톤; 폴리(락티드-코-글리콜리드); 폴리(하이드록시부티레이트); 폴리(하이드록시부티레이트-코-발러레이트); 폴리디옥사논; 폴리오르토에스터; 폴리무수물; 폴리(글리콜산); 폴리(D,L-락트산); 폴리(글리콜산-코-트리메틸렌 카르보네이트); 폴리포스포에스터; 폴리포스포에스터 우레탄; 폴리(아미노산); 시아노아크릴레이트; 폴리(트리메틸렌 카르보네이트); 폴리(이미노카르보네이트); 코폴리(에테르-에스터) (예를 들어, 폴리(에틸렌 옥시드)-폴리(락트산) (PEO/PLA) 공중합체); 폴리알킬렌 옥살레이트; 폴리포스파젠; 생체분자, 예컨대 피브린, 피브리노겐, 셀룰로스, 전분, 콜라겐 및 히알루론산; 폴리우레탄; 실리콘; 폴리에스터; 폴리올레핀; 폴리아이소부틸렌 및 에틸렌-알파올레핀 공중합체; 아크릴 중합체 및 공중합체; 비닐 할라이드 중합체 및 공중합체, 예컨대 폴리비닐 클로라이드; 폴리비닐 에테르, 예컨대 폴리비닐 메틸 에테르; 폴리비닐리덴 할라이드, 예컨대 폴리비닐리덴 플루오라이드 및 폴리비닐리덴 클로라이드; 폴리아크릴로니트릴; 폴리비닐 케톤; 폴리비닐 방향족, 예컨대 폴리스티렌; 폴리비닐 에스터, 예컨대 폴리비닐 아세테이트; 비닐 단량체 서로에 대한 공중합체와 비닐 단량체와 올레핀의 공중합체, 예컨대 에틸렌-메틸 메타크릴레이트 공중합체, 아크릴로니트릴-스티렌 공중합체, ABS 수지, 및 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체; 폴리아미드, 예컨대 Nylon 66 및 폴리카프로락탐; 알키드 수지; 폴리카르보네이트; 폴리옥시메틸렌; 폴리이미드; 폴리에테르; 에폭시 수지; 폴리우레탄; 레이온; 레이온-트리아세테이트; 셀룰로스; 셀룰로스 아세테이트; 셀룰로스 부티레이트; 셀룰로스 아세테이트 부티레이트; 셀로판; 셀룰로스 니트레이트; 셀룰로스 프로피오네이트; 셀룰로스 에테르; 무정형 테플론(Teflon); 폴리(에틸렌 글리콜); 및 카르복시메틸 셀룰로스를 포함한다.
적합한 합성 중합체는 비치환 또는 치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(프로필렌글리콜) 폴리(비닐알콜), 및 이들의 유도체, 예를 들어, 치환된 폴리(에틸렌글리콜), 예컨대 메톡시폴리(에틸렌글리콜), 및 이들의 유도체를 포함한다. 적합한 자연 발생적 중합체는, 예를 들어, 알부민, 아밀로스, 덱스트란, 글리코겐, 및 이들의 유도체를 포함한다.
적합한 중합체는 500 Da 내지 50000 Da, 예를 들어, 5000 Da 내지 40000 Da, 또는 25000 내지 40000 Da의 범위의 평균 분자량을 가질 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 대상 항체가 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG) 또는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체를 포함하는 경우, PEG 또는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체는 약 0.5 킬로달톤 (kDa) 내지 1 kDa, 약 1 kDa 내지 5 kDa, 5 kDa 내지 10 kDa, 10 kDa 내지 25 kDa, 25 kDa 내지 40 kDa, 또는 40 kDa 내지 60 kDa의 범위의 분자량을 가질 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 PEG 중합체에 공유 결합된다. 일부 실시형태에서, 대상 scFv 다량체는 PEG 중합체에 공유 결합된다. 단백질에 접합시키기에 적합한 PEG는 일반적으로 실온에서 물에 가용성이고, 일반식 R(O-CH2-CH2)nO-R (여기서, R은 수소 또는 보호기, 예컨대 알킬 또는 알카놀 기이고, n은 1 내지 1000의 정수임)을 가진다. R이 보호기인 경우, 이것은 일반적으로 1 내지 8개의 탄소를 갖는다. 대상 항체에 접합된 PEG는 선형 또는 분지형일 수 있다. 분지형 PEG 유도체에는 "별형(star)-PEG" 및 다중-아암 PEG가 포함된다.
대상 항체는 글리코실화될 수 있는데, 예를 들어, 대상 항체는 공유 결합된 탄수화물 또는 다당류 모이어티를 포함할 수 있다. 항체의 글리코실화는 통상적으로 N-결합되거나 또는 O-결합된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 추가는 해당 아미노산 서열이 N- 또는 O-결합된 글리코실화 부위를 함유하도록 해당 아미노산 서열을 변화시킴으로써 적절히 달성된다. 이와 유사하게, 글리코실화 부위의 제거는 항체 고유의 글리코실화 부위 내의 아미노산 변화에 의해 달성될 수 있다.
대상 항체는, 예를 들어, 글루타르알데하이드, 동종이기능성 가교 링커, 또는 이종이기능성 가교 링커를 사용하여 제2 모이어티 (예를 들어, 지질, 대상 항체 이외의 폴리펩타이드, 합성 중합체, 탄수화물 등)에 공유 결합시킬 수 있다. 글루타르알데하이드는 아미노 모이어티를 통해 폴리펩타이드에 가교 결합된다. 동종이기능성 가교 링커 (예를 들어, 동종이기능성 이미도에스터, 동종이기능성 N-하이드록시숙신이미딜 (NHS) 에스터, 또는 동종이기능성 설프히드릴 반응성 가교 링커)는 2개 이상의 동일한 반응성 모이어티를 함유하고, 연결되는 폴리펩타이드의 혼합물을 함유하는 용액에 가교 링커를 첨가하는 1단계 반응 절차에서 사용할 수 있다. 동종이기능성 NHS 에스터 및 이미도 에스터는 아민 함유 폴리펩타이드에 가교 결합된다. 약알칼리성 pH에서, 이미도에스터는 1차 아민에만 반응하여 이미도아미드를 형성하고, 가교 결합된 폴리펩타이드의 전체적인 전하는 영향을 받지 않는다. 동종이기능성 설프히드릴 반응성 가교 링커에는 비스말레이미드헥산 (BMH), 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠 (DFDNB), 및 1,4-디-(3',2'-피리딜디티오)프로피노아미도 부탄 (DPDPB)이 포함된다.
이종이기능성 가교 링커는 2개 이상의 서로 다른 반응성 모이어티 (예를 들어, 아민 반응성 모이어티 및 설프히드릴 반응성 모이어티)를 가져, 아민 또는 설프히드릴 반응성 모이어티를 통해 폴리펩타이드 중 하나와 가교 결합한 다음, 비반응성 모이어티를 통해 다른 폴리펩타이드와 반응한다. 피리딜 이황화물 가교 링커와 마찬가지로, 다수의 이종이기능성 할로아세틸 가교 링커들도 이용가능하다. 카르보디이미드는 아미드 결합을 생성하는 카르복실과 아민의 커플링을 위한 이종이기능성 가교 결합 시약의 전형적인 예이다.
대상 항체는 고체 지지체 상에 고정시킬 수 있다. 적합한 지지체는 해당 분야에 널리 공지되어 있고, 특히, 시판 중인 컬럼 물질, 폴리스티렌 비드, 라텍스 비드, 자성 비드, 콜로이드성 금속 입자, 유리 및/또는 실리콘 칩 및 표면, 니트로셀룰로스 스트립, 나일론막, 시트, 듀라사이트(duracyte), 반응 트레이 (예를 들어, 다중 웰 플레이트)의 웰, 플라스틱 튜브 등을 포함한다. 고체 지지체는, 예를 들어, 유리, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리카르보네이트, 덱스트란, 나일론, 아밀로스, 천연 및 변형 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 아가로스, 및 자철석을 비롯한 다양한 임의의 물질을 포함할 수 있다. 고체 지지체에 대상 항체를 고정시키는 적합한 방법은 널리 공지되어 있으며, 이온성, 소수성, 공유 상호작용 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 고체 지지체는, 예를 들어, 수용액에서 가용성이거나 불용성일 수 있다. 일부 실시형태에서, 적합한 고체 지지체는 일반적으로 수용액에서 불용성이다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 검출가능한 표지를 포함할 수 있다. 적합한 검출가능한 표지는 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 전기적, 광학적 또는 화학적 수단에 의해 검출가능한 임의의 조성물을 포함한다. 적합한 것으로는 자성 비드 (예를 들어, Dynabeads™), 형광 염료 (예를 들어, 플루오레세인 아이소티오시아네이트, 텍사스 레드(texas red), 로다민, 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질 등), 방사성 표지 (예를 들어, 3H, 125I, 35S, 14C 또는 32P), 효소 (예를 들어, 홀스 래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 루시퍼라제 및 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA)에서 흔히 사용되는 다른 효소들), 및 비색분석 표지, 예컨대 콜로이드성 금 또는 착색 유리 또는 플라스틱 (예를 들어, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 라텍스 등) 비드를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 조영제 또는 방사성 동위원소를 포함하는데, 여기서 조영제 또는 방사성 동위원소는, 예를 들어, 이미지화, 예를 들어, 인간에 대해 수행되는 이미지화 절차에서, 검출가능한 표지로 사용하기에 적절한 것이다. 표지의 비제한적 예로는 방사성 동위원소, 예컨대 1231I (요오드), 18F (불소), 99Tc (테크네튬), 111In (인듐) 및 67Ga (갈륨)과 조영제, 예컨대 가돌리늄 (Gd), 디스프로슘 및 철을 포함한다. Gd 방사성 동위원소 (153Gd)도 비-인간 포유류의 이미지화 절차에 적절하게 이용가능하다.
대상 항체에 연결될 수 있는 적합한 형광 단백질은 에쿼리아 빅토리아 (Aequoria victoria)의 녹색 형광 단백질 또는 이의 돌연변이 또는 유도체; 예를 들어, 강화된 GFP (다수의 이러한 GFP는, 예를 들어, Clontech, Inc.로부터 시판됨); 적색 형광 단백질; 황색 형광 단백질; 산호충류(Anthozoan) 종의 다양한 형광 및 착색 단백질; 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 "방사선 비투과성(radiopaque)" 표지, 예를 들어, x-선을 사용하여 쉽게 가시화될 수 있는 표지를 포함할 것이다. 방사선 비투과성 물질들은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 가장 일반적인 방사선 비투과성 물질로는 아이오다이드, 브로마이드 또는 바륨 염을 포함한다. 다른 방사선 비투과성 물질들도 공지되어 있는데, 이에 제한되지는 않지만, 유기 비스무트(bismuth) 유도체, 방사선 비투과성 다중우레탄, 유기 비스무트 합성물, 방사선 비투과성 바륨 다량체 복합체 등을 포함한다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는, 예컨대 리간드; 에피토프 태그; 펩타이드; 항체 이외의 단백질; 등의 융합 상대물질에 연결 (예를 들어, 공유 또는 비공유적으로 연결)될 것이다. 적합한 융합 상대물질로는 생체 내에서 향상된 안정성 (예를 들어, 향상된 혈청 반감기)를 부여하고; 정제의 용이함 등을 제공하며; 세포로부터 융합 단백질을 분비하고; 에피토프 태그, 예컨대 (His)n, 예를 들어, 6His 등을 제공하며; 세포로부터 융합 단백질을 분비하고; 에피토프 태그, 예컨대 GST, 헤마글루티닌 (HA; 예를 들어, CYPYDVPDYA; 서열번호 35), FLAG (예를 들어, DYKDDDDK; 서열번호 36), c-myc (예를 들어, CEQKLISEEDL; 서열번호 37) 등을 제공하며; 검출가능한 신호, 예컨대 검출가능한 산물을 생성하는 효소 (예를 들어, β-갈락토시다제, 루시퍼라제), 또는 자체로 검출가능한 단백질, 예컨대 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질 등을 제공하고; 다량체화, 예를 들어, 다량체화 도메인, 예컨대 면역글로불린의 Fc 부분을 제공하는 등의 펩타이드 및 폴리펩타이드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 폴리아민 변형을 포함한다. 대상 항체는 자연 발생 또는 합성 폴리아민으로 변형될 수 있다. 유용한 자연 발생 폴리아민으로는 푸트레신, 스페르미딘, 스페르민, 1,3-데아미노프로판, 노르스페르미딘, syn-호모스페르미딘, 써민, 써모스페르민, 칼도펜타민, 호모칼도펜타민 및 카나발민을 포함한다. 푸트레신, 스페르미딘 및 스페르민이 특히 유용하다. 합성 폴리아민은 실험식 CXHYNZ로 이루어지고, 1-6 NR 또는 N(R)2 모이어티 (여기서, R은 H, (C1-C4) 알킬, 페닐, 또는 벤질임)를 추가로 포함하는 환형 또는 비환형, 분지형 또는 비분지형의 3-12개 탄소 원자의 탄화수소 사슬일 수 있다. 폴리아민은 임의의 표준 가교결합 방법을 사용하여 항체에 연결될 수 있다.
본 발명의 항-MUC1 항체가 공유 결합된 이종성 모이어티 (heterologous moiety)를 포함하는 경우, 상기 이종성 모이어티는 항-MUC1 중쇄 및/또는 경쇄에 직접적으로 연결되거나, 또는 링커를 통해 연결될 수 있다. 적합한 링커는 쉽게 선택될 수 있으며, 적절한 서로 다른 임의의 길이, 예컨대 1개의 아미노산 (예를 들어, Gly) 내지 20개의 아미노산, 2개의 아미노산 내지 15개의 아미노산, 3개의 아미노산 내지 12개의 아미노산, 예컨대 4개의 아미노산 내지 10개의 아미노산, 5개의 아미노산 내지 9개의 아미노산, 6개의 아미노산 내지 8개의 아미노산, 또는 7개의 아미노산 내지 8개의 아미노산일 수 있으며, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 아미노산일 수도 있다.
유연성 링커의 예로는 글리신 중합체 (G)n, 글리신-세린 중합체 [예를 들어, (GS)n, (GSGGS)n (서열번호 21) 및 (GGGS)n (서열번호 22), 여기서 n은 적어도 1의 정수임], 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체, 및 해당 분야에 공지된 다른 유연성 링커를 포함한다.
항체의 변형 방법
항체는 임의의 다양한 방법을 사용하여 공유 부착된 이종성 모이어티 (예를 들어, 검출가능한 표지, 약물 등)를 갖도록 변형될 수 있다. 본 발명은 관심대상 모이어티에 접합된 항-MUC1 항체를 제공하는데, 이 경우 관심대상 모이어티에 접합된 항-MUC1 항체를 "항-MUC1 항체 접합체"라고 부른다. 본 발명의 항-MUC1 항체 접합체는 1) 관심대상 모이어티에 접합된 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심대상 모이어티에 접합된 Ig 경쇄 불변 영역; 2) 관심대상 모이어티에 접합된 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심대상 모이어티에 접합되지 않은 Ig 경쇄 불변 영역; 또는 3) 관심대상 모이어티에 접합되지 않은 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심대상 모이어티에 접합된 Ig 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 대상 항-MUC1 항체 접합체는 관심대상 모이어티에 접합된 VH 및/또는 VL 도메인을 포함할 수도 있다.
일례로, 항체는 2-포르밀글리신 잔기를 포함하도록 변형될 수 있으며, 이것은 이종성 모이어티의 부착을 위한 화학 작용기 (chemical handle)의 역할을 할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-MUC1의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역은 2-포르밀글리신 생성 효소 (FGE)의 작용에 의해 2-포르밀글리신 (fGly)을 함유하도록 변환될 수 있는 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하도록 변형될 수 있다. 이러한 설파타제 모티프는 본원에서 FGE 변형 부위라고도 지칭할 수 있다. FGE의 작용은 해당 FGE가 면역글로불린 폴리펩타이드 내에 위치한 설파타제 모티프에서 작용한다는 점에서 서열 특이적인 방식으로 유도된다. 관심대상 모이어티는 태깅된 Ig 폴리펩타이드의 변환된 알데하이드 태그의 fGly 잔기의 알데하이드와의 반응을 위한 반응 상대물질의 성분으로서 제공된다. 시판 중인 다양한 시약들을 사용하여 관심대상 모이어티를 알데하이드 태깅된 Ig 폴리펩타이드의 fGly 잔기에 부착시킬 수 있다. 예를 들어, 다수의 관심대상 모이어티의 아미노옥시, 히드라지드, 또는 티오세미카르바지드 유도체들이 적절한 반응 상대물질인데, 이들은 쉽게 이용가능하거나 또는 표준 화학적 방법을 사용하여 생성될 수도 있다.
예를 들어, 태깅된 Ig 폴리펩타이드에 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG) 모이어티를 부착시키기 위해, 표준 프로토콜을 사용하여 모노아미노-PEG 및 아미노옥시글리신으로부터 아미노옥시-PEG를 생성할 수 있다. 이후, 아미노옥시-PEG를 변환된 (예를 들어, fGly-변형된) 알데하이드 태깅된 Ig 폴리펩타이드와 반응시켜 PEG 모이어티를 부착할 수 있다. 비오틴 모이어티의 변환된 알데하이드 태깅된 폴리펩타이드로의 전달은 아미노옥시 비오틴, 비오틴 히드라지드 또는 2,4 디니트로페닐히드라진을 사용하여 달성될 수 있다.
알데하이드 태그의 최소 설파타제 모티프는 일반적으로 길이가 5 또는 6개의 아미노산 잔기, 보통 길이가 6개 이하의 아미노산 잔기이다. Ig 폴리펩타이드에 제공되는 설파타제 모티프는 적어도 5 또는 6개의 아미노산 잔기이고, 길이가 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 또는 7개 미만의 아미노산 잔기의 설파타제 모티프를 만들기 위해서, 길이가, 예를 들어, 5 내지 16개, 6 내지 16개, 5 내지 15개, 6 내지 15개, 5 내지 14개, 6 내지 14개, 5 내지 13개, 6 내지 13개, 5 내지 12개, 6 내지 12개, 5 내지 11개, 6 내지 11개, 5 내지 10개, 6 내지 10개, 5 내지 9개, 6 내지 9개, 5 내지 8개, 또는 6 내지 8개의 아미노산 잔기일 수 있다. 특정 실시형태에서, 사용된 설파타제 모티프는 다음 식으로 기재될 수 있다:
X1Z1X2Z2X3Z3 (서열번호 29) (I)
상기 식에서,
Z1은 시스테인 또는 세린이고 ((C/S)로도 나타낼 수 있음);
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기이며 ((P/A)로도 나타낼 수 있음);
Z3은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌 (R), 그리고 리신 (K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있으며, 일반적으로 리신임), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글리신 (G), 류신 (L), 발린 (V), 아이소류신 (I), 또는 프롤린 (P), 일반적으로는 A, G, L, V, 또는 I)이고;
X1은 존재 또는 부재하며, 존재하는 경우, 임의의 아미노산이지만, 일반적으로 지방족 아미노산, 황함유 아미노산, 또는 극성, 하전되지 않은 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 일반적으로는 L, M, V, S 또는 T, 더 일반적으로는 L, M, S 또는 V일 수 있으며, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 있을 때, X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산이지만, 일반적으로 지방족 아미노산, 극성, 하전되지 않은 아미노산, 또는 황 함유 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C; 예를 들어, S, T, A, V 또는 G일 수 있다. 일례로, 알데하이드 태그는 식 L(C/S)TPSR (서열번호 5), 예를 들어, LCTPSR (서열번호 6) 또는 LSTPSR (서열번호 23)이다. 따라서, 본 발명은 알데하이드-태깅된 Ig 중쇄 및/또는 알데하이드-태깅된 Ig 경쇄를 포함하는 항체를 제공하는데, 이 경우 상기 알데하이드-태깅된 Ig 항체는 이러한 설파타제 모티프를 함유하는 중쇄 및/또는 경쇄의 Ig 불변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
일반적으로, 표적 폴리펩타이드의 알데하이드 태그의 설파타제 모티프에서 시스테인 또는 세린의 fGly로의 변환을 촉진하는데 사용되는 FGE는 해당 알데하이드 태그에 존재하는 설파타제 모티프에 따라 선택된다. FGE는 알데하이드 태깅된 폴리펩타이드가 발현되는 숙주 세포에 고유한 것일 수 있거나, 또는 숙주 세포가 적절한 FGE를 발현하도록 유전적으로 변형될 수도 있다. 일부 실시형태에서, 인간 FGE와 상용가능한 설파타제 모티프를 사용하여, FGE를 발현하는 인간 세포에서 또는 인간 FGE를 발현하도록 유전적으로 변형된 숙주 세포, 통상적으로 포유류 세포에서 알데하이드 태깅된 단백질을 발현시키는 것이 바람직할 수 있다. 일반적으로, fGly-변형된 항체를 생성하는데 사용하기에 적합한 FGE는 자연 발생 공급원으로부터 얻어질 수 있거나 합성에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 적절한 FGE는 자연적으로 FGE를 생산하거나 또는 FGE를 암호화하는 재조합 유전자를 발현하도록 유전적으로 변형된 생물학적 공급원으로부터 유래될 수도 있다. 다수의 FGE를 암호화하는 핵산은 해당 분야에 공지되어 있어 쉽게 이용가능하다.
설파타제 모티프에 대한 FGE의 작용 후, Z1은 산화되어 2-포르밀글리신 (fGly) 잔기를 생성한다. 또한, FGE 매개성 변환과 관심대상 모이어티를 포함하는 반응 상대물질과의 반응 이후에, 상기 식의 Z1에서 fGly 위치는 관심대상 모이어티 (예를 들어, 검출가능한 표지, 수용성 중합체, 폴리펩타이드, 약물 등)에 공유 결합된다. 따라서, 본 발명은 fGly 모이어티를 포함하도록 변형된 항-MUC1 항체를 제공하는데, 여기서 상기 항-MUC1 항체는 다음 식의 fGly-변환된 설파타제 모티프를 포함한다:
X1(fGly)X2Z2X3Z3 (서열번호 30)
상기 식에서,
X1은 존재 또는 부재하며, 존재하는 경우, 임의의 아미노산이되, 단 설파타제 모티프가 폴리펩타이드의 N-말단에 존재하는 경우에, X1이 존재하고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기이고 ((P/A)로도 나타낼 수 있음);
Z3은 염기성 아미노산이며;
여기서, 상기 fGly-변형된 항-MUC1 항체는 폴딩 상태일 때 용매 접근가능한 표면 상에 fGly 기를 제공한다. 일부 실시형태에서, fGly-변환된 설파타제 모티프는 식 L(fGly)TPSR (서열번호 24)이다.
상기 언급된 바와 같이, fGly 모이어티를 포함하도록 변형된 대상 항-MUC1 항체는 fGly 모이어티를 통해 항-MUC1 항체에 공유 결합된 관심대상인 이종성 모이어티 (예를 들어, 검출가능한 표지, 수용성 중합체, 폴리펩타이드, 약물 등)를 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. 따라서, 본 발명은 항-MUC1 항체 접합체 (본원에서 "항-MUC1 접합체"로도 칭함)를 제공하며, 상기 항-MUC1 접합체는 다음을 포함한다:
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (서열번호 31) (I')
상기 식에서,
fGly'는 공유 부착된 모이어티를 갖는 2-포르밀글리신 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기이며 (이것은 (P/A)로도 나타낼 수 있다); Z3은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌 (R), 그리고 리신 (K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있으며, 일반적으로는 리신임), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글리신 (G), 류신 (L), 발린 (V), 아이소류신 (I), 또는 프롤린 (P), 일반적으로는 A, G, L, V, 또는 I)이고;
X1은 존재 또는 부재하며, 존재하는 경우, 임의의 아미노산이지만, 일반적으로 지방족 아미노산, 황함유 아미노산, 또는 극성, 하전되지 않은 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 일반적으로는 L, M, V, S 또는 T, 더 일반적으로는 L, M 또는 V일 수 있되, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재하는 경우에, X1이 존재하고; X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산이지만, 일반적으로 지방족 아미노산, 황함유 아미노산, 또는 극성, 하전되지 않은 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 것), 일반적으로 S, T, A, V, G 또는 C, 더 일반적으로는 S, T, A, V 또는 G일 수 있다. 일부 실시형태에서, 모티프는 식 L(fGly')TPSR (서열번호 25)이다.
약물
경우에 따라서는, 본 발명의 항-MUC1 항체는 본 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에 공유 결합된 약물을 포함한다. "약물"은 저분자 약물, 펩타이드 약물, 독소 (예를 들어, 세포독소) 등을 포함한다.
"저분자 약물"은 본원에서 사용된 바와 같이 관심대상의 약학적 활성을 나타내고 일반적으로 약 800 Da 이하, 또는 2000　Da이하의 분자량이지만, 최대 5 kDa의 분자를 포함할 수 있고 약 10 kDa만큼 클 수 있는 화합물, 예컨대 유기 화합물을 가리킨다. 무기 저분자는 탄소 원자를 함유하지 않는 분자를 지칭한는 한편, 유기 저분자는 적어도 하나의 탄소 원자를 함유하는 화합물을 의미한다.
본원에 사용된 "펩타이드 약물"은 아미노산 함유 중합체 화합물을 지칭하며, 자연 발생적 및 비자연 발생적 펩타이드, 올리고펩타이드, 환형 펩타이드, 폴리펩타이드와 단백질 뿐만 아니라 펩타이드 모방체를 포함하고자 한다. 펩타이드 약물은 화학적 합성에 의해 얻어질 수 있거나 유전적으로 암호화된 공급원 (예를 들어, 재조합 공급원)으로부터 생산될 수 있다. 펩타이드 약물은 분자량의 범위 내에 있을 수 있고, 분자량이 200 Da 내지 10 kDa 또는 그 이상일 수 있다.
경우에 따라서, 약물은 독소, 예를 들어, 세포독소이다. 고등 식물에 편재하는 단백질의 한 부류인 리보좀 비활성화 단백질 (RIP)이 이러한 세포독소의 예이다. 적합한 세포독소는 리신, 아브린, 디프테리아 독소, 슈도모나스(Pseudomonas) 외독소 (예를 들어, PE35, PE37, PE38, PE40 등), 사포린, 젤로닌, 미국자리공 항-바이러스 단백질 (PAP), 보툴리늄 독소, 브리오딘, 모모르딘, 및 보우가닌을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
경우에 따라서는, 약물은 암 화학치료제이다. 암 화학치료제는 암세포의 증식을 감소시키는 비-펩타이드성 (즉, 비-단백질성) 화합물을 포함하고, 세포독성제 및 세포정지제를 포함한다. 화학치료제의 비제한적 예로는 알킬화제, 알킬화제, 니트로소우레아, 항대사성물질, 항종양 항생제, 식물 (빈카) 알칼로이드, 및 스테로이드 호르몬을 포함한다. 펩타이드성 화합물도 사용될 수 있다.
적합한 암 화학치료제로는 돌라스타틴 및 이의 활성 유사체 및 유도체; 및 아우리스타틴 및 이의 활성 유사체 및 유도체를 포함한다. 적합한 암 화학치료제는 메이탄시노이드 및 이의 활성 유사체 및 유도체; 및 듀오카르마이신 및 이의 활성 유사체 및 유도체를 포함한다.
세포 증식을 감소시키는 작용을 하는 작용제는 해당 분야에 공지되어 있고 광범위하게 사용된다. 이러한 작용제로는 알킬화제, 예컨대 질소 머스타드, 니트로소우레아, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트 및 트리아젠을 포함하며, 상기 트리아젠에는 메클로르에타민, 사이클로포스파미드 (Cytoxan™), 멜팔란 (L-사르코리신), 카르무스틴 (BCNU), 로무스틴 (CCNU), 세무스틴 (메틸-CCNU), 스트렙토조신, 클로로조토신, 유라실 머스타드, 클로르메틴, 이포스파미드, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포르아민, 부설판, 다카르바진, 및 테모졸로미드가 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
항대사성물질로는 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 아데노신 데아미나제 억제제를 포함하며, 상기 아데노신 데아미나제 억제제에는 시타라빈 (CYTOSAR-U), 시토신 아라비노시드, 플루오로유라실 (5-FU), 플록슈리딘 (FudR), 6-티오구아닌, 6-메르캅토퓨린 (6-MP), 펜토스타틴, 5-플루오로유라실 (5-FU), 메토트렉세이트, 10-프로파르길-5,8-디데아자폴레이트 (PDDF, CB3717), 5,8-디데아자테트라하이드로폴산 (DDATHF), 류코보린, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴 및 젬시타빈이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
적합한 천연물 및 이의 유도체 (예를 들어, 빈카 알칼로이드, 항종양 항생제, 효소, 림포카인, 및 에피포도필로톡신)로는 Ara-C, 파클리탁셀 (Taxol®), 도세탁셀 (Taxotere®), 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나제, 아자티오프린; 브레퀴나르; 알칼로이드, 예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈노렐빈, 빈데신 등; 포도필로톡신, 예를 들어, 에토포시드, 테니포시드 등; 항생제, 예를 들어, 안트라사이클린, 다우노루비신, 하이드로클로라이드 (다우노마이신, 루비도마이신, 세루비딘), 이다루비신, 독소루비신, 에피루비신 및 모르폴리노 유도체 등; 페녹시존 비스사이클로펩타이드, 예를 들어, 닥티노마이신; 염기성 글리코펩타이드, 예를 들어, 블레오마이신; 안트라퀴논 글리코시드, 예를 들어, 플리카마이신 (미트라마이신); 안트라세네디온, 예를 들어, 미톡사트론; 아지리노피롤로 인돌레디온, 예를 들어, 미토마이신; 대환형 면역억제제, 예를 들어, 사이클로스포린, FK-506 (타크롤리무스, 프로그래프), 라파마이신 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 항-증식성 세포독성제로는 나벨벤, CPT-11, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 사이클로포스파미드, 이포스아미드, 및 드롤록사핀을 들 수 있다.
항증식성 활성을 갖는 미소관 작용제들도 사용하기에 적합하며, 알로콜히친 (NSC 406042), 할리콘드린 B (NSC 609395), 콜히친 (NSC 757), 콜히친 유도체 (예를 들어, NSC 33410), 돌스타틴 10 (NSC 376128), 메이탄신 (NSC 153858), 리족신 (NSC 332598), 파클리탁셀 (Taxol®), Taxol® 유도체, 도세탁셀 (Taxotere®), 티오콜히친 (NSC 361792), 트리틸 시스테린, 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트, 천연 및 합성 에포틸론 (이에 제한되는 것은 아니나, 예컨대 에포틸론 A, 에포틸론 B, 디스코데르몰리드를 포함); 에스트라무스틴, 노코다졸 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
사용에 적합한 호르몬 조절자 및 스테로이드 (합성 유사체 포함)로는 아드레노코르티코스테로이드, 예를 들어, 프레드니손, 덱사메타손 등; 에스트로겐 및 프리게스틴, 예를 들어, 하이드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 에스트라디올, 클로미펜, 타목시펜 등; 및 부신피질 억제제, 예를 들어, 아미노글루테티미드; 17α-에티닐에스트라디올; 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 플루옥시메스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메틸프리드니솔론, 메틸-테스토스테론, 프리드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 하이드록시프로게스테론, 아미노글루테티미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 류프롤리드, 플루타미드 (Drogenil), 토레미펜 (Fareston), 및 Zoladex®를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 에스트로겐은 증식 및 분화를 자극하므로; 에스트로겐 수용체에 결합하는 화합물을 사용하여 이 활성을 차단한다.
적합한 다른 화학치료제로는 금속 착물, 예를 들어, 시스플라틴 (cis-DDP), 카르보플라틴 등; 우레아, 예를 들어, 하이드록시우레아; 및 히드라진, 예를 들어, N-메틸히드라진; 에피도필로톡신; 토포이소머라제 억제제; 프로카르바진; 미톡산트론; 류코보린; 테가푸르; 등을 포함한다. 관심대상인 다른 항-증식제로는 면역억제제, 예를 들어, 미코페놀산, 탈리도미드, 데스옥시스페르구알린, 아자스포린, 레플루노미드, 미조리빈, 아자스파린 (SKF 105685); Iressa® (ZD 1839, 4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-메톡시-6-(3-(4-모르폴리닐)프로폭시)퀴나졸린) 등을 포함한다.
탁산이 사용하기 적절하다. "탁산"은 파클리탁셀 뿐만 아니라 임의의 활성 탁산 유도체 또는 프로드러그(pro-drug)를 포함한다. "파클리탁셀" (본원에서 유사체, 제형, 및 유도체, 예를 들어, 도세탁셀, TAXOL™, TAXOTERE™ (도세탁셀의 제형), 파클리탁셀의 10-데스아세틸 유사체 및 파클리탁셀의 3'N-데스벤조일-3'N-t-부톡시카르보닐 유사체를 포함하는 것으로 이해되어야 함)은 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 쉽게 제조될 수 있거나 (WO 94/07882, WO 94/07881, WO 94/07880, WO 94/07876, WO 93/23555, WO 93/10076호; 미국 특허 5,294,637; 5,283,253; 5,279,949; 5,274,137; 5,202,448; 5,200,534; 5,229,529호; 및 EP 590,267호도 참조함), 또는 다양한 시판 공급원, 예를 들어, Sigma Chemical Co. (미주리주 세인트 루이스 소재)로부터 얻을 수 있다 (Taxus brevifolia의 T7402; 또는 Taxus yannanensis의 T-1912).
파클리탁셀은 파클리탁셀의 화학적으로 이용가능한 일반적인 형태 뿐만 아니라 유사체 및 유도체 (예를 들어, TAXOTERE™ 도세탁셀, 상기 언급된 바와 같음) 및 파클리탁셀 접합체 (예를 들어, 파클리탁셀-PEG, 파클리탁셀-덱스트란, 또는 파클리탁셀-자일로스)도 지칭하는 것으로 이해되어야 한다.
또한, "탁산"이라는 용어에는 친수성 유도체와 소수성 유도체를 모두 포함하는 다양한 공지된 유도체들도 포함된다. 탁산 유도체에는, 갈락토스 및 만노스 유도체; 피페라지노 및 다른 유도체가 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
항체의 제조 방법
대상 항체는 임의의 공지된 방법, 예를 들어, 단백질 합성을 위한 통상적인 합성 방법; 재조합 DNA 방법 등에 의해 제조될 수 있다.
대상 항체가 단일 사슬 폴리펩타이드인 경우, 이는 표준 화학 펩타이드 합성 기술을 사용하여 합성될 수 있다. 폴리펩타이드를 화학적으로 합성하는 경우, 합성은 액상 또는 고체상을 통해 진행될 수 있다. 서열의 C-말단 아미노산을 불용성 지지체에 부착한 후 해당 서열 내 나머지 아미노산을 순차적으로 첨가하는 고체상 폴리펩타이드 합성 (SPPS)이 대상 항체의 화학적 합성에 적절한 방법의 예이다. Fmoc 및 Boc와 같은 다양한 형태의 SPPS를 이용하여 대상 항체를 합성할 수 있다.
표준 재조합 방법을 대상 항체의 제조에 사용할 수 있다. 예를 들어, 선택적으로 불변 영역에 연결된 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산을 발현 벡터로 삽입한다. 경쇄 및 중쇄는 동일하거나 상이한 발현 벡터에서 클로닝될 수 있다. 면역글로불린 사슬을 암호화하는 DNA 세그먼트를 면역글로불린 폴리펩타이드의 발현을 담보하는 발현 벡터(들)의 제어 서열에 작동가능하게 연결시킨다. 발현 제어 서열은, 이에 제한되는 것은 아니나, 프로모터 (예를 들어, 자연적으로 회합되거나 이종성인 프로모터), 신호 서열, 인핸서 요소 및 전사 종결 서열을 포함한다. 발현 제어 서열은 진핵생물 숙주 세포 (예를 들어, COS 또는 CHO 세포)를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터 내의 진핵세포 프로모터 시스템일 수 있다. 일단 벡터가 적절한 숙주로 통합되면, 해당 숙주를 뉴클레오타이드 서열의 높은 수준의 발현 및 항체의 수집과 정제에 적절한 조건 하에 유지시킨다.
암호의 중복성으로 인해, 다양한 핵산 서열들은 각 면역글로불린 아미노산 서열을 암호화할 수 있다. 원하는 핵산 서열들은 신생 (de novo) 고체상 DNA 합성에 의해, 또는 조기 제조된 원하는 폴리뉴클레오타이드 변이체의 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 돌연변이 유발에 의해 제조될 수 있다.
적합한 발현 벡터는 에피솜으로서 또는 숙주 염색체 DNA의 필수적인 부분으로서 일반적으로 숙주 유기체에서 복제가능하다. 통상적으로, 발현 벡터는 원하는 DNA 서열로 형질전환된 세포의 검출을 허용하도록 선별 마커 (예를 들어, 암피실린-저항성, 하이그로마이신-저항성, 테트라사이클린 저항성, 카나마이신 저항성 또는 네오마이신 저항성)를 포함한다.
에쉐리키아 콜라이 (Escherichia coli)는 대상 항체 암호화 폴리뉴클레오타이드를 클로닝하는데 사용될 수 있는 원핵생물 숙주 세포의 예이다. 사용하기에 적절한 다른 미생물 숙주로는 바실루스(bacilli), 예컨대 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 및 다른 장내세균, 예컨대 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia), 및 다양한 슈도모나스 종을 포함한다. 다른 미생물, 예컨대 효모도 발현에 유용하다. 사카로미세스(Saccharomyces) (예를 들어, 사카로미세스 세레비시애(S. cerevisiae)) 및 피치아(Pichia)는 적절한 효모 숙주 세포의 예이다.
미생물 이외에, 포유류 세포 (예를 들어, 시험관 내 세포 배양물에서 성장시킨 포유류 세포)도 본 발명의 폴리펩타이드 (예를 들어, 면역글로불린 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드)를 발현 및 제조하는데 사용할 수 있다. 적합한 포유류 숙주 세포는 CHO 세포주, 다양한 Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주 및 형질전환된 B-세포 또는 하이브리도마를 포함한다. 이러한 세포들에 대한 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제 원점, 프로모터와 인핸서, 및 필수적인 정보 처리 부위, 예컨대 리보좀 결합 부위, RNA 스플라이싱 부위, 폴리아데닐화 부위와 전사 종결자 서열을 포함할 수 있다. 적절한 발현 제어 서열의 예로는 면역글로불린 유전자, SV40, 아데노바이러스, 소 유두종 바이러스, 시토메갈로바이러스 등에서 유래한 프로모터를 들 수 있다.
일단 (화학적으로 또는 재조합에 의해) 합성되면, 전체 항체, 이의 이량체, 개별 경쇄와 중쇄, 또는 다른 형태의 대상 항체 (예를 들어, scFv 등)들은 암모늄 설페이트 침전, 친화도 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 정제, 겔 전기영동 등을 비롯한 당업계의 표준 절차에 따라 정제될 수 있다 (일반적으로 문헌 [Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, N.Y., (1982)]를 참조함). 대상 항체는 실질적으로 순수한데, 예를 들어, 적어도 약 80% 내지 85%, 적어도 약 85% 내지 90%, 적어도 약 90% 내지 95%, 또는 98% 내지 99%, 또는 그 이상 순수할 수 있으며, 예를 들어, 세포 잔해물, 대상 항체 이외의 거대분자 등과 같은 오염물들이 없을 수 있다.
조성물
본 발명은 대상 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. 대상 항체 조성물은, 대상 항체 이외에, 염, 예컨대 NaCl, MgCl2, KCl, MgSO4 등; 완충제, 예컨대 Tris 완충제, N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(2-에탄술폰산) (HEPES), 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 (MES), 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 나트륨 염 (MES), 3-(N-모르폴리노)프로판술폰산 (MOPS), N-트리스[하이드록시메틸]메틸-3-아미노프로판술폰산 (TAPS) 등; 가용화제; 계면활성제, 예를 들어, 비이온성 계면활성제, 예컨대 Tween-20 등; 프로테아제 억제제; 글리세롤 등 중에서 하나 이상을 포함할 수 있다.
핵산
본 발명은 대상 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 대상 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 목적한 표적 세포 (예를 들어, 암호화된 항체를 합성하도록 유전적으로 변형된 세포)에서 뉴클레오타이드 서열의 발현을 허용하는 하나 이상의 조절 요소, 예컨대 프로모터 및 인핸서에 작동가능하게 연결될 수 있다.
적합한 프로모터 및 인핸서 요소는 해당 분야에 공지되어 있다. 박테리아 세포에서의 발현의 경우, 적합한 프로모터는 lacI, lacZ, T3, T7, gpt, 람다 P 및 trc를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 진핵세포에서의 발현의 경우, 적합한 프로모터는 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린 유전자 프로모터 및 인핸서 요소; 시토메갈로바이러스 극초기 (immediate early) 프로모터; 단순 헤르페스 바이러스 티미딘 키나제 프로모터; 초기 및 후기 SV40 프로모터; 레트로바이러스의 긴 말단 반복부위에 존재하는 프로모터; 마우스 메탈로티오네인-I 프로모터; 및 당업계에 공지된 다양한 조직 특이적 프로모터들을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시형태에서, 예를 들어, 효모 세포에서의 발현의 경우, 적합한 프로모터는 항시성 프로모터, 예컨대 ADH1 프로모터, PGK1 프로모터, ENO 프로모터, PYK1 프로모터 등; 또는 조절성 프로모터, 예컨대 GAL1 프로모터, GAL10 프로모터, ADH2 프로모터, PHO5 프로모터, CUP1 프로모터, GAL7 프로모터, MET25 프로모터, MET3 프로모터, CYC1 프로모터, HIS3 프로모터, ADH1 프로모터, PGK 프로모터, GAPDH 프로모터, ADC1 프로모터, TRP1 프로모터, URA3 프로모터, LEU2 프로모터, ENO 프로모터, TP1 프로모터 및 AOX1 (예를 들어, 피치아에서 사용하기 위한 것)을 들 수 있다. 적절한 벡터와 프로모터의 선택은 당업계의 숙련자 수준 내에 있다.
원핵생물 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터는 박테리오파지 T7 RNA 중합효소 프로모터; trp 프로모터; lac 오페론 프로모터; 하이브리드 프로모터, 예를 들어, lac/tac 하이브리드 프로모터, tac/trc 하이브리드 프로모터, trp/lac 프로모터, T7/lac 프로모터; trc 프로모터; tac 프로모터 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 에쉐리키아 콜라이와 같은 원핵생물에서 사용하기에 적합한 강력한 프로모터는, 이에 제한되는 것은 아니나, Trc, Tac, T5, T7 및 P람다를 포함한다. 박테리아 숙주 세포에서 사용하기 위한 작동자의 비제한적 예로는 락토스 프로모터 작동자 (LacI 억제자 단백질은 락토스와 접촉될 때 입체구조를 변화시켜, LacI 억제자 단백질이 작동자에 결합하는 것을 방지함), 트립토판 프로모터 작동자 (트립토판과 복합체를 형성할 때, TrpR 억제자 단백질은 작동자에 결합하는 입체구조를 가지며; 트립토판의 부재시, TrpR 억제자 단백질은 작동자에 결합하지 않는 입체구조를 가짐) 및 tac 프로모터 작동자를 포함한다.
대상 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 발현 벡터 및/또는 클로닝 벡터에 존재할 수 있다. 대상 항체가 별개의 두 폴리펩타이드를 포함하는 경우, 상기 두 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 동일하거나 별개인 벡터에서 클로닝될 수 있다. 발현 벡터는 선별가능한 마커, 복제 원점, 및 벡터의 복제 및/또는 유지를 제공하는 다른 특징부들을 포함할 수 있다.
적합한 많은 벡터와 프로모터들이 당업자에게 공지되어 있으며; 대상 재조합 작제물을 생성하기 위해 다수가 시판되고 있다. 다음 벡터들이 예로서 제공된다. 박테리아: pBs, phagescript, PsiX174, pBluescript SK, pBs KS, pNH8a, pNH16a, pNH18a, pNH46a (Stratagene, 미국 캘리포니아주 라호야 소재); pTrc99A, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, 및 pRIT5 (Pharmacia, 스웨덴 웁살라 소재). 진핵생물: pWLneo, pSV2cat, pOG44, PXR1, pSG (Stratagene) pSVK3, pBPV, pMSG 및 pSVL (Pharmacia).
세포
본 발명은 대상 핵산으로 유전적으로 변형된, 단리된 유전적으로 변형된 숙주 세포 (예를 들어, 시험관 내 세포)를 제공한다. 일부 실시형태에서, 단리된 유전적으로 변형된 대상 숙주 세포는 대상 항체를 생산할 수 있다.
적합한 포유류 세포는 1차 세포 및 불멸화된 세포주를 포함한다. 적합한 포유류 세포주는 인간 세포주, 비-인간 영장류 세포주, 설치류 (예를 들어, 마우스, 랫트) 세포주 등을 포함한다. 적합한 포유류 세포주는, 이에 제한되는 것은 아니나, HeLa 세포 (예를 들어, 미국 세포 균주 은행 (ATCC) 번호 CCL-2), CHO 세포 (예를 들어, ATCC 번호 CRL9618, CCL61, CRL9096), Vero 세포, NIH 3T3 세포 (예를 들어, ATCC 번호 CRL-1658), Huh-7 세포, BHK 세포 (예를 들어, ATCC 번호 CCL10), PC12 세포 (ATCC 번호 CRL1721), COS 세포, COS-7 세포 (ATCC 번호 CRL1651), RAT1 세포, 마우스 L 세포 (ATCC 번호 CCLI.3), 인간 배아 신장 (HEK) 293 세포 (ATCC 번호 CRL1573), HLHepG2 세포 등을 포함한다.
적합한 효모 세포로는 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 피치아 핀란디카(Pichia finlandica), 피치아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피치아 코클라매(Pichia koclamae), 피치아 멤브라내파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피치아 오푼티애(Pichia opuntiae), 피치아 써모톨러란스(Pichia thermotolerans), 피치아 살리크타리아(Pichia salictaria), 피치아 구에르큠(Pichia guercuum), 피치아 피즈페리(Pichia pijperi), 피치아 스티프티스(Pichia stiptis), 피치아 메타놀리카(Pichia methanolica), 피치아 종(Pichia sp.), 사카로미세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스 종(Saccharomyces sp.), 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이베로미세스 종(Kluyveromyces sp.), 클루이베로미세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스페르길루스 니게르(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리재(Aspergillus oryzae), 트리코더마 리세이(Trichoderma reesei), 크리소스포리움 러크노웬스(Chrysosporium lucknowense), 푸사리움 종(Fusarium sp.), 푸사리움 그라미늄(Fusarium gramineum), 푸사리움 베네나툼(Fusarium venenatum), 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa), 클라미도모나스 레인하르드티(Chlamydomonas reinhardtii) 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
적합한 원핵생물 세포로는 에쉐리키아 콜라이, 락토바실루스 종(Lactobacillus sp.), 살모넬라 종(Salmonella sp.), 시겔라 종(Shigella sp.) 등의 다양한 실험실 균주를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
약학적 조성물
본 발명은 대상 항체를 포함하는 약학적 조성물을 비롯한, 조성물을 제공한다. 일반적으로, 제제는 대상 항체의 유효량을 포함한다. "유효량"은 원하는 결과, 예를 들어, 암성 세포수의 감소시키기에 충분한 용량을 의미한다. 경우에 따라서는, 원하는 결과란 대조군과 비교하였을 때 적어도 악성 종양 증상의 감소이다.
제제
대상 방법에서, 대상 항체는 원하는 치료 효과 또는 진단 효과를 가져올 수 있는 임의의 적절한 수단을 사용하여 숙주에게 투여될 수 있다. 따라서, 작용제는 치료적 투여를 위해 다양한 제형으로 투여될 수 있다. 보다 구체적으로, 대상 항체는 약학적으로 허용가능한 적절한 담체 또는 희석제와 조합하여 약학적 조성물로 제제화될 수 있고, 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태, 예컨대 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌제, 주사용액, 흡입제 및 에어로졸의 조제물로 제제화될 수 있다.
약학적 제형에서, 대상 항체는 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 투여될 수 있거나, 또는 이들은 단독으로 또는 약학적으로 활성인 다른 화합물들과 적절하게 결합한 상태 뿐만 아니라 그와 조합하여 사용될 수도 있다. 하기의 방법과 부형제들은 예시일 뿐 어떠한 식으로도 제한하려는 것은 아니다.
경구용 제제의 경우, 대상 항체는 단독으로 사용하거나 또는 적절한 첨가제, 예를 들어, 통상적인 첨가제, 예컨대 락토스, 만니톨, 옥수수 전분 또는 감자 전분; 결합제, 예컨대 결정성 셀룰로스, 셀룰로스 유도체, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴; 붕해제, 예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 또는 나트륨 카르복시메틸셀룰로스; 윤활제, 예컨대 활석 또는 마그네슘 스테아레이트; 및 필요한 경우, 희석제, 완충제, 습윤제, 보존제 및 향미제와 병용하여 정제, 분말, 과립 또는 캡슐을 제조할 수 있다.
대상 항체는, 이들을 수성 또는 비수성 용매, 예컨대 식물성 오일 또는 다른 유사한 오일, 합성 지방족 산 글리세리드, 고급 지방족 산의 에스터 또는 프로필렌 글리콜에 해, 현탁 또는 에멀젼화시켜; 필요한 경우, 통상적인 첨가제, 예컨대 가용화제, 등장화제, 현탁제, 에멀젼화제, 안정화제 및 보존제와 함께 용해, 현탁 또는 에멀젼화시켜 주사용 제제로 제형화할 수 있다.
대상 항체를 포함하는 약학적 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 항체를 선택적인 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 안정화제, 계면활성제, 완충제 및/또는 등장화제와 혼합하여 제조된다. 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 안정화제는 사용된 용량과 농도에서 수용체에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 글루타티온, 시스테인, 메티오닌 및 시트르산; 보존제 (예컨대 에탄올, 벤질 알콜, 페놀, m-크레솔, p-클로르-m-크레솔, 메틸 또는 프로필 파라벤, 벤잘코늄 클로라이드, 또는 이들의 조합); 아미노산, 예컨대 아르기닌, 글리신, 오르니틴, 리신, 히스티딘, 글루탐산, 아스파르트산, 아이소류신, 류신, 알라닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 메티오닌, 세린, 프롤린 및 이들의 조합; 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 젤라틴 또는 혈청 알부민; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 트레할로스, 수크로스, 락토스, 글루코스, 만노스, 말토스, 갈락토스, 프럭토스, 소르보스, 라피노스, 글루코사민, N-메틸글루코사민, 갈락토사민, 및 뉴라민산; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 Tween, Brij Pluronics, Triton-X, 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다.
약학적 조성물은 액체 형태, 동결건조된 형태 또는 동결건조된 형태로부터 환원된 액체 형태로 존재할 수 있으며, 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균 용액으로 환원되어야 한다. 동결건조된 조성물을 환원시키기 위한 표준 절차는 (일반적으로 동결건조 동안에 제거된 부피와 동등한) 부피의 순수한 물을 보충하는 것이지만; 비경구 투여용 약학적 조성물의 제조에는 항박테리아제를 포함하는 용액을 사용할 수도 있다.
대상 약학적 조성물 중의 예시적 항체 농도는 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/ml 또는 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 또는 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 범위일 수 있다.
항체의 수성 제제는, pH 완충 용액 중에서, 예를 들어, 약 4.0 내지 약 7.0, 또는 약 5.0 내지 약 6.0, 또는 다르게는 약 5.5의 범위의 pH에서 제조될 수 있다. 상기 범위 내의 pH에 적합한 완충제의 예로는 포스페이트-, 히스티딘-, 시트레이트-, 숙시네이트-, 아세테이트-완충제 및 다른 유기산 완충제를 포함한다. 완충제 농도는, 예를 들어, 해당 완충제와 제제의 원하는 등장성에 따라 약 1 mM 내지 약 100 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 50 mM일 수 있다.
동결건조 과정 동안에 탈안정화 조건에 대해 불안정한 활성 성분 (예를 들어, 단백질)을 보호하기 위해 동결방지제를 추가할 수도 있다. 예를 들어, 공지된 동결방지제는 당 (글루코스 및 수크로스 포함); 폴리올 (만니톨, 소르비톨 및 글리세롤 포함); 및 아미노산 (알라닌, 글리신 및 글루탐산 포함)을 포함한다. 동결방지제는 약 10 nM 내지 500 nM의 양으로 포함될 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상 제제는 대상 항체, 및 하나 이상의 작용제 (예를 들어, 계면활성제, 완충제, 안정화제, 등장화제)를 포함하고, 필수적으로 하나 이상의 보존제, 예컨대 에탄올, 벤질 알콜, 페놀, m-크레솔, p-클로르-m-크레솔, 메틸 또는 프로필 파라벤, 벤잘코늄 클로라이드 및 이들의 조합을 함유하지 않는다. 다른 실시형태에서, 보존제는, 예를 들어, 약 0.001 내지 약 2% (w/v)의 범위의 농도로 제제 내에 포함된다.
예를 들어, 대상 제제는 비경구 투여에 적합한 액상 또는 동결건조된 제제일 수 있고, 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 대상 항체; 약 0.001 % 내지 약 1 %의 적어도 하나의 계면활성제; 약 1 mM 내지 약 100 mM의 완충제; 선택적으로 약 10 mM 내지 약 500 mM의 안정화제; 및 약 5 mM 내지 약 305 mM의 등장화제를 포함할 수 있으며, 약 4.0 내지 약 7.0의 pH를 갖는다.
또 다른 예로서, 대상 비경구 제제는 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 대상 항체; 0.04% Tween 20 w/v; 20 mM의 L-히스티딘; 및 250 mM의 수크로스를 포함하는 액상 또는 동결건조된 제제로서, 5.5의 pH를 갖는다.
본원에 사용된 용어 "단위 제형"은 인간 및 동물 대상체에 대한 단위 복용량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 가리키며, 각 단위는 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체 또는 비히클과 결합하여 원하는 효과를 나타내기에 충분한 양으로 계산된 소정량의 본 발명의 화합물을 함유한다. 대상 항체에 대한 세목은 사용된 특정 항체와 달성되어야 하는 효과, 및 숙주에서 각 항체와 관련된 약물동태에 따라 달라질 수 있다.
대상 항체는 주사용 제제로서 투여될 수 있다. 통상적으로, 주사용 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로 제조되고; 주사 전 액체 비히클 중의 용액, 또는 현탁액으로 적합한 고체 형태들도 제조될 수 있다. 상기 제제는 에멀젼화되거나 리포솜 비히클에 캡슐화된 항체일 수도 있다.
약학적으로 허용가능한 부형제, 예컨대 비히클, 보조제, 담체 또는 희석제는 공중이 쉽게 이용할 수 있다. 또한, 약학적으로 허용가능한 보조 물질, 예컨대 pH 조정제 및 완충제, 등장성 조정제, 안정화제, 습윤제 등도 공중이 쉽게 이용할 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 제어 방출형 제제로 제형화된다. 서방형 제제는 해당 분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 소수성 고체 중합체의 반투과성 매트릭스 (매트릭스가 성형품, 예컨대 필름 또는 마이크로캡슐의 형태임)를 포함한다. 서방형 매트릭스의 예로는 폴리에스터, L-글루탐산 및 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 하이드로겔, 폴리락티드, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다. 서방형 제제에 포함된 항체의 생물학적 활성의 손실 가능성과 면역원성의 변화 가능성은, 적절한 첨가제를 사용하고, 수분 함량을 조절하며, 특정 중합체 매트릭스 조성물을 개발함으로써 방지할 수 있다.
물리적 시스템으로는, 속도 조절막을 구비한 저장소 시스템, 예컨대 마이크로캡슐화, 거대캡슐화 및 막 시스템; 속도 조절막이 없는 저장소 시스템, 예컨대 중공 섬유, 초미세다공성 셀룰로스 트리아세테이트, 및 다공성 중합체 기질 및 폼(foam); 모놀리스형(monolithic) 시스템, 예컨대 비다공성, 중합체, 또는 탄성중합체 매트릭스에서 물리적으로 용해되는 시스템 (예를 들어, 비침식성, 침식성, 환경적 제제 진입, 및 분해성), 및 비다공성, 중합체, 또는 탄성중합체 매트릭스에서 물리적으로 분산되는 물질 (예를 들어, 비침식성, 침식성, 환경 작용제 투입, 및 분해성); 적층 구조, 예컨대 외부 제 층과 화학적으로 유사하거나 유사하지 않은 저장소 층; 및 다른 물리적인 방법, 예컨대 삼투 펌프, 또는 이온 교환 수지로의 흡착을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
화학적 시스템으로는, 중합체 매트릭스의 화학적 침식 (예를 들어, 이종성, 또는 동종성 침식), 또는 중합체 매트릭스의 생물학적 침식 (예를 들어, 이종성, 또는 동종성)을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
투약량
적합한 투약량은 다양한 임상적 요인에 기초하여 주치의 또는 자격이 있는 다른 의료인에 의해 결정될 수 있다. 의학 분야에 널리 공지된 바와 같이, 임의의 한 환자에 대한 투약량은 환자의 크기, 체표면적, 나이, 투여되는 특정 화합물, 환자의 성별, 투여 시간과 경로, 일반적인 건강 상태, 및 동시에 투여되는 다른 약물을 비롯한 여러가지 요인에 따라 달라진다. 대상 항체는 1회 투약시 체중 1 kg당 1 ng 내지 20 mg, 예를 들어, 체중 1 kg당 0.1 mg 내지 10 mg, 예를 들어, 체중 1 kg당 0.5 mg 내지 5 mg의 양으로 투여될 수 있으나; 특히 상기 언급된 요인들을 고려하여, 상기 예시한 범위보다 낮거나 높은 용량도 상정할 수 있다. 지속 주입이 처방된 경우라면, 투약량은 1분에 체중 1 kg당 1 ㎍ 내지 10 mg의 범위일 수 있다.
당업자라면 누구나 투약량 수준이 특정 항체의 기능, 증상의 중증도 및 부작용에 대한 대상체의 민감도에 따라 달라질 수 있음을 쉽게 인식하고 있을 것이다. 주어진 화합물에 대한 바람직한 투약량은 다양한 방법으로 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다.
투여 경로
대상 항체는 생체 내 및 생체 외 방법 뿐만 아니라 전신 및 국소화된 투여 경로를 비롯한, 약물 전달에 적합한 임의의 이용가능한 방법과 경로를 사용하여 개체에게 투여된다.
통상적이고 약학적으로 허용가능한 투여 경로는 비강내, 근육내, 기관내, 피하, 피내, 국소 도포, 정맥내, 동맥내, 직장, 비강, 경구 투여 경로와 기타 장 및 비경구 투여 경로를 포함한다. 투여 경로는, 필요하다면, 조합될 수 있거나, 항체 및/또는 원하는 효과에 따라 조정될 수도 있다. 대상 항체 조성물은 1회 용량 또는 다회 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상 항체 조성물은 경구로 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상 항체 조성물은 흡입 경로를 통해 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상 항체 조성물은 비강내로 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상 항체 조성물은 국소적으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상 항체 조성물은 두개내로 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상 항체 조성물은 정맥내로 투여된다.
작용제는 통상적인 약물 전달에 적합한 임의의 이용가능한 통상적인 방법과 경로, 예컨대 전신 또는 국소화된 경로를 사용하여 숙주에게 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명에 의해 고려되는 투여 경로는 장, 비경구, 또는 흡입 경로를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
흡입 투여 이외의 비경구 투여 경로는 국소적, 경피, 피하, 근육내, 안와내, 낭내, 척수내, 흉골내, 간내, 및 정맥내 경로, 즉 소화관을 통한 것 이외의 임의의 투여 경로를 포함하지만, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여는 대상 항체의 전신 또는 국소 전달을 위해 수행될 수 있다. 전신 전달이 필요한 경우, 투여는 통상적으로 약학적 제제의 침습적 또는 전신적으로 흡수되는 국소 또는 점막 투여를 수반한다.
대상 항체는 장 투여에 의해 대상체에게 전달될 수도 있다. 장 투여 경로는 경구 및 (예를 들어, 좌제를 사용하는) 직장 전달을 포함하지만, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
치료라고 하면, 적어도 숙주를 병들게 하는 병리학적 질환과 관련된 증상의 개선을 의미하며, 이 경우 개선은 넓은 의미에서는 적어도, 치료되는 병리학적 질환, 예컨대 유방암, 췌장암 또는 폐암과 관련된 파라미터, 예를 들어, 증상의 크기에서의 감소를 가리키는데 사용된다. 이와 같이, 치료는 병리학적 질환, 또는 적어도 그와 관련된 증상이, 완전히 억제된, 예컨대 증상의 발생이 방지되거나, 또는 증상이 중단, 예를 들어, 종결되어, 해당 숙주가 더 이상 병리학적 질환, 또는 적어도 해당 병리학적 질환을 특징으로 하는 증상으로부터 고통받지 않는 상황을 포함하기도 한다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는, 예를 들어, 전신 전달 (예를 들어, 정맥내 주입)을 위해 또는 국소 부위에, 주사에 의해 투여된다.
다양한 숙주 (여기서, 용어 "숙주"는 본원에서 용어 "대상체", "개체" 및 "환자"와 서로 교환해서 사용함)는 대상 방법에 따라 치료될 수 있다. 일반적으로, 이러한 숙주는 "포유동물" 또는 "포유류"인데, 상기 용어는 육식동물목 (예를 들어, 개 및 고양이), 설치목 (예를 들어, 쥐, 기니피그, 및 랫트), 및 영장목 (예를 들어, 인간, 침팬지, 및 원숭이)을 포함하여, 포유동물강 내에 있는 유기체를 기술하기 위해 광범위하게 사용된다. 일부 실시형태에서, 숙주는 인간일 것이다.
치료 방법
본 발명은 MUC1-양성 세포, 예를 들어, 암성 MUC1-양성 세포; 또는 자가반응성 MUC1-양성 세포와 관련이 있거나 이들에 의해 유발되는 질병 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
악성 종양의 치료
본 발명은 고형 종양 또는 혈액학적 악성 종양을 비롯한 악성 종양을 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 일반적으로 상기 치료가 필요한 개체 (예를 들어, 악성 종양이 있는 개체)에게 유효량의 대상 항체를 (예를 들어, 단일 요법에서) 단독으로 또는 (예를 들어, 병용 요법에서) 하나 이상의 추가의 치료제들과 조합하여 투여하는 단계를 수반하는 것인, 방법을 제공한다.
악성 종양은, 예를 들어, HCC, 비-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병, 모발 세포 백혈병, 전림프구성 백혈병, 항문암, 충수암, 담도암 (즉, 담관암종), 방광암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 원발부위불명암 (cancer of Unknown Primary: CUP), 식도암, 안암, 나팔관암, 위장암, 신장암, 간암, 폐암, 수모세포종, 흑색종, 구강암, 난소암, 췌장암, 부갑상선 질환, 음경암, 하수체 종양, 전립선암, 직장암, 피부암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 질암, 외음부암 등을 포함한다.
일부 실시형태에서, 대상 항체의 유효량은, (예를 들어, 단일 요법에서) 단독으로 또는 (예를 들어, 병용 요법에서) 1회 이상의 용량으로 하나 이상의 추가의 치료제와 조합하여 투여될 때, 해당 항체로 치료하지 않은 개체에서 암성 세포수와 비교하여, 해당 개체의 암성 세포수를 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 그 이상 감소시키기에 효과적인 양이다.
병용 요법
일부 실시형태에서, 악성 종양을 치료하는 대상 방법은 대상 항체 및 하나 이상의 추가적인 치료제를 투여하는 단계를 수반한다. 적합한 추가적인 치료제는 (상술한 바와 같은) 암 화학치료제를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
치료에 적합한 대상체
다양한 대상체들이 대상 방법을 사용한 치료에 적합하다. 적합한 대상체로는 악성 종양이 있거나; 악성 종양으로 진단되었(던 적이 있)거나; 악성 종양에 걸린 적이 있어서 악성 종양이 재발할 위험이 있거나; 악성 종양을 대상 항-MUC1 항체 이외의 작용제로 (예를 들어, 암 화학치료제로) 치료받았던 적이 있어 해당 작용제에 반응하지 않거나; 또는 악성 종양을 대상 항-MUC1 항체 이외의 작용제로 (예를 들어, 암 화학치료제로) 치료받았던 적이 있어 처음에는 해당 작용제에 반응하였지만 나중에는 반응이 중단된 (예를 들어, 재발된) 임의의 개체, 예컨대 인간을 포함한다.
검출 방법
본 발명은 대상 항체의 사용을 수반하는 다양한 검출 방법을 제공한다. 검출 방법은 진단 방법, 예후 방법 및 모니터링 방법을 포함한다. 대상 검출 방법은 일반적으로 MUC1 양성 세포, 예컨대 암성 세포를 검출하는 단계를 수반한다.
일부 실시형태에서, 대상 방법은, 예를 들어, 개체가 악성 종양에 걸렸는지 여부를 결정하기 위한 진단 방법이다.
일부 실시형태에서, 대상 방법은, 예를 들어, 악성 종양에 걸린 것으로 진단되었고, 그 장애에 대해 치료 중이고, 해당 치료에 대한 반응 및/또는 해당 장애의 진행/퇴행이 모니터링 되는 개체를 모니터링하는 방법이다.
경우에 따라서는, 대상 검출 방법은 검출가능하게 표지된 본 발명의 항-MUC1 항체를 개체에게 투여하는 단계; 및 상기 개체에서 상기 항체의 조직에 대한 결합을 검출하는 단계를 수반한다. 검출은, 예를 들어, 자기 공명 이미지화 또는 적합한 다른 이미지화 기술에 의해 달성될 수 있다.
다른 경우로, 대상 검출 방법은 검출가능하게 표지된 본 발명의 항-MUC1 항체를 개체로부터 얻은 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계; 및 상기 생물학적 샘플에서 항체의 분자에 대한 결합을 검출하는 단계를 수반한다.
항-MUC1 항체는 직접적으로 또는 간접적으로 표지될 수 있다. 간접적 표지는 검출가능한 표지를 포함하는 2차 항체를 포함하는데, 상기 2차 항체가 대상 항-MUC1 항체에 결합한다. 다른 간접적 표지로는 비오틴을 포함하는데, 비오티닐화된 항-MUC1 항체는 검출가능한 표지를 포함하는 아비딘 또는 스트렙타비딘을 사용하여 검출될 수 있다.
적합한 검출가능한 표지로는 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 전기적, 광학적 또는 화학적 수단에 의해 검출가능한 임의의 조성물을 포함한다. 적합한 표지로는 자성 비드 (예를 들어, Dynabeads™), 형광 염료 (예를 들어, 플루오레세인 아이소티오시아네이트, 텍사스 레드, 로다민, 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질 등), 방사성 표지 (예를 들어, 3H, 125I, 35S, 14C, 또는 32P), 효소 (예를 들어, 홀스 래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 루시퍼라제, 및 기타 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA)에서 일반적으로 사용되는 것들), 및 비색분석 표지, 예컨대 콜로이드성 금 또는 착색 유리 또는 플라스틱 (예를 들어, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 라텍스 등) 비드를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
일부 실시형태에서, 대상 항체는 조영제 또는 방사성 동위원소를 포함하는데, 이 경우 상기 조영제 또는 방사성 동위원소는 이미지화, 예를 들어, 인간에 대해 수행되는 이미지화 절차에서 사용하기에 적합한 것이다. 표지의 비제한적 예로는 방사성 동위원소, 예컨대 1231I (요오드), 18F (불소), 99Tc (테크네튬), 111In (인듐) 및 67Ga (갈륨)과 조영제, 예컨대 가돌리늄 (Gd), 디스프로슘 및 철을 포함한다. 방사성 Gd 동위원소 (153Gd)도 이용가능하고 비-인간 포유동물에서의 이미지화 절차에 적합하다. 대상 항체는 표준 기술을 사용하여 표지될 수 있다. 예를 들어, 대상 항체는 클로라민 T 또는 1,3,4,6-테트라클로로-3α,6α-데페닐글리코유릴을 사용하여 요오드화될 수 있다. 대상 항체는 표준 기술을 통해 조영제로도 표지될 수 있다. 예를 들어, 대상 항체는 저분자량 Gd 킬레이트 화합물, 예컨대 Gd 디에틸렌 트리아민 펜타아세트산 (GdDTPA) 또는 Gd 테트라아자사이클로도데칸테트라아세트산 (GdDOTA)을 해당 항체에 접합시킴으로써 Gd로 표지할 수 있다. 대상 항체는, 예를 들어, 폴리리신-Gd 킬레이트 화합물을 항체에 접합시킴으로써 Gd로 표지될 수 있다. 다르게는, 대상 항체는 Gd 킬레이터 지질을 포함하는 상자성 중합된 리포솜을 아비딘 및 비오티닐화된 항체와 함께 항온배양함으로써 Gd로 표지될 수 있다.
대상 항체에 연결될 수 있는 적합한 형광 단백질은, 에쿼리아 빅토리아에서 유래한 녹색 형광 단백질 또는 이의 돌연변이 또는 유도체; 예를 들어, 강화된 GFP (다수의 이러한 GFP는, 예를 들어, Clontech, Inc.에서 시판됨); 적색 형광 단백질; 황색 형광 단백질; 산호충류 종의 다양한 형광 및 착색 단백질; 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 비제한적인 양태의 예시
상술한 본 발명의 실시형태들을 비롯한 양태들은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 양태 또는 실시형태들과 조합하면 유용할 수 있다. 전술한 설명에 대해 제한하려는 것은 아니지만, 1-50번으로 번호를 매긴 본 발명의 비제한적 특정 양태들을 아래에 제공한다. 본 개시내용을 읽는다면 당업자라면 누구나 명백히 알 수 있듯이, 개별적으로 번호를 매긴 각 양태들은 개별적으로 번호를 매긴 임의의 전술하거나 후술한 양태들과 함께 사용되거나 조합될 수도 있다. 이는 이러한 양태들의 모든 조합들을 뒷받침하기 위한 것이지, 하기에 명시하는 양태들의 조합으로만 한정하려는 것은 아니다.
1. 뮤신-1 (MUC-1)에 특이적으로 결합하고, MUC-1으로의 결합에 대해 하기를 포함하는 제2 항체와 경쟁하는 항체:
하기 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1-3 (HCDR 1-3)을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTDHTMHWIKQRPGKGLEWMGYFYPRDDSTNYNEKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLRYALDYWGQGTLVTVSS (서열번호 1); 및
하기 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1-3 (LCDR 1-3)을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬:
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIYGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYAWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 2);
EIVLTQSPATLLSPGERATLSCRASSSVGSSNLYWYQQKPGQAPRLWIYRSTKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYRWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 3); 또는
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIIGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYSWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 4)
2. 뮤신-1 (MUC-1)에 특이적으로 결합하는 항체로서,
하기 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1-3 (HCDR 1-3)을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTDHTMHWIKQRPGKGLEWMGYFYPRDDSTNYNEKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLRYALDYWGQGTLVTVSS (서열번호 1); 및
하기 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1-3 (LCDR 1-3)을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬:
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIYGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYAWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 2);
EIVLTQSPATLLSPGERATLSCRASSSVGSSNLYWYQQKPGQAPRLWIYRSTKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYRWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 3); 또는
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIIGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYSWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 4)
을 포함하는, 항체.
3. 제1 양태 또는 제2 양태에 있어서, VH 폴리펩타이드가 서열번호 1에 기재된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체.
4. 제1 양태 내지 제3 양태 중 어느 한 양태에 있어서, VL 폴리펩타이드가 서열번호 2, 3 또는 4에 기재된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체.
5. 제1 양태 내지 제3 양태 중 어느 한 양태에 있어서,
카바트 (Kabat) 정의에 따라,
HCDR1은 아미노산 서열 DHTMH (서열번호 17)를 포함하고;
HCDR2는 아미노산 서열 YFYPRDDSTNYNEKFKG (서열번호 18)를 포함하며;
HCDR3은 아미노산 서열 GLRYALDY (서열번호 9)를 포함하고;
LCDR1은 아미노산 서열 RASSSVG/SSSYLY (서열번호 41)를 포함하며;
LCDR2는 아미노산 서열 G/RT/SS/TN/KLAS (서열번호 42)를 포함하고;
LCDR3은 아미노산 서열 HQYA/R/SWSPPT (서열번호 43)를 포함하거나; 또는
카바트 정의에 따라,
LCDR1은 아미노산 서열 RASSSVSSSYLY (서열번호 10)를 포함하고;
LCDR2는 아미노산 서열 GTSNLAS (서열번호 11)를 포함하며;
LCDR3은 아미노산 서열 HQYAWSPPT (서열번호 12)를 포함하는 것인, 항체.
6. 제1 양태 내지 제3 양태 중 어느 한 양태에 있어서,
카바트 정의에 따라,
HCDR1은 아미노산 서열 DHTMH (서열번호 17)를 포함하고;
HCDR2는 아미노산 서열 YFYPRDDSTNYNEKFKG (서열번호 18)를 포함하며;
HCDR3은 아미노산 서열 GLRYALDY (서열번호 9)를 포함하고;
LCDR1은 아미노산 서열 RASSSVGSSNLY (서열번호 13)를 포함하며;
LCDR2는 아미노산 서열 RSTKLAS (서열번호 14)를 포함하고;
LCDR3은 아미노산 서열 HQYRWSPPT (서열번호 15)를 포함하는 것인, 항체.
7. 제1 양태 내지 제3 양태 중 어느 한 양태에 있어서,
카바트 정의에 따라,
HCDR1은 아미노산 서열 DHTMH (서열번호 17)를 포함하고;
HCDR2는 아미노산 서열 YFYPRDDSTNYNEKFKG (서열번호 18)를 포함하며;
HCDR3은 아미노산 서열 GLRYALDY (서열번호 9)를 포함하고;
LCDR1은 아미노산 서열 RASSSVSSSYLY (서열번호 10)를 포함하며;
LCDR2는 아미노산 서열 GTSNLAS (서열번호 11)를 포함하고;
LCDR3은 아미노산 서열 HQYSWSPPT (서열번호 16)를 포함하는 것인, 항체.
8. 제1 양태 내지 제7 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 인간화된 항체인 것인, 항체.
9. 제1 양태 내지 제8 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 키메라 항체인 것인, 항체.
10. 제1 양태 내지 제9 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 IgG, Fv, 단일 사슬 항체, scFv, Fab, F(ab')2 및 Fab'로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
11. 제1 양태 내지 제10 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 MUC1에 결합하는 항체 단편인 것인, 항체.
12. 제1 양태 내지 제10 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 IgG인 것인, 항체.
13. 제1 양태 내지 제10 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 IgG1인 것인, 항체.
14. 제1 양태 내지 제10 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 Fab인 것인, 항체.
15. 제1 양태 내지 제10 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 단일 사슬 항체인 것인, 항체.
16. 제1 양태 내지 제10 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 scFv인 것인, 항체.
17. 제1 양태 내지 제16 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 MUC1에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하는 이중특이적 항체이고, 상기 제1 항원 결합 도메인이 제1 양태 내지 제7 양태 중 어느 한 양태에 정의된 VH 사슬 및 VL 사슬을 포함하는 것인, 항체.
18. 제1 양태 내지 제17 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 검출가능하게 표지된 것인, 항체.
19. 제1 양태 내지 제18 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 공유 결합된 비-펩타이드 합성 중합체를 포함하는 것인, 항체.
20. 제19 양태에 있어서, 상기 합성 중합체가 폴리(에틸렌 글리콜) 중합체인 것인, 항체.
21. 제1 양태 내지 제19 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 공유 결합된 지질 또는 지방산 모이어티를 포함하는 것인, 항체.
22. 제1 양태 내지 제18 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 공유 결합된 다당류 또는 탄수화물 모이어티를 포함하는 것인, 항체.
23. 제1 양태 내지 제22 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 조영제를 포함하는 것인, 항체.
24. 제1 양태 내지 제23 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 친화성 도메인을 포함하는 것인, 항체.
25. 제1 양태 내지 제24 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 고체 지지체 상에 고정되는 것인, 항체.
26. 제1 양태 내지 제25 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 공유 결합된 세포독소를 포함하는 것인, 항체.
27. 제1 양태 내지 제26 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체.
28. 제1 양태 내지 제26 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 아미노산 서열을 포함하고, 상기 설파타제 모티프가 2-포르밀글리신 (fGly) 모이어티를 포함하도록 변형되는 것인, 항체.
29. 제28 양태에 있어서, 상기 항체가 fGly 모이어티를 통해 항체에 공유 결합된 이종성 모이어티를 포함하는 것인, 항체.
30. 제29 양태에 있어서, 상기 이종성 모이어티가 약물, 독소, 검출가능한 표지, 수용성 중합체 및 합성 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
31. 제1 양태 내지 제17 양태 중 어느 한 양태의 항체의 가변 중쇄 (VH) 사슬, 가변 경쇄 (VL) 사슬, 또는 상기 양자 모두를 암호화하는 핵산.
32. 제31 양태에 있어서, 상기 항체가 단일 사슬 항체이고, 상기 핵산이 단일 사슬 항체를 암호화하는 것인, 핵산.
33. 제32 양태에 있어서, 상기 단일 사슬 항체가 scFv인 것인, 핵산.
34. 제31 양태 내지 제33 양태 중 어느 한 양태의 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터로서, 상기 핵산이 진핵 세포에서 활성인 전사 제어 요소에 작동가능하게 연결되는 것인, 재조합 발현 벡터.
35. 제31 양태 내지 제33 양태 중 어느 한 양태의 핵산 또는 제34 양태의 발현 벡터를 포함하는 세포.
36. 제35 양태에 있어서, 상기 핵산이 항체의 VH 사슬 및 항체의 VL 사슬을 암호화하는 것인, 세포.
37. 제36 양태에 있어서, 상기 항체가 단일 사슬 항체이고, 상기 핵산이 단일 사슬 항체를 암호화하는 것인, 세포.
38. 제37 양태에 있어서, 상기 단일 사슬 항체가 scFv인 것인, 세포.
39. 제1 양태 내지 제17 양태 중 어느 한 양태의 항체의 가변 중쇄 (VH) 사슬을 암호화하는 제1 핵산; 및
상기 항체의 가변 경쇄 (VL) 사슬을 암호화하는 제2 핵산
을 포함하는, 세포.
40. 제39 양태에 있어서,
제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터
를 포함하는 것인, 세포.
41. 제1 양태 내지 제17 양태 중 어느 한 양태의 항체; 및
상기 항체에 접합된 작용제 (agent)
를 포함하는, 접합체.
42. 제41 양태에 있어서, 상기 작용제가 반감기 연장 모이어티, 표지제 및 치료제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 접합체.
43. 이종성 아미노산 서열에 융합되어 있는, 제1 양태 내지 제17 양태 중 어느 한 양태의 항체의 가변 중쇄 (VH) 사슬, 가변 경쇄 (VL) 사슬, 또는 상기 양자 모두를 포함하는, 융합 단백질.
44. a) 제1 양태 내지 제17 양태 중 어느 한 양태의 항체; 및
b) 약학적으로 허용가능한 담체
를 포함하는, 약학적 조성물.
45. a) 제41 양태 또는 제42 양태의 접합체; 및
b) 약학적으로 허용가능한 담체
를 포함하는, 약학적 조성물.
46. a) 제43 양태의 융합 단백질; 및
b) 약학적으로 허용가능한 담체
를 포함하는, 약학적 조성물.
47. 제44 양태 내지 제46 양태 중 어느 한 양태에 있어서, T 세포 활성화제를 더 포함하는, 약학적 조성물.
48. 제47 양태에 있어서, 상기 T 세포 활성화제가 면역 체크포인트 억제제, 사이토카인 및 억제성 면역 수용체의 길항제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 약학적 조성물.
49. 제44 양태 내지 제48 양태 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 항체가 리포좀에 캡슐화되는 것인, 약학적 조성물.
50. 대상체에서 세포 증식성 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법이
세포 증식성 질환에 걸린 대상체에게 제44 양태 내지 제49 양태 중 어느 한 양태의 약학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계
를 포함하는 것인, 방법.
실시예
하기 실시예들은 당업자에게 본 발명을 제조하여 사용하는 방법에 대한 완전한 개시와 설명을 제공하기 위해 기술하지만, 이는 본 발명자들이 자신들의 발명으로 간주하는 범위를 제한하려는 것도 아닐 뿐더러, 하기 실험들이 수행된 모든 실험이라거나 유일한 실험임을 나타내고자 한 것도 아니다. 사용된 수치 (예를 들어, 양, 온도 등)에 관하여 정확성을 담보하기 위한 노력을 했으나, 일부 실험 오차와 편차들은 해명되어야 한다. 달리 명시하지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압 또는 그 부근이다. 표준 약어들, 예컨대 bp, 염기 쌍(들); kb, 킬로베이스; pl, 피코리터; s 또는 sec, 초; min, 분; h 또는 hr, 시간; aa, 아미노산(들); kb, 킬로베이스; bp, 염기 쌍(들); nt, 뉴클레오타이드(들); i.m., 근육내(로); i.p., 복강내(로); s.c., 피하(로); 등이 사용될 수 있다. 실시예에서 언급되는 시판 중인 시약들은, 달리 명시하지 않는 한, 제조업체의 지침에 따라 사용하였다. 실시예와 명세서 전반에 걸쳐 ECACC 등록 번호로 확인되는 세포의 공급처는 유럽 세포 균주 은행 (ECACC, 영국 솔즈베리 소재)이다. 달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 과학 기술 용어들은 본 발명이 속한 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 대표적인 방법과 재료들을 하기에 기재하였지만, 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 방법과 재료들도 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 재료, 방법, 및 실시예들은 단지 예시일 뿐, 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다.
실시예 1: 항-MUC1 단일클론 항체
재료와 방법
SEC HPLC: 응집도를 측정하기 위해, 300 mM의 NaCl, 25 mM의 인산나트륨 (pH 6.8)의 이동상을 가지고 분석용 크기 배제 크로마토그래피 (SEC; Tosoh #08541)를 사용하여 샘플들을 분석하였다.
MUC1 ELISA: 항원을 PBS 중에서 스트렙타비딘 (Pierce, 15500) 또는 Maxisorp (VWR, 62409-024) 96-웰 플레이트 상에 직접 100 ng/웰로 코팅하였다. 코팅된 플레이트들을 4℃에서 밤새 배양하였다.　상기 플레이트들을 카제인 차단 완충액 (Thermo Fisher, 37528)으로 차단하고 PBS-Tween-20으로 세척하였다. 항체들을 PBS 중에서 단계 희석하고, 상기 코팅된 웰에 첨가하여 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 항온배양하였다. 점착성을 시험하기 위해, 코팅하지 않은 차단된 웰에도 항체들을 첨가하였다. 퍼옥시다제 (HRP) 접합된 항-Fc 2차 항체 (Jackson Immunoresearch, #109-035-098)를 검출에 사용한 후, TMP 기질 (Thermo Fisher, 34028)과 H2SO4 켄칭을 사용하였다. Molecular Devices 플레이트 판독기 상에서 450 nM에서의 흡광도를 판독하였다.
유세포측정 분석: 세포주들을 Versene으로 수확하여, 2% FBS가 포함된 PBS (PBS/FBS)로 옮겨 냉각시켰다. 세포들을 지정된 Ab (1 ㎍/시험)와 함께 얼음 위에서 20-30분 동안 항온배양하였다. PBS/FBS로 1회 세척한 후, AlexaFluor488 접합된 항-인간 IgG-Fc 항체 및 (죽은 세포를 배제하는 데 사용되는) 염료 7-AAD를 첨가하여 세포들을 얼음 위에서 20분 동안 항온배양하였다. 샘플들을 PBS/FBS로 2회 세척한 후, FACSDiva™ 소프트웨어를 실행하는 FACS Canto™ 장비에서 유세포 분석을 수행하였다. 이중항들과 죽은 세포들을 제외하고 FSC/SSC 세포군을 게이팅하여 분석을 수행하였다. AlexaFluor488 채널의 기하학적 평균 형광 강도 (gMFI)를 각 항체에 대해 측정하였다. 모든 샘플들은 3벌로 실행되었습니다. 대조군에는 MUC1-음성 세포주 (HCT-116), 2차 항체 단독으로 표지된 세포들과 염색되지 않은 세포들이 포함되었다.
시차 주사 형광측정법: Protein Thermal Shift 키트 (Applied Biosystems)를 사용하는 단백질 용융 온도 측정에 항체 (1 mg/mL로 10 μL)를 사용하였다. 상기 항체를 20 μL의 반응을 위해 5 μL의 완충액과 2.5 μL의 8X 형광 염료와 혼합하였다. QuantStudio3 (Applied Biosystems) 실시간 PCR 기계를 사용하여 용융 곡선을 생성하였다. 설정은 다음과 같았다: 25℃에서 2분간 유지한 후, 0.05℃/초로 유지. 온도는 99℃로 올린 후 99℃에서 2분간 유지. 원시 데이터는 Protein Thermal Shift 소프트웨어 (Applied Biosystems)를 사용하여 분석하였다.
결과
3개의 항-MUC1 단일클론 항체인 MUC1 gB06, MUC1 G12 및 MUC1 H02가 생성되었다. 상기 3개의 항체는 동일한 중쇄 서열을 공유하고 경쇄 서열이 서로 다르다.
초티아 정의, 카바트 정의 및 IMGT 정의를 기초로 표시한, 프레임워크 영역 (밑줄)과 HCDR (굵은 글씨)을 갖는 가변 중쇄 영역 서열을 아래와 같이 나타낸다:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVS GYTFTDH TMHWIKQRPGKGLEWMGYF YPRDDS TNYNEKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR GLRYALDY WGQGTLVTVSS (서열번호 1) (초티아 정의)
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFT DHTMH WIKQRPGKGLEWMG YFYPRDDSTNYNEKFKG RVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR GLRYALDY WGQGTLVTVSS (서열번호 1) (카바트 정의)
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVS GYTFTDHT MHWIKQRPGKGLEWMGY FYPRDDST NYNEKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYC ARGLRYALDY WGQGTLVTVSS (서열번호 1) (IMGT 정의)
초티아 정의, 카바트 정의 및 IMGT 정의를 기초로 표시한, 프레임워크 영역 (밑줄)과 LCDR (굵은 글씨)을 갖는 가변 경쇄 영역 서열을 아래와 같이 나타낸다:
gB06, VL:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSSSYLY WYQQKPGQAPRLWIY GTSNLAS GVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYC HQYAWSPPT FGQGTKLEIK (서열번호 2) (초티아 및 카바트 정의)
G12, VL:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVGSSNLY WYQQKPGQAPRLWIY RSTKLAS GVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYC HQYRWSPPT FGQGTKLEIK (서열번호 3) (초티아 및 카바트 정의)
H02, VL:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASSSVSSSYLY WYQQKPGQAPRLWII GTSNLAS GVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYC HQYSWSPPT FGQGTKLEIK (서열번호 4) (초티아 및 카바트 정의)
gB06, VL:
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRAS SSVSSSY LYWYQQKPGQAPRLWIY GT SNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYC HQYAWSPPT FGQGTKLEIK (서열번호 2) (IMGT 정의)
G12, VL:
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRAS SSVGSSN LYWYQQKPGQAPRLWIY RS TKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYC HQYRWSPPT FGQGTKLEIK (서열번호 3) (IMGT 정의)
H02, VL:
EIVLTQSPATLSPGERATLSCRAS SSVSSSY LYWYQQKPGQAPRLWII GT SNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYC HQYSWSPPT FGQGTKLEIK (서열번호 4) (IMGT 정의)
도 1은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 측정시, 항-MUC1 단일클론 항체들인 MUC1 gB06, MUC1 G12 및 MUC1 H02가 각각 99% 이상, 99% 이상 및 98% 이상의 단량체성임을 나타낸다.
도 2a-2c는 ELISA에 의해 평가시, 항-MUC1 단일클론 항체들인 MUC1 gB06, MUC1 G12 및 MUC1 H02가 재조합 20mer MUC1 글리코실화된 비오틴에는 결합하지만 재조합 60mer MUC1 글리코실화되지 않은 비오틴 또는 유인 펩타이드에는 결합하지 않음을 나타낸다. 20mer MUC1 글리코실화된 비오틴은 S/T 잔기들 중 일부에 Tn (GalNac) 항원 또는 시알릴 Tn (Neu5Acα2-6GalNAc) 항원 변형이 있는 VTSAPDTRPAPGSTAPPAHG (서열번호 26) 서열을 포함하는 펩타이드를 가리키는데, 여기서 비오틴은 N-말단에 접합된다. 60mer MUC1 글리코실화되지 않은 비오틴은 VTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHG (서열번호 27) 서열을 포함하는 펩타이드를 가리키는데, 여기서 비오틴은 N-말단에 접합된다. 유인 펩타이드는 S/T 잔기들 중 일부에 Tn (GalNac) 항원 또는 시알릴 Tn (Neu5Acα2-6GalNAc) 항원 변형이 있는 PLPVTSTSSASTGHATPLAV (서열번호 28) 서열을 포함하는 펩타이드를 지칭한다.
도 3a-3c는 코팅되지 않은 스트렙타비딘 또는 Maxisorp 플레이트에 항-MUC1 항체들인 MUC1 gB06, MUC1 G12 및 MUC1 H02가 결합하는 수준을 나타낸다.
도 4는 3벌로 시험된 상기 명시한 항체들의 지정된 세포주에 대한 결합을 보여주는 중첩된 히스토그램을 나타낸다.
도 5는 상기 명시한 항체들의 지정된 세포주에 대한 결합을 보여주는 엇갈리게 배열된 히스토그램을 나타낸다.
도 6은 시차주사 형광측정법에 의해 측정된 B06, G12 및 H02 항-MUC1 항체들의 CH2 및 Fab 영역의 용융 온도를 나타낸다.
실시예 2: 항-MUC1 단일클론 항체의 생체내 효능
이종이식 연구
방법: 암컷 NCG 마우스 (10 마리/그룹)에 에스트로겐 펠렛 (0.36 mg/90일, 17β-에스트라디올)을 이식한 다음, Matrigel (1:1 vol/vol)이 포함된 PBS에서 2천만 개의 T47D 세포를 피하 접종하였다. 치료 개시 전날 (0일)에 모든 동물들에게 10 mg/kg의 인간 IgG의 정맥내 용량을 투여하였다.
종양이 평균 223 ㎣에 도달했을 때 (1일째) 치료를 시작하였다. 치료를 위해, 비히클 단독 또는 B06 항체를 동물에게 정맥내 투여하였다. 치료 투약은 총 4회로 매주 투약하였다. 상기 동물들을 체중과 종양 크기에 대해 매주 2회 모니터링하였다. 동물들의 종양이 2000 ㎣에 도달하면 그 동물을 안락사시켰다.
결과 : 비히클 대조군의 종양은 연구를 진행하는 동안 느리지만 지속적으로 성장하였다. 10 mg/kg의 B06 항체를 투여했던 동물들은 종양 정체가 유도되었다.
도 7은 T47D 이종이식편에 대한 항-MUC1 항체 B06의 생체내 효능을 나타낸다. n = 10 마리의 마우스/그룹; 화살표는 항체 또는 비히클이 투여된 날을 가리킨다.
본 발명을 특정 실시형태들을 참고로 하여 설명하였지만, 당업자라면 누구나 다양한 변형을 가할 수 있고, 본 발명의 진정한 개념과 범위를 벗어나지 않으면서 균등물들을 대체할 수 있음을 이해할 것이다. 또한, 본 발명의 목적, 개념 및 범위에 특정 상황, 재료, 물질의 조성, 방법, 방법 단계(들)을 맞추기 위해 많은 변형들이 이루어질 수도 있다. 이러한 모든 변형들은 본원에 첨부되는 청구범위 내에 속한다.
SEQUENCE LISTING <110> R.P. Scherer Technologies Rabuka, David Drake, Penelope M. Kim, Yun Cheol Barfield, Robyn M. Bauzon, Maxine Ogunkoya, Ayodele <120> ANTIBODY SPECIFIC FOR MUCIN-1 AND METHODS OF USE THEREOF <130> RDWD-035WO <150> US 63/059,497 <151> 2020-07-31 <160> 46 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Thr Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Phe Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Leu Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 2 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ala Trp Ser Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 3 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 3 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Gly Ser Ser 20 25 30 Asn Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Arg Ser Thr Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Arg Trp Ser Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 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<400> 7 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 1 5 <210> 8 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 8 Tyr Pro Arg Asp Asp Ser 1 5 <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 9 Gly Leu Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr 1 5 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 10 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Tyr 1 5 10 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 11 Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 12 His Gln Tyr Ala Trp Ser Pro Pro Thr 1 5 <210> 13 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 13 Arg Ala Ser Ser Ser Val Gly Ser Ser Asn Leu Tyr 1 5 10 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 14 Arg Ser Thr Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 15 His Gln Tyr Arg Trp Ser Pro Pro Thr 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 16 His Gln Tyr Ser Trp Ser Pro Pro Thr 1 5 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 17 Asp His Thr Met His 1 5 <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 18 Tyr Phe Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 19 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 19 gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60 tcctgcaagg tttctggata caccttcacc gaccatacca tgcactggat caaacagcga 120 cctggaaaag ggcttgagtg gatgggatac ttctacccta gagatgattc cacaaattac 180 aacgagaagt tcaagggcag agtcaccctt accgcggaca aatctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgtggtctt 300 cgatacgctc ttgactactg gggccaagga accctggtca ccgtctcctc a 351 <210> 20 <211> 1255 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Met Thr Pro Gly Thr Gln Ser Pro Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr 1 5 10 15 Val Leu Thr Val Val Thr Gly Ser Gly His Ala Ser Ser Thr Pro Gly 20 25 30 Gly Glu Lys Glu Thr Ser Ala Thr Gln Arg Ser Ser Val Pro Ser Ser 35 40 45 Thr Glu Lys Asn Ala Val Ser Met Thr Ser Ser Val Leu Ser Ser His 50 55 60 Ser Pro Gly Ser Gly Ser Ser Thr Thr Gln Gly Gln Asp Val Thr Leu 65 70 75 80 Ala Pro Ala Thr Glu Pro Ala Ser Gly Ser Ala Ala Thr Trp Gly Gln 85 90 95 Asp Val Thr Ser Val Pro Val Thr Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Thr 100 105 110 Pro Pro Ala His Asp Val Thr Ser Ala Pro Asp Asn Lys Pro Ala Pro 115 120 125 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 130 135 140 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 145 150 155 160 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 165 170 175 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 180 185 190 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 195 200 205 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 210 215 220 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 225 230 235 240 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 245 250 255 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 260 265 270 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 275 280 285 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 290 295 300 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 305 310 315 320 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 325 330 335 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 340 345 350 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 355 360 365 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 370 375 380 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 385 390 395 400 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 405 410 415 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 420 425 430 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 435 440 445 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 450 455 460 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 465 470 475 480 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 485 490 495 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 500 505 510 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 515 520 525 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 530 535 540 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 545 550 555 560 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 565 570 575 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 580 585 590 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 595 600 605 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 610 615 620 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 625 630 635 640 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 645 650 655 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 660 665 670 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 675 680 685 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 690 695 700 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 705 710 715 720 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 725 730 735 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 740 745 750 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 755 760 765 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 770 775 780 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 785 790 795 800 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 805 810 815 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 820 825 830 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 835 840 845 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 850 855 860 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 865 870 875 880 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 885 890 895 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 900 905 910 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 915 920 925 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Asn 930 935 940 Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Ala Pro Pro Val His Asn Val Thr Ser 945 950 955 960 Ala Ser Gly Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ser Thr Leu Val His Asn Gly 965 970 975 Thr Ser Ala Arg Ala Thr Thr Thr Pro Ala Ser Lys Ser Thr Pro Phe 980 985 990 Ser Ile Pro Ser His His Ser Asp Thr Pro Thr Thr Leu Ala Ser His 995 1000 1005 Ser Thr Lys Thr Asp Ala Ser Ser Thr His His Ser Ser Val Pro 1010 1015 1020 Pro Leu Thr Ser Ser 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sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 26 Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro 1 5 10 15 Pro Ala His Gly 20 <210> 27 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 27 Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro 1 5 10 15 Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly 20 25 30 Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg 35 40 45 Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly 50 55 60 <210> 28 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 28 Pro Leu Pro Val Thr Ser Thr Ser Ser Ala Ser Thr Gly His Ala Thr 1 5 10 15 Pro Leu Ala Val 20 <210> 29 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> SITE <222> (1)..(1) <223> The amino acid at position 1 is either present or absent and, when present, can be any amino acid though usually an aliphatic amino acid, a sulfur-containing amino acid, or a polar, uncharged amino acid <220> <221> SITE <222> (2)..(2) <223> The amino acid at position 2 is cysteine or serine <220> <221> SITE <222> (3)..(3) <223> The amino acid at position 3 can be any amino acid though usually an aliphatic amino acid, a polar, uncharged amino acid, or a sulfur containing amino acid <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> The amino acid at position 4 is proline or alanine <220> <221> SITE <222> (5)..(5) <223> The amino acid at position 5 is any amino acid though usually an aliphatic amino acid, a polar, uncharged amino acid, or a sulfur containing amino acid <220> <221> SITE <222> (6)..(6) <223> The amino acid at position 6 is a basic amino acid (e.g., Arg, Lys, His) or an aliphatic amino acid (e.g., Ala, Gly, Leu, Val, Ile, or Pro) <400> 29 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> SITE <222> (1)..(1) <223> The amino acid at position 1 is either present or absent and, when present, is any amino acid <220> <221> SITE <222> (2)..(2) <223> The amino acid at position 2 is 2-formylglycine <220> <221> SITE <222> (3)..(3) <223> The amino acid at position 3 is any amino acid <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> The amino acid at position 4 is proline or alanine <220> <221> SITE <222> (5)..(5) <223> The amino acid at position 5 is any amino acid <220> <221> SITE <222> (6)..(6) <223> The amino acid at position 6 is a basic amino acid <400> 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> SITE <222> (1)..(1) <223> The amino acid at position 1 is either present or absent and, when present, can be any amino acid, though usually an aliphatic amino acid, a sulfur-containing amino acid, or a polar, uncharged amino acid <220> <221> SITE <222> (2)..(2) <223> The amino acid at position 2 is a 2-formylglycine residue having a covalently attached moiety <220> <221> SITE <222> (3)..(3) <223> The amino acid at position 3 is any amino acid, though usually an aliphatic amino acid, a sulfur-containing amino acid, or a polar, uncharged amino acid <220> <221> SITE <222> (4)..(4) <223> The amino acid at position 4 is proline or alanine <220> <221> SITE <222> (5)..(5) <223> The amino acid at position 5 is any amino acid though usually an aliphatic amino acid, a sulfur-containing amino acid, or a polar, uncharged amino acid <220> <221> SITE <222> (6)..(6) <223> The amino acid at position 6 is a basic amino acid (e.g., Arg, Lys, His), or an aliphatic amino acid (e.g., Ala, Gly, Leu, Val, Ile, Pro) <400> 31 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 32 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> SITE <222> (3)..(10) <223> Each amino acid at positions 3 to 10 may either be present or absent <400> 32 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 33 Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr 1 5 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 34 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Thr 1 5 <210> 35 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 35 Cys Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala 1 5 10 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 36 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 37 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 37 Cys Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 1 5 10 <210> 38 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 38 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagttc aagtgttagc agcagctact tatactggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct ctggatctat ggtacctcca accttgcctc cggcgtccca 180 gcaaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gactacactc tcaccatcag ctccctggag 240 cctgaagatg cggcagttta ttactgtcac caatacgcct ggtccccgcc gacgttcggc 300 caagggacca agttggaaat caaa 324 <210> 39 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 39 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagttc aagtgttggc agcagcaact tatactggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct ctggatctat aggtccacca aacttgcctc cggcgtccca 180 gcaaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gactacactc tcaccatcag ctccctggag 240 cctgaagatg cggcagttta ttactgtcac caatacagat ggtccccgcc gacgttcggc 300 caagggacca agttggaaat caaa 324 <210> 40 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 40 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagttc aagtgttagc agcagctact tatactggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct ctggatcatt ggtacctcca accttgcctc cggcgtccca 180 gcaaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gactacactc tcaccatcag ctccctggag 240 cctgaagatg cggcagttta ttactgtcac caatactcct ggtccccgcc gacgttcggc 300 caagggacca agttggaaat caaa 324 <210> 41 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 41 Arg Ala Ser Ser Ser Val Gly Ser Ser Ser Tyr Leu Tyr 1 5 10 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 42 Gly Arg Thr Ser Ser Thr Asn Lys Leu Ala Ser 1 5 10 <210> 43 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 43 His Gln Tyr Ala Arg Ser Trp Ser Pro Pro Thr 1 5 10 <210> 44 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 44 Phe Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Thr 1 5 <210> 45 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 45 Ala Arg Gly Leu Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 46 Ser Ser Val Gly Ser Ser Asn 1 5

Claims (43)

  1. 뮤신-1 (MUC-1)에 특이적으로 결합하는 항체로서,
    하기 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1-3 (HCDR 1-3)을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬:
    EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTDHTMHWIKQRPGKGLEWMGYFYPRDDSTNYNEKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLRYALDYWGQGTLVTVSS (서열번호 1); 및
    하기 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1-3 (LCDR 1-3)을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬:
    EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIYGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYAWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 2);
    EIVLTQSPATLLSPGERATLSCRASSSVGSSNLYWYQQKPGQAPRLWIYRSTKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYRWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 3); 또는
    EIVLTQSPATLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIIGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYSWSPPTFGQGTKLEIK (서열번호 4)
    을 포함하는, 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 VH 사슬이 서열번호 1에 기재된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체.
  3. 제2항에 있어서, 상기 VL 사슬이 서열번호 2, 3 또는 4에 기재된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    카바트 (Kabat) 정의에 따라,
    HCDR1은 아미노산 서열 DHTMH (서열번호 17)를 포함하고;
    HCDR2는 아미노산 서열 YFYPRDDSTNYNEKFKG (서열번호 18)를 포함하며;
    HCDR3은 아미노산 서열 GLRYALDY (서열번호 9)를 포함하고;
    LCDR1은 아미노산 서열 RASSSVSSSYLY (서열번호 10)를 포함하며;
    LCDR2는 아미노산 서열 GTSNLAS (서열번호 11)를 포함하고;
    LCDR3은 아미노산 서열 HQYAWSPPT (서열번호 12)를 포함하는 것인, 항체.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    카바트 정의에 따라,
    HCDR1은 아미노산 서열 DHTMH (서열번호 17)를 포함하고;
    HCDR2는 아미노산 서열 YFYPRDDSTNYNEKFKG (서열번호 18)를 포함하며;
    HCDR3은 아미노산 서열 GLRYALDY (서열번호 9)를 포함하고;
    LCDR1은 아미노산 서열 RASSSVGSSNLY (서열번호 13)를 포함하며;
    LCDR2는 아미노산 서열 RSTKLAS (서열번호 14)를 포함하고;
    LCDR3은 아미노산 서열 HQYRWSPPT (서열번호 15)를 포함하는 것인, 항체.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    카바트 정의에 따라,
    HCDR1은 아미노산 서열 DHTMH (서열번호 17)를 포함하고;
    HCDR2는 아미노산 서열 YFYPRDDSTNYNEKFKG (서열번호 18)를 포함하며;
    HCDR3은 아미노산 서열 GLRYALDY (서열번호 9)를 포함하고;
    LCDR1은 아미노산 서열 RASSSVSSSYLY (서열번호 10)를 포함하며;
    LCDR2는 아미노산 서열 GTSNLAS (서열번호 11)를 포함하고;
    LCDR3은 아미노산 서열 HQYSWSPPT (서열번호 16)를 포함하는 것인, 항체.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간화된 항체 또는 키메라 항체인 것인, 항체.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 IgG, Fv, 단일 사슬 항체, scFv, Fab, F(ab')2 및 Fab'로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 MUC1에 결합하는 항체 단편인 것인, 항체.
  10. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 IgG, IgG1, Fab, 단일 사슬 항체, scFv 또는 이중특이적 항체인 것인, 항체.
  11. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 검출가능하게 표지된 것인, 항체.
  12. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 공유 결합된 비-펩타이드 합성 중합체를 포함하는 것인, 항체.
  13. 제12항에 있어서, 상기 합성 중합체가 폴리(에틸렌 글리콜) 중합체인 것인, 항체.
  14. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 공유 결합된 지질 또는 지방산 모이어티를 포함하는 것인, 항체.
  15. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 공유 결합된 다당류 또는 탄수화물 모이어티를 포함하는 것인, 항체.
  16. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 조영제를 포함하는 것인, 항체.
  17. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 친화성 도메인을 포함하는 것인, 항체.
  18. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 고체 지지체 상에 고정되는 것인, 항체.
  19. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 공유 결합된 세포독소를 포함하는 것인, 항체.
  20. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체.
  21. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 아미노산 서열을 포함하고, 상기 설파타제 모티프가 2-포르밀글리신 (fGly) 모이어티를 포함하도록 변형되는 것인, 항체.
  22. 제21항에 있어서, 상기 항체가 fGly 모이어티를 통해 항체에 공유 결합된 이종성 모이어티 (heterologous moiety)를 포함하는 것인, 항체.
  23. 제22항에 있어서, 상기 이종성 모이어티가 약물, 독소, 검출가능한 표지, 수용성 중합체 및 합성 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 항체.
  24. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체의 가변 중쇄 (VH) 사슬, 가변 경쇄 (VL) 사슬, 또는 상기 양자 모두를 암호화하는 핵산.
  25. 제24항에 있어서, 상기 항체가 단일 사슬 항체이고, 상기 핵산이 단일 사슬 항체를 암호화하는 것인, 핵산.
  26. 제25항에 있어서, 상기 단일 사슬 항체가 scFv인 것인, 핵산.
  27. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항의 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터로서, 상기 핵산이 진핵 세포에서 활성인 전사 제어 요소에 작동가능하게 연결되는 것인, 재조합 발현 벡터.
  28. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항의 핵산 또는 제27항의 발현 벡터를 포함하는 세포.
  29. 제28항에 있어서, 상기 핵산이 항체의 VH 사슬 및 항체의 VL 사슬을 암호화하는 것인, 세포.
  30. 제29항에 있어서, 상기 항체가 단일 사슬 항체이고, 상기 핵산이 단일 사슬 항체를 암호화하는 것인, 세포.
  31. 제30항에 있어서, 상기 단일 사슬 항체가 scFv인 것인, 세포.
  32. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체의 가변 중쇄 (VH) 사슬을 암호화하는 제1 핵산; 및
    상기 항체의 가변 경쇄 (VL) 사슬을 암호화하는 제2 핵산
    을 포함하는, 세포.
  33. 제32항에 있어서,
    제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
    제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터
    를 포함하는 것인, 세포.
  34. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체; 및
    상기 항체에 접합된 작용제 (agent)
    를 포함하는, 접합체.
  35. 제34항에 있어서, 상기 작용제가 반감기 연장 모이어티, 표지제 및 치료제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 접합체.
  36. 이종성 아미노산 서열에 융합되어 있는, 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체의 가변 중쇄 (VH) 사슬, 가변 경쇄 (VL) 사슬, 또는 상기 양자 모두를 포함하는, 융합 단백질.
  37. a) 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체; 및
    b) 약학적으로 허용가능한 담체
    를 포함하는, 약학적 조성물.
  38. a) 제34항 또는 제35항의 접합체; 및
    b) 약학적으로 허용가능한 담체
    를 포함하는, 약학적 조성물.
  39. a) 제36항의 융합 단백질; 및
    b) 약학적으로 허용가능한 담체
    를 포함하는, 약학적 조성물.
  40. 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포 활성화제를 더 포함하는, 약학적 조성물.
  41. 제40항에 있어서, 상기 T 세포 활성화제가 면역 체크포인트 억제제, 사이토카인 및 억제성 면역 수용체의 길항제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 약학적 조성물.
  42. 제37항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 리포좀에 캡슐화되는 것인, 약학적 조성물.
  43. 대상체에서 세포 증식성 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법이
    세포 증식성 질환에 걸린 대상체에게 제37항 내지 제42항 중 어느 한 항의 약학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계
    를 포함하는 것인, 방법.
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