KR20220140500A - 약물 전달 시스템 성분에 대한 치료제 단백질의 흡착을 방지하기 위한 방법 및 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 개시내용은 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분 상에서의 단백질 흡착으로 인한 약물 전달 동안의 단백질 상실을 감소시키는 조성물 및 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 방지하기 위한 조성물을 제공하며, 조성물은 석시네이트 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 치료제 단백질을 추가로 포함한다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 1월 13일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/960,602호에 대한 우선권을 주장하며, 이는 모든 목적을 위해 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
기술분야
본 개시내용은 치료제 단백질의 정맥내 주사에 관한 것이다. 더 구체적으로는, 본 개시내용은 정맥내 약물 전달 시스템의 한 가지 이상의 성분에 대한 치료제 단백질의 흡착을 방지하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 치료제 단백질을 이용하는 환자의 정맥내 치료 방법에 관한 것이다.
서열목록
본 출원은 전자적으로 제출되고 본 명세서에 전체가 참조에 의해 원용되는 서열목록을 포함한다. 서열목록은 2021년 1월 13일자로 보고되었고, 파일명이 APVO_060_01WO_SeqList_ST25.txt이며, 용량이 약 301 킬로바이트이다.
단백질계 치료제는 임상에서 상당히 성공적이었다. 미국 및 유럽에서 임상용으로 승인된 수백가지의 치료제 단백질이 있다. 승인된 치료제 단백질은, 예를 들어, 항체-기반 약물, Fc 융합 단백질, 항응고제, 혈액 인자, 뼈형성 단백질, 조작된 단백질 스캐폴드, 효소, 성장 인자, 호르몬, 인터페론, 인터류킨 및 혈전용해제를 포함한다.
다수의 치료제 단백질은 정맥내 경로를 통해 투여된다. 정맥내(i.v) 경로를 통해 단백질을 전달할 때, 접촉면은 이들의 양친매성 특성으로 인해 이러한 표면에 흡착하는 경향이 있기 때문에 특정 우려를 갖는다. 주사기, i.v. 용기(예를 들어, i.v. 백(i.v. bag)) 및 선(line)에서의 다양한 플라스틱 중합체의 광범위한 사용에 의해, 흡착에 의한 단백질 상실 위험은 특히 저농도에서 상당하다. 단백질 흡착 현장은 의도된 치료적 이점을 손상시키고, 투약량 수준을 끌어올리고, 치료 비용을 증가시킬 수 있다.
약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분 상에서의 단백질의 흡착으로 인한 단백질 상실을 감소시키는 치료제 단백질의 정맥내 전달을 위한 개선된 조성물 및 방법에 대한 요구가 남아있다.
본 개시내용은 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분 상에서의 단백질 흡착을 감소 또는 제거하기 위해 사용될 수 있는 조성물을 제공한다. 조성물은 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분의 표면과 접촉된 후에, 동일한 표면이 치료제 단백질과 접촉된다. 본 명세서에 기재된 조성물은 IVSS(정맥내 용액 안정제) 조성물을 지칭할 수 있다.
정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 치료제 단백질의 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 조성물은 석시네이트 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 4mM 내지 약 6mM의 석시네이트, 예컨대, 약 5mM의 석시네이트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.002%(w/v) 내지 약 0.008%(w/v) 폴리소르베이트 80, 예컨대, 약 0.004%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물의 pH는 약 5.0 내지 약 7.0, 예컨대, 약 6.0이다. 일부 실시형태에서, 조성물은 물에서 약 5mM의 석시네이트 및 약 0.0004%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하되, 조성물의 pH는 약 6.0이고, 조성물은 주사용으로 제형화된다.
본 명세서에 개시된 조성물은 크기, 전하 및/또는 기타 특징으로 인해 정맥내 약물의 전달에서 사용되는 플라스틱관 및 백에 부착되는 경향을 갖는 임의의 치료제 단백질과 함께 이용될 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 조성물은 치료제 단백질을 포함한다. 치료제 단백질은 단일특이성 또는 다중특이성 결합 단백질일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 동형이량체를 형성한다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 이형이량체를 형성한다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 scFv-Fc-scFv(예를 들어, ADAPTIR®), 쿼드로마(quadroma), Κλ-바디, dAb, 다이어바디(diabody), TandAb, 나노바디, DOCK-AND-LOCKs®(DNLs®), CrossMab Fab, CrossMab VH-VL, 가닥-교환 조작된 도메인 바디(SEEDbodies), 애피바디(Affibody), 파이노머(Fynomer), Kunitz 도메인, Albu-dab, 교환된 VH를 갖는 2개의 조작된 Fv 단편(예를 들어, 이중-친화도 재표적화 분자(D.A.R.T.s)), scFv × scFv(예를 들어, BiTE), DVD-IG, Covx-바디, 펩티바디, scFv-Ig, SVD-Ig, dAb-Ig, 노브-인-홀(Knobs-in-Hole), CH3 도메인에 매칭 돌연변이를 포함하는 IgG1 항체(예를 들어, DuoBody 항체) 및 triomAb로 이루어진 군으로부터 선택된 형식이다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 적어도 제1 결합 도메인을 포함한다. 제1 결합 도메인은 단일 쇄 가변 단편(scFv)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 적어도 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인을 포함하되, 제1 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)일 수 있고, 제2 결합 도메인은 scFv일 수 있다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 종양 항원에 특이적으로 결합하고, 제2 결합 도메인은 CD3(예를 들어, CD3ε)에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 CD3에 특이적으로 결합하고, 제2 결합 도메인은 종양 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 종양 항원에 특이적으로 결합하고, 제2 결합 도메인은 4-1BB 또는 OX40에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 4-1BB 또는 OX40에 특이적으로 결합하고, 제2 결합 도메인은 종양 항원에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 결합 도메인은 4-1BB에 특이적으로 결합하고, 제2 결합 도메인은 종양 항원에 특이적으로 결합한다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 4-1BB 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 종양 항원 도메인을 포함하거나, 또는 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로, 종양 항원 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 4-1BB 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 결합 도메인은 OX40에 특이적으로 결합하고, 제2 결합 도메인은 종양 항원에 특이적으로 결합한다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 OX40 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 종양 항원 도메인을 포함하거나, 또는 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로, 종양 항원 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 OX40 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 4-1BB에 특이적으로 결합하고, 제2 결합 도메인은 OX40에 특이적으로 결합하거나, 또는 제1 결합 도메인은 OX40에 특이적으로 결합하고, 제2 결합 도메인은 4-1BB에 특이적으로 결합한다. 또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 4-1BB 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 OX40 결합 도메인을 포함하거나, 또는 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로, OX40 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 4-1BB 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 CD123에 특이적으로 결합하고/하거나, 제2 결합 도메인은 CD3ε에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 치료 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 제1 결합 도메인, 힌지 영역, 면역글로불린 불변 영역 및 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 또는 IgD의 면역글로불린 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, HCDR2는 서열번호 11을 포함하고, HDCR3은 서열번호 12를 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, LCDR2는 서열번호 14를 포함하고, LCDR3은 서열번호 15를 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, HCDR2는 서열번호 11을 포함하고, HDCR3은 서열번호 12를 포함하며; LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, LCDR3은 서열번호 15를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 서열번호 18에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH), 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, HDCR3은 서열번호 21을 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, LCDR2는 서열번호 23을 포함하고, LCDR3은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, HDCR3은 서열번호 21을 포함하며, LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, LCDR3은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 서열번호 27에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 서열번호 31의 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 농도는 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖이다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 농도는 약 0.01, 약 0.02, 약 0.03, 약 0.04, 약 0.05, 약 0.06, 약 0.07, 약 0.08 또는 약 0.09㎍/㎖이다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 농도는 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8 또는 약 0.9㎍/㎖이다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 농도는 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9 또는 약 2.0㎍/㎖이다.
일부 실시형태에서, 조성물은 약 25 내지 약 150mM 석시네이트 및 약 0.01% 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 조성물은, 예를 들어, 10× 내지 50× 농도일 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 20× 농도이다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 75mM 내지 약 125mM의 석시네이트, 예컨대, 약 100mM의 석시네이트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80, 예컨대, 약 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물의 pH는 약 5.0 내지 약 7.0, 예컨대, 약 6.0이다. 일부 실시형태에서, 조성물은 물에서 약 100mM의 석시네이트 및 약 0.08%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하되, 조성물의 pH는 약 6.0이고, 조성물은 주사용으로 제형화된다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 치료제 단백질의 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 상기 조성물은 약 100mM 석시네이트, 약 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 치료적 유효량의 치료제 단백질을 포함한다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 제1 표적에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 힌지 영역, 면역글로불린 불변 영역, 제2 표적에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 표적은 CD86이다. 일부 실시형태에서, 제1 표적은 CD123이다. 일부 실시형태에서, 제2 표적은 IL-10의 수용체이다. 일부 실시형태에서, 제2 표적은 CD3ε이다. 일부 실시형태에서, 제1 표적은 CD86이고, 제2 표적은 IL-10의 수용체이다. 일부 실시형태에서, 제1 표적은 CD123이고, 제2 표적은 CD3ε이다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 제1 결합 도메인, 힌지 영역, 면역글로불린 불변 영역 및 제2 결합 도메인을 포함하고, 제1 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며; HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, HCDR2는 서열번호 11을 포함하며, HDCR3은 서열번호 12를 포함하고; LCDR1은 서열번호 13을 포함하며, LCDR2는 서열번호 14를 포함하고, LCDR3은 서열번호 15를 포함하며; 제2 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고; HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, HDCR3은 서열번호 21을 포함하며; LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, LCDR3은 서열번호 24를 포함한다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 서열번호 31의 서열을 포함한다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로: CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고, CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하며, 면역글로불린 Fc 도메인은 Fc 수용체 FcγR, FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIIb에 대한 결합을 방지하거나 유의미하게 감소시키는 둘 이상의 돌연변이를 포함하는 IgG1 Fc 도메인이고, 단량체 IL-10 도메인은 짧은 링커에 의해 분리되는 인간 IL-10의 2개의 서브유닛을 포함하며, 치료제 단백질은 동형이량체이다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로: CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고, CD86 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2이며, HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3이고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4이며, LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6이며, 단량체 IL-10 도메인은 서열번호28의 아미노산 서열을 갖는다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고, CD86 결합 도메인은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함한다.
또한 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물이 제공되며, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 치료제 단백질의 보유에 적합한 용기를 제공하되, 용기의 내면은, 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉되기 전에, 본 개시내용의 조성물과 처음 접촉된다. 일부 실시형태에서, 용기는 라텍스가 실질적으로 없다. 일부 실시형태에서, 용기는 비스(2-에틸헥실) 프탈레이트(DEHP)가 실질적으로 없다. 일부 실시형태에서, 용기는 IV 백, 주사기 및 관으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시내용은 또한 치료제 단백질의 전달을 위해 정맥내 약물 전달 시스템을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 제공하는 단계, 및 치료제 단백질을 적어도 하나의 용기에 첨가하기 전에, 적어도 하나의 용기의 내면을 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 적어도 하나의 용기의 내면을 코팅하고, 치료제 단백질이 용기의 내면에 결합하는 것을 방지한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 용기는 라텍스가 실질적으로 없다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 용기는 비스(2-에틸헥실) 프탈레이트(DEHP)가 실질적으로 없다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 용기는 IV 백, 주사기 및 관으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시내용은 또한 치료제 단백질의 정맥내 투여에 의해 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 제공하는 단계, 용기의 내면을 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계, 용기의 내면을 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계, 및 치료제 단백질을 환자에게 정맥내로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 적어도 제1 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)이다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 적어도 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)이고, 제2 결합 도메인은 scFv이다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 CD123에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 CD3ε에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 치료 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 제1 결합 도메인, 힌지 영역, 면역글로불린 불변 영역 및 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 또는 IgD의 면역글로불린 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, HCDR2는 서열번호 11을 포함하고, HDCR3은 서열번호 12를 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, LCDR2는 서열번호 14를 포함하고, LCDR3은 서열번호 15를 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, HCDR2는 서열번호 11을 포함하고, HDCR3은 서열번호 12를 포함하며; LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, LCDR3은 서열번호 15를 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 서열번호 18에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH), 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, HDCR3은 서열번호 21을 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, LCDR2는 서열번호 23을 포함하고, LCDR3은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, HDCR3은 서열번호 21을 포함하며; LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, LCDR3은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 서열번호 27에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료 단백질은 서열번호 31의 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로: CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고, CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하며, 면역글로불린 Fc 도메인은 Fc 수용체 FcγR, FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIIb에 대한 결합을 방지하거나 유의미하게 감소시키는 둘 이상의 돌연변이를 포함하는 IgG1 Fc 도메인이고, 단량체 IL-10 도메인은 짧은 링커에 의해 분리되는 인간 IL-10의 2개의 서브유닛을 포함하며, 치료제 단백질은 동형이량체이다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH), 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2이며, HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3이고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4이며, LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6이다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 서열번호 7에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 및 서열번호 8에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 서열번호 9에 대해 적어도 약 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 서열번호 30 또는 서열번호 30에 대해 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 정맥내 주입에 의해 투여된다. 일부 실시형태에서, 조성물은 적어도 하나의 용기의 내면을 코팅하고, 치료제 단백질이 용기의 내면에 결합하는 것을 방지한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간과 같은 포유류이다.
또한 치료제 단백질을 환자에게 전달하기 위한 약물 전달 시스템이 제공되며, 시스템은 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 포함하되, 적어도 하나의 용기의 내면은, 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉되기 전에 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉된다.
이들 및 기타 실시형태는 이하에 제시하는 상세한 설명에서 더욱 상세하게 다룬다.
도 1A 내지 도 1D는 200㎚ 내지 600㎚ 파장의 IVSS 용액의 스펙트럼 스캔 프로파일을 나타내는 도면. 용액을 제조한 후에, 스펙트럼 스캔 프로파일을 제3일(도 1A), 제41일(도 1B), 제77일(도 1C) 및 제144일(도 1D)에 생성하였다.
도 2는 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용하기 위한 예시적인 치료제 단백질의 구조를 나타내는 개략도를 도시한 도면. 본 명세서에서 Q0128로 지칭되는 치료제 단백질은 이황화결합에 의해 회합된 2개의 동일한 폴리펩타이드를 포함하는 동형이량체 단백질이다. 각 폴리펩타이드는 CD86 결합 도메인, Fc 도메인 및 단량체 IL-10을 포함한다.
도 3A 및 도 3B는 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용하기 위한 예시적인 치료적 단백질의 구조를 나타내는 개략도를 도시한 도면. 도 3A은 CD3 결합 도메인 및 Fc 도메인을 각각 포함하는 두 동일한 폴리펩타이드를 포함하는 동형이량체 단백질을 도시한 도면. 도 3B는 종양 결합 도메인(예를 들어, CD123 결합 도메인), Fc 도메인 및 CD3 결합 도메인을 각각 포함하는 두 동일한 폴리펩타이드를 포함하는 동형이량체 단백질을 도시한 도면. 예시적인 CD123 × CD3 이중특이성 치료 단백질은 본 명세서에서 TRI130으로서 지칭된다.
도 4는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여를 위해 IV 백에 치료제 단백질을 넣기 전에, IV 백의 내면을 코팅하기 위해 IVSS 용액을 이용하기 위한 예시적인 프로토콜을 나타내는 개략도를 도시한 도면.
도 2는 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용하기 위한 예시적인 치료제 단백질의 구조를 나타내는 개략도를 도시한 도면. 본 명세서에서 Q0128로 지칭되는 치료제 단백질은 이황화결합에 의해 회합된 2개의 동일한 폴리펩타이드를 포함하는 동형이량체 단백질이다. 각 폴리펩타이드는 CD86 결합 도메인, Fc 도메인 및 단량체 IL-10을 포함한다.
도 3A 및 도 3B는 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 사용하기 위한 예시적인 치료적 단백질의 구조를 나타내는 개략도를 도시한 도면. 도 3A은 CD3 결합 도메인 및 Fc 도메인을 각각 포함하는 두 동일한 폴리펩타이드를 포함하는 동형이량체 단백질을 도시한 도면. 도 3B는 종양 결합 도메인(예를 들어, CD123 결합 도메인), Fc 도메인 및 CD3 결합 도메인을 각각 포함하는 두 동일한 폴리펩타이드를 포함하는 동형이량체 단백질을 도시한 도면. 예시적인 CD123 × CD3 이중특이성 치료 단백질은 본 명세서에서 TRI130으로서 지칭된다.
도 4는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여를 위해 IV 백에 치료제 단백질을 넣기 전에, IV 백의 내면을 코팅하기 위해 IVSS 용액을 이용하기 위한 예시적인 프로토콜을 나타내는 개략도를 도시한 도면.
본 개시내용은 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분 상에서의 단백질 흡착으로 인한 약물 전달 동안의 단백질 상실을 감소시키는 조성물 및 방법을 제공한다. 본 개시내용은, 표면(예를 들어, 약물 전달 시스템 성분의 표면)에 대한 단백질 흡착이, 약물의 투여 전에 석시네이트 및 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉시킴으로써 감소 또는 제거될 수 있다는 발견에 기반한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 방지하기 위한 조성물을 제공하며, 조성물은 석시네이트 및 폴리소르베이트 80을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 표제 부문은 단지 조직적 목적을 위한 것이며, 기재된 대상을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 특허, 특허 출원, 논문, 책 및 협약을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 본 명세서에 인용된 모든 문헌 또는 문헌의 일부는 임의의 목적을 위해 이들의 전문에 본 명세서에 분명하게 참조에 의해 원용된다. 하나 이상의 원용된 문헌 또는 문헌의 일부가 본 출원의 용어의 정의와 모순되는 용어를 정하는 사건에서, 본 출원에 나타나는 정의로 제어한다. 그러나, 본 명세서에 인용된 임의의 참고문헌, 논문, 간행물 및 특허 출원의 언급은 세계의 임의의 국가에서 이들이 유효한 선행 기술을 구성하거나 공통의 일반적 기술의 일부를 형성한다는 승인 또는 임의의 형태의 암시가 아니며, 이렇게 취해져서도 안 된다.
본 설명에서, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비 범위 또는 정수 범위는 열거된 범위 내의 임의의 정수 값, 달리 표시되지 않는 한, 적절한 경우, 이의 부분(예컨대, 정수의 1/10 및 1/100)을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에서 사용되는 단수의 용어는 달리 표시되지 않는 한 열거된 성분 중 "하나 이상"을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 대안의 용어(예를 들어, "또는")는 대안 중 하나, 둘 다 또는 이들의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "포함한다(include)"와 "포함한다(comprise)"는 동의어로 사용된다. 또한, 본 명세서에 기재된 성분(예를 들어, 도메인 또는 영역) 및 치환체를 포함하는 폴리펩타이드는, 각 폴리펩타이드가 개개로 제시되는 것과 동일한 정도로 본 출원에 의해 개시된다는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 개개 폴리펩타이드의 특정 성분의 선택은 본 개시내용의 범주 이내이다.
정의
용어 "약"은 수치적 값 바로 앞에 있을 때, 수치적 값의 ± 최대 10%를 의미한다. 예를 들어, "약 40"은 ± 최대 10%의 40(즉, 36 내지 44), ± 최대 10%, ± 최대 9%, ± 최대 8%, ± 최대 7%, ± 최대 6%, ± 최대 5%, ± 최대 4%, ± 최대 3%, ± 최대 2%, ± 최대 1%, ± 최대 1% 미만, 또는 임의의 다른 값 또는 이들 값의 범위를 의미한다.
용어 "mcg"와 "㎍"는 본 명세서에서 마이크로그램을 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 실질적으로는 당업계에서 사용되는 이의 보통의 의미를 갖는다. 예를 들어, "실질적으로"는 "유의미하게", "상당히", "대체로", "대부분" 또는 "본질적으로"를 의미할 수 있다. 일부 실시형태에서, "실질적으로"는 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%를 지칭할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "결합 도메인" 또는 "결합 영역"은 표적 분자, 예컨대, 항원, 리간드, 수용체, 기질 또는 저해제를 특이적으로 인식하고 결합하는 능력을 갖는 항체로부터 유래된 단백질, 폴리펩타이드, 올리고펩타이드 또는 펩타이드 또는 항체 또는 결합 도메인의 도메인, 영역, 일부 또는 부위를 지칭한다. 예시적인 결합 도메인은 단일쇄 항체 가변 영역(예를 들어, 도메인 항체, sFv, scFv, scFab), 수용체 엑토도메인 및 리간드(예를 들어, 사이토카인, 케모카인)를 포함한다. 특정 실시형태에서, 결합 도메인은 항원 결합 부위(예를 들어, 대안의 프레임워크 영역(FR)(예를 들어, 하나 이상의 아미노산 치환을 선택적으로 포함하는 인간 FR)에 위치된 항체로부터의 가변 중쇄 서열 및 가변 경쇄 서열 또는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 3개의 중쇄 CDR을 포함함)을 포함하거나, 이들로 이루어진다. 웨스턴 블롯, ELISA, 파지 디스플레이 라이브러리 선별 및 BIACORE® 상호작용 분석을 비롯한 특정 표적에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 결합 도메인을 확인하기 위한 다양한 검정이 공지되어 있다.
결합 도메인 또는 단백질이 105M-1 이상의 친화도 또는 Ka(즉, 1/M의 단위로 특정 결합 상호작용의 평형)로 표적에 결합한는 한편, 시험 샘플에 존재하는 다른 성분에 유의미하게 결합하지 않는다면, 표적에 "특이적으로 결합한다". 결합 도메인은 "고친화도" 결합 도메인 및 "저친화도" 결합 도메인으로 분류될 수 있다. "고친화도" 결합 도메인은 적어도 107M-1, 적어도 108M-1, 적어도 109M-1, 적어도 1010M-1, 적어도 1011M-1, 적어도 1012M-1 또는 적어도 1013M-1의 Ka를 갖는 해당 결합 도메인을 지칭한다. "저친화도" 결합 도메인은 최대 107M-1, 최대 106M-1, 최대 105M-1의 Ka를 갖는 해당 결합 도메인을 지칭한다. 대안적으로, 친화도는 M의 단위를 갖는 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수(Kd)(예를 들어, 10-5M 내지 10-13M)로 정의될 수 있다. 본 개시내용에 따른 결합 도메인 폴리펩타이드 및 단일 쇄 폴리펩타이드의 친화도는 통상적인 기법을 이용하여 용이하게 결정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Scatchard et al. (1949) Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660]; 및 미국 특허 제5,283,173호, 제5,468,614호 또는 균등물 참조).
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "보존적 치환"은 유사한 특성을 갖는 다른 아미노산을 하나의 아미노산으로 치환하는 것으로서 당업계에서 인식된다. 예시적인 보존적 치환은 당업계에 잘 공지되어 있다(예를 들어, WO 97/09433, 페이지 10, 1997년 3월 13일자로 공개; 문헌[Lehninger, Biochemistry, Second Edition; Worth Publishers, Inc. NY:NY (1975), pp.71-77; Lewin, Genes IV, Oxford University Press, NY 및 Cell Press, Cambridge, MA (1990), p. 8] 참조). 특정 실시형태에서, 보존적 치환은 류신의 세린으로의 치환을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "유도체"는 효소와 함께 또는 효소 없이 화학적 또는 생물학적 수단에 의한, 예를 들어, 글리코실화, 알킬화, 아실화, 에스터 형성 또는 아마이드 형성에 의한, 펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기의 변형을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 표기된 폴리폴리펩타이드 또는 아미노산 서열"로부터 유래된"은 폴리펩타이드 유래를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열은 특정 서열(때때로 "개시" 또는 "모" 또는 "모체" 서열로 지칭됨)로부터 유래되며 개시 서열 또는 이의 일부와 본질적으로 동일한 아미노산을 갖고, 일부는 적어도 10 내지 20개의 아미노산, 적어도 20 내지 30개의 아미노산, 또는 적어도 30 내지 50개의 아미노산, 또는 적어도 50 내지 150개의 아미노산으로 이루어지거나, 또는 개시 서열에 이의 유래를 갖는 것으로 당업자에 의해 달리 확인 가능하다. 예를 들어, 결합 도메인은 항체, 예를 들어, Fab, F(ab')2, Fab', scFv, 단일 도메인 항체(sdAb) 등으로부터 유래될 수 있다.
다른 폴리펩타이드로부터 유래된 폴리펩타이드는 개시 폴리펩타이드에 비해서 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어, 다른 아미노산 잔기로 치환되거나 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입 또는 결실을 갖는 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 폴리펩타이드는 천연 유래가 아닌 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이러한 변형은 필수적으로 개시 폴리펩타이드와 100% 미만의 서열 동일성 또는 유사성을 갖는다. 일 실시형태에서, 변이체는 개시 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 약 60%에서 100% 미만의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성의 아미노산 서열을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 변이체는 개시 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 약 75% 내지 100% 미만, 약 80% 내지 100% 미만, 약 85% 내지 100% 미만, 약 90% 내지 100% 미만, 약 95% 내지 100% 미만의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성의 아미노산 서열을 가질 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 달리 제공되지 않는 한, 면역글로불린 분자의 가변 영역에서 아미노산 잔기의 위치는 IMGT 넘버링 컨벤션에 따라 넘버링되고(Brochet, X, et al, Nucl. Acids Res. (2008) 36, W503-508), 면역글로불린 분자의 불변 영역에서 아미노산 잔기의 위치는 EU 명명법에 따라 넘버링된다(Ward et al., 1995 Therap. Immunol. 2:77-94). 다른 넘버링 컨벤션은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat 넘버링 컨벤션(Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. Bethesda, MD: Public Health Service, National Institutes of Health (1991)).
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "이량체"는 공유 결합(예를 들어, 이황화결합) 및 다른 상호작용(예를 들어, 정전기적 상호작용, 염 브리지, 수소결합 및 소수성 상호작용)을 포함하는 분자내 힘의 하나 이상의 형태를 통해 서로 회합되는 두 서브유닛으로 이루어진 생물학적 독립체를 지칭하며, 적절한 조건 하에서(예를 들어, 생리적 조건 하에, 재조합 단백질의 발현, 정제 및/또는 저장에 적합한 수용액에서, 또는 비변성 및/또는 비환원 전기영동을 위한 조건 하에서) 안정하다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "이형이량체" 또는 "이형이량체 단백질"은 두 상이한 폴리펩타이드로부터 형성된 이량체를 지칭한다. 이형이량체는 4개의 폴리펩타이드(즉, 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄)로부터 형성된 항체를 포함하지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "동형이량체" 또는 "동형이량체 단백질"은 두 동일한 폴리펩타이드로부터 형성된 이량체를 지칭한다. 특징 및 활성(예컨대, 결합 및 RTCC)을 포함하는 폴리펩타이드의 모든 개시내용은 이량체 형태뿐만 아니라 다른 다량체 형태의 폴리펩타이드를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 폴리펩타이드가 이량체 형태(즉, 이량체 단백질)일 때, 이는 아미노-말단에서 2개의 결합 부위 및 카복실 말단에서 2개의 결합 부위를 함유한다. 따라서 단일 쇄 폴리펩타이드가 이량체화될 때 결합 도메인은 2가(즉, 각 말단에 2개의 결합 부분)로 간주된다.
"야생형 면역글로불린 힌지 영역"은 항체 중쇄에서 발견되는 (IgG, IgA 및 IgD에 대해) CH1과 CH2 도메인 사이에 개재되거나 이들을 연결하거나, 또는 (IgE 및 IgM에 대해) CH1과 CH3 도메인 사이에 개재되거나 이들을 연결하는 천연 유래의 상부 및 중간 힌지 아미노산 서열을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 야생형 면역글로불린 힌지 영역 서열은 인간이고, 인간 IgG 힌지 영역을 포함할 수 있다.
"변경된 야생형 면역글로불린 힌지 영역" 또는 "변경된 면역글로불린 힌지 영역"은 (a) 최대 30% 아미노산 변화(예를 들어, 최대 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 아미노산 치환 또는 결실)를 갖는 야생형 면역글로불린 힌지 영역, 또는 (b) 약 5개의 아미노산(예를 들어, 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 아미노산) 최대 약 120개의 아미노산 길이를 갖는(예를 들어, 약 10 내지 약 40개의 아미노산 또는 약 15 내지 약 30개의 아미노산 또는 약 15 내지 약 20개의 아미노산 또는 약 20 내지 약 25개의 아미노산 길이를 갖는) 야생형 면역글로불린 힌지 영역의 부분은 최대 약 30%의 아미노산 변화(예를 들어, 최대 약 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 아미노산 치환 또는 결실 또는 이들의 조합)을 갖고, US 2013/0129723 및 US 2013/0095097에 개시된 바와 같은 IgG 코어 힌지 영역을 갖는 것을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "인간화된"은 인간에 대해 덜 면역원성인 한편, 유전자 조작 기법을 이용하여 본래 항체의 항원-결합 특성을 여전히 보유하는 비인간 종(예를 들어, 마우스 또는 래트)으로부터 유래된 항체 또는 면역글로불린 결합 단백질 및 폴리펩타이드의 제조 방법을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 면역글로불린 결합 단백질 및 폴리펩타이드의 결합 도메인(들)(예를 들어, 경쇄 및 중쇄 가변 영역, Fab, scFv)은 인간화된다. 비인간 결합 도메인은 CDR 접합(Jones et al., Nature 321:522 (1986)) 및 이의 변이체, 예를 들어, "정형(reshaping)"(Verhoeyen, et al., 1988 Science 239:1534-1536; Riechmann, et al., 1988 Nature 332:323-337; Tempest, et al., Bio/Technol 1991 9:266-271), "초키메라화(hyperchimerization)"(Queen, et al., 1989 Proc Natl Acad Sci USA 86:10029-10033; Co, et al., 1991 Proc Natl Acad Sci USA 88:2869-2873; Co, et al., 1992 J Immunol 148:1149-1154), 및 "베니어링(veneering)"(Mark, et al., "Derivation of therapeutically active humanized and veneered anti-CD18 antibodies." In: Metcalf BW, Dalton BJ, eds. Cellular adhesion: molecular definition to therapeutic potential. New York: Plenum Press, 1994: 291-312)으로 알려진 기법을 이용하여 인간화될 수 있다. 비-인간 공급원으로부터 유래된다면, 항체 또는 면역글로불린 결합 단백질 및 폴리펩타이드의 다른 영역, 예컨대, 힌지 영역 및 불변 영역 도메인은 또한 인간화될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "면역글로불린 이량체화 도메인" 또는 "면역글로불린 이형이량체화 도메인"은 제2 폴리펩타이드 쇄의 상이한 면역글로불린 도메인과 우선적으로 상호작용 또는 회합하는 폴리펩타이드 쇄의 면역글로불린 도메인을 지칭하되, 상이한 면역글로불린 이형이량체화 도메인의 상호작용은 제1 폴리펩타이드와 제2 폴리펩타이드 쇄의 이형이량체화(즉, "이형이량체"로도 지칭되는 두 상이한 폴리펩타이드 쇄 사이의 이량체 형성)에 실질적으로 기여하거나 이를 효율적으로 촉진시킨다. 면역글로불린 이형이량체화 도메인 사이의 상호작용은 제1 폴리펩타이드 쇄의 면역글로불린 이형이량체화 도메인 및/또는 제2 폴리펩타이드 쇄의 면역글로불린 이형이량체화 도메인의 부재 하에 제1 폴리펩타이드와 제2 폴리펩타이드 사이의 이량체화의 통계적으로 유의미한 감소가 있다면, 제1 폴리펩타이드와 제2 폴리펩타이드의 이형이량체화에 "실질적으로 기여하거나 또는 이를 효율적으로 촉진시킨다". 특정 실시형태에서, 제1 폴리펩타이드 쇄와 제2 폴리펩타이드 쇄가 공동발현될 때, 제1 폴리펩타이드 쇄 및 제2 폴리펩타이드 쇄의 적어도 60%, 적어도 약 60% 내지 약 70%, 적어도 약 70% 내지 약 80%, 적어도 80% 내지 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99%는 서로 이형이량체를 형성한다. 대표적인 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 본 명세서에 제공된 바와 같은 면역글로불린 CH1 도메인, 면역글로불린 CL 도메인(예를 들어, Cκ 또는 Cλ 아이소타입), 또는 이들의 유도체, 예를 들어, 야생형 면역글로불린 CH1 및 CL 도메인 및 변경된(또는 돌연변이된) 면역글로불린 CH1 및 CL 도메인을 포함한다.
"면역글로불린 불변 영역" 또는 "불변 영역"은 하나 이상의 불변 영역 도메인의 부분 또는 모두에 대응하거나 이로부터 유래된 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 지칭하기 위해 본 명세서에 정의된 용어이다. 특정 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 하나 이상의 불변 영역 도메인의 일부 또는 모두에 대응하거나, 이로부터 유래되지만, 공급원 항체의 모든 불변 영역 도메인은 아니다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 IgG CH2 및 CH3 도메인, 예를 들어, IgG1 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 CH1 도메인을 포함하지 않는다. 특정 실시형태에서, 불변 영역을 구성하는 불변 영역 도메인은 인간이다. 일부 실시형태에서, (예를 들어, CD3 또는 다른 T-세포 표면 항원에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 CD123-결합 폴리펩타이드 또는 단백질의 특정 실시형태에서), 본 개시내용의 융합 단백질의 불변 영역 도메인은 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC) 및 보체 활성화 및 보체-의존적 세포독성(CDC)의 기능을 결여하거나 또는 최소 효과기 기능을 갖는 한편, 일부 Fc 수용체(예컨대, FcRn, 신생아 Fc 수용체)에 결합하는 능력을 보유하고, 생체냉에서 상대적으로 긴 반감기를 보유한다. 다른 변형에서, 본 개시내용의 융합 단백질은 ADCC와 CDC 중 하나 또는 둘 다의 이러한 효과기 기능을 보유하는 불변 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 결합 도메인은 인간 IgG1 불변 영역에 융합되되, IgG1 불변 영역은 다음의 돌연변이된 아미노산 중 하나 이상을 갖는다: 234번 위치에서 류신(L234), 235번 위치에서 류신(L235), 237번 위치에서 글리신(G237), 318번 위치에서 글루타메이트(E318), 320번 위치에서 라이신(K320), 322번 위치에서 라이신(K322), 또는 이들의 임의의 조합(EU에 따른 넘버링). 예를 들어, 이들 아미노산 중 임의의 하나 이상은 알라닌으로 바꿀 수 있다. 추가 실시형태에서, IgG1 Fc 도메인은 L234, L235, G237, E318, K320 및 K322(EU 넘버링에 따름) 각각이 알라닌으로 돌연변이되고(즉, 각각 L234A, L235A, G237A, E318A, K320A 및 K322A), 선택적으로 N297A 돌연변이도 갖는다(즉, CH2 도메인의 글리코실화를 본질적으로 제거함). 다른 실시형태에서, IgG1 Fc 도메인은 각각의 L234A, L235A, G237A 및 K322A 돌연변이 갖는다.
"Fc 영역" 또는 "Fc 도메인"은 세포 상의 항체 수용체 및 보체의 C1q 성분에 대한 결합을 초래하는 공급원 항체의 부분에 대응하거나 또는 이로부터 유래된 폴리펩타이드 서열을 지칭한다. Fc는 "단편 결정질", 즉, 단백질 결정을 용이하게 형성할 항체의 단편을 나타낸다. 본래 단백질 분해로 설명된 별도의 단백질 단편은 면역글로불린 단백질의 전체 일반 구조를 정할 수 있다. 문헌에 의해 본래 정의된 바와 같이, Fc 단편은 이황화연결된 중쇄 힌지 영역, CH2 및 CH3 도메인으로 이루어진다. 그러나, 보다 최근에 상기 용어는 CH3, CH2, 및 제2의 사슬을 갖는 이황화연결된 이량체를 형성하기에 충분한 힌지의 적어도 일부로 이루어진 단일쇄에 적용되었다. 면역글로불린 구조 및 기능의 검토를 위해, 문헌[Putnam, The Plasma Proteins, Vol. V (Academic Press, Inc., 1987), pp. 49-140; 및 Padlan, Mol. Immunol. 31:169-217, 1994]을 참조한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 Fc는 천연 유래 서열의 변이체를 포함한다.
용어 환자 및 대상체는 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "필요로 하는 환자" 또는 "필요로 하는 대상체"는 본 명세서에 제공된 치료제 단백질 또는 이의 조성물에 의해 치료 또는 개선될 수 있는 질환, 장애 또는 병태의 위험에 있거나, 이를 앓고 있는 대상체를 지칭한다. 필요로 하는 대상체는, 예를 들어, CD123의 발현과 연관된 질환, 예컨대, 급성 골수성 백혈병(AML), B-림프성 백혈병, 모구 형질세포양 수지상 신생물(BPDCN), 털세포 백혈병(HCL), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 모세포과다불응성빈혈(RAEB), 만성 골수성 백혈병 및 호지킨 림프종으로 진단된 환자일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 당업계에 잘 공지된 경로를 이용하여 투여될 때 알레르기 또는 다른 심각한 유해반응을 일반적으로 생성하지 않는 분자 독립체 및 조성물을 지칭한다. 연방정부 또는 주정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 또는 미국 약전 또는 동물에서의 사용을 위해 일반적으로 인식되는 기타 약전에 의해 열거된 분자 독립체 및 조성물은 "약제학적으로 허용 가능한" 것으로 간주된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "핵산", "핵산 분자" 또는 "폴리뉴클레오타이드"는 단일- 또는 이중 가닥 형태로 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드 및 이들의 중합체를 지칭한다. 구체적으로 제한되지 않는 한, 상기 용어는 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 갖고 천연 유래 뉴클레오타이드와 유사한 방식으로 대사된 천연 뉴클레오타이드의 핵산 함유 유사체를 포함한다. 달리 표시되지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 상보적으로 변형된 이의 변이체(예를 들어, 축퇴 코돈 치환) 및 상보성 서열뿐만 아니라 분명하게 표시된 서열을 절대적으로 포함한다. 구체적으로는, 축퇴 코돈 치환은 하나 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 세 번째 위치가 혼합-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환되는 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다(Batzer et al. (1991) Nucleic Acid Res. 19:5081; Ohtsuka et al. (1985) J. Biol. Chem. 260:2605-2608; Cassol et al. (1992); Rossolini et al. (1994) Mol. Cell. Probes 8:91-98). 용어 핵산은 유전자, cDNA, 및 유전자에 의해 암호화된 mRNA와 상호 호환적으로 사용된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "핵산", "핵산 분자" 또는 "폴리뉴클레오타이드"는 뉴클레오타이드 유사체, 및 유도체, 단편 및 상동체를 이용하여 생성된 DNA 또는 RNA의 유사체, DNA 분자(예를 들어, cDNA 또는 게놈 DNA), RNA 분자(예를 들어, mRNA)를 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "발현"은 핵산에 의해 암호화된 생성물의 생합성을 지칭한다. 예를 들어, 관심의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 세그먼트의 경우에, 발현은 핵산 세그먼트의 mRNA로의 전사 및 mRNA의 하나 이상의 폴리펩타이드로의 번역을 수반한다.
용어 "발현 단위"와 "발현 카세트"는 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용되고, 관심의 폴리펩타이드를 암호화하고 숙주 세포에서 핵산 세그먼트의 발현을 제공할 수 있는 핵산 세그먼트를 의미한다. 발현 단위는 전형적으로 전사 프로모터, 관심의 폴리펩타이드를 암호화하는 오픈 리딩 프레임, 및 전사 종결자를 모두 작동 가능한 입체배치로 포함한다. 전사 프로모터 및 종결자에 추가로, 발현 단위는 다른 핵산 세그먼트, 예컨대, 인핸서 또는 폴리아데닐화 신호를 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "발현 벡터"는 하나 이상의 발현 단위를 포함하는 선형 또는 원형의 핵산 분자를 지칭한다. 하나 이상의 발현 단위에 추가로, 발현 벡터는 또한 추가적인 핵산 세그먼트, 예컨대, 하나 이상의 복제기점 또는 하나 이상의 선택 가능한 마커를 포함할 수 있다. 발현 벡터는 일반적으로 플라스미드 또는 바이러스 DNA로부터 유래되거나, 또는 둘 다의 요소를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "서열 동일성"은 둘 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열 사이의 관계 또는 둘 이상의 폴리펩타이드 서열 사이의 관계를 지칭한다. 하나의 서열에서의 위치가 비교 서열의 대응하는 위치에서의 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기에 의해 점유될 때, 서열은 해당 위치에서 "동일한" 것으로 언급된다. 서열 동일성 백분율은 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 서열 둘 다에서 생기는 위치의 수를 결정하여 동일한 위치의 수를 수득함으로써 계산된다. 이어서, 동일한 위치의 수를 비교창에서 위치의 총 수로 나누고, 100을 곱하여서 서열 동일성 백분율을 수득한다. "서열 동일성" 백분율은 비교창에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정된다. 핵산 서열의 비교창은, 예를 들어, 적어도 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000개 이상의 핵산 길이일 수 있다. 폴리펩타이드 서열에 대한 비교창은, 예를 들어, 적어도 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300개 이상의 아미노산 길이일 수 있다. 비교를 위한 서열을 최적으로 정렬하기 위해, 비교창에서 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열의 일부는 첨가 또는 갭으로 지칭되는 결실을 포함하는 한편, 참조 서열은 일정하게 유지된다. 최적의 정렬은 갭에 의할 때조차, 참조 서열과 비교기 서열 사이의 "동일한" 위치의 가장 큰 가능한 수를 생성하는 정렬이다. 두 서열 사이의 "서열 동일성" 백분율은 미국 국가생물공학센터(National Center for Biotechnology Information)로부터 2004년 9월 1일자로 입수 가능한 프로그램 "BLAST 2 Sequences"의 버전을 이용하여 결정될 수 있고, 이 프로그램은 프로그램 BLASTN(뉴클레오타이드 서열 비교용) 및 BLASTP(폴리펩타이드 서열 비교용)를 포함하며, 이 프로그램들은 Karlin과 Altschul의 알고리즘에 기반한다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(12):5873-5877, 1993). "BLAST 2 Sequences"을 이용할 때, 2004년 9월 1일자의 디폴트 파라미터인 파라미터는 단어 크기(3), 오픈 갭 페널티(11), 익스텐션 갭 페널티(1), 갭 드롭 오프(50), 예상치(10) 및 매트릭스 옵션을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 임의의 다른 필요한 파라미터에 대해 사용될 수 있다. 두 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열은 두 서열이 서로에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다면, "실질적으로 유사한 서열 동일성" 또는 "실질적인 서열 동일성"을 갖는 것으로 간주된다.
"CD3"은 T-세포 수용체 복합체의 서브유닛인 6개 쇄의 다중-단백질 복합체로서 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Abbas and Lichtman, 2003; Janeway et al., p. 172 및 178, 1999]). 포유류에서, T-세포 수용체 복합체의 CD3 서브유닛은 CD3γ 쇄, CD3δ 쇄, 2개의 CD3ε 쇄 및 CD3ζ 쇄의 동형이량체이다. CD3γ, CD3δ 및 CD3ε 쇄는 단일 면역글로불린 도메인을 함유하는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 고도로 관련된 세포 표면 단백질이다. CD3γ, CD3δ 및 CD3ε 쇄의 막관통 영역은 음으로 하전되며, 이는 이들 쇄가 양으로 하전된 T-세포 수용체 쇄와 회합되는 것을 허용하는 특징이다. CD3γ, CD3δ 및 CD3ε 쇄의 세포내 꼬리는 각각 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM로 알려진 단일 보존 모티프를 함유하는 반면, 각 CD3ζ 쇄는 3개를 갖는다. ITAM는 TCR 복합체의 신호전달 능력에 중요한 것으로 여겨진다. 본 개시내용에서 사용되는 바와 같은 CD3은 인간, 원숭이, 마우스, 래트 또는 기타 포유류를 비롯한 다양한 동물 종으로부터 유래될 수 있다.
용어 "CD123"은 분화 123의 클러스터, 인터류킨-3 수용체 알파 쇄 및 IL3RA으로도 알려진 CD123의 임의의 아이소폼(isoform)을 지칭할 수 있다. CD123은 인터류킨-3 수용체의 베타 쇄와 회합되어 수용체를 형성한다. CD123은 예측된 Ig-유사 도메인 및 2개의 FnIII 도메인을 포함하는 세포외 도메인을 갖는 I형 막관통 당단백질이다. 본 개시내용의 CD123-결합 도메인은 CD123의 세포외 도메인에 결합한다.
CD123은 인간 인터류킨-3(IL-3) 수용체의 알파쇄로도 알려져 있다. CD123은 I형 막관통 당단백질이고, 사이토카인 수용체 슈퍼패밀리의 구성원이다. 인터류킨-3 수용체는 CD123 및 베타쇄(CD131)에 의해 형성된 이형이량체이다. IL-3은 CD123에 결합하고, 신호 전달은 CD131에 의해 제공된다. IL-3은 조혈 및 면역 세포의 기능 및 생산을 조절하고, 내피세포 증식을 자극한다(Testa et al., Biomark Res. 2:4 (2014)).
CD123은 급성 골수성 백혈병(AML), B-림프성 백혈병, 모구 형질세포양 수지세포 신생물(BPDCN) 및 털세포 백혈병의 서브세트를 비롯한 다수의 혈액 악성종양에서 과발현된다. 대부분의 AML 환자가 초기 요법에 잘 반응하지만, 대다수의 AML 환자는 궁극적으로 재발 또는 난치성 질환으로 진단된다(Ramos et al., J. Clin. Med. 4:665-695 (2015)). 증가된 효율 및 효력 및 감소된 유해효과를 갖고 CD123의 조절장애와 연관된 장애를 치료하기 위해 사용될 수 있는 CD123을 표적화하는 분자에 대한 요구가 있다.
"CD86"은 B7 수용체 슈퍼패밀리에 속하고 T-세포 공자극 분자로서 작용하는 표면 분자로서 당업계에 공지되어 있다(Lu et al. 1997; Vicenti et al. 2008). 이는 보통 항원 제시 세포(APC) 기능을 갖는 세포, 예컨대, 수지상 세포, 단핵구 상에서 발현되고 활성화되지만, 휴지 B 세포 상에서는 발현 및 활성화되지 않는다(Lu et al. 1997; Vicenti et al. 2008). 이는 미경험 인간 단핵구 및 DC에 의해 고수준으로 발현되고, 일부 활성화 조건 하에 추가로 상향조절된다(Hathcock et al. 1994); Sansom et al. 2003). 미경험 단핵구 상의 CD86 발현은 세포당 2,000 내지 5,000개 복제물 범위인 것으로 추정된다(Wolk et al. 2007). 고수준의 CD86 발현은 특정 병리학적 조건에서 염증 조직과 연관되며(Vuckovic et al. 2001; Nakazawa et al. 1999) CD86 및 CD80(후자는 B7 패밀리의 제2 구성원임)은 T-세포 공동 수용체인 CD28과 상호작용함으로써 T-세포 활성화를 용이하게 한다.
"CD86 결합 도메인"은 CD86에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, CD86-결합 도메인은 CD86(예를 들어, 인간 CD86)의 세포외 도메인 상에 위치된 에피토프에 결합한다. 특정 양상에서, 이 에피토프는 불연속적 및/또는 입체구조적 에피토프이다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 CD86에 결합하지만, CD80에는 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 인간 CD86에 결합한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 비인간 영장류 CD86에 결합한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 인간 CD86에 결합하고, 또한 사이노몰거스 CD86과 교차반응한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 사이노몰거스 마카크 단핵구 및 계통 음성 집단(DC)에 결합한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 인간화된다.
"단백질"은 하나 이상의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 거대분자이다. 단백질은 또한 비펩타이드 성분, 예컨대, 탄수화물기를 포함할 수 있다. 탄수화물 및 기타 비펩타이드 치환체는 단백질이 생성된 세포에 의해 단백질에 첨가될 수 있고, 세포 유형에 따라 다를 것이다. 단백질은 이들의 아미노산 골격 구조에 관해 본 명세서에 정의되며; 탄수화물기와 같은 치환체는 일반적으로 명시되지 않지만, 그럼에도 불구하고 존재할 수 있다. 용어 "단백질", "폴리펩타이드", "치료제 단백질" 및 "치료제 폴리펩타이드"는 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다.
치료제 단백질은 항체 또는 항체의 항원-결합 단편일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 또한 scFv-Fc-scFv 분자, 이중특이성 T-세포 관여자(scFv-scFv) 분자 또는 이중 친화도 재표??화 분자일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 재조합 다중특이성 단백질일 수 있다. 다른 실시형태에서, 다중특이성 단백질은 두 상이한 단클론성 항체를 화학적으로 연결함으로써 또는 두 하이브리도마 세포주를 융합시킴으로써 생성되어 혼성-하이브리도마를 생성할 수 있다. 치료제 단백질에 대해 사용될 수 있는 다른 다가 형식은, 예를 들어, scFv-Fc-scFv(예를 들어, ADAPTIR™), 쿼드로마, Κλ-바디, dAb, 다이어바디, TandAb, 나노바디, 스몰 모듈 이뮤노파마슈티컬스(Small Modular ImmunoPharmaceutials: SMIPs™), DOCK-AND-LOCKs®(DNLs®), CrossMab Fab, CrossMab VH-VL, 가닥-교환 조작된 도메인 바디(SEEDbodies), 애피바디, 파이노머, Kunitz 도메인, Albu-dab, 교환된 VH를 갖는 2개의 조작된 Fv 단편(예를 들어, 이중-친화도 재표적화 분자(D.A.R.T.s)), scFv × scFv(예를 들어, BiTE), DVD-IG, Covx-바디, 펩티바디, scFv-Ig, SVD-Ig, dAb-Ig, 노브-인-홀, CH3 도메인에 매칭 돌연변이를 포함하는 IgG1 항체(예를 들어, DuoBody 항체) 및 triomAb를 포함한다. 예시적인 이중특이성 형식은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된 문헌[Garber et al., Nature Reviews Drug Discovery 13:799-801 (2014)]에 논의되어 있다. 추가적인 예시적인 이중특이성 형식은 문헌[Liu et al. Front. Immunol. 8:38 doi: 10.2289/fimmu.2017.00038, 및 Brinkmann and Kontermann, MABS 9: 2, 182-212 (2017)]에서 논의되며, 이들 각각은 본 명세서에 이의 전문이 참조에 의해 원용된다. 특정 실시형태에서, 이중특이성 항체는 F(ab')2 형식일 수 있다. F(ab')2 단편은 힌지 영역에서 이황화결합에 의해 연결된 사량체 항체 분자의 2개의 항원-결합 아암을 포함한다.
용어 "아미노-말단" 및 "카복시-말단"은 폴리펩타이드 내의 위치를 정하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 문맥이 허용하는 경우, 이들 용어는 근위 또는 상대 위치를 나타내기 위해 특정 서열 또는 폴리펩타이드의 부분과 관련하여 사용된다. 예를 들어, 폴리펩타이드 내의 참조 서열에 대해 카복시-말단에 위치된 특정 서열은 참조 서열의 카복시-말단에 대해 근위에 위치되지만, 반드시 완전한 폴리펩타이드의 카복시-말단에 있지는 않다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "치료", "치료하는" 또는 "개선시키는"은 치료적 치료 또는 예방적/방지적 치료 중 하나를 지칭한다. 치료를 받는 개체에서의 질환의 적어도 하나의 증상이 개선되거나 또는 치료가 개체에서의 진행성 질환의 악화를 지연시킬 수 있거나, 또는 추가적인 연관된 질환의 발병을 방지한다면, 치료는 치료적이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "치료적 유효량(또는 용량)" 또는 "효과적인 양(또는 용량)"의 특이적 결합 분자 또는 화합물은 기관 기능에서 통계학적으로 유의미한 방식 또는 통계학적으로 유의미한 개선에서 치료중인 질환의 하나 이상의 증상의 개선을 초래하는 데 충분한 화합물의 양을 지칭한다. 단독으로 투여되는 개개 활성 성분을 언급할 때, 치료적 유효 용량은 성분 단독을 지칭한다. 조성물을 언급할 때, 치료적 유효 용량은 연속적으로 투여되든 또는 동시에 투여되든(동일한 제형으로 또는 별개의 제형으로 병행하여) 치료적 효과를 초래하는 활성 성분의 조합된 양을 지칭한다.
용어 "경쇄 가변 영역"("경쇄 가변 도메인" 또는 "VL" 또는 VL로도 지칭됨) 및 "중쇄 가변 영역"("중쇄 가변 도메인" 또는 "VH" 또는 VH로도 지칭됨)은 각각 항체 경쇄 및 중쇄로부터의 가변 결합 영역을 지칭한다. 가변 결합 영역은 아미노-말단에서 카복시-말단까지 일반적으로 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 순서로 "상보성 결정 영역"(CDR) 및 "프레임워크 영역"(FR)으로 알려진 별개의 잘 규정된 하위-영역으로 구성된다. 일 실시형태에서, FR은 인간화된다. 용어 "CL"은 "면역글로불린 경쇄 불변 영역" 또는 "경쇄 불변 영역", 즉, 항체 경쇄로부터의 불변 영역을 지칭한다. 용어 "CH"는 항체 아이소타입에 따라서 CH1, CH2 및 CH3(IgA, IgD, IgG), 또는 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인(IgE, IgM)으로 추가로 나눌 수 있는 "면역글로불린 중쇄 불변 영역" 또는 "중쇄 불변 영역"을 지칭한다. "Fab"(단편 항원 결합)는 항원에 결합하는 항체의 부분이고, 쇄간 이황화결합을 통해 경쇄에 연결된 중쇄의 가변 영역 및 CH1 도메인을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "치료제 단백질을 보유하는 데 적합한 용기"는 치료제 단백질을 보유 및/또는 전달하는 데 적합한 임의의 임상적으로 허용 가능한 용기를 지칭한다. 이러한 용기의 비제한적 예는, 예를 들어, IV 백, 주사기, 관/튜빙 등을 포함한다. 일부 실시형태에서, 용기는 라텍스 및/또는 비스(2-에틸헥실) 프탈레이트(DEHP)가 실질적으로 없다.
"정맥내 약물 전달 시스템"은 약물을 준비(예를 들어, 희석, 혼합 등)하고/하거나 약물을 대상체 또는 환자에게 정맥내로 전달하기 위해 사용되는 임의의 임상적으로 허용 가능한 시스템을 지칭할 수 있다. 이러한 시스템은, 예를 들어, IV 백, 주사기, 관/튜빙, 펌프, 바늘 등을 포함할 수 있다.
단백질 흡수를 방지하기 위한 조성물
치료제 단백질은 종종 약물 전달 시스템을 이용하여 정맥내로 투여된다. 예를 들어, 단백질 치료제를 함유하는 멸균 용액은 IV 백 또는 다른 용기에 제공될 수 있고, 환자의 정맥 내로 삽입되는 바늘에 부착된 관을 통해 환자의 신체에 주사/주입된다. 따라서, 치료제 단백질의 투여 동안, 단백질은 약물 전달 시스템의 하나 이상의 표면, 예를 들어, IV 백 또는 관의 내면과 접촉하게 된다. 치료제 단백질은, 예를 들어, 단백질 표면 상에서 하전된 아미노산이 표면과 상호작용할 때, 이러한 표면에 흡착되는 것으로 알려져 있다. 단백질이 표면에 부착된 채로 남아있는 경향은 물질 특성, 예컨대, 표면 에너지, 질감 및 상대 전하 분포에 대체로 따른다. 보다 큰 단백질은 아미노산과 표면 사이의 접착 부위의 보다 많은 수로 인해 표면에 흡착되거나 부착된 채로 남아있을 가능성이 더 크다.
단백질 흡착은 환자에 대한 치료제 단백질의 투여 동안에 상당한 우려가 있을 수 있다. 예를 들어, 약물 전달 시스템 표면에 대한 치료제 단백질의 흡착은 환자에 전달되는 단백질의 용량을 감소시킬 수 있다. 단백질 흡착은 저용량 및/또는 저농도(즉, 10mcg/㎖ 이하)에서 단백질 치료제의 투여 동안 특히 문제가 될 수 있다.
본 개시내용은 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분 상에서의 단백질 흡착을 감소 또는 제거하기 위해 사용될 수 있는 조성물을 제공한다. 조성물은 치료제 단백질의 투여 전에, 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분의 표면과 접촉된다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약물 전달 시스템의 적어도 하나의 성분의 내면을 코팅하고, 치료제 단백질이 해당 성분의 내면에 결합하는 것을 방지한다.
단백질 흡착을 방지하기 위한 조성물은 완충제 및 계면활성제를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 치료제 단백질을 추가로 포함할 수 있다. 조성물의 pH는 약 5.0 내지 약 7.0, 예를 들어, 약 5.0, 약 5.25, 약 5.5, 약 5.75, 약 6.0, 약 6.25, 약 6.5, 약 6.75 또는 약 7.0의 범위일 수 있다.
일부 실시형태에서, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 완충제 및 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 계면활성제를 포함한다. 실시형태에서, 조성물은 약 4mM 내지 약 6mM의 완충제, 예를 들어, 약 5mM의 완충제를 포함한다.
추가 실시형태에서, 조성물은 약 25 내지 약 150mM의 완충제를 포함한다. 실시형태에서, 조성물은 약 75 내지 약 125mM의 완충제, 예를 들어, 약 100mM의 완충제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.002%(w/v) 내지 약 0.008%(w/v)의 계면활성제를 포함한다. 실시형태에서, 조성물은 약 0.004%(w/v)의 계면활성제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)의 계면활성제를 포함한다. 예를 들어, 조성물은 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)의 계면활성제를 포함할 수 있다. 구체적 실시형태에서, 조성물은 약 0.08%(w/v)의 계면활성제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 완충제는 석시네이트 완충제일 수 있다. 일부 실시형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트-80일 수 있다. 추가 실시형태에서, 완충제는 석시네이트일 수 있고, 계면활성제는 폴리소르베이트-80일 수 있다. 석시네이트는 석신산의 염 또는 에스터이다. 폴리소르베이트 80은 비이온성 계면활성제 및 유화제이다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 치료제 단백질의 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 석시네이트 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 25 내지 약 150mM의 석시네이트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 75 내지 약 125mM의 석시네이트, 예를 들어, 약 100mM의 석시네이트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.002%(w/v) 내지 약 0.008%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 실시형태에서, 조성물은 약 0.004%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 실시형태에서, 조성물은 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 예를 들어, 조성물은 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.08%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다.
실시형태에서, 조성물은 약 4mM 내지 약 6mM 석시네이트, 예를 들어, 약 5mM의 석시네이트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.002%(w/v) 내지 약 0.008%(w/v) 폴리소르베이트 80, 예컨대, 약 0.004%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 물에서 약 5mM의 석시네이트 및 약 0.0004%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하되, 조성물의 pH는 약 6.0이고, 조성물은 주사용으로 제형화된다.
일부 실시형태에서, 조성물은 치료제 단백질을 추가로 포함한다. 치료제 단백질의 농도는 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 농도는 약 0.01, 약 0.02, 약 0.03, 약 0.04, 약 0.05, 약 0.06, 약 0.07, 약 0.08 또는 약 0.09㎍/㎖이다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 농도는 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8 또는 약 0.9㎍/㎖이다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 농도는 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9 또는 약 2.0㎍/㎖이다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 치료제 단백질의 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 약 100mM 석시네이트, 약 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 80 및 치료적 유효량의 치료제 단백질을 포함한다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 치료제 단백질의 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 제1 표적에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인, 힌지 영역, 면역글로불린 불변 영역, 제2 표적에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 표적은 CD86이다. 일부 실시형태에서, 제1 표적은 CD123이다. 일부 실시형태에서, 제2 표적은 IL-10의 수용체이다. 일부 실시형태에서, 제2 표적은 CD3ε이다. 일부 실시형태에서, 제1 표적은 CD86이고, 제2 표적은 IL-10의 수용체이다. 일부 실시형태에서, 제1 표적은 CD123이고, 제2 표적은 CD3ε이다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 제1 결합 도메인, 힌지 영역, 면역글로불린 불변 영역 및 제2 결합 도메인을 포함하고, 제1 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며; HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, HCDR2는 서열번호 11을 포함하며, HDCR3은 서열번호 12을 포함하고; LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, LCDR3은 서열번호 15를 포함하고, 제2 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고; HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, HDCR3은 서열번호 21을 포함하며; LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, LCDR3은 서열번호 24를 포함한다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 서열번호 31의 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고, CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하며, 면역글로불린 Fc 도메인은 Fc 수용체 FcγR, FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIIb에 대한 결합을 방지하거나 유의미하게 감소시키는 둘 이상의 돌연변이를 포함하는 IgG1 Fc 도메인이고, 단량체 IL-10 도메인은 짧은 링커에 의해 분리되는 인간 IL-10의 2개의 서브유닛을 포함하며, 치료제 단백질은 동형이량체이다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로: CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고, CD86 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2이며, HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3이고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4이며, LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6이며, 단량체 IL-10 도메인은 서열번호28의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80; 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고, CD86 결합 도메인은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질을 포함하되, 치료제 단백질은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 조성물은 1× 초과인 농도로 제공될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 10× 내지 50× 농도일 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 2×, 5×, 10×, 15×, 20×, 25×, 30×, 35×, 40×, 45× 또는 50× 농도일 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 20× 농도이다. 이 문맥에서 사용되는 바와 같은 "×"는 용액이 사용을 위해 보통 1× 농도로 희석되어야 하는 농축된 형태라는 것을 나타낸다. 예를 들어, 5× 농축된 용액은 5배 희석되어야 하는 한편, 100× 농축된 용액은 100배 희석되어야 한다. 희석은, 예를 들어, 물 또는 식염수를 이용하여 수행될 수 있다.
일부 실시형태에서, 조성물은 약 25 내지 약 150mM 석시네이트 및 약 0.01% 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 75mM 내지 약 125mM의 석시네이트, 예컨대, 약 100mM의 석시네이트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80, 예컨대, 약 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물의 pH는 약 5.0 내지 약 7.0, 예컨대, 약 6.0이다. 일부 실시형태에서, 조성물은 물에서 약 100mM의 석시네이트 및 약 0.08%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하되, 조성물의 pH는 약 6.0이고, 조성물은 주사용으로 제형화된다.
일부 실시형태에서, 20× IVSS 용액이 제공되되, 20× 용액은 약 25 내지 약 150mM 석시네이트 및 약 0.01% 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 20× IVSS 용액은 약 100mM의 석시네이트 및 약 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 20× IVSS 용액은 물에서 약 100mM의 석시네이트 및 약 0.08%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하되, 조성물의 pH는 약 6.0이고, 조성물은 주사용으로 제형화된다.
일부 실시형태에서, 20× IVSS 용액은 1× 농도로 희석된다. 일부 실시형태에서, 1× IVSS 용액은 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 1× IVSS 용액은 약 5mM의 석시네이트 및 약 0.004%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 실시형태에서, 1× IVSS 용액은 물에서 약 5mM의 석시네이트 및 약 0.004%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하되, 조성물의 pH는 약 6.0이고, 조성물은 주사용으로 제형화된다. 일부 실시형태에서, 1× IVSS 용액은 치료제 단백질, 예컨대, 항-CD123 × 항-CD3 이중특이성 결합 단백질 또는 항-CD86 × 단량체 IL-10 결합 단백질을 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 1× IVSS 용액(치료제 단백질이 있거나 또는 없음)은, 치료제 단백질의 전달 전에, 치료제 단백질의 전달에 적합한 약물 전달 시스템의 적어도 하나의 성분을 코팅하는 데 사용된다.
일부 실시형태에서, 조성물은 1종 이상의 추가적인 성분, 예컨대, 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.
치료 단백질
본 명세서에 기재된 조성물 및 방법은 치료제 단백질이 하나 이상의 표면에 흡착하는 것을 방지하기 위해, 다수의 상이한 유형의 치료제 단백질의 제조, 보관 및/또는 투여와 관련하여 사용될 수 있다. 제 단백질은, 예를 들어, 항체-기반 약물, Fc 융합 단백질, 항응고제, 혈액 인자, 뼈형성 단백질, 조작된 단백질 스캐폴드, 효소, 성장 인자, 호르몬, 사이토카인, 인터페론, 인터류킨 또는 혈전용해제일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 표적 수용체에 대한 리간드이다.
결합 도메인
일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 적어도 하나의 결합 도메인을 포함한다. 결합 도메인은 적어도 하나의 세포-표면 분자(예를 들어, 세포-표면 수용체)에 특이적 결합을 제공할 수 있다. 결합 도메인은 항체, 또는 이의 단편, 또는 임의의 다양한 상이한 형식의 융합 단백질 형태일 수 있다(예를 들어, 융합 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성 분자의 형태일 수 있다). 다른 실시형태에서, 결합 도메인은 결합 도메인 폴리펩타이드를, 예를 들어, 특정 세포 유형, 독소, 추가적인 세포 수용체, 또는 항체에 표적화하는, 예를 들어, 특정 사이토카인 또는 분자를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 결합 도메인은 항체로부터 유래되고, 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함한다. 예를 들어, 단일쇄 가변 단편(scFv)은 VH 및 VL 쇄를 포함한다. 이들 결합 도메인 및 가변 쇄는 표적(들)에 일부 결합을 여전히 보유하는 임의의 순서로 배열될 수 있다. 일부 실시형태에서, 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 및 단백질은 scFv인 결합 도메인을 포함한다. 이러한 실시형태에서, 결합 도메인은 scFv 도메인으로 지칭될 수 있다. 일부 실시형태에서, 결합 도메인은 관심의 표적에 특이적인 VH 및 VL 영역을 포함하는 단일쇄 Fv 단편(scFv)이다. 특정 실시형태에서, VH 및 VL 영역은 인간이거나 인간화된다. 일부 변형에서, 결합 도메인은 펩타이드 링커에 의해 결합된 VL 및 VH 영역을 포함하는 단일쇄 Fv(scFv)이다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 결합 도메인은 (i) CDR LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL), 및 (ii) CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 작제물에 제공되는 아미노산 서열은 인간 면역글로불린 리더 서열을 포함하지 않는다. CDR 서열과 나타난 아미노산 치환 위치는 IMGT 기준을 이용하여 정해진 것이다(Brochet et al, Nucl. Acids Res. (2008) 36, W503-508).
특정 실시형태에서, 본 개시내용의 결합 도메인 VL 및/또는 VH 영역은 모 VL 및/또는 VH 영역의 VL 및/또는 VH로부터 유래되고(예를 들어, PCT 공개 WO 2016/185016에 기재된 바와 같은 1618/1619), 선택적으로, 알려진 단클론성 항체의 VL 및/또는 VH 서열과 비교할 때, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 삽입, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 결실, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환 또는 비보존적 아미노산 치환), 또는 상기 언급한 변화의 조합을 포함한다. 삽입(들), 결실(들) 또는 치환(들)은 아미노- 또는 카복시-말단 또는 이 영역의 단부 둘 다에서를 포함하는 VL 및/또는 VH 영역 어디에서나 있을 수 있으며, 단, 각각의 CDR은 0개의 변화 또는 1, 2 또는 3개 이하의 변화를 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 VL 및/또는 VH 영역을 포함하는 결합 도메인은 여전히 모 결합 도메인과 유사하거나 더 큰 친화도로 이의 표적에 특이적으로 결합할 수 있다.
VL 및 VH 영역에 결합하기 위한 펩타이드 링커의 사용은 당업계에 잘 공지되어 있으며, 다수의 간행물이 본 특정 분야에 존재한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 128) 아미노산 서열 ((Gly4Ser)3)(서열번호 59)의 3개의 반복부로 이루어진 15량체이다. 다른 링커가 사용되었고, 적절한 링커 서열을 다양화 및 선택하기 위해 파지 디스플레이 기술뿐만 아니라 선택적 감염 파지 기술이 사용되었다(Tang et al., J. Biol. Chem. 271, 15682-15686, 1996; Hennecke et al., Protein Eng. 11, 405-410, 1998). 특정 실시형태에서, VL 및 VH 영역은 식 (Gly4Ser)n을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 펩타이드 링커에 의해 결합되되, n = 1 내지 5이다(서열번호 129). 예를 들어, 본 발명의 일 실시형태에서, 링커는 (Gly4Ser)4(서열번호61)를 포함한다. 다른 적합한 링커는 무작위 돌연변이유발을 통해 단순한 링커를 최적화함으로써 얻을 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 scFv의 VH 영역은 링커 서열에 대해 N-말단에 위치될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 scFv의 VL 영역은 링커 서열에 대해 C-말단에 위치될 수 있다.
힌지
결합 도메인에 추가로, 치료 폴리펩타이드는 힌지 영역을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 힌지는, 야생형 면역글로불린 힌지 영역에서 하나 이상의 시스테인 잔기가 하나 이상의 다른 아미노산 잔기(예를 들어, 세린 또는 알라닌)로 치환되는 변경된 면역글로불린 힌지이다. 예시적인 변경된 면역글로불린 힌지, 카복시-말단 링커 및 아미노-말단 링커는 1, 2 또는 3개의 상이한 아미노산 잔기(예를 들어, 세린 또는 알라닌)으로 치환된 야생형 인간 IgG1 힌지에서 발견되는 1, 2 또는 3개의 시스테인 잔기를 갖는 면역글로불린 인간 IgG1 힌지 영역을 포함한다. 변경된 면역글로불린 힌지는 다른 아미노산(예를 들어, 세린 또는 알라닌)으로 치환되는 프롤린을 추가로 가질 수 있다. 예를 들어, 위에서 기재한 변경된 인간 IgG1 힌지는 다른 아미노산 잔기(예를 들어, 세린, 알라닌)로 치환되는 야생형 인간 IgG1 힌지 영역의 3개의 시스테인에 대해 카복시-말단에 위치된 프롤린을 추가로 가질 수 있다. 일 실시형태에서, 코어 힌지 영역의 프롤린은 치환되지 않는다. 특정 실시형태에서, 힌지, 카복시-말단 링커 또는 아미노-말단 링커 폴리펩타이드는 야생형 면역글로불린 힌지 영역, 예컨대, 야생형 인간 IgG1 힌지, 야생형 인간 IgG2 힌지 또는 야생형 인간 IgG4 힌지에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나, 이러한 서열이다.
면역글로불린 불변 도메인
치료 단백질은 또한 면역글로불린 불변(Fc) 도메인(본 명세서에서 불변 영역, Fc 도메인, Fc 영역 등으로 지칭됨)을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 IgG CH2 및 CH3 도메인, 예를 들어, IgG1 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 CH1 도메인을 포함하지 않는다. 특정 실시형태에서, 불변 영역을 구성하는 불변 도메인을 구성하는 불변 도메인은 인간이거나 또는 인간 서열로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 234, 235, 237 및 322번 위치에 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 234, 235, 237, 318, 320 및 322번 위치에 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 돌연변이 L234A, L235A, G237A 및 K322A를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 돌연변이 L234A, L235A, G237A, E318A, K320A 및 K322A를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 IgG1로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, IgG1로부터 유래된 Fc 도메인은 환자에게 투여될 때, 폴리펩타이드가 CD86 및/또는 IL-10R 발현 세포를 고갈시키는 것을 방지하는 둘 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, IgG1 Fc 도메인에서 둘 이상의 돌연변이는 Fc-매개 가교를 통해 신호전달을 방지하거나 실질적으로 감소시킨다.
일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 서열번호 32 내지 35 중 임의의 하나의 아미노산 서열, 또는 이의 변이체를 포함한다. 면역글로불린 불변 영역의 포함은 대상체에 대한 투여 후 순환으로부터의 본 발명의 폴리펩타이드 및 단백질의 제거를 늦춘다. 돌연변이 또는 다른 변경에 의해, 면역글로불린 불변 영역은 폴리펩타이드 효과기 기능(예를 들어, ADCC, ADCP, CDC, 보체 고정, 및 Fc 수용체에 대한 결합)의 상대적으로 용이한 조절을 추가로 가능하게 하며, 이는 당업계에 알려져 있고 본 명세서에 기재된 바와 같은 치료 중인 질환에 따라서 증가 또는 감소될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 및 단백질은 이들 효과기 기능 중 하나 이상을 매개할 수 있는 면역글로불린 불변 영역을 포함한다. 다른 실시형태에서, 이들 효과기 기능 중 하나 이상은 대응하는 야생형 면역글로불린 불변 영역에 비해서, 본 개시내용에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 면역글로불린 불변 영역에서 감소되거나 또는 존재하지 않는다.
본 개시내용의 폴리펩타이드 및 단백질에 존재하는 면역글로불린 불변 영역은 CH2 도메인, CH3 도메인, CH4 도메인 또는 이들의 임의의 조합의 일부 또는 모두를 포함하거나, 이들로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 면역글로불린 불변 영역은 CH2 도메인, CH3 도메인, CH2와 CH3 도메인 둘 다, CH3과 CH4 도메인 둘 다, 2개의 CH3 도메인, CH4 도메인, 2개의 CH4 도메인, 및 CH2 도메인, 및 CH3 도메인의 부분을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질은 CH1 도메인을 포함하지 않는다.
본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질은 특정 면역글로불린 부류 또는 하위부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 또는 IgD)로부터의 그리고 다양한 종(인간, 마우스, 래트 및 다른 포유류를 포함함)으로부터의 야생형 면역글로불린 CH2 도메인 또는 변경된 면역글로불린 CH2 도메인을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 CH2 도메인은 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 각각 서열번호 115, 199 내지 201 및 195 내지 197(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에 제시된 바와 같은 야생형 인간 면역글로불린 CH2 도메인, 예컨대, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 또는 IgD의 야생형 CH2 도메인이다. 특정 실시형태에서, CH2 도메인은 미국 특허 공개 US 2013/0129723의 서열번호 115(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에 제시된 바와 같은 야생형 인간 IgG1 CH2 도메인이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용의 폴리펩타이드 또는 단백질에서 변경된 CH2 영역은 야생형 면역글로불린 CH2 영역, 예컨대, 야생형 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4, 또는 마우스 IgG2a의 CH2 영역(예를 들어, IGHG2c)에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 서열을 포함하거나, 이러한 서열이다.
본 개시내용의 폴리펩타이드 또는 단백질에서 변경된 면역글로불린 CH2 영역은 다양한 종(인간, 마우스, 래트 및 다른 포유류를 포함함)으로부터의 다양한 면역글로불린 아이소타입, 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 및 IgD의 CH2 영역으로부터 유래될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 융합 단백질에서 변경된 면역글로불린 CH2 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4, 또는 마우스 IgG2a의 CH2 영역(예를 들어, IGHG2c)으로부터 유래될 수 있으며, 이의 서열은 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 115, 199, 201 및 320에 제시되어 있다(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨). 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 변경된 CH2 도메인은 면역학적 활성(즉, 효과기 기능), 예컨대, ADCC, ADCP, CDC, 보체 고정, Fc 수용체 결합 또는 이들의 임의의 조합을 향상시키거나 감소시키는 당업계에 공지된 돌연변이를 갖는 변경된 인간 IgG1 CH2 도메인이다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 CH2 도메인은 하나 이상의 아미노산 결실 또는 치환을 포함하는 변경된 면역글로불린 CH2 영역(예를 들어, 변경된 인간 IgG1 CH2 도메인)이다. 일부 실시형태에서, CH2 도메인은 297번 위치의 아스파라긴에서의 아미노산 치환(예를 들어, 아스파라긴의 알라닌으로의 치환)을 포함한다. 이러한 아미노산 치환은 이 부위에서 글리코실화를 감소시키거나 제거하고, FcγR 및 C1q에 대해 효율적인 Fc 결합을 없앤다. 297번 위치에서 Asn에서 Ala으로의 치환을 갖는 변경된 인간 IgG1 CH2 도메인의 서열은 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 324(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에 제시된다. 일부 실시형태에서, 변경된 CH2 도메인은 234 내지 238번 위치에서 적어도 하나의 치환 또는 결실을 포함한다. 예를 들어, 면역글로불린 CH2 영역은 234, 235, 236, 237 또는 238번 위치; 234 및 235번 위치; 234 및 236번 위치; 234 및 237번 위치; 234 및 238번 위치; 234 내지 236번 위치; 234, 235 및 237번 위치; 234, 236 및 238번 위치; 234, 235, 237 및 238번 위치; 236 내지 238번 위치; 또는 234 내지 238번 위치에서 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산의 임의의 다른 조합에서 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 변경된 CH2 영역은 234 내지 238 위치에서, 예를 들어, 236번 위치 또는 237번 위치 중 하나에서 하나 이상의(예를 들어, 2, 3, 4 또는 5개의) 아미노산 결실을 포함하는 한편, 다른 위치는 치환된다. 특정 실시형태에서, 234 내지 238번 위치 중 하나 이상에서 아미노산 잔기는 하나 이상의 알라닌 잔기로 대체되었다. 추가 실시형태에서, 234 내지 238번 위치에서 아미노산 잔기 중 하나만이 결실된 한편, 234 내지 238번 위치에서 남아있는 아미노산 중 하나 이상은 다른 아미노산(예를 들어, 알라닌 또는 세린)으로 치환될 수 있다.
일부 실시형태에서, 상기 언급한 돌연변이(들)는 변경된 CH2 도메인을 포함하는 폴리펩타이드의 ADCC 활성 또는 Fc 수용체-결합 능력을 감소 또는 제거한다.
특정 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 CH2 도메인은 253, 310, 318, 320, 322 및 331번 위치에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 변경된 면역글로불린 CH2 영역(예를 들어, 변경된 인간 IgG1 CH2 도메인)이다. 예를 들어, 면역글로불린 CH2 영역은 253, 310, 318, 320, 322 또는 331번 위치, 318 및 320번 위치, 318 및 322번 위치, 318, 320 및 322번 위치, 또는 253, 310, 318, 320, 322 및 331번 위치에서 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산의 임의의 다른 조합에서 치환을 포함할 수 있다. 이러한 실시형태에서, 상기 언급한 돌연변이(들)는 변경된 CH2 도메인을 포함하는 폴리펩타이드의 CDC 활성을 감소 또는 제거한다.
특정 다른 실시형태에서, 297번 위치에서의 아미노산 치환에 추가로, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 변경된 CH2 영역(예를 들어, 변경된 인간 IgG1 CH2 도메인)은 234 내지 238번 위치에서 하나 이상의(예를 들어, 2, 3, 4 또는 5개의) 추가적인 치환을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역글로불린 CH2 영역은 234 및 297번 위치, 234, 235 및 297번 위치, 234, 236 및 297번 위치, 234 내지 236 및 297번 위치, 234, 235, 237 및 297번 위치, 234, 236, 238 및 297번 위치, 234, 235, 237, 238 및 297번 위치, 236 내지 238 및 297번 위치, 또는 297번 위치에 추가로 234 내지 238번 위치에서 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산의 임의의 조합에서 치환을 포함할 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, 변경된 CH2 영역은 234 내지 238번 위치에서, 예컨대, 236번 위치 또는 237번 위치에서 하나 이상의(예를 들어, 2, 3, 4 또는 5개의) 아미노산 결실을 포함할 수 있다. 추가적인 돌연변이(들)는 변경된 CH2 도메인을 포함하는 폴리펩타이드의 ADCC 활성 또는 Fc 수용체-결합 능력을 감소 또는 제거한다. 특정 실시형태에서, 234 내지 238번 위치 중 하나 이상에서 아미노산 잔기는 하나 이상의 알라닌 잔기로 대체되었다. 추가 실시형태에서, 234 내지 238번 위치에서 아미노산 잔기 중 하나만이 결실된 한편, 234 내지 238번 위치에서 남아있는 아미노산 중 하나 이상은 다른 아미노산(예를 들어, 알라닌 또는 세린)으로 치환될 수 있다.
특정 실시형태에서, 234 내지 238번 위치에서 하나 이상의(예를 들어, 2, 3, 4 또는 5개의) 아미노산 치환에 추가로, 본 개시내용의 융합 단백질에서 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 돌연변이된 CH2 영역(예를 들어, 변경된 인간 IgG1 CH2 도메인)은 보체 고정에 관련된 하나 이상의 위치에서(예를 들어, I253, H310, E318, K320, K322 또는 P331 위치에서) 하나 이상의(예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6개의) 추가적인 아미노산 치환(예를 들어, 알라닌으로 치환됨)을 포함할 수 있다. 돌연변이된 면역글로불린 CH2 영역의 예는 234, 235, 237(존재하는 경우), 318, 320 및 322번 위치에서 알라닌 치환을 갖는 인간 IgG1, IgG2, IgG4 및 마우스 IgG2a CH2 영역을 포함한다. 예시적인 돌연변이된 면역글로불린 CH2 영역은 L234, L235, G237, E318, K320 및 K322에서 알라닌 치환을 갖는 마우스 IGHG2c CH2 영역이다.
또한 추가 실시형태에서, 297번 위치에서 아미노산 치환 및 234 내지 238번 위치에서 추가적인 결실(들) 또는 치환(들)에 추가로, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 변경된 CH2 영역(예를 들어, 변경된 인간 IgG1 CH2 도메인)은 253, 310, 318, 320, 322 및 331번 위치에서 하나 이상의(예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6개의) 추가적인 치환을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역글로불린 CH2 영역은 (1) 297번 위치에서 치환, (2) 234 내지 238번 위치에서 하나 이상의 치환 또는 결실 또는 이들의 조합, 및 I253, H310, E318, K320, K322 및 P331 위치에서 하나 이상의(예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6) 아미노산 치환, 예컨대, E318, K320 및 K322 위치에서 1, 2, 3개의 치환을 포함할 수 있다. 상기 언급한 위치에서 아미노산은 알라닌 또는 세린으로 치환될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 면역글로불린 CH2 영역은: (i) 297번 위치의 아스파라긴에서 아미노산 치환 및 234, 235, 236 또는 237번 위치에서 하나의 아미노산 치환; (ii) 297번 위치의 아스파라긴에서 아미노산 치환 및 234 내지 237번 위치 중 둘에서 아미노산 치환; (iii) 297번 위치의 아스파라긴에서 아미노산 치환 및 234 내지 237번 위치의 셋에서 아미노산 치환; (iv) 297번 위치의 아스파라긴에서 아미노산 치환, 234, 235 및 237번 위치에서 아미노산 치환, 및 236번 위치에서 아미노산 결실; (v) 234 내지 237번 위치 중 셋에서 아미노산 치환 및 318, 320 및 322번 위치에서 아미노산 치환; 또는 (vi) 234 내지 237번 위치 중 셋에서 아미노산 치환, 236번 위치에서 아미노산 결실, 및 318, 320 및 322번 위치에서 아미노산 치환을 포함한다.
297번 위치의 아스파라긴에서 아미노산 치환을 갖는 예시적인 변경된 면역글로불린 CH2 영역은 L234, L235, G237 및 N297에서 알라닌 치환 및 G236에서 결실을 갖는 인간 IgG1 CH2 영역(미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 325를 포함하고, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), V234, G236 및 N297에서 알라닌 치환을 갖는 인간 IgG2 CH2 영역(미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 326, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), F234, L235, G237 및 N297에서 알라닌 치환 및 G236의 결실을 갖는 인간 IgG4 CH2 영역(미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 322, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), F234 및 N297에서 알라닌 치환을 갖는 인간 IgG4 CH2 영역(미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 343, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), L235 및 N297에서 알라닌 치환을 갖는 인간 IgG4 CH2 영역(미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 344, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), G236 및 N297에서 알라닌 치환을 갖는 인간 IgG4 CH2 영역(미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 345, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), 및 G237 및 N297에서 알라닌 치환을 갖는 인간 IgG4 CH2 영역(미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 346, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)을 포함한다. 이들 CH2 영역은 본 개시내용의 폴리펩타이드에서 사용될 수 있다.
특정 실시형태에서, 상기 기재한 아미노산 치환에 추가로, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 변경된 CH2 영역(예를 들어, 변경된 인간 IgG1 CH2 도메인)은 상기 언급한 위치가 아닌 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 이러한 아미노산 치환은 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환일 수 있다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, P233은 변경된 IgG2 CH2 영역에서 E233으로 바뀔 수 있다(예를 들어, 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 326 참조, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨). 추가로 또는 대안적으로, 특정 실시형태에서, 변경된 CH2 영역은 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 삽입(들), 결실(들) 또는 치환(들)은 면역글로불린 CH2 영역의 어디에서나, 예컨대, 야생형 면역글로불린 CH2 영역의 N- 또는 C-말단에 있을 수 있어서, 힌지를 통해 CH2 영역을 다른 영역(예를 들어, 결합 도메인 또는 면역글로불린 이형이량체화 도메인)과 연결하는 것을 초래할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 변경된 CH2 도메인은 235, 318, 320 및 322번 위치에서 알라닌 치환을 갖는 인간 IgG1 CH2 도메인(즉, L235A, E318A, K320A 및 K322A 치환을 갖는 인간 IgG1 CH2 도메인) (미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 595, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), 및 선택적으로 N297 돌연변이(예를 들어, 알라닌으로)이다. 특정 다른 실시형태에서, 변경된 CH2 도메인은 234, 235, 237, 318, 320 및 322번 위치에서 알라닌 치환을 갖는 인간 IgG1 CH2 도메인(즉, L234A, L235A, G237A, E318A, K320A 및 K322A 치환을 갖는 인간 IgG1 CH2 도메인)(미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 596, 상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), 및 선택적으로 N297 돌연변이(예를 들어, 알라닌으로)이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 면역글로불린 불변 영역은 EU 넘버링 시스템에 따라 치환 L234A, L235A, G237A 및 K322A를 포함하는, 인간 IgG1 CH2 도메인을 포함한다.
본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 면역글로불린 불변 영역을 형성할 수 있는 CH3 도메인은 다양한 종(인간, 마우스, 래트 및 다른 포유류를 포함함)의 특정 면역글로불린 부류 또는 하위부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE, IgM)로부터의 야생형 면역글로불린 CH3 도메인 또는 이의 변경된 면역글로불린 CH3 도메인으로부터 유래될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 CH3 도메인은 야생형 인간 면역글로불린 CH3 도메인, 예컨대, 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 116, 208 내지 210, 204 내지 207, 및 212 각각에 제시된 바와 같은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 또는 IgM의 야생형 CH3 도메인(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)이다. 특정 실시형태에서, CH3 도메인은 미국 특허 공개 제2013/0129723의 서열번호 116(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에 제시된 바와 같은 야생형 인간 IgG1 CH3 도메인이다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 CH3 도메인은 변경된 인간 면역글로불린 CH3 도메인, 예컨대, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 또는 IgM 항체의 야생형 CH3 도메인에 기반하거나 이들로부터 유래된 변경된 CH3 도메인이다. 예를 들어, 변경된 CH3 도메인은 H433 및 N434번 위치에서 1 또는 2개의 돌연변이를 갖는 인간 IgG1 CH3 도메인일 수 있다(위치는 EU 넘버링에 따라 넘버링됨). 이러한 위치에서 돌연변이는 보체 고정에 관련될 수 있다. 특정 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 변경된 CH3 도메인은 인간 IgG1 CH3 도메인일 수 있지만, F405 또는 Y407 위치에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는다. 이러한 위치에서 아미노산은 다른 CH3 도메인과의 상호작용에 관련된다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 변경된 CH3 도메인은 마지막 라이신이 결실된 변경된 인간 IgG1 CH3 도메인일 수 있다. 이 변경된 CH3 도메인의 서열은 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 761에 제시된다(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨).
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질은 소위 "노브-인투-홀(knobs-into-hole)" 돌연변이를 포함하는 CH3 도메인을 포함한다(문헌[Marvin and Zhu, Acta Pharmacologica Sinica 26:649-58, 2005; Ridgway et al., Protein Engineering 9:617-21, 1966] 참조). 더 구체적으로는, 돌연변이는 각 폴리펩타이드 쇄의 CH3 도메인 각각에 도입될 수 있고, 따라서 CH3/CH3 회합에 필요한 입체 상보성은 이들 2개의 CH3 도메인이 서로 짝지어지게 한다. 예를 들어, 폴리펩타이드 이형이량체의 하나의 단일 쇄 폴리펩타이드에서 CH3 도메인은 T366W 돌연변이(작은 아미노산을 보다 큰 아미노산으로 치환하는 "노브" 돌연변이)를 포함할 수 있고, 폴리펩타이드 이형이량체의 다른 단일 쇄 폴리펩타이드에서 CH3 도메인은 Y407A 돌연변이(큰 아미노산을 보다 작은 아미노산으로 치환하는 "홀" 돌연변이)를 포함할 수 있다. 다른 예시적인 노브-인투-홀 돌연변이는 (1) 하나의 CH3 도메인에서 T366Y 돌연변이 및 다른 CH3 도메인에서 Y407T, 및 (2) 하나의 CH3 도메인에서 T366W 돌연변이 및 다른 CH3 도메인에서 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 면역글로불린 불변 영역을 형성할 수 있는 CH4 도메인은 IgE 또는 IgM 분자로부터의 야생형 면역글로불린 CH4 도메인 또는 이의 변경된 면역글로불린 CH4 도메인일 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 CH4 도메인은 야생형 인간 면역글로불린 CH4 도메인, 예컨대, 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 213 및 214에 각각 제시된 바와 같은 인간 IgE 및 IgM 분자의 야생형 CH4 도메인이다(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨). 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 CH4 도메인은 변경된 인간 면역글로불린 CH4 도메인, 예컨대, 인간 IgE 또는 IgM 분자의 CH4 도메인에 기반하거나 이로부터 유래된 변경된 CH4 도메인이며, 이는 IgE 또는 IgM Fc 영역과 연관된 것으로 알려진 면역학적 활성을 증가 또는 감소시키는 돌연변이를 갖는다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 면역글로불린 불변 영역은 CH2, CH3 또는 CH4 도메인(즉, CH2, CH3 및 CH4로부터 선택된 하나 초과의 불변 영역 도메인)의 조합을 포함한다. 예를 들어, 면역글로불린 불변 영역은 CH2 및 CH3 도메인 또는 CH3 및 CH4 도메인을 포함할 수 있다. 특정 다른 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 2개의 CH3 도메인을 포함하고, CH2 또는 CH4 도메인을 포함하지 않을 수 있다(즉, 2개 이상의 CH3만을 포함함). 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 면역글로불린 불변 영역을 형성하는 다중 불변 영역 도메인은 동일한 면역글로불린 분자, 또는 동일한 부류 또는 하위부류 면역글로불린 분자에 기반하거나, 이로부터 유래될 수 있다. 특정 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 IgG CH2-CH3(예를 들어, IgG1 CH2-CH3, IgG2 CH2-CH3, 및 IgG4 CH2-CH3)이고, 인간(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2 및 IgG4) CH2CH3일 수 있다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 면역글로불린 불변 영역은 (1) 야생형 인간 IgG1 CH2 및 CH3 도메인, (2) N297A 치환을 갖는 인간 IgG1 CH2(즉, CH2(N297A)) 및 야생형 인간 IgG1 CH3, 또는 (3) 마지막 라이신이 결실된 인간 IgG1 CH2(N297A) 및 변경된 인간 IgG1 CH3을 포함한다. 대안적으로, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질의 다중 불변 영역 도메인은 상이한 면역글로불린 분자, 또는 상이한 부류 또는 하위부류 면역글로불린 분자에 기반하거나 또는 이로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 인간 IgM CH3 도메인과 인간 IgG1 CH3 도메인을 둘 다 포함한다. 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드의 면역글로불린 불변 영역을 형성하는 다중 불변 영역 도메인은 함께 직접적으로 연결될 수 있거나, 또는 하나 이상의(예를 들어, 약 2 내지 10개의) 아미노산을 통해 서로 연결될 수 있다.
본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질에서 사용될 수 있는 예시적인 면역글로불린 불변 영역은 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 305 내지 309, 321, 323, 341, 342 및 762에 제시되어 있다(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨). 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 단백질에서 사용될 수 있는 추가적인 예시적인 면역글로불린 불변 영역은 이하의 표에 제공된다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 동형이량체 또는 이형이량체 단백질의 각 폴리펩타이드 쇄의 면역글로불린 불변 영역은 서로 동일하다. 특정 다른 실시형태에서, 이형이량체 단백질의 하나의 폴리펩타이드 쇄의 면역글로불린 불변 영역은 이형이량체의 다른 폴리펩타이드 쇄의 면역글로불린 불변 영역과 상이하다. 예를 들어, 이형이량체 단백질의 하나의 면역글로불린 불변 영역은 "노브" 돌연변이를 갖는 CH3 도메인을 포함할 수 있는 반면, 이형이량체 단백질의 다른 면역글로불린 불변 영역은 "홀" 돌연변이를 갖는 CH3 도메인을 포함할 수 있다.
Fc-결합 도메인 링커
일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 결합 도메인을 연결하는(예를 들어, scFv 도메인을 연결하는) Fc-결합 도메인 링커를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 Gly4Ser 링커(서열번호 128)이다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 128) 아미노산 서열((Gly4Ser)4)(서열번호61)의 4개의 반복부로 이루어진 20량체이다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 서열번호 50 내지 70 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 다른 링커가 사용되었고, 적절한 링커 서열을 다양화 및 선택하기 위해 파지 디스플레이 기술뿐만 아니라 선택적 감염 파지 기술이 사용되었다(Tang et al., J. Biol. Chem. 271, 15682-15686, 1996; Hennecke et al., Protein Eng. 11, 405-410, 1998). 특정 실시형태에서, VL 및 VH 영역은 식 (Gly4Ser)n을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 펩타이드 링커에 의해 결합되되, n = 1 내지 5이다(서열번호 129). 다른 적합한 링커는 무작위 돌연변이유발을 통해 단순한 링커를 최적화함으로써 얻을 수 있다. 일부 실시형태에서, 이중특이성 분자는 힌지 영역 또는 불변 영역을 포함하지 않는다.
특정 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 글리신-세린(예를 들어, Gly4Ser, 서열번호 128) 반복부를 포함하는 가요성 링커 서열이다. 특정 실시형태에서, 링커는 3개의 Gly4Ser 반복부(서열번호 61) 다음에 프롤린 잔기를 포함한다. 특정 실시형태에서, 프롤린 잔기 다음에 글리신, 아르기닌 및 세린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산이 이어진다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 서열번호 50 내지 70으로부터 선택된 서열을 포함하거나 또는 이들로 이루어진다.
본 개시내용에 따른 사용에 적합한 일부 예시적인 힌지 및 Fc-결합 도메인 링커 서열은 아래의 표 2 및 표 3에 나타낸다. 추가적인 예시적인 힌지 및 링커 영역은 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 241 내지 244, 601, 78, 763 내지 791, 228, 379 내지 434, 618 내지 749에 제시된다(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨).
앞서 언급한 도메인에 추가로, 치료 폴리펩타이드는 면역글로불린 이량체화/이형이량체화 도메인, 접합 아미노산, 태그, 추가적인 결합 도메인 등을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 및 단백질은 약물 또는 독성 모이어티에 접합된다.
이중특이성/다중특이성 단백질
일부 실시형태에서, 치료 단백질은 이중특이성 또는 다중특이성 단백질일 수 있다. 이중특이성 분자의 비제한적 예는 scFv-Fc-scFv 분자, scFv-Ig 분자 및 scFv-scFv 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이중특이성 분자는 제2 결합 도메인 scFv에 연결된 제1 결합 도메인 scFv를 포함하거나, 이것으로 이루어지고, 면역글로불린 불변 영역와 같은 다른 서열을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 치료 단백질은 아미노-말단에서 카복시-말단까지, 또는 카복시-말단에서 아미노-말단의 순서로, (i) 제1 결합 도메인, (ii) 힌지 영역, (iii) 면역글로불린 불변 영역, (iv) (선택적으로) Fc-결합 도메인 링커, 및 (v) 제2 결합 도메인을 포함하는, 이중특이성 또는 다중특이성 단백질일 수 있다.
동형이량체/이형이량체
일부 실시형태에서, 치료 단백질은 동형이량체 또는 이형이량체일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료 단백질은 두 동일한 폴리펩타이드의 이량체이되, 각 폴리펩타이드는, 아미노-말단에서 카복시-말단의 순서로, 또는 카복시-말단에서 아미노-말단의 순서로 (i) 제1 결합 도메인, (ii) 힌지 영역, 및 (iii) 면역글로불린 불변 영역, (iv) (선택적으로) Fc-결합 도메인 링커, 및 (v) 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 이중특이성 또는 다중특이성 단백질은 두 동일한 폴리펩타이드의 이량체이되, 각 폴리펩타이드는, 아미노-말단에서 카복시-말단의 순서로, 또는 카복시-말단에서 아미노-말단의 순서로: (i) 제1 결합 도메인, (ii) 힌지 영역, (iii) 면역글로불린 불변 영역, (iv) (선택적으로) Fc-결합 도메인 링커, 및 (v) 제2 결합 도메인을 포함한다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이중특이성 단백질은 다이어바디이다.
특정 실시형태에서, 다른 폴리펩타이드 쇄와 함께 이형이량체를 형성하는 폴리펩타이드에 존재하는 힌지는 면역글로불린 힌지, 예컨대, 야생형 면역글로불린 힌지 영역 또는 이의 변경된 면역글로불린 힌지 영역일 수 있다. 특정 실시형태에서, 이형이량체 단백질의 하나의 폴리펩타이드 쇄의 힌지는 이형이량체의 다른 폴리펩타이드 쇄의 대응하는 힌지와 동일하다. 특정 다른 실시형태에서, 하나의 쇄의 힌지는 (이들의 길이 또는 서열이) 다른 쇄의 힌지와 상이하다. 상이한 쇄의 상이한 힌지는 힌지가 연결된 결합 도메인의 결합 친화도의 상이한 조작을 가능하게 하며, 따라서, 이형이량체는 다른 결합 도메인의 표적 이상으로 하나의 결합 도메인의 표적에 우선적으로 결합할 수 있다.
다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 및 단백질은 제2의, 비-동일 폴리펩타이드 쇄에서 상이한 이형이량체화 도메인과 이형이량체화될 수 있는 이형이량체화 도메인을 포함한다. 특정 변형에서, 이형이량체화에 대한 제2 폴리펩타이드 쇄는 제2 결합 도메인을 포함한다. 따라서, 본 개시내용의 특정 실시형태에서, 2개의 비-동일 폴리펩타이드 쇄, 즉, 제1 결합 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 것 및 선택적으로 제2 결합 도메인을 포함하는 두 번째는 이형이량체화하여, 이형이량체 결합 단백질을 형성한다. 이량체화/이형이량체화 도메인은 2개의 비-동일 폴리펩타이드 쇄로부터의 이형이량체화를 형성하는 것이 요망되는 경우에 사용될 수 있으며, 하나의 또는 둘 모두의 폴리펩타이드 쇄는 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 특정 이형이량체는 하나의 폴리펩타이드 쇄 구성원은 결합 도메인을 포함하지 않는다. 이형이량체 유형의 예는 미국 특허 공개 제2013/0095097호 및 제2013/0129723호 및 국제특허출원 공개 WO 2016/094873에 기재된 것을 포함한다.
특정 실시형태에서, 제1 폴리펩타이드 쇄 및 제2 폴리펩타이드 쇄는 "면역글로불린 이량체화 도메인" 또는 "면역글로불린 이형이량체화 도메인"의 포함을 통해 이량체화한다. "면역글로불린 이량체화 도메인" 또는 "면역글로불린 이형이량체화 도메인"은 본 명세서에서 제2 폴리펩타이드 쇄의 상이한 면역글로불린 도메인과 우선적으로 상호작용 또는 회합하는 제1 폴리펩타이드 쇄의 면역글로불린 도메인을 지칭하되, 상이한 면역글로불린 도메인의 상호작용은 제1 폴리펩타이드와 제2 폴리펩타이드 쇄의 이형이량체화(즉, "이형이량체"로도 지칭되는 두 상이한 폴리펩타이드 쇄 사이의 이량체 형성)에 실질적으로 기여하거나 이를 효율적으로 촉진시킨다. 이형이량체의 폴리펩타이드 쇄에서 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 서로 상이하고, 따라서, 쇄 둘 다의 이형이량체화를 용이하게 하고 쇄 중 하나의 동형이량체화를 최소화하도록 차별적으로 변형될 수 있다. 본 명세서에 제공된 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 상이한 폴리펩타이드 사이의 효율적인 이형이량체화를 가능하게 하고, 얻어진 이형이량체 단백질의 정제를 용이하게 한다.
본 명세서에 제공된 바와 같은, 본 개시내용에 따른 두 상이한 폴리펩타이드 쇄의 이형이량체화를 촉진시키는 데 유용한 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 야생형 및 변경된 면역글로불린 CH1 및 CL 도메인, 예를 들어, 인간 CH1 및 CL 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 면역글로불린 이형이량체화 도메인은, 예를 들어, 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 114, 186 내지 192 및 194 또는 미국 특허 공개 제2013/0129723호의 서열번호 114에 각각 제시된 바와 같은 야생형 CH1 도메인, 예컨대, 야생형 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 또는 IgM CH1 도메인이다(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨). 추가 실시형태에서, 야생형 면역글로불린 CL 도메인(예를 들어, 인간 CL)과 이황화결합을 형성하는 데 관련되는 야생형 CH1 도메인(예를 들어, 인간 CH1)의 시스테인 잔기는, 이황화결합이 변경된 CH1 도메인과 야생형 CL 도메인 사이에서 형성되지 않도록, 변경된 면역글로불린 CH1 도메인에서 결실 또는 치환된다.
특정 실시형태에서, 면역글로불린 이형이량체화 도메인은, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2013/0129723호의 서열번호 112 및 113에 각각 제시된 바와 같은(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨) 야생형 CL 도메인, 예컨대, 야생형 Cκ 도메인 또는 야생형 Cλ 도메인이다. 추가 실시형태에서, 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 변경된 면역글로불린 CL 도메인, 예컨대, 변경된 Cκ 또는 Cλ 도메인, 예를 들어, 변경된 인간 Cκ 또는 인간 Cλ 도메인이다. 특정 실시형태에서, 야생형 면역글로불린 CH1 도메인과의 이황화결합을 형성하는 데 관련된 야생형 CL 도메인의 시스테인 잔기는 변경된 면역글로불린 CL 도메인, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2013/0129723호의 서열번호 141에 제시된 바와 같은 Cκ 도메인 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0129723호의 서열번호 140에 제시된 바와 같은 Cλ 도메인(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에서 결실 또는 치환된다. 특정 실시형태에서, 야생형 인간 Cκ 도메인으로부터 결실된 제1 아르기닌이 이의 카복실-말단에서 아르기닌을 갖고 변경된 Cκ 도메인의 아미노 말단을 다른 도메인(예를 들어, 면역글로불린 하위-영역, 예컨대, 면역글로불린 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 하위-영역)과 연결하는 링커에 의해 제공될 수 있기 때문에, 야생형 인간 Cκ 도메인의 마지막 시스테인만이 변경된 Cκ 도메인에서 결실된다.
추가 실시형태에서, 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 Cκ-Cκ 계면에서 쇄간 수소 결합을 형성하는 데 관련될 수 있는 위치에서 야생형 Cκ 도메인에 비해서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 변경된 Cκ 도메인이다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 상이한 아미노산으로 치환되는 N29, N30, Q52, V55, T56, S68 또는 T70 위치에서 하나 이상의 아미노산을 갖는 변경된 인간 Cκ 도메인이다. 아미노산의 넘버링은 미국 특허 출원 공개 제2013/0129723의 서열번호 141(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에 제시된 바와 같은 변경된 인간 Cκ 서열에서의 이들의 위치에 기반한다. 특정 실시형태에서, 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 N29, N30, V55 또는 T70 위치에서 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 갖는 변경된 인간 Cκ 도메인이다. 상기 언급한 위치에서 치환체로서 사용된 아미노산은 알라닌이거나, 또는 벌크 측쇄 모이어티, 예컨대, 아르기닌, 트립토판, 타이로신, 글루타메이트, 글루타민, 라이신 아스파르테이트, 메티오닌, 세린 또는 페닐알라닌을 갖는 아미노산 잔기일 수 있다. 변경된 인간 Cκ 도메인은 CH1 도메인과의 이형이량체화를 용이하게 하지만, 다른 Cκ 도메인과의 동형이량체화를 최소화하는 것이다. 대표적인 변경된 인간 Cκ 도메인은 미국 특허 출원 공개 제2013/0129723호의 서열번호 142 내지 178; 미국 특허 출원 공개 제2013/0129723호의 서열번호 160(N29W V55A T70A), 161(N29Y V55A T70A), 202(T70E N29A N30A V55A), 167(N30R V55A T70A), 168(N30K V55A T70A), 170(N30E V55A T70A), 172(V55R N29A N30A), 175(N29W N30Y V55A T70E), 176(N29Y N30Y V55A T70E), 177(N30E V55A T70E), 178(N30Y V55A T70E), 838(N30D V55A T70E), 839(N30M V55A T70E), 840(N30S V55A T70E) 및 841(N30F V55A T70E)(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에 제시되어 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 Cκ 도메인에서의 돌연변이에 추가로 또는 이에 대한 대안으로서, 폴리펩타이드 이형이량체의 면역글로불린 이형이량체화 도메인 둘 다(즉, 면역글로불린 CH1과 CL 도메인), 얻어진 면역글로불린 이형이량체화 도메인이 돌연변이 부위에서 아미노산 잔기 사이에 염 브리지(즉, 이온성 상호작용)를 형성하도록 돌연변이를 갖는다. 예를 들어, 폴리펩타이드 이형이량체의 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 돌연변이된 Cκ 도메인과 조합하여 돌연변이된 CH1 도메인일 수 있다. 돌연변이된 CH1 도메인에서, 야생형 인간 CH1 도메인의 68번 위치에서 발린(V68)은 음전하를 갖는 아미노산 잔기(예를 들어, 아스파르테이트 또는 글루타메이트)로 치환되는 반면, 제1 아르기닌 및 마지막 시스테인이 결실된 돌연변이된 인간 Cκ 도메인의 29번 위치에서 류신(L29)은 양전하를 갖는 아민노산 잔기(예를 들어, 라이신, 아르기닌 또는 히스티딘)으로 치환된다. 얻어진 돌연변이된 CH1 도메인의 음전하를 갖는 아미노산 잔기와 얻어진 돌연변이된 Cκ 도메인의 양전하를 갖는 아미노산 잔기 사이의 전하-전하 상호작용은, 돌연변이된 CH1과 Cκ 도메인 사이의 이형이량체 계면을 안정화시키는 염 브리지를 형성한다. 대안적으로, 야생형 CH1의 V68은 양전하를 갖는 아미노산 잔기로 치환될 수 있는 반면, 제1 아르기닌 및 마지막 시스테인이 결실된 돌연변이되 인간 Cκ 도메인의 L29는 음전하를 갖는 아미노산 잔기로 치환될 수 있다. V68이 음전하 또는 양전하 중 하나를 갖는 아미노산으로 치환되는 예시적인 돌연변이된 CH1 서열은 미국 특허 출원 공개 제2013/0129723호의 서열번호 844 및 845(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에 제시되어 있다. L29가 음전하 또는 양전하 중 하나를 갖는 아미노산으로 치환되는 예시적인 돌연변이된 Cκ 서열은 미국 특허 출원 공개 제2013/0129723호의 서열번호 842 및 843(상기 서열은 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)에 제시되어 있다.
인간 CH1 도메인의 V68 및 인간 Cκ 도메인의 L29가 아닌 위치는 CH1 도메인의 V68 및 Cκ 도메인의 L29에서의 돌연변이에 추가로 또는 이에 대한 대안으로 아미노산 사이의 이온성 상호작용을 생성하도록 반대 전하를 갖는 아미노산으로 치환될 수 있다. 이러한 위치는 CH1-Cκ 계면에서 아미노산 잔기를 확인하기 위해 무작위 돌연변이유발, CH1-Cκ 쌍의 결정 구조 분석을 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 확인될 수 있고, 추가로 기준 세트(예를 들어, 이온 상호작용에서 맞물리는 성향, 잠재적 상대 잔기에 근접함 등)를 이용하여 CH1-Cκ 계면에서 아미노산 잔기 중의 적합한 위치를 확인할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용의 폴리펩타이드 이형이량체는 한 쌍의 면역글로불린 이형이량체화 도메인만을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩타이드 이형이량체의 제1 쇄는 면역글로불린 이형이량체화 도메인으로서 CH1 도메인을 포함할 수 있는 한편, 제2 쇄는 CL 도메인(예를 들어, Cκ 또는 Cλ)을 면역글로불린 이형이량체화 도메인으로서 포함할 수 있다. 대안적으로, 제1 쇄는 CL 도메인(예를 들어, Cκ 또는 Cλ)을 면역글로불린 이형이량체화 도메인으로서 포함할 수 있는 한편, 제2 쇄는 CH1 도메인을 면역글로불린 이형이량체화 도메인으로서 포함할 수 있다. 본 명세서에 제시된 바와 같은, 제1 쇄 및 제2 쇄의 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 회합되어 본 개시내용의 이형이량체 단백질을 형성할 수 있다.
특정 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 이형이량체 단백질은 2개의 쌍의 면역글로불린 이형이량체화 도메인을 가질 수 있다. 예를 들어, 이형이량체의 제1 쇄는 2개의 CH1 도메인을 포함할 수 있는 한편, 제2 쇄는 제1 쇄에서 2개의 CH1 도메인과 회합되는 2개의 CL 도메인을 가질 수 있다. 대안적으로, 제1 쇄는 2개의 CL 도메인을 포함할 수 있는 한편, 제2 쇄는 제1 쇄에서 2개의 CL 도메인과 회합되는 2개의 CH1 도메인을 가질 수 있다. 특정 실시형태에서, 제1 폴리펩타이드 쇄는 CH1 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 한편, 제2 폴리펩타이드 쇄는 제1 폴리펩타이드 쇄의 CH1 도메인 및 CL 도메인 각각와 회합되는 CL 도메인 및 CH1 도메인을 포함한다.
이형이량체 단백질이 한 개의 이형이량체화 쌍(즉, 각 쇄에서 하나의 면역글로불린 이형이량체화 도메인)만을 포함하는 실시형태에서, 각 쇄의 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 해당 쇄의 면역글로불린 불변 영역에 대해 아미노-말단에 위치될 수 있다. 대안적으로, 각 쇄에서 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 해당 쇄의 면역글로불린 불변 영역에 대해 카복실-말단에 위치될 수 있다.
이형이량체 단백질이 2개의 이형이량체화 쌍(즉, 각 쇄에서 2개의 면역글로불린 이형이량체화 도메인)을 포함하는 실시형태에서, 각 쇄에서 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 둘 다 해당 쇄의 면역글로불린 불변 영역에 대해 아미노-말단에 위치될 수 있다. 대안적으로, 각 쇄에서 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 둘 다 해당 쇄의 면역글로불린 불변 영역에 대해 카복실-말단에 위치될 수 있다. 추가 실시형태에서, 각 쇄에서 하나의 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 해당 쇄의 면역글로불린 불변 영역에 대해 아미노 말단에 위치될 수 있는 한편, 각 쇄의 다른 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 해당 쇄의 면역글로불린 불변 영역에 대해 카복실-말단에 위치될 수 있다. 다시 말해서, 해당 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 각 쇄의 2개의 면역글로불린 이형이량체화 도메인 사이에 개재된다.
본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 및 단백질은 미국 특허 공개 제2013/0129723호 및 제2013/0095097호에 일반적으로 개시된 바와 같은 스캐폴딩을 이용하여 생성될 수 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다. 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드는 2개의 비-동일 폴리펩타이드 쇄를 포함할 수 있고, 각 폴리펩타이드 쇄는 면역글로불린 이형이량체화 도메인을 포함한다. 접해 있는 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 상이하다. 일 실시형태에서, 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 CH1 도메인 또는 이의 유도체를 포함한다. 다른 실시형태에서, 면역글로불린 이형이량체화 도메인은 CL 도메인 또는 이의 유도체를 포함한다. 일 실시형태에서, CL 도메인은 Cκ 또는 Cλ 아이소타입 또는 이의 유도체이다.
예시적인 치료제 단백질: 항-CD86 × 모노 IL-10 폴리펩타이드 및 이의 이량체
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물에 포함된 치료제 단백질은 CD86 결합 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하는 IL-10 전달 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하는 IL-10 전달 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 실시형태에서, 단백질 치료제는 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인, (선택적으로) Fc-결합 도메인 링커 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하는 IL-10 전달 폴리펩타이드일 수 있다.
따라서, 일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 CD86 결합 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하거나, 이들로 이루어질 수 있다. 본 개시내용의 IL-10 전달 폴리펩타이드는 융합 단백질로서 기재될 수 있다. 또한 이러한 IL-10 전달 폴리펩타이드의 이량체, 예를 들어, 동형이량체 및 이형이량체가 제공된다.
CD86 표면 분자는 B7 수용체 슈퍼패밀리에 속하며, T-세포 공자극 분자로서 작용한다(Lu et al. 1997; Vicenti et al. 2008). 이는 보통 항원 제시 세포(APC) 기능을 갖는 세포, 예컨대, 수지상 세포, 단핵구 상에서 발현되고 활성화되지만, 휴지 B 세포 상에서는 발현 및 활성화되지 않는다(Lu et al. 1997; Vicenti et al. 2008). 이는 미경험 인간 단핵구 및 DC에 의해 고수준으로 발현되고, 일부 활성화 조건 하에 추가로 상향조절된다(Hathcock et al. 1994; Sansom et al. 2003). 미경험 단핵구 상의 CD86 발현은 세포당 2,000 내지 5,000개 복제물 범위인 것으로 추정된다(Wolk et al. 2007). 고수준의 CD86 발현은 특정 병리학적 조건에서 염증 조직과 연관되며(Vuckovic et al. 2001; Nakazawa et al. 1999) CD86 및 CD80(후자는 B7 패밀리의 제2 구성원임)은 T-세포 공동 수용체인 CD28과 상호작용함으로써 T-세포 활성화를 용이하게 한다.
CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, CD86-결합 도메인은 CD86(예를 들어, 인간 CD86)의 세포외 도메인 상에 위치된 에피토프에 결합한다. 특정 양상에서, 이 에피토프는 불연속적 및/또는 입체구조적 에피토프이다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 CD86에 결합하지만, CD80에는 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 인간 CD86에 결합한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 비인간 영장류 CD86에 결합한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 인간 CD86에 결합하고, 또한 사이노몰거스 CD86과 교차반응한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 사이노몰거스 마카크 단핵구 및 계통 음성 집단(DC)에 결합한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 인간화된다.
일부 경우에, IL-10 전달 폴리펩타이드의 CD86 결합 도메인은 FUN-1 항체로부터 유래된 인간화된 CD86 결합 도메인일 수 있다(예를 들어, 문헌[Nozawa et al., J. Pathol. 1993; 169(3):309-315] 참조). 예를 들어, CD86-결합 도메인 폴리펩타이드는 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH; 및 (2) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, HCDR1, HCDR2, HDCR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 중 적어도 하나는 FUN1 항체로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR1은 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR2는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR3은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 1, 2 및 3을 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 4, 5 및 6을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2이며, HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3이고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4이며, LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6이다.
특정 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 서열번호 8의 경쇄 가변 영역(VL)의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.5% 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CD86-결합 도메인 폴리펩타이드는 서열번호 7의 중쇄 가변 영역(VH)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄를 포함한다.
본 개시내용의 폴리펩타이드에서 사용하기에 적합한 CD86-결합 도메인은 scFv를 포함하거나, 이것으로 이루어질 수 있다. 일부 실시형태에서, scFv는 VH-VL 배향 또는 VL-VH 배향일 수 있다. 일부 실시형태에서, scFV는 VH 영역과 VL 영역 사이에 링커를 포함할 수 있다. 일부 이유에서, 링커는 (Gly-Ser4)n을 포함할 수 있되, n = 1 내지 5의 정수이다(서열번호 129). 특정 실시형태에서, n = 4이다(서열번호 61).
일부 실시형태에서, CD86-결합 도메인은 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 82%, 적어도 약 85%, 적어도 약 87%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 100% 동일한 항-CD86 scFv를 포함한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 서열번호 9에 대해 적어도 약 95% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
사이토카인 IL-10은 염증 억제에서 중요한 플레이어이다. 전임상 및 인간 연구에서 염증 과정을 제한하는 IL-10의 중요한 역할은 20년 전에 이의 발견 이후로 광범위하게 문서화되었다(Moore et al., 2001). 그러나, 다양한 염증 질환에 대한 요법으로서 IL-10을 개발하기 위한 다수의 시도는 임상에서 제한된 성공을 나타내었다. IL-10이 항원 제시를 억제하고 항원-특이적 관용을 촉진시키지만, 이것이 또한 다양한 림프구 집단의 효과기 기능을 자극한다는 임상 증거는 점점 많아지고 있다. 이는 세포독성 T 세포의 자극을 통해 암 환자에서 항-종양 반응을 향상시킴에 있어서 IL-10의 최근의 임상 성공에 의해 가장 잘 설명된다(Chan et al. 2015). 따라서, IL-10의 다면발현효과는 이의 짧은 반감기 및 IL-10R의 광범위한 발현과 조합되어, 임상 연구에서 국소 염증을 저해하는 이의 능력을 좌절시켰을 가능성이 있다.
IL-10은 억제 기능과 자극 기능을 둘 다 발휘하는 사이토카인이다. IL-10은 T 세포 및 단핵구, 대식세포, 및 수지상 세포에 의해 정상적으로 발현된다. IL-10의 주요 기능 중 하나는 수지상 세포(DC) 및 대식세포에 의한 항원 제시의 억제를 통해 T-세포 활성화를 방지하는 것이다(Moore et al. 2001). 항원 제시 기능을 유도하는 것에 추가로, IL-10은 또한 조절 DC의 분화를 유도한다(Amodio et al. 2012). 보통의 DC와 달리, 조절 DC는 항원-의존적 조절 T 세포(Tr1)의 분화를 유도한다(Gregori et al. 2010, Pacciani et al. 2010, Gregori et al. 2011). 다수의 동물 모델 및 인간 질환에서 염증 과정을 억제함에 있어서 IL-10의 중요한 역할은 광범위하게 문서화되었다(Kuhn et al. 1993; Steidler et al. 2000; Lindsay et al. 2003). 이의 잘 특성규명된 면역억제 기능과 함께, IL-10은 또한 다른 세포 유형의 기능을 자극한다. 이의 자극 기능 중에는 B 세포에 의한 면역글로불린 분비의 향상(Rousset et al. 1992; Fluckiger et al. 1993; Bachereau et al. 1994) 및 T 세포에 의한 세포독성 효과기 기능의 향상이 있다(Mumm et al. 2011; Chan et al 2015). 환자에서 자가면역병태의 치료를 위한 요법으로서 IL-10을 개발함에 있어서 다수의 시도가 있었다(Colombel et al. 2001; Fedorak et al. 2000; Schreiber et al. 2000; Kimball et al. 2002). 그러나, IL-10의 다면발현효과, 이의 짧은 반감기 및 IL-10R의 광범위한 발현은 염증을 저해하는 약물로서 IL-10을 이용하는 효능의 결여에 대한 원인일 가능성이 매우 높다(Herfarth et al. 2002).
IL-10은 IL-10 수용체(IL-10R)에 결합한다. IL-10R은 세포당 대략 수백개의 수용체인 것으로 추정되는 매우 낮은 복제수로 대부분의 조혈모 세포 표면 상에서 발현된다(Carson et al. 1995; Jurlander et al. 1997). IL-10R은 2개의 쇄: IL-10에 대한 친화도로 회합하는 IL-10R1 쇄, IL-10과의 낮은 친화도 상호작용을 갖는 IL-10R2 쇄로 구성되며, 다른 클래스 2 사이토카인 패밀리 구성원과의 수용체 복합체에 참여한다(Walter 2014). 쇄는 둘 다 단일 형질도입에 기여하지만, 모든 IL-10-특이적 기능은 IL-10R1 쇄에 남아있는 것으로 나타난다. IL-10은 T 세포 및 단핵구/대식세포에 의해 발현되는 2개의 뒤얽힌 폴리펩타이드 쇄의 비공유적 동형이량체이다. IL-10은 우세하게 STAT3의 전사 인자의 인산화 및 활성화를 통해 신호 전달을 촉발하는 2개의 IL-10R 복합체의 이량체화를 유도하지만, STAT1이 또한 활성화될 수 있다(Walter 2014; Donnelly et al. 1999). 앞서 기재한 바와 같이, IL-10은 세포 유형에 따라서 억제 또는 자극 기능을 매개할 수 있다. 이는 골수성 세포, 예컨대, DC 및 단핵구, 및 대식세포에 의해 염증 사이토카인의 활성화 및 분비를 억제한다(Sabat et al. 2010; Mosser et al. 2008; Ouyang et al. 2011). 이는 조절 T 세포(Tr1 (Roncarolo)의 분화를 유도하는 조절 DC의 분화를 유도한다. 그러나 이는 또한 B 세포의 성장 및 분화(Rousset et al. 1992; Fluckiger et al. 1993; Banchereau et al. 1994) 및 세포독성 CD8+ T 세포의 효과기 기능(Mumm et al. 2011; Chan et al. 2015)을 촉진시킨다. 염증의 중요한 음성 조절자로서 IL-10 경로의 중요한 역할은 다양한 동물 모델에서의 IL-10 결핍증의 결과에 의해 강조된다(Kuhn et al. 1993; Steidler et al. 2000; Lindsay et al. 2003).
억제 기능을 유지하는 한편 자극 특성을 감소시키는 IL-10(단량체 IL-10, 모노IL10 또는 모노-IL10)의 변형된 형태가 본 명세서에 기재된다. IL-10의 단량체 형태는 여전히 IL-10R과 상호작용할 수 있지만, 인간 림프구 상에서 하류의 사건을 더 이상 촉발시키지 않는 한편, 골수성 세포 상에서 약간 약화된 기능을 나타낼 수 있다. 더 구체적으로는, 단량체 IL-10은 IL-10R과 상호작용하고, IL-10R을 통해 신호를 전달하지만, IL-10R에 대해 더 낮은 친화도를 나타내고(Josephson et al. 2000), 이는 1:1의 모노IL10/가용성 IL-10R에 비해서 1:2의 wt IL-10: wt IL-10 이량체/가용성 IL-10R1과 상이한 입체배치에서 수용체와 상호작용한다. 감소된 친화도에도 불구하고, 단량체 IL-10은 세포 상에서 생물학적 활성을 보유하지만 효력은 감소된다. 제조 관점으로부터, 단량체 IL-10이 wt IL-10보다 더 큰 열 안정성을 나타낸다는 것이 중요하다(Josephson et al, 2000; Westerhof et al. 2012).
일부 양상에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 서브도메인의 분자내 폴딩을 가능하게 하는 IL-10 서브도메인 사이의 DE 루프에 아미노산 삽입을 포함하는 단량체 IL-10 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 아미노산 삽입은 4 내지 8개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 아미노산 삽입은 5 내지 10개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 아미노산 삽입은 6개의 아미노산 길이이다. 본 명세서에 기재된 단량체 IL-10의 예는 단량체의 분자내 폴딩을 야기하는 야생형 IL-10의 DE 루프에 6개의 아미노산(GGGSGG, 서열번호130)을 도입함으로써 조작되었다(Josephson et al. 2000). 따라서, 일부 실시형태에서, 단량체 IL-10은 서브도메인의 분자내 폴딩을 가능하게 하는 IL-10 서브도메인 사이의 DE 루프에 6개의 아미노산 삽입을 포함한다. 특정 실시형태에서, 단량체 IL-10은 서열번호 28의 서열에 대해 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.5% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하거나 이들로 이루어진 IL-10 전달 폴리펩타이드는 면역글로불린 Fc 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 IgG CH2 및 CH3 도메인, 예를 들어, IgG1 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 CH1 도메인을 포함하지 않는다. 특정 실시형태에서, 불변 영역을 구성하는 불변 도메인을 구성하는 불변 도메인은 인간이거나 또는 인간 서열로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 234, 235, 237 및 322번 위치에 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 234, 235, 237, 318, 320 및 322번 위치에 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 돌연변이 L234A, L235A, G237A 및 K322A를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 돌연변이 L234A, L235A, G237A, E318A, K320A 및 K322A를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 IgG1로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, IgG1로부터 유래된 Fc 도메인은 환자에게 투여될 때, 폴리펩타이드가 CD86 및/또는 IL-10R 발현 세포를 고갈시키는 것을 방지하는 둘 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, IgG1 Fc 도메인에서 둘 이상의 돌연변이는 Fc-매개 가교를 통해 신호전달을 방지하거나 실질적으로 감소시킨다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 펩타이드는 Fc-결합 도메인 링커를 추가로 포함할 수 있다. Fc-결합 도메인 링커는 1 내지 100개의 아미노산, 예를 들어, 8 내지 15개의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 II형 C-렉틴 단백질로부터 유래된 아미노산 서열을 포함하되, II형 C-렉틴 단백질은 NKG2A일 수 있다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 서열번호 50 내지 70 중 어느 하나를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 (Gly4Ser)n을 함유하는 아미노산 서열을 포함하되, n=1 내지 5이다(서열번호 129). 특정 실시형태에서, n = 4이다(서열번호 61). 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 프로테아제 절단 부위를 포함하지 않는다.
IL-10 전달 펩타이드는 힌지 영역, 예컨대, IgG로부터 유래된 힌지 영역을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 하나 이상의 돌연변이된 시스테인 잔기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 71 내지 109 중 어느 하나를 포함한다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 아미노 말단에서 카복시 말단까지 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인, Fc-결합 도메인 링커 및 단량체 IL-10 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 서열번호 9 또는 서열번호 9에 대해 적어도 약 95% 내지 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28 또는 서열번호 28에 대해 적어도 약 95% 내지 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, IL10 전달 펩타이드는 아미노 말단에서 카복시 말단까지, 서열번호 9의 CD86 결합 도메인 및 서열번호 28의 단량체 IL-10을 포함한다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 아미노 말단에서 카복실 말단까지, CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인, (선택적으로) Fc-결합 도메인 링커 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하되, CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하고, 면역글로불린 Fc 도메인은 Fc 수용체 FcγR, FcγRIIa, FcγRIIb 및/또는 FcγRIIIb에 대한 결합을 방지하거나 유의미하게 감소시키는 둘 이상의 돌연변이를 포함하는 IgG1 Fc 도메인이고, Fc-결합 도메인 링커는 8 내지 20개의 아미노산 길이 사이에 가요성 링커를 포함하고 글리코실화 부위가 없으며, 단량체 IL-10 도메인은 짧은 링커에 의해 분리되는 인간 IL-10의 2개의 서브유닛을 포함하고, IL-10 전달 폴리펩타이드는 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드를 갖는 이량체 단백질을 형성한다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 서열번호 30 또는 서열번호 30에 대해 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 서열번호 30으로 본질절으로 이루어지거나, 서열번호 30으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 서열번호 29의 서열, 또는 이에 대해 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 갖는 핵산에 의해 암호화된다. Q0128은 서열번호 30의 아미노산 서열을 갖는 IL-10 전달 폴리펩타이드(또는 융합 단백질)의 예이다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 IL-10R 및 CD86을 발현시키는 세포에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 이량체, 예컨대, 동형이량체 또는 이형이량체이다. 일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는 단량체이다.
일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는, 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화될 때, 단핵구 및 수지상 세포의 STAT3 인산화를 유도한다. 수지상 세포는 관용원성(tolerogenic) 수지상 세포일 수 있다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는, 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화될 때, B, T 및 NK 림프구 상에서 인산화를 유도하지 않거나, IL-10에 비해서 B, T 및 NK 림프구 상에서 최소 인산화를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD86 도메인은 CD86 결합 도메인을 포함하지 않는 Fc-단량체 IL-10 또는 Fc-IL-10 분자에 비해서 생체내 단량체 IL-10 도메인의 신호를 향상시킨다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는, 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화될 때, IL-10에 비해서 증가된 효능을 나타낸다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는, 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화될 때, 활성화된 T 세포를 자극하지 않는다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는, 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화될 때, IL-10에 비해서 B 세포를 자극하지 않거나 활성화된 B 세포를 최소로 자극한다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는, 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화될 때, IL-10에 비해서 IgM 분비를 유도하지 않거나 IgM 분비를 최소로 유도한다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는, 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화될 때, T 세포 증식을 저해한다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드는, 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화될 때, 항원 제시 세포 기능을 저해한다.
일부 실시형태에서, IL-10 전달 폴리펩타이드가 동일한 IL-10 전달 폴리펩타이드에 이량체화되고 인간 또는 인간 영장류에게 투여될 때 항원 제시의 최대 저해를 달성하기 위해 단핵구 상에서 20% 미만의 CD86 수용체 점유가 요구된다.
본 명세서에게 기재된 항-CD86 x 모노-IL10 분자는 항원 제시 세포에 IL-10(단량체 IL-10)의 변형된 형태를 전달함으로써 건선과 같은 염증성 병태를 치료하도록 설계된다. 이들 분자는 억제 기능을 유지하면서 자극 특성을 감소시키는 IL-10의 개선된 형태로서 작용한다. 이들은 두 메커니즘의 조합을 통해 이런 이중 목표를 달성한다. 첫째로, 이들 분자에 존재하는 IL-10의 단량체 형태는 여전히 IL-10R과 상호작용할 수 있지만, 인간 림프구 상에서 하류의 사건을 더 이상 촉발시키지 않는 한편, 골수성 세포 상에서 약간 약화된 기능을 나타낼 수 있다. 둘째로, 항-CD86 표적화 아암(arm)에 단량체 IL-10을 결합시키는 것은 CD86 발현 세포 상에서 단량체 IL-10의 신호를 특이적으로 향상시킨다. 분자에서 Fc 부분의 포함은, wt IL-10의 4시간 미만의 반감기에 비해서, 이의 반감기를 증가시킨다(Huhn et al. 1996). 얻어진 분자는 항원 제시 기능 및 T-세포 활성화를 억제하고, 조절 DC를 유도하지만, 미경험 또는 활성화된 B 또는 T 세포의 기능을 자극하지 않는다. 이들 분자가 시험관내 및 생체내에서 최적의 기능을 유발하는 최소 농도는 CD86 수용체 포화에 필요한 수준 미만이다. 따라서, 이들 분자는 모노IL10의 전달을 통해 작용하고, CD86 차단을 통해서는 작용하지 않는다.
본 발명의 조성물에서 사용하기 위한 치료제 단백질은 상기 기재한 임의의 치료제 단백질로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 치료적 결합 단백질은, 적어도 면역글로불린 불변 영역에 의해 선택적으로 분리되는 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 및/또는 제2 결합 도메인은 약물 또는 독소에 접합된다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH, VL 또는 VH와 VL 둘 다 인간화된다. HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1일 수 있고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2일 수 있으며, HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3일 수 있고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4일 수 있으며, LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5일 수 있고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6일 수 있다. VH는 서열번호 7 또는 서열번호 7에 대해 적어도 약 90%, 적어도 약 92%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL은 서열번호 8 또는 서열번호 8에 대해 적어도 약 90%, 적어도 약 92%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 7을 포함하고, VL은 서열번호 8을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)이다. scFv의 경쇄 가변 영역은 상기 scFv의 중쇄 가변 영역에 대해 카복시-말단 또는 아미노-말단일 수 있다. 일부 실시형태에서, scFv는 scFv의 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역 사이에 위치될 수 있는 링커 폴리펩타이드를 포함한다. 링커 폴리펩타이드는 식 (Gly4Ser)n을 포함할 수 있되, n = 1 내지 5이다(서열번호 129).
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 항원-제시 세포에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 IL-10의 수용체에 결합한다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합한다.
일부 실시형태에서, 결합 도메인은 서열번호 1의 HCDR1, 서열번호 2의 HCDR2 및 서열번호 3의 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 4의 LCDR1, 서열번호 5의 LCDR2 및 서열번호 6의 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 결합 도메인은 서열번호 7 또는 이에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 8 또는 이에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 결합 도메인은 서열번호 9, 또는 이에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 사이토카인 수용체에 특이적으로 결합한다. 사이토카인 수용체는, 예를 들어, IL-10 수용체(IL-10R)일 수 있다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 사이토카인 또는 사이토카인의 재조합 변이체를 포함한다. 사이토카인 또는 재조합 변이체는 단량체 IL-10일 수 있다. 일부 실시형태에서, 단량체 IL-10은 IL-10 수용체(IL-10R)에 특이적으로 결합한다. 실시형태에서, 단량체 IL-10은 서브도메인의 분자내 폴딩을 가능하게 하는 IL-10 서브도메인 사이의 DE 루프에 아미노산 삽입을 포함한다. 아미노산 삽입은 4 내지 8개의 아미노산 또는 5 내지 10개의 아미노산일 수 있다. 실시형태에서, 단량체 IL-10은 서열번호 28을 포함한다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 면역글로불린 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 인간 Fc 도메인이다. 일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 또는 IgD의 면역글로불린 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 EU 넘버링 시스템에 따라 치환 L234A, L235A, G237A 및 K322A를 포함하는 인간 IgG1 CH2 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 EU 넘버링 시스템에 따라 치환 L234A, L235A, G237A, E318A, K320A 및 K322A를 포함하는 인간 IgG1 CH2 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 서열번호 131을 포함한다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 힌지 영역, 예를 들어, 면역글로불린 힌지 영역으로부터 유래된 힌지 영역을 포함한다. 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 47을 포함한다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 Fc-결합 도메인 링커를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 Gly4Ser(서열번호 128) 서열, 예컨대, (Gly4Ser)n을 포함하되, n = 1 내지 5이다(서열번호 129).
일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 II형 C-렉틴 단백질의 스토크 영역으로부터 유래된 서열을 포함한다. II형 C-렉틴 단백질은 CD69, CD72, CD94, NKG2A 또는 NKG2D일 수 있다. 일부 실시형태에서, Fc-결합 도메인 링커는 서열번호132를 포함한다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로: CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고, CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하며, 면역글로불린 Fc 도메인은 Fc 수용체 FcγR, FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIIb에 대한 결합을 방지하거나 유의미하게 감소시키는 둘 이상의 돌연변이를 포함하는 IgG1 Fc 도메인이고, 단량체 IL-10 도메인은 짧은 링커에 의해 분리되는 인간 IL-10의 2개의 서브유닛을 포함하며, 치료제 단백질은 동형이량체이다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1이고, HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2이며, HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3이고, LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4이며, LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5이고, LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6이다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 서열번호 7에 대해 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 및 서열번호 8에 대해 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄를 포함한다. 일부 실시형태에서, CD86 결합 도메인은 서열번호 9에 대해 적어도 약 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 서열번호 30 또는 서열번호 30에 대해 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 항원-제시 세포, 예를 들어, 단핵구 또는 수지상 세포에 특이적으로 결합한다. 항원-제시 세포는 단핵구 또는 수지상 세포, 예컨대, CD86-발현 단핵구 또는 CD86-발현 수지상 세포일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 제1 결합 도메인 또는 제2 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합한다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 최소 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC) 활성 및/또는 보체-의존적 세포독성(CDC) 활성을 나타내지 않거나 나타낸다.
일부 실시형태에서, 조성물 중의 치료제 단백질 중량의 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상 또는 약 95% 이상은 응집물로 존재하지 않는다. 응집물 백분율은 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 적어도 하나의 냉동 사건 및 후속 해동 사건 후에 응집하지 않거나 최소로 응집한다. 일부 실시형태에서, 글루타메이트 완충제를 포함하는 본 개시내용의 조성물은 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정되는 바와 같이 동일한 다중특이성 단백질 및 비-글루타메이트 완충제를 포함하는 조성물의 상대적 양보다 적어도 하나의 냉동 사건 및 후속적 해동 사건 후에 고분자량 종으로서 존재하는 다중특이성 단백질의 상대적 양이 더 낮다. 냉동 사건은, 예를 들어, -80℃에서 또는 -20℃에서일 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 약 1 내지 20㎎/m, 약 1 내지 12㎎/㎖ 또는 약 5 내지 10㎎/㎖의 치료제 단백질을 포함한다. 실시형태에서, 조성물은 약 1㎎/㎖ 내지 약 12㎎/㎖ 또는 약 5㎎/㎖ 내지 약 10㎎/㎖의 치료 단백질을 포함한다. 추가 실시형태에서, 조성물은 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 또는 약 12㎎/㎖의 치료 단백질을 포함한다. 특정 실시형태에서, 조성물은 약 2㎎/㎖의 치료 단백질을 포함한다.
예시적인 단백질 치료제: 항-CD123 × 항-CD3 폴리펩타이드 및 이의 이량체
예시적인 단백질 치료제는 T-세포 상에서 CD123-발현 세포와 T-세포 수용체 복합체 둘 다에 결합하여 표적-의존적 T-세포 세포독성, 활성화 및 증식을 유도할 수 있다.
따라서, 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물과 관련하여 사용되는 치료 단백질은 CD123 결합 도메인 및 CD3 결합 도메인을 포함하는 이중특이성 단일 쇄 분자이다. 일부 실시형태에서, CD123 및/또는 CD3 결합 도메인은 항체로부터 유래되고, 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함한다. 예를 들어, CD123 및/또는 CD3 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하는 scFv일 수 있다. 이들 결합 도메인 및 가변 쇄는 표적(들)에 일부 결합을 여전히 보유하는 임의의 순서로 배열될 수 있다. 예를 들어, 가변 도메인은, 예컨대, (VH CD123)-(VL CD123)-(VH CD3)-(VL CD3); (VL CD123)-(VH CD123)-(VH CD3)-(VL CD3); (VH CD123)-(VL CD123)-(VL CD3)-(VH CD3); (VL CD123)-(VH CD123)-(VL CD3)-(VH CD3); (VH CD3)-(VL CD3)-(VH CD123)-(VL CD123); (VL CD3)-(VH CD3)-(VL CD123)-(VH CD123); (VH CD3)-(VL CD3)-(VL CD123)-(VH CD123); 또는 (VL CD3)-(VH CD3)-(VH CD123)-(VL CD123)의 순서로 배열될 수 있다. CD3에 결합하는 결합 도메인에서 VH 영역과 VL 영역의 쌍은 단일 쇄 항체(scFv)의 형식일 수 있다. VH 및 VL 영역은 VH-VL 또는 VL-VH 순서로 배열될 수 있다. 일부 실시형태에서, scFv는 동일한 배향의 동일한 VH 및 VL 영역 서열을 포함하는 항체보다 더 효과적으로 CD123에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, scFv는 VH-VL 배향에서보다 VL-VH 배향에서, 또는 그 반대의 경우에, CD123에 더 효과적으로 결합할 수 있다. VH-영역은 링커 서열에 대해 N-말단에 위치될 수 있다. VL 영역은 링커 서열에 대해 C-말단에 위치될 수 있다. 이중특이성 단일 쇄 분쇄의 CD3 결합 도메인에서 도메인 배열은 VH-VL일 수 있고, CD3 결합 도메인은 CD123-결합 도메인에 대해 C-말단에 위치된다. 이중특이성 분자는 CD3에 대한 scFv 결합에 연결된 CD123에 대해 scFv 결합을 포함할 수 있다. 이들 scFv는 짧은 펩타이드와 연결될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이중특이성 단일 쇄 분자는 힌지 영역 또는 불변 영역을 포함하지 않는다(예를 들어, US 2013/0295121, WO 2010/037836, WO 2004/106381 및 WO 2011/121110; 각각은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용됨).
CD123-이중특이성 결합 작제물은 표 4, 표 5 및/또는 표 6에 나타낸 하나 이상의 서열을 포함할 수 있다.
특정 실시형태에서, CD123-결합 도메인은 (i) CDR LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL), 및 (ii) HCDR1이 서열번호 144에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열번호 146에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열번호 148에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는, CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 특정 실시형태에서, CD123-결합 도메인은 (i) CDR LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL) 및 (ii) CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 일부 이러한 실시형태에서, (i) LCDR1은 서열번호 138에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 138과 상이한 서열을 갖고; (ii) LCDR2는 서열번호 140에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 140과 상이한 서열을 갖고; (iii) LCDR3은 서열번호 142에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 142와 상이한 서열을 갖고; (iv) HCDR1은 서열번호 144에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 144와 상이한 서열을 갖고; (v) HCDR2는 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 146와 상이한 서열을 갖고; (vi) HCDR3은 서열번호 148에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 148과 상이한 서열을 갖는다. 상기 기재된 아미노산 치환은 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환일 수 있다. 일부 실시형태에서, LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산만큼 열거된 서열과 상이하다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 CDR은 알려진 단클론성 항체의 CDR 서열과 비교할 때, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 삽입, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 결실, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환 또는 비보존적 아미노산 치환), 또는 상기 언급한 변화의 조합을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 (i) LCDR1은 서열번호 138에 제시된 아미노산 서열 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환만큼 서열번호 138과 상이한 서열을 갖고; (ii) LCDR2는 서열번호 140에 제시된 아미노산 서열 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환만큼 서열번호 140과 상이한 서열을 갖고; (iii) LCDR3은 서열번호 142에 제시된 아미노산 서열 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환만큼 서열번호 142와 상이한 서열을 갖고; (iv) HCDR1은 서열번호 144에 제시된 아미노산 서열 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환만큼 서열번호 144와 상이한 서열을 갖고; (v) HCDR2는 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환만큼 서열번호 146와 상이한 서열을 갖고; (vi) HCDR3은 서열번호 148에 제시된 아미노산 서열 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환만큼 서열번호 148과 상이한 서열을 갖는, 재조합 폴리펩타이드를 포함한다. 상기 기재된 아미노산 치환은 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환일 수 있다.
관련된 실시형태에서, 본 발명의 재조합 폴리펩타이드는 경쇄 가변 영역(VL)의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 134) 또는 중쇄 가변 영역(VH)의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 136)에, 또는 둘 다에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 88%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.5% 또는 100% 동일한 서열을 포함하거나, 이러한 서열이다. 일부 실시형태에서, 재조합 폴리펩타이드의 CD123-결합 도메인은 VHVL 배향에서 서열번호 136을 포함하는 가변 중쇄 및 서열번호 134를 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 scFv이다. 일부 실시형태에서, 재조합 폴리펩타이드의 CD123-결합 도메인은 VLVH 배향에서 서열번호 134를 포함하는 가변 경쇄 및 서열번호 136을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 scFv이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 서열번호 337의 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명은 서열번호 337의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 88%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.5% 또는 100% 동일한 재조합 폴리펩타이드를 포함한다.
일부 실시형태에서, CD123-결합 도메인은 (i) CDR LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL) 및 (ii) CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 일부 이러한 실시형태에서, (i) LCDR1은 서열번호 154에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 154와 상이한 서열을 갖고; (ii) LCDR2는 서열번호 156에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 156과 상이한 서열을 갖고; (iii) LCDR3은 서열번호 158에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 158과 상이한 서열을 갖고; (iv) HCDR1은 서열번호 160에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 160과 상이한 서열을 갖고; (v) HCDR2는 서열번호 162에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 162와 상이한 서열을 갖고; (vi) HCDR3은 서열번호 164에 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 하나의 아미노산 치환만큼 서열번호 164와 상이한 서열을 갖는다. 상기 기재된 아미노산 치환은 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환일 수 있다. 일부 실시형태에서, LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산만큼 열거된 서열과 상이하다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 CDR은 알려진 단클론성 항체의 CDR 서열과 비교할 때, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 삽입, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 결실, 약 하나 이상의(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의) 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환 또는 비보존적 아미노산 치환), 또는 상기 언급한 변화의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, CD123-결합 도메인은 경쇄 가변 영역(VL)의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 150) 또는 중쇄 가변 영역(VH)의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 152)에, 또는 둘 다에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 88%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.5% 또는 100% 동일한 서열을 포함하거나, 이러한 서열이다.
일부 실시형태에서, CD123-결합 도메인은 인간화된 면역글로불린 VL 및/또는 VH 영역을 포함한다. 면역글로불린 VL 및 VH 영역을 인간화하기 위한 기법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 미국 특허 공개 제2006/0153837호에서 논의된다. 일부 실시형태에서, CD123-결합 도메인은 인간 면역글로불린 VL 및/또는 VH 영역을 포함한다.
본질적으로, CDR 접합에 의한 인간화는 인간 가변 영역 프레임워크 및 인간 불변 영역 상에 비-인간 항체의 CDR만을 재조합화하는 것을 수반한다. 이론적으로, 이는 면역원성을 실질적으로 감소 또는 제거하여야 한다(동종이인자형 또는 이디오타입 차이가 존재하는 경우를 제외). 그러나, 본래 항체의 일부 프레임워크 잔기가 또한 보존될 필요가 있을 수 있다는 것이 보고되었다(Reichmann et al., Nature, 332:323 (1988); Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:10,029 (1989)).
보존될 필요가 있는 프레임워크 잔기는 컴퓨터 모델링을 통해 확인될 수 있다. 대안적으로, 중요한 프레임워크 잔기는 알려진 항원-결합 부위 구조를 비교함으로써 잠재적으로 확인될 수 있다(Padlan, Molec. Immunol., 31(3):169-217 (1994), 본 명세서에 참조에 의해 원용됨).
항원 결합에 잠재적으로 영향을 미치는 잔기는 몇 가지의 그룹에 속한다. 제1 그룹은 항원 부위 표면과 인접한 잔기를 포함하고, 이는 따라서 항원과 직접 접촉된다. 이들 잔기는 아미노-말단 잔기 및 CDR에 인접한 것을 포함한다. 제2 그룹은 항체에서 CDR 또는 다른 펩타이드 쇄를 접촉시킴으로써, CDR의 구조 또는 상대 배열을 변경시킬 수 있는 잔기를 포함한다. 제3 그룹은 가변 도메인의 구조적 완전함에 영향을 미칠 수 있는 파묻힌 측쇄를 갖는 아미노산을 포함한다. 이들 그룹에서 잔기는 보통 동일한 위치에서 발견되지만(Padlan, 1994, 상기 참조), 확인된 바와 같은 이들의 위치는 넘버링 시스템에 따라 다를 수 있다(문헌[Kabat et al., "Sequences of proteins of immunological interest, 5th ed., Pub. No. 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991] 참조).
당업계의 인간화된 항체에 관한 지식은, 본 개시내용에 따른 폴리펩타이드가 항체가 아니라고 해도, 이들 폴리펩타이드에 적용 가능하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 CD123-결합 도메인에 관한 것이되, (i) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 150에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 152에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 150에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 88%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 168에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 150에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 184에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 200에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 230에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 232에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 166에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 296에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 166에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 248에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 166에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 264에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xi) 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 166에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 280에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 각각의 CDR은 관심의 표적(예를 들어, CD123)에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 이의 단편 또는 유도체에 비해서, 1, 2 또는 3개 이하의 치환, 삽입 또는 결실을 포함한다.
일부 실시형태에서, CD123-결합 도메인은 CD123에 대한 IL-3 결합을 저해하지 않는다.
일부 실시형태에서, CD123-결합 분자 또는 단백질은 CD123을 발현시키는 표적 세포에 대한 T-세포의 보충을 위해 T-세포 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 CD123-결합 단백질은 (i) TCR 복합체 또는 이의 성분(예를 들어, TCRα, TCRβ, CD3γ, CD3δ 및 CD3ε)에 특이적으로 결합하는 결합 도메인 및 (ii) CD123에 특이적으로 결합하는 다른 결합 도메인을 포함할 수 있다. CD123-결합 단백질은 T-세포에 결합하는 임의의 결합 도메인, 예를 들어, 항체 유래 결합 도메인을 본질적으로 이용할 수 있다. CD3 결합 도메인이 유래될 수 있는 예시적인 항-CD3 항체는 CRIS-7 단클론성 항체(Reinherz, E. L. et al. (eds.), Leukocyte typing II., Springer Verlag, New York, (1986); 서열번호 341에 각각 나타낸 VL 및 VH 아미노산 서열 (QVVLTQSPAIMSAFPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDSSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMETEDAATYYCQQWSRNPPTFGGGTKLQITR) 및 서열번호 342 (QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRSTMHWVKQRPGQGLEWIGYINP
SSAYTNYNQKFKDKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCASPQVHYDYNGFPYWGQGTLVTVSA)); HuM291(Chau et al. (2001) Transplantation 71:941-950; 서열번호 343에 각각 나타낸 VL 및 VH 아미노산 서열(diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasssvsymnwyqqkpgkapkrliydtsklasgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqwssnpptfgggtkveik) 및 서열번호 344 (qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytfisytmhwvrqapgqglewmgyinprsgythynqklkdkatltadksastaymelsslrsedtavyycarsayydydgfaywgqgtlvtvss)); BC3 단클론성 항체(Anasetti et al. (1990) J. Exp. Med. 172:1691); OKT3 단클론성 항체(Ortho multicenter Transplant Study Group (1985) N. Engl. J. Med. 313:337) 및 이들의 유도체, 예컨대, OKT3 ala-ala(또한 OKT3 AA-FL 또는 OKT3 FL로 지칭됨), 234 및 235번 위치에서 알라닌 치환을 갖는 인간화된, Fc 변이체(Herold et al. (2003) J. Clin. Invest. 11:409); 비실리주맙(visilizumab)(Carpenter et al. (2002) Blood 99:2712), G19-4 단클론성 항체 (Ledbetter et al., 1986, J. Immunol. 136:3945), 145-2C11 단클론성 항체(Hirsch et al. (1988) J. Immunol. 140: 3766) 및 I2C 단클론성 항체(예를 들어, US 2011/0293619 및 US20120244162 참조)를 포함한다. 예를 들어, CD3 결합 도메인은 US 2012/0244162의 서열번호 17, 21, 35, 39, 53, 57, 71, 75, 89, 83, 107, 111, 125, 129, 143, 147, 161, 165, 179 및 183로부터 선택된 VL 영역 및/또는 US 2012/0244162의 서열번호 15, 19, 33, 37, 51, 55, 69, 73, 87, 91, 105, 109, 123, 127, 141, 145, 159, 163, 177 및 181로부터 선택된 VH 영역을 포함하는 CD3 결합 도메인을 비롯한, 미국 특허 공개 제2012/0244162호에 개시된 CD3 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, CD3 결합 도메인은 US 2012/0244162의 서열번호 23, 25, 41, 43, 59, 61, 77, 79, 95, 97, 113, 115, 131, 133, 149, 151, 167, 169, 185 및 187로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CD3 결합 도메인은 WO2004/106380, WO2005/040220A1, US 2014/0099318에 기재된 것 또는 이의 CD3 결합 도메인으로부터 유래된 것이다. 예시적인 항-TCR 항체는 BMA031 단클론성 항체이다(Borst et al. (1990) Human Immunology 29:175-188). CD3 결합 도메인은 WO 2013/158856에 기재된 임의의 항체 또는 서열로부터 유래될 수 있다(본 명세서에 이의 전문이 참조에 의해 원용됨).
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 CD123-결합 폴리펩타이드의 제2 결합 도메인은 (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되, (a) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 348, 349 및 350에 제시된 아미노산 서열을 갖고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 345, 346 및 347에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖거나; 또는 (b) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 354, 서열번호 355 및 서열번호 356에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 351, 서열번호 352 및 서열번호 353에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 CD123-결합 폴리펩타이드의 제2 결합 도메인은 (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되, (a) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 351, 352 및 353에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 357, 359 및 359에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖거나; 또는 (b) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 359, 367 및 368에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 363, 364 및 365에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 CD123-결합 폴리펩타이드의 제2 결합 도메인은 (i) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 및 (ii) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되, (a) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 372, 373 및 374에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 369, 370 및 371에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖거나; 또는 (b) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 서열번호 378, 379 및 380에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖고, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 서열번호 375, 376 및 377에 각각 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 단락에 열거된 CDR 서열을 포함하는 제2 결합 도메인은 인간화된다.
CD3ε에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하는 CD123-결합 단백질의 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 CD3ε에 대한 결합에 대해 CRIS-7, HuM291 또는 I2C 단클론성 항체와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, CD3-결합 도메인은 CRIS-7, HuM291 또는 I2C 단클론성 항체로부터 유래된 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL) 및 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다(예를 들어, 제2 결합 도메인의 VL 및 VH는 단클론성 항체의 경쇄 CDR 및 중쇄 CDR을 각각 포함하는 인간화된 가변 영역일 수 있다). 제2 결합 도메인은 DRA222, TSC455, 또는 TSC456 CD3-결합 도메인의 경쇄 가변 영역, 중쇄 가변 영역, 또는 둘 다를 포함할 수 있다. DRA222, TSC455 및 TSC456의 아미노산 서열은 표 4에 제공된다. DRA222 결합 도메인은 또한 WO 2013/158856에 기재된다. TSC455는 또한 TSC394 F87Y로도 지칭될 수 있다. TSC455는 또한 TSC394 E86D F87Y 또는 TSC394 DY로도 지칭될 수 있다. 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 CD3에 특이적으로 결합하고 면역글로불린 경쇄 가변 영역 및 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하되; 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 서열번호 384에서 아미노산 서열에 대해 적어도 약 93% 동일, 적어도 약 95% 동일, 적어도 약 97% 동일, 적어도 약 98% 동일 또는 적어도 약 99% 동일하거나; 또는 서열번호 385에서 아미노산 서열에 대해 적어도 약 94% 동일, 적어도 약 95% 동일, 적어도 약 97% 동일, 적어도 약 98% 동일 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 면역글로불린 중쇄 가변 영역은 서열번호 383에서 아미노산 서열에 대해 적어도 약 82% 동일, 적어도 약 85% 동일, 적어도 약 87% 동일, 적어도 약 90% 동일, 적어도 약 92% 동일, 적어도 약 95% 동일, 적어도 약 97% 동일, 적어도 약 98% 동일 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CD3-결합 도메인을 추가로 포함하는 CD123-결합 폴리펩타이드 또는 단백질은 폴리펩타이드 또는 단백질의 재조합 발현 동안 생성된 고분자량 응집물의 낮은 수준을 가질 수 있다. CD3-결합 도메인을 추가로 포함하는 CD123-결합 폴리펩타이드 또는 단백질은 폴리펩타이드 또는 단백질에 존재하는 CD3-결합 도메인에 따라서, 인간 혈청에서 상대적으로 긴 안정성을 나타낼 수 있다.
특정 변형에서, CD3-결합 도메인은 각각 본 명세서에 이의 전문이 참조에 의해 원용되는 US 2013/0129730, US 2011/0293619, US 7,635,472, WO 2010/037836, WO 2004/106381, 또는 WO 2011/121110에 개시된 CD3-결합 서열(예를 들어, CDR 또는 가변 영역) 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시형태에서, CD3-결합 도메인은 표 7에 나타낸 서열 중 하나 이상을 포함한다.
다양한 실시형태에서, CD3-결합 도메인은 표 8에 나타낸 서열 중 하나 이상을 포함한다.
일부 실시형태에서, 치료 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 제1 결합 도메인, 힌지 영역, 면역글로불린 불변 영역 및 제2 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 면역글로불린 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 또는 IgD의 면역글로불린 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, HCDR2는 서열번호 11을 포함하고, HDCR3은 서열번호 12를 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, LCDR2는 서열번호 14를 포함하고, LCDR3은 서열번호 15를 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, HCDR2는 서열번호 11을 포함하고, HDCR3은 서열번호 12를 포함하며; LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, LCDR3은 서열번호 15를 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 16의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL은 서열번호 17의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인은 서열번호 18에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); (ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, HDCR3은 서열번호 21을 포함한다. 일부 실시형태에서, LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, LCDR2는 서열번호 23을 포함하고, LCDR3은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, HDCR3은 서열번호 21을 포함하며; LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, LCDR3은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 25의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, VL은 서열번호 26의 서열, 또는 이에 대해 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 결합 도메인은 서열번호 27에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료 단백질은 서열번호 31의 서열을 포함한다.
약물 전달 시스템
본 명세서에 기재된 단백질 흡착을 방지하기 위한 조성물은 당업자에게 알려진 다수의 상이한 유형의 약물 전달 시스템과 함께 사용될 수 있다.
본 개시내용에 따른 약물 전달 시스템은 액체를 보유하도록 구성된 하나 이상의 성분, 예를 들어, IV 백을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료제 단백질은 IV 백 내부의 액체에서 현탁된다. 액체를 보유하도록 구성된 성분은 약 50, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 350, 약 450 또는 약 500㎖의 용적을 가질 수 있다. 성분은, 예를 들어, 폴리비닐 클로라이드(PVC), 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리프로필렌 또는 코폴리에스터 에터로부터 제조될 수 있다.
약물 전달 시스템은 하나 이상의 관을 추가로 포함할 수 있다. 관은 액체를 보유하도록 구성된 성분에 부착될 수 있다.
본 개시내용의 약물 전달 시스템은 환자에 삽입을 위해 바늘을 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질을 환자에 전달하기 위한 약물 전달 시스템은 치료제 단백질의 전달에 적합한 적어도 하나의 성분을 포함하되, 성분은 액체를 보유하도록 구성된 용기, 관 및 바늘로 이루어진 군으로부터 선택되고; 적어도 하나의 성분의 내면은, 치료제 단백질과 접촉되기 전에 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉된다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질을 환자에게 전달하기 위한 약물 전달 시스템은 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 포함하되, 적어도 하나의 용기의 내면은, 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉되기 전에 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉된다.
치료제 단백질을 보유하는 데 적합한 용기가 또한 제공된다. 일부 실시형태에서, 용기의 내면은 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉되기 전에 본 개시내용의 조성물과 처음 접촉된다. 일부 실시형태에서, 용기는 라텍스가 실질적으로 없다. 일부 실시형태에서, 용기는 비스(2-에틸헥실) 프탈레이트(DEHP)가 실질적으로 없다. 일부 실시형태에서, 용기는 IV 백, 주사기 및 관으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 치료제 단백질의 전달을 위해 정맥내 약물 전달 시스템을 제조하는 방법은 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 제공하는 단계, 및 치료제 단백질을 적어도 하나의 용기에 첨가하기 전에, 적어도 하나의 용기의 내면을 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 적어도 하나의 용기의 내면을 코팅하고, 치료제 단백질이 용기의 내면에 결합하는 것을 방지한다.
치료 방법
본 개시내용은 또한 치료제 단백질의 정맥내 투여(예를 들어, 정맥내 주입)에 의해 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 대상체는, 예를 들어, 포유류일 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간, 토끼, 개, 고양이, 기니피그, 햄스터, 래트, 마우스, 말 또는 소이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 제공하는 단계, 용기의 내면을 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계, 용기의 내면을 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계, 및 치료제 단백질을 환자에게 정맥내로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 적어도 하나의 용기의 내면을 코팅하고, 치료제 단백질이 용기의 내면에 결합하는 것을 방지한다.
실시예
본 발명은 다음의 실시예를 참조로 하여 상세하게 더욱 기재한다. 이들 실시예는 단지 예시적인 목적을 위해 제공하며, 달리 구체화하지 않는 한 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 따라서, 본 발명은 다음의 실시예로 제한되는 것으로 해석되어서는 안 되며, 오히려, 본 명세서에 제공된 교시의 결과로서 분명하게 되는 임의의 및 모든 변형을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
추가적인 설명 없이, 당업자는, 앞의 설명 및 다음의 예시적인 실시예를 이용하여, 본 발명의 화합물을 제조하고 이용하며, 특허청구된 방법을 실행할 수 있는 것으로 여겨진다. 따라서, 다음의 작업 실시예는 본 발명의 바람직한 실시형태를 구체적으로 지적하며, 본 개시내용의 나머지를 어떤 방법으로 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예 1: IVSS 용액의 제조
T=1일에, pH 6.0에서 10mM의 석시네이트 및 0.08% 폴리소르베이트-80을 포함하는 20× IVSS 조성물을 제조하였다. 조성물을 질소 오버레이를 갖는 10㎖의 깨끗한 유리 바이알에 넣고, 20㎜ 마개/플립오프 오버실을 이용하여 밀봉하였다. 이 조성물을 실시예 전체적으로 "석시네이트 제형"으로 지칭한다.
pH 6.0에서 333mM 히스티딘 및 0.067% 폴리소르베이트-80을 포함하는 비교기 20× IVSS 조성물을 제조하였다. 조성물을 질소 오버레이를 갖는 10㎖의 깨끗한 유리 바이알에 유사하게 넣고, 20㎜ 마개/플립오프 오버실을 이용하여 밀봉하였다. 이 조성물을 실시예 전체적으로 "히스티딘 제형"으로 지칭한다.
실시예 2: 석시네이트 및 히스티딘 제형에서의 폴리소르베이트의 안정성
HPLC에 의해 및/또는 UV 스펙트럼 스캔 프로파일의 정량적 평가에 의해 폴리소르베이트-80의 정량화로 석시네이트 제형 및 히스티딘 제형에서의 폴리소르베이트-80의 안정성을 결정하였다. HPLC에 대해, ELSD 검출기를 구비한 Agilent® HPLC 상에서 제형 둘 다의 폴리소르베이트 농도를 결정하였다. UV 스펙트럼 스캔에 대해, 제형 둘 다의 100 내지 600㎚로부터의 흡광도를 분광광도계를 이용하여 스캐닝하였다.
안정성 데이터를 표 9에 나타낸다. 석시네이트 제형에서의 폴리소르베이트-80은 40℃에서 적어도 270일 동안 안정적인 반면, 히스티딘 제형에서의 폴리소르베이트-80은 25℃에서 2개월 미만 동안 안정적이다. 이 결과는 폴리소르베이트-80이 히스티딘 제형에 비해서 석시네이트 제형에서 더 안정적이라는 것을 입증한다.
표 10은 HPLC 방법에 의한 석시네이트 제형에서의 폴리소르베이트 80 정량화를 나타낸다. 샘플을 40℃에서 270일 동안 보유한다. 석시네이트 완충제 중 폴리소르베이트-80은 270일 후에 여전히 세부항목 내에 있었고, 폴리소르베이트-80을 0.07%에서 정량화하였다. (폴리소르베이트 80 세부항목을 0.06% 내지 0.1% 폴리소르베이트-80에서 설정한다.)
또한 UV 스캔 방법을 이용하여 안정성을 평가하였다. UV 스캔 데이터는 HPLC 방법에 의해 얻은 데이터를 확실하게 하였다(도 1A 내지 도 1D). T=41일에(도 1B), 히스티딘 제형은 폴리소르베이트-80의 붕괴를 나타내는 UV 스펙트럼 스캔 프로파일의 변화를 나타내었다. T=77(도 1C) 및 T=144일에(도 1D), 히스티딘 제형은 T=41일에 비해서 추가적인 폴리소르베이트-80 분해를 나타내었다. 이 실험의 지속기간 동안 석시네이트 제형에 대한 스펙트럼 스캔 프로파일의 변화는 없었다.
석시네이트 제형의 진행 중인 안정성은 2 내지 8℃ 및 25℃에서 보유한 샘플에서 6개월 동안 관찰되었다. 석시네이트 제형은 시험한 모든 시점 및 온도에서 안정적이었다. 아래의 표 11(a)은 초기, 1-개월, 2-개월, 3-개월 및 6-개월 시점 동안 외관 데이터, pH, 삼투몰농도, 폴리소르베이트 80 농도, 스펙트럼 스캔 및 마이크로 플로우 영상(Micro Flow Imaging: MFI)을 나타낸다. 값은 가장 가까운 정수로 반올림한다(예를 들어, 1.2는 1.0으로 반올림한다).
[표 11(a)]
이하의 표 11(b)는 다양한 온도(2 내지 8℃, 25℃) 및 조건(반전, 직립)에서 개시(T0), 1-개월(T1), 2-개월(T2), 3-개월(T3), 6-개월(T6), 9-개월(T9) 및 12-개월 (T12) 시점 동안의 외관 데이터, pH, 삼투몰농도, 스펙트럼 스캔 정보, 폴리소르베이트 80 농도, 스펙트럼 스캔 및 마이크로 플로우 영상(MFI) 데이터를 나타낸다. 표 11(b)에서, 데이터는 관찰된 밀리리터당 입자 수를 나타내되, 입자는 ≥ 2㎛, ≥ 5㎛, ≥ 10㎛ 또는 ≥ 25㎛의 직경을 갖는다. 값은 다음 정수로 반올림한다(예를 들어, 1.2는 2로 반올림한다).
[표 11(b)]
종합하면, 이 데이터는 폴리소르베이트-80은 히스티딘-기반 제형에서보다 석시네이트-기반 제형에서 훨씬 더 안정적이라는 것을 시사한다.
실시예 3: TRI130가 있는 IVSS 용액을 이용하는 방법
IVSS는 임상시험에서 TRI130, CD123 × CD3 이중특이성을 공급한다.
IVSS는 임상시험 현장에 일회용 10㎖ 바이알에서 냉장 수송한다. IVSS를, 사용할 때까지 약국 또는 지정된 보호 구역에서 2 내지 8℃에 보관한다.
환자에 대한 TRI130의 투여 전에, 최종 용량을 준비하기 위해 TRI130을 희석시킨다. TRI130 희석물을 빈 IV 백에 준비하고; 이를 약물 희석 백으로서 지칭한다.
약물 희석 백을 준비하기 위해, 용량 준비에서 사용을 위해 생성물이 적절하게 혼합되는 것을 확실히 하기 위해 TRI130의 바이알을 뒤집지 않고 부드럽게(진탕하지 않음) 5 내지 6회 돌린다. 190㎖의 정상 식염수를 빈 약물 희석 백에 첨가한다. 9.7㎖의 IVSS를 약물 희석 백에 첨가하고, 백을 5 내지 6회 뒤집어서 부드럽게 혼합한다. 0.3㎖의 TRI130를 약물 희석 백에 첨가하고, 백을 5 내지 6회 뒤집어서 부드럽게 혼합한다.
환자에 대한 투여를 위해 주사기를 준비하기 위해, 다음의 절차에 따른다. 50 또는 60㎖ 주사기에 환자 이름, 연구 번호, 약물명, 용량 및 제조일 및 시간을 라벨링한다. 이는 환자 투여 주사기로 지칭한다. 정상 식염수의 양("A"㎖)을 이런 라벨링된 빈 60㎖ 주사기에 첨가한다. 용량 코호트에 따라서 다르게 첨가될 식염수의 양인 "A"에 대해서는 표 13을 참조한다.
이어서, IVSS의 양("B"㎖)을 주사기 및 바늘을 이용하여 IVSS의 하나의 바이알로부터 첨가한다. IVSS의 양에 대해 표 13을 참조하며, 용량 코호트에 따라서 "B"가 첨가될 것이다. 이어서, 바늘을 제거하고, Baxter RAPIDFILL 커넥터(루어락-대-루어락)을 이용하여 해당 용적("B"㎖)을 60㎖ 환자 투여 주사기에 옮긴다. IVSS를 함유하는 주사기의 내용물을 60㎖ 환자 투여 주사기에 밀어넣는다. 이어서, 환자 투여 주사기를 커넥터로부터 약간 느슨하게 하고, IVSS 모두가 주사기와 커넥터로부터 전달되는 것을 보장하기 위해 플런저를 잡아당겨서 추가 1㎖를 빼낸다. 이어서, 주사기를 커넥터에 다시 조이고, 환자 투여 주사기의 내용물을 5 내지 6회 부드럽게 뒤집어서 혼합한다. 이어서, IVSS 주사기 및 커넥터를 분리시키고, 폐기한다.
주사기와 바늘을 이용하여 TRI130의 양("C"㎖)을 (상기 기재한 바와 같이 준비한) 약물 희석 백으로부터 회수한다. 용량 코호트에 따라서 다르게 첨가될 약물 희석 백으로부터의 약물의 양인 "C"에 대해서는 표 13을 참조한다. 이어서, 바늘을 제거하고, Baxter RAPIDFILL 커넥터를 이용하여 TRI130(용적 "C")을 환자 투여 주사기에 옮긴다.
TRI130("C"㎖)을 함유하는 주사기의 내용물을 60㎖ 환자 투여 주사기에 밀어넣는다. 환자 투여 주사기를 커넥터로부터 약간 느슨하게 하고, TRI130 모두가 주사기와 커넥터로부터 전달되는 것을 보장하기 위해 플런저를 잡아당겨서 추가 1㎖를 빼낸다. 이어서, 주사기를 커넥터에 다시 조이고, 환자 투여 주사기의 내용물을 5 내지 6회 부드럽게 뒤집어서 혼합한다. TRI130 주사기 및 커넥터를 분리시키고, 폐기한다.
후속적으로, 필터가 있는 IV 익스텐션 라인(extension line)을 환자 투여 주사기에 부착하고, IV 라인으로부터 단부 캡을 제거한다. 환자 투여 주사기로부터의 1㎖ 용액을 IV 익스텐션 라인 및 필터를 통해 밀어서 라인에 넣는다. IV 익스텐션 라인 및 필터는 대략 0.84㎖를 사용할 것이며, 따라서 대략 0.16㎖는 IV 튜빙을 나가고, 적절하게 폐기되어야 한다. IV 라인 상의 단부 캡을 교체한다. 이어서, 환자 투여를 위해 환자 투여 주사기 및 IV 라인 및 필터를 병원 바닥 또는 주입 센터에 보낸다.
다양한 코호트에서 환자에 투여를 위한 TRI130의 준비에 관한 추가적인 상세한 설명을 표 12(a), 표 12(b), 표 13(a) 및 표 13(b)에 나타낸다. 표 12(a) 및 표 12(b)는 약물 희석 백의 제조를 위한 정상 식염수, IVSS 및 TRI130 약물 제품의 용적을 제공한다. 표 13(a) 및 표 13(b)는 환자 투여 주사기의 제조를 위한 (약물 희석 백으로부터의) 정상 식염수, IVSS 및 TRI130 약물 용액을 제공한다.
[표 12(a)]
[표 12(b)]
[표 13(a)]
[표 13(b)]
SEQUENCE LISTING
<110> Aptevo Research and Development LLC
<120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR PREVENTING ADSORPTION OF THERAPEUTIC
PROTEINS TO DRUG DELIVERY SYSTEM COMPONENTS
<130> WO/2021/146336
<140> PCT/US2021/013304
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<150> US 62/960,602
<151> 2020-01-13
<160> 389
<170> PatentIn version 3.5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD3? LCDR3
<400> 24
Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 25
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD3? VH
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD3? VL
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Ser Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser
100 105
<210> 27
<211> 249
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD3? scFv
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln
130 135 140
Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
145 150 155 160
Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Ser Ser
180 185 190
Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly
225 230 235 240
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser
245
<210> 28
<211> 166
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Monomeric IL-10
<400> 28
Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro
1 5 10 15
Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
20 25 30
Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu
35 40 45
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu
85 90 95
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
100 105 110
Pro Cys Glu Asn Gly Gly Gly Ser Gly Gly Lys Ser Lys Ala Val Glu
115 120 125
Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys
130 135 140
Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met
145 150 155 160
Thr Met Lys Ile Arg Asn
165
<210> 29
<211> 2112
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD86 x monomeric IL-10 bispecific construct DNA sequence
<400> 29
aagcttgccg ccatggaagc accagcgcag cttctcttcc tcctgctact ctggctccca 60
gataccaccg gtcaggtgca gctggtgcag tctggggctg aggtgaagaa gcctggggcc 120
tcagtgaagg tctcctgcaa ggcttctgga tacaccttca ccgactacaa catgaactgg 180
gtgcgacagg cccctggaca agggcttgag tggatgggaa atattgatcc ttactatggt 240
ggtactagtt acaatcagaa gttcaagggc agggtcacca tgaccaggga cacgtccatc 300
agcacagcct acatggagct gagcaggctg agatctgacg acacggccgt gtattactgt 360
gcgagatggg actataggta cgacgacggg agggcttact atgttatgga cttctggggc 420
caagggacca cggtcaccgt ctcctcaggt ggaggcggtt caggcggagg tggatccggc 480
ggtggcggat cgggtggcgg cggatctgac atcgtgatga cccagtctcc agactccctg 540
gctgtgtctc tgggcgagag ggccaccatc aactgcaagt ccagccagag tgttttatac 600
agctccaacc agaagaacta cttagcttgg taccagcaga aaccaggaca gcctcctaag 660
ctgctcattt actgggcatc tacccgggaa tccggggtcc ctgaccgatt cagtggcagc 720
gggtctggga cagatttcac tctcaccatc agcagcctgc aggctgaaga tgtggcagtt 780
tattactgtc atcaatacct ctactcgtgg acgtttggcc aggggaccaa gctggagatc 840
aaacggctcg agcccaaatc ttctgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 900
gaagccgcgg gtgcaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 960
atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 1020
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 1080
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 1140
tggctgaatg gcaaggcgta cgcgtgcgcg gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1200
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 1260
ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1320
tatccaagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1380
accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1440
gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1500
cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gttcttccct gaatacagga 1560
actcagccga attctagccc aggccagggc acccagtctg agaacagctg cacccacttc 1620
ccaggcaacc tgcctaacat gcttcgagat ctccgagatg ccttcagcag agtgaagact 1680
ttctttcaaa tgaaggatca gctggacaac ttgttgttaa aggagtcctt gctggaggac 1740
tttaagggtt acctgggttg ccaagccttg tctgagatga tccagtttta cctggaggag 1800
gtgatgcccc aagctgagaa ccaagaccca gacatcaagg cgcatgtgaa ctccctgggg 1860
gagaacctga agaccctcag gctgaggcta cggcgctgtc atcgatttct tccctgtgaa 1920
aacggtggtg gatccggcgg taagagcaag gccgtggagc aggtgaagaa tgcctttaat 1980
aagctccaag agaaaggcat ctacaaagcc atgagtgagt ttgacatctt catcaactac 2040
atagaagcct acatgacaat gaagatacga aactaacgta cgttcgaacc cgggcacgtg 2100
cggaccgaat tc 2112
<210> 30
<211> 667
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD86 x monomeric IL-10 bispecific construct amino acid sequence
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Tyr Arg Tyr Asp Asp Gly Arg Ala Tyr Tyr Val Met
100 105 110
Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu
145 150 155 160
Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr
165 170 175
Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
180 185 190
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly
195 200 205
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
210 215 220
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His
225 230 235 240
Gln Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
245 250 255
Lys Arg Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
260 265 270
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
275 280 285
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
290 295 300
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
305 310 315 320
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
325 330 335
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
340 345 350
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Ala Tyr Ala Cys Ala Val Ser
355 360 365
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
370 375 380
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
385 390 395 400
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
405 410 415
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
420 425 430
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
435 440 445
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
450 455 460
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
465 470 475 480
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Ser Leu Asn Thr Gly
485 490 495
Thr Gln Pro Asn Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser
500 505 510
Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg
515 520 525
Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu
530 535 540
Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr
545 550 555 560
Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu
565 570 575
Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val
580 585 590
Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg
595 600 605
Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Gly Gly Gly Ser Gly Gly Lys
610 615 620
Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu
625 630 635 640
Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr
645 650 655
Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn
660 665
<210> 31
<211> 777
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD123 x anti-CD3? bispecific construct amino acid sequence
<400> 31
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala
20 25 30
Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser His Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg
65 70 75 80
Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Thr Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu
145 150 155 160
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
165 170 175
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg
180 185 190
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
210 215 220
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
225 230 235 240
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Lys Leu Arg
245 250 255
Tyr Phe Asp Trp Leu Ser Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
260 265 270
Met Val Thr Val Ser Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
275 280 285
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val
290 295 300
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
305 310 315 320
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
325 330 335
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
340 345 350
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
355 360 365
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
370 375 380
Cys Ala Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
385 390 395 400
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
405 410 415
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
420 425 430
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
435 440 445
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
450 455 460
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
465 470 475 480
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
485 490 495
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Gly
500 505 510
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ser
515 520 525
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
530 535 540
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Ser
545 550 555 560
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
565 570 575
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
580 585 590
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
595 600 605
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
610 615 620
Ala Arg Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
625 630 635 640
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
645 650 655
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln
660 665 670
Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
675 680 685
Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr
690 695 700
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Ser Ser
705 710 715 720
Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
725 730 735
Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala
740 745 750
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly
755 760 765
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser
770 775
<210> 32
<211> 699
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified immunoglobulin constant region
<400> 32
tcgagtgagc ccaaatcttc tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 60
gccgcgggtg caccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 120
tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 180
aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 240
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 300
ctgaatggca aggaatacaa gtgcgcggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 360
aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 420
tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 480
ccaagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 540
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 600
aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 660
aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggt 699
<210> 33
<211> 233
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified immunoglobulin constant region
<400> 33
Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
35 40 45
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
50 55 60
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
65 70 75 80
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
85 90 95
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn
100 105 110
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
115 120 125
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
130 135 140
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
165 170 175
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
180 185 190
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
195 200 205
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
210 215 220
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230
<210> 34
<211> 693
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified immunoglobulin constant region
<400> 34
gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgcg 60
ggtgcaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 120
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 180
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 240
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 300
ggcaaggaat acaagtgcgc ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 360
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 420
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatccaagc 480
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 540
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 600
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 660
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggt 693
<210> 35
<211> 231
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified immunoglobulin constant region
<400> 35
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230
<210> 36
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> immunoglobulin hinge region
<400> 36
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
<210> 37
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> immunoglobulin hinge region
<400> 37
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Cys Ser
1 5 10 15
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> immunoglobulin hinge region
<400> 38
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<210> 125
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD3 HCDR3
<400> 125
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Phe Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 126
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD3 HCDR3
<400> 126
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr
1 5 10
<210> 127
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD3 HCDR3
<400> 127
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Leu Ser Phe Trp Ala Tyr
1 5 10
<210> 128
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> peptide linker
<400> 128
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 129
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> peptide linker
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(10)
<223> may be present or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(15)
<223> may be present or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(20)
<223> may be present or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(25)
<223> may be present or absent
<400> 129
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 130
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DE loop insertion peptide
<400> 130
Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5
<210> 131
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Modified immunoglobulin constant region
<400> 131
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Ala Tyr Ala Cys Ala Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215
<210> 132
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fc binding domain linker
<400> 132
Ser Ser Leu Asn Thr Gly Thr Gln Pro Asn Ser
1 5 10
<210> 133
<211> 342
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 variable light chain domain
<400> 133
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca cagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300
cctccgacca ctttcggcgg agggaccaag gtggagatca aa 342
<210> 134
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 variable light chain domain
<400> 134
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser His Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
100 105 110
Ile Lys
<210> 135
<211> 372
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 variable heavy chain domain
<400> 135
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatggca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggaggg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagaaaag 300
ttacgatatt ttgactggtt atccgatgct tttgatatct ggggccaagg gacaatggtc 360
accgtctctt ca 372
<210> 136
<211> 124
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 variable heavy chain domain
<400> 136
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Lys Leu Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Ser Asp Ala Phe Asp
100 105 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 137
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRL1
<400> 137
cacagtgttt tatacagctc caacaataag aactac 36
<210> 138
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRL1
<400> 138
His Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRL2
<400> 139
Thr Gly Gly Gly Cys Ala Thr Cys Thr
1 5
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRL2
<400> 140
Trp Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRL3
<400> 141
cagcaatatt atagtactcc tccgaccact 30
<210> 142
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRL3
<400> 142
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Thr
1 5 10
<210> 143
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRH1
<400> 143
ggattcacct ttagcagcta tggc 24
<210> 144
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRH1
<400> 144
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 145
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRH2
<400> 145
attagtggta gtggtggtag caca 24
<210> 146
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRH2
<400> 146
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 147
<211> 51
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRH3
<400> 147
gcgaaagaaa agttacgata ttttgactgg ttatccgatg cttttgatat c 51
<210> 148
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> OMT1 CDRH3
<400> 148
Ala Lys Glu Lys Leu Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Ser Asp Ala Phe Asp
1 5 10 15
Ile
<210> 149
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 variable light chain domain
<400> 149
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatctga attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 150
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 variable light chain domain
<400> 150
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 151
<211> 366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 variable heavychain domain
<400> 151
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata catcttcacc gactactata tgcactgggt gcgtcaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgagcccta acagtggtaa cacaggctat 180
gcacagaagt tccagggccg tgtcaccatg acccgcgaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgcg ttctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatgcg 300
gcggattacg gtgactacgt tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360
tcttca 366
<210> 152
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 variable heavy chain domain
<400> 152
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Ser Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Ala Asp Tyr Gly Asp Tyr Val Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 153
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR L1
<400> 153
cagagcatta gcagctat 18
<210> 154
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR L1
<400> 154
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 155
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR L2
<400> 155
gctgcatcc 9
<210> 156
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR L2
<400> 156
Ala Ala Ser
1
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<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR L3
<400> 157
caacagagtt acagtacccc tctcact 27
<210> 158
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR L3
<400> 158
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 159
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR H1
<400> 159
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<210> 160
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR H1
<400> 160
Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 161
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR H2
<400> 161
atgagcccta acagtggtaa caca 24
<210> 162
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR H2
<400> 162
Met Ser Pro Asn Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 163
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR H3
<400> 163
gcgagagatg cggcggatta cggtgactac gttgcttttg atatc 45
<210> 164
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB8 CDR H3
<400> 164
Ala Arg Asp Ala Ala Asp Tyr Gly Asp Tyr Val Ala Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 165
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 variable light chain domain
<400> 165
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatctga attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 166
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 variable light chain domain
<400> 166
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 167
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 variable heavy chain domain
<400> 167
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgtcaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatggggtgg atcaacccta acagtggtga cacaagctat 180
gcacagaagt tccagggccg tgtcaccatg acccgcgaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgcg ttctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcaggatagt 300
agtggttccg gggcttttga tatctggggc caagggacaa tggtcaccgt ctcttca 357
<210> 168
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 variable heavy chain domain
<400> 168
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gln Asp Ser Ser Gly Ser Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 169
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR L1
<400> 169
cagagcatta gcagctat 18
<210> 170
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR L1
<400> 170
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 171
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR L2
<400> 171
gctgcatcc 9
<210> 172
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR L2
<400> 172
Ala Ala Ser
1
<210> 173
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR L3
<400> 173
caacagagtt acagtacccc tctcact 27
<210> 174
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR L3
<400> 174
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 175
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR H1
<400> 175
ggatacacct tcaccagcta ctat 24
<210> 176
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR H1
<400> 176
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 177
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR H2
<400> 177
atcaacccta acagtggtga caca 24
<210> 178
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR H2
<400> 178
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Thr
1 5
<210> 179
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR H3
<400> 179
gcgcaggata gtagtggttc cggggctttt gatatc 36
<210> 180
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB60 CDR H3
<400> 180
Ala Gln Asp Ser Ser Gly Ser Gly Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 181
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 variable light chain domain
<400> 181
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatctga attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 182
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 variable light chain domain
<400> 182
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 183
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 variable heavy chain domain
<400> 183
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc ggctactata tgcactgggt gcgtcaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccta acagtggtaa cacaggctat 180
gcacagaagt tccagggccg tgtcaccatg acccgcgaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgcg ttctgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagaggaa 300
ccgatttttg gagtggttat ggatgctttt gatatctggg gccaagggac aatggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 184
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 variable heavy chain domain
<400> 184
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Glu Pro Ile Phe Gly Val Val Met Asp Ala Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 185
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR L1
<400> 185
cagagcatta gcagctat 18
<210> 186
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR L1
<400> 186
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR L2
<400> 187
gctgcatcc 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR L2
<400> 188
Ala Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR L3
<400> 189
caacagagtt acagtacccc tctcact 27
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR L3
<400> 190
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR H1
<400> 191
ggatacacct tcaccggcta ctat 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR H1
<400> 192
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR H2
<400> 193
atgaacccta acagtggtaa caca 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR H2
<400> 194
Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr
1 5
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<211> 48
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR H3
<400> 195
gcgaaagagg aaccgatttt tggagtggtt atggatgctt ttgatatc 48
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<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB65 CDR H3
<400> 196
Ala Lys Glu Glu Pro Ile Phe Gly Val Val Met Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10 15
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<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 variable light chain domain
<400> 197
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgcgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gaccataaac aactatttga actggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctattct gcatctactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaccag agttacactt cacctctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 198
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 variable light chain domain
<400> 198
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr Thr Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 199
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 variable heavy chain domain
<400> 199
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgcctc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtgcca atagtgctgg tctaggccat 180
gcggactctg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgcg cgccgaggac acggccgtat attactgtgc gagagtgggc 300
tatagcagct cggctgatgc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctcc 360
tcg 363
<210> 200
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 variable heavy chain domain
<400> 200
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Ala Asn Ser Ala Gly Leu Gly His Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Tyr Ser Ser Ser Ala Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR L1
<400> 201
cagaccataa acaactat 18
<210> 202
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR L1
<400> 202
Gln Thr Ile Asn Asn Tyr
1 5
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<211> 9
<212> DNA
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<220>
<223> DB82 CDR L2
<400> 203
tctgcatct 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR L2
<400> 204
Ser Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR L3
<400> 205
caccagagtt acacttcacc tctcact 27
<210> 206
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR L3
<400> 206
His Gln Ser Tyr Thr Ser Pro Leu Thr
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR H1
<400> 207
ggattcacct ttagcagcta tgcc 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR H1
<400> 208
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR H2
<400> 209
attagtgcca atagtgctgg tcta 24
<210> 210
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR H2
<400> 210
Ile Ser Ala Asn Ser Ala Gly Leu
1 5
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<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR H3
<400> 211
gcgagagtgg gctatagcag ctcggctgat gcttttgata tc 42
<210> 212
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB82 CDR H3
<400> 212
Ala Arg Val Gly Tyr Ser Ser Ser Ala Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 213
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 variable light chain domain
<400> 213
gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gagacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgaccgttt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agccgtgtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctac acactggcca 300
ctcactttcg gccctggtac caaagtggat atcaaa 336
<210> 214
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 variable light chain domain
<400> 214
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asp Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Thr His Trp Pro Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 215
<211> 375
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 variable heavy chain domain
<400> 215
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcact agctatgcta tgcattgggt gcgtcaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggactt gttgatcctg aagatggtga aacaatatat 180
gcagagaagt tccagggccg tgtcaccatg acccgcgaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgcg ttctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagacgaacg 300
tattactatg atagtagtgg ttcccgttat gcttttgata tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cttca 375
<210> 216
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 variable heavy chain domain
<400> 216
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Val Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Ser Arg Tyr Ala Phe
100 105 110
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 217
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR L1
<400> 217
cagagcctcc tgcatagtaa tggagacaac tat 33
<210> 218
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR L1
<400> 218
Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asp Asn Tyr
1 5 10
<210> 219
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR L2
<400> 219
ttgggttct 9
<210> 220
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR L2
<400> 220
Leu Gly Ser
1
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<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR L3
<400> 221
atgcaagcta cacactggcc actcact 27
<210> 222
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR L3
<400> 222
Met Gln Ala Thr His Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 223
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR H1
<400> 223
ggatacacct tcactagcta tgct 24
<210> 224
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR H1
<400> 224
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala
1 5
<210> 225
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR H2
<400> 225
gttgatcctg aagatggtga aaca 24
<210> 226
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR H2
<400> 226
Val Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr
1 5
<210> 227
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR H3
<400> 227
gcgagacgaa cgtattacta tgatagtagt ggttcccgtt atgcttttga tatc 54
<210> 228
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB83 CDR H3
<400> 228
Ala Arg Arg Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Ser Arg Tyr Ala Phe
1 5 10 15
Asp Ile
<210> 229
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 variable light chain domain
<400> 229
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgcgtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gggcatcaga aatgatttag gttggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatca 180
cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacggtg cccccctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 230
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 variable light chain domain
<400> 230
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Gly Ala Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 231
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 variable heavy chain domain
<400> 231
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata tatgttcagt ggccattctg cacactgggt gcgtcaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccta acagtggtaa cacaggctat 180
gcacagaagt tccagggccg tgtcaccatg acccgcgaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgcg ttctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatagc 300
agtggctggt acgatgtctt tgactactgg ggccagggga ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 232
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 variable heavy chain domain
<400> 232
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Met Phe Ser Gly His
20 25 30
Ser Ala His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Ser Gly Trp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 233
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR L1
<400> 233
cagggcatca gaaatgat 18
<210> 234
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR L1
<400> 234
Gln Gly Ile Arg Asn Asp
1 5
<210> 235
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR L2
<400> 235
gctgcatcc 9
<210> 236
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR L2
<400> 236
Ala Ala Ser
1
<210> 237
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR L3
<400> 237
caacagagtt acggtgcccc cctc 24
<210> 238
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR L3
<400> 238
Gln Gln Ser Tyr Gly Ala Pro Leu Thr
1 5
<210> 239
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR H1
<400> 239
ggatatatgt tcagtggcca ttct 24
<210> 240
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR H1
<400> 240
Gly Tyr Met Phe Ser Gly His Ser
1 5
<210> 241
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR H2
<400> 241
atgaacccta acagtggtaa caca 24
<210> 242
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR H2
<400> 242
Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 243
<211> 39
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR H3
<400> 243
gcgagagata gcagtggctg gtacgatgtc tttgactac 39
<210> 244
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB86 CDR H3
<400> 244
Ala Arg Asp Ser Ser Gly Trp Tyr Asp Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 245
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB280 variable light chain domain
<400> 245
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatctga attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 246
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB280 variable light chain domain
<400> 246
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 247
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB280 variable heavy chain domain
<400> 247
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata cagcctcaac ttatactata tgcactgggt gcgtcaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccta acagtggtaa cacaggctat 180
gcacagaagt tccagggccg tgtcaccatg acccgcgaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgcg ttctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagcctcgat 300
tgtagtggtg gtagctgcta ctccgaatat gatgcttttg atatctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctca 378
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB280 variable heavy chain domain
<400> 248
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Asn Leu Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Leu Asp Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Ser Glu Tyr Asp Ala
100 105 110
Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<213> Artificial Sequence
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<220>
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Ala Ala Ser
1
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<220>
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1 5
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<211> 24
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<220>
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atgaacccta acagtggtaa caca 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB280 CDR H2
<400> 258
Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr
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<212> DNA
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gcgagcctcg attgtagtgg tggtagctgc tactccgaat atgatgcttt tgatatc 57
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Ala Ser Leu Asp Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Ser Glu Tyr Asp Ala
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatctga attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB331 variable light chain domain
<400> 262
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB331 variable heavy chain domain
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caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgtcaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccta acagtggtaa cacaggctat 180
gcacagaagt tccagggccg tgtcaccatg acccgcgaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgcg ttctgaggac acggccgtgt attactgtgc aacagatctc 300
gcgggggaag ccttgttcga cccctggggc cagggcaccc tggtcaccgt ctcctca 357
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB331 variable heavy chain domain
<400> 264
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asp Leu Ala Gly Glu Ala Leu Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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cagagcatta gcagctat 18
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<211> 6
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<223> DB331 CDR L1
<400> 266
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> DB331 CDR L2
<400> 267
gctgcatcc 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB331 CDR L2
<400> 268
Ala Ala Ser
1
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<211> 27
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<213> Artificial Sequence
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<223> DB331 CDR L3
<400> 269
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB331 CDR H2
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1 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB331 CDR H3
<400> 276
Ala Thr Asp Leu Ala Gly Glu Ala Leu Phe Asp Pro
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB415 variable light chain domain
<400> 277
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatctga attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB415 variable light chain domain
<400> 278
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB415 variable heavy chain domain
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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgcctc 60
tcctgtgcag cctctggaat caccttcagt agttatggca tgcattgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagttgga atagtggtaa cagagtctat 180
gtggactctg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgcg cgccgaggac acggccgtat attactgtgc gagagatact 300
aatgatgctt ttgatatctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc a 351
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB415 variable heavy chain domain
<400> 280
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Asn Arg Val Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Thr Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
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1 5
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Ala Ala Ser
1
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<213> Artificial Sequence
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<223> DB415 CDR L3
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caacagagtt acagtacccc tctcact 27
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB415 CDR L3
<400> 286
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
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<213> Artificial Sequence
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<211> 24
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<220>
<223> DB415 CDR H3
<400> 292
Ala Arg Asp Thr Asn Asp Ala Phe Asp Ile
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> DB435 variable light chain domain
<400> 293
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gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctctcac tttcggcgga 300
ggtaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 294
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 variable light chain domain
<400> 294
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 295
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 variable heavy chain domain
<400> 295
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgtcaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggctgg atcacccctc acaatggtaa cataaagtat 180
gcacgggagt tccagggccg tgtcaccatg acccgcgaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgcg ttctgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagatctg 300
aactggaacg cagcctttga ctactggggc caggggaccc tggtcaccgt ctcctca 357
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<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 variable heavy chain domain
<400> 296
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Thr Pro His Asn Gly Asn Ile Lys Tyr Ala Arg Glu Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu Asn Trp Asn Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 297
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR L1
<400> 297
cagagcatta gcagctat 18
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR L1
<400> 298
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 299
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR L2
<400> 299
gctgcatcc 9
<210> 300
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR L2
<400> 300
Ala Ala Ser
1
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<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR L3
<400> 301
caacagagtt acagtacccc tctcact 27
<210> 302
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR L3
<400> 302
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 303
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR H1
<400> 303
ggaggcacct tcagcagcta tgct 24
<210> 304
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR H1
<400> 304
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 305
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR H2
<400> 305
atcacccctc acaatggtaa cata 24
<210> 306
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR H2
<400> 306
Ile Thr Pro His Asn Gly Asn Ile
1 5
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<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR H3
<400> 307
gcgaaagatc tgaactggaa cgcagccttt gactac 36
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<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DB435 CDR H3
<400> 308
Ala Lys Asp Leu Asn Trp Asn Ala Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 309
<211> 2340
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI129
<400> 309
atggaagcac cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccggt 60
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 120
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatggca tgagctgggt ccgccaggct 180
ccagggaagg ggctggaggg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 240
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 300
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagaaaag 360
ttacgatatt ttgactggtt atccgatgct tttgatatct ggggccaagg gacaatggtc 420
accgtctctt caggtggagg cggttcaggc ggaggtggat ccggcggtgg cggctccggt 480
ggcggcggat ctgacatcgt gatgacccag tctccagact ccctggctgt gtctctgggc 540
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aactacttag cttggtacca gcagaaacca ggacagcctc ctaagctgct catttactgg 660
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tattatagta ctcctccgac cactttcggc ggagggacca aggtggagat caaatcctcg 840
agtgagccca aatcttctga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc 900
gcgggtgcac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 960
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 1020
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 1080
cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 1140
aatggcaagg aatacaagtg cgcggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1200
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1260
cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatcca 1320
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1380
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1440
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cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggttccg gaggaggggg ttcaggtggg 1560
ggaggttctg gcggcggggg aagcccttca caggtgcaac tggtgcagag tggacccgag 1620
gttaaaaaac cagggtcctc cgttaaggtt agctgcaaag cctctggcta cacattttcc 1680
aggagtacaa tgcactgggt gaggcaggct cctggacagg gactcgagtg gatcgggtat 1740
atcaacccat ctagcgccta taccaattac aaccaaaagt ttaaggaccg agttaccatt 1800
accgctgaca aatccaccag tacagcttat atggagctgt catctcttag gtccgaggac 1860
actgctgttt attactgcgc tcgtcctcag gttcactatg actataatgg ttttccctac 1920
tggggtcagg gaaccctggt gactgtctct tctggcggtg gaggcagcgg tgggggtggg 1980
tctggaggcg gtggcagtgg cggcggaggc tctgatattc agatgactca gtctcctagc 2040
actctcagcg ccagcgtggg ggatcgtgtg acaatgactt gctccgctag cagtagtgtg 2100
tcttacatga attggtatca gcagaagccc gggaaagcac ctaagcgctg gatctatgac 2160
tcttccaagc tggcaagtgg tgtcccctca cggttctctg gctcaggttc tggtactgac 2220
tatactttga ctatctcctc cctccagccc gatgatttcg ctacctatta ttgtcagcag 2280
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<210> 310
<211> 759
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI129
<400> 310
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Glu Lys Leu Arg Tyr Phe Asp Trp Leu Ser Asp Ala Phe Asp
100 105 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
145 150 155 160
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser His Ser Val Leu Tyr Ser
165 170 175
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
180 185 190
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
195 200 205
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
210 215 220
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
225 230 235 240
Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
245 250 255
Ile Lys Ser Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
260 265 270
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu
275 280 285
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
290 295 300
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
305 310 315 320
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
325 330 335
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
340 345 350
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala
355 360 365
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
370 375 380
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
385 390 395 400
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
405 410 415
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
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Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
435 440 445
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
450 455 460
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
465 470 475 480
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ser Gly Gly Gly
485 490 495
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ser Gln Val
500 505 510
Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val
515 520 525
Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Ser Thr Met
530 535 540
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr
545 550 555 560
Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp
565 570 575
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
580 585 590
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
595 600 605
Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
610 615 620
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
625 630 635 640
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
645 650 655
Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Met
660 665 670
Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln
675 680 685
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Ser Ser Lys Leu
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Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
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Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr
725 730 735
Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr
740 745 750
Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser
755
<210> 311
<211> 2334
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI130
<400> 311
atggaagcac cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccggt 60
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cctccgacca ctttcggcgg agggaccaag gtggagatca aaggtggagg cggttcaggc 420
ggaggtggat ccggcggtgg cggctccggt ggcggcggat ctgaggtgca gctgttggag 480
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ggggtctcag ctattagtgg tagtggtggt agcacatact acgcagactc cgtgaagggc 660
cggttcacca tctccagaga caattccaag aacacgctgt atctgcaaat gaacagcctg 720
agagccgagg acacggccgt atattactgt gcgaaagaaa agttacgata ttttgactgg 780
ttatccgatg cttttgatat ctggggccaa gggacaatgg tcaccgtctc ctcgagtgag 840
cccaaatctt ctgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgcgggt 900
gcaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 960
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 1020
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 1080
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<210> 312
<211> 757
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI130
<400> 312
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
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Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
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195 200 205
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Leu Ser Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val
245 250 255
Ser Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
260 265 270
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
275 280 285
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Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
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Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser
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Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
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<210> 313
<211> 2313
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI123
<400> 313
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ggcggtacca aagtggagat caagaggtca taa 2313
<210> 314
<211> 750
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI123
<400> 314
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
210 215 220
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe
225 230 235 240
Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ser Glu Pro Lys Ser
245 250 255
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
260 265 270
Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
275 280 285
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
290 295 300
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305 310 315 320
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
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Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
340 345 350
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370 375 380
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405 410 415
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
420 425 430
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
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Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
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<210> 315
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI124
<400> 315
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<213> Artificial Sequence
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<400> 316
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> humanized bispecific construct TRI139
<400> 317
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 318
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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145 150 155 160
Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln
165 170 175
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Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly
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Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
245 250 255
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
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Ser Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
690 695 700
Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp
705 710 715 720
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740 745
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<211> 2313
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI137
<400> 319
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aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 660
ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg 720
caacctgaag attttgcaac ttactactgt caacagagtt acagtacccc tctcactttc 780
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cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa gccgcgggtg caccgtcagt cttcctcttc 900
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 960
gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 1020
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 1080
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggaatacaa gtgcgcggtc 1140
tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1200
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agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat ccaagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1320
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ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1440
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1500
tctccgggtt ccggaggagg gggttcaggt gggggaggtt ctggcggcgg gggaagccct 1560
tcacaggtgc aactggtgca gagtggaccc gaggttaaaa aaccagggtc ctccgttaag 1620
gttagctgca aagcctctgg ctacacattt tccaggagta caatgcactg ggtgaggcag 1680
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tacaaccaaa agtttaagga ccgagttacc attaccgctg acaaatccac cagtacagct 1800
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<210> 320
<211> 750
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI137
<400> 320
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1 5 10 15
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Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe
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Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ser Glu Pro Lys Ser
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405 410 415
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645 650 655
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<213> Artificial Sequence
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<400> 321
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<213> Artificial Sequence
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ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1500
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI127
<400> 326
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1 5 10 15
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
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130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
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Val Ile Ser Ala Asn Ser Ala Gly Leu Gly His Ala Asp Ser Val Lys
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Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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<213> Artificial Sequence
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595 600 605
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Arg Ser
<210> 329
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<213> Artificial Sequence
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<211> 747
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> humanized bispecific construct TRI132
<400> 330
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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145 150 155 160
Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser
180 185 190
Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
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Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly
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Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
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Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro
260 265 270
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Thr Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305 310 315 320
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340 345 350
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370 375 380
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ser
485 490 495
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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545 550 555 560
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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610 615 620
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625 630 635 640
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645 650 655
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660 665 670
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675 680 685
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725 730 735
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 337
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65 70 75 80
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130 135 140
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260 265 270
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305 310 315 320
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<220>
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Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
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<220>
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Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Lys Trp Val Arg
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180 185 190
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Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
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Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu
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Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala
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290
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRI168 - dual-affinity re-targeting molecule chain 2
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145 150 155 160
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
165 170 175
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180 185 190
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
195 200 205
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
210 215 220
Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala
245 250 255
Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys
260 265 270
Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Ser Ser Ser Leu Asn Asp Ile Phe
275 280 285
Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp
290 295 300
Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris-7 variable light chain sequence
<400> 341
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<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris-7 variable heavy chain sequence
<400> 342
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20 25 30
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<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 343
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Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 variable heavy chain sequence
<400> 344
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 345
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VH CDR1 (Kabat)
<400> 345
Arg Ser Thr Met His
1 5
<210> 346
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VH CDR2 (Kabat)
<400> 346
Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
<210> 347
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VH CDR3 (Kabat)
<400> 347
Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr
1 5 10
<210> 348
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VL CDR1 (Kabat)
<400> 348
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 349
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VL CDR2 (Kabat)
<400> 349
Asp Ser Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 350
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VL CDR3 (Kabat)
<400> 350
Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 351
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VH CDR1 (IMGT)
<400> 351
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Ser Thr
1 5
<210> 352
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VH CDR2 (IMGT)
<400> 352
Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr
1 5
<210> 353
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VH CDR3 (IMGT)
<400> 353
Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 354
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VL CDR1 (IMGT)
<400> 354
Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 355
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VL CDR2 (IMGT)
<400> 355
Asp Ser Ser
1
<210> 356
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Cris7 and DRA222 VL CDR3 (IMGT)
<400> 356
Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 357
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VH CDR1 (Kabat)
<400> 357
Lys Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 358
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VH CDR2 (Kabat)
<400> 358
Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Asp
<210> 359
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VH CDR3 (Kabat)
<400> 359
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr
1 5 10
<210> 360
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VL CDR1 (Kabat)
<400> 360
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn
1 5 10
<210> 361
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VL CDR2 (Kabat)
<400> 361
Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro
1 5
<210> 362
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VL CDR3 (Kabat)
<400> 362
Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
1 5
<210> 363
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VH CDR1 (IMGT)
<400> 363
Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala
1 5
<210> 364
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VH CDR2 (IMGT)
<400> 364
Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
1 5 10
<210> 365
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VH CDR3 (IMGT)
<400> 365
Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 366
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VL CDR1 (IMGT)
<400> 366
Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr
1 5
<210> 367
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VL CDR2 (IMGT)
<400> 367
Gly Thr Lys
1
<210> 368
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> I2C VL CDR3 (IMGT)
<400> 368
Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
1 5
<210> 369
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VH CDR1 (Kabat)
<400> 369
Ser Tyr Thr Met His
1 5
<210> 370
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VH CDR2 (Kabat)
<400> 370
Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 371
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VH CDR3 (Kabat)
<400> 371
Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 372
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VL CDR1 (Kabat)
<400> 372
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 373
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VL CDR2 (Kabat)
<400> 373
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 374
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VL CDR3 (Kabat)
<400> 374
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 375
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VH CDR1 (IMGT)
<400> 375
Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr Thr
1 5
<210> 376
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VH CDR2 (IMGT)
<400> 376
Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr
1 5
<210> 377
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VH CDR3 (IMGT)
<400> 377
Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 378
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VL CDR1 (IMGT)
<400> 378
Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 379
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VL CDR2 (IMGT)
<400> 379
Asp Thr Ser
1
<210> 380
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HuM291 VL CDR3 (IMGT)
<400> 380
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 381
<211> 251
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TSC455 (anti-CD3) TSC394 F87Y scFv
<400> 381
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln
130 135 140
Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
145 150 155 160
Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Ser Ser
180 185 190
Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly
225 230 235 240
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser Ser Ser
245 250
<210> 382
<211> 251
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TSC456 (anti-CD3) TSC394 E86D F87Y scFv
<400> 382
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln
130 135 140
Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
145 150 155 160
Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Ser Ser
180 185 190
Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly
225 230 235 240
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser Ser Ser
245 250
<210> 383
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TSC455 and TSC456 variable heavy domain
<400> 383
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 384
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TSC455 variable light domain
<400> 384
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Ser Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser
100 105
<210> 385
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TSC456 variable light domain
<400> 385
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Ser Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser
100 105
<210> 386
<211> 247
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DRA222 (anti-CD3) scFv
<400> 386
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Ser
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Asp Ile Gln Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Met Thr
145 150 155 160
Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Ser Ser Lys Leu Ala
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Gln Ile Thr Ser Ser Ser
245
<210> 387
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DRA222 variable heavy domain
<400> 387
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Ser
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 388
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DRA222 variable light domain
<400> 388
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Ser Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Ser
100 105
<210> 389
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-CD3 LCDR3
<400> 389
Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
1 5
Claims (105)
- 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 치료제 단백질의 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서, 석시네이트 및 폴리소르베이트 80을 포함하는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은:
약 1 내지 약 10mM의 석시네이트, 및
약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80
을 포함하는, 조성물. - 제2항에 있어서, 상기 조성물은 약 4mM 내지 약 6mM의 석시네이트를 포함하는, 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 조성물은 약 5mM의 석시네이트를 포함하는, 조성물.
- 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.002%(w/v) 내지 약 0.008%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하는, 조성물.
- 제5항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.004%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하는, 조성물.
- 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 5.0 내지 약 7.0인, 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 6.0인, 조성물.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 상기 치료제 단백질을 포함하는, 조성물.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 적어도 제1 결합 도메인을 포함하는, 조성물.
- 제10항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)인, 조성물.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 적어도 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인을 포함하는, 조성물.
- 제12항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)이고, 상기 제2 결합 도메인은 scFv인, 조성물.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 CD123에 특이적으로 결합하는, 조성물.
- 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 조성물.
- 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로,
(a) 상기 제1 결합 도메인
(b) 힌지 영역;
(c) 면역글로불린 불변 영역; 및
(d) 상기 제2 결합 도메인
을 포함하는, 조성물. - 제16항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 또는 IgD의 면역글로불린 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는, 조성물.
- 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은,
(i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및
(ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)
을 포함하는, 조성물. - 제18항에 있어서, 상기 HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 11을 포함하며, 상기 HDCR3은 서열번호 12를 포함하는, 조성물.
- 제18항에 있어서, 상기 LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 15를 포함하는, 조성물.
- 제18항에 있어서,
상기 HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 11을 포함하고, 상기 HDCR3은 서열번호 12를 포함하며;
상기 LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 15를 포함하는, 조성물. - 제12항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열번호 18에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 조성물.
- 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은:
(i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및
(ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)
을 포함하는, 조성물. - 제23항에 있어서, 상기 HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 20을 포함하며, 상기 HDCR3은 서열번호 21을 포함하는, 조성물.
- 제23항에 있어서, 상기 LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 24를 포함하는, 조성물.
- 제23항에 있어서,
상기 HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 20을 포함하며, 상기 HDCR3은 서열번호 21을 포함하고; 그리고
상기 LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 24를 포함하는, 조성물. - 제12항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 서열번호 27에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는, 조성물.
- 제12항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 서열번호 31의 서열을 포함하는, 조성물.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로, CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하되,
상기 CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하고,
상기 면역글로불린 Fc 도메인은 Fc 수용체 FcγR, FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIIb에 대한 결합을 방지하거나 유의미하게 감소시키는 둘 이상의 돌연변이를 포함하는 IgG1 Fc 도메인이며,
상기 단량체 IL-10 도메인은 짧은 링커에 의해 분리되는 인간 IL-10의 2개의 서브유닛을 포함하고, 그리고
상기 치료제 단백질은 동형이량체인, 조성물. - 제29항에 있어서, 상기 CD86 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (2) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 조성물.
- 제30항에 있어서, 상기 HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1이고, 상기 HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2이며, 상기 HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3이고, 상기 LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4이며, 상기 LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5이고, 상기 LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6인, 조성물.
- 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD86 결합 도메인은 서열번호 7에 대해 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 및 서열번호 8에 대해 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄를 포함하는, 조성물.
- 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD86 결합 도메인은 서열번호 9에 대해 적어도 약 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 조성물.
- 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 조성물.
- 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 서열번호 30 또는 서열번호 30에 대해 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 조성물.
- 제9항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질의 농도는 약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖인, 조성물.
- 제36항에 있어서, 상기 치료제 단백질의 농도는 약 0.01, 약 0.02, 약 0.03, 약 0.04, 약 0.05, 약 0.06, 약 0.07, 약 0.08 또는 약 0.09㎍/㎖인, 조성물.
- 제36항에 있어서, 상기 치료제 단백질의 농도는 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8 또는 약 0.9㎍/㎖인, 조성물.
- 제36항에 있어서, 상기 치료제 단백질의 농도는 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9 또는 약 2.0㎍/㎖인, 조성물.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 물에서 약 5mM의 석시네이트 및 약 0.0004%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하되, 상기 조성물의 pH는 약 6.0이고, 상기 조성물은 주사용으로 제형화되는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 약 25 내지 약 150mM의 석시네이트 및 약 0.01% 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 조성물.
- 제41항에 있어서, 상기 조성물은 10× 내지 50× 농도인, 조성물.
- 제42항에 있어서, 상기 조성물은 20× 농도인, 조성물.
- 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 75mM 내지 약 125mM의 석시네이트를 포함하는, 조성물.
- 제44항에 있어서, 상기 조성물은 약 100mM의 석시네이트를 포함하는, 조성물.
- 제41항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.05%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 조성물.
- 제46항에 있어서, 상기 조성물은 약 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하는, 조성물.
- 제41항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 5.0 내지 약 7.0인, 조성물.
- 제48항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 6.0인, 조성물.
- 제41항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 물에서 약 100mM의 석시네이트 및 약 0.08%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하되, 상기 조성물의 pH는 약 6.0이고, 상기 조성물은 주사용으로 제형화되는, 조성물.
- 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서,
약 100mM 석시네이트;
약 0.08%(w/v) 폴리소르베이트 80; 및
약 치료적 유효량의 치료제 단백질
을 포함하는 조성물. - 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서,
약 1 내지 약 10mM의 석시네이트;
약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80; 및
약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질
을 포함하되,
상기 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로
(a) 제1 표적에 특이적으로 결합하는 제1 결합 도메인;
(b) 힌지 영역;
(c) 면역글로불린 불변 영역; 및
(d) 제2 표적에 특이적으로 결합하는 제2 결합 도메인
을 포함하는, 조성물. - 제52항에 있어서, 상기 제1 표적은 CD86인, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 제1 표적은 CD123인, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 제2 표적은 IL-10의 수용체인, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 제2 표적은 CD3ε인, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 제1 표적은 CD86이고, 상기 제2 표적은 IL-10의 수용체인, 조성물.
- 제52항에 있어서, 상기 제1 표적은 CD123이고, 상기 제2 표적은 CD3ε인, 조성물.
- 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서,
약 1 내지 약 10mM의 석시네이트,
약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80; 및
약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질
을 포함하되,
상기 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로
(a) 제1 결합 도메인;
(b) 힌지 영역;
(c) 면역글로불린 불변 영역; 및
(d) 제2 결합 도메인
을 포함하고,
상기 제1 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고; 상기 HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 11을 포함하고, 상기 HDCR3은 서열번호 12를 포함하며; 상기 LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 15를 포함하며;
상기 제2 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고; 상기 HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 20을 포함하고, 상기 HDCR3은 서열번호 21을 포함하며; 상기 LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 24를 포함하는 조성물. - 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서,
약 1 내지 약 10mM의 석시네이트;
약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80; 및
약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질
을 포함하되,
상기 치료 단백질은 서열번호 31의 서열을 포함하는, 조성물. - 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서,
약 1 내지 약 10mM의 석시네이트;
약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80; 및
약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질
을 포함하되,
상기 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로, CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하며,
상기 CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하고,
상기 면역글로불린 Fc 도메인은 Fc 수용체 FcγR, FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIIb에 대한 결합을 방지하거나 유의미하게 감소시키는 둘 이상의 돌연변이를 포함하는 IgG1 Fc 도메인이며,
상기 단량체 IL-10 도메인은 짧은 링커에 의해 분리되는 인간 IL-10의 2개의 서브유닛을 포함하고, 그리고
상기 치료제 단백질은 동형이량체인, 조성물. - 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서,
약 1 내지 약 10mM의 석시네이트;
약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80; 및
약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질
을 포함하되,
상기 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고;
상기 CD86 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (2) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 상기 HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1이고, 상기 HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2이며, 상기 HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3이고, 상기 LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4이며, 상기 LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5이고, 상기 LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6이고;
상기 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28의 아미노산 서열을 갖는, 조성물. - 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서,
약 1 내지 약 10mM의 석시네이트;
약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80; 및
약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질
을 포함하되,
상기 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하고;
상기 CD86 결합 도메인은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
상기 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 조성물. - 정맥내 약물 전달 시스템의 하나 이상의 성분에 대한 단백질 흡착을 감소시키기 위한 조성물로서,
약 1 내지 약 10mM의 석시네이트;
약 0.001%(w/v) 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80; 및
약 0.01㎍/㎖ 내지 약 2.0㎍/㎖의 치료제 단백질
을 포함하되,
상기 치료 단백질은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는, 조성물. - 치료제 단백질의 보유에 적합한 용기로서, 상기 용기의 내면은 상기 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉되기 전에, 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 조성물과 처음 접촉되는, 용기.
- 제65항에 있어서, 상기 용기는 라텍스가 실질적으로 없는, 용기.
- 제65항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용기는 비스(2-에틸헥실) 프탈레이트(DEHP)가 실질적으로 없는, 용기.
- 제65항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용기는 IV 백(IV bag), 주사기 및 관으로 이루어진 군으로부터 선택된, 용기.
- 치료제 단백질의 전달을 위한 정맥내 약물 전달 시스템의 제조 방법으로서,
상기 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 제공하는 단계; 및
상기 치료제 단백질이 적어도 하나의 용기에 첨가되기 전에, 상기 적어도 하나의 용기의 내면을 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계
를 포함하는, 방법. - 제69항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 용기의 내면을 코팅하고, 상기 치료제 단백질이 상기 용기의 내면에 결합하는 것을 방지하는, 방법.
- 제69항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 용기는 라텍스가 실질적으로 없는, 방법.
- 제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 용기는 비스(2-에틸헥실) 프탈레이트(DEHP)가 실질적으로 없는, 방법.
- 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 용기는 IV 백, 주사기 및 관으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 치료제 단백질의 정맥내 투여에 의해 대상체를 치료하는 방법으로서,
상기 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 제공하는 단계;
상기 용기의 내면을 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 약 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계;
상기 용기의 내면을 상기 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계; 및
상기 치료제 단백질을 상기 환자에게 정맥내로 투여하는 단계
를 포함하는, 방법. - 제74항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 적어도 제1 결합 도메인을 포함하는, 방법.
- 제75항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)인, 방법.
- 제74항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 적어도 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인을 포함하는, 방법.
- 제77항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)이고, 상기 제2 결합 도메인은 scFv인, 방법.
- 제77항 또는 제78항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 CD123에 특이적으로 결합하는, 방법.
- 제77항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 방법.
- 제77항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은, 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로,
(a) 상기 제1 결합 도메인;
(b) 힌지 영역;
(c) 면역글로불린 불변 영역; 및
(d) 상기 제2 결합 도메인
을 포함하는, 방법. - 제81항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 또는 IgD의 면역글로불린 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는, 방법.
- 제77항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은:
(i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및
(ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)
을 포함하는, 방법. - 제83항에 있어서, 상기 HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 11을 포함하며, 상기HDCR3은 서열번호 12를 포함하는, 방법.
- 제83항에 있어서, 상기 LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 15를 포함하는, 방법.
- 제83항에 있어서,
상기 HCDR1은 서열번호 10을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 11을 포함하며, 상기 HDCR3은 서열번호 12를 포함하고; 그리고
상기 LCDR1은 서열번호 13을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 14를 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 15를 포함하는, 방법. - 제77항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 서열번호 18에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는, 방법.
- 제77항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은:
(i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및
(ii) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)
을 포함하는, 방법. - 제88항에 있어서, 상기 HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 20을 포함하며, 상기 HDCR3은 서열번호 21을 포함하는, 방법.
- 제88항에 있어서, 상기 LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 24를 포함하는, 방법.
- 제88항에 있어서,
상기 HCDR1은 서열번호 19를 포함하고, 상기 HCDR2는 서열번호 20을 포함하며, 상기 HDCR3은 서열번호 21을 포함하고; 그리고
상기 LCDR1은 서열번호 22를 포함하고, 상기 LCDR2는 서열번호 23을 포함하며, 상기 LCDR3은 서열번호 24를 포함하는, 방법. - 제77항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 서열번호 27에 대해 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 방법.
- 제77항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 서열번호 31의 서열을 포함하는, 방법.
- 제77항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 아미노 말단에서 카복실 말단까지의 순서로 CD86 결합 도메인, 면역글로불린 힌지 도메인, 면역글로불린 Fc 도메인 및 단량체 IL-10 도메인을 포함하되,
상기 CD86 결합 도메인은 CD86에 특이적으로 결합하는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하고;
상기 면역글로불린 Fc 도메인은 Fc 수용체 FcγR, FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIIb에 대한 결합을 방지하거나 유의미하게 감소시키는 둘 이상의 돌연변이를 포함하는 IgG1 Fc 도메인이며;
상기 단량체 IL-10 도메인은 짧은 링커에 의해 분리되는 인간 IL-10의 2개의 서브유닛을 포함하고; 그리고
상기 치료제 단백질은 동형이량체인, 방법. - 제94에 있어서, 상기 CD86 결합 도메인은 (i) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(VH); 및 (2) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 방법.
- 제95항에 있어서, 상기 HCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1이고, 상기 HCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 2이며, 상기 HCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 3이고, 상기 LCDR1의 아미노산 서열은 서열번호 4이며, 상기 LCDR2의 아미노산 서열은 서열번호 5이고, 상기 LCDR3의 아미노산 서열은 서열번호 6인, 방법.
- 제94항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD86 결합 도메인은 서열번호 7에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 및 서열번호 8에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄를 포함하는, 조성물.
- 제94항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD86 결합 도메인은 서열번호 9에 대해 적어도 약 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제94항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체 IL-10 도메인은 서열번호 28에 대해 적어도 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제94항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 서열번호 30 또는 서열번호 30에 대해 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제74항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료제 단백질은 정맥내 주입에 의해 투여되는, 방법.
- 제74항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 상기 적어도 하나의 용기의 내면을 코팅하고, 상기 치료제 단백질이 상기 용기의 내면에 결합하는 것을 방지하는, 방법.
- 제74항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 포유류인, 방법.
- 제103항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
- 치료제 단백질을 환자에게 전달하기 위한 약물 전달 시스템으로서,
상기 치료제 단백질을 보유하기에 적합한 적어도 하나의 용기를 포함하되,
상기 적어도 하나의 용기의 내면은, 상기 치료제 단백질을 포함하는 조성물과 접촉되기 전에, 약 1 내지 약 10mM의 석시네이트 및 약 0.001% 내지 0.01%(w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물과 접촉되는, 시스템.
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