KR20220119389A - 분리된 항원 axl 결합 단백질 및 그의 용도 - Google Patents

분리된 항원 axl 결합 단백질 및 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20220119389A
KR20220119389A KR1020227021710A KR20227021710A KR20220119389A KR 20220119389 A KR20220119389 A KR 20220119389A KR 1020227021710 A KR1020227021710 A KR 1020227021710A KR 20227021710 A KR20227021710 A KR 20227021710A KR 20220119389 A KR20220119389 A KR 20220119389A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
binding protein
antigen binding
isolated antigen
ser
seq
Prior art date
Application number
KR1020227021710A
Other languages
English (en)
Inventor
밍 엘브이
샤오란 딩
시웨이 미아오
빈 탄
주공 왕
Original Assignee
섬근 엠에이비 (베이징) 바이오테크 코포레이션, 엘티디.
항저우 섬근 바이오테크 코포레이션, 엘티디.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 섬근 엠에이비 (베이징) 바이오테크 코포레이션, 엘티디., 항저우 섬근 바이오테크 코포레이션, 엘티디. filed Critical 섬근 엠에이비 (베이징) 바이오테크 코포레이션, 엘티디.
Publication of KR20220119389A publication Critical patent/KR20220119389A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G01N2333/91205—Phosphotransferases in general

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

서열번호 1 또는 서열번호 46의 아미노산 서열로 표시되는 VH 내의 하나 이상의 CDR을 포함하고, 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질을 제공한다. 상기 단리된 항원 결합 단백질을 포함하는 면역접합체, 상기 단리된 항원 결합 단백질을 코딩하는 핵산, 상기 단리된 항원 결합 단백질을 포함하는 벡터, 상기 핵산 또는 상기 벡터를 포함하는 세포, 상기 단리된 항원 결합 단백질을 제조하는 방법 및 상기 단리된 항원 결합 단백질의 용도를 더 제공한다.

Description

분리된 항원 AXL 결합 단백질 및 그의 용도
본 발명은 생물의학 분야에 관한 것이며, 구체적으로 단리된 항원 결합 AXL 단백질 및 이의 용도에 관한 것이다.
AXL(수용체 타이로신 키나아제)은 키나아제 Tyro-3 계열의 구성원이며, 리간드 Gas6（항응고인자 단백질 S와 상동성을 갖는 70kDa 단백질）과의 결합을 통해 활성화된다. AXL의 활성화는 Pi-3-키나아제/Akt（Franke등, Oncogene 22：8983-8998, 2003）및 Ras/Erk 및 β-알부민/TCF（Goruppi등, Mol.Cell Biol.21：902-915，2001）와 같은 기타 주요 경로를 통한 신호 전달을 초래한다.
종양 세포에서, AXL은 세포의 침입 및 이동을 조절하는 데 중요한 역할을 한다. AXL의 과발현은 불량한 예후와 관련이 있을 뿐만 아니라, 유방, 결장, 식도암, 간세포, 위, 신경교종, 폐, 흑색종, 골육종, 난소, 전립선, 횡문근육종, 신장, 갑상선 및 자궁내막암에 보고된 다양한 인간 암의 침윤 증가와도 관계가 있다（Linger R.M. Adv. Cancer Res. 2008, 100, 35-83 및 Verma A. Mol. Cancer Ther. (2011). 10, 1763-1773）.
AXL의 치료 가능성에 비추어, 특이적으로 결합되는 AXL 단백질의 항체를 제조해야 한다.
한 측면에서, 본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 46의 아미노산 서열로 표시되는 VH 내의 하나 이상의 CDR을 포함하고, 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질을 제공한다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 하기 중 하나 이상의 특성을 갖는다.
1) 1×10-7M 이하의 KD로 AXL 단백질과 결합할 수 있는 특성,
2) 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질을 특이적으로 인식할 수 있는 특성,
3) 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질에 결합하여 내재화 매개할 수 있는 특성.
특정 실시 양태에서, 상기 AXL 단백질은 인간 AXL 단백질을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 인간 AXL 단백질은 서열번호 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 AXL 단백질은 세포외 도메인을 포함한다
특정 실시 양태에서, 상기 세포외 도메인은 서열번호 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 세포는 종양 세포를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 종양은 AXL 양성 종양을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
특정 실시 양태에서, 상기 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
특정 실시 양태에서, 상기 세포는 인간 세포를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 세포는 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 피부편평세포암종 A431 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포, 인간 췌장암 MIA PaCa-2 세포, 적백혈병 K562 세포, 급성 T세포 백혈병 Jurkat 세포, 인간 유방암 MCF-7 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 인간 유방암 MDA-MB-468 세포, 인간 유방암 SKBR3 세포, 인간 난소암 SKOV3 세포, 림프종 U-937 세포, 림프종 Raji 세포, 인간 골수종 U266 세포, 인간 다발성 골수종 RPMI8226 세포로 구성된 군에서 선택된다.
특정 실시 양태에서, 상기 VH는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 HCDR2는 서열번호 26, 44 및 45 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VL은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VH는 프레임워크 영역 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR1의 C-말단은 상기 HCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR1은 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR1은 서열번호 11, 15 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR2는 상기 HCDR1 및 상기 HCDR2 사이에 위치하고, 상기 H-FR2는 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR3은 상기 HCDR2 및 상기 HCDR3 사이에 위치하고, 상기 H-FR3은 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR4의 N-말단은 상기 HCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 H-FR4는 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VH는 서열번호 3, 5, 42 및 43 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VL은 프레임워크 영역 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR1의 C-말단은 상기 LCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 L-FR1은 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR1은 서열번호 20 및 24 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR2는 상기 LCDR1과 상기 LCDR2 사이에 위치하고, 상기 L-FR2는 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR3은 상기 LCDR2와 상기 LCDR3 사이에 위치하고, 상기 L-FR3은 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR4의 N-말단은 상기 LCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 L-FR4는 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 VL은 서열번호 4 및 6 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역으로부터 유래한다.
특정 실시 양태에서, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역으로부터 유래한다.
특정 실시 양태에서, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 서열번호 33 및 41 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 인간 Igκ 불변 영역을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 서열번호 35 및 37 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄를 포함하고, 상기 항체 경쇄는 서열번호 36 및 38 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 항체는 단일클론 항체, 단일사슬 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체, 인간화 항체, 완전 인간 항체로 구성된 군에서 선택된다.
특정 실시 양태에서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab)2, Fv, F(ab’)2, scFv, di-scFv 및 dAb 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 포함하는 면역결합체를 제공한다.
특정 실시 양태에서, 상기 면역접합체는 화학요법제, 방사성 원소, 세포증식억제제, 세포독성제로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 다른 제제를 더 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 링커 분자를 통해 상기 다른 제제와 연결된다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질 및 다른 제제는 각각 상기 링커 분자에 공유결합된다.
특정 실시 양태에서, 상기 다른 제제는 메이탄신 또는 이의 유도체를 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 메이탄신 유도체는 메이탄신 유도체 DM1을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 단리된 항원 결합 단백질을 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 핵산 분자 또는 상기 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 면역접합체, 상기 핵산 분자, 상기 벡터 및/또는 상기 세포, 및 임의로 제약상 허용되는 보조제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 단리된 항원 결합 단백질이 발현되는 조건 하에 상기 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 면역접합체, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포 및/또는 상기 약학적 조성물의 약제 제조 중의 용도를 제공하며, 상기 약제는 종양의 예방, 완화 및/또는 치료에 사용된다.
특정 실시 양태에서, 상기 종양은 AXL 양성 종양을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 상기 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
특정 실시 양태에서, 상기 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 진단제 제조에 있어서 상기 단리된 항원 결합 단백질의 용도를 제공하며, 상기 진단제는 AXL 단백질의 발현과 관련되는 질병 또는 질환의 진단에 사용된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체 중에 AXL 단백질의 발현과 관련되는 질병 또는 질환을 진단하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 대상체 유래 샘플을 상기 단리된 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계, 및 상기 샘플 내 단리된 항원 결합 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 물질의 존재 및/또는 함량을 판단하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 샘플에서 AXL을 검출하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 단리된 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함한다.
당업자는 하기 상세한 설명을 통해 본 발명의 기타 측면 및 이점을 용이하게 통찰할 수 있다. 하기의 상세한 설명에는 본 발명의 예시적 실시 양태만 도시 및 설명된다. 당업자가 인식하는 바와 같이, 본 발명의 내용은 본 발명과 관련된 발명의 정신 및 범위를 벗어나 당업자가 개시된 구체적 실시 양태를 변경할 수 없게 한다. 따라서, 본 발명의 도면 및 명세서의 설명은 예시적일 뿐 제한적인 것이 아니다.
본 발명과 관련된 구체적 특징은 청구 범위에 설명된 바와 같다. 하기의 상세한 예시적 실시 양태 및 도면을 통해 본 발명과 관련된 특징 및 이점을 보다 잘 이해할 수 있다. 도면에 대한 간략한 설명은 다음과 같다.
도 1은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 항원 결합 능력,
도 2는 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M11과 상이한 표적 항원의 결합,
도 3은 본 벌명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M21과 상이한 표적 항원의 결합,
도 4는 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M31과 상이한 표적 항원의 결합,
도 5는 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M41과 상이한 표적 항원의 결합,
도 6은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M11, 6G12M21과 A549 세포 표면 항원의 결합,
도 7은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M11, 6G12M21과 MDA-MB-231 세포 표면 항원의 결합,
도 8은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M11, 6G12M21과 786-O 세포 표면 항원의 결합,
도 9는 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M21, 6G12M31, 6G12M41과 MDA-MB-231 세포 표면 항원의 결합,
도 10은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M21, 6G12M31, 6G12M41과 786-O 세포 표면 항원의 결합,
도 11은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M11, 6G12M21의 A549 세포에 대한 내재화 효율,
도 12는 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M11, 6G12M21의 MDA-MB-231 세포에 대한 내재화 효율,
도 13은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M11, 6G12M21의 786-O 세포에 대한 내재화 효율,
도 14는 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M21, 6G12M31, 6G12M41의 MDA-MB-231 세포에 대한 내재화 효율,
도 15는 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 6G12M21, 6G12M31, 6G12M41의 786-O 세포에 대한 내재화 효율,
도 16은 본 발명의 상기 면역접합체의 MDA-MB-231에 대한 억제 곡선,
도 17은 본 발명의 상기 면역접합체의 투여 후 종양(인간 유방암 MDA-MB-231)의 부피 변화 추이도,
도 18은 본 발명의 상기 면역접합체 투여 후 마우스의 체중 변화 추이도이다.
본 발명의 실시 양태는 특정한 구체적 실시예를 통해 하기에서 설명되며, 통상의 지식을 가진 자라면 본 명세서에 개시된 내용을 통해 본 발명의 기타 이점 및 효과를 쉽게 이해할 수 있다.
본 발명은 하기에서 더 상세하게 설명된다. 본 발명에서 별도의 설명이 없는 한, 본 명세서에서 사용되는 과학 및 기술용어는 당업자들이 통상적으로 이해하는 의미를 갖는다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 단백질 및 핵산 화학, 분자 생물학, 세포 및 조직 배양, 미생물학, 면역학 관련 용어 및 실험실 실험 단계는 모두 해당 분야에서 널리 사용되는 용어 및 일반적 절차이다. 동시에, 본 발명의 보다 나은 이해를 위해, 관련 용어의 정의 및 해석은 하기와 같다.
본 발명에서, 용어 “단리된”은 통상적으로 자연 상태에서 인공적인 수단을 거쳐 얻는 것을 말한다. 자연계에서 특정 “단리”된 물질 또는 성분이 나타나는 경우, 그 자연 환경에 변화가 발생했거나, 또는 자연 환경에서 그 물질이 단리되였거나, 또는 두 상황이 동시에 발생했을 수 있다. 예를 들어, 어떤 살아있는 동물 체내에는 어떤 단리되지 않은 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드가 자연적으로 존재하며, 이러한 자연 상태에서 단리된 고순도의 상동성을 지닌 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 단리라고 한다. 용어 “단리된”은 인공 또는 합성 물질의 혼합을 배제하지 않고, 물질 활성에 영향을 미치지 않는 기타 불순물의 존재도 배제하지 않는다.
본 발명에서, 용어 “단리된 항원 결합 단백질”은 통상적으로 자연 상태에서 인공적인 수단을 거쳐 얻는 항원 결합 능력을 가진 단백질을 말한다. 그 “단리된 항원 결합 단백질”은 항원 결합 부분 및 선택성을 포함할 수 있고, 항원 결합 부분은 상기 항원 결합 부분의 항원 결합을 촉진하는 배열의 스캐폴드 또는 프레임워크 부분의 채택을 허용한다. 항원 결합 단백질은 항체 유래의 단백질 스캐폴드 또는 이식된 CDR 또는 CDR 유도체를 갖는 대체 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드를 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드는 예를 들어 항원 결합 단백질의 3차원 구조를 안정시키기 위해 도입된 돌연변이를 포함하는 항체 유래 스캐폴드 및 예를 들어 생체 적합성 폴리머를 포함하는 완전 합성 스캐폴드를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 예를 들어, Korndorfer 등, 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 53(1):121-129(2003); Roque 등, Biotechnol. Prog. 20:639-654(2004)를 참조한다. 또한, 펩티드 항체 모방체(“PAMs”) 및 피브로넥틴(Fibronectin) 성분을 이용하는 항체 모방체 기반의 스캐폴드는 스캐폴드로 사용될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “KD”（마찬가지로, “K D ” 또는 “Kd”）는 통상적으로 “친화 상수” 또는 “평형 해리 상수”를 의미하고, 적정 측정에서 평형 시, 또는 해리 속도 상수（kd）에서 결합 속도 상수（ka）를 나누어 얻은 값을 말한다. 결합 속도 상수（ka）, 해리 속도 상수（kd）, 평형 해리 상수（KD）를 사용해 결합 단백질(예를 들어, 본 발명에 개시된 상기 단리된 항원 결합 단백질)의 항원(예를 들어, AXL 단백질)에 대한 결합 친화도를 표시한다. 결합 및 해리 속도 상수의 결정 방법은 당업계에 널리 알려져 있다. 형광 기반 기술은 고감도 및 생리 완충액에서 평형 시 샘플의 검사 능력을 제공한다. 예를 들어, Octet를 통해 상기 K D 값을 측정할 수 있고, 기타 실험적 접근 및 BIAcore（생체분자 상호작용 분석）와 같은 기기를 통해서도 측정할 수 있다(예를 들어, BIAcoreInternationalAB, aGEHealthcarecompany, Uppsala, 스웨덴에서 획득 가능한 기기）. 또한, SapidyneInstruments（Boise，Idaho）에서 획득 가능한 KinExA（동역학적 배제 분석（KineticExclusionAssay））을 사용해 상기 K D 값을 측정하거나, 또는 표면 플라즈몬 공명（SPR）을 사용해 상기 K D 값을 측정할 수도 있다.
본 발명에서, 용어 “EC50” 또는 “EC50”은 반수 유효 농도라고도 하며, 일반적으로 최대 효과의 50%를 일으키는 항체 농도를 말한다.
본 발명에서, 용어 “AXL 단백질”은 통상적으로 axl유전자에 의해 코딩되는 단백질 수용체 타이로신 키나아제를 말한다. AXL(Ark, UFO, Tyro-7)은 키나아제 Tyro-3계열의 구성원이고, 리간드 Gas6(항응고인자 단백질 S와 상동성을 갖는 70-kDa 단백질)과의 결합을 통해 활성화될 수 있다. 일부 암（예를 들어, 폐암, 신장암, 유방암）의 세포에서, AXL 단백질의 과발현이 존재할 수 있다. 인간 AXL 단백질은 894개 아미노산의 단백질이며, 그 아미노산 서열은 서열번호 3으로 표시될 수 있다. 여기서 1-26번째 아미노산 잔기는 신호 펩티드이고, 27-451번째는 AXL 단백질의 세포외 도메인이다(그 아미노산 서열은 서열번호 40으로 표시된다).
본 발명에서, 용어 “세포외 도메인”은 통상적으로 세포 외부에 위치하는 폴리펩티드 또는 단백질 도메인을 말한다. 예를 들어, 상기 세포외 도메인은 AXL 단백질의 세포외 도메인일 수 있고, 그 아미노산 서열은 서열번호 40으로 표시될 수 있다. AXL 단백질의 세포외 도메인은 세포 접착 분자에 접근하는 데 필요한 구조를 가질 수 있다. 상기 AXL 단백질의 세포외 도메인은 Gas6 리간드에 결합할 수 있는 두 개의 면역글로불린 유사 도메인의 조합물일 수 있다（Sasaki T 등, EMBO J.(2006).25,80-87）.
본 발명에서, 용어 “특이적 결합” 또는 “특이성”은 통상적으로 표적과 항체 간의 결합이 분자(생체 분자 포함)의 이종 집단에 존재하는 상황에서 표적의 존재를 결정할 수 있는 것처럼 측정 가능하고 재현 가능한 상호 작용을 말한다. 예를 들어, 특이적으로 결합되는 표적(에피토프일 수 있다) 항체는 다른 표적물에 결합하는 것보다 더 높은 친화성, 친화력, 용이성, 및/또는 더 큰 지속 시간으로 그 표적에 결합되는 항체이다. 한 실시 양태에서, 항체가 관련 없는 표적에 결합되는 정도는 방사 면역 측정 분석(RIA)을 통해 측정한 바와 같이 표적에 대한 항체 결합의 약 10% 미만이다. 예를 들어, 본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 <1x10-7M 미만의 해리 상수(KD)로 AXL 단백질에 결합될 수 있다. 특정 실시방안에서, 항체는 단백질의 에피토프에 특이적으로 결합하는데, 상기 에피토프는 상이한 종의 단백질 중에서 보존적이다. 또 다른 실시방안에서, 특이적 결합은 배타적 결합을 포함할 수 있으나 요구되지는 않는다.
본 발명에서, 용어 “내재화”는 통상적으로 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 폴리펩티드가 세포 표면 수용체와 특이적으로 결합하여 수용체-항체 복합체를 형성한 후, 그 수용체가 매개하는 세포내 이입을 통해 세포 내로 이입되는 과정을 말한다. 이때 이러한 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 Fab단편)은 내재화 항체가 될 수 있다. 상기 내재화 항체는 약제, 효소 또는 DNA를 정향 운반하는 벡터로 사용될 수 있다. 특정한 상황에서, 상기 내재화는 종양 세포의 증식을 억제할 수 있다. 예를 들어, 상기 내재화 항체는 항종양의 화학요법제, 방사성 원소, 세포증식억제제, 세포독성제에 결합되어 종양 생물요법의 후보군으로 사용될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “종양”은 통상적으로 비정상 세포의 성장에 의해 형성된 신생물 또는 고형 병변을 말한다. 본 발명에서, 종양은 고형 종양 또는 혈액 종양일 수 있다. 예를 들어, 본 발명에서, 종양은 AXL 양성 종양일 수 있으며, 여기서 상기 AXL 양성 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 AXL 양성 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “가변 도메인”은 통상적으로 항체 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 말한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 “VH” 및 “VL”（또는 각각 “VH” 및 “VL로）로 칭할 수 있다. 이러한 도메인은 일반적으로 항체의 변화가 가장 큰 부분(동일 유형의 기타 항체에 비해)이고, 항원 결합 부위를 포함한다.
본 발명에서, 용어 “가변”은 통상적으로 항체 사이 가변 도메인의 특정 영역이 서열상 큰 차이가 있다는 사실을 말한다. V 도메인은 항원 결합을 매개하고 그 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 결정한다. 그러나, 가변성은 전체 가변 도메인 범위 내에 고르게 분포되지 않는다. 오히려, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 중 고변이 영역(CDR 또는 HVR)이라고 하는 3개 구간에 집중된다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존적인 부위를 프레임워크 영역(FR)이라 한다. 자연적 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR 영역을 포함하며, 대부분은 β-병풍 구조를 사용하고, 3개 CDR을 통해 연결되어 환형의 연결을 형성하며, 일부 경우에는 β-병풍 구조의 일부를 형성한다. 각 사슬 중의 CDR은 FR 영역을 통해 밀착되게 유지되고, 다른 사슬부터의 CDR은 항체의 항원 결합 부위 형성을 공동으로 촉진한다(Kabat et al, Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991) 참조). 불변 도메인은 항체와 항원의 결합에 직접 참여하지는 않지만, 항체가 항체 의존성 세포 독성에 참여하는 것처럼 다양한 이펙터 기능을 나타낸다.
본 발명에서, 용어 “항체”는 통상적으로 면역글로불린 또는 이의 단편 또는 이의 유도체를 말하고, 체외나 체내에서 생성되는 것에 상관 없이 항원 결합 부위를 포함하는 모든 폴리펩티드를 포괄한다. 그 용어는 다중클론, 단일클론, 단일 특이적, 다중 특이적, 비특이적, 인간화, 단일사슬, 키메라, 합성, 재조합, 하이브리드, 돌연변이체 및 이식된 항체를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 용어 “완전한”에 의해 별도로 변형되지 않는 한, “완전한 항체”에서, 본 발명의 목적을 위해, 용어 “항체”는 Fab, F(ab')2, Fv, scFv, Fd, dAb 및 항원 결합을 유지하는 기능(예를 들어, AXL에 특이적 결합)의 기타 항체 단편과 같은 항체 단편도 포함한다. 통상적으로, 이러한 단편은 반드시 항원 결합 도메인을 포함해야 한다. 기본 4사슬 항체 단위는 두 개의 동일한 경(L)쇄 및 두 개의 동일한 중(H)쇄로 구성되는 이종 사량체 당 단백질이다. IgM 항체는 5개의 기본 이종 사량체 단위와 J사슬로 불리는 또 다른 폴리펩티드로 구성되고, 10개의 항원 결합 부위를 포함하며, IgA 항체는 J사슬과 결합한 후 다가 결합을 형성할 수 있는 2-5개의 기본 4사슬 단위를 포함한다. IgG의 경우, 4사슬 단위는 일반적으로 약150,000달톤이다. 각 L사슬은 하나의 공유 이황화 결합을 통해 H사슬과 연결되고, 두 개의 H사슬은 H사슬 동종형에 따라 결정되는 하나 이상의 이황화 결합을 통해 서로 연결된다. 각 H 및 L사슬은 규칙적인 간격을 둔 사슬 내 이황화 다리를 더 갖는다. 각 H 사슬은 N-말단에서 가변 도메인(VH)을 가지며, α 및 γ사슬에 대해서는 각각 세 개의 불변 도메인(CH)이 이어지고, μ 및 ε의 동종형에 대해서는 네 개의 CH 도메인이 이어진다. 각 L사슬은 N-말단에서 가변 도메인(VL)을 가지며, 타단은 불변 도메인을 갖는다. VL은 VH에 해당되고, CL은 중쇄의 첫 번째 불변 도메인(CH1)에 해당된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인 사이에 경계면을 형성하는 것으로 여겨진다. VH와 VL은 짝을 이루어 단일 항원 결합 부위를 형성한다. 상이한 유형의 항체 구조 및 특성의 경우는 Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, Conn., 1994의 제71페이지 및 제6장을 참조한다. 모든 척추동물 종에서 유래한 L사슬은 그 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 κ와 λ라고 하는 분명하게 상이한 두 가지 유형 중의 하나로 분류될 수 있다. 그 중쇄（CH) 불변 도메인에 따른 아미노산 서열은 면역글로불린을 상이한 유형 또는 동종형으로 나눌 수 있다. 면역글로불린은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ의 중쇄로 명명되는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5가지 유형이 있다. CH서열 및 기능 방면의 상대적으로 작은 차이에 기반하여, γ 및 α 유형은 추가적으로 서브클래스로 나누어지며, 예를 들어, 인간은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgK1의 서브클래스를 발현한다.
본 발명에서, 용어 “CDR”은 통상적으로 그 서열이 매우 가변적이고 및/또는 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체의 가변 도메인 영역을 말한다. 통상적으로, 항체는 VH 중에 3개(HCDR1, HCDR2, HCDR3), VL 중에 3개(LCDR1, LCDR2, LCDR3)인 6개의 CDR을 포함한다. 천연 항체에서, HCDR3 및 LCDR3은 상기 6개 CDR의 대부분의 다양성을 나타내며, 특히 HCDR3은 항체에 미세 특이성을 부여하는 방면에서 독특한 역할을 하는 것으로 여겨진다. Xu et al, Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003)을 참조한다. 실제로 중쇄만으로 구성된 자연적으로 존재하는 낙타의 항체는 경쇄가 부족한 상황에서 기능이 정상적이고 안정적이다. Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993); Sheriff et al, Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)을 참조한다.
본 발명에서, 용어 “FR”은 통상적으로 프레임워크 영역이라 불리는 항체 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부위를 말한다. 통상적으로, 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR영역 즉, VH 중 4개(H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4), 및 VL 중 4개(L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4)를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 VL은 프레임워크 영역 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 VH는 프레임워크 영역 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함할 수 있다.
본 발명에서, 용어 “항원 결합 단편”은 통상적으로 항원(예를 들어, AXL 단백질)에 특이적으로 결합하는 능력을 갖는 하나 이상의 단편을 말한다. 본 발명에서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab)2, Fv 단편, F(ab’)2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb를 포함할 수 있다.
본 발명에서, 용어 “단일클론 항체” 또는 “단일클론 항체 구성”은 통상적으로 단일 분자로 구성된 항체 분자 제제를 말한다. 단일클론 항체 구성은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화력을 나타낸다.
본 발명에서, 용어 “단일사슬 항체”는 통상적으로 항체 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 분자를 말한다. 예를 들어, 상기 단일사슬 항체는 항체 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 링커 분자（linker）(예를 들어, 링커 펩티드)를 통해 연결되어 형성될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “인간 항체”는 통상적으로 가변 영역의 프레임워크 및 CDR 영역에서 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체를 말한다. 또한, 항체가 불변 영역을 포함하는 경우, 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터도 유래된다 본 발명의 인간 항체는 체외 무작위 돌연변이 또는 점 돌연변이를 통하거나 또는 체내 세포 돌연변이를 통해 도입된 돌연변이와 같이 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 그러나, 용어 “인간 항체”는 인간 프레임워크 서열 중 기타 포유동물 종으로부터 유래된 CDR서열에 삽입된 항체는 포함하지 않는다.
본 발명에서, 용어 “뮤린 항체”는 통상적으로 가변 영역 프레임워크 및 CDR 영역이 마우스 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체를 말한다. 또한, 항체가 불변 영역을 포함하는 경우, 마우스 생식계열 면역글로불린 서열에서도 유래된다. 본 발명의 뮤린 항체는 체외 무작위 돌연변이 또는 점 돌연변이를 통하거나 또는 체내 세포 돌연변이를 통해 도입된 돌연변이와 같이 마우스 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 그러나, 용어 “뮤린 항체”는 마우스 프레임워크 서열 중 기타 포유동물 종으로부터 유래된 CDR 서열에 삽입된 항체는 포함하지 않는다.
본 발명에서, 용어 “키메라 항체”는 통상적으로 비인간 유전 물질과 인간 유전 물질의 조합을 통해 얻는 항체를 말한다. 또는 더 포괄적으로, 키메라 항체는 하나의 종 유전 물질과 다른 종의 유전 물질이 조합된 항체를 말한다.
본 발명에서, 용어 “다중특이적 항체”는 통상적으로 두 개 이상의 항원 또는 에피토프를 동시에 인식할 수 있는 항체 분자를 말한다. 상기 다중특이적 항체는 화학적 커플링 방법, 하이브리드-하이브리도마 방법, 유전자 공학 항체 제조법 등을 통해 진핵생물 발현계 또는 원핵생물 발현계에서 얻을 수 있다.
본 발명에서, 용어 “인간화 항체”는 통상적으로 비인간 종에서 유래하지만 단백질 서열이 변형되어 인간의 자연 발생 항체와의 유사성을 증가시키는 항체를 말한다.
본 발명에서, 용어 “완전 인간 항체”는 통상적으로 완전한 인간 항체를 말한다. 즉, 항체의 불변 영역 및 가변 영역이 모두 인간에서 유래된다. 상기 완전 인간 항체는 파지 항체 라이브러리 기술, 유전자 변형 마우스로 인간화 항체 제조, 리보솜 디스플레이 기술, EBV형질 전환 B세포 복제 기술, 단일 B세포 복제 등 기술을 통해 구현될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “항원 인식 항체” 및 “항원에 특이적인 항체”는 본 명세서에서 용어 “항원에 특이적으로 결합하는 항체”와 번갈아 사용된다.
본 발명에서, 용어 “직접 연결”은 용어 “간접 연결”과 상대적이며, 용어 “직접 연결”은 통상적으로 직접적인 연결을 말한다. 예를 들어, 상기 직접 연결은 물질 간에 인트론 없이 직접 연결되는 경우일 수 있다. 상기 인트론은 코넥손일 수 있다. 예를 들어, 상기 코넥손은 펩티드 코넥손일 수 있다. 용어 “간접 연결”은 통상적으로 물질 사이가 직접적으로 연결되지 않는 상황을 말한다. 예를 들어, 상기 간접 연결은 인트론을 통해 연결되는 상황일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질에서, 상기 L-FR1의 C-말단은 상기 LCDR1의 N-말단과 직접적 또는 간접적으로 연결될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “면역접합체”는 통상적으로 상기 다른 제제(예를 들어, 화학요법제, 방사성 원소, 세포증식억제제, 세포독성제)와 상기 단리된 항원 결합 단백질이 접합하여(예를 들어, 링커 분자를 통한 공유결합） 형성되는 접합체를 말하며, 그 접합체는 상기 단리된 항원 결합 단백질과 표적 세포 상 항원의 특이적으로 결합을 통해, 상기 다른 제제를 표적 세포(예를 들어, 종양 세포)로 전달할 수 있다. 그후 상기 면역접합체는 상기 내재화를 거쳐 최종적으로 표적 세포 내부(예를 들어, 리소좀 등의 소낭체)에 진입하며, 이때 상기 면역접합체 중의 링커 분자는 분해되어, 상기 다른 제제를 방출함에 따라 그 세포 독성 효과를 발휘할 수 있다. 또한, 상기 항원도 상기 표적 세포에 의해 분비되고, 상기 표적 세포 외부의 간극에 위치할 수 있다.
본 발명에서, 용어 “화학요법제”는 통상적으로 종양 및/또는 종양 세포의 증식을 억제할 수 있는 화학요법 제제를 말한다. 상기 화학요법제는 유사분열 억제제, 키나아제 억제제, 알킬화제, 항대사물질, 삽입 항생제, 성장 인자 억제제, 세포 주기 억제제, 효소, 토포이소머라제 억제제, 히스톤 디아세틸레이스 억제제, 항생존제, 생체 응답 조절제, 항안드로겐, 항신생혈관제와 같은 항호르몬으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 화학요법제는 카페시타빈, 다우노루비신, 다우노루비신, 악티노마이신 D, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 에소포루비신 비신, 블레오마이신, 호스포스파미드, 이포스파마이드, 시토신아라비노시드, 카르무스틴, 부설판, 마이토마이신C, 악티노마이신D, 프루카마이신, 프레드니손, 하이드록시프로게스테론, 테스토스테론, 타목시펜, 다카르바진, 프로카바진, 헥사멜라민, 펜타메틸멜라민, 미톡산트론, 아마크리딘, 클로람부실, 메틸 시클로헥실니트로소우레아, 질소 머스타드, 멜팔란, 시클로포스파미드, 6-맬캡톱퓨린, 6-치오구아닌, 시타라빈（CA）, 5-아자시티딘, 히드록시우레아, 펜토스타틴, 4-하이드록시퍼옥시사이클로포스파미드, 5-플루오로우라실(5-FU), 5-플루오로데옥시우리딘(5-FUdR), 메토트렉세이트(MTX), 콜히친, 택솔（taxol）, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포사이드, 트라이메트렉세이트, 테니포사이드 및/또는 디에틸스틸베스트롤(DES)로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “방사성 원소”는 통상적으로 종양 및/또는 종양 세포의 증식을 억제할 수 있는 방사선 치료용 원소를 말한다. 상기 방사성 원소는 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I 및/또는131I로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “세포증식억제제”는 통상적으로 종양 세포의 성장 및 복제를 촉진하는 성장 인자에 대한 억제를 통해 종양을 억제하는 제제를 말한다. 성장 인자는 세포 표면의 수용체와 결합한 후 세포 내의 신호 경로를 활성화하며, 복잡한 경로는 증식에 대한 세포의 통제력 상실을 촉진시킴에 따라, 세포의 과도한 분열을 야기하여 종양으로 발전될 수 있다. 상기 세포증식억제제는 이러한 성장 인자의 작용을 억제할 수 있다. 상기 세포증식억제제는 혈관신생 억제 인자, 데아세틸라제（HDAC）억제 인자, Hedgehog 신호 경로 차단제, mTOR 억제제, p53/mdm2 억제제, PARP 억제제, 프로테아솜 억제제 및/또는 타이로신 키나아제 억제제로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “세포독성제”는 통상적으로 작용하는 세포에 대해 독소를 생성하여, 종양 및/또는 종양 세포의 증식을 억제하는 제제를 말한다. 상기 세포독성제는 부설판, 헥사메틸멜라민, 티아테파, 시클로포스파미드, 클로람부실, 우라무스틴, 멜팔란, 클로람부실, 카르무스틴, 스트렙토조토신, 다카르바진, 테모졸로미드, 이포스파미드 등과 같은 알킬화제, 마이토마이신C 등의 항종양제, 메토트렉세이트, 아자티오프린, 머캅토퓨린, 플루다라빈, 5-플루오로우라실 등과 같은 항대사물질, 시스플라틴, 카보플라틴 등과 같은 백금율 함유하는 항암제, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론 등과 같은 안트라사이클린, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 포도필로톡신, 도세탁셀 등과 같은 식물 알칼로이드 및 테르페노이드, 이리노테칸, 아마크리딘, 토포테칸, 에토포사이드, 테니포사이드 등과 같은 토포이소머라제 억제제, 리툭시맙, 트라스투주맙, 베바시주맙, 에를로티닙, 닥티노마이신 등과 같은 항체류, 피나스테리드 등의 아로마타제 억제제, 타목시펜, 고세렐린, 파클리탁셀 및/또는 이마티닙 메실레이트로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 상기 세포독성제는 경구, 주사 등 방식으로 투여될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “링커 분자”는 통상적으로 두 분자를 연결하거나 연계시키는 기능 분자를 말한다. 예를 들어, 상기 링커 분자는 한 분자를 다른 분자에 연결시킬 수 있다(예를 들어, 한 분자는 단백질 분자이고, 다른 분자도 단백질 분자이거나, 또는 소분자 약제일 수 있다). 상기 링커 분자는 상기 면역접합체의 구성에 사용될 수 있다. 상기 면역접합체에서, 상기 링커 분자는 하기의 두 가지 기능적 특징을 가질 수 있다. 1. 순환계통의 안정성을 가지며, 상기 면역접합체가 표적 세포에 도달하기 전 순환계통에서 분해되어 상기 다른 제제를 방출할 수 없으므로, 독성 작용의 발생을 피할 수 있다. 2. 표적 세포에 진입한 후, 상기 링커 분자는 다른 제제가 효과적으로 방출되어 제약상 활성을 발휘할 수 있도록, 빠르고 효과적으로 방출되어야 한다. 상기 링커 분자는 극성 또는 비극성 아미노산으로 구성될 수 있다. 상기 링커 분자는 헤테로 원자(질소 원자, 황 원자 등)를 포함하는 탄소 사슬일 수도 있다. 상기 링커 분자의 길이는 2 내지 50개 원자 사이와 같은 2-100개 원자일 수 있고, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개 원자일 수도 있다. 또 예를 들어, 상기 링커 분자의 길이는 20-26개(20, 21, 22, 23, 24, 25 또는 26개) 원자일 수도 있다. 상기 링커 분자는 수소 원자, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 트리알킬아미노, 히드록시, 알콕시, 할로겐, 아릴, 헤테로고리, 방향족 헤테로고리, 시아노, 아미드, 카르바모일, 카르복실산, 에스테르, 티오에테르, 알킬 설파이드, 메르캅토 및 우레이도로 구성된 군에서 선택되는 치환기를 포함할 수 있다. 또한, 상기 링커 분자는 pH 민감성 링커 분자, 프로테아제 절단성 링커 분자, 뉴클레아제 민감성 링커 분자, 리파제 민감성 링커 분자, 글로코시다아제 링커 분자, 저산소증 링커 분자, 광 절단성 링커 분자, 열 불안정성 링커 분자 및 초음파 민감성 링커 분자로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에서, 용어 “공유”는 통상적으로 공유결합, 즉, 두 개 이상의 원자에 공유 전자쌍이 존재하고, 전자가 포화 상태에 도달함에 따라 비교적 안정적인 화학 구조를 형성하는 것을 말한다. 공유결합의 형성은 인접한 두 원자 사이 스핀 방향이 반대인 전자의 짝??기이며, 이때 원자 궤도가 서로 겹치고 두 핵 사이의 전자 구름 밀도가 상대적으로 증대됨에 따라, 두 핵에 대한 인력도 증가한다. 공유결합은 포화성 및 방향성을 가질 수 있다. 공유결합은 비극성 공유결합, 극성 공유결합, 배위결합으로 나눌 수 있다. 공유결합만 포함하는 화합물을 공유 화합물이라고 할 수 있다.
본 발명에서, 용어 “메이탄신”은 통상적으로 항유사분열 세포 독소에 속하는 메이테누스 식물로부터 단리되어 얻은(미국 특허 US3896111 참조) 화합물을 말하며, 구조식은 하기와 같다.
Figure pct00001
，
상기 메이탄신의 CAS번호는 35846-53-8이다. 메이탄신은 L-1210, P-388 백혈병, S-180, W-256, 루이스 폐암 및 체외 비인두암과 같은 다양한 종양에 대한 치료 효과가 뚜렷하다. 상기 메이탄신 유도체는 메이탄신 유도체 DM1, DM4와 같이 메이탄신 고리 구조를 갖고 그 고리에 하나 이상의 치환기를 갖는 변형된 화합물을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 용어 “메이탄신 유도체 DM1”은 통상적으로 하기 구조식을 갖는 화합물을 말한다.
Figure pct00002
，
CAS번호는 139504-50-0이다. 상기 메이탄신 유도체 DM1은 항유사분열 세포 독소일 수 있다.
본 발명에서, 용어 “AXL 단백질의 발현과 관련되는 질병 또는 질환”은 통상적으로 AXL 단백질의 발현과 관련이 있거나, 또는 AXL 단백질 발현의 상향 조절로 인해 초래되는 질병 또는 질환을 말한다. 예를 들어, AXL 단백질의 발현과 관련되는 질병 또는 질환은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및/또는 골수종일 수 있다.
본 발명에서, 용어 “단리된 핵산 분자”는 통상적으로 임의의 길이의 단리된 형식의 뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드, 또는 그 자연적인 환경에서 단리되거나 인공적으로 합성된 유사체를 말한다.
본 발명에서, 용어 “벡터”는 통상적으로 어떤 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 삽입시켜 단백질을 발현시킬 수 있는 핵산 운반체를 말한다. 벡터는 숙주 세포의 형질 전환, 형질 도입 또는 형질 감염을 통해, 그 운반하는 유전 물질 요소를 숙주 세포 내에서 발현시켜서 발현시킨다. 예를 들어, 벡터는 플라스미드, 파지미드, 코스미드, 효모 인공 염색체(YAC), 박테리아 인공 염색체(BAC) 또는 P1 유래 인공 염색체(PAC)와 같은 인공 염색체, λ파지 또는 M13 파지 및 동물 바이러스 등과 같은 파지를 포함한다. 벡터로 사용되는 동물 바이러스 종류는 레트로바이러스（렌티바이러스 포함), 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스(예를 들어, 단순 포진 바이러스), 폭스바이러스, 배큘로바이러스, 유두종바이러스, 유두종바이러스 바이러스(예를 들어, SV40)이다. 벡터는 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서 서열, 선택 요소 및 리포터 유전자를 포함하여 발현을 제어하는 다양한 요소를 포함할 수 있다. 또한, 벡터는 복제 기점을 더 포함할 수 있다. 벡터는 바이러스 입자, 리포솜 또는 단백질 외피와 같이 세포로의 진입을 돕는 성분을 더 포함할 수 있지만, 이러한 물질에 국한되지 않는다.
본 발명에서, 용어 “세포”는 통상적으로 본 발명의 상기 핵산 분자 또는 본 발명의 상기 벡터를 포함해 대상체 플라스미드 또는 벡터의 수용체일 수 있거나 수용체이었던 단일 세포, 세포계 또는 세포 배양물을 말한다. 세포는 단일 세포의 자손을 포함할 수 있다. 자연적, 우발적 또는 의도적인 돌연변이로 인해, 자손은 원시의 모세포와 반드시 완전하게 동일하지 않을 수 있다(전체 DNA 보완체의 형태 또는 게놈 상). 세포는 본 발명의 상기 벡터로 체외 형질 감염된 세포를 포함할 수 있다. 세포는 세균 세포(예를 들어, 대장균), COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, CHO-K1 세포, LNCAP 세포, HeLa 세포, HEK293 세포, COS-1 세포, NS0 세포, 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 피부편평세포암종 A431 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포, 인간 췌장암 MIA PaCa-2 세포, 적백혈병 K562세포, 급성 T 세포 백혈병 Jurkat 세포, 인간 유방암 MCF-7 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 인간 유방암 MDA-MB-468 세포, 인간 유방암 SKBR3 세포, 인간 난소암 SKOV3 세포, 림프종 U-937 세포, 림프종 Raji 세포, 인간 골수종 U266 세포 또는 인간 다발성 골수종 RPMI8226 세포와 같은 효모 세포 또는 기타 진핵 세포일 수 있다. 특정 실시 양태에서, 세포는 포유동물 세포이다. 특정 실시 양태에서, 포유동물 세포는 HEK293 세포이다.
본 발명에서, 용어 “약학적 조성물”은 통상적으로 환자, 바람직하게는 인간 환자에게 투여하기 적합한 조성물을 말한다. 예를 들어, 본 발명의 상기 약학적 조성물은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 본 발명의 상기 면역접합체, 본 발명의 핵산 분자, 본 발명의 상기 벡터 및/또는 본 발명의 상기 세포, 및 임의로 제약상 허용되는 보조제를 포함한다. 또한, 상기 약학적 조성물은 하나 이상의(제약상 유효한) 담체, 안정화제, 부형제, 희석제, 가용화제, 계면활성제, 유화제 및/또는 방부제 등의 적절한 제제를 더 포함할 수 있다. 조성물의 허용 가능한 성분은 사용되는 제량 및 농도에서 바람직하게는 수용체에게 무독성이다. 본 발명의 약학적 조성물은 액체, 냉동 및 동결 건조된 조성물을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
본 발명에서, 용어 “제약상 허용되는 보조제”는 통상적으로 약제 투여와 양립될 수 있는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 등장제, 흡수 지연제 등을 말하며, 통상적으로 안전하고 무독성이며, 생물학적으로도 다른 방면에서 적합하지 않은 것도 아니다.
본 발명에서, 용어 “대상체”는 통상적으로 고양이, 개, 말, 돼지. 젖소, 양, 토끼, 마우스, 랫 또는 원숭이를 포함하나 이에 국한되지 않는 인간 또는 비인간 동물을 말한다.
본 발명에서, 용어 “포함”은 통상적으로 명확하게 지정하는 특징을 포함하나, 다른 요소를 배제하지 않는 것을 말한다.
본 발명에서, 용어 “대략”은 통상적으로 지정된 수치 이상 또는 이하에서 0.5%-10% 범위 내의 변동을 말한다. 예를 들어, 지정된 수치 이상 또는 이하에서 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 3.5%, 4%, 4.5%, 5%, 5.5%, 6%, 6.5%, 7%, 7.5%, 8%, 8.5%, 9%, 9.5% 또는 10%의 범위 내로 변동한다.
단리된 항원 결합 단백질
한편, 본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 46의 아미노산 서열로 표시되는 VH 내의 하나 이상의 CDR, 및 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질을 제공한다.
QVQL X1 QSGPGLVKPSQSLSLTC X2 V X3 G X4 SISSGYYWNWIRQ X5 PG X6 X7 LEWMGYRSYDGSNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVT X8 EDTATYYCARGWLLHYTMDYWGQGT X9 VTVSS（서열번호 1）에서, 여기서, X1은 K 또는 V일 수 있고, X2는 S 또는 A일 수 있고, X3은 T 또는 S일 수 있고，X4는 F, Y, D 또는 S일 수 있고, X5는 F 또는 S일 수 있고, X6은 N 또는 Q일 수 있고, X7은 K 또는 G일 수 있고, X8은 T 또는 S일 수 있고, X9는 S 또는 T일 수 있다.
QVQLVQSGPGLVKPSQSLSLTCSVTGFSISSGYYWNWIRQFPGQKLEWMGYRSYDGSNNYX1PSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTSEDTATYYCARGWLLHYTMDYWGQGTTVTVSS（서열번호 46）에서, 여기서, X1은 D 또는 G일 수 있다.
X1 X2 VMTQSP X3 S X4 X5 VTLG X6 SASISCRSSRSLLHSNGFTYLYWY X7 QKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFS X8 SGSGTDFTL X9 ISRVEAEDVGVYYCGQNLELPLTFG X10 GTKLE X11 K（서열번호 2)에서, 여기서, X1은 E 또는 D일 수 있고, X2는 L 또는 I일 수 있고, X3은 F 또는 S일 수 있고, X4는 N 또는 V일 수 있고, X5는 A 또는 S일 수 있고, X6은 T 또는 Q일 수 있고, X7은 L 또는 Q일 수 있고, X8은 S 또는 G일 수 있고, X9는 R 또는 K일 수 있고, X10은 A 또는 G일 수 있고, X11은 L 또는 I일 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 VH는 6G12 항체 VH（서열번호 31) 중 하나 이상 위치에서의 아미노산 돌연변이를 통해 얻을 수 있다. 구체적으로, 6G12 항체 VH의 프레임워크 영역（FR） 중 하나 이상 위치에서의 아미노산 돌연변이를 통해 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 얻을 수 있고, 6G12 항체 VH의 가변 영역（CDR） 중 하나 이상 위치의 아미노산 돌연변이를 통해서도 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 얻을 수 있다. 예를 들어, 6G12 항체 VH 중, N-말단부터 C-말단까지, 5번째 K는 V로 돌연변이될 수 있고, 23번째 S는 A로 돌연변이될 수 있고, 25번째 T는 S로 돌연변이될 수 있고, 27번째 F는 Y, D 또는 S로 돌연변이될 수 있고, 41번째 F는 S로 돌연변이될 수 있고, 44번째 N은 Q로 돌연변이될 수 있고, 45번째 K는 G로 돌연변이될 수 있고, 88번째 T는 S로 돌연변이될 수 있고, 114번째 S는 T로 돌연변이될 수 있다.
예를 들어, 6G12 항체 VH 중, N-말단부터 C-말단까지, 5번째 K는 V로 돌연변이될 수 있고, 23번째 S는 A로 돌연변이될 수 있고, 25번째 T는 S로 돌연변이될 수 있고, 27번째 F는 Y, D 또는 S로 돌연변이될 수 있고, 41번째 F는 S로 돌연변이될 수 있고, 44번째 N은 Q로 돌연변이될 수 있고, 45번째 K는 G로 돌연변이될 수 있고, 61번째 N은 D 또는 G로 돌연변이될 수 있고, 88번째 T는 S로 돌연변이될 수 있고, 114번째 S는 T로 돌연변이될 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 VL은 6G12 항체 VL（서열번호 32) 중 하나 이상 위치에서의 아미노산 돌연변이를 통해 얻을 수 있다. 구체적으로, 6G12 항체 VL의 프레임워크 영역（FR）중 하나 이상 위치의 아미노산 돌연변이를 통해 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 얻을 수 있다.
예를 들어, 6G12 항체 VL 중, N-말단부터 C-말단까지, 1번째 E는 D로 돌연변이될 수 있고, 2번째 L은 I로 돌연변이될 수 있고, 9번째 F는 S로 돌연변이될 수 있고, 11번째 N은 V로 돌연변이될 수 있고, 12번째 A는 S로 돌연변이될 수 있고, 17번째 T는 Q로 돌연변이될 수 있고, 42번째 L은 Q로 돌연변이될 수 있고, 69번째 S는 G로 돌연변이될 수 있고, 79번째 R은 K로 돌연변이될 수 있고, 105번째 A는 G로 돌연변이될 수 있고, 111번째 L은 I로 돌연변이될 수 있다.
상기 단리된 항원 결합 단백질의 성질
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 하기 중 하나 이상의 특성을 가질 수 있다.
1) 1×10-7M 이하의 KD로 AXL 단백질과 결합할 수 있는 특성.
2) 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질을 특이적으로 인식할 수 있는 특성.
3) 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질에 결합하여 내재화 매개할 수 있는 특성.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 1×10-7M 이하의 KD로 AXL 단백질과 결합할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질이 인간 유래 AXL 단백질에 결합하는 KD 값은 ≤1×10-7M, ≤9×10-8M, ≤8×10-8M, ≤7×10-8M, ≤6×10-8M, ≤5×10-8M, ≤4×10-8M, ≤3×10-8M, ≤2×10-8M, ≤1.5×10-8M, ≤1.2×10-8M, ≤1.15×10-8M, ≤1.1×10-8M, ≤1.05×10-8M, ≤1×10-8M, ≤5×10-9M 또는 ≤1×10-9M일 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질이 마우스 유래 AXL 단백질에 결합하는 KD 값은 ≤1×10-7M, ≤9×10-8M, ≤8×10-8M, ≤7×10-8M, ≤6×10-8M, ≤5×10-8M, ≤4×10-8M, ≤3×10-8M, ≤2×10-8M, ≤1.5×10-8M, ≤1.2×10-8M, ≤1.15×10-8M, ≤1.1×10-8M, ≤1.05×10-8M, ≤1×10-8M, ≤5×10-9M 또는 ≤1×10-9M일 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질이 원숭이 유래 AXL 단백질에 결합하는 KD 값은 ≤1×10-7M, ≤9×10-8M, ≤8×10-8M, ≤7×10-8M, ≤6×10-8M, ≤5×10-8M, ≤4×10-8M, ≤3×10-8M, ≤2×10-8M, ≤1.5×10-8M, ≤1.2×10-8M, ≤1.15×10-8M, ≤1.1×10-8M, ≤1.05×10-8M, ≤1×10-8M, ≤5×10-9M 또는 1×10-9M일 수 있다.
본 발명에서, 상기 Kd 값은 또한 ELISA, 경쟁 ELISA 또는 BIACORE 또는 KINEXA을 통해 측정될 수 있다.
본 발명에서, 상기 경쟁적 결합 능력은 상기 단리된 항원 결합 단백질의 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 측정하여 평가될 수 있다. 상기 해리 평형 상수의 측정 방법은 효소 결합 면역 흡착 분석법, 표면 플라즈몬 공명법(SRP), 전위차 적정법, 분광 광도법, 세관 전기영동법, 형광법 및 박층 크로마토그래피 pH법으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 SRP법（예를 들어, 생체 거대분자 상호작용 기기의 사용)을 통해 측정될 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질과 특이적으로 결합할 수 있다. 상기 특이적 결합은 FACS를 통해 측정될 수 있다. 예를 들어, FACS 측정 중 Ec50을 통해 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질이 세포 표면의 AXL 단백질에 특이적으로 결합하는 상황이 반영될 수 있다. 예를 들어, EC50이 낮을수록 특이적 결합이 더 좋음을 나타낸다. 예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질이 FACS 측정에서 비소세포폐암 A549 세포 표면의 AXL 단백질에 결합하는 EC50 값은 0.01μg/ml~0.10μg/ml, 0.01μg/ml~0.15μg/ml, 0.01μg/ml~0.20μg/ml, 0.01μg/ml~0.25μg/ml, 0.01μg/ml~0.30μg/ml, 0.01μg/ml~0.35μg/ml, 0.01μg/ml~0.40μg/ml, 0.01μg/ml~0.45μg/ml, 0.01μg/ml~0.50μg/ml, 0.01μg/ml~0.55μg/ml, 0.01μg/ml~0.60μg/ml, 0.01μg/ml~0.65μg/ml, 0.01μg/ml~0.70μg/ml, 0.01μg/ml~0.75μg/ml 또는 0.01μg/ml~0.80μg/ml일 수 있다. 또 다른 예에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질이 FACS 측정에서 인간 유방암 MDA-MB-231 세포 표면의 AXL 단백질에 결합하는 EC50 값은 0.01μg/ml~0.10μg/ml, 0.01μg/ml~0.15μg/ml, 0.01μg/ml~0.20μg/ml, 0.01μg/ml~0.25μg/ml, 0.01μg/ml~0.30μg/ml, 0.01μg/ml~0.35μg/ml, 0.01μg/ml~0.40μg/ml, 0.01μg/ml~0.45μg/ml, 0.01μg/ml~0.50μg/ml, 0.01μg/ml~0.55μg/ml, 0.01μg/ml~0.60μg/ml, 0.01μg/ml~0.65μg/ml, 0.01μg/ml~0.70μg/ml, 0.01μg/ml~0.75μg/ml 또는 0.01μg/ml~0.80μg/ml일 수 있다. 또 다른 예에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질이 FACS 측정에서 신장투명세포선암 786-O 세포 표면의 AXL 단백질에 결합하는 EC50 값은 0.01μg/ml~0.10μg/ml, 0.01μg/ml~0.15μg/ml, 0.01μg/ml~0.20μg/ml, 0.01μg/ml~0.25μg/ml, 0.01μg/ml~0.30μg/ml, 0.01μg/ml~0.35μg/ml, 0.01μg/ml~0.40μg/ml, 0.01μg/ml~0.45μg/ml, 0.01μg/ml~0.50μg/ml, 0.01μg/ml~0.55μg/ml, 0.01μg/ml~0.60μg/ml, 0.01μg/ml~0.65μg/ml, 0.01μg/ml~0.70μg/ml, 0.01μg/ml~0.75μg/ml 또는 0.01μg/ml~0.80μg/ml일 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질과 결합한 후 내재화 매개할 수 있다. 예를 들어, 상기 내재화는 상기 단리된 항원 결합 단백질이 세포(예를 들어, 종양 세포)의 질막에 결합될 수 있거나, 또는, 세포 미세 환경(예를 들어, 종양 세포 미세 환경) 중 단백질의 가수분해 활성에 반응한 후 세포 내에서 방출될 수 있는 단계를 포함할 수 있다. 따라서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 세포막에 의해 삼켜져 그 세포 속으로 흡입될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 면역접합체 중의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 및/또는 이와 접합되는 상기 다른 제제도 상기 단리된 항원 결합 단백질에서 세포의 질막에 결합된 후, 세포에 의해 삼켜져 그 세포 속으로 흡입될 수 있다.
본 발명에서, 상기 AXL 단백질은 인간 AXL 단백질（NP_068713）일 수 있고, 사이노몰구스 원숭이 AXL 단백질（Genbank 수탁 번호 Hb387229.1）일 수도 있다. 예를 들어, 상기 AXL 단백질은 서열번호 39의 아미노산 서열로 표시되는 인간 AXL 단백질일 수 있다.
상기 AXL 단백질은 AXL 단백질 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 변이체는 1） 상기 AXL 단백질 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 단백질 또는 폴리펩티드, 및 2） 상기 AXL 단백질과 적어도 약 85%(예를 들어, 적어도 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 그 이상）의 서열 상동성을 갖는 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다.
상기 AXL 단백질은 AXL 단백질의 단편을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기AXL 단백질은 서열번호 40의 아미노산 서열로 표시되는 인간 AXL 단백질의 세포외 도메인일 수 있다.
본 발명에서, 상기 세포는 종양 세포를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 종양은 AXL 양성 종양일 수 있다. 예를 들어, 상기 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 또 다른 예에서, 상기 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
본 발명에서, 상기 세포는 인간 세포를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 세포는 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 피부편평세포암종 A431 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포, 인간 췌장암 MIA PaCa-2 세포, 적백혈병 K562 세포, 급성 T 세포 백혈병 Jurkat 세포, 인간 유방암 MCF-7 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 인간 유방암 MDA-MB-468 세포, 인간 유방암 SKBR3 세포, 인간 난소암 SKOV3 세포, 림프종 U-937 세포, 림프종 Raji 세포, 인간 골수종 U266 세포 및 인간 다발성 골수종 RPMI8226 세포로 구성된 군에서 선택되는 세포를 포함할 수 있다.
상기 단리된 항원 결합 단백질의 종류
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 재조합 항체, 단일클론 항체, 인간 항체, 뮤린 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 이중특이적 항체, 단일사슬 항체, 2중 항체, 3중 항체, 4중 항체, Fv 단편, scFv 단편, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편 및 낙타화된 단일 도메인 항체를 포함할 수 있으나 이에 국한되지 않는다.
본 발명에서, 상기 항체는 인간화 항체일 수 있다. 다시 말하면, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 관련 항원（예를 들어, 인간 AXL)에 면역 특이적으로 결합할 수 있고, 기본적으로 인간 항체의 아미노산 서열을 갖는 프레임워크(FR) 영역 및 기본적으로 비인간 항체의 아미노산 서열의 상보성 결정 영역（CDR）을 갖는 항체 또는 이의 변이체, 유도체, 유사체 또는 단편을 포함할 수 있다. 여기서의 “기본적으로”는 CDR의 경우에서 CDR의 아미노산 서열이 비인간 항체 CDR의 아미노산 서열과 적어도 80％, 바람직하게는 적어도 85％, 적어도 90％, 적어도 95％, 적어도 98％ 또는 적어도 99％가 동일함을 말한다. 상기 인간화 항체는 기본적으로 적어도 하나 이상이고 통상적으로는 두 개의 가변 도메인（Fab, Fab′, F(ab′)2, FabC, Fv）을 포함할 수 있으며, 여기서 모든 또는 기본적으로 모든 CDR 영역은 비인간 면역글로불린(즉, 항체)의 CDR 영역에 대응되고 모든 또는 기본적으로 모든 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린 공통 서열을 갖는 프레임워크 영역이다. 바람직하게는, 인간화 항체는 통상적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역인 적어도 일부의 면역글로불린 불변 영역(예를 들어, Fc)을 더 포함한다. 특정 실시예에서, 인간화 항체는 경쇄 및 중쇄의 적어도 가변 도메인을 포함한다. 항체는 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3 및 CH4를 더 포함한다. 일부 실시예에서, 인간화 항체는 인간화 경쇄만 포함한다. 일부 실시예에서, 인간화 항체는 인간화 중쇄만 포함한다. 특정 실시예에서, 인간화 항체는 경쇄 및/또는 인간화 중쇄의 인간화 가변 도메인만 포함한다.
본 발명에서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab)2, Fv 단편, F(ab’)2, scFv, di-scFv 및/또는 dAb 단편을 포함할 수 있다.
CDR
상보성 결정 영역이라고도 하는 항체의 CDR은 가변 영역의 일부이다. 그 영역의 아미노산 잔기는 항원 또는 항원 에피토프와 접촉된다. 항체 CDR은 CCG, Kabat, Chothia, IMGT, Kabat/Chothia의 종합적 고려 등과 같은 다양한 코딩 시스템을 통해 결정될 수 있다. 이러한 코딩 시스템은 당업계에 널리 알려져 있으며, 구체적으로는 http://www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum을 참조한다. 당업자는 항체의 서열 및 구조에 따라, 상이한 코딩 시스템을 통해 CDR 영역을 결정할 수 있다. 상이한 코딩 시스템을 사용하면, CDR 영역에 차이가 있을 수 있다. 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질에의 CDR은 Kabat를 통해 결정될 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 상기 VH는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함할 수 있다.
본 발명에셔, 상기 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 HCDR2는 서열번호 26, 44 및 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 44로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 44로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
FR
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 VH는 프레임워크 영역 H-FR1, H-FR2, H-FR3, 및 H-FR4를 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 H-FR1의 C-말단은 상기 HCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있고, 상기 H-FR1은 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
QVQL X1 QSGPGLVKPSQSLSLTC X2 V X3 G X4 SIS（서열번호 7）에서, 여기서, X1은 K 또는 V일 수 있고, X2는 S 또는 A일 수 있고, X3은 T 또는 S일 수 있고, X4는 F, Y, D 또는 S일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 H-FR1은 서열번호 11 및 15 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 H-FR2는 상기 HCDR1과 상기 HCDR2 사이에 위치할 수 있고, 상기 H-FR2는 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
WIRQ X1 PG X2 X3 LEWMG（서열번호 8）에서, 여기서 X1은 F 또는 S일 수 있고, X2는 N 또는 Q일 수 있고, X3은 K 또는 G일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 H-FR3은 상기 HCDR2과 상기 HCDR3 사이에 위치할 수 있고, 상기 H-FR3은 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
RISITRDTSKNQFFLKLNSVT X1 EDTATYYCAR（서열번호 9）에서, 여기서, X1은 T 또는 S일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 H-FR4의 N-말단은 상기 HCDR3의 C-말단과 연결될 수 있고, 상기 H-FR4는 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
WGQGT X1 VTVSS（서열번호 10）에서, 여기서, X1은 S 또는 T일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 VL은 프레임워크 영역 L-FR1, L-FR2, L-FR3, 및 L-FR4를 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 L-FR1의 C-말단은 상기 LCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있고, 상기 L-FR1은 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
X1 X2 VMTQSP X3 S X4 X5 VTLG X6 SASISC（서열번호 16）에서, 여기서, X1은 E 또는 D일 수 있고, X2는 L 또는 I일 수 있고, X3은 F 또는 S일 수 있고, X4는 N 또는 V일 수 있고, X5는 A 또는 S일 수 있고, X6은 T 또는 Q일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 L-FR1은 서열번호 20 및 24 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 L-FR2는 상기 LCDR1과 상기 LCDR2 사이에 위치할 수 있고, 상기 L-FR2는 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
WY X1 QKPGQSPQLLIY（서열번호 17）에서, 여기서, X1은 L 또는 Q일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 L-FR3은 상기 LCDR2과 상기 LCDR3 사이에 위치할 수 있고, 상기 L-FR3은 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
GVPDRFS X1 SGSGTDFTL X2 ISRVEAEDVGVYYC（서열번호 18）에서, 여기서, X1은 S 또는 G일 수 있고, X2는 R 또는 K일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 L-FR4의 N-말단은 상기 LCDR3의 C-말단과 연결될 수 있고, 상기 L-FR4는 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
FG X1 GTKLE X2 K（서열번호 19）에서, 여기서, X1은 A 또는 G일 수 있고, X2는 L 또는 I일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에서, 상기 L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 L-FR1은 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 L-FR1은 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, L-FR1은 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, L-FR1은 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
VH 및 VL
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 가변 영역 VH 및 항체 중쇄 가변 영역 VL을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 VH는 서열번호 3, 5, 42 및 43 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 VL은 서열번호 4, 6 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 VH는 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 상기 VH는 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 상기 VH는 서열번호 42로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 상기 VH는 서열번호 43으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
불변 영역, 중쇄 및 경쇄
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있고, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역에서 유래될 수 있다.
특정 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있고, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역에서 유래될 수 있다. 또 다른 실시 양태에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있고, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IIgG4 중쇄 불변 영역에서 유래될 수 있다.
예를 들어, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 서열번호 33, 41 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있고, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 인간 Igκ 불변 영역에서 유래될 수 있다. 예를 들어, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 HC를 포함할 수 있고, 상기 HC는 서열번호 35, 37 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 경쇄 LC를 포함할 수 있고, 상기 LC는 서열번호 36, 38 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 항체 중쇄 및 항체 경쇄를 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 중쇄는 서열번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄는 서열번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 중쇄는 서열번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 경쇄는 서열번호 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 중쇄는 서열번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 경쇄는 서열번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다, 여기서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 서열번호 11로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, L-FR1은 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 VH는 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 6G12M11 항체일 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 중쇄는 서열번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 경쇄는 서열번호 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 여기서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 26으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, L-FR1은 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 VH는 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 6G12M21 항체일 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 44로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, L-FR1은 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 VH는 서열번호 42로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 6G12M31 항체일 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR2는 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 단리된 항원 결합 단백질의 H-FR1은 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, L-FR1은 서열번호 24로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 VH는 서열번호 43으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 상기 VL은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 6G12M41 항체일 수 있다.
또한, 설명이 필요한 점은, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체와 하나 이상의 보존적 서열 변형이 존재하는 중쇄 및/또는 경쇄 서열을 포함할 수 있다. 소위 “보존적 서열 변형”은 항체 결합 특성에 분명한 영향을 미치거나 변경시키지 않는 아미노산 변형을 말한다, 이러한 보존적 변형에는 아미노산 치환, 추가 및 결실이 포함된다. 점 돌연변이 및 PCR 매개 돌연변이와 같이 당업계에 이미 알려진 표준 기술을 통해, 변형을 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질 내로 도입할 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 아미노산 잔기를 치환하는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기 그룹은 당업계에 널리 알려져 있다. 이러한 아미노산 잔기 그룹은 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 전하를 띠지 않는 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), β-분지 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 갖는 아미노산을 포함한다. 특정 실시 양태에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 CDR 영역 중 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 그룹의 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있다. 당업자는 일부 보존적 서열 변형이 항원 결합성을 소실시키지 않음을 잘 알고 있으며, 구체적으로는 Brummell et al., （1993） Biochem 32:1180-8; de Wildt et al., （1997） Prot. Eng. 10:835-41; Komissarov et al., （1997） J. Biol. Chem. 272:26864-26870; Hall et al., （1992） J. Immunol. 149:1605-12; Kelley and O'Connell （1993） Biochem.32:6862-35; Adib-Conquy et al., （1998） Int. Immunol.10:341-6 and Beers et al., （2000） Clin. Can. Res. 6:2835-43을 참조한다.
본 발명에 관련된 단백질, 폴리펩티드 및/또는 아미노산 서열은 적어도 그 상기 단백질 또는 폴리펩티드와 동일하거나 유사한 특성을 갖는 변이체 또는 상동체의 범위를 포함하는 것으로 더 이해되어야 한다.
본 발명에서, 상기 변이체는 상기 단백질 및/또는 상기 폴리펩티드(예를 들어, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질）의 아미노산 서열 중 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 또는 추가된 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다. 예를 들어, 상기 변이체는 적어도 한 개, 예를 들어 1-30개, 1-20개 또는 1-10개, 또 다른 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 아미노산의 치환, 결실 및/또는 삽입을 통해 아미노산 변형을 갖는 단백질 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 상기 기능성 변이체는 기본적으로 변경(예를 들어, 치환, 결실 또는 추가) 전의 상기 단백질 또는 상기 폴리펩티드의 생물학적 특성을 유지할 수 있다. 예를 들어, 상기 기능성 변이체는 변경 전의 상기 단백질 또는 상기 폴리펩티드의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%의 생물학적 활성(예를 들어, AXL 단백질에 특이적으로 결합하는 능력）을 유지할 수 있다.
본 발명에서, 상기 상동체는 상기 단백질 및/또는 상기 폴리펩티드（예를 들어, 본 발명의 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편）의 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 그 이상）의 서열 상동성을 갖는 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다.
본 발명에서, 상기 상동성은 통상적으로 두 개 이상 서열 사이의 유사성 또는 관련 정도를 말한다. 하기의 방식을 통해 “서열 상동성 백분율”을 계산할 수 있다. 정렬할 두 개의 서열을 정렬창에 정렬하여, 두 서열 중에 동일한 핵산 염기(예를 들어, A, T, C, G, I） 또는 동일한 아미노산 잔기（예를 들어, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys 및 Met）가 존재하는 위치의 수를 확정해서 일치하는 위치의 수를 얻고, 일치하는 위치의 수를 정렬창의 총 위치 수(즉, 창 크기)로 나눈 후, 결과를 100으로 곱하여 서열 상동성 백분율을 얻는다. 서열 상동성 백분율을 확정하기 위한 정렬은 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign（DNASTAR） 소프트웨어와 같이 당업계에 알려진 다양한 방식으로 구현될 수 있다. 당업자는 정렬 중인 전체 길이 서열 범위 내 또는 표적 서열 영역 내에서 최대 정렬 구현을 위해 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열 정렬에 사용되는 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 상기 상동성은 하기의 FASTA 및 BLAST 방법을 통해서도 측정될 수 있다. FASTA 알고리즘에 대한 설명은 R．Pearson 및 D．J．Lipman의 “생물학 서열 정렬에 사용되는 개선된 도구”, 미국 국립과학원 회보（Proc． Natl．Acad．Sci．），85：2444-2448, 1988；및 D．J．Lipman와 W．R．Pearson의 “빠르고 민감한 단백질의 유사성 검색”, Science, 227：1435-1441, 1989을 참조한다. BLAST 알고리즘에 대한 설명은 S.Altschul, W．Gish, W．Miller, E． W． =Myers 및 D．Lipman의 “기본적 국부 정렬（alignment） 검색 도구”, 분자 생물학 저널, 215：403-410, 1990을 참조한다.
면역접합체, 핵산 분자, 벡터, 세포 및 약학적 조성물
면역접합체
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 단리된 항원 결합 단백질을 포함하는 면역접합체를 제공한다.
예를 들어, 상기 면역접합체는 화학요법제, 방사성 원소, 세포증식억제제 및 세포독성제로 구성된 군에서 선택된 적어도 하나의 다른 제제를 포함할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 면역접합체 중 상기 단리된 항원 결합 단백질은 상기 적어도 하나의 다른 제제에 링커 분자를 통해 연결될 수 있다. 예를 들어, 상기 면역접합체 중 상기 단리된 항원 결합 단백질 및 상기 적어도 하나의 다른 제제는 각각 상기 링커 분자와 공유결합될 수 있다.
특정 실시 양태에서, 상기 다른 제제는 메이탄신（maytansine） 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 메이탄신 유도체는 메이탄신 유도체 DM1을 포함할 수 있다.
핵산 분자
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 코딩할 수 있는 단리된 하나 이상의 핵산 분자를 더 제공한다. 본 발명의 상기 단리된 하나 이상의 핵산 분자는 임의의 길이의 단리된 형식의 뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드, 또는 자연적인 환경에서 단리되거나 인공적으로 합성된 유사체일 수 있지만, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질을 코딩할 수 있다.
벡터
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 핵산 분자를 포함할 수 있는 벡터를 더 제공한다. 상기 벡터는 숙주 세포의 형질 전환, 형질 도입 또는 형질 감염을 통해, 그 운반하는 유전 물질 요소를 숙주 세포 내에서 발현시켜서 발현시킨다. 예를 들어, 벡터는 플라스미드, 파지미드, 코스미드, 효모 인공 염색체(YAC), 박테리아 인공 염색체(BAC) 또는 P1 유래 인공 염색체(PAC)와 같은 인공 염색체, λ파지 또는 M13 파지 및 동물 바이러스 등과 같은 파지를 포함할 수 있다. 벡터로 사용되는 동물 바이러스 종류는 레트로바이러스(렌티바이러스 포함), 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스(예를 들어, 단순 포진 바이러스), 폭스바이러스, 배큘로바이러스, 유두종바이러스, 유두종바이러스 바이러스(예를 들어, SV40)이다. 또 다른 예에서, 상기 벡터는 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서 서열, 선택 요소 및 리포터 유전자를 포함하여 발현을 제어하는 다양한 요소를 포함할 수 있다. 또한, 상기 벡터는 복제 기점을 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 벡터는 바이러스 입자, 리포솜 또는 단백질 외피와 같이 세포로의 진입을 돕는 성분을 더 포함할 수 있지만, 이러한 물질에 국한되지 않는다.
세포
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 핵산 분자 또는 본 발명의 상기 벡터를 포함할 수 있는 세포를 더 제공한다. 상기 세포는 단일 세포의 자손을 포함할 수 있다. 자연적, 우발적 또는 의도적인 돌연변이로 인해, 자손은 원시의 모세포와 완전하게 동일하지 않을 수 있다（전체 DNA 보완체의 형태 또는 게놈 상）. 특정 실시 양태에서, 상기 세포는 본 발명의 상기 벡터로 체외 형질 감염된 세포를 더 포함할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 세포는 세균 세포(예를 들어, 대장균), COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, CHO-K1 세포, LNCAP 세포, HeLa 세포, HEK293 세포, COS-1 세포, Ns0 세포, 골수종 세포, 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 피부편평세포암종 A431 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포, 인간 췌장암 MIA PaCa-2 세포, 적백혈병 K562 세포, 급성 T 세포 백혈병 Jurkat 세포, 인간 유방암 MCF-7 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 인간 유방암 MDA-MB-468 세포, 인간 유방암 SKBR3 세포, 인간 난소암 SKOV3 세포, 림프종 U-937 세포, 림프종 Raji 세포, 인간 골수종 U266 세포 또는 인간 다발성 골수종 RPMI8226 세포와 같은 효모 세포 또는 기타 진핵 세포일 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 세포는 포유동물 세포일 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 포유동물 세포는 HEK293 세포일 수 있다.
약학적 조성물
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 본 발명의 상기 면역접합체, 본 발명의 상기 핵산 분자, 본 발명의 상기 벡터 및/또는 본 발명의 상기 세포, 및 임의로 제약상 허용되는 보조제를 포함할 수 있는 약학적 조성물을 더 제공한다.
특정 실시 양태에서, 상기 약학적 조성물은 하나 이상의(제약상 유효한) 담체, 안정화제, 부형제, 희석제, 가용화제, 계면활성제, 유화제 및/또는 방부제 등의 적절한 제제를 더 포함할 수 있다. 조성물의 허용 가능한 성분은 사용되는 제량 및 농도에서 바람직하게는 수용체에게 무독성이다. 본 발명의 약학적 조성물은 액체, 냉동 및 동결 건조된 조성물을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
특정 실시 양태에서, 상기 제약상 허용되는 보조제는 약제 투여와 양립될 수 있는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 등장체, 흡수 지연제 등을 포함할 수 있고, 통상적으로 안전하고 무독성이며, 생물학적으로도 다른 방면에서 적합하지 않은 것도 아니다.
특정 실시 양태에서, 상기 약학적 조성물은 비경구, 경피, 강내. 동맥내, 척추 강내 및/또는 비강내 투여 또는 조직에 대한 직접 주사를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 약학적 조성물은 주입 또는 주사를 통해 환자 또는 대상체에게 투여될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 약학적 조성물의 투여는 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 국소 또는 진피내 투여와 같은 다양한 방식을 통해 수행될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 상기 약학적 조성물은 중단되지 않고 투여될 수 있다. 상기 중단되지 않는(또는 연속) 투여는 WO2015/036583에 개시된 바와 같이, 환자가 착용하는 소형 펌프 시스템을 통해 환자 체내로 유입되는 치료제의 측정을 구현할 수 있다.
상기 약학적 조성물의 투여 요법은 급속 주입제 투여일 수 있고, 시간 경과에 따라 다양한 용량을 나누어 투여할 수 있으며, 또는 치료 상황의 위급 정도에 따라 용량의 비율을 줄이거나 늘릴 수도 있다. 특정 실시 양태에서, 치료 요법은 매주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 매월 1회, 3개월마다 1회, 또는 3-6개월마다 1회 투여될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 투여 요법은 정맥내 체중당 1mg/kg 또는 체중당 3mg/kg 투여를 포함하고, 항체는 （1）4주마다 6회 투여한 후, 3개월마다 1회 투여.（2）3주마다 1회 투여.（3）체중당 3mg/kg으로 1회 투여한 후, 체중당 1mg/kg으로 3주마다 1회 투여하는 투여 시간표 중의 하나로 투여된다. 특정 실시 양태에서, 용량은 약 1-1000μg/ml, 예를 들어 약 25-300μg/ml의 혈액 농도가 구현되도록 조정된다.
제조 방법 및 용도
제조 방법
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질의 제조 방법을 더 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질이 발현되는 조건 하에 본 발명의 상기 세포를 배양하는 단계를 포함할 수 있다.
용도
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 면역접합체, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포 및/또는 상기 약학적 조성물의 약제 제조 중의 용도를 더 제공하며, 상기 약제는 종양의 예방, 완화 및/또는 치료에 사용된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 종양의 예방, 완화 또는 치료 방법을 더 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 면역접합체, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포 및/또는 상기 약학적 조성물을 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 본 발명에서, 상기 투여는 정맥내, 종양내, 복강내, 피하, 근육내, 국소 또는 진피내 투여와 같은 다양한 방식으로 수행될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질, 상기 면역접합체, 상기 핵산 분자, 상기 벡터, 상기 세포 및/또는 상기 약학적 조성물은 종양의 예방, 완화 또는 치료에 사용될 수 있다.
본 발명에서, 상기 종양은 고형 종양 또는 혈액 종양일 수 있다.
본 발명에서, 상기 종양은 AXL 양성 종양을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 AXL 양성 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 또 다른 예에서, 상기 AXL 양성 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에서, 상기 대상체는 인간 및 비인간 동물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 대상체는 고양이, 개, 말, 돼지. 젖소, 양, 토끼, 마우스, 랫 또는 원숭이를 포함할 수 있으나 이에 국한되지 않는다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 대상체 중의 종양 성장을 효과적으로 억제하기 위해 하나 이상의 다른 항체와 함께 투여될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 대상체에게 상기 단리된 항원 결합 단백질 및 LAG-3 항체, PD-1 항체 및/또는CTLA-4 항체와 같은 하나 이상의 다른 항체를 투여할 수 있다.
본 발명에서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 화학요법제와 함께 투여될 수 있으며, 상기 화학요법제는 SN-38, 에피루비신, 옥살리플라틴 및/또는 5-FU와 같은 세포독성제일 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 AXL 단백질의 발현과 관련되는 질병 또는 질환을 진단하는 데 사용되는 상기 단리된 항원 결합 단백질을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 진단제 제조에 사용되는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공하며, 여기서 상기 진단제는 AXL 단백질 발현과 관련되는 질병 또는 질환 상태를 진단하는 데 사용된다.
본 발명에서, 상기 진단제는 단독으로 사용될 수 있거나 또는 기기, 기구, 설비 또는 시스템과 조합하여 사용될 수 있다. 질병의 예방, 진단, 치료 모니터링, 예후 관찰, 건강 상태 평가 및 유전성 질병의 예측 과정에서, 상기 진단제를 사용하여 인체 시료((예를 들어, 각종 체액, 세포, 조직 시료 등)에 대한 체외 검사를 수행할 수 있다. 상기 진단제는 제제, 키트, 교정 장치 및 품질 관리품으로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
상기 체외 검출 방법은 Western Blot, ELISA, 면역조직화학으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 제제는 상기 AXL 단백질 발현량을 측정할 수 있는 제제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 제제는 Western Blot 수행에 사용되는 제제, ELISA 수행에 사용되는 제제 및 면역조직화학 수행에 사용되는 제제로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체 중 AXL 단백질의 발현과 관련되는 질병 또는 질환을 진단하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 대상체로부터 유래된 샘플을 상기 단리된 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계, 및 상기 샘플 중 상기 단리된 항원 결합 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 물질의 존재 및/또는 함량을 판단하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 샘플 중 AXL을 검출하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 단리된 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명에서, 상기 투여는 정맥내, 종양내, 복강내, 피하, 근육내, 국소 또는 진피내 투여와 같은 다양한 방식으로 수행될 수 있다.
본 발명에서, AXL 단백질의 발현과 관련되는 상기 질병 및 질환은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택될 수 있거나, 또는, 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 하기의 실시 양태를 더 포함할 수 있다.
1. 서열번호 1 또는 서열번호 46의 아미노산 서열로 표시되는 VH 내의 하나 이상의 CDR, 및 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질.
2. 하기 중 하나 이상의 특성을 갖는 실시 양태 제1항의 단리된 항원 결합 단백질.
1) 1×10-7M 이하의 KD로 AXL 단백질과 결합할 수 있는 특성.
2) 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질을 특이적으로 인식할 수 있는 특성.
3) 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질에 결합한 후 내재화 매개할 수 있는 특성.
3. 실시 양태 제2항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 AXL 단백질은 인간 AXL 단백질을 포함한다.
4. 실시 양태 제3항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 인간 AXL 단백질은 서열번호 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
5. 실시 양태 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 AXL 단백질은 세포외 도메인을 포함한다.
6. 실시 양태 제5항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 세포외 도메인은 서열번호 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
7. 실시 양태 제2항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 세포는 종양 세포를 포함한다.
8. 실시 양태 제7항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 종양은 AXL 양성 종양을 포함한다.
9. 실시 양태 제8항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
10. 실시 양태 제9항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
11. 실시 양태 제2항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 세포는 인간 세포를 포함한다.
12. 실시 양태 제7항 또는 제11항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 세포는 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 피부편평세포암종 A431 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포, 인간 췌장암 MIA PaCa-2 세포, 적백혈병 K562 세포, 급성 T 세포 백혈병 Jurkat 세포, 인간 유방암 MCF-7 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 인간 유방암 MDA-MB-468 세포, 인간 유방암 SKBR3 세포, 인간 난소암 SKOV3 세포, 림프종 U-937 세포, 림프종 Raji 세포, 인간 골수종 U266 세포 및 인간 다발성 골수종 RPMI8226 세포로 구성된 군에서 선택된다.
13. 실시 양태 제1항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 VH는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다.
14. 실시 양태 제13항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
15. 실시 양태 제13항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 HCDR2는 서열번호 26, 44 및 45 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
16. 실시 양태 제13항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
17. 실시 양태 제1항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 VL은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
18. 실시 양태 제17항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
19. 실시 양태 제17항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
20. 실시 양태 제17항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
21. 실시 양태 제1항 또는 제13항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 VH는 프레임워크 영역 H-FR1, H-FR2, H-FR3, 및 H-FR4를 포함한다.
22. 실시 양태 제21항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 H-FR1의 C-말단은 상기 HCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR1은 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
23. 실시 양태 제22항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 H-FR1은 서열번호 11 및 15 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
24. 실시 양태 제21항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 H-FR2는 상기 HCDR1과 상기 HCDR2 사이에 위치하고, 상기 H-FR2는 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
25. 실시 양태 제24항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
26. 실시 양태 제21항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 H-FR3은 상기 HCDR2와 상기 HCDR3 사이에 위치하고, 상기 H-FR3은 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
27. 실시 양태 제26항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
28. 실시 양태 제21항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 H-FR4의 N-말단은 상기 HCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 H-FR4는 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
29. 실시 양태 제28항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
30. 실시 양태 제1항, 제13항 내지 제16항 및 제22항 내지 제29항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 VH는 서열번호 3, 5, 42 및 43 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
31. 실시 양태 제1항 또는 제17항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 VL은 프레임워크 영역 L-FR1, L-FR2, L-FR3, 및 L-FR4를 포함한다.
32. 실시 양태 제31항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 L-FR1의 C-말단은 상기 LCDR1의 N-말단과 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 L-FR1은 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
33. 실시 양태 제32항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 L-FR1은 서열번호 20 및 24 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
34. 실시 양태 제31항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 L-FR2는 상기 LCDR1과 상기 LCDR2 사이에 위치하고, 상기 L-FR2는 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
35. 실시 양태 제34항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
36. 실시 양태 제31항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 L-FR3은 상기 LCDR2와 상기 LCDR3 사이에 위치하고, 상기 L-FR3은 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
37. 실시 양태 제36항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
38. 실시 양태 제31항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 L-FR4의 N-말단은 상기 LCDR3의 C-말단과 연결되고, 상기 L-FR4는 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
39. 실시 양태 제38항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
40. 실시 양태 제1항, 제17항 내지 제20항 및 제32항 내지 제39항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 VL은 서열번호 4, 6 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
41. 항체 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 항체 중쇄 불변 영역이 인간 lgG 중쇄 불변 영역으로부터 유래하는 실시 양태 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질.
42. 실시 양태 제41항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역으로부터 유래한다.
43. 실시 양태 제42항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 서열번호 33, 41 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
44. 항체 경쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 인간 lgk 불변 영역을 포함하는 실시 양태 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항, 제42항 내지 제43항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질.
45. 실시 양태 제44항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
46. 항체 중쇄를 포함하고, 상기 항체 중쇄는 서열번호 35 및 37 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 실시 양태 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항, 제42항 내지 제43항 및 제45항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질.
47. 항체 경쇄를 포함하고, 상기 항체 경쇄는 서열번호 36 및 38 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 실시 양태 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항, 제42항 내지 제43항 및 제45항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질.
48. 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 실시 양태 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항, 제42항 내지 제43항 및 제45항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질.
49. 실시 양태 제48항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 항체는 단일클론 항체, 단일사슬 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체, 인간화 항체, 완전 인간 항체로 구성된 군에서 선택된다.
50. 실시 양태 제48항의 단리된 항원 결합 단백질, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab)2, Fv, F(ab’)2, scFv, di-scFv 및 dAb 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
51. 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질을 포함하는 면역접합체.
52. 화학요법제, 방사성 원소, 세포증식억제제, 세포독성제로 구성된 군에서 선택되는 적어도 하나 이상의 다른 제제를 더 포함하는 실시 양태 제51항의 면역접합체.
53. 실시 양태 제52항의 면역접합체, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 링커 분자를 통해 다른 제제에 연결된다.
54. 실시 양태 제53항의 면역접합체, 상기 단리된 항원 결합 단백질 및 상기 다른 제제는 각각 상기 링커 분자와 공유결합된다.
55. 실시 양태 제52항 내지 제54항 중 어느 한 항의 면역접합체, 상기 다른 제제는 메이탄신 또는 이의 유도체를 포함한다.
56. 실시 양태 제55항의 면역접합체, 상기 메이탄신 유도체는 메이탄신 유도체 DM1을 포함한다.
57. 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질을 코딩하는 단리된 하나 이상의 핵산 분자.
58. 실시 양태 제57항의 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터.
59. 실시 양태 제57항의 핵산 분자 또는 실시 양태 제58항의 벡터를 포함하는 세포.
60. 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질, 실시 양태 제51항 내지 제56항 중 어느 한 항의 면역접합체, 실시 양태 제57항의 핵산 분자, 실시 양태 제58항의 벡터 및/또는 실시 양태 제59항의 세포, 및 임의로 제약상 허용되는 보조제를 포함하는 약학적 조성물.
61. 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질을 제조하는 방법, 상기 방법은 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질이 발현되는 조건 하에 실시 양태 제59항의 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
62. 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질, 실시 양태 제51항 내지 제56항 중 어느 한 항의 면역접합체, 실시 양태 제57항의 핵산 분자, 실시 양태 제58항의 벡터, 실시 양태 제59항의 세포 및/또는 실시 양태 제60항의 약학적 조성물의 약제 제조 중의 용도, 상기 약제는 종양의 예방, 완화 및/또는 치료용으로 사용된다.
63. 실시 양태 제62항의 용도, 상기 종양은 AXL 양성 종양을 포함한다.
64. 실시 양태 제63항의 용도, 상기 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
65. 실시 양태 제64항의 용도, 상기 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택된다.
66. 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질의 진단제 제조 중의 용도, 상기 진단제는 AXL 단백질 발현과 관련되는 질병 또는 질환을 진단하는 데 사용된다.
67. 대상체 중에서 AXL 단백질 발현과 관련되는 질병 또는 질환을 진단하는 방법, 상기 방법은 상기 대상체 유래 샘플을 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계, 및 상기 샘플 내 단리된 항원 결합 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 물질의 존재 및/또는 함량을 판단하는 단계를 포함한다.
68. 샘플에서 AXL을 검출하는 방법, 상기 방법은 실시 양태 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함한다.
어떤 이론에도 제한되지 않는 하기의 실시예는 본 발명의 단백질 분자, 제조 방법 및 용도 등의 설명을 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 실시예는 벡터 및 플라스미드를 구성하는 데 사용되는 방법, 단백질 코딩 유전자를 이러한 벡터 및 플라스미드에 삽입하는 방법 또는 플라스미드를 숙주 세포에 도입하는 방법과 같은 종래의 방법에 대한 구체적인 설명은 포함하지 않는다. 이러한 방법은 당업자에게 잘 알려진 것이고, Sambrook, J., Fritsch, E．F． and Maniais， T．（1989） Molecular Cloning： A Laboratory Manual，2nd edition，Cold spring Harbor Laboratory Press를 포함하는 많은 간행물에 설명되어 있다.
실시예
실시예 1. 항체의 표적 항원 인식
표적 항원 AXL-His(베이징 시노 바이오로지컬)를 ELISA스트립에 1 μg/ml로 4°C에서 밤새 코팅한다. PBST 세척 후 10% 소태아혈청을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 밀폐시킨다. 상이한 농도의 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체를 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 반응시킨다. PBST 세척 후, 겨자무과산화효소로 표기된 염소 항마우스 이차 항체(Goat Anti- mouse IgG HRP, Abcam)를 넣고 37°C에서 30분 동안 반응시킨다. PBST로 5회 반복 세척하고, 흡수지에서 남은 액적을 최대한 가볍게 두드려 말린다. 각 웰에 100μl TMB(eBioscience)를 넣고, 실온（20±5℃）에서 빛을 피해 1.5min 동안 둔다. 각 웰에 100μl 2N H2SO4의 반응 종료액을 첨가하여 기질 반응을 중단시키고, 마이크로플레이트 리더 450nm 위치에서의 OD 값을 판독하여 항체와 표적 항원 AXL의 결합 능력을 분석한다. 여기서, 6G12M11 항체의 중쇄는 서열번호 35와 같은 아미노산 서열로 표시되고, 경쇄는 서열번호 36과 같은 아미노산 서열로 표시된다. 6G12M21 항체의 중쇄는 서열번호 37과 같은 아미노산 서열로 표시되고, 경쇄는 서열번호 38과 같은 아미노산 서열로 표시되며, 6G12M31 항체의 VH는 서열번호 42와 같은 아미노산 서열로 표시되고, VL은 서열번호 6과 같은 아미노산 서열로 표시된다. 6G12M41 항체의 VH는 서열번호 43과 같은 아미노산 서열로 표시되고, VL은 서열번호 6과 같은 아미노산 서열로 표시된다.
실험 결과는 도 1A 및 도 1B에 도시된 바와 같이, 6G12M11 및 6G12M21 항체는 모두 표적 항원 AXL을 특이적으로 인식할 수 있음을 알 수 있다. 그 인식 활성은 뚜렷한 용량 의존성을 나타내며, 6G12M11의 EC50 값은 27.03ng/mL, 6G12M21의 EC50 값은 25.29ng/mL이고, 6G12M31의 EC50 값은 21.11ng/mL이고, 6G12M41의 EC50 값은 17.56ng/mL이다.
실시예 2. 항체 친화도 측정
본 실험은 표면 플라즈몬 공명 기술을 사용해 AXL-His와 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체의 친화도를 측정한다. 실험 기기는 BIACOR 생체물질 상호반응 분석기（GE Healthcare, 200）를 사용한다. 먼저 항체 포획법을 사용해 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체를 칩 표면에 고정시키고, 두 항체의 농도를 0.5μg/mL로 설정하여 10μL/min의 유속으로 시료를 60초 동안 주입한다. 제조된 AXL-His(베이징 시노 바이오로지컬, 6×His태그, 분자량 47.5Kda)를 이동상으로, 5가지 농도 구배(8, 4, 2, 1, 0.5μg/mL)를 사용해 각각 칩 표면을 흐르게 하여 상호작용을 측정한다. AXL-His는 30μL/min의 유속으로 120s 동안 결합되고 1800s 동안 해리된다. 항원 항체 친화도의 결과는 표 1과 같이, 본 발명의 상기 단리된 항원 결합 단백질은 1×10-7M 이하의 KD로 AXL 단백질에 결합할 수 있음을 알 수 있다.
항체의 친화성 측정 결과
항체 결합 상수 Ka（1/Ms） 해리 상수 Kd（1/s） 상대적 친화도 KD（M）
6G12M11 9.742E+04 1.136E-03 1.166E-08
6G12M21 1.119E+05 1.137E-03 1.016E-08
6G12M31 3.97E+04 1.16E-03 2.92E-08
6G12M41 4.15E+04 1.19E-03 2.87E-08
실시예 3. 항체의 표적 항원에 대한 특이적 인식
AXL, TRYO3, MER은 TYRO3 수용체 타이로신 키나아제 아과에 속하며, 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체의 인식 특이성을 검증하기 위해, ELISA법을 이용해 항체와 AXL 동족 다른 구성원의 결합 능력을 측정한다.
TYRO3-Fc(ACRO Biosystems), MER-His（ACRO Biosystems）, AXL-His(베이징 시노 바이오로지컬)를 각각 ELISA스트립에 1 μg/ml로 4°C에서 밤새 코팅한다. PBST 세척 후 10% 소태아혈청을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 밀폐시킨다. 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체를 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 반응시킨다. PBST 세척 후 겨자무과산화효소로 표기된 염소 항인간 IgG Fab 이차 항체(Goat Anti-Human IgG (Fab')2 (HRP)，Abcam)를 첨가하고, 실온에서 30분 동안 반응시킨다. PBST로 5회 반복 세척하고, 흡수지에서 남은 액적을 최대한 가볍게 두드려 말린다. 각 웰에 100μl TMB(eBioscience，#85-00-420)를 넣고, 실온（20±5℃）에서 빛을 피해 1.5분 동안 둔다. 각 웰에 100μl 2N H2SO4의 반응 종료액을 참가하여 기질 반응을 중단시킨 후, 마이크로플레이트 리더 450nm 위치에서의 OD 값을 판독하여 항체와 단백질의 결합 능력을 분석한다.
결과는 도 2-5에 도시된 바와 같이, 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체는 표적 항원 AXL을 특이적으로 인식할 수 있지만, AXL 동족의 다른 단백질 TYRO3, MER에는 모두 결합되지 않음을 할 수 있다.
실시예 4. 항체의 세포 표면 항원에 대한 특이적 인식
유세포 분석 기술을 이용해 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포 표면의 AXL과 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체의 결합을 측정한다. 대수기 세포를 수집하고, 세포 밀도를 5×106개/mL로 조정한 후, 얼음 위에서 미리 냉각시킨다. 2% FBS의 사전 냉각된 생리 식염수로 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체를 20μg/ml로 희석한다. 100μl 세포를 취한 후, 동일한 부피의 전술한 희석 항체를 첨가하여 4℃에서 빛을 피해 30min 동안 반응시킨다. 종료 후, 2% FBS의 사전 냉각된 생리 식염수로 2회 세척한다（6000rpm, 45s）. 이차 항체 PE Mouse Anti-Human IgG（BD Pharmingen）를 2% FBS의 사전 냉각된 생리 식염수로 1:5로 희석하고, 100μL의 재현탁 세포를 취한 후, 4℃에서 빛을 피해 30min 동안 반응시킨다. 반응이 종료된 후, 2% FBS의 사전 냉각된 생리 식염수로 2회 세척한다（6000rpm, 45s）. 400μl의 1% 파라포름알데히드로 세포를 재현탁한다. 유세포 분석기（BD Calibur）를 이용해 항체와 세포 표면 항원의 결합 능력을 분석한다.
결과는 도 6, 도 7 및 도 8에 도시된 바와 같이, 6G12M11 및 6G12M21 항체는 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포 및 신장투명선암 786-O 세포 표면의 AXL을 특이적이고 용량 의존적으로 인식할 수 있고, 6G12M11 및 6G12M21 항체의 인식 능력은 유사함을 알 수 있다. 여기서, 6G12M11 및 6G12M21 항체의 A549 세포와 결합하는 EC50 값은 각각 0.46μg/mL, 0.78μg/mL이다. MDA-MB-231 세포와 결합하는 EC50 값은 각각 0.59μg/mL, 0.39μg/mL이다. 786-O 세포와 결합하는 EC50 값은 각각 0.43μg/mL, 0.31μg/mL이다.
결과는 도 9 및 도 10에 도시된 바와 같다. 결과에 따르면, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체는 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 신장투명선암 786-O 세포 표면의 AXL을 특이적이고 용량 의존적으로 인식할 수 있고, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체의 인식 능력은 유사하다. 여기서, MDA-MB-231 세포와 결합하는 EC50 값은 6G12M21의 경우 0.64μg/mL, 6G12M31의 경우 0.60μg/mL, 6G12M41의 경우 0.54μg/mL이다. 786-O 세포와 결합하는 EC50 값은 6G12M21의 경우 0.40μg/mL, 6G12M31의 경우 0.53μg/mL, 6G12M41의 경우 0.47μg/mL이다.
실시예 5. 항체의 내재화 활성
유세포 분석 기술을 이용해 인간 비소세포폐암A549 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포에서 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체의 내재화 효율을 측정한다. 대수기 세포를 수집하고, 세포 밀도를 5×106개/mL로 조정한 후, 얼음 위에서 미리 냉각시킨다. 2% FBS의 사전 냉각된 생리 식염수로 6G12M11, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체를 상이한 농도로 희석한다. 100μl 세포를 취한 후, 동일한 부피의 전술한 희석 항체를 첨가하여 4℃에서 30분 동안 배양한다. 종료 후, 2% FBS의 사전 냉각된 생리 식염수로 세포를 3회 세척한다. 세포를 4℃ 또는 37℃에서 계속 2시간 동안 배양한 후 세포를 2회 세척한다. 이차 항체 PE Mouse Anti-Human IgG（BD Pharmingen）를 2% FBS의 사전 냉각된 생리 식염수로 1:5로 희석하고, 100μL의 재현탁 세포를 취한 후, 4℃에서 빛을 피해 30분 동안 반응시킨다. 반응이 종료된 후 세포를 3회 세척한다. 400μl의 1% 파라포름알데히드로 세포를 재현탁한다. 유세포 분석기（BD Calibur）를 이용해 상이한 온도에서 배양한 세포 표면의 항체 형광 강도를 분석하고, 하기 공식으로 항체의 내재화 효율을 계산한다.
내재화 효율=（4℃ 표면의 총 MFI - 37℃ 표면의 총MFI）/4℃ 표면의 총 MFI×100%.
결과는 도 11, 도 12 및 도 13에 도시된 바와 같이, 6G12M11 및 6G12M21 항체가 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포에서 모두 효과적으로 내재화될 수 있고, 내재화 효율이 비슷함에 따라, 6G12M11 및 6G12M21 항체가 양호한 내재화 활성을 가지고 있음을 알 수 있다.
도 14 및 도 15에 도시된 바와 같이, 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체는 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포에서 모두 효과적으로 내재화될 수 있고, 내재화 효율이 비슷함을 알 수 있다. 6G12M21, 6G12M31 및 6G12M41 항체는 양호한 내재화 활성을 가지고 있음을 알 수 있다.
실시예 6. 면역접합체의 종양 세포 증식 억제
ADC의 예시 분자로 소분자 linker 및 MMAF를 이용하여 면역접합체 6G12M41-ADC를 구성하며, 6G12M41을 기반으로 면역접합체의 생물학적 활성을 평가하고, 소분자 약물 접합체(ADC) 등 면역접합체를 구성하는 6G12M41 항체의 잠재력을 분석한다.
96웰 배양 플레이트에 특정 수량의 대수기 세포(인간 유방암 MDA-MB-231 세포)를 접종하여 24시간 동안 부착 성장시킨 후, 상이한 농도의 약물을 첨가하여 72시간 동안 작용시킨다. 약물의 작용이 종료되면, CCK-8（Dojindo, 일본 도진도 연구소）을 웰당 10μl씩 배양 플레이트에 첨가한 후, 37℃ 5%의 이산화탄소 인큐베이터에서 3-5시간 동안 배양한다. 마이크로플레이트 리더 450nm파장에서 OD 값을 측정하고, 하기 공식에 따라 세포 성장 억제율을 계산한다.
억제율=（OD 값 대조 웰－OD 값 약물 투여 웰）/OD 값 대조 웰×100%.
각 농도의 억제율에 따라 반수 억제 농도 IC50을 계산한다.
결과는 도 16에 도시된 바와 같다. 결과에 따르면, 6G12M41 항체는 MMAF（6G12M41-ADC）와 결합되면, 유방암 MDA-MB-231에 대해 뚜렷한 증식 억제 효과가 있는 것으로 나타났고, IC50은 8.298nM이다.
실시예 7. 면역접합체의 생체내 종양 활성 억제
면역접합체 6G12M41-ADC를 예로 들어 생체내 종양 활성 억제를 분석한다.
B-NDG 마우스에 MDA-MB-231 유방암 세포를 피하 접종하여 피하 유방암 동물 모델을 구축하고, 6G12M41-ADC의 체내 종양 활성 억제를 평가한다. 암컷, 8주령 B-NDG 마우스(바이오사이토젠)를 사용하고, MDA-MB-231 세포를 10% 불활성화 소태아혈청을 함유한 GIBCO Leibovitz's L-15 배지에서 배양한다. 지수기의 MDA-MB-231 세포를 수집한 후, 1×107개/0.1mL농도, 0.1mL/개 부피로 B-NDG 마우스의 오른쪽 피하에 접종한다. 접종 후 종양의 평균 부피가 92mm3일 때, 종양 크기에 따라 그룹당 6마리씩 무작위로 4개 그룹, 즉 G1 PBS, G2 6G12M41 (10 mg/kg), G3 6G12M41-ADC (10 mg/kg) 및 G4 6G12M41-ADC (5 mg/kg)으로 나누고, 매주 1회, 연속 2회 복강 투여한다. 그룹 투여 25일째에 실험을 종료한다. 투약 기간 및 관찰 기간 동안 매주 2회 마우스의 체중 및 종양 부피를 측정하고, 측정 값을 기록한다. 실험 종료 후 동물을 안락사시키고, 마우스의 종양을 절개하여 무게를 잰다. 상대 종양 억제율（TGI）에 따라 치료 효과를 평가하고, 동물 체중 변화 및 사망 상황에 따라 안전성을 평가한다. TGITV (%) = [1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100% (Ti: 치료 그룹의 투약 i일째 종양 부피 평균치, T0: 치료 그룹의 투약 0일째 종양 부피 평균치, Vi: 용매 대조 그룹의 투약 i일째 종양 부피 평균치, V0: 용매 대조 그룹의 투약 0일째 종양 부피 평균치).
결과는 도 17 및 도 18에 도시된 바와 같으며, 실험 과정에서, 투약 그룹의 실험 동물이 투약 기간 동안 활동력 및 음식물 섭취 상태가 양호하고, 체중이 어느 정도 증가함에 따라, 테스트 제품에 대한 내성은 실험 동물이 더 우수한 것으로 나타났다. 그룹 투약 25일째 PBS대조 그룹의 평균 종양 부피는 668±45mm3이며, G2-G4 각 투약 그룹의 평균 종양 부피는 각각 458±14mm3, 311±26mm3 및 395±14mm3이고, TGITV는 각각 36.5%, 62.0% 및 47.5%이다.
각 테스트 제품은 MDA-MB-231 세포 피하 이식 종양 성장에 대해 뚜렷한 억제 효과가 있고, 약효를 발휘하는 동시에 동물에 뚜렷한 독성 부작용을 일으키지 않아 안전성이 우수하다. 또한, 테스트 제품 6G12M41-ADC의 종양 억제 효과는 농도 의존성을 갖는다.
전술한 상세한 설명은 해석 및 예시적 방식으로 제공되는 것이며, 첨부된 청구 범위를 제한하는 것은 아니다. 현재 본 발명에 열거된 실시 양태의 다양한 변화는 당업자라면 명백히 알 수 있는 것으로, 첨부된 청구 범위 및 이의 동등한 방안의 범위 내에 포함된다.
Sequence Listing <110> SUMGEN MAB (BEIJING) BIOTECH CO., LTD. , HANGZHOU SUMGEN BIOTECH CO., LTD. <120> SEPARATED ANTIGEN AXL BINDING PROTEIN AND USE THEREOF <130> 0070-PA-022KR <160> 46 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH general formula <220> <221> X <222> (5)..(5) <223> X is K or V <220> <221> X <222> (23)..(23) <223> X is S or A <220> <221> X <222> (25)..(25) <223> X is T or S <220> <221> X <222> (27)..(27) <223> X is F, Y, D or S <220> <221> X <222> (41)..(41) <223> X is F or S <220> <221> X <222> (44)..(44) <223> X is N or Q <220> <221> X <222> (45)..(45) <223> X is K or G <220> <221> X <222> (88)..(88) <223> X is T or S <220> <221> X <222> (114)..(114) <223> X is S or T <400> 1 Gln Val Gln Leu Xaa Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Xaa Val Xaa Gly Xaa Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa Pro Gly Xaa Xaa Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Xaa Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Xaa Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL general formula <220> <221> X <222> (1)..(1) <223> X is E or D <220> <221> X <222> (2)..(2) <223> X is L or I <220> <221> X <222> (9)..(9) <223> X is F or S <220> <221> X <222> (11)..(11) <223> X is N or V <220> <221> X <222> (12)..(12) <223> X is A or S <220> <221> X <222> (17)..(17) <223> X is T or Q <220> <221> X <222> (42)..(42) <223> X is L or Q <220> <221> X <222> (69)..(69) <223> X is S or G <220> <221> X <222> (79)..(79) <223> X is R or K <220> <221> X <222> (105)..(105) <223> X is A or G <220> <221> X <222> (111)..(111) <223> X is L or I <400> 2 Xaa Xaa Val Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Xaa Xaa Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Xaa Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Xaa Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Xaa Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Xaa Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Glu Xaa Lys 100 105 110 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11 VH <400> 3 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11 VL <400> 4 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 5 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M21 VH <400> 5 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 6 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M21/6G12M31/6G12M41 VL <400> 6 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 7 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-FR1 general formula <220> <221> X <222> (5)..(5) <223> X is K or V <220> <221> X <222> (23)..(23) <223> X is S or A <220> <221> X <222> (25)..(25) <223> X is T or S <220> <221> X <222> (27)..(27) <223> X is F, Y, D or S <400> 7 Gln Val Gln Leu Xaa Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Xaa Val Xaa Gly Xaa Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 8 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-FR2 general formula <220> <221> X <222> (5)..(5) <223> X is F or S <220> <221> X <222> (8)..(8) <223> X is N or Q <220> <221> X <222> (9)..(9) <223> X is K or G <400> 8 Trp Ile Arg Gln Xaa Pro Gly Xaa Xaa Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 9 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-FR3 general formula <220> <221> X <222> (22)..(22) <223> X is T or S <400> 9 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys 1 5 10 15 Leu Asn Ser Val Thr Xaa Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-FR4 general formula <220> <221> X <222> (6)..(6) <223> X is S or T <400> 10 Trp Gly Gln Gly Thr Xaa Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 11 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11 H-FR1 <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 12 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M121/6G12M31/6G12M41 H-FR2 <400> 12 Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 13 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12M31/6G12M41 H-FR3 <400> 13 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys 1 5 10 15 Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12M31/6G12M41 H-FR4 <400> 14 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 15 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M21/6G12M31/6G12M41 H-FR1 <400> 15 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 16 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-FR1 general formula <220> <221> X <222> (1)..(1) <223> X is E or D <220> <221> X <222> (2)..(2) <223> X is L or I <220> <221> X <222> (9)..(9) <223> X is F or S <220> <221> X <222> (11)..(11) <223> X is N or V <220> <221> X <222> (12)..(12) <223> X is A or S <220> <221> X <222> (17)..(17) <223> X is T or Q <400> 16 Xaa Xaa Val Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Xaa Xaa Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Xaa Ser Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-FR2 general formula <220> <221> X <222> (3)..(3) <223> X is L or Q <400> 17 Trp Tyr Xaa Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 18 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-FR3 general formula <220> <221> X <222> (8)..(8) <223> X is S or G <220> <221> X <222> (18)..(18) <223> X is R or K <400> 18 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Xaa Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Xaa Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-FR4 general formula <220> <221> X <222> (3)..(3) <223> X is A or G <220> <221> X <222> (9)..(9) <223> X is L or I <400> 19 Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Glu Xaa Lys 1 5 10 <210> 20 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11 L-FR1 <400> 20 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Ser Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12M31/6G12M41 L-FR2 <400> 21 Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 22 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12M31/6G12M41 L-FR3 <400> 22 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 23 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12M31/6G12M41 L-FR4 <400> 23 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 24 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M21/6G12M31/6G12M41 L-FR1 <400> 24 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Ser Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12/6G12M31/6G12M41 HCDR1 <400> 25 Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn 1 5 <210> 26 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12 HCDR2 <400> 26 Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 1 5 10 15 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12 /6G12M31/6G12M41 HCDR3 <400> 27 Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 28 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12 /6G12M31/6G12M41 LCDR1 <400> 28 Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12/6G12M31/6G12M41 LCDR2 <400> 29 Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11/6G12M21/6G12/6G12M31/6G12M41 LCDR3 <400> 30 Gly Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 31 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12 VH <400> 31 Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 32 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12 VL <400> 32 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Asn Ala Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 33 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 34 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 35 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11 heavy chain <400> 35 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 36 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M11 light chain <400> 36 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 37 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M21 heavy chain <400> 37 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 38 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M21 light chain <400> 38 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 39 <211> 894 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Met Ala Trp Arg Cys Pro Arg Met Gly Arg Val Pro Leu Ala Trp Cys 1 5 10 15 Leu Ala Leu Cys Gly Trp Ala Cys Met Ala Pro Arg Gly Thr Gln Ala 20 25 30 Glu Glu Ser Pro Phe Val Gly Asn Pro Gly Asn Ile Thr Gly Ala Arg 35 40 45 Gly Leu Thr Gly Thr Leu Arg Cys Gln Leu Gln Val Gln Gly Glu Pro 50 55 60 Pro Glu Val His Trp Leu Arg Asp Gly Gln Ile Leu Glu Leu Ala Asp 65 70 75 80 Ser Thr Gln Thr Gln Val Pro Leu Gly Glu Asp Glu Gln Asp Asp Trp 85 90 95 Ile Val Val Ser Gln Leu Arg Ile Thr Ser Leu Gln Leu Ser Asp Thr 100 105 110 Gly Gln Tyr Gln Cys Leu Val Phe Leu Gly His Gln Thr Phe Val Ser 115 120 125 Gln Pro Gly Tyr Val Gly Leu Glu Gly Leu Pro Tyr Phe Leu Glu Glu 130 135 140 Pro Glu Asp Arg Thr Val Ala Ala Asn Thr Pro Phe Asn Leu Ser Cys 145 150 155 160 Gln Ala Gln Gly Pro Pro Glu Pro Val Asp Leu Leu Trp Leu Gln Asp 165 170 175 Ala Val Pro Leu Ala Thr Ala Pro Gly His Gly Pro Gln Arg Ser Leu 180 185 190 His Val Pro Gly Leu Asn Lys Thr Ser Ser Phe Ser Cys Glu Ala His 195 200 205 Asn Ala Lys Gly Val Thr Thr Ser Arg Thr Ala Thr Ile Thr Val Leu 210 215 220 Pro Gln Gln Pro Arg Asn Leu His Leu Val Ser Arg Gln Pro Thr Glu 225 230 235 240 Leu Glu Val Ala Trp Thr Pro Gly Leu Ser Gly Ile Tyr Pro Leu Thr 245 250 255 His Cys Thr Leu Gln Ala Val Leu Ser Asp Asp Gly Met Gly Ile Gln 260 265 270 Ala Gly Glu Pro Asp Pro Pro Glu Glu Pro Leu Thr Ser Gln Ala Ser 275 280 285 Val Pro Pro His Gln Leu Arg Leu Gly Ser Leu His Pro His Thr Pro 290 295 300 Tyr His Ile Arg Val Ala Cys Thr Ser Ser Gln Gly Pro Ser Ser Trp 305 310 315 320 Thr His Trp Leu Pro Val Glu Thr Pro Glu Gly Val Pro Leu Gly Pro 325 330 335 Pro Glu Asn Ile Ser Ala Thr Arg Asn Gly Ser Gln Ala Phe Val His 340 345 350 Trp Gln Glu Pro Arg Ala Pro Leu Gln Gly Thr Leu Leu Gly Tyr Arg 355 360 365 Leu Ala Tyr Gln Gly Gln Asp Thr Pro Glu Val Leu Met Asp Ile Gly 370 375 380 Leu Arg Gln Glu Val Thr Leu Glu Leu Gln Gly Asp Gly Ser Val Ser 385 390 395 400 Asn Leu Thr Val Cys Val Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Gly Asp Gly Pro 405 410 415 Trp Ser Leu Pro Val Pro Leu Glu Ala Trp Arg Pro Gly Gln Ala Gln 420 425 430 Pro Val His Gln Leu Val Lys Glu Pro Ser Thr Pro Ala Phe Ser Trp 435 440 445 Pro Trp Trp Tyr Val Leu Leu Gly Ala Val Val Ala Ala Ala Cys Val 450 455 460 Leu Ile Leu Ala Leu Phe Leu Val His Arg Arg Lys Lys Glu Thr Arg 465 470 475 480 Tyr Gly Glu Val Phe Glu Pro Thr Val Glu Arg Gly Glu Leu Val Val 485 490 495 Arg Tyr Arg Val Arg Lys Ser Tyr Ser Arg Arg Thr Thr Glu Ala Thr 500 505 510 Leu Asn Ser Leu Gly Ile Ser Glu Glu Leu Lys Glu Lys Leu Arg Asp 515 520 525 Val Met Val Asp Arg His Lys Val Ala Leu Gly Lys Thr Leu Gly Glu 530 535 540 Gly Glu Phe Gly Ala Val Met Glu Gly Gln Leu Asn Gln Asp Asp Ser 545 550 555 560 Ile Leu Lys Val Ala Val Lys Thr Met Lys Ile Ala Ile Cys Thr Arg 565 570 575 Ser Glu Leu Glu Asp Phe Leu Ser Glu Ala Val Cys Met Lys Glu Phe 580 585 590 Asp His Pro Asn Val Met Arg Leu Ile Gly Val Cys Phe Gln Gly Ser 595 600 605 Glu Arg Glu Ser Phe Pro Ala Pro Val Val Ile Leu Pro Phe Met Lys 610 615 620 His Gly Asp Leu His Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Arg Leu Gly Asp Gln 625 630 635 640 Pro Val Tyr Leu Pro Thr Gln Met Leu Val Lys Phe Met Ala Asp Ile 645 650 655 Ala Ser Gly Met Glu Tyr Leu Ser Thr Lys Arg Phe Ile His Arg Asp 660 665 670 Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Asn Glu Asn Met Ser Val Cys Val 675 680 685 Ala Asp Phe Gly Leu Ser Lys Lys Ile Tyr Asn Gly Asp Tyr Tyr Arg 690 695 700 Gln Gly Arg Ile Ala Lys Met Pro Val Lys Trp Ile Ala Ile Glu Ser 705 710 715 720 Leu Ala Asp Arg Val Tyr Thr Ser Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly 725 730 735 Val Thr Met Trp Glu Ile Ala Thr Arg Gly Gln Thr Pro Tyr Pro Gly 740 745 750 Val Glu Asn Ser Glu Ile Tyr Asp Tyr Leu Arg Gln Gly Asn Arg Leu 755 760 765 Lys Gln Pro Ala Asp Cys Leu Asp Gly Leu Tyr Ala Leu Met Ser Arg 770 775 780 Cys Trp Glu Leu Asn Pro Gln Asp Arg Pro Ser Phe Thr Glu Leu Arg 785 790 795 800 Glu Asp Leu Glu Asn Thr Leu Lys Ala Leu Pro Pro Ala Gln Glu Pro 805 810 815 Asp Glu Ile Leu Tyr Val Asn Met Asp Glu Gly Gly Gly Tyr Pro Glu 820 825 830 Pro Pro Gly Ala Ala Gly Gly Ala Asp Pro Pro Thr Gln Pro Asp Pro 835 840 845 Lys Asp Ser Cys Ser Cys Leu Thr Ala Ala Glu Val His Pro Ala Gly 850 855 860 Arg Tyr Val Leu Cys Pro Ser Thr Thr Pro Ser Pro Ala Gln Pro Ala 865 870 875 880 Asp Arg Gly Ser Pro Ala Ala Pro Gly Gln Glu Asp Gly Ala 885 890 <210> 40 <211> 425 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human AXL protein extracellular domain <400> 40 Pro Arg Gly Thr Gln Ala Glu Glu Ser Pro Phe Val Gly Asn Pro Gly 1 5 10 15 Asn Ile Thr Gly Ala Arg Gly Leu Thr Gly Thr Leu Arg Cys Gln Leu 20 25 30 Gln Val Gln Gly Glu Pro Pro Glu Val His Trp Leu Arg Asp Gly Gln 35 40 45 Ile Leu Glu Leu Ala Asp Ser Thr Gln Thr Gln Val Pro Leu Gly Glu 50 55 60 Asp Glu Gln Asp Asp Trp Ile Val Val Ser Gln Leu Arg Ile Thr Ser 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Asp Thr Gly Gln Tyr Gln Cys Leu Val Phe Leu Gly 85 90 95 His Gln Thr Phe Val Ser Gln Pro Gly Tyr Val Gly Leu Glu Gly Leu 100 105 110 Pro Tyr Phe Leu Glu Glu Pro Glu Asp Arg Thr Val Ala Ala Asn Thr 115 120 125 Pro Phe Asn Leu Ser Cys Gln Ala Gln Gly Pro Pro Glu Pro Val Asp 130 135 140 Leu Leu Trp Leu Gln Asp Ala Val Pro Leu Ala Thr Ala Pro Gly His 145 150 155 160 Gly Pro Gln Arg Ser Leu His Val Pro Gly Leu Asn Lys Thr Ser Ser 165 170 175 Phe Ser Cys Glu Ala His Asn Ala Lys Gly Val Thr Thr Ser Arg Thr 180 185 190 Ala Thr Ile Thr Val Leu Pro Gln Gln Pro Arg Asn Leu His Leu Val 195 200 205 Ser Arg Gln Pro Thr Glu Leu Glu Val Ala Trp Thr Pro Gly Leu Ser 210 215 220 Gly Ile Tyr Pro Leu Thr His Cys Thr Leu Gln Ala Val Leu Ser Asp 225 230 235 240 Asp Gly Met Gly Ile Gln Ala Gly Glu Pro Asp Pro Pro Glu Glu Pro 245 250 255 Leu Thr Ser Gln Ala Ser Val Pro Pro His Gln Leu Arg Leu Gly Ser 260 265 270 Leu His Pro His Thr Pro Tyr His Ile Arg Val Ala Cys Thr Ser Ser 275 280 285 Gln Gly Pro Ser Ser Trp Thr His Trp Leu Pro Val Glu Thr Pro Glu 290 295 300 Gly Val Pro Leu Gly Pro Pro Glu Asn Ile Ser Ala Thr Arg Asn Gly 305 310 315 320 Ser Gln Ala Phe Val His Trp Gln Glu Pro Arg Ala Pro Leu Gln Gly 325 330 335 Thr Leu Leu Gly Tyr Arg Leu Ala Tyr Gln Gly Gln Asp Thr Pro Glu 340 345 350 Val Leu Met Asp Ile Gly Leu Arg Gln Glu Val Thr Leu Glu Leu Gln 355 360 365 Gly Asp Gly Ser Val Ser Asn Leu Thr Val Cys Val Ala Ala Tyr Thr 370 375 380 Ala Ala Gly Asp Gly Pro Trp Ser Leu Pro Val Pro Leu Glu Ala Trp 385 390 395 400 Arg Pro Gly Gln Ala Gln Pro Val His Gln Leu Val Lys Glu Pro Ser 405 410 415 Thr Pro Ala Phe Ser Trp Pro Trp Trp 420 425 <210> 41 <211> 229 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 42 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M31 VH <400> 42 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asp Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 43 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M41 VH <400> 43 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Gly Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 44 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M31 HCDR2 <400> 44 Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asp Pro Ser Leu Lys Asn 1 5 10 15 <210> 45 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M41 HCDR2 <400> 45 Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Gly Pro Ser Leu Lys Asn 1 5 10 15 <210> 46 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6G12M31 VH; 6G12M41 VH <220> <221> misc_feature <222> (61)..(61) <223> X is D or G <400> 46 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Phe Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Arg Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Xaa Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Leu Leu His Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115

Claims (68)

  1. 서열번호 1 또는 서열번호 46의 아미노산 서열로 표시되는 VH 내의 하나 이상의 CDR, 및 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 VL 내의 하나 이상의 CDR을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 하기 특성 중 하나 이상의 특성을 갖는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질:
    1) 1×10-7M 이하의 KD로 AXL 단백질과 결합할 수 있는 특성,
    2) 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질을 특이적으로 인식할 수 있는 특성,
    3) 세포 표면에 발현하는 AXL 단백질에 결합하여 내재화 매개할 수 있는 특성.
  3. 제2항에 있어서, 상기 AXL 단백질은 인간 AXL 단백질을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질.
  4. 제3항에 있어서, 상기 인간 AXL 단백질은 서열번호 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  5. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AXL 단백질은 세포외 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  6. 제5항에 있어서, 상기 세포외 도메인은 서열번호 40으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  7. 제2항에 있어서, 상기 세포는 종양 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  8. 제7항에 있어서, 상기 종양은 AXL 양성 종양을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  9. 제8항에 있어서, 상기 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액 종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  10. 제9항에 있어서, 상기 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  11. 제2항에 있어서, 상기 세포는 인간 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  12. 제7항 또는 제11항에 있어서, 상기 세포는 인간 비소세포폐암 A549 세포, 인간 피부편평세포암종 A431 세포, 신장투명세포선암 786-O 세포, 인간 췌장암 MIA PaCa-2 세포, 적백혈병 K562 세포, 급성 T 세포 백혈병 Jurkat 세포, 인간 유방암 MCF-7 세포, 인간 유방암 MDA-MB-231 세포, 인간 유방암 MDA-MB-468 세포, 인간 유방암 SKBR3 세포, 인간 난소암 SKOV3 세포, 림프종 U-937 세포, 림프종 Raji 세포, 인간 골수종 U266 세포 및 인간 다발성 골수종 RPMI8226 세포로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  13. 제1항에 있어서, 상기 VH는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  14. 제13항에 있어서, 상기 HCDR1은 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  15. 제13항에 있어서, 상기 HCDR2는 서열번호 26, 44 및 45 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  16. 제13항에 있어서, 상기 HCDR3은 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  17. 제1항에 있어서, 상기 VL은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  18. 제17항에 있어서, 상기 LCDR1은 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  19. 제17항에 있어서, 상기 LCDR2는 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  20. 제17항에 있어서, 상기 LCDR3은 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  21. 제1항 또는 제13항에 있어서, 상기 VH는 프레임워크 영역 H-FR1, H-FR2, H-FR3 및 H-FR4를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  22. 제21항에 있어서, 상기 H-FR1의 C-말단은 상기 HCDR1의 N-말단에 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 H-FR1은 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  23. 제22항에 있어서, 상기 H-FR1은 서열번호 11 및 15 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  24. 제21항에 있어서, 상기 H-FR2는 상기 HCDR1과 상기 HCDR2 사이에 위치하고, 상기 H-FR2는 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  25. 제24항에 있어서, 상기 H-FR2는 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  26. 제21항에 있어서, 상기 H-FR3는 상기 HCDR2와 상기 HCDR3 사이에 위치하고, 상기 H-FR3은 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  27. 제26항에 있어서, 상기 H-FR3은 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  28. 제21항에 있어서, 상기 H-FR4의 N-말단은 상기 HCDR3의 C-말단에 연결되고, 상기 H-FR4는 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  29. 제28항에 있어서, 상기 H-FR4는 서열번호 14로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  30. 제1항, 제13항 내지 제16항 및 제22항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 3, 5, 42 및 43 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  31. 제1항 또는 제17항에 있어서, 상기 VL은 프레임워크 영역 L-FR1, L-FR2, L-FR3 및 L-FR4를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  32. 제31항에 있어서, 상기 L-FR1의 C-말단은 상기 LCDR1의 N-말단에 직접 또는 간접적으로 연결되고, 상기 L-FR1은 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  33. 제32항에 있어서, 상기 L-FR1은 서열번호 20 및 24 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  34. 제31항에 있어서, 상기 L-FR2는 상기 LCDR1과 상기 LCDR2 사이에 위치하고, 상기 L-FR2는 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  35. 제34항에 있어서, 상기 L-FR2는 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  36. 제31항에 있어서, 상기 L-FR3은 상기 LCDR2와 상기 LCDR3 사이에 위치하고, 상기 L-FR3은 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  37. 제36항에 있어서, 상기 L-FR3은 서열번호 22로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  38. 제31항에 있어서, 상기 L-FR4의 N-말단은 상기 LCDR3의 C-말단에 연결되고, 상기 L-FR4는 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  39. 제38항에 있어서, 상기 L-FR4는 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  40. 제1항, 제17항 내지 제20항 및 제32항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL은 서열번호 4 및 6 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  41. 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항 및 제32항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 IgG 중쇄 불변 영역으로부터 유래된 항체 중쇄 불변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  42. 제41항에 있어서, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역으로부터 유래된 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  43. 제42항에 있어서, 상기 항체 중쇄 불변 영역은 서열번호 33 및 41 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  44. 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항 및 제42항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 경쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 인간 Igκ 불변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  45. 제44항에 있어서, 상기 항체 경쇄 불변 영역은 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  46. 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항, 제42항 내지 제43항 및 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 중쇄를 포함하고, 상기 항체 중쇄는 서열번호 35 및 37 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  47. 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항, 제42항 내지 제43항 및 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 경쇄를 포함하고, 상기 항체 경쇄는 서열번호 36 및 38 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  48. 제1항 내지 제4항, 제6항 내지 제11항, 제13항 내지 제20항, 제22항 내지 제29항, 제32항 내지 제39항, 제42항 내지 제43항 및 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  49. 제48항에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체, 단일사슬 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체, 인간화 항체 및 완전 인간 항체로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  50. 제48항에 있어서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab)2, Fv, F(ab’)2, scFv, di-scFv 및 dAb 단편으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단리된 항원 결합 단백질.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질을 포함하는 면역접합체.
  52. 제51항에 있어서, 화학요법제, 방사성 원소, 세포증식억제제 및 세포독성제로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 다른 제제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 면역접합체.
  53. 제52항에 있어서, 상기 단리된 항원 결합 단백질은 링커 분자에 의해 다른 제제에 연결되는 것을 특징으로 하는 면역접합체.
  54. 제53항에 있어서, 상기 단리된 항원 결합 단백질 및 다른 제제는 각각 링커 분자에 공유결합되는 것을 특징으로 하는 면역접합체.
  55. 제52항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다른 제제는 메이탄신 또는 이의 유도체를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역접합체.
  56. 제55항에 있어서, 상기 메이탄신 유도체는 메이탄신 유도체 DM1을 포함하는 것을 특징으로 하는 면역접합체.
  57. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질을 코딩하는 단리된 하나 이상의 핵산 분자.
  58. 제57항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  59. 제57항의 핵산 분자 또는 제58항의 벡터를 포함하는 세포.
  60. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질, 제51항 내지 제56항 중 어느 한 항의 면역접합체, 제57항의 핵산 분자, 제58항의 벡터 및/또는 제59항의 세포, 및 임의로 제약상 허용되는 보조제(adjuvant)를 포함하는 약학적 조성물.
  61. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질의 제조 방법으로, 상기 방법은 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질이 발현되는 조건 하에 제59항의 세포를 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  62. 종양의 예방, 경감 및/또는 치료용 약제 제조에 있어서 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질, 제51항 내지 제56항 중 어느 한 항의 면역접합체, 제57항의 핵산 분자, 제58항의 벡터, 제59항의 세포 및/또는 제60항의 약학적 조성물의 용도.
  63. 제62항에 있어서, 상기 종양은 AXL 양성 종양을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
  64. 제63항에 있어서, 상기 종양은 폐암, 피부암, 신장암, 췌장암, 혈액종양, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
  65. 제64항에 있어서, 상기 종양은 비소세포폐암, 피부편평세포암종, 신장투명세포선암, 췌장암, 적백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 유방암, 난소암, 림프종 및 골수종으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
  66. AXL 단백질 발현과 관련되는 질병 또는 질환을 진단하기 위한 진단제의 제조에 있어서, 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질의 용도.
  67. 대상체에서 AXL 단백질의 발현과 관련된 질병 또는 질환을 진단하는 방법으로,
    상기 방법은,
    대상체 유래 샘플을 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계,
    상기 샘플 내 단리된 항원 결합 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 물질의 존재 및/또는 함량을 판단하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  68. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항의 단리된 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함하는, 샘플에서 AXL을 검출하는 방법.
KR1020227021710A 2019-11-28 2020-11-27 분리된 항원 axl 결합 단백질 및 그의 용도 KR20220119389A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911187949.6 2019-11-28
CN201911187949.6A CN113045664B (zh) 2019-11-28 2019-11-28 一种分离的结合抗原axl的蛋白及其用途
PCT/CN2020/132456 WO2021104496A1 (zh) 2019-11-28 2020-11-27 一种分离的结合抗原axl的蛋白及其用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220119389A true KR20220119389A (ko) 2022-08-29

Family

ID=76129158

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227021710A KR20220119389A (ko) 2019-11-28 2020-11-27 분리된 항원 axl 결합 단백질 및 그의 용도

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20220411531A1 (ko)
EP (1) EP4067384A1 (ko)
JP (1) JP2023504244A (ko)
KR (1) KR20220119389A (ko)
CN (2) CN113045664B (ko)
AU (1) AU2020390381A1 (ko)
CA (1) CA3159802A1 (ko)
TW (1) TW202120559A (ko)
WO (1) WO2021104496A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110540592B (zh) * 2018-05-29 2022-08-09 杭州尚健生物技术有限公司 结合axl蛋白的抗体及其应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
AR097648A1 (es) 2013-09-13 2016-04-06 Amgen Inc Combinación de factores epigenéticos y compuestos biespecíficos que tienen como diana cd33 y cd3 en el tratamiento de leucemia mieloide
CN110642952B (zh) * 2014-08-14 2021-05-25 上海生物制品研究所有限责任公司 抗her3抗体、其制法及其应用
EP3229836B1 (en) * 2014-12-09 2019-11-13 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Human monoclonal antibodies against axl
EP3297662A4 (en) * 2015-05-18 2019-03-13 Agensys, Inc. ANTIBODY BINDING TO AXL PROTEINS
EP3458482A4 (en) * 2016-05-20 2020-01-15 Agency for Science, Technology and Research ANTI-AXL TYROSINE KINASEPEPTOR ANTIBODIES AND USES THEREOF
BR112020005011A2 (pt) * 2017-09-13 2020-09-15 National Research Council Of Canada anticorpos específicos de axl e usos dos mesmos
CN110483639A (zh) * 2018-05-15 2019-11-22 复旦大学 靶向axl的抗体及抗体-药物偶联物及其制备方法和用途
CN110540592B (zh) * 2018-05-29 2022-08-09 杭州尚健生物技术有限公司 结合axl蛋白的抗体及其应用
CN110003338B (zh) * 2019-04-16 2021-04-23 北京免疫方舟医药科技有限公司 抗ox40抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP4067384A1 (en) 2022-10-05
CA3159802A1 (en) 2021-06-03
JP2023504244A (ja) 2023-02-02
TW202120559A (zh) 2021-06-01
AU2020390381A1 (en) 2022-07-14
CN113045664A (zh) 2021-06-29
US20220411531A1 (en) 2022-12-29
CN114761435A (zh) 2022-07-15
CN113045664B (zh) 2023-05-12
WO2021104496A1 (zh) 2021-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2506276C2 (ru) Axl-антитела
JP5909442B2 (ja) ヒト化ａｘｌ抗体
JP2018527950A (ja) 新規抗ｐｄ−１抗体
AU2007324509B2 (en) Novel antiproliferation antibodies
AU2014317009A1 (en) CD70-binding peptides and method, process and use relating thereto
US20220193132A1 (en) Anti-egfrviii antibodies and antigen-binding fragments thereof
WO2022042719A1 (zh) 抗vegf-抗pd-l1双特异性抗体、其药物组合物及用途
US20210230295A1 (en) Antibody binding to axl protein and application thereof
WO2022068810A1 (zh) 抗Claudin18.2和CD3的双特异性抗体以及其用途
KR20200138762A (ko) 항-cd27 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 이의 의학적 용도
CN112661855B (zh) 含SIRPa变体的融合蛋白
KR20220119389A (ko) 분리된 항원 axl 결합 단백질 및 그의 용도
WO2021032130A1 (zh) Bcma抗体
CN111303288B (zh) 一种分离的结合抗原psma的蛋白及其用途
CN113166264B (zh) 一种分离的抗原结合蛋白及其用途
CN116574187B (zh) 针对gucy2c的抗体及其用途
WO2024109657A1 (zh) 抗ccr8抗体及其用途
CN113164601B (zh) 一种分离的抗原结合蛋白及其用途
CN114539420B (zh) 抗b7-h3单克隆抗体、抗b7-h3×cd3双特异性抗体、制备方法及其应用
CN116462761B (zh) 针对cll1的抗体及其用途
WO2024002266A1 (zh) 分离的抗原结合蛋白及其用途
US20220073612A1 (en) Antibodies specific to delta 1 chain of t cell receptor
TW202227498A (zh) 新型抗ｃｌａｕｄｉｎ１８抗體
TW202132353A (zh) 一種分離的結合抗原ｐｓｍａ的蛋白及其用途