KR20220015976A - 안정한 약제학적 제제 - Google Patents

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KR20220015976A
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김광우
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신연경
오준석
이재빈
한원용
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Abstract

본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 재조합 융합 단백질; 계면활성제; 당 또는 이의 유도체; 및 완충제를 포함한다. 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 재조합 융합 단백질을 포함하면서 낮은 점도를 가지고, 장기 보관 조건, 가속 조건 및 가혹 조건에서의 우수한 안정성을 유지하고, 안내 투여가 가능하다.

Description

안정한 약제학적 제제 {Stable Pharmaceutical Formulation}
본 발명은 혈관 내피 성장 인자 (Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)를 억제할 수 있는 약제를 안정하게 보존할 수 있으며 안내(intraocular) 투여가 가능한 약학 조제물에 관한 것이다.
혈관 내피 성장 인자 (VEGF)의 방출은 눈의 증가된 혈관 투과성 및 부적절한 새로운 혈관 성장을 기여하므로, 신생혈관성 (습성) 연령 관련 황반 변성, 망막정맥폐쇄성 (망막중심정맥폐쇄 또는 망막분지정맥폐쇄) 황반부종에 의한 시력 손상, 당뇨병성 황반부종에 의한 시력 손상, 그리고 병적 근시로 인한 맥락막 신생혈관 형성에 따른 시력 손상을 야기시킬 수 있다. 따라서, VEGF를 억제하는 것은 혈관신생과 관련된 안과 질환을 치료하기 위한 효과적인 방법이다.
VEGF 억제 약제의 성분명은 애플리버셉트(Aflibercept)이며, Type A와 Type B VEGF 및 PIGF (Placental Growth Factor)를 억제시킬 수 있는 재조합 융합 단백질의 일종이다. 이 약제를 포함한 약제학적 제제는 안구 내 주사로 투여되어야 하며, 자격을 갖춘 안내 투여 경험이 있는 의사에 의해 직접 수행되어야 한다.
VEGF 억제 약제를 장기 보관하기 위해, 안정화제로 히스티딘, 트레할로스, 폴리소르베이트 20을 포함하는 제형을 개발했으며, 투여 시 고통을 줄이기 위한 목적으로 안구 내부와 유사한 삼투압을 갖도록 등장화제로 염화나트륨을 추가하였다. 하지만 등장화제인 염화나트륨이 존재할 시 약제의 안정성이 감소하는 것을 확인하였고, 이를 개선하기 위해 염화나트륨의 농도는 적정한 삼투압을 유지할 수 있는 농도로 적용하였다.
본 발명의 제형은 한국 공개특허공보 제10-2009-0018807호의 애플리버셉트 액상 제형보다 약제의 안정화 측면에서 개량된 결과를 도출했으며, 실험예를 통해 개량한 수준을 직접적으로 비교 평가하였다 (실험예1).
따라서, 본 발명 제형인 VEGF 억제 약제인 애플리버셉트를 포함하는 안정한 약제학적 제제의 우수성을 최종적으로 확인하였다.
이에, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 VEGF 억제 약제인 애플리버셉트를 포함하면서 장기 보관에 안정한 약제학적 제제를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 가속 조건 및 가혹 조건에서의 우수한 안정성을 바탕으로 장기간 보관 안정성이 우수한 약제학적 제제를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 안내 투여가 가능한 안정한 약제학적 제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 (A) 재조합 융합 단백질, (B) 계면활성제, (C) 당 또는 이의 유도체, 및 (D) 완충제를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 약제학적 제제는 액상일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) 길항제를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 인간 VEGF 수용체 세포외 영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 2 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 면역글로블린 G(IgG)의 Fc 부위, 바람직하게는 인간 면역글로블린 G(IgG)의 Fc 부위를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함할 수 있다. 서열번호 2의 아미노산은 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드로 암호화될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 애플리버셉트(Aflibercept)를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 100 mg/ml일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (B) 계면활성제는 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (B) 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (B) 계면활성제는 폴리소르베이트 20을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (B) 계면활성제의 농도는 0.01 내지 0.1 %(w/v)일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (C) 당은 단당류, 이당류, 올리고당, 다당류 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함하고, (C) 당의 유도체는 당 알코올, 당 산 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (C) 당 또는 이의 유도체는 소르비톨, 만니톨, 트레할로스, 수크로오스 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (C) 당 또는 이의 유도체는 트레할로스를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (C) 당 또는 이의 유도체의 농도는 1 내지 20 %(w/v)일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (D) 완충제는 아미노산을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (D) 완충제는 유리 아미노산, 아미노산염 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (D) 완충제는 히스티딘, 히스티딘염 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (D) 완충제의 함량은 1 내지 20 mM일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 아세트산, 구연산, 인산 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않을 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 (E) 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (E) 등장화제는 염화나트륨(NaCl), 염화칼륨(KCl), 염화칼슘(CaCl) 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (E) 등장화제의 함량은 30 mM 이하일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제제는 pH가 5.0 내지 7.0일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제제는 NaF, KBr, NaBr, Na2SO4, NaSCN, K2SO4 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제제는 킬레이트제를 포함하지 않는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 (A) (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함하는 재조합 융합 단백질 5 내지 100 mg/ml, (B) 계면활성제 0.01 내지 0.1 %(w/v), (C) 당 또는 이의 유도체 1 내지 20 %(w/v), (D) 완충제 1 내지 20 mM 및 (E) 등장화제 30 mM 이하를 포함할 수 있다. 서열번호 2의 아미노산은 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드로 암호화될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 (A) VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) 길항제;(B) 폴리소르베이트; (C) 당 또는 이의 유도체; 및(D) 히스티딘을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 (E) 염화나트륨을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 (A) (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소, 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함하는 재조합 융합 단백질 5 내지 100 mg/ml; (B) 폴리소르베이트 0.01 내지 0.1 %(w/v); (C) 당 또는 이의 유도체 1 내지 20 %(w/v); 및 (D) 히스티딘 1 내지 20 mM을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 (E) 염화나트륨 30 mM 이하를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 9개월 보관 시 HIAC으로 측정한, 10.00㎛ 이상 400.00㎛ 미만의 불용성 이물 입자 수가 50개 이하일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 보관 10일 후 98% 이상의 주성분 함량을 나타낼 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 보관 10일 후 1% 이하의 고분자량 성분 함량을 나타낼 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 보관 10일 후 0.05% 이하의 저분자량 성분 함량을 나타낼 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 9개월 보관 시 87% 이상의 전하 변형체 함량을 나타낼 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 9개월 보관 시 90% 이상의 VEGF 결합 친화도를 나타내 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 안내(intraocular) 투여용, 바람직하게는 유리체내(intravitreal) 투여용일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 사용 전에 재용해(reconstitution) 단계, 희석(dilution) 단계 또는 이들 모두를 거치지 않는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따른 유리 바이알(vial)은 상기 안정한 약제학적 제제가 충진된다.
본 발명의 일 구현예에 따른 프리-필드 시린지(pre-filled syringe)는 상기 안정한 약제학적 제제가 충진된다.
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 재조합 융합 단백질을 포함하면서 낮은 점도를 가지고, 장기 보관 조건, 가속 조건 및 가혹 조건에서의 우수한 안정성을 유지하고, 안내 투여가 가능하다.
[안정한 약제학적 제제]
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 (A) 재조합 융합 단백질; (B) 계면활성제; (C) 당 또는 이의 유도체; 및 (D) 완충제를 포함한다.
본 출원의 명세서에서 용어 “포함하지 않음”은 해당 성분을 전혀 포함하지 않는 것을 의미한다. 또한, 해당 용어는 해당 성분을 실질적으로 포함하지 않는 것, 즉 융합단백질의 활성, 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 영향을 주지 않는 범위로 포함하는 것, 예를 들어 약제학적 제제의 전체 중량을 기준으로 0 내지 1 %(w/v), 0 내지 1 ppm(w/v) 또는 0 내지 1 ppb(w/v)로 포함하는 것을 의미한다. 상기의 약제학적 제제는 액상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
(A) 재조합 융합 단백질
본 발명의 재조합 융합 단백질은 VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) 길항제일 수 있다. 또한, 본 발명의 재조합 융합 단백질은 (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함할 수 있다. 서열번호 2의 아미노산은 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드로 암호화될 수 있다.
본 발명의 재조합 융합 단백질은 인간 VEGF 수용체 세포외 영역을 포함할 수 있고, 더 구체적으로 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 2 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 융합 단백질은 인간 면역글로블린 G(IgG)의 Fc 부위를 포함할 수도 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 융합 단백질은 애플리버셉트(Aflibercept)를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 재조합 융합 단백질의 농도는 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 100 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 95 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 90 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 85 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 80 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 75 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 70 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 65 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 60 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 55 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 50 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 45 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 40 mg/ml일 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 10 내지 100 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 10 내지 90 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 10 내지 80 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 10 내지 70 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 10 내지 60 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 10 내지 50 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 10 내지 40 mg/ml일 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 20 내지 100 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 20 내지 90 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 20 내지 80 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 20 내지 70 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 20 내지 60 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 20 내지 50 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 20 내지 40 mg/ml일 수 있다.
아울러, 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 30 내지 100 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 30 내지 90 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 30 내지 80 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 30 내지 70 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 30 내지 60 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 30 내지 50 mg/ml일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 재조합 융합 단백질의 농도는 30 내지 40 mg/ml일 수 있다.
(B) 계면활성제
계면활성제의 예는 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르 (예를 들면, 폴리소르베이트), 폴리옥시에틸렌알킬에테르 (예를 들면, Brij), 알킬페닐폴리옥시에틸렌에테르 (예를 들면, Triton-X), 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 코폴리머 (예를 들면, Poloxamer, Pluronic), 나트륨 도데실 설페이트 (SDS), 폴록사머 및 이들의 혼합물 등을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있으며, 구체적으로 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르 (폴리소르베이트), 폴록사머 또는 이들이 혼합물을 포함할 수 있다. 더욱 구체적으로, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 다른 구현예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20을 포함할 수도 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 계면활성제의 농도는 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다. 예를 들어, 계면활성제의 농도는 0.001 내지 5 %(w/v), 0.005 내지 2 %(w/v)가 바람직하며, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 1%(w/v), 0.01 내지 0.5%(w/v), 0.01 내지 0.1%(w/v) 또는 0.01 내지 0.05 %(w/v)일 수도 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
(C) 당 또는 당의 유도체
당은 단당류, 이당류, 올리고당, 다당류 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다. 단당류의 예로는 글루코스, 프룩토스, 갈락토스 등이 있으며 이에 제한되지 않는다. 이당류의 예로는 수크로오스, 락토스, 말토스, 트레할로스 등이 있으며 이에 제한되지 않는다. 올리고당의 예로는 프룩토올리고당, 갈락토올릭고당, 만난올리고당 등이 있으며 이에 제한되지 않는다. 다당류의 예로는 전분, 글리코겐, 셀룰로스, 키틴, 펙틴 등이 있으며 이에 제한되지 않는다.
당의 유도체는 당 알코올, 당 산 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 당 알코올의 예로는 글리세롤, 에리스리톨, 트레이톨, 아라비톨, 자이리톨, 리비톨, 만니톨, 소르비톨, 갈락티톨, 푸시톨, 이디톨, 이노시톨, 볼레미톨, 아이소말트, 말티톨, 락티톨, 말토트리이톨, 말토테트라이톨, 폴리글리시톨 등이 있으며 이에 제한되지 않는다. 당 산의 예로는 알돈산(글리세르산 등), 울로손산(뉴라민산 등), 우론산(글루쿠론산 등), 알다르산(타르타르산 등) 등이 있으며 이에 제한되지 않는다
본 발명의 일 구현예에서, 당 또는 이의 유도체로서 소르비톨, 만니톨, 트레할로스, 수크로오스 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 구현예에서, 당 또는 이의 유도체로서 트레할로스를 포함할 수도 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에서, 당 또는 이의 유도체의 농도는 본 발명에 따른 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다. 예를 들어, 당 또는 이의 유도체의 농도는 0.1 내지 30 %(w/v), 0.5 내지 25%(w/v)일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1 내지 20 %(w/v)일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 0.5 내지 20%(w/v) 또는 1 내지 25%(w/v)일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에 따르면 1 내지 20 %(w/v), 2 내지 15%(w/v), 4 내지 13%(w/v) 또는 8 내지 12 %(w/v)일 수 있다.
(D) 완충제
완충제는 산이나 알칼리에 의한 pH의 변화를 최소화시키는 중화성 물질이며, 완충제의 예로는 포스페이트(phosphate), 아세테이트(acetate), 숙시네이트(succinate), 글루코네이트(gluconate), 시트레이트(citrate) 뿐만 아니라, 아미노산의 종류인 글루타메이트(glutamate), 히스티딘(histidine) 등이 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 완충제로서 아미노산을 포함할 수 있으며, 더 구체적으로는 유리 아미노산, 아미노산염 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제는 히스티딘, 히스티딘염 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있으나. 이에 한정되는 것은 아니다.
완충제로서 히스티딘염을 사용하는 경우, 예를 들어, 히스티딘 클로라이드, 히스티딘 아세테이트, 히스티딘 포스페이트, 히스티딘 설페이트 등이 포함될 수 있다. 완충제로서 히스티딘을 포함하는 것이, pH 조절 및 안정성 면에서 바람직할 수도 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, pH 조절을 위해 기타의 산 종류 등을 포함할 수도 있으나, 본 발명의 일 구현예에 따르면, 아세트산, 구연산, 인산 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않는 것일 수도 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 본 발명에 따른 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 1 내지 20 mM 또는 1 내지 10 mM일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 2 내지 20 mM 또는 2 내지 10 mM일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 3 내지 20 mM 또는 3 내지 10 mM일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 4 내지 20 mM 또는 4 내지 10 mM일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 5 내지 20 mM 또는 5 내지 10 mM일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 6 내지 20 mM 또는 6 내지 10 mM일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 1 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 완충제의 함량은 6.4 내지 9.6 mM 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
(E) 등장화제
본 발명의 일 구현예에서, (E) 등장화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
등장화제는 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 본 발명에 따른 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 30 mM 이하일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 0.00001 내지 30 mM, 0.0001 내지 30 mM, 0.001 내지 30 mM, 0.01 내지 30 mM, 0.1 내지 30 mM, 또는 1 내지 30 mM, 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 0.00001 내지 30 mM, 0.00001 내지 25 mM 또는 0.00001 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 0.0001 내지 30 mM, 0.0001 내지 25 mM 또는 0.0001 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 0.001 내지 30 mM, 0.001 내지 25 mM 또는 0.001 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 0.01 내지 30 mM, 0.01 내지 25 mM 또는 0.01 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 0.1 내지 30 mM, 0.1 내지 25 mM 또는 0.1 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 1 내지 30 mM, 1 내지 25 mM 또는 1 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 2 내지 30 mM, 2 내지 25 mM 또는 2 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 3 내지 30 mM, 3 내지 25 mM 또는 3 내지 20 mM 일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 등장화제의 함량은 5 내지 18 mM, 6 내지 17mM 또는 7.2 내지 15.6 mM 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
(F) pH
본 발명의 일 구현예에서, 안정한 약제학적조성물의 pH는 5.0 내지 7.0, 5.0 내지 6.5, 5.5 내지 7.0, 또는 5.5 내지 6.5일 수 있다. pH가 이 범위 내인 경우, 장기간 안정성 및 저점도를 우수하게 나타낼 수 있다. pH는 완충제를 이용하여 조절할 수 있다. 다시 말해서, 완충제를 소정의 함량으로 포함하는 경우 별도의 pH 조절제 없이도 상기 범위의 pH를 나타낼 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서 상기 조성물은 아세트산, 구연산, 인산 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않는 것일 수 있다. 아세트산(아세테이트) 구연산(시트레이트), 인산 또는 이들의 혼합물을 완충제로 사용하는 경우 상기 범위의 pH를 나타내는 것이 어려울 수도 있다. 별도의 pH 조절제로서 산(예를 들어, 염산) 또는 염기(예를 들어, 수산화나트륨)를 추가로 포함하는 경우, 목표로 하는 재조합 융합 단백질의 안정성이 저하될 수 있다.
(G) 기타 성분
본 발명의 일 구현예에서, 안정한 약제학적 제제는 보존제를 포함하지 않을 수 있다. 보존제의 예로는 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 페놀, 부틸 알코올, 벤질 알콜, 알킬 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 시클로헥산올, 3-펜탄올, m-크레졸 등이 있다. 보존제를 포함하는 경우 안정성 개선에 도움이 되지 않을 수 있다.
또한, 본 발명의 일 구현예에서, 안정한 약제학적 제제는 NaF, KBr, NaBr, Na2SO4, NaSCN, K2SO4 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않을 수 있고, 킬레이트제를 포함하지 않는 것일 수도 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
(H) “안정한” 약제학적 제제
본 발명의 "안정한" 약제학적 제제에서 용어 “안정한”은 본 발명에 따른 재조합 융합 단백질이 제조 공정 동안 및/또는 보관/저장 시에 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 실질적으로 보유하는 것을 의미한다. 항체의 안정성을 측정하는 다양한 분석학적 기술은 당해 기술분야에서 용이하게 이용할 수 있다. 안정성은 선택된 온도에서, 선택된 기간에 대해 측정될 수 있다.
물리적 안정성은 당해 기술분야에 공지된 방법으로 평가할 수 있으며, 이러한 방법은 광(흡광 또는 광학 밀도)의 샘플 겉보기 감쇠 측정을 포함한다. 이러한 광 감쇠 측정은 제제의 탁도와 관련된다. 또한, 물리적 안정성에 대해 고분자량 성분 함량, 저분자량 성분 함량, 온전한 단백질량, 불용성 이물 입자수 등을 측정할 수 있다.
화학적 안정성은, 예를 들어, 화학적으로 변화된 형태의 재조합 융합 단백질을 검출하고 정량함으로써 평가할 수 있다. 화학적 안정성은, 예를 들어 이온 교환 크로마토그래피에 의해 평가될 수 있는 하전 변화 (예: 탈아미드화 또는 산화의 결과로서 발생)를 포함한다. 화학적 안정성에 대해 전하 변형체(산성 또는 염기성 피크) 등을 측정할 수 있다.
생물학적 활성은 당해 기술분야에 공지된 방법으로 평가할 수 있으며, 예를 들어 ELISA를 통해 항원 결합 친화도를 측정할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 용어 “안정한” 약제학적 제제는 다음 중 하나 이상을 만족하는 약제학적 제제를 의미한다.
(H)-1 탁도
- 온도 5±3℃ 조건에서 4주 동안 보관한 후 분광 광도계로 측정한 흡광도 A600이 0 내지 0.0700 또는 0 내지 0.0400인 약제학적 제제;
- 온도 10℃, 15℃, 20℃, 25℃, 30℃, 또는 35℃, 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 분광 광도계로 측정한 흡광도 A600이 0 내지 0.0700 또는 0 내지 0.0400인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 분광 광도계로 측정한 흡광도 A600이 0 내지 0.0700 또는 0 내지 0.0400인 약제학적 제제;
(H)-2 주성분 함량(메인 피크)
- 온도 5±3℃ 조건에서 9개월동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 주성분이 98 내지 99%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 주성분이 89 내지 92%인 약제학적 제제;
(H)-3 고분자량 성분(메인 피크(온전한 재조합 융합 단백질)를 기준으로 체류 시간(retention time)이 앞쪽인 피크)
- 온도 5±3℃ 조건에서 9개월 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 고분자량 성분이 98 내지 100%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 고분자량 성분이 7 내지 10%인 약제학적 제제;
(H)-4 저분자량 성분(메인 피크(온전한 재조합 융합 단백질)를 기준으로 체류 시간(retention time)이 뒷쪽인 피크)
- 온도 5±3℃ 조건에서 9개월 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 저분자량 성분이 0.0 내지 0.1%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 저분자량 성분이 0.0 내지 1.2%인 약제학적 제제;
(H)-5 온전한 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량
- 온도 5±3℃ 조건에서 9개월 동안 보관한 후 환원 CE-SDS로 측정한 온전한 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량이 96 내지 98%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 환원 CE-SDS로 측정한 온전한 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량이 90 내지 96%인 약제학적 제제;
(H)-6 불용성 이물 입자수
- 온도 5±3℃에서 9개월 동안 보관 후 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자(2.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 100개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 9개월 동안 보관 후 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자(10.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 50개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 9개월 동안 보관 후 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자(25.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 5개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자(2.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 100개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자(10.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 50개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자(25.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 5개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 9개월 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(1.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 5,000개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 9개월 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 100개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 9개월 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(25.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 15개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 1,000개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 100개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(25.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 100개인 약제학적 제제;
- 온도 5±3℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(25.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 10개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(1.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 5,000개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(1.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 2,500개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 1,000개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 100개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(25.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 100개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃에서 4주 동안 보관 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(25.00㎛≤, <100.00㎛)의 개수는 0 내지 10개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(1.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 20,000개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 70개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(25.00㎛≤, <400.00㎛)의 개수는 0 내지 15개인 약제학적 제제;
(H)-7 산화율
- 온도 5±3℃에서 4주 동안 보관한 후 LC-MS로 측정한 중쇄 Met 192의 산화율이 0 내지 7%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 LC-MS로 측정한 중쇄 Met 192의 산화율이 0 내지 6%인 약제학적 제제;
(H)-8 전하 변형체
- 온도 5±3℃에서 4주 동안 보관한 후 cIEF로 측정한 이론적인 피크4에서 피크11의 상대적인 함량이 89 내지 91%인 약제학적 제제
- 온도 5±3℃에서 9개월 동안 보관한 후 cIEF로 측정한 이론적인 피크4에서 피크11의 합이 86 내지 88%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 cIEF로 측정한 이론적인 피크4에서 피크11의 합이 86 내지 88%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 cIEF로 측정한 이론적인 피크4에서 피크11의 상대적인 함량이 86 내지 88%인 약제학적 제제
(H)-9 VEGF 결합 친화도
- 온도 5±3℃에서 9개월 동안 보관한 후 ELISA로 측정한 VEGF 결합 친화도가 75 내지 95%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 4주 동안 보관한 후 ELISA로 측정한 VEGF 결합 친화도가 60 내지 75%인 약제학적 제제;
[안정한 약제학적 제제의 제조방법]
본 발명의 안정한 약제학적 제제는 공지된 방법을 이용하여 제조할 수 있으며, 특정 방법으로 제한되지 않는다. 예를 들어, 계면활성제, 당 또는 이의 유도체 및 등장화제를 포함하는 용액에 완충제를 첨가하면서 pH를 조절한 후, 이 혼합 용액에 재조합 융합 단백질을 넣어 약제학적 제제를 제조할 수 있다. 또한, 정제 공정의 최종 단계에서 일부 부형제를 포함하는 용액을 제조한 후 나머지 성분을 첨가하여 약제학적 제제를 제조할 수 있다. 예를 들어, 정제 공정의 최종 단계에서 재조합 융합 단백질, 완충제, 당 또는 이의 유도체, 등장화제를 포함하는 용액을 제조한 후, 이 용액에 계면활성제를 첨가하여 약제학적 제제를 제조할 수 있다.
또한, 상기 제제는 제조 시 동결 건조 공정을 포함하지 않을 수 있다.
동결 건조 공정을 포함하지 않은 경우, 예를 들어, 본 발명의 약제학적 제제를 제조하고 멸균 등의 처리 후 바로 1차 포장재인 유리 바이알이나 프리-필드 시린지와 같은 밀폐 용기에 담길 수 있다.
[안정한 약제학적 제제의 사용방법]
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 VEGF의 누출로 인한 질병을 치료하는데 사용될 수 있다. VEGF 누출로 인한 질병의 예로는 신생혈관성 (습성) 연령 관련 황반변성, 망막정맥폐쇄성 (망막중심정맥폐쇄 또는 망막분지정맥폐쇄) 황반부종에 의한 시력 손상, 당뇨병성 황반부종에 의한 시력 손상, 병적근시로 인한 맥락막 신생혈관 형성에 따른 시력 손상 등이 있으며 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 1회 또는 수회 사용될 수 있으며, 투여 시에는 자격을 갖춘 안내 투여(주사) 경험이 있는 의사에 의해 투여되어야 한다.
상기 약제학적 제제 내의 재조합 융합 단백질을 비롯한 다른 성분들의 농도는 상술한 바와 같으며, 약제학적 제제의 전체 부피는 0.05 내지 0.3 ml일 수 있다.
상기 약제학적 제제의 투여량 및 투여시기는 질병의 종류, 질병의 중증도 및 경과상태, 환자의 건강 및 치료에 대한 반응, 및 치료하는 의사의 판단에 따라 달라질 수 있으며, 권장 투여량은 2 mg (약 50 마이크로 리터와 동일)로 제한되어 있지만 투여 간격 및 투여시기는 제한되지 않는다. 예를 들어, 상기 약제학적 제제를 포함하는 한 개의 제품으로 재조합 융합 단백질 농도를 기준으로 2 mg을 한 쪽 안내 투여한 후 동일한 투여량을 짧게는 2주 길게는 2개월마다 투여할 수 있다. 16주보다 긴 투여 간격은 연구되지 않았다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 사용 전에 재용해(reconstitution) 단계, 희석(dilution) 단계 또는 이들 모두를 거치지 않을 수 있다.
[치료방법 및 안정화 방법]
본 발명은 또한 VEGF 누출로 인한 질병을 갖는 환자에게 (A) 재조합 융합 단백질; (B) 계면활성제; (C) 당 또는 이의 유도체; 및 (D) 완충제를 포함한 안정한 약제학적 제제를 이용한 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 재조합 융합 단백질을 안정화하는 약제학적 제제의 조건을 제공함으로써, (A) 재조합 융합 단백질; (B) 계면활성제; (C) 당 또는 이의 유도체; 및 (D) 완충제를 포함하는 안정한 약제학적 제제의 안정화 방법을 제공한다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 상기 약제학적 제제는 액상일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) 길항제를 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 인간 VEGF 수용체 세포외 영역을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 2 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 면역글로블린 G(IgG)의 Fc 부위, 바람직하게는 인간 면역글로블린 G(IgG)의 Fc 부위를 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질은 애플리버셉트(Aflibercept)를 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (A) 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 100 mg/ml일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (B) 계면활성제는 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (B) 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (B) 계면활성제는 폴리소르베이트 20을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (B) 계면활성제의 농도는 0.01 내지 0.1 %(w/v)일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (C) 당은 단당류, 이당류, 올리고당, 다당류 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함하고, (C) 당의 유도체는 당 알코올, 당 산 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (C) 당 또는 이의 유도체는 소르비톨, 만니톨, 트레할로스, 수크로오스 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (C) 당 또는 이의 유도체는 트레할로스를 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (C) 당 또는 이의 유도체의 농도는 1 내지 20 %(w/v)일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (D) 완충제는 아미노산을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (D) 완충제는 유리 아미노산, 아미노산염 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (D) 완충제는 히스티딘, 히스티딘염 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (D) 완충제의 함량은 1 내지 20 mM일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 아세트산, 구연산, 인산 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (E) 등장화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
(E) 등장화제는 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, (E) 등장화제의 함량은 30 mM 이하일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 본 발명의 제제는 pH가 5.0 내지 7.0일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 본 발명의 제제는 NaF, KBr, NaBr, Na2SO4, NaSCN, K2SO4 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제제는 킬레이트제를 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 (A) (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함하는 재조합 융합 단백질 5 내지 100 mg/ml, (B) 계면활성제 0.01 내지 0.1 %(w/v), (C) 당 또는 이의 유도체 1 내지 20 %(w/v), 및 (D) 완충제 1 내지 20 mM를 포함할 수 있다. 상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 약제학적 제제는 (E) 등장화제 30 mM 이하를 추가로 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 약제학적 제제는 (A) VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) 길항제;(B) 폴리소르베이트; (C) 당 또는 이의 유도체; 및 (D) 히스티딘을 포함할 수 있다. 상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 약제학적 제제는 (E) 염화나트륨을 추가로 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 약제학적 제제는 (A) (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소, 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함하는 재조합 융합 단백질 5 내지 100 mg/ml; (B) 폴리소르베이트 0.01 내지 0.1 %(w/v); (C) 당 또는 이의 유도체 1 내지 20 %(w/v); 및 (D) 히스티딘 1 내지 20 mM 을 포함할 수 있다. 상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 약제학적 제제는 (E) 염화나트륨 30 mM 이하를 추가로 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 9개월 보관 시 HIAC으로 측정한, 10.00㎛ 이상 400.00㎛ 미만의 불용성 이물 입자 수가 50개 이하일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 보관 10일 후 98% 이상의 주성분 함량을 나타낼 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 보관 10일 후 1% 이하의 고분자량 성분 함량을 나타낼 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 보관 10일 후 0.05% 이하의 저분자량 성분 함량을 나타낼 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 9개월 보관 시 87.5% 이상의 전하 변형체 함량을 나타낼 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 안정한 약제학적 제제는 5±3℃ 9개월 보관 시 90% 이상의 VEGF 결합 친화도를 나타낼 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 안내 투여용, 바람직하게는 유리체내 투여용일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 사용 전에 재용해(reconstitution) 단계, 희석(dilution) 단계 또는 이들 모두를 거치지 않는 것일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 유리 바이알(vial)은 상기 안정한 약제학적 제제가 충진될 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에 따른 프리-필드 시린지(pre-filled syringe)는 상기 안정한 약제학적 제제가 충진될 수 있다.
[제품]
본 발명은 또한 상기 안정한 약제학적 제제; 및 상기 안정한 약제학적 제제를 밀폐된 상태로 수용하는 용기를 포함하는 제품을 제공한다.
상기 안정한 약제학적 제제는 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 용기는 유리, 폴리머(플라스틱), 금속 등의 물질로부터 형성될 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 용기는 병, 바이알, 카트리지, 주사기(프리-필드 시린지), 또는 튜브이며, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 용기는 유리 또는 폴리머 바이알, 또는 유리 또는 폴리머 프리-필드 시린지일 수 있다.
상기 바이알, 카트리지, 프리-필드 시린지 등의 구체적인 제품 형태와 상기 안정한 약제학적 제제를 상기 바이알, 카트리지, 프리-필드 시린지 등에 충진하는 방법은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 용이하게 입수하거나 실시할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,861,335호, 제6,331,174호 등은 프리-필드 시린지의 구체적인 제품 형태 및 충진 방법을 개시한다. 상기 바이알, 카트리지, 프리-필드 시린지 등으로서 상용화된 제품을 그대로 이용하거나, 상기 안정한 약제학적 제제의 물성, 투여부위, 투여량 등을 고려하여 별도로 주문 제작한 제품을 이용할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 제품은 상기 안정한 약제학적 제제의 사용방법, 보관방법 또는 이들 모두를 제공하는 지시사항을 더 포함할 수 있다. 상기 사용방법은 VEGF 누출로 인한 질병의 치료법을 포함하고, 투여경로, 투여량 및 투여시기를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 제품은 상업적 및 사용자 관점에서 필요한 기타 도구, 예를 들어 바늘, 주사기 등을 포함할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예
아래 실험예에서 사용된 재조합 융합 단백질과 관련하여, 셀트리온 연구소에서 배양 및 정제된 애플리버셉트를 사용하였다.
아래 실험예에서 사용된 약제학적 제제의 물리적 안정성, 화학적 안정성 및 생물학적 활성의 측정방법으로서 다음과 같은 방법을 사용하였다.
- 탁도(Turbidity)
UV-Vis 분광 광도계를 이용하여 600 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
- 주성분 함량
크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(Size Exclusion HPLC)를 이용하여 주성분 함량(main peak; %)을 측정하였다.
- 고분자량 성분 함량
크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(Size Exclusion HPLC)를 이용하여 고분자량 성분의 함량(pre-peak; %)을 측정하였다.
- 저분자량 성분 함량
크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(Size Exclusion HPLC)를 이용하여 저분자량 성분의 함량(post-peak; %)을 측정하였다.
- 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량
환원 모세관 전기이동 나트륨 도데실 설페이트(Reduced Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate; R CE-SDS)를 이용하여 온전한 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량(%)을 측정하였다.
- 불용성 이물 입자(Sub-visible particles)의 수
마이크로 플로우 이미징 (Micro Flow Imaging; MFI) 및 광 차폐형 미립자 계수기 (모델명: HIAC 9703)를 이용하여 불용성 이물 입자의 수를 측정하였다.
- 산화율(Oxidation)
질량분석을 통한 액체 크로마토그래피(LC-MS)로 펩티드 매핑(Peptide mapping)을 통해 중쇄 Met 192의 산화율(%)을 측정하였다.
- 전하 변형체 (전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11이 차지하는 상대함량)
모세관 전기영동 포커싱 (Capillary Iso-Electric Focusing, cIEF)로 산성 및 염기성 피크(%)를 측정하였다.
- VEGF 결합 친화도
효소결합면역흡착 분석법(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay; ELISA)으로 VEGF 결합 친화도(%)를 측정하였다.
실험예 1: 히스티딘 완충제의 농도에 따른 비교; pH 5.5 - pH 6.5의 비교; 염화나트륨 등장화제의 농도에 따른 비교; 트레할로스 농도에 따른 비교; 및 본 발명 제형의 우수성 확인
실험예 1에서 사용된 약제학적 제제와 관련하여, 각 완충액을 각 pH에 맞게 제조한 뒤 트레할로스와 염화나트륨을 첨가하고, 이에 재조합 융합 단백질을 첨가하고, 계면활성제를 첨가하여 표 1의 시료들을 제조하였다. 각 성분의 구체적인 함량은 표 1에 기재된 바와 같다. 실시예1-9와 비교예1은 셀트리온 연구소에서 정제된 애플리버셉트를 첨가했으며, 비교예2는 리제네론사의 아일리아 제품으로, 비교예1과 동일 약제학적 제제에 타사에서 제조한 애플리버셉트가 첨가된 시료이다. 각 시료들의 유리 바이알 충진 목표 용량은 0.278 ml이였다.
실시예 1-9 및 비교예 1-2에 따라 제조된 약제학적 제제를 5±3℃ 온도와 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도에서 보관하였고, 5±3℃ 온도에서 0주 후, 2주 후, 4주 후의 안정성 그리고 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 2주 후 및 4주 후의 안정성을 측정하였다. 결과는 표 2-15에 나타내었다.
실험예 1의 구성
구분 완충제 pH 당 등장화제 계면활성제 단백질 농도
실시예 1 히스티딘 8.0 mM 5.5 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 2 히스티딘 8.0 mM 6.0 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 3 히스티딘 8.0 mM 6.5 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 4 히스티딘 6.4 mM 6.0 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 5 히스티딘 9.6 mM 6.0 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 6 히스티딘 8.0 mM 6.0 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
10.4 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 7 히스티딘 8.0 mM 6.0 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
15.6 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 8 히스티딘 8.0 mM 6.0 트레할로스8 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 9 히스티딘 8.0 mM 6.0 트레할로스12 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
비교예 1 인산나트륨 10 mM 6.2 수크로오스5 %(w/v) 염화나트륨
40.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
비교예 2 인산나트륨 10 mM 6.2 수크로오스5 %(w/v) 염화나트륨
40.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
탁도
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 0.0154 0.0163 0.0275 0.0181 0.0143
실시예 2 0.0230 0.0196 0.0252 0.0188 0.0258
실시예 3 0.0214 0.0214 0.0207 0.0212 0.0203
실시예 4 0.0200 0.0192 0.0164 0.0283 0.0350
실시예 5 0.0156 0.0172 0.0206 0.0365 0.0245
실시예 6 0.0150 0.0163 0.0240 0.0153 0.0190
실시예 7 0.0124 0.0165 0.0162 0.0229 0.0191
실시예 8 0.0157 0.0259 0.0176 0.0194 0.0210
실시예 9 0.0126 0.0212 0.0394 0.0153 0.0379
비교예 1 0.0203 0.0197 0.0207 0.0240 0.0191
비교예 2 0.0105 0.0178 0.0170 0.0197 0.0181
표 2를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에도 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 탁도가 매우 낮아 투명한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 특히 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도 흡광도가 0.0400 이하임을 알 수 있다. 기존 제형(비교예1-2)의 결과와 유사함을 알 수 있다.
온전한 주성분 함량(메인 피크%)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 99.33 99.32 99.18 94.52 89.41
실시예 2 99.04 98.96 98.84 94.85 91.13
실시예 3 98.89 98.76 98.61 94.96 91.47
실시예 4 98.98 98.89 98.88 95.11 91.31
실시예 5 99.08 98.94 98.95 95.11 91.27
실시예 6 99.14 99.04 98.86 95.17 91.89
실시예 7 98.91 98.92 98.95 95.20 91.27
실시예 8 99.06 99.03 98.88 94.49 89.88
실시예 9 99.01 99.04 98.94 95.63 92.22
비교예 1 98.90 98.61 98.79 92.00 86.07
비교예 2 98.09 97.95 97.98 92.97 89.34
표 3을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 주성분 함량이 비교예 1-2 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 반면, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에는, 실시예 1-9의 주성분 함량이 비교예 1-2 대비 높기 때문에, 본 발명 제형이 목표 재조합 융합 단백질이 더욱 안정하게 보관 가능한, 개량된 약제학적 제제임을 알 수 있다.
고분자량 성분 함량(%)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 0.66 0.68 0.82 4.70 9.44
실시예 2 0.96 1.03 1.15 4.69 8.24
실시예 3 1.10 1.23 1.35 4.97 8.43
실시예 4 1.02 1.08 1.10 4.47 8.10
실시예 5 0.90 1.06 1.01 4.41 8.12
실시예 6 0.86 0.94 1.13 4.35 7.56
실시예 7 1.07 1.06 1.04 4.36 8.12
실시예 8 0.88 0.96 1.10 5.07 9.47
실시예 9 0.98 0.94 0.93 3.94 7.15
비교예 1 1.10 1.38 1.19 7.45 13.29
비교예 2 1.89 2.01 1.99 6.94 10.53
표 4를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 고분자량 성분 함량이 비교예 1-2 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 반면, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에는, 실시예 1-9의 고분자량 성분 함량이 비교예 1-2 대비 낮기 때문에, 본 발명 제형이 목표 재조합 융합 단백질이 더욱 안정하게 보관 가능한, 개량된 약제학적 제제임을 알 수 있다.
저분자량 성분 함량(%)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 0.02 0.00 0.01 0.77 1.15
실시예 2 0.00 0.01 0.01 0.47 0.64
실시예 3 0.01 0.01 0.04 0.08 0.10
실시예 4 0.00 0.03 0.02 0.42 0.59
실시예 5 0.02 0.00 0.03 0.48 0.62
실시예 6 0.00 0.01 0.00 0.48 0.55
실시예 7 0.01 0.02 0.01 0.43 0.61
실시예 8 0.06 0.02 0.02 0.44 0.65
실시예 9 0.01 0.01 0.13 0.43 0.63
비교예 1 0.00 0.01 0.02 0.54 0.64
비교예 2 0.02 0.04 0.03 0.09 0.13
표 5를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 저분자량 성분 함량이 비교예 1-2 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에, 실시예 2-9의 저분자량 성분 함량이 비교예 1과 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다. 반면, 실시예1을 통해 pH 5.5 조건은 저분자량 성분 함량 측면에서 비교예1-2 대비 다소 불리한 점을 확인했기 때문에 목표 pH 및 pH 범위를 조금 높여서 조정할 필요가 있다는 것을 확인하였다. pH 범위를 조정한 실험 결과는 실험예2에 포함되어 있다.
1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량(%)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 95.43 95.97 98.30 95.18 90.60
실시예 2 97.33 97.65 98.30 95.23 93.80
실시예 3 97.57 98.04 98.30 97.32 96.20
실시예 4 97.53 97.45 98.30 95.98 94.00
실시예 5 97.45 97.83 98.30 95.69 93.80
실시예 6 97.41 97.27 98.30 95.67 94.10
실시예 7 96.65 98.35 97.70 95.74 93.80
실시예 8 97.58 97.43 98.20 96.42 93.80
실시예 9 97.52 96.33 97.90 95.71 93.90
비교예 1 97.57 97.27 98.40 96.35 93.60
비교예 2 97.89 97.15 98.30 96.74 96.40
표 6을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량이 비교예 1-2 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에, 실시예 2-9의 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량이 비교예 1-2와 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다. 단, 실시예1을 통해 pH 5.5 조건은 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량 측면에서 비교예1-2 대비 다소 불리하기 때문에 목표 pH 및 pH 범위를 조금 높여서 조정할 필요가 있다는 것을 확인하였다. 해당 결과는 실험예2에 포함되어 있다.
HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수 (2.00㎛≤, <400.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 18 170 115 112 77
실시예 2 88 150 53 62 70
실시예 3 30 20 13 15 78
실시예 4 15 25 12 43 20
실시예 5 105 28 12 60 87
실시예 6 53 42 7 38 52
실시예 7 33 28 7 53 55
실시예 85 8 40 7 28 68
실시예 9 33 68 13 142 73
비교예 1 53 72 12 57 48
비교예 2 - - - - -
표 7을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(2.00㎛≤, <400.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(2.00㎛≤, <400.00㎛)가 비교예 1과 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수 (10.00㎛≤, <400.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 5 10 3 23 8
실시예 2 5 23 13 7 2
실시예 3 7 2 0 3 15
실시예 4 2 2 0 17 3
실시예 5 7 7 0 10 10
실시예 6 10 7 0 10 20
실시예 7 25 2 0 13 3
실시예 8 0 8 0 5 3
실시예 9 5 7 0 13 2
비교예 1 3 12 0 8 3
비교예 2 - - - - -
표 8을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <400.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <400.00㎛)가 비교예 1과 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수 particles/mL (25.00㎛≤, <400.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 2 0 0 2 0
실시예 2 0 5 0 0 0
실시예 3 0 0 0 2 0
실시예 4 0 0 0 2 0
실시예 5 0 3 0 0 0
실시예 6 3 0 0 0 2
실시예 7 5 0 0 2 0
실시예 8 0 2 0 0 0
실시예 9 0 3 0 0 0
비교예 1 0 0 0 0 0
비교예 2 - - - - -
표 9를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <400.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <400.00㎛)가 비교예 1과 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛. particles/mL)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 - 2596 - 2885 6418
실시예 2 8406 1116 1906 1208 6484
실시예 3 5255 7519 2436 1678 3768
실시예 4 14701 - 3744 514 8558
실시예 5 16433 1367 3819 1438 3190
실시예 6 5135 990 4996 1979 2812
실시예 7 6262 566 3459 1666 18324
실시예 8 7976 5378 4145 1559 4109
실시예 9 8554 672 4055 1609 11022
비교예 1 6996 371 3197 496 3999
비교예 2 - - - - -
표 10을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1과 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 - 126 - 31 35
실시예 2 22 5 22 10 51
실시예 3 51 27 14 20 33
실시예 4 13 - 26 8 48
실시예 5 17 9 19 15 18
실시예 6 19 26 40 31 51
실시예 7 19 7 18 22 40
실시예 8 26 17 34 20 21
실시예 9 22 18 30 96 68
비교예 1 9 13 31 4 19
비교예 2 - - - - -
표 11을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1과 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 - 5 - 11 0
실시예 2 4 0 0 0 9
실시예 3 26 3 4 3 9
실시예 4 0 - 11 4 8
실시예 5 3 0 2 2 2
실시예 6 3 6 2 4 15
실시예 7 0 0 4 7 7
실시예 8 5 2 4 0 0
실시예 9 7 4 6 7 6
비교예 1 0 3 2 0 0
비교예 2 - - - - -
표 12를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1과 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
산화율(Met192, %)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 4.9 3.5 5.1 4.0 6.1
실시예 2 5.6 4.0 4.9 4.0 4.9
실시예 3 3.8 4.6 4.1 4.1 4.9
실시예 4 4.7 4.3 6.5 4.4 4.5
실시예 5 4.4 3.8 4.4 4.6 4.6
실시예 6 4.9 3.7 3.8 5.5 5.1
실시예 7 5.2 4.7 3.7 6.6 4.7
실시예 8 4.2 5.5 5.3 4.2 4.6
실시예 9 4.1 4.7 5.3 4.5 3.9
비교예 1 4.2 3.8 4.3 4.3 5.8
비교예 2 4.6 3.2 3.7 4.0 4.4
표 13을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 산화율(Met192)이 비교예 1-2 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 산화율(Met192)이 비교예 1-2와 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
전하 변형체 (전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11의 상대적인 함량, %)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 87.3 86.4 87.1 86.3 88.3
실시예 2 90.7 87.0 87.0 86.4 86.4
실시예 3 87.4 87.1 87.3 86.0 85.3
실시예 4 89.6 86.9 87.2 86.6 87.1
실시예 5 87.9 86.8 86.7 86.6 86.8
실시예 6 87.7 86.7 86.9 86.5 85.4
실시예 7 88.8 86.8 87.2 86.7 86.6
실시예 8 88.6 86.9 87.0 86.9 87.2
실시예 9 88.7 86.7 87.3 86.8 86.5
비교예 1 88.9 87.0 86.6 86.7 86.2
비교예 2 87.5 91.0 91.3 91.3 89.9
표 14를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 전하 변형체(전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11의 상대적인 함량)가 비교예 1-2 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 전하 변형체(전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11의 상대적인 함량)가 비교예 1-2와 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
VEGF 결합 친화도(%)
구분 5±3℃
0주 후 		5±3℃
2주 후 		5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 1 82 - 86 82 59
실시예 2 89 - 78 70 73
실시예 3 91 - 79 70 74
실시예 4 98 - 72 70 69
실시예 5 90 - 82 75 75
실시예 6 95 - 81 84 74
실시예 7 89 - 83 76 63
실시예 8 99 - 73 68 59
실시예 9 96 - 81 82 60
비교예 1 99 - 89 78 78
비교예 2 97 - 92 79 78
표 15를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 모든 실시예 1-9의 VEGF 결합 친화도가 비교예 1-2 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 1-9의 VEGF 결합 친화도가 비교예 1-2와 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
실험예 2: 저분자량 함량 개선을 위한 목표 pH 및 pH 범위 조정
실험예 2에서 사용된 약제학적 제제와 관련하여, 각 완충액을 각 pH에 맞게 제조한 뒤 트레할로스와 염화나트륨을 첨가하고, 이에 재조합 융합 단백질을 첨가하고, 계면활성제를 첨가하여 하기 표 16의 시료들을 제조하였다. 각 성분의 구체적인 함량은 표 16에 기재된 바와 같다. 하기의 실시예는 셀트리온 연구소에서 정제된 애플리버셉트를 첨가했으며, 비교예1은 리제네론사의 아일리아 제품으로, 타사에서 제조한 애플리버셉트가 첨가된 시료이다. 실시예2와 실시예10의 차이는 단백질 농도이며, 실시예10-14의 차이는 pH이다. 각 시료들의 유리 바이알 충진 목표 용량은 0.278 ml이였다.
실시예 2, 10 내지 14 및 비교예 1에 따라 제조된 약제학적 제제를 5±3℃ 온도와 50±2℃ 온도에서 보관하였고, 5±3℃ 온도에서 0일 후, 10일 후의 안정성 그리고 50±2℃ 온도에서 5일 후 및 10일 후의 안정성을 측정하였다. 결과는 표 17-30에 나타내었다.
실험예 2의 구성
구분 완충제 pH 당 등장화제 계면활성제 단백질 농도
실시예 2 히스티딘 8.0 mM 6.0 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 10 히스티딘 8.0 mM 6.0 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 30
mg/mL
실시예 11 히스티딘 8.0 mM 5.5 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 30
mg/mL
실시예 12 히스티딘 8.0 mM 5.9 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 30
mg/mL
실시예 13 히스티딘 8.0 mM 6.2 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 30
mg/mL
실시예 14 히스티딘 8.0 mM 6.5 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
13.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 30
mg/mL
비교예 1 인산나트륨 10 mM 6.2 수크로오스5 %(w/v) 염화나트륨
40.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
온전한 주성분 함량(메인 피크%)
구분 5±3℃
0일 후 		5±3℃
10일 후 		50±2℃
5일 후 		50±2℃
10일 후
실시예 2 99.13 99.05 49.23 28.78
실시예 10 99.15 99.08 54.71 34.78
실시예 11 99.16 99.05 53.66 34.20
실시예 12 99.16 98.97 51.06 32.47
실시예 13 97.26 98.98 53.02 34.74
실시예 14 99.12 98.99 51.82 33.02
비교예 1 98.00 97.82 36.13 21.64
표 17을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 10일 후에 본 발명 제형의 범위를 설정하는 실시예 2, 10 내지 14의 주성분 함량이 비교예 1 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 반면, 50±2℃ 온도 조건에서 10일 후에는, 실시예 2, 10 내지 14의 주성분 함량이 비교예 1 대비 높기 때문에, 본 발명 제형이 목표 재조합 융합 단백질이 더욱 안정하게 보관 가능한, 개량된 약제학적 제제임을 알 수 있다.
고분자량 성분 함량(%)
구분 5±3℃
0일 후 		5±3℃
10일 후 		50±2℃
5일 후 		50±2℃
10일 후
실시예 2 0.84 0.92 44.81 64.84
실시예 10 0.75 0.90 39.99 59.85
실시예 11 0.81 0.90 39.27 57.98
실시예 12 0.83 0.99 43.80 62.17
실시예 13 2.70 0.98 42.91 61.49
실시예 14 0.86 0.99 45.23 63.92
비교예 1 1.98 2.15 61.70 76.09
표 18을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 10일 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 실시예 2, 10 내지 14의 고분자량 성분 함량이 비교예 1보다 낮은 것을 알 수 있다. 또한 50±2℃ 온도 조건에서 10일 후에도, 실시예 2, 10 내지 14의 고분자량 성분 함량이 비교예 1 대비 낮기 때문에, 본 발명 제형이 목표 재조합 융합 단백질이 더욱 안정하게 보관 가능한, 개량된 약제학적 제제임을 알 수 있다.
저분자량 성분 함량(%)
구분 5±3℃
0일 후 		5±3℃
10일 후 		50±2℃
5일 후 		50±2℃
10일 후
실시예 2 0.04 0.03 5.96 6.38
실시예 10 0.10 0.02 5.29 5.38
실시예 11 0.03 0.05 7.06 7.82
실시예 12 0.01 0.04 5.14 5.36
실시예 13 0.03 0.04 4.07 3.77
실시예 14 0.02 0.02 2.95 3.06
비교예 1 0.02 0.02 2.17 2.28
표 19를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 10일 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 실시예 2, 10 내지 14의 저분자량 성분 함량이 비교예 1 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 반면, 50±2℃ 온도 조건에서 10일 후에는, 실시예 2, 10 내지 14의 저분자량 성분 함량이 비교예 1보다 다소 높은 점을 알 수 있다. 실시예 11 내지 14의 저분자량 성분 함량을 보면 pH가 낮을수록 저분자량 함량이 높음을 알 수 있고, 실시예 11을 보면 pH 5.5 제형에서는 목표 pH 약제학적 제제인 실시예 13 보다 분석법 변동 수준을 넘어 약 4% 이상 저분자량 함량이 급격히 증가하는 특징을 확인할 수 있다. 따라서 본 발명 제형의 pH 범위는 5.9 내지 6.5로 설정하는 것이 보다 우수함을 확인할 수 있다.
1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량(%)
구분 5±3℃
0일 후 		5±3℃
10일 후 		50±2℃
5일 후 		50±2℃
10일 후
실시예 2 96.58 96.32 88.31 82.11
실시예 10 96.66 96.62 88.58 84.32
실시예 11 96.01 96.14 86.38 81.27
실시예 12 96.17 96.18 89.43 85.43
실시예 13 96.52 96.35 92.50 91.52
실시예 14 96.48 96.34 95.90 92.85
비교예 1 97.37 96.11 95.77 94.11
표 20을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 10일 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 실시예 2, 10 내지 14의 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량이 비교예 1 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 반면, 50±2℃ 온도 조건에서 10일 후에는, 실시예 2, 10 내지 14의 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량이 비교예 1보다 다소 낮은 점을 알 수 있다. 실시예 11 내지 14의 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량을 보면 pH가 낮을수록 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량이 낮음을 알 수 있고, 실시예 11을 보면 pH 5.5 제형에서는 목표 pH 약제학적 제제인 실시예 13보다 분석법 변동 수준을 넘어 약 10% 이상 저분자량 함량이 급격히 증가하는 특징을 확인할 수 있다. 따라서 본 발명 제형의 pH 범위는 5.9 내지 6.5로 설정하는 것이 보다 우수함을 확인하였다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0일 후 		5±3℃
10일 후 		50±2℃
5일 후 		50±2℃
10일 후
실시예 2 222 530 324 1201
실시예 10 546 84 234 430
실시예 11 198 245 1112 704
실시예 12 146 234 153 290
실시예 13 198 143 125 14709
실시예 14 157 205 231 430
비교예 1 - - - -
표 21을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 10일 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 실시예 2, 10 내지 14의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛)가 절대적으로 낮은, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 50±2℃ 온도 조건에서 10일 후에도, 실시예 2, 10 내지 14의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛)가 절대적으로 낮은, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0일 후 		5±3℃
10일 후 		50±2℃
5일 후 		50±2℃
10일 후
실시예 2 0 26 2 4
실시예 10 4 4 9 7
실시예 11 0 8 10 29
실시예 12 6 6 4 2
실시예 13 0 6 5 97
실시예 14 11 37 4 14
비교예 1 - - - -
표 22를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 10일 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 실시예 2, 10 내지 14의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛)가 절대적으로 낮은, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 50±2℃ 온도 및 조건에서 10일 후에도, 실시예 2, 10 내지 14의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛)가 절대적으로 낮은, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0일 후 		5±3℃
10일 후 		50±2℃
5일 후 		50±2℃
10일 후
실시예 2 0 2 0 0
실시예 10 0 0 0 6
실시예 11 0 4 2 8
실시예 12 4 0 0 0
실시예 13 0 0 0 10
실시예 14 3 12 2 0
비교예 1 - - - -
표 23을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 10일 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 실시예 2, 10 내지 14의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛)가 절대적으로 낮은, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 50±2℃ 온도 및 조건에서 10일 후에도, 실시예 2, 10 내지 14의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛)가 절대적으로 낮은, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
VEGF 결합 친화도 (%)
구분 5±3℃
0일 후 		5±3℃
10일 후 		50±2℃
5일 후 		50±2℃
10일 후
실시예 2 94 106 45 31
실시예 10 104 110 56 34
실시예 11 103 98 38 20
실시예 12 102 91 67 39
실시예 13 99 117 66 58
실시예 14 113 83 78 59
비교예 1 110 86 73 55
표 24를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 10일 후에, 본 발명 제형의 범위를 설정하는 실시예 2, 10 내지 14의 VEGF 결합 친화도가 비교예 1 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 반면, 50±2℃ 온도 조건에서 10일 후에는, 실시예 2, 10 내지 14 중 일부 실시예의 VEGF 결합 친화도가 비교예 1보다 다소 높은 점을 알 수 있다. 실시예 11 내지 14의 VEGF 결합 친화도를 보면 pH가 낮을수록 VEGF 결합 친화도가 낮음을 알 수 있고, 실시예 11을 보면 pH 5.5 제형에서는 목표 pH 약제학적 제제인 실시예 13보다 분석법 변동 수준을 넘어 약 38% 이상 VEGF 결합 친화도가 급격히 감소하는 특징을 확인할 수 있다. 따라서 본 발명 제형의 pH 범위는 5.9 내지 6.5로 설정하는 것이 보다 우수함을 확인할 수 있다.
실험예 3: 염화나트륨 등장화제의 농도 범위 보강을 위한 추가 비교 및 본 발명 제형의 우수성 확인
실험예 2에서 사용된 약제학적 제제와 관련하여, 각 완충액을 각 염화나트륨 농도에 맞게 제조한 뒤, 재조합 융합 단백질을 첨가하고, 계면활성제를 첨가하여 표 25의 시료들을 제조하였다. 각 성분의 구체적인 함량은 표 25에 기재된 바와 같다. 실시예15-16과 비교예 1은 셀트리온 연구소에서 정제된 애플리버셉트를 첨가된 시료이다. 각 시료들의 유리 바이알 충진 목표 용량은 0.278 ml이였다.
실시예 15-16 및 비교예 1에 따라 제조된 약제학적 제제를 5±3℃ 온도와 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도에서 보관하였고, 5±3℃ 온도에서 4주 후의 안정성 그리고 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 2주 후 및 4주 후의 안정성을 측정하였다. 결과는 표 26-31에 나타내었다.
실험예 3의 구성
구분 완충제 pH 당 등장화제 계면활성제 단백질 농도
실시예 15 히스티딘 8.0 mM 6.2 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
0.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
실시예 16 히스티딘 8.0 mM 6.2 트레할로스10 %(w/v) 염화나트륨
7.2 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
비교예 1 인산나트륨 10 mM 6.2 수크로오스5 %(w/v) 염화나트륨
40.0 mM		 폴리소르베이트 20
0.03 %(w/v)		 40
mg/mL
탁도
구분 5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 15 0.0048 0.0065 0.0052
실시예 16 0.0034 0.0064 0.0127
비교예 1 0.0078 0.0095 0.0103
표 26을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에도 저농도 염화나트륨 조건의 실시예 15-16의 탁도가 매우 낮아 투명한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 특히 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도 흡광도가 0.0400 이하임을 알 수 있다. 기존 제형(비교예1)의 결과와 유사함을 알 수 있다.
전하 변형체 (전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11의 상대적인 함량, %)
구분 5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 15 89.9 - 86.9
실시예 16 89.6 - 87.7
비교예 1 90.3 - 86.2
표 27을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 저농도 염화나트륨 조건의 실시예 15-16의 전하 변형체(전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11의 상대적인 함량)가 비교예 1 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 15-16의 전하 변형체(전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11의 상대적인 함량)가 비교예 1과 유사한 수준인 약제학적 제제임을 알 수 있다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 15 2770 1935 2184
실시예 16 2504 985 1355
비교예 1 1399 6004 9586
표 28을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 저농도 염화나트륨 조건의 실시예 15-16의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 15-16의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(1.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1보다 절대적으로 낮은, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 15 77 28 61
실시예 16 64 0 22
비교예 1 24 216 731
표 29를 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 저농도 염화나트륨 조건의 실시예 15-16의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 15-16의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1보다 절대적으로 낮은, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 15 9 7 8
실시예 16 6 0 0
비교예 1 2 4 7
표 30을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 저농도 염화나트륨 조건의 실시예 15-16의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1 결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 15-16의 MFI로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <100.00㎛)가 비교예 1결과와 유사한, 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
VEGF 결합 친화도 (%)
구분 5±3℃
4주 후 		40±2℃, 75±5%
2주 후 		40±2℃, 75±5%
4주 후
실시예 15 105 95 87
실시예 16 101 96 68
비교예 1 99 85 72
표 31을 보면, 5±3℃ 온도조건에서 4주 후에, 저농도 염화나트륨 조건의 실시예 15-16의 VEGF 결합 친화도가 비교예 1 결과와 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다. 또한, 40±2℃ 온도 및 75±5%의 상대습도 조건에서 4주 후에도, 실시예 15-16의 VEGF 결합 친화도가 비교예 1과 유사한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
실험예 4: 실시예 13의 장기간 안정성 평가에 따른 본 발명 제형의 우수성 확인
실시예 13의 장기간　안정성　평가를 ICH(International Conference on Harmonisation)에서 제공한 가이드라인(Guideline Q5C Quality of Biotechnological Products: Stability Testing of Biotechnological 또는 Biological Products and ICH Guideline Q1A (R2): Stability Testing of New Drug Substances and Drug Products)에　따라　실시하였다.
상기 실험예 1의 방법으로 제조한 실시예 13의 안정한 액체 약제학적 제제 0.278 mL을 5±3℃/주변 상대 습도에서 밀폐 용기에 보관하였다. 상기 온도 및 습도에서 0개월, 3개월, 6개월 및 9개월 후 안정성을 확인하였다. 단, 단백질 농도 조건은 40 mg/mL로 수행하였다.
실시예 13의 장기간 안정성을 확인하기 위하여, 외관 분석, SoloVPE를 이용한 단백질 농도 측정, SEC-HPLC를 이용한 주성분, 고분자량, 저분자량 함량 측정, 환원 CE-SDS를 이용한 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부 (1VEGF + 1VEGF2 + Fc)의 함량 측정, cIEF를 이용한 전하 변형체 (전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11이 차지하는 상대함량) 측정 그리고 VEGF 결합 친화도, 불용성 이물 입자 (Sub-visible particles)의 수를 측정하였으며 그 결과를 표 32에서 41로 나타내었다.
외관
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 유백색 유백색 유백색 유백색
표 32를 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 외관상의 변화 없이 안정한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
단백질 농도 (mg/ml)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 39.1 39.9 39.7 42.4
표 33을 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 단백질 농도의 변화 없이 안정한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
고분자량 성분 함량 (%)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 0.42 0.72 0.48 0.63
표 34를 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 고분자량 성분 함량이 변화 없이 안정한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
저분자량 성분 함량(%)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 0.24 0.00 0.00 0.00
표 35를 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 저분자량 성분 함량이 변화 없이 안정한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량(%)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 97.42 97.48 97.40 97.37
표 36을 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 1개 재조합된 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 2 및 재조합된 인간 IgG의 Fc 일부(1VEGF1 + 1VEGF2 + Fc)의 함량이 변화 없이 안정한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(2.00㎛≤, <400.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 - 185 172 297
표 37을 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 불용성 이물 입자의 수(2.00㎛≤, <400.00㎛)가 낮은 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <400.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 8 3 8 33
표 38을 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 불용성 이물 입자의 수(10.00㎛≤, <400.00㎛)가 낮은 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
HIAC으로 측정한 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <400.00㎛, particles/mL)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 0 0 0 5
표 39를 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 불용성 이물 입자의 수(25.00㎛≤, <400.00㎛)가 낮은 매우 깨끗한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
전하 변형체(전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11의 상대적인 함량, %)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 87.9 87.6 88.0 87.5
표 40을 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 전하 변형체(전체 12개 피크 중 피크4에서 피크11의 상대적인 함량) 함량이 변화없이 안정한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
VEGF 결합 친화도 (%)
구분 5±3℃
0 개월 		5±3℃
3 개월 후 		5±3℃
6 개월 후 		5±3℃
9 개월 후
실시예 13 112 106 98 92
표 41을 보면, 실시예 13은 장기보관 온도조건에서 9개월 후에도 VEGF 결합 친화도가 변화 없이 안정한 약제학적 제제임을 알 수 있다.
<110> CELLTRION, INC. <120> Stable Pharmaceutical Formulation <130> CPD2021054KR <150> KR 10-2020-0096434 <151> 2020-07-31 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1377 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 atggtcagct actgggacac cggggtcctg ctgtgcgcgc tgctcagctg tctgcttctc 60 acaggatcta gttccggaag tgataccggt agacctttcg tagagatgta cagtgaaatc 120 cccgaaatta tacacatgac tgaaggaagg gagctcgtca ttccctgccg ggttacgtca 180 cctaacatca ctgttacttt aaaaaagttt ccacttgaca ctttgatccc tgatggaaaa 240 cgcataatct gggacagtag aaagggcttc atcatatcaa atgcaacgta caaagaaata 300 gggcttctga cctgtgaagc aacagtcaat gggcatttgt ataagacaaa ctatctcaca 360 catcgacaaa ccaatacaat catagatgtg gttctgagtc cgtctcatgg aattgaacta 420 tctgttggag aaaagcttgt cttaaattgt acagcaagaa ctgaactaaa tgtggggatt 480 gacttcaact gggaataccc ttcttcgaag catcagcata agaaacttgt aaaccgagac 540 ctaaaaaccc agtctgggag tgagatgaag aaatttttga gcaccttaac tatagatggt 600 gtaacccgga gtgaccaagg attgtacacc tgtgcagcat ccagtgggct gatgaccaag 660 aagaacagca catttgtcag ggtccatgaa aaggacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1020 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080 accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1260 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatga 1377 <210> 2 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Met Val Ser Tyr Trp Asp Thr Gly Val Leu Leu Cys Ala Leu Leu Ser 1 5 10 15 Cys Leu Leu Leu Thr Gly Ser Ser Ser Gly Ser Asp Thr Gly Arg Pro 20 25 30 Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu 35 40 45 Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr 50 55 60 Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys 65 70 75 80 Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr 85 90 95 Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His 100 105 110 Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile 115 120 125 Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu 130 135 140 Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile 145 150 155 160 Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu 165 170 175 Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe 180 185 190 Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu 195 200 205 Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr 210 215 220 Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 225 230 235 240 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 245 250 255 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 260 265 270 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 275 280 285 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 290 295 300 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 305 310 315 320 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 325 330 335 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 340 345 350 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 355 360 365 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 370 375 380 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 385 390 395 400 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 405 410 415 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 420 425 430 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 435 440 445 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455

Claims (44)

  1. (A) 재조합 융합 단백질;
    (B) 계면활성제;
    (C) 당 또는 이의 유도체; 및
    (D) 완충제를 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 약제학적 제제는 액상임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  3. 제1항에 있어서,
    (A) 재조합 융합 단백질은 VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) 길항제임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  4. 제1항에 있어서,
    (A) 재조합 융합 단백질은 인간 VEGF 수용체 세포외 영역을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  5. 제1항에 있어서,
    (A) 재조합 융합 단백질은 인간 VEGF 수용체 세포외 영역 1, 2 또는 이들의 혼합물을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서,
    (A) 재조합 융합 단백질은 인간 면역글로블린 G(IgG)의 Fc 부위를 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  7. 제1항에 있어서,
    (A) 재조합 융합 단백질은
    (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소;
    (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소; 및
    (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  8. 제1항에 있어서,
    (A) 재조합 융합 단백질은 애플리버셉트(Aflibercept)를 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  9. 제1항에 있어서,
    (A) 재조합 융합 단백질의 농도는 5 내지 100 mg/ml임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  10. 제1항에 있어서,
    (B) 계면활성제는 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 이들의 혼합물을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  11. 제10항에 있어서,
    (B) 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  12. 제11항에 있어서,
    (B) 계면활성제는 폴리소르베이트 20을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  13. 제1항에 있어서,
    (B) 계면활성제의 농도는 0.01 내지 0.1 %(w/v)임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  14. 제1항에 있어서,
    (C) 당은 단당류, 이당류, 올리고당, 다당류 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함하고, (C) 당의 유도체는 당 알코올, 당 산 또는 이들의 혼합물을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  15. 제1항에 있어서,
    (C) 당 또는 이의 유도체는 소르비톨, 만니톨, 트레할로스, 수크로오스 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  16. 제15항에 있어서,
    (C) 당 또는 이의 유도체는 트레할로스를 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  17. 제1항에 있어서,
    (C) 당 또는 이의 유도체의 농도는 1 내지 20 %(w/v)임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  18. 제1항에 있어서,
    (D) 완충제는 아미노산을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  19. 제1항에 있어서,
    (D) 완충제는 유리 아미노산, 아미노산염 또는 이들의 혼합물을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  20. 제19항에 있어서,
    (D) 완충제는 히스티딘, 히스티딘염 또는 이들의 혼합물을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  21. 제1항에 있어서,
    (D) 완충제의 함량은 1 내지 20 mM임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  22. 제1항에 있어서,
    아세트산, 구연산, 인산 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  23. 제1항에 있어서,
    (E) 등장화제를 추가로 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  24. 제23항에 있어서,
    (E) 등장화제는 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  25. 제23항에 있어서,
    (E) 등장화제의 함량은 30 mM 이하임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  26. 제1항에 있어서,
    pH가 5.0 내지 7.0임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  27. 제1항에 있어서,
    NaF, KBr, NaBr, Na2SO4, NaSCN, K2SO4 또는 이들의 혼합물을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  28. 제1항에 있어서,
    킬레이트제를 포함하지 않는 것을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  29. (A) (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소, 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함하는 재조합 융합 단백질 5 내지 100 mg/ml;
    (B) 계면활성제 0.01 내지 0.1 %(w/v);
    (C) 당 또는 이의 유도체 1 내지 20 %(w/v); 및
    (D) 완충제 1 내지 20 mM
    을 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  30. 제29항에 있어서,
    (E) 등장화제 30 mM 이하를 추가로 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  31. (A) VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) 길항제;
    (B) 폴리소르베이트;
    (C) 당 또는 이의 유도체; 및
    (D) 히스티딘
    을 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  32. 제31항에 있어서,
    (E) 염화나트륨을 추가로 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  33. (A) (1) 서열번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 1 요소, (2) 서열번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGF 수용체 세포외 영역 2 요소, 및 (3) 서열번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 Fc 부위 요소를 포함하는 재조합 융합 단백질 5 내지 100 mg/ml;
    (B) 폴리소르베이트 0.01 내지 0.1 %(w/v);
    (C) 당 또는 이의 유도체 1 내지 20 %(w/v); 및
    (D) 히스티딘 1 내지 20 mM
    을 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  34. 제33항에 있어서,
    (E) 염화나트륨 30 mM 이하를 추가로 포함함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    5±3℃ 9개월 보관 시 HIAC으로 측정한, 10.00㎛ 이상 400.00㎛ 미만의 불용성 이물 입자 수가 50개 이하인, 안정한 약제학적 제제.
  36. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    5±3℃ 보관 10일 후 98% 이상의 주성분 함량을 나타내는, 안정한 약제학적 제제.
  37. 제 1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    5±3℃ 보관 10일 후 1% 이하의 고분자량 성분 함량을 나타내는, 안정한 약제학적 제제.
  38. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    5±3℃ 보관 10일 후 0.05% 이하의 저분자량 성분 함량을 나타내는, 안정한 약제학적 제제.
  39. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    5±3℃ 9개월 보관 시 87% 이상의 전하 변형체 함량을 나타내는, 안정한 약제학적 제제.
  40. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    5±3℃ 9개월 보관 시 90% 이상의 VEGF 결합 친화도를 나타내는, 안정한 약제학적 제제.
  41. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    안내(intraocular) 투여용임을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  42. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    사용 전에 재용해(reconstitution) 단계, 희석(dilution) 단계 또는 이들 모두를 거치지 않는 것을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  43. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 기재된 안정한 약제학적 제제가 충진된 유리 바이알(vial).
  44. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 기재된 안정한 약제학적 제제가 충진된 프리-필드 시린지(pre-filled syringe).

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