JP2023528117A - 単一アームＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体および腎臓疾患または状態を処置するための方法 - Google Patents

単一アームＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体および腎臓疾患または状態を処置するための方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023528117A
JP2023528117A JP2022554931A JP2022554931A JP2023528117A JP 2023528117 A JP2023528117 A JP 2023528117A JP 2022554931 A JP2022554931 A JP 2022554931A JP 2022554931 A JP2022554931 A JP 2022554931A JP 2023528117 A JP2023528117 A JP 2023528117A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
subject
creatinine
actriib
actriia
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022554931A
Other languages
English (en)
Inventor
ガン リー，
ラビンドラ クマール，
Original Assignee
アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド filed Critical アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド
Publication of JP2023528117A publication Critical patent/JP2023528117A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1796—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2006—IL-1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

一部の態様では、本開示は、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体および単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体、ならびにそのようなヘテロ多量体を使用して、腎臓疾患または状態を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減する方法、特に、１つまたは複数の腎臓関連合併症を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減する方法に関する。本開示は、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を使用して、限定されるものではないが、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、および／または慢性腎臓病を含む各種の状態を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減する方法も提供する。

Description

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０２０年３月１３日に出願された米国仮出願第６２／９８９，０３７号の利益およびそれに対する優先権を主張する。前述の出願は、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
発明の背景
腎臓疾患は、腎臓機能の喪失をもたらし得る、一部の場合では致死的であり得る、ある範囲の状態を含む。正常に機能している腎臓は、老廃物および過剰な体液を血液から濾過し、これらは、次いで、尿中に***される。例えば、慢性腎臓病が進行期に至ると、危険なレベルの体液、電解質および老廃物が、血流中で増大し得る。未処置のままにすると、腎臓疾患は、末期腎疾患（例えば、末期腎不全）へと進行し得、これは、人工の濾過（透析）または腎臓移植なしでは致死的である。そのため、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置するための有効な療法に対する満たされていない高い必要性が存在する。
発明の概要
一部分では、本開示は、単一ＡｃｔＲＩＩＡまたは単一ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、例えば、その断片およびバリアントを含む単一アームヘテロ多量体複合体を提供する。これらの構築物は、本明細書では、単一アームヘテロ多量体、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体またはヘテロ二量体、および単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体またはヘテロ二量体と称されることがある。必要に応じて、本明細書に開示される単一アームポリペプチドヘテロ多量体（例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体、例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物）は、対応するヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物）と比較して、異なるリガンド結合特異性／プロファイルを有する。新規の特性は、本明細書の実施例によって示されるように、ＡｃｔＲＩＩＡの単一ドメインまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの単一ドメインを含むヘテロ多量体によって示される。
ヘテロ多量体構造としては、例えば、ヘテロ二量体、ヘテロ三量体、およびより高次の複合体が挙げられる。好ましくは、本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、受容体のリガンド結合性ドメイン、例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ受容体の細胞外ドメインを含む。したがって、ある特定の態様では、本明細書に記載されるヘテロ多量体は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの細胞外ドメイン、ならびにその切断体およびバリアントを含む。好ましくは、本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、およびそれを含むヘテロ多量体は可溶性である。ある特定の態様では、本開示のヘテロ多量体は、１種または複数のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０）に結合する。必要に応じて、本開示のタンパク質複合体は、１０－８、１０－９、１０－１０、１０－１１、もしくは１０－１２未満の、またはそれに等しいＫＤでこれらのリガンドのうちの１種または複数に結合する。一般に、本開示の単一アームヘテロ多量体は、少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドの１つまたは複数の活性をアンタゴナイズ（阻害）し、そのような活性の変更は、例えば、本明細書に記載される細胞に基づくアッセイを含む、当技術分野において公知のさまざまなアッセイを使用して測定され得る。好ましくは、本開示の単一アームヘテロ多量体は、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）において、少なくとも４、６、１２、２４、３６、４８、または７２時間の血清半減期を示す。必要に応じて、本開示の単一アームヘテロ多量体は、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）において、少なくとも６、８、１０、１２、１４、２０、２５、または３０日の血清半減期を示し得る。
一部分では、本開示は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置するために使用することができるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ単一アームヘテロ多量体を提供する。ＵＵＯおよびＣｏｌ４ａ３（－／－）アルポート症候群モデルにおいて、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体について、プラス効果が観察された。本開示は、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢ）シグナル伝達経路のアンタゴニストを使用して、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）の重症度を低減し得ること、および望ましい治療剤が、ＡｃｔＲＩＩシグナル伝達アンタゴニスト活性に基づいて選択され得ることを確立する。したがって、一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、および慢性腎臓病を含む腎臓疾患または状態を処置するために、さまざまな単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を使用するための方法を提供し、例えば、１種または複数のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド［例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ６、ＢＭＰ５、およびＢＭＰ１０］を阻害する単一アームヘテロ多量体を含む。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する方法であって、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する方法であって、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含み、ヘテロ多量体が、第２のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含み、第１のポリペプチドが、相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列およびＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩＢを含まない、方法を提供する。
一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１、２、３、４、５、および６のうちのいずれかの配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または配列番号１のアミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、もしくは２９のうちのいずれか１つで開始し、配列番号１のアミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、もしくは１３４のうちのいずれか１つで終了するポリペプチドと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、ここで、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に対して７９位に酸性アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のＬ７９に対応する位置に酸性アミノ酸を含まない。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のＬ７９に対応する位置にアスパラギン酸（Ｄ）を含まない。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する方法であって、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する方法であって、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含み、ヘテロ多量体が、第２のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含み、第１のポリペプチドが、相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列およびＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩＡを含まない、方法を提供する。
一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９、１０および１１のうちのいずれかの配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または配列番号９のアミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０のうちのいずれか１つで開始し、配列番号９のアミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、もしくは１３５のうちのいずれか１つで終了するポリペプチドと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
本開示の一部の実施形態では、ヘテロ多量体は、ヘテロ二量体である。
本開示の一部の実施形態では、相互作用対の第１のメンバーは、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、第１の免疫グロブリンＦｃドメインである。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号１４～２８のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示の一部の実施形態では、相互作用対の第２のメンバーは、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、第１の免疫グロブリンＦｃドメインである。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号１４～２８のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示の一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号４６、４８、５５、５７、５８、５９、６０、６１、８４、８６、８８、８９、９０、および９１のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号４９、５１、６２、６３、８５、および８７のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示の一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと相互作用対の第１のメンバーとの間に位置するリンカードメインを含む。一部の実施形態では、リンカードメインは、配列番号２９～４４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
本開示の一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドと相互作用対の第１のメンバーとの間に位置するリンカードメインを含む。一部の実施形態では、リンカードメインは、配列番号２９～４４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
本開示の一部の実施形態では、第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドは、グリコシル化アミノ酸、ペグ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸、および有機誘導体化剤にコンジュゲートされたアミノ酸から選択される１つまたは複数の修飾アミノ酸残基を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドは、グリコシル化され、ＣＨＯ細胞における第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドの発現から得ることが可能なグリコシル化パターンを有する。
一部の実施形態では、ヘテロ多量体（例えば、ヘテロ二量体Ｆｃ融合物）は、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０からなる群から選択されるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドのうちの１種または複数に結合する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物よりも高いリガンド選択性を有する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物は、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、およびＢＭＰ１０に強く結合する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に強く結合し、かつＧＤＦ８およびアクチビンＡに中程度で結合する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＢＭＰ１０への弱い結合、最小限の結合、または検出されない結合を示す。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、およびＧＤＦ１１をアンタゴナイズし、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ６、およびＧＤＦ３のうちの１種または複数を最小限でアンタゴナイズする。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＧＤＦ１１よりもアクチビンＡに対してより高く増強された選択性と組み合わされて、アクチビンＢよりもアクチビンＡへの優先的な結合を示す。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物で観察されたように、ＧＤＦ８およびＢＭＰ１０への中間の結合を主に保持する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＧＤＦ１１のアンタゴニズムを最小限にするがアクチビンＢよりも優先的にアクチビンＡをアンタゴナイズすることが望ましい治療的適用において利用される。本開示の一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、細胞に基づくアッセイにおいて、１種または複数のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドの活性を阻害する。
本開示の一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、アルポート症候群である。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）である。一部の実施形態では、ＦＳＧＳは、原発性ＦＳＧＳである。一部の実施形態では、ＦＳＧＳは、続発性ＦＳＧＳである。一部の実施形態では、ＦＳＧＳは、遺伝性ＦＳＧＳである。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）である。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、常染色体劣性多発性嚢胞腎（ＡＲＰＫＤ）である。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）である。
一部の実施形態では、本開示の方法は、腎臓疾患または状態を処置するための追加の活性薬剤および／または支持療法を対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を処置するための追加の活性薬剤および／または支持療法は、アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）（例えば、ロサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、フィマサルタン、アジルサルタン、サルプリサルタン（salprisartan）、およびテルミサルタン）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えば、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、ラミプリル、トランドラプリル、およびゾフェノプリル）、グルココルチコイド（例えば、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、およびトリアムシノロン）、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス）、シクロホスファミド、クロラムブシル、ヤヌスキナーゼ阻害剤（例えば、トファシチニブ）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、シロリムス、エベロリムス）、ＩＭＤＨ阻害剤（例えば、アザチオプリン、レフルノミド、ミコフェノレート）、生物製剤（例えば、アバタセプト、アダリムマブ、アナキンラ、バシリキシマブ、セルトリズマブ、ダクリズマブ、エタネルセプト、フレソリムマブ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、セクキヌマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、ベドリズマブ）、スタチン（例えば、ベナゼプリル、バルサルタン、フルバスタチン、プラバスタチン）、ラデミルセン（抗ｍｉＲＮＡ－２１）、バルドキソロンメチル、Ａｃｈｔａｒゲル、トルバプタン、スパルセンタンと組み合わせたアバタセプト、アリスキレン、アロプリノール、ＡＮＧ－３０７０、アトルバスタチン、ブレセルマブ、ボスチニブ、ＣＣＸ１４０－Ｂ、ＣＸＡ－１０、Ｄ６－２５－ヒドロキシビタミンＤ３、ダパグリフロジン、ＭＭＦと組み合わせたデキサメタゾン、エモジン、ＦＧ－３０１９、ＦＫ５０６、ＦＫ－５０６およびＭＭＦ、ＦＴ－０１１、ガラクトース、ＧＣ１００８、ＧＦＢ－８８７、イソトレチノイン、ランレオチド、レバミゾール、リキシバプタン、ロスマピモド、メトホルミン、ミゾリビン（mizorbine）、Ｎ－アセチルマンノサミン、オクトレオチド、パリカルシトール、ＰＦ－０６７３０５１２、ピオグリタゾン、プロパゲルマニウム、プロパゲルマニウムおよびイルベサルタン、ラパミューン、ラパマイシン、ＲＥ－０２１（例えば、スパルセンタン）、ＲＧ０１２、ロシグリタゾン（例えば、Ａｖａｎｄｉａ）、サキナビル（saquinivir）、ＳＡＲ３３９３７５、ソマトスタチン、スピロノラクトン、テセバチニブ（ＫＤ０１９）、テトラコサクチン、ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ（ＴＷ）、バルプロ酸、ＶＡＲ－２００、ベングルスタット（ＧＺ４０２６７１）、ベリヌラド、ボクロスポリン、ＶＸ－１４７、腎臓透析、腎臓移植、間葉系幹細胞療法、骨髄幹細胞、リポタンパク質除去、Ｌｉｐｏｓｏｒｂｅｒ ＬＡ－１５デバイス、プラスマフェレーシス、血漿交換、ならびに食事の変更（例えば、食事によるナトリウム摂取）からなる群から選択される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を処置するための追加の活性薬剤および／または支持療法は、ロサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、フィマサルタン、アジルサルタン、サルプリサルタン、およびテルミサルタンからなる群から選択されるアンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）である。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を処置するための追加の活性薬剤および／または支持療法は、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、ラミプリル、トランドラプリル、およびゾフェノプリルからなる群から選択されるアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤である。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を処置するための追加の活性薬剤および／または支持療法は、ＡＲＢおよびＡＣＥ阻害剤の組合せである。
一部の実施形態では、本開示の方法は、それを必要とする対象におけるアルブミン尿、タンパク尿、微量アルブミン尿、および顕性アルブミン尿のうちの１つまたは複数の重症度、発生、および／または期間を低減する。本開示の一部の実施形態では、対象は、タンパク尿を有する。一部の実施形態では、対象は、アルブミン尿を有する。一部の実施形態では、対象は、中等度のアルブミン尿を有する。一部の実施形態では、対象は、重度のアルブミン尿を有する。一部の実施形態では、対象は、２４時間の採尿あたり約３０～約３００ｍｇアルブミンのアルブミン－クレアチニン比（ＡＣＲ）を有する。一部の実施形態では、対象は、約３０～約３００ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンのＡＣＲを有する。一部の実施形態では、対象は、約３００ｍｇアルブミン／２４時間を上回るアルブミン－クレアチニン比（ＡＣＲ）を有する。一部の実施形態では、対象は、約３００ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンを上回るＡＣＲを有する。一部の実施形態では、対象は、ステージＡ１のアルブミン尿を有する。一部の実施形態では、対象は、ステージＡ２のアルブミン尿を有する。一部の実施形態では、対象は、ステージＡ３のアルブミン尿を有する。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ１のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ２のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ３のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージＡ１のアルブミン尿を有する対象のステージＡ２のアルブミン尿への進行を遅延させるか、または予防する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージＡ２を有する対象のステージＡ３のアルブミン尿への進行を遅延させるか、または予防する。一部の実施形態では、本開示の方法は、それを必要とする対象におけるアルブミン尿のステージの進行の悪化を遅延させるか、または予防する。一部の実施形態では、本開示の方法は、対象におけるアルブミン尿の分類を１つまたは複数のステージ分改善する。
一部の実施形態では、本開示の方法は、対象のＡＣＲを低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、約０．１～約１００．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン（例えば、約０．１～約２．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約２．５～約３．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約３．５～約５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約５．０～約７．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約７．５～約１０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約１０．０～約１５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約１５．０～約２０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約２０．０～約２５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約３０．０～約３５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約４０．０～約４５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約４５．０～約５０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約５０．０～約６０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約６０．０～約７０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約７０．０～約８０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約８０．０～約９０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約９０．０～約１００．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン）低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減する。
一部の実施形態では、本開示の方法は、対象の尿タンパク質－クレアチニン比（ＵＰＣＲ）を低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約０．１～約１００．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン（例えば、約０．１～約２．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約２．５～約３．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約３．５～約５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約５．０～約７．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約７．５～約１０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約１０．０～約１５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約１５．０～約２０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約２０．０～約２５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約３０．０～約３５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約４０．０～約４５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約４５．０～約５０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約５０．０～約６０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約６０．０～約７０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約７０．０～約８０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約８０．０～約９０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約９０．０～約１００．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン）低減する。
一部の実施形態では、本開示の方法は、対象の尿タンパク質－クレアチニン比（ＵＰＣＲ）を低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約０．１～約１００．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン（例えば、約０．１～約２．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約２．５～約３．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約３．５～約５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約５．０～約７．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約７．５～約１０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約１０．０～約１５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約１５．０～約２０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約２０．０～約２５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約３０．０～約３５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約４０．０～約４５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約４５．０～約５０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約５０．０～約６０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約６０．０～約７０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約７０．０～約８０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約８０．０～約９０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約９０．０～約１００．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン）低減する。一部の実施形態では、方法は、対象の絶対ＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニンより高く、またはそれと等しく低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン未満に低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．３ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン未満に低減する。
一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、３０％より高く、またはそれと等しく低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、４０％より高く、またはそれと等しく低減する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、５０％より高く、またはそれと等しく低減する。
一部の実施形態では、本開示の方法は、対象の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）および／または糸球体濾過量（ＧＦＲ）を増加させる。一部の実施形態では、ｅＧＦＲは、血清クレアチニン、年齢、民族性、および性別の変数を使用して測定される。一部の実施形態では、ｅＧＦＲは、コッククロフトゴールト式、腎臓疾患における食事の修飾（ＭＤＲＤ）式、ＣＫＤ－ＥＰＩ式、Ｍａｙｏの二次方程式の解の公式、およびシュワルツ式のうちの１つまたは複数を使用して測定される。一部の実施形態では、ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲは、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）増加する。一部の実施形態では、ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲは、ベースライン測定値と比較して、３０％より高く、またはそれと等しく増加する。一部の実施形態では、ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲは、ベースライン測定値と比較して、４０％より高く、またはそれと等しく増加する。
一部の実施形態では、ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲは、ベースライン測定値と比較して、約１ｍＬ／分／１．７３ｍ２（例えば、３、５、７、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍＬ／分／１．７３ｍ２）増加する。一部の実施形態では、ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲは、ベースライン測定値と比較して、約１ｍＬ／分／年（例えば、２、３、５、７、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍＬ／分／年）増加する。一部の実施形態では、ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲは、ベースライン測定値と比較して、１ｍＬ／分／年より高く、またはそれと等しく増加する。一部の実施形態では、ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲは、ベースライン測定値と比較して、３ｍＬ／分／年より高く、またはそれと等しく増加する。
本開示の一部の実施形態では、対象の腎臓疾患または状態は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のステージにおいて評価される。一部の実施形態では、対象は、ステージ１の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ２の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ３の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ４の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ５の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ１のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ２のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ３のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ３ａのＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ３ｂのＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ４のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ５のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ１のＣＫＤを有する対象のステージ２のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ２のＣＫＤを有する対象のステージ３のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ２のＣＫＤを有する対象のステージ３ａのＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ３ａのＣＫＤを有する対象のステージ３ｂのＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ３のＣＫＤを有する対象のステージ４のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ３ｂのＣＫＤを有する対象のステージ４のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、ステージ４のＣＫＤを有する対象のステージ５のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、それを必要とする対象におけるＣＫＤのステージの進行の悪化を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、対象における腎臓損傷のＣＫＤの分類を１つまたは複数のステージ分改善する。
一部の実施形態では、本開示の方法は、対象における総腎臓体積を低減する。一部の実施形態では、総腎臓体積は、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減される。
一部の実施形態では、本開示の方法は、対象の血中尿素窒素（ＢＵＮ）を低減する。一部の実施形態では、ＢＵＮは、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減される。
一部の実施形態では、本開示の方法は、対象における尿好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ｕＮＧＡＬ）濃度を低減する。一部の実施形態では、ｕＮＧＡＬは、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減される。一部の実施形態では、対象は、急性腎傷害の低リスクの指標である＜５０ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値を有する。一部の実施形態では、対象は、急性腎傷害の多義的なリスクの指標である約５０～約１４９ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値を有する。一部の実施形態では、対象は、急性腎傷害の中程度のリスクの指標である約１５０～約３００ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値を有する。一部の実施形態では、対象は、急性腎傷害の高リスクの指標である＞３００ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値を有する。本開示の一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを約０．１～約３００．０ｎｇ／ｍＬ（例えば、約０．１～約５０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約１００．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約１５０．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約２００．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約２５０．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約３００．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約２５ｎｇ／ｍＬ、約２５～約５０ｎｇ／ｍＬ、約５０～約１００ｎｇ／ｍＬ、約１００～約１５０ｎｇ／ｍＬ、約１５０～約２００ｎｇ／ｍＬ、約２００～約２５０ｎｇ／ｍＬ、約２５０～約３００ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬより高く）低減する。
一部の実施形態では、本開示の方法は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）の臨床的悪化を予防するか、または遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）に関連する１つまたは複数の合併症に対する入院のリスクを低減する。
一部の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、皮下投与される。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、２週間ごとに１回投与される。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、３週間ごとに１回投与される。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、４週間ごとに１回投与される。
図１は、複数のＡｃｔＲＩＩＢおよびＡｃｔＲＩＩＡ結晶構造の複合分析に基づいて本明細書で推定される残基を有するヒトＡｃｔＲＩＩＡ（配列番号６６）およびヒトＡｃｔＲＩＩＢ（配列番号２）の細胞外ドメインとボックスで示される直接接触しているリガンドとのアライメントを示す。
図２は、それらの細胞内ドメイン（それぞれ、配列番号６７、６８、６９、７０、７１、７２）なしのさまざまな脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質、その細胞内ドメイン（配列番号７３）なしのヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質、およびコンセンサスＡｃｔＲＩＩ前駆体タンパク質（配列番号７４）の多重配列アライメントを示す。
図３は、さまざまな脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＡタンパク質およびヒトＡｃｔＲＩＩＡ（配列番号７５～８２）の多重配列アライメントを示す。
図４は、Ｃｌｕｓｔａｌ ２．１を使用するヒトＩｇＧアイソタイプ由来のＦｃドメインの多重配列アライメントを示す。ヒンジ領域は、点線下線によって示される。二重下線は、非対称鎖対形成を促進するＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号２２）の操作される位置の例、ならびに他のアイソタイプＩｇＧ２（配列番号２３）、ＩｇＧ３（配列番号２４）およびＩｇＧ４（配列番号２６）に関して対応する位置を示す。
図５は、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物と比較した、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物についてのリガンド結合データを示す。それぞれのタンパク質ヘテロ多量体について、リガンドは、解離速度（ｋｏｆｆまたはｋｄ）、リガンドシグナル伝達阻害と良く相関する結合定数によってランク付けし、結合親和性を降順にリストした（最も緊密に結合するリガンドは、最上位にリストされる）。左側において、黄色、赤色、緑色、および青色の線は、解離速度定数の大きさを示す。特定の目的のリガンドは、太字で強調されるが、他のものは、灰色で表され、実線の黒色線は、ヘテロ二量体への結合がホモ二量体と比較して増強されているまたは変化していないリガンドを示す一方、破線は、ホモ二量体と比較して、実質的に低減された結合を示す。示されるように、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物は、同様に高い親和性で５つの高親和性リガンドのそれぞれと結合するが、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、これらのリガンドの中でより容易に区別される。そのため、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に強く結合し、ＣＤＦ８およびアクチビンＡに中間の強さで結合する。ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物とはさらに対照的に、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＢＭＰ１０への弱い結合のみを示し、ＢＭＰ９への結合は示さない。これらのデータは、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物が、ホモ二量体ＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物よりも高いリガンド選択性を有することを示す。
図６は、ＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物と比較した、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物についてのリガンド結合データを示す。フォーマットは、図５についてと同じである。示されるように、ＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物は、アクチビンＡおよびＧＤＦ１１への強い結合と組み合わされて、アクチビンＢへの優先的な結合を示すが、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＧＤＦ１１（弱い結合剤）よりもアクチビンＡに対してより高く増強された選択性と組み合わされて、アクチビンＢよりもアクチビンＡに対する逆の優先傾向を有する。これらのデータは、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物が、ホモ二量体ＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物と実質的に異なるリガンド選択性を有することを示す。
図７は、ＵＵＯモデルにおける単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物（「ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」）の治療効果を示す。１６頭のマウスに、腎臓の下極のレベルで、左片側尿管結紮を２回行い、３日後、それらを２つの群に無作為化した：ｉ）「ＵＵＯ／ＰＢＳ」（８頭のマウスに、手術後３日目、７日目、１０日目、および１４日目に、ビヒクル対照のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を皮下注射した）、およびｉｉ）「ＵＵＯ／ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」（８頭のマウスに、手術後３日目、７日目、１０日目、および１４日目に、１０ｍｇ／ｋｇの用量で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物を皮下注射した）。「対照」は、片側尿管結紮手順を受けていない反対側の腎臓である。図７Ａ～７Ｆは、線維化遺伝子マーカー（それぞれ、フィブロネクチン、ＰＡＩ－Ｉ、ＣＴＧＦ、Ｃｏｌ－Ｉ、Ｃｏｌ－ＩＩＩ、ａ－ＳＭＡ）の遺伝子発現分析を示し、図７Ｇ～７Ｈは、炎症遺伝子マーカー（それぞれ、ＭＣＰ－１、ＴＮＦａ）の遺伝子発現分析を示し、図７Ｉは、トロンボスポンジン１（Ｔｈｂｓ１）の遺伝子発現分析を示し、図７Ｊは、腎傷害マーカー（ＮＧＡＬ）の遺伝子発現分析を示し、図Ｋ～Ｎは、ＴＧＦβリガンド（それぞれ、Ｔｇｆｂ１、Ｔｇｆｂ２、Ｔｇｆｂ３、アクチビンＡ）の遺伝子発現分析を示す。「ＵＵＯ／ＰＢＳ」処置マウスと比べて、「ＵＵＯ／ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」処置マウスは、繊維化遺伝子および炎症遺伝子の著しく低い発現、ＴＧＦβ１／２／３、アクチビンＡ、およびＴｈｂｓ１の上方調節の低減、ならびに腎傷害遺伝子発現の低減を実証した。統計学的有意性（ｐ値）は、「対照」および試料「ＵＵＯ／ＰＢＳ」の間の比較について、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、および＊＊＊＊ｐ＜０．０００１として表される。統計学的有意性（ｐ値）は、「対照」および試料「ＵＵＯ／ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」の間の比較について、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１、および＃＃＃＃ｐ＜０．０００１として表される。統計学的有意性（ｐ値）は、試料「ＵＵＯ／ＰＢＳ」および試料「ＵＵＯ／ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」の間の比較について、＠ｐ＜０．０５、＠＠ｐ＜０．０１、＠＠＠ｐ＜０．００１、および＠＠＠＠ｐ＜０．０００１として表される。「Ｂ．Ｄ．Ｌ．」は、測定値が、検出限界より下であり、統計値が、「Ｂ．Ｄ．Ｌ．」値との比較で値について算出されなかったことを意味する。 同上。 同上。
図８は、Ｃｏｌ４ａ３（－／－）アルポート症候群モデルにおける単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（「ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」）の治療効果を示す。１３頭のＣｏｌ４ａ３－／－マウスを、２つの群に無作為化した：ｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」（７頭のマウスに、１週間に２回、ビヒクル対照のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を皮下注射した）、およびｉｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ（３０ｍｐｋ）」（６頭のマウスに、１週間に２回、３０ｍｇ／ｋｇの用量で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物を皮下注射した）。非処置Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウスである６頭の「ＷＴ」マウスも７．５週間で分析した。Ｃｏｌ４ａ３ビヒクルマウスと比べて、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質によるマウスの処置（Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウス）は、アルブミン尿を著しく低減し（約４９．９％（ｐ＜０．０１）のアルブミン－クレアチニン比（ＡＣＲ）として表される）（図８Ａ）、これは、Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウスにおける血中尿素窒素（ＢＵＮ）の減少と関連した（図８Ｂ）。統計学的有意性（ｐ値）は、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、および＊＊＊＊ｐ＜０．０００１として表される。
図９は、Ｃｏｌ４ａ３（－／－）アルポート症候群モデルにおける単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（「ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」）の治療効果を示す。６週齢の５８頭のＣｏｌ４ａ３－／－マウスを、飲料水中のラミプリル（ＡＣＥｉ、１０ｍｇ／ｋｇ／日）で処置し、３つの群に無作為化した：ｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」（２７頭のマウスに、１週間に２回、ビヒクル対照のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を皮下注射した）、ｉｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ（１０ｍｐｋ）」（１１頭のマウスに、週に２回、１０ｍｇ／ｋｇの用量で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を皮下注射した）、およびｉｉｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ（３０ｍｐｋ）」（２０頭のマウスに、１週間に２回、３０ｍｇ／ｋｇの用量で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を皮下注射した）。「ＷＴ」マウスは、処置なしのＣｏｌ４ａ３＋／＋マウスである。Ｃｏｌ４ａ３ビヒクルマウスと比べて、１０ｍｇ／ｐｋおよび３０ｍｇ／ｋｇの両方での単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質によるマウスの処置（Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウス）は、ＡＣＥｉの存在下でアルブミン尿を著しく低減した（図９Ａ）。加えて、３０ｍｇ／ｋｇ処置は、ＡＣＥｉの存在下で尿ＮＧＡＬ（例えば、ｕＮＡＧＬ）レベルを著しく減少させた（図９Ｂ）。ＡＣＥｉの存在下、「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」マウスは、７６日の生存期間中央値を有していた（図９Ｃ）。統計学的有意性（ｐ値）は、＊ｐ＜０．０５ ３０ｍｐｋ対ビヒクル、＊＊＊ｐ＜０．００１ ３０ｍｐｋ対ビヒクル、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ３０ｍｐｋ対ビヒクル、＃＃ｐ＜０．０１ １０ｍｐｋ対ビヒクル、および＃＃＃ｐ＜０．００１ １０ｍｐｋ対ビヒクルとして表される。
発明の詳細な説明
１．概説
一部分では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメインまたはＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインを含む単一アームヘテロ多量体、そのような単一アームヘテロ多量体を作製する方法、およびその使用に関する。本明細書に記載される場合、単一アームヘテロ多量体は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインを含み得る。ある特定の好ましい実施形態では、本開示のヘテロ多量体は、対応するホモ多量体複合体と比べてＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物と比較してＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物）への変更された結合のプロファイルを有する。
ＴＧＦ－βスーパーファミリーは、ＴＧＦ－ベータ、アクチビン、ｎｏｄａｌ、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、増殖および分化因子（ＧＤＦ）、および抗ミュラーホルモン（ＡＭＨ）を含む３０を超える分泌因子で構成される［Weiss et al. (2013) Developmental Biology, 2(1): 47-63］。脊椎動物および無脊椎動物の両方で見出されるスーパーファミリーのメンバーは、多様な組織において遍在的に発現され、動物の寿命全体にわたる発生の最初期段階の間に機能する。実際に、ＴＧＦ－βスーパーファミリータンパク質は、幹細胞自己再生、原腸形成、分化、器官形態形成、および成体組織ホメオスタシスの重要なメディエーターである。この偏在的な活性と一致して、異常なＴＧＦ－ベータスーパーファミリーシグナル伝達は、例えば、自己免疫疾患、心臓血管疾患、線維症、およびがんを含む広範囲のヒト病理と関連している。
ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーのリガンド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢに結合するリガンド）は、一方の単量体の中央の３－１／２ターンのヘリックスが、他方の単量体のベータ鎖によって形成される凹形表面に対してパッキングされる、同じ二量体構造を共有する。ＴＧＦ－ベータファミリーメンバーの大多数は、分子間ジスルフィド結合によってさらに安定化される。このジスルフィド結合は、２つの他のジスルフィド結合によって形成される環を通して横断し、「システインノット」モチーフと称されているものを生じる［Lin et al. (2006) Reproduction 132: 179-190；およびHinck et al. (2012)FEBS Letters 586: 1860-1870］。
ＴＧＦ－ベータスーパーファミリー（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）シグナル伝達は、Ｉ型およびＩＩ型セリン／トレオニンキナーゼ受容体のヘテロマー複合体によって媒介され、これは、リガンド刺激の際に下流のＳＭＡＤタンパク質（例えば、ＳＭＡＤタンパク質１、２、３、５、および８）をリン酸化および活性化する［Massague (2000) Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 1:169-178］。これらのＩ型およびＩＩ型受容体は、システインリッチ領域を有するリガンド結合性細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および予測されるセリン／トレオニンキナーゼ特異性を有する細胞質ドメインで構成される膜貫通タンパク質である。一般に、Ｉ型受容体は、細胞内シグナル伝達を媒介するが、ＩＩ型受容体は、ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドの結合のために必要とされる。Ｉ型およびＩＩ型受容体は、リガンド結合後に安定な複合体を形成し、ＩＩ型受容体によるＩ型受容体のリン酸化がもたらされる。
ＴＧＦ－ベータファミリーは、それらが結合するＩ型受容体およびそれらが活性化するＳｍａｄタンパク質に基づいて、２つの系統発生枝に分けることができる。一方は、より最近進化した枝であり、これは、例えば、ＴＧＦ－ベータ、アクチビン、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ３、およびｎｏｄａｌを含み、Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ３を活性化するＩ型受容体を通してシグナル伝達する［Hinck (2012) FEBS Letters 586:1860-1870］。他方の枝は、スーパーファミリーのうちのより離れて関連するタンパク質を含み、例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ１、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、およびＧＤＦ７が挙げられ、これは、Ｓｍａｄ１、Ｓｍａｄ５、およびＳｍａｄ８を通してシグナル伝達する。
アクチビンは、ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーのメンバーであり、最初に、卵胞刺激ホルモンの分泌の調節因子として発見されたが、その後、さまざまな生殖系および非生殖系の役割が特徴付けられた。３種の主たるアクチビンの形態（Ａ、Ｂ、およびＡＢ）が存在し、これらは、２種の近接して関連するβサブユニット（それぞれ、βＡβＡ、βＢβＢ、およびβＡβＢ）のホモ／ヘテロ二量体である。ヒトゲノムは、アクチビンＣおよびアクチビンＥもコードし、これらは、肝臓で主に発現され、βＣまたはβＥを含有するヘテロ二量体形態も公知である。ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーでは、アクチビンは、固有の多機能因子であり、これは、卵巣および胎盤細胞におけるホルモン産生を刺激し、神経細胞生存をサポートし、細胞型に応じて細胞周期進行に正または負に影響を及ぼし、少なくとも両生類胚での中胚葉分化を誘導することができる［DePaolo et al. (1991) Proc Soc Ep Biol Med. 198:500-512；Dyson et al.(1997) Curr Biol. 7:81-84；およびWoodruff (1998) Biochem Pharmacol. 55:953-963］。いくつかの組織では、アクチビンシグナル伝達は、その関連するヘテロ二量体であるインヒビンによってアンタゴナイズされる。例えば、下垂体からの卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）分泌の調節では、アクチビンは、ＦＳＨ合成および分泌を促進するが、インヒビンは、ＦＳＨ合成および分泌を低減する。アクチビン生物活性を調節し得るか、および／またはアクチビンに結合し得る他のタンパク質としては、ホリスタチン（ＦＳ）、ホリスタチン関連タンパク質（ＦＳＲＰ、ＦＬＲＧまたはＦＳＴＬ３としても公知）、およびα２－マクログロブリンが挙げられる。
本明細書に記載される場合、「アクチビンＡ」に結合する薬剤は、単離されたβＡサブユニットの文脈では、または二量体複合体（例えば、βＡβＡホモ二量体またはβＡβＢヘテロ二量体）としてのいずれかにかかわらず、βＡサブユニットに特異的に結合する薬剤である。ヘテロ二量体複合体（例えば、βＡβＢヘテロ二量体）の場合では、「アクチビンＡ」に結合する薬剤は、βＡサブユニット内に存在するエピトープに特異的であるが、複合体の非βＡサブユニット（例えば、複合体のβＢサブユニット）内に存在するエピトープに結合しない。同様に、「アクチビンＡ」をアンタゴナイズ（阻害）する本明細書に開示される薬剤は、単離されたβＡサブユニットの文脈では、または二量体複合体（例えば、βＡβＡホモ二量体またはβＡβＢヘテロ二量体）としてのいずれかにかかわらず、βＡサブユニットにより媒介される１つまたは複数の活性を阻害する薬剤である。βＡβＢヘテロ二量体の場合では、「アクチビンＡ」を阻害する薬剤は、βＡサブユニットの１つまたは複数の活性を特異的に阻害するが、複合体の非βＡサブユニット（例えば、複合体のβＢサブユニット）の活性を阻害しない薬剤である。この原則は、「アクチビンＢ」、「アクチビンＣ」、および「アクチビンＥ」に結合するか、および／またはそれを阻害する薬剤にも適用される。「アクチビンＡＢ」をアンタゴナイズする本明細書に開示される薬剤は、βＡサブユニットによって媒介される１つまたは複数の活性およびβＢサブユニットによって媒介される１つまたは複数の活性を阻害する薬剤である。
ＢＭＰおよびＧＤＦは、ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーの特徴的なフォールドを共有するシステインノットサイトカインのファミリーを一緒に形成する［Rider et al. (2010) Biochem J., 429(1):1-12］。このファミリーとしては、例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ２ａ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３ｂ（ＧＤＦ１０としても公知）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９（ＧＤＦ２としても公知）、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１１（ＧＤＦ１１としても公知）、ＢＭＰ１２（ＧＤＦ７としても公知）、ＢＭＰ１３（ＧＤＦ６としても公知）、ＢＭＰ１４（ＧＤＦ５としても公知）、ＢＭＰ１５、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３（ＶＧＲ２としても公知）、ＧＤＦ８（ミオスタチンとしても公知）、ＧＤＦ９、ＧＤＦ１５、およびデカペンタプレジックが挙げられる。ＢＭＰにそれらの名称を与えた骨形成を誘導する能力とは別に、ＢＭＰ／ＧＤＦは、広範囲の組織の発生において形態形成活性を示す。ＢＭＰ／ＧＤＦホモおよびヘテロ二量体は、Ｉ型およびＩＩ型受容体二量体の組合せと相互作用して、複数の可能性のあるシグナル伝達複合体を産生し、ＳＭＡＤ転写因子の２つの競合セットのうちの１つの活性化をもたらす。ＢＭＰ／ＧＤＦは、非常に特異的で局所的な機能を有する。これらは、ＢＭＰ／ＧＤＦ発現の発生制限およびサイトカインに対して高親和性で結合するいくつかの特異的ＢＭＰアンタゴニストタンパク質の分泌によるものを含むいくつかの方法で調節される。不思議なことに、いくつかのこれらのアンタゴニストは、ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドと似ている。
増殖および分化因子－８（ＧＤＦ８）は、ミオスタチンとしても公知である。ＧＤＦ８は、骨格筋量の負の調節因子であり、発達中および成体骨格筋において高度に発現される。トランスジェニックマウスにおけるＧＤＦ８ヌル突然変異は、骨格筋の著しい肥大および過形成によって特徴付けられる［McPherron et al. Nature (1997) 387:83-90］。骨格筋量の同様の増加は、ウシでの、および際立ってヒトでの、ＧＤＦ８の天然に存在する突然変異において明白である［Ashmoreet al. (1974) Growth, 38:501-507；Swatland and Kieffer, J. Anim. Sci. (1994)38:752-757；McPherron and Lee, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1997) 94:12457-12461；Kambaduret al. Genome Res. (1997) 7:910-915；およびSchuelke et al. (2004) N Engl J Med,350:2682-8］。研究は、ヒトでのＨＩＶ感染に関連する筋消耗がＧＤＦ８タンパク質発現の増加に付随することも示している［Gonzalez-Cadavidet al., PNAS (1998) 95:14938-43］。加えて、ＧＤＦ８は、筋肉特異的酵素（例えば、クレアチンキナーゼ）の産生をモジュレートし、筋芽細胞増殖をモジュレートすることができる［国際特許出願公開第００／４３７８１号］。ＧＤＦ８プロペプチドは、成熟ＧＤＦ８ドメイン二量体に非共有的に結合し、その生物活性を不活性化することができる［Miyazonoet al. (1988) J. Biol. Chem., 263: 6407-6415；Wakefield et al. (1988) J. Biol.Chem., 263; 7646-7654；およびBrown et al. (1990) Growth Factors, 3: 35-43］。ＧＤＦ８または構造的に関連するタンパク質に結合し、それらの生物活性を阻害する他のタンパク質としては、ホリスタチン、および潜在的には、ホリスタチン関連タンパク質が挙げられる［Gameret al. (1999) Dev. Biol., 208: 222-232］。
ＢＭＰ１１としても公知のＧＤＦ１１は、マウス発生の間に、尾芽、肢芽、上顎弓および下顎弓、ならびに後根神経節において発現される分泌タンパク質である［McPherron et al. (1999) Nat. Genet., 22: 260-264；およびNakashima et al.(1999) Mech. Dev., 80: 185-189］。ＧＤＦ１１は、中胚葉組織および神経組織の両方で、パターン形成における固有の役割を果たす［Gameret al. (1999) Dev Biol., 208:222-32］。ＧＤＦ１１は、発生中のヒヨコの肢部における軟骨形成および筋肉形成の負の調節因子であることが示された［Gameret al. (2001) Dev Biol., 229:407-20］。筋肉におけるＧＤＦ１１の発現は、ＧＤＦ８と同様の方法で筋成長を調節するその役割も示唆する。加えて、脳におけるＧＤＦ１１の発現は、ＧＤＦ１１が、神経系の機能に関係する活性も有し得ることを示唆する。興味深いことに、ＧＤＦ１１は、嗅上皮において神経発生を阻害することが見出された［Wuet al. (2003) Neuron., 37:197-207］。それ故に、ＧＤＦ１１は、筋肉疾患および神経変性疾患（例えば、筋萎縮性側索硬化症）などの疾患の処置においてｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの適用を有し得る。
本明細書で使用される場合、ＡｃｔＲＩＩは、ＩＩ型アクチビン受容体のファミリーを指す。このファミリーは、ＡＣＶＲ２Ａ遺伝子によってコードされるＩＩＡ型アクチビン受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ）、およびＡＣＶＲ２Ｂ遺伝子によってコードされるＩＩＢ型アクチビン受容体（ＡｃｔＲＩＩＢ）の両方を含む。ＡｃｔＲＩＩ受容体は、アクチビン、ＧＤＦ８（ミオスタチン）、ＧＤＦ１１、ならびにＢＭＰ、とりわけＢＭＰ６およびＢＭＰ７のサブセットを含む各種のＴＧＦ－ベータスーパーファミリーリガンドに結合するＴＧＦ－ベータスーパーファミリーＩＩ型受容体である。ＡｃｔＲＩＩ受容体は、筋肉および神経筋障害（例えば、筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、および筋萎縮）、望ましくない骨／軟骨の成長、脂肪組織障害（例えば、肥満）、代謝障害（例えば、２型糖尿病）、ならびに神経変性障害を含む各種の生物学的障害に関わる。例えば、Tsuchida et al., (2008) Endocrine Journal 55(1):11-21、Ｋｎｏｐｆら、米国特許第８，２５２，９００号、ならびにＯＭＩＭエントリー１０２５８１および６０２７３０を参照されたい。
ある特定の態様では、本開示は、１種または複数のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０）によって開始される細胞内シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）をアンタゴナイズする、それぞれ、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインを含む単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体、好ましくは可溶性ヘテロ多量体の使用に関する。本明細書に記載される場合、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置するため有用であり得る。
本明細書で実証されるように、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、線維化遺伝子および炎症遺伝子の発現の抑制、ＴＧＦβ１／２／３、アクチビンＡ、およびＴｈｂｓ１の上方調節の阻害、ならびに腎傷害の低減において有効である。単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物処置は、ＵＵＯモデルにおいて、腎臓の線維化および炎症を抑制し、腎傷害を低減する。さらには、尿アルブミンとクレアチニンの比（ＡＣＲ）は、アルブミン尿を測定して算出され、これは、Ｃｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」）において、４週間～７．５週間、著しく増加した。単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物によるマウスの処置は、４９．９％（ｐ＜０．０１）アルブミン尿を著しく低減し、これは、Ｃｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」）において減少したＢＵＮに関連した。ＡＣＥ阻害剤処置にかかわらず、アルブミン尿は、Ｃｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」）において、６週間～１０週間、著しく増加した。Ｃｏｌ４ａ３ビヒクルマウスと比べて、１０ｍｇ／ｐｋおよび３０ｍｇ／ｋｇの両方での単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質によるマウスの処置（Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウス）は、ＡＣＥｉの存在下でアルブミン尿を著しく低減し、生存を増加させた。これらのデータは、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物処置が、アルポートマウスモデルにおいて、アルブミン尿を低減し、腎臓機能を改善することを実証する。また、これらのデータは、例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含む、他の単一アームＡｃｔＲＩＩヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、腎臓疾患または状態の処置または予防において有用であり得ることを示す。
本明細書で使用される用語は、一般に、本開示の文脈内で、およびそれぞれの用語が使用される具体的な文脈において、当技術分野におけるそれらの通常の意味を有する。ある特定の用語は、本開示の組成物および方法、ならびにそれらを作製および使用する方法を記載する際に、実施者に追加のガイダンスを提供するために、本明細書の下記または他の箇所で議論される。用語の任意の使用の範囲または意味は、それが使用される具体的な文脈から明らかであろう。
「相同の」は、すべてのその文法形態および綴りの変形形態において、同じ種の生物体のスーパーファミリー由来のタンパク質、および異なる種の生物体由来の相同タンパク質を含む「共通の進化上の起源」を持つ２つのタンパク質間の関係を指す。そのようなタンパク質（およびそれらのコード核酸）は、同一性パーセントの観点または特定の残基もしくはモチーフおよび保存された位置の存在にかかわらず、それらの配列類似性によって反映される配列相同性を有する。しかしながら、一般的な用法および本出願では、「相同の」という用語は、「高度に」などの副詞で修飾された場合、配列類似性を指すことがあり、一般的な進化上の起源に関係していてもよく、または関係していなくてもよい。
「配列類似性」という用語は、すべてのその文法形態において、共通の進化上の起源を共有していてもよく、または共有していなくてもよい、核酸またはアミノ酸配列間の同一性または一致の程度を指す。
参照ポリペプチド（またはヌクレオチド）配列に関する「配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、必要に応じて最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮しない、参照ポリペプチド（ヌクレオチド）配列中のアミノ酸残基（または核酸）と同一である候補配列中のアミノ酸残基（または核酸）のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当技術分野での技能の範囲内のさまざまな方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸（核酸）配列同一性％の値は、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータープログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって生み出され、ソースコードは米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９にユーザー文書と共に提出されており、これは、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆ．から公に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされていてもよい。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標） Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムにおける使用のためにコンパイルされていなければならない。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変更されない。
「Ｘに実質的に結合しない」とは、すべてのその文法形態において、薬剤が、「Ｘ」に対して、約１０－７、１０－６、１０－５、１０－４よりも高い、またはそれよりも高いＫＤを有する（例えば、ＫＤを決定するために使用されるアッセイによる検出可能な結合がない）ことを意味することが意図される。
「アゴナイズする」は、すべてのその文法形態において、タンパク質および／もしくは遺伝子を活性化する（例えば、そのタンパク質の遺伝子発現を活性化もしくは増幅することによって、または不活性なタンパク質が活性状態に入るように誘導することによって）、またはタンパク質のおよび／もしくは遺伝子の活性を増加させるプロセスを指す。
「アンタゴナイズする」は、すべてのその文法形態において、タンパク質および／もしくは遺伝子を阻害する（例えば、そのタンパク質の遺伝子発現を阻害もしくは減少させることによって、または活性なタンパク質が不活性状態に入るように誘導することによって）、またはタンパク質のおよび／もしくは遺伝子の活性を減少させるプロセスを指す。
「約」および「およそ」という用語は、本明細書および特許請求の範囲全体を通して数値に関連して使用される場合、当業者が精通し、許容される正確さの隔たりを表す。一般に、そのような正確さの隔たりは、±１０％である。あるいは、および特に生物学的系において、「約」および「およそ」という用語は、所与の値の１桁以内、好ましくは、≦５倍、より好ましくは、≦２倍である値を意味し得る。
本明細書に開示される数値範囲は、範囲を定義する数を含む。
「ａ」および「ａｎ」という用語は、その用語が使用される文脈が他に明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。「ａ」（または「ａｎ」）という用語、ならびに「１つまたは複数」および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書で互換的に使用することができる。さらには、「および／または」は、本明細書で使用される場合、他を伴う、または伴わない、２つまたはそれよりも多くの指定された性質または構成要素のそれぞれの具体的な開示としてみなされるべきである。そのため、「および／または」という用語は、本明細書で「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される場合、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「および／または」という用語は、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの語句で使用される場合、以下の態様のそれぞれを包含することが意図される：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
本明細書全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形形態は、言及された整数または整数の群の包含を意味するが、任意の他の整数または整数の群の排除を意味しないことが理解されるであろう。
２．ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む単一アームヘテロ多量体
ある特定の態様では、本開示は、それぞれ、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体に関する。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドは、第２のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含むタンパク質複合体（例えば、ヘテロ多量体）を形成してもよく、ここで、第１のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列、および相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含まない。相互作用対は、複合体、特にヘテロ二量体複合体を形成するように相互作用する任意の２つのポリペプチド配列であり得るが、有効な実施形態は、ホモ二量体配列を形成する相互作用対も用い得る。本明細書に記載される場合、相互作用対のうちの１つのメンバーは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、例えば、配列番号１、２、３、４、５、６、９、１０、１１、４６、４８、５５、５７、５８、５９、６０、６１、８４、８６、８８、８９、９０、および９１のうちのいずれかの配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドに融合され得る。好ましくは、相互作用対は、一部分では、改善された血清半減期を付与するように、またはＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの単量体形態と比べて改善された血清半減期を提供するように結合している別の部分、例えばポリエチレングリコール部分においてアダプターとして作用するように選択される。
本明細書で示されるように、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢの単量体（単一アーム）形態は、それらの対応するホモ二量体形態と比較して実質的に変更されたリガンド結合選択性を示し得るが、単量体形態は、治療的状況では望ましくない短い血清滞留時間（半減期）を有する傾向がある。血清半減期を改善するための一般的なメカニズムは、ＩｇＧの定常ドメイン部分（例えば、Ｆｃ部分）を有するホモ二量体融合タンパク質としてポリペプチドを発現させることである。しかしながら、ホモ二量体タンパク質として発現される（例えば、Ｆｃ融合構築物中の）ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、単量体形態と同じ活性プロファイルを示さないことがある。本明細書で実証されるように、課題は、単量体形態を半減期を延長する部分に融合することによって解決され得、驚くべきことに、これは、そのようなタンパク質を、相互作用対の１つのメンバーが、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに融合され、相互作用対の別のメンバーが、部分なしまたは異種部分に融合されている非対称ヘテロ二量体融合タンパク質として発現させることによって容易に達成することができ、相互作用対によって付与される血清半減期の改善に加えて新規のリガンド結合プロファイルをもたらす。
ある特定の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（例えば、配列番号１、２、３、４、５、６、９、１０、１１、４６、４８、５５、５７、５８、５９、６０、６１、８４、８６、８８、８９、９０、および９１のうちのいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチド）を含む単一アームヘテロ多量体に関し、これは、一般に、本明細書では、「本開示の単一アームヘテロ多量体」または「単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体」または「単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体」と称される。好ましくは、本開示の単一アームヘテロ多量体は、可溶性である、例えば、単一アームヘテロ多量体は、少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの可溶性部分を含む。一般に、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの可溶性部分に対応する。したがって、一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの細胞外ドメインを含む。ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢの例示的な細胞外ドメインが本明細書に開示され、そのような配列、ならびにその断片、機能性バリアント、および修飾形態は、本開示の発明（例えば、単一アームヘテロ多量体組成物およびその使用）に従って使用され得る。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインのアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシン（Ｋ）が除去されて提供されてもよい（例えば、それぞれ、配列番号８８および８９、または８４、８６、および９１）。
スリーフィンガー毒性フォールドとして公知の決定的な構造的モチーフは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢによるリガンド結合のために重要であり、それぞれの単量体受容体の細胞外ドメイン内の種々の位置に位置する１０、１２、または１４の保存されたシステイン残基によって形成される。例えば、Greenwald et al. (1999) Nat Struct Biol 6:18-22；Hinck (2012) FEBSLett 586:1860-1870を参照されたい。本明細書に記載されるヘテロマー複合体のうちのいずれかは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢのそのようなドメインを含み得る。これらの保存されたシステインの最外部により境界が画定されるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢのコアリガンド結合性ドメインは、配列番号１（ＡｃｔＲＩＩＢ前駆体）の２９～１０９位、および配列番号９（ＡｃｔＲＩＩＡ前駆体）の３０～１１０位に対応する。これらのシステインの境界が画定されたコア配列に隣接する構造的な順序付けが少ないアミノ酸は、必ずしもリガンド結合性を変更することなく、いずれかの末端において１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、または３７残基が切断され得る。Ｎ末端および／またはＣ末端切断についての例示的な細胞外ドメインとしては、配列番号２、３、５、６、１０、１１、および８３が挙げられる。
他の好ましい実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、限定されるものではないが、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０を含む１種または複数のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドに結合し、その活性を阻害（アンタゴナイズ）する。特に、本開示の単一アームヘテロ多量体は、１種または複数のＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢのリガンド）によって開始される細胞内シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）をアンタゴナイズするために使用され得る。本明細書に記載される場合、そのようなアンタゴニストのヘテロ多量体は、ＴＧＦベータスーパーファミリーの１種または複数のリガンド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢのリガンド）の影響を受ける、限定されないが、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を含むさまざまなＴＧＦ－ベータが関連する状態の処置または予防のためのものであり得る。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、それらの対応するホモ多量体と比較して（例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物、対、対応する単一アームＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物）、異なるリガンド結合プロファイルを有する。本明細書に記載される場合、本開示の単一アームヘテロ多量体は、例えば、単一アームの単位複合体に基づいて、ヘテロ二量体、ヘテロ三量体、ヘテロ四量体、およびさらなるオリゴマー構造を含む。ある特定の好ましい実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、ヘテロ二量体である。
本明細書で使用される場合、「ＡｃｔＲＩＩＢ」という用語は、任意の種由来のアクチビンＩＩＢ型受容体（ＡｃｔＲＩＩＢ）タンパク質のファミリー、および突然変異誘発または他の修飾によってそのようなＡｃｔＲＩＩＢタンパク質から誘導されたバリアントを指す。本明細書でのＡｃｔＲＩＩＢへの言及は、現在特定されている形態のうちのいずれか１種への言及であると理解される。ＡｃｔＲＩＩＢファミリーのメンバーは、一般に、システインリッチ領域を含むリガンド結合性細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および予測されるセリン／トレオニンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインで構成される膜貫通タンパク質である。
「ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド」という用語には、ＡｃｔＲＩＩＢファミリーメンバーの任意の天然に存在するポリペプチド、ならびに有用な活性を保持するその任意のバリアント（突然変異体、断片、融合物、およびペプチドミメティクス形態を含む）を含むポリペプチドを含む。そのようなバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの例は、本開示全体、ならびに国際特許出願公開番号ＷＯ２００６／０１２６２７号およびＷＯ２００８／０９７５４１号に提供され、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるすべてのＡｃｔＲＩＩＢ関連ポリペプチドについてのアミノ酸の番号付けは、具体的に他に指定されない限り、下記に提供されるヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質配列（配列番号１）の番号付けに基づく。
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質配列は、以下の通りである。
Figure 2023528117000001
Figure 2023528117000002
シグナルペプチドは、一重下線で示され、細胞外ドメインは、太字フォントで示され、可能性のある内在性Ｎ連結グリコシル化部位は、二重下線で示される。
プロセシングされた細胞外ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド配列は、以下の通りである。
Figure 2023528117000003
一部の実施形態では、タンパク質は、Ｎ末端に「ＳＧＲ・・・」配列を有して産生されてもよい。細胞外ドメインのＣ末端「テイル」は、一重下線によって示される。「テイル」が欠失した配列（Δ１５配列）は、以下の通りである。
Figure 2023528117000004
配列番号１の６４位にアラニンを有する（Ａ６４）ＡｃｔＲＩＩＢの形態は、文献にも報告されている。例えば、Hilden et al. (1994) Blood, 83(8): 2163-2170を参照されたい。出願人は、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインとＡ６４置換とを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質が、アクチビンおよびＧＤＦ１１に対する比較的低い親和性を有することを突き止めた。対照的に、６４位にアルギニンを有する（Ｒ６４）同じＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、低ナノモル濃度～高ピコモル濃度の範囲のアクチビンおよびＧＤＦ１１に対する親和性を有する。したがって、Ｒ６４を有する配列は、本開示においてヒトＡｃｔＲＩＩＢについての「野生型」参照配列として使用される。
６４位にアラニンを有するＡｃｔＲＩＩＢの形態は、以下の通りである。
Figure 2023528117000005
Figure 2023528117000006
シグナルペプチドは、一重下線によって示され、細胞外ドメインは、太字フォントによって示される。
代替Ａ６４形態のプロセシングされた細胞外ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド配列は、以下の通りである。
Figure 2023528117000007
一部の実施形態では、タンパク質は、Ｎ末端に「ＳＧＲ・・・」配列を有して産生されてもよい。細胞外ドメインのＣ末端「テイル」は、一重下線によって示される。「テイル」が欠失した配列（Δ１５配列）は、以下の通りである。
Figure 2023528117000008
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質をコードする核酸配列は、下記に示され（配列番号７）、Ｇｅｎｂａｎｋ参照配列ＮＭ＿００１１０６．３のヌクレオチド２５～１５６０から構成され、これは、ＡｃｔＲＩＩＢ前駆体のアミノ酸１～５１３をコードする。示される配列は、６４位にアルギニンを提供し、代わりにアラニンを提供するように修飾されていてもよい。シグナル配列は、下線が付けられている。
Figure 2023528117000009
Figure 2023528117000010
プロセシングされた細胞外ヒトＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドをコードする核酸配列は、以下の通りである（配列番号８）。示される配列は、６４位にアルギニンを提供し、代わりにアラニンを提供するように修飾されていてもよい。
Figure 2023528117000011
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ可溶性細胞外ドメインおよびヒトＡｃｔＲＩＩＡ可溶性細胞外ドメインのアミノ酸配列のアライメントを図１に示す。このアライメントは、ＡｃｔＲＩＩリガンドと直接接触すると考えられる両受容体内のアミノ酸残基を示す。図２は、さまざまな脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＢタンパク質およびヒトＡｃｔＲＩＩＡの多重配列アライメントを表す。これらのアライメントから、正常なＡｃｔＲＩＩリガンド結合活性のため、および正常なＡｃｔＲＩＩリガンド結合活性を著しく変更することなく置換に耐える可能性があるアミノ酸位置を予測するために重要である、リガンド結合性ドメイン内の重要なアミノ酸位置を予測することが可能である。ＡｃｔＲＩＩタンパク質は、構造的および機能的な特徴に関して、特にリガンド結合に関して、当技術分野において特徴付けられている。例えば、Attisano et al. (1992) Cell 68(1):97-108；Greenwald et al. (1999)Nature Structural Biology 6(1): 18-22；Allendorph et al. (2006) PNAS 103(20:7643-7648；Thompson et al. (2003) The EMBO Journal 22(7): 1555-1566；ならびに米国特許第７，７０９，６０５号、同第７，６１２，０４１号、および同第７，８４２，６６３号を参照されたい。
例えば、Ａｔｔｉｓａｎｏらは、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインのＣ末端のプロリンノットの欠失が、アクチビンに対する受容体の親和性を低減したことを示した。本配列番号１のアミノ酸２０～１１９を含有するＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質である「ＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１１９）－Ｆｃ」は、プロリンノット領域および完全な膜近傍ドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１３４）－Ｆｃと比べて、ＧＤＦ１１およびアクチビンに対する低減された結合を有する（例えば、米国特許第７，８４２，６６３号を参照されたい）。しかしながら、ＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１２９）－Ｆｃタンパク質は、プロリンノット領域が破壊されているにもかかわらず、野生型と比べて、類似するがいくらか低減された活性を保持する。そのため、アミノ酸１３４、１３３、１３２、１３１、１３０、および１２９（配列番号１に対して）で終わるＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインは、活性であるとすべて予想されるが、１３４または１３３で終わっている構築物は、最も活性であり得る。同様に、残基１２９～１３４（配列番号１に対して）のうちのいずれかでの突然変異は、大きな周辺部分によってリガンド結合親和性が変更されるとは予想されない。このサポートにおいて、Ｐ１２９およびＰ１３０（配列番号１に対して）の突然変異が、リガンド結合を実質的に減少させないことが当技術分野において公知である。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、早ければアミノ酸１０９（最後のシステイン）で終了してもよいが、しかしながら、１０９および１１９、またはその間（例えば、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、または１１９）で終了する形態は、低減されたリガンド結合を有すると予想される。アミノ酸１１９（配列番号１に対して）は、あまり保存されておらず、そのため、容易に変更または切断される。１２８（配列番号１に対して）またはその後で終了するＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドおよびＡｃｔＲＩＩＢに基づくＧＤＦトラップは、リガンド結合活性を保持するはずである。配列番号１に対して、１１９および１２７、またはその間（例えば、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、または１２７）で終了するＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドならびにＡｃｔＲＩＩＢに基づくＧＤＦトラップは、中間の結合能力を有するであろう。これらの形態のうちのいずれかは、臨床または実験の状況に応じて、使用するのに望ましくあり得る。
ＡｃｔＲＩＩＢのＮ末端で、アミノ酸２９またはその前（配列番号１に対して）で開始するタンパク質が、リガンド結合活性を保持するであろうと予想される。アミノ酸２９は、最初のシステインを表す。２４位（配列番号１に対して）でのアラニンからアスパラギンへの突然変異は、リガンド結合に実質的に影響を及ぼすことなく、Ｎ連結グリコシル化配列を導入する。例えば、米国特許第７，８４２，６６３号を参照されたい。このことは、アミノ酸２０～２９に対応するシグナル切断ペプチドとシステイン架橋領域との間の領域における突然変異が、十分に許容されることを確認する。特に、２０、２１、２２、２３、および２４位（配列番号１に対して）で開始するＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドならびにＡｃｔＲＩＩＢに基づくＧＤＦトラップは、一般にリガンド結合活性を保持するはずであり、２５、２６、２７、２８、および２９位（配列番号１に対して）で開始するＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドおよびＡｃｔＲＩＩＢに基づくＧＤＦトラップも、リガンド結合活性を保持すると予想される。例えば、米国特許第７，８４２，６６３号に示されるデータは、驚くべきことに、２２、２３、２４、または２５で開始するＡｃｔＲＩＩＢ構築物が、最も強い活性を有することを実証する。
総合すれば、ＡｃｔＲＩＩＢの活性部分（例えば、リガンド結合性部分）は、配列番号１のアミノ酸２９～１０９を含む。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、例えば、配列番号１のアミノ酸２０～２９に対応する残基で開始し（例えば、アミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９で開始する）、配列番号１のアミノ酸１０９～１３４に対応する位置で終了する（例えば、アミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４で終了する）ＡｃｔＲＩＩＢの一部と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。他の例としては、配列番号１の、２０～２９位（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９位）または２１～２９位（例えば、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９位）で開始し、１１９～１３４位（例えば、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４）、１１９～１３３位（例えば、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、または１３３）、１２９～１３４位（例えば、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４）、または１２９～１３３位（例えば、１２９、１３０、１３１、１３２、または１３３）で終了するポリペプチドが挙げられる。他の例としては、配列番号１の、２０～２４位（例えば、２０、２１、２２、２３、または２４）、２１～２４位（例えば、２１、２２、２３、または２４）、または２２～２５位（例えば、２２、２２、２３、または２５）で開始し、１０９～１３４位（例えば、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４）、１１９～１３４位（例えば、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４）、または１２９～１３４位（例えば、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４）で終了する構築物が挙げられる。これらの範囲内のバリアント、特に、配列番号１の対応する位置と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するものも企図される。
本開示は、図２に示される複合ＡｃｔＲＩＩＢ構造の分析の結果を含み、リガンド結合ポケットが、一部分では、残基Ｙ３１、Ｎ３３、Ｎ３５、Ｌ３８～Ｔ４１、Ｅ４７、Ｅ５０、Ｑ５３～Ｋ５５、Ｌ５７、Ｈ５８、Ｙ６０、Ｓ６２、Ｋ７４、Ｗ７８～Ｎ８３、Ｙ８５、Ｒ８７、Ａ９２、およびＥ９４～Ｆ１０１によって定義されることを実証する。加えて、ＡｃｔＲＩＩＢは、大半の脊椎動物にわたって十分に保存されており、細胞外ドメインの大きな伸長部は完全に保存されている。したがって、さまざまな脊椎動物生物体由来のＡｃｔＲＩＩＢ配列の比較は、変更され得る残基への洞察を提供する。例えば、Ｒ４０は、ツメガエルにおいてＫであり、この位置の塩基性アミノ酸が許容されることを示す。Ｌ４６は、ツメガエルＡｃｔＲＩＩＢにおいてバリンであり、そのため、この位置は変更され得、必要に応じて、Ｖ、Ｉ、もしくはＦなどの別の疎水性残基、またはＡなどの非極性残基に変更され得る。Ｅ５２は、ツメガエルにおいてＫであり、この部位が、Ｅ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｇ、Ｙなどの極性残基、およびおそらくＡを含む多種多様な変化を許容し得ることを示す。Ｑ５３は、ウシＡｃｔＲＩＩＢにおいてＲであり、ツメガエルＡｃｔＲＩＩＢにおいてＫであり、したがって、Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ、およびＨを含むアミノ酸が、この位置で許容されるであろう。Ｔ９３は、ツメガエルにおいてＫであり、広い構造の変形形態がこの位置で許容されることを示し、Ｓ、Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｈ、Ｇ、Ｐ、Ｇ、およびＹなどの極性残基が好ましい。Ｆ１０８は、ツメガエルにおいてＹであり、したがって、Ｙ、またはＩ、ＶもしくはＬなどの他の疎水性基が許容されるはずである。Ｅ１１１は、ツメガエルにおいてＫであり、Ｄ、Ｒ、ＫおよびＨ、ならびにＱおよびＮを含む変化した残基が、この位置で許容されることを示す。Ｒ１１２は、ツメガエルにおいてＫであり、ＲおよびＨを含む塩基性残基が、この位置で許容されることを示す。１１９位のＡは、比較的あまり保存されておらず、げっ歯動物におけるＰおよびツメガエルにおけるＶとして現れ、そのため、本質的に、任意のアミノ酸が、この位置で許容されるはずである。本明細書に記載される変形形態は、さまざまな方法で組み合わされ得る。加えて、当技術分野において記載される突然変異誘発プログラムの結果は、多くの場合に保存されることが有益であるＡｃｔＲＩＩＢ中のアミノ酸位置が存在することも確認する。配列番号１に関して、これらは、６４位（塩基性アミノ酸）、８０位（酸性または疎水性アミノ酸）、７８位（疎水性、特に、トリプトファン）、３７位（酸性、特に、アスパラギン酸またはグルタミン酸）、５６位（塩基性アミノ酸）、６０位（疎水性アミノ酸、特に、フェニルアラニンまたはチロシン）を含む。そのため、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドでは、本開示は、保存されていてもよいアミノ酸のフレームワークを提供する。保存されることが望ましくあり得る他の位置は、以下の通りである：すべて配列番号１に対して、５２位（酸性アミノ酸）、５５位（塩基性アミノ酸）、８１位（酸性）、９８位（極性または荷電、特に、Ｅ、Ｄ、Ｒ、またはＫ）。
そのため、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの一般式は、配列番号１のアミノ酸２９～１０９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、必要に応じて、２０～２４（例えば、２０、２１、２２、２３、または２４）、または２２～２５（例えば、２２、２３、２４、または２５）の範囲の位置で開始し、１２９～１３４（例えば、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４）の範囲の位置で終了し、リガンド結合ポケット中に１、２、５、１０、または１５以下の保存的アミノ酸変化、ならびにリガンド結合ポケット中の４０、５３、５５、７４、７９、および／または８２位に０、１つまたは複数の非保存的変更を含むものである。可変性が特に十分に許容され得る結合ポケットの外側の部位は、細胞外ドメインのアミノ末端およびカルボキシ末端（上記に示される通り）、ならびに４２～４６位および６５～７３位（配列番号１に対して）を含む。６５位のアスパラギンからアラニンへの変更（Ｎ６５Ａ）は、実際は、Ａ６４バックグラウンド中のリガンド結合を改善し、そのため、Ｒ６４バックグラウンドにおけるリガンド結合に対する有害な効果を有さないと予想される。例えば、米国特許第７，８４２，６６３号を参照されたい。この変化は、おそらく、Ａ６４バックグラウンド中のＮ６５でのグリコシル化を除去し、したがって、この領域の著しい変化が許容される可能性があることを実証する。Ｒ６４Ａ変化はあまり許容されないが、Ｒ６４Ｋは十分に許容され、したがって、Ｈなどの別の塩基性残基が６４位で許容され得る。例えば、米国特許第７，８４２，６６３号を参照されたい。
ある特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む単一アームヘテロ多量体に関し、これは、その断片、機能性バリアント、および修飾形態を含む。好ましくは、本開示の発明（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む単一アームヘテロ多量体、およびその使用）による使用のためのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、可溶性である（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメイン）。他の好ましい実施形態では、本開示の発明による使用のためのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、１種または複数のＴＧＦベータスーパーファミリーリガンドに結合するか、および／またはその活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達の誘導）を阻害（アンタゴナイズ）する。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１のアミノ酸２０～２９に対応する残基で開始し（例えば、アミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９で開始する）、配列番号１のアミノ酸１０９～１３４に対応する位置で終了する（例えば、アミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４で終了する）ＡｃｔＲＩＩＢの一部と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１のアミノ酸２０～２９に対応する残基で開始し（例えば、アミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９で開始する）、配列番号１のアミノ酸１０９～１３４に対応する位置で終了する（例えば、アミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４で終了する）ＡｃｔＲＩＩＢの一部と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含み、ここで、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸（すなわち、ＤまたはＥアミノ酸残基）である。ある特定の好ましい実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１のアミノ酸２９～１０９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。他の好ましい実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１のアミノ酸２９～１０９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含み、ここで、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸（すなわち、ＤまたはＥアミノ酸残基）である。他の好ましい実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１のアミノ酸２９～１０９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含み、ここで、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸（すなわち、ＤまたはＥアミノ酸残基）ではない。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１、２、３、４、５、６、４６、４８、６０、６１、８４、８６、９０、または９１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１、２、３、４、５、６、４６、４８、６０、６１、８４、８６、９０、または９１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含み、ここで、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸（すなわち、ＤまたはＥアミノ酸残基）である。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１、２、３、４、５、６、４６、４８、６０、６１、８４、８６、９０、または９１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含み、ここで、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸（すなわち、ＤまたはＥアミノ酸残基）ではない。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１、２、３、４、５、６、４６、４８、６０、６１、８４、８６、９０、または９１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１、２、３、４、５、６、４６、４８、６０、６１、８４、８６、９０、または９１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になり、ここで、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸（すなわち、ＤまたはＥアミノ酸残基）である。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号１、２、３、４、５、６、４６、４８、６０、６１、８４、８６、９０、または９１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になり、ここで、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸（すなわち、ＤまたはＥアミノ酸残基）ではない。
一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になり、ここで、Ｌ７９に対応する位置は、アスパラギン酸（Ｄ）である。リーダー、ｈＦｃドメイン、およびリンカーなしの切断型ＧＤＦトラップＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ ２５－１３１）についてのアミノ酸配列（配列番号８３）を下記に示す。ネイティブ配列における７９位で置換されたアスパラギン酸は、下線が付けられ、太字であり、シークエンシングによって、成熟融合タンパク質におけるＮ末端残基であることが明らかになったグルタミン酸も同様である。
Figure 2023528117000012
ある特定の実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含むタンパク質複合体に関する。本明細書で使用される場合、「ＡｃｔＲＩＩＡ」という用語は、任意の種由来のアクチビンＩＩＡ型受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ）タンパク質のファミリー、および突然変異誘発または他の修飾によってそのようなＡｃｔＲＩＩＡタンパク質から誘導されたバリアントを指す。本明細書でのＡｃｔＲＩＩＡへの言及は、現在特定されている形態のうちのいずれか１種への言及であると理解される。ＡｃｔＲＩＩＡファミリーのメンバーは、一般に、システインリッチ領域を含むリガンド結合性細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および予測されるセリン／トレオニンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインで構成される膜貫通タンパク質である。
「ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド」という用語には、ＡｃｔＲＩＩＡファミリーメンバーの任意の天然に存在するポリペプチド、ならびに有用な活性を保持するその任意のバリアント（突然変異体、断片、融合物、およびペプチドミメティクス形態を含む）を含むポリペプチドを含む。そのようなバリアントＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドの例は、本開示全体、ならびに国際特許出願公開番号ＷＯ２００６／０１２６２７号に提供され、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるすべてのＡｃｔＲＩＩＡ関連ポリペプチドについてのアミノ酸の番号付けは、具体的に他に指定されない限り、下記に提供されるヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質配列（配列番号９）の番号付けに基づく。
ヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質配列は、以下の通りである。
Figure 2023528117000013
シグナルペプチドは、一重下線によって示され、細胞外ドメインは、太字フォントで示され、可能性のある内在性Ｎ連結グリコシル化部位は、二重下線によって示される。
プロセシングされた細胞外ヒトＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド配列は、以下の通りである。
Figure 2023528117000014
細胞外ドメインのＣ末端「テイル」は、一重下線によって示される。「テイル」が欠失した配列（Δ１５配列）は、以下の通りである。
Figure 2023528117000015
ヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質をコードする核酸配列は、下記に示され（配列番号１２）、Ｇｅｎｂａｎｋ参照配列ＮＭ＿００１６１６．４のヌクレオチド１５９～１７００に対応する。シグナル配列は、下線が付けられている。
Figure 2023528117000016
Figure 2023528117000017
プロセシングされた細胞外ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドをコードする核酸配列は、以下の通りである。
Figure 2023528117000018
したがって、ＡｃｔＲＩＩＡの活性部分（例えば、リガンド結合性）についての一般式は、配列番号９のアミノ酸３０～１１０を含むか、それから本質的になるか、あるいはそれからなるポリペプチドである。したがって、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、例えば、配列番号９のアミノ酸２１～３０のうちのいずれか１つに対応する残基で開始し（例えば、アミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０のうちのいずれか１つで開始する）、配列番号９のアミノ酸１１０～１３５のうちのいずれか１つに対応する位置で終了する（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、もしくは１３５のうちのいずれか１つで終了する）ＡｃｔＲＩＩＡの一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み得るか、それから本質的になり得るか、あるいはそれからなり得る。他の例としては、配列番号９の２１～３０（例えば、アミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のうちのいずれか１つで開始する）、２２～３０（例えば、アミノ酸２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のうちのいずれか１つで開始する）、２３～３０（例えば、アミノ酸２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のうちのいずれか１つで開始する）、２４～３０（例えば、アミノ酸２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のうちのいずれか１つで開始する）から選択される位置で開始し、配列番号９の１１１～１３５（例えば、アミノ酸１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、または１３５のうちのいずれか１つで終了する）、１１２～１３５（例えば、アミノ酸１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、または１３５のうちのいずれか１つで終了する）、１１３～１３５（例えば、アミノ酸１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、または１３５のうちのいずれか１つで終了する）、１２０～１３５（例えば、アミノ酸１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、または１３５のうちのいずれか１つで終了する）、１３０～１３５（例えば、アミノ酸１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、または１３５のうちのいずれか１つで終了する）、１１１～１３４（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４のうちのいずれか１つで終了する）、１１１～１３３（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、または１３３のうちのいずれか１つで終了する）、１１１～１３２（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、または１３２のうちのいずれか１つで終了する）、または１１１～１３１（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、または１３１のうちのいずれか１つで終了する）から選択される位置で終了する構築物が挙げられる。これらの範囲内のバリアント、特に、配列番号９の対応する部分と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、あるいはそれからなるものも企図される。そのため、一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸３０～１１０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリペプチドを含み得るか、それから本質的になり得るか、またはそれからなり得る。必要に応じて、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸３０～１１０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリペプチドを含み、リガンド結合ポケット中に１、２、５、１０、または１５以下の保存的アミノ酸変化を含む。
ＡｃｔＲＩＩＡは、脊椎動物の中で十分に保存されており、細胞外ドメインの大きな伸長部は完全に保存されている。例えば、図３は、さまざまなＡｃｔＲＩＩＡオルソログと比較した、ヒトＡｃｔＲＩＩＡ細胞外ドメインの多重配列アライメントを表す。ＡｃｔＲＩＩＡに結合するリガンドのうちの多くも、非常に保存されている。したがって、これらのアライメントから、正常なＡｃｔＲＩＩＡリガンド結合活性のため、および正常なＡｃｔＲＩＩＡリガンド結合活性を著しく変更することなく置換に耐える可能性があるアミノ酸位置を予測するために重要である、リガンド結合性ドメイン内の重要なアミノ酸位置を予測することが可能である。したがって、ここに開示される方法により有用である活性なヒトＡｃｔＲＩＩＡバリアントポリペプチドは、別の脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＡの配列由来の対応する位置に１つまたは複数のアミノ酸を含んでいてもよく、またはヒトもしくは他の脊椎動物配列中のものと類似の残基を含んでいてもよい。
限定することを意味することなく、以下の例は、活性なＡｃｔＲＩＩＡバリアントを定義するこの手法を示す。図３に示されるように、ヒト細胞外ドメインにおけるＦ１３は、Ｏｖｉｓ ａｒｉｅｓ（配列番号７６）、Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ（配列番号７９）、Ｂｏｓ Ｔａｕｒｕｓ（配列番号８０）、Ｔｙｔｏ ａｌｂａ（配列番号８１）、およびＭｙｏｔｉｓ ｄａｖｉｄｉｉ（配列番号８２）のＡｃｔＲＩＩＡにおいてＹであり、Ｆ、Ｗ、およびＹを含む芳香族残基がこの位置で許容されることを示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＱ２４は、Ｂｏｓ ＴａｕｒｕｓのＡｃｔＲＩＩＡにおいてＲであり、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、およびＥを含む荷電残基がこの位置で許容されることを示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＳ９５は、Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓおよびＴｙｔｏ ａｌｂａのＡｃｔＲＩＩＡにおいてＦであり、Ｅ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｇ、Ｙなどの極性残基、およびおそらくＬ、Ｉ、またはＦなどの疎水性残基を含む多種多様な変化がこの部位で許容され得ることを示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＥ５２は、Ｏｖｉｓ ａｒｉｅｓのＡｃｔＲＩＩＡにおいてＤであり、ＤおよびＥを含む酸性残基が、この位置で許容されることを示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＰ２９は、Ｏｖｉｓ ａｒｉｅｓのＡｃｔＲＩＩＡにおいてＳ、およびＭｙｏｔｉｓ ｄａｖｉｄｉｉのＡｃｔＲＩＩＡにおいてＬとして現れるように、比較的あまり保存されておらず、そのため、本質的に、任意のアミノ酸が、この位置で許容されるはずである。
ある特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含む単一アームヘテロ多量体に関し、これは、その断片、機能性バリアント、および修飾形態を含む。好ましくは、本開示の発明（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含む単一アームヘテロ多量体、およびその使用）による使用のためのＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、可溶性である（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメイン）。他の好ましい実施形態では、本開示の発明による使用のためのＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、１種または複数のＴＧＦベータスーパーファミリーリガンドに結合するか、および／またはその活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達の誘導）を阻害（アンタゴナイズ）する。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号９、１０、１１、５５、５７、５８、５９、８８、または８９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、配列番号９、１０、１１、５５、５７、５８、５９、８８、または８９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一である少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
一部の実施形態では、本開示は、治療有効性または安定性（例えば、有効期間、およびｉｎ ｖｉｖｏでのタンパク質分解に対する耐性）を増強するなどの目的のために、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの構造を修飾することにより機能性バリアントを作製することを企図する。バリアントは、アミノ酸の置換、欠失、付加、またはそれらの組合せによって産生することができる。例えば、ロイシンのイソロイシンもしくはバリンによる分離した置き換え、アスパラギン酸のグルタミン酸による分離した置き換え、トレオニンのセリンによる分離した置き換え、またはあるアミノ酸の構造的に関連するアミノ酸による類似の置き換え（例えば、保存的突然変異）が、得られる分子の生物活性に対して大きな影響を有さないであろうと予測することは合理的である。保存的置き換えは、それらの側鎖において関連しているアミノ酸のファミリー内で行われるものである。本開示のポリペプチドのアミノ酸配列の変化が機能性ホモログをもたらすかどうかは、野生型ポリペプチドと類似の様式で細胞中で応答を生じさせる、または例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０を含む１種または複数のＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢリガンドに結合する、バリアントポリペプチドの能力を評価することによって容易に決定することができる。
ある特定の実施形態では、本開示は、ポリペプチドのグリコシル化を変更するために、本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの特異的な突然変異を企図する。そのような突然変異は、Ｏ連結またはＮ連結グリコシル化部位などの、１つまたは複数のグリコシル化部位を導入または除去するために、選択され得る。アスパラギン連結グリコシル化認識部位は、一般に、アスパラギン－Ｘ－トレオニンまたはアスパラギン－Ｘ－セリン（式中、「Ｘ」は任意のアミノ酸である）のトリペプチド配列を含み、これは、適切な細胞のグリコシル化酵素によって特異的に認識される。変更はまた、ポリペプチドの配列に１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加、またはそれによる置換（Ｏ連結グリコシル化部位に対して）によって行われてもよい。グリコシル化認識部位の１番目または３番目のアミノ酸位置の１つまたは両方での各種のアミノ酸の置換または欠失（および／または２番目の位置でのアミノ酸の欠失）は、修飾トリペプチド配列での非グリコシル化をもたらす。ポリペプチド上の糖質部分の数を増加させる別の手段は、ポリペプチドへのグリコシドの化学的または酵素的カップリングによる。使用されるカップリング様式に応じて、糖は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン；（ｂ）遊離カルボキシル基；（ｃ）遊離スルフヒドリル基、例えば、システインの遊離スルフヒドリル基；（ｄ）遊離ヒドロキシル基、例えば、セリン、トレオニン、もしくはヒロドキシプロリンの遊離ヒドロキシル基；（ｅ）芳香族残基、例えば、フェニルアラニン、チロシン、もしくはトリプトファンの芳香族残基；または（ｆ）グルタミンのアミド基に結合され得る。ポリペプチド上に存在する１つまたは複数の糖質部分の除去は、化学的におよび／または酵素的に達成されてもよい。化学的脱グリコシル化は、例えば、ポリペプチドの化合物トリフルオロメタンスルホン酸または同等の化合物への曝露を含み得る。この処理は、アミノ酸配列をそのままにしながら、連結する糖（Ｎ－アセチルグルコサミンまたはＮ－アセチルガラクトサミン）を除いて、ほとんどまたはすべての糖の切断をもたらす。ポリペプチド上の糖質部分の酵素的切断は、Thotakura et al. [Meth. Enzymol. (1987) 138:350]によって記載されるように、各種のエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼの使用によって達成することができる。哺乳動物、酵母、昆虫、および植物細胞はすべて、ペプチドのアミノ酸配列によって影響され得る異なるグリコシル化パターンを導入し得るので、ポリペプチドの配列は、使用される発現系の種類に応じて、必要により、調整され得る。一般に、ヒトにおける使用のための本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、適したグリコシル化を提供する哺乳動物細胞系、例えば、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞系において発現され得るが、他の哺乳動物発現細胞系も同様に有用であると予想される。
ある特定の実施形態では、本開示は、本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの特異的な突然変異を企図する。一部の実施形態では、本開示のポリペプチドの１つまたは複数のアミノ酸残基を修飾することができる。一部の実施形態では、修飾は、グリコシル化アミノ酸である。一部の実施形態では、修飾は、ペグ化アミノ酸である。一部の実施形態では、修飾は、ファルネシル化アミノ酸である。一部の実施形態では、修飾は、アセチル化アミノ酸である。一部の実施形態では、修飾は、ビオチン化アミノ酸である。一部の実施形態では、修飾は、脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸である。一部の実施形態では、修飾は、有機誘導体化剤にコンジュゲートされたアミノ酸である。一部の実施形態では、本開示の第１および／または第２のポリペプチドは、グリコシル化アミノ酸、ペグ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸、および有機誘導体化剤にコンジュゲートされたアミノ酸から選択される１つまたは複数のアミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のポリペプチドは、グリコシル化され、ＣＨＯ細胞における第１および／または第２のポリペプチドの発現から得ることが可能なグリコシル化パターンを有する。
本開示は、突然変異体、特に本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのコンビナトリアル突然変異体のセット、および切断型突然変異体を生成する方法をさらに企図する。コンビナトリアル突然変異体のプールは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド配列を同定するために特に有用である。そのようなコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする目的は、例えば、変更された特性、例えば、変更された薬物動態または変更されたリガンド結合を有するポリペプチドバリアントを生成することであり得る。各種のスクリーニングアッセイが下記に提供され、そのようなアッセイを使用して、バリアントを評価し得る。例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドバリアントは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０）に結合して、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢリガンドのＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドへの結合を防止する能力、および／またはＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢリガンドによって引き起こされるシグナル伝達を妨げる能力についてスクリーニングされ得る。一部の実施形態では、本開示のヘテロ多量体は、細胞に基づくアッセイにおいて、１種または複数のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドの活性を阻害する。
本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ単一アームヘテロ多量体の活性はまた、細胞に基づくアッセイまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイにおいて試験され得る。例えば、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）に関与する遺伝子の発現に対する単一アームヘテロ多量体の効果が評価され得る。これは、必要により、１種または複数の組換えＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドタンパク質（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０）の存在下で行われてもよく、細胞は、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体、および必要に応じて、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドを産生するようにトランスフェクトされてもよい。同じく、本開示の単一アームヘテロ多量体は、マウスまたは他の動物に投与されてもよく、アルブミンクレアチニン比（ＡＣＲ）、糸球体濾過量（ＧＦＲ）、および／または血中尿素窒素（ＢＵＮ）などの１つまたは複数の測定値は、当技術分野で認識されている方法を使用して評価されてもよい。同様に、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドまたはそのバリアントの活性は、例えば、本明細書に記載されるアッセイおよび当技術分野における通常の知識のアッセイによって、骨芽細胞、脂肪細胞、および／または神経細胞において、これらの細胞の成長に対する任意の効果について試験されてもよい。ＳＭＡＤ応答性レポーター遺伝子が、下流のシグナル伝達に対する効果をモニターするために、そのような細胞系で使用されてもよい。
コンビナトリアル由来バリアントを生成することができ、これは、参照単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体、または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体と比べて増加した選択性または一般に増加した効力を有する。そのようなバリアントは、組換えＤＮＡ構築物から発現される場合、遺伝子治療プロトコールにおいて使用することができる。同じく、突然変異誘発は、対応する未修飾単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体とは劇的に異なる細胞外半減期を有するバリアントを生じさせることができる。例えば、変更されたタンパク質は、タンパク質分解、または未修飾ポリペプチドの破壊もしくはそうでなければ不活性化をもたらす他の細胞プロセスに対して、安定性がより高い、または安定性がより低い状態にすることができる。そのようなバリアント、およびそれらをコードする遺伝子は、ポリペプチドの半減期をモジュレートすることによって、ポリペプチド複合体レベルを変更するために利用することができる。例えば、短い半減期は、より一時的な生物学的効果を生じさせることができ、誘導性発現系の一部である場合、細胞外の組換えポリペプチド複合体レベルのより厳密な制御を可能にし得る。Ｆｃ融合タンパク質では、突然変異は、リンカー（もしあれば）および／またはＦｃ部分において行われて、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の半減期を変更し得る。
コンビナトリアルライブラリーは、潜在的なＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ配列の少なくとも一部をそれぞれ含むポリペプチドのライブラリーをコードする遺伝子の縮重ライブラリーによって産生されてもよい。例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、遺伝子配列に酵素的にライゲーションすることができ、その結果、ヌクレオチド配列をコードする潜在的なＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢの縮重セットは、個々のポリペプチドとして、または代わりに、より大きな融合タンパク質のセット（例えば、ファージディスプレイ用）として発現可能である。
潜在的なホモログのライブラリーを縮重オリゴヌクレオチド配列から生成することができる多くの方法がある。縮重遺伝子配列の化学合成は、自動ＤＮＡ合成機において行うことができ、次いで、合成遺伝子は、発現のための適切なベクターにライゲーションすることができる。縮重オリゴヌクレオチドの合成は、当技術分野において周知である。例えば、Narang, SA (1983) Tetrahedron 39:3；Itakura et al. (1981) RecombinantDNA, Proc. 3rd Cleveland Sympos. Macromolecules, ed. AG Walton, Amsterdam:Elsevier pp273-289；Itakura et al. (1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323；Itakura etal. (1984) Science 198:1056；Ike et al. (1983) Nucleic Acid Res. 11:477を参照されたい。そのような技法は、他のタンパク質の指向進化において用いられている。例えば、Scottet al., (1990) Science 249:386-390；Roberts et al. (1992) PNAS USA 89:2429-2433；Devlinet al. (1990) Science 249: 404-406；Cwirla et al., (1990) PNAS USA 87: 6378-6382；ならびに米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，１９８，３４６号、および同第５，０９６，８１５号を参照されたい。
あるいは、他の形態の突然変異誘発を利用して、コンビナトリアルライブラリーを生成することができる。例えば、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発［例えば、Ruf et al. (1994) Biochemistry 33:1565-1572；Wang et al. (1994) J.Biol. Chem. 269:3095-3099；Balint et al. (1993) Gene 137:109-118；Grodberg et al.(1993) Eur. J. Biochem. 218:597-601；Nagashima et al. (1993) J. Biol. Chem.268:2888-2892；Lowman et al. (1991) Biochemistry 30:10832-10838；およびCunningham etal. (1989) Science 244:1081-1085を参照されたい］、リンカースキャニング突然変異誘発［例えば、Gustin et al.(1993) Virology 193:653-660；およびBrown et al. (1992) Mol. Cell Biol. 12:2644-2652；McKnightet al. (1982) Science 232:316を参照されたい］、飽和突然変異誘発［例えば、Meyers et al., (1986)Science 232:613を参照されたい］；ＰＣＲ突然変異誘発［例えば、Leung et al. (1989) Method Cell Mol Biol1:11-19を参照されたい］；または化学的突然変異誘発を含むランダム突然変異誘発［例えば、Miller et al. (1992) A ShortCourse in Bacterial Genetics, CSHL Press, Cold Spring Harbor, NY；およびGreener etal. (1994) Strategies in Mol Biol 7:32-34を参照されたい］を使用して生成およびスクリーニングすることによってライブラリーから単離することができる。リンカースキャニング突然変異誘発は、特にコンビナトリアル設定では、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの切断（生体活性）形態を特定するための魅力的な方法である。
広範囲の技法が、点突然変異および切断によって作製されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするため、ならびにこのことについて、ある特定の特性を有する遺伝子産物についてｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために、当技術分野において公知である。そのような技法は、一般に、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体のコンビナトリアル突然変異誘発によって生成される遺伝子ライブラリーの迅速スクリーニングに適用可能であろう。大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニングするために最も広く使用される技法は、典型的には、遺伝子ライブラリーを複製可能発現ベクターにクローニングすること、得られたベクターのライブラリーで適切な細胞を形質転換すること、および所望の活性の検出が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの比較的容易な単離を促進する条件下で、コンビナトリアル遺伝子を発現させることを含む。好ましいアッセイとしては、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０）についての結合アッセイおよび／または細胞シグナル伝達アッセイが挙げられる。
ある特定の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド中に天然に存在する任意のものに加えて、翻訳後修飾をさらに含んでいてもよい。そのような修飾としては、限定されるものではないが、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアシル化が挙げられる。結果として、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ単一アームヘテロ多量体は、ポリエチレングリコール、脂質、多糖または単糖、およびホスフェートなどの非アミノ酸エレメントを含み得る。単一アームヘテロ多量体の機能性に対するそのような非アミノ酸エレメントの効果は、他の単一アームヘテロ多量体バリアントについて本明細書に記載されるようにして試験されてもよい。本開示のポリペプチドが、新生形態のポリペプチドを切断することによって細胞中で産生される場合、翻訳後プロセシングはまた、タンパク質の正確なフォールディングおよび／または機能に対して重要であり得る。異なる細胞（例えば、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ３８、ＮＩＨ－３Ｔ３、またはＨＥＫ２９３）は、特定の細胞機構、およびそのような翻訳後活性の特徴的なメカニズムを有し、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの正確な修飾およびプロセシングを確実にするように選択され得る。
ある特定の態様では、本明細書に開示されるポリペプチドは、相互作用対の相補的メンバーを含む少なくとも１種のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むタンパク質ヘテロ多量体を形成し得る。好ましくは、本明細書に開示されるポリペプチドは、単一アームヘテロ二量体を形成するが、限定されるものではないが、ヘテロ三量体、ヘテロ四量体、およびさらなるオリゴマー構造などのより高次のヘテロ多量体も含む。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、少なくとも１つの多量体化ドメインを含む。本明細書に開示されるように、「多量体化ドメイン」という用語は、少なくとも第１のポリペプチドと少なくとも第２のポリペプチドとの間の共有結合的なまたは非共有結合的な相互作用を促進するアミノ酸またはアミノ酸の配列を指す。本明細書に開示されるポリペプチドは、共有結合的にまたは非共有結合的に、多量体化ドメインに接合され得る。好ましくは、多量体化ドメインは、単一アームポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む融合ポリペプチド）と相互作用対の相補的メンバーとの間の相互作用を促進して、ヘテロ多量体形成（例えば、ヘテロ二量体形成）を促進し、かつ必要に応じて、ホモ多量体形成（例えば、ホモ二量体形成）を妨げるか、またはそうでなければ冷遇し、それによって、所望のヘテロ多量体の収量を増加させる。
当技術分野において公知の多くの方法を使用して、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を生成することができる。例えば、天然に存在しないジスルフィド結合は、ジスルフィド結合が第１および第２のポリペプチドの間で形成されるように、遊離チオールが第２のポリペプチド（例えば、相互作用対の相補的メンバー）上の別の遊離チオール含有残基と相互作用するように、第１のポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む融合ポリペプチド）において、システインなどの遊離チオール含有残基で天然に存在するアミノ酸を置き換えることによって構築されてもよい。ヘテロ多量体形成を促進するための相互作用の追加の例としては、限定されるものではないが、ＫｊａｅｒｇａａｒｄらのＷＯ２００７１４７９０１号に記載されるようなイオン性相互作用；Ｋａｎｎａｎらの米国特許第８，５９２，５６２号に記載されるような静電ステアリング効果；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎらの米国特許出願公開第２０１２０３０２７３７号に記載されるようなコイルドコイル相互作用；Pack & Plueckthun,(1992) Biochemistry 31: 1579-1584に記載されるようなロイシンジッパー；およびPacket al., (1993) Bio/Technology 11: 1271-1277に記載されるようなヘリックスターンヘリックスモチーフが挙げられる。さまざまなセグメントの連結が、例えば、化学的架橋、ペプチドリンカー、ジスルフィド架橋などによるような共有結合、またはアビジン－ビオチンもしくはロイシンジッパー技術などによるアフィニティー相互作用を介して得ることができる。
ある特定の態様では、多量体化ドメインは、相互作用対の１つの構成要素を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドは、第２のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含むヘテロ多量体を形成してもよく、ここで、第１のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列および相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含む。相互作用対は、相互作用してヘテロ多量体、特にヘテロ二量体を形成する任意の２つのポリペプチド配列であり得るが、有効な実施形態は、ホモ二量体複合体を形成することができる相互作用対も用い得る。相互作用対のうちの１つのメンバーは、例えば、配列番号１、２、３、４、５、６、９、１０、１１のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、あるいはそれからなるポリペプチド配列を含む、本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに融合され得る。相互作用対は、増加した血清半減期などの改善された特性／活性を付与するように、または別の部分が改善された特性／活性を提供するように結合されるアダプターとして作用するように選択され得る。例えば、ポリエチレングリコール部分は、相互作用対の１つまたは両方の構成要素に結合されて、改善された血清半減期などの改善された特性／活性を提供し得る。
相互作用対の第１および第２のメンバーは、非対称対であってもよく、これは、対のメンバーが、自己会合するよりもむしろ、互いと優先的に会合することを意味する。したがって、非対称相互作用対の第１および第２のメンバーは、会合して、ヘテロ二量体相互作用対を形成し得る。あるいは、相互作用対は、ガイドされなくてもよく、これは、対のメンバーが、実質的な優先度なしで、互いと会合してもよく、または自己会合してもよく、そのため、同じまたは異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する。したがって、ガイドされていない相互作用対の第１および第２のメンバーは、会合して、ホモ二量体相互作用対またはヘテロ二量体相互作用対を形成し得る。必要に応じて、相互作用対（例えば、非対称対またはガイドされていない相互作用対）の第１のメンバーは、相互作用対の第２のメンバーと共有結合的に会合する。必要に応じて、相互作用対（例えば、非対称対またはガイドされていない相互作用対）の第１のメンバーは、相互作用対の第２のメンバーと非共有結合的に会合する。
具体例として、本開示は、ポリペプチドに融合された少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むヘテロ多量体融合タンパク質を提供する。一部の実施形態では、本開示は、免疫グロブリンのＣＨ１、ＣＨ２もしくはＣＨ３ドメイン、またはＦｃドメインなどの免疫グロブリンの定常領域を含むポリペプチドに融合された少なくとも１種のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むヘテロ多量体融合タンパク質を提供する。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４に由来するＦｃドメインが本明細書に提供される。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、第１の免疫グロブリンＦｃドメインである。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、第１の免疫グロブリンＦｃドメインである。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖由来の定常領域に由来する。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１由来の定常領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ２由来の定常領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ３由来の定常領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ４由来の定常領域を含む。一部の実施形態では、免疫グロブリンまたはＦｃドメインのアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシン（Ｋ）が除去されて提供されてもよい（例えば、配列番号８５および８７）。
ＣＤＣまたはＡＤＣＣ活性のいずれかを減少させる他の突然変異が公知であり、集合的に、これらのバリアントのいずれかは、本開示に含まれ、本開示の単一アームヘテロ多量体融合タンパク質の有利な構成要素として使用され得る。必要に応じて、配列番号２２のＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、Ａｓｐ－２６５、Ｌｙｓ－３２２、およびＡｓｎ－４３４などの残基に１つまたは複数の突然変異を有する（対応する全長ＩｇＧ１に従って番号付け）。ある特定の場合では、これらの突然変異（例えば、Ａｓｐ－２６５突然変異）のうちの１つまたは複数を有する突然変異体Ｆｃドメインは、野生型Ｆｃドメインと比べて、Ｆｃγ受容体に結合する能力が低減されている。他の場合では、これらの突然変異（例えば、Ａｓｎ－４３４突然変異）のうちの１つまたは複数を有する突然変異体Ｆｃドメインは、野生型Ｆｃドメインと比べて、ＭＨＣクラスＩ関連Ｆｃ受容体（ＦｃＲＮ）に結合する能力が増加している。
ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（Ｇ１Ｆｃ）のために使用され得るネイティブアミノ酸配列の例を下記に示す（配列番号２２）。点線下線は、ヒンジ領域を示し、実線下線は、天然に存在するバリアントを有する位置を示す。一部分では、本開示は、配列番号２２と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。Ｇ１Ｆｃにおける天然に存在するバリアントは、配列番号２２（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５７を参照されたい）において使用される番号付けシステムに従って、Ｅ１３４ＤおよびＭ１３６Ｌを含むであろう。
Figure 2023528117000019
ヒトＩｇＧ２のＦｃ部分（Ｇ２Ｆｃ）のために使用され得るネイティブアミノ酸配列の例を下記に示す（配列番号２３）。点線下線は、ヒンジ領域を示し、二重下線は、配列中にデータベースの矛盾が存在する位置を示す（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０１８５９に従う）。一部分では、本開示は、配列番号２３と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。
Figure 2023528117000020
ヒトＩｇＧ３のＦｃ部分（Ｇ３Ｆｃ）のために使用され得るアミノ酸配列の２つの例を下記に示す。Ｇ３Ｆｃにおけるヒンジ領域は、他のＦｃ鎖におけるものと最大で４倍ぐらいの長さであり得、類似の１７残基のセグメントが先行する３つの同一の１５残基のセグメントを含有する。下記に示される第１のＧ３Ｆｃ配列（配列番号２４）は、単一の１５残基のセグメントから構成される短ヒンジ領域を含有するが、第２のＧ３Ｆｃ配列（配列番号２５）は、全長ヒンジ領域を含有する。それぞれの場合において、点線下線は、ヒンジ領域を示し、実線下線は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０１８５９に従う天然に存在するバリアントを有する位置を示す。一部分では、本開示は、配列番号２４および２５と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸を含むポリペプチドを提供する。
Figure 2023528117000021
Figure 2023528117000022
Ｇ３Ｆｃにおける天然に存在するバリアント（例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８６０を参照されたい）は、配列番号２４において使用される番号付けシステムに変換した場合、Ｅ６８Ｑ、Ｐ７６Ｌ、Ｅ７９Ｑ、Ｙ８１Ｆ、Ｄ９７Ｎ、Ｎ１００Ｄ、Ｔ１２４Ａ、Ｓ１６９Ｎ、Ｓ１６９ｄｅｌ、Ｆ２２１Ｙを含み、本開示は、これらの変形形態のうちの１つまたは複数を含有するＧ３Ｆｃドメインを含む融合タンパク質を提供する。加えて、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ３遺伝子（ＩＧＨＧ３）は、異なるヒンジ長によって特徴付けられる構造的多型を示す［Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５９を参照されたい］。具体的には、バリアントＷＩＳは、Ｖ領域の大部分およびＣＨ１領域のすべてを欠いている。これは、ヒンジ領域に通常存在する１１位に加えて、７位に余分な鎖間ジスルフィド結合を有する。バリアントＺＵＣは、Ｖ領域の大部分、ＣＨ１領域のすべて、およびヒンジの一部を欠く。バリアントＯＭＭは、対立形質または別のガンマ鎖サブクラスを表し得る。本開示は、これらのバリアントのうちの１つまたは複数を含有するＧ３Ｆｃドメインを含む追加の融合タンパク質を提供する。
ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分（Ｇ４Ｆｃ）のために使用され得るネイティブアミノ酸配列の例を下記に示す（配列番号２６）。点線下線は、ヒンジ領域を示す。一部分では、本開示は、配列番号２６と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。
Figure 2023528117000023
Ｆｃドメインにおける各種の操作された突然変異は、Ｇ１Ｆｃ配列（配列番号２２）に関して本明細書に提示され、Ｇ２Ｆｃ、Ｇ３Ｆｃ、およびＧ４Ｆｃにおける類似の突然変異は、図４におけるＧ１Ｆｃとのそれらのアライメントに由来し得る。同等でないヒンジ長に起因して、アイソタイプアライメント（図４）に基づく類似のＦｃ位置は、配列番号２２、２３、２４、および２６において異なるアミノ酸番号を持つ。ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域から構成される免疫グロブリン配列（例えば、配列番号２２、２３、２４、および２６）における所与のアミノ酸位置は、番号付けが、ＵｎｉｐｒｏｔデータベースにおけるようにＩｇＧ１重鎖定常ドメイン全体（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域から構成される）を包含する場合に、同じ位置とは異なる番号によって特定されることも認識され得る。例えば、ヒトＧ１Ｆｃ配列（配列番号２２）、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５７）、およびヒトＩｇＧ１重鎖における選択されたＣＨ３位置の間の対応は、以下の通りである。
Figure 2023528117000024
単一細胞系からの非対称の免疫グロブリンに基づくタンパク質の大規模産生において生じる問題は、「鎖会合課題」として公知である。二特異性抗体の産生において顕著に直面するように、鎖会合課題は、異なる重鎖および／または軽鎖が単一細胞系において産生される場合に、生得的に生じる複数の組合せの中から所望の多重鎖タンパク質を効率的に産生するという挑戦に関する［例えば、Klein et al (2012) mAbs 4:653-663を参照されたい］。この問題は、２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖が同じ細胞中で産生される場合に最も重大であり、この場合では、１つだけが典型的には所望される場合に、合計で１６の可能な鎖の組合せ（これらの一部は同一であるが）が存在する。それにもかかわらず、同じ原理は、２つの異なる（非対称）重鎖のみを組み込む所望の多重鎖融合タンパク質の収量の減少の原因となる。
単一細胞系においてＦｃ含有融合ポリペプチド鎖の所望の対形成を増加させて、許容される収量で好ましい非対称融合タンパク質を産生するさまざまな方法が、当技術分野において公知である［例えば、Klein et al (2012) mAbs 4:653-663を参照されたい］。Ｆｃ含有鎖の所望の対形成を得るための方法としては、限定されるものではないが、電荷に基づく対形成（静電ステアリング）、「ノブ－イントゥ－ホール」立体対形成、ＳＥＥＤｂｏｄｙ対形成、およびロイシンジッパーに基づく対形成が挙げられる。例えば、Ridgwayet al (1996) Protein Eng 9:617-621；Merchant et al (1998) Nat Biotech 16:677-681；Daviset al (2010) Protein Eng Des Sel 23:195-202；Gunasekaran et al (2010);285:19637-19646；Wranik et al (2012) J Biol Chem 287:43331-43339；米国特許第５９３２４４８号；ＷＯ１９９３／０１１１６２号；ＷＯ２００９／０８９００４号、およびＷＯ２０１１／０３４６０５号を参照されたい。
例えば、特定のポリペプチド間の相互作用によって促進され得る１つの手段は、Ａｒａｔｈｏｏｎらの米国特許第７，１８３，０７６号およびＣａｒｔｅｒらの米国特許第５，７３１，１６８号に記載されるような突出－イントゥ－空洞（ノブ－イントゥ－ホール）の相補的領域を操作することによるものである。「突出」は、第１のポリペプチド（例えば、第１の相互作用対）の境界からの小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。突出と同一または類似のサイズの相補的「空洞」は、必要に応じて、第２のポリペプチド（例えば、第２の相互作用対）の境界において、大きなアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置き換えることによって作出される。適切な位置および減少した突出または空洞が、第１または第２のポリペプチドのいずれかの境界に存在する場合、隣接する境界で、それぞれ、対応する空洞または突出を操作することのみが必要である。
中性のｐＨ（７．０）で、アスパラギン酸およびグルタミン酸は、負に荷電し、リシン、アルギニン、およびヒスチジンは、正に荷電する。これらの荷電残基を使用して、ヘテロ二量体形成を促進し、同時に、ホモ二量体形成を妨げることができる。引力相互作用が反対の荷電間で起こり、反発相互作用が同種の荷電間で起こる。一部分では、本明細書に開示されるタンパク質複合体は、ヘテロ多量体形成（例えば、ヘテロ二量体形成）を促進するために引力相互作用を利用し、必要に応じて、荷電した境界の残基の部位特異的突然変異誘発を行うことによって、ホモ二量体形成（例えば、ホモ二量体形成）を妨げるために反発相互作用を利用する。
例えば、ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインの境界は、ドメイン間相互作用に関与する４つの固有の荷電残基対：Ａｓｐ３５６－Ｌｙｓ４３９’、Ｇｌｕ３５７－Ｌｙｓ３７０’、Ｌｙｓ３９２－Ａｓｐ３９９’、およびＡｓｐ３９９－Ｌｙｓ４０９’［第２の鎖中の残基の番号付けは（’）によって示される］を含む。ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメイン中で残基を指定するためにここで使用される番号付けスキームがＫａｂａｔのＥＵ番号付けスキームに従うことに留意すべきである。ＣＨ３－ＣＨ３ドメイン相互作用に存在する２倍の対称に起因して、それぞれの固有の相互作用は、構造中で２回表される（例えば、Ａｓｐ－３９９－Ｌｙｓ４０９’およびＬｙｓ４０９－Ａｓｐ３９９’）。野生型配列では、Ｋ４０９－Ｄ３９９’が、ヘテロ二量体およびホモ二量体形成の両方に好ましい。第１の鎖における電荷の極性をスイッチする単一の突然変異（例えば、Ｋ４０９Ｅ；正電荷から負電荷に）は、第１の鎖のホモ二量体の形成に対して好ましくない相互作用をもたらす。好ましくない相互作用は、同じ電荷（負－負；Ｋ４０９Ｅ－Ｄ３９９’およびＤ３９９－Ｋ４０９Ｅ’）間で起こる反発相互作用に起因して生じる。第２の鎖における電荷の極性をスイッチする類似の突然変異（Ｄ３９９Ｋ’；負から正に）は、第２の鎖のホモ二量体形成に対して好ましくない相互作用（Ｋ４０９’－Ｄ３９９Ｋ’およびＤ３９９Ｋ－Ｋ４０９’）をもたらす。しかし、同時に、これらの２つの突然変異（Ｋ４０９ＥおよびＤ３９９Ｋ’）は、ヘテロ二量体形成に対して好ましい相互作用（Ｋ４０９Ｅ－Ｄ３９９Ｋ’およびＤ３９９－Ｋ４０９’）をもたらす。
ヘテロ二量体形成およびホモ二量体の邪魔に対する静電ステアリング効果は、例えば、Ａｒｇ３５５およびＬｙｓ３６０を含む第２の鎖における逆の荷電残基と対形成することができるか、またはできない追加の荷電残基の突然変異によってさらに増強することができる。下記の表は、本明細書に開示されるヘテロ多量体のヘテロ多量体形成を増強するために単独でまたは組み合わせて使用することができる可能性のある荷電変化突然変異を列挙する。
Figure 2023528117000025
一部の実施形態では、本出願の融合タンパク質においてＣＨ３－ＣＨ３境界を作り上げる１つまたは複数の残基は、相互作用が静電気的に好ましくないものになるように、荷電したアミノ酸により置き換えられる。例えば、境界における正に荷電したアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、またはヒスチジン）は、負に荷電したアミノ酸（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）により置き換えられる。あるいは、または前述の置換と組み合わせて、境界における負に荷電したアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸により置き換えられる。ある特定の実施形態では、アミノ酸は、所望の電荷特徴を有する天然に存在しないアミノ酸により置き換えられる。負に荷電した残基（ＡｓｐまたはＧｌｕ）をＨｉｓに突然変異することで、立体的な課題を引き起こし得る側鎖体積の増加をもたらすことに留意すべきである。さらには、Ｈｉｓプロトンの供与体形態および受容体形態は、局在化した環境に依存する。これらの課題は、設計戦略とともに考慮に入れられるべきである。境界の残基は、ヒトおよびマウスＩｇＧサブクラスにおいて高度に保存されているので、本明細書に開示される静電ステアリング効果は、ヒトおよびマウスのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４に適用することができる。この戦略は、ＣＨ３ドメイン境界で非荷電残基を荷電残基に修飾するために拡張することもできる。
一部分では、本開示は、電荷対形成（静電ステアリング）に基づいて相補的であるように操作されたＦｃ配列を使用する非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望の対形成を提供する。静電的相補性を有するＦｃ配列の対の一方は、必要に応じたリンカーを有するまたは有さない状態で、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと任意に融合して、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドを生成し得る。この単一鎖は、第１のＦｃと相補的なＦｃ配列と一緒に最適な細胞中で共発現されて、所望の多重鎖構築物（例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体）の生成に有利に働き得る。静電ステアリングに基づくこの例では、配列番号１４［ヒトＧ１Ｆｃ（Ｅ１３４Ｋ／Ｄ１７７Ｋ）］および配列番号１５［ヒトＧ１Ｆｃ（Ｋ１７０Ｄ／Ｋ１８７Ｄ）］は、相補的Ｆｃ配列の例であり、ここで、操作されたアミノ酸置換に二重下線が付けられており、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１４または配列番号１５のいずれかに融合され得るが、両方には融合され得ない。ネイティブｈＧ１Ｆｃ、ネイティブｈＧ２Ｆｃ、ネイティブｈＧ３Ｆｃ、およびネイティブｈＧ４Ｆｃの間の高度のアミノ酸配列同一性を考えると、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ、またはｈＧ４Ｆｃの対応する位置のアミノ酸置換（図４を参照されたい）が、下記の相補的ｈＧ１Ｆｃ対の代わりに使用され得る相補的Ｆｃ対を生成することが認識され得る（配列番号１４および１５）。
Figure 2023528117000026
Figure 2023528117000027
一部分では、本開示は、立体的相補性のために操作されたＦｃ配列を使用する非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望の対形成を提供する。一部分では、本開示は、立体的相補性の例としてノブ－イントゥ－ホール対形成を提供する。立体的相補性を有するＦｃ配列の対の一方は、必要に応じたリンカーを有するまたは有さない状態で、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと任意に融合して、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体融合構築物または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体融合構築物を生成し得る。この単一鎖は、第１のＦｃと相補的なＦｃ配列と一緒に最適な細胞中で共発現されて、所望の多重鎖構築物（例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体）の生成に有利に働き得る。ノブ－イントゥ－ホール対形成に基づくこの例では、配列番号１６［ヒトＧ１Ｆｃ（Ｔ１４４Ｙ）］および配列番号１７［ヒトＧ１Ｆｃ（Ｙ１８５Ｔ）］は、相補的Ｆｃ配列の例であり、ここで、操作されたアミノ酸置換に二重下線が付けられており、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１６または配列番号１７のいずれかに融合され得るが、両方には融合され得ない。ネイティブｈＧ１Ｆｃ、ネイティブｈＧ２Ｆｃ、ネイティブｈＧ３Ｆｃ、およびネイティブｈＧ４Ｆｃの間の高度のアミノ酸配列同一性を考えると、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ、またはｈＧ４Ｆｃの対応する位置のアミノ酸置換（図４を参照されたい）が、下記の相補的ｈＧ１Ｆｃ対の代わりに使用され得る相補的Ｆｃ対を生成することが認識され得る（配列番号１６および１７）。
Figure 2023528117000028
Figure 2023528117000029
操作されたジスルフィド結合と組み合わされたノブ－イントゥ－ホール対形成に基づくＦｃ相補性の例は、配列番号１８［ｈＧ１Ｆｃ（Ｓ１３２Ｃ／Ｔ１４４Ｗ）］および配列番号１９［ｈＧ１Ｆｃ（Ｙ１２７Ｃ／Ｔ１４４Ｓ／Ｌ１４６Ａ／Ｙ１８５Ｖ）］に開示される。これらの配列における操作されたアミノ酸置換は、二重下線が付けられ、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１８または配列番号１９のいずれかに融合され得るが、両方には融合され得ない。ネイティブｈＧ１Ｆｃ、ネイティブｈＧ２Ｆｃ、ネイティブｈＧ３Ｆｃ、およびネイティブｈＧ４Ｆｃの間の高度のアミノ酸配列同一性を考えると、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ、またはｈＧ４Ｆｃの対応する位置のアミノ酸置換（図４を参照されたい）が、下記の相補的ｈＧ１Ｆｃ対の代わりに使用され得る相補的Ｆｃ対を生成することが認識され得る（配列番号１８および１９）。
Figure 2023528117000030
一部分では、本開示は、ヒトＩｇＧおよびＩｇＡ ＣＨ３ドメインのβ鎖セグメントをかみ合わせて生成するように操作されたＦｃ配列を使用する、非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望の対形成を提供する。そのような方法は、ＳＥＥＤｂｏｄｙ融合タンパク質の形成を可能にする鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ＣＨ３ヘテロ二量体の使用を含む［例えば、Davis et al (2010) Protein Eng Design Sel 23:195-202を参照されたい］。ＳＥＥＤｂｏｄｙ相補性を有するＦｃ配列の対の一方は、必要に応じたリンカーを有するまたは有さない状態で、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと任意に融合して、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体融合構築物または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体構築物を生成し得る。この単一鎖は、第１のＦｃと相補的なＦｃ配列と一緒に最適な細胞中で共発現されて、所望の多重鎖構築物の生成に有利に働き得る。ＳＥＥＤｂｏｄｙ（Ｓｂ）対形成に基づくこの例では、配列番号２０［ｈＧ１Ｆｃ（ＳｂＡＧ）］および配列番号２１［ｈＧ１Ｆｃ（ＳｂＧＡ）］は、相補的ＩｇＧ Ｆｃ配列の例であり、ここで、ＩｇＡ Ｆｃからの操作されたアミノ酸置換に二重下線が付けられており、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２０または配列番号２１のいずれかに融合され得るが、両方には融合され得ない。ネイティブｈＧ１Ｆｃ、ネイティブｈＧ２Ｆｃ、ネイティブｈＧ３Ｆｃ、およびネイティブｈＧ４Ｆｃの間の高度のアミノ酸配列同一性を考えると、ｈＧ１Ｆｃ、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ、またはｈＧ４Ｆｃの対応する位置のアミノ酸置換（図４を参照されたい）が、下記の相補的ＩｇＧ－ＩｇＡ対において使用され得るＦｃ単量体を生成することが認識され得る（配列番号２０および２１）。
Figure 2023528117000031
一部分では、本開示は、Ｆｃ ＣＨ３ドメインのＣ末端で結合した切断可能なロイシンジッパードメインを有する非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望の対形成を提供する。ロイシンジッパーの結合は、ヘテロ二量体抗体重鎖の優先的なアセンブリーを引き起こすのに十分である。例えば、Wranik et al (2012) J Biol Chem 287:43331-43339を参照されたい。本明細書に開示されるように、ロイシンジッパー形成鎖に結合したＦｃ配列の対の一方は、必要に応じたリンカーを有するまたは有さない状態で、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと任意に融合して、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体融合構築物、または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体融合構築物を生成し得る。この単一鎖は、相補的ロイシンジッパー形成鎖に結合したＦｃ配列と一緒に最適な細胞中で共発現されて、所望の多重鎖構築物の生成に有利に働き得る。精製後の細菌性エンドプロテイナーゼＬｙｓ－Ｃによる構築物のタンパク質分解消化は、ロイシンジッパードメインを放出することができ、構造がネイティブＦｃと同一であるＦｃ構築物をもたらす。ロイシンジッパー対形成に基づくこの例では、配列番号２７［ｈＧ１Ｆｃ－Ａｐ１（酸性）］および配列番号２８［ｈＧ１Ｆｃ－Ｂｐ１（塩基性）］は相補的ＩｇＧ Ｆｃ配列の例であり、ここで、操作された相補的ロイシンジッパー配列に下線が付けられており、構築物のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２７または配列番号２８のいずれかに融合され得るが、両方には融合され得ない。ネイティブｈＧ１Ｆｃ、ネイティブｈＧ２Ｆｃ、ネイティブｈＧ３Ｆｃ、およびネイティブｈＧ４Ｆｃの間の高度のアミノ酸配列同一性を考えると、必要に応じたリンカーを有するまたは有さない状態で、ｈＧ１Ｆｃ、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ、またはｈＧ４Ｆｃに結合したロイシンジッパー形成配列（図４を参照されたい）が、下記の相補的ロイシンジッパー形成対において使用され得るＦｃ単量体を生成することが認識され得る（配列番号２７および２８）。
Figure 2023528117000032
融合タンパク質（例えば、免疫グロブリンＦｃ融合タンパク質）の異なるエレメントが、所望の機能性と一致する任意の様式で配列され得ることが理解される。例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインは、異種ドメインに対してＣ末端に配置されてもよく、または代わりに、異種ドメインは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインに対してＣ末端に配置されてもよい。ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインおよび異種ドメインは、融合タンパク質中で隣接する必要はなく、追加のドメインまたはアミノ酸配列が、いずれかのドメインに対してＣ末端もしくはＮ末端に、またはドメインの間に含まれていてもよい。例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体融合構築物または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体融合構築物は、式Ａ－Ｂ－Ｃで記載されるアミノ酸配列を含み得る。Ｂ部分は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインに対応する。ＡおよびＣ部分は、独立して、０、１または２つ以上のアミノ酸であり得、ＡおよびＣ部分は両方とも、存在する場合、Ｂに対して異種である。Ａおよび／またはＣ部分は、リンカー配列を介してＢ部分に結合されていてもよい。ある特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドは、式Ａ－Ｂ－Ｃで記載されるアミノ酸配列（式中、Ａは、リーダー（シグナル）配列であり、Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインから構成され、Ｃは、ｉｎ ｖｉｖｏ安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期、取り込み／投与、組織局在化もしくは分布、タンパク質複合体の形成、および／または精製のうちの１つまたは複数を増強するポリペプチド部分である）を含む。ある特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドは、式Ａ－Ｂ－Ｃで記載されるアミノ酸配列（式中、Ａは、ＴＰＡリーダー配列であり、Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインから構成され、Ｃは、免疫グロブリンＦｃドメインである）を含む。好ましい融合ポリペプチドは、配列番号４６、４８、５５、５７、５８、５９、６０、６１、８４、８６、８８、８９、９０、または９１のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、所望の特性を付与するために、１つまたは複数の異種部分（ドメイン）をさらに含む。例えば、一部の融合ドメインは、アフィニティークロマトグラフィーによる融合タンパク質の単離のために特に有用である。そのような融合ドメインの周知の例としては、限定されるものではないが、ポリヒスチジン、Ｇｌｕ－Ｇｌｕ、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、プロテインＡ、プロテインＧ、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、マルトース結合性タンパク質（ＭＢＰ）、またはヒト血清アルブミンが挙げられる。アフィニティー精製の目的のために、グルタチオン、アミラーゼ、およびニッケルまたはコバルトコンジュゲート化樹脂などのアフィニティークロマトグラフィーのための関連するマトリックスが使用される。そのようなマトリックスの多くは、「キット」形態、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＧＳＴ精製システム、および（ＨＩＳ６）融合パートナーとともに有用なＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ（商標）システム（Ｑｉａｇｅｎ）において利用可能である。別の例として、融合ドメインは、リガンドトラップポリペプチドの検出を容易にするために選択され得る。そのような検出ドメインの例としては、さまざまな蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ）、ならびに特異的抗体が利用可能な通常は短ペプチド配列である「エピトープタグ」が挙げられる。特異的モノクローナル抗体が容易に利用可能である周知のエピトープタグとしては、ＦＬＡＧ、インフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）、およびｃ－ｍｙｃタグが挙げられる。一部の場合では、融合ドメインは、第Ｘａ因子またはトロンビンなどのプロテアーゼ切断部位を有し、これは、関連するプロテアーゼが融合タンパク質を部分的に消化し、それによって、そこから組換えタンパク質を遊離させることを可能にする。次いで、遊離したタンパク質は、その後のクロマトグラフ分離によって融合ドメインから単離することができる。
ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ポリペプチドを安定化することができる１つまたは複数の修飾を含む。例えば、そのような修飾は、ポリペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ半減期を増強するか、ポリペプチドの循環半減期を増強するか、および／またはポリペプチドのタンパク質分解を低減する。そのような安定化する修飾としては、限定されるものではないが、融合ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインおよび安定化ドメインを含む融合ポリペプチドを含む）、グリコシル化部位の修飾（例えば、グリコシル化部位の本開示のポリペプチドへの付加を含む）、および糖質部分の修飾（例えば、本開示のポリペプチドからの糖質部分の除去を含む）が挙げられる。本明細書で使用される場合、「安定化ドメイン」という用語は、融合ポリペプチドの場合におけるように融合ドメイン（例えば、免疫グロブリンＦｃドメイン）を指すだけでなく、糖質部分などの非タンパク質性修飾、またはポリエチレングリコールなどの非タンパク質性部分も含む。
好ましい実施形態では、本明細書に記載される方法に従って使用される単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、単離されたヘテロ多量体である。本明細書で使用される場合、単離されたタンパク質（例えば、ヘテロ多量体）またはポリペプチド（例えば、ヘテロ多量体）は、その天然の環境の構成要素から分離されているものである。一部の実施形態では、本開示の単一アームヘテロ多量体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定されるように、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％より高い純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法は、当技術分野において周知である［例えば、Flatman et al., (2007) J. Chromatogr. B 848:79-87を参照されたい］。
ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドおよびその単一アームヘテロ多量体は、各種の当技術分野で公知の技法によって産生することができる。例えば、本開示のポリペプチドは、Bodansky, M. Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag,Berlin (1993)およびGrant G. A. (ed.), Synthetic Peptides: A User's Guide, W. H.Freeman and Company, New York (1992)に記載される技法などの標準的なタンパク質化学技法を使用して合成することができる。加えて、自動ペプチド合成機が市販されている（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ Ｍｏｄｅｌ ３９６；Ｍｉｌｌｉｇｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ ９６００を参照）。あるいは、本開示のポリペプチドおよび複合体は、その断片またはバリアントを含んで、当技術分野において周知であるさまざまな発現系［例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、バキュロウイルス］を使用して、組換え的に産生されてもよい。さらなる実施形態では、本開示の修飾または未修飾ポリペプチドは、例えば、プロテアーゼ、例えば、トリプシン、サーモリシン、キモトリプシン、ペプシン、または対の塩基性アミノ酸変換酵素（ＰＡＣＥ）を使用することによる、組換え的に産生された全長ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの消化によって産生されてもよい。（市販のソフトウェア、例えば、ＭａｃＶｅｃｔｏｒ、Ｏｍｅｇａ、ＰＣＧｅｎｅ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．を使用する）コンピュータ解析を使用して、タンパク質分解的切断部位を特定することができる。
一部の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、第２のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含み、ここで、第１のポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列およびＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢを含まない。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号１、２、３、４、５、および６のうちのいずれかの配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または配列番号１のアミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、もしくは２９のうちのいずれか１つで開始し、配列番号１のアミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、もしくは１３４のうちのいずれか１つで終了するポリペプチドと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号１の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号２の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号３の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号４の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号５の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号６の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号１のアミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９のうちのいずれか１つで開始し、配列番号１のアミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４のうちのいずれか１つで終了するポリペプチドと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号１のＬ７９に対応する位置に酸性アミノ酸を含まない。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号１のＬ７９に対応する位置にアスパラギン酸（Ｄ）を含まない。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号２のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号２のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号３のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号３のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号５のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号５のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号６のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号６のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号４８のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号４８のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号８４のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号８４のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号６１のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号６１のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号８６のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号８６のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号９０のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号９０のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号９１のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、配列番号９１のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、第２のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含み、ここで、第１のポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列およびＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡを含まない。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号９、１０および１１のうちのいずれかの配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または配列番号９のアミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０のうちのいずれか１つで開始し、配列番号９のアミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、もしくは１３５のうちのいずれか１つで終了するポリペプチドと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号９の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号１０の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号１１の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号９のアミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のうちのいずれか１つで開始し、配列番号９のアミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、または１３５のうちのいずれか１つで終了するポリペプチドと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、あるいはそれから本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号１０のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号１１のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号１１のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号５７のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号５７のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号８８のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号８８のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号５９のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号５９のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号８９のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、配列番号８９のアミノ酸配列から本質的になる。
一部の実施形態では、単一アームヘテロ多量体は、ヘテロ二量体である。一部の実施形態では、相互作用対の第１のメンバーは、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、第１の免疫グロブリンＦｃドメインである。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号１４～２８のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号１４の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号１５の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号１６の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号１７の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号１８の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号１９の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２０の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２１の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２２の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２３の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２４の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２５の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２６の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２７の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域は、配列番号２８の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、相互作用対の第２のメンバーは、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、第１の免疫グロブリンＦｃドメインである。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号１４～２８のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号１４の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号１５の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号１６の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号１７の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号１８の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号１９の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２０の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２１の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２２の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２３の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２４の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２５の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２６の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２７の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域は、配列番号２８の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号４６、４８、５５、５７、５８、５９、６０、６１、８４、８６、８８、８９、９０、および９１のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号４６の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号４８の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号５５の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号５７の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号５８の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号５９の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６０の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号６１の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号８４の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号８６の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号８８の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号８９の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号９０の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号９１の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号４９、５１、６２、６３、８５、および８７のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号４９の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５１の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６２の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６３の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号８５の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号８７の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ヘテロ多量体複合体は、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０からなる群から選択されるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドのうちの１種または複数に結合する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に結合する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、ＧＤＦ８およびアクチビンＡに結合する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１よりもアクチビンＡに結合する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、ＧＤＦ８に結合する。
３．リンカー
本開示は、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を提供し、これらの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドおよび相互作用対の第１のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）は、リンカーによって接続され得る。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体は、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドと相互作用対の第１のメンバーとの間に位置するリンカードメインを含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと相互作用対の第１のメンバーとの間に位置するリンカードメインを含む。一部の実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリンリッチリンカーである。他の中性に近いアミノ酸、例えば、限定されるものではないが、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、ＰｒｏおよびＡｌａもリンカー配列中で使用され得る。一部の実施形態では、リンカーは、ＧｌｙおよびＳｅｒを含有するアミノ酸配列のさまざまな順列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸長より長い。さらなる実施形態では、リンカーは、少なくとも１２、１５、２０、２１、２５、３０、３５、４０、４５または５０アミノ酸の長さを有する。一部の実施形態では、リンカーは、４０、３５、３０、２５、２２または２０アミノ酸未満である。一部の実施形態では、リンカーは、１０～５０、１０～４０、１０～３０、１０～２５、１０～２１、１０～１５、１０、１５～２５、１７～２２、２０、または２１アミノ酸長である。好ましい実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ（ＧＧＧＧＳ）（配列番号２９）、またはその反復の（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎ≧２である）（配列番号３０）を含む。特定の実施形態では、ｎ≧３またはｎ＝３～１０である。好ましい実施形態では、ｎ≧４またはｎ＝４～１０である。一部の実施形態では、ｎは、（ＧＧＧＧＳ）ｎリンカー（配列番号２９）において、４を超えない。一部の実施形態では、ｎ＝４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～８、５～７、または５～６である。一部の実施形態では、ｎ＝３、４、５、６、または７である。特定の実施形態では、ｎ＝４である。一部の実施形態では、（ＧＧＧＧＳ）ｎ配列（配列番号２９）を含むリンカーは、Ｎ末端トレオニンも含む。一部の実施形態では、リンカーは、以下のうちのいずれか１つである。
ＧＧＧ（配列番号３１）
ＧＧＧＧ（配列番号３２）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３３）
ＳＧＧＧ（配列番号３４）
ＳＧＧＧＧ（配列番号３５）
ＴＧＧＧ（配列番号３６）
ＴＧＧＧＧ（配列番号３７）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３８）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３９）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４０）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４１）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４２）または
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４３）
一部の実施形態では、リンカーは、ＴＧＧＧＰＫＳＣＤＫ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、Ｎ末端トレオニンを欠く配列番号３１～４４のうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号４２または４３のアミノ酸配列を含まない。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２９～４４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
４．ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドをコードする核酸
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（その断片、機能性バリアント、および融合タンパク質を含む）をコードする単離された核酸および／または組換え核酸を提供する。例えば、配列番号１２は、天然に存在するヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体ポリペプチドをコードする一方、配列番号１３は、ＡｃｔＲＩＩＡのプロセシングされた細胞外ドメインをコードする。対象の核酸は、一本鎖または二本鎖であり得る。そのような核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であり得る。これらの核酸は、例えば、本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ単一アームヘテロ多量体を作製するための方法において使用され得る。
本明細書で使用される場合、単離された核酸は、その天然の環境の構成要素から分離されている核酸分子を指す。単離された核酸としては、元は核酸分子を含有する細胞中に含有されるが、核酸分子が、染色体外に、またはその天然の染色体上の場所とは異なる染色体上の場所に存在する、核酸分子が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドをコードする核酸は、配列番号７、８、１２、および１３のうちのいずれか１つのバリアントである核酸を含むことが理解される。ある特定の実施形態では、相互作用対の第１および／または第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）をコードする核酸は、配列番号５０のうちのいずれか１つのバリアントである核酸を含むことが理解される。一部の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体融合物または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体Ｆｃ融合物をコードする核酸は、配列番号４７および５６のうちのいずれか１つのバリアントである核酸を含むことが理解される。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体融合物は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物を含む。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体融合物は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物を含む。バリアントヌクレオチド配列は、対立遺伝子バリアントを含んで、１つまたは複数のヌクレオチドの置換、付加、または欠失によって異なる配列を含み、したがって、配列番号７、８、１２、１３、４７、５０、および５６のうちのいずれか１つにおいて指定されるヌクレオチド配列と異なるコード配列を含むであろう。ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号７、８、１２、１３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である単離された核酸配列または組換え核酸配列によってコードされる。ある特定の実施形態では、本開示の相互作用対の第１および／または第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）は、配列番号５０と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である単離された核酸配列または組換え核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体融合物は、配列番号５６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である単離された核酸配列または組換え核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体融合物は、配列番号４７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である単離された核酸配列または組換え核酸配列によってコードされる。当業者は、配列番号７、８、１２、１３、４７、５０、および５６と相補的な配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列も本開示の範囲内であることを認識するであろう。さらなる実施形態では、本開示の核酸配列は、単離され得るか、組換えであり得るか、および／もしくは異種ヌクレオチド配列と融合され得るか、またはＤＮＡライブラリー中にあり得る。
他の実施形態では、本開示の核酸は、配列番号７、８、１２、１３、４７、５０、および５６に指定されるヌクレオチド配列、配列番号７、８、１２、１３、４７、５０、および５６の相補体配列、またはその断片に対して、高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列も含む。当業者は、ＤＮＡハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシーの条件が変わり得ることを容易に理解するであろう。例えば、約４５℃での６．０×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）でのハイブリダイゼーション、それに続いて５０℃での２．０×ＳＳＣの洗浄を行うことができる。例えば、洗浄ステップにおける塩濃度は、５０℃での約２．０×ＳＳＣの低いストリンジェンシーから５０℃での約０．２×ＳＳＣの高いストリンジェンシーまでで選択することができる。加えて、洗浄ステップにおける温度は、室温の約２２℃での低いストリンジェンシー条件から約６５℃での高いストリンジェンシー条件まで上昇させることができる。温度および塩の両方が変えられてもよく、または温度もしくは塩濃度は、他の変数を変化させながら、一定で維持されてもよい。一実施形態では、本開示は、室温での６×ＳＳＣ、それに続く室温での２×ＳＳＣの洗浄の低いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする核酸を提供する。
遺伝コードにおける縮重に起因して配列番号７、８、１２、１３、４７、５０、および５６に記載される核酸とは異なる単離された核酸も、本開示の範囲内である。例えば、いくつかのアミノ酸が、２つ以上のトリプレットによって指定される。同じアミノ酸を特定するコドンまたは同義語（例えば、ＣＡＵおよびＣＡＣは、ヒスチジンについての同義語である）は、タンパク質のアミノ酸配列に影響を及ぼさない「サイレント」突然変異をもたらし得る。しかしながら、対象タンパク質のアミノ酸配列の変化をもたらすＤＮＡ配列多型が哺乳動物細胞の中に存在するであろうと予想される。当業者は、特定のタンパク質をコードする核酸の１つまたは複数のヌクレオチドにおけるこれらの変形形態（ヌクレオチドの最大で約３～５％）が、天然の対立遺伝子の変形形態に起因して、所与の種の個体の中に存在し得ることを認識するであろう。ありとあらゆるそのようなヌクレオチドの変形形態および得られるアミノ酸多型は、本開示の範囲内である。
ある特定の実施形態では、本開示の組換え核酸は、発現構築物において、１つまたは複数の調節ヌクレオチド配列に作動可能に連結されていてもよい。調節ヌクレオチド配列は、一般に、発現のために使用される宿主細胞に適切であろう。多数の種類の適切な発現ベクターおよび好適な調節配列が、各種の宿主細胞について当技術分野において公知である。典型的には、前記１つまたは複数の調節ヌクレオチド配列としては、限定されるものではないが、プロモーター配列、リーダーまたはシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始および終結配列、翻訳開始および終結配列、ならびにエンハンサーまたはアクチベーター配列が挙げられ得る。当技術分野において公知の構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターが、本開示によって企図される。プロモーターは、天然に存在するプロモーター、または２つ以上のプロモーターのエレメントが組み合わされたハイブリッドプロモーターのいずれかであり得る。発現構築物は、プラスミドなどのエピソームにおいて細胞中に存在してもよく、または発現構築物は、染色体中に挿入されていてもよい。一部の実施形態では、発現ベクターは、形質転換された宿主細胞の選択を可能にする選択マーカー遺伝子を含有する。選択マーカー遺伝子は、当技術分野において周知であり、使用される宿主細胞によって変わるであろう。
本開示のある特定の態様では、対象の核酸は、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体をコードするヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つの調節配列に作動可能に連結された発現ベクター中で提供される。調節配列は、当技術分野で認識されており、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の発現を方向付けるために選択される。したがって、調節配列という用語は、プロモーター、エンハンサー、および他の発現制御エレメントを含む。例示的な調節配列は、Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, AcademicPress, San Diego, CA (1990)に記載されている。例えば、それに作動可能に連結される場合にＤＮＡ配列の発現を制御する多種多様な発現制御配列のうちのいずれかが、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体をコードするＤＮＡ配列を発現させるためにこれらのベクターにおいて使用され得る。そのような有用な発現制御配列としては、例えば、ＳＶ４０の初期および後期プロモーター、ｔｅｔプロモーター、アデノウイルスまたはサイトメガロウイルス最初期プロモーター、ＲＳＶプロモーター、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ＴＡＣまたはＴＲＣ系、その発現がＴ７ ＲＮＡポリメラーゼによって方向付けられるＴ７プロモーター、ファージラムダの主要オペレーターおよびプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質についての制御領域、３－ホスホグリセリン酸キナーゼまたは他の糖分解酵素についてのプロモーター、酸ホスファターゼのプロモーター、例えば、Ｐｈｏ５、酵母α接合因子のプロモーター、バキュロウイルス系の多角体プロモーター、および原核細胞もしくは真核細胞またはそれらのウイルスの遺伝子の発現を制御することが公知の他の配列、ならびにそれらのさまざまな組合せが挙げられる。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、および／または発現される所望のタンパク質の種類などの因子に依存し得ることが理解されるべきである。また、ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、およびベクターによってコードされる任意の他のタンパク質、例えば、抗生物質マーカーの発現も考慮されなければならない。
本開示の組換え核酸は、クローニングされた遺伝子またはその一部を、原核細胞、真核細胞（酵母、トリ、昆虫または哺乳動物）のいずれか、またはその両方における発現のために好適なベクターにライゲーションすることによって産生することができる。組換えＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の産生のための発現ビヒクルとしては、プラスミドおよび他のベクターが挙げられる。例えば、好適なベクターとしては、以下の種類のプラスミド：Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞における発現のための、ｐＢＲ３２２由来プラスミド、ｐＥＭＢＬ由来プラスミド、ｐＥＸ由来プラスミド、ｐＢＴａｃ由来プラスミドおよびｐＵＣ由来プラスミドが挙げられる。
一部の哺乳動物発現ベクターは、細菌におけるベクターの繁殖を容易にするための原核生物配列、および真核細胞において発現される１つまたは複数の真核生物転写単位の両方を含有する。ｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＳＶ２ｇｐｔ、ｐＳＶ２ｎｅｏ、ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ、ｐＴｋ２、ｐＲＳＶｎｅｏ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＴ７、ｐｋｏ－ｎｅｏおよびｐＨｙｇに由来するベクターは、真核細胞のトランスフェクションのために好適な哺乳動物発現ベクターの例である。これらのベクターの一部は、原核細胞および真核細胞の両方における複製および薬物耐性選択を容易にするために、ｐＢＲ３２２などの細菌プラスミド由来の配列で修飾される。あるいは、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ－１）またはエプスタインバーウイルス（ｐＨＥＢｏ、ｐＲＥＰ由来およびｐ２０５）などのウイルスの誘導体は、真核細胞におけるタンパク質の一過性の発現のために使用することができる。他のウイルス（レトロウイルスを含む）発現系の例は、遺伝子治療送達システムの記載において下記に見出され得る。プラスミドの調製および宿主生物体の形質転換において用いられるさまざまな方法は、当技術分野において周知である。原核細胞および真核細胞の両方のための他の好適な発現系、ならびに一般的な組換え手順について、例えば、Molecular Cloning A Laboratory Manual, 3rd Ed., ed. by Sambrook,Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)を参照されたい。一部の例では、バキュロウイルス発現系の使用によって組換えポリペプチドを発現させることが望ましくあり得る。そのようなバキュロウイルス発現系の例としては、ｐＶＬ由来ベクター（例えば、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３およびｐＶＬ９４１）、ｐＡｃＵＷ由来ベクター（例えば、ｐＡｃＵＷ１）、およびｐＢｌｕｅＢａｃ由来ベクター（例えば、β－ｇａｌ含有ｐＢｌｕｅＢａｃ ＩＩＩ）が挙げられる。
好ましい実施形態では、Ｐｃｍｖ－Ｓｃｒｉｐｔベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）、ｐｃＤＮＡ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）、およびｐＣＩ－ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃ．）などのベクターが、ＣＨＯ細胞における対象のＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の産生のために設計される。明らかであるように、対象の遺伝子構築物を使用して、例えば、精製のために、融合タンパク質またはバリアントタンパク質を含むタンパク質を産生するために、培養物中で繁殖された細胞において、対象のＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の発現を引き起こすことができる。
本開示は、対象のＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体のうちの１種または複数についてのコード配列を含む組換え遺伝子でトランスフェクトされた宿主細胞にも関連する。宿主細胞は、任意の原核細胞または真核細胞であり得る。例えば、本開示のＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現系を使用する）、酵母、または哺乳動物細胞［例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系］において発現されてもよい。他の好適な宿主細胞は、当業者に公知である。
したがって、本開示は、対象のＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を産生する方法にさらに関連する。例えば、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体をコードする発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞を、適切な条件下で培養して、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の発現を起こすことが可能であり得る。ポリペプチドを、分泌させ、細胞およびポリペプチドを含有する培地の混合物から単離し得る。あるいは、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、回収または溶解された細胞から得られる細胞質または膜画分から単離され得る。細胞培養物は、宿主細胞、培地、および他の副産物を含む。細胞培養のために好適な培地は、当技術分野において周知である。対象のポリペプチドは、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の特定のエピトープに特異的な抗体を用いる免疫アフィニティー精製、ならびにＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体に融合されたドメインに結合する薬剤を用いるアフィニティー精製（例えば、プロテインＡカラムを本明細書に開示される任意のポリペプチドを精製するために使用し得る）を含む、タンパク質を精製するための当技術分野において公知の技法を使用して、細胞培養培地、宿主細胞、またはその両方から単離することができる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、精製を容易にするドメインを含む。
一部の実施形態では、精製は、例えば、任意の順序で以下の３つまたはそれよりも多くを含む、一連のカラムクロマトグラフィーステップによって達成される：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィー。精製は、ウイルス濾過および緩衝液交換で完了し得る。単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定される＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、または＞９９％、およびＳＤＳ ＰＡＧＥによって決定される＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、または＞９９％の純度に精製され得る。純度の標的レベルは、哺乳動物系、特に非ヒト霊長類、げっ歯動物（マウス）、およびヒトにおいて所望の結果を達成するために十分なものでなければならない。
別の実施形態では、組換えＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、相互作用対の第１および／もしくは第２のメンバー（例えば、ＩｇＧ重鎖由来の定常領域）、ならびに／または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の所望の部分のＮ末端でポリ－（Ｈｉｓ）／エンテロキナーゼ切断部位配列などの精製リーダー配列をコードする融合遺伝子は、Ｎｉ２＋金属樹脂を使用するアフィニティークロマトグラフィーによって、発現された構築物の精製を可能にし得る。次いで、精製リーダー配列は、その後、エンテロキナーゼによる処理によって除去されて、精製されたＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドまたはタンパク質複合体を提供することができる。例えば、Hochuli et al. (1987) J. Chromatography 411:177；および Janknecht et al.(1991) PNAS USA 88:8972を参照されたい。
融合遺伝子を作製するための技法は周知である。本質的には、異なるポリペプチド配列をコードするさまざまなＤＮＡ断片の接合は、ライゲーションのための平滑末端または交互末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要により接着性末端の埋め込み、望ましくない接合を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、ならびに酵素的ライゲーションを用いる、従来の技法に従って行われる。別の実施形態では、融合遺伝子は、自動ＤＮＡ合成機を含む従来の技法によって、合成することができる。あるいは、遺伝子断片のＰＣＲ増幅は、キメラ遺伝子配列を生成するためにその後にアニーリングすることができる、２つの連続的な遺伝子断片の間に相補的なオーバーハングを生じさせるアンカープライマーを使用して行うことができる。例えば、Current Protocols in Molecular Biology, eds. Ausubel et al., JohnWiley & Sons: 1992を参照されたい。
５．スクリーニングアッセイ
ある特定の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢのアゴニストまたはアンタゴニストである化合物（薬剤）を特定するための単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の使用に関する。このスクリーニングにより特定された化合物は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置するそれらの能力を評価するために試験することができる。これらの化合物は、例えば、動物モデルにおいて試験することができる。
ある特定の態様では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減するため、特に、１つまたは複数の腎臓関連合併症を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減するために使用され得る化合物（薬剤）を特定するための対象の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の使用に関する。
１種または複数のＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドのシグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を標的にすることによって腎臓疾患または状態を処置するための治療剤についてのスクリーニングに対する多数の手法が存在する。ある特定の実施形態では、化合物のハイスループットスクリーニングを行って、選択された細胞系においてＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド媒介効果を撹乱させる薬剤を特定することができる。ある特定の実施形態では、アッセイを行って、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、またはＢＭＰ１０）のその結合パートナー、例えばＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢへの結合を特異的に阻害または低減する化合物をスクリーニングおよび特定する。あるいは、アッセイを使用して、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドのその結合パートナー、例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢへの結合を増強する化合物を特定することができる。さらなる実施形態では、化合物は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢと相互作用するそれらの能力によって特定することができる。
各種のアッセイフォーマットが十分であり、本開示を考慮すると、本明細書に明示的に記載されないものが、それでもなお、当業者によって把握されるであろう。本明細書に記載されるように、本発明の試験化合物（薬剤）は、任意のコンビナトリアル化学法によって作出され得る。あるいは、対象の化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで合成される天然に存在する生体分子であり得る。組織成長のモジュレーターとして作用するそれらの能力について試験される化合物（薬剤）は、例えば、細菌、酵母、植物、または他の生物体によって産生され得るか（例えば、天然産物）、化学的に産生され得るか（例えば、ペプチドミメティックを含む小分子）、または組換え的に産生され得る。本発明によって企図される試験化合物としては、非ペプチジル有機分子、ペプチド、ポリペプチド、ペプチドミメティック、糖、ホルモン、および核酸分子が挙げられる。ある特定の実施形態では、試験薬剤は、約２，０００ダルトン未満の分子量を有する小有機分子である。
本開示の試験化合物は、単一の別個の実体として提供され得るか、または、コンビナトリアル化学によって作製されるものなどの複雑性がより高いライブラリーにおいて提供され得る。これらのライブラリーは、例えば、アルコール、ハロゲン化アルキル、アミン、アミド、エステル、アルデヒド、エーテル、および他のクラスの有機化合物を含むことができる。試験化合物の試験系への提示は、特に、最初のスクリーニングステップにおいて、化合物の単離形態または混合物としてのいずれかであり得る。必要に応じて、化合物は、他の化合物で必要に応じて誘導体化されていてもよく、化合物の単離を容易にする誘導体化基を有していてもよい。誘導体化基の非限定的な例としては、ビオチン、フルオレセイン、ジゴキシゲニン（digoxygenin）、緑色蛍光タンパク質、同位体、ポリヒスチジン、磁気ビーズ、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、光活性化可能な架橋剤、またはそれらの任意の組合せが挙げられる。
化合物および天然抽出物のライブラリーを試験する多くの薬物スクリーニングプログラムでは、所与の期間に調査される化合物の数を最大化するために、ハイスループットアッセイが望ましい。精製または半精製されたタンパク質に由来し得るものなどの無細胞系で行われるアッセイは、多くの場合、それらが、迅速な開発、および試験化合物によって媒介される分子標的中の変更の比較的容易な検出を可能にするために作成することができるという点で、「一次」スクリーニングとして好ましい。また、試験化合物の細胞毒性または生物学的利用能の効果は、一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系において無視することができ、アッセイは、代わりに、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、またはＢＭＰ１０）とその結合パートナー、例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢとの間の結合親和性の変更に現れ得るような分子標的に対する薬物の効果を主に重視している。
単に説明するために、本開示の例示的なスクリーニングアッセイでは、目的の化合物を、アッセイの意図について必要により、通常、ＡｃｔＲＩＩＢリガンドに結合することができる単離および精製されたＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと接触させる。次いで、化合物およびＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの混合物に、ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、ＧＤＦ１１）を含有する組成物を添加する。ＡｃｔＲＩＩＢ／ＡｃｔＲＩＩＢリガンド複合体の検出および定量化は、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとその結合タンパク質との間の複合体形成を阻害する（または強化する）際の化合物の有効性を決定するための手段を提供する。化合物の有効性は、さまざまな濃度の試験化合物を使用して得られるデータから用量応答曲線を作成することによって評価することができる。また、対照アッセイを、比較のためのベースラインを提供するために行うこともできる。例えば、対照アッセイでは、単離および精製されたＡｃｔＲＩＩＢリガンドを、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体）を含む組成物に添加し、ＡｃｔＲＩＩＢ／ＡｃｔＲＩＩＢリガンド複合体の形成を、試験化合物の非存在下で定量化する。一般に、反応物を混合し得る順序を変えることができること、および同時に混合することができることが理解されるであろう。また、精製されたタンパク質の代わりに、細胞抽出物および溶解物を、好適な無細胞アッセイ系にするために使用してもよい。
ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドとその結合タンパク質との間の複合体形成は、各種の技法によって検出され得る。例えば、複合体の形成のモジュレーションは、例えば、放射性標識（例えば、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃまたは３Ｈ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ）、または酵素標識されたＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドおよび／もしくはその結合タンパク質などの検出可能に標識されたタンパク質を使用して、イムノアッセイによって、またはクロマトグラフ検出によって、定量化することができる。
ある特定の実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドとその結合タンパク質との間の相互作用の程度を直接的にまたは間接的のいずれかで測定する際に、蛍光偏光アッセイおよび蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）アッセイの使用を企図する。さらに、光導波路（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２６４３２号および米国特許第５，６７７，１９６号を参照されたい）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、表面電荷センサー、および表面力センサーに基づくものなどの他の検出様式は、本開示の多くの実施形態に適合する。
また、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドとその結合パートナーとの間の相互作用を破壊または高める薬剤を特定するための「ツーハイブリッドアッセイ」としても公知の相互作用トラップアッセイの使用を企図する。例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Zervos et al. (1993) Cell 72:223-232；Madura et al. (1993) J BiolChem 268:12046-12054；Bartel et al. (1993) Biotechniques 14:920-924；およびIwabuchiet al. (1993) Oncogene 8:1693-1696)を参照されたい。具体的な実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドとその結合タンパク質との間の相互作用を解離させる化合物（例えば、小分子またはペプチド）を特定するための逆ツーハイブリッドシステムの使用を企図する［例えば、Vidaland Legrain, (1999) Nucleic Acids Res 27:919-29；Vidal and Legrain, (1999)Trends Biotechnol 17:374-81；ならびに米国特許第５，５２５，４９０号；同第５，９５５，２８０号；および同第５，９６５，３６８号を参照されたい］。
ある特定の実施形態では、対象の化合物は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドと相互作用するそれらの能力によって特定される。化合物とＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドとの間の相互作用は、共有結合的または非共有結合的であり得る。例えば、そのような相互作用は、光架橋、放射性標識リガンド結合、およびアフィニティークロマトグラフィーを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ生化学的方法を使用して、タンパク質レベルで特定することができる［例えば、Jakoby WB et al. (1974) Methods in Enzymology 46:1を参照されたい］。ある特定の場合では、化合物は、メカニズムに基づくアッセイ、例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドに結合する化合物を検出するためのアッセイにおいてスクリーニングされてもよい。これは、固相または液相の結合事象を含み得る。あるいは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢリガンドをコードする遺伝子を、レポーター系（例えば、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、または緑色蛍光タンパク質）で細胞にトランスフェクトし、好ましくは、ハイスループットスクリーニングによってライブラリーに対して、またはライブラリーの個々のメンバーを用いて、スクリーニングすることができる。他のメカニズムに基づく結合アッセイ、例えば、自由エネルギーの変化を検出する結合アッセイを使用してもよい。結合アッセイは、ウェル、ビーズもしくはチップに固定されるか、または固定化された抗体によって捕捉されるか、またはキャピラリー電気泳動によって分解される標的を用いて行うことができる。結合した化合物は、通常、比色分析エンドポイントもしくは蛍光、または表面プラズモン共鳴を使用して、検出され得る。
６．治療的使用
一部分では、本開示は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置する方法であって、有効量の、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体、または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の組合せを、それを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体、または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の組合せを使用して、ＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、および／またはＡｃｔＲＩＩＡもしくはＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０）の異常な活性に関連する疾患または状態を処置または予防することができる。
ある特定の実施形態では、本発明は、治療有効量の、本明細書に記載される単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体、または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の組合せを、必要に応じて１種または複数の追加の活性薬剤および／または支持療法と組み合わせて、個体に投与することによる、それを必要とする個体を処置する方法を提供する。
「腎臓（ｒｅｎａｌ）」および「腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）」という用語は、本明細書で互換的に使用される。
「処置」、「処置すること」、「緩和」などの用語は、本明細書では、一般に、所望の薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを意味するために使用され、処置される状態の１つもしくは複数の臨床的合併症の重症度を改善すること、緩和すること、および／または減少させることを指すためにも使用されることもある。効果は、疾患、状態もしくはその合併症の開始または再発を、完全にまたは部分的に遅延させる観点から予防的であってもよく、ならびに／あるいは疾患もしくは状態、および／または疾患もしくは状態に起因する有害効果を、部分的にまたは完全に治癒させる観点で治療的であってもよい。本明細書で使用される場合、「処置」は、哺乳動物、特にヒトの疾患または状態の任意の処置を包含する。本明細書で使用される場合、障害または状態を「予防する」治療薬は、統計試料において、未処置の対照試料と比べて、処置試料における障害もしくは状態の発生を低減するか、または未処置の対照試料と比べて、障害もしくは状態の開始を遅延させる化合物を指す。
一般に、本開示に記載される疾患または状態の処置または予防は、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を有効量で投与することによって達成される。薬剤の有効量は、必要な投薬量および期間で、所望の治療的結果または予防的結果を達成するために有効な量を指す。本開示の薬剤の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子に従って変わり得る。予防有効量は、必要な投薬量および期間で、所望の予防的結果を達成するために有効な量を指す。
「患者」、「対象」、または「個体」という用語は、本明細書で互換的に使用され、ヒトまたは非ヒト動物のいずれかを指す。これらの用語は、哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、実験動物、家畜動物（ウシ、ブタ、ラクダなどを含む）、コンパニオン動物（例えば、イヌ、ネコ、他の飼育動物など）、およびげっ歯動物（例えば、マウスおよびラット）を含む。特定の実施形態では、患者、対象または個体は、ヒトである。
「ベースライン」という用語は、本明細書で使用される場合、比較することができる初期測定値を指す。一部の例では、ベースライン測定は、対象が標準治療（ＳＯＣ）のみを投与されている間に行われた測定であり得る。一部の例では、ベースライン測定は、ＳＯＣが対象に投与されることなく行うことができる。ベースライン測定はまた、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体もしくは単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体、および／またはＳＯＣの投与前に行われた測定であり得る。
ある特定の態様では、本開示は、疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置または予防するための１種または複数の追加の活性薬剤または他の支持療法と組み合わせた、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の使用を企図する。本明細書で使用される場合、「と組み合わせて」、「の組合せ」、「と組み合わせた」、または「共」投与は、追加の活性薬剤または支持療法（例えば、第２、第３、第４など）が身体中で依然として有効であるように（例えば、複数の化合物が、ある一定期間、患者において同時に有効であり、これは、これらの化合物の相乗効果を含み得る）、投与の任意の形態を指す。有効性は、血液、血清、または血漿中の薬剤の測定可能な濃度に相関しなくてもよい。例えば、異なる治療用化合物は、同じ製剤中または別々の製剤中のいずれかで、同時的または逐次的のいずれかで、異なるスケジュールで投与することができる。そのため、そのような処置を受ける対象は、異なる活性薬剤または療法の組合せ効果から利益を得ることができる。本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、本明細書に開示されるものなどの１種もしくは複数の他の追加の薬剤または支持療法と同時的に、その前に、またはその後に、投与することができる。一般に、それぞれの活性薬剤または療法は、その特定の薬剤について決定された用量および／またはタイムスケジュールで投与されるであろう。レジメンにおいて用いられる特定の組合せは、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の適合性を、追加の活性薬剤もしくは療法、および／または所望の効果とともに考慮に入れる。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態の１つまたは複数の合併症を処置する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を企図する。一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態の１つまたは複数の合併症を予防する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を企図する。一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態の進行速度を低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を企図する。一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態の１つまたは複数の合併症の進行速度を低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を企図する。一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態の重症度を低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を企図する。一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態の１つまたは複数の合併症の重症度を低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を企図する。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、および慢性腎臓病からなる群から選択される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、アルポート症候群である。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）である。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、多発性嚢胞腎である。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態は、慢性腎臓病である。一部の実施形態では、対象は、腎臓機能の低下を有する。一部の実施形態では、本開示の方法は、腎臓機能低下を遅らせる。
ある特定の態様では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、方法は、アルポート症候群を有する対象を処置することに関する。一部の実施形態では、方法は、確認遺伝子診断されたアルポート症候群を有する対象を処置することに関する。
遺伝性腎炎としても公知のアルポート症候群は、ＩＶ型コラーゲンのアルファ－３、アルファ－４、およびアルファ－５鎖をコードする遺伝子の突然変異から生じる遺伝的異種疾患である。ＩＶ型コラーゲンのアルファ鎖は、通常、腎臓を含む身体全体にわたるさまざまな基底膜に位置する。これらの鎖の異常は、これらの部位で欠陥のある基底膜をもたらし得、次に、アルポート症候群の臨床的性質（例えば、進行性糸球体疾患）に至る。
アルポート症候群の遺伝は、Ｘ連鎖性の常染色体劣性または常染色体優性であり得る。一部の実施形態では、対象は、Ｘ連鎖性アルポート症候群を有する。一部の実施形態では、本開示は、Ｘ連鎖性アルポート症候群を有する対象を処置する方法に関する。Ｘ連鎖性遺伝は、罹患患者の大部分を占め、Ｘ染色体上のＣＯＬ４Ａ５遺伝子における突然変異から生じる。一部の実施形態では、対象は、ＣＯＬ４Ａ５遺伝子に遺伝的欠陥を有する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＯＬ４Ａ５遺伝子に１つまたは複数の遺伝的欠陥を有する対象を処置する方法に関する。常染色体劣性バリアントは、アルポート症候群を有する患者のおよそ１５パーセントを占め、ＣＯＬ４Ａ３またはＣＯＬ４Ａ４遺伝子のいずれかにおける遺伝的欠陥から生じる。一部の実施形態では、対象は、常染色体劣性アルポート症候群を有する。常染色体優性疾患は、アルポート症候群を有する患者の約２０～約３０パーセントを占めると思われ、ＣＯＬ４Ａ３またはＣＯＬ４Ａ４遺伝子におけるヘテロ接合突然変異から生じる。一部の実施形態では、対象は、常染色体優性アルポート症候群を有する。一部の実施形態では、対象は、ＣＯＬ４Ａ３遺伝子にヘテロ接合突然変異を有する。一部の実施形態では、対象は、ＣＯＬ４Ａ４遺伝子にヘテロ接合突然変異を有する。一部の実施形態では、対象は、ＣＯＬ４Ａ３遺伝子に遺伝的欠陥を有する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＯＬ４Ａ３遺伝子に１つまたは複数の遺伝的欠陥を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、対象は、ＣＯＬ４Ａ４遺伝子に遺伝的欠陥を有する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＯＬ４Ａ４遺伝子に１つまたは複数の遺伝的欠陥を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、対象は、ＣＯＬ４Ａ３およびＣＯＬＡ４Ａ遺伝子に遺伝的欠陥を有する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＯＬ４Ａ３およびＣＯＬ４Ａ４遺伝子に１つまたは複数の遺伝的欠陥を有する対象を処置する方法に関する。一部の家族は、３つの遺伝子（ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＣＯＬ４Ａ５）のうちの２つにおける突然変異の遺伝に起因する２遺伝子性遺伝を示す。一部の実施形態では、対象は、３つの遺伝子（ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＣＯＬ４Ａ５）のうちの２つに突然変異を有する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、および／またはＣＯＬ４Ａ５遺伝子に１つまたは複数の遺伝的欠陥を有する対象を処置する方法に関する。
アルポート症候群の古典的な提示は、Ｘ連鎖性疾患を有する罹患男性の臨床兆候に基づく。一部の実施形態では、Ｘ連鎖性疾患を有する対象は、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）に進行する糸球体疾患を有する。常染色体劣性疾患を有する患者における臨床提示および経過は、Ｘ連鎖性疾患を有する患者に類似する。常染色体優性疾患を有する患者は、一般に、より緩やかな腎臓機能の喪失を示す。
最初に、アルポート症候群の腎臓の兆候は、典型的には、無症候性の持続性顕微鏡的血尿（例えば、尿中の血液の存在）であり、これは、通常、罹患患者の小児期早期に存在する。スクリーニング尿検査は、日常的な小児プライマリーケアにおいてめったに行われないので、顕微鏡的血尿は、患者が、罹患家族の一員を理由としてスクリーニングされるか、または別の問題についての偶発的所見として見出されるまで、検出されることはない。肉眼的血尿は、最初に提示される所見であり得、多くの場合、上呼吸器感染症後に起こる。しかしながら、肉眼的血尿の再発エピソードは、特に小児期では珍しくない。一部の実施形態では、本開示は、無症候性の持続性顕微鏡的血尿を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、肉眼的血尿を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、肉眼的血尿の再発エピソードを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、アルポート症候群を有する対象）における無症候性の持続性顕微鏡的血尿、肉眼的血尿、または持続性顕微鏡的血尿の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
アルポート症候群を有する患者は、典型的には、身体の免疫防御において複合的な役割を果たす補体経路の構成要素であるＣ３の正常なレベルを有する。Ｃ３の減少は、他の状態の中でも、急性糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎、免疫複合体病、活動性全身性エリテマトーデス、敗血性ショック、および末期肝臓疾患に関連し得る。小児期早期では、血清クレアチニンおよび血圧の測定値は、通常、同様に正常レベルである。一部の実施形態では、本開示は、正常なＣ３のレベルを有するアルポート症候群を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ベースライン測定値と比較して、減少したＣ３のレベルを有するアルポート症候群を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、アルポート症候群を有する対象）におけるＣ３レベルを増加させる方法に関する。
タンパク尿、高血圧、および進行性腎機能不全は、アルポート症候群を有する対象において発症し得る。タンパク尿は、尿中の過剰のタンパク質の存在を含む。アルブミンは、血液中のタンパク質のおよそ５０％～６０％を構成する、肝臓によって産生されるタンパク質である。これに起因して、尿中のアルブミンの濃度は、日常的なタンパク尿の検査と比較して、特に、糖尿病または高血圧を有する対象のための任意の腎臓疾患の最も高感度の指標の１つである。この測定値は、多くの場合、アルブミン尿と称される。一部の実施形態では、本開示は、タンパク尿を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、高血圧を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、進行性腎機能不全を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、アルポート症候群を有する対象）におけるタンパク尿、高血圧、および進行性腎機能不全のうちの１つまたは複数の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
アルポート症候群を有する対象は、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を発症し得る。ＥＳＲＤは、通常、多くの他の腎臓疾患および状態の中でも、Ｘ連鎖性または常染色体劣性アルポート症候群を有する患者において１６～３５歳で起こる。一部の家族では、経過は、より遅発性であって、特に、常染色体優性アルポート症候群を有する者において、腎不全が４５～６０歳まで遅延している。Ｘ連鎖性アルポート症候群を有する女性は、肉眼的血尿の再発エピソード、タンパク尿を有することがあり、びまん性糸球体基底膜（ＧＢＭ）肥厚は、低年齢でのより重度の腎臓機能異常およびＥＳＲＤに関連する。一部の実施形態では、本開示は、ＥＳＲＤを有するアルポート症候群を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、Ｘ連鎖性アルポート症候群を有する女性を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、アルポート症候群を有する対象）における肉眼的血尿、タンパク尿、ならびにより重度の腎臓機能異常およびＥＳＲＤに関連するびまん性糸球体基底膜（ＧＢＭ）肥厚のうちの１つまたは複数の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
アルポート症候群の診断は、分子遺伝学的検査によって、または皮膚もしくは腎臓生検によって行われ得る。分子遺伝学的な次世代解析は、持続性血尿および／または末期腎疾患（ＥＳＲＤ）について陽性の家族歴を有する患者について、ならびに家族歴にかかわらず慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する患者について診断を行うための好ましい方法である。アルポート症候群は、腎臓生検からの試料における糸球体基底膜（ＧＢＭ）の層状組織の特徴的な所見の存在によって、または免疫染色によるＩＶ型コラーゲンの異常によって、またはＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、もしくはＣＯＬ４Ａ５における１つもしくは複数の突然変異の特定によって、他の糸球体疾患と区別することができる。ＦＳＧＳの兆候ありまたはなしの、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、またはＣＯＬ４Ａ５突然変異を有する対象における薄い糸球体基底膜は、適宜、アルポート症候群として診断される。一部の実施形態では、本開示は、持続性血尿および／もしくは末期腎疾患（ＥＳＲＤ）について、ならびに／または慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する患者についての陽性の家族歴を有するアルポート症候群を有する対象を処置する方法に関する。
ある特定の態様では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減する方法であって、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）を有する対象に対して有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、対象は、原発性ＦＳＧＳを有する。一部の実施形態では、対象は、遺伝性ＦＳＧＳを有する。
ＦＳＧＳは、腎臓生検における有足細胞の足の消失によって特徴付けられる糸球体瘢痕化疾患である。ＦＳＧＳを患っている対象からの尿試料が分析される場合、腎不全に進行し得る多量の尿タンパク質喪失が典型的には観察される。ＦＳＧＳは、米国において特発性ネフローゼ症候群を有する成人の中で一般的な病理組織学的病変であり、全症例の約３５パーセントを占める。ＦＳＧＳはまた、米国において、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を有する患者において特定される最も一般的な原発性糸球体疾患である。ＥＳＲＤに関連する病変としてのＦＳＧＳの有病率は上昇している。ＦＳＧＳは、光学顕微鏡法（ＬＭ）、免疫蛍光法（ＩＦ）、または電子顕微鏡法（ＥＭ）によって調べられる場合、腎臓生検標本の少なくとも１つの糸球体（病巣）の部分的な（セグメントの）硬化の存在によって特徴付けられる。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、ＦＳＧＳを有する対象）における尿タンパク質喪失の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、ＦＳＧＳを有する対象）における腎不全の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、ＦＳＧＳを有する対象）における末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、ＦＳＧＳを有する対象）における腎臓の糸球体における硬化の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
ＦＳＧＳは、糸球体の毛細管の周囲を包む腎臓のボーマン嚢中の細胞である有足細胞に対する傷害を個々にまたは集合的にもたらす複数の経路の結果として生じる。ＦＳＧＳに関連して、５つの公知の病因があり、６番目の病因が示唆されている。ＦＳＧＳの病因は、原発性（例えば、特発性）、続発性（例えば、適応性）、遺伝性、ウイルス関連、医薬関連、およびＡＰＯＬ１リスク対立遺伝子関連を含む。原発性または特発性ＦＳＧＳは、免疫抑制療法に対する反応性および腎臓移植後の再発のリスクを伴って、血漿因子に関連する。原発性ＦＳＧＳでは、有足細胞に対して毒性である推定上の循環因子は、全身性の有足細胞機能異常を引き起こす。原発性ＦＳＧＳは、最も多くの場合、ネフローゼ系を提示する。続発性（例えば、適応性）ＦＳＧＳは、身体のサイズの増加、ネフロンの能力の低減、またはある特定の疾患に関連する単一糸球体過剰濾過に起因する過剰のネフロンの作業負荷に関連する。続発性ＦＳＧＳは、一般に、ネフロンの量の低減から生じる適応性現象として起こるか、または薬物（例えば、ヘロイン、インターフェロン、およびパミドロネート）からの直接毒性による医薬誘発性、もしくはウイルス感染（例えば、ＨＩＶ）によるウイルス誘発性と考えることができる。続発性ＦＳＧＳは、多くの場合、非ネフローゼタンパク尿および／またはいくらかの程度の腎機能不全を提示する。続発性ＦＳＧＳは、最も一般的には、糸球体の肥大または過剰濾過に応答する適応として発症するＦＳＧＳを指す。追加の病因は、ＦＳＧＳの駆動体として認識され、ほぼ４０遺伝子のうちの１つの突然変異に起因する高浸透度の遺伝性ＦＳＧＳ（遺伝性ＦＳＧＳ）、ウイルス関連ＦＳＧＳ、および医薬関連ＦＳＧＳを含む。出現データは、第６の病因：サハラ以南が起源の個体におけるＡＰＯＬ１リスク対立遺伝子関連ＦＳＧＳの特定をサポートする。続発性ＦＳＧＳは、ウイルス関連ＦＳＧＳおよび／または医薬関連ＦＳＧＳを包含する場合がある。一部の実施形態では、本開示は、原発性または特発性ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、続発性または適応性ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、遺伝性ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ウイルス関連ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、医薬関連ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ＡＰＯＬ１リスク対立遺伝子関連ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
原発性ＦＳＧＳは、いくつかのプロトタイプ特徴を含む。原発性ＦＳＧＳは、青年および若年成人におけるＦＳＧＳの最も一般的な形態であり、通常、ネフローゼ域のタンパク尿（時折、大量のタンパク尿、例えば、尿中で＞１０ｇタンパク質／日）、血漿アルブミンレベルの低減、および／または高脂血症に関連する。一部の実施形態では、ネフローゼ域のタンパク尿は、＞３．５ｇタンパク質／日のタンパク尿、および／または＜３．５ｇアルブミン／ｄＬ尿（＜３５ｇ／Ｌ）の低アルブミン血症、および／またはネフローゼ症候群の他の兆候（例えば、浮腫、高脂血症）を含む。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、原発性ＦＳＧＳを有する対象）におけるネフローゼ域のタンパク尿、血漿アルブミンレベルの低減、または高脂血症のうちの１つまたは複数の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、原発性ＦＳＧＳを有する対象）におけるタンパク尿の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
続発性または適応性ＦＳＧＳを有する対象は、典型的には、時間とともに、ゆっくりとしたタンパク尿および腎機能不全の増加を提示する。続発性ＦＳＧＳを有する対象におけるタンパク尿は、多くの場合、非ネフローゼ域に存在する（例えば、ネフローゼ域は、典型的には、１日あたり尿中の３グラムまたはそれよりも多くのタンパク質の喪失、および／または尿中のクレアチニン１グラムあたり２グラムのタンパク質の存在である）。時折、続発性ＦＳＧＳを有する対象におけるタンパク尿は、正常である血清アルブミンレベルを含む。続発性ＦＳＧＳを有する対象は、上昇している糸球体濾過量（ＧＦＲ）を有することがあり、これは、腎臓を通って濾過された体液の流量の測定値である。一部の実施形態では、続発性ＦＳＧＳおよびＧＦＲの増加を有する対象は、先天性チアノーゼ性心臓疾患、鎌状赤血球貧血、肥満、アンドロゲン乱用、睡眠時無呼吸、および高タンパク質の食事からなる群から選択される１つまたは複数の追加のおよび／または関連する状態を有し得る。一部の実施形態では、本開示は、正常ＧＦＲを有する続発性ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ＧＦＲの減少を有する続発性ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象（例えば、原発性ＦＳＧＳを有する対象）におけるタンパク尿および／または腎機能不全の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
ウイルスは、ＦＳＧＳの原因に関係している。ＨＩＶ－１は、ＦＳＧＳ、特に崩壊性糸球体症バリアントに関連し得る。ＦＳＧＳの原因に関係している他のウイルスとしては、限定されるものではないが、サイトメガロウイルス、パルボウイルスＢ１９、およびエプスタインバーウイルスが挙げられる。寄生生物もＦＳＧＳに関連しており、限定されるものではないが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ（マラリア）、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ、およびフィラリア症（filiariasis）が挙げられる。一部の実施形態では、本開示は、ＨＩＶ－１に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ＨＩＶ－１、サイトメガロウイルス、パルボウイルスＢ１９、およびエプスタインバーウイルスのうちの１種または複数に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ（マラリア）、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ、およびフィラリア症を含む寄生生物に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、ＨＩＶ、サイトメガロウイルス、パルボウイルスＢ１９、エプスタインバーウイルス、肺結核、リーシュマニア症、およびマラリアを含む感染症に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、成人のスチル病、全身性エリテマトーデス、および混合結合組織障害を含むＦＳＧＳの原因に関係している自己免疫障害に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、血球貪食性リンパ組織球増多症、多発性骨髄腫、および急性単芽球性白血病を含むＦＳＧＳの原因に関係している悪性腫瘍に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、血栓性微小血管症、腎梗塞、アテローム塞栓症、および親水性ポリマー塞栓症を含むＦＳＧＳの原因に関係している急性糸球体虚血に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、ＡＰＯＬ１高リスク対立遺伝子、鎌状赤血球症、ミトコンドリア病（コエンザイムＱ欠乏症）、急性ミオクローヌス腎不全症候群、およびギャロウェイモワト症候群を含むＦＳＧＳの原因に関係している遺伝性障害に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、動脈症／血栓性微小血管症、急性拒絶反応、およびウイルス感染症（サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス、ＢＫポリオーマウイルス）を含むＦＳＧＳの原因に関係している移植後事象に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
一部の実施形態では、本開示は、ある特定の医薬に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、またはＩＦＮ－γ療法は、崩壊性糸球体症の発症に関連している。一部の実施形態では、本開示は、ＭＣＤ、ＦＳＧＳ、ならびに特に、ビスホスホネートを摂取していたおよび／または依然として摂取している崩壊性ＦＳＧＳ（崩壊性糸球体症）を含む有足細胞の傷害のうちの１つまたは複数に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、リチウム療法を受けていたおよび／または現在受けているＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、シロリムスを摂取していたおよび／または依然として摂取しているＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｃｙｉｎ）およびダウノマイシンを含むアントラサイクリン医薬を摂取していたおよび／または依然として摂取しているＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、ビスホスホネート、インターフェロン（アルファ、ベータ、またはガンマ）、同化ステロイド、カルシニューリン阻害剤、およびラパマイシン（ｍＴＯＲ）阻害剤の哺乳動物（メカニズム的）標的を含むＦＳＧＳの原因に関係している医薬を摂取していたおよび／または依然として摂取しているＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
遺伝性ＦＳＧＳは、２つの形態を取る。一部の実施形態では、本開示は、感受性遺伝子における１つまたは複数のバリアントに関連する遺伝性ＦＳＧＳを有する対象（すなわち、特定のバリアントを有する一部の個体はＦＳＧＳを発症し、他の個体は発症しない）を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、限定されるものではないが、ＡＰＯＬ１およびＰＤＳＳ１を含む１つまたは複数の感受性遺伝子に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、メンデル性遺伝（核遺伝子について）または母性遺伝（ミトコンドリアＤＮＡによってコードされる遺伝子について）のいずれかを示す１つまたは複数の高浸透度の突然変異に関連する遺伝性ＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。ＦＳＧＳに関連する遺伝子の数は毎年増えており、大部分は、全エクソームシークエンシングの普及が理由である。少なくとも３８の遺伝子が、遺伝性ＦＳＧＳに関して特定されている。一部の実施形態では、本開示は、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＣＯＬ４Ａ５、ＩＴＧＢ４、ＬＡＭＢ２、ＮＰＨＳ、ＮＰＨＳ２、ＣＤ２ＡＰ、ＰＴＰＲＯ、ＭＹＯ１Ｅ、ＡＣＴＮ４、ＩＮＦ２、ＡＨＲＧＰ２４、ＡＨＲＧＤＩＡ、ＭＹＨ９、ＩＮＦ１、ＭＴ－ＴＬ１、ＭＴ－ＴＬ２、ＭＴ－ＴＹ、ＣＯＱ２、ＣＯＱ６、ＰＤＳＳ２、ＡＤＣＫ、ＷＴ１、ＮＵＰ９５、ＮＵＰ２０３、ＸＰ０５、ＮＸＦ５、ＰＡＸ２、ＬＭＸ１Ｂ、ＳＭＡＲＣＡＬ１、ＮＸＦ５、ＥＹＡ１、ＷＤＲ７３、ＬＭＮＡ、ＰＬＣＥ１、ＴＲＰＣ６、ＫＡＮＫ４、ＳＣＡＲＢ２、およびＴＴＣ２１Ｂを含む遺伝性ＦＳＧＳに関与する１つまたは複数の遺伝子に関連するＦＳＧＳを有する対象を処置する方法に関する。
一部の実施形態では、ＦＳＧＳが疑われる対象は、腎臓生検を施される。腎臓生検は、糸球体サイズ、ＦＳＧＳの組織学的バリアント、小嚢胞尿細管の変化、および尿細管肥大のうちの１つまたは複数を決定するために光学顕微鏡法によって分析され得る。さらに、腎臓生検は、他の原発性糸球体症を除外するために免疫蛍光法によって、ならびに／または有足細胞の足プロセス消失の程度、有足細胞の微絨毛転換、および管状細網封入のうちの１つまたは複数を決定するために電子顕微鏡法によって分析され得る。腎臓組織学の完全な評価は、分節性糸球体硬化症の実質の状況を確立するために重要であり、多くの他の糸球体疾患のうちの１つに関連するＦＳＧＳをＦＳＧＳの臨床的な病理学的症候群由来の疾患から区別する。一部の実施形態では、遺伝子検査を使用して、遺伝性ＦＳＧＳの病因について対象をさらに分析する。
伝統的には、ＦＳＧＳは、ＬＭの調査に基づいてＦＳＧＳ病変の５つの形態学的バリアントを定義するコロンビア分類に基づいて分類した。この分類システムは、病理学的基準のみに依拠するように設計されており、これらの所見を臨床および／または遺伝情報と統合しない。一般に、腎臓生検において見られる形態学的特徴は、ＦＳＧＳの遺伝性および非遺伝性の形態の間を区別することができない。例外としては、ＮＰＨＳ１およびアクチニンアルファ４遺伝子の突然変異に関連する際立った性質、ならびにファブリー病、アルポート症候群、およびレシチン－コレステロールアシルトランスフェラーゼ欠乏症の疾患特異的病変が挙げられる。ＦＳＧＳの組織学的バリアントは、他に特定されない（ＮＯＳ）ＦＳＧＳ（以前は古典的ＦＳＧＳと呼ばれており、最も一般的な形態である）；崩壊バリアント；先端部バリアント；肺門周囲バリアント；および細胞バリアントを含む。ＬＭにおける糸球体の外観は、定義によって、これらの形態の中で異なるが、それらはすべて、有足細胞の変化の超微細構造的所見を共有する。先端部病変は、丸柱に並置された糸球体房の部分に影響を及ぼし、先端部病変の異常としては、先端部でのボーマン嚢への接着、細胞過形成、泡沫細胞の存在、および／または硬化のうちの１つまたは複数が挙げられる。崩壊バリアントは、毛細血管外の上皮の肥大および／または増殖に関連して、分節状のまたは全体的な糸球体間質の強化、および毛細血管内の開通性の喪失を示す。肺門周囲およびＮＯＳバリアントは、それぞれ、マトリックスの増加を有するループ状毛細血管の分節性硬化／分節性閉塞（ヒアリン変性ありまたはなし）が臍の近くに分節を含むかどうか、または特異的な分節を決定することができないかどうかによって決定される。細胞病変は、再現性よく特定するための最も困難な病変である。細胞病変は、泡沫細胞および核崩壊ありまたはなしで、管腔を閉塞する分節性の毛細血管内細胞過形成を示す。
ある特定の態様では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含み、腎臓疾患または状態が、多発性嚢胞腎（ＰＫＤ）である、方法に関する。
多発性嚢胞腎には、常染色体劣性（ＡＲＰＫＤ）および常染色体優性（ＡＤＰＫＤ）の２つの形態が存在する。疾患の２つの形態は、別個の遺伝的基盤を有し、ＡＤＰＫＤに関与する２つの遺伝子が特定され、ＡＲＰＫＤに関与する１つの遺伝子が特定されている。疾患の２つの異なる種類の兆候は、非常に類似しており、両方とも、尿細管上皮細胞の過剰増殖から生じ、最終的に、嚢胞形成を伴う尿細管構造の破壊が生じ、慢性腎不全に至る。一部の実施形態では、本開示は、常染色体劣性多発性嚢胞腎（ＡＲＰＫＤ）を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）を有する対象を処置する方法に関する。
常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）は、至る所で過剰な嚢胞形成を伴う著しい腎臓の肥大によって特徴付けられる腎臓の遺伝性障害である。これらの嚢胞は、腎臓機能が徐々に低下するにつれて、年齢とともに漸進的に肥大する。ＡＤＰＫＤの診断は、家族歴および超音波エコー評価に基づく。ＡＤＰＫＤを有する患者の２５％程度において、家族歴は特定されず、これは、無症候性疾患、またはそのような症例の約５％での新たな遺伝的突然変異に関係し得る。ＡＤＰＫＤの性質の定義は、著しい両側の腎臓の肥大である。ＡＤＰＫＤを有する患者は、典型的には、人生の５０または６０年までに、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）に進行する。ＡＤＰＫＤの進行の速度は、腎臓の体積に直接的に関係し、治療は、腎臓体積の減少を遅らせて、進行を遅延させることを目的とする。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における腎臓における嚢胞の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における腎臓肥大の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における腎臓体積（例えば、総腎臓体積）の増加の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
ＡＤＰＫＤは、第１６染色体（ＰＫＤ１遺伝子座）または第４染色体（ＰＫＤ２遺伝子座）における異常が原因であり得る。ＰＫＤ１突然変異は、ＡＤＰＫＤの症例の約７８％を構成するが、ＰＫＤ２突然変異は、症例の約１４％を構成する。ＰＫＤ１患者は、ＰＫＤ２患者よりも低年齢でＥＳＲＤに進行する傾向がある。一部の実施形態では、本開示は、ＰＫＤ１遺伝子座に突然変異を有するＡＤＰＫＤを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ＰＫＤ２遺伝子座に突然変異を有するＡＤＰＫＤを有する対象を処置する方法に関する。
ＰＫＤ１およびＰＫＤ２遺伝子は、それぞれ、タンパク質のポリシスチン－１およびポリシスチン－２をコードする。これらのポリシスチンは、内在性膜タンパク質であり、腎尿細管上皮において見出される。ポリシスチン－１の異常が、腎尿細管上皮における細胞間相互作用および細胞－マトリックス相互作用を損なう一方で、ポリシスチン－２の異常が、細胞におけるカルシウムシグナル伝達を損なうと仮定される。
ＰＫＤに起因する腎臓病態生理学の結果として生じる変化としては、限定されるものではないが、血尿（多くの場合、肉眼的）、欠陥の濃縮（多尿症および口渇の増加をもたらす）、軽度のタンパク尿、腎結石症（ＡＤＰＫＤ患者の約２５％）、側腹部痛、および腹部疼痛が挙げられる。さらには、嚢胞の破裂、出血、および感染症が一般的な合併症である。進行性の腎臓の低下は、多くの場合、末期腎疾患をもたらす。高血圧は、最もよく見られる初期臨床提示であり、約５０％～約７０％の症例において起こり、ＥＳＲＤおよび心臓血管合併症への減退の速度に直接関連する最も一般的な性質である。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における血尿、欠陥の濃縮、タンパク尿、腎結石症、側腹部痛、および腹部疼痛のうちの１つまたは複数の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における嚢胞の破裂、出血、および感染症のうちの１つまたは複数の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における高血圧の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
多くの場合に、複数の腎臓外の兆候が、多発性嚢胞腎を有する対象に存在する。脳動脈瘤が、若年成人の約５％、６０歳を超える患者の２０％もに存在する。脳動脈瘤またはくも膜下出血のリスクは、その家族歴を有する対象において最も高い。腎外嚢胞は、ＡＤＰＫＤにおいて一般的である。肝嚢胞は、多くの場合、これらの患者において指摘され、有病率が年齢とともに増加する。３５歳を超える患者の９４％もが、肝嚢胞を有すると報告されている。総嚢胞有病率および体積は、男性に対して女性においてより高い。ＡＤＰＫＤ患者における肝嚢胞は、肝臓機能異常を稀に引き起こす。稀に、患者は、急性嚢胞感染または出血から痛みを発生する。加えて、ＡＤＰＫＤ患者の約７％～約３６％が、ＰＫＤ２突然変異を有するＡＤＰＫＤ患者においてより高い有病率で、膵嚢胞を発生する。心臓弁膜症は、ＡＤＰＫＤ患者の２５～３０％で指摘されている。心臓血管合併症、特に心肥大および冠動脈疾患は、ＡＤＰＫＤを有する患者における主要な死因である。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における脳動脈瘤の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における腎外嚢胞の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における肝嚢胞の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における膵嚢胞の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における心臓血管合併症（例えば、心肥大、冠動脈疾患）の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
常染色体劣性多発性嚢胞腎（ＡＲＰＫＤ）は、小児における著しい腎臓および肝臓関連の罹患率および死亡率の原因である。ＡＲＰＫＤを有する対象の大部分は、肥大したエコー源性腎臓を伴って、新生児期に存在する。腎臓疾患は、腎肥大症、高血圧、および種々の程度の腎臓機能異常によって特徴付けられる。ＡＲＰＫＤに罹患した個体の５０％より多くが、生後１０年以内に末期腎疾患（ＥＳＲＤ）に進行し、ＥＳＲＤに進行したＡＲＰＫＤを有する対象は、腎臓移植を必要とし得る。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における１つまたは複数の腎肥大症、高血圧、および腎臓機能異常の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における末期腎疾患の重症度、発生、および／または期間を低減し、腎臓移植についての必要性を予防する方法に関する。
ＡＲＰＫＤは、染色体６ｐ２１上に位置するＰＫＨＤ１遺伝子の突然変異が原因であり得、これは、少なくとも６６のエキソンを含有し、大きな内在性膜タンパク質であるフィブロシスチン（ポリダクチンとも称される）をコードする。フィブロシスチンの機能は、現在未知であるが、皮質および髄質集合管、ならびに腎臓の厚い上行脚、ならびに肝胆管の上皮細胞において見出される。一部の実施形態では、本開示は、ＰＫＨＤ１における１つまたは複数の突然変異に関連するＡＲＰＫＤを有する対象を処置する方法に関する。
ＰＫＨＤ１突然変異の多様性のために、ＡＲＰＫＤの症例では、遺伝子型を表現型と相関させることは困難であり得る。２つの切断型突然変異を有する対象は、より重度の腎臓の関与を有し得、おそらく、早期新生児死亡のリスクがある。ミスセンス突然変異についてホモ接合体である対象、または切断型突然変異と対をなすミスセンス突然変異を有する対象は、重度の表現型も有し得る。２つのミスセンス突然変異を有するヘテロ接合体である対象は、典型的には、より軽度の疾患を有する。新生児期を生き延びた対象は、ほとんどの場合、少なくとも１つのミスセンス突然変異を有する。一部の実施形態では、本開示は、２つの切断型突然変異を含むＡＲＰＫＤを有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態は、本開示は、１つまたは複数のミスセンス突然変異を含むＡＲＰＫＤを有する対象を処置する方法に関する。
ＡＲＰＫＤにおいて影響される２つの主要な器官系は、腎臓および肝胆道である。腎臓は、サイズが増加し得るか、および／または髄質から皮質に放射状に広がり、嚢表面上でピンポイントの点として見える小嚢胞（通常、２ｍｍ未満のサイズ）を有し得る。腎臓疾患の重症度は、嚢胞の影響を受けるネフロンのパーセンテージに比例する。より大きな腎嚢胞（最大で１ｃｍ）および間質性線維症が発生し、これは、新生児期を超えて生存する対象において見られる腎臓機能の進行性の増悪に寄与する。ＡＲＰＫＤは、肝内胆管および肝臓の線維化の種々の程度の拡張を含む発生異常に起因する胆道異形成に関連する。一部の実施形態では、本開示は、腎臓サイズの増加および／または嚢胞の存在の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
ＡＲＰＫＤの臨床提示は、症状の開始の年齢および肝臓または腎臓の関与の優性に基づいて変わる。ＡＲＰＫＤは、多くの場合、妊娠２４週後の胎児における日常的な出生前超音波検査によって検出される。推定診断は、皮髄分化が少ない著しく肥大したエコー源性腎臓の特徴的な所見の存在に基づく。直径５～７ｍｍのサイズの範囲の別個の嚢胞が検出され得るが、しかしながら、より大きな嚢胞、特に直径＞１０ｍｍの嚢胞は珍しい。ＡＲＰＫＤを有する対象は、典型的には、血圧の変化、腎臓機能、血清電解質濃度、水分補給状態、栄養状態、および成長についてモニターされる。一部の実施形態では、本開示は、ＡＲＰＫＤを有する対象を処置する方法であって、血圧、腎臓機能、血清電解質濃度、水分補給状態、栄養状態、および成長のうちの１つまたは複数をモニターすることをさらに含む、方法に関する。
新生児期の間、乳幼児は、呼吸困難が付随し得るか、または付随し得ない、腎臓の兆候を提示し得る。ＡＲＰＫＤを有する乳幼児は、両側の著しく肥大した腎臓を提示し得、これは肺機能に影響を与え得るか、または胃の腎圧迫に起因する食物摂取の困難さをもたらし得る。ＡＲＰＫＤを有する乳幼児は、クレアチニンおよび血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血清／血漿濃度の増加によって反映される腎臓機能障害を提示し得る。末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を有する新生児は、生存のために腎機能代替療法（ＲＲＴ）を必要とし得る。ＡＲＰＫＤを有する乳幼児は、高血圧および低ナトリウム血症のうちの１つまたは複数を提示し得る（尿を最大限に希釈することができないことに起因する）。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象におけるクレアチニンおよび血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血清／血漿濃度の増加によって反映される腎臓機能障害の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における高血圧および／または低ナトリウム血症の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
新生児期を超えて生存する患者について、継続的な腎臓成熟に起因する腎臓機能の改善が存在し得る。しかしながら、時間とともに、腎臓機能の進行性の増悪が発生し得、これは、迅速にまたはゆっくりであり得、ＥＳＲＤをもたらし得る。ＡＲＰＫＤを有する青年期の対象は、腎臓機能の進行性の増悪（通常、尿細管機能異常または障害の徴候を始めとして、濃縮能力の低下に起因する多尿症および／または多飲症、５００ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇを下回る最大尿オスモル濃度、尿酸性化能力の減少に起因する代謝性アシドーシス、高血圧、***症の再発エピソード、尿異常（限定されるものではないが、軽度のタンパク尿、糖尿、高リン酸尿症、および／またはマグネシウムの尿***量の増加を含む）、進行性腎臓機能障害、ならびに腎臓成長速度および／または腎臓サイズの減少）のうちの１つまたは複数を有し得る。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における腎臓機能の進行性の増悪、進行性腎臓機能障害、ならびに腎臓成長速度および／または腎臓サイズの減少のうちの１または複数の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
ＡＲＰＫＤの超音波所見は、皮髄分化が少ない両側の大きなエコー源性腎臓によって特徴付けられる。延髄の関与のみを有する患者では、標準解像度の超音波検査は正常であり得るが、しかしながら、高解像度の超音波検査は、髄質に限定された管拡張を検出することができる。常染色体優性疾患を有する対象において典型的に見られる大嚢胞は、通常、ＡＲＰＫＤを有する患者の乳幼児期には存在しないが、より年長の小児において現れ得る。結果として、より年長の対象では、超音波によって、ＡＲＰＫＤを常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）から識別することはより困難であり得る。一部の実施形態では、本開示は、ＡＲＰＫＤまたはＡＤＰＫＤを有する対象を処置する方法であって、超音波による疾患の識別をさらに含む、方法に関する。
ある特定の態様では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減する方法であって、慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する対象に対して有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。
慢性腎臓病（ＣＫＤ）は、腎臓が損傷を受けて、健康な腎臓と同様に血液を濾過することができない状態である。ＣＫＤを有する対象は、典型的には、身体中に残っている過剰の体液および血液からの廃棄物を有する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＫＤを有する対象を処置することに関し、ここで、対象は、貧血または赤血球の低い数、感染症の発生の増加、血液中の低カルシウムレベル、高カリウムレベルおよび高リンレベル、食欲不振または少ない摂食量、うつ病またはより低いクオリティオブライフからなる群から選択される１つまたは複数の他の健康状態も有する。
ＣＫＤは、種々のレベルの重症度を有し、典型的には、経時的に悪化するが、処置は、進行を遅らせることが示されている。未処置のままにすると、ＣＫＤは、腎不全、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、および／または早期心臓血管疾患に進行し得、生存のための透析または腎臓移植に至る可能性がある。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における腎不全、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）および／または早期心臓血管疾患の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
ＣＫＤの診断は、典型的には、推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）を測定する血液検査、ならびに／または尿中のアルブミンおよび／もしくは全タンパク質を測定する尿検査によって達成される。典型的には、尿中のタンパク質の増加は、ＣＫＤを示す。根本原因を決定するために、超音波または腎臓生検を行ってもよい。
一部の実施形態では、ＣＫＤは、最初は症状なしで現れ、通常、血清クレアチニンおよび／または尿中のタンパク質の増加のいずれかによる日常的なスクリーニング血液検査において検出される。ＣＫＤを有する対象の腎臓機能が減少するにつれて、体液過剰、およびレニン－アンジオテンシン系を介して腎臓によって作り出される血管作用性ホルモンの産生に起因して血圧が上昇し、それによって高血圧および心不全を発症するリスクが増加する。尿素がＣＫＤを有する対象中に蓄積するにつれて、高尿素血症、および最終的には***（倦怠感から心膜炎および脳症の範囲の症状）が生じ得る。その高い全身濃度に起因して、尿素は、高濃度でエクリン汗中に***され、汗が蒸発するにつれて、皮膚上で結晶化する（例えば、「尿素霜」）。ＣＫＤを有する対象では、カリウムが、血液中に蓄積し得る（例えば、不快感および潜在的に致命的な心不整脈を含むある範囲の症状を伴う高カリウム血症）。高カリウム血症は、通常、糸球体濾過量（ＧＦＲ）が約２０～約２５ｍｌ／分／１．７３ｍ２未満に低下するまで、ＣＫＤを有する対象において発症せず、その時点で、腎臓は、カリウムを***する能力が減少している。ＣＫＤにおける高カリウム血症は、酸血症（カリウムの細胞外シフトをもたらす）によって、およびインスリンの欠如から悪化し得る。ＣＫＤを有する対象は、腎臓における不十分なリン酸***から生じ得る高リン血症を有し得る。高リン血症は、血管石灰化を引き起こすことによって心臓血管のリスクの増加に寄与する。ＣＫＤを有する対象は、低カルシウム血症を有し得る。ＣＫＤを有する対象は、カルシウム、リン（リン酸）、副甲状腺ホルモン、もしくはビタミンＤ代謝の異常；骨代謝回転、石灰化、体積、線形成長、もしくは強度（腎臓骨形成異常）の異常；および／または血管もしくは他の軟部組織石灰化を引き起こし得るミネラルおよび骨代謝の１つまたは複数の変化を有し得る。ＣＫＤを有する対象は、近位尿細管の細胞から十分なアンモニアを生じる能力の減少から生じ得る代謝性アシドーシスを有し得る。ＣＫＤを有する対象は、貧血を有し得る。ＣＫＤの後期段階では、対象は、悪液質を発症し得、意図的ではない体重減少、筋消耗、衰弱および食欲不振をもたらす。ＣＫＤを有する対象は、一般的な集団よりも、結果として生じる心臓血管疾患を伴うアテローム性動脈硬化症を発症するより高い可能性がある。一部の実施形態では、本開示は、血圧の上昇、高血圧および／または心不全、高尿素血症、***、「尿素霜」、高カリウム血症、カリウムを***する腎臓の能力の減少、酸血症、高リン血症、血管石灰化、低カルシウム血症、ミネラルおよび骨代謝の変化（特に、カルシウム、リン（リン酸）、副甲状腺ホルモン、またはビタミンＤ代謝の異常を引き起こし得る変化）、骨代謝回転、石灰化、体積、線形成長、または強度（腎臓骨形成異常）の異常、血管または他の軟部組織の石灰化、代謝性アシドーシス、貧血、悪液質（特に、意図的ではない体重減少、筋消耗、衰弱および食欲不振をもたらし得る悪液質）、ならびにアテローム性動脈硬化症（心臓血管疾患をもたらし得る）からなる群から選択されるＣＫＤの１つまたは複数の状態または合併症の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
ＣＫＤの一般的な原因は、真性糖尿病、高血圧、および糸球体腎炎である。高血圧を有する成人５人のうち約１人、および糖尿病を有する成人３人のうち１人がＣＫＤを有する。ＣＫＤはまた、血管疾患（限定されるものではないが、両側性腎動脈狭窄などの大血管疾患、および虚血性腎症、溶血性***症候群、血管炎などの小血管疾患を含む）、原発性糸球体疾患（巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）および／またはＩｇＡ腎症（または腎炎））、続発性糸球体疾患（糖尿病性腎症およびループス腎炎など）、尿細管間質疾患（薬物および毒素誘発性の慢性尿細管間質性腎炎、および逆流性腎症を含む）、閉塞性腎症（両側性腎結石および前立腺の良性前立腺肥大症によって例示される通り）、および先天性疾患（多発性嚢胞腎疾患など）のうちの１つまたは複数によっても引き起こされ得る。稀に、腎臓に感染する蟯虫が、閉塞性腎症を引き起こし得る。一部の実施形態では、本開示は、真性糖尿病、高血圧、および糸球体腎炎、血管疾患（限定されるものではないが、両側性腎動脈狭窄などの大血管疾患、および虚血性腎症、溶血性***症候群、血管炎などの小血管疾患を含む）、原発性糸球体疾患（巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）および／またはＩｇＡ腎症（または腎炎））、続発性糸球体疾患（糖尿病性腎症およびループス腎炎など）、尿細管間質疾患（薬物および毒素誘発性の慢性尿細管間質性腎炎、および逆流性腎症を含む）、閉塞性腎症（両側性腎結石および前立腺の良性前立腺肥大症によって例示される通り）、ならびに先天性疾患（多発性嚢胞腎疾患など）のうちの１つまたは複数によって引き起こされるＣＫＤを有する対象を処置する方法に関する。稀に、腎臓に感染する蟯虫が、閉塞性腎症を引き起こし得る。
一部の実施形態では、本開示は、アルブミン尿および／またはタンパク尿について、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象をモニターする方法に関する。尿中のタンパク質レベルの上昇は、多くの腎臓疾患または状態の顕著な特徴である。アルブミン尿およびタンパク尿についての毎年のモニタリングは、リスクのある小児のために１歳で開始を始める。タンパク尿は、尿中の異常な量のタンパク質の存在を含む。タンパク尿の最も感受性の高いマーカーは、尿アルブミンの上昇（例えば、アルブミン尿）である。アルブミンは、典型的には、血液中を循環し、腎臓疾患または状態なしの対象の尿中には微量のアルブミンのみが見出される。中等度のアルブミン尿は、典型的には、微量アルブミン尿と呼ばれ、重度のアルブミン尿は、典型的には、顕性アルブミン尿と呼ばれる。上限値を上回るアルブミンレベルは、重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿と呼ばれる。一部の実施形態では、本開示は、アルブミン尿、タンパク尿、微量アルブミン尿、および顕性アルブミン尿のうちの１つまたは複数を有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象におけるアルブミン尿、タンパク尿、微量アルブミン尿、および顕性アルブミン尿のうちの１つまたは複数の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。
アルブミンの測定は、そのような測定が行われた方法に応じて、異なる単位を有し得る。一部の実施形態では、尿中のアルブミンは、採取された尿の期間あたりのアルブミンの質量（例えば、ｍｇ／２４時間）として測定される。一部の実施形態では、尿中のアルブミンは、採取された尿の体積あたりのアルブミンの質量（例えば、ｍｇ／Ｌ）として測定される。一部の実施形態では、尿中のアルブミンは、尿中のクレアチニンの質量あたりのアルブミンの質量（例えば、μｇ／ｍｇクレアチニン、アルブミン－クレアチン比、またはＡＣＲと称される）として測定される。
一部の実施形態では、対象は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）の存在を決定するための尿検査を施される。一部の実施形態では、尿検査は、特定の期間（例えば、２４時間）にわたる尿の採取を含む。中等度のアルブミン尿または微量アルブミン尿は、約３０～約３００ｍｇアルブミン／２４時間である２４時間の採尿からの尿中で検出されたアルブミンのレベル、および／または約２０～約２００μｇアルブミン／１分である１分の採尿からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む。重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿は、約３００ｍｇアルブミン／２４時間を上回る２４時間の採尿からの尿中で検出されたアルブミンのレベル、および／または約２００μｇアルブミン／１分を上回る１分の採尿からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む。一部の実施形態では、本開示は、約３０～約３００ｍｇアルブミン／２４時間である２４時間の採尿からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む中等度のアルブミン尿または微量アルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、約２０～約２００μｇアルブミン／１分である１分の採尿からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む中等度のアルブミン尿または微量アルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、約３００ｍｇアルブミン／２４時間を上回る２４時間の採尿からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、約２００μｇアルブミン／１分を上回る１分の採尿からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。
一部の実施形態では、尿検査は、尿の単一試料を使用するスポット検査を含む。一部の実施形態では、尿検査は、ディップスティック検査を含む。一部の実施形態では、尿ディップスティック検査は、アルブミン尿のレベルの推定を提供し得る。一部の実施形態では、中等度のアルブミン尿または微量アルブミン尿は、約２０～約２００ｍｇアルブミン／Ｌ尿であるスポット試料からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む。一部の実施形態では、重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿は、約２００ｍｇアルブミン／Ｌ尿を上回るスポット試料からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む。一部の実施形態では、本開示は、約２０～約２００ｍｇアルブミン／Ｌ尿であるスポット試料からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む中等度のアルブミン尿または微量アルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、約２００ｍｇアルブミン／Ｌ尿を上回るスポット試料からの尿中で検出されたアルブミンのレベルを含む重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。
スポットチェック試料中の尿中濃度の変動（より大きな試料採取および／または経時的な試料採取に対する）を相殺するために、試料中のアルブミンの量をクレアチニンの尿中濃度に対して比較することが有用である。これは、アルブミン／クレアチニン比（ＡＣＲ）と呼ばれる。一部の実施形態では、アルブミン尿の存在および／または重症度は、尿中のアルブミンのクレアチニンに対する比（例えば、アルブミン－クレアチニン比、ＡＣＲ、尿アルブミン－クレアチニン比またはｕＡＣＲと称される場合がある）によって決定される。ＡＣＲの下限および上限は、男性と女性との間で変わり得る。ＡＣＲは、尿中のクレアチニンの質量の単位あたりのアルブミンの質量の単位として測定される。一部の実施形態では、本開示は、約３０～約３００ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンの間のＡＣＲを含む中等度のアルブミン尿または微量アルブミン尿を有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、約３００ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンを上回るＡＣＲを含む重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿を有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、正常なＡＣＲは、典型的には、３０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンを下回る。任意のアルブミン尿測定についての測定の単位が異なり得ることに留意することが重要である。例えば、ＡＣＲは、クレアチニンの１ｍｇあたりのアルブミンのμｇとして測定されてもよい。ＡＣＲはまた、ｇアルブミン／ｇクレアチニンとして測定されてもよい。ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンの単位は、μｇアルブミン／ｍｇクレアチニンの単位と交換可能である。ＡＣＲは、アルブミンおよびクレアチニンの両方が質量の測定値として提供される場合、単位なしで提供される場合がある。
ＡＣＲは、尿中のクレアチニンの濃度あたりのアルブミンの質量として測定することができる。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における約２．５～約３５ｍｇアルブミン／ｍｍｏｌクレアチニンのＡＣＲを含む中等度のアルブミン尿または微量アルブミン尿を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における約３５ｍｇアルブミン／ｍｍｏｌクレアチニンを上回るＡＣＲを含む重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿を処置する方法を提供する。
対象における腎臓損傷および機能喪失の程度を記述する疾患のステージは、典型的には、腎臓疾患または状態を有する対象に割り当てられる。アルブミン尿のステージは、典型的には、ＡＣＲの観点から測定される。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ１のアルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。ステージＡ１のアルブミン尿は、３０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン未満（または３ｍｇアルブミン／ｍｍｏｌクレアチニン未満）のＡＣＲを伴う正常～中等度の尿中のアルブミンのレベルの増加を含む。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ２のアルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。ステージＡ２は、約３０～約３００ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン（または約３～約３０ｍｇアルブミン／ｍｍｏｌクレアチニン）のＡＣＲを伴う中等度のアルブミン尿または微量アルブミン尿を含む。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ３のアルブミン尿を有する対象を処置する方法に関する。ステージＡ３は、３００ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンより高い（または３０ｍｇアルブミン／ｍｍｏｌクレアチニンより高い）のＡＣＲを伴う重度のアルブミン尿または顕性アルブミン尿を含む。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象への療法の投与は、末期腎疾患の発症を遅延させるか、または予防する。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象への療法の投与は、前記対象のアルブミン尿のステージを低下させる。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ１のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ２のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ３のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ２のアルブミン尿への進行を遅延させるか、または予防する、ステージＡ１のアルブミン尿を有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージＡ３のアルブミン尿への進行を遅延させるか、または予防する、ステージＡ２のアルブミン尿を有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象におけるアルブミン尿のステージの進行の悪化を遅延させるか、および／または予防する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における腎臓損傷の改善、および／またはアルブミン尿のステージ分類の格下げを提供する。一部の実施形態では、本開示は、対象におけるアルブミン尿の分類を１つまたは複数のステージ分改善する方法を提供する。
一部の実施形態では、対象は、ネフローゼ域のタンパク尿を有する。一部の実施形態では、ネフローゼ域のタンパク尿は、１．７３ｍ２の体表面積あたり２４時間あたりの尿中に約３～約３．５ｇのタンパク質を含む。一部の実施形態では、ネフローゼ症候群を有する対象は、３．５ｇ／２４時間／１．７３ｍ２より高いタンパク尿を有する。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象におけるＡＣＲを低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約０．１～約２．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約２．５～約３．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約３．５～約５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約５．０～約７．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約７．５～約１０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約１０．０～約１５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約１５．０～約２０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約２０．０～約２５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約３０．０～約３５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約４０．０～約４５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約４５．０～約５０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約５０．０～約６０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約６０．０～約７０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約７０．０～約８０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約８０．０～約９０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約９０．０～約１００．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象におけるＡＣＲを低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．５ｇアルブミン／ｇクレアチニンより高く、またはそれと等しく低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象の絶対ＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．５ｇアルブミン／ｇクレアチニン未満に低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象の絶対ＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．３ｇアルブミン／ｇクレアチニン未満に低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約０．１～約２．５ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約０．３～約２．５ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約０．５～約２．５ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約０．５～約３．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約２．５～約３．５ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約３．５～約５．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約５．０～約７．５ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約７．５～約１０．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約１０．０～約１５．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約１５．０～約２０．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約２０．０～約２５．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約３０．０～約３５．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約４０．０～約４５．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約４５．０～約５０．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約５０．０～約６０．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約６０．０～約７０．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約７０．０～約８０．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約８０．０～約９０．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、約９０．０～約１００．０ｇアルブミン／ｇクレアチニン低減することに関する。
一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値（例えば、ＳＯＣ）と比較して、少なくとも５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも３０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、３０％より高く、またはそれと等しく低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも４０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、３０％より高く、またはそれと等しく低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、５０％より高く、またはそれと等しく低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも６０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも７０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも８０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９９％低減することに関する。
一部の実施形態では、総尿タンパク質は、尿中のクレアチニンの存在に対して測定および比較され得る（例えば、ＵＰＣＲ）。一部の実施形態では、ＵＰＣＲは、タンパク尿の測定値である。一部の実施形態では、タンパク尿は、０．２ｍｇ／ｍｇよりも高い尿タンパク質－クレアチニン比（ＵＰＣＲ）を含む。一部の実施形態では、タンパク尿は、１時間あたり４ｍｇ／ｍ２よりも高い尿タンパク質***量を含む。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態の完全寛解（ＣＲ）は、０．２ｇタンパク質／ｇクレアチニン未満の一貫したＵＰＣＲ測定値として定義される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態の部分寛解（ＰＲ）は、ベースラインタンパク尿からの約５０％の低減、および約２ｇタンパク質／ｇクレアチニン未満の一貫したＵＰＣＲを有するとして定義される。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象におけるＵＰＣＲを低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約０．２～約１ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、０．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン未満低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約０．１～約１００．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約０．１～約２．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約２．５～約３．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約３．５～約５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約５．０～約７．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約７．５～約１０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約１０．０～約１５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約１５．０～約２０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約２０．０～約２５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約３０．０～約３５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約４０．０～約４５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約４５．０～約５０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約５０．０～約６０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約６０．０～約７０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約７０．０～約８０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約８０．０～約９０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約９０．０～約１００．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン低減することに関する。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象におけるＵＰＣＲを低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約０．２～約１ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、０．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン未満低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニンより高く、またはそれと等しく低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象の絶対ＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン未満に低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象の絶対ＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．３ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン未満に低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約０．１～約１００．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約０．１～約２．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約２．５～約３．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約３．５～約５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約５．０～約７．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約７．５～約１０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約１０．０～約１５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約１５．０～約２０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約２０．０～約２５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約３０．０～約３５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約４０．０～約４５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約４５．０～約５０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約５０．０～約６０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約６０．０～約７０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約７０．０～約８０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約８０．０～約９０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、約９０．０～約１００．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン低減することに関する。
一部の実施形態では、療法の投与は、尿タンパク質***量を減少させる。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも３０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、３０％より高く、またはそれと等しく低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも４０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、４０％より高く、またはそれと等しく低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、５０％より高く、またはそれと等しく低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも６０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも７０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも８０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９９％低減することに関する。
対象は、腎臓がどの程度血液を濾過しているかを決定することによる腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）の存在を決定するための血液検査を施され得る。典型的には、糸球体濾過量（ＧＦＲ）が決定され、これは、腎臓を通ってボーマン嚢に濾過された体液（例えば、血液）の流量を測定する。ＧＦＲは、任意の溶質が自由に濾過され、腎臓によって再吸収も分泌もされない場合のクリアランス率に等しい。したがって、ＧＦＲは、血液の算出可能な体積が起源である尿中の物質の量の測定値であり、典型的には、時間あたりの体積、例えば、１分あたりのミリリットル（ｍＬ／分）の単位で記録される。体表面積に対して調整されたＧＦＲの正常範囲は、男性では約１００～約１３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２で、男性では１２５ｍＬ／分／１．７３ｍ２の平均ＧＦＲである。体表面積に対して調整されたＧＦＲの正常範囲は、４０歳未満の女性では約９０～約１２０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。２歳未満の小児におけるイヌリンクリアランスによって測定されるＧＦＲは、約１１０ｍＬ／分／１．７３ｍ２であり、これは漸進的に減少する。４０歳以降、ＧＦＲは、１年あたり約０．４～約１．２ｍＬ／分で年齢とともに漸進的に減少する。ＧＦＲはまた、血液および尿中の物質の比較測定によって算出され、血液検査の結果を使用して推定されてもよい（例えば、ｅＧＦＲ）。一部の実施形態では、ｅＧＦＲは、血清クレアチニン、年齢、民族性、および性別の変数を使用して測定される。一部の実施形態では、ｅＧＦＲは、コッククロフトゴールト式、腎臓疾患における食事の修飾（ＭＤＲＤ）式、ＣＫＤ－ＥＰＩ式、Ｍａｙｏの二次方程式の解の公式、およびシュワルツ式のうちの１つまたは複数を使用して測定される。
糸球体濾過量（ＧＦＲ）≧６０ｍｌ／分／１．７３ｍ２は、腎臓損傷が存在しない場合に、慢性腎臓病なしの対象において正常とみなされ、これは、ラボのアルブミン／クレアチニン比（ＡＣＲ）≧３０を含む、血液、尿、またはイメージング研究において見られる損傷の徴候を含む。少なくとも３か月間、ＧＦＲ＜６０ｍｌ／分／１．７３ｍ２を有する対象は、慢性腎臓病を有するとして診断される。
一般に、尿中のタンパク質は、腎臓機能の低下および心臓血管疾患についての独立したマーカーとしてみなされ、慢性腎臓病のステージ（一般に、腎臓疾患および／または状態について使用される場合が多い）は、対象のＧＦＲを測定することによって決定される。一部の実施形態では、本開示は、ステージ１のＣＫＤを処置する方法を提供する。ステージ１のＣＫＤは、正常な腎臓機能、正常または比較的高いＧＦＲ（例えば、≧９０ｍｌ／分／１．７３ｍ２）を伴う腎臓損傷、および低いクレアチニンレベルを含む。腎臓損傷は、血液もしくは尿検査またはイメージング研究における異常を含む、損傷の病理学的異常またはマーカーとして定義され得る。一部の実施形態では、本開示は、ステージ２のＣＫＤを処置する方法を提供する。ステージ２のＣＫＤは、腎臓損傷による、腎臓機能およびＧＦＲ（例えば、約６０～約８９ｍｌ／分／１．７３ｍ２）の軽度の低減を含む。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３のＣＫＤを処置する方法を提供する。ステージ３のＣＫＤは、腎臓機能およびＧＦＲ（例えば、約３０～約５９ｍｌ／分／１．７３ｍ２）の軽度～中程度の低減を含む。ステージ３のＣＫＤは、ステージ３ａ（例えば、腎臓機能および約４５～約５９ｍｌ／分／１．７３ｍ２のＧＦＲの軽度～中程度の低減）および３ｂ（例えば、腎臓機能および約３０～約４４ｍｌ／分／１．７３ｍ２のＧＦＲの中程度～重度の低減）に分けられることがある。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３ａのＣＫＤを処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３ｂのＣＫＤを処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ４のＣＫＤを処置する方法を提供する。ステージ４のＣＫＤは、腎臓機能およびＧＦＲ（例えば、約１５～約２９ｍｌ／分／１．７３ｍ２）の重度の低減を含む。一部の実施形態では、本開示は、ステージ５のＣＫＤを処置する方法を提供する。ステージ５のＣＫＤは、確立された腎不全（例えば、約＜１５ｍｌ／分／１．７３ｍ２のＧＦＲ）、永続的な腎臓補充療法、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、および高クレアチニンレベルを含む。一部の実施形態では、本開示は、ステージ１のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ２のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３ａのＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３ｂのＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ４のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ５のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ２のＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ１のＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３のＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ２のＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３ａのＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ２のＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３ｂのＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ２のＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ３ｂのＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ３ａのＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ４のＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ３のＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ４のＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ３ａのＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ４のＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ３ｂのＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ステージ５のＣＫＤへの進行を遅延させるか、または予防する、ステージ４のＣＫＤを有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象におけるＣＫＤのステージの進行の悪化を遅延させるか、および／または予防する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における腎臓損傷の改善、および／またはＣＫＤのステージ分類の格下げを提供する。一部の実施形態では、本開示は、対象におけるＣＫＤの分類を１つまたは複数のステージ分改善する方法を提供する。
ある特定の態様では、本開示は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、対象は、ステージ１のＣＫＤを有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ２のＣＫＤを有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ３のＣＫＤを有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ３ａのＣＫＤを有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ３ｂのＣＫＤを有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ４のＣＫＤを有する。一部の実施形態では、対象は、ステージ５のＣＫＤを有する。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象におけるＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを増加させる方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１５％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２５％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも３０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、３０％より高く、またはそれと等しく増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも４０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、４０％より高く、またはそれと等しく増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも６０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも７０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも８０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９０％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９５％増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９９％増加させることに関する。
一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約１ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約３ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約７ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約９ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約１０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約１５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約２０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約２５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約３５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約４０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約４５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約５０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約５５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約６５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約７０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約７５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約８０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約８５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約９０ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約９５ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約１００ｍＬ／分／１．７３ｍ２増加させることに関する。
一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値（例えば、ＳＯＣ）と比較して、約１ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、１ｍＬ／分／年より高く、またはそれと等しく増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約２ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約３ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、３ｍＬ／分／年より高く、またはそれと等しく増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約７ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約９ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約１０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約１５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約２０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約２５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約３０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約３５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約４０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約４５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約５０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約５５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約６０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約６５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約７０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約７５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約８０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約８５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約９０ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約９５ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値と比較して、約１００ｍＬ／分／年増加させることに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲを、ベースライン測定値（例えば、ＳＯＣ）のレベルまたはそれに近いレベルを維持することに関する。
一部の実施形態では、ＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲは、イヌリンまたはイヌリンアナログのシニストリンを血漿に注入することによって決定することができる。イヌリンおよびシニストリンは両方とも、糸球体濾過後に腎臓によって再吸収も分泌もされないので、それらの***の速度は、糸球体フィルターを横断する水および溶質の濾過の速度に直接比例する。一部の実施形態では、ＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲは、放射性物質を使用して測定される。一部の実施形態では、ＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲは、クロム－５１を使用して測定される。一部の実施形態では、ＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲは、５１Ｃｒ－ＥＤＴＡの腎臓または血漿クリアランスを使用して測定される。一部の実施形態では、ＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲは、テクネチウム－９９ｍを使用して測定される。一部の実施形態では、ＧＦＲおよび／またはｅＧＦＲは、９９ｍＴｃ－ＤＴＰＡを使用して測定される。放射性物質を使用する利点は、それらが、イヌリンの理想的な特性に近いが（糸球体濾過のみを受ける）、少量の尿または血液試料のみでより実用的に測定することができることである。５１Ｃｒ－ＥＤＴＡの腎臓または血漿クリアランスは、イヌリンとの比較において正確に示されている。一部の実施形態では、イヌリンクリアランスは、糸球体の機能をわずかに過大評価する。初期の腎疾患では、イヌリンクリアランスは、残っているネフロンにおける過剰濾過に起因して正常のままであり得る。不完全な採尿は、イヌリンクリアランス測定値の誤差の重要な起源である。
クレアチニンクリアランス率（ＣＣｒまたはＣｒＣｌ）は、単位時間あたりのクレアチニンが除去される血漿の体積であり、ＧＦＲを概算するための有用な尺度である。クレアチニンクリアランスは、シメチジンによって遮断され得るクレアチニン分泌に起因して、ＧＦＲを超える。ＧＦＲおよびＣＣｒは両方とも、血液および尿中の物質の比較測定によって正確に算出されてもよく、または血液検査の結果だけを使用する式によって推定されてもよい（ｅＧＦＲおよびｅＣＣｒ）。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象における総腎臓体積を低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、総腎臓体積は、超音波によって測定される。一部の実施形態では、総腎臓体積は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって測定される。一部の実施形態では、総腎臓体積は、腎臓疾患または障害（例えば、ＡＤＰＫＤ）における腎臓および嚢胞の合計体積を反映する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも３０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも４０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも６０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも７０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも８０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象における総腎臓体積を、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９９％低減することに関する。
一部の実施形態では、血中尿素窒素（ＢＵＮ）が測定される。一部の実施形態では、ＢＵＮ検査は、血液中の尿素窒素の量を測定する。一部の実施形態では、腎臓が損なわれている場合、尿素窒素の量は、より高くなり得る。一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象におけるＢＵＮを低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、ヒトについての正常ＢＵＮレベルは、約７ｍｇ／ｄＬ～約２０ｍｇ／ｄＬである。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも３０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも４０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも６０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも７０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも８０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象におけるＢＵＮを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９９％低減することに関する。
尿好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）濃度は、初期の傷害に対して非常に鋭敏であり、尿細管特異的損傷のマーカーとして公知である、急性腎傷害の初期バイオマーカーである。尿ＮＧＡＬ（またはｕＮＧＡＬ）は、血清クレアチニンレベルの前に上昇する傾向があり、尿細管傷害の予測を可能にする。ｕＮＧＡＬは、腎臓構造の急性腎傷害の重症度に従って、量的におよび比例的に増加する。一部の実施形態では、＜５０ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値は、急性腎傷害の低リスクの指標である。一部の実施形態では、約５０～約１４９ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値は、急性腎傷害の多義的なリスクを示す。一部の実施形態では、約１５０～約３００ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値は、急性腎傷害の中程度のリスクを示す。一部の実施形態では、＞３００ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値は、急性腎傷害の高リスクを示す。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象におけるｕＮＧＡＬを低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約０．１～約５０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約０．１～約１００．０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約０．１～約１５０．０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約０．１～約２００．０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約０．１～約２５０．０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約０．１～約３００．０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約０．１～約２５ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約２５～約５０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約５０～約１００ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約１００～約１５０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約１５０～約２００ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約２００～約２５０ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約２５０～約３００ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、３００ｎｇ／ｍＬより高く低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、約０．１～約３００ｎｇ／ｍＬ低減することに関する。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を有する対象におけるｕＮＧＡＬを低減する方法であって、有効量の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも１５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも３０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも４０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも５０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも６０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも７０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも８０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９０％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９５％低減することに関する。一部の実施形態では、方法は、対象のｕＮＧＡＬを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも９９％低減することに関する。
必要に応じて、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減するための、特に、腎臓疾患または状態の１つまたは複数の合併症を処置する、予防する、またはその進行速度および／もしくは重症度を低減するための本明細書に開示される方法は、腎臓疾患または状態を処置するための１種または複数の追加の活性薬剤および／または支持療法を対象に投与することをさらに含んでいてもよい。一部の実施形態では、対象は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を処置するために、追加の活性薬剤および／または支持療法を投与される。一部の実施形態では、ＡＲＢおよびＡＣＥ阻害剤は、セカンドライン療法としてのベータ遮断およびカルシウムチャネル遮断薬とともに、腎臓疾患および状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）のための療法の頼みの綱である。一部の実施形態では、サードライン療法のチアジドは、正常な腎臓機能を有する対象において好ましいが、ループ利尿薬は、損なわれた腎臓機能を有する対象において好ましい。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）のアンタゴニストを投与される。一部の実施形態では、ＲＡＡＳ阻害剤としては、限定されるものではないが、アンジオテンシンアンタゴニスト（例えば、アンジオテンシン遮断療法、アンジオテンシン系阻害剤、レニン－アンジオテンシン系阻害剤、アンジオテンシンＩＩ遮断、ＩＩ型アンジオテンシン１受容体遮断薬、ＡＲＢ、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、またはサルタン）、およびアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤が挙げられる。一部の実施形態では、ＲＡＡＳアンタゴニズム、および特にＡＣＥ阻害剤およびＡＲＢの組合せは、輸出小動脈血管緊張を低減することによって、したがって糸球体濾過のための原動力である糸球体内毛細管圧を低減することによって、ＧＦＲを低下させるであろう。そのため、ＧＦＲの中等度の減少は、許容され得、ＲＡＡＳアンタゴニズムが達成されていることの証拠を提供する。
一部の実施形態では、対象は、対象がタンパク尿の徴候を示す場合、アンジオテンシンアンタゴニスト（例えば、アンジオテンシン受容体遮断薬、ＡＲＢ）を投与される。一部の実施形態では、ＡＲＢは、腎臓疾患または状態を有する対象におけるタンパク尿を低減する。一部の実施形態では、アンジオテンシンアンタゴニストは、腎臓疾患または状態を有する対象の糸球体硬化症率を減少させる。一部の実施形態では、ＡＲＢの投与は、腎臓疾患の進行を減少させる。一部の実施形態では、対象は、ロサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、フィマサルタン、アジルサルタン、サルプリサルタン、およびテルミサルタンからなる群から選択される１種または複数のＡＲＢを投与される。一部の実施形態では、対象は、ロサルタンを投与される。一部の実施形態では、対象は、イルベサルタンを投与される。一部の実施形態では、対象は、オルメサルタンを投与される。一部の実施形態では、対象は、カンデサルタンを投与される。一部の実施形態では、対象は、バルサルタンを投与される。一部の実施形態では、対象は、フィマサルタンを投与される。一部の実施形態では、対象は、アジルサルタンを投与される。一部の実施形態では、対象は、サルプリサルタンを投与される。一部の実施形態では、対象は、テルミサルタンを投与される。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、ＡＣＥ阻害剤を投与される。一部の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、ラミプリル（例えば、ｒａｍｉｐｅｎ）、トランドラプリル、およびゾフェノプリルからなる群から選択される。一部の実施形態では、対象は、ベナゼプリルを投与される。一部の実施形態では、対象は、カプトプリルを投与される。一部の実施形態では、対象は、エナラプリルを投与される。一部の実施形態では、対象は、リシノプリルを投与される。一部の実施形態では、対象は、ペリンドプリルを投与される。一部の実施形態では、対象は、ラミプリルを投与される。一部の実施形態では、対象は、トランドラプリルを投与される。一部の実施形態では、対象は、ゾフェノプリルを投与される。一部の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は、タンパク尿および正常な腎臓機能を有する対象における透析を遅延させる。一部の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は、対象の腎臓機能の低下を遅らせる。一部の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は、対象におけるタンパク尿を低減する。一部の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は、対象における腎臓損傷を減少させる。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、ＡＲＢおよびＡＣＥ阻害剤を投与される。一部の実施形態では、タンパク尿および／または微量アルブミン尿を含む腎臓疾患または状態を有する対象は、ＡＲＢおよびＡＣＥ阻害剤を投与される。
一部の実施形態では、アンジオテンシンアンタゴニズムに対する代替手法は、ＡＣＥ阻害剤および／またはＡＲＢをアルドステロンアンタゴニストと組み合わせることである。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、原発性ＦＳＧＳ）を有する対象は、免疫抑制処置を投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、免疫抑制薬物療法で処置される。一部の実施形態では、免疫抑制は、続発性ＦＳＧＳを有する対象に投与されない。一部の実施形態では、免疫抑制薬は、原発性ＦＳＧＳを有していない対象に投与されない。一部の実施形態では、免疫抑制薬は、コルチコステロイド、カルシニューリン阻害剤、ヤヌスキナーゼ阻害剤、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）阻害剤の哺乳動物標的、ＩＭＤＨ阻害剤、および生物製剤（限定されるものではないが、モノクローナル抗体を含む）からなる群から選択される。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、コルチコステロイドを投与される。一部の実施形態では、グルココルチコイドは、コルチコステロイドである。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、１種または複数のグルココルチコイドを投与される。一部の実施形態では、グルココルチコイドの投与は、初期療法である。一部の実施形態では、グルココルチコイドは、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、およびトリアムシノロンからなる群から選択される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、プレドニゾンを投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、プレドニゾロンを投与される。
一部の実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、シクロスポリン（例えば、ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ、ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎ、ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ、Ｎｅｏｒａｌ、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ、ＳａｎｇＣｙａ）およびタクロリムス（例えば、Ａｓｔａｇｒａｆ ＸＬ、Ｅｎｖａｒｓｕｓ ＸＲ、Ｐｒｏｇｒａｆ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、継続的なステロイド療法に耐えることができないステロイド感受性の対象、および／またはステロイド耐性腎臓疾患（例えば、ステロイド耐性ＦＳＧＳ）を有する対象に投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、シクロスポリンを投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、タクロリムスを投与される。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、１種または複数のコルチコステロイドおよび／またはカルシニューリン阻害剤の組合せを投与されてもよい。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、シクロスポリンおよびプレドニゾンを投与されてもよい。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、タクロリムスおよびプレドニゾンを投与される。一部の実施形態では、シクロスポリンおよびプレドニゾンは、クレアチニンクリアランスとして評価される腎臓機能を保つために投与される。
一部の実施形態では、グルココルチコイドと組み合わせたミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）による処置は、カルシニューリン阻害剤を摂取できない対象において有益であり得る。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、１種または複数のグルココルチコイドと組み合わせたミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）を投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、ＭＭＦおよびプレドニゾンを投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、プレドニゾロンおよびＭＭＦを投与される。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、シクロホスファミドおよび／またはプレドニゾンを投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、プレドニゾロンおよび／またはクロラムブシルを投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、シクロホスファミドを投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態を有する対象は、クロラムブシルを投与される。
一部の実施形態では、ヤヌスキナーゼ阻害剤は、トファシチニブ（例えば、Ｘｅｌｊａｎｚ）である。
一部の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、シロリムス（例えば、Ｒａｐａｍｕｎｅ）およびエベロリムス（例えば、Ａｆｉｎｉｔｏｒ、Ｚｏｒｔｒｅｓｓ）からなる群から選択される。
一部の実施形態では、ＩＭＤＨ阻害剤は、アザチオプリン（例えば、Ａｚａｓａｎ、Ｉｍｕｒａｎ）、レフルノミド（例えば、Ａｒａｖａ）、およびミコフェノレート（例えば、ＣｅｌｌＣｅｐｔ、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ）からなる群から選択される。
一部の実施形態では、生物製剤は、アバタセプト（例えば、Ｏｒｅｎｃｉａ）、アダリムマブ（例えば、Ｈｕｍｉｒａ）、アナキンラ（例えば、Ｋｉｎｅｒｅｔ）、バシリキシマブ（例えば、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ）、セルトリズマブ（例えば、Ｃｉｍｚｉａ）、ダクリズマブ（例えば、Ｚｉｎｂｒｙｔａ）、エタネルセプト（例えば、Ｅｎｂｒｅｌ）、フレソリムマブ、ゴリムマブ（例えば、Ｓｉｍｐｏｎｉ）、インフリキシマブ（例えば、Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、イキセキズマブ（例えば、Ｔａｌｔｚ）、ナタリズマブ（例えば、Ｔｙｓａｂｒｉ）、リツキシマブ（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ）、セクキヌマブ（例えば、Ｃｏｓｅｎｔｙｘ）、トシリズマブ（例えば、Ａｃｔｅｍｒａ）、ウステキヌマブ（例えば、Ｓｔｅｌａｒａ）、およびベドリズマブ（例えば、Ｅｎｔｙｖｉｏ）からなる群から選択される。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、スタチン（例えば、ベナゼプリル、バルサルタン、フルバスタチン、プラバスタチン）を投与される。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、ラデミルセンを投与される。ラデミルセンは、抗ｍｉＲＮＡ－２１である。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、バルドキソロンメチルを投与される。バルドキソロンメチルはＫＥＡＰ１－Ｎｒｆ２経路の活性化剤であり、バルドキソロンメチルは炎症促進性転写因子のＮＦ－κＢも阻害する。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、Ａｃｈｔａｒゲルを投与される。Ａｃｈｔａｒゲルは、１９５０年代に、今日必要とされているよりも厳しくない基準の下でネフローゼ症候群のために米国食品医薬品局によって承認された。一部の実施形態では、一部の症例研究は、ＦＳＧＳを有する一部の対象において、Ａｃｈｔａｒの限定的な有効性を示唆する。一部の実施形態では、ＦＳＧＳを有する対象は、Ａｃｈｔａｒゲルを投与される。
一部の実施形態では、ＡＤＰＫＤを有する対象は、トルバプタン（例えば、ＯＰＣ－４１０６１）を投与される。一部の実施形態では、トルバプタンは、後期の慢性腎臓病を有するが、ビリルビンおよびアラニンアミノトランスフェラーゼレベルの上昇に関連する患者において、１年の期間にわたって、プラセボよりもゆっくりとしたｅＧＦＲの低下を実証した。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）の対象は、スパルセンタンと組み合わせたアバタセプト、アリスキレン、アロプリノール、ＡＮＧ－３０７０、アトルバスタチン、ブレセルマブ、ボスチニブ、ＣＣＸ１４０－Ｂ、ＣＸＡ－１０、Ｄ６－２５－ヒドロキシビタミンＤ３、ダパグリフロジン、ＭＭＦと組み合わせたデキサメタゾン、エモジン、ＦＧ－３０１９、ＦＫ５０６、ＦＫ－５０６およびＭＭＦ、ＦＴ－０１１、ガラクトース、ＧＣ１００８、ＧＦＢ－８８７、イソトレチノイン、ランレオチド、レバミゾール、リキシバプタン、ロスマピモド、メトホルミン、ミゾリビン、Ｎ－アセチルマンノサミン、オクトレオチド、パリカルシトール、ＰＦ－０６７３０５１２、ピオグリタゾン、プロパゲルマニウム、プロパゲルマニウムおよびイルベサルタン、ラパミューン、ラパマイシン、ＲＥ－０２１（例えば、スパルセンタン）、ＲＧ０１２、ロシグリタゾン（例えば、Ａｖａｎｄｉａ）、サキナビル、ＳＡＲ３３９３７５、ソマトスタチン、スピロノラクトン、テセバチニブ（ＫＤ０１９）、テトラコサクチン、ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ（ＴＷ）、バルプロ酸、ＶＡＲ－２００、ベングルスタット（ＧＺ４０２６７１）、ベリヌラド、ボクロスポリン、ならびにＶＸ－１４７のうちの１種または複数を投与される。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、腎臓透析を受ける。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、腎臓移植を受ける。一部の実施形態では、ＥＳＲＤを有する対象は、腎臓移植を受ける。一部の実施形態では、腎臓移植片を有する対象は、再発性腎臓疾患を経験しない。一部の実施形態では、腎臓移植片を有する対象は、抗糸球体基底膜抗体病を縮小させる。一部の実施形態では、抗糸球体基底膜抗体病は、腎臓移植後１年以内に起こる。一部の実施形態では、抗糸球体基底膜抗体病を有する対象は、メチルプレドニゾンおよび／またはシクロホスファミドを投与される。一部の実施形態では、抗糸球体基底膜抗体病を有する対象は、プラスマフェレーシスを受ける。
一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、間葉系幹細胞療法を投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、骨髄幹細胞を投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、リポタンパク質除去を受ける。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、Ｌｉｐｏｓｏｒｂｅｒ ＬＡ－１５デバイスを投与される。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、プラスマフェレーシスを受ける。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、血漿交換を受ける。一部の実施形態では、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）を有する対象は、食事の変更（例えば、食事によるナトリウム摂取）を受ける。
一部の実施形態では、本開示の方法は、対象における腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）の臨床的悪化を遅延させる。一部の実施形態では、本開示の方法は、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、多発性嚢胞腎、慢性腎臓病）に関連する１つまたは複数の合併症に対する入院のリスクを低減する。
７．医薬組成物
ある特定の態様では、本開示の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、単独でまたは医薬製剤（治療用組成物または医薬組成物とも称される）の構成要素として投与することができる。医薬製剤は、有効にそこに含有される活性成分（例えば、本開示の薬剤）の生物活性を可能にするような形態であって、製剤が投与されるであろう対象に対して許容されない毒性の追加の構成要素を含有しない調製物を指す。対象の化合物は、ヒトまたは獣医学における使用のための任意の従来の方法での投与のために製剤化され得る。例えば、本開示の１種または複数の薬剤は、薬学的に許容される担体とともに製剤化されてもよい。薬学的に許容される担体は、一般に対象に対して非毒性である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、限定されるものではないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、および／または保存剤が挙げられる。一般に、本開示における使用のための医薬製剤は、パイロジェンフリーの、対象に投与される場合に生理学的に許容される形態である。上記に記載される製剤に必要に応じて含まれていてもよい本明細書に記載されるもの以外の治療的に有用な薬剤は、本開示の方法において、対象の薬剤と組み合わせて投与されてもよい。
ある特定の実施形態では、本開示の治療方法は、組成物を、全身的に、またはインプラントもしくはデバイスとして局所的に投与することを含む。投与される場合、本開示における使用のための治療用組成物は、実質的にパイロジェンフリーの形態、またはパイロジェンフリーの生理学的に許容される形態である。上記に記載される組成物に必要に応じて含まれていてもよい単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体以外の治療的に有用な薬剤は、本明細書に開示された方法において、対象の化合物と同時にまたは逐次的に投与されてもよい。
典型的には、本明細書に開示されるタンパク質治療剤は、非経口的に、特に静脈内または皮下に投与される。一部の実施形態では、非経口の投与経路は、筋肉内、腹腔内、皮内、硝子体内、硬膜外、大脳内、動脈内、関節内、海綿体内、病巣内、骨内、眼内、髄腔内、静脈内、経皮、経粘膜、羊膜外投与、皮下、およびそれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、非経口の投与経路は、皮下である。一部の実施形態では、非経口の投与経路は、皮下注射である。一部の実施形態では、本開示の組成物は、皮下注射によって投与される。非経口投与に好適な医薬組成物は、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、１種または複数の薬学的に許容される無菌の等張の水性溶液もしくは非水性溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、あるいは使用直前に無菌の注射可能な溶液または分散液に再構成され得る無菌粉末と組み合わせて含んでいてもよく、これは、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質、または懸濁化剤もしくは増粘剤を含有していてもよい。本開示の医薬組成物において用いられ得る好適な水性および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要とされる粒子径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。
組成物および製剤は、所望により、活性成分を含有する１つまたは複数の単位剤形を含有し得るパックまたはディスペンサーデバイス中に存在していてもよい。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスティックホイルを含んでいてもよい。パックまたはディスペンサーデバイスは、投与のための説明書が添付されていてもよい。
さらに、組成物は、標的組織部位への送達のための形態でカプセル化または注射されてもよい。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の治療用化合物（例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体）を標的組織部位に送達することができ、発生している組織のための構造を提供し、かつ体内に最適に再吸収され得る、マトリックスを含んでいてもよい。例えば、マトリックスは、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の徐放を提供し得る。そのようなマトリックスは、他の埋め込まれる医学的適用のために現在使用されている材料で形成されていてもよい。
マトリックス材料の選択は、生体適合性、生分解性、機械的特性、美容的外観、および界面の特性に基づく。対象の組成物の特定の適用は、適切な製剤を定義するであろう。組成物のための可能性があるマトリックスは、生分解性であり得、化学的に定義される硫酸カルシウム、リン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト、ポリ乳酸、およびポリ無水物であり得る。他の可能性がある材料は、生分解性であり、生物学的に十分に定義されており、例えば、骨または皮膚コラーゲンである。さらなるマトリックスは、純粋なタンパク質または細胞外マトリックス構成要素で構成される。他の可能性があるマトリックスは、非生分解性であり、化学的に定義されており、例えば、焼結ヒドロキシアパタイト、バイオガラス、アルミネート、または他のセラミックである。マトリックスは、上記で言及された種類の材料のうちのいずれかの組合せ、例えば、ポリ乳酸およびヒドロキシアパタイト、またはコラーゲンおよびリン酸三カルシウムで構成されていてもよい。バイオセラミックを、組成物中、例えばカルシウム－アルミネート－ホスファート中で変更し、加工して、細孔サイズ、粒子径、粒子形状、および生分解性を変更してもよい。
経口投与のための固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣剤、散剤、顆粒剤など）において、本発明の１種または複数の治療用化合物は、１種または複数の薬学的に許容される担体、例えば、クエン酸ナトリウムもしくは第二リン酸カルシウム、および／または以下のうちのいずれかと混合され得る：（１）フィラーまたは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシアなど；（３）保湿剤、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム；（５）溶液妨害剤、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、例えば、第４級アンモニウム化合物；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなど；（８）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイトクレー；（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物；ならびに（１０）着色剤。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合では、医薬組成物はまた、緩衝剤を含んでいてもよい。同様の種類の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖などの賦形剤、および高分子量ポリエチレングリコールなどを使用する軟および硬ゼラチン充填カプセルにおいてフィラーとして用いられてもよい。
経口投与のための液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、当技術分野において一般に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、トウロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含有していてもよい。不活性希釈剤以外に、経口組成物は、補助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、着色剤、芳香剤、ならびに保存剤を含むこともできる。
懸濁剤は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物を含有していてもよい。
本発明の組成物はまた、補助剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含有していてもよい。微生物の作用の防止は、さまざまな抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの含有によって確実にされ得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物に含めることも望ましくあり得る。加えて、注射可能な医薬形態の持続的吸収が、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの含有によってもたらされ得る。
投薬レジメンは、本開示の対象の化合物（例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体）の作用を修飾するさまざまな因子を考慮して、主治医により決定されることが理解される。さまざまな因子としては、限定されるものではないが、対象の年齢、性別および食事、疾患の重症度、投与の回数、ならびに他の臨床的因子が挙げられる。必要に応じて、投薬量は、再構成において使用されるマトリックスの種類、および組成物中の化合物の種類によって変わり得る。最終組成物への他の公知の増殖因子の添加も、投薬に影響を及ぼし得る。進行は、骨成長および／または修復、例えば、Ｘ線（ＤＥＸＡを含む）、組織形態計測的決定、ならびにテトラサイクリン標識の定期的な評価によってモニターすることができる。
ある特定の実施形態では、本発明は、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体のｉｎ ｖｉｖｏ産生のための遺伝子治療も提供する。そのような治療は、上記で列挙される障害を有する細胞または組織への単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体ポリヌクレオチド配列の導入によって、その治療効果を達成するであろう。単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体ポリヌクレオチド配列の送達は、組換え発現ベクター、例えば、キメラウイルスまたはコロイド分散系を使用して達成することができる。単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体ポリヌクレオチド配列の治療的送達のために、標的化リポソームの使用が好ましい。
ある特定の実施形態では、本開示は、本開示の薬剤のうちの１種または複数のｉｎ ｖｉｖｏ産生のための遺伝子治療も提供する。そのような治療は、上記で列挙される障害のうちの１つまたは複数を有する細胞または組織への薬剤配列の導入によって、その治療効果を達成するであろう。薬剤配列の送達は、組換え発現ベクター、例えば、キメラウイルスまたはコロイド分散系を使用することによって達成することができる。本開示の薬剤配列のうちの１つまたは複数の好ましい治療的送達は、標的化リポソームの使用である。
本明細書に教示される遺伝子治療のために利用され得るさまざまなウイルスベクターとしては、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニア、または好ましくはＲＮＡウイルス、例えばレトロウイルスが挙げられる。好ましくは、レトロウイルスベクターは、マウスまたは鳥類のレトロウイルスの誘導体である。単一の外来遺伝子が挿入され得るレトロウイルスベクターの例としては、限定されるものではないが、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）が挙げられる。いくつかの追加のレトロウイルスベクターは、複数の遺伝子を組み込むことができる。これらのベクターはすべて、形質導入細胞が特定および生成され得るように、選択マーカーについての遺伝子を移入するまたは組み込むことができる。レトロウイルスベクターは、例えば、糖、糖脂質、またはタンパク質を結合することによって、標的特異的にすることができる。好ましい標的化は、抗体を使用することによって達成される。当業者は、特定のポリヌクレオチド配列を、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を含有するレトロウイルスベクターの標的特異的送達を可能にするために、レトロウイルスゲノムに挿入することができるか、またはウイルスエンベロープに結合させることができることを認識するであろう。好ましい実施形態では、ベクターは、骨または軟骨を標的とする。
あるいは、組織培養細胞を、従来のリン酸カルシウムトランスフェクションによって、レトロウイルス構造遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖをコードするプラスミドで直接的にトランスフェクトすることができる。次いで、これらの細胞は、目的の遺伝子を含有するベクタープラスミドでトランスフェクトされる。得られた細胞は、レトロウイルスベクターを培養培地に放出する。
単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体ポリヌクレオチドのための別の標的化送達系は、コロイド分散系である。コロイド分散系としては、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質に基づく系が挙げられる。本発明の好ましいコロイド系は、リポソームである。リポソームは、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの送達ビヒクルとして有用である人工膜小胞である。ＲＮＡ、ＤＮＡおよび無傷ビリオンが、水性の内部に封入され、生物学的に活性な形態で細胞に送達され得る（例えば、Fraley, et al., Trends Biochem. Sci., 6:77, 1981を参照されたい）。リポソームビヒクルを使用する効率的な遺伝子移入のための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Mannino,et al., Biotechniques, 6:682, 1988を参照されたい。リポソームの組成物は、通常、リン脂質の組合せ、通常、ステロイド、特にコレステロールとの組合せである。他のリン脂質または他の脂質もまた、使用されてもよい。リポソームの物理的特徴は、ｐＨ、イオン強度、および二価カチオンの存在に依存する。
リポソーム産生において有用な脂質の例としては、ホスファチジル化合物、例えば、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質、セレブロシド、およびガングリオシドが挙げられる。例示的なリン脂質としては、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、およびジステアロイルホスファチジルコリンが挙げられる。リポソームの標的化は、例えば、器官特異性、細胞特異性、および細胞小器官特異性に基づいても可能であり、当技術分野において公知である。
本開示は、ｐＨを調整するための酸および塩基；ならびにｐＨを狭い範囲内に保つための緩衝剤を含むように変更されてもよい製剤を提供する。
投薬レジメンは、本開示の対象の化合物（例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体）の作用を修飾するさまざまな因子を考慮して、主治医により決定されることが理解される。さまざまな因子としては、限定されるものではないが、患者の年齢、性別および／もしくは食事、疾患の重症度、投与の回数、ならびに／または他の臨床的因子が挙げられる。必要に応じて、投薬量は、再構成において使用されるマトリックスの種類、および／または組成物中の化合物の種類によって変わり得る。最終組成物への他の公知の増殖因子の添加も、投薬に影響を及ぼし得る。
一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、１回または複数回用量で投与される。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、０．２５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、０．５０ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、０．７５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１．２５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１．５０ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１．７５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２．２５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２．５０ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２．７５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３．２５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３．５０ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３．７５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４．２５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４．５０ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４．７５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、５．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、５．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、６．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、７．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、８．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、９．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１０．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２０．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３０．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、少なくとも０．２５ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。一部の実施形態では、１種または複数のＴβＲＩＩ融合アンタゴニストの用量は、約０．２５ｍｇ／ｋｇから約３０．００ｍｇ／ｋｇのヘテロ多量体を含む。
一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、毎日１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２日ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３日ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４日ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、５日ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、６日ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１週間ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２週間ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３週間ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４週間ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１週間おき１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１か月ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２か月ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３か月ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４か月ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、５か月ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、６か月ごとに１回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、毎年１回投与される。
一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、毎日２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２日ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３日ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４日ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、５日ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、６日ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１週間ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２週間ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３週間ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４週間ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１週間おき２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１か月ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２か月ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３か月ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４か月ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、５か月ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、６か月ごとに２回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、毎年２回投与される。
一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、毎日３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２日ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３日ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４日ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、５日ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、６日ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１週間ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２週間ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３週間ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４週間ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１週間おき３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、１か月ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、２か月ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、３か月ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、４か月ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、５か月ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、６か月ごとに３回投与される。一部の実施形態では、本開示の１種または複数の単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体の用量は、毎年３回投与される。
一部の実施形態では、本開示は、腎臓疾患または状態を処置する方法であって、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含み、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体が、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約３０．００ｍｇ／ｋｇの用量でそれを必要とする対象に投与される、方法を提供する。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、毎週少なくとも１回投与される。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、３週間ごとに少なくとも１回投与される。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、４週間ごとに少なくとも１回投与される。一部の実施形態では、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体は、皮下投与される。
例示
ここに、本発明を一般的に記載し、これは、以下の実施例への参照によってより容易に理解され、これらは、本発明のある特定の実施形態の例示の目的のためだけに含まれ、本発明を限定することを意図するものではない。
（実施例１）
単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物の生成および特徴付け
出願人は、短いＮ末端伸長を有するＩｇＧ重鎖由来の定常領域（例えば、Ｆｃドメイン）、およびヒトＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインがＩｇＧ重鎖由来の別々の定常領域（例えば、Ｆｃドメイン）に融合された第２のポリペプチドを、細胞外ドメインとこのＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域（例えば、Ｆｃドメイン）との間に位置するリンカーとともに含む可溶性単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物を構築した。個々の構築物は、それぞれ、単量体Ｆｃポリペプチドおよび単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体と称され、それぞれについての配列を下記に提供する。
ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物またはＦｃホモ二量体融合物よりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するための方法論は、非対称ヘテロマー複合体の形成をガイドするように、Ｆｃドメインのアミノ酸配列に変更を導入することである。Ｆｃドメインを使用して非対称相互作用対を作製する多くの異なる手法を本開示に記載する。
単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ、配列番号４６～４８、８４および４９～５１、８５の単量体Ｆｃポリペプチド配列に示される１つの手法では、一方のＦｃドメインは、相互作用面においてカチオン性アミノ酸を導入するように変更されるが、他のＦｃドメインは、相互作用面においてアニオン性アミノ酸を導入するように変更される。単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体および単量体Ｆｃポリペプチドは、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）リーダー：ＭＤＡＭＫＲＧＬＣＣＶＬＬＬＣＧＡＶＦＶＳＰ（配列番号４５）をそれぞれ用いる。
単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体配列（配列番号４６）を下記に示す。
Figure 2023528117000033
リーダー（シグナル）配列およびリンカーは、下線が付けられている。可能性があるホモ二量体複合体（ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物またはホモ二量体Ｆｃ融合物）のいずれかよりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（酸性アミノ酸をリシンで置き換える）を、上記の二重下線によって示されるように、ＡｃｔＲＩＩＢ融合タンパク質のＦｃドメインに導入することができる。配列番号４６のアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシン（Ｋ）が除去されて提供されてもよい。
この単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体は、以下の核酸配列（配列番号４７）によってコードされる。
Figure 2023528117000034
成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体（配列番号４８）は、以下の通りである。
Figure 2023528117000035
成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体（配列番号８４）は、下記に表されるように、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
Figure 2023528117000036
相補的ヒトＧ１Ｆｃポリペプチド（配列番号４９）は、ＴＰＡリーダーを用い、以下の通りである。
Figure 2023528117000037
リーダー配列は、下線が付けられ、Ｆｃポリペプチドの必要に応じたＮ末端伸長は、二重下線によって示される。可能性があるホモ二量体融合物のいずれかよりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（リシンをアニオン性残基で置き換える）を、上記の二重下線によって示されるように、単量体Ｆｃポリペプチドに導入することができる。配列番号４９のアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
この相補的Ｆｃポリペプチドは、以下の核酸（配列番号５０）によってコードされる。
Figure 2023528117000038
成熟単量体Ｆｃポリペプチドの配列は、以下の通りである（配列番号５１）。
Figure 2023528117000039
成熟単量体Ｆｃポリペプチドの配列（配列番号８５）は、下記に表されるように、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
Figure 2023528117000040
Figure 2023528117000041
単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ、配列番号４８（または配列番号８４）および配列番号５１（または配列番号８５）の単量体Ｆｃポリペプチドを、ＣＨＯ細胞系から共発現および精製して、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物が生じ得る。
非対称Ｆｃ融合ポリペプチドを使用するヘテロ多量体の形成を促進するための別の手法では、Ｆｃドメインは、単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ配列番号６０～６１、８６、９０～９１、および６２～６３、８７の単量体Ｆｃポリペプチド配列に示されるように、相補的疎水性相互作用および追加の分子間ジスルフィド結合を導入するように変更される。
単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体配列（配列番号６０）は、ＴＰＡリーダーを用い、下記に示す。
Figure 2023528117000042
リーダー配列およびリンカーは、下線が付けられている。可能性があるホモ二量体複合体のいずれかよりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（セリンをシステインで、トレオニンをトリプトファンで置き換える）を、上記の二重下線によって示されるように、融合タンパク質のＦｃドメインに導入することができる。配列番号６０のアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体は、以下の通りである。
Figure 2023528117000043
Figure 2023528117000044
代替の成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体は、以下の通りである。
Figure 2023528117000045
成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体は、下記に表されるように、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
Figure 2023528117000046
代替の成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体は、以下の通りである。
Figure 2023528117000047
Figure 2023528117000048
単量体Ｆｃポリペプチドの相補形態（配列番号６２）は、ＴＰＡリーダーを使用し、以下の通りである。
Figure 2023528117000049
リーダー配列は、下線が付けられ、Ｆｃポリペプチドの必要に応じたＮ末端伸長は、二重下線によって示される。可能性があるホモ二量体複合体のいずれかよりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するために、４つのアミノ酸置換を、上記の二重下線によって示されるように、単量体Ｆｃポリペプチドに導入することができる。配列番号６２のアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
成熟単量体Ｆｃポリペプチド配列（配列番号６３）は、以下の通りである。
Figure 2023528117000050
成熟単量体Ｆｃポリペプチド配列（配列番号８７）は、下記に表されるように、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
Figure 2023528117000051
単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ、配列番号６１（または配列番号８６）および配列番号６３（または配列番号８７）の単量体Ｆｃポリペプチドを、ＣＨＯ細胞系から共発現および精製して、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物が生じ得る。
単一アームＡｃｔＲＩＩＢ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ、配列番号９０（または配列番号９１）および配列番号６３（または配列番号８７）の単量体Ｆｃポリペプチドを、ＣＨＯ細胞系から共発現および精製して、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物が生じ得る。
さまざまな単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物の精製は、例えば、任意の順序で以下の３つまたはそれよりも多くを含む、一連のカラムクロマトグラフィーステップによって達成することができた：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィー。精製は、ウイルス濾過および緩衝液交換で完了し得る。
Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）に基づく結合アッセイを使用して、上記に記載される単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物のリガンド結合選択性をＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物のものと比較した。単一アームＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物およびＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物を、抗Ｆｃ抗体を使用して、システム上に独立して捕捉した。リガンドを注入し、捕捉された受容体タンパク質上に流した。結果を下記の表に要約し、ここで、ほとんどの有効なリガンドトラップに典型的に関連するリガンドの解離速度（ｋｄ）を、灰色の陰影によって表す。
Figure 2023528117000052
Figure 2023528117000053
これらの競合結合データは、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物が、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物よりも高いリガンド選択性を有することを実証する。ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物は５つの重要なリガンドに強く結合するが（図５におけるアクチビンＡ、アクチビンＢ、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ８、およびＧＤＦ１１のクラスターを参照されたい）、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、これらのリガンドの中でより容易に区別される。そのため、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に強く結合し、ＧＤＦ８およびアクチビンＡに中間の強さで結合する。ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物とはさらに対照的に、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＢＭＰ１０への弱い結合のみを示し、ＢＭＰ９への結合は示さない。図５を参照されたい。
これらの結果は、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物が、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物よりも選択的なアンタゴニストであることを示す。したがって、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、そのような選択的なアンタゴニズムが有利なある特定の適用において、ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体Ｆｃ融合物よりも有用であろう。例としては、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、およびＧＤＦ１１のうちの１種または複数のアンタゴニズムを保持するが、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ６、およびＧＤＦ３のうちの１種または複数のアンタゴニズムを最小化することが望ましい治療的適用が挙げられる。前者の群におけるリガンドの選択的阻害は、それらが、後者の群およびその臨床状態の関連するセットから機能的に異なる傾向があるサブファミリーを構成するので、特に治療的に有利であろう。
（実施例２）
単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物の生成および特徴付け
出願人は、短いＮ末端伸長を有する単量体Ｆｃポリペプチド、およびヒトＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメインが別々のＦｃドメインに融合された第２のポリペプチドを、細胞外ドメインとこの第２のＦｃドメインとの間に位置するリンカーとともに含む可溶性単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物を構築した。個々の構築物は、それぞれ、単量体Ｆｃポリペプチドおよび単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体と称され、それぞれについての配列を下記に提供する。
単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成は、実施例１で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物について記載された手法と同様の手法によってガイドされ得る。単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ、配列番号５５～５７、８８および４９～５１、８５の単量体Ｆｃポリペプチド配列に示される第１の手法では、一方のＦｃドメインは、相互作用面においてカチオン性アミノ酸を導入するように変更されるが、他のＦｃドメインは、相互作用面においてアニオン性アミノ酸を導入するように変更される。
単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体は、ＴＰＡリーダーを用い、以下の通りである。
Figure 2023528117000054
リーダーおよびリンカー配列は、下線が付けられている。可能性があるホモ二量体複合体（ＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物またはＦｃホモ二量体融合物）のいずれかよりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（アニオン性残基をリシンで置き換える）を、上記の二重下線によって示されるように、融合ポリペプチドのＦｃドメインに導入することができる。配列番号５５のアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
この単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体は、以下の核酸（配列番号５６）によってコードされる。
Figure 2023528117000055
Figure 2023528117000056
成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体配列は、以下の通りである（配列番号５７）。
Figure 2023528117000057
成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体配列は、下記の通り、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい（配列番号８８）。
Figure 2023528117000058
Figure 2023528117000059
実施例１に記載されるように、単量体ヒトＧ１Ｆｃポリペプチドの相補形態（配列番号４９）は、ＴＰＡリーダーを用い、必要に応じたＮ末端伸長を組み込む。可能性があるホモ二量体複合体のいずれかよりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（リシンをアニオン性残基で置き換える）を、単量体Ｆｃポリペプチドに導入することができる。配列番号４９のアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシンなしで提供されてもよい。この相補的Ｆｃポリペプチドは、配列番号５０の核酸によってコードされ、成熟単量体Ｆｃポリペプチド（配列番号５１または配列番号８５）は、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい。
単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ、配列番号５７（または配列番号８８）および配列番号５１（または配列番号８５）の単量体Ｆｃポリペプチドを、ＣＨＯ細胞系から共発現および精製して、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物が生じ得る。
非対称Ｆｃ融合ポリペプチドを使用するヘテロ多量体の形成を促進するための別の手法では、Ｆｃドメインは、単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ配列番号５８～５９、８９、および６２～６３、８７のＦｃポリペプチド配列に示されるように、相補的疎水性相互作用および追加の分子間ジスルフィド結合を導入するように変更される。
単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体（配列番号５８）は、ＴＰＡリーダーを使用し、以下の通りである。
Figure 2023528117000060
リーダー配列およびリンカーは、下線が付けられている。可能性があるホモ二量体複合体のいずれかよりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（セリンをシステインで、トレオニンをトリプトファンで置き換える）を、上記の二重下線によって示されるように、単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体のＦｃドメインに導入することができる。配列番号５８のアミノ酸配列は、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい（配列番号８９）。
成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体（配列番号５９）は、以下の通りである。
Figure 2023528117000061
成熟単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体は、以下の通り、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい（配列番号８９）。
Figure 2023528117000062
実施例１に記載されるように、単量体ヒトＧ１Ｆｃポリペプチドの相補形態（配列番号６２）は、ＴＰＡリーダーを用い、必要に応じたＮ末端伸長を組み込む。可能性があるホモ二量体複合体のいずれかよりもむしろ単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物の形成を促進するために、４つのアミノ酸置換を、示されるように、単量体Ｆｃポリペプチドに導入することができる。配列番号６２のアミノ酸配列および成熟Ｇ１Ｆｃポリペプチド（配列番号６３）は、必要に応じて、Ｃ末端のリシンが除去されて提供されてもよい（配列番号８７）。
単一アームＡｃｔＲＩＩＡ Ｆｃ融合物単量体、ならびにそれぞれ、配列番号５９（または配列番号８９）および配列番号６３（または配列番号８７）の単量体Ｆｃポリペプチドを、ＣＨＯ細胞系から共発現および精製して、単一アームＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物が生じ得る。
さまざまな単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物の精製は、例えば、任意の順序で以下の３つまたはそれよりも多くを含む、一連のカラムクロマトグラフィーステップによって達成することができた：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィー。精製は、ウイルス濾過および緩衝液交換で完了し得る。
Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）に基づく結合アッセイを使用して、上記に記載される単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物のリガンド結合選択性をＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物のものと比較した。単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物およびＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物を、抗Ｆｃ抗体を使用して、システム上に独立して捕捉した。リガンドを注入し、捕捉された受容体タンパク質上に流した。結果を下記の表に要約し、ここで、ほとんどの有効なリガンドトラップに典型的に関連するリガンドの解離速度（ｋｄ）を、灰色の陰影によって表す。
Figure 2023528117000063
これらの競合結合データは、単一アームＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃヘテロ二量体Ｆｃ融合体が、ＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物とは異なるリガンド選択性（および単一アームホモマーＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃとは異なる、実施例１を参照されたい）を有することを示す。ＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物は、アクチビンＡおよびＧＤＦ１１への強い結合と組み合わされて、アクチビンＢへの優先的な結合を示すが、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＧＤＦ１１（弱い結合剤）よりもアクチビンＡに対してより高く増強された選択性と組み合わされて、アクチビンＢよりもアクチビンＡに対する逆の優先傾向を有する。図６を参照されたい。加えて、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、ＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物で観察されたＧＤＦ８およびＢＭＰ１０への中間の結合を主に保持する。
これらの結果は、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物が、ＡｃｔＲＩＩＡ ホモ二量体Ｆｃ融合物と比較して実質的に変更されたリガンド選択性を有するアンタゴニストであることを示す。したがって、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合物は、そのようなアンタゴニズムが有利なある特定の適用において、ＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体Ｆｃ融合物よりも有用であろう。例としては、ＧＤＦ１１のアンタゴニズムを最小化しながら、アクチビンＡをアクチビンＢよりも優先的にアンタゴナイズすることが望ましい治療的適用が挙げられる。
一緒に、前述の実施例は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、単一アームヘテロマータンパク質複合体の文脈に置かれる場合に、ホモマータンパク質複合体のいずれかの種類と比べて変更された選択性を示す新規の結合ポケットを形成し、治療剤として可能性がある使用のための新規タンパク質剤の形成を可能にすることを実証する。
（実施例３）
単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質処置は、腎臓の線維化および炎症を抑制し、腎傷害を低減する。
腎臓疾患に対する単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の効果を、マウス片側尿管閉塞（ＵＵＯ）モデルにおいて評価した。例えば、Klahr and Morrissey (2002) Am J Physiol Renal Physiol 283: F861-F875を参照されたい。
１６頭の１２週齢のＣ５７ＢＬ／６雄マウスに、腎臓の下極のレベルで、左片側尿管結紮を２回行った。３日後、マウスを２つの群に無作為化した：「ＵＵＯ／ＰＢＳ」（８頭のマウスに、手術後３日目、７日目、１０日目、および１４日目に、ビヒクル対照のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を皮下注射した）、およびｉｉ）「ＵＵＯ／ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」（８頭のマウスに、手術後３日目、７日目、１０日目、および１４日目に、１０ｍｇ／ｋｇの用量で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を皮下注射した）。両方の群を、関連する動物ケアガイドラインに従って、１７日目に犠牲にした。個々の動物から半分の腎臓を、組織学分析（Ｈ＆Ｅ、およびマッソントリクローム染色）のために採取し、ＵＵＯ腎臓および反対側の腎臓（「対照」）の両方から、１／４の腎臓を、ＲＮＡ抽出のために使用した（ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｄｉキット、Ｑｉａｇｅｎ、ＩＬ）。
ＵＵＯ腎臓試料に対する遺伝子発現分析を行って、さまざまな遺伝子のレベルを評価した。ＱＲＴ－ＰＣＲを、ＣＦＸ Ｃｏｎｎｅｃｔ（商標）リアルタイムＰＣＲ検出システム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、ＣＡ）において行って、さまざまな線維化遺伝子（フィブロネクチン、ＰＡＩ－１、ＣＴＧＦ、Ｃｏｌ－Ｉ、Ｃｏｌ－ＩＩＩ、およびａ－ＳＭＡ）（それぞれ、図７Ａ～７Ｆ）、炎症遺伝子（ＭＣＰ－１およびＴＮＦα）（それぞれ、図７Ｇ～Ｈ）、トロンボスポンジン１（Ｔｈｂｓ１）（図７Ｉ）、腎傷害遺伝子（ＮＧＡＬ）（図７Ｊ）、およびＴＧＦβスーパーファミリーリガンド（ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３、およびアクチビンＡ）（それぞれ、図７Ｋ～７Ｎ）の発現を評価した。これらのＴＧＦβスーパーファミリーリガンドの上方調節は、腎臓の線維化／腎臓機能異常に非常に関連し、それらは、腎臓損傷の良好な指標としての役割を果たす。一般に、ここで試験されたものを含むいくつかの線維化遺伝子は、線維化の間に、ＴＧＦβによって上方調節される。Ｔｈｂｓ１は、ＴＧＦβの直接の下流標的であり、線維化の間を含んで、ＴＧＦβ活性化を調節する役割も果たす。Ｔｈｂｓ１発現の増加がＴＧＦβ発現の増加を意味する可能性があるので、Ｔｈｂｓ１の発現レベルの測定は、線維化のレベルの指標を与える。「ＵＵＯ／ＰＢＳ」処置マウスと比べて、「ＵＵＯ／ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ」処置マウスは、繊維化遺伝子および炎症遺伝子の著しく低い発現、ＴＧＦβ１／２／３、アクチビンＡ、およびＴｈｂｓ１の上方調節の低減、ならびに腎傷害遺伝子発現の低減を実証した。
一緒に、これらのデータは、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質処置が、腎臓の線維化および炎症を抑制し、腎傷害を低減することを実証する。また、これらのデータは、例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含む、他の単一アームＡｃｔＲＩＩヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、腎臓疾患または状態の処置または予防において有用であり得ることを示す。
（実施例４）
単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合物タンパク処置は、アルポートマウスモデルにおいて、アルブミン尿を低減し、腎臓機能を改善する。
腎臓疾患に対する単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の効果を、マウスアルポートモデル（Ｃｏｌ４ａ３－／－）において評価した。例えば、Cosgrove D, et al (1996) Genes Dev 10(23): 2981-92を参照されたい。
１３頭の４週齢のＣｏｌ４ａ３－／－マウスを、２つの群に無作為化した：ｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」（７頭のマウスに、１週間に２回、ビヒクル対照のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を皮下注射した）、およびｉｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ（３０ｍｐｋ）」（６頭のマウスに、１週間に２回、３０ｍｇ／ｋｇの用量で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を皮下注射した）。尿試料を、処置を開始する前の日（４週間）および５３日目（７．５週間）に、６頭のＣｏｌ４ａ３＋／＋マウス（「ＷＴ」）、７頭のＣｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」）、および単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質で処置された６頭のＣｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ（３０ｍｐｋ）」）から収集して、アルブミン（マウスアルブミンＥＬＩＳＡキット、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ、ＭＩ）およびクレアチニン（クレアチニンアッセイキット、ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＡ）のレベルを測定した。ＡＣＲは、尿中のアルブミンのクレアチニンに対する比の測定値である。アルブミンは、血液中に通常存在する主要なタンパク質であり、腎臓が正しく機能している場合、典型的には、アルブミンはほとんどまたは全く尿中に存在しない。どのぐらいの量のアルブミンが尿に放出されているかのより正確な指標を提供するために、アルブミン－クレアチニン比（ＡＣＲ）を算出する。筋肉代謝の副産物であるクレアチニンは、通常、一定の割合で尿に放出され、無作為の尿試料中のアルブミンを測定する場合に、クレアチニン測定が尿濃度について補正する方法として機能することを可能にする。より高いＡＣＲ測定値は、腎臓が正しく機能していないことの指標である。血液試料を、処置を開始する前の日（４週間）および５３日目（７．５週間）に、６頭のＣｏｌ４ａ３＋／＋マウス（「ＷＴ」）、７頭のＣｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」）、および単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質で処置された６頭のＣｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ（３０ｍｐｋ）」）から収集して、血中尿素窒素（ＢＵＮ）測定値（ＤＲＩ－ＣＨＥＭ ７０００化学分析器、ＨＥＳＫＡ、ＣＯ）を決定した。ＢＵＮは、廃棄産物の尿素から生じる血液中の窒素の量の測定値である。尿素は、典型的には、尿を通して体外に排出される。血液中のより高いレベルの尿素は、腎臓が正しく機能していないことを示す。両方の群を、関連する動物ケアガイドラインに従って、５３日目（７．５週間）に犠牲にした。
尿のアルブミンとクレアチニンの比（ＡＣＲ）を算出して、アルブミン尿を測定した。図８Ａを参照されたい。アルブミン尿は、Ｃｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」）において、４週間～７．５週間、著しく増加した。Ｃｏｌ４ａ３ビヒクルマウスと比べて、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質によるマウスの処置（Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウス）は、アルブミン尿を４９．９％著しく低減し（ｐ＜０．０１）、これは、Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウスにおけるＢＵＮの減少と関連した（図８Ｂ）。
一緒に、これらのデータは、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質処置が、アルポートマウスモデルにおいて、アルブミン尿を低減し、腎臓機能を改善することを実証する。また、これらのデータは、例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含む他の単一アームＡｃｔＲＩＩヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート病）の処置または予防において有用であり得ることを示す。
（実施例５）
単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質処置は、Ｃｏｌ４ａ３－／－アルポートマウスモデルにおいて、ＡＣＥｉ（ラミプリル）の存在下で、アルブミン尿を低減し、生存を延長する。
腎臓疾患に対する単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の効果を、マウスアルポートモデル（Ｃｏｌ４ａ３－／－）において評価した。例えば、Cosgrove D, et al (1996) Genes Dev 10(23): 2981-92を参照されたい。
６週齢の５８頭のＣｏｌ４ａ３－／－マウスを、飲料水中のラミプリル（ＡＣＥｉ、１０ｍｇ／ｋｇ／日）で処置し、３つの群に無作為化した：ｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」（２７頭のマウスに、１週間に２回、ビヒクル対照のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を皮下注射した）、ｉｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ（１０ｍｐｋ）」（１１頭のマウスに、１週間に２回、１０ｍｇ／ｋｇの用量で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を皮下注射した）、およびｉｉｉ）「Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄ（３０ｍｐｋ）」（２０頭のマウスに、１週間に２回、３０ｍｇ／ｋｇの用量で単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を皮下注射した）。「ＷＴ」マウスは、処置なしのＣｏｌ４ａ３＋／＋マウスである。尿試料を、処置を開始する前の日（６週間）、５３日目（７．５週間）、６３日目（９週間）、および７０日目（１０週間）に収集して、アルブミン（マウスアルブミンＥＬＩＳＡキット、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ、ＭＩ）好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）（Ａｂｃａｍ、ＭＡ）、およびクレアチニン（クレアチニンアッセイキット、ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＡ）のレベルを測定した。ＡＣＲは、尿中のアルブミンのクレアチニンに対する比の測定値である。アルブミンは、血液中に通常存在する主要なタンパク質であり、腎臓が正しく機能している場合、典型的には、アルブミンはほとんどまたは全く尿中に存在しない。どのぐらいの量のアルブミンが尿に放出されているかのより正確な指標を提供するために、アルブミン－クレアチニン比（ＡＣＲ）を算出する。ＮＧＡＬは、腎臓損傷のマーカーであり、尿ＮＧＡＬのレベルの増加は、腎傷害の重症度と関連する。より高いＡＣＲ測定値は、腎臓が正しく機能していないことの指標である。処置を継続して、関連する動物ケアガイドラインに従って、それぞれの群について生存を評価した。
尿のアルブミンとクレアチニンの比（ＡＣＲ）を算出して、アルブミン尿を測定した。図９Ａを参照されたい。ＡＣＥｉ処置にかかわらず、アルブミン尿は、Ｃｏｌ４ａ３－／－マウス（「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」）において、６週間～１０週間、著しく増加した。Ｃｏｌ４ａ３ビヒクルマウスと比べて、１０ｍｇ／ｐｋおよび３０ｍｇ／ｋｇの両方での単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質によるマウスの処置（Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウス）は、ＡＣＥｉの存在下でアルブミン尿を著しく低減した。加えて、３０ｍｇ／ｋｇ処置は、ＡＣＥｉの存在下で尿ＮＧＡＬ（例えば、ｕＮＡＧＬ）レベルを著しく減少させた（図９Ｂ）。
図９Ｃに示されるように、ＡＣＥｉの存在下、「Ｃｏｌ４ａ３ビヒクル」マウスは、７６日の生存期間中央値を有していた。１０ｍｇ／ｋｇでの単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質によるマウスの処置（Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウス）は、９３日の生存期間中央値で、生存期間を増加させた。３０ｍｇ／ｋｇでの単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質によるマウスの処置（Ｃｏｌ４ａ３ ｓａ－ＩＩＢ－ｈｄマウス）は、１０９日の生存期間中央値で、生存期間を著しく増加させた（ｐ＜０．００１）。
一緒に、これらのデータは、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質処置が、ＡＣＥｉの存在下でアルポートマウスモデルにおいて、アルブミン尿を低減し、生存を延長することを実証する。また、これらのデータは、例えば、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含む他の単一アームＡｃｔＲＩＩヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、腎臓疾患または状態（例えば、アルポート病）の処置または予防において有用であり得ることを示す。
参照による組み込み
本明細書で言及されたすべての刊行物および特許は、それぞれの個々の刊行物または特許が参照により本明細書に組み込まれることが具体的かつ個々に示されているかのように、それらの全体がここに参照により本明細書に組み込まれる。
主題の具体的な実施形態を議論したが、上記の明細書は、例示的なものであって、限定的なものではない。多くの変形形態が、本明細書および下記の特許請求の範囲の検討の際に、当業者に明らかになるであろう。本発明の全範囲は、特許請求の範囲を均等物のその全範囲と一緒に、および本明細書をそのような変形形態と一緒に参照することによって決定されるべきである。

Claims (123)

  1. 腎臓疾患または状態を処置する方法であって、単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記ヘテロ多量体が、第２のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含み、
    ａ．前記第１のポリペプチドが、相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列およびＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸配列を含み、
    ｂ．前記第２のポリペプチドが、前記相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩＢのアミノ酸配列を含まない、
    方法。
  2. 腎臓疾患または状態を処置する方法であって、単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記ヘテロ多量体が、第２のポリペプチドと共有結合的にまたは非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含み、
    ａ．前記第１のポリペプチドが、相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列およびＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸配列を含み、
    ｂ．前記第２のポリペプチドが、前記相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩＡのアミノ酸配列を含まない、
    方法。
  3. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、
    ａ．配列番号１、２、３、４、５、および６のうちのいずれかの配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
    ｂ．配列番号１のアミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、もしくは２９のうちのいずれか１つで開始し、配列番号１のアミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、もしくは１３４のうちのいずれか１つで終了するポリペプチドと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である
    アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  4. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号１のＬ７９に対応する位置に酸性アミノ酸を含まない、請求項３に記載の方法。
  5. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号１のＬ７９に対応する位置にアスパラギン酸（Ｄ）を含まない、請求項３に記載の方法。
  6. 前記ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドが、
    ａ．配列番号９、１０、および１１のうちのいずれかの配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
    ｂ．配列番号９のアミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０のうちのいずれか１つで開始し、配列番号９のアミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、もしくは１３５のうちのいずれか１つで終了するポリペプチドと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である
    アミノ酸配列を含む、請求項２に記載の方法。
  7. 前記ヘテロ多量体が、ヘテロ二量体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 相互作用対の前記第１のメンバーが、ＩｇＧ重鎖由来の第１の定常領域を含む、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  9. 相互作用対の前記第２のメンバーが、ＩｇＧ重鎖由来の第２の定常領域を含む、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  10. ＩｇＧ重鎖由来の前記第１の定常領域が、第１の免疫グロブリンＦｃドメインである、請求項８に記載の方法。
  11. ＩｇＧ重鎖由来の前記第２の定常領域が、第１の免疫グロブリンＦｃドメインである、請求項９に記載の方法。
  12. ＩｇＧ重鎖由来の前記第１の定常領域が、配列番号１４～２８のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
  13. ＩｇＧ重鎖由来の前記第２の定常領域が、配列番号１４～２８のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の方法。
  14. 前記第１のポリペプチドが、配列番号４６、４８、５５、５７、５８、５９、６０、６１、８４、８６、８８、８９、９０、および９１のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれかに記載の方法。
  15. 前記第２のポリペプチドが、配列番号４９、５１、６２、６３、８５、および８７のうちのいずれか１つから選択される配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１４のいずれかに記載の方法。
  16. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体が、前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと相互作用対の前記第１のメンバーとの間に位置するリンカードメインを含む、請求項１、３～５または７～１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体が、前記ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドと相互作用対の前記第１のメンバーとの間に位置するリンカードメインを含む、請求項２、６または７～１５のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記リンカードメインが、配列番号２９～４４のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１６または１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドが、グリコシル化アミノ酸、ペグ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、および脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸から選択される１つまたは複数の修飾アミノ酸残基を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドが、グリコシル化され、ＣＨＯ細胞における前記第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドの発現から得ることが可能なグリコシル化パターンを有する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記ヘテロ多量体が、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０からなる群から選択される１つまたは複数のリガンドに結合する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体が、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に結合する、請求項１、３～５または７～１６、１８～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体が、ＧＤＦ８およびアクチビンＡに結合する、請求項１、３～５または７～１６、１８～２１のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体が、アクチビンＡに結合する、請求項２、６、７～１５または１７～２１のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体が、ＧＤＦ８に結合する、請求項２、６、７～１５または１７～２１のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記ヘテロ多量体が、細胞に基づくアッセイにおいて１つまたは複数のリガンドの活性を阻害する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記腎臓疾患または状態が、アルポート症候群である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記腎臓疾患または状態が、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記ＦＳＧＳが、原発性ＦＳＧＳである、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記ＦＳＧＳが、続発性ＦＳＧＳである、請求項２８に記載の方法。
  31. 前記ＦＳＧＳが、遺伝性ＦＳＧＳである、請求項２８に記載の方法。
  32. 前記腎臓疾患または状態が、多発性嚢胞腎である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記腎臓疾患または状態が、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記腎臓疾患または状態が、常染色体劣性多発性嚢胞腎（ＡＲＰＫＤ）である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記腎臓疾患または状態が、慢性腎臓病（ＣＫＤ）である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記対象が、腎臓機能の低下を有する、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 腎臓機能低下を遅らせる、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
  38. 腎臓疾患または状態を処置するための追加の活性薬剤および／または支持療法を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. 腎臓疾患または状態を処置するための前記追加の活性薬剤および／または支持療法が、アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）（例えば、ロサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、フィマサルタン、アジルサルタン、サルプリサルタン、およびテルミサルタン）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えば、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、ラミプリル、トランドラプリル、およびゾフェノプリル）、グルココルチコイド（例えば、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、およびトリアムシノロン）、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス）、シクロホスファミド、クロラムブシル、ヤヌスキナーゼ阻害剤（例えば、トファシチニブ）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、シロリムス、エベロリムス）、ＩＭＤＨ阻害剤（例えば、アザチオプリン、レフルノミド、ミコフェノレート）、生物製剤（例えば、アバタセプト、アダリムマブ、アナキンラ、バシリキシマブ、セルトリズマブ、ダクリズマブ、エタネルセプト、フレソリムマブ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、セクキヌマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、ベドリズマブ）、スタチン（例えば、ベナゼプリル、バルサルタン、フルバスタチン、プラバスタチン）、ラデミルセン（抗ｍｉＲＮＡ－２１）、バルドキソロンメチル、Ａｃｈｔａｒゲル、トルバプタン、スパルセンタンと組み合わせたアバタセプト、アリスキレン、アロプリノール、ＡＮＧ－３０７０、アトルバスタチン、ブレセルマブ、ボスチニブ、ＣＣＸ１４０－Ｂ、ＣＸＡ－１０、Ｄ６－２５－ヒドロキシビタミンＤ３、ダパグリフロジン、ＭＭＦと組み合わせたデキサメタゾン、エモジン、ＦＧ－３０１９、ＦＫ５０６、ＦＫ－５０６およびＭＭＦ、ＦＴ－０１１、ガラクトース、ＧＣ１００８、ＧＦＢ－８８７、イソトレチノイン、ランレオチド、レバミゾール、リキシバプタン、ロスマピモド、メトホルミン、ミゾリビン、Ｎ－アセチルマンノサミン、オクトレオチド、パリカルシトール、ＰＦ－０６７３０５１２、ピオグリタゾン、プロパゲルマニウム、プロパゲルマニウムおよびイルベサルタン、ラパミューン、ラパマイシン、ＲＥ－０２１（例えば、スパルセンタン）、ＲＧ０１２、ロシグリタゾン（例えば、Ａｖａｎｄｉａ）、サキナビル、ＳＡＲ３３９３７５、ソマトスタチン、スピロノラクトン、テセバチニブ（ＫＤ０１９）、テトラコサクチン、ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ（ＴＷ）、バルプロ酸、ＶＡＲ－２００、ベングルスタット（ＧＺ４０２６７１）、ベリヌラド、ボクロスポリン、ＶＸ－１４７、腎臓透析、腎臓移植、間葉系幹細胞療法、骨髄幹細胞、リポタンパク質除去、Ｌｉｐｏｓｏｒｂｅｒ ＬＡ－１５デバイス、プラスマフェレーシス、血漿交換、ならびに食事の変更（例えば、食事によるナトリウム摂取）からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
  40. 腎臓疾患または状態を処置するための前記追加の活性薬剤および／または支持療法が、ロサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、フィマサルタン、アジルサルタン、サルプリサルタン、およびテルミサルタンからなる群から選択されるアンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）である、請求項３８に記載の方法。
  41. 腎臓疾患または状態を処置するための前記追加の活性薬剤および／または支持療法が、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、ラミプリル、トランドラプリル、およびゾフェノプリルからなる群から選択されるアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤である、請求項３８に記載の方法。
  42. 腎臓疾患または状態を処置するための前記追加の活性薬剤および／または支持療法が、ＡＲＢおよびＡＣＥ阻害剤の組合せである、請求項３８に記載の方法。
  43. 前記対象が、タンパク尿を有する、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記対象が、アルブミン尿を有する、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記対象が、中等度のアルブミン尿を有する、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記対象が、重度のアルブミン尿を有する、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
  47. それを必要とする対象におけるアルブミン尿、タンパク尿、微量アルブミン尿、および顕性アルブミン尿のうちの１つまたは複数の重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記対象が、２４時間の採尿あたり約３０～約３００ｍｇアルブミンのアルブミン－クレアチニン比（ＡＣＲ）を有する、請求項４５に記載の方法。
  49. 前記対象が、約３０～約３００ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンのＡＣＲを有する、請求項４５に記載の方法。
  50. 前記対象が、約３００ｍｇアルブミン／２４時間を上回るアルブミン－クレアチニン比（ＡＣＲ）を有する、請求項４６に記載の方法。
  51. 前記対象が、約３００ｍｇアルブミン／ｇクレアチニンを上回るＡＣＲを有する、請求項４６に記載の方法。
  52. 前記対象が、ステージＡ１のアルブミン尿を有する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記対象が、ステージＡ２のアルブミン尿を有する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記対象が、ステージＡ３のアルブミン尿を有する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  55. ステージＡ１のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  56. ステージＡ２のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  57. ステージＡ３のアルブミン尿の重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  58. ステージＡ１のアルブミン尿を有する対象のステージＡ２のアルブミン尿への進行を遅延させるか、または予防する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  59. ステージＡ２を有する対象のステージＡ３のアルブミン尿への進行を遅延させるか、または予防する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  60. それを必要とする対象におけるアルブミン尿のステージの進行の悪化を遅延させるか、および／または予防する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  61. 対象におけるアルブミン尿の分類を１つまたは複数のステージ分改善する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  62. 前記対象のＡＣＲを低減する、請求項１～６１のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記対象のＡＣＲを、約０．１～約１００．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン（例えば、約０．１～約２．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約２．５～約３．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約３．５～約５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約５．０～約７．５ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約７．５～約１０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約１０．０～約１５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約１５．０～約２０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約２０．０～約２５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約３０．０～約３５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約４０．０～約４５．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約４５．０～約５０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約５０．０～約６０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約６０．０～約７０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約７０．０～約８０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約８０．０～約９０．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン、約９０．０～約１００．０ｍｇアルブミン／ｇクレアチニン）低減する、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記対象のＡＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減する、請求項６２に記載の方法。
  65. 前記対象の尿タンパク質－クレアチニン比（ＵＰＣＲ）を低減する、請求項１～６４のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記対象のＵＰＣＲを、約０．１～約１００．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン（例えば、約０．１～約２．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約２．５～約３．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約３．５～約５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約５．０～約７．５ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約７．５～約１０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約１０．０～約１５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約１５．０～約２０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約２０．０～約２５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約３０．０～約３５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約４０．０～約４５．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約４５．０～約５０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約５０．０～約６０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約６０．０～約７０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約７０．０～約８０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約８０．０～約９０．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン、約９０．０～約１００．０ｍｇ尿タンパク質／ｍｇクレアチニン）低減する、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記対象のＵＰＣＲを、約０．１～約１００．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン（例えば、約０．１～約２．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約２．５～約３．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約３．５～約５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約５．０～約７．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約７．５～約１０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約１０．０～約１５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約１５．０～約２０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約２０．０～約２５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約３０．０～約３５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約４０．０～約４５．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約４５．０～約５０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約５０．０～約６０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約６０．０～約７０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約７０．０～約８０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約８０．０～約９０．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン、約９０．０～約１００．０ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン）低減する、請求項６５に記載の方法。
  68. 前記対象の絶対ＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニンより高く、またはそれと等しく低減する、請求項６５に記載の方法。
  69. 前記対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．５ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン未満に低減する、請求項６５に記載の方法。
  70. 前記対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、０．３ｇ尿タンパク質／ｇクレアチニン未満に低減する、請求項６５に記載の方法。
  71. 前記対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減する、請求項６５に記載の方法。
  72. 前記対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、３０％より高く、またはそれと等しく低減する、請求項６５に記載の方法。
  73. 前記対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、４０％より高く、またはそれと等しく低減する、請求項６５に記載の方法。
  74. 前記対象のＵＰＣＲを、ベースライン測定値と比較して、５０％より高く、またはそれと等しく低減する、請求項６５に記載の方法。
  75. 前記対象の推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）および／または糸球体濾過量（ＧＦＲ）を増加させる、請求項１～７４のいずれか一項に記載の方法。
  76. 前記ｅＧＦＲが、血清クレアチニン、年齢、民族性、および性別の変数を使用して測定される、請求項７５に記載の方法。
  77. 前記ｅＧＦＲが、コッククロフトゴールト式、腎臓疾患における食事の修飾（ＭＤＲＤ）式、ＣＫＤ－ＥＰＩ式、Ｍａｙｏの二次方程式の解の公式、およびシュワルツ式のうちの１つまたは複数を使用して測定される、請求項７５に記載の方法。
  78. 前記ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲが、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）増加する、請求項７５に記載の方法。
  79. 前記ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲが、ベースライン測定値と比較して、３０％より高く、またはそれと等しく増加する、請求項７５に記載の方法。
  80. 前記ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲが、ベースライン測定値と比較して、４０％より高く、またはそれと等しく増加する、請求項７５に記載の方法。
  81. 前記ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲが、ベースライン測定値と比較して、約１ｍＬ／分／１．７３ｍ２（例えば、３、５、７、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍＬ／分／１．７３ｍ２）増加する、請求項７５に記載の方法。
  82. 前記ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲが、ベースライン測定値と比較して、約１ｍＬ／分／年（例えば、２、３、５、７、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍＬ／分／年）増加する、請求項７５に記載の方法。
  83. 前記ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲが、ベースライン測定値と比較して、１ｍＬ／分／年より高く、またはそれと等しく増加する、請求項７５に記載の方法。
  84. 前記ｅＧＦＲおよび／またはＧＦＲが、ベースライン測定値と比較して、３ｍＬ／分／年より高く、またはそれと等しく増加する、請求項７５に記載の方法。
  85. 前記腎臓疾患または状態が、慢性腎臓病（ＣＫＤ）のステージにおいて評価される、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  86. 前記対象が、ステージ１の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記対象が、ステージ２の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  88. 前記対象が、ステージ３の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  89. 前記対象が、ステージ４の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  90. 前記対象が、ステージ５の慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  91. ステージ１のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  92. ステージ２のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  93. ステージ３のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  94. ステージ３ａのＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  95. ステージ３ｂのＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  96. ステージ４のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  97. ステージ５のＣＫＤの重症度、発生、および／または期間を低減する、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  98. ステージ１のＣＫＤを有する対象のステージ２のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  99. ステージ２のＣＫＤを有する対象のステージ３のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  100. ステージ２のＣＫＤを有する対象のステージ３ａのＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  101. ステージ３ａのＣＫＤを有する対象のステージ３ｂのＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  102. ステージ３のＣＫＤを有する対象のステージ４のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  103. ステージ３ｂのＣＫＤを有する対象のステージ４のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  104. ステージ４のＣＫＤを有する対象のステージ５のＣＫＤへの進行を予防するか、または遅延させる、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。
  105. それを必要とする対象におけるＣＫＤのステージの進行の悪化を遅延させるか、および／または予防する、請求項１～１０４のいずれか一項に記載の方法。
  106. 対象における腎臓損傷のＣＫＤの分類を１つまたは複数のステージ分改善する、請求項１～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  107. 対象における総腎臓体積を低減する、請求項１～１０６のいずれか一項に記載の方法。
  108. 前記総腎臓体積が、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減される、請求項１０７に記載の方法。
  109. 前記対象の血中尿素窒素（ＢＵＮ）を低減する、請求項１～１０８のいずれか一項に記載の方法。
  110. 前記ＢＵＮが、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減される、請求項１０９に記載の方法。
  111. 前記対象の尿好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ｕＮＧＡＬ）濃度を低減する、請求項１～１１０のいずれか一項に記載の方法。
  112. 前記ｕＮＧＡＬが、ベースライン測定値と比較して、少なくとも２．５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％）低減される、請求項１１１に記載の方法。
  113. 前記対象が、急性腎傷害の低リスクの指標である＜５０ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値を有する、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の方法。
  114. 前記対象が、急性腎傷害の多義的なリスクの指標である約５０～約１４９ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値を有する、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の方法。
  115. 前記対象が、急性腎傷害の中程度のリスクの指標である約１５０～約３００ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値を有する、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の方法。
  116. 前記対象が、急性腎傷害の高リスクの指標である＞３００ｎｇ／ｍＬのｕＮＧＡＬ測定値を有する、請求項１～１１２のいずれか一項に記載の方法。
  117. 前記対象のｕＮＧＡＬを約０．１～約３００．０ｎｇ／ｍＬ（例えば、約０．１～約５０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約１００．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約１５０．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約２００．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約２５０．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約３００．０ｎｇ／ｍＬ、約０．１～約２５ｎｇ／ｍＬ、約２５～約５０ｎｇ／ｍＬ、約５０～約１００ｎｇ／ｍＬ、約１００～約１５０ｎｇ／ｍＬ、約１５０～約２００ｎｇ／ｍＬ、約２００～約２５０ｎｇ／ｍＬ、約２５０～約３００ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬより高く）低減する、請求項１～１１６のいずれか一項に記載の方法。
  118. 腎臓疾患または状態の臨床的悪化を予防するか、または遅延させる、請求項１～１１７のいずれか一項に記載の方法。
  119. 腎臓疾患または状態に関連する１つまたは複数の合併症に対する入院のリスクを低減する、請求項１～１１８のいずれか一項に記載の方法。
  120. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体が、皮下投与される、請求項１～１１９のいずれか一項に記載の方法。
  121. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体が、２週間ごとに１回投与される、請求項１～１２０のいずれか一項に記載の方法。
  122. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体が、３週間ごとに１回投与される、請求項１～１２０のいずれか一項に記載の方法。
  123. 前記単一アームＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体または単一アームＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体が、４週間ごとに１回投与される、請求項１～１２０のいずれか一項に記載の方法。
JP2022554931A 2020-03-13 2021-03-11 単一アームＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体および腎臓疾患または状態を処置するための方法 Pending JP2023528117A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062989037P 2020-03-13 2020-03-13
US62/989,037 2020-03-13
PCT/US2021/021991 WO2021183819A1 (en) 2020-03-13 2021-03-11 Single-arm actriia and actriib heteromultimers and methods for treating renal diseases or conditions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023528117A true JP2023528117A (ja) 2023-07-04

Family

ID=77672098

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022554931A Pending JP2023528117A (ja) 2020-03-13 2021-03-11 単一アームＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体および腎臓疾患または状態を処置するための方法

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20230134083A1 (ja)
EP (1) EP4117707A1 (ja)
JP (1) JP2023528117A (ja)
KR (1) KR20230002391A (ja)
CN (1) CN115515618A (ja)
AU (1) AU2021236249A1 (ja)
BR (1) BR112022018319A2 (ja)
CA (1) CA3171638A1 (ja)
MX (1) MX2022011364A (ja)
WO (1) WO2021183819A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117137924A (zh) * 2023-09-28 2023-12-01 宜兴食品与生物技术研究院有限公司 N-乙酰-d-甘露糖胺在制备促进骨生长的食品及药物中的应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180002661A (ko) * 2015-04-06 2018-01-08 악셀레론 파마 인코포레이티드 ALK7:ActRIIB 이형다합체와 이의 용도
CN107849114B (zh) * 2015-04-06 2021-08-20 阿塞勒隆制药公司 单臂i型和ii型受体融合蛋白和其用途
JP7219705B2 (ja) * 2016-10-05 2023-02-08 アクセルロン ファーマ インコーポレイテッド ＡＬＫ４：ＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体およびその使用
JP2019529509A (ja) * 2016-10-05 2019-10-17 アクセレロン ファーマ インコーポレーテッド 腎臓疾患を治療するための組成物および方法

Also Published As

Publication number Publication date
CA3171638A1 (en) 2021-09-16
BR112022018319A2 (pt) 2022-11-22
AU2021236249A1 (en) 2022-10-06
CN115515618A (zh) 2022-12-23
EP4117707A1 (en) 2023-01-18
MX2022011364A (es) 2022-11-30
WO2021183819A1 (en) 2021-09-16
US20230134083A1 (en) 2023-05-04
KR20230002391A (ko) 2023-01-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11827689B2 (en) ALK7:ActRIIB heteromultimers and uses thereof
JP6968917B2 (ja) 赤血球レベルを高めるためのｇｄｆトラップの使用
US20220242927A1 (en) Alk4:actriib heteromultimers and uses thereof
KR102079482B1 (ko) 비효율적 적혈구생성 치료를 위한 방법 및 조성물
KR101669278B1 (ko) ＡｃｔＲⅡＢ로부터 유도된 변이체 및 이의 용도
RU2642302C1 (ru) Комбинированное применение ловушек gdf и активаторов рецепторов эритропоэтина для повышения содержания эритроцитов
JP2020158546A (ja) 筋ジストロフィー治療のためのユートロフィン誘導に関するａｃｔｒｉｉｂタンパク質およびその改変体およびその使用
CN107135646B (zh) 用于治疗溃疡的方法和组合物
US20220289852A1 (en) Alk7 antagonists and uses thereof
KR20120049214A (ko) 발열성 지방세포를 증가시키는 방법
US20180163187A1 (en) Alk4:actriib heteromultimers and uses thereof
JP2023528117A (ja) 単一アームＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体および腎臓疾患または状態を処置するための方法
WO2023022968A2 (en) Compositions and methods for treating renal diseases or conditions
JP2023528709A (ja) バリアントａｃｔｒｉｉｂタンパク質およびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20230206

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20230330